WO2010029685A1 - 変異型酵素の設計法、調製法、及び変異型酵素 - Google Patents

変異型酵素の設計法、調製法、及び変異型酵素 Download PDF

Info

Publication number
WO2010029685A1
WO2010029685A1 PCT/JP2009/003870 JP2009003870W WO2010029685A1 WO 2010029685 A1 WO2010029685 A1 WO 2010029685A1 JP 2009003870 W JP2009003870 W JP 2009003870W WO 2010029685 A1 WO2010029685 A1 WO 2010029685A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
atom
amino acid
enzyme
hoh
acid corresponding
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2009/003870
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
橋爪亮太
三上文三
松原寛敬
松永亜希子
山口庄太郎
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Amano Enzyme Inc
Original Assignee
Amano Enzyme Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Amano Enzyme Inc filed Critical Amano Enzyme Inc
Priority to EP09812834.1A priority Critical patent/EP2351837B1/en
Priority to JP2010528603A priority patent/JP5623282B2/ja
Priority to CN200980134865.4A priority patent/CN102597232B/zh
Priority to US13/062,798 priority patent/US8735131B2/en
Priority to DK09812834.1T priority patent/DK2351837T3/da
Publication of WO2010029685A1 publication Critical patent/WO2010029685A1/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14Hydrolases (3)
    • C12N9/78Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
    • C12N9/80Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5) acting on amide bonds in linear amides (3.5.1)
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14Hydrolases (3)
    • C12N9/48Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)

Definitions

  • the present invention relates to a method for designing and preparing a mutant enzyme for deamidating a protein, a mutant enzyme, and the like.
  • Protein deamidase is an enzyme that hydrolyzes the amide groups of glutamine and asparagine in proteins, converts them into glutamic acid and aspartic acid, and releases ammonia. Protein deamidase improves protein functionality (solubility, emulsification properties, foam properties, gelation properties, etc.), improves wheat gluten dough extensibility, reduces wheat allergen-induced, protein from agricultural products
  • the enzyme is applicable to various uses such as improvement of extraction efficiency and improvement of calcium solubility in protein solution, and it is an industrially highly useful enzyme.
  • Protein deamidase exists widely in nature. The most well-known ones include protein-derived protein glutaminases (Patent Documents 1 and 2). Plants have reported the presence of enzymes that deamidate glutamine residues in proteins from germinating wheat, kidney beans, and pumpkin seeds (Non-patent Document 1). Moreover, its existence is widely known in nature including in vivo, for example, transglutaminase derived from actinomycetes, which has been widely used as a food processing enzyme in recent years, is cross-linked between glutamine and lysine residues in proteins. When the reaction is catalyzed but no primary amine such as lysine is present in the reaction system, the glutamine residue in the protein is deamidated (Non-patent Document 2).
  • Non-patent Document 3 peptide glutaminase, which is an enzyme that deamidates a glutamine residue in a peptide, has been reported in bacteria (Bacillus circulans) (Non-patent Document 3).
  • the substrate, enzyme concentration, reaction temperature, reaction time, etc. are adjusted according to the use as in other enzymes.
  • the target product cannot be produced or the expected yield cannot be obtained only by adjusting the enzyme reaction conditions, and it is necessary to modify the properties of the protein deamidase itself. Has arisen.
  • storage stability is important.
  • enzymes are generally less stable against oxygen, the addition or degassing of stabilizers is necessary to maintain sufficient storage stability. Packaging in the state was necessary, which led to an increase in cost.
  • One of the objects of the present invention is to provide a novel method for improving an enzyme that deamidates a protein.
  • Another object of the present invention is to provide a mutant enzyme having improved action and stability.
  • the change in activity makes it possible to reduce the amount of enzyme used, shorten the reaction time, and expand the application.
  • the improvement in stability makes it possible to provide an enzyme agent with high storage stability.
  • the amino acid at the active site was also clarified, and an amino acid residue thought to affect the electronic state of the side chain of the amino acid at the active center in the vicinity thereof was also clarified. Furthermore, as a result of attempting to modify the properties of the enzyme based on the results of the structural analysis, the substrate specificity was modified and the stability was improved.
  • a method for designing a mutant enzyme comprising the following steps: (1) In the amino acid sequence of protein deamidase (mutation target enzyme), the following group, that is, the amino acid corresponding to the 35th amino acid in the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2, the amino acid corresponding to the 38th amino acid, the 39th amino acid Amino acid corresponding to amino acid corresponding to position 40, amino acid corresponding to amino acid position 41, amino acid corresponding to amino acid position 42, amino acid corresponding to amino acid position 43, amino acid corresponding to amino acid position 45, and amino acid corresponding to position 46 Amino acid corresponding to amino acid position 49, amino acid corresponding to amino acid position 79, amino acid corresponding to amino acid position 80, amino acid corresponding to amino acid position 81, amino acid corresponding to amino acid position 82, and amino acid corresponding to amino acid position 83 , Amino acid corresponding to amino acid 84, amino acid 103
  • step (1) the amino acid corresponding to the 39th amino acid, the amino acid corresponding to the 40th amino acid, the amino acid corresponding to the 41st amino acid, the amino acid corresponding to the 43rd amino acid in the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2; Amino acid corresponding to amino acid 79, amino acid corresponding to amino acid 80, amino acid corresponding to amino acid 81, amino acid corresponding to amino acid 82, amino acid corresponding to amino acid 142, amino acid corresponding to amino acid 143, position 146
  • the mutant enzyme according to [1] wherein one or more amino acids selected from the group consisting of an amino acid corresponding to an amino acid, an amino acid corresponding to an amino acid corresponding to position 166, and an amino acid corresponding to an amino acid corresponding to position 185 are specified.
  • step (1) an amino acid corresponding to the 35th amino acid, an amino acid corresponding to the 38th amino acid, an amino acid corresponding to the 40th amino acid, an amino acid corresponding to the 41st amino acid in the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2; Amino acid corresponding to amino acid 42, amino acid corresponding to amino acid 43, amino acid corresponding to amino acid 45, amino acid corresponding to amino acid 46, amino acid corresponding to amino acid 49, amino acid corresponding to amino acid 80, 81 position An amino acid corresponding to an amino acid, an amino acid corresponding to an amino acid at position 82, an amino acid corresponding to an amino acid at position 83, an amino acid corresponding to an amino acid at position 84, an amino acid corresponding to an amino acid at position 103, an amino acid corresponding to an amino acid
  • step (1) an amino acid corresponding to the 84th amino acid of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2 is specified.
  • step (1) the amino acid is identified by comparing the amino acid sequence of the enzyme to be mutated with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2 and / or the three-dimensional structure of the enzyme to be mutated and SEQ ID NO: 2.
  • [7] The method for designing a mutant enzyme according to any one of [1] to [6], wherein the amino acid identified in step (1) is substituted with an amino acid having a different charge state.
  • the method for designing a mutant enzyme according to any one of [1] to [8], wherein the enzyme to be mutated is a protein deamidase derived from a microorganism.
  • the method for designing a mutant enzyme according to [9], wherein the enzyme to be mutated is a protein glutaminase derived from the genus Criserobacterium.
  • a method for designing a mutant enzyme comprising the following steps: (1) A step of analyzing a pro form of a protein deamidase (mutation target enzyme) and identifying one or more amino acids involved in substrate specificity or oxidative stability; (2) A step of constructing an amino acid sequence in which the amino acid identified in step (1) is substituted with another amino acid or deleted based on the amino acid sequence of the enzyme to be mutated. [14] A method for preparing a mutant enzyme, comprising the following steps: (1) A step of preparing a nucleic acid encoding an amino acid sequence constructed by the design method according to any one of [1] to [13]; (2) a step of expressing the nucleic acid; and (3) a step of recovering the expression product.
  • amino acid sequence of protein deamidase (mutation target enzyme), the following group, that is, the amino acid corresponding to the 35th amino acid, the amino acid corresponding to the 38th amino acid, and the 39th amino acid of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2
  • Amino acid corresponding to amino acid corresponding to position 40 amino acid corresponding to amino acid position 41, amino acid corresponding to amino acid position 42, amino acid corresponding to amino acid position 43, amino acid corresponding to amino acid position 45, and amino acid corresponding to position 46
  • Amino acid corresponding to 84 amino acid 103 position amino acid Amino acid corresponding to amino acid, amino acid corresponding to amino acid at position 104, amino acid corresponding to amino acid at position 105, amino acid
  • the amino acid to be substituted or deleted is the following group: an amino acid corresponding to the 39th amino acid in the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2, an amino acid corresponding to the 40th amino acid, an amino acid corresponding to the 41st amino acid, 43 Amino acid corresponding to the amino acid at position 74, amino acid corresponding to the amino acid at position 79, amino acid corresponding to the amino acid at position 80, amino acid corresponding to the amino acid at position 81, amino acid corresponding to the amino acid at position 82, amino acid corresponding to the amino acid at position 142, amino acid at the position 143 Or an amino acid corresponding to amino acid 146, an amino acid corresponding to amino acid 166, an amino acid corresponding to amino acid 166, and one or more amino acids selected from the group consisting of amino acids corresponding to amino acid 185; Mutant enzyme.
  • the mutant enzyme according to [15], wherein the amino acid to be substituted or deleted is an amino acid corresponding to amino acid 82 at the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2.
  • the amino acid to be substituted or deleted is the following group: an amino acid corresponding to the 35th amino acid, an amino acid corresponding to the 38th amino acid, an amino acid corresponding to the 40th amino acid in the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2, 41 Amino acid corresponding to amino acid at position 44, amino acid corresponding to amino acid at position 42, amino acid corresponding to amino acid at position 43, amino acid corresponding to amino acid at position 45, amino acid corresponding to amino acid at position 46, amino acid corresponding to amino acid at position 49, amino acid at position 80 Amino acid corresponding to amino acid 81, amino acid corresponding to amino acid 82, amino acid corresponding to amino acid 82, amino acid corresponding to amino acid 83, amino acid corresponding to amino acid 84, amino acid corresponding to amino acid 103, amino acid corresponding to amino acid corresponding to amino
  • the mutant enzyme according to [15], wherein the amino acid to be substituted or deleted is an amino acid corresponding to the 84th amino acid in the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2.
  • the mutant enzyme according to any one of [15] to [19], wherein the enzyme to be mutated is a wild-type enzyme.
  • the mutant enzyme according to any one of [15] to [20], wherein the enzyme to be mutated is a protein deamidase derived from a microorganism.
  • the mutant enzyme according to [21], wherein the enzyme to be mutated is a protein glutaminase derived from the genus Criserobacterium.
  • the mutant enzyme according to [21], wherein the enzyme to be mutated is a protein glutaminase derived from Chrysobacterium proteolyticum.
  • [27] A gene encoding the mutant enzyme according to any one of [15] to [26].
  • [28] A recombinant DNA containing the gene according to [27].
  • [29] A microorganism having the recombinant DNA according to [28].
  • the first aspect of the present invention provides a method for designing a mutant enzyme based on an enzyme that deamidates a protein.
  • an enzyme different from the enzyme before mutation can be obtained in terms of action and / or stability.
  • the design method of the present invention is used as a technique for changing the action and stability of the enzyme.
  • the design method of the present invention can be used for the purpose of changing the activity and / or substrate specificity of a protein deamidase for individual protein substrates. More specifically, for example, the design method of the present invention can be used for the purpose of improving the stability of protein deamidase.
  • the specificity with respect to each protein substrate can be changed, it is possible to deamidize a protein having low reactivity so far with a smaller amount of enzyme, that is, to reduce the amount used. Moreover, if different substrate specificities can be imparted, it can be applied to new uses. On the other hand, if the oxidation stability can be improved, effects such as improved ease of handling are brought about during the use of the enzyme or in the process of transportation and storage.
  • Protein glutaminase acts on glutamine residues in proteins and converts them to glutamic acid. Utilizing this property, protein functionality (solubility, emulsification properties, foam properties, gelation properties, etc.), wheat gluten dough extensibility, wheat allergen-induced degradation, agricultural products
  • the enzyme is applicable to various uses such as improvement of protein extraction efficiency and improvement of calcium solubility in protein solution, and it is an industrially useful enzyme. If the reactivity with respect to the amide group in the substrate can be changed, for example, versatility can be improved, the amount of enzyme used (added amount) can be reduced, and the enzyme can be applied to new fields.
  • “activity” refers to an action of hydrolyzing an amide group of glutamine or asparagine in a protein or peptide, converting it to a glutamic acid residue or an aspartic acid residue, respectively, and releasing ammonia, unless otherwise specified. It is used as a generic term for characteristics.
  • the “activity” can be evaluated by relative activity by measuring the amount of free ammonia under a certain condition such as substrate concentration and reaction temperature in a test system using a protein or peptide as a substrate as follows.
  • a protein or peptide is dissolved or dispersed at a concentration of 1% in a 176 mM phosphate buffer (pH 6.0), and a protein deamidase is reacted at 37 ° C.
  • the concentration of ammonia liberated in the reaction solution after a certain time is quantified with Ammonia Test Wako (Wako), and the amount of increase in ammonia per unit time and unit enzyme is measured.
  • the “activity” may be evaluated by comparing the Km value, Kcat value, etc. obtained by a test system using a protein or peptide as a substrate.
  • oxidative stability means the above-described activity in the presence of an oxide (that is, hydrolyzing the amide group of glutamine or asparagine in a protein or peptide, respectively, in the presence of an oxide, This refers to the stability regarding the activity of converting to an aspartic acid residue and releasing ammonia.
  • the oxidation stability can be determined by, for example, the following method.
  • the method for designing a mutant enzyme of the present invention is roughly divided into two steps: a step of identifying an amino acid to be mutated (step (1)) and a step of constructing an amino acid sequence in which the identified amino acid is mutated (step (2)). including. Details of each step will be described below.
  • a step of identifying an amino acid to be mutated (step (1))
  • a step of constructing an amino acid sequence in which the identified amino acid is mutated step (2). Details of each step will be described below.
  • an enzyme that is a basis for designing a mutant enzyme is referred to as “mutation target enzyme”.
  • step (1) one or more amino acids (hereinafter also referred to as “mutation target amino acids”) to be mutated are specified in the amino acid sequence of the protein deamidase (mutation target enzyme).
  • the amino acid to be mutated in the present invention corresponds to the following group, that is, the amino acid corresponding to the 35th amino acid in the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2, and the 38th amino acid.
  • amino acid an amino acid corresponding to the amino acid at position 39, an amino acid corresponding to the amino acid at position 40, an amino acid corresponding to the amino acid at position 41, an amino acid corresponding to the amino acid at position 42, an amino acid corresponding to the amino acid at position 43, an amino acid corresponding to the amino acid at position 45;
  • Amino acid corresponding to amino acid 46 amino acid corresponding to amino acid 49, amino acid corresponding to amino acid 79, amino acid corresponding to amino acid 80, amino acid corresponding to amino acid 81, amino acid corresponding to amino acid 82, position 83
  • Amino acid corresponding to amino acid, phase 84 amino acid Amino acid corresponding to position 103, amino acid corresponding to position 104, amino acid corresponding to position 105, amino acid corresponding to position 106, amino acid corresponding to position 117, amino acid corresponding to position 142 ,
  • amino acids to be mutated consist of mature form (consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2) and pro form (consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4) with respect to protein glutaminase derived from Chryseobacterium proteolyticum strain 9670. Analysis of the three-dimensional structure of) revealed that amino acids suggested to be involved in substrate recognition and / or active center amino acids and nearby amino acids were affected. It is an amino acid. If these amino acids are mutated, it can be expected that the activity (particularly substrate specificity) and / or oxidative stability of the enzyme will change.
  • the term “corresponding” when used for amino acid residues in the present specification means that the protein (enzyme) to be compared has an equivalent contribution to the performance of its function, and in particular, Means equal contribution to substrate specificity.
  • the amino acid sequence to be compared with the reference amino acid sequence that is, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2
  • the amino acid sequence to be compared with the reference amino acid sequence can be optimally compared in consideration of partial homology of the primary structure (that is, amino acid sequence).
  • the amino acid at the position corresponding to the specific amino acid in the reference amino acid sequence is identified as the “corresponding amino acid”. can do.
  • the “corresponding amino acid” can also be specified by comparing three-dimensional structures (three-dimensional structures).
  • a highly reliable comparison result can be obtained by using the three-dimensional structure information.
  • a method of performing alignment while comparing atomic coordinates of the three-dimensional structures of a plurality of enzymes can be taken.
  • the three-dimensional structure information of the enzyme to be mutated can be obtained from, for example, Protein Data Bank (http://www.pdbj.org/index_j.html).
  • Crystallize the protein is indispensable for determining the three-dimensional structure, but it also has industrial utility as a high purity protein purification method and a high density and stable storage method. In addition, you may decide to crystallize the protein which the substrate or its analog compound couple
  • Diffraction data is collected by irradiating the produced crystal with X-rays.
  • protein crystals are damaged by X-ray irradiation and the diffraction ability deteriorates.
  • a cryogenic measurement technique in which the crystal is rapidly cooled to about ⁇ 173 ° C. and diffraction data is collected in that state has recently become widespread.
  • synchrotron radiation having high luminance is used.
  • phase information is required in addition to diffraction data.
  • the heavy atom isomorphous substitution method is a method of obtaining phase information by introducing a metal atom having a large atomic number such as mercury or platinum into a crystal and utilizing the contribution of the metal atom to the X-ray diffraction data of the large X-ray scattering ability. .
  • the determined phase can be improved by smoothing the electron density of the solvent region in the crystal.
  • the phase is improved.
  • the phase is further improved by averaging the electron density of these molecules.
  • the protein model is fitted to the electron density map calculated using the improved phase in this way. This process is performed on a computer graphic using a program such as QUANTA of MSI (USA). Thereafter, the structure is refined using a program such as X-PLOR of MSI, and the structural analysis is completed.
  • crystal structure of a related protein is known for the target protein, it can be determined by molecular replacement using the atomic coordinates of the known protein. Molecular replacement and structural refinement can be performed using programs such as CNS_SOLVE ver.11.
  • the present inventors tried to crystallize the mature form of protein glutaminase purified from the culture solution of Chryseobacterium proteolyticum strain 9670 and to crystallize the pro form of protein glutaminase purified from recombinant Escherichia coli.
  • the three-dimensional structure was successfully obtained.
  • the atomic coordinates of the three-dimensional structure of the pro-form of protein glutaminase are shown at the end of the specification.
  • amino acid sequence of the mature form of the protein glutaminase is shown in SEQ ID NO: 2 in the sequence listing
  • the base sequence of the gene encoding it is shown in SEQ ID NO: 1
  • the amino acid sequence of the pro-form of protein glutaminase is shown in SEQ ID NO: : 4 shows the base sequence of the gene encoding it in SEQ ID NO: 3, respectively.
  • FIG. 1 is the figure which superimposed the alpha carbon of the mature body (dark line) of protein glutaminase, and the pro body (light line), and FIG. 2 represented the higher-order structure of the pro body of protein glutaminase with the ribbon model.
  • FIG. 1 is the figure which superimposed the alpha carbon of the mature body (dark line) of protein glutaminase, and the pro body (light line)
  • FIG. 2 represented the higher-order structure of the pro body of protein glutaminase with the ribbon model.
  • FIG. 3 is an enlarged view of the vicinity of the active center Cys42 and the substrate binding region in the pro form
  • FIG. 4 is an enlarged view of an amino acid region that is thought to affect the active center.
  • the amino acid to be mutated corresponds to the amino acid corresponding to the 39th amino acid, the amino acid corresponding to the 40th amino acid, and the 41st amino acid in the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2.
  • amino acids to be mutated are amino acids that have been suggested to be involved in substrate specificity as a result of analyzing the three-dimensional structure of the protein glutaminase derived from Chryseobacterium proteolyticum strain 9670. And those arranged in the vicinity of the amino acid at the active center.
  • the tyrosine residue at position 82 is located in the vicinity of the pro-region amino acid (Ala- (minus) position 67, etc.) closely linked to the active center cysteine (position 42), and the active pocket Since it is located at the entrance and is expected to form hydrogen bonds with the substrate, it was thought to play an important role in substrate recognition. And when the mutant which substituted the said amino acid with the other amino acid was produced and the property was investigated, it was confirmed that the said amino acid plays an important role regarding substrate specificity (refer the column of an Example). Therefore, in a further preferred embodiment of the present invention, an amino acid corresponding to the amino acid (amino acid at position 82) is used as a mutation target amino acid.
  • the amino acid to be mutated is an amino acid corresponding to the 35th amino acid, an amino acid corresponding to the 38th amino acid, or an amino acid corresponding to the 40th amino acid in the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2.
  • amino acid corresponding to amino acid 41 amino acid corresponding to amino acid 42, amino acid corresponding to amino acid 43, amino acid corresponding to amino acid 45, amino acid corresponding to amino acid 46 and amino acid 49
  • amino acid an amino acid corresponding to the amino acid at position 80, an amino acid corresponding to the amino acid at position 81, an amino acid corresponding to the amino acid at position 82, an amino acid corresponding to the amino acid at position 83, an amino acid corresponding to the amino acid at position 84, an amino acid corresponding to the amino acid at position 103;
  • Amino acid corresponding to the acid is selected from the group consisting of amino acids corresponding to amino acid corresponding to position 106 amino acids, and 117 amino acid position.
  • target amino acids are amino acids that have been suggested to be involved in oxidative stability as a result of analyzing the three-dimensional structure of the mature and pro-form protein glutaminase derived from Chryseobacterium proteolyticum strain 9670. Including those related to the interaction and structure retention of residues (Cys42, His83, Asp103).
  • the 84th amino acid affects the dissociation state of the thiol group of cystene in the vicinity of the active center cysteine (position 42) in the three-dimensional structure analysis of protein glutaminase derived from Chryseobacterium proteolyticum strain 9670. It was expected to play an important role with respect to the ease of oxidation of the active center cysteine. And when the mutant which substituted the said amino acid with the other amino acid was produced and the property was investigated, it was confirmed that the said amino acid plays an important role regarding oxidation stability (refer the column of an Example). Therefore, in a further preferred embodiment of the present invention, the amino acid corresponding to the amino acid (position 84 amino acid) is the amino acid to be mutated.
  • the type and origin of the enzyme to be mutated in the present invention are not particularly limited as long as it is an enzyme that hydrolyzes an amide group in a protein.
  • enzymes to be mutated include enzymes that deamidate glutamine residues in proteins reported in wheat, kidney beans, and pumpkin seeds, transglutaminases derived from microorganisms such as mammals, fish or actinomycetes, and bacteria (Bacillus). -Circulatory peptide glutaminase.
  • a protein deamidase derived from a microorganism more preferably a protein glutaminase derived from Chryseobacterium proteolyticum strain 9670 is used as the enzyme to be mutated.
  • an enzyme consisting of an amino acid sequence having high identity to the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2 is the enzyme to be mutated.
  • an enzyme comprising an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2 is preferably used as the enzyme to be mutated.
  • the higher the identity the better.
  • an enzyme comprising an amino acid sequence having an identity of 80% or more, more preferably 90% or more, and still more preferably 95% or more is defined as an enzyme to be mutated.
  • the identity (%) of two amino acid sequences can be determined by the following procedure, for example.
  • two sequences are aligned for optimal comparison (eg, a gap may be introduced into the first sequence to optimize alignment with the second sequence).
  • a molecule (amino acid residue) at a specific position in the first sequence is the same as the molecule at the corresponding position in the second sequence, the molecule at that position is said to be the same.
  • Gapped BLAST described in Altschul et al. (1997) Amino Acids Research 25 (17): 3389-3402 can be used.
  • the default parameters of the corresponding programs eg, XBLAST and NBLAST
  • XBLAST and NBLAST the default parameters of the corresponding programs
  • gap weight 12, 10, 8, 6, or 4
  • the enzyme to be mutated is typically a wild-type enzyme (an enzyme found in nature). However, this does not preclude that an enzyme that has already undergone some mutation or modification is used as the enzyme to be mutated. Thus, the present invention can be used for the purpose of further improving the properties of the enzyme.
  • Step (2) based on the amino acid sequence of the enzyme to be mutated, an amino acid sequence in which the amino acid identified in step (1) has been replaced with another amino acid or deleted is constructed.
  • the type of amino acid after substitution is not particularly limited. Therefore, it may be a conservative amino acid substitution or a non-conservative amino acid substitution.
  • conservative amino acid substitution refers to substitution of a certain amino acid residue with an amino acid residue having a side chain having the same properties.
  • a basic side chain eg lysine, arginine, histidine
  • an acidic side chain eg aspartic acid, glutamic acid
  • an uncharged polar side chain eg asparagine, glutamine, serine, threonine, tyrosine, cysteine
  • Non-polar side chains eg glycine, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, phenylalanine, methionine, tryptophan
  • ⁇ -branched side chains eg threonine, valine, isoleucine
  • aromatic side chains eg tyrosine, phenylalanine, Like tryptophan
  • a conservative amino acid substitution is preferably a substitution between amino acid residues within the same family.
  • the specified amino acid is substituted with an amino acid having a different charge state. Such substitution can be expected to significantly alter the properties
  • the second aspect of the present invention relates to a method for preparing a mutant enzyme.
  • the preparation method of the present invention includes the following steps. (1) preparing a nucleic acid encoding an amino acid sequence constructed by the design method of the present invention; (2) a step of expressing the nucleic acid; and (3) a step of recovering an expression product.
  • step (1) based on the amino acid sequence constructed by the design method of the present invention, a mutation required for the gene encoding the enzyme to be mutated (that is, the amino acid at a specific position in the protein that is the expression product). Substitution or deletion) is added to obtain a nucleic acid (gene) encoding the mutant enzyme.
  • a mutation required for the gene encoding the enzyme to be mutated that is, the amino acid at a specific position in the protein that is the expression product.
  • substitution or deletion is added to obtain a nucleic acid (gene) encoding the mutant enzyme.
  • Many methods for position-specific nucleotide sequence substitution are known in the art (for example, see Molecular Cloning, Third Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York). Can be used.
  • a position-specific amino acid saturation mutation method can be employed.
  • the position-specific amino acid saturation mutation method is a “Semi-rational, semi-random” technique in which amino acid saturation mutation is introduced by estimating the position where the desired function is involved based on the three-dimensional structure of the protein (J. Mol. Biol. 331, 585-592 (2003)).
  • a position-specific amino acid saturation mutation can be introduced using a kit such as Quick change (Stratagene), Overlap extension PCR (Nucleic Acid Res. 16,7351-7367 (1988)).
  • a DNA polymerase used for PCR Taq polymerase or the like can be used. However, it is preferable to use a highly accurate DNA polymerase such as KOD-PLUS- (Toyobo), Pfu turbo (Stratagene).
  • a mutant enzyme is also encoded by inserting a random mutation into an enzyme gene and comparing the substrate specificity of the expression product of each mutant (modified) to select a gene having a preferred substrate specificity. Genes can be created. In the case of introducing such random mutation, first, mutation is randomly introduced into the target gene region using, for example, error-pron PCR, and a mutant enzyme gene library is constructed. Then, clones are selected from the obtained library using enzyme activity and substrate specificity as indices.
  • step (2) the gene prepared in step (1) is expressed.
  • step (3) the mutant enzyme that is an expression product is recovered.
  • gene expression and expression product are collected using an appropriate host-vector system, but a cell-free synthesis system may be used.
  • a cell-free synthesis system may be used.
  • cell-free synthesis system refers to a ribosome derived from a live cell (or obtained by a genetic engineering technique) This refers to the in vitro synthesis of mRNA or protein encoded by a template nucleic acid (DNA or mRNA) using transcription / translation factors.
  • a cell extract obtained by purifying a cell disruption solution as needed is generally used.
  • Cell extracts generally contain ribosomes necessary for protein synthesis, various factors such as initiation factors, and various enzymes such as tRNA.
  • cell-free transcription / translation system is used interchangeably with a cell-free protein synthesis system, an in vitro translation system or an in vitro transcription / translation system.
  • RNA is used as a template to synthesize proteins.
  • total RNA, mRNA, in vitro transcript and the like are used.
  • the other in vitro transcription / translation system uses DNA as a template.
  • the template DNA should contain a ribosome binding region and preferably contain an appropriate terminator sequence.
  • conditions to which factors necessary for each reaction are added are set so that the transcription reaction and the translation reaction proceed continuously.
  • Mutant enzyme According to the above preparation method, a mutant enzyme having altered activity on proteins and peptides, or a mutant enzyme having altered oxidative stability can be obtained. Therefore, the present invention provides a mutant enzyme as a further aspect.
  • the activity on a protein that is difficult to act on the enzyme to be mutated is improved.
  • the stability in the presence of hydrogen peroxide is improved as compared with the enzyme to be mutated.
  • the mutant enzyme of the present invention is an amino acid sequence corresponding to the 35th amino acid of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2 in the amino acid sequence of an enzyme that hydrolyzes an amide group of a protein (enzyme to be mutated): 38 Amino acid corresponding to the amino acid at position 44, Amino acid corresponding to the amino acid at position 39, Amino acid corresponding to the amino acid at position 40, Amino acid corresponding to the amino acid at position 41, Amino acid corresponding to the amino acid at position 42, Amino acid corresponding to the amino acid at position 43 Amino acid corresponding to amino acid corresponding to position 46, amino acid corresponding to amino acid position 49, amino acid corresponding to amino acid position 79, amino acid corresponding to amino acid position 80, amino acid corresponding to amino acid position 81, and amino acid corresponding to position 82 Amino acid, amino acid corresponding to amino acid at position 83, amino acid at position 84 Amino acids corresponding to amino acids 103, amino acids corresponding
  • the amino acid to be substituted or deleted corresponds to the following group, that is, the amino acid corresponding to the 39th amino acid of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2, and the 40th amino acid.
  • amino acid an amino acid corresponding to the amino acid at position 41, an amino acid corresponding to the amino acid at position 43, an amino acid corresponding to the amino acid at position 79, an amino acid corresponding to the amino acid at position 80, an amino acid corresponding to the amino acid at position 81, an amino acid corresponding to the amino acid at position 82; Selected from the group consisting of an amino acid corresponding to amino acid 142, an amino acid corresponding to amino acid 143, an amino acid corresponding to amino acid 146, an amino acid corresponding to amino acid 166, and an amino acid corresponding to amino acid corresponding to amino acid 185 One or more amino acids.
  • the amino acid to be substituted or deleted is the following group: an amino acid corresponding to the 35th amino acid in the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2, an amino acid corresponding to the 38th amino acid , Amino acid corresponding to amino acid at position 40, amino acid corresponding to amino acid at position 41, amino acid corresponding to amino acid at position 42, amino acid corresponding to amino acid at position 43, amino acid corresponding to amino acid at position 45, amino acid corresponding to amino acid at position 46, 49 Amino acid corresponding to the amino acid at position 80, amino acid corresponding to the amino acid at position 80, amino acid corresponding to the amino acid at position 81, amino acid corresponding to the amino acid at position 82, amino acid corresponding to the amino acid at position 83, amino acid corresponding to the amino acid at position 84, amino acid at position 103
  • An amino acid corresponding to amino acid 104, an amino acid corresponding to amino acid 104, Amino acid corresponding to position 5 the amino acid is one
  • the amino acid to be substituted or deleted is an amino acid corresponding to amino acid 82 and / or 84 of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2.
  • the type and origin of the enzyme to be mutated are the same as in the case of the first aspect described above, and a duplicate description is omitted.
  • Specific examples of the enzyme to be mutated include an enzyme consisting of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2 (protein glutaminase derived from Criseobacterium proteolyticum strain 9670), and an enzyme showing the amino acid sequence in Patent Document 1 (Chryseo) A protein glutaminase derived from Bacterium Greum JCM2410), an enzyme having an amino acid sequence described in Patent Document 3 (transglutaminase derived from Streptomyces mobaraensis S-8112), and the like.
  • the mutant enzyme of the present invention is characterized by having an amino acid sequence mutated at a specific position (amino acid substitution or deletion) in the amino acid sequence of the enzyme before mutation (that is, the enzyme to be mutated). Other than the positions, some amino acids may be mutated or modified.
  • the present invention is a protein (hereinafter also referred to as “homologous protein”) that has the same function but has a different amino acid sequence when compared with the mutant enzyme having the amino acid sequence subjected to the mutation. ).
  • Partially differing amino acid sequences typically means deletion or substitution of one to several amino acids constituting the amino acid sequence, or addition, insertion of one to several amino acids, or these It means that the amino acid sequence is mutated (changed) by the combination.
  • the difference in the amino acid sequence here is permissible as long as the properties relating to hydrolysis of the amide group of the protein are not significantly reduced (preferably within the limit that is substantially retained).
  • the positions where the amino acid sequences are different are not particularly limited, and differences may occur at a plurality of positions.
  • the term “plurality” as used herein refers to, for example, a number corresponding to less than about 30% of all amino acids, preferably a number corresponding to less than about 20%, and more preferably a number corresponding to less than about 10%. The number is preferably less than about 5%, and most preferably less than about 1%. That is, the homologous protein is any one of the above-mentioned mutant enzyme amino acid sequences, for example, about 70% or more, preferably about 80% or more, more preferably about 90% or more, still more preferably about 95% or more, and most preferably about 99%. % Identity.
  • the mutant enzyme can be used for any application that requires hydrolysis of the amide group of the protein.
  • improved protein functionality solubility, emulsification properties, foam properties, gelling properties, etc.
  • improved wheat gluten dough extensibility extensibility
  • reduced wheat allergen induction improved protein extraction efficiency from agricultural products
  • a mutant enzyme can be used to improve calcium solubility in a protein solution.
  • the amount of the mutant enzyme used is appropriately set so that the desired effect is exhibited.
  • effects such as improved handling are brought about during the use of the enzyme or in the process of transportation and storage.
  • Nucleic acid encoding mutant enzyme, etc. The present invention further provides a nucleic acid related to the mutant enzyme of the present invention. That is, a gene encoding a mutant enzyme, a nucleic acid that can be used as a probe for identifying a nucleic acid encoding a mutant enzyme, and a primer for amplifying or mutating a nucleic acid encoding a mutant enzyme Nucleic acids capable of being provided are provided.
  • the gene encoding the mutant enzyme is typically used for the preparation of the mutant enzyme. According to a genetic engineering preparation method using a gene encoding a mutant enzyme, it is possible to obtain a mutant enzyme in a more homogeneous state. The method can also be said to be a suitable method when preparing a large amount of mutant enzyme.
  • the use of the gene encoding the mutant enzyme is not limited to the preparation of the mutant enzyme.
  • the nucleic acid can also be used as an experimental tool for the purpose of elucidating the action mechanism of a mutant enzyme, or as a tool for designing or preparing a further mutant of the enzyme.
  • a “gene encoding a mutant enzyme” refers to a nucleic acid from which the mutant enzyme is obtained when expressed, and has a base sequence corresponding to the amino acid sequence of the mutant enzyme.
  • the nucleic acid includes, of course, a nucleic acid obtained by adding a sequence that does not encode an amino acid sequence to such a nucleic acid. Codon degeneracy is also considered.
  • the nucleic acid of the present invention is isolated by using standard genetic engineering techniques, molecular biological techniques, biochemical techniques, etc. with reference to the sequence information disclosed in this specification or the attached sequence listing. Can be prepared.
  • a nucleic acid having a different base sequence in part of the protein encoded by the same is compared with the base sequence of the gene encoding the mutant enzyme of the present invention.
  • a base sequence defining a homologous nucleic acid is also referred to as “homologous base sequence”).
  • a homologous nucleic acid it consists of a base sequence containing one or more base substitutions, deletions, insertions, additions or inversions based on the base sequence of the nucleic acid encoding the mutant enzyme of the present invention, and Examples include DNA encoding a protein having an activity of hydrolyzing an amide group.
  • Base substitution or deletion may occur at a plurality of sites.
  • the term “plurality” as used herein refers to, for example, 2 to 40 bases, preferably 2 to 20 bases, more preferably 2 to 10 bases, although it varies depending on the position and type of amino acid residues in the three-dimensional structure of the protein encoded by the nucleic acid. It is.
  • homologous nucleic acids include, for example, restriction enzyme treatment, treatment with exonuclease, DNA ligase, etc., site-directed mutagenesis (Molecular Cloning, Third Edition, Chapter 13, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York) It can be obtained by introducing mutations by mutation introduction methods (Molecular Cloning, Third Edition, Chapter 13, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York). Homologous nucleic acids can also be obtained by other methods such as ultraviolet irradiation.
  • nucleic acid having a base sequence complementary to the base sequence of a gene encoding the mutant enzyme of the present invention relates to a nucleic acid having a base sequence complementary to the base sequence of a gene encoding the mutant enzyme of the present invention. Still another embodiment of the present invention provides at least about 60%, 70%, 80%, 90%, 95% of the base sequence of the gene encoding the mutant enzyme of the present invention or a base sequence complementary thereto. Nucleic acids having 99% and 99.9% identical base sequences are provided.
  • Still another embodiment of the present invention is a nucleic acid having a base sequence that hybridizes under stringent conditions to a base sequence of a gene encoding the mutant enzyme of the present invention or a base sequence complementary to the base sequence homologous thereto.
  • the “stringent conditions” here are conditions under which so-called specific hybrids are formed and non-specific hybrids are not formed. Such stringent conditions are known to those skilled in the art, such as Molecular Cloning (Third Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York) and Current protocols in molecular biology (edited by Frederick M. Ausubel et al., 1987) Can be set with reference to.
  • hybridization solution 50% formamide, 10 ⁇ SSC (0.15M NaCl, 15 mM sodium citrate, pH 7.0), 5 ⁇ Denhardt solution, 1% SDS, 10% dextran sulfate, 10 ⁇ g / ml denaturation
  • 5 ⁇ Denhardt solution 1% SDS
  • 10% dextran sulfate 10 ⁇ g / ml denaturation
  • incubation at about 42 ° C to about 50 ° C using salmon sperm DNA, 50 mM phosphate buffer (pH 7.5), followed by washing at about 65 ° C to about 70 ° C using 0.1 x SSC, 0.1% SDS can be mentioned.
  • Further preferable stringent conditions include, for example, 50% formamide, 5 ⁇ SSC (0.15M NaCl, 15 mM sodium citrate, pH 7.0), 1 ⁇ Denhardt solution, 1% SDS, 10% dextran sulfate, 10 ⁇ g / ml as a hybridization solution.
  • nucleic acid having a base sequence of a gene encoding the mutant enzyme of the present invention or a part of a base sequence complementary thereto.
  • a nucleic acid fragment can be used for detecting, identifying, and / or amplifying a nucleic acid having a base sequence of a gene encoding the mutant enzyme of the present invention.
  • the nucleic acid fragment is, for example, a nucleotide portion continuous in the base sequence of the gene encoding the mutant enzyme of the present invention (eg, about 10 to about 100 bases in length, preferably about 20 to about 100 bases, more preferably about 30 to about 100). It is designed to include at least a portion that hybridizes (100 base length).
  • a nucleic acid fragment can be labeled.
  • fluorescent substances, enzymes, and radioisotopes can be used.
  • Still another aspect of the present invention relates to a recombinant DNA containing the gene of the present invention (a gene encoding a mutant enzyme).
  • the recombinant DNA of the present invention is provided, for example, in the form of a vector.
  • vector refers to a nucleic acid molecule capable of transporting a nucleic acid inserted therein into a target such as a cell.
  • An appropriate vector is selected depending on the purpose of use (cloning, protein expression) and in consideration of the type of host cell.
  • M13 phage or a modified version thereof, ⁇ phage or a modified version thereof, pBR322 or a modified version thereof (pB325, pAT153, pUC8, etc.) such as E. coli host vector, pYepSec1, pMFa, pYES2
  • Examples of vectors using insect cells as hosts include pAc and pVL, and examples of vectors using mammalian cells as hosts include pCDM8 and pMT2PC.
  • the vector of the present invention is preferably an expression vector.
  • “Expression vector” refers to a vector capable of introducing a nucleic acid inserted therein into a target cell (host cell) and allowing expression in the cell.
  • Expression vectors usually contain a promoter sequence necessary for the expression of the inserted nucleic acid, an enhancer sequence that promotes expression, and the like.
  • An expression vector containing a selectable marker can also be used. When such an expression vector is used, the presence / absence (and extent) of introduction of the expression vector can be confirmed using a selection marker.
  • Insertion of the nucleic acid of the present invention into a vector, insertion of a selectable marker gene (if necessary), insertion of a promoter (if necessary), etc. are performed using standard recombinant DNA techniques (for example, Molecular Cloning, Third Edition, 1.84, Cold Spring Harbor Laboratory Press and New York, which can be referred to, are known methods using restriction enzymes and DNA ligases).
  • a host cell it is preferable to use a bacterial cell such as Escherichia coli (Escherichia coli) from the viewpoint of ease of handling.
  • Escherichia coli Escherichia coli
  • a host cell capable of replicating a recombinant DNA and expressing a gene of a mutant enzyme If available.
  • Representative examples of preferred hosts include Escherichia coli BL21 (DE3) pLysS when a T7 promoter is used, and Escherichia coli JM109 otherwise.
  • microorganism that is, a transformant
  • the microorganism of the present invention can be obtained by transfection or transformation using the vector of the present invention.
  • calcium chloride method Frnal of Molecular Biology (J. Mol. Biol.), Volume 53, pp. 159 (1970)
  • Hanahan Method Journal of Molecular Biology, Volume 166, 557) (1983)
  • SEM method Gene, 96, 23 (1990)
  • Chung et al. Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA, 86 Vol., P.
  • the microorganism of the present invention can be used for producing the mutant enzyme of the present invention. That is, still another aspect of the present invention provides a method for producing the mutant enzyme of the present invention using the above microorganism.
  • the production method of the present invention includes at least a step of culturing the above microorganism under conditions under which the mutant enzyme of the present invention is produced. Usually, in addition to this step, a step of recovering (separating and purifying) the produced protein is performed.
  • the microorganism (transformant) according to the present invention may be cultured according to a conventional method.
  • the carbon source used in the medium may be any assimitable carbon compound.
  • glucose, sucrose, lactose, maltose, molasses, pyruvic acid and the like are used.
  • the nitrogen source may be any nitrogen compound that can be used.
  • peptone, meat extract, yeast extract, casein hydrolyzate, soybean cake alkaline extract, and the like are used.
  • phosphates, carbonates, sulfates, salts such as magnesium, calcium, potassium, iron, manganese, and zinc, specific amino acids, specific vitamins, and the like are used as necessary.
  • the culture temperature can be set within the range of 30 ° C. to 40 ° C. (preferably around 37 ° C.).
  • the culture time can be set in consideration of the growth characteristics of the transformant to be cultured and the production characteristics of the mutant enzyme.
  • the pH of the medium is adjusted so that the transformant grows and the enzyme is produced.
  • the pH of the medium is about 6.0 to 9.0 (preferably around pH 7.0).
  • the culture solution containing the microbial cells producing the mutated enzyme can be used as it is or after concentration, removal of impurities, etc. as an enzyme solution. to recover. If the produced mutant enzyme is a secretory protein, it can be recovered from the culture solution, and if not, it can be recovered from the bacterial body.
  • the culture supernatant is filtered and centrifuged to remove insolubles, followed by concentration under reduced pressure, membrane concentration, salting out using ammonium sulfate or sodium sulfate, methanol, ethanol, acetone, etc.
  • Fractionation methods such as fractional precipitation, dialysis, heat treatment, isoelectric point treatment, gel filtration, adsorption chromatography, ion exchange chromatography, affinity chromatography, etc. (eg Sephadex gel (Pharmacia Biotech) gel) Separation and purification by combining filtration, DEAE Sepharose CL-6B (Pharmacia Biotech), Octyl Sepharose CL-6B (Pharmacia Biotech), CM Sepharose CL-6B (Pharmacia Biotech)), etc. Obtainable.
  • the microbial cells are collected by filtering, centrifuging, etc., and then the microbial cells are subjected to mechanical methods such as pressure treatment, ultrasonic treatment, or enzymatic methods such as lysozyme. After disruption by the method, a purified mutant enzyme product can be obtained by separation and purification in the same manner as described above.
  • the purified enzyme obtained as described above can be provided by pulverization, for example, by freeze drying, vacuum drying or spray drying. At that time, the purified enzyme may be dissolved in a phosphate buffer, triethanolamine buffer, Tris-HCl buffer or GOOD buffer in advance. Preferably, a phosphate buffer or a triethanolamine buffer can be used. In addition, PIPES, MES, or MOPS is mentioned as a GOOD buffer here.
  • a phosphate buffer or a triethanolamine buffer can be used.
  • PIPES, MES, or MOPS is mentioned as a GOOD buffer here.
  • the PCR reaction was carried out using a KOD plus system (Toyobo) at 94 ° C / 2 minutes, 94 ° C / 15 seconds-70 ° C / 30 seconds-68 ° C / 70 seconds for 30 cycles.
  • the obtained PCR fragment was treated with restriction enzymes NdeI and XhoI, and then ligated to plasmid pET20 (b) (Novagen) cut with both enzymes to obtain expression plasmid pETPG1. It was confirmed by determining the nucleotide sequence that the obtained PCR fragment correctly encoded the pro form of protein glutaminase.
  • SEQ ID NO: 5 5'-CGTGC CATATG GATTCCAACGGGAATCAGG-3 '(underline is a restriction enzyme NdeI recognition site)
  • SEQ ID NO: 6 5'-CTCG CTCGAG AAATCCACAGCTGGATACAT-3' (underline is a restriction enzyme XhoI recognition site)
  • the obtained eluted protein was subjected to TALON affinity chromatography (Clontech) and eluted with 20 mM sodium phosphate / 300 mM imidazole pH 7.0 to obtain a protein glutaminase pro-form.
  • the purified product was subjected to buffer exchange with 0.1 M sodium phosphate (pH 6.1) and concentrated to about 27.5 mg / ml.
  • FIG. 2 shows a ribbon model of a professional higher-order structure. Incidentally, the data of the atomic coordinates of the professional body are shown at the end of the specification.
  • FIG. 3 is an enlarged view of the vicinity of the active center Cys42 and the substrate binding region in the pro form, and FIG. 4 is an enlarged view of an amino acid region that is thought to affect the active center.
  • the tyrosine residue at position 82 is located in the vicinity of the amino acid in the pro region (Ala- (minus) position 67, etc.) closely linked to the active center cysteine (position 42), which is important for substrate recognition. It was thought to play a role (Figure 3).
  • the four tyrosine residues (43, 82, 142, and 143) at the entrance of the cleft leading to the active center have a function of attracting protein molecules due to their hydrophobicity, but the tyrosine residue at the 82 position is the entrance to the active pocket. And is expected to form hydrogen bonds with the substrate (FIG. 3).
  • the amino acid (Tyr82) was replaced with another amino acid, for example, a hydrophilic amino acid having a small steric hindrance, and the effect was verified by the following procedure.
  • the remaining PCR product was treated with restriction enzyme Dpn I to decompose the methylated template plasmid, and transformed into E. coli competent cell DH5 ⁇ strain. . Plasmid DNA was isolated from the obtained ampicillin resistant transformant, the nucleotide sequence was confirmed, and the target mutant gene was obtained. 1. A plasmid having the target mutant gene is introduced into the expression host E. coli BL21 (DE3) strain; In the same manner as (2) and (3), the pro-form of the protein glutaminase mutant Tyr82Ser was expressed and purified.
  • the 84th amino acid is located near the active center cysteine (position 42) at a position that affects the dissociation state of the cysteine thiol group (FIG. 4), and is important for the ease of oxidation of the active center cysteine. Thought to play a role. Under this assumption, the amino acid (Val84) was replaced with another amino acid, for example, an amino acid having a negative charge, by the following procedure, and the effect was verified.
  • a primer for substituting Val84 with aspartic acid was synthesized based on the sequence of the gene encoding the pro-form of protein glutaminase derived from Chryseobacterium proteolyticum strain 9670.
  • the forward primer for mutation shown in SEQ ID NO: 8 and the reverse primer corresponding to each were synthesized, and the following 3.
  • the pro-form of protein glutaminase mutant Val84Asp was expressed and purified by the same method as in (1). Furthermore, 3.
  • An active protein glutaminase mutant Val84Asp mature was purified in the same manner as in (2).
  • SEQ ID NO: 8 5'-GCGTGGAGCTACCAC GAT GCAATATTGGTAAGC-3 '(underline codes for substituted amino acids)
  • the protein glutaminase mutant Val84Asp has significantly improved stability in the presence of hydrogen peroxide compared to the wild type protein glutaminase.
  • the oxidation stability could be improved by introducing the mutation.
  • the Val84 mutation was effective in improving oxidative stability. If the oxidation stability is improved, it becomes possible to omit the stabilizer or reduce the amount of the stabilizer used. In addition, handling in the manufacturing process (particularly the packaging process) is facilitated.
  • the design method / preparation method of the present invention is used to modify an enzyme that deamidates a protein.
  • the mutant enzyme with improved activity for example, it is possible to reduce the amount of enzyme used, shorten the reaction time, expand the use (application to a substrate that could not act), and the like.
  • the mutant enzyme with improved oxidative stability for example, omission of a stabilizer for maintaining storage stability or reduction of the amount of stabilizer used, simplification of a production process (for example, in a deaerated state) It becomes possible to dispense with packaging).
  • the present invention can contribute to the expansion of the use of an enzyme for deamidating proteins and the improvement of usability.
  • REMARK 3 RESOLUTION RANGE HIGH (ANGSTROMS): 1.73 REMARK 3 RESOLUTION RANGE LOW (ANGSTROMS): 81.38 REMARK 3 DATA CUTOFF (SIGMA (F)): NONE REMARK 3 COMPLETENESS FOR RANGE (%): 98.17 REMARK 3 NUMBER OF REFLECTIONS: 76594 REMARK 3 REMARK 3 FIT TO DATA USED IN REFINEMENT.
  • REMARK 3 CROSS-VALIDATION METHOD THROUGHOUT REMARK 3 FREE R VALUE TEST SET SELECTION: RANDOM REMARK 3 R VALUE (WORKING + TEST SET): 0.18371 REMARK 3 R VALUE (WORKING SET): 0.18241 REMARK 3 FREE R VALUE: 0.20864 REMARK 3 FREE R VALUE TEST SET SIZE (%): 5.0 REMARK 3 FREE R VALUE TEST SET COUNT: 4037 REMARK 3 REMARK 3 FIT IN THE HIGHEST RESOLUTION BIN.
  • REMARK 3 ALL ATOMS 5470 REMARK 3 REMARK 3 B VALUES.
