JP5502754B2 - 家畜のクロストリディウム属細菌による疾病の予防及び/又は治療用飼料、並びに抗クロストリディウム剤 - Google Patents
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Description
また、クロストリディウム属細菌の中でも、クロストリディウム パーフリンゲンス(Clostridium perfringens)は、感染により壊疽性腸炎を引き起こしたり、エンテロトキセミア、悪性水腫の原因にもなる。壊疽性腸炎は、罹病率、致死率がともに高く、養鶏、ブロイラー、養豚、酪農業界に与える経済的被害は大きい。従って、家畜及び家禽の数ある疾病の中でもその防除対策の確立が急がれる最も重要な疾病の1つである。
壊疽性腸炎は、疾病臨床的には、子豚、ヒナ等の下痢がみられ、腸粘膜への細菌の侵入、小腸の壊死を伴うことを特徴とする。エンテロトキセミアは、クロストリディウム パーフリンゲンスが動物の小腸内で増殖し、その産生する毒素により、壊死性、出血性の病変を起こし、かつ毒血症のために急性死を招く疾病である。悪性水腫は、偶発的または外科手術により生じた創面に、菌が侵入して発生し、その菌が発芽、増殖して毒素を出し、毒血症、菌血症を起こし死に至らせる疾病である。
これまでに本症を予防及び治療するために、抗生物質やその他の抗菌剤を飼料とともに投与する方法も行なわれている。しかし、近年、特に耐性菌の発生や食肉への抗生物質等の残留性の問題などがあって、抗生物質などの投与を動物に対して行なうことは適当ではないという気運が高まりつつある。従って、抗生物質などを用いない本症の予防及び治療方法と予防及び治療剤の開発が望まれている。
一方では、オウバク、ゲンノショウコ、コウボク、タンジン、チモ、ダイオウ、チョウジ、ジョテイ、ケイガイ、ケイヒ、ゲンジン、ケツメイシ、ビワヨウ、ボウフウ、ホップ、ソヨウ、ヨウバイヒ、レンギョウ、アロエ、ギュウタン、イレイセン、ウバイ、エンメイソウ、シャゼンソウ、シンイ、インチンコウ、ジンコウ、センキュウ、コウホン、ゴバイシ、サンシュユ、シコン、コオウレン、シャクヤク、キンオウシ、タイム、シロナンテン、チユ及びマオウからなる群から選択された1種または2種以上の生薬を含有する家畜及び家禽のクロストリジウム バーフリンゲンス感染症の予防及び治療剤が知られている(特許文献1)。また、ピネン、チモール、オイゲノール、リモネン、ナツメグ、タイム、クローブ及びシトラスを含有することを特徴とするクロストリジウム バーフリンゲンス感染症の予防及び治療剤が知られている(特許文献2)。
しかしながら、これらの技術は効果が一定しないといった課題が残されており実用化には至っていない。
(1)カシューナッツ殻油または加熱処理カシューナッツ殻油を含有することを特徴とするクロストリディウム パーフリンゲンス(Clostridium perfringens)による疾病の防除剤(飼料を除く)。
(2)カシューナッツ殻油または加熱処理カシューナッツ殻油を含有することを特徴とするクロストリディウム パーフリンゲンス(Clostridium perfringens)による疾病を防除するための医薬。
(3)クロストリディウム パーフリンゲンス(Clostridium perfringens)による疾病を発症した家畜にカシューナッツ殻油または加熱処理カシューナッツ殻油を投与することを特徴とするクロストリディウム パーフリンゲンス(Clostridium perfringens)による疾病の防除方法。
本発明の防除剤は、クロストリディウム属細菌を殺菌し、腸内環境を改善させることにより、家畜の成長を促進させることができる。
カシューナッツの殻を圧搾することにより抽出された非加熱カシューナッツ殻油(以下、カシューナッツ殻油という。)は、J.Agric.Food Chem. 2001, 49, 2548-2551に記載されるように、アナカルド酸を55〜80質量%、カルダノールを5〜20質量%、カルドールを5〜30質量%含むものである。
カシューナッツ殻油を130℃以上で加熱処理して得られる加熱処理カシューナッツ殻油は、カシューナッツ殻油の主成分のアナカルド酸の大部分が脱炭酸しカルダノールに変換され、アナカルド酸を0〜10質量%、カルダノールを55〜80質量%、カルドールを5〜30質量%含むものとなる。
本発明において使用されるカシューナッツ殻油は、加熱せずに、カシューナッツの殻を粉砕・破砕して得られたものであってもよい。また、殻そのものであっても良い。
本発明において使用されるカシューナッツ殻油は、市販品を用いることもできる。
