WO2010067883A1

WO2010067883A1 - 家畜のクロストリディウム属細菌による疾病の予防及び／又は治療用飼料、並びに抗クロストリディウム剤

Info

Publication number: WO2010067883A1
Application number: PCT/JP2009/070829
Authority: WO
Inventors: 協長嶋; 望月　正己; 康明杉本
Original assignee: 出光興産株式会社
Priority date: 2008-12-12
Filing date: 2009-12-14
Publication date: 2010-06-17
Also published as: KR20110100272A; DK2397147T3; JP5502754B2; TWI487488B; US20110250303A1; CA2746574A1; MX2011006273A; EP2397147A1; BRPI0922577A2; EP2397147B1; AU2009325395B2; CN102245193B; CA2746574C; KR101652552B1; CN103432180A; JPWO2010067883A1; TW201032728A; US9730971B2; EP2397147A4; TWI568360B

Abstract

　本発明は、カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールを含有することを特徴とするクロストリディウム属細菌による疾病の防除剤を提供する。

Description

家畜のクロストリディウム属細菌による疾病の予防及び／又は治療用飼料、並びに抗クロストリディウム剤

　本発明は、カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールを含有するクロストリディウム属細菌による疾病の防除剤に関する。

　家畜の感染症は、家畜の体重を減少させたり、様々な病状を引き起したりするなど、その商品価値を著しく低下させる。例えば、スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）は、ウシ、ヒツジ、ヤギの乳房炎、皮下腫瘍、膿血症、馬の発疹、豚、鶏の関節炎、皮膚炎、敗血症の原因菌である。また、ストレプトコッカス・スイス（Streptococcus suis）は、豚の髄膜炎、敗血症、心内膜炎、関節炎の原因菌である。
　また、クロストリディウム属細菌の中でも、クロストリディウムパーフリンゲンス（Clostridium perfringens）は、感染により壊疽性腸炎を引き起こしたり、エンテロトキセミア、悪性水腫の原因にもなる。壊疽性腸炎は、罹病率、致死率がともに高く、養鶏、ブロイラー、養豚、酪農業界に与える経済的被害は大きい。従って、家畜及び家禽の数ある疾病の中でもその防除対策の確立が急がれる最も重要な疾病の１つである。
　壊疽性腸炎は、疾病臨床的には、子豚、ヒナ等の下痢がみられ、腸粘膜への細菌の侵入、小腸の壊死を伴うことを特徴とする。エンテロトキセミアは、クロストリディウムパーフリンゲンスが動物の小腸内で増殖し、その産生する毒素により、壊死性、出血性の病変を起こし、かつ毒血症のために急性死を招く疾病である。悪性水腫は、偶発的または外科手術により生じた創面に、菌が侵入して発生し、その菌が発芽、増殖して毒素を出し、毒血症、菌血症を起こし死に至らせる疾病である。

　クロストリディウムパーフリンゲンス感染症は、重大な伝染病であるにもかかわらず、予防・治療方法が未だ確立されていない。予防方法として、飼育管理を適当に行なうことなどが行なわれているが、実際には予防は極めて困難である。
　これまでに本症を予防及び治療するために、抗生物質やその他の抗菌剤を飼料とともに投与する方法も行なわれている。しかし、近年、特に耐性菌の発生や食肉への抗生物質等の残留性の問題などがあって、抗生物質などの投与を動物に対して行なうことは適当ではないという気運が高まりつつある。従って、抗生物質などを用いない本症の予防及び治療方法と予防及び治療剤の開発が望まれている。
　一方では、オウバク、ゲンノショウコ、コウボク、タンジン、チモ、ダイオウ、チョウジ、ジョテイ、ケイガイ、ケイヒ、ゲンジン、ケツメイシ、ビワヨウ、ボウフウ、ホップ、ソヨウ、ヨウバイヒ、レンギョウ、アロエ、ギュウタン、イレイセン、ウバイ、エンメイソウ、シャゼンソウ、シンイ、インチンコウ、ジンコウ、センキュウ、コウホン、ゴバイシ、サンシュユ、シコン、コオウレン、シャクヤク、キンオウシ、タイム、シロナンテン、チユ及びマオウからなる群から選択された１種または２種以上の生薬を含有する家畜及び家禽のクロストリジウムバーフリンゲンス感染症の予防及び治療剤が知られている（特許文献１）。また、ピネン、チモール、オイゲノール、リモネン、ナツメグ、タイム、クローブ及びシトラスを含有することを特徴とするクロストリジウムバーフリンゲンス感染症の予防及び治療剤が知られている（特許文献２）。
　しかしながら、これらの技術は効果が一定しないといった課題が残されており実用化には至っていない。