  • REMARK 3 FROM WILSON PLOT A ** 2): NULL REMARK 3 MEAN B VALUE (OVERALL, A ** 2): 27.925 REMARK 3 OVERALL ANISOTROPIC B VALUE.
  • REMARK 3 B11 A ** 2): 1.76 REMARK 3 B22 (A ** 2): -1.28 REMARK 3 B33 (A ** 2): -0.49 REMARK 3 B12 (A ** 2): 0.00 REMARK 3 B13 (A ** 2): 0.00 REMARK 3 B23 (A ** 2): 0.00 REMARK 3 REMARK 3 ESTIMATED OVERALL COORDINATE ERROR.

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

 蛋白質を脱アミド化する酵素を改良する新規な方法を提供することを課題とする。 以下のステップによって変異型酵素を設計する;(1)蛋白質脱アミド酵素(変異対象酵素)のアミノ酸配列において、配列番号:2に示すアミノ酸配列の35位、38位、39位、40位、41位、42位、43位、45位、46位、49位、79位、80位、81位、82位、83位、84位、103位、104位、105位、106位、117位、142位、143位、146位、166位、185位のアミノ酸に相当するアミノ酸の中から一又は二以上のアミノ酸を特定するステップ;(2)変異対象酵素のアミノ酸配列を基にして、ステップ(1)で特定されたアミノ酸が他のアミノ酸に置換された、又は削除されたアミノ酸配列を構築するステップ。

Description

変異型酵素の設計法、調製法、及び変異型酵素
 本発明は蛋白質を脱アミド化する変異型酵素の設計法、調製法、及び変異型酵素等に関する。
 蛋白質脱アミド酵素は、蛋白質中のグルタミン、アスパラギンのアミド基を加水分解し、グルタミン酸、アスパラギン酸に変換しアンモニアを遊離する酵素である。蛋白質脱アミド酵素は、蛋白質の機能性(溶解性、乳化特性、泡末特性、ゲル化特性など)の向上、小麦グルテンのドウの伸展性の向上、小麦アレルゲン誘発性の低下、農産物からの蛋白質抽出効率の向上、蛋白質溶液中でのカルシウム溶解性の向上など様々な用途に適用可能であり、産業上の利用性の高い酵素である。
 蛋白質脱アミド酵素は自然界に広く存在する。最も良く知られたものとしては、微生物由来のプロテイングルタミナーゼが挙げられる(特許文献1、2)。植物からは発芽中の小麦、インゲン豆、カボチャの種子から、蛋白質中のグルタミン残基を脱アミドする酵素の存在が報告されている(非特許文献1)。また、生体内も含め自然界に広くその存在が知られており、例えば近年食品加工用酵素として広く使用されている放線菌由来のトランスグルタミナーゼは、蛋白質中のグルタミン残基とリジン残基間で架橋反応を触媒するが、反応系にリジンなどの1級アミンが存在しない場合蛋白質中のグルタミン残基を脱アミド化する(非特許文献2)。また他の微生物においては、細菌(Bacillus circulans)の菌体内に、ペプチド中のグルタミン残基を脱アミド化する酵素であるペプチドグルタミナーゼの存在が報告されている(非特許文献3)。
 蛋白質脱アミド酵素を利用する場合においては、他の酵素と同様、用途に応じて基質及び酵素の濃度、反応温度、反応時間等が調節される。しかしながら、このような酵素反応条件の調節のみでは目的の生成物を製造することができない場合や期待される収量が得られない場合などがあり、蛋白質脱アミド酵素の性質自体を改質する必要性が生じてきた。また、産業用酵素剤として利用する場合は保存安定性が重要であるが、一般に酵素は酸素に対する安定性が低いがため、十分な保存安定性を維持するために安定化剤の添加や脱気状態での包装などが必要であり、コスト増に繋がっていた。
 蛋白質脱アミド酵素の性質を改質するためには、一般に、蛋白質脱アミド酵素の変異体を作製し、その活性、基質特異性等を評価して優良な変異体を同定する必要があるが、これらのプロセスは多大な労力を要するものであった。
特開2000-50887号公報 特開2001-218590号公報 特開2004-97099号公報
Vaintraub, I.A., Kotova, L.V. & Shaha, R. (1996) Protein deamidases from germinating seeds. Physiol. Plantarum. 96, 662-666. 「産業用酵素」(1995)上島孝之、丸善、3.2.6 食品機能の改良「トランスグルタミナーゼの利用」pp.40-42 Kikuchi, M., Hayashida, H., Nakano, E. & Sakaguchi K. (1971) Peptidoglutaminase. Enzymes for selective deamidation of γ-amido of peptide-bound glutamine. Biochemistry 10, 1222-1229.
 本発明の目的の一つは、蛋白質を脱アミド化する酵素を改良する新規な方法を提供することである。また、本発明の別の目的は、作用性及び安定性が改良された変異型酵素を提供することである。作用性の変化は、酵素使用量の低減化や反応時間の短縮化、用途の拡大などを可能とする。一方、安定性の改良は、保存安定性の高い酵素剤の提供を可能とする。
 以上の課題に鑑み鋭意検討した結果、本発明者らはX線結晶構造解析技術を駆使することによって、クリセオバクテリウム・プロテオリティカム9670株(Chryseobacterium proteolyticum 9670)(FERM BP-7351)由来プロテイングルタミナーゼにおいて、基質の認識に関する重要な知見、及び活性部位とその近傍に関する重要な知見を得た。即ち、当該プロテイングルタミナーゼに関して、その成熟体及びプロ体の結晶化に成功するとともにその立体構造情報を得ることに成功し、活性部位と基質ポケットが明らかとなった。これによって基質の認識に関与すると考えられるアミノ酸が特定された。また、活性部位のアミノ酸も明らかとなり、その近傍において活性中心のアミノ酸の側鎖の電子状態に影響を及ぼすと考えられるアミノ酸残基も明らかとなった。さらには、構造解析の結果を基に酵素の性質の改変を試みた結果、基質特異性の改変及び安定性の向上に成功した。
 本発明は主として以上の成果に基づくものであり、以下の変異型酵素の設計法等を提供する。
 [1]以下のステップを含む、変異型酵素の設計法:
 (1)蛋白質脱アミド酵素(変異対象酵素)のアミノ酸配列において、以下の群、即ち配列番号:2に示すアミノ酸配列の35位アミノ酸に相当するアミノ酸、38位アミノ酸に相当するアミノ酸、39位アミノ酸に相当するアミノ酸、40位アミノ酸に相当するアミノ酸、41位アミノ酸に相当するアミノ酸、42位アミノ酸に相当するアミノ酸、43位アミノ酸に相当するアミノ酸、45位アミノ酸に相当するアミノ酸、46位アミノ酸に相当するアミノ酸、49位アミノ酸に相当するアミノ酸、79位アミノ酸に相当するアミノ酸、80位アミノ酸に相当するアミノ酸、81位アミノ酸に相当するアミノ酸、82位アミノ酸に相当するアミノ酸、83位アミノ酸に相当するアミノ酸、84位アミノ酸に相当するアミノ酸、103位アミノ酸に相当するアミノ酸、104位アミノ酸に相当するアミノ酸、105位アミノ酸に相当するアミノ酸、106位アミノ酸に相当するアミノ酸、117位アミノ酸に相当するアミノ酸、142位アミノ酸に相当するアミノ酸、143位アミノ酸に相当するアミノ酸、146位アミノ酸に相当するアミノ酸、166位アミノ酸に相当するアミノ酸、及び185位アミノ酸に相当するアミノ酸からなる群より選択される一又は二以上のアミノ酸を特定するステップ;
 (2)変異対象酵素のアミノ酸配列を基にして、ステップ(1)で特定されたアミノ酸が他のアミノ酸に置換された、又は削除されたアミノ酸配列を構築するステップ。
 [2]ステップ(1)において、配列番号:2に示すアミノ酸配列の39位アミノ酸に相当するアミノ酸、40位アミノ酸に相当するアミノ酸、41位アミノ酸に相当するアミノ酸、43位アミノ酸に相当するアミノ酸、79位アミノ酸に相当するアミノ酸、80位アミノ酸に相当するアミノ酸、81位アミノ酸に相当するアミノ酸、82位アミノ酸に相当するアミノ酸、142位アミノ酸に相当するアミノ酸、143位アミノ酸に相当するアミノ酸、146位アミノ酸に相当するアミノ酸、166位アミノ酸に相当するアミノ酸、及び185位アミノ酸に相当するアミノ酸からなる群より選択される一又は二以上のアミノ酸が特定される、[1]に記載の変異型酵素の設計法。
 [3]ステップ(1)において、配列番号:2に示すアミノ酸配列の82位アミノ酸に相当するアミノ酸が特定される、[1]に記載の変異型酵素の設計法。
 [4]ステップ(1)において、配列番号:2に示すアミノ酸配列の35位アミノ酸に相当するアミノ酸、38位アミノ酸に相当するアミノ酸、40位アミノ酸に相当するアミノ酸、41位アミノ酸に相当するアミノ酸、42位アミノ酸に相当するアミノ酸、43位アミノ酸に相当するアミノ酸、45位アミノ酸に相当するアミノ酸、46位アミノ酸に相当するアミノ酸、49位アミノ酸に相当するアミノ酸、80位アミノ酸に相当するアミノ酸、81位アミノ酸に相当するアミノ酸、82位アミノ酸に相当するアミノ酸、83位アミノ酸に相当するアミノ酸、84位アミノ酸に相当するアミノ酸、103位アミノ酸に相当するアミノ酸、104位アミノ酸に相当するアミノ酸、105位アミノ酸に相当するアミノ酸、106位アミノ酸に相当するアミノ酸、及び117位アミノ酸に相当するアミノ酸からなる群より選択される一又は二以上のアミノ酸が特定される、[1]に記載の変異型酵素の設計法。
 [5]ステップ(1)において、配列番号:2に示すアミノ酸配列の84位アミノ酸に相当するアミノ酸が特定される、[1]に記載の変異型酵素の設計法。
 [6]ステップ(1)におけるアミノ酸の特定が、前記変異対象酵素のアミノ酸配列と配列番号:2に示すアミノ酸配列との比較、及び/又は前記変異対象酵素の立体構造と配列番号:2に示すアミノ酸配列からなる酵素の立体構造との比較によって行われる、[1]~[5]のいずれか一項に記載の変異型酵素の設計法。
 [7]ステップ(1)において特定されたアミノ酸を、電荷状態の異なるアミノ酸に置換する、[1]~[6]のいずれか一項に記載の変異型酵素の設計法。
 [8]前記変異対象酵素が野生型酵素である、[1]~[7]のいずれか一項に記載の変異型酵素の設計法。
 [9]前記変異対象酵素が微生物由来の蛋白質脱アミド酵素である、[1]~[8]のいずれか一項に記載の変異型酵素の設計法。
 [10]前記変異対象酵素がクリセロバクテリウム属由来のプロテイングルタミナーゼである、[9]に記載の変異型酵素の設計法。
 [11]前記変異対象酵素がクリセロバクテリウム・プロテオリティカム由来のプロテイングルタミナーゼである、[9]に記載の変異型酵素の設計法。
 [12]前記変異対象酵素のアミノ酸配列が、配列番号:2に示すアミノ酸配列と70%以上の同一性を有する、[1]~[11]のいずれか一項に記載の変異型酵素の設計法。
 [13]以下のステップを含む、変異型酵素の設計法:
 (1)蛋白質脱アミド酵素(変異対象酵素)のプロ体の構造解析を行い、基質特異性又は酸化安定性に関与する、一又は二以上のアミノ酸を特定するステップ;
 (2)変異対象酵素のアミノ酸配列を基にして、ステップ(1)で特定されたアミノ酸が他のアミノ酸に置換された、又は削除されたアミノ酸配列を構築するステップ。
 [14]以下のステップを含む、変異型酵素の調製法:
 (1)[1]~[13]のいずれか一項に記載の設計法によって構築されたアミノ酸配列をコードする核酸を用意するステップ;
 (2)前記核酸を発現させるステップ、及び
 (3)発現産物を回収するステップ。
 [15]蛋白質脱アミド酵素(変異対象酵素)のアミノ酸配列において、以下の群、即ち配列番号:2に示すアミノ酸配列の35位アミノ酸に相当するアミノ酸、38位アミノ酸に相当するアミノ酸、39位アミノ酸に相当するアミノ酸、40位アミノ酸に相当するアミノ酸、41位アミノ酸に相当するアミノ酸、42位アミノ酸に相当するアミノ酸、43位アミノ酸に相当するアミノ酸、45位アミノ酸に相当するアミノ酸、46位アミノ酸に相当するアミノ酸、49位アミノ酸に相当するアミノ酸、79位アミノ酸に相当するアミノ酸、80位アミノ酸に相当するアミノ酸、81位アミノ酸に相当するアミノ酸、82位アミノ酸に相当するアミノ酸、83位アミノ酸に相当するアミノ酸、84位アミノ酸に相当するアミノ酸、103位アミノ酸に相当するアミノ酸、104位アミノ酸に相当するアミノ酸、105位アミノ酸に相当するアミノ酸、106位アミノ酸に相当するアミノ酸、117位アミノ酸に相当するアミノ酸、142位アミノ酸に相当するアミノ酸、143位アミノ酸に相当するアミノ酸、146位アミノ酸に相当するアミノ酸、166位アミノ酸に相当するアミノ酸、及び185位アミノ酸に相当するアミノ酸が他のアミノ酸に置換された、又は削除されたアミノ酸配列からなる変異型酵素。
 [16]置換又は削除されるアミノ酸が、以下の群、即ち配列番号:2に示すアミノ酸配列の39位アミノ酸に相当するアミノ酸、40位アミノ酸に相当するアミノ酸、41位アミノ酸に相当するアミノ酸、43位アミノ酸に相当するアミノ酸、79位アミノ酸に相当するアミノ酸、80位アミノ酸に相当するアミノ酸、81位アミノ酸に相当するアミノ酸、82位アミノ酸に相当するアミノ酸、142位アミノ酸に相当するアミノ酸、143位アミノ酸に相当するアミノ酸、146位アミノ酸に相当するアミノ酸、166位アミノ酸に相当するアミノ酸、及び185位アミノ酸に相当するアミノ酸からなる群より選択される一又は二以上のアミノ酸である、[15]に記載の変異型酵素。
 [17]置換又は削除されるアミノ酸が、配列番号:2に示すアミノ酸配列の82位アミノ酸に相当するアミノ酸である、[15]に記載の変異型酵素。
 [18]置換又は削除されるアミノ酸が、以下の群、即ち配列番号:2に示すアミノ酸配列の35位アミノ酸に相当するアミノ酸、38位アミノ酸に相当するアミノ酸、40位アミノ酸に相当するアミノ酸、41位アミノ酸に相当するアミノ酸、42位アミノ酸に相当するアミノ酸、43位アミノ酸に相当するアミノ酸、45位アミノ酸に相当するアミノ酸、46位アミノ酸に相当するアミノ酸、49位アミノ酸に相当するアミノ酸、80位アミノ酸に相当するアミノ酸、81位アミノ酸に相当するアミノ酸、82位アミノ酸に相当するアミノ酸、83位アミノ酸に相当するアミノ酸、84位アミノ酸に相当するアミノ酸、103位アミノ酸に相当するアミノ酸、104位アミノ酸に相当するアミノ酸、105位アミノ酸に相当するアミノ酸、106位アミノ酸に相当するアミノ酸、及び117位アミノ酸に相当するアミノ酸からなる群より選択される一又は二以上のアミノ酸である、[15]に記載の変異型酵素。
 [19]置換又は削除されるアミノ酸が、配列番号:2に示すアミノ酸配列の84位アミノ酸に相当するアミノ酸である、[15]に記載の変異型酵素。
 [20]前記変異対象酵素が野生型酵素である、[15]~[19]のいずれか一項に記載の変異型酵素。
 [21]前記変異対象酵素が微生物由来の蛋白質脱アミド酵素である、[15]~[20]のいずれか一項に記載の変異型酵素。
 [22]前記変異対象酵素がクリセロバクテリウム属由来のプロテイングルタミナーゼである、[21]に記載の変異型酵素。
 [23]前記変異対象酵素がクリセロバクテリウム・プロテオリティカム由来のプロテイングルタミナーゼである、[21]に記載の変異型酵素。
 [24]前記変異対象酵素のアミノ酸配列が、配列番号:2に示すアミノ酸配列と70%以上の同一性を有する、[15]~[23]のいずれか一項に記載の変異型酵素。
 [25]基質蛋白質に対する作用性が、前記変異対象酵素に比べて変化している、[16]、[17]、[20]~[23]のいずれか一項に記載の変異型酵素。
 [26]過酸化水素に対する安定性が、前記変異対象酵素に比べて向上している、[18]~[23]のいずれか一項に記載の変異型酵素。 [27][15]~[26]のいずれか一項に記載の変異型酵素をコードする遺伝子。 [28][27]に記載の遺伝子を含む組換えDNA。 [29][28]に記載の組換えDNAを保有する微生物。
クリセオバクテリウム・プロテオリティカム9670株由来のプロテイングルタミナーゼの成熟体(濃線)とプロ体(淡線)のα炭素を重ね合わせた図。 クリセオバクテリウム・プロテオリティカム9670株由来のプロテイングルタミナーゼのプロ体の高次構造をリボンモデルで表した図。α-ヘッリクスとβ-シートをそれぞれ、らせん状と矢印状に示した。 クリセオバクテリウム・プロテオリティカム9670株由来のプロテイングルタミナーゼのプロ体における活性中心Cys42付近と基質結合領域を拡大した図。 クリセオバクテリウム・プロテオリティカム9670株由来のプロテイングルタミナーゼのプロ体における活性中心に影響を及ぼすと思われるアミノ酸領域を拡大した図。
1.変異型酵素の設計法
 本発明の第1の局面は、蛋白質を脱アミド化する酵素を基にした変異型酵素の設計法を提供する。本発明の設計法によれば、作用性及び/又は安定性の点で変異前の酵素と異なる酵素を得ることができる。換言すれば、本発明の設計法は酵素の作用性や安定性を変化させるための手法として利用される。具体的には例えば、蛋白質脱アミド酵素の個々の蛋白質基質に対する活性及び/又は基質特異性を変化させる目的の下、本発明の設計法を利用し得る。さらに具体的には例えば、蛋白質脱アミド酵素の安定性を向上させる目的の下、本発明の設計法を利用し得る。個々の蛋白質基質に対する特異性を変化させることができればこれまで反応性が低い蛋白質もより少ない量の酵素で脱アミド化することが可能になること、即ち使用量の低減が期待できる。また、異なる基質特異性を付与できれば、新規な用途へ適用することが可能となる。一方、酸化安定性を向上することができれば、酵素の使用の際或いは輸送、保存の過程において、扱い易さの向上などの効果がもたらされる。
 蛋白質脱アミド酵素の一つであるプロテイングルタミナーゼは、蛋白質中のグルタミン残基に作用しグルタミン酸に変換する。この性質を利用して、蛋白質の機能性(溶解性、乳化特性、泡末特性、ゲル化特性など)の向上、小麦グルテンのドウの伸展性の向上、小麦アレルゲン誘発性の低下、農産物からの蛋白質抽出効率の向上、蛋白質溶液中でのカルシウム溶解性の向上など様々な用途に適用可能であり、産業上の利用性の高い酵素である。基質中のアミド基に対する反応性を変えることができれば、例えば汎用性の向上、酵素使用量(添加量)の低下などを図ることができると共に、新しい分野への本酵素の適用が可能となる。
 本明細書において「作用性」は、特に説明がない場合、蛋白質又はペプチド中のグルタミン又はアスパラギンのアミド基を加水分解し、それぞれグルタミン酸残基、アスパラギン酸残基に変換しアンモニアを遊離する作用に関する特性を包括する用語として用いられる。「作用性」は、以下の様に蛋白質又はペプチドを基質として用いた試験系において基質濃度、反応温度など一定の条件下での遊離アンモニア量を測定し、相対活性によって評価することができる。
 (1)176 mMのりん酸緩衝液(pH6.0)中に1%濃度で蛋白質又はペプチドを溶解又は分散させ、37℃で蛋白質脱アミド酵素を反応させる。
 (2)一定時間後に反応液中に遊離したアンモニアの濃度をアンモニアテスト・ワコー(和光社)で定量し、単位時間、単位酵素あたりのアンモニア増加量を測定する。
 尚、蛋白質又はペプチドを基質として用いた試験系によって求められるKm値、Kcat値など比較することによって「作用性」を評価することにしてもよい。
 本明細書において「酸化安定性」は、特に説明がない場合、酸化物存在下での上記作用性(即ち、蛋白質又はペプチド中のグルタミン又はアスパラギンのアミド基を加水分解し、それぞれグルタミン酸残基、アスパラギン酸残基に変換しアンモニアを遊離する活性)に関する安定性をさす。酸化安定性は例えば以下の方法で求めることができる。
 (1)0.45~0.9%の過酸化水素を含む176 mMのりん酸緩衝液(pH6.0)中に一定濃度の基質(例えば10 mM Cbz-Gln-Gly)を溶解し、37℃で蛋白質脱アミド酵素を反応させる。
 (2)一定時間後に反応液中に遊離したアンモニアの濃度をアンモニアテスト・ワコーで定量し、アンモニア増加量を測定する。過酸化水素存在下でのアンモニア増加量を、過酸化水素非存在下でアンモニア増加量を100%として表現する。
 本発明の変異型酵素の設計法は大別して二つのステップ、即ち変異させるアミノ酸を特定するステップ(ステップ(1))と、特定したアミノ酸が変異したアミノ酸配列を構築するステップ(ステップ(2))を含む。以下、各ステップの詳細を説明する。尚、本明細書では、変異型酵素を設計するにあたって基礎となる酵素(変異が施される酵素)のことを「変異対象酵素」という。
 ステップ(1)
 ステップ(1)では、蛋白質脱アミド酵素(変異対象酵素)のアミノ酸配列において、変異を施す一又は二以上のアミノ酸(以下、「変異対象アミノ酸」ともいう)を特定する。本発明における変異対象アミノ酸は、蛋白質脱アミド酵素(変異対象酵素)のアミノ酸配列において、以下の群、即ち配列番号:2に示すアミノ酸配列の35位アミノ酸に相当するアミノ酸、38位アミノ酸に相当するアミノ酸、39位アミノ酸に相当するアミノ酸、40位アミノ酸に相当するアミノ酸、41位アミノ酸に相当するアミノ酸、42位アミノ酸に相当するアミノ酸、43位アミノ酸に相当するアミノ酸、45位アミノ酸に相当するアミノ酸、46位アミノ酸に相当するアミノ酸、49位アミノ酸に相当するアミノ酸、79位アミノ酸に相当するアミノ酸、80位アミノ酸に相当するアミノ酸、81位アミノ酸に相当するアミノ酸、82位アミノ酸に相当するアミノ酸、83位アミノ酸に相当するアミノ酸、84位アミノ酸に相当するアミノ酸、103位アミノ酸に相当するアミノ酸、104位アミノ酸に相当するアミノ酸、105位アミノ酸に相当するアミノ酸、106位アミノ酸に相当するアミノ酸、117位アミノ酸に相当するアミノ酸、142位アミノ酸に相当するアミノ酸、143位アミノ酸に相当するアミノ酸、146位アミノ酸に相当するアミノ酸、166位アミノ酸に相当するアミノ酸、及び185位アミノ酸に相当するアミノ酸からなる群より選択される。尚、これらの変異対象アミノ酸は、クリセオバクテリウム・プロテオリティカム9670株由来のプロテイングルタミナーゼに関して成熟体(配列番号:2のアミノ酸配列からなる)及びプロ体(配列番号:4のアミノ酸配列からなる)の立体構造を解析した結果、基質の認識に関与していると示唆されたアミノ酸、及び/または活性中心のアミノ酸とその近傍にあって活性中心のアミノ酸に影響を及ぼすことが明らかになったアミノ酸である。これらのアミノ酸を変異させれば、酵素の作用性(特に基質特異性)及び/又は酸化安定性が変化することを期待できる。
 ここで、本明細書においてアミノ酸残基について使用する場合の用語「相当する」とは、比較されるタンパク質(酵素)間においてその機能の発揮に同等の貢献をしていることを意味し、特に基質特異性に対する貢献が同等であることを意味する。例えば、基準のアミノ酸配列(つまり配列番号:2のアミノ酸配列)に対して比較対象のアミノ酸配列を、一次構造(即ちアミノ酸配列)の部分的な相同性を考慮しつつ、最適な比較ができるように並べたときに(このときに必要に応じてギャップを導入し、アライメントを最適化してもよい)、基準のアミノ酸配列中の特定のアミノ酸に対応する位置のアミノ酸を「相当するアミノ酸」として特定することができる。一次構造同士の比較に代えて、又はこれに加えて立体構造(三次元構造)同士の比較によって「相当するアミノ酸」を特定することもできる。立体構造情報を利用することによって信頼性の高い比較結果が得られる。この場合は、複数の酵素の立体構造の原子座標を比較しながらアライメントを行っていく手法をとることが出来る。変異対象酵素の立体構造情報は例えばProtein Data Bank(http://www.pdbj.org/index_j.html)より取得することができる。
 X線結晶構造解析による蛋白質立体構造の決定方法の一例を以下に示す。
 (1)蛋白質を結晶化する。結晶化は立体構造決定のためには欠かせないが、それ以外にも、蛋白質の高純度の精製法、高密度で安定な保存法としても産業上の有用性がある。尚、リガンドとして基質又はそのアナログ化合物が結合した蛋白質を結晶化することにしても良い。
 (2)作製した結晶にX線を照射して回折データを収集する。なお、蛋白質結晶はX線照射によりダメージを受け回折能が劣化するケースが多々ある。その場合、結晶を急激に-173℃程度に冷却し、その状態で回折データを収集する低温測定技術が最近普及してきた。なお、最終的に、構造決定に利用する高分解能データを収集するために、輝度の高いシンクロトロン放射光が利用される。
 (3)結晶構造解析を行うには、回折データに加えて、位相情報が必要になる。目的の蛋白質に対して、類縁の蛋白質の結晶構造が未知の場合、分子置換法で構造決定することは不可能であり、重原子同型置換法により位相問題が解決されなくてはならない。重原子同型置換法は、水銀や白金等原子番号が大きな金属原子を結晶に導入し、金属原子の大きなX線散乱能のX線回折データへの寄与を利用して位相情報を得る方法である。決定された位相は、結晶中の溶媒領域の電子密度を平滑化することにより改善することが可能である。溶媒領域の水分子は揺らぎが大きいために電子密度がほとんど観測されないので、この領域の電子密度を0に近似することにより、真の電子密度に近づくことができ、ひいては位相が改善されるのである。また、非対称単位に複数の分子が含まれている場合、これらの分子の電子密度を平均化することにより位相が更に大幅に改善される。このようにして改善された位相を用いて計算した電子密度図に蛋白質のモデルをフィットさせる。このプロセスは、コンピューターグラフィックス上で、MSI社(アメリカ)のQUANTA等のプログラムを用いて行われる。この後、MSI社のX-PLOR等のプログラムを用いて、構造精密化を行い、構造解析は完了する。
 目的の蛋白質に対して、類縁の蛋白質の結晶構造が既知の場合は、既知蛋白質の原子座標を用いて分子置換法により決定できる。分子置換と構造精密化はプログラム CNS_SOLVE ver.11などを用いて行うことができる。
 本発明者らは、クリセオバクテリウム・プロテオリティカム9670株の培養液から精製したプロテイングルタミナーゼの成熟体の結晶化、及び組換え大腸菌から精製したプロテイングルタミナーゼのプロ体の結晶化を試み、両者の立体構造を得ることに成功した。尚、プロテイングルタミナーゼのプロ体の立体構造の原子座標を明細書の最後に示す。また、当該プロテイングルタミナーゼの成熟体のアミノ酸配列を配列表の配列番号:2に、それをコードする遺伝子の塩基配列を配列番号:1に、プロテイングルタミナーゼのプロ体のアミノ酸配列を配列表の配列番号:4に、それをコードする遺伝子の塩基配列を配列番号:3にそれぞれ示す。
 後述の実施例に示すように、クリセオバクテリウム・プロテオリティカム9670株由来のプロテイングルタミナーゼの成熟体分子は、62.306×62.306×185.532Åの六方晶系のP6522形を、プロ体分子は56.644×103.290×132.510Åの斜方晶系のP212121形をしていることが判明した(後掲の表1及び表2を参照)。尚、図1はプロテイングルタミナーゼの成熟体(濃線)とプロ体(淡線)のα炭素を重ね合わせた図であり、図2はプロテイングルタミナーゼのプロ体の高次構造をリボンモデルで表した図である。α-ヘッリクスとβ-シートをそれぞれ、らせん状と矢印状に示した。図3はプロ体において活性中心Cys42付近と基質結合領域を拡大した図であり、図4は活性中心に影響を及ぼすと思われるアミノ酸領域を拡大した図である。
 基質特異性の改変を目的とする場合、好ましくは、変異対象アミノ酸が、配列番号:2に示すアミノ酸配列の39位アミノ酸に相当するアミノ酸、40位アミノ酸に相当するアミノ酸、41位アミノ酸に相当するアミノ酸、43位アミノ酸に相当するアミノ酸、79位アミノ酸に相当するアミノ酸、80位アミノ酸に相当するアミノ酸、81位アミノ酸に相当するアミノ酸、82位アミノ酸に相当するアミノ酸、142位アミノ酸に相当するアミノ酸、143位アミノ酸に相当するアミノ酸、146位アミノ酸に相当するアミノ酸、166位アミノ酸に相当するアミノ酸、及び185位アミノ酸に相当するアミノ酸からなる群より選択される。これらの変異対象アミノ酸は、クリセオバクテリウム・プロテオリティカム9670株由来プロテイングルタミナーゼのプロ体の立体構造を解析した結果、基質特異性に関与することが示唆されたアミノ酸であり、クレフト周辺の表面に配置されるもの、及び活性中心のアミノ酸の近傍に配置されるものを含む。
 上記アミノ酸の中でも82位のチロシン残基は、活性中心のシステイン(42位)に密着しているプロ領域のアミノ酸(Ala-(マイナス)67位など)の近傍に配置されていること、活性ポケット入り口に位置し、基質と水素結合を形成することが予想されることから、基質の認識において重要な役割を果たすと考えられた。そして、当該アミノ酸を他のアミノ酸に置換した変異体を作製し、その性質を調べたところ、当該アミノ酸が基質特異性に関して重要な役割を果たすことが確認された(実施例の欄を参照)。そこで本発明の更に好ましい態様では当該アミノ酸(82位アミノ酸)に相当するアミノ酸を変異対象アミノ酸とする。
 一方、酸化安定性の向上を目的とする場合、好ましくは、変異対象アミノ酸が、配列番号:2に示すアミノ酸配列の35位アミノ酸に相当するアミノ酸、38位アミノ酸に相当するアミノ酸、40位アミノ酸に相当するアミノ酸、41位アミノ酸に相当するアミノ酸、42位アミノ酸に相当するアミノ酸、43位アミノ酸に相当するアミノ酸、45位アミノ酸に相当するアミノ酸、46位アミノ酸に相当するアミノ酸、49位アミノ酸に相当するアミノ酸、80位アミノ酸に相当するアミノ酸、81位アミノ酸に相当するアミノ酸、82位アミノ酸に相当するアミノ酸、83位アミノ酸に相当するアミノ酸、84位アミノ酸に相当するアミノ酸、103位アミノ酸に相当するアミノ酸、104位アミノ酸に相当するアミノ酸、105位アミノ酸に相当するアミノ酸、106位アミノ酸に相当するアミノ酸、及び117位アミノ酸に相当するアミノ酸からなる群より選択される。これらの変異対象アミノ酸は、クリセオバクテリウム・プロテオリティカム9670株由来プロテイングルタミナーゼの成熟体及びプロ体の立体構造を解析した結果、酸化安定性に関与することが示唆されたアミノ酸であり、触媒残基(Cys42、His83、Asp103)の相互作用や構造保持に関係するものを含む。
 上記アミノ酸の中でも84位アミノ酸は、クリセオバクテリウム・プロテオリティカム9670株由来のプロテイングルタミナーゼに関する立体構造解析において、活性中心のシステイン(42位)の近傍においてシステンのチオール基の解離状態に影響を及ぼす位置に配置されることから、活性中心システインの酸化され易さに関して重要な役割を果たすと予想された。そして、当該アミノ酸を他のアミノ酸に置換した変異体を作製し、その性質を調べたところ、当該アミノ酸が酸化安定性に関して重要な役割を果たすことが確認された(実施例の欄を参照)。そこで本発明の更に好ましい態様では当該アミノ酸(84位アミノ酸)に相当するアミノ酸を変異対象アミノ酸とする。
 本発明における変異対象酵素の種類や由来等は、蛋白質中のアミド基を加水分解する酵素である限り、特に限定されない。変異対象酵素の例として、小麦、インゲン豆、カボチャの種子で報告されている蛋白質中のグルタミン残基を脱アミドする酵素、哺乳動物、魚或いは放線菌等の微生物由来のトランスグルタミナーゼ、細菌(バチルス・サーキュランス)のペプチドグルタミナーゼなどが挙げられる。好ましくは微生物由来の蛋白質脱アミド酵素、より好ましくはクリセオバクテリウム・プロテオリティカム9670株由来のプロテイングルタミナーゼを変異対象酵素とする。
 配列番号:2に示すアミノ酸配列に対する同一性が高いアミノ酸配列からなる酵素を変異対象酵素とすることが好ましい。その理由として、効果的な改良が達成されることを期待できること、及び変異対象アミノ酸の特定が容易となることが挙げられる。具体的には、配列番号:2に示すアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなる酵素を変異対象酵素とすることが好ましい。ここでの同一性は一般に高いほど好ましい。例えば80%以上、更に好ましくは90%以上、更に更に好ましくは95%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなる酵素を変異対象酵素とする。
 ここで、二つのアミノ酸配列の同一性(%)は例えば以下の手順で決定することができる。まず、最適な比較ができるよう二つの配列を並べる(例えば、第一の配列にギャップを導入して第二の配列とのアライメントを最適化してもよい)。第一の配列の特定位置の分子(アミノ酸残基)が、第二の配列における対応する位置の分子と同じであるとき、その位置の分子が同一であるという。二つの配列の同一性は、その二つの配列に共通する同一位置の数の関数であり(すなわち、同一性(%)=同一位置の数/位置の総数 × 100)、好ましくは、アライメントの最適化に要したギャップの数およびサイズも考慮に入れる。
 二つの配列の比較及び同一性の決定は数学的アルゴリズムを用いて実現可能である。配列の比較に利用可能な数学的アルゴリズムの具体例としては、KarlinおよびAltschul (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-68に記載され、KarlinおよびAltschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-77において改変されたアルゴリズムがあるが、これに限定されることはない。このようなアルゴリズムは、Altschulら (1990) J. Mol. Biol. 215:403-10に記載のNBLASTプログラムおよびXBLASTプログラム(バージョン2.0)に組み込まれている。あるアミノ酸配列に相同的なアミノ酸配列を得るには例えば、XBLASTプログラムでscore = 50、wordlength = 3としてBLASTポリペプチド検索を行えばよい。比較のためのギャップアライメントを得るためには、Altschulら (1997) Amino Acids Research 25(17):3389-3402に記載のGapped BLASTが利用可能である。BLASTおよびGapped BLASTを利用する場合は、対応するプログラム(例えばXBLASTおよびNBLAST)のデフォルトパラメータを使用することができる。詳しくはhttp://www.ncbi.nlm.nih.govを参照されたい。配列の比較に利用可能な他の数学的アルゴリズムの例としては、MyersおよびMiller (1988) Comput Appl Biosci. 4:11-17に記載のアルゴリズムがある。このようなアルゴリズムは、例えばGENESTREAMネットワークサーバー(IGH Montpellier、フランス)またはISRECサーバーで利用可能なALIGNプログラムに組み込まれている。アミノ酸配列の比較にALIGNプログラムを利用する場合は例えば、PAM120残基質量表を使用し、ギャップ長ペナルティ=12、ギャップペナルティ=4とすることができる。
 二つのアミノ酸配列の同一性を、GCGソフトウェアパッケージのGAPプログラムを用いて、Blossom 62マトリックスまたはPAM250マトリックスを使用し、ギャップ加重=12、10、8、6、又は4、ギャップ長加重=2、3、又は4として決定することができる。また、二つの核酸配列の相同度を、GCGソフトウェアパッケージ(http://www.gcg.comで利用可能)のGAPプログラムを用いて、ギャップ加重=50、ギャップ長加重=3として決定することができる。
 変異対象酵素は典型的には野生型酵素(天然において見出される酵素)である。しかしながら、既に何らかの変異ないし改変が施された酵素を変異対象酵素とすることを妨げるものではない。このように本発明は酵素の更なる特性の向上を目的として利用され得る。
 ステップ(2)
 ステップ(2)では、変異対象酵素のアミノ酸配列を基にして、ステップ(1)で特定されたアミノ酸が他のアミノ酸に置換された、又は削除されたアミノ酸配列を構築する。置換後のアミノ酸の種類は特に限定されるものではない。従って、保存的アミノ酸置換であっても非保存的アミノ酸置換であってもよい。ここでの「保存的アミノ酸置換」とは、あるアミノ酸残基を、同様の性質の側鎖を有するアミノ酸残基に置換することをいう。アミノ酸残基はその側鎖によって塩基性側鎖(例えばリシン、アルギニン、ヒスチジン)、酸性側鎖(例えばアスパルギン酸、グルタミン酸)、非荷電極性側鎖(例えばアスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン)、非極性側鎖(例えばグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン)、β分岐側鎖(例えばスレオニン、バリン、イソロイシン)、芳香族側鎖(例えばチロシン、フェニルアラニン、トリプトファン)のように、いくつかのファミリーに分類されている。保存的アミノ酸置換は好ましくは、同一のファミリー内のアミノ酸残基間の置換である。好ましい一態様では、特定されたアミノ酸を電荷状態の異なるアミノ酸へ置換する。このような置換によれば性質の大幅な改変を期待できる。
2.変異型酵素の調製法 本発明の第2の局面は変異型酵素の調製法に関する。本発明の調製法は以下のステップを含む。 (1)本発明の設計法によって構築されたアミノ酸配列をコードする核酸を用意するステップ; (2)前記核酸を発現させるステップ、及び (3)発現産物を回収するステップ。
 ステップ(1)では、本発明の設計法によって構築されたアミノ酸配列に基づいて、変異対象酵素をコードする遺伝子に対して必要な変異(即ち、発現産物であるタンパク質における、特定位置でのアミノ酸の置換又は削除)を加え、変異型酵素をコードする核酸(遺伝子)を得る。位置特異的塩基配列置換のための方法は当該技術分野において数多く知られており(例えば、Molecular Cloning, Third Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New Yorkを参照)、その中から適切な方法を選択して用いることができる。
位置特異的変異導入法として、位置特異的アミノ酸飽和変異法を採用することができる。位置特異的アミノ酸飽和変異法は、タンパクの立体構造を基に、求める機能の関与する位置を推定し、アミノ酸飽和変異を導入する「Semi-rational,semi-random」手法である(J.Mol.Biol.331,585-592(2003))。例えば、Quick change(ストラタジーン社)等のキット、Overlap extention PCR(Nucleic Acid Res. 16,7351-7367(1988))を用いて位置特異的アミノ酸飽和変異を導入することが可能である。PCRに用いるDNAポリメラーゼはTaqポリメラーゼ等を用いることができる。但し、KOD-PLUS-(東洋紡社)、Pfu turbo(ストラタジーン社)などの精度の高いDNAポリメラーゼを用いることが好ましい。
一方、酵素遺伝子にランダムな変異を挿入し、各変異体(改変体)の発現産物の基質特異性を比較して好ましい基質特異性を有する遺伝子を選択することによっても、変異型酵素をコードする遺伝子を作製することができる。このようなランダム変異を導入する場合は、まず例えばエラープロンPCRを利用して標的とする遺伝子領域にランダムに変異を導入し、変異型酵素遺伝子ライブラリーを構築する。そして、得られたライブラリーより、酵素活性や基質特異性を指標としてクローンを選抜する。
ステップ(2)では、ステップ(1)で用意した遺伝子を発現させる。そして続くステップ(3)において発現産物である変異型酵素を回収する。 通常は、適当な宿主-ベクター系を利用して遺伝子の発現~発現産物(変異型酵素)の回収を行うが、無細胞合成系を利用することにしてもよい。尚、宿主-ベクター系を利用した変異型酵素の調製法の詳細に関しては後述(4.変異型酵素をコードする核酸等の欄)の対応する記載が援用される。
 ここで、「無細胞合成系(無細胞転写系、無細胞転写/翻訳系)」とは、生細胞を用いるのではなく、生細胞由来の(或いは遺伝子工学的手法で得られた)リボソームや転写・翻訳因子などを用いて、鋳型である核酸(DNAやmRNA)からそれがコードするmRNAや蛋白質をin vitroで合成することをいう。無細胞合成系では一般に、細胞破砕液を必要に応じて精製して得られる細胞抽出液が使用される。細胞抽出液には一般に、蛋白質合成に必要なリボソーム、開始因子などの各種因子、tRNAなどの各種酵素が含まれる。蛋白質の合成を行う際には、この細胞抽出液に各種アミノ酸、ATP、GTPなどのエネルギー源、クレアチンリン酸など、蛋白質の合成に必要なその他の物質を添加する。勿論、蛋白質合成の際に、別途用意したリボソームや各種因子、及び/又は各種酵素などを必要に応じて補充してもよい。
蛋白質合成に必要な各分子(因子)を再構成した転写/翻訳系の開発も報告されている(Shimizu, Y. et al.: Nature Biotech., 19, 751-755, 2001)。この合成系では、バクテリアの蛋白質合成系を構成する3種類の開始因子、3種類の伸長因子、終結に関与する4種類の因子、各アミノ酸をtRNAに結合させる20種類のアミノアシルtRNA合成酵素、及びメチオニルtRNAホルミル転移酵素からなる31種類の因子の遺伝子を大腸菌ゲノムから増幅し、これらを用いて蛋白質合成系をin vitroで再構成している。本発明ではこのような再構成した合成系を利用してもよい。
用語「無細胞転写/翻訳系」は、無細胞蛋白質合成系、in vitro翻訳系又はin vitro転写/翻訳系と交換可能に使用される。in vitro翻訳系ではRNAが鋳型として用いられて蛋白質が合成される。鋳型RNAとしては全RNA、mRNA、in vitro転写産物などが使用される。他方のin vitro転写/翻訳系ではDNAが鋳型として用いられる。鋳型DNAはリボソーム結合領域を含むべきであって、また適切なターミネータ配列を含むことが好ましい。尚、in vitro転写/翻訳系では、転写反応及び翻訳反応が連続して進行するように各反応に必要な因子が添加された条件が設定される。
3.変異型酵素 以上の調製法によれば、蛋白質、ペプチド対する作用性が変化した変異型酵素、或いは酸化安定性が変化した変異型酵素を得ることができる。そこで本発明は更なる局面として変異型酵素を提供する。好ましい一態様の変異型酵素では、変異対象酵素では作用しにくかった蛋白質対する作用性が向上している。また、好ましい他の態様の変異型酵素では、過酸化水素存在下での安定性が変異対象酵素よりも向上している。
 本発明の変異型酵素は、蛋白質のアミド基を加水分解する酵素(変異対象酵素)のアミノ酸配列において、以下の群、即ち配列番号:2に示すアミノ酸配列の35位アミノ酸に相当するアミノ酸、38位アミノ酸に相当するアミノ酸、39位アミノ酸に相当するアミノ酸、40位アミノ酸に相当するアミノ酸、41位アミノ酸に相当するアミノ酸、42位アミノ酸に相当するアミノ酸、43位アミノ酸に相当するアミノ酸、45位アミノ酸に相当するアミノ酸、46位アミノ酸に相当するアミノ酸、49位アミノ酸に相当するアミノ酸、79位アミノ酸に相当するアミノ酸、80位アミノ酸に相当するアミノ酸、81位アミノ酸に相当するアミノ酸、82位アミノ酸に相当するアミノ酸、83位アミノ酸に相当するアミノ酸、84位アミノ酸に相当するアミノ酸、103位アミノ酸に相当するアミノ酸、104位アミノ酸に相当するアミノ酸、105位アミノ酸に相当するアミノ酸、106位アミノ酸に相当するアミノ酸、117位アミノ酸に相当するアミノ酸、142位アミノ酸に相当するアミノ酸、143位アミノ酸に相当するアミノ酸、146位アミノ酸に相当するアミノ酸、166位アミノ酸に相当するアミノ酸、及び185位アミノ酸に相当するアミノ酸からなる群より選択される一又は二以上のアミノ酸が他のアミノ酸に置換された、又は削除されたアミノ酸配列からなる。
好ましくは、基質特異性の改変を目的とする場合、置換又は削除されるアミノ酸が、以下の群、即ち配列番号:2に示すアミノ酸配列の39位アミノ酸に相当するアミノ酸、40位アミノ酸に相当するアミノ酸、41位アミノ酸に相当するアミノ酸、43位アミノ酸に相当するアミノ酸、79位アミノ酸に相当するアミノ酸、80位アミノ酸に相当するアミノ酸、81位アミノ酸に相当するアミノ酸、82位アミノ酸に相当するアミノ酸、142位アミノ酸に相当するアミノ酸、143位アミノ酸に相当するアミノ酸、146位アミノ酸に相当するアミノ酸、166位アミノ酸に相当するアミノ酸、及び185位アミノ酸に相当するアミノ酸に相当するアミノ酸からなる群より選択される一又は二以上のアミノ酸である。一方、酸化安定性の向上を目的とする場合、置換又は削除されるアミノ酸が、以下の群、即ち配列番号:2に示すアミノ酸配列の35位アミノ酸に相当するアミノ酸、38位アミノ酸に相当するアミノ酸、40位アミノ酸に相当するアミノ酸、41位アミノ酸に相当するアミノ酸、42位アミノ酸に相当するアミノ酸、43位アミノ酸に相当するアミノ酸、45位アミノ酸に相当するアミノ酸、46位アミノ酸に相当するアミノ酸、49位アミノ酸に相当するアミノ酸、80位アミノ酸に相当するアミノ酸、81位アミノ酸に相当するアミノ酸、82位アミノ酸に相当するアミノ酸、83位アミノ酸に相当するアミノ酸、84位アミノ酸に相当するアミノ酸、103位アミノ酸に相当するアミノ酸、104位アミノ酸に相当するアミノ酸、105位アミノ酸に相当するアミノ酸、106位アミノ酸に相当するアミノ酸、及び117位アミノ酸に相当するアミノ酸に相当するアミノ酸からなる群より選択される一又は二以上のアミノ酸である。
さらに好ましくは、置換又は削除されるアミノ酸が、配列番号:2に示すアミノ酸配列の82位及び/又は84位アミノ酸に相当するアミノ酸である。
変異対象酵素の種類や由来等については、上記の第1の局面の場合と同様であり、重複する説明を省略する。尚、変異対象酵素の具体例は、配列番号:2に示すアミノ酸配列からなる酵素(クリセオバクテリウム・プロテオリティカム9670株由来のプロテイングルタミナーゼ)、特許文献1にアミノ酸配列を示す酵素(クリセオバクテリウム・グレウムJCM2410株由来のプロテイングルタミナーゼ)、特許文献3にアミノ酸配列を示す酵素(ストレプトマイセス・モバラエンシスS-8112株由来のトランスグルタミナーゼ)などである。
本発明の変異型酵素は、変異前の酵素(即ち変異対象酵素)のアミノ酸配列において特定の位置で変異(アミノ酸の置換又は削除)したアミノ酸配列を有することを特徴とするが、当該変異に係る位置以外においても一部のアミノ酸の変異ないし改変が行われていてもよい。このように本発明は、上記変異が施されたアミノ酸配列を有する変異型酵素と比較した場合にその機能は同等であるものの一部においてアミノ酸配列が相違するタンパク質(以下、「相同タンパク質」ともいう)をも提供する。「一部においてアミノ酸配列が相違する」とは、典型的には、アミノ酸配列を構成する1~数個のアミノ酸の欠失、置換、若しくは1~数個のアミノ酸の付加、挿入、又はこれらの組合せによりアミノ酸配列に変異(変化)が生じていることをいう。ここでのアミノ酸配列の相違は、蛋白質のアミド基の加水分解に関わる特性が大幅に低下しない限度において(好ましくは実質的に保持される限度において)許容される。この条件を満たす限りアミノ酸配列が相違する位置は特に限定されず、また複数の位置で相違が生じていてもよい。ここでの複数とは例えば全アミノ酸の約30%未満に相当する数であり、好ましくは約20%未満に相当する数であり、さらに好ましくは約10%未満に相当する数であり、より一層好ましくは約5%未満に相当する数であり、最も好ましくは約1%未満に相当する数である。即ち相同タンパク質は、上記変異型酵素のアミノ酸配列のいずれかと例えば約70%以上、好ましくは約80%以上、さらに好ましくは約90%以上、より一層好ましくは約95%以上、最も好ましくは約99%以上の同一性を有する。
変異型酵素は、蛋白質のアミド基の加水分解が必要とされる任意の用途に利用可能である。例えば、蛋白質の機能性(溶解性、乳化特性、泡末特性、ゲル化特性など)の向上、小麦グルテンのドウの伸展性の向上、小麦アレルゲン誘発性の低下、農産物からの蛋白質抽出効率の向上、蛋白質溶液中でのカルシウム溶解性の向上等に変異型酵素を利用することができる。変異型酵素の使用量は目的の効果が発揮されるように適宜設定される。また、保存安定性が向上した変異型酵素によれば、酵素の使用の際或いは輸送、保存の過程において、扱い易さの向上などの効果がもたらされる。
4.変異型酵素をコードする核酸等 本発明は更に、本発明の変異型酵素に関連する核酸を提供する。即ち、変異型酵素をコードする遺伝子、変異型酵素をコードする核酸を同定するためのプローブとして用いることができる核酸、変異型酵素をコードする核酸を増幅又は突然変異等させるためのプライマーとして用いることができる核酸が提供される。
変異型酵素をコードする遺伝子は、典型的には、変異型酵素の調製に利用される。変異型酵素をコードする遺伝子を用いた遺伝子工学的調製法によれば、より均質な状態の変異型酵素を得ることが可能である。また、当該方法は、大量の変異型酵素を調製する場合にも好適な方法といえる。尚、変異型酵素をコードする遺伝子の用途は変異型酵素の調製に限られない。例えば、変異型酵素の作用機構の解明などを目的とした実験用のツールとして、或いは酵素の更なる変異体をデザイン又は作製するためのツールとして、当該核酸を利用することもできる。
本明細書において「変異型酵素をコードする遺伝子」とは、それを発現させた場合に当該変異型酵素が得られる核酸のことをいい、当該変異型酵素のアミノ酸配列に対応する塩基配列を有する核酸は勿論のこと、そのような核酸にアミノ酸配列をコードしない配列が付加されてなる核酸をも含む。また、コドンの縮重も考慮される。
本発明の核酸は、本明細書又は添付の配列表が開示する配列情報を参考にし、標準的な遺伝子工学的手法、分子生物学的手法、生化学的手法などを用いることによって、単離された状態に調製することができる。
本発明の他の態様では、本発明の変異型酵素をコードする遺伝子の塩基配列と比較した場合にそれがコードするタンパク質の機能は同等であるものの一部において塩基配列が相違する核酸(以下、「相同核酸」ともいう。また、相同核酸を規定する塩基配列を「相同塩基配列」ともいう)が提供される。相同核酸の例として、本発明の変異型酵素をコードする核酸の塩基配列を基準として1若しくは複数の塩基の置換、欠失、挿入、付加、又は逆位を含む塩基配列からなり、かつ蛋白質のアミド基を加水分解する活性を有するタンパク質をコードするDNAを挙げることができる。塩基の置換や欠失などは複数の部位に生じていてもよい。ここでの「複数」とは、当該核酸がコードするタンパク質の立体構造におけるアミノ酸残基の位置や種類によっても異なるが例えば2~40塩基、好ましくは2~20塩基、より好ましくは2~10塩基である。
以上のような相同核酸は例えば、制限酵素処理、エキソヌクレアーゼやDNAリガーゼ等による処理、位置指定突然変異導入法(Molecular Cloning, Third Edition, Chapter 13 ,Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York)やランダム突然変異導入法(Molecular Cloning, Third Edition, Chapter 13 ,Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York)による変異の導入などによって得られる。また、紫外線照射など他の方法によっても相同核酸を得ることができる。
本発明の他の態様は、本発明の変異型酵素をコードする遺伝子の塩基配列に対して相補的な塩基配列を有する核酸に関する。本発明の更に他の態様は、本発明の変異型酵素をコードする遺伝子の塩基配列、或いはそれに相補的な塩基配列に対して少なくとも約60%、70%、80%、90%、95%、99%、99.9%同一な塩基配列を有する核酸を提供する。
本発明の更に別の態様は、本発明の変異型酵素をコードする遺伝子の塩基配列又はその相同塩基配列に相補的な塩基配列に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有する核酸に関する。ここでの「ストリンジェントな条件」とは、いわゆる特異的なハイブリッドが形成され、非特異的なハイブリッドが形成されない条件をいう。このようなストリンジェントな条件は当業者に公知であって例えばMolecular Cloning(Third Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York)やCurrent protocols in molecular biology(edited by Frederick M. Ausubel et al., 1987)を参照して設定することができる。ストリンジェントな条件として例えば、ハイブリダイゼーション液(50%ホルムアミド、10×SSC(0.15M NaCl, 15mM sodium citrate, pH 7.0)、5×Denhardt溶液、1% SDS、10% デキストラン硫酸、10μg/mlの変性サケ精子DNA、50mMリン酸バッファー(pH7.5))を用いて約42℃~約50℃でインキュベーションし、その後0.1×SSC、0.1% SDSを用いて約65℃~約70℃で洗浄する条件を挙げることができる。更に好ましいストリンジェントな条件として例えば、ハイブリダイゼーション液として50%ホルムアミド、5×SSC(0.15M NaCl, 15mM sodium citrate, pH 7.0)、1×Denhardt溶液、1%SDS、10%デキストラン硫酸、10μg/mlの変性サケ精子DNA、50mMリン酸バッファー(pH7.5)を用いる条件を挙げることができる。
本発明の更に他の態様は、本発明の変異型酵素をコードする遺伝子の塩基配列、或いはそれに相補的な塩基配列の一部を有する核酸(核酸断片)を提供する。このような核酸断片は、本発明の変異型酵素をコードする遺伝子の塩基配列を有する核酸などを検出、同定、及び/又は増幅することなどに用いることができる。核酸断片は例えば、本発明の変異型酵素をコードする遺伝子の塩基配列において連続するヌクレオチド部分(例えば約10~約100塩基長、好ましくは約20~約100塩基長、更に好ましくは約30~約100塩基長)にハイブリダイズする部分を少なくとも含むように設計される。プローブとして利用される場合には核酸断片を標識化することができる。標識化には例えば、蛍光物質、酵素、放射性同位元素を用いることができる。
本発明のさらに他の局面は、本発明の遺伝子(変異型酵素をコードする遺伝子)を含む組換えDNAに関する。本発明の組換えDNAは例えばベクターの形態で提供される。本明細書におい
て用語「ベクター」は、それに挿入された核酸を細胞等のターゲット内へと輸送することができる核酸性分子をいう。
使用目的(クローニング、タンパク質の発現)に応じて、また宿主細胞の種類を考慮して適当なベクターが選択される。大腸菌を宿主とするベクターとしてはM13ファージ又はその改変体、λファージ又はその改変体、pBR322又はその改変体(pB325、pAT153、pUC8など)等、酵母を宿主とするベクターとしてはpYepSec1、pMFa、pYES2等、昆虫細胞を宿主とするベクターとしてはpAc、pVL等、哺乳類細胞を宿主とするベクターとしてはpCDM8、pMT2PC等を例示することができる。
本発明のベクターは好ましくは発現ベクターである。「発現ベクター」とは、それに挿入された核酸を目的の細胞(宿主細胞)内に導入することができ、且つ当該細胞内において発現させることが可能なベクターをいう。発現ベクターは通常、挿入された核酸の発現に必要なプロモーター配列や、発現を促進させるエンハンサー配列等を含む。選択マーカーを含む発現ベクターを使用することもできる。かかる発現ベクターを用いた場合には、選択マーカーを利用して発現ベクターの導入の有無(及びその程度)を確認することができる。
本発明の核酸のベクターへの挿入、選択マーカー遺伝子の挿入(必要な場合)、プロモーターの挿入(必要な場合)等は標準的な組換えDNA技術(例えば、Molecular Cloning, Third Edition, 1.84, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New Yorkを参照することができる、制限酵素及びDNAリガーゼを用いた周知の方法)を用いて行うことができる。
 宿主細胞としては、取り扱いの容易さの点から、大腸菌(エシェリヒア・コリ)などの細菌細胞を用いることが好ましいが、組換えDNAが複製可能で且つ変異型酵素の遺伝子が発現可能な宿主細胞であれば利用可能である。好ましい宿主の代表例として、T7系プロモーターを利用する場合はエシェリヒア・コリBL21(DE3)pLysS、そうでない場合はエシェリヒア・コリJM109を挙げることができる。
本発明の他の局面は、本発明の組換えDNAを保有する微生物(即ち形質転換体)に関する。本発明の微生物は、上記本発明のベクターを用いたトランスフェクション乃至はトランスフォーメーションによって得ることができる。例えば、塩化カルシウム法(ジャーナル オブ モレキュラー バイオロジー(J.Mol. Biol.)、第53巻、第159頁 (1970))、ハナハン(Hanahan)法(ジャーナル オブ モレキュラー バイオロジー、第166巻、第557頁 (1983))、SEM法(ジーン(Gene)、第96巻、第23頁(1990))、チャング(Chung)らの方法(プロシーディングズ オブ ザ ナショナル アカデミー オブ サイエンシーズ オブ ザ USA、第86巻、第2172頁(1989))、リン酸カルシウム共沈降法、エレクトロポーレーション(Potter,H. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 81, 7161-7165(1984))、リポフェクション(Felgner, P.L. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 84,7413-7417(1984))等によって実施することができる。
本発明の微生物は、本発明の変異型酵素を生産することに利用することができる。即ち、本発明の更に他の局面は、上記微生物を用いて本発明の変異型酵素を生産する方法を提供する。本発明の生産方法は、上記微生物を本発明の変異型酵素が産生される条件下で培養するステップを少なくとも含む。通常はこのステップに加えて、産生されたタンパク質を回収(分離及び精製)するステップが実施される。
本発明に係る微生物(形質転換体)の培養は常法に従えばよい。培地に使用する炭素源としては資化可能な炭素化合物であればよく、例えばグルコース、シュークロース、ラクトース、マルトース、糖蜜、ピルビン酸などが使用される。また、窒素源としては利用可能な窒素化合物であればよく、例えばペプトン、肉エキス、酵母エキス、カゼイン加水分解物、大豆粕アルカリ抽出物などが使用される。その他、リン酸塩、炭酸塩、硫酸塩、マグネシウム、カルシウム、カリウム、鉄、マンガン、亜鉛などの塩類、特定のアミノ酸、特定のビタミンなどが必要に応じて使用される。
一方、培養温度は30℃~40℃の範囲内(好ましくは37℃付近)で設定することができる。培養時間は、培養対象の形質転換体の生育特性や変異型酵素の産生特性などを考慮して設定することができる。培地のpHは、形質転換体が生育し且つ酵素が産生される範囲内に調製される。好ましくは培地のpHを6.0~9.0程度(好ましくはpH7.0付近)とする。
変異型酵素を生産する菌体を含む培養液をそのまま、或いは濃縮、不純物の除去などを経た後に酵素溶液として利用することもできるが、一般的には培養液又は菌体より変異型酵素を一旦回収する。産生される変異型酵素が分泌型タンパク質であれば培養液より、それ以外であれば菌体内より回収することができる。培養液から回収する場合には、例えば培養上清をろ過、遠心処理して不溶物を除去した後、減圧濃縮、膜濃縮、硫酸アンモニウムや硫酸ナトリウムを利用した塩析、メタノールやエタノール又はアセトンなどによる分別沈殿法、透析、加熱処理、等電点処理、ゲルろ過や吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー等の各種クロマトグラフィー(例えば、セファデックス(Sephadex)ゲル(ファルマシアバイオテク)などによるゲルろ過、DEAEセファロースCL-6B (ファルマシアバイオテク)、オクチルセファロースCL-6B (ファルマシアバイオテク)、CMセファロースCL-6B(ファルマシアバイオテク))などを組み合わせて分離、精製を行ことにより変異型酵素の精製品を得ることができる。他方、菌体内から回収する場合には、培養液をろ過、遠心処理等することによって菌体を採取し、次いで菌体を加圧処理、超音波処理などの機械的方法またはリゾチームなどによる酵素的方法で破壊した後、上記と同様に分離、精製を行うことにより変異型酵素の精製品を得ることができる。
上記のようにして得られた精製酵素を、例えば凍結乾燥や真空乾燥或いはスプレードライなどにより粉末化して提供することも可能である。その際、精製酵素を予めリン酸緩衝液、トリエタノールアミン緩衝液、トリス塩酸緩衝液やGOODの緩衝液に溶解させておいてもよい。好ましくは、リン酸緩衝液、トリエタノールアミン緩衝液を使用することができる。尚、ここでGOODの緩衝液としてはPIPES、MES又はMOPSが挙げられる。 以下、本発明を実施例により更に具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されない。
1.プロテイングルタミナーゼの成熟体のX線結晶構造解析(1)プロテイングルタミナーゼの成熟体の調製 クリセオバクテリウム・プロテオリティカム9670株由来のプロテイングルタミナーゼ成熟体は、既報(Yamaguchi, S., Jeens D.J. & Archer, D.B. (2001) Protein-glutaminase from Chryseobacterium proteolyticum, an enzyme that deamidates glutaminyl residues in proteins. Purification, characterization and gene cloning. Eur. J. Biochem., 268, 1410-1421)の方法に従って調製した。
(2)結晶化
 プロテイングルタミナーゼの成熟体の結晶化は次の手順で行った。まずHampton Research社の24穴プレートを用いたシッティングドロップ蒸気拡散法でスクリーニングした。20℃で静置し、数日後に三つのウェルにおいて結晶が観察された。このうち最も良好な条件を採用し、ハンギングドロップ蒸気拡散法を用い、5μlの酵素液(40mg/ml)と5μlのリザーバー溶液(1.0M リン酸アンモニウム 0.1M クエン酸ナトリウム pH5.6)からなる10μlのハンギングドロップで良好な結晶を得た。X線解析に先立ち30%グリセロールを含むリザーバー溶液で処理後、液体窒素(-173℃)で瞬間冷却した。
(3)X線解析
 X線回折データは、液体窒素の温度でスプリング・エイト(SPring-8、兵庫県)のシンクロトロン・ラジエーションBL-38B1を用いて収集し、HKL2000プログラムを用いて加工した。1.15Å分解能のX線回折データを収集し、結晶学的パラメーターを決定した。空間群はP6522、格子定数は、a=62.306Å、b=62.306Å、c=185.582Åとなった。
(4)三次元構造決定
 三次元構造は、2mM Na[AuCl4]に5分間ソーキングし、金原子を導入して、この異常分散を利用し位相を決定する重原子同型置換法により分解能1.15Åで決定した。位相決定にはSEHLXD, SHELXCプログラムを用い、モデリングにWinCoot、構造精密化にはRefmac5, SHELXLを用いた。データ収集と精密化の統計値データを表1に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
2.プロテイングルタミナーゼのプロ体のX線結晶構造解析(1)プロテイングルタミナーゼのプロ体の大腸菌での発現プラスミドの作製 クリセオバクテリウム・プロテオリティカム9670株由来のプロテイングルタミナーゼのプロ体をコードする遺伝子(GenBank Accesion No. AB046594)を、以下の様にPCRにより増幅した。Sambrookらの方法(Molecular Cloning: a laboratory manual, 2nd Edition, Cold Spring harbor Laboratory Press, 1989)により単離したクリセオバクテリウム・プロテオリティカム9670株の染色体DNAをPCRの鋳型とし、配列番号:5と配列番号:6のオリゴヌクレオチドを合成しプライマーとした。PCR反応は、KODプラスシステム(東洋紡)を用いて、94℃/2分、94℃/15秒 - 70℃/30秒 - 68℃/70秒を30サイクル行った。得られたPCR断片を制限酵素NdeI及びXhoIで処理後、同じく両酵素で切断したプラスミドpET20(b)(Novagen社)に連結し発現プラスミドpETPG1を得た。得られたPCR断片が正しくプロテイングルタミナーゼのプロ体をコードしていることは塩基配列を決定することにより確認した。
配列番号:5 5’-CGTGCCATATGGATTCCAACGGGAATCAGG-3’(アンダーラインは制限酵素NdeI認識部位) 配列番号:6 5’-CTCGCTCGAGAAATCCACAGCTGGATACAT-3’(アンダーラインは制限酵素XhoI認識部位)
(2)プロテイングルタミナーゼのプロ体の大腸菌での発現 上記の発現プラスミドを大腸菌BL21(DE3)(Novagen社)に形質転換により導入した。得られた形質転換体を、100μ/mlのアンピシリンを含むLB培地800ml x 2に接種し、37℃で振とうした。600nmの濁度が0.6~0.8に達した時点で終濃度0.5mMになるようにイソプロピルチオガラクトシド(IPTG)を添加し、さらに18℃で15時間培養した。培養液から遠心分離で菌体を集め、緩衝液(20mM リン酸ナトリウム(pH6.3)、0.5M NaCl、10mM imidazole)に懸濁した。
(3)組換えプロテイングルタミナーゼのプロ体の精製
 (2)で得られた懸濁液を氷水中、20分間、200μAで超音波処理後、14000rpm、4℃、30分の遠心分離に供し粗抽出液を得た。これをNi-NTAアフィニティクロマトグラフィー(Qiagen社)に供し、20mM リン酸ナトリウム/300mM imidazole(pH7.0)で溶出した。得られた溶出蛋白質をTALONアフィニティクロマトグラフィー(Clontech社)に供し、同じく20mM リン酸ナトリウム/300mM imidazole pH7.0で溶出し、プロテイングルタミナーゼのプロ体を得た。この精製物を0.1M リン酸ナトリウム(pH 6.1)を用いてbuffer交換を行うとともに、27.5mg/ml程度まで濃縮した。
(4)結晶化
 プロテイングルタミナーゼのプロ体の結晶化は次の手順で行った。まずHampton Research社のPEG/Ion Screenによって24穴プレート二枚を用いたシッティングドロップ蒸気拡散法でスクリーニングした。20℃で静置し、数日後に22個のウェルにおいて結晶が観察された。このうち最も良好な結晶は、2μlの酵素液(27mg/ml)と2μlのリザーバー溶液(20% PEG3350, 0.2M クエン酸アンモニウム pH5.1)からなる4μlシッティングドロップから得た。X線解析に先立ち20%メチルペンタジオールを含むリザーバー溶液で処理後、液体窒素(-173℃)で瞬間冷却した。
(5)X線解析 X線回折データは、液体窒素の温度でスプリング・エイト(SPring-8、兵庫県)のシンクロトロン・ラジエーションBL-38B1を用いて収集し、HKL2000プログラムを用いて加工した。1.73Å分解能のX線回折データを収集し、結晶学的パラメーターを決定した。空間群はP212121、格子定数は、a=56.644Å、b=103.290Å、c=132.510Åとなった。
(6)三次元構造決定 三次元構造は、先に解いたプロテイングルタミナーゼ原子座標を用いて、分子置換法により分解能1.73Åで決定した。位相決定にはphaserを用い、モデリングをWinCootで、構造精密化にはRefmac5を用いた。データ収集と精密化の統計値データを表2に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
 得られたクリセオバクテリウム・プロテオリティカム9670株由来のプロテイングルタミナーゼの成熟体(濃線)及びプロ体(淡線)の三次元構造のモデルを図1(α炭素を重ね合わせた図)に示す。また、プロ体の高次構造のリボンモデルを図2に示す。尚、プロ体の原子座標のデータは明細書の最後に示す。図3はプロ体において活性中心Cys42付近と基質結合領域を拡大した図であり、図4は活性中心に影響を及ぼすと思われるアミノ酸領域を拡大した図である。
3.プロテイングルタミナーゼ変異体Tyr82Serの作製
 2.で得られたクリセオバクテリウム・プロテオリティカム9670株由来のプロテイングルタミナーゼのプロ体の三次元構造から、クレフト周辺の表面に配置されること或いは活性中心のアミノ酸の近傍に配置されることを理由に、基質特異性に影響し得るアミノ酸として39位アミノ酸、40位アミノ酸、41位アミノ酸、43位アミノ酸、79位アミノ酸、80位アミノ酸、81位アミノ酸、82位アミノ酸、142位アミノ酸、143位アミノ酸、146位アミノ酸、166位アミノ酸及び185位アミノ酸を特定した。中でも82位のチロシン残基は、活性中心のシステイン(42位)に密着しているプロ領域のアミノ酸(Ala-(マイナス)67位など)の近傍に配置されており、基質の認識に関して重要な役割を果たすと考えられた(図3)。また、活性中心へ通じるクレフトの入り口にある4つのチロシン残基(43、82、142、143位)はその疎水性によってタンパク質分子を引き寄せる働きがあるが、82位のチロシン残基は活性ポケット入り口に位置し、基質と水素結合を形成することが予想される(図3)。この推測の下、以下の手順で当該アミノ酸(Tyr82)を他のアミノ酸、例えば親水性で立体障害の小さいアミノ酸へ置換しその効果を検証した。
(1)プロテイングルタミナーゼ変異体Tyr82Serのプロ体の発現
 クリセオバクテリウム・プロテオリティカム9670株由来のプロテイングルタミナーゼのプロ体をコードする遺伝子の配列を基にして、Tyr82をセリンに置換するためのプライマーを合成した。配列番号:7に示す変異用のフォーワード・プライマー、及びそれぞれに相当するリバース・プライマーを合成し100ng/μlの濃度に調製した。クリセオバクテリウム・プロテオリティカム9670株由来のプロテイングルタミナーゼのプロ体の発現プラスミドpETPG1を鋳型とし、Quickchange PCRシステム(ストラタジーン社)を用いてPCR反応を行った。1μl(20ng/μl)のpETPG1、5μlの10 x PCR緩衝液(後述のDNAポリメラーゼに添付されているもの)、1.0μl(それぞれ2.5mM)のdNTP、各1.25μlの変異プライマー・セット(フォーワード及びリバース・プライマー)、39μlの滅菌水、1μl(2.5U)のPfu Turbo Hotstart DNAポリメラーゼ(ストラタジーン社)を調製し、95℃/30秒(変性)- 60℃/1分(アニール)- 68℃/4.7分(伸長)を17サイクル行い、最終68℃/5分の増幅を行った。得られたPCR産物を1%アガロースゲル電気泳動で確認後、残りのPCR産物について、メチル化された鋳型プラスミドを分解するため制限酵素Dpn Iで処理し、大腸菌コンピテントセルDH5α株に形質転換した。得られたアンピシリン耐性形質転換体からプラスミドDNAを単離し塩基配列を確認して、目的の変異遺伝子を取得した。目的の変異遺伝子を有するプラスミドを、発現宿主大腸菌BL21(DE3)株に導入し、2.(2)及び(3)と同様にして、プロテイングルタミナーゼ変異体Tyr82Serのプロ体を発現、精製した。
 配列番号:7 5’-TGTGTGGCGTGGAGCTCTCACGTTGCAATATTG-3’(アンダーラインは置換アミノ酸をコードする)
(2)プロテイングルタミナーゼ変異体Tyr82Serの成熟体の精製