本発明のカシューナッツ殻油は、カシューナッツの殻から圧搾抽出し、これを130℃に加熱処理して得たものでもよい。
本発明のクロストリディウム属細菌による疾病の防除剤は、カシューナッツ殻油の代わりに、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールを含んでいてもよい。
なお、加熱処理カシューナッツ殻油を用いる場合、加熱カシューナッツ殻油中のアナカルド酸とカルダノールとの質量比は、好ましくは、0:100〜20:80である。
本発明において、クロストリディウム属細菌よる疾病とは、特にクロストリディウム・パーフリンゲンスが感染して発症する疾病をいい、具体的には、壊疽性腸炎、エンテロトキセミア、悪性水腫が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明において含まれるクロストリディウム属細菌としては、クロストリディウム・パーフリンゲンス(Clostridium perfringens)、クロストリディウム・テタニ(C. tetani)、クロストリディウム・ボツリヌム(C. botulinum)、クロストリディウム・ディフィシル(C. difficile)、クロストリディウム・サーモセラム(C. thermocellum)、クロストリディウム・ブチリカム(C. butyricum)などが挙げられるが、これらに限定されない。
粉剤としては、カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールに上記賦形剤を添加し、粉末化することもできる。
液剤としては、カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールをそのまま用いてもよいし、カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールをエタノールなどの溶媒に溶かしてもよいし、あるいは上記賦形剤または任意成分を添加して用いることもできる。
カプセル剤としては、カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールをそのままカプセルに詰めてもよいし、あるいは上記賦形剤または任意成分を添加してもよい。
ペレット剤としては、カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールに上記賦形剤を添加し、造粒し、ペレット化することもできる。
被覆剤としては、カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールに上記賦形剤を添加・造粒し、コーティング剤等で被覆することもできる。
本発明のクロストリディウム属細菌による疾病の防除剤を飼料用組成物として用いる場合は、動物用サプリメント(以下、サプリメントという。)に用いられる他のサプリメント成分と混合してサプリメントとすることができる。サプリメントの種類や、カシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノール以外の成分は、特に制限されない。
なお、本発明の飼料におけるカシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールの含有量は、飼料の乾物質量当たり、全量基準で0.001〜5質量%が好ましく、より好ましくは0.01〜2質量%、特に好ましくは0.1〜1質量%である。0.001質量%以上であれば、クロストリディウム属細菌による疾病を効果的に防除することができる。0.01質量%以上、特に好ましくは0.1質量%以上であれば、その傾向は顕著になり好ましい。一方、5質量%でもクロストリディウム属細菌による疾病を防除できるが、動物の嗜好性改善のためには、2質量%以下、特に1質量%以下が好ましい。
飼料を摂取させる方法及び飼育する方法は、家畜の種類に応じて、通常用いられる方法をとることができる。
カシュー・トレーディング(株)よりカシューナッツの殻500kgを入手し、圧搾することによりカシューナッツ殻油158kgを製造した。また、130℃で加熱処理することによりアナカルド酸をカルダノールに変換した加熱処理カシューナッツ殻油を、カシュー・トレーディング(株)より入手した(コールドプレスオイル(インド産))。
カシューナッツ殻油の組成は以下の方法で測定した。すなわち、HPLC(Waters600、日本ウォーターズ(株))、検出機(Waters490E、日本ウォーターズ(株))、プリンタ(クロマトパックC−R6A、島津製作所)、カラム(SUPELCOSIL LC18、SUPELCO社)を用いた。アセトニトリル:水:酢酸が80:20:1(容量比)の溶媒を用い、流速は2ml/分とした。280nmの吸光度で検出した。