　カシューナッツ殻油および／またはアナカルド酸には、抗菌作用（非特許文献１）、コクシジウム症軽減作用(特許文献３)が知られている。また、カシューナッツ殻油および／またはアナカルド酸がStaphylococcos aureus、Streptococcus mutans、Bacillus subtilis、Bacillus ammoniagenesのようなグラム陽性菌に抗菌作用があり、Escherichia coli、Enterobacter aerogenes、Pseudomonas aeruginosaのようなグラム陰性菌およびSaccharomyces cerevisiae、Candida utilis、Penichillium chrysogenumのような真菌に抗菌作用が無いことが報告されている（非特許文献２）。しかしながら、カシューナッツ殻油および／またはアナカルド酸のクロストリディウム属細菌、特にクロストリディウムパーフリンゲンス（Clostridium perfringens）に対する抗菌作用は知られておらず、壊疽性腸炎、エンテロトキセミア、悪性水腫に対する予防および治療効果に関しては報告が全く無い。

特許第２５９９１６１号公報特開２００８－１１０９５１号公報特開平８－２３１４１０号公報

Muroi, H. et al. Bioorganic & Medicinal Chemistry 12,583-587 (2004) Himejima M. and Kubo I., J.Agric.Food Chem., 39, 418-421 (1991)

　本発明は、家畜の重大な伝染病である、クロストリディウムパーフリンゲンス感染症を防除することを課題とする。

　本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を行った結果、カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールが、クロストリディウムパーフリンゲンスによる疾病の防除に用いることができることを見出し、本発明を完成するに至った。

　すなわち、本発明の要旨は、以下の通りである。
（１）カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールを含有することを特徴とするクロストリディウム属細菌による疾病の防除剤。
（２）カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールを含有することを特徴とする、クロストリディウム属細菌による疾病防除用飼料用組成物。
（３）カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールを含有することを特徴とする、クロストリディウム属細菌による疾病防除用飼料。
（４）（１）に記載のクロストリディウム属細菌による疾病の防除剤を含有することを特徴とする、クロストリディウム属細菌による疾病防除用飼料用組成物。
（５）（４）に記載のクロストリディウム属細菌による疾病防除用飼料用組成物を含有することを特徴とする、クロストリディウム属細菌による疾病防除用飼料。
（６）クロストリディウム属細菌による疾病を発症した家畜にカシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールを投与することを特徴とするクロストリディウム属細菌による疾病防除方法。
（７）クロストリディウム属細菌による疾病の防除剤の製造のためのカシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールの使用。
（８）クロストリディウム属細菌による疾病防除用飼料用組成物の製造のためのカシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールの使用。
（９）クロストリディウム属細菌による疾病防除用飼料の製造のためのカシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールの使用。

　本発明の防除剤およびこれを含む飼料は、家畜に投与することにより、クロストリディウム属細菌による疾病を防除することができる。
　本発明の防除剤およびこれを含む飼料は、クロストリディウム属細菌を殺菌し、腸内環境を改善させることにより、家畜の成長を促進させることができる。

　本発明のクロストリディウム属細菌による疾病の防除剤は、カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールを含有することを特徴とする。なお、本発明において、防除とは予防および治療を含むものである。

　本発明に用いるカシューナッツ殻油は、カシューナッツツリー(Anacardium occidentale L.)の実の殻に含まれる油状の液体である。カシューナッツ殻油は、その成分として、アナカルド酸、カルダノール、カルドールを含むものである。一般に、アナカルド酸は加熱処理することによりカルダノールに変換するが、加熱処理によりカルダノールとカルドールのみになったカシューナッツ殻油でも良い。
　カシューナッツの殻を圧搾することにより抽出された非加熱カシューナッツ殻油（以下、カシューナッツ殻油という。）は、J.Agric.Food Chem. 2001, 49, 2548-2551に記載されるように、アナカルド酸を５５～８０質量％、カルダノールを５～２０質量％、カルドールを５～３０質量％含むものである。
　カシューナッツ殻油を１３０℃以上で加熱処理して得られる加熱処理カシューナッツ殻油は、カシューナッツ殻油の主成分のアナカルド酸の大部分が脱炭酸しカルダノールに変換され、アナカルド酸を０～１０質量％、カルダノールを５５～８０質量％、カルドールを５～３０質量％含むものとなる。