 次にプロ領域を取り除くため、9.32 U/mg-蛋白質のトリプシン(Sigma社)を添加し、30℃で4時間反応させた。反応液をTALONアフィニティクロマトグラフィーに供してプロテアーゼを未吸着画分に取り除いた後、20mM リン酸ナトリウム/300mM imidazole(pH7.0)で溶出した。溶出画分を20mM クエン酸ナトリウム緩衝液 pH4.9で透析し、MonoS 陽イオン交換クロマトグラフィー(GEヘルスケア バイオサイエンス社)に供した。吸着した蛋白質を0.5MのNaClグラジエントで溶出することにより、活性のあるプロテイングルタミナーゼ変異体Tyr82Serの成熟体を精製した。
4.プロテイングルタミナーゼ変異体Tyr82Serの基質特異性
 3.で調製したプロテイングルタミナーゼ変異体Tyr82Serの成熟体の各種蛋白質に対する特異性を調べた。α‐ラクトアルブミン(Sigma社)、β‐ラクトグロブリン(Sigma社)、分離大豆蛋白(フジプロF、不二製油社)、小麦グルテン(Viten、ロケッテ社)及びカゼイン(和光社)を各0.2%含む20 mMリン酸緩衝液(pH6.0)196μlに、0.3μg/4μlプロテイングルタミナーゼ変異体Tyr82Serの成熟体を添加し、37℃で10~200分間反応させた。終濃度0.2Mになるようにトリクロロ酢酸を添加し反応を停止後、遊離したアンモニアをアンモニアテスト・ワコー(和光社)で定量した。対照として変異型プロテイングルタミナーゼの成熟体を同量用いた。単位時間当たりの遊離アンモニア量を求め、α‐ラクトアルブミンに対するそれを100%として、各種蛋白質に対する遊離アンモニア量を相対値で表した。結果を表3に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
 プロテイングルタミナーゼ変異体Tyr82Serは、野生型プロテイングルタミナーゼに比べ、β‐ラクトグロブリン、分離大豆蛋白、小麦グルテンにより作用しやすくなった一方、カゼインに対しては反応性が低下していることが判る。このように、変異の導入によって各種蛋白質に対する作用性を変化させることができた。以上の結果によって、Tyr82の変異が基質特異性の改変に有効であることを確認できた。尚、作用性が向上すれば酵素使用量を低減できる。また、用途の拡大も期待できる。
5.プロテイングルタミナーゼ変異体Val84Aspの作製
 クリセオバクテリウム・プロテオリティカム9670株由来のプロテイングルタミナーゼの成熟体及びプロ体の三次元構造を解析した結果、触媒残基(Cys42、His83、Asp103)の相互作用や構造保持に関係し、酸化安定性に影響し得るアミノ酸として35位アミノ酸、38位アミノ酸、40位アミノ酸、41位アミノ酸、42位アミノ酸、43位アミノ酸、45位アミノ酸、46位アミノ酸、49位アミノ酸、80位アミノ酸、81位アミノ酸、82位アミノ酸、83位アミノ酸、84位アミノ酸、103位アミノ酸、104位アミノ酸、105位アミノ酸、106位アミノ酸及び117位アミノ酸が特定された。中でも84位アミノ酸は、活性中心のシステイン(42位)の近傍においてシステインのチオール基の解離状態に影響を及ぼす位置に配置されており(図4)、活性中心システインの酸化され易さに関して重要な役割を果たすと考えられた。この推測の下、以下の手順で当該アミノ酸(Val84)を他のアミノ酸、例えば負電荷を有するアミノ酸へ置換しその効果を検証した。
 クリセオバクテリウム・プロテオリティカム9670株由来のプロテイングルタミナーゼのプロ体をコードする遺伝子の配列を基にして、Val84をアスパラギン酸に置換するためのプライマーを合成した。配列番号:8に示す変異用のフォーワード・プライマー、及びそれぞれに相当するリバース・プライマーを合成し、以下3.(1)と同様の方法で、プロテイングルタミナーゼ変異体Val84Aspのプロ体を発現、精製した。さらに、3.(2)と同様の方法で、活性のあるプロテイングルタミナーゼ変異体Val84Aspの成熟体を精製した。
 配列番号:8 5’-GCGTGGAGCTACCACGATGCAATATTGGTAAGC-3’(アンダーラインは置換アミノ酸をコードする)
6.プロテイングルタミナーゼ変異体Val84Aspの酸化安定性
 5.で調製したプロテイングルタミナーゼ変異体Val84Aspの酸化安定性を調べるため、過酸化水素存在下での安定性を調べた。0.45若しくは0.9%の過酸化水素を含有する10 mM Z-Gln-Gly(ペプチド研究所社)/100 mMりん酸緩衝液(pH6.0)の基質液に、0.809μgのプロテイングルタミナーゼ変異体Val84Aspの成熟体を添加し、37℃で20分間反応させた。終濃度0.2Mになるようにトリクロロ酢酸を添加し反応を停止後、遊離したアンモニアをアンモニアテスト・ワコー(和光社)で定量した。対照として0.121μgの野生型プロテイングルタミナーゼの成熟体を用いた。単位時間当たりの遊離アンモニア量を求め、過酸化水素非存在下のそれを100%として、各過酸化水素濃度における遊離アンモニア量を相対値で表し残存活性とした。結果を表4に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
 このように、プロテイングルタミナーゼ変異体Val84Aspは、野生型プロテイングルタミナーゼに比べ、過酸化水素存在下での安定性が著しく向上していることが判る。このように、変異の導入によって酸化安定性を向上させることができた。このように、Val84の変異が酸化安定性の向上に有効であることを確認できた。尚、酸化安定性が向上すれば、安定化剤を省くことや、或いは安定化剤の使用量を低減することが可能となる。また、製造工程(特に包装工程)における取り扱いも容易となる。
本発明の設計法・調製法は、蛋白質を脱アミド化する酵素の改変に利用される。作用性が向上した変異型酵素によれば、例えば、酵素使用量の低減や反応時間の短縮化、用途の拡大(作用し得なかった基質への適用など)などが可能となる。また、酸化安定性が向上した変異型酵素によれば、例えば、保存安定性を維持するための安定化剤の省略又は安定剤の使用量の低減、製造工程の簡略化(例えば脱気状態で包装しなくてもよくなる)などが可能となる。一方、本発明の設計法・調製法を利用することによって、野生型酵素では想定できなかった新規な用途に適用可能な変異型酵素が提供されることを期待できる。即ち、蛋白質を脱アミド化する酵素の用途の拡大、使いやすさの向上に本発明は貢献し得る。
この発明は、上記発明の実施の形態及び実施例の説明に何ら限定されるものではない。特許請求の範囲の記載を逸脱せず、当業者が容易に想到できる範囲で種々の変形態様もこの発明に含まれる。 本明細書の中で明示した論文、公開特許公報、及び特許公報などの内容は、その全ての内容を援用によって引用することとする。
クリセオバクテリウム・プロテオリティカム9670株由来のプロテイングルタミナーゼのプロ体の立体構造の原子座標を以下に示す。
HEADER    ----                        XX-XXX-9-   xxxx           
COMPND    ---                                                    
REMARK 3                                                        
REMARK 3 REFINEMENT.                                            
REMARK 3   PROGRAM     : REFMAC 5.2.0019                         
REMARK 3   AUTHORS     : MURSHUDOV,VAGIN,DODSON                
REMARK 3                                                        
REMARK 3    REFINEMENT TARGET : MAXIMUM LIKELIHOOD              
REMARK 3                                               
REMARK 3  DATA USED IN REFINEMENT.                            
REMARK 3   RESOLUTION RANGE HIGH (ANGSTROMS) :   1.73         
REMARK 3   RESOLUTION RANGE LOW  (ANGSTROMS) :  81.38        
REMARK 3   DATA CUTOFF            (SIGMA(F)) : NONE            
REMARK 3   COMPLETENESS FOR RANGE        (%) :  98.17         
REMARK 3   NUMBER OF REFLECTIONS             :   76594        
REMARK 3                                                       
REMARK 3  FIT TO DATA USED IN REFINEMENT.                     
REMARK 3   CROSS-VALIDATION METHOD          : THROUGHOUT      
REMARK 3   FREE R VALUE TEST SET SELECTION  : RANDOM        
REMARK 3   R VALUE     (WORKING + TEST SET) : 0.18371      
REMARK 3   R VALUE            (WORKING SET) :  0.18241        
REMARK 3   FREE R VALUE                     :  0.20864          
REMARK 3   FREE R VALUE TEST SET SIZE   (%) :  5.0        
REMARK 3   FREE R VALUE TEST SET COUNT      :  4037    
REMARK 3                                                    
REMARK 3  FIT IN THE HIGHEST RESOLUTION BIN.                
REMARK 3   TOTAL NUMBER OF BINS USED           :      20    
REMARK 3   BIN RESOLUTION RANGE HIGH           :    1.728   
REMARK 3   BIN RESOLUTION RANGE LOW            :    1.773  
REMARK 3   REFLECTION IN BIN     (WORKING SET) :     5068  
REMARK 3   BIN COMPLETENESS (WORKING+TEST) (%) :    88.97    
REMARK 3   BIN R VALUE           (WORKING SET) :    0.242    
REMARK 3   BIN FREE R VALUE SET COUNT          :      279    
REMARK 3   BIN FREE R VALUE                    :    0.250    
REMARK 3                                                     
REMARK 3  NUMBER OF NON-HYDROGEN ATOMS USED IN REFINEMENT.   
REMARK 3   ALL ATOMS                :     5470               
REMARK 3                                                     
REMARK 3  B VALUES.                                          
REMARK 3   FROM WILSON PLOT           (A**2) : NULL          
REMARK 3   MEAN B VALUE      (OVERALL, A**2) :  27.925       
REMARK 3   OVERALL ANISOTROPIC B VALUE.                      
REMARK 3    B11 (A**2) :     1.76                            
REMARK 3    B22 (A**2) :    -1.28                            
REMARK 3    B33 (A**2) :    -0.49                            
REMARK 3    B12 (A**2) :     0.00                            
REMARK 3    B13 (A**2) :     0.00                       
REMARK 3    B23 (A**2) :     0.00                        
REMARK 3                                               
REMARK 3  ESTIMATED OVERALL COORDINATE ERROR.           
REMARK 3   ESU BASED ON R VALUE               (A):   0.102
REMARK 3   ESU BASED ON FREE R VALUE          (A):   0.099 
REMARK 3   ESU BASED ON MAXIMUM LIKELIHOOD    (A):   0.065
REMARK 3 ESU FOR B VALUES BASED ON MAXIMUM LIKELIHOOD (A**2): 1.954
REMARK 3                                              
REMARK 3 CORRELATION COEFFICIENTS.                        
REMARK 3   CORRELATION COEFFICIENT FO-FC      :   0.962  
REMARK 3   CORRELATION COEFFICIENT FO-FC FREE :   0.950  
REMARK 3                                                   
REMARK 3 RMS DEVIATIONS FROM IDEAL VALUES  COUNT  RMS  WEIGHT
REMARK 3 BOND LENGTHS REFINED ATOMS    (A): 4850 ; 0.012 ; 0.022
REMARK 3 BOND ANGLES REFINED ATOMS (DEGREES): 6697 ; 1.497 ; 1.967
REMARK 3 TORSION ANGLES, PERIOD 1  (DEGREES): 693 ;11.741 ; 5.000
REMARK 3 TORSION ANGLES, PERIOD 2  (DEGREES): 196 ;38.364 ;25.000
REMARK 3 TORSION ANGLES, PERIOD 3  (DEGREES): 852 ;14.504 ;15.000
REMARK 3 TORSION ANGLES, PERIOD 4  (DEGREES): 18 ;12.593 ;15.000
REMARK 3 CHIRAL-CENTER RESTRAINTS   (A**3): 762 ; 0.126 ; 0.200
REMARK 3 GENERAL PLANES REFINED ATOMS  (A): 3722 ; 0.006 ; 0.020
REMARK 3 NON-BONDED CONTACTS REFINED ATOMS (A): 2619 ; 0.200 ; 0.200
REMARK 3 NON-BONDED TORSION REFINED ATOMS  (A): 3434 ; 0.308 ; 0.200
REMARK 3 H-BOND (X...Y) REFINED ATOMS  (A): 731 ; 0.145 ; 0.200
REMARK 3 SYMMETRY VDW REFINED ATOMS     (A): 105 ; 0.204 ; 0.200
REMARK 3 SYMMETRY H-BOND REFINED ATOMS   (A):  34 ; 0.333 ; 0.200
REMARK 3                                                  
REMARK 3  ISOTROPIC THERMAL FACTOR RESTRAINTS.  COUNT   RMS  WEIGHT 
REMARK 3 MAIN-CHAIN BOND REFINED ATOMS  (A**2): 3105 ; 0.841 ; 1.500
REMARK 3 MAIN-CHAIN ANGLE REFINED ATOMS (A**2): 5034 ; 1.391 ; 2.000
REMARK 3 SIDE-CHAIN BOND REFINED ATOMS  (A**2): 1950 ; 1.832 ; 3.000
REMARK 3 SIDE-CHAIN ANGLE REFINED ATOMS (A**2): 1598 ; 2.746 ; 4.500
REMARK 3                                        
REMARK 3  NCS RESTRAINTS STATISTICS                
REMARK 3   NUMBER OF NCS GROUPS : NULL          
REMARK 3                                            
REMARK 3                                               
REMARK 3  TLS DETAILS                            
REMARK 3   NUMBER OF TLS GROUPS  : NULL               
REMARK 3                                               
REMARK 3                                           
REMARK 3  BULK SOLVENT MODELLING.                
REMARK 3   METHOD USED :  MASK               
REMARK 3   PARAMETERS FOR MASK CALCULATION              
REMARK 3   VDW PROBE RADIUS   :   1.20                  
REMARK 3   ION PROBE RADIUS   :   0.80               
REMARK 3   SHRINKAGE RADIUS   :   0.80              
REMARK 3                                              
REMARK 3  OTHER REFINEMENT REMARKS:                    
REMARK 3  HYDROGENS HAVE BEEN ADDED IN THE RIDING POSITIONS
REMARK 3                                         
SSBOND   1 CYS X  158    CYS X  167                
SSBOND   2 CYS X  211    CYS X  307              
SSBOND   3 CYS X  212    CYS X  261                      
SSBOND   4 CYS X  296    CYS X  318                 
SSBOND   5 CYS C  211    CYS C  307                 
SSBOND   6 CYS C  212    CYS C  261           
SSBOND   7 CYS C  296    CYS C  318         
SSBOND   8 CYS C  158    CYS C  167                   
CISPEP   1 LYS X   43    ASP X   44                    0.00 
CISPEP   2 ASN X   57    GLY X   58                    0.00 
CISPEP   3 LYS X  135    LEU X  136                    0.00  
CISPEP   4 SER X  165    PRO X  166                    0.00 
CISPEP   5 PRO X  173    VAL X  174                    0.00  
CISPEP   6 ASP X  175    GLY X  176                    0.00 
CISPEP   7 SER X  308    PRO X  309                    0.00 
CISPEP   8 SER X  310    PRO X  311                    0.00  
CISPEP   9 ASN C   79    GLU C   80                    0.00  
CISPEP  10 SER C  165    PRO C  166                    0.00 
CISPEP  11 PRO C  173    VAL C  174                    0.00  
CISPEP  12 SER C  308    PRO C  309                    0.00 
CISPEP  13 SER C  310    PRO C  311                    0.00 
CRYST1 56.644  103.290  132.510  90.00  90.00  90.00 P 21 21 21
SCALE1      0.017654  0.000000  0.000000        0.00000    
SCALE2      0.000000  0.009681  0.000000        0.00000   
SCALE3      0.000000  0.000000  0.007547        0.00000  
ATOM  1  N   ASP X -96     -12.592   0.198 -54.520  1.00 58.56  N  
ATOM  2  CA  ASP X -96     -12.881  -1.265 -54.427  1.00 58.40  C  
ATOM  3  CB  ASP X -96     -12.225  -2.029 -55.590  1.00 58.69  C  
ATOM  4  CG  ASP X -96     -10.706  -2.010 -55.525  1.00 59.61  C  
ATOM  5  OD1 ASP X -96     -10.085  -1.182 -56.231  1.00 61.01  O  
ATOM  6  OD2 ASP X -96     -10.135  -2.823 -54.769  1.00 59.92  O  
ATOM  7  C   ASP X -96     -12.493  -1.868 -53.068  1.00 57.94  C  
ATOM  8  O   ASP X -96     -12.011  -1.159 -52.172  1.00 57.92  O  
ATOM  9  N   SER X -95     -12.702  -3.181 -52.940  1.00 56.99  N  
ATOM 10  CA  SER X -95     -12.605  -3.896 -51.661  1.00 56.03  C  
ATOM 11  CB  SER X -95     -13.609  -5.055 -51.639  1.00 56.36  C  
ATOM 12  OG  SER X -95     -14.894  -4.623 -52.054  1.00 56.91  O  
ATOM 13  C   SER X -95     -11.199  -4.418 -51.352  1.00 54.92  C  
ATOM 14  O   SER X -95     -10.870  -4.688 -50.193  1.00 55.05  O  
ATOM 15  N   LYS X -94     -10.390  -4.575 -52.398  1.00 53.31  N  
ATOM 16  CA  LYS X -94      -8.969  -4.881 -52.271  1.00 51.78  C  
ATOM 17  CB  LYS X -94      -8.393  -5.212 -53.651  1.00 51.89  C  
ATOM 18  CG  LYS X -94      -6.926  -5.626 -53.670  1.00 52.50  C  
ATOM 19  CD  LYS X -94      -6.521  -6.219 -55.027  1.00 52.96  C  
ATOM 20  CE  LYS X -94      -7.252  -7.529 -55.322  1.00 54.36  C  
ATOM 21  NZ  LYS X -94      -6.753  -8.187 -56.560  1.00 55.99  N  
ATOM 22  C   LYS X -94      -8.213  -3.697 -51.642  1.00 50.21  C  
ATOM 23  O   LYS X -94      -7.248  -3.895 -50.904  1.00 49.64  O  
ATOM 24  N   LEU X -93      -8.660  -2.475 -51.939  1.00 48.36  N  
ATOM 25  CA  LEU X -93      -8.067  -1.260 -51.363  1.00 46.57  C  
ATOM 26  CB  LEU X -93      -7.957  -0.161 -52.433  1.00 46.24  C  
ATOM 27  CG  LEU X -93      -7.180  -0.482 -53.722  1.00 45.25  C  
ATOM 28  CD1 LEU X -93      -7.428   0.563 -54.806  1.00 45.02  C  
ATOM 29  CD2 LEU X -93      -5.674  -0.648 -53.479  1.00 44.66  C  
ATOM 30  C   LEU X -93      -8.835  -0.747 -50.132  1.00 45.92  C  
ATOM 31  O   LEU X -93     -10.009  -1.081 -49.935  1.00 45.62  O  
ATOM 32  N   LYS X -92      -8.138   0.025 -49.298  1.00 44.54  N  
ATOM 33  CA  LYS X -92      -8.708   0.821 -48.198  1.00 44.24  C  
ATOM 34  CB  LYS X -92      -7.632   0.884 -47.105  1.00 44.19  C  
ATOM 35  CG  LYS X -92      -7.775   1.955 -46.033  1.00 46.39  C  
ATOM 36  CD  LYS X -92      -8.474   1.424 -44.790  1.00 49.21  C  
ATOM 37  CE  LYS X -92      -8.758   2.563 -43.808  1.00 50.74  C  
ATOM 38  NZ  LYS X -92      -9.683   2.160 -42.712  1.00 51.81  N  
ATOM 39  C   LYS X -92      -8.906   2.167 -48.919  1.00 43.10  C  
ATOM 40  O   LYS X -92      -7.931   2.828 -49.157  1.00 43.24  O  
ATOM 41  N   ASP X -91     -10.109   2.673 -49.195  1.00 42.41  N  
ATOM 42  CA  ASP X -91     -11.040   3.345 -48.270  1.00 40.07  C  
ATOM 43  CB  ASP X -91     -12.460   2.816 -48.177  1.00 40.99  C  
ATOM 44  CG  ASP X -91     -13.454   3.814 -48.781  1.00 42.19  C  
ATOM 45  OD1 ASP X -91     -13.049   4.995 -48.948  1.00 41.22  O  
ATOM 46  OD2 ASP X -91     -14.613   3.444 -49.089  1.00 43.71  O  
ATOM 47  C   ASP X -91     -10.581   4.290 -47.147  1.00 38.40  C  
ATOM 48  O   ASP X -91     -10.811   4.067 -45.954  1.00 37.95  O  
ATOM 49  N   PHE X -90      -9.955   5.374 -47.605  1.00 35.70  N  
ATOM 50  CA  PHE X -90      -9.498   6.476 -46.774  1.00 33.75  C  
ATOM 51  CB  PHE X -90      -8.280   7.154 -47.423  1.00 33.30  C  
ATOM 52  CG  PHE X -90      -7.738   8.316 -46.638  1.00 32.37  C  
ATOM 53  CD1 PHE X -90      -6.863   8.106 -45.577  1.00 32.51  C  
ATOM 54  CE1 PHE X -90      -6.364   9.177 -44.834  1.00 32.69  C  
ATOM 55  CZ  PHE X -90      -6.739  10.481 -45.166  1.00 33.10  C  
ATOM 56  CE2 PHE X -90      -7.622  10.696 -46.228  1.00 31.88  C  
ATOM 57  CD2 PHE X -90      -8.102   9.626 -46.960  1.00 32.39  C  
ATOM 58  C   PHE X -90     -10.625   7.496 -46.621  1.00 32.73  C  
ATOM 59  O   PHE X -90     -10.610   8.304 -45.689  1.00 33.16  O  
ATOM 60  N   GLY X -89     -11.579   7.443 -47.544  1.00 30.58  N  
ATOM 61  CA  GLY X -89     -12.726   8.352 -47.558  1.00 29.57  C  
ATOM 62  C   GLY X -89     -12.469   9.556 -48.443  1.00 27.95  C  
ATOM 63  O   GLY X -89     -11.500   9.566 -49.201  1.00 26.45  O  
ATOM 64  N   LYS X -88     -13.338  10.569 -48.355  1.00 26.02  N  
ATOM 65  CA  LYS X -88     -13.156  11.787 -49.134  1.00 25.54  C  
ATOM 66  CB  LYS X -88     -14.491  12.464 -49.483  1.00 26.40  C  
ATOM 67  CG  LYS X -88     -15.224  11.865 -50.695  1.00 30.50  C  
ATOM 68  CD  LYS X -88     -16.059  10.662 -50.326  1.00 36.67  C  
ATOM 69  CE  LYS X -88     -17.298  11.062 -49.536  1.00 40.18  C  
ATOM 70  NZ  LYS X -88     -18.208   9.891 -49.300  1.00 42.06  N  
ATOM 71  C   LYS X -88     -12.271  12.765 -48.374  1.00 23.22  C  
ATOM 72  O   LYS X -88     -12.285  12.832 -47.141  1.00 23.52  O  
ATOM 73  N   THR X -87     -11.492  13.529 -49.123  1.00 21.66  N  
ATOM 74  CA  THR X -87     -10.657  14.540 -48.534  1.00 20.71  C  
ATOM 75  CB  THR X -87      -9.359  13.927 -47.954  1.00 20.85  C  
ATOM 76  OG1 THR X -87      -8.636  14.941 -47.238  1.00 22.40  O  
ATOM 77  CG2 THR X -87      -8.519  13.349 -49.073  1.00 21.11  C  
ATOM 78  C   THR X -87     -10.308  15.567 -49.596  1.00 19.45  C  
ATOM 79  O   THR X -87     -10.626  15.383 -50.770  1.00 20.99  O  
ATOM 80  N   VAL X -86      -9.652  16.646 -49.173  1.00 18.56  N  
ATOM 81  CA  VAL X -86      -9.186  17.651 -50.099  1.00 16.70  C  
ATOM 82  CB  VAL X -86      -9.642  19.059 -49.694  1.00 18.11  C  
ATOM 83  CG1 VAL X -86      -9.037  20.079 -50.638  1.00 16.18  C  
ATOM 84  CG2 VAL X -86     -11.189  19.132 -49.699  1.00 18.28  C  
ATOM 85  C   VAL X -86      -7.652  17.619 -50.079  1.00 16.92  C  
ATOM 86  O   VAL X -86      -7.035  17.897 -49.061  1.00 15.94  O  
ATOM 87  N   PRO X -85      -7.048  17.297 -51.219  1.00 15.93  N  
ATOM 88  CA  PRO X -85      -5.585  17.359 -51.269  1.00 16.25  C  
ATOM 89  CB  PRO X -85      -5.228  16.680 -52.592  1.00 16.80  C  
ATOM 90  CG  PRO X -85      -6.471  16.696 -53.393  1.00 17.38  C  
ATOM 91  CD  PRO X -85      -7.657  16.883 -52.491  1.00 16.40  C  
ATOM 92  C   PRO X -85      -5.123  18.820 -51.267  1.00 16.09  C  
ATOM 93  O   PRO X -85      -5.766  19.666 -51.887  1.00 15.24  O  
ATOM 94  N   VAL X -84      -4.023  19.096 -50.570  1.00 15.70  N  
ATOM 95  CA  VAL X -84      -3.529  20.468 -50.401  1.00 15.87  C  
ATOM 96  CB  VAL X -84      -3.657  20.955 -48.921  1.00 15.65  C  
ATOM 97  CG1 VAL X -84      -5.136  21.022 -48.543  1.00 16.92  C  
ATOM 98  CG2 VAL X -84      -2.925  19.987 -47.953  1.00 17.26  C  
ATOM 99  C   VAL X -84      -2.110  20.721 -50.875  1.00 16.65  C  
ATOM 100  O   VAL X -84      -1.644  21.880 -50.871  1.00 16.16  O  
ATOM 101  N   GLY X -83      -1.419  19.654 -51.259  1.00 16.37  N  
ATOM 102  CA  GLY X -83      -0.065  19.812 -51.788  1.00 17.79  C  
ATOM 103  C   GLY X -83       0.336  18.600 -52.609  1.00 18.02  C  
ATOM 104  O   GLY X -83      -0.104  17.483 -52.356  1.00 17.55  O  
ATOM 105  N   ILE X -82       1.164  18.837 -53.617  1.00 19.69  N  
ATOM 106  CA  ILE X -82       1.662  17.761 -54.435  1.00 22.96  C  
ATOM 107  CB  ILE X -82       0.679  17.448 -55.608  1.00 22.30  C  
ATOM 108  CG1 ILE X -82       1.123  16.196 -56.379  1.00 24.47  C  
ATOM 109  CD1 ILE X -82      -0.021  15.546 -57.175  1.00 23.85  C  
ATOM 110  CG2 ILE X -82       0.449  18.668 -56.517  1.00 23.02  C  
ATOM 111  C   ILE X -82       3.066  18.143 -54.903  1.00 25.62  C  
ATOM 112  O   ILE X -82       3.286  19.267 -55.347  1.00 25.20  O  
ATOM 113  N   ASP X -81       4.022  17.237 -54.729  1.00 28.63  N  
ATOM 114  CA AASP X -81       5.385  17.425 -55.242  0.50 31.28  C  
ATOM 115  CA BASP X -81       5.342  17.420 -55.348  0.50 31.17  C  
ATOM 116  CB AASP X -81       6.278  18.042 -54.157  0.50 31.61  C  
ATOM 117  CB BASP X -81       6.286  18.248 -54.467  0.50 31.48  C  
ATOM 118  CG AASP X -81       5.967  19.519 -53.897  0.50 32.96  C  
ATOM 119  CG BASP X -81       6.661  17.544 -53.181  0.50 32.34  C  
ATOM 120  OD1AASP X -81       5.447  19.828 -52.806  0.50 33.87  O  
ATOM 121  OD1BASP X -81       5.796  17.442 -52.295  0.50 33.24  O  
ATOM 122  OD2AASP X -81       6.252  20.372 -54.771  0.50 34.49  O  
ATOM 123  OD2BASP X -81       7.828  17.108 -53.047  0.50 34.10  O  
ATOM 124  C   ASP X -81       5.972  16.087 -55.716  1.00 32.61  C  
ATOM 125  O   ASP X -81       5.482  15.030 -55.328  1.00 32.88  O  
ATOM 126  N   GLU X -80       7.022  16.130 -56.537  1.00 34.59  N  
ATOM 127  CA  GLU X -80       7.758  14.904 -56.872  1.00 37.06  C  
ATOM 128  CB  GLU X -80       8.023  14.780 -58.381  1.00 37.51  C  
ATOM 129  CG  GLU X -80       8.704  13.460 -58.783  1.00 38.37  C  
ATOM 130  CD  GLU X -80       8.401  13.003 -60.212  1.00 41.19  C  
ATOM 131  OE1 GLU X -80       7.710  13.725 -60.969  1.00 42.82  O  
ATOM 132  OE2 GLU X -80       8.851  11.893 -60.580  1.00 42.05  O  
ATOM 133  C   GLU X -80       9.055  14.865 -56.064  1.00 38.79  C  
ATOM 134  O   GLU X -80       9.813  15.840 -56.065  1.00 39.64  O  
ATOM 135  N   GLU X -79       9.269  13.763 -55.340  1.00 40.20  N  
ATOM 136  CA  GLU X -79      10.506  13.515 -54.587  1.00 41.35  C  
ATOM 137  CB  GLU X -79      10.356  13.889 -53.092  1.00 41.25  C  
ATOM 138  CG  GLU X -79      11.664  13.719 -52.249  1.00 41.65  C  
ATOM 139  CD  GLU X -79      11.522  14.059 -50.746  1.00 43.56  C  
ATOM 140  OE1 GLU X -79      12.369  14.828 -50.222  1.00 46.51  O  
ATOM 141  OE2 GLU X -79      10.587  13.551 -50.082  1.00 45.92  O  
ATOM 142  C   GLU X -79      10.928  12.048 -54.736  1.00 41.17  C  
ATOM 143  O   GLU X -79      10.190  11.143 -54.362  1.00 41.12  O  
ATOM 144  N   ASN X -78      12.110  11.829 -55.310  1.00 42.01  N  
ATOM 145  CA  ASN X -78      12.811  10.527 -55.254  1.00 42.48  C  
ATOM 146  CB  ASN X -78      13.357  10.279 -53.826  1.00 43.17  C  
ATOM 147  CG  ASN X -78      14.275  11.387 -53.324  1.00 45.72  C  
ATOM 148  OD1 ASN X -78      14.337  11.644 -52.115  1.00 49.35  O  
ATOM 149  ND2 ASN X -78      14.999  12.037 -54.237  1.00 48.66  N  
ATOM 150  C   ASN X -78      12.138   9.197 -55.700  1.00 41.70  C  
ATOM 151  O   ASN X -78      11.981   8.305 -54.858  1.00 42.84  O  
ATOM 152  N   GLY X -77      11.669   9.016 -56.934  1.00 41.02  N  
ATOM 153  CA  GLY X -77      10.886   9.941 -57.731  1.00 38.78  C  
ATOM 154  C   GLY X -77       9.491   9.370 -57.452  1.00 37.18  C  
ATOM 155  O   GLY X -77       8.960   8.505 -58.179  1.00 36.84  O  
ATOM 156  N   MET X -76       8.951   9.798 -56.320  1.00 35.40  N  
ATOM 157  CA  MET X -76       7.616   9.457 -55.879  1.00 33.50  C  
ATOM 158  CB  MET X -76       7.642   9.035 -54.408  1.00 34.57  C  
ATOM 159  CG  MET X -76       7.610   7.551 -54.108  1.00 37.24  C  
ATOM 160  SD  MET X -76       6.102   6.698 -54.616  1.00 43.74  S  
ATOM 161  CE  MET X -76       6.883   5.673 -55.819  1.00 37.02  C  
ATOM 162  C   MET X -76       6.853  10.762 -55.945  1.00 31.30  C  
ATOM 163  O   MET X -76       7.444  11.830 -55.838  1.00 31.09  O  
ATOM 164  N   ILE X -75       5.539  10.688 -56.091  1.00 28.78  N  
ATOM 165  CA  ILE X -75       4.734  11.882 -55.936  1.00 25.95  C  
ATOM 166  CB  ILE X -75       3.520  11.876 -56.889  1.00 26.45  C  
ATOM 167  CG1 ILE X -75       3.937  11.735 -58.382  1.00 27.99  C  
ATOM 168  CD1 ILE X -75       4.703  12.920 -58.964  1.00 29.05  C  
ATOM 169  CG2 ILE X -75       2.614  13.069 -56.601  1.00 26.21  C  
ATOM 170  C   ILE X -75       4.270  11.883 -54.477  1.00 24.53  C  
ATOM 171  O   ILE X -75       3.720  10.900 -54.018  1.00 23.53  O  
ATOM 172  N   LYS X -74       4.518  12.973 -53.758  1.00 22.03  N  
ATOM 173  CA  LYS X -74       4.167  13.071 -52.354  1.00 20.85  C  
ATOM 174  CB  LYS X -74       5.294  13.773 -51.624  1.00 21.48  C  
ATOM 175  CG  LYS X -74       5.554  13.320 -50.257  1.00 27.11  C  
ATOM 176  CD  LYS X -74       7.052  13.482 -49.977  1.00 30.33  C  
ATOM 177  CE  LYS X -74       7.246  14.303 -48.744  1.00 30.20  C  
ATOM 178  NZ  LYS X -74       8.661  14.600 -48.474  1.00 29.98  N  
ATOM 179  C   LYS X -74       2.956  13.977 -52.278  1.00 19.14  C  
ATOM 180  O   LYS X -74       3.019  15.101 -52.749  1.00 19.50  O  
ATOM 181  N   VAL X -73       1.889  13.511 -51.657  1.00 17.73  N  
ATOM 182  CA  VAL X -73       0.636  14.272 -51.621  1.00 16.63  C  
ATOM 183  CB  VAL X -73      -0.522  13.483 -52.272  1.00 16.74  C  
ATOM 184  CG1 VAL X -73      -1.726  14.399 -52.407  1.00 17.22  C  
ATOM 185  CG2 VAL X -73      -0.108  12.938 -53.654  1.00 18.22  C  
ATOM 186  C   VAL X -73       0.282  14.578 -50.168  1.00 16.09  C  
ATOM 187  O   VAL X -73       0.424  13.727 -49.291  1.00 16.47  O  
ATOM 188  N   SER X -72      -0.149  15.803 -49.909  1.00 15.44  N  
ATOM 189  CA  SER X -72      -0.631  16.124 -48.573  1.00 15.75  C  
ATOM 190  CB  SER X -72       0.198  17.268 -47.991  1.00 16.08  C  
ATOM 191  OG  SER X -72       0.300  18.303 -48.957  1.00 19.58  O  
ATOM 192  C   SER X -72      -2.123  16.434 -48.652  1.00 15.97  C  
ATOM 193  O   SER X -72      -2.638  16.836 -49.726  1.00 15.46  O  
ATOM 194  N   PHE X -71      -2.832  16.206 -47.550  1.00 15.99  N  
ATOM 195  CA  PHE X -71      -4.297  16.349 -47.532  1.00 17.41  C  
ATOM 196  CB  PHE X -71      -5.011  15.019 -47.255  1.00 18.45  C  
ATOM 197  CG  PHE X -71      -4.796  13.939 -48.287  1.00 21.09  C  
ATOM 198  CD1 PHE X -71      -4.887  14.186 -49.651  1.00 24.79  C  
ATOM 199  CE1 PHE X -71      -4.679  13.149 -50.594  1.00 23.98  C  
ATOM 200  CZ  PHE X -71      -4.443  11.865 -50.149  1.00 23.54  C  
ATOM 201  CE2 PHE X -71      -4.431  11.588 -48.794  1.00 26.62  C  
ATOM 202  CD2 PHE X -71      -4.603  12.623 -47.863  1.00 25.33  C  
ATOM 203  C   PHE X -71      -4.676  17.290 -46.400  1.00 17.10  C  
ATOM 204  O   PHE X -71      -3.927  17.458 -45.431  1.00 16.79  O  
ATOM 205  N   MET X -70      -5.865  17.871 -46.479  1.00 16.68  N  
ATOM 206  CA  MET X -70      -6.334  18.685 -45.372  1.00 18.05  C  
ATOM 207  CB  MET X -70      -7.719  19.256 -45.694  1.00 17.48  C  
ATOM 208  CG  MET X -70      -8.795  18.179 -45.783  1.00 19.50  C  
ATOM 209  SD  MET X -70     -10.449  18.903 -46.041  1.00 22.83  S  
ATOM 210  CE  MET X -70     -10.800  19.642 -44.469  1.00 22.89  C  
ATOM 211  C   MET X -70      -6.389  17.911 -44.041  1.00 16.49  C  
ATOM 212  O   MET X -70      -6.645  16.697 -44.024  1.00 16.56  O  
ATOM 213  N   LEU X -69      -6.138  18.646 -42.952  1.00 15.65  N  
ATOM 214  CA ALEU X -69      -6.253  18.191 -41.563  0.50 15.37  C  
ATOM 215  CA BLEU X -69      -6.279  18.166 -41.557  0.50 16.17  C  
ATOM 216  CB ALEU X -69      -7.673  17.714 -41.226  0.50 15.02  C  
ATOM 217  CB BLEU X -69      -7.680  17.584 -41.264  0.50 16.28  C  
ATOM 218  CG ALEU X -69      -7.916  17.543 -39.732  0.50 13.76  C  
ATOM 219  CG BLEU X -69      -8.764  18.357 -40.506  0.50 18.96  C  
ATOM 220  CD1ALEU X -69      -7.829  18.889 -39.001  0.50 15.17  C  
ATOM 221  CD1BLEU X -69      -9.957  17.422 -40.296  0.50 18.74  C  
ATOM 222  CD2ALEU X -69      -9.265  16.894 -39.513  0.50 13.62  C  
ATOM 223  CD2BLEU X -69      -8.281  18.910 -39.168  0.50 20.64  C  
ATOM 224  C   LEU X -69      -5.200  17.180 -41.109  1.00 14.90  C  
ATOM 225  O   LEU X -69      -4.464  17.443 -40.172  1.00 15.81  O  
ATOM 226  N   THR X -68      -5.118  16.030 -41.777  1.00 15.19  N  
ATOM 227  CA  THR X -68      -4.073  15.090 -41.456  1.00 14.88  C  
ATOM 228  CB  THR X -68      -4.237  13.723 -42.149  1.00 14.69  C  
ATOM 229  OG1 THR X -68      -3.076  12.931 -41.860  1.00 14.68  O  
ATOM 230  CG2 THR X -68      -4.386  13.874 -43.658  1.00 15.54  C  
ATOM 231  C   THR X -68      -2.708  15.691 -41.806  1.00 14.87  C  
ATOM 232  O   THR X -68      -2.565  16.364 -42.836  1.00 15.62  O  
ATOM 233  N   ALA X -67      -1.741  15.511 -40.924  1.00 14.47  N  
ATOM 234  CA  ALA X -67      -0.365  15.980 -41.203  1.00 15.64  C  
ATOM 235  CB  ALA X -67       0.351  16.325 -39.891  1.00 15.70  C  
ATOM 236  C   ALA X -67       0.450  14.945 -41.985  1.00 16.15  C  
ATOM 237  O   ALA X -67       1.624  15.164 -42.260  1.00 18.22  O  
ATOM 238  N   GLN X -66      -0.140  13.805 -42.319  1.00 17.36  N  
ATOM 239  CA  GLN X -66       0.649  12.753 -42.976  1.00 17.46  C  
ATOM 240  CB  GLN X -66      -0.012  11.408 -42.734  1.00 17.47  C  
ATOM 241  CG  GLN X -66      -0.144  11.117 -41.246  1.00 21.02  C  
ATOM 242  CD  GLN X -66      -1.044   9.917 -41.006  1.00 27.56  C  
ATOM 243  OE1 GLN X -66      -0.555   8.867 -40.660  1.00 29.26  O  
ATOM 244  NE2 GLN X -66      -2.345  10.063 -41.257  1.00 28.99  N  
ATOM 245  C   GLN X -66       0.776  12.966 -44.473  1.00 17.80  C  
ATOM 246  O   GLN X -66      -0.151  13.459 -45.124  1.00 17.91  O  
ATOM 247  N   PHE X -65       1.924  12.558 -45.019  1.00 17.41  N  
ATOM 248  CA  PHE X -65       2.089  12.443 -46.456  1.00 16.64  C  
ATOM 249  CB  PHE X -65       3.555  12.570 -46.830  1.00 17.40  C  
ATOM 250  CG  PHE X -65       4.078  13.973 -46.782  1.00 15.89  C  
ATOM 251  CD1 PHE X -65       5.039  14.340 -45.835  1.00 18.22  C  
ATOM 252  CE1 PHE X -65       5.549  15.636 -45.809  1.00 18.44  C  
ATOM 253  CZ  PHE X -65       5.107  16.576 -46.719  1.00 15.26  C  
ATOM 254  CE2 PHE X -65       4.132  16.216 -47.681  1.00 16.07  C  
ATOM 255  CD2 PHE X -65       3.636  14.915 -47.705  1.00 15.83  C  
ATOM 256  C   PHE X -65       1.642  11.094 -46.960  1.00 17.64  C  
ATOM 257  O   PHE X -65       1.815  10.065 -46.279  1.00 17.39  O  
ATOM 258  N   TYR X -64       1.089  11.128 -48.166  1.00 18.05  N  
ATOM 259  CA  TYR X -64       0.736   9.938 -48.913  1.00 19.14  C  
ATOM 260  CB  TYR X -64      -0.767   9.935 -49.146  1.00 20.45  C  
ATOM 261  CG  TYR X -64      -1.484   9.770 -47.842  1.00 22.81  C  
ATOM 262  CD1 TYR X -64      -1.727  10.876 -47.014  1.00 24.05  C  
ATOM 263  CE1 TYR X -64      -2.354  10.717 -45.806  1.00 28.09  C  
ATOM 264  CZ  TYR X -64      -2.723   9.438 -45.395  1.00 27.91  C  
ATOM 265  OH  TYR X -64      -3.334   9.262 -44.184  1.00 30.01  O  
ATOM 266  CE2 TYR X -64      -2.468   8.324 -46.178  1.00 27.89  C  
ATOM 267  CD2 TYR X -64      -1.842   8.504 -47.397  1.00 27.47  C  
ATOM 268  C   TYR X -64       1.507   9.965 -50.213  1.00 20.03  C  
ATOM 269  O   TYR X -64       1.934  11.010 -50.666  1.00 21.37  O  
ATOM 270  N   GLU X -63       1.692   8.822 -50.839  1.00 19.82  N  
ATOM 271  CA AGLU X -63       2.561   8.759 -52.007  0.50 20.64  C  
ATOM 272  CA BGLU X -63       2.535   8.802 -52.021  0.50 20.86  C  
ATOM 273  CB AGLU X -63       3.860   8.018 -51.662  0.50 20.85  C  
ATOM 274  CB BGLU X -63       3.911   8.203 -51.699  0.50 21.09  C  
ATOM 275  CG AGLU X -63       3.671   6.551 -51.287  0.50 22.71  C  
ATOM 276  CG BGLU X -63       4.688   8.955 -50.606  0.50 23.31  C  
ATOM 277  CD AGLU X -63       4.973   5.742 -51.286  0.50 23.36  C  
ATOM 278  CD BGLU X -63       6.171   8.633 -50.591  0.50 24.18  C  
ATOM 279  OE1AGLU X -63       6.002   6.250 -50.791  0.50 26.77  O  
ATOM 280  OE1BGLU X -63       6.546   7.488 -50.934  0.50 28.76  O  
ATOM 281  OE2AGLU X -63       4.959   4.590 -51.781  0.50 28.06  O  
ATOM 282  OE2BGLU X -63       6.960   9.532 -50.236  0.50 27.71  O  
ATOM 283  C   GLU X -63       1.871   8.063 -53.161  1.00 19.96  C  
ATOM 284  O   GLU X -63       1.042   7.196 -52.951  1.00 20.20  O  
ATOM 285  N   ILE X -62       2.242   8.416 -54.377  1.00 19.55  N  
ATOM 286  CA  ILE X -62       1.776   7.652 -55.523  1.00 20.92  C  
ATOM 287  CB  ILE X -62       0.457   8.213 -56.094  1.00 20.02  C  
ATOM 288  CG1 ILE X -62      -0.067   7.350 -57.258  1.00 21.74  C  
ATOM 289  CD1 ILE X -62      -1.457   7.767 -57.733  1.00 21.58  C  
ATOM 290  CG2 ILE X -62       0.600   9.686 -56.477  1.00 20.83  C  
ATOM 291  C   ILE X -62       2.888   7.615 -56.569  1.00 21.22  C  
ATOM 292  O   ILE X -62       3.557   8.635 -56.783  1.00 21.14  O  
ATOM 293  N   LYS X -61       3.103   6.451 -57.194  1.00 22.12  N  
ATOM 294  CA ALYS X -61       4.162   6.304 -58.196  0.50 22.94  C  
ATOM 295  CA BLYS X -61       4.173   6.326 -58.190  0.50 23.00  C  
ATOM 296  CB ALYS X -61       4.515   4.829 -58.411  0.50 23.26  C  
ATOM 297  CB BLYS X -61       4.636   4.872 -58.375  0.50 23.70  C  
ATOM 298  CG ALYS X -61       5.791   4.638 -59.224  0.50 25.78  C  
ATOM 299  CG BLYS X -61       5.987   4.763 -59.112  0.50 25.65  C  
ATOM 300  CD ALYS X -61       6.207   3.179 -59.285  0.50 27.71  C  
ATOM 301  CD BLYS X -61       6.772   3.503 -58.726  0.50 27.54  C  
ATOM 302  CE ALYS X -61       7.371   2.994 -60.243  0.50 29.74  C  
ATOM 303  CE BLYS X -61       8.187   3.510 -59.320  0.50 27.29  C  
ATOM 304  NZ ALYS X -61       7.601   1.553 -60.502  0.50 31.73  N  
ATOM 305  NZ BLYS X -61       9.086   4.558 -58.731  0.50 30.24  N  
ATOM 306  C   LYS X -61       3.769   6.931 -59.527  1.00 22.57  C  
ATOM 307  O   LYS X -61       2.662   6.692 -60.002  1.00 21.95  O  
ATOM 308  N   PRO X -60       4.666   7.757 -60.122  1.00 23.55  N  
ATOM 309  CA  PRO X -60       4.346   8.371 -61.414  1.00 24.40  C  
ATOM 310  CB  PRO X -60       5.317   9.561 -61.489  1.00 24.63  C  
ATOM 311  CG  PRO X -60       6.504   9.104 -60.735  1.00 24.40  C  
ATOM 312  CD  PRO X -60       5.978   8.221 -59.619  1.00 24.11  C  
ATOM 313  C   PRO X -60       4.553   7.400 -62.570  1.00 25.23  C  
ATOM 314  O   PRO X -60       5.517   7.515 -63.332  1.00 26.68  O  
ATOM 315  N   THR X -59       3.658   6.432 -62.663  1.00 24.88  N  
ATOM 316  CA  THR X -59       3.648   5.477 -63.752  1.00 25.65  C  
ATOM 317  CB  THR X -59       3.270   4.105 -63.226  1.00 25.60  C  