カシューナッツ殻油には、アナカルド酸が61.8質量%、カルダノールが8.2質量%、カルドールが19.9質量%、加熱処理カシューナッツ殻油には、アナカルド酸が0.0質量%、カルダノールが71.4質量%、カルドールが14.4質量%含まれていた。
日本化学療法学会標準法(1981)に準じてカシューナッツ殻油及び加熱処理カシューナッツ殻油の最小発育阻止濃度(MIC)を測定した。前培養は感受性測定用ブイヨン培地(日水製薬(株)製品)を用いて培養し、接種菌液については生理食塩水にて、約105〜106 CFU/mlとなるように調整した。測定培地としては、感受性測定用培地(日水製薬(株)製品)を用いた。クロストリディウム パーフリンゲンスを嫌気培養し、37℃、約20時間後に判定した。
結果を表1に示した。
1Lの三角フラスコにGAMブイヨン(日水製薬(株)製品)500mlを作成し、オートクレーブ滅菌後、カシューナッツ殻油およびクロストリディウム パーフリンゲンスをそれぞれ無菌的に投与し、37℃の恒温器を用い嫌気条件で緩攪拌培養した。試験区では、カシューナッツ殻油1gを10mlのジメチルフォルムアミドに溶解し、5mlを三角フラスコに添加した。対照区では、ジメチルフォルムアミドのみ5mlを三角フラスコに添加した。クロストリディウム パーフリンゲンスの前培養はCW寒天培地(日水製薬(株)製品)にて、嫌気条件で37℃、48時間培養したものをかきとり、滅菌生理食塩水に浮遊させた後、最終濃度で約106 CFU/mlとなるよう調整した。クロストリディウム パーフリンゲンスの菌数測定方法は、培養液を無菌的に採取し、滅菌生理食塩水で10倍段階希釈後、それぞれの希釈段階の0.1mlをCW寒天培地(日水製薬(株)製品)に塗布後、嫌気条件で37℃、72時間培養し、発育した特長的なコロニーを計数した。
結果を表2に示した。
日本ハイポー(株)第一ファーム事業所にて飼育されているブロイラー種鶏(銘柄:チャンキー)由来の種卵より孵化したワクチン歴のないヒナで、実験鶏舎にて7日間予備飼育した。1区7羽とし、割りつけに際しては、試験開始時の体重に差が生じないようにした。カシューナッツ殻油および加熱処理カシューナッツ殻油は0.5質量%餌に添加して予備飼育終了後から試験終了時まで与えた。飼料は、日本配合飼料(株)ブロイラー肥育前期用標準飼料(SDB No1)を0〜21日齢、ブロイラー肥育後期用標準飼料(SDB No2)を22〜35日齢まで供試した。体重を8日(試験開始時)、14日、21日、28日及び35日齢時に測定した。鶏ヒナ飼養終了時に、各群から5羽ずつを無作為に選出し、屠殺、開腹により盲腸内容物を採取した。なお、採取した盲腸内容物は群ごとにプールして検査に供した。検体1gを10倍段階希釈し、希釈倍率ごとに5枚の培地へ0.1mlずつ接種した。クロストリディウム パーフリンゲンスは、CW寒天(日水製薬(株)製品)を用い、嫌気条件で37℃、24hr培養し、特徴的なコロニーを計数した。
平均体重を表3に示した。
盲腸内容物中のクロストリディウム パーフリンゲンス数を表4に示した。
本発明の防除剤は、クロストリディウム属細菌による疾病を発症している家畜および家禽などの動物にカシューナッツ殻油、加熱処理カシューナッツ殻油、アナカルド酸、カルダノール、またはアナカルド酸とカルダノールを投与することにより、クロストリディウム属細菌による疾病を防除することができる。
本発明の防除剤は、クロストリディウム属細菌を殺菌し、腸内環境を改善させることにより、動物の成長を促進させることができる。
Claims (3)
- カシューナッツ殻油または加熱処理カシューナッツ殻油を含有することを特徴とするクロストリディウム パーフリンゲンス(Clostridium perfringens)による疾病の防除剤(飼料を除く)。
- カシューナッツ殻油または加熱処理カシューナッツ殻油を含有することを特徴とするクロストリディウム パーフリンゲンス(Clostridium perfringens)による疾病を防除するための医薬。
- クロストリディウム パーフリンゲンス(Clostridium perfringens)による疾病を発症した家畜にカシューナッツ殻油または加熱処理カシューナッツ殻油を投与することを特徴とするクロストリディウム パーフリンゲンス(Clostridium perfringens)による疾病の防除方法。
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