　本発明において使用されるカシューナッツ殻油は、カシューナッツの殻を圧搾することにより抽出した植物油として得ることができる。また、本発明において使用されるカシューナッツ殻油は、加熱または抽出により、例えば、カシューナッツ殻を乾留又は溶剤抽出して得ることもできる。さらに、本発明において使用されるカシューナッツ殻油は、特開平8-231410号公報に記載されている方法によって得ることもできる。
　本発明において使用されるカシューナッツ殻油は、加熱せずに、カシューナッツの殻を粉砕・破砕して得られたものであってもよい。また、殻そのものであっても良い。
　本発明において使用されるカシューナッツ殻油は、市販品を用いることもできる。

　本発明のカシューナッツ殻油は、上記のようにして得られたカシューナッツ殻油を、７０℃以上、好ましくは１３０℃以上に加熱することによって得た加熱カシューナッツ殻油であってもよい。
　本発明のカシューナッツ殻油は、カシューナッツの殻から圧搾抽出し、これを１３０℃に加熱処理して得たものでもよい。
　本発明のクロストリディウム属細菌による疾病の防除剤は、カシューナッツ殻油の代わりに、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールを含んでいてもよい。

　本発明において使用されるアナカルド酸としては、天然物アナカルド酸、合成アナカルド酸、それらの誘導体が挙げられる。また、市販のアナカルド酸を用いてもよい。アナカルド酸は、特開平８－２３１４１０号公報に記載されるように、カシューナッツの殻を有機溶剤で抽出処理して得られたカシューナッツ油を、例えば、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを用いてｎ－ヘキサン、酢酸エチルおよび酢酸の混合溶媒の比率を変えて溶出することによって得ることができる（特開平３－２４０７２１号公報、特開平３－２４０７１６号公報など）。

　本発明において使用されるカルダノールとしては、天然物カルダノール、合成カルダノール、それらの誘導体が挙げられる。また、本発明において使用されるカルダノールは、カシューナッツ殻油の主成分のアナカルド酸を脱炭酸することにより、得ることができる。
　なお、加熱処理カシューナッツ殻油を用いる場合、加熱カシューナッツ殻油中のアナカルド酸とカルダノールとの質量比は、好ましくは、０：１００～２０：８０である。

　本発明のクロストリディウム属細菌による疾病の防除剤におけるカシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールの含有量は、前記防除剤の全量基準で、１質量％～１００質量％が好ましく、より好ましくは５質量％～９５質量％、特に好ましくは１０質量％～９０質量％である。１質量％以上であれば、クロストリディウム属細菌による疾病を効果的に防除することができる。５質量％以上、特に好ましくは１０質量％以上であれば、その傾向は顕著になり好ましい。一方、１００質量％でもクロストリディウム属細菌による疾病を防除できるが、動物の嗜好性改善のためには、９５質量％以下、特に好ましくは９０質量％以下が好ましい。

　本発明の防除剤は、クロストリディウム属細菌による疾病を防除するために用いることができる。
　本発明において、クロストリディウム属細菌よる疾病とは、特にクロストリディウム・パーフリンゲンスが感染して発症する疾病をいい、具体的には、壊疽性腸炎、エンテロトキセミア、悪性水腫が挙げられるが、これらに限定されない。
　本発明において含まれるクロストリディウム属細菌としては、クロストリディウム・パーフリンゲンス（Clostridium perfringens）、クロストリディウム・テタニ(C. tetani)、クロストリディウム・ボツリヌム(C. botulinum)、クロストリディウム・ディフィシル(C. difficile)、クロストリディウム・サーモセラム(C. thermocellum)、クロストリディウム・ブチリカム(C. butyricum)などが挙げられるが、これらに限定されない。

　本発明のクロストリディウム属細菌による疾病の防除剤は、カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールの他に、例えば乳糖、白糖、Ｄ－マンニトール、デンプン、コーンスターチ、結晶セルロース、シリカゲル、軽質無水ケイ酸等の飼料または医薬品または食品に使用することができる賦形剤であればどのようなものを含んでいてもよい。