ATOM 318  OG1 THR X -59       1.990   4.191 -62.579  1.00 26.32  O  
ATOM 319  CG2 THR X -59       4.303   3.641 -62.222  1.00 27.41  C  
ATOM 320  C   THR X -59       2.591   5.888 -64.769  1.00 25.63  C  
ATOM 321  O   THR X -59       1.715   6.708 -64.455  1.00 24.72  O  
ATOM 322  N   LYS X -58       2.663   5.317 -65.975  1.00 25.64  N  
ATOM 323  CA  LYS X -58       1.647   5.568 -66.990  1.00 26.49  C  
ATOM 324  CB  LYS X -58       1.946   4.783 -68.281  1.00 26.59  C  
ATOM 325  CG  LYS X -58       3.121   5.351 -69.064  1.00 26.28  C  
ATOM 326  CD  LYS X -58       3.440   4.517 -70.298  1.00 28.51  C  
ATOM 327  CE  LYS X -58       4.482   5.213 -71.157  1.00 31.01  C  
ATOM 328  NZ  LYS X -58       4.866   4.395 -72.354  1.00 36.58  N  
ATOM 329  C   LYS X -58       0.277   5.198 -66.447  1.00 26.21  C  
ATOM 330  O   LYS X -58      -0.718   5.894 -66.705  1.00 27.19  O  
ATOM 331  N   GLU X -57       0.228   4.136 -65.657  1.00 25.99  N  
ATOM 332  CA AGLU X -57      -1.004   3.638 -65.052  0.50 26.70  C  
ATOM 333  CA BGLU X -57      -1.059   3.710 -65.138  0.50 26.43  C  
ATOM 334  CB AGLU X -57      -0.709   2.332 -64.290  0.50 26.64  C  
ATOM 335  CB BGLU X -57      -1.035   2.294 -64.568  0.50 27.10  C  
ATOM 336  CG AGLU X -57      -0.643   2.470 -62.773  0.50 27.96  C  
ATOM 337  CG BGLU X -57      -2.463   1.795 -64.363  0.50 27.84  C  
ATOM 338  CD AGLU X -57       0.222   1.427 -62.081  0.50 28.21  C  
ATOM 339  CD BGLU X -57      -2.585   0.499 -63.596  0.50 31.52  C  
ATOM 340  OE1AGLU X -57       1.252   1.813 -61.465  0.50 27.36  O  
ATOM 341  OE1BGLU X -57      -1.789   0.269 -62.655  0.50 32.65  O  
ATOM 342  OE2AGLU X -57      -0.143   0.230 -62.129  0.50 29.67  O  
ATOM 343  OE2BGLU X -57      -3.515  -0.272 -63.927  0.50 31.05  O  
ATOM 344  C   GLU X -57      -1.632   4.659 -64.095  1.00 26.10  C  
ATOM 345  O   GLU X -57      -2.850   4.705 -63.921  1.00 27.07  O  
ATOM 346  N   ASN X -56      -0.771   5.429 -63.429  1.00 24.42  N  
ATOM 347  CA  ASN X -56      -1.244   6.377 -62.424  1.00 22.73  C  
ATOM 348  CB  ASN X -56      -0.302   6.391 -61.216  1.00 23.46  C  
ATOM 349  CG  ASN X -56      -0.504   5.184 -60.316  1.00 23.89  C  
ATOM 350  OD1 ASN X -56      -1.583   4.582 -60.302  1.00 25.12  O  
ATOM 351  ND2 ASN X -56       0.528   4.822 -59.569  1.00 25.40  N  
ATOM 352  C   ASN X -56      -1.431   7.789 -62.943  1.00 21.59  C  
ATOM 353  O   ASN X -56      -1.782   8.672 -62.170  1.00 20.38  O  
ATOM 354  N   GLU X -55      -1.204   7.997 -64.242  1.00 20.38  N  
ATOM 355  CA  GLU X -55      -1.136   9.355 -64.774  1.00 20.13  C  
ATOM 356  CB  GLU X -55      -0.697   9.360 -66.244  1.00 20.34  C  
ATOM 357  CG  GLU X -55      -0.417  10.772 -66.708  1.00 22.05  C  
ATOM 358  CD  GLU X -55       0.287  10.855 -68.031  1.00 25.87  C  
ATOM 359  OE1 GLU X -55       0.481   9.808 -68.705  1.00 25.16  O  
ATOM 360  OE2 GLU X -55       0.626  11.990 -68.383  1.00 25.68  O  
ATOM 361  C   GLU X -55      -2.432  10.150 -64.556  1.00 18.84  C  
ATOM 362  O   GLU X -55      -2.398  11.360 -64.256  1.00 18.70  O  
ATOM 363  N   GLN X -54      -3.571   9.470 -64.688  1.00 19.13  N  
ATOM 364  CA  GLN X -54      -4.855  10.146 -64.481  1.00 18.24  C  
ATOM 365  CB  GLN X -54      -6.024   9.402 -65.164  1.00 18.87  C  
ATOM 366  CG  GLN X -54      -5.872   9.332 -66.677  1.00 19.52  C  
ATOM 367  CD  GLN X -54      -5.299  10.588 -67.275  1.00 17.74  C  
ATOM 368  OE1 GLN X -54      -5.805  11.697 -67.036  1.00 19.06  O  
ATOM 369  NE2 GLN X -54      -4.225  10.441 -68.056  1.00 17.11  N  
ATOM 370  C   GLN X -54      -5.163  10.427 -63.015  1.00 18.20  C  
ATOM 371  O   GLN X -54      -5.627  11.515 -62.690  1.00 17.73  O  
ATOM 372  N   TYR X -53      -4.889   9.472 -62.133  1.00 17.30  N  
ATOM 373  CA  TYR X -53      -5.027   9.707 -60.682  1.00 17.69  C  
ATOM 374  CB  TYR X -53      -4.575   8.481 -59.878  1.00 18.67  C  
ATOM 375  CG  TYR X -53      -5.348   7.220 -60.204  1.00 20.07  C  
ATOM 376  CD1 TYR X -53      -6.713   7.273 -60.470  1.00 22.45  C  
ATOM 377  CE1 TYR X -53      -7.435   6.104 -60.778  1.00 24.69  C  
ATOM 378  CZ  TYR X -53      -6.785   4.889 -60.776  1.00 24.21  C  
ATOM 379  OH  TYR X -53      -7.498   3.751 -61.080  1.00 25.23  O  
ATOM 380  CE2 TYR X -53      -5.430   4.800 -60.502  1.00 24.67  C  
ATOM 381  CD2 TYR X -53      -4.709   5.974 -60.219  1.00 23.86  C  
ATOM 382  C   TYR X -53      -4.200  10.911 -60.266  1.00 16.86  C  
ATOM 383  O   TYR X -53      -4.641  11.760 -59.485  1.00 16.11  O  
ATOM 384  N   ILE X -52      -2.989  10.971 -60.788  1.00 16.99  N  
ATOM 385  CA  ILE X -52      -2.086  12.086 -60.452  1.00 17.22  C  
ATOM 386  CB  ILE X -52      -0.640  11.837 -60.931  1.00 17.20  C  
ATOM 387  CG1 ILE X -52      -0.041  10.661 -60.138  1.00 17.03  C  
ATOM 388  CD1 ILE X -52       1.254  10.041 -60.789  1.00 17.73  C  
ATOM 389  CG2 ILE X -52       0.192  13.114 -60.784  1.00 18.10  C  
ATOM 390  C   ILE X -52      -2.642  13.398 -60.968  1.00 17.01  C  
ATOM 391  O   ILE X -52      -2.624  14.398 -60.252  1.00 16.12  O  
ATOM 392  N   GLY X -51      -3.162  13.408 -62.197  1.00 17.09  N  
ATOM 393  CA  GLY X -51      -3.806  14.628 -62.716  1.00 16.32  C  
ATOM 394  C   GLY X -51      -5.024  15.061 -61.904  1.00 17.20  C  
ATOM 395  O   GLY X -51      -5.186  16.238 -61.612  1.00 16.35  O  
ATOM 396  N   MET X -50      -5.869  14.108 -61.525  1.00 18.21  N  
ATOM 397  CA  MET X -50      -6.997  14.396 -60.650  1.00 19.19  C  
ATOM 398  CB  MET X -50      -7.752  13.132 -60.279  1.00 19.88  C  
ATOM 399  CG  MET X -50      -8.290  12.386 -61.459  1.00 21.48  C  
ATOM 400  SD  MET X -50      -9.026  10.845 -60.923  1.00 24.52  S  
ATOM 401  CE  MET X -50     -10.434  11.508 -60.085  1.00 24.71  C  
ATOM 402  C   MET X -50      -6.525  15.065 -59.364  1.00 18.47  C  
ATOM 403  O   MET X -50      -7.137  16.039 -58.908  1.00 18.44  O  
ATOM 404  N   LEU X -49      -5.450  14.526 -58.787  1.00 16.47  N  
ATOM 405  CA  LEU X -49      -4.875  15.103 -57.564  1.00 16.45  C  
ATOM 406  CB  LEU X -49      -3.772  14.194 -57.016  1.00 16.04  C  
ATOM 407  CG  LEU X -49      -4.348  12.888 -56.429  1.00 16.84  C  
ATOM 408  CD1 LEU X -49      -3.235  11.893 -56.231  1.00 19.06  C  
ATOM 409  CD2 LEU X -49      -5.102  13.113 -55.121  1.00 19.18  C  
ATOM 410  C   LEU X -49      -4.339  16.506 -57.782  1.00 16.06  C  
ATOM 411  O   LEU X -49      -4.580  17.397 -56.954  1.00 16.91  O  
ATOM 412  N   ARG X -48      -3.623  16.703 -58.886  1.00 16.06  N  
ATOM 413  CA AARG X -48      -3.044  18.015 -59.205  0.50 16.52  C  
ATOM 414  CA BARG X -48      -3.036  18.012 -59.188  0.50 16.76  C  
ATOM 415  CB AARG X -48      -2.212  17.944 -60.478  0.50 16.93  C  
ATOM 416  CB BARG X -48      -2.158  17.944 -60.435  0.50 16.86  C  
ATOM 417  CG AARG X -48      -0.946  17.176 -60.293  0.50 17.97  C  
ATOM 418  CG BARG X -48      -1.267  19.159 -60.617  0.50 17.39  C  
ATOM 419  CD AARG X -48      -0.033  17.312 -61.485  0.50 20.60  C  
ATOM 420  CD BARG X -48      -0.302  18.995 -61.789  0.50 18.44  C  
ATOM 421  NE AARG X -48       1.269  16.700 -61.217  0.50 22.91  N  
ATOM 422  NE BARG X -48       0.661  17.920 -61.583  0.50 22.65  N  
ATOM 423  CZ AARG X -48       2.273  17.293 -60.577  0.50 23.51  C  
ATOM 424  CZ BARG X -48       0.576  16.708 -62.134  0.50 24.82  C  
ATOM 425  NH1AARG X -48       2.155  18.535 -60.123  0.50 22.87  N  
ATOM 426  NH1BARG X -48      -0.433  16.394 -62.946  0.50 24.09  N  
ATOM 427  NH2AARG X -48       3.407  16.635 -60.396  0.50 25.51  N  
ATOM 428  NH2BARG X -48       1.515  15.807 -61.875  0.50 27.44  N  
ATOM 429  C   ARG X -48      -4.129  19.073 -59.346  1.00 16.95  C  
ATOM 430  O   ARG X -48      -4.010  20.183 -58.822  1.00 15.28  O  
ATOM 431  N   GLN X -47      -5.197  18.718 -60.054  1.00 17.19  N  
ATOM 432  CA  GLN X -47      -6.302  19.654 -60.249  1.00 17.94  C  
ATOM 433  CB  GLN X -47      -7.267  19.103 -61.327  1.00 19.32  C  
ATOM 434  CG  GLN X -47      -6.642  19.124 -62.717  1.00 20.46  C  
ATOM 435  CD  GLN X -47      -6.328  20.535 -63.168  1.00 23.39  C  
ATOM 436  OE1 GLN X -47      -5.193  20.864 -63.416  1.00 27.74  O  
ATOM 437  NE2 GLN X -47      -7.339  21.379 -63.221  1.00 24.81  N  
ATOM 438  C   GLN X -47      -7.049  19.939 -58.954  1.00 18.21  C  
ATOM 439  O   GLN X -47      -7.466  21.094 -58.694  1.00 18.81  O  
ATOM 440  N   ALA X -46      -7.209  18.909 -58.122  1.00 16.79  N  
ATOM 441  CA  ALA X -46      -7.868  19.068 -56.832  1.00 16.86  C  
ATOM 442  CB  ALA X -46      -8.197  17.699 -56.209  1.00 17.32  C  
ATOM 443  C   ALA X -46      -7.024  19.933 -55.890  1.00 17.30  C  
ATOM 444  O   ALA X -46      -7.561  20.723 -55.132  1.00 17.90  O  
ATOM 445  N   VAL X -45      -5.702  19.783 -55.929  1.00 16.89  N  
ATOM 446  CA  VAL X -45      -4.848  20.676 -55.124  1.00 17.01  C  
ATOM 447  CB  VAL X -45      -3.375  20.284 -55.215  1.00 16.62  C  
ATOM 448  CG1 VAL X -45      -2.477  21.391 -54.600  1.00 17.96  C  
ATOM 449  CG2 VAL X -45      -3.148  18.963 -54.514  1.00 16.03  C  
ATOM 450  C   VAL X -45      -5.033  22.125 -55.604  1.00 18.02  C  
ATOM 451  O   VAL X -45      -5.245  23.052 -54.808  1.00 18.21  O  
ATOM 452  N   LYS X -44      -4.976  22.314 -56.915  1.00 19.32  N  
ATOM 453  CA  LYS X -44      -5.101  23.641 -57.486  1.00 21.42  C  
ATOM 454  CB  LYS X -44      -5.077  23.562 -59.022  1.00 21.25  C  
ATOM 455  CG  LYS X -44      -5.089  24.914 -59.695  1.00 24.93  C  
ATOM 456  CD  LYS X -44      -4.974  24.781 -61.206  1.00 30.79  C  
ATOM 457  CE  LYS X -44      -6.344  24.632 -61.832  1.00 35.86  C  
ATOM 458  NZ  LYS X -44      -6.245  24.755 -63.335  1.00 37.41  N  
ATOM 459  C   LYS X -44      -6.367  24.312 -57.009  1.00 22.62  C  
ATOM 460  O   LYS X -44      -6.330  25.450 -56.521  1.00 23.81  O  
ATOM 461  N   ASN X -43      -7.482  23.592 -57.100  1.00 23.02  N  
ATOM 462  CA  ASN X -43      -8.787  24.161 -56.855  1.00 23.99  C  
ATOM 463  CB  ASN X -43      -9.763  23.617 -57.890  1.00 25.16  C  
ATOM 464  CG  ASN X -43      -9.384  24.037 -59.309  1.00 27.67  C  
ATOM 465  OD1 ASN X -43      -8.967  25.181 -59.537  1.00 30.47  O  
ATOM 466  ND2 ASN X -43      -9.487  23.107 -60.255  1.00 31.42  N  
ATOM 467  C   ASN X -43      -9.326  23.972 -55.434  1.00 23.43  C  
ATOM 468  O   ASN X -43     -10.450  24.400 -55.128  1.00 23.02  O  
ATOM 469  N   GLU X -42      -8.521  23.344 -54.566  1.00 21.76  N  
ATOM 470  CA  GLU X -42      -8.953  22.972 -53.203  1.00 21.65  C  
ATOM 471  CB  GLU X -42      -8.978  24.189 -52.269  1.00 21.42  C  
ATOM 472  CG  GLU X -42      -9.175  23.843 -50.802  1.00 21.51  C  
ATOM 473  CD  GLU X -42      -9.022  25.043 -49.908  1.00 22.61  C  
ATOM 474  OE1 GLU X -42     -10.000  25.809 -49.764  1.00 22.09  O  
ATOM 475  OE2 GLU X -42      -7.909  25.225 -49.345  1.00 21.14  O  
ATOM 476  C   GLU X -42     -10.302  22.250 -53.253  1.00 21.20  C  
ATOM 477  O   GLU X -42     -11.300  22.646 -52.617  1.00 21.64  O  
ATOM 478  N   SER X -41     -10.324  21.169 -54.022  1.00 20.53  N  
ATOM 479  CA ASER X -41     -11.558  20.447 -54.243  0.50 20.54  C  
ATOM 480  CA BSER X -41     -11.550  20.435 -54.283  0.50 21.07  C  
ATOM 481  CB ASER X -41     -11.983  20.544 -55.712  0.50 20.69  C  
ATOM 482  CB BSER X -41     -11.857  20.447 -55.781  0.50 21.28  C  
ATOM 483  OG ASER X -41     -11.012  19.998 -56.582  0.50 20.18  O  
ATOM 484  OG BSER X -41     -13.187  20.021 -56.029  0.50 23.98  O  
ATOM 485  C   SER X -41     -11.398  19.009 -53.776  1.00 20.83  C  
ATOM 486  O   SER X -41     -10.272  18.495 -53.729  1.00 20.59  O  
ATOM 487  N   PRO X -40     -12.510  18.374 -53.366  1.00 20.70  N  
ATOM 488  CA  PRO X -40     -12.372  17.026 -52.818  1.00 20.46  C  
ATOM 489  CB  PRO X -40     -13.644  16.849 -51.972  1.00 21.20  C  
ATOM 490  CG  PRO X -40     -14.654  17.742 -52.635  1.00 20.47  C  
ATOM 491  CD  PRO X -40     -13.904  18.873 -53.262  1.00 21.50  C  
ATOM 492  C   PRO X -40     -12.241  15.907 -53.853  1.00 20.46  C  
ATOM 493  O   PRO X -40     -12.620  16.075 -55.020  1.00 21.17  O  
ATOM 494  N   VAL X -39     -11.647  14.801 -53.408  1.00 20.40  N  
ATOM 495  CA  VAL X -39     -11.566  13.552 -54.158  1.00 21.51  C  
ATOM 496  CB  VAL X -39     -10.195  13.331 -54.838  1.00 21.18  C  
ATOM 497  CG1 VAL X -39      -9.954  14.353 -55.920  1.00 22.84  C  
ATOM 498  CG2 VAL X -39      -9.085  13.382 -53.786  1.00 21.84  C  
ATOM 499  C   VAL X -39     -11.791  12.428 -53.167  1.00 21.39  C  
ATOM 500  O   VAL X -39     -11.793  12.644 -51.961  1.00 21.40  O  
ATOM 501  N   HIS X -38     -11.993  11.229 -53.697  1.00 21.93  N  
ATOM 502  CA  HIS X -38     -12.109  10.041 -52.891  1.00 23.32  C  
ATOM 503  CB  HIS X -38     -13.269   9.196 -53.393  1.00 23.99  C  
ATOM 504  CG  HIS X -38     -13.657   8.103 -52.449  1.00 26.91  C  
ATOM 505  ND1 HIS X -38     -14.883   7.481 -52.502  1.00 31.61  N  
ATOM 506  CE1 HIS X -38     -14.954   6.568 -51.549  1.00 31.82  C  
ATOM 507  NE2 HIS X -38     -13.830   6.598 -50.857  1.00 32.26  N  
ATOM 508  CD2 HIS X -38     -12.997   7.544 -51.404  1.00 30.43  C  
ATOM 509  C   HIS X -38     -10.830   9.225 -53.032  1.00 22.50  C  
ATOM 510  O   HIS X -38     -10.457   8.858 -54.148  1.00 23.16  O  
ATOM 511  N   ILE X -37     -10.189   8.941 -51.903  1.00 22.43  N  
ATOM 512  CA  ILE X -37      -8.887   8.270 -51.889  1.00 22.65  C  
ATOM 513  CB  ILE X -37      -7.924   8.977 -50.914  1.00 22.32  C  
ATOM 514  CG1 ILE X -37      -7.634  10.407 -51.390  1.00 19.84  C  
ATOM 515  CD1 ILE X -37      -6.964  10.516 -52.779  1.00 21.74  C  
ATOM 516  CG2 ILE X -37      -6.626   8.170 -50.693  1.00 20.69  C  
ATOM 517  C   ILE X -37      -8.997   6.796 -51.493  1.00 23.88  C  
ATOM 518  O   ILE X -37      -9.589   6.479 -50.474  1.00 24.45  O  
ATOM 519  N   PHE X -36      -8.374   5.919 -52.289  1.00 24.63  N  
ATOM 520  CA  PHE X -36      -8.209   4.507 -51.914  1.00 25.58  C  
ATOM 521  CB  PHE X -36      -8.860   3.595 -52.949  1.00 26.96  C  
ATOM 522  CG  PHE X -36     -10.329   3.797 -53.074  1.00 29.92  C  
ATOM 523  CD1 PHE X -36     -11.214   3.005 -52.339  1.00 32.18  C  
ATOM 524  CE1 PHE X -36     -12.588   3.200 -52.451  1.00 33.14  C  
ATOM 525  CZ  PHE X -36     -13.075   4.200 -53.287  1.00 32.73  C  
ATOM 526  CE2 PHE X -36     -12.197   5.001 -54.016  1.00 32.82  C  
ATOM 527  CD2 PHE X -36     -10.834   4.796 -53.909  1.00 30.13  C  
ATOM 528  C   PHE X -36      -6.732   4.205 -51.792  1.00 25.15  C  
ATOM 529  O   PHE X -36      -5.944   4.595 -52.655  1.00 24.99  O  
ATOM 530  N   LEU X -35      -6.361   3.557 -50.696  1.00 24.09  N  
ATOM 531  CA  LEU X -35      -4.965   3.317 -50.369  1.00 23.60  C  
ATOM 532  CB  LEU X -35      -4.719   3.686 -48.908  1.00 23.86  C  
ATOM 533  CG  LEU X -35      -4.862   5.158 -48.516  1.00 21.91  C  
ATOM 534  CD1 LEU X -35      -4.503   5.262 -47.057  1.00 23.63  C  
ATOM 535  CD2 LEU X -35      -3.928   6.024 -49.377  1.00 22.02  C  
ATOM 536  C   LEU X -35      -4.613   1.852 -50.564  1.00 24.33  C  
ATOM 537  O   LEU X -35      -5.470   0.984 -50.367  1.00 24.95  O  
ATOM 538  N   LYS X -34      -3.377   1.571 -50.974  1.00 25.23  N  
ATOM 539  CA  LYS X -34      -2.893   0.184 -50.889  1.00 26.37  C  
ATOM 540  CB  LYS X -34      -1.514   0.047 -51.523  1.00 25.87  C  
ATOM 541  CG  LYS X -34      -1.571   0.303 -53.017  1.00 28.54  C  
ATOM 542  CD  LYS X -34      -0.235   0.106 -53.703  1.00 32.40  C  
ATOM 543  CE  LYS X -34      -0.354   0.467 -55.185  1.00 35.20  C  
ATOM 544  NZ  LYS X -34       0.819  -0.025 -55.990  1.00 38.42  N  
ATOM 545  C   LYS X -34      -2.870  -0.190 -49.415  1.00 26.92  C  
ATOM 546  O   LYS X -34      -2.417   0.587 -48.585  1.00 26.68  O  
ATOM 547  N   PRO X -33      -3.397  -1.380 -49.073  1.00 28.47  N  
ATOM 548  CA  PRO X -33      -3.527  -1.742 -47.664  1.00 28.87  C  
ATOM 549  CB  PRO X -33      -4.056  -3.186 -47.726  1.00 29.50  C  
ATOM 550  CG  PRO X -33      -4.759  -3.262 -49.009  1.00 29.50  C  
ATOM 551  CD  PRO X -33      -3.933  -2.428 -49.960  1.00 28.90  C  
ATOM 552  C   PRO X -33      -2.211  -1.671 -46.891  1.00 29.27  C  
ATOM 553  O   PRO X -33      -1.136  -1.950 -47.450  1.00 28.50  O  
ATOM 554  N   ASN X -32      -2.310  -1.261 -45.623  1.00 29.55  N  
ATOM 555  CA  ASN X -32      -1.158  -1.198 -44.722  1.00 29.90  C  
ATOM 556  CB  ASN X -32      -0.616  -2.618 -44.480  1.00 30.74  C  
ATOM 557  CG  ASN X -32      -1.729  -3.597 -44.165  1.00 31.10  C  
ATOM 558  OD1 ASN X -32      -2.462  -3.413 -43.195  1.00 33.03  O  
ATOM 559  ND2 ASN X -32      -1.905  -4.602 -45.017  1.00 30.36  N  
ATOM 560  C   ASN X -32      -0.078  -0.267 -45.244  1.00 29.56  C  
ATOM 561  O   ASN X -32       1.123  -0.545 -45.117  1.00 30.93  O  
ATOM 562  N   SER X -31      -0.509   0.841 -45.846  1.00 27.42  N  
ATOM 563  CA  SER X -31       0.436   1.787 -46.430  1.00 26.42  C  
ATOM 564  CB  SER X -31       0.837   1.347 -47.836  1.00 26.12  C  
ATOM 565  OG  SER X -31      -0.143   1.761 -48.770  1.00 24.67  O  
ATOM 566  C   SER X -31      -0.152   3.180 -46.533  1.00 25.38  C  
ATOM 567  O   SER X -31      -1.376   3.359 -46.439  1.00 24.06  O  
ATOM 568  N   ASN X -30       0.748   4.130 -46.800  1.00 24.55  N  
ATOM 569  CA  ASN X -30       0.420   5.499 -47.196  1.00 24.76  C  
ATOM 570  CB  ASN X -30       1.391   6.504 -46.528  1.00 24.41  C  
ATOM 571  CG  ASN X -30       2.781   6.575 -47.207  1.00 27.19  C  
ATOM 572  OD1 ASN X -30       3.292   5.592 -47.748  1.00 28.11  O  
ATOM 573  ND2 ASN X -30       3.388   7.776 -47.187  1.00 26.95  N  
ATOM 574  C   ASN X -30       0.423   5.678 -48.720  1.00 23.54  C  
ATOM 575  O   ASN X -30       0.482   6.809 -49.224  1.00 23.46  O  
ATOM 576  N   GLU X -29       0.382   4.568 -49.452  1.00 22.78  N  
ATOM 577  CA  GLU X -29       0.424   4.637 -50.914  1.00 21.87  C  
ATOM 578  CB  GLU X -29       1.210   3.460 -51.489  1.00 22.21  C  
ATOM 579  CG  GLU X -29       1.502   3.625 -52.953  1.00 23.54  C  
ATOM 580  CD  GLU X -29       2.298   2.478 -53.545  1.00 28.81  C  
ATOM 581  OE1 GLU X -29       2.831   1.658 -52.776  1.00 27.98  O  
ATOM 582  OE2 GLU X -29       2.372   2.399 -54.783  1.00 29.57  O  
ATOM 583  C   GLU X -29      -0.968   4.694 -51.518  1.00 21.32  C  
ATOM 584  O   GLU X -29      -1.838   3.867 -51.215  1.00 22.17  O  
ATOM 585  N   ILE X -28      -1.191   5.685 -52.371  1.00 20.00  N  
ATOM 586  CA  ILE X -28      -2.464   5.823 -53.043  1.00 19.65  C  
ATOM 587  CB  ILE X -28      -2.635   7.255 -53.570  1.00 18.67  C  
ATOM 588  CG1 ILE X -28      -2.505   8.239 -52.405  1.00 19.41  C  
ATOM 589  CD1 ILE X -28      -2.428   9.697 -52.854  1.00 19.23  C  
ATOM 590  CG2 ILE X -28      -3.981   7.436 -54.323  1.00 19.75  C  
ATOM 591  C   ILE X -28      -2.568   4.813 -54.190  1.00 20.33  C  
ATOM 592  O   ILE X -28      -1.719   4.790 -55.089  1.00 19.86  O  
ATOM 593  N   GLY X -27      -3.633   4.007 -54.162  1.00 21.28  N  
ATOM 594  CA  GLY X -27      -3.910   3.027 -55.233  1.00 22.13  C  
ATOM 595  C   GLY X -27      -4.899   3.470 -56.297  1.00 22.80  C  
ATOM 596  O   GLY X -27      -4.798   3.076 -57.470  1.00 23.36  O  
ATOM 597  N   LYS X -26      -5.849   4.316 -55.889  1.00 23.19  N  
ATOM 598  CA ALYS X -26      -6.920   4.792 -56.748  0.50 23.09  C  
ATOM 599  CA BLYS X -26      -6.836   4.849 -56.812  0.50 23.08  C  
ATOM 600  CB ALYS X -26      -8.095   3.809 -56.663  0.50 23.61  C  
ATOM 601  CB BLYS X -26      -7.970   3.832 -57.078  0.50 23.57  C  
ATOM 602  CG ALYS X -26      -9.275   4.143 -57.530  0.50 24.88  C  
ATOM 603  CG BLYS X -26      -8.863   4.158 -58.276  0.50 24.00  C  
ATOM 604  CD ALYS X -26     -10.226   2.965 -57.608  0.50 24.94  C  
ATOM 605  CD BLYS X -26      -9.766   2.980 -58.702  0.50 23.72  C  
ATOM 606  CE ALYS X -26     -11.050   3.014 -58.878  0.50 27.81  C  
ATOM 607  CE BLYS X -26     -10.678   3.338 -59.897  0.50 25.09  C  
ATOM 608  NZ ALYS X -26     -11.836   1.757 -59.053  0.50 28.24  N  
ATOM 609  NZ BLYS X -26      -9.985   3.588 -61.226  0.50 26.03  N  
ATOM 610  C   LYS X -26      -7.380   6.166 -56.267  1.00 22.48  C  
ATOM 611  O   LYS X -26      -7.378   6.407 -55.068  1.00 22.05  O  
ATOM 612  N   VAL X -25      -7.788   7.030 -57.191  1.00 22.89  N  
ATOM 613  CA  VAL X -25      -8.447   8.306 -56.851  1.00 23.29  C  
ATOM 614  CB  VAL X -25      -7.566   9.518 -57.170  1.00 23.33  C  
ATOM 615  CG1 VAL X -25      -8.299  10.842 -56.871  1.00 22.55  C  
ATOM 616  CG2 VAL X -25      -6.263   9.438 -56.369  1.00 22.25  C  
ATOM 617  C   VAL X -25      -9.736   8.364 -57.662  1.00 25.02  C  
ATOM 618  O   VAL X -25      -9.727   8.128 -58.873  1.00 24.45  O  
ATOM 619  N   GLU X -24     -10.847   8.637 -56.980  1.00 27.00  N  
ATOM 620  CA  GLU X -24     -12.134   8.807 -57.660  1.00 29.52  C  
ATOM 621  CB  GLU X -24     -13.154   7.763 -57.157  1.00 29.38  C  
ATOM 622  CG  GLU X -24     -12.802   6.319 -57.531  1.00 32.35  C  
ATOM 623  CD  GLU X -24     -13.680   5.276 -56.843  1.00 33.32  C  
ATOM 624  OE1 GLU X -24     -14.653   5.652 -56.147  1.00 37.37  O  
ATOM 625  OE2 GLU X -24     -13.377   4.060 -56.980  1.00 39.76  O  
ATOM 626  C   GLU X -24     -12.663  10.228 -57.451  1.00 30.15  C  
ATOM 627  O   GLU X -24     -12.294  10.905 -56.493  1.00 30.01  O  
ATOM 628  N   SER X -23     -13.538  10.660 -58.356  1.00 31.54  N  
ATOM 629  CA ASER X -23     -14.164  11.983 -58.281  0.40 32.14  C  
ATOM 630  CA BSER X -23     -14.165  11.981 -58.278  0.60 32.20  C  
ATOM 631  CB ASER X -23     -14.998  12.250 -59.535  0.40 32.08  C  
ATOM 632  CB BSER X -23     -15.012  12.210 -59.521  0.60 32.15  C  
ATOM 633  OG ASER X -23     -14.429  11.642 -60.681  0.40 32.31  O  
ATOM 634  OG BSER X -23     -16.064  11.262 -59.557  0.60 32.75  O  
ATOM 635  C   SER X -23     -15.055  12.101 -57.049  1.00 32.53  C  
ATOM 636  O   SER X -23     -15.593  11.102 -56.556  1.00 33.17  O  
ATOM 637  N   ALA X -22     -15.216  13.323 -56.554  1.00 33.23  N  
ATOM 638  CA  ALA X -22     -16.139  13.579 -55.449  1.00 34.12  C  
ATOM 639  CB  ALA X -22     -15.633  14.719 -54.587  1.00 34.37  C  
ATOM 640  C   ALA X -22     -17.509  13.920 -56.031  1.00 34.27  C  
ATOM 641  O   ALA X -22     -17.602  14.403 -57.159  1.00 34.28  O  
ATOM 642  N   SER X -21     -18.563  13.676 -55.259  1.00 34.97  N  
ATOM 643  CA  SER X -21     -19.910  14.008 -55.705  1.00 35.01  C  
ATOM 644  CB  SER X -21     -20.930  13.215 -54.899  1.00 35.01  C  
ATOM 645  OG  SER X -21     -20.990  13.666 -53.559  1.00 36.32  O  
ATOM 646  C   SER X -21     -20.190  15.519 -55.585  1.00 35.15  C  
ATOM 647  O   SER X -21     -19.438  16.251 -54.917  1.00 35.31  O  
ATOM 648  N   PRO X -20     -21.278  16.001 -56.223  1.00 34.78  N  
ATOM 649  CA  PRO X -20     -21.633  17.404 -55.995  1.00 34.14  C  
ATOM 650  CB  PRO X -20     -22.894  17.605 -56.860  1.00 34.43  C  
ATOM 651  CG  PRO X -20     -22.834  16.501 -57.884  1.00 34.61  C  
ATOM 652  CD  PRO X -20     -22.215  15.338 -57.157  1.00 34.86  C  
ATOM 653  C   PRO X -20     -21.939  17.635 -54.517  1.00 33.77  C  
ATOM 654  O   PRO X -20     -21.626  18.712 -53.985  1.00 33.95  O  
ATOM 655  N   GLU X -19     -22.510  16.629 -53.860  1.00 33.20  N  
ATOM 656  CA  GLU X -19     -22.800  16.698 -52.427  1.00 33.92  C  
ATOM 657  CB  GLU X -19     -23.556  15.456 -51.939  1.00 34.52  C  
ATOM 658  CG  GLU X -19     -25.002  15.348 -52.456  1.00 38.68  C  
ATOM 659  CD  GLU X -19     -25.116  14.699 -53.839  1.00 44.12  C  
ATOM 660  OE1 GLU X -19     -26.270  14.477 -54.286  1.00 46.40  O  
ATOM 661  OE2 GLU X -19     -24.069  14.409 -54.482  1.00 45.98  O  
ATOM 662  C   GLU X -19     -21.503  16.861 -51.629  1.00 32.90  C  
ATOM 663  O   GLU X -19     -21.440  17.653 -50.686  1.00 32.90  O  
ATOM 664  N   ASP X -18     -20.484  16.093 -52.017  1.00 31.62  N  
ATOM 665  CA  ASP X -18     -19.150  16.219 -51.433  1.00 30.57  C  
ATOM 666  CB  ASP X -18     -18.180  15.221 -52.073  1.00 30.51  C  
ATOM 667  CG  ASP X -18     -18.556  13.774 -51.810  1.00 31.78  C  
ATOM 668  OD1 ASP X -18     -19.223  13.478 -50.792  1.00 34.74  O  
ATOM 669  OD2 ASP X -18     -18.162  12.925 -52.631  1.00 34.52  O  
ATOM 670  C   ASP X -18     -18.584  17.625 -51.613  1.00 29.39  C  
ATOM 671  O   ASP X -18     -18.085  18.225 -50.654  1.00 29.00  O  
ATOM 672  N   VAL X -17     -18.657  18.131 -52.840  1.00 28.40  N  
ATOM 673  CA  VAL X -17     -18.122  19.451 -53.167  1.00 29.17  C  
ATOM 674  CB  VAL X -17     -18.283  19.781 -54.673  1.00 29.41  C  
ATOM 675  CG1 VAL X -17     -17.915  21.251 -54.969  1.00 30.08  C  
ATOM 676  CG2 VAL X -17     -17.436  18.824 -55.523  1.00 30.03  C  
ATOM 677  C   VAL X -17     -18.772  20.521 -52.287  1.00 28.87  C  
ATOM 678  O   VAL X -17     -18.081  21.362 -51.708  1.00 27.04  O  
ATOM 679  N   ARG X -16     -20.098  20.457 -52.177  1.00 29.24  N  
ATOM 680  CA  ARG X -16     -20.849  21.376 -51.325  1.00 29.97  C  
ATOM 681  CB  ARG X -16     -22.355  21.081 -51.438  1.00 30.14  C  
ATOM 682  CG  ARG X -16     -23.266  22.273 -51.142  1.00 31.83  C  
ATOM 683  CD  ARG X -16     -24.754  21.831 -51.056  1.00 33.54  C  
ATOM 684  NE  ARG X -16     -25.175  21.132 -52.263  1.00 40.54  N  
ATOM 685  CZ  ARG X -16     -25.567  19.858 -52.317  1.00 42.39  C  
ATOM 686  NH1 ARG X -16     -25.638  19.104 -51.215  1.00 41.60  N  
ATOM 687  NH2 ARG X -16     -25.900  19.339 -53.493  1.00 44.12  N  
ATOM 688  C   ARG X -16     -20.394  21.244 -49.879  1.00 28.81  C  
ATOM 689  O   ARG X -16     -20.098  22.247 -49.206  1.00 28.27  O  
ATOM 690  N   TYR X -15     -20.338  20.002 -49.403  1.00 27.65  N  
ATOM 691  CA  TYR X -15     -19.957  19.729 -48.036  1.00 27.55  C  
ATOM 692  CB  TYR X -15     -19.991  18.226 -47.751  1.00 28.41  C  
ATOM 693  CG  TYR X -15     -19.475  17.911 -46.372  1.00 29.45  C  
ATOM 694  CD1 TYR X -15     -20.218  18.241 -45.242  1.00 30.48  C  
ATOM 695  CE1 TYR X -15     -19.740  17.978 -43.974  1.00 31.43  C  
ATOM 696  CZ  TYR X -15     -18.500  17.393 -43.823  1.00 31.13  C  
ATOM 697  OH  TYR X -15     -18.036  17.131 -42.557  1.00 31.35  O  
ATOM 698  CE2 TYR X -15     -17.738  17.062 -44.929  1.00 30.57  C  
ATOM 699  CD2 TYR X -15     -18.223  17.327 -46.191  1.00 29.51  C  
ATOM 700  C   TYR X -15     -18.575  20.297 -47.659  1.00 26.62  C  
ATOM 701  O   TYR X -15     -18.436  20.959 -46.625  1.00 25.69  O  
ATOM 702  N   PHE X -14     -17.566  19.999 -48.480  1.00 26.24  N  
ATOM 703  CA  PHE X -14     -16.198  20.478 -48.224  1.00 25.75  C  
ATOM 704  CB  PHE X -14     -15.165  19.755 -49.107  1.00 25.52  C  
ATOM 705  CG  PHE X -14     -14.838  18.384 -48.593  1.00 23.76  C  
ATOM 706  CD1 PHE X -14     -15.522  17.263 -49.062  1.00 24.67  C  
ATOM 707  CE1 PHE X -14     -15.239  15.992 -48.551  1.00 24.22  C  
ATOM 708  CZ  PHE X -14     -14.287  15.841 -47.558  1.00 23.78  C  
ATOM 709  CE2 PHE X -14     -13.609  16.950 -47.074  1.00 23.90  C  
ATOM 710  CD2 PHE X -14     -13.892  18.216 -47.589  1.00 22.64  C  
ATOM 711  C   PHE X -14     -16.097  21.989 -48.315  1.00 26.54  C  
ATOM 712  O   PHE X -14     -15.343  22.591 -47.558  1.00 26.45  O  
ATOM 713  N   LYS X -13     -16.879  22.604 -49.206  1.00 26.78  N  
ATOM 714  CA ALYS X -13     -16.897  24.062 -49.293  0.40 27.55  C  
ATOM 715  CA BLYS X -13     -16.919  24.068 -49.314  0.60 28.06  C  
ATOM 716  CB ALYS X -13     -17.647  24.547 -50.534  0.40 27.72  C  
ATOM 717  CB BLYS X -13     -17.737  24.512 -50.535  0.60 28.15  C  
ATOM 718  CG ALYS X -13     -16.722  24.904 -51.677  0.40 28.55  C  
ATOM 719  CG BLYS X -13     -16.972  24.420 -51.847  0.60 29.25  C  
ATOM 720  CD ALYS X -13     -15.864  26.115 -51.327  0.40 28.59  C  
ATOM 721  CD BLYS X -13     -17.815  24.808 -53.071  0.60 29.74  C  
ATOM 722  CE ALYS X -13     -14.541  26.073 -52.059  0.40 28.93  C  
ATOM 723  CE BLYS X -13     -16.898  25.248 -54.219  0.60 31.54  C  
ATOM 724  NZ ALYS X -13     -13.706  27.252 -51.714  0.40 29.70  N  
ATOM 725  NZ BLYS X -13     -17.390  24.884 -55.583  0.60 33.31  N  
ATOM 726  C   LYS X -13     -17.454  24.702 -48.030  1.00 27.61  C  
ATOM 727  O   LYS X -13     -17.037  25.813 -47.661  1.00 28.15  O  
ATOM 728  N   THR X -12     -18.361  23.994 -47.351  1.00 27.34  N  
ATOM 729  CA ATHR X -12     -18.932  24.497 -46.114  0.50 27.52  C  
ATOM 730  CA BTHR X -12     -18.955  24.449 -46.072  0.50 27.51  C  
ATOM 731  CB ATHR X -12     -20.302  23.845 -45.851  0.50 27.56  C  
ATOM 732  CB BTHR X -12     -20.244  23.652 -45.614  0.50 27.55  C  
ATOM 733  OG1ATHR X -12     -21.123  24.053 -47.007  0.50 28.11  O  
ATOM 734  OG1BTHR X -12     -19.898  22.347 -45.119  0.50 28.29  O  
ATOM 735  CG2ATHR X -12     -20.986  24.466 -44.648  0.50 28.22  C  
ATOM 736  CG2BTHR X -12     -21.265  23.524 -46.713  0.50 28.14  C  
ATOM 737  C   THR X -12     -17.978  24.424 -44.905  1.00 27.20  C  
ATOM 738  O   THR X -12     -17.888  25.383 -44.144  1.00 28.27  O  
ATOM 739  N   ILE X -11     -17.260  23.309 -44.747  1.00 25.50  N  
ATOM 740  CA  ILE X -11     -16.380  23.126 -43.589  1.00 24.26  C  
ATOM 741  CB  ILE X -11     -16.251  21.633 -43.153  1.00 24.43  C  
ATOM 742  CG1 ILE X -11     -15.639  20.776 -44.265  1.00 24.73  C  
ATOM 743  CD1 ILE X -11     -15.165  19.449 -43.787  1.00 25.38  C  
ATOM 744  CG2 ILE X -11     -17.646  21.071 -42.743  1.00 25.49  C  
ATOM 745  C   ILE X -11     -14.993  23.755 -43.773  1.00 23.19  C  
ATOM 746  O   ILE X -11     -14.386  24.225 -42.809  1.00 23.34  O  
ATOM 747  N   LEU X -10     -14.522  23.757 -45.014  1.00 21.94  N  
ATOM 748  CA  LEU X -10     -13.222  24.339 -45.345  1.00 21.35  C  
ATOM 749  CB  LEU X -10     -12.395  23.360 -46.204  1.00 21.00  C  
ATOM 750  CG  LEU X -10     -10.933  23.774 -46.464  1.00 20.13  C  
ATOM 751  CD1 LEU X -10     -10.155  23.985 -45.168  1.00 19.81  C  
ATOM 752  CD2 LEU X -10     -10.221  22.769 -47.379  1.00 20.94  C  
ATOM 753  C   LEU X -10     -13.508  25.662 -46.039  1.00 21.76  C  
ATOM 754  O   LEU X -10     -13.678  25.735 -47.264  1.00 22.31  O  
ATOM 755  N   THR X  -9     -13.560  26.714 -45.237  1.00 22.34  N  
ATOM 756  CA  THR X  -9     -14.266  27.925 -45.633  1.00 23.81  C  
ATOM 757  CB  THR X  -9     -15.492  28.139 -44.694  1.00 23.97  C  
ATOM 758  OG1 THR X  -9     -16.223  29.281 -45.151  1.00 26.76  O  
ATOM 759  CG2 THR X  -9     -15.042  28.349 -43.229  1.00 23.92  C  
ATOM 760  C   THR X  -9     -13.420  29.183 -45.669  1.00 24.93  C  
ATOM 761  O   THR X  -9     -12.362  29.259 -45.043  1.00 23.52  O  
ATOM 762  N   LYS X  -8     -13.892  30.169 -46.433  1.00 26.04  N  
ATOM 763  CA  LYS X  -8     -13.291  31.505 -46.413  1.00 28.19  C  
ATOM 764  CB  LYS X  -8     -13.174  32.086 -47.830  1.00 28.65  C  
ATOM 765  CG  LYS X  -8     -11.992  31.504 -48.647  1.00 31.17  C  
ATOM 766  CD  LYS X  -8     -10.653  31.818 -47.961  1.00 31.96  C  
ATOM 767  CE  LYS X  -8      -9.467  31.650 -48.888  1.00 34.08  C  
ATOM 768  NZ  LYS X  -8      -9.219  30.234 -49.250  1.00 31.97  N  
ATOM 769  C   LYS X  -8     -14.062  32.442 -45.474  1.00 29.13  C  
ATOM 770  O   LYS X  -8     -13.661  33.579 -45.233  1.00 29.06  O  
ATOM 771  N   GLU X  -7     -15.142  31.925 -44.913  1.00 31.23  N  
ATOM 772  CA  GLU X  -7     -15.906  32.638 -43.899  1.00 34.13  C  
ATOM 773  CB  GLU X  -7     -17.258  31.962 -43.677  1.00 34.39  C  
ATOM 774  CG  GLU X  -7     -18.189  32.040 -44.889  1.00 38.05  C  
ATOM 775  CD  GLU X  -7     -18.542  33.472 -45.276  1.00 42.11  C  
ATOM 776  OE1 GLU X  -7     -18.683  34.337 -44.381  1.00 43.86  O  
ATOM 777  OE2 GLU X  -7     -18.674  33.731 -46.487  1.00 45.58  O  
ATOM 778  C   GLU X  -7     -15.110  32.634 -42.616  1.00 35.09  C  
ATOM 779  O   GLU X  -7     -14.649  31.574 -42.159  1.00 36.08  O  
ATOM 780  N   VAL X  -6     -14.912  33.820 -42.058  1.00 35.59  N  
ATOM 781  CA  VAL X  -6     -14.168  33.957 -40.815  1.00 36.56  C  
ATOM 782  CB  VAL X  -6     -13.119  35.090 -40.895  1.00 36.66  C  
ATOM 783  CG1 VAL X  -6     -12.423  35.304 -39.554  1.00 35.42  C  
ATOM 784  CG2 VAL X  -6     -12.092  34.774 -41.982  1.00 36.09  C  
ATOM 785  C   VAL X  -6     -15.162  34.145 -39.677  1.00 37.94  C  
ATOM 786  O   VAL X  -6     -16.053  34.991 -39.750  1.00 37.84  O  
ATOM 787  N   LYS X  -5     -15.003  33.325 -38.647  1.00 39.40  N  
ATOM 788  CA  LYS X  -5     -15.920  33.267 -37.527  1.00 41.86  C  
ATOM 789  CB  LYS X  -5     -16.576  31.882 -37.485  1.00 41.87  C  
ATOM 790  CG  LYS X  -5     -17.225  31.442 -38.813  1.00 43.39  C  
ATOM 791  CD  LYS X  -5     -17.538  29.941 -38.828  1.00 43.03  C  
ATOM 792  CE  LYS X  -5     -18.529  29.580 -39.929  1.00 45.46  C  
ATOM 793  NZ  LYS X  -5     -17.919  29.530 -41.287  1.00 46.23  N  
ATOM 794  C   LYS X  -5     -15.147  33.529 -36.240  1.00 42.30  C  
ATOM 795  O   LYS X  -5     -14.447  32.651 -35.751  1.00 42.92  O  
ATOM 796  N   GLY X  -4     -15.260  34.739 -35.699  1.00 42.91  N  
ATOM 797  CA  GLY X  -4     -14.598  35.087 -34.435  1.00 43.18  C  
ATOM 798  C   GLY X  -4     -15.123  34.319 -33.229  1.00 43.29  C  
ATOM 799  O   GLY X  -4     -16.264  33.848 -33.232  1.00 43.65  O  
ATOM 800  N   GLN X  -3     -14.280  34.186 -32.203  1.00 43.35  N  
ATOM 801  CA  GLN X  -3     -14.644  33.538 -30.943  1.00 43.24  C  
ATOM 802  CB  GLN X  -3     -13.392  33.399 -30.062  1.00 42.96  C  
ATOM 803  CG  GLN X  -3     -13.628  32.926 -28.626  1.00 41.63  C  
ATOM 804  CD  GLN X  -3     -14.359  31.594 -28.544  1.00 40.69  C  
ATOM 805  OE1 GLN X  -3     -13.935  30.590 -29.132  1.00 38.10  O  
ATOM 806  NE2 GLN X  -3     -15.459  31.575 -27.794  1.00 39.40  N  
ATOM 807  C   GLN X  -3     -15.747  34.350 -30.235  1.00 43.98  C  
ATOM 808  O   GLN X  -3     -15.648  35.576 -30.140  1.00 43.40  O  
ATOM 809  N   THR X  -2     -16.793  33.666 -29.761  1.00 44.81  N  
ATOM 810  CA  THR X  -2     -17.967  34.355 -29.184  1.00 46.04  C  
ATOM 811  CB  THR X  -2     -19.297  33.572 -29.368  1.00 45.81  C  
ATOM 812  OG1 THR X  -2     -19.059  32.167 -29.239  1.00 47.12  O  
ATOM 813  CG2 THR X  -2     -19.897  33.851 -30.732  1.00 46.50  C  
ATOM 814  C   THR X  -2     -17.810  34.813 -27.729  1.00 46.36  C  
ATOM 815  O   THR X  -2     -18.226  35.918 -27.389  1.00 46.56  O  
ATOM 816  N   ASN X  -1     -17.220  33.989 -26.868  1.00 46.95  N  
ATOM 817  CA  ASN X  -1     -16.928  34.478 -25.521  1.00 47.47  C  
ATOM 818  CB  ASN X  -1     -17.140  33.419 -24.422  1.00 47.99  C  
ATOM 819  CG  ASN X  -1     -16.583  32.061 -24.781  1.00 49.70  C  
ATOM 820  OD1 ASN X  -1     -17.340  31.109 -25.002  1.00 50.88  O  
ATOM 821  ND2 ASN X  -1     -15.257  31.952 -24.818  1.00 51.70  N  
ATOM 822  C   ASN X  -1     -15.573  35.166 -25.421  1.00 47.00  C  
ATOM 823  O   ASN X  -1     -14.769  35.109 -26.347  1.00 47.32  O  
ATOM 824  N   LYS X   0     -15.349  35.859 -24.311  1.00 46.35  N  
ATOM 825  CA  LYS X   0     -14.104  36.606 -24.104  1.00 45.29  C  
ATOM 826  CB  LYS X   0     -14.291  38.080 -24.497  1.00 45.96  C  
ATOM 827  CG  LYS X   0     -15.653  38.715 -24.133  1.00 47.16  C  
ATOM 828  CD  LYS X   0     -16.554  38.846 -25.369  1.00 49.84  C  
ATOM 829  CE  LYS X   0     -17.499  40.054 -25.274  1.00 50.41  C  
ATOM 830  NZ  LYS X   0     -18.753  39.753 -24.532  1.00 52.05  N  
ATOM 831  C   LYS X   0     -13.747  36.477 -22.633  1.00 43.30  C  
ATOM 832  O   LYS X   0     -14.640  36.721 -21.820  1.00 44.85  O  
ATOM 833  N   LEU X   1     -12.529  36.100 -22.192  1.00 41.07  N  
ATOM 834  CA ALEU X   1     -11.323  35.755 -22.986  0.60 38.71  C  
ATOM 835  CA BLEU X   1     -11.321  35.750 -22.985  0.40 38.49  C  
ATOM 836  CB ALEU X   1     -11.607  34.862 -24.207  0.60 38.92  C  
ATOM 837  CB BLEU X   1     -11.601  34.869 -24.217  0.40 38.65  C  
ATOM 838  CG ALEU X   1     -11.343  33.361 -24.040  0.60 39.19  C  
ATOM 839  CG BLEU X   1     -12.161  33.452 -24.034  0.40 38.02  C  
ATOM 840  CD1ALEU X   1     -12.036  32.740 -22.819  0.60 38.90  C  
ATOM 841  CD1BLEU X   1     -11.884  32.661 -25.302  0.40 38.45  C  
ATOM 842  CD2ALEU X   1     -11.709  32.619 -25.320  0.60 38.86  C  
ATOM 843  CD2BLEU X   1     -11.588  32.717 -22.817  0.40 37.64  C  
ATOM 844  C   LEU X   1     -10.335  36.891 -23.293  1.00 36.93  C  
ATOM 845  O   LEU X   1     -10.516  37.679 -24.232  1.00 36.78  O  
ATOM 846  N   ALA X   2      -9.286  36.931 -22.478  1.00 33.62  N  
ATOM 847  CA  ALA X   2      -8.151  37.821 -22.618  1.00 30.84  C  
ATOM 848  CB  ALA X   2      -7.461  37.995 -21.295  1.00 30.15  C  
ATOM 849  C   ALA X   2      -7.180  37.192 -23.608  1.00 29.03  C  
ATOM 850  O   ALA X   2      -6.813  36.022 -23.472  1.00 27.05  O  
ATOM 851  N   SER X   3      -6.749  37.983 -24.579  1.00 27.79  N  
ATOM 852  CA ASER X   3      -5.817  37.502 -25.594  0.64 27.29  C  
ATOM 853  CA BSER X   3      -5.817  37.508 -25.600  0.36 26.91  C  
ATOM 854  CB ASER X   3      -5.970  38.315 -26.883  0.64 27.29  C  
ATOM 855  CB BSER X   3      -5.945  38.353 -26.871  0.36 26.85  C  
ATOM 856  OG ASER X   3      -7.137  37.914 -27.581  0.64 29.43  O  
ATOM 857  OG BSER X   3      -5.466  39.666 -26.655  0.36 26.02  O  
ATOM 858  C   SER X   3      -4.369  37.504 -25.114  1.00 26.68  C  
ATOM 859  O   SER X   3      -3.498  36.872 -25.722  1.00 26.53  O  
ATOM 860  N   VAL X   4      -4.103  38.213 -24.019  1.00 25.77  N  
ATOM 861  CA  VAL X   4      -2.741  38.374 -23.535  1.00 25.24  C  
ATOM 862  CB  VAL X   4      -2.212  39.843 -23.730  1.00 24.77  C  
ATOM 863  CG1 VAL X   4      -0.776  39.953 -23.268  1.00 25.57  C  
ATOM 864  CG2 VAL X   4      -2.357  40.274 -25.189  1.00 24.23  C  
ATOM 865  C   VAL X   4      -2.622  37.965 -22.074  1.00 25.68  C  
ATOM 866  O   VAL X   4      -3.325  38.495 -21.204  1.00 26.15  O  
ATOM 867  N   ILE X   5      -1.740  37.007 -21.817  1.00 24.64  N  
ATOM 868  CA  ILE X   5      -1.548  36.428 -20.491  1.00 24.70  C  
ATOM 869  CB  ILE X   5      -0.815  35.060 -20.599  1.00 24.30  C  
ATOM 870  CG1 ILE X   5      -1.807  33.962 -20.986  1.00 23.45  C  
ATOM 871  CD1 ILE X   5      -2.584  34.187 -22.269  1.00 23.56  C  
ATOM 872  CG2 ILE X   5      -0.132  34.658 -19.282  1.00 23.31  C  
ATOM 873  C   ILE X   5      -0.751  37.446 -19.686  1.00 24.92  C  
ATOM 874  O   ILE X   5       0.201  38.012 -20.209  1.00 24.72  O  
ATOM 875  N   PRO X   6      -1.159  37.706 -18.426  1.00 26.15  N  
ATOM 876  CA  PRO X   6      -0.593  38.859 -17.662  1.00 26.72  C  
ATOM 877  CB  PRO X   6      -1.457  38.888 -16.395  1.00 26.68  C  
ATOM 878  CG  PRO X   6      -1.901  37.434 -16.213  1.00 26.57  C  
ATOM 879  CD  PRO X   6      -2.184  36.986 -17.647  1.00 25.77  C  
ATOM 880  C   PRO X   6       0.891  38.789 -17.303  1.00 27.44  C  
ATOM 881  O   PRO X   6       1.540  39.835 -17.127  1.00 27.93  O  
ATOM 882  N   ASP X   7       1.445  37.583 -17.181  1.00 27.39  N  
ATOM 883  CA  ASP X   7       2.842  37.428 -16.780  1.00 28.49  C  
ATOM 884  CB  ASP X   7       3.031  37.808 -15.302  1.00 28.45  C  
ATOM 885  CG  ASP X   7       2.055  37.105 -14.377  1.00 32.54  C  
ATOM 886  OD1 ASP X   7       1.506  37.776 -13.473  1.00 34.04  O  
ATOM 887  OD2 ASP X   7       1.823  35.879 -14.533  1.00 34.39  O  
ATOM 888  C   ASP X   7       3.377  36.012 -17.035  1.00 28.34  C  
ATOM 889  O   ASP X   7       2.605  35.089 -17.324  1.00 27.78  O  
ATOM 890  N   VAL X   8       4.694  35.866 -16.934  1.00 28.61  N  
ATOM 891  CA AVAL X   8       5.398  34.597 -17.176  0.50 28.87  C  
ATOM 892  CA BVAL X   8       5.317  34.585 -17.243  0.50 28.37  C  
ATOM 893  CB AVAL X   8       6.935  34.775 -17.055  0.50 29.00  C  
ATOM 894  CB BVAL X   8       6.848  34.715 -17.493  0.50 28.47  C  
ATOM 895  CG1AVAL X   8       7.653  33.417 -16.991  0.50 29.77  C  
ATOM 896  CG1BVAL X   8       7.601  34.994 -16.200  0.50 27.67  C  
ATOM 897  CG2AVAL X   8       7.454  35.569 -18.216  0.50 29.64  C  
ATOM 898  CG2BVAL X   8       7.395  33.462 -18.209  0.50 27.65  C  
ATOM 899  C   VAL X   8       4.953  33.513 -16.203  1.00 28.78  C  
ATOM 900  O   VAL X   8       4.871  32.329 -16.548  1.00 28.47  O  
ATOM 901  N   ALA X   9       4.690  33.923 -14.964  1.00 29.04  N  
ATOM 902  CA  ALA X   9       4.217  32.995 -13.931  1.00 28.98  C  
ATOM 903  CB  ALA X   9       4.061  33.704 -12.585  1.00 29.25  C  
ATOM 904  C   ALA X   9       2.907  32.329 -14.345  1.00 28.57  C  
ATOM 905  O   ALA X   9       2.726  31.111 -14.153  1.00 28.70  O  
ATOM 906  N   THR X  10       1.999  33.118 -14.912  1.00 27.69  N  
ATOM 907  CA  THR X  10       0.721  32.602 -15.382  1.00 26.95  C  
ATOM 908  CB  THR X  10      -0.290  33.738 -15.647  1.00 27.20  C  
ATOM 909  OG1 THR X  10      -0.465  34.489 -14.428  1.00 29.02  O  
ATOM 910  CG2 THR X  10      -1.653  33.180 -16.093  1.00 27.03  C  
ATOM 911  C   THR X  10       0.930  31.748 -16.639  1.00 26.63  C  
ATOM 912  O   THR X  10       0.312  30.689 -16.779  1.00 26.55  O  
ATOM 913  N   LEU X  11       1.811  32.195 -17.529  1.00 25.77  N  
ATOM 914  CA  LEU X  11       2.204  31.381 -18.697  1.00 25.47  C  
ATOM 915  CB  LEU X  11       3.315  32.058 -19.496  1.00 24.96  C  
ATOM 916  CG  LEU X  11       3.776  31.317 -20.761  1.00 25.08  C  
ATOM 917  CD1 LEU X  11       2.665  31.300 -21.802  1.00 24.06  C  
ATOM 918  CD2 LEU X  11       5.038  31.949 -21.314  1.00 25.43  C  
ATOM 919  C   LEU X  11       2.704  29.999 -18.257  1.00 25.90  C  
ATOM 920  O   LEU X  11       2.300  28.972 -18.825  1.00 25.39  O  
ATOM 921  N   ASN X  12       3.591  29.986 -17.265  1.00 26.09  N  
ATOM 922  CA  ASN X  12       4.121  28.720 -16.727  1.00 26.60  C  
ATOM 923  CB  ASN X  12       5.282  28.984 -15.763  1.00 27.47  C  
ATOM 924  CG  ASN X  12       6.518  29.514 -16.471  1.00 28.94  C  
ATOM 925  OD1 ASN X  12       6.729  29.273 -17.664  1.00 31.89  O  
ATOM 926  ND2 ASN X  12       7.343  30.247 -15.738  1.00 32.04  N  
ATOM 927  C   ASN X  12       3.028  27.867 -16.090  1.00 26.22  C  
ATOM 928  O   ASN X  12       3.027  26.630 -16.238  1.00 25.47  O  
ATOM 929  N   SER X  13       2.090  28.514 -15.401  1.00 25.94  N  
ATOM 930  CA  SER X  13       0.943  27.809 -14.838  1.00 25.81  C  
ATOM 931  CB  SER X  13       0.035  28.723 -14.019  1.00 26.10  C  
ATOM 932  OG  SER X  13      -1.130  27.990 -13.655  1.00 27.52  O  
ATOM 933  C   SER X  13       0.137  27.115 -15.934  1.00 25.21  C  
ATOM 934  O   SER X  13      -0.177  25.915 -15.834  1.00 24.54  O  
ATOM 935  N   LEU X  14      -0.176  27.866 -16.988  1.00 23.93  N  
ATOM 936  CA  LEU X  14      -0.889  27.310 -18.126  1.00 23.56  C  
ATOM 937  CB  LEU X  14      -1.211  28.399 -19.146  1.00 23.21  C  
ATOM 938  CG  LEU X  14      -2.123  29.493 -18.599  1.00 23.11  C  
ATOM 939  CD1 LEU X  14      -2.098  30.655 -19.583  1.00 20.97  C  
ATOM 940  CD2 LEU X  14      -3.526  28.948 -18.465  1.00 21.94  C  
ATOM 941  C   LEU X  14      -0.098  26.186 -18.785  1.00 22.27  C  
ATOM 942  O   LEU X  14      -0.685  25.170 -19.143  1.00 22.27  O  
ATOM 943  N   PHE X  15       1.221  26.345 -18.920  1.00 22.15  N  
ATOM 944  CA  PHE X  15       2.039  25.260 -19.481  1.00 21.36  C  
ATOM 945  CB  PHE X  15       3.530  25.615 -19.568  1.00 21.74  C  
ATOM 946  CG  PHE X  15       4.369  24.469 -20.069  1.00 20.30  C  
ATOM 947  CD1 PHE X  15       4.997  23.593 -19.179  1.00 21.28  C  
ATOM 948  CE1 PHE X  15       5.724  22.506 -19.639  1.00 22.95  C  
ATOM 949  CZ  PHE X  15       5.826  22.281 -20.997  1.00 22.72  C  
ATOM 950  CE2 PHE X  15       5.193  23.139 -21.889  1.00 20.46  C  
ATOM 951  CD2 PHE X  15       4.465  24.213 -21.427  1.00 20.73  C  
ATOM 952  C   PHE X  15       1.891  23.973 -18.636  1.00 22.52  C  
ATOM 953  O   PHE X  15       1.746  22.861 -19.173  1.00 21.49  O  
ATOM 954  N   ASN X  16       1.997  24.134 -17.317  1.00 22.04  N  
ATOM 955  CA  ASN X  16       1.843  23.002 -16.415  1.00 23.13  C  
ATOM 956  CB  ASN X  16       2.227  23.401 -14.991  1.00 23.49  C  
ATOM 957  CG  ASN X  16       3.715  23.626 -14.842  1.00 27.25  C  
ATOM 958  OD1 ASN X  16       4.517  22.998 -15.520  1.00 32.04  O  
ATOM 959  ND2 ASN X  16       4.090  24.537 -13.943  1.00 34.01  N  
ATOM 960  C   ASN X  16       0.465  22.372 -16.474  1.00 22.05  C  
ATOM 961  O   ASN X  16       0.341  21.129 -16.480  1.00 22.46  O  
ATOM 962  N   GLN X  17      -0.575  23.184 -16.571  1.00 21.36  N  
ATOM 963  CA  GLN X  17      -1.920  22.641 -16.714  1.00 20.99  C  
ATOM 964  CB  GLN X  17      -2.961  23.726 -16.722  1.00 21.67  C  
ATOM 965  CG  GLN X  17      -3.123  24.444 -15.358  1.00 21.97  C  
ATOM 966  CD  GLN X  17      -4.197  25.483 -15.437  1.00 23.99  C  
ATOM 967  OE1 GLN X  17      -5.326  25.197 -15.837  1.00 25.85  O  
ATOM 968  NE2 GLN X  17      -3.851  26.724 -15.075  1.00 26.51  N  
ATOM 969  C   GLN X  17      -2.072  21.827 -17.990  1.00 21.12  C  
ATOM 970  O   GLN X  17      -2.688  20.762 -17.992  1.00 20.05  O  
ATOM 971  N   ILE X  18      -1.536  22.366 -19.082  1.00 19.71  N  
ATOM 972  CA  ILE X  18      -1.502  21.626 -20.341  1.00 19.71  C  
ATOM 973  CB  ILE X  18      -0.971  22.526 -21.462  1.00 19.58  C  
ATOM 974  CG1 ILE X  18      -2.041  23.556 -21.793  1.00 19.28  C  
ATOM 975  CD1 ILE X  18      -1.500  24.711 -22.683  1.00 20.14  C  
ATOM 976  CG2 ILE X  18      -0.472  21.691 -22.689  1.00 20.43  C  
ATOM 977  C   ILE X  18      -0.703  20.322 -20.249  1.00 19.12  C  
ATOM 978  O   ILE X  18      -1.189  19.267 -20.671  1.00 19.87  O  
ATOM 979  N   LYS X  19       0.512  20.377 -19.732  1.00 19.60  N  
ATOM 980  CA  LYS X  19       1.323  19.162 -19.628  1.00 20.87  C  
ATOM 981  CB  LYS X  19       2.752  19.477 -19.198  1.00 21.81  C  
ATOM 982  CG  LYS X  19       3.685  18.337 -19.426  1.00 23.53  C  
ATOM 983  CD  LYS X  19       5.088  18.716 -19.043  1.00 25.39  C  
ATOM 984  CE  LYS X  19       6.016  17.533 -19.170  1.00 28.23  C  
ATOM 985  NZ  LYS X  19       7.329  17.910 -18.585  1.00 28.51  N  
ATOM 986  C   LYS X  19       0.691  18.121 -18.694  1.00 21.00  C  
ATOM 987  O   LYS X  19       0.832  16.896 -18.914  1.00 21.11  O  
ATOM 988  N   ASN X  20      -0.014  18.600 -17.665  1.00 20.96  N  
ATOM 989  CA  ASN X  20      -0.773  17.702 -16.769  1.00 21.16  C  
ATOM 990  CB  ASN X  20      -1.353  18.483 -15.592  1.00 21.86  C  
ATOM 991  CG  ASN X  20      -0.337  18.784 -14.519  1.00 21.91  C  
ATOM 992  OD1 ASN X  20       0.828  18.382 -14.579  1.00 24.93  O  
ATOM 993  ND2 ASN X  20      -0.780  19.527 -13.522  1.00 27.61  N  
ATOM 994  C   ASN X  20      -1.921  16.964 -17.433  1.00 21.65  C  
ATOM 995  O   ASN X  20      -2.502  16.035 -16.836  1.00 22.58  O  
ATOM 996  N   GLN X  21      -2.269  17.372 -18.654  1.00 20.72  N  
ATOM 997  CA  GLN X  21      -3.316  16.701 -19.412  1.00 20.30  C  
ATOM 998  CB  GLN X  21      -4.265  17.707 -20.077  1.00 21.25  C  
ATOM 999  CG  GLN X  21      -5.138  18.486 -19.079  1.00 20.15  C  
ATOM 1000  CD  GLN X  21      -5.926  17.558 -18.145  1.00 22.69  C  
ATOM 1001  OE1 GLN X  21      -6.531  16.559 -18.580  1.00 21.96  O  
ATOM 1002  NE2 GLN X  21      -5.913  17.882 -16.854  1.00 21.66  N  
ATOM 1003  C   GLN X  21      -2.780  15.667 -20.430  1.00 20.06  C  
ATOM 1004  O   GLN X  21      -3.558  15.092 -21.172  1.00 19.93  O  
ATOM 1005  N   SER X  22      -1.472  15.431 -20.402  1.00 19.79  N  
ATOM 1006  CA  SER X  22      -0.790  14.481 -21.293  1.00 19.60  C  
ATOM 1007  CB  SER X  22       0.721  14.484 -21.076  1.00 19.80  C  
ATOM 1008  OG  SER X  22       1.324  15.770 -21.206  1.00 22.66  O  
ATOM 1009  C   SER X  22      -1.273  13.062 -21.022  1.00 19.56  C  
ATOM 1010  O   SER X  22      -1.354  12.647 -19.861  1.00 18.61  O  
ATOM 1011  N   CYS X  23      -1.599  12.332 -22.088  1.00 19.12  N  
ATOM 1012  CA  CYS X  23      -1.787  10.877 -21.971  1.00 19.27  C  
ATOM 1013  CB  CYS X  23      -2.091  10.268 -23.352  1.00 18.65  C  
ATOM 1014  SG  CYS X  23      -3.640  10.819 -24.006  1.00 19.19  S  
ATOM 1015  C   CYS X  23      -0.538  10.245 -21.371  1.00 19.80  C  
ATOM 1016  O   CYS X  23       0.571  10.565 -21.761  1.00 20.04  O  
ATOM 1017  N  AGLY X  24      -0.727   9.337 -20.409  0.57 20.12  N  
ATOM 1018  N  BGLY X  24      -0.737   9.337 -20.412  0.43 20.16  N  
ATOM 1019  CA AGLY X  24       0.403   8.709 -19.754  0.57 21.01  C  
ATOM 1020  CA BGLY X  24       0.378   8.693 -19.743  0.43 20.96  C  
ATOM 1021  C  AGLY X  24       0.778   9.383 -18.444  0.57 21.44  C  
ATOM 1022  C  BGLY X  24       0.663   9.282 -18.372  0.43 21.35  C  
ATOM 1023  O  AGLY X  24       1.788   9.018 -17.824  0.57 21.52  O  
ATOM 1024  O  BGLY X  24       1.495   8.758 -17.632  0.43 21.39  O  
ATOM 1025  N   THR X  25      -0.012  10.379 -18.040  1.00 21.98  N  
ATOM 1026  CA  THR X  25       0.167  11.035 -16.718  1.00 23.05  C  
ATOM 1027  CB  THR X  25       0.464  12.564 -16.821  1.00 23.35  C  
ATOM 1028  OG1 THR X  25      -0.703  13.236 -17.300  1.00 25.53  O  
ATOM 1029  CG2 THR X  25       1.642  12.823 -17.696  1.00 24.50  C  
ATOM 1030  C   THR X  25      -1.053  10.884 -15.852  1.00 23.42  C  
ATOM 1031  O   THR X  25      -2.174  11.058 -16.326  1.00 24.08  O  
ATOM 1032  N   SER X  26      -0.840  10.601 -14.557  1.00 24.57  N  
ATOM 1033  CA ASER X  26      -1.955  10.365 -13.649  0.50 24.72  C  
ATOM 1034  CA BSER X  26      -1.954  10.366 -13.645  0.50 24.88  C  
ATOM 1035  CB ASER X  26      -1.455   9.786 -12.322  0.50 25.08  C  
ATOM 1036  CB BSER X  26      -1.449   9.814 -12.312  0.50 25.27  C  
ATOM 1037  OG ASER X  26      -0.784   8.557 -12.541  0.50 23.63  O  
ATOM 1038  OG BSER X  26      -0.272  10.488 -11.916  0.50 24.80  O  
ATOM 1039  C   SER X  26      -2.817  11.600 -13.419  1.00 24.62  C  
ATOM 1040  O   SER X  26      -3.986  11.480 -13.073  1.00 25.42  O  
ATOM 1041  N   THR X  27      -2.247  12.790 -13.633  1.00 25.05  N  
ATOM 1042  CA  THR X  27      -3.022  14.044 -13.534  1.00 25.25  C  
ATOM 1043  CB  THR X  27      -2.091  15.274 -13.532  1.00 25.96  C  
ATOM 1044  OG1 THR X  27      -1.121  15.139 -14.582  1.00 24.52  O  
ATOM 1045  CG2 THR X  27      -1.351  15.378 -12.198  1.00 26.69  C  
ATOM 1046  C   THR X  27      -4.083  14.269 -14.624  1.00 25.53  C  
ATOM 1047  O   THR X  27      -5.042  15.036 -14.428  1.00 25.57  O  
ATOM 1048  N   ALA X  28      -3.903  13.627 -15.785  1.00 24.68  N  
ATOM 1049  CA  ALA X  28      -4.765  13.873 -16.927  1.00 24.38  C  
ATOM 1050  CB  ALA X  28      -4.138  13.267 -18.193  1.00 24.08  C  
ATOM 1051  C   ALA X  28      -6.196  13.373 -16.758  1.00 24.75  C  
ATOM 1052  O   ALA X  28      -6.426  12.323 -16.152  1.00 25.70  O  
ATOM 1053  N   SER X  29      -7.145  14.117 -17.308  1.00 25.13  N  
ATOM 1054  CA  SER X  29      -8.533  13.691 -17.393  1.00 26.05  C  
ATOM 1055  CB  SER X  29      -9.485  14.819 -16.987  1.00 27.22  C  
ATOM 1056  OG  SER X  29      -9.339  15.114 -15.607  1.00 28.29  O  
ATOM 1057  C   SER X  29      -8.809  13.264 -18.824  1.00 26.65  C  
ATOM 1058  O   SER X  29      -8.086  13.674 -19.735  1.00 28.08  O  
ATOM 1059  N   SER X  30      -9.851  12.460 -19.029  1.00 26.69  N  
ATOM 1060  CA  SER X  30     -10.225  11.987 -20.363  1.00 26.66  C  
ATOM 1061  CB  SER X  30     -11.053  10.686 -20.287  1.00 26.84  C  
ATOM 1062  OG  SER X  30     -10.292   9.634 -19.719  1.00 28.21  O  
ATOM 1063  C   SER X  30     -11.043  13.043 -21.094  1.00 26.20  C  
ATOM 1064  O   SER X  30     -11.869  13.723 -20.473  1.00 26.72  O  
ATOM 1065  N   PRO X  31     -10.824  13.195 -22.419  1.00 25.65  N  
ATOM 1066  CA  PRO X  31      -9.719  12.578 -23.163  1.00 24.40  C  
ATOM 1067  CB  PRO X  31     -10.099  12.773 -24.626  1.00 24.69  C  
ATOM 1068  CG  PRO X  31     -11.413  13.494 -24.653  1.00 25.56  C  
ATOM 1069  CD  PRO X  31     -11.699  14.006 -23.286  1.00 25.14  C  
ATOM 1070  C   PRO X  31      -8.423  13.313 -22.882  1.00 23.27  C  
ATOM 1071  O   PRO X  31      -8.388  14.567 -22.866  1.00 23.82  O  
ATOM 1072  N   CYS X  32      -7.373  12.553 -22.646  1.00 21.09  N  
ATOM 1073  CA  CYS X  32      -6.051  13.141 -22.408  1.00 19.98  C  
ATOM 1074  CB  CYS X  32      -5.112  12.170 -21.706  1.00 19.73  C  
ATOM 1075  SG  CYS X  32      -5.035  10.520 -22.505  1.00 21.80  S  
ATOM 1076  C   CYS X  32      -5.469  13.621 -23.731  1.00 19.51  C  
ATOM 1077  O   CYS X  32      -5.906  13.187 -24.821  1.00 18.36  O  
ATOM 1078  N   ILE X  33      -4.511  14.540 -23.650  1.00 18.04  N  
ATOM 1079  CA  ILE X  33      -3.890  15.031 -24.879  1.00 17.56  C  
ATOM 1080  CB  ILE X  33      -3.359  16.465 -24.737  1.00 17.47  C  
ATOM 1081  CG1 ILE X  33      -4.487  17.378 -24.238  1.00 19.13  C  
ATOM 1082  CD1 ILE X  33      -4.011  18.787 -23.899  1.00 19.04  C  
ATOM 1083  CG2 ILE X  33      -2.818  16.934 -26.124  1.00 16.89  C  
ATOM 1084  C   ILE X  33      -2.764  14.086 -25.286  1.00 16.62  C  
ATOM 1085  O   ILE X  33      -1.840  13.820 -24.530  1.00 17.40  O  
ATOM 1086  N   THR X  34      -2.838  13.615 -26.526  1.00 16.78  N  
ATOM 1087  CA  THR X  34      -1.959  12.547 -27.030  1.00 16.38  C  
ATOM 1088  CB  THR X  34      -2.680  11.839 -28.190  1.00 16.07  C  
ATOM 1089  OG1 THR X  34      -3.163  12.843 -29.100  1.00 17.72  O  
ATOM 1090  CG2 THR X  34      -3.893  11.041 -27.654  1.00 17.24  C  
ATOM 1091  C   THR X  34      -0.550  13.009 -27.473  1.00 15.98  C  
ATOM 1092  O   THR X  34      -0.064  12.665 -28.567  1.00 15.99  O  
ATOM 1093  N   PHE X  35       0.111  13.792 -26.633  1.00 16.58  N  
ATOM 1094  CA  PHE X  35       1.434  14.307 -26.965  1.00 16.83  C  
ATOM 1095  CB  PHE X  35       1.981  15.153 -25.806  1.00 17.01  C  
ATOM 1096  CG  PHE X  35       1.204  16.406 -25.543  1.00 17.51  C  
ATOM 1097  CD1 PHE X  35       1.017  17.373 -26.550  1.00 18.73  C  
ATOM 1098  CE1 PHE X  35       0.296  18.554 -26.269  1.00 17.48  C  
ATOM 1099  CZ  PHE X  35      -0.204  18.787 -24.996  1.00 18.05  C  
ATOM 1100  CE2 PHE X  35      -0.001  17.841 -23.981  1.00 19.00  C  
ATOM 1101  CD2 PHE X  35       0.681  16.654 -24.263  1.00 17.85  C  
ATOM 1102  C   PHE X  35       2.450  13.219 -27.262  1.00 17.33  C  
ATOM 1103  O   PHE X  35       3.357  13.417 -28.085  1.00 17.40  O  
ATOM 1104  N   ARG X  36       2.300  12.067 -26.591  1.00 16.08  N  
ATOM 1105  CA  ARG X  36       3.244  10.967 -26.761  1.00 16.67  C  
ATOM 1106  CB  ARG X  36       3.094   9.935 -25.637  1.00 16.76  C  
ATOM 1107  CG  ARG X  36       1.700   9.381 -25.552  1.00 17.04  C  
ATOM 1108  CD  ARG X  36       1.571   8.364 -24.388  1.00 16.39  C  
ATOM 1109  NE  ARG X  36       0.227   7.803 -24.366  1.00 18.54  N  
ATOM 1110  CZ  ARG X  36      -0.223   6.962 -23.438  1.00 18.62  C  
ATOM 1111  NH1 ARG X  36       0.588   6.580 -22.462  1.00 21.25  N  
ATOM 1112  NH2 ARG X  36      -1.484   6.528 -23.485  1.00 20.35  N  
ATOM 1113  C   ARG X  36       3.097  10.253 -28.101  1.00 16.71  C  
ATOM 1114  O   ARG X  36       3.912   9.393 -28.411  1.00 17.01  O  
ATOM 1115  N   TYR X  37       2.070  10.604 -28.871  1.00 16.22  N  
ATOM 1116  CA  TYR X  37       1.879  10.031 -30.188  1.00 16.33  C  
ATOM 1117  CB  TYR X  37       0.490   9.405 -30.284  1.00 15.75  C  
ATOM 1118  CG  TYR X  37       0.193   8.736 -31.613  1.00 16.26  C  
ATOM 1119  CD1 TYR X  37       0.976   7.668 -32.080  1.00 16.01  C  
ATOM 1120  CE1 TYR X  37       0.692   7.034 -33.306  1.00 16.04  C  
ATOM 1121  CZ  TYR X  37      -0.424   7.451 -34.033  1.00 15.66  C  
ATOM 1122  OH  TYR X  37      -0.730   6.852 -35.209  1.00 16.80  O  
ATOM 1123  CE2 TYR X  37      -1.224   8.508 -33.593  1.00 15.15  C  
ATOM 1124  CD2 TYR X  37      -0.909   9.139 -32.370  1.00 12.97  C  
ATOM 1125  C   TYR X  37       2.017  11.130 -31.245  1.00 16.17  C  
ATOM 1126  O   TYR X  37       1.014  11.722 -31.630  1.00 16.50  O  
ATOM 1127  N   PRO X  38       3.256  11.380 -31.705  1.00 16.40  N  
ATOM 1128  CA  PRO X  38       3.567  12.448 -32.689  1.00 16.88  C  
ATOM 1129  CB  PRO X  38       5.086  12.569 -32.645  1.00 17.61  C  
ATOM 1130  CG  PRO X  38       5.506  11.234 -32.261  1.00 17.20  C  
ATOM 1131  CD  PRO X  38       4.486  10.717 -31.269  1.00 16.50  C  
ATOM 1132  C   PRO X  38       2.961  12.255 -34.090  1.00 17.13  C  
ATOM 1133  O   PRO X  38       3.112  13.158 -34.918  1.00 15.80  O  
ATOM 1134  N   VAL X  39       2.464  11.067 -34.467  1.00 16.12  N  
ATOM 1135  CA  VAL X  39       2.558  10.585 -35.833  1.00 16.25  C  
ATOM 1136  CB  VAL X  39       2.039   9.138 -35.958  1.00 15.59  C  
ATOM 1137  CG1 VAL X  39       1.579   8.827 -37.386  1.00 17.51  C  
ATOM 1138  CG2 VAL X  39       3.126   8.170 -35.514  1.00 16.91  C  
ATOM 1139  C   VAL X  39       1.483  11.505 -36.509  1.00 15.97  C  
ATOM 1140  O   VAL X  39       1.650  12.028 -37.660  1.00 15.54  O  
ATOM 1141  N   ASP X  40       0.345  11.693 -35.820  1.00 15.71  N  
ATOM 1142  CA  ASP X  40      -0.744  12.586 -36.364  1.00 16.21  C  
ATOM 1143  CB  ASP X  40      -1.694  11.898 -37.334  1.00 15.73  C  
ATOM 1144  CG  ASP X  40      -2.187  12.823 -38.448  1.00 17.57  C  
ATOM 1145  OD1 ASP X  40      -2.725  12.282 -39.410  1.00 16.85  O  
ATOM 1146  OD2 ASP X  40      -2.051  14.075 -38.369  1.00 17.34  O  
ATOM 1147  C   ASP X  40      -1.415  13.316 -35.185  1.00 16.13  C  
ATOM 1148  O   ASP X  40      -1.305  12.870 -34.054  1.00 16.63  O  
ATOM 1149  N   GLY X  41      -2.197  14.356 -35.413  1.00 17.00  N  
ATOM 1150  CA  GLY X  41      -3.461  14.629 -34.760  1.00 16.01  C  
ATOM 1151  C   GLY X  41      -3.003  15.934 -34.023  1.00 15.82  C  
ATOM 1152  O   GLY X  41      -3.607  16.389 -33.023  1.00 14.91  O  
ATOM 1153  N   CYS X  42      -1.961  16.609 -34.547  1.00 15.17  N  
ATOM 1154  CA  CYS X  42      -1.494  17.902 -33.984  1.00 15.71  C  
ATOM 1155  CB  CYS X  42      -0.446  18.568 -34.897  1.00 16.18  C  
ATOM 1156  SG  CYS X  42      -1.003  18.837 -36.611  1.00 17.05  S  
ATOM 1157  C   CYS X  42      -2.622  18.912 -33.816  1.00 15.11  C  
ATOM 1158  O   CYS X  42      -2.647  19.678 -32.837  1.00 14.81  O  
ATOM 1159  N   TYR X  43      -3.542  18.887 -34.778  1.00 15.28  N  
ATOM 1160  CA  TYR X  43      -4.665  19.825 -34.829  1.00 15.81  C  
ATOM 1161  CB  TYR X  43      -5.399  19.647 -36.157  1.00 16.97  C  
ATOM 1162  CG  TYR X  43      -5.825  18.222 -36.460  1.00 18.18  C  
ATOM 1163  CD1 TYR X  43      -4.989  17.342 -37.157  1.00 17.62  C  
ATOM 1164  CE1 TYR X  43      -5.391  16.010 -37.432  1.00 18.43  C  
ATOM 1165  CZ  TYR X  43      -6.641  15.579 -37.014  1.00 18.42  C  
ATOM 1166  OH  TYR X  43      -7.040  14.292 -37.309  1.00 20.03  O  
ATOM 1167  CE2 TYR X  43      -7.486  16.447 -36.328  1.00 19.22  C  
ATOM 1168  CD2 TYR X  43      -7.070  17.754 -36.056  1.00 17.99  C  
ATOM 1169  C   TYR X  43      -5.599  19.641 -33.601  1.00 16.72  C  
ATOM 1170  O   TYR X  43      -6.027  20.622 -32.971  1.00 16.12  O  
ATOM 1171  N   ALA X  44      -5.857  18.380 -33.248  1.00 15.99  N  
ATOM 1172  CA  ALA X  44      -6.635  18.056 -32.038  1.00 16.06  C  
ATOM 1173  CB  ALA X  44      -7.039  16.564 -32.058  1.00 15.43  C  
ATOM 1174  C   ALA X  44      -5.885  18.415 -30.772  1.00 15.97  C  
ATOM 1175  O   ALA X  44      -6.470  18.973 -29.846  1.00 17.19  O  
ATOM 1176  N   ARG X  45      -4.581  18.126 -30.707  1.00 15.26  N  
ATOM 1177  CA  ARG X  45      -3.802  18.477 -29.525  1.00 15.64  C  
ATOM 1178  CB  ARG X  45      -2.365  17.988 -29.619  1.00 15.01  C  
ATOM 1179  CG  ARG X  45      -2.260  16.437 -29.805  1.00 15.05  C  
ATOM 1180  CD  ARG X  45      -0.899  15.913 -29.421  1.00 14.72  C  
ATOM 1181  NE  ARG X  45       0.179  16.500 -30.209  1.00 13.99  N  
ATOM 1182  CZ  ARG X  45       0.540  16.100 -31.428  1.00 15.52  C  
ATOM 1183  NH1 ARG X  45      -0.091  15.093 -32.043  1.00 14.02  N  
ATOM 1184  NH2 ARG X  45       1.562  16.732 -32.028  1.00 14.30  N  
ATOM 1185  C   ARG X  45      -3.801  19.986 -29.304  1.00 15.28  C  
ATOM 1186  O   ARG X  45      -3.951  20.450 -28.174  1.00 15.43  O  
ATOM 1187  N   ALA X  46      -3.623  20.743 -30.385  1.00 15.00  N  
ATOM 1188  CA  ALA X  46      -3.577  22.200 -30.266  1.00 15.47  C  
ATOM 1189  CB  ALA X  46      -3.162  22.849 -31.614  1.00 14.97  C  
ATOM 1190  C   ALA X  46      -4.914  22.773 -29.806  1.00 15.68  C  
ATOM 1191  O   ALA X  46      -4.941  23.721 -29.001  1.00 15.76  O  
ATOM 1192  N   HIS X  47      -6.007  22.219 -30.332  1.00 16.33  N  
ATOM 1193  CA  HIS X  47      -7.336  22.727 -29.986  1.00 17.07  C  
ATOM 1194  CB  HIS X  47      -8.430  22.198 -30.907  1.00 17.39  C  
ATOM 1195  CG  HIS X  47      -9.401  23.248 -31.359  1.00 18.44  C  
ATOM 1196  ND1 HIS X  47      -9.000  24.485 -31.833  1.00 18.43  N  
ATOM 1197  CE1 HIS X  47     -10.064  25.182 -32.180  1.00 21.80  C  
ATOM 1198  NE2 HIS X  47     -11.139  24.447 -31.961  1.00 21.01  N  
ATOM 1199  CD2 HIS X  47     -10.752  23.234 -31.440  1.00 20.49  C  
ATOM 1200  C   HIS X  47      -7.635  22.387 -28.528  1.00 17.72  C  
ATOM 1201  O   HIS X  47      -8.278  23.174 -27.832  1.00 17.51  O  
ATOM 1202  N   LYS X  48      -7.206  21.210 -28.079  1.00 16.37  N  
ATOM 1203  CA  LYS X  48      -7.403  20.874 -26.658  1.00 16.28  C  
ATOM 1204  CB  LYS X  48      -7.123  19.377 -26.434  1.00 16.38  C  
ATOM 1205  CG  LYS X  48      -7.701  18.800 -25.101  1.00 16.38  C  
ATOM 1206  CD  LYS X  48      -9.246  18.740 -25.186  1.00 16.81  C  
ATOM 1207  CE  LYS X  48      -9.834  18.020 -23.963  1.00 18.81  C  
ATOM 1208  NZ  LYS X  48     -11.318  18.043 -24.070  1.00 19.45  N  
ATOM 1209  C   LYS X  48      -6.533  21.743 -25.733  1.00 16.64  C  
ATOM 1210  O   LYS X  48      -6.984  22.135 -24.636  1.00 16.69  O  
ATOM 1211  N   MET X  49      -5.302  22.055 -26.143  1.00 16.28  N  
ATOM 1212  CA  MET X  49      -4.453  23.000 -25.376  1.00 16.31  C  
ATOM 1213  CB  MET X  49      -3.067  23.202 -26.012  1.00 16.23  C  
ATOM 1214  CG  MET X  49      -2.187  21.948 -25.964  1.00 17.24  C  
ATOM 1215  SD  MET X  49      -0.490  22.322 -26.360  1.00 17.04  S  
ATOM 1216  CE  MET X  49      -0.511  22.380 -28.167  1.00 18.03  C  
ATOM 1217  C   MET X  49      -5.167  24.356 -25.263  1.00 17.02  C  
ATOM 1218  O   MET X  49      -5.179  24.985 -24.193  1.00 16.91  O  
ATOM 1219  N   ARG X  50      -5.773  24.787 -26.361  1.00 17.47  N  
ATOM 1220  CA  ARG X  50      -6.467  26.084 -26.372  1.00 18.24  C  
ATOM 1221  CB  ARG X  50      -7.037  26.381 -27.741  1.00 18.03  C  
ATOM 1222  CG  ARG X  50      -7.862  27.659 -27.717  1.00 18.49  C  
ATOM 1223  CD  ARG X  50      -8.243  28.043 -29.116  1.00 19.00  C  
ATOM 1224  NE  ARG X  50      -9.116  29.206 -29.137  1.00 17.75  N  
ATOM 1225  CZ  ARG X  50     -10.423  29.167 -29.365  1.00 20.14  C  
ATOM 1226  NH1 ARG X  50     -11.023  28.018 -29.586  1.00 18.68  N  
ATOM 1227  NH2 ARG X  50     -11.133  30.298 -29.359  1.00 20.46  N  
ATOM 1228  C   ARG X  50      -7.626  26.042 -25.386  1.00 19.18  C  
ATOM 1229  O   ARG X  50      -7.865  27.010 -24.648  1.00 19.70  O  
ATOM 1230  N   GLN X  51      -8.339  24.917 -25.356  1.00 19.39  N  
ATOM 1231  CA  GLN X  51      -9.462  24.787 -24.408  1.00 20.51  C  
ATOM 1232  CB  GLN X  51     -10.187  23.453 -24.591  1.00 19.64  C  
ATOM 1233  CG  GLN X  51     -11.428  23.324 -23.685  1.00 22.57  C  
ATOM 1234  CD  GLN X  51     -12.055  21.965 -23.760  1.00 23.54  C  
ATOM 1235  OE1 GLN X  51     -11.374  20.950 -23.625  1.00 22.95  O  
ATOM 1236  NE2 GLN X  51     -13.372  21.931 -23.943  1.00 25.85  N  
ATOM 1237  C   GLN X  51      -9.027  24.968 -22.953  1.00 20.23  C  
ATOM 1238  O   GLN X  51      -9.753  25.606 -22.160  1.00 22.75  O  
ATOM 1239  N   ILE X  52      -7.869  24.426 -22.589  1.00 20.40  N  
ATOM 1240  CA  ILE X  52      -7.304  24.626 -21.251  1.00 20.81  C  
ATOM 1241  CB  ILE X  52      -6.018  23.826 -21.025  1.00 21.50  C  
ATOM 1242  CG1 ILE X  52      -6.318  22.318 -21.191  1.00 22.03  C  
ATOM 1243  CD1 ILE X  52      -5.106  21.459 -21.110  1.00 25.90  C  
ATOM 1244  CG2 ILE X  52      -5.384  24.196 -19.657  1.00 20.43  C  
ATOM 1245  C   ILE X  52      -7.070  26.124 -21.000  1.00 21.51  C  
ATOM 1246  O   ILE X  52      -7.460  26.641 -19.959  1.00 21.54  O  
ATOM 1247  N   LEU X  53      -6.459  26.830 -21.954  1.00 20.38  N  
ATOM 1248  CA  LEU X  53      -6.325  28.285 -21.798  1.00 20.55  C  
ATOM 1249  CB  LEU X  53      -5.629  28.918 -23.015  1.00 20.08  C  