　また、本発明のクロストリディウム属細菌による疾病の防除剤は、カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールの他に、家畜および家禽の成長促進に有効な成分、栄養補助成分、保存安定性を高める成分、被覆剤成分等の任意成分をさらに含むものであってもよい。このような任意成分としては、飼料の原料や飼料添加物、食品原料や食品添加物、医薬品原材料等が挙げられる。例えば、エンテロコッカス属細菌、バチルス属細菌、ビフィズス菌、ラクトバチルス菌等の生菌剤；アミラーゼ、リパーゼ等の酵素；Ｌ－アスコルビン酸、塩化コリン、イノシトール、葉酸等のビタミン；塩化カリウム、クエン酸鉄、酸化マグネシウム、リン酸塩類等のミネラル、ＤＬ－アラニン、ＤＬ－メチオニン、Ｌ－リジン等のアミノ酸；フマル酸、酪酸、乳酸、酢酸等の有機酸及びそれらの塩；エトキシキン、ジブチルヒドロキシトルエン等の抗酸化剤；プロピオン酸カルシウム等の防カビ剤；カルボキシルメチルセルロース（ＣＭＣ）、カゼインナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム等の粘結剤；グリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル等の乳化剤；アスタキサンチン、カンタキサンチン等の色素；各種エステル、エーテル、ケトン類等の着香料、が挙げられる。

　本発明のクロストリディウム属細菌による疾病の防除剤の剤形は特に制限されず、例えば、粉剤、液剤、固体、錠剤、カプセル剤、乳剤、ペレット剤、被覆剤など任意の形態が挙げられるが、粉剤、液剤、カプセル剤、ペレット剤、被覆剤が好ましい。
　粉剤としては、カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールに上記賦形剤を添加し、粉末化することもできる。
　液剤としては、カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールをそのまま用いてもよいし、カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールをエタノールなどの溶媒に溶かしてもよいし、あるいは上記賦形剤または任意成分を添加して用いることもできる。
　カプセル剤としては、カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールをそのままカプセルに詰めてもよいし、あるいは上記賦形剤または任意成分を添加してもよい。
　ペレット剤としては、カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールに上記賦形剤を添加し、造粒し、ペレット化することもできる。
　被覆剤としては、カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールに上記賦形剤を添加・造粒し、コーティング剤等で被覆することもできる。

　上述のように、本発明のクロストリディウム属細菌による疾病の防除剤は、カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールおよび必要に応じて賦形剤または任意成分を混合し、製剤化することにより製造することができる。なお、剤の形態によっては、前記したカシューナッツ殻の粉砕・破砕物、或いは何らの処理もしないでカシューナッツ殻をそのまま他の任意成分と混合させて本発明の防除剤とすることができる。さらに、他の任意成分と混合させず、粉砕・破砕物そのものまたはカシューナッツ殻そのものを防除剤とすることができ、前記防除剤そのものを飼料用組成物、または飼料とすることもできる。また、カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールをエタノールなどの溶媒に溶解させ、これを、飼料用組成物または飼料に混合吸収させることもできる。

　本発明の飼料用組成物は、カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールを含有することを特徴とする。本発明の飼料用組成物におけるカシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールの含有量は、全量基準で０．０００５質量％～１００質量％が好ましく、より好ましくは０．０５～９５質量％、特に好ましくは１～９０質量％である。０．０００５質量％以上であれば、クロストリディウム属細菌による疾病を効果的に防除することができる。０．０５質量％以上、特に好ましくは１質量％以上であれば、その傾向は顕著になり好ましい。一方、１００質量％でもクロストリディウム属細菌による疾病を防除できるが、動物の嗜好性改善のためには、９５質量％以下、特に好ましくは９０質量％以下が好ましい。
　本発明のクロストリディウム属細菌による疾病の防除剤を飼料用組成物として用いる場合は、動物用サプリメント（以下、サプリメントという。）に用いられる他のサプリメント成分と混合してサプリメントとすることができる。サプリメントの種類や、カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノール以外の成分は、特に制限されない。

　本発明の飼料はカシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールを含有することを特徴とする。
　なお、本発明の飼料におけるカシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールの含有量は、飼料の乾物質量当たり、全量基準で０．００１～５質量％が好ましく、より好ましくは０．０１～２質量％、特に好ましくは０．１～１質量％である。０．００１質量％以上であれば、クロストリディウム属細菌による疾病を効果的に防除することができる。０．０１質量％以上、特に好ましくは０．１質量％以上であれば、その傾向は顕著になり好ましい。一方、５質量％でもクロストリディウム属細菌による疾病を防除できるが、動物の嗜好性改善のためには、２質量％以下、特に１質量％以下が好ましい。