ATOM 1250  CG  LEU X  53      -4.155  29.235 -22.805  1.00 20.87  C  
ATOM 1251  CD1 LEU X  53      -3.333  27.955 -22.569  1.00 22.18  C  
ATOM 1252  CD2 LEU X  53      -3.639  30.044 -24.010  1.00 22.18  C  
ATOM 1253  C   LEU X  53      -7.692  28.940 -21.614  1.00 21.51  C  
ATOM 1254  O   LEU X  53      -7.858  29.810 -20.741  1.00 21.61  O  
ATOM 1255  N   MET X  54      -8.667  28.519 -22.408  1.00 22.23  N  
ATOM 1256  CA  MET X  54     -10.009  29.112 -22.328  1.00 23.62  C  
ATOM 1257  CB  MET X  54     -10.897  28.626 -23.454  1.00 23.52  C  
ATOM 1258  CG  MET X  54     -10.454  29.170 -24.816  1.00 24.11  C  
ATOM 1259  SD  MET X  54     -11.521  28.652 -26.133  1.00 26.86  S  
ATOM 1260  CE  MET X  54     -13.127  29.338 -25.734  1.00 31.24  C  
ATOM 1261  C   MET X  54     -10.691  28.854 -20.990  1.00 24.52  C  
ATOM 1262  O   MET X  54     -11.439  29.719 -20.507  1.00 24.59  O  
ATOM 1263  N   ASN X  55     -10.391  27.697 -20.398  1.00 24.35  N  
ATOM 1264  CA  ASN X  55     -10.884  27.344 -19.056  1.00 25.79  C  
ATOM 1265  CB  ASN X  55     -10.500  25.904 -18.688  1.00 25.85  C  
ATOM 1266  CG  ASN X  55     -11.265  24.835 -19.490  1.00 26.61  C  
ATOM 1267  OD1 ASN X  55     -10.878  23.662 -19.477  1.00 29.01  O  
ATOM 1268  ND2 ASN X  55     -12.343  25.216 -20.147  1.00 28.24  N  
ATOM 1269  C   ASN X  55     -10.341  28.297 -18.001  1.00 26.00  C  
ATOM 1270  O   ASN X  55     -10.936  28.433 -16.920  1.00 26.90  O  
ATOM 1271  N   ASN X  56      -9.212  28.935 -18.311  1.00 25.36  N  
ATOM 1272  CA  ASN X  56      -8.540  29.897 -17.442  1.00 25.43  C  
ATOM 1273  CB  ASN X  56      -7.024  29.707 -17.492  1.00 25.45  C  
ATOM 1274  CG  ASN X  56      -6.550  28.507 -16.712  1.00 27.26  C  
ATOM 1275  OD1 ASN X  56      -5.968  28.643 -15.626  1.00 27.92  O  
ATOM 1276  ND2 ASN X  56      -6.760  27.310 -17.276  1.00 27.03  N  
ATOM 1277  C   ASN X  56      -8.848  31.348 -17.816  1.00 25.35  C  
ATOM 1278  O   ASN X  56      -8.306  32.275 -17.199  1.00 26.98  O  
ATOM 1279  N   GLY X  57      -9.682  31.547 -18.825  1.00 24.61  N  
ATOM 1280  CA  GLY X  57     -10.090  32.891 -19.233  1.00 24.45  C  
ATOM 1281  C   GLY X  57      -9.190  33.523 -20.286  1.00 24.47  C  
ATOM 1282  O   GLY X  57      -9.179  34.758 -20.457  1.00 24.19  O  
ATOM 1283  N   TYR X  58      -8.454  32.682 -21.020  1.00 23.62  N  
ATOM 1284  CA  TYR X  58      -7.529  33.175 -22.054  1.00 23.10  C  
ATOM 1285  CB  TYR X  58      -6.071  32.866 -21.690  1.00 23.30  C  
ATOM 1286  CG  TYR X  58      -5.658  33.482 -20.395  1.00 23.77  C  
ATOM 1287  CD1 TYR X  58      -5.419  32.701 -19.265  1.00 22.90  C  
ATOM 1288  CE1 TYR X  58      -5.046  33.290 -18.046  1.00 25.04  C  
ATOM 1289  CZ  TYR X  58      -4.945  34.665 -17.970  1.00 25.01  C  
ATOM 1290  OH  TYR X  58      -4.593  35.276 -16.783  1.00 25.65  O  
ATOM 1291  CE2 TYR X  58      -5.184  35.456 -19.088  1.00 24.84  C  
ATOM 1292  CD2 TYR X  58      -5.539  34.867 -20.282  1.00 25.03  C  
ATOM 1293  C   TYR X  58      -7.811  32.605 -23.425  1.00 22.63  C  
ATOM 1294  O   TYR X  58      -8.315  31.487 -23.554  1.00 22.45  O  
ATOM 1295  N   ASP X  59      -7.488  33.387 -24.452  1.00 21.75  N  
ATOM 1296  CA  ASP X  59      -7.402  32.843 -25.804  1.00 21.03  C  
ATOM 1297  CB  ASP X  59      -8.348  33.573 -26.774  1.00 22.15  C  
ATOM 1298  CG  ASP X  59      -8.896  32.657 -27.884  1.00 22.92  C  
ATOM 1299  OD1 ASP X  59      -8.253  31.629 -28.231  1.00 20.18  O  
ATOM 1300  OD2 ASP X  59      -9.978  32.969 -28.439  1.00 22.36  O  
ATOM 1301  C   ASP X  59      -5.939  32.892 -26.260  1.00 20.88  C  
ATOM 1302  O   ASP X  59      -5.059  33.281 -25.505  1.00 19.95  O  
ATOM 1303  N   CYS X  60      -5.695  32.421 -27.477  1.00 20.02  N  
ATOM 1304  CA  CYS X  60      -4.356  32.382 -28.019  1.00 18.73  C  
ATOM 1305  CB  CYS X  60      -3.596  31.128 -27.531  1.00 19.29  C  
ATOM 1306  SG  CYS X  60      -4.413  29.580 -27.984  1.00 20.53  S  
ATOM 1307  C   CYS X  60      -4.486  32.348 -29.530  1.00 17.87  C  
ATOM 1308  O   CYS X  60      -5.593  32.372 -30.080  1.00 17.72  O  
ATOM 1309  N   GLU X  61      -3.346  32.341 -30.191  1.00 16.00  N  
ATOM 1310  CA  GLU X  61      -3.280  32.114 -31.620  1.00 15.16  C  
ATOM 1311  CB  GLU X  61      -2.239  33.045 -32.243  1.00 15.68  C  
ATOM 1312  CG  GLU X  61      -2.728  34.504 -32.373  1.00 17.69  C  
ATOM 1313  CD  GLU X  61      -1.606  35.405 -32.803  1.00 19.92  C  
ATOM 1314  OE1 GLU X  61      -0.694  35.628 -31.985  1.00 22.67  O  
ATOM 1315  OE2 GLU X  61      -1.635  35.882 -33.971  1.00 22.78  O  
ATOM 1316  C   GLU X  61      -2.887  30.656 -31.899  1.00 14.78  C  
ATOM 1317  O   GLU X  61      -2.483  29.939 -30.980  1.00 15.30  O  
ATOM 1318  N   LYS X  62      -3.039  30.240 -33.154  1.00 15.34  N  
ATOM 1319  CA  LYS X  62      -2.380  29.008 -33.650  1.00 15.66  C  
ATOM 1320  CB  LYS X  62      -3.336  28.180 -34.492  1.00 15.90  C  
ATOM 1321  CG  LYS X  62      -4.595  27.669 -33.750  1.00 16.08  C  
ATOM 1322  CD  LYS X  62      -4.244  26.606 -32.713  1.00 18.47  C  
ATOM 1323  CE  LYS X  62      -5.529  26.136 -31.974  1.00 15.81  C  
ATOM 1324  NZ  LYS X  62      -6.623  25.629 -32.882  1.00 15.28  N  
ATOM 1325  C   LYS X  62      -1.257  29.485 -34.562  1.00 15.57  C  
ATOM 1326  O   LYS X  62      -1.395  30.518 -35.242  1.00 15.57  O  
ATOM 1327  N   GLN X  63      -0.155  28.741 -34.573  1.00 14.46  N  
ATOM 1328  CA  GLN X  63       0.809  28.884 -35.671  1.00 14.09  C  
ATOM 1329  CB  GLN X  63       2.220  29.222 -35.162  1.00 14.01  C  
ATOM 1330  CG  GLN X  63       3.178  29.406 -36.366  1.00 14.62  C  
ATOM 1331  CD  GLN X  63       4.496  29.999 -35.981  1.00 16.22  C  
ATOM 1332  OE1 GLN X  63       5.536  29.345 -36.067  1.00 17.74  O  
ATOM 1333  NE2 GLN X  63       4.466  31.241 -35.516  1.00 15.91  N  
ATOM 1334  C   GLN X  63       0.805  27.574 -36.444  1.00 14.10  C  
ATOM 1335  O   GLN X  63       0.977  26.507 -35.822  1.00 13.78  O  
ATOM 1336  N   PHE X  64       0.549  27.652 -37.746  1.00 13.74  N  
ATOM 1337  CA  PHE X  64       0.638  26.492 -38.670  1.00 13.64  C  
ATOM 1338  CB  PHE X  64      -0.525  26.491 -39.653  1.00 13.69  C  
ATOM 1339  CG  PHE X  64      -1.856  26.225 -39.011  1.00 14.24  C  
ATOM 1340  CD1 PHE X  64      -2.371  24.919 -38.950  1.00 14.22  C  
ATOM 1341  CE1 PHE X  64      -3.630  24.652 -38.337  1.00 12.26  C  
ATOM 1342  CZ  PHE X  64      -4.372  25.719 -37.811  1.00 12.18  C  
ATOM 1343  CE2 PHE X  64      -3.849  27.026 -37.865  1.00 14.82  C  
ATOM 1344  CD2 PHE X  64      -2.601  27.274 -38.468  1.00 14.15  C  
ATOM 1345  C   PHE X  64       1.933  26.635 -39.439  1.00 14.39  C  
ATOM 1346  O   PHE X  64       2.171  27.680 -40.058  1.00 14.50  O  
ATOM 1347  N   VAL X  65       2.769  25.588 -39.415  1.00 13.41  N  
ATOM 1348  CA  VAL X  65       4.007  25.596 -40.198  1.00 13.54  C  
ATOM 1349  CB  VAL X  65       5.278  25.408 -39.319  1.00 13.61  C  
ATOM 1350  CG1 VAL X  65       5.224  24.116 -38.427  1.00 13.43  C  
ATOM 1351  CG2 VAL X  65       6.539  25.477 -40.194  1.00 13.72  C  
ATOM 1352  C   VAL X  65       3.864  24.487 -41.241  1.00 13.42  C  
ATOM 1353  O   VAL X  65       3.333  23.427 -40.932  1.00 12.31  O  
ATOM 1354  N   TYR X  66       4.301  24.741 -42.467  1.00 12.66  N  
ATOM 1355  CA  TYR X  66       4.072  23.798 -43.557  1.00 13.47  C  
ATOM 1356  CB  TYR X  66       3.137  24.366 -44.622  1.00 13.30  C  
ATOM 1357  CG  TYR X  66       1.796  24.855 -44.103  1.00 12.81  C  
ATOM 1358  CD1 TYR X  66       0.644  24.069 -44.241  1.00 13.99  C  
ATOM 1359  CE1 TYR X  66      -0.607  24.514 -43.762  1.00 13.90  C  
ATOM 1360  CZ  TYR X  66      -0.671  25.770 -43.167  1.00 14.22  C  
ATOM 1361  OH  TYR X  66      -1.854  26.296 -42.676  1.00 13.31  O  
ATOM 1362  CE2 TYR X  66       0.452  26.555 -42.994  1.00 11.76  C  
ATOM 1363  CD2 TYR X  66       1.703  26.106 -43.491  1.00 12.83  C  
ATOM 1364  C   TYR X  66       5.377  23.534 -44.275  1.00 13.71  C  
ATOM 1365  O   TYR X  66       6.204  24.426 -44.414  1.00 14.47  O  
ATOM 1366  N   GLY X  67       5.527  22.319 -44.774  1.00 14.84  N  
ATOM 1367  CA  GLY X  67       6.699  22.024 -45.591  1.00 15.18  C  
ATOM 1368  C   GLY X  67       7.000  20.541 -45.634  1.00 14.59  C  
ATOM 1369  O   GLY X  67       6.123  19.696 -45.444  1.00 15.46  O  
ATOM 1370  N   ASN X  68       8.262  20.237 -45.918  1.00 15.41  N  
ATOM 1371  CA  ASN X  68       8.738  18.867 -45.856  1.00 15.00  C  
ATOM 1372  CB  ASN X  68       9.881  18.710 -46.857  1.00 15.24  C  
ATOM 1373  CG  ASN X  68      10.441  17.297 -46.874  1.00 17.42  C  
ATOM 1374  OD1 ASN X  68       9.731  16.333 -46.593  1.00 17.91  O  
ATOM 1375  ND2 ASN X  68      11.739  17.173 -47.207  1.00 21.74  N  
ATOM 1376  C   ASN X  68       9.232  18.708 -44.414  1.00 14.73  C  
ATOM 1377  O   ASN X  68      10.408  18.903 -44.138  1.00 14.38  O  
ATOM 1378  N   LEU X  69       8.331  18.403 -43.481  1.00 13.30  N  
ATOM 1379  CA  LEU X  69       8.705  18.479 -42.071  1.00 13.43  C  
ATOM 1380  CB  LEU X  69       7.576  19.056 -41.216  1.00 14.19  C  
ATOM 1381  CG  LEU X  69       6.922  20.327 -41.777  1.00 12.92  C  
ATOM 1382  CD1 LEU X  69       5.875  20.776 -40.744  1.00 15.38  C  
ATOM 1383  CD2 LEU X  69       7.950  21.438 -41.948  1.00 14.58  C  
ATOM 1384  C   LEU X  69       9.095  17.105 -41.511  1.00 13.87  C  
ATOM 1385  O   LEU X  69       8.525  16.070 -41.907  1.00 14.97  O  
ATOM 1386  N   LYS X  70      10.058  17.108 -40.593  1.00 15.12  N  
ATOM 1387  CA  LYS X  70      10.454  15.880 -39.860  1.00 15.83  C  
ATOM 1388  CB  LYS X  70      11.626  15.158 -40.542  1.00 17.13  C  
ATOM 1389  CG  LYS X  70      11.237  14.585 -41.901  1.00 18.62  C  
ATOM 1390  CD  LYS X  70      12.300  13.667 -42.446  1.00 21.04  C  
ATOM 1391  CE  LYS X  70      11.814  13.028 -43.725  1.00 18.64  C  
ATOM 1392  NZ  LYS X  70      11.670  13.975 -44.877  1.00 18.60  N  
ATOM 1393  C   LYS X  70      10.800  16.265 -38.440  1.00 15.62  C  
ATOM 1394  O   LYS X  70      11.433  17.307 -38.208  1.00 15.95  O  
ATOM 1395  N   ALA X  71      10.335  15.461 -37.494  1.00 16.81  N  
ATOM 1396  CA  ALA X  71      10.606  15.706 -36.075  1.00 17.29  C  
ATOM 1397  CB  ALA X  71       9.416  16.337 -35.412  1.00 16.66  C  
ATOM 1398  C   ALA X  71      10.961  14.405 -35.377  1.00 18.43  C  
ATOM 1399  O   ALA X  71      10.543  13.333 -35.797  1.00 18.33  O  
ATOM 1400  N   SER X  72      11.732  14.531 -34.309  1.00 19.57  N  
ATOM 1401  CA  SER X  72      12.181  13.353 -33.541  1.00 21.76  C  
ATOM 1402  CB  SER X  72      13.701  13.274 -33.568  1.00 22.22  C  
ATOM 1403  OG  SER X  72      14.143  12.255 -32.664  1.00 24.53  O  
ATOM 1404  C   SER X  72      11.705  13.457 -32.113  1.00 22.89  C  
ATOM 1405  O   SER X  72      11.773  14.542 -31.527  1.00 22.89  O  
ATOM 1406  N   THR X  73      11.228  12.338 -31.552  1.00 23.55  N  
ATOM 1407  CA  THR X  73      10.892  12.258 -30.125  1.00 24.97  C  
ATOM 1408  CB  THR X  73       9.965  11.066 -29.817  1.00 25.17  C  
ATOM 1409  OG1 THR X  73      10.667   9.845 -30.092  1.00 25.85  O  
ATOM 1410  CG2 THR X  73       8.648  11.138 -30.624  1.00 25.89  C  
ATOM 1411  C   THR X  73      12.119  12.053 -29.243  1.00 26.11  C  
ATOM 1412  O   THR X  73      11.993  11.977 -28.009  1.00 26.35  O  
ATOM 1413  N   GLY X  74      13.288  11.931 -29.868  1.00 26.21  N  
ATOM 1414  CA  GLY X  74      14.502  11.448 -29.180  1.00 27.69  C  
ATOM 1415  C   GLY X  74      14.780   9.975 -29.484  1.00 27.75  C  
ATOM 1416  O   GLY X  74      15.922   9.528 -29.425  1.00 29.34  O  
ATOM 1417  N   THR X  75      13.743   9.211 -29.825  1.00 27.09  N  
ATOM 1418  CA  THR X  75      13.914   7.797 -30.119  1.00 27.33  C  
ATOM 1419  CB  THR X  75      13.317   6.897 -28.997  1.00 27.78  C  
ATOM 1420  OG1 THR X  75      11.926   7.195 -28.820  1.00 29.69  O  
ATOM 1421  CG2 THR X  75      14.056   7.123 -27.667  1.00 27.68  C  
ATOM 1422  C   THR X  75      13.362   7.349 -31.475  1.00 26.68  C  
ATOM 1423  O   THR X  75      13.688   6.262 -31.953  1.00 26.86  O  
ATOM 1424  N   CYS X  76      12.504   8.165 -32.085  1.00 24.38  N  
ATOM 1425  CA  CYS X  76      11.963   7.822 -33.393  1.00 22.91  C  
ATOM 1426  CB  CYS X  76      10.798   6.825 -33.273  1.00 22.50  C  
ATOM 1427  SG  CYS X  76       9.399   7.359 -32.320  1.00 23.58  S  
ATOM 1428  C   CYS X  76      11.550   9.113 -34.115  1.00 21.67  C  
ATOM 1429  O   CYS X  76      11.329  10.142 -33.464  1.00 21.35  O  
ATOM 1430  N   CYS X  77      11.493   9.037 -35.440  1.00 21.32  N  
ATOM 1431  CA  CYS X  77      11.156  10.191 -36.282  1.00 21.34  C  
ATOM 1432  CB  CYS X  77      12.140  10.328 -37.435  1.00 22.02  C  
ATOM 1433  SG  CYS X  77      13.798  10.804 -36.934  1.00 28.71  S  
ATOM 1434  C   CYS X  77       9.758  10.045 -36.852  1.00 20.32  C  
ATOM 1435  O   CYS X  77       9.281   8.929 -37.106  1.00 20.24  O  
ATOM 1436  N   VAL X  78       9.103  11.196 -37.058  1.00 18.30  N  
ATOM 1437  CA  VAL X  78       7.894  11.248 -37.850  1.00 18.16  C  
ATOM 1438  CB  VAL X  78       6.653  11.600 -36.981  1.00 17.82  C  
ATOM 1439  CG1 VAL X  78       6.419  10.521 -35.918  1.00 18.61  C  
ATOM 1440  CG2 VAL X  78       6.851  12.937 -36.255  1.00 18.16  C  
ATOM 1441  C   VAL X  78       8.075  12.278 -38.984  1.00 16.32  C  
ATOM 1442  O   VAL X  78       8.883  13.201 -38.875  1.00 16.36  O  
ATOM 1443  N   ALA X  79       7.313  12.095 -40.064  1.00 16.33  N  
ATOM 1444  CA  ALA X  79       7.283  13.049 -41.183  1.00 14.60  C  
ATOM 1445  CB  ALA X  79       7.557  12.363 -42.512  1.00 15.52  C  
ATOM 1446  C   ALA X  79       5.915  13.698 -41.233  1.00 13.80  C  
ATOM 1447  O   ALA X  79       4.883  13.031 -41.093  1.00 13.90  O  
ATOM 1448  N   TRP X  80       5.922  15.002 -41.459  1.00 13.65  N  
ATOM 1449  CA  TRP X  80       4.662  15.738 -41.531  1.00 12.96  C  
ATOM 1450  CB  TRP X  80       4.523  16.629 -40.300  1.00 13.88  C  
ATOM 1451  CG  TRP X  80       4.408  15.978 -38.956  1.00 13.65  C  
ATOM 1452  CD1 TRP X  80       3.708  14.815 -38.617  1.00 13.60  C  
ATOM 1453  NE1 TRP X  80       3.803  14.613 -37.228  1.00 14.32  N  
ATOM 1454  CE2 TRP X  80       4.558  15.634 -36.683  1.00 14.83  C  
ATOM 1455  CD2 TRP X  80       4.935  16.513 -37.749  1.00 14.21  C  
ATOM 1456  CE3 TRP X  80       5.715  17.656 -37.456  1.00 13.05  C  
ATOM 1457  CZ3 TRP X  80       6.081  17.906 -36.120  1.00 14.20  C  
ATOM 1458  CH2 TRP X  80       5.693  17.010 -35.081  1.00 14.15  C  
ATOM 1459  CZ2 TRP X  80       4.916  15.890 -35.339  1.00 14.46  C  
ATOM 1460  C   TRP X  80       4.662  16.707 -42.704  1.00 13.58  C  
ATOM 1461  O   TRP X  80       5.702  17.284 -43.053  1.00 12.55  O  
ATOM 1462  N   SER X  81       3.478  16.967 -43.237  1.00 12.82  N  
ATOM 1463  CA  SER X  81       3.295  18.037 -44.217  1.00 13.11  C  
ATOM 1464  CB  SER X  81       2.140  17.698 -45.159  1.00 12.74  C  
ATOM 1465  OG  SER X  81       0.920  17.728 -44.447  1.00 14.52  O  
ATOM 1466  C   SER X  81       3.029  19.412 -43.572  1.00 12.65  C  
ATOM 1467  O   SER X  81       3.228  20.441 -44.220  1.00 13.54  O  
ATOM 1468  N   TYR X  82       2.572  19.414 -42.324  1.00 12.93  N  
ATOM 1469  CA  TYR X  82       2.406  20.639 -41.564  1.00 12.19  C  
ATOM 1470  CB  TYR X  82       1.098  21.348 -41.968  1.00 13.15  C  
ATOM 1471  CG  TYR X  82      -0.132  20.896 -41.200  1.00 12.72  C  
ATOM 1472  CD1 TYR X  82      -0.848  19.753 -41.603  1.00 13.66  C  
ATOM 1473  CE1 TYR X  82      -1.988  19.341 -40.907  1.00 14.29  C  
ATOM 1474  CZ  TYR X  82      -2.421  20.085 -39.814  1.00 14.19  C  
ATOM 1475  OH  TYR X  82      -3.562  19.684 -39.151  1.00 13.95  O  
ATOM 1476  CE2 TYR X  82      -1.762  21.244 -39.418  1.00 15.64  C  
ATOM 1477  CD2 TYR X  82      -0.617  21.646 -40.102  1.00 14.13  C  
ATOM 1478  C   TYR X  82       2.372  20.263 -40.107  1.00 12.48  C  
ATOM 1479  O   TYR X  82       2.185  19.078 -39.755  1.00 12.38  O  
ATOM 1480  N   HIS X  83       2.579  21.250 -39.254  1.00 11.71  N  
ATOM 1481  CA  HIS X  83       2.372  21.045 -37.840  1.00 12.16  C  
ATOM 1482  CB  HIS X  83       3.725  20.798 -37.174  1.00 12.15  C  
ATOM 1483  CG  HIS X  83       3.635  20.369 -35.738  1.00 13.16  C  
ATOM 1484  ND1 HIS X  83       2.790  19.368 -35.316  1.00 14.77  N  
ATOM 1485  CE1 HIS X  83       2.919  19.217 -34.003  1.00 15.52  C  
ATOM 1486  NE2 HIS X  83       3.851  20.056 -33.575  1.00 13.88  N  
ATOM 1487  CD2 HIS X  83       4.303  20.798 -34.637  1.00 14.23  C  
ATOM 1488  C   HIS X  83       1.658  22.291 -37.295  1.00 13.58  C  
ATOM 1489  O   HIS X  83       1.730  23.360 -37.897  1.00 14.11  O  
ATOM 1490  N   VAL X  84       1.000  22.159 -36.152  1.00 13.09  N  
ATOM 1491  CA  VAL X  84       0.354  23.314 -35.513  1.00 12.85  C  
ATOM 1492  CB  VAL X  84      -1.153  23.438 -35.911  1.00 12.93  C  
ATOM 1493  CG1 VAL X  84      -1.954  22.212 -35.491  1.00 14.19  C  
ATOM 1494  CG2 VAL X  84      -1.796  24.759 -35.345  1.00 12.79  C  
ATOM 1495  C   VAL X  84       0.540  23.187 -34.008  1.00 12.68  C  
ATOM 1496  O   VAL X  84       0.611  22.069 -33.466  1.00 12.80  O  
ATOM 1497  N   ALA X  85       0.618  24.331 -33.336  1.00 12.86  N  
ATOM 1498  CA  ALA X  85       0.570  24.377 -31.866  1.00 12.81  C  
ATOM 1499  CB  ALA X  85       1.964  24.236 -31.272  1.00 13.52  C  
ATOM 1500  C   ALA X  85      -0.008  25.746 -31.490  1.00 13.36  C  
ATOM 1501  O   ALA X  85      -0.267  26.594 -32.358  1.00 13.70  O  
ATOM 1502  N   ILE X  86      -0.250  25.922 -30.200  1.00 13.92  N  
ATOM 1503  CA  ILE X  86      -0.788  27.209 -29.731  1.00 14.48  C  
ATOM 1504  CB  ILE X  86      -1.627  27.061 -28.438  1.00 14.19  C  
ATOM 1505  CG1 ILE X  86      -0.813  26.505 -27.264  1.00 15.53  C  
ATOM 1506  CD1 ILE X  86      -1.597  26.707 -25.898  1.00 15.36  C  
ATOM 1507  CG2 ILE X  86      -2.886  26.217 -28.722  1.00 15.95  C  
ATOM 1508  C   ILE X  86       0.338  28.201 -29.576  1.00 14.70  C  
ATOM 1509  O   ILE X  86       1.436  27.863 -29.095  1.00 14.57  O  
ATOM 1510  N   LEU X  87       0.057  29.437 -30.003  1.00 14.77  N  
ATOM 1511  CA  LEU X  87       1.012  30.536 -29.916  1.00 15.02  C  
ATOM 1512  CB  LEU X  87       1.183  31.219 -31.270  1.00 14.40  C  
ATOM 1513  CG  LEU X  87       2.174  32.391 -31.340  1.00 14.91  C  
ATOM 1514  CD1 LEU X  87       3.597  31.903 -31.098  1.00 15.97  C  
ATOM 1515  CD2 LEU X  87       2.094  33.013 -32.772  1.00 15.74  C  
ATOM 1516  C   LEU X  87       0.431  31.525 -28.911  1.00 15.52  C  
ATOM 1517  O   LEU X  87      -0.578  32.177 -29.188  1.00 16.07  O  
ATOM 1518  N   VAL X  88       1.052  31.591 -27.745  1.00 16.09  N  
ATOM 1519  CA AVAL X  88       0.487  32.299 -26.592  0.56 16.43  C  
ATOM 1520  CA BVAL X  88       0.463  32.326 -26.631  0.44 16.97  C  
ATOM 1521  CB AVAL X  88       0.633  31.463 -25.282  0.56 16.47  C  
ATOM 1522  CB BVAL X  88       0.440  31.487 -25.329  0.44 17.18  C  
ATOM 1523  CG1AVAL X  88      -0.115  32.112 -24.138  0.56 13.61  C  
ATOM 1524  CG1BVAL X  88      -0.449  30.231 -25.503  0.44 16.50  C  
ATOM 1525  CG2AVAL X  88       0.116  30.009 -25.471  0.56 16.77  C  
ATOM 1526  CG2BVAL X  88       1.843  31.090 -24.923  0.44 18.06  C  
ATOM 1527  C   VAL X  88       1.175  33.650 -26.403  1.00 17.24  C  
ATOM 1528  O   VAL X  88       2.403  33.713 -26.371  1.00 17.59  O  
ATOM 1529  N   SER X  89       0.381  34.712 -26.245  1.00 18.38  N  
ATOM 1530  CA  SER X  89       0.925  36.046 -26.001  1.00 19.53  C  
ATOM 1531  CB  SER X  89       0.079  37.118 -26.701  1.00 18.99  C  
ATOM 1532  OG  SER X  89       0.131  37.005 -28.117  1.00 20.62  O  
ATOM 1533  C   SER X  89       0.904  36.283 -24.502  1.00 20.81  C  
ATOM 1534  O   SER X  89      -0.102  35.972 -23.846  1.00 20.70  O  
ATOM 1535  N   TYR X  90       2.003  36.806 -23.956  1.00 21.04  N  
ATOM 1536  CA  TYR X  90       2.072  37.126 -22.525  1.00 22.97  C  
ATOM 1537  CB  TYR X  90       2.691  35.978 -21.694  1.00 23.08  C  
ATOM 1538  CG  TYR X  90       4.153  35.787 -21.984  1.00 23.59  C  
ATOM 1539  CD1 TYR X  90       4.558  35.183 -23.175  1.00 22.56  C  
ATOM 1540  CE1 TYR X  90       5.899  35.041 -23.486  1.00 24.44  C  
ATOM 1541  CZ  TYR X  90       6.850  35.462 -22.603  1.00 24.72  C  
ATOM 1542  OH  TYR X  90       8.161  35.304 -22.947  1.00 29.30  O  
ATOM 1543  CE2 TYR X  90       6.499  36.091 -21.404  1.00 22.80  C  
ATOM 1544  CD2 TYR X  90       5.141  36.236 -21.098  1.00 22.84  C  
ATOM 1545  C   TYR X  90       2.898  38.404 -22.324  1.00 24.10  C  
ATOM 1546  O   TYR X  90       3.756  38.750 -23.156  1.00 23.12  O  
ATOM 1547  N   LYS X  91       2.651  39.091 -21.215  1.00 25.22  N  
ATOM 1548  CA ALYS X  91       3.466  40.257 -20.887  0.50 26.14  C  
ATOM 1549  CA BLYS X  91       3.454  40.264 -20.856  0.50 25.87  C  
ATOM 1550  CB ALYS X  91       2.634  41.313 -20.146  0.50 26.08  C  
ATOM 1551  CB BLYS X  91       2.633  41.246 -20.004  0.50 25.56  C  
ATOM 1552  CG ALYS X  91       1.666  42.036 -21.069  0.50 28.25  C  
ATOM 1553  CG BLYS X  91       1.484  41.917 -20.740  0.50 26.48  C  
ATOM 1554  CD ALYS X  91       0.543  42.710 -20.304  0.50 29.95  C  
ATOM 1555  CD BLYS X  91       1.957  42.590 -22.024  0.50 25.18  C  
ATOM 1556  CE ALYS X  91      -0.524  43.227 -21.252  0.50 30.86  C  
ATOM 1557  CE BLYS X  91       1.052  43.743 -22.436  0.50 24.16  C  
ATOM 1558  NZ ALYS X  91      -1.751  43.665 -20.518  0.50 33.46  N  
ATOM 1559  NZ BLYS X  91       1.731  44.556 -23.519  0.50 21.99  N  
ATOM 1560  C   LYS X  91       4.712  39.857 -20.111  1.00 26.02  C  
ATOM 1561  O   LYS X  91       4.633  39.165 -19.087  1.00 26.39  O  
ATOM 1562  N   ASN X  92       5.871  40.268 -20.624  1.00 27.24  N  
ATOM 1563  CA  ASN X  92       7.126  39.987 -19.944  1.00 28.90  C  
ATOM 1564  CB  ASN X  92       8.342  40.088 -20.892  1.00 29.08  C  
ATOM 1565  CG  ASN X  92       8.638  41.522 -21.352  1.00 30.60  C  
ATOM 1566  OD1 ASN X  92       8.103  42.495 -20.808  1.00 29.88  O  
ATOM 1567  ND2 ASN X  92       9.496  41.649 -22.359  1.00 31.85  N  
ATOM 1568  C   ASN X  92       7.258  40.874 -18.690  1.00 29.88  C  
ATOM 1569  O   ASN X  92       6.318  41.598 -18.325  1.00 30.66  O  
ATOM 1570  N   ALA X  93       8.413  40.805 -18.049  1.00 31.13  N  
ATOM 1571  CA  ALA X  93       8.682  41.556 -16.826  1.00 32.02  C  
ATOM 1572  CB  ALA X  93      10.088  41.263 -16.355  1.00 32.22  C  
ATOM 1573  C   ALA X  93       8.467  43.083 -16.977  1.00 32.07  C  
ATOM 1574  O   ALA X  93       8.123  43.753 -16.001  1.00 32.93  O  
ATOM 1575  N   SER X  94       8.661  43.604 -18.194  1.00 32.17  N  
ATOM 1576  CA ASER X  94       8.565  45.047 -18.433  0.40 31.93  C  
ATOM 1577  CA BSER X  94       8.577  45.042 -18.471  0.60 32.16  C  
ATOM 1578  CB ASER X  94       9.746  45.532 -19.271  0.40 31.92  C  
ATOM 1579  CB BSER X  94       9.707  45.454 -19.405  0.60 32.10  C  
ATOM 1580  OG ASER X  94       9.706  44.990 -20.576  0.40 32.17  O  
ATOM 1581  OG BSER X  94      10.958  45.066 -18.874  0.60 33.56  O  
ATOM 1582  C   SER X  94       7.242  45.458 -19.076  1.00 31.79  C  
ATOM 1583  O   SER X  94       7.051  46.623 -19.449  1.00 31.41  O  
ATOM 1584  N   GLY X  95       6.321  44.505 -19.203  1.00 30.82  N  
ATOM 1585  CA  GLY X  95       5.010  44.802 -19.761  1.00 29.73  C  
ATOM 1586  C   GLY X  95       4.929  44.712 -21.275  1.00 29.17  C  
ATOM 1587  O   GLY X  95       3.912  45.072 -21.851  1.00 29.28  O  
ATOM 1588  N   VAL X  96       5.995  44.228 -21.912  1.00 28.31  N  
ATOM 1589  CA  VAL X  96       6.070  44.106 -23.366  1.00 27.56  C  
ATOM 1590  CB  VAL X  96       7.536  44.194 -23.879  1.00 27.72  C  
ATOM 1591  CG1 VAL X  96       7.598  43.923 -25.378  1.00 28.74  C  
ATOM 1592  CG2 VAL X  96       8.127  45.580 -23.587  1.00 28.45  C  
ATOM 1593  C   VAL X  96       5.487  42.751 -23.762  1.00 26.72  C  
ATOM 1594  O   VAL X  96       5.818  41.755 -23.139  1.00 26.72  O  
ATOM 1595  N   THR X  97       4.639  42.728 -24.783  1.00 26.53  N  
ATOM 1596  CA  THR X  97       3.998  41.462 -25.197  1.00 25.71  C  
ATOM 1597  CB  THR X  97       2.745  41.697 -26.021  1.00 26.49  C  
ATOM 1598  OG1 THR X  97       1.800  42.423 -25.226  1.00 27.60  O  
ATOM 1599  CG2 THR X  97       2.090  40.359 -26.464  1.00 26.39  C  
ATOM 1600  C   THR X  97       5.008  40.637 -25.968  1.00 25.26  C  
ATOM 1601  O   THR X  97       5.637  41.116 -26.928  1.00 25.18  O  
ATOM 1602  N   GLU X  98       5.191  39.407 -25.498  1.00 23.72  N  
ATOM 1603  CA  GLU X  98       6.022  38.433 -26.169  1.00 23.13  C  
ATOM 1604  CB  GLU X  98       7.185  38.019 -25.275  1.00 24.20  C  
ATOM 1605  CG  GLU X  98       8.242  39.097 -25.126  1.00 27.20  C  
ATOM 1606  CD  GLU X  98       9.551  38.561 -24.614  1.00 33.43  C  
ATOM 1607  OE1 GLU X  98      10.052  37.543 -25.161  1.00 35.54  O  
ATOM 1608  OE2 GLU X  98      10.099  39.172 -23.673  1.00 37.03  O  
ATOM 1609  C   GLU X  98       5.144  37.233 -26.453  1.00 21.71  C  
ATOM 1610  O   GLU X  98       4.069  37.115 -25.875  1.00 21.01  O  
ATOM 1611  N   LYS X  99       5.584  36.378 -27.373  1.00 20.40  N  
ATOM 1612  CA  LYS X  99       4.808  35.177 -27.720  1.00 19.47  C  
ATOM 1613  CB  LYS X  99       4.243  35.253 -29.140  1.00 20.14  C  
ATOM 1614  CG  LYS X  99       3.272  36.438 -29.392  1.00 20.67  C  
ATOM 1615  CD  LYS X  99       2.750  36.392 -30.799  1.00 22.36  C  
ATOM 1616  CE  LYS X  99       1.933  37.674 -31.125  1.00 25.13  C  
ATOM 1617  NZ  LYS X  99       1.181  37.554 -32.424  1.00 25.92  N  
ATOM 1618  C   LYS X  99       5.673  33.943 -27.595  1.00 18.33  C  
ATOM 1619  O   LYS X  99       6.877  33.976 -27.856  1.00 18.78  O  
ATOM 1620  N   ARG X 100       5.044  32.849 -27.176  1.00 17.90  N  
ATOM 1621  CA  ARG X 100       5.731  31.554 -27.133  1.00 16.39  C  
ATOM 1622  CB  ARG X 100       6.159  31.215 -25.704  1.00 16.69  C  
ATOM 1623  CG  ARG X 100       7.232  32.140 -25.117  1.00 17.03  C  
ATOM 1624  CD  ARG X 100       8.597  31.921 -25.752  1.00 19.97  C  
ATOM 1625  NE  ARG X 100       9.633  32.721 -25.068  1.00 22.92  N  
ATOM 1626  CZ  ARG X 100       9.879  34.012 -25.322  1.00 24.72  C  
ATOM 1627  NH1 ARG X 100       9.158  34.682 -26.219  1.00 25.46  N  
ATOM 1628  NH2 ARG X 100      10.841  34.644 -24.642  1.00 26.80  N  
ATOM 1629  C   ARG X 100       4.798  30.477 -27.632  1.00 15.76  C  
ATOM 1630  O   ARG X 100       3.576  30.551 -27.438  1.00 15.99  O  
ATOM 1631  N   ILE X 101       5.386  29.452 -28.255  1.00 14.97  N  
ATOM 1632  CA  ILE X 101       4.649  28.242 -28.548  1.00 14.82  C  
ATOM 1633  CB  ILE X 101       5.369  27.437 -29.675  1.00 14.40  C  
ATOM 1634  CG1 ILE X 101       5.269  28.193 -31.021  1.00 14.29  C  
ATOM 1635  CD1 ILE X 101       3.896  28.158 -31.669  1.00 13.31  C  
ATOM 1636  CG2 ILE X 101       4.799  25.986 -29.778  1.00 14.41  C  
ATOM 1637  C   ILE X 101       4.583  27.362 -27.298  1.00 15.01  C  
ATOM 1638  O   ILE X 101       5.563  27.235 -26.557  1.00 16.78  O  
ATOM 1639  N   ILE X 102       3.432  26.743 -27.086  1.00 15.22  N  
ATOM 1640  CA  ILE X 102       3.368  25.618 -26.155  1.00 15.53  C  
ATOM 1641  CB  ILE X 102       2.289  25.824 -25.082  1.00 15.85  C  
ATOM 1642  CG1 ILE X 102       2.775  26.896 -24.102  1.00 15.35  C  
ATOM 1643  CD1 ILE X 102       1.676  27.371 -23.088  1.00 16.52  C  
ATOM 1644  CG2 ILE X 102       2.079  24.497 -24.270  1.00 16.17  C  
ATOM 1645  C   ILE X 102       3.109  24.354 -26.970  1.00 14.71  C  
ATOM 1646  O   ILE X 102       2.112  24.254 -27.676  1.00 14.75  O  
ATOM 1647  N   ASP X 103       4.042  23.401 -26.885  1.00 15.19  N  
ATOM 1648  CA  ASP X 103       3.873  22.130 -27.605  1.00 15.75  C  
ATOM 1649  CB  ASP X 103       4.339  22.258 -29.073  1.00 15.62  C  
ATOM 1650  CG  ASP X 103       4.084  21.012 -29.862  1.00 17.16  C  
ATOM 1651  OD1 ASP X 103       3.508  20.047 -29.287  1.00 14.98  O  
ATOM 1652  OD2 ASP X 103       4.459  20.986 -31.036  1.00 15.79  O  
ATOM 1653  C   ASP X 103       4.648  21.004 -26.921  1.00 15.61  C  
ATOM 1654  O   ASP X 103       5.777  20.707 -27.317  1.00 15.70  O  
ATOM 1655  N   PRO X 104       4.037  20.380 -25.892  1.00 16.56  N  
ATOM 1656  CA  PRO X 104       4.657  19.228 -25.215  1.00 16.96  C  
ATOM 1657  CB  PRO X 104       3.663  18.912 -24.078  1.00 18.10  C  
ATOM 1658  CG  PRO X 104       2.981  20.267 -23.800  1.00 17.71  C  
ATOM 1659  CD  PRO X 104       2.790  20.787 -25.226  1.00 16.52  C  
ATOM 1660  C   PRO X 104       4.934  17.997 -26.093  1.00 18.27  C  
ATOM 1661  O   PRO X 104       5.658  17.100 -25.633  1.00 18.00  O  
ATOM 1662  N   SER X 105       4.437  17.968 -27.337  1.00 17.32  N  
ATOM 1663  CA ASER X 105       4.796  16.861 -28.244  0.78 16.75  C  
ATOM 1664  CA BSER X 105       4.785  16.885 -28.265  0.22 17.67  C  
ATOM 1665  CB ASER X 105       3.815  16.685 -29.401  0.78 16.65  C  
ATOM 1666  CB BSER X 105       3.847  16.871 -29.467  0.22 17.61  C  
ATOM 1667  OG ASER X 105       3.947  17.665 -30.405  0.78 13.87  O  
ATOM 1668  OG BSER X 105       2.515  16.631 -29.054  0.22 18.40  O  
ATOM 1669  C   SER X 105       6.234  17.007 -28.734  1.00 17.76  C  
ATOM 1670  O   SER X 105       6.832  16.032 -29.183  1.00 18.72  O  
ATOM 1671  N   LEU X 106       6.780  18.224 -28.631  1.00 16.83  N  
ATOM 1672  CA  LEU X 106       8.127  18.537 -29.080  1.00 18.10  C  
ATOM 1673  CB  LEU X 106       8.089  19.473 -30.296  1.00 17.88  C  
ATOM 1674  CG  LEU X 106       7.557  18.886 -31.610  1.00 17.69  C  
ATOM 1675  CD1 LEU X 106       7.637  19.984 -32.683  1.00 16.63  C  
ATOM 1676  CD2 LEU X 106       8.332  17.628 -32.022  1.00 17.37  C  
ATOM 1677  C   LEU X 106       9.023  19.135 -27.999  1.00 19.04  C  
ATOM 1678  O   LEU X 106      10.253  18.934 -28.034  1.00 19.97  O  
ATOM 1679  N   PHE X 107       8.430  19.844 -27.039  1.00 19.10  N  
ATOM 1680  CA  PHE X 107       9.210  20.493 -25.972  1.00 20.07  C  
ATOM 1681  CB  PHE X 107       9.329  22.000 -26.211  1.00 20.09  C  
ATOM 1682  CG  PHE X 107      10.088  22.340 -27.457  1.00 19.71  C  
ATOM 1683  CD1 PHE X 107      11.464  22.530 -27.417  1.00 19.10  C  
ATOM 1684  CE1 PHE X 107      12.180  22.840 -28.577  1.00 20.27  C  
ATOM 1685  CZ  PHE X 107      11.500  22.923 -29.798  1.00 18.73  C  
ATOM 1686  CE2 PHE X 107      10.137  22.715 -29.842  1.00 19.08  C  
ATOM 1687  CD2 PHE X 107       9.436  22.419 -28.688  1.00 19.91  C  
ATOM 1688  C   PHE X 107       8.544  20.227 -24.646  1.00 20.78  C  
ATOM 1689  O   PHE X 107       7.481  20.768 -24.357  1.00 20.16  O  
ATOM 1690  N   SER X 108       9.158  19.350 -23.864  1.00 21.20  N  
ATOM 1691  CA ASER X 108       8.567  18.928 -22.600  0.72 22.20  C  
ATOM 1692  CA BSER X 108       8.571  18.930 -22.604  0.28 22.30  C  
ATOM 1693  CB ASER X 108       9.080  17.530 -22.204  0.72 22.16  C  
ATOM 1694  CB BSER X 108       9.070  17.527 -22.239  0.28 22.23  C  
ATOM 1695  OG ASER X 108      10.482  17.576 -21.998  0.72 22.71  O  
ATOM 1696  OG BSER X 108       8.795  17.232 -20.889  0.28 22.80  O  
ATOM 1697  C   SER X 108       8.852  19.920 -21.472  1.00 22.87  C  
ATOM 1698  O   SER X 108       8.155  19.922 -20.455  1.00 23.86  O  
ATOM 1699  N   SER X 109       9.862  20.761 -21.660  1.00 23.39  N  
ATOM 1700  CA ASER X 109      10.389  21.656 -20.618  0.50 24.24  C  
ATOM 1701  CA BSER X 109      10.311  21.587 -20.540  0.50 24.27  C  
ATOM 1702  CB ASER X 109      11.777  22.147 -21.034  0.50 24.89  C  
ATOM 1703  CB BSER X 109      11.814  21.846 -20.609  0.50 24.84  C  
ATOM 1704  OG ASER X 109      11.752  22.752 -22.325  0.50 27.11  O  
ATOM 1705  OG BSER X 109      12.533  20.627 -20.455  0.50 26.94  O  
ATOM 1706  C   SER X 109       9.497  22.864 -20.299  1.00 24.26  C  
ATOM 1707  O   SER X 109       9.416  23.328 -19.155  1.00 24.39  O  
ATOM 1708  N   GLY X 110       8.853  23.416 -21.328  1.00 22.94  N  
ATOM 1709  CA  GLY X 110       8.116  24.660 -21.135  1.00 21.33  C  
ATOM 1710  C   GLY X 110       7.844  25.319 -22.469  1.00 20.72  C  