　本発明の飼料は、カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールをそのまま、またはカシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールを含む飼料用組成物を飼料成分に添加し、混合して製造することができる。この際、粉末状、固形状の飼料用組成物を用いる場合は、混合を容易にするために飼料用組成物を液状又はゲル状の形態にしてもよい。この場合は、水、植物油、液体動物油、鉱物油、合成油、水溶性高分子化合物等の流動性液体を液体担体として用いることができる。また、飼料中におけるカシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールの均一性を保つために、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、カゼインナトリウム、アラビアゴム、グアーガム、タマリンド種子多糖類などの水溶性多糖類を配合することも好ましい。

　本発明の飼料を摂取させる家畜には、牛、豚等の家畜のほかにも鶏等の家禽も含まれる。摂取させる飼料の量は、家畜の種類、体重、年齢、性別、健康状態、飼料の成分などにより適宜調節することができる。
　飼料を摂取させる方法及び飼育する方法は、家畜の種類に応じて、通常用いられる方法をとることができる。

　製造例
　カシュー・トレーディング（株）よりカシューナッツの殻５００ｋｇを入手し、圧搾することによりカシューナッツ殻油１５８ｋｇを製造した。また、１３０℃で加熱処理することによりアナカルド酸をカルダノールに変換した加熱処理カシューナッツ殻油を、カシュー・トレーディング（株）より入手した（コールドプレスオイル（インド産））。
　カシューナッツ殻油の組成は以下の方法で測定した。すなわち、HPLC（Waters600、日本ウォーターズ（株））、検出機（Waters490E、日本ウォーターズ（株））、プリンタ(クロマトパックＣ－Ｒ６Ａ、島津製作所)、カラム（SUPELCOSIL LC18、SUPELCO社）を用いた。アセトニトリル：水：酢酸が８０：２０：１（容量比）の溶媒を用い、流速は２ｍｌ／分とした。２８０ｎｍの吸光度で検出した。
　カシューナッツ殻油には、アナカルド酸が６１．８質量％、カルダノールが８．２質量％、カルドールが１９．９質量％、加熱処理カシューナッツ殻油には、アナカルド酸が０．０質量％、カルダノールが７１．４質量％、カルドールが１４．４質量％含まれていた。

　実施例１
　日本化学療法学会標準法（1981）に準じてカシューナッツ殻油及び加熱処理カシューナッツ殻油の最小発育阻止濃度（MIC）を測定した。前培養は感受性測定用ブイヨン培地（日水製薬（株）製品）を用いて培養し、接種菌液については生理食塩水にて、約10⁵～10⁶ CFU/ｍｌとなるように調整した。測定培地としては、感受性測定用培地（日水製薬（株）製品）を用いた。クロストリディウムパーフリンゲンスを嫌気培養し、３７℃、約２０時間後に判定した。
　結果を表１に示した。

　カシューナッツ殻油および加熱処理カシューナッツ殻油はクロストリディウムパーフリンゲンスに対する強い抗菌作用を有することが分かる。

　実施例２
　１Ｌの三角フラスコにＧＡＭブイヨン（日水製薬（株）製品）５００ｍｌを作成し、オートクレーブ滅菌後、カシューナッツ殻油およびクロストリディウムパーフリンゲンスをそれぞれ無菌的に投与し、３７℃の恒温器を用い嫌気条件で緩攪拌培養した。試験区では、カシューナッツ殻油１ｇを１０ｍｌのジメチルフォルムアミドに溶解し、５ｍｌを三角フラスコに添加した。対照区では、ジメチルフォルムアミドのみ５ｍｌを三角フラスコに添加した。クロストリディウムパーフリンゲンスの前培養はＣＷ寒天培地（日水製薬（株）製品）にて、嫌気条件で３７℃、４８時間培養したものをかきとり、滅菌生理食塩水に浮遊させた後、最終濃度で約10⁶ ＣＦＵ／ｍｌとなるよう調整した。クロストリディウムパーフリンゲンスの菌数測定方法は、培養液を無菌的に採取し、滅菌生理食塩水で10倍段階希釈後、それぞれの希釈段階の０．１ｍｌをＣＷ寒天培地（日水製薬（株）製品）に塗布後、嫌気条件で３７℃、７２時間培養し、発育した特長的なコロニーを計数した。
　結果を表２に示した。

　クロストリディウムパーフリンゲンスは、対照区では試験期間を通して細菌数が確認されたが、カシューナッツ殻油添加区では試験３日目および７日目において検出限界以下になった。カシューナッツ殻油はクロストリディウムパーフリンゲンスに対する強い抗菌作用を有することが分かる。

　実施例３
　日本ハイポー（株）第一ファーム事業所にて飼育されているブロイラー種鶏（銘柄：チャンキー）由来の種卵より孵化したワクチン歴のないヒナで、実験鶏舎にて7日間予備飼育した。１区７羽とし、割りつけに際しては、試験開始時の体重に差が生じないようにした。カシューナッツ殻油および加熱処理カシューナッツ殻油は０．５質量％餌に添加して予備飼育終了後から試験終了時まで与えた。飼料は、日本配合飼料（株）ブロイラー肥育前期用標準飼料（SDB No1）を0～21日齢、ブロイラー肥育後期用標準飼料（SDB No2）を22～35日齢まで供試した。体重を8日（試験開始時）、14日、21日、28日及び35日齢時に測定した。鶏ヒナ飼養終了時に、各群から5羽ずつを無作為に選出し、屠殺、開腹により盲腸内容物を採取した。なお、採取した盲腸内容物は群ごとにプールして検査に供した。検体1ｇを10倍段階希釈し、希釈倍率ごとに5枚の培地へ0.1mlずつ接種した。クロストリディウムパーフリンゲンスは、CW寒天（日水製薬（株）製品）を用い、嫌気条件で37℃、24hr培養し、特徴的なコロニーを計数した。
　平均体重を表３に示した。

　カシューナッツ殻油および加熱処理カシューナッツ殻油を飼料に０．５質量％添加した鶏ヒナは、対照例に比べ体重が増加した。カシューナッツ殻油および加熱処理カシューナッツ殻油には増体効果が有ることがわかった。
　盲腸内容物中のクロストリディウムパーフリンゲンス数を表４に示した。

　カシューナッツ殻油を飼料に０．５質量％添加した鶏ヒナでは、腸内のクロストリディウムパーフリンゲンスの菌数が対照区の十分の一に、さらに加熱処理カシューナッツ殻油処理区では対照区の百分の一に減少していた。この結果は、カシューナッツ殻油および加熱処理カシューナッツ殻油にクロストリディウムパーフリンゲンスに対する殺菌作用が有ることを示した実施例１，２の結果と一致した。

　本発明により、クロストリディウムパーフリンゲンス（Clostridium perfringens）の感染によって起こる壊疽性腸炎、エンテロトキセミア、悪性水腫の予防及び／又は治療用飼料、並びに抗クロストリディウム剤が提供される。
　本発明の防除剤は、クロストリディウム属細菌による疾病を発症している家畜および家禽などの動物にカシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールを投与することにより、クロストリディウム属細菌による疾病を防除することができる。
　本発明の防除剤は、クロストリディウム属細菌を殺菌し、腸内環境を改善させることにより、動物の成長を促進させることができる。

Claims

カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールを含有することを特徴とするクロストリディウム属細菌による疾病の防除剤。
カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールを含有することを特徴とする、クロストリディウム属細菌による疾病防除用飼料用組成物。
カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールを含有することを特徴とする、クロストリディウム属細菌による疾病防除用飼料。
請求項１に記載のクロストリディウム属細菌による疾病の防除剤を含有することを特徴とする、クロストリディウム属細菌による疾病防除用飼料用組成物。
請求項４に記載のクロストリディウム属細菌による疾病防除用飼料用組成物を含有することを特徴とする、クロストリディウム属細菌による疾病防除用飼料。
クロストリディウム属細菌による疾病を発症した家畜にカシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールを投与することを特徴とするクロストリディウム属細菌による疾病防除方法。
クロストリディウム属細菌による疾病の防除剤の製造のためのカシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールの使用。
クロストリディウム属細菌による疾病防除用飼料用組成物の製造のためのカシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールの使用。
クロストリディウム属細菌による疾病防除用飼料の製造のためのカシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールの使用。