ATOM 1711  O   GLY X 110       8.184  24.742 -23.524  1.00 19.63  O  
ATOM 1712  N   PRO X 111       7.254  26.532 -22.438  1.00 20.71  N  
ATOM 1713  CA  PRO X 111       7.013  27.258 -23.697  1.00 19.89  C  
ATOM 1714  CB  PRO X 111       6.269  28.543 -23.246  1.00 19.98  C  
ATOM 1715  CG  PRO X 111       5.769  28.226 -21.808  1.00 20.31  C  
ATOM 1716  CD  PRO X 111       6.877  27.337 -21.260  1.00 20.71  C  
ATOM 1717  C   PRO X 111       8.342  27.603 -24.373  1.00 19.55  C  
ATOM 1718  O   PRO X 111       9.385  27.745 -23.705  1.00 20.50  O  
ATOM 1719  N   VAL X 112       8.324  27.700 -25.699  1.00 18.44  N  
ATOM 1720  CA  VAL X 112       9.537  27.983 -26.472  1.00 17.97  C  
ATOM 1721  CB  VAL X 112      10.117  26.722 -27.170  1.00 18.18  C  
ATOM 1722  CG1 VAL X 112      10.703  25.731 -26.110  1.00 17.68  C  
ATOM 1723  CG2 VAL X 112       9.077  26.048 -28.068  1.00 18.25  C  
ATOM 1724  C   VAL X 112       9.213  29.022 -27.532  1.00 17.42  C  
ATOM 1725  O   VAL X 112       8.047  29.288 -27.809  1.00 16.70  O  
ATOM 1726  N   THR X 113      10.238  29.606 -28.133  1.00 17.16  N  
ATOM 1727  CA  THR X 113       9.958  30.565 -29.210  1.00 17.34  C  
ATOM 1728  CB  THR X 113      11.197  31.349 -29.652  1.00 17.41  C  
ATOM 1729  OG1 THR X 113      12.183  30.447 -30.161  1.00 18.71  O  
ATOM 1730  CG2 THR X 113      11.765  32.146 -28.481  1.00 18.73  C  
ATOM 1731  C   THR X 113       9.433  29.818 -30.423  1.00 17.16  C  
ATOM 1732  O   THR X 113       9.704  28.618 -30.581  1.00 15.26  O  
ATOM 1733  N   ASP X 114       8.666  30.518 -31.261  1.00 16.38  N  
ATOM 1734  CA  ASP X 114       8.164  29.858 -32.459  1.00 16.52  C  
ATOM 1735  CB  ASP X 114       7.042  30.642 -33.169  1.00 16.69  C  
ATOM 1736  CG  ASP X 114       7.448  32.058 -33.574  1.00 18.71  C  
ATOM 1737  OD1 ASP X 114       6.619  32.687 -34.264  1.00 17.53  O  
ATOM 1738  OD2 ASP X 114       8.577  32.525 -33.270  1.00 18.40  O  
ATOM 1739  C   ASP X 114       9.316  29.500 -33.385  1.00 16.11  C  
ATOM 1740  O   ASP X 114       9.277  28.482 -34.049  1.00 16.68  O  
ATOM 1741  N   THR X 115      10.366  30.330 -33.368  1.00 16.24  N  
ATOM 1742  CA  THR X 115      11.583  30.041 -34.115  1.00 17.11  C  
ATOM 1743  CB  THR X 115      12.588  31.154 -33.857  1.00 18.33  C  
ATOM 1744  OG1 THR X 115      11.972  32.404 -34.228  1.00 20.33  O  
ATOM 1745  CG2 THR X 115      13.851  30.918 -34.684  1.00 20.09  C  
ATOM 1746  C   THR X 115      12.168  28.668 -33.759  1.00 17.40  C  
ATOM 1747  O   THR X 115      12.438  27.824 -34.644  1.00 16.95  O  
ATOM 1748  N   ALA X 116      12.349  28.446 -32.461  1.00 16.55  N  
ATOM 1749  CA  ALA X 116      12.838  27.161 -31.957  1.00 16.20  C  
ATOM 1750  CB  ALA X 116      13.067  27.237 -30.447  1.00 16.34  C  
ATOM 1751  C   ALA X 116      11.905  26.005 -32.295  1.00 16.00  C  
ATOM 1752  O   ALA X 116      12.353  24.897 -32.621  1.00 16.05  O  
ATOM 1753  N   TRP X 117      10.603  26.248 -32.206  1.00 14.69  N  
ATOM 1754  CA  TRP X 117       9.615  25.220 -32.487  1.00 14.37  C  
ATOM 1755  CB  TRP X 117       8.266  25.780 -32.086  1.00 13.61  C  
ATOM 1756  CG  TRP X 117       7.100  24.916 -32.393  1.00 14.74  C  
ATOM 1757  CD1 TRP X 117       6.731  23.761 -31.756  1.00 13.28  C  
ATOM 1758  NE1 TRP X 117       5.559  23.278 -32.299  1.00 13.18  N  
ATOM 1759  CE2 TRP X 117       5.166  24.117 -33.312  1.00 13.42  C  
ATOM 1760  CD2 TRP X 117       6.117  25.163 -33.391  1.00 14.22  C  
ATOM 1761  CE3 TRP X 117       5.932  26.189 -34.347  1.00 12.97  C  
ATOM 1762  CZ3 TRP X 117       4.849  26.114 -35.193  1.00 12.92  C  
ATOM 1763  CH2 TRP X 117       3.901  25.053 -35.094  1.00 13.74  C  
ATOM 1764  CZ2 TRP X 117       4.053  24.046 -34.168  1.00 13.98  C  
ATOM 1765  C   TRP X 117       9.635  24.844 -33.982  1.00 14.26  C  
ATOM 1766  O   TRP X 117       9.678  23.656 -34.340  1.00 15.00  O  
ATOM 1767  N   ARG X 118       9.638  25.843 -34.863  1.00 14.87  N  
ATOM 1768  CA  ARG X 118       9.740  25.534 -36.307  1.00 14.99  C  
ATOM 1769  CB  ARG X 118       9.590  26.780 -37.182  1.00 15.24  C  
ATOM 1770  CG  ARG X 118       8.188  27.416 -37.038  1.00 13.83  C  
ATOM 1771  CD  ARG X 118       7.888  28.452 -38.183  1.00 14.53  C  
ATOM 1772  NE  ARG X 118       8.912  29.496 -38.266  1.00 13.44  N  
ATOM 1773  CZ  ARG X 118       8.884  30.635 -37.561  1.00 15.32  C  
ATOM 1774  NH1 ARG X 118       7.898  30.877 -36.685  1.00 15.11  N  
ATOM 1775  NH2 ARG X 118       9.847  31.538 -37.730  1.00 15.64  N  
ATOM 1776  C   ARG X 118      11.022  24.752 -36.619  1.00 16.11  C  
ATOM 1777  O   ARG X 118      11.019  23.829 -37.431  1.00 15.49  O  
ATOM 1778  N   ASN X 119      12.113  25.106 -35.948  1.00 16.64  N  
ATOM 1779  CA  ASN X 119      13.365  24.377 -36.149  1.00 17.61  C  
ATOM 1780  CB  ASN X 119      14.500  25.032 -35.344  1.00 18.62  C  
ATOM 1781  CG  ASN X 119      15.818  24.288 -35.505  1.00 22.10  C  
ATOM 1782  OD1 ASN X 119      16.273  23.623 -34.581  1.00 26.99  O  
ATOM 1783  ND2 ASN X 119      16.391  24.346 -36.704  1.00 24.26  N  
ATOM 1784  C   ASN X 119      13.231  22.895 -35.770  1.00 17.71  C  
ATOM 1785  O   ASN X 119      13.807  22.026 -36.436  1.00 17.97  O  
ATOM 1786  N   ALA X 120      12.447  22.602 -34.727  1.00 16.46  N  
ATOM 1787  CA  ALA X 120      12.219  21.215 -34.294  1.00 16.76  C  
ATOM 1788  CB  ALA X 120      11.587  21.174 -32.900  1.00 16.90  C  
ATOM 1789  C   ALA X 120      11.403  20.408 -35.301  1.00 16.95  C  
ATOM 1790  O   ALA X 120      11.399  19.145 -35.265  1.00 17.32  O  
ATOM 1791  N   CYS X 121      10.738  21.126 -36.219  1.00 15.83  N  
ATOM 1792  CA  CYS X 121       9.949  20.504 -37.276  1.00 16.37  C  
ATOM 1793  CB  CYS X 121       8.730  21.356 -37.640  1.00 15.45  C  
ATOM 1794  SG  CYS X 121       7.545  21.568 -36.286  1.00 16.83  S  
ATOM 1795  C   CYS X 121      10.759  20.266 -38.518  1.00 16.37  C  
ATOM 1796  O   CYS X 121      10.223  19.761 -39.516  1.00 16.94  O  
ATOM 1797  N   VAL X 122      12.033  20.644 -38.486  1.00 16.17  N  
ATOM 1798  CA  VAL X 122      12.912  20.370 -39.622  1.00 17.26  C  
ATOM 1799  CB  VAL X 122      13.158  21.596 -40.536  1.00 17.96  C  
ATOM 1800  CG1 VAL X 122      11.895  21.860 -41.412  1.00 19.88  C  
ATOM 1801  CG2 VAL X 122      13.518  22.801 -39.738  1.00 18.67  C  
ATOM 1802  C   VAL X 122      14.181  19.690 -39.122  1.00 18.34  C  
ATOM 1803  O   VAL X 122      15.304  20.146 -39.339  1.00 19.16  O  
ATOM 1804  N   ASN X 123      13.942  18.592 -38.420  1.00 18.44  N  
ATOM 1805  CA  ASN X 123      15.022  17.832 -37.821  1.00 20.32  C  
ATOM 1806  CB  ASN X 123      14.491  17.047 -36.626  1.00 20.45  C  
ATOM 1807  CG  ASN X 123      15.624  16.462 -35.790  1.00 22.04  C  
ATOM 1808  OD1 ASN X 123      16.696  16.182 -36.316  1.00 23.74  O  
ATOM 1809  ND2 ASN X 123      15.388  16.287 -34.507  1.00 22.83  N  
ATOM 1810  C   ASN X 123      15.707  16.949 -38.862  1.00 21.10  C  
ATOM 1811  O   ASN X 123      15.215  15.893 -39.232  1.00 20.24  O  
ATOM 1812  N   THR X 124      16.850  17.417 -39.351  1.00 22.78  N  
ATOM 1813  CA  THR X 124      17.513  16.746 -40.480  1.00 24.52  C  
ATOM 1814  CB  THR X 124      18.468  17.687 -41.230  1.00 25.13  C  
ATOM 1815  OG1 THR X 124      19.328  18.303 -40.283  1.00 27.49  O  
ATOM 1816  CG2 THR X 124      17.698  18.774 -41.973  1.00 25.34  C  
ATOM 1817  C   THR X 124      18.256  15.469 -40.057  1.00 25.36  C  
ATOM 1818  O   THR X 124      18.771  14.747 -40.913  1.00 25.90  O  
ATOM 1819  N   SER X 125      18.292  15.183 -38.757  1.00 25.82  N  
ATOM 1820  CA ASER X 125      18.759  13.865 -38.299  0.60 25.78  C  
ATOM 1821  CA BSER X 125      18.738  13.868 -38.267  0.40 25.92  C  
ATOM 1822  CB ASER X 125      18.991  13.849 -36.787  0.60 26.20  C  
ATOM 1823  CB BSER X 125      18.846  13.870 -36.744  0.40 26.24  C  
ATOM 1824  OG ASER X 125      17.774  13.827 -36.070  0.60 26.57  O  
ATOM 1825  OG BSER X 125      19.724  14.889 -36.301  0.40 27.87  O  
ATOM 1826  C   SER X 125      17.767  12.776 -38.710  1.00 25.78  C  
ATOM 1827  O   SER X 125      18.100  11.576 -38.718  1.00 25.75  O  
ATOM 1828  N   CYS X 126      16.554  13.195 -39.079  1.00 24.55  N  
ATOM 1829  CA  CYS X 126      15.496  12.289 -39.512  1.00 24.16  C  
ATOM 1830  CB  CYS X 126      14.137  12.858 -39.086  1.00 24.30  C  
ATOM 1831  SG  CYS X 126      13.896  12.814 -37.327  1.00 25.51  S  
ATOM 1832  C   CYS X 126      15.467  12.046 -41.011  1.00 23.59  C  
ATOM 1833  O   CYS X 126      14.806  11.113 -41.483  1.00 24.69  O  
ATOM 1834  N   GLY X 127      16.156  12.899 -41.755  1.00 22.38  N  
ATOM 1835  CA  GLY X 127      16.111  12.894 -43.218  1.00 22.60  C  
ATOM 1836  C   GLY X 127      16.040  14.319 -43.745  1.00 22.21  C  
ATOM 1837  O   GLY X 127      16.312  15.271 -42.999  1.00 22.76  O  
ATOM 1838  N   SER X 128      15.657  14.467 -45.016  1.00 22.23  N  
ATOM 1839  CA  SER X 128      15.547  15.784 -45.636  1.00 21.66  C  
ATOM 1840  CB  SER X 128      15.304  15.677 -47.147  1.00 22.57  C  
ATOM 1841  OG  SER X 128      14.016  15.111 -47.432  1.00 26.97  O  
ATOM 1842  C   SER X 128      14.376  16.533 -44.972  1.00 19.71  C  
ATOM 1843  O   SER X 128      13.350  15.925 -44.633  1.00 19.72  O  
ATOM 1844  N   ALA X 129      14.554  17.828 -44.752  1.00 18.57  N  
ATOM 1845  CA  ALA X 129      13.464  18.640 -44.186  1.00 17.54  C  
ATOM 1846  CB  ALA X 129      13.389  18.440 -42.660  1.00 17.54  C  
ATOM 1847  C   ALA X 129      13.634  20.118 -44.498  1.00 16.86  C  
ATOM 1848  O   ALA X 129      14.752  20.638 -44.522  1.00 16.96  O  
ATOM 1849  N   SER X 130      12.516  20.810 -44.716  1.00 16.49  N  
ATOM 1850  CA  SER X 130      12.554  22.250 -44.864  1.00 16.38  C  
ATOM 1851  CB  SER X 130      13.095  22.691 -46.234  1.00 17.02  C  
ATOM 1852  OG  SER X 130      12.262  22.292 -47.297  1.00 17.88  O  
ATOM 1853  C   SER X 130      11.151  22.802 -44.642  1.00 15.94  C  
ATOM 1854  O   SER X 130      10.155  22.097 -44.852  1.00 15.75  O  
ATOM 1855  N   VAL X 131      11.113  24.051 -44.212  1.00 15.83  N  
ATOM 1856  CA  VAL X 131       9.849  24.788 -44.067  1.00 14.86  C  
ATOM 1857  CB  VAL X 131       9.930  25.768 -42.895  1.00 15.08  C  
ATOM 1858  CG1 VAL X 131       8.717  26.733 -42.906  1.00 13.48  C  
ATOM 1859  CG2 VAL X 131      10.056  25.018 -41.566  1.00 14.75  C  
ATOM 1860  C   VAL X 131       9.570  25.548 -45.362  1.00 15.59  C  
ATOM 1861  O   VAL X 131      10.471  26.196 -45.933  1.00 15.28  O  
ATOM 1862  N   SER X 132       8.317  25.528 -45.815  1.00 14.40  N  
ATOM 1863  CA ASER X 132       7.931  26.330 -46.985  0.69 15.08  C  
ATOM 1864  CA BSER X 132       7.942  26.340 -46.973  0.30 14.35  C  
ATOM 1865  CB ASER X 132       7.146  25.481 -47.974  0.69 16.47  C  
ATOM 1866  CB BSER X 132       7.259  25.487 -48.037  0.30 14.98  C  
ATOM 1867  OG ASER X 132       5.952  25.052 -47.366  0.69 19.82  O  
ATOM 1868  OG BSER X 132       8.215  24.645 -48.650  0.30 13.46  O  
ATOM 1869  C   SER X 132       7.084  27.553 -46.616  1.00 14.91  C  
ATOM 1870  O   SER X 132       7.018  28.504 -47.384  1.00 14.35  O  
ATOM 1871  N   SER X 133       6.431  27.515 -45.457  1.00 13.67  N  
ATOM 1872  CA ASER X 133       5.584  28.645 -45.041  0.60 12.89  C  
ATOM 1873  CA BSER X 133       5.550  28.622 -45.051  0.40 13.31  C  
ATOM 1874  CB ASER X 133       4.332  28.707 -45.926  0.60 12.76  C  
ATOM 1875  CB BSER X 133       4.275  28.612 -45.910  0.40 13.21  C  
ATOM 1876  OG ASER X 133       3.517  27.562 -45.754  0.60 12.74  O  
ATOM 1877  OG BSER X 133       3.292  29.514 -45.419  0.40 14.47  O  
ATOM 1878  C   SER X 133       5.173  28.478 -43.589  1.00 13.01  C  
ATOM 1879  O   SER X 133       5.244  27.383 -43.024  1.00 12.91  O  
ATOM 1880  N   TYR X 134       4.766  29.574 -42.972  1.00 13.09  N  
ATOM 1881  CA  TYR X 134       4.008  29.453 -41.741  1.00 13.26  C  
ATOM 1882  CB  TYR X 134       4.861  29.519 -40.460  1.00 14.34  C  
ATOM 1883  CG  TYR X 134       5.312  30.889 -39.986  1.00 13.28  C  
ATOM 1884  CD1 TYR X 134       6.644  31.303 -40.150  1.00 14.94  C  
ATOM 1885  CE1 TYR X 134       7.086  32.552 -39.667  1.00 13.50  C  
ATOM 1886  CZ  TYR X 134       6.167  33.375 -39.018  1.00 16.59  C  
ATOM 1887  OH  TYR X 134       6.537  34.598 -38.537  1.00 15.34  O  
ATOM 1888  CE2 TYR X 134       4.847  32.967 -38.834  1.00 14.57  C  
ATOM 1889  CD2 TYR X 134       4.430  31.739 -39.304  1.00 14.73  C  
ATOM 1890  C   TYR X 134       2.957  30.558 -41.757  1.00 13.33  C  
ATOM 1891  O   TYR X 134       3.125  31.578 -42.433  1.00 13.51  O  
ATOM 1892  N   ALA X 135       1.900  30.351 -40.984  1.00 13.62  N  
ATOM 1893  CA  ALA X 135       0.882  31.385 -40.830  1.00 13.55  C  
ATOM 1894  CB  ALA X 135      -0.276  31.120 -41.792  1.00 13.85  C  
ATOM 1895  C   ALA X 135       0.382  31.376 -39.394  1.00 14.39  C  
ATOM 1896  O   ALA X 135       0.156  30.296 -38.832  1.00 16.19  O  
ATOM 1897  N   ASN X 136       0.160  32.573 -38.827  1.00 14.16  N  
ATOM 1898  CA  ASN X 136      -0.475  32.693 -37.503  1.00 14.61  C  
ATOM 1899  CB  ASN X 136       0.137  33.838 -36.703  1.00 14.18  C  
ATOM 1900  CG  ASN X 136       1.583  33.574 -36.324  1.00 17.06  C  
ATOM 1901  OD1 ASN X 136       1.995  32.417 -36.163  1.00 16.37  O  
ATOM 1902  ND2 ASN X 136       2.347  34.636 -36.154  1.00 18.99  N  
ATOM 1903  C   ASN X 136      -1.950  32.945 -37.714  1.00 15.00  C  
ATOM 1904  O   ASN X 136      -2.316  33.754 -38.589  1.00 15.92  O  
ATOM 1905  N   THR X 137      -2.800  32.257 -36.943  1.00 15.01  N  
ATOM 1906  CA  THR X 137      -4.250  32.456 -37.054  1.00 15.19  C  
ATOM 1907  CB  THR X 137      -4.988  31.211 -37.641  1.00 15.55  C  
ATOM 1908  OG1 THR X 137      -5.015  30.159 -36.670  1.00 15.90  O  
ATOM 1909  CG2 THR X 137      -4.348  30.707 -38.958  1.00 15.48  C  
ATOM 1910  C   THR X 137      -4.863  32.710 -35.688  1.00 14.32  C  
ATOM 1911  O   THR X 137      -4.230  32.477 -34.658  1.00 12.95  O  
ATOM 1912  N   ALA X 138      -6.114  33.182 -35.678  1.00 15.37  N  
ATOM 1913  CA  ALA X 138      -6.902  33.150 -34.444  1.00 15.56  C  
ATOM 1914  CB  ALA X 138      -8.340  33.586 -34.714  1.00 15.74  C  
ATOM 1915  C   ALA X 138      -6.900  31.747 -33.838  1.00 15.79  C  
ATOM 1916  O   ALA X 138      -6.902  30.753 -34.568  1.00 16.65  O  
ATOM 1917  N   GLY X 139      -6.978  31.679 -32.508  1.00 17.01  N  
ATOM 1918  CA  GLY X 139      -6.970  30.383 -31.802  1.00 16.90  C  
ATOM 1919  C   GLY X 139      -8.082  29.453 -32.227  1.00 17.48  C  
ATOM 1920  O   GLY X 139      -7.917  28.231 -32.245  1.00 17.64  O  
ATOM 1921  N   ASN X 140      -9.230  30.010 -32.583  1.00 18.37  N  
ATOM 1922  CA  ASN X 140     -10.381  29.157 -32.883  1.00 18.44  C  
ATOM 1923  CB  ASN X 140     -11.709  29.928 -32.739  1.00 19.93  C  
ATOM 1924  CG  ASN X 140     -11.923  30.951 -33.830  1.00 22.46  C  
ATOM 1925  OD1 ASN X 140     -10.992  31.355 -34.542  1.00 22.88  O  
ATOM 1926  ND2 ASN X 140     -13.181  31.403 -33.963  1.00 25.46  N  
ATOM 1927  C   ASN X 140     -10.296  28.421 -34.228  1.00 17.81  C  
ATOM 1928  O   ASN X 140     -11.109  27.554 -34.525  1.00 18.36  O  
ATOM 1929  N   VAL X 141      -9.274  28.747 -35.036  1.00 16.61  N  
ATOM 1930  CA  VAL X 141      -9.058  28.010 -36.279  1.00 16.54  C  
ATOM 1931  CB  VAL X 141      -8.064  28.764 -37.166  1.00 15.12  C  
ATOM 1932  CG1 VAL X 141      -7.734  27.939 -38.425  1.00 17.52  C  
ATOM 1933  CG2 VAL X 141      -8.679  30.085 -37.587  1.00 17.37  C  
ATOM 1934  C   VAL X 141      -8.510  26.608 -35.926  1.00 15.86  C  
ATOM 1935  O   VAL X 141      -7.456  26.496 -35.314  1.00 15.69  O  
ATOM 1936  N   TYR X 142      -9.236  25.569 -36.312  1.00 15.85  N  
ATOM 1937  CA  TYR X 142      -8.822  24.181 -36.043  1.00 15.79  C  
ATOM 1938  CB  TYR X 142     -10.027  23.261 -36.201  1.00 16.60  C  
ATOM 1939  CG  TYR X 142      -9.914  21.838 -35.705  1.00 16.02  C  
ATOM 1940  CD1 TYR X 142     -10.460  20.791 -36.461  1.00 17.45  C  
ATOM 1941  CE1 TYR X 142     -10.416  19.467 -35.996  1.00 16.49  C  
ATOM 1942  CZ  TYR X 142      -9.833  19.197 -34.766  1.00 16.65  C  
ATOM 1943  OH  TYR X 142      -9.812  17.903 -34.343  1.00 17.69  O  
ATOM 1944  CE2 TYR X 142      -9.249  20.196 -33.993  1.00 16.05  C  
ATOM 1945  CD2 TYR X 142      -9.320  21.538 -34.459  1.00 16.90  C  
ATOM 1946  C   TYR X 142      -7.755  23.753 -37.042  1.00 15.78  C  
ATOM 1947  O   TYR X 142      -6.784  23.124 -36.677  1.00 16.03  O  
ATOM 1948  N   TYR X 143      -7.954  24.119 -38.294  1.00 15.42  N  
ATOM 1949  CA  TYR X 143      -7.022  23.767 -39.363  1.00 15.59  C  
ATOM 1950  CB  TYR X 143      -7.397  22.443 -40.029  1.00 15.86  C  
ATOM 1951  CG  TYR X 143      -6.593  22.201 -41.296  1.00 15.84  C  
ATOM 1952  CD1 TYR X 143      -5.248  21.803 -41.232  1.00 15.77  C  
ATOM 1953  CE1 TYR X 143      -4.503  21.636 -42.390  1.00 15.78  C  
ATOM 1954  CZ  TYR X 143      -5.099  21.860 -43.624  1.00 15.90  C  
ATOM 1955  OH  TYR X 143      -4.423  21.711 -44.795  1.00 16.80  O  
ATOM 1956  CE2 TYR X 143      -6.421  22.279 -43.705  1.00 17.29  C  
ATOM 1957  CD2 TYR X 143      -7.149  22.438 -42.540  1.00 17.06  C  
ATOM 1958  C   TYR X 143      -7.055  24.895 -40.374  1.00 16.03  C  
ATOM 1959  O   TYR X 143      -8.146  25.411 -40.683  1.00 16.16  O  
ATOM 1960  N   ARG X 144      -5.882  25.298 -40.860  1.00 15.43  N  
ATOM 1961  CA  ARG X 144      -5.807  26.282 -41.950  1.00 15.05  C  
ATOM 1962  CB  ARG X 144      -4.936  27.471 -41.517  1.00 16.14  C  
ATOM 1963  CG  ARG X 144      -4.549  28.377 -42.710  1.00 13.65  C  
ATOM 1964  CD  ARG X 144      -3.529  29.442 -42.289  1.00 15.10  C  
ATOM 1965  NE  ARG X 144      -3.119  30.267 -43.428  1.00 17.44  N  
ATOM 1966  CZ  ARG X 144      -2.186  29.936 -44.327  1.00 17.17  C  
ATOM 1967  NH1 ARG X 144      -1.525  28.782 -44.264  1.00 15.13  N  
ATOM 1968  NH2 ARG X 144      -1.879  30.790 -45.296  1.00 18.05  N  
ATOM 1969  C   ARG X 144      -5.169  25.599 -43.144  1.00 15.29  C  
ATOM 1970  O   ARG X 144      -4.109  24.996 -43.005  1.00 13.71  O  
ATOM 1971  N   SER X 145      -5.789  25.683 -44.317  1.00 14.22  N  
ATOM 1972  CA  SER X 145      -5.204  25.079 -45.523  1.00 15.67  C  
ATOM 1973  CB  SER X 145      -6.262  24.841 -46.592  1.00 16.28  C  
ATOM 1974  OG  SER X 145      -6.533  26.098 -47.223  1.00 17.57  O  
ATOM 1975  C   SER X 145      -4.103  25.985 -46.078  1.00 15.76  C  
ATOM 1976  O   SER X 145      -3.992  27.175 -45.702  1.00 15.58  O  
ATOM 1977  N   PRO X 146      -3.242  25.423 -46.954  1.00 15.86  N  
ATOM 1978  CA  PRO X 146      -2.267  26.269 -47.640  1.00 16.10  C  
ATOM 1979  CB  PRO X 146      -1.487  25.268 -48.500  1.00 16.54  C  
ATOM 1980  CG  PRO X 146      -1.602  23.960 -47.732  1.00 16.47  C  
ATOM 1981  CD  PRO X 146      -3.035  23.985 -47.253  1.00 15.56  C  
ATOM 1982  C   PRO X 146      -2.893  27.380 -48.490  1.00 16.80  C  
ATOM 1983  O   PRO X 146      -2.189  28.314 -48.855  1.00 18.30  O  
ATOM 1984  N   SER X 147      -4.199  27.298 -48.755  1.00 15.96  N  
ATOM 1985  CA ASER X 147      -4.896  28.361 -49.496  0.60 17.42  C  
ATOM 1986  CA BSER X 147      -4.882  28.374 -49.496  0.40 17.61  C  
ATOM 1987  CB ASER X 147      -5.847  27.754 -50.517  0.60 17.42  C  
ATOM 1988  CB BSER X 147      -5.819  27.814 -50.563  0.40 17.68  C  
ATOM 1989  OG ASER X 147      -5.138  26.950 -51.456  0.60 18.16  O  
ATOM 1990  OG BSER X 147      -7.100  27.521 -50.039  0.40 20.55  O  
ATOM 1991  C   SER X 147      -5.607  29.351 -48.573  1.00 17.58  C  
ATOM 1992  O   SER X 147      -6.425  30.193 -49.037  1.00 17.46  O  
ATOM 1993  N   ASN X 148      -5.278  29.270 -47.285  1.00 16.48  N  
ATOM 1994  CA  ASN X 148      -5.805  30.165 -46.250  1.00 16.74  C  
ATOM 1995  CB  ASN X 148      -5.526  31.637 -46.586  1.00 15.89  C  
ATOM 1996  CG  ASN X 148      -5.541  32.523 -45.350  1.00 15.00  C  
ATOM 1997  OD1 ASN X 148      -5.094  32.129 -44.275  1.00 16.09  O  
ATOM 1998  ND2 ASN X 148      -6.120  33.729 -45.496  1.00 17.34  N  
ATOM 1999  C   ASN X 148      -7.315  29.970 -46.004  1.00 17.08  C  
ATOM 2000  O   ASN X 148      -7.999  30.901 -45.525  1.00 18.12  O  
ATOM 2001  N   SER X 149      -7.829  28.789 -46.335  1.00 16.34  N  
ATOM 2002  CA  SER X 149      -9.175  28.386 -45.894  1.00 17.52  C  
ATOM 2003  CB  SER X 149      -9.788  27.316 -46.793  1.00 17.61  C  
ATOM 2004  OG  SER X 149      -9.923  27.805 -48.107  1.00 18.82  O  
ATOM 2005  C   SER X 149      -9.086  27.876 -44.468  1.00 18.30  C  
ATOM 2006  O   SER X 149      -8.044  27.331 -44.049  1.00 16.60  O  
ATOM 2007  N   TYR X 150     -10.176  28.065 -43.722  1.00 17.02  N  
ATOM 2008  CA  TYR X 150     -10.223  27.714 -42.309  1.00 18.28  C  
ATOM 2009  CB  TYR X 150     -10.653  28.918 -41.435  1.00 18.32  C  
ATOM 2010  CG  TYR X 150      -9.643  30.049 -41.274  1.00 19.57  C  
ATOM 2011  CD1 TYR X 150      -8.311  29.901 -41.638  1.00 19.33  C  
ATOM 2012  CE1 TYR X 150      -7.388  30.963 -41.461  1.00 18.26  C  
ATOM 2013  CZ  TYR X 150      -7.830  32.166 -40.905  1.00 19.55  C  
ATOM 2014  OH  TYR X 150      -6.962  33.228 -40.715  1.00 21.46  O  
ATOM 2015  CE2 TYR X 150      -9.154  32.305 -40.537  1.00 20.35  C  
ATOM 2016  CD2 TYR X 150     -10.035  31.264 -40.719  1.00 19.90  C  
ATOM 2017  C   TYR X 150     -11.213  26.582 -42.105  1.00 18.34  C  
ATOM 2018  O   TYR X 150     -12.236  26.498 -42.795  1.00 18.75  O  
ATOM 2019  N   LEU X 151     -10.878  25.700 -41.178  1.00 18.74  N  
ATOM 2020  CA  LEU X 151     -11.790  24.682 -40.694  1.00 19.70  C  
ATOM 2021  CB  LEU X 151     -11.213  23.288 -41.016  1.00 19.51  C  
ATOM 2022  CG  LEU X 151     -11.869  22.083 -40.360  1.00 21.37  C  
ATOM 2023  CD1 LEU X 151     -13.283  21.883 -40.850  1.00 22.97  C  
ATOM 2024  CD2 LEU X 151     -11.040  20.838 -40.663  1.00 22.05  C  
ATOM 2025  C   LEU X 151     -11.935  24.894 -39.202  1.00 19.30  C  
ATOM 2026  O   LEU X 151     -10.953  25.156 -38.502  1.00 18.08  O  
ATOM 2027  N   TYR X 152     -13.178  24.845 -38.715  1.00 19.57  N  
ATOM 2028  CA  TYR X 152     -13.447  25.082 -37.307  1.00 20.01  C  
ATOM 2029  CB  TYR X 152     -14.537  26.156 -37.168  1.00 19.97  C  
ATOM 2030  CG  TYR X 152     -14.081  27.520 -37.618  1.00 21.44  C  
ATOM 2031  CD1 TYR X 152     -13.280  28.298 -36.798  1.00 20.62  C  
ATOM 2032  CE1 TYR X 152     -12.833  29.568 -37.196  1.00 21.57  C  
ATOM 2033  CZ  TYR X 152     -13.217  30.056 -38.443  1.00 21.99  C  
ATOM 2034  OH  TYR X 152     -12.792  31.308 -38.816  1.00 23.87  O  
ATOM 2035  CE2 TYR X 152     -14.014  29.305 -39.288  1.00 21.47  C  
ATOM 2036  CD2 TYR X 152     -14.449  28.025 -38.866  1.00 22.96  C  
ATOM 2037  C   TYR X 152     -13.902  23.799 -36.603  1.00 20.64  C  
ATOM 2038  O   TYR X 152     -14.309  22.844 -37.258  1.00 21.25  O  
ATOM 2039  N   ASP X 153     -13.818  23.801 -35.274  1.00 20.88  N  
ATOM 2040  CA  ASP X 153     -14.287  22.686 -34.443  1.00 22.62  C  
ATOM 2041  CB  ASP X 153     -13.125  21.722 -34.162  1.00 21.41  C  
ATOM 2042  CG  ASP X 153     -13.575  20.444 -33.478  1.00 21.91  C  
ATOM 2043  OD1 ASP X 153     -14.706  19.966 -33.757  1.00 19.60  O  
ATOM 2044  OD2 ASP X 153     -12.782  19.926 -32.686  1.00 20.19  O  
ATOM 2045  C   ASP X 153     -14.776  23.300 -33.145  1.00 23.76  C  
ATOM 2046  O   ASP X 153     -14.201  23.093 -32.082  1.00 23.25  O  
ATOM 2047  N   ASN X 154     -15.826  24.109 -33.237  1.00 26.72  N  
ATOM 2048  CA  ASN X 154     -16.176  24.989 -32.114  1.00 28.77  C  
ATOM 2049  CB  ASN X 154     -17.172  26.065 -32.547  1.00 29.10  C  
ATOM 2050  CG  ASN X 154     -16.538  27.100 -33.455  1.00 32.64  C  
ATOM 2051  OD1 ASN X 154     -17.185  27.618 -34.372  1.00 37.50  O  
ATOM 2052  ND2 ASN X 154     -15.260  27.407 -33.206  1.00 32.00  N  
ATOM 2053  C   ASN X 154     -16.612  24.328 -30.811  1.00 29.03  C  
ATOM 2054  O   ASN X 154     -16.447  24.920 -29.737  1.00 30.38  O  
ATOM 2055  N   ASN X 155     -17.132  23.105 -30.907  1.00 28.57  N  
ATOM 2056  CA  ASN X 155     -17.553  22.355 -29.726  1.00 28.05  C  
ATOM 2057  CB  ASN X 155     -18.983  21.860 -29.919  1.00 29.02  C  
ATOM 2058  CG  ASN X 155     -19.963  23.000 -30.038  1.00 33.19  C  
ATOM 2059  OD1 ASN X 155     -20.656  23.137 -31.054  1.00 39.38  O  
ATOM 2060  ND2 ASN X 155     -19.995  23.860 -29.018  1.00 34.63  N  
ATOM 2061  C   ASN X 155     -16.611  21.209 -29.394  1.00 26.14  C  
ATOM 2062  O   ASN X 155     -16.951  20.316 -28.623  1.00 25.00  O  
ATOM 2063  N   LEU X 156     -15.410  21.255 -29.987  1.00 24.52  N  
ATOM 2064  CA ALEU X 156     -14.391  20.220 -29.788  0.44 23.67  C  
ATOM 2065  CA BLEU X 156     -14.391  20.215 -29.813  0.56 23.51  C  
ATOM 2066  CB ALEU X 156     -13.766  20.306 -28.381  0.44 23.96  C  
ATOM 2067  CB BLEU X 156     -13.689  20.308 -28.448  0.56 23.70  C  
ATOM 2068  CG ALEU X 156     -12.932  21.531 -27.935  0.44 24.54  C  
ATOM 2069  CG BLEU X 156     -12.414  21.170 -28.406  0.56 23.76  C  
ATOM 2070  CD1ALEU X 156     -11.429  21.324 -28.110  0.44 24.38  C  
ATOM 2071  CD1BLEU X 156     -12.701  22.649 -28.550  0.56 24.50  C  
ATOM 2072  CD2ALEU X 156     -13.365  22.849 -28.579  0.44 26.49  C  
ATOM 2073  CD2BLEU X 156     -11.639  20.928 -27.120  0.56 23.72  C  
ATOM 2074  C   LEU X 156     -14.909  18.796 -30.078  1.00 23.21  C  
ATOM 2075  O   LEU X 156     -14.384  17.821 -29.539  1.00 22.81  O  
ATOM 2076  N   ILE X 157     -15.910  18.688 -30.938  1.00 22.98  N  
ATOM 2077  CA AILE X 157     -16.461  17.382 -31.343  0.50 23.40  C  
ATOM 2078  CA BILE X 157     -16.441  17.370 -31.288  0.50 23.39  C  
ATOM 2079  CB AILE X 157     -17.677  17.557 -32.306  0.50 23.20  C  
ATOM 2080  CB BILE X 157     -17.757  17.465 -32.110  0.50 23.32  C  
ATOM 2081  CG1AILE X 157     -18.940  17.876 -31.505  0.50 24.91  C  
ATOM 2082  CG1BILE X 157     -18.830  18.227 -31.308  0.50 24.65  C  
ATOM 2083  CD1AILE X 157     -19.965  18.627 -32.293  0.50 25.95  C  
ATOM 2084  CD1BILE X 157     -19.145  17.625 -29.934  0.50 24.89  C  
ATOM 2085  CG2AILE X 157     -17.931  16.310 -33.155  0.50 24.28  C  
ATOM 2086  CG2BILE X 157     -18.275  16.077 -32.493  0.50 24.37  C  
ATOM 2087  C   ILE X 157     -15.362  16.570 -32.016  1.00 23.14  C  
ATOM 2088  O   ILE X 157     -15.098  15.412 -31.663  1.00 23.53  O  
ATOM 2089  N   ASN X 158     -14.706  17.199 -32.990  1.00 22.71  N  
ATOM 2090  CA  ASN X 158     -13.664  16.489 -33.711  1.00 21.39  C  
ATOM 2091  CB  ASN X 158     -13.278  17.235 -34.983  1.00 21.86  C  
ATOM 2092  CG  ASN X 158     -12.522  16.346 -35.945  1.00 23.52  C  
ATOM 2093  OD1 ASN X 158     -11.288  16.340 -35.967  1.00 20.15  O  
ATOM 2094  ND2 ASN X 158     -13.255  15.540 -36.696  1.00 21.44  N  
ATOM 2095  C   ASN X 158     -12.456  16.240 -32.808  1.00 20.49  C  
ATOM 2096  O   ASN X 158     -11.926  15.125 -32.773  1.00 19.44  O  
ATOM 2097  N   THR X 159     -12.043  17.287 -32.081  1.00 19.09  N  
ATOM 2098  CA  THR X 159     -10.910  17.219 -31.160  1.00 18.36  C  
ATOM 2099  CB  THR X 159     -10.742  18.536 -30.366  1.00 18.50  C  
ATOM 2100  OG1 THR X 159     -10.405  19.597 -31.276  1.00 17.89  O  
ATOM 2101  CG2 THR X 159      -9.666  18.434 -29.315  1.00 17.39  C  
ATOM 2102  C   THR X 159     -11.004  16.034 -30.210  1.00 18.76  C  
ATOM 2103  O   THR X 159     -10.104  15.212 -30.110  1.00 18.14  O  
ATOM 2104  N   ASN X 160     -12.112  15.962 -29.488  1.00 18.94  N  
ATOM 2105  CA  ASN X 160     -12.243  14.923 -28.496  1.00 19.48  C  
ATOM 2106  CB  ASN X 160     -13.461  15.222 -27.626  1.00 19.71  C  
ATOM 2107  CG  ASN X 160     -13.233  16.417 -26.728  1.00 20.20  C  
ATOM 2108  OD1 ASN X 160     -12.100  16.733 -26.359  1.00 20.53  O  
ATOM 2109  ND2 ASN X 160     -14.321  17.089 -26.351  1.00 23.98  N  
ATOM 2110  C   ASN X 160     -12.319  13.531 -29.100  1.00 19.55  C  
ATOM 2111  O   ASN X 160     -11.776  12.587 -28.528  1.00 19.96  O  
ATOM 2112  N   CYS X 161     -12.967  13.430 -30.250  1.00 21.19  N  
ATOM 2113  CA  CYS X 161     -13.067  12.160 -30.983  1.00 21.32  C  
ATOM 2114  CB  CYS X 161     -13.973  12.334 -32.194  1.00 22.84  C  
ATOM 2115  SG  CYS X 161     -14.218  10.805 -33.137  1.00 25.46  S  
ATOM 2116  C   CYS X 161     -11.667  11.677 -31.403  1.00 21.19  C  
ATOM 2117  O   CYS X 161     -11.286  10.510 -31.180  1.00 20.33  O  
ATOM 2118  N   VAL X 162     -10.888  12.591 -31.974  1.00 20.25  N  
ATOM 2119  CA  VAL X 162      -9.511  12.251 -32.387  1.00 18.91  C  
ATOM 2120  CB  VAL X 162      -8.893  13.397 -33.219  1.00 19.50  C  
ATOM 2121  CG1 VAL X 162      -7.403  13.098 -33.465  1.00 18.88  C  
ATOM 2122  CG2 VAL X 162      -9.696  13.569 -34.521  1.00 18.97  C  
ATOM 2123  C   VAL X 162      -8.613  11.861 -31.196  1.00 18.68  C  
ATOM 2124  O   VAL X 162      -7.907  10.852 -31.230  1.00 17.48  O  
ATOM 2125  N   LEU X 163      -8.642  12.666 -30.133  1.00 17.69  N  
ATOM 2126  CA  LEU X 163      -7.896  12.365 -28.939  1.00 17.62  C  
ATOM 2127  CB  LEU X 163      -8.105  13.466 -27.908  1.00 17.65  C  
ATOM 2128  CG  LEU X 163      -7.480  14.815 -28.270  1.00 16.26  C  
ATOM 2129  CD1 LEU X 163      -7.822  15.763 -27.133  1.00 18.05  C  
ATOM 2130  CD2 LEU X 163      -5.954  14.728 -28.476  1.00 16.46  C  
ATOM 2131  C   LEU X 163      -8.295  11.008 -28.349  1.00 18.16  C  
ATOM 2132  O   LEU X 163      -7.441  10.254 -27.899  1.00 18.23  O  
ATOM 2133  N   THR X 164      -9.589  10.726 -28.345  1.00 18.60  N  
ATOM 2134  CA  THR X 164     -10.071   9.416 -27.878  1.00 19.69  C  
ATOM 2135  CB  THR X 164     -11.609   9.387 -27.797  1.00 19.96  C  
ATOM 2136  OG1 THR X 164     -12.015  10.365 -26.829  1.00 20.69  O  
ATOM 2137  CG2 THR X 164     -12.096   7.987 -27.323  1.00 21.08  C  
ATOM 2138  C   THR X 164      -9.534   8.278 -28.762  1.00 20.14  C  
ATOM 2139  O   THR X 164      -9.083   7.249 -28.248  1.00 20.87  O  
ATOM 2140  N   LYS X 165      -9.576   8.465 -30.078  1.00 19.68  N  
ATOM 2141  CA  LYS X 165      -9.077   7.448 -30.988  1.00 20.04  C  
ATOM 2142  CB  LYS X 165      -9.298   7.831 -32.452  1.00 21.31  C  
ATOM 2143  CG  LYS X 165      -8.966   6.713 -33.441  1.00 22.30  C  
ATOM 2144  CD  LYS X 165     -10.051   5.619 -33.396  1.00 27.58  C  
ATOM 2145  CE  LYS X 165      -9.879   4.539 -34.465  1.00 28.08  C  
ATOM 2146  NZ  LYS X 165     -10.852   3.414 -34.217  1.00 31.64  N  
ATOM 2147  C   LYS X 165      -7.602   7.173 -30.766  1.00 18.97  C  
ATOM 2148  O   LYS X 165      -7.177   6.025 -30.828  1.00 18.97  O  
ATOM 2149  N   PHE X 166      -6.821   8.224 -30.506  1.00 18.60  N  
ATOM 2150  CA  PHE X 166      -5.364   8.071 -30.323  1.00 18.26  C  
ATOM 2151  CB  PHE X 166      -4.592   9.284 -30.899  1.00 17.53  C  
ATOM 2152  CG  PHE X 166      -4.765   9.502 -32.401  1.00 18.08  C  
ATOM 2153  CD1 PHE X 166      -5.367   8.557 -33.238  1.00 19.26  C  
ATOM 2154  CE1 PHE X 166      -5.535   8.802 -34.625  1.00 18.50  C  
ATOM 2155  CZ  PHE X 166      -5.063  10.005 -35.176  1.00 19.23  C  
ATOM 2156  CE2 PHE X 166      -4.455  10.942 -34.352  1.00 17.96  C  
ATOM 2157  CD2 PHE X 166      -4.306  10.688 -32.967  1.00 16.89  C  
ATOM 2158  C   PHE X 166      -4.911   7.858 -28.888  1.00 18.51  C  
ATOM 2159  O   PHE X 166      -3.708   7.770 -28.605  1.00 17.52  O  
ATOM 2160  N   SER X 167      -5.874   7.741 -27.979  1.00 18.77  N  
ATOM 2161  CA ASER X 167      -5.588   7.777 -26.545  0.59 19.40  C  
ATOM 2162  CA BSER X 167      -5.574   7.780 -26.549  0.41 19.06  C  
ATOM 2163  CB ASER X 167      -6.887   7.561 -25.767  0.59 19.15  C  
ATOM 2164  CB BSER X 167      -6.846   7.625 -25.712  0.41 18.91  C  
ATOM 2165  OG ASER X 167      -7.429   6.286 -26.055  0.59 21.34  O  
ATOM 2166  OG BSER X 167      -6.543   7.826 -24.340  0.41 19.44  O  
ATOM 2167  C   SER X 167      -4.517   6.781 -26.106  1.00 18.81  C  
ATOM 2168  O   SER X 167      -3.657   7.109 -25.267  1.00 20.00  O  
ATOM 2169  N  ALEU X 168      -4.577   5.575 -26.679  0.22 18.93  N  
ATOM 2170  N  BLEU X 168      -4.542   5.562 -26.665  0.78 18.52  N  
ATOM 2171  CA ALEU X 168      -3.702   4.464 -26.306  0.22 18.95  C  
ATOM 2172  CA BLEU X 168      -3.614   4.532 -26.208  0.78 19.16  C  
ATOM 2173  CB ALEU X 168      -4.518   3.178 -26.140  0.22 18.98  C  
ATOM 2174  CB BLEU X 168      -4.320   3.171 -26.129  0.78 18.82  C  
ATOM 2175  CG ALEU X 168      -5.458   2.983 -24.955  0.22 19.31  C  
ATOM 2176  CG BLEU X 168      -5.532   3.178 -25.208  0.78 17.93  C  
ATOM 2177  CD1ALEU X 168      -6.547   4.035 -24.907  0.22 19.74  C  
ATOM 2178  CD1BLEU X 168      -6.297   1.855 -25.364  0.78 18.63  C  
ATOM 2179  CD2ALEU X 168      -6.059   1.591 -25.066  0.22 18.96  C  
ATOM 2180  CD2BLEU X 168      -5.039   3.388 -23.761  0.78 16.96  C  
ATOM 2181  C  ALEU X 168      -2.597   4.223 -27.329  0.22 18.85  C  
ATOM 2182  C  BLEU X 168      -2.350   4.420 -27.050  0.78 19.66  C  
ATOM 2183  O  ALEU X 168      -2.069   3.112 -27.442  0.22 18.25  O  
ATOM 2184  O  BLEU X 168      -1.478   3.584 -26.770  0.78 20.21  O  
ATOM 2185  N   LEU X 169      -2.254   5.264 -28.077  1.00 19.02  N  
ATOM 2186  CA  LEU X 169      -1.137   5.187 -29.010  1.00 18.66  C  
ATOM 2187  CB  LEU X 169      -1.583   5.688 -30.383  1.00 18.31  C  
ATOM 2188  CG  LEU X 169      -2.888   5.104 -30.922  1.00 18.81  C  
ATOM 2189  CD1 LEU X 169      -3.167   5.757 -32.264  1.00 19.69  C  
ATOM 2190  CD2 LEU X 169      -2.812   3.553 -31.039  1.00 19.38  C  
ATOM 2191  C   LEU X 169       0.030   6.010 -28.487  1.00 19.62  C  
ATOM 2192  O   LEU X 169      -0.147   7.030 -27.814  1.00 19.04  O  
ATOM 2193  N   SER X 170       1.231   5.542 -28.772  1.00 19.60  N  
ATOM 2194  CA ASER X 170       2.434   6.185 -28.286  0.55 20.45  C  
ATOM 2195  CA BSER X 170       2.432   6.222 -28.317  0.45 21.04  C  
ATOM 2196  CB ASER X 170       2.739   5.694 -26.863  0.55 20.57  C  
ATOM 2197  CB BSER X 170       2.761   5.875 -26.850  0.45 21.21  C  
ATOM 2198  OG ASER X 170       3.858   6.362 -26.311  0.55 18.68  O  
ATOM 2199  OG BSER X 170       3.736   4.848 -26.741  0.45 23.00  O  
ATOM 2200  C   SER X 170       3.577   5.861 -29.242  1.00 21.18  C  
ATOM 2201  O   SER X 170       3.599   4.763 -29.825  1.00 22.50  O  
ATOM 2202  N   GLY X 171       4.509   6.797 -29.399  1.00 21.00  N  
ATOM 2203  CA  GLY X 171       5.652   6.625 -30.280  1.00 20.85  C  
ATOM 2204  C   GLY X 171       5.330   6.910 -31.736  1.00 21.42  C  
ATOM 2205  O   GLY X 171       4.363   7.620 -32.047  1.00 20.35  O  
ATOM 2206  N   CYS X 172       6.139   6.346 -32.634  1.00 20.42  N  
ATOM 2207  CA  CYS X 172       6.058   6.718 -34.064  1.00 21.24  C  
ATOM 2208  CB  CYS X 172       7.449   7.059 -34.610  1.00 21.75  C  
ATOM 2209  SG  CYS X 172       8.285   8.377 -33.709  1.00 22.99  S  
ATOM 2210  C   CYS X 172       5.339   5.679 -34.921  1.00 21.50  C  
ATOM 2211  O   CYS X 172       5.400   5.740 -36.161  1.00 21.28  O  
ATOM 2212  N   SER X 173       4.652   4.750 -34.239  1.00 20.36  N  
ATOM 2213  CA  SER X 173       3.741   3.746 -34.836  1.00 21.39  C  
ATOM 2214  CB  SER X 173       4.409   2.365 -34.863  1.00 22.59  C  
ATOM 2215  OG  SER X 173       5.482   2.350 -35.804  1.00 24.84  O  
ATOM 2216  C   SER X 173       2.420   3.669 -34.046  1.00 21.15  C  
ATOM 2217  O   SER X 173       2.431   3.883 -32.834  1.00 21.22  O  
ATOM 2218  N   PRO X 174       1.283   3.361 -34.710  1.00 21.36  N  
ATOM 2219  CA  PRO X 174       1.114   3.025 -36.128  1.00 21.43  C  
ATOM 2220  CB  PRO X 174      -0.334   2.523 -36.197  1.00 21.45  C  
ATOM 2221  CG  PRO X 174      -1.037   3.224 -35.085  1.00 21.17  C  
ATOM 2222  CD  PRO X 174      -0.015   3.341 -33.993  1.00 21.49  C  
ATOM 2223  C   PRO X 174       1.296   4.237 -37.056  1.00 21.96  C  
ATOM 2224  O   PRO X 174       1.002   5.360 -36.678  1.00 21.11  O  
ATOM 2225  N   SER X 175       1.796   3.991 -38.264  1.00 22.22  N  
ATOM 2226  CA  SER X 175       1.881   5.031 -39.286  1.00 23.61  C  
ATOM 2227  CB  SER X 175       3.270   5.673 -39.301  1.00 23.68  C  
ATOM 2228  OG  SER X 175       3.411   6.515 -40.439  1.00 24.56  O  
ATOM 2229  C   SER X 175       1.569   4.320 -40.600  1.00 24.44  C  
ATOM 2230  O   SER X 175       2.295   3.378 -40.947  1.00 25.73  O  
ATOM 2231  N   PRO X 176       0.494   4.731 -41.319  1.00 24.20  N  
ATOM 2232  CA APRO X 176      -0.409   5.838 -41.000  0.40 23.82  C  
ATOM 2233  CA BPRO X 176      -0.414   5.836 -41.006  0.60 23.78  C  
ATOM 2234  CB APRO X 176      -1.399   5.840 -42.177  0.40 24.38  C  
ATOM 2235  CB BPRO X 176      -1.400   5.833 -42.192  0.60 24.54  C  
ATOM 2236  CG APRO X 176      -1.331   4.460 -42.725  0.40 24.21  C  
ATOM 2237  CG BPRO X 176      -0.659   5.132 -43.296  0.60 23.71  C  
ATOM 2238  CD APRO X 176       0.099   4.064 -42.576  0.40 24.81  C  
ATOM 2239  CD BPRO X 176       0.133   4.080 -42.598  0.60 25.04  C  
ATOM 2240  C   PRO X 176      -1.169   5.647 -39.686  1.00 23.46  C  
ATOM 2241  O   PRO X 176      -1.344   4.499 -39.211  1.00 22.37  O  
ATOM 2242  N   ALA X 177      -1.600   6.763 -39.109  1.00 23.20  N  
ATOM 2243  CA  ALA X 177      -2.422   6.726 -37.898  1.00 23.53  C  
ATOM 2244  CB  ALA X 177      -2.671   8.159 -37.386  1.00 23.56  C  
ATOM 2245  C   ALA X 177      -3.746   6.027 -38.222  1.00 24.05  C  
ATOM 2246  O   ALA X 177      -4.117   5.912 -39.397  1.00 24.44  O  
ATOM 2247  N   PRO X 178      -4.480   5.587 -37.192  1.00 24.92  N  
ATOM 2248  CA  PRO X 178      -5.812   5.033 -37.396  1.00 25.95  C  
ATOM 2249  CB  PRO X 178      -6.307   4.762 -35.966  1.00 26.10  C  
ATOM 2250  CG  PRO X 178      -5.113   4.722 -35.128  1.00 26.02  C  
ATOM 2251  CD  PRO X 178      -4.104   5.621 -35.768  1.00 24.78  C  
ATOM 2252  C   PRO X 178      -6.779   6.005 -38.059  1.00 26.40  C  
ATOM 2253  O   PRO X 178      -6.640   7.221 -37.929  1.00 25.53  O  
ATOM 2254  N   ASP X 179      -7.786   5.445 -38.723  1.00 27.80  N  
ATOM 2255  CA  ASP X 179      -8.849   6.204 -39.363  1.00 29.96  C  
ATOM 2256  CB  ASP X 179      -9.842   5.215 -39.976  1.00 30.69  C  
ATOM 2257  CG  ASP X 179     -10.661   5.814 -41.089  1.00 35.02  C  
ATOM 2258  OD1 ASP X 179     -11.138   6.966 -40.966  1.00 37.70  O  
ATOM 2259  OD2 ASP X 179     -10.823   5.112 -42.109  1.00 40.98  O  
ATOM 2260  C   ASP X 179      -9.578   7.079 -38.350  1.00 29.91  C  
ATOM 2261  O   ASP X 179      -9.932   6.614 -37.255  1.00 30.07  O  
ATOM 2262  N  AVAL X 180      -9.835   8.322 -38.743  0.31 30.56  N  
ATOM 2263  N  BVAL X 180      -9.775   8.353 -38.697  0.69 29.78  N  
ATOM 2264  CA AVAL X 180     -10.518   9.278 -37.884  0.31 31.17  C  
ATOM 2265  CA BVAL X 180     -10.549   9.299 -37.861  0.69 29.85  C  
ATOM 2266  CB AVAL X 180      -9.470  10.220 -37.208  0.31 31.26  C  
ATOM 2267  CB BVAL X 180      -9.626  10.337 -37.130  0.69 29.67  C  
ATOM 2268  CG1AVAL X 180      -9.241  11.506 -38.006  0.31 31.32  C  
ATOM 2269  CG1BVAL X 180      -8.807   9.653 -36.033  0.69 28.02  C  
ATOM 2270  CG2AVAL X 180      -9.849  10.497 -35.772  0.31 31.74  C  
ATOM 2271  CG2BVAL X 180      -8.700  11.053 -38.106  0.69 28.97  C  
ATOM 2272  C  AVAL X 180     -11.622  10.023 -38.661  0.31 31.59  C  
ATOM 2273  C  BVAL X 180     -11.645  10.028 -38.655  0.69 30.70  C  
ATOM 2274  O  AVAL X 180     -12.169  11.030 -38.199  0.31 31.43  O  
ATOM 2275  O  BVAL X 180     -12.191  11.050 -38.202  0.69 30.38  O  
ATOM 2276  N   SER X 181     -11.968   9.490 -39.833  1.00 32.06  N  
ATOM 2277  CA ASER X 181     -12.902  10.148 -40.747  0.59 33.25  C  
ATOM 2278  CA BSER X 181     -12.912  10.126 -40.759  0.41 32.53  C  
ATOM 2279  CB ASER X 181     -12.842   9.505 -42.141  0.59 33.64  C  
ATOM 2280  CB BSER X 181     -12.892   9.422 -42.120  0.41 32.76  C  
ATOM 2281  OG ASER X 181     -11.515   9.515 -42.650  0.59 34.74  O  
ATOM 2282  OG BSER X 181     -13.284   8.067 -41.995  0.41 30.51  O  
ATOM 2283  C   SER X 181     -14.335  10.146 -40.205  1.00 33.43  C  
ATOM 2284  O   SER X 181     -15.127  11.036 -40.544  1.00 33.88  O  
ATOM 2285  N   SER X 182     -14.647   9.159 -39.365  1.00 33.55  N  
ATOM 2286  CA  SER X 182     -15.952   9.067 -38.704  1.00 34.59  C  
ATOM 2287  CB  SER X 182     -16.159   7.679 -38.089  1.00 34.83  C  
ATOM 2288  OG  SER X 182     -15.234   7.420 -37.043  1.00 36.33  O  
ATOM 2289  C   SER X 182     -16.153  10.148 -37.626  1.00 34.15  C  
ATOM 2290  O   SER X 182     -17.294  10.479 -37.284  1.00 34.80  O  
ATOM 2291  N   CYS X 183     -15.059  10.688 -37.087  1.00 32.95  N  
ATOM 2292  CA  CYS X 183     -15.164  11.830 -36.186  1.00 32.19  C  
ATOM 2293  CB  CYS X 183     -13.795  12.279 -35.679  1.00 31.30  C  
ATOM 2294  SG  CYS X 183     -12.941  11.065 -34.710  1.00 27.42  S  
ATOM 2295  C   CYS X 183     -15.775  12.938 -37.003  1.00 33.53  C  
ATOM 2296  O   CYS X 183     -15.281  13.262 -38.083  1.00 35.18  O  
ATOM 2297  N   GLY X 184     -16.868  13.497 -36.529  1.00 33.87  N  
ATOM 2298  CA  GLY X 184     -17.519  14.537 -37.303  1.00 34.38  C  
ATOM 2299  C   GLY X 184     -17.169  15.898 -36.765  1.00 34.44  C  
ATOM 2300  O   GLY X 184     -16.108  16.080 -36.159  1.00 33.39  O  
ATOM 2301  N   PHE X 185     -18.072  16.849 -37.006  1.00 34.98  N  
ATOM 2302  CA  PHE X 185     -17.977  18.203 -36.484  1.00 35.47  C  
ATOM 2303  CB  PHE X 185     -17.555  19.179 -37.590  1.00 35.27  C  
ATOM 2304  CG  PHE X 185     -16.175  18.914 -38.132  1.00 35.42  C  
ATOM 2305  CD1 PHE X 185     -15.045  19.414 -37.482  1.00 34.35  C  
ATOM 2306  CE1 PHE X 185     -13.767  19.165 -37.981  1.00 33.67  C  
ATOM 2307  CZ  PHE X 185     -13.608  18.399 -39.132  1.00 34.45  C  
ATOM 2308  CE2 PHE X 185     -14.724  17.898 -39.791  1.00 34.94  C  
ATOM 2309  CD2 PHE X 185     -16.000  18.152 -39.289  1.00 35.39  C  
ATOM 2310  C   PHE X 185     -19.322  18.627 -35.877  1.00 36.25  C  
ATOM 2311  O   PHE X 185     -19.362  19.441 -34.947  1.00 36.71  O  
ATOM 2312  O5  CIT A   1      10.696  29.207 -40.463  1.00 20.04  O  
ATOM 2313  C6  CIT A   1      11.803  29.450 -39.914  1.00 18.94  C  
ATOM 2314  O6  CIT A   1      11.964  30.400 -39.104  1.00 20.90  O  
ATOM 2315  C3  CIT A   1      12.998  28.575 -40.256  1.00 21.03  C  
ATOM 2316  O7  CIT A   1      14.164  29.085 -39.537  1.00 22.20  O  
ATOM 2317  C4  CIT A   1      13.253  28.635 -41.763  1.00 23.23  C  
ATOM 2318  C5  CIT A   1      13.783  30.006 -42.132  1.00 23.46  C  
ATOM 2319  O4  CIT A   1      13.032  31.001 -41.963  1.00 21.48  O  
ATOM 2320  O3  CIT A   1      14.965  30.146 -42.577  1.00 23.26  O  
ATOM 2321  C2  CIT A   1      12.621  27.154 -39.811  1.00 23.04  C  
ATOM 2322  C1  CIT A   1      13.889  26.338 -39.724  1.00 24.90  C  
ATOM 2323  O1  CIT A   1      14.386  25.853 -40.763  1.00 22.08  O  
ATOM 2324  O2  CIT A   1      14.435  26.161 -38.612  1.00 24.82  O  
ATOM 2325  O5  CIT A   2       9.061  35.292 -39.078  1.00 18.25  O  
ATOM 2326  C6  CIT A   2      10.019  35.317 -38.260  1.00 18.17  C  
ATOM 2327  O6  CIT A   2      10.988  34.495 -38.374  1.00 18.35  O  
ATOM 2328  C3  CIT A   2       9.971  36.351 -37.127  1.00 19.59  C  
ATOM 2329  O7  CIT A   2      11.091  36.141 -36.236  1.00 21.96  O  
ATOM 2330  C4  CIT A   2      10.072  37.748 -37.766  1.00 21.00  C  
ATOM 2331  C5  CIT A   2      10.340  38.793 -36.711  1.00 22.63  C  
ATOM 2332  O4  CIT A   2       9.415  39.160 -35.962  1.00 23.25  O  
ATOM 2333  O3  CIT A   2      11.486  39.278 -36.563  1.00 25.44  O  
ATOM 2334  C2  CIT A   2       8.681  36.183 -36.325  1.00 21.80  C  
ATOM 2335  C1  CIT A   2       8.759  34.869 -35.566  1.00 23.04  C  
ATOM 2336  O1  CIT A   2       8.881  34.832 -34.304  1.00 23.78  O  
ATOM 2337  O2  CIT A   2       8.762  33.809 -36.218  1.00 16.31  O  
ATOM 2338  O   HOH A 101      -1.531  12.658 -31.337  1.00 15.31  O  
ATOM 2339  O   HOH A 102       0.986  19.102 -29.507  1.00 15.94  O  
ATOM 2340  O   HOH A 103      13.767  28.290 -36.967  1.00 24.90  O  
ATOM 2341  O   HOH A 104      -0.411  20.576 -31.478  1.00 17.02  O  
ATOM 2342  O   HOH A 105      -5.711  23.165 -34.163  1.00 16.23  O  
ATOM 2343  O   HOH A 106      -0.983  34.945 -29.324  1.00 20.34  O  
ATOM 2344  O   HOH A 107       5.742  13.302 -29.139  1.00 23.68  O  
ATOM 2345  O   HOH A 108      -7.200  10.647 -25.284  1.00 23.55  O  
ATOM 2346  O   HOH A 109       5.558  34.594 -35.866  1.00 21.15  O  
ATOM 2347  O   HOH A 111      -7.714  16.506 -20.973  1.00 31.59  O  
ATOM 2348  O   HOH A 112     -13.073  25.939 -33.716  1.00 19.33  O  
ATOM 2349  O   HOH A 113      11.947  20.837 -23.956  1.00 47.65  O  
ATOM 2350  O   HOH A 114      -9.746  18.498 -16.237  0.50 50.48  O  
ATOM 2351  O   HOH A 115       8.882  14.953 -44.331  1.00 16.03  O  
ATOM 2352  O   HOH A 116       7.857  37.418 -28.860  1.00 30.75  O  
ATOM 2353  O   HOH A 117     -17.279  22.909 -25.907  0.50 46.46  O  
ATOM 2354  O   HOH A 118       7.927  33.211 -30.190  1.00 19.37  O  
ATOM 2355  O   HOH A 119       6.318  23.247 -25.127  1.00 16.71  O  
ATOM 2356  O   HOH A 120      -9.625  32.923 -31.269  1.00 22.04  O  
ATOM 2357  O   HOH A 121      -7.361  34.462 -31.317  1.00 26.55  O  
ATOM 2358  O   HOH A 122     -17.233  20.930 -32.879  1.00 33.89  O  
ATOM 2359  O   HOH A 123      12.598  17.233 -33.728  1.00 22.11  O  
ATOM 2360  O   HOH A 124     -11.345  32.752 -36.815  1.00 24.47  O  
ATOM 2361  O   HOH A 125      12.329   2.183 -31.041  1.00 35.38  O  
ATOM 2362  O   HOH A 127     -15.310  12.088 -28.366  1.00 34.59  O  
ATOM 2363  O   HOH A 128     -10.228  25.263 -28.486  1.00 22.20  O  
ATOM 2364  O   HOH A 129      -6.187   4.452 -28.658  1.00 25.37  O  
ATOM 2365  O   HOH A 131     -10.547  16.176 -19.971  1.00 48.68  O  
ATOM 2366  O   HOH A 132      -1.508   8.814 -26.380  1.00 19.37  O  
ATOM 2367  O   HOH A 133      16.851  21.983 -40.540  1.00 31.58  O  
ATOM 2368  O   HOH A 134       3.493  11.280 -39.354  1.00 20.32  O  
ATOM 2369  O  AHOH A 135       3.343  10.778 -20.927  0.47 22.61  O  
ATOM 2370  O  BHOH A 135       3.394   7.259 -21.732  0.53 18.00  O  
ATOM 2371  O   HOH A 137      17.223  18.707 -45.679  1.00 25.59  O  
ATOM 2372  O   HOH A 138     -13.352  26.124 -22.237  1.00 64.02  O  
ATOM 2373  O   HOH A 139      -9.965   8.890 -24.000  1.00 43.00  O  
ATOM 2374  O   HOH A 140      -4.241   2.071 -29.185  1.00163.93  O  
ATOM 2375  O   HOH A 141      -7.203  34.181 -38.194  1.00 21.10  O  
ATOM 2376  O   HOH A 143      -3.958   6.442 -20.556  1.00 37.48  O  
ATOM 2377  O   HOH A 144       5.045   3.071 -31.407  1.00 24.14  O  
ATOM 2379  O   HOH A 146     -13.058   8.412 -30.835  1.00 27.24  O  
ATOM 2380  O   HOH A 147      -4.668  20.441 -16.215  1.00 22.69  O  
ATOM 2381  O   HOH A 148     -12.205  13.604 -38.805  1.00 40.59  O  
ATOM 2382  O   HOH A 149      19.366  14.873 -43.745  1.00 47.66  O  
ATOM 2383  O   HOH A 150     -12.059  31.791 -15.938  1.00 62.41  O  
ATOM 2384  O   HOH A 151      -7.035   2.170 -33.927  1.00 39.47  O  
ATOM 2385  O   HOH A 152      12.798  28.887 -26.995  1.00 24.30  O  
ATOM 2386  O   HOH A 153      -5.128  36.742 -34.647  1.00 46.78  O  
ATOM 2387  O   HOH A 154      14.543  23.775 -31.828  1.00 22.81  O  
ATOM 2388  O   HOH A 155       5.726  36.388 -13.336  1.00 32.05  O  
ATOM 2389  O   HOH A 156      -4.354   1.999 -33.727  1.00 47.18  O  
ATOM 2390  O   HOH A 157      11.378  17.921 -24.997  1.00 41.96  O  
ATOM 2391  O   HOH A 159       6.179   7.308 -25.997  1.00 56.96  O  
ATOM 2392  O   HOH A 160      -7.492  36.775 -32.926  1.00 56.28  O  
ATOM 2393  O   HOH A 161      12.481   6.677 -36.564  1.00 33.37  O  
ATOM 2394  O   HOH A 162     -13.566  32.920 -18.115  1.00 65.89  O  
ATOM 2395  O   HOH A 163     -12.249  25.590 -26.582  1.00 41.23  O  
ATOM 2396  O   HOH A 164       0.019  15.852 -36.732  1.00 25.63  O  
ATOM 2397  O   HOH A 165      -3.300  35.641 -35.681  1.00 30.33  O  
ATOM 2398  O   HOH A 166      13.102  19.773 -47.900  1.00 22.91  O  
ATOM 2399  O   HOH A 168      -3.599   1.132 -37.286  1.00 62.93  O  
ATOM 2400  O   HOH A 169      -8.053   2.566 -38.795  1.00 43.90  O  
ATOM 2401  O   HOH A 170       5.707   9.583 -39.810  1.00 23.64  O  
ATOM 2402  O   HOH A 171     -18.268  12.635 -31.017  1.00 42.49  O  
ATOM 2403  O  AHOH A 172       0.678  37.077 -35.843  0.50 20.10  O  
ATOM 2404  O  BHOH A 172      -1.101  38.480 -37.341  0.50 29.43  O  
ATOM 2405  O   HOH A 173      -0.673  39.350 -29.268  1.00 32.61  O  
ATOM 2406  O   HOH A 174       6.826   9.248 -27.831  1.00 32.89  O  
ATOM 2407  O   HOH A 175      -7.661   3.635 -32.064  1.00 34.22  O  
ATOM 2408  O   HOH A 176       1.946  30.944 -10.568  1.00 89.96  O  
ATOM 2409  O   HOH A 177      -8.979  22.974 -17.734  1.00 44.82  O  
ATOM 2410  O  AHOH A 178      -7.890  40.543 -24.795  0.58 29.01  O  
ATOM 2411  O  BHOH A 178      -4.514  42.847 -24.251  0.41 28.65  O  
ATOM 2412  O   HOH A 179     -11.404  39.007 -20.154  1.00 48.23  O  
ATOM 2413  O   HOH A 180       6.378   7.366 -38.212  1.00 26.51  O  
ATOM 2414  O   HOH A 181       9.199   6.077 -37.300  1.00 32.88  O  
ATOM 2415  O   HOH A 182      13.704  25.122 -43.392  1.00 19.34  O  
ATOM 2416  O   HOH A 183      -7.226  16.454 -14.708  1.00 32.53  O  
ATOM 2417  O   HOH A 184      -0.690  -0.977 -25.341  1.00 36.24  O  
ATOM 2418  O   HOH A 185       6.172  38.223 -17.072  1.00 33.70  O  
ATOM 2419  O   HOH A 186      15.651  20.087 -35.506  1.00 29.67  O  
ATOM 2420  O   HOH A 187      -8.510   9.490 -41.062  1.00 30.12  O  
ATOM 2421  O   HOH A 188      -7.297  -2.941 -29.537  1.00335.48  O  
ATOM 2422  O   HOH A 189       2.826  37.953 -34.436  1.00 59.09  O  
ATOM 2423  O   HOH A 190       9.175   8.111 -28.635  1.00 31.10  O  
ATOM 2424  O   HOH A 191     -15.106  29.936 -32.223  1.00 37.49  O  
ATOM 2425  O   HOH A 192       0.313  42.270 -16.951  1.00 32.52  O  
ATOM 2426  O   HOH A 194      -5.863   9.237 -39.570  1.00 36.13  O  
ATOM 2427  O   HOH A 195     -12.118   9.846 -24.204  1.00 40.45  O  
ATOM 2428  O   HOH A 196      -5.711  39.350 -17.899  1.00 56.35  O  
ATOM 2429  O   HOH A 197       3.943  15.237 -21.725  1.00 29.41  O  
ATOM 2430  O   HOH A 199      -8.525   4.396 -27.703  1.00 58.30  O  
ATOM 2431  O   HOH A 200       6.819  38.772 -14.652  1.00 39.28  O  
ATOM 2432  O   HOH A 201      10.696  10.194 -41.347  1.00 44.88  O  
ATOM 2433  O  AHOH A 202       5.708  39.198 -30.967  0.50 32.28  O  
ATOM 2434  O  BHOH A 202       5.533  39.773 -29.591  0.50 27.58  O  
ATOM 2435  O   HOH A 203       3.734  12.975 -23.342  1.00 25.53  O  
ATOM 2436  O   HOH A 204      -5.651  40.638 -22.956  1.00 32.09  O  
ATOM 2437  O   HOH A 205       0.288   2.502 -23.394  1.00 55.86  O  
ATOM 2438  O   HOH A 206       3.821  26.180 -48.087  1.00 34.85  O  
ATOM 2439  O   HOH A 207       9.498  22.504 -48.018  1.00 22.79  O  
ATOM 2440  O   HOH A 208     -12.057   3.953 -37.742  1.00 53.40  O  
ATOM 2441  O   HOH A 209       3.946  45.188 -25.710  1.00 32.01  O  
ATOM 2442  O   HOH A 211       2.805   1.864 -28.466  1.00 44.47  O  
ATOM 2443  O   HOH A 212      18.018  19.688 -37.127  1.00 41.97  O  
ATOM 2444  O  AHOH A 213       7.261  26.069 -17.727  0.40 19.96  O  
ATOM 2445  O  BHOH A 213       9.007  26.003 -17.429  0.60 48.95  O  
ATOM 2446  O   HOH A 214       0.493  28.503 -48.806  1.00 23.27  O  
ATOM 2447  O   HOH A 216      14.746  31.221 -30.503  1.00 35.24  O  
ATOM 2448  O   HOH A 217      14.889  30.052 -28.097  1.00 42.36  O  
ATOM 2449  O   HOH A 219      10.882  18.320 -19.268  1.00 57.12  O  
ATOM 2450  O   HOH A 221       4.451  23.228 -48.043  1.00 22.82  O  
ATOM 2451  O   HOH A 222       1.736  31.349 -45.503  1.00 22.75  O  
ATOM 2452  O  AHOH A 224      11.252  38.015 -21.741  0.48 31.04  O  
ATOM 2453  O  BHOH A 224       9.796  36.294 -20.769  0.52 26.52  O  
ATOM 2454  O   HOH A 225       1.377  45.964 -25.844  1.00 82.59  O  
ATOM 2455  O   HOH A 226      -2.067  43.974 -24.503  1.00 48.05  O  
ATOM 2456  O   HOH A 227      -5.138  33.788 -14.555  1.00 36.41  O  
ATOM 2457  O   HOH A 228       4.103  41.201 -16.768  1.00 34.76  O  
ATOM 2458  O   HOH A 229      -0.182  43.181 -26.637  1.00 30.29  O  
ATOM 2459  O  AHOH A 230      -5.515  12.158 -38.769  0.50 19.44  O  
ATOM 2460  O  BHOH A 230      -6.410  13.299 -39.653  0.50 26.20  O  
ATOM 2461  O  AHOH A 231       4.806   4.908 -44.751  0.58 38.09  O  
ATOM 2462  O  BHOH A 231       3.281   6.263 -43.347  0.42 25.62  O  
ATOM 2463  O  AHOH A 234     -18.702   9.782 -34.538  0.50 38.27  O  
ATOM 2464  O  BHOH A 234     -18.073  12.250 -33.623  0.50 34.65  O  
ATOM 2465  O   HOH A 236      10.629  36.300 -28.229  1.00 56.87  O  
ATOM 2466  O   HOH A 237      17.117  10.914 -35.051  1.00 55.58  O  
ATOM 2467  O   HOH A 239      -2.376  36.435 -37.966  1.00 46.78  O  
ATOM 2468  O   HOH A 240      14.364  12.071 -46.206  1.00 33.48  O  
ATOM 2469  O  AHOH A 241      -9.851  14.427 -37.430  0.52 22.83  O  
ATOM 2470  O  BHOH A 241     -10.019  14.712 -38.089  0.48 30.46  O  
ATOM 2471  O   HOH A 243       2.591   1.199 -38.458  1.00 40.51  O  
ATOM 2472  O   HOH A 244       5.485   9.383 -43.329  1.00 54.31  O  
ATOM 2473  O   HOH A 246       1.174   3.101 -30.487  1.00 18.90  O  
ATOM 2474  O   HOH A 247      -0.474   0.977 -30.993  1.00 28.41  O  
ATOM 2475  O   HOH A 248      -2.381   0.479 -32.980  1.00 32.44  O  
ATOM 2476  O   HOH A 249       3.885   0.646 -31.701  1.00 32.40  O  
ATOM 2477  O   HOH A 250      -5.445  10.229 -16.552  1.00 36.12  O  
ATOM 2478  O   HOH A 251       9.523  12.083 -26.210  1.00 50.93  O  
ATOM 2479  O   HOH A 252      -1.079   1.943 -39.924  1.00 35.42  O  
ATOM 2480  O   HOH A 254      15.726   7.799 -34.296  1.00 74.31  O  
ATOM 2481  O   HOH A 255      -4.240   7.651 -41.272  1.00 27.53  O  
ATOM 2482  O   HOH A 256       4.587  37.305 -11.207  1.00 48.17  O  
ATOM 2483  O  AHOH A 257      -3.570  39.808 -19.062  0.59 28.62  O  
ATOM 2484  O  BHOH A 257      -2.049  42.193 -18.594  0.41 28.15  O  
ATOM 2485  O   HOH A 258      -3.532  20.318 -13.757  1.00 34.60  O  
ATOM 2486  O   HOH A 259      -7.939  21.563 -13.810  1.00 46.49  O  
ATOM 2487  O  AHOH A 260     -20.316  27.164 -31.042  0.00 31.89  O  
ATOM 2488  O  BHOH A 260     -18.764  28.879 -31.204  0.50 42.74  O  
ATOM 2489  O   HOH A 262       4.228  35.574 -33.729  1.00 86.53  O  
ATOM 2490  O   HOH A 263       4.136  29.616 -12.278  1.00 38.35  O  
ATOM 2491  O   HOH A 266      -2.702  19.826 -44.369  1.00 20.63  O  
ATOM 2492  O   HOH A 267      -1.169  15.957 -45.143  1.00 14.29  O  
ATOM 2496  O   HOH A 274       1.898  17.390 -37.219  1.00 18.28  O  
ATOM 2497  O   HOH A 275      11.247  12.385 -47.261  1.00 48.63  O  
ATOM 2498  O   HOH A 276       8.323  12.867 -46.035  1.00 25.04  O  
ATOM 2499  O   HOH A 277       2.316   8.741 -43.976  1.00 34.93  O  
ATOM 2500  O   HOH A 278       3.923  11.446 -43.351  1.00 18.55  O  
ATOM 2501  O   HOH A 279       2.232  -0.091 -41.515  1.00 73.91  O  
ATOM 2502  O   HOH A 280      16.280  22.524 -43.449  1.00 43.46  O  
ATOM 2504  O   HOH A 283      18.013  31.396 -40.305  1.00 36.60  O  
ATOM 2505  O   HOH A 285      -4.563  33.064 -41.806  1.00 21.56  O  
ATOM 2506  O   HOH A 286      -2.478  34.562 -41.132  1.00 25.47  O  
ATOM 2507  O   HOH A 287      -2.277  33.625 -45.727  1.00 18.85  O  
ATOM 2508  O   HOH A 288      -2.453  34.236 -25.704  1.00 22.88  O  
ATOM 2509  O   HOH A 289      -3.604  35.922 -28.352  1.00 24.87  O  
ATOM 2510  O   HOH A 290     -16.278  22.455 -39.072  1.00 35.70  O  
ATOM 2511  O   HOH A 291     -15.480  24.693 -40.469  1.00 24.37  O  
ATOM 2512  O   HOH A 292     -13.270  22.205 -50.763  1.00 24.79  O  
ATOM 2513  O   HOH A 293     -15.350  21.588 -52.242  1.00 24.18  O  
ATOM 2514  O   HOH A 294      -5.907  22.482 -52.137  1.00 18.68  O  
ATOM 2515  O   HOH A 295      -0.154  20.274 -45.152  1.00 20.09  O  
ATOM 2516  O   HOH A 296       0.937  20.708 -47.708  1.00 21.77  O  
ATOM 2517  O   HOH A 297     -12.753  24.685 -49.625  1.00 27.86  O  
ATOM 2518  O   HOH A 298     -19.939  16.334 -38.931  1.00 57.28  O  
ATOM 2522  O   HOH A 302      -9.915  37.497 -58.431  1.00 28.27  O  
ATOM 2523  O   HOH A 303      13.243  37.173 -37.484  1.00 28.11  O  
ATOM 2525  O   HOH A 305      15.759  19.836 -47.797  1.00 27.61  O  
ATOM 2526  O   HOH A 306       2.168  26.997 -49.988  1.00 34.53  O  
ATOM 2527  O   HOH A 307      10.615  40.806 -34.205  1.00 35.86  O  
ATOM 2528  O   HOH A 308      16.641  24.358 -46.102  1.00 36.28  O  
ATOM 2529  O   HOH A 309      14.999  26.071 -45.427  1.00 31.56  O  
ATOM 2530  O   HOH A 310      18.947  21.020 -44.796  1.00 37.16  O  
ATOM 2531  O   HOH A 311      18.958  16.833 -46.270  1.00 49.10  O  
ATOM 2532  O   HOH C   1       0.687  28.888 -46.114  1.00 30.00  O  
ATOM 2533  O   HOH C   2       1.310  12.262 -23.809  1.00 30.00  O  
ATOM 2534  O   HOH C   3      -5.506  24.469 -50.261  1.00 30.00  O  
ATOM 2535  O   HOH C   4      -4.537   6.847 -63.694  1.00 30.00  O  
ATOM 2536  O   HOH C   5      -3.465   7.950 -69.119  1.00 30.00  O  
ATOM 2537  O   HOH C   6      -0.689   7.516 -68.987  1.00 30.00  O  
ATOM 2538  O   HOH C   7       1.465  15.227 -34.512  1.00 30.00  O  
ATOM 2539  O   HOH C   8      -2.922  18.033 -64.005  1.00 30.00  O  
ATOM 2540  O   HOH C   9       3.548  20.695 -46.949  1.00 30.00  O  
ATOM 2541  O   HOH C  10      10.780  26.497 -49.641  1.00 30.00  O  
ATOM 2542  O   HOH C  11      12.634  33.426 -36.465  1.00 30.00  O  
ATOM 2543  O   HOH C  12       5.786  16.537 -22.901  1.00 30.00  O  
ATOM 2544  O   HOH C  13      12.937  27.054 -46.857  1.00 30.00  O  
ATOM 2545  O   HOH C  14       6.502  39.336 -35.949  1.00 30.00  O  
ATOM 2546  O   HOH C  15      -5.761  36.080 -43.647  1.00 30.00  O  
ATOM 2547  O   HOH C  16      -7.585  11.943 -13.663  1.00 30.00  O  
ATOM 2548  O   HOH C  17      -9.688  16.619 -59.660  1.00 30.00  O  
ATOM 2549  O   HOH C  18       4.944   3.723 -66.311  1.00 30.00  O  
ATOM 2550  O   HOH C  19      13.295  23.779 -49.541  1.00 30.00  O  
ATOM 2551  O   HOH C  20       1.485  21.758 -54.204  1.00 30.00  O  
ATOM 2552  O   HOH C  21      -3.366   8.671 -19.425  1.00 30.00  O  
ATOM 2553  O   HOH C  22      -5.683   9.873 -19.059  1.00 30.00  O  
ATOM 2554  O   HOH C  23       2.140   1.764 -65.514  1.00 30.00  O  
ATOM 2555  O   HOH C  24     -14.440  19.170 -24.241  1.00 30.00  O  
ATOM 2556  O   HOH C  25     -12.733   8.522 -18.759  1.00 30.00  O  
ATOM 2557  O   HOH C  26      -7.769  14.288 -44.900  1.00 30.00  O  
ATOM 2559  O   HOH C  28      11.554  36.742 -33.603  1.00 30.00  O  
ATOM 2560  O   HOH C  29     -12.352   9.366 -16.171  1.00 30.00  O  
ATOM 2561  O   HOH C  30      -1.757  24.193 -52.094  1.00 30.00  O  
ATOM 2562  O   HOH C  31     -16.515  14.170 -29.781  1.00 30.00  O  
ATOM 2563  O   HOH C  32      -8.003   8.675 -21.019  1.00 30.00  O  
ATOM 2564  O   HOH C  33      -3.444  25.239 -54.158  1.00 30.00  O  
ATOM 2565  O   HOH C  34      -7.938  30.384 -51.979  1.00 30.00  O  
ATOM 2566  O   HOH C  35       2.468  17.449 -50.602  1.00 30.00  O  
ATOM 2567  O   HOH C  36      -6.188  24.781 -66.689  1.00 30.00  O  
ATOM 2568  O   HOH C  37      -6.617  22.749 -16.042  1.00 30.00  O  
ATOM 2569  O   HOH C  38      -0.619  14.262 -67.206  1.00 30.00  O  
ATOM 2570  O   HOH C  39      -9.580  32.602 -44.185  1.00 30.00  O  
ATOM 2571  O   HOH C  40       1.662   4.063 -56.615  1.00 30.00  O  
ATOM 2572  O   HOH C  41       0.933  22.593 -49.906  1.00 30.00  O  
ATOM 2573  O   HOH C  42      -3.043  35.748 -44.230  1.00 30.00  O  
ATOM 2574  O   HOH C  43       6.140  34.562 -32.067  1.00 30.00  O  
ATOM 2575  O   HOH C  44     -10.742  35.560 -28.151  1.00 30.00  O  
ATOM 2576  O   HOH C  45      -1.839  22.026 -58.550  1.00 30.00  O  
ATOM 2577  O   HOH C  46     -11.484  34.620 -32.648  1.00 30.00  O  
ATOM 2578  O   HOH C  47      14.664  34.861 -34.845  1.00 30.00  O  
ATOM 2579  O   HOH C  48      -6.236  35.576 -29.116  1.00 30.00  O  
ATOM 2580  O   HOH C  49     -13.538  15.049 -57.534  1.00 30.00  O  
ATOM 2581  O   HOH C  50      -1.601   5.182 -20.763  1.00 30.00  O  
ATOM 2582  O   HOH C  51      -8.513  35.035 -42.937  1.00 30.00  O  
ATOM 2583  O   HOH C  52      -0.509  13.527 -64.430  1.00 30.00  O  
ATOM 2584  O   HOH C  53      -9.850   6.324 -24.875  1.00 30.00  O  
ATOM 2585  O   HOH C  54      -7.787   6.272 -22.362  1.00 30.00  O  
ATOM 2586  O   HOH C  55       2.358   9.462 -64.261  1.00 30.00  O  
ATOM 2587  O   HOH C  56      -3.487  13.317 -66.019  1.00 30.00  O  
ATOM 2588  O   HOH C  57      -0.253  -5.415 -47.284  1.00 30.00  O  
ATOM 2589  O   HOH C  58      13.974  31.730 -38.203  1.00 30.00  O  
ATOM 2590  O   HOH C  59      12.195  34.379 -32.195  1.00 30.00  O  
ATOM 2591  O   HOH C  60     -21.708  20.859 -55.420  1.00 30.00  O  
ATOM 2592  O   HOH C  61     -15.348  10.282 -46.446  1.00 30.00  O  
ATOM 2593  O   HOH C  62       2.963  21.782 -51.323  1.00 30.00  O  
ATOM 2594  O   HOH C  63      -7.307   6.476 -64.455  1.00 30.00  O  
ATOM 2595  O   HOH C  64     -11.376  14.406 -59.725  1.00 30.00  O  
ATOM 2596  O   HOH C  65      10.159  34.915 -30.356  1.00 30.00  O  
ATOM 2597  O   HOH C  66       4.101  19.428 -50.886  1.00 30.00  O  
ATOM 2598  O   HOH C  67     -11.104  34.217 -45.726  1.00 30.00  O  
ATOM 2599  O   HOH C  68       5.358  19.708 -48.662  1.00 30.00  O  
ATOM 2600  O   HOH C  69      -3.346   2.621 -44.714  1.00 30.00  O  
ATOM 2601  O   HOH C  70      -9.453  32.208 -53.173  1.00 30.00  O  
ATOM 2602  O   HOH C  71       2.337   1.898 -58.916  1.00 30.00  O  
ATOM 2603  O   HOH C  72      -7.721  34.427 -47.909  1.00 30.00  O  
ATOM 2604  O   HOH C  73      16.829  28.278 -44.664  1.00 30.00  O  
ATOM 2605  O   HOH C  74     -10.540  36.403 -18.888  1.00 30.00  O  
ATOM 2606  O   HOH C  75      -1.443  23.991 -60.849  1.00 30.00  O  
ATOM 2607  O   HOH C  76     -16.952  15.622 -27.468  1.00 30.00  O  
ATOM 2608  O   HOH C  77       2.068  12.105 -63.903  1.00 30.00  O  
ATOM 2609  O   HOH C  78     -13.882  28.256 -29.870  1.00 30.00  O  
ATOM 2610  O   HOH C  79      -3.417  23.201 -67.341  1.00 30.00  O  
ATOM 2611  O   HOH C  80      16.950  33.091 -35.082  1.00 30.00  O  
ATOM 2612  O   HOH C  81      16.894  28.940 -40.059  1.00 30.00  O  
ATOM 2613  O   HOH C  82       1.916   9.042 -40.885  1.00 30.00  O  
ATOM 2614  O   HOH C  83      -4.136   3.936 -65.735  1.00 30.00  O  
ATOM 2615  O   HOH C  84     -11.015   7.373 -61.136  1.00 30.00  O  
ATOM 2616  O   HOH C  85     -11.594   6.222 -63.829  1.00 30.00  O  
ATOM 2617  O   HOH C  86       7.808  21.076 -49.513  1.00 30.00  O  
ATOM 2618  O   HOH C  87      -9.319   7.734 -43.070  1.00 30.00  O  
ATOM 2619  O   HOH C  88       2.987  18.410 -15.929  1.00 30.00  O  
ATOM 2620  O   HOH C  89     -11.950  31.127 -43.560  1.00 30.00  O  
ATOM 2621  O   HOH C  90       6.856  36.995 -32.055  1.00 30.00  O  
ATOM 2622  O   HOH C  91      -9.684  16.350 -62.596  1.00 30.00  O  
ATOM 2623  O   HOH C  92       8.635  30.172 -19.315  1.00 30.00  O  
ATOM 2624  O   HOH C  93      -3.862  23.049 -64.550  1.00 30.00  O  
ATOM 2625  O   HOH C  94      -4.176  30.890 -14.889  1.00 30.00  O  
ATOM 2626  O   HOH C  95      -8.758  36.678 -47.359  1.00 30.00  O  
ATOM 2627  O   HOH C  96       7.602  14.316 -22.874  1.00 30.00  O  
ATOM 2628  O   HOH C  97      12.595  19.409 -29.552  1.00 30.00  O  
ATOM 2629  O   HOH C  98      -5.309   3.984 -41.114  1.00 30.00  O  
ATOM 2630  O   HOH C  99       2.023  24.305 -48.491  1.00 30.00  O  
ATOM 2631  O   HOH C 100       2.187  25.383 -11.731  1.00 30.00  O  
ATOM 2632  O   HOH C 101      14.435   3.757 -30.955  1.00 30.00  O  
ATOM 2633  O   HOH C 102      -5.183   1.305 -61.760  1.00 30.00  O  
ATOM 2634  O   HOH C 103       4.805  47.440 -24.003  1.00 30.00  O  
ATOM 2635  O   HOH C 104      -6.102  -6.016 -50.429  1.00 30.00  O  
ATOM 2636  O   HOH C 105     -12.556  17.247 -21.858  1.00 30.00  O  
ATOM 2637  O   HOH C 106     -23.771  18.511 -49.022  1.00 30.00  O  
ATOM 2638  O   HOH C 107       9.177  37.792 -18.187  1.00 30.00  O  
ATOM 2639  O   HOH C 108      -6.291  26.732 -54.116  1.00 30.00  O  
ATOM 2640  O   HOH C 109       4.910  37.182 -35.474  1.00 30.00  O  
ATOM 2641  O   HOH C 110     -17.207  23.977 -35.876  1.00 30.00  O  
ATOM 2642  O   HOH C 111     -17.531  26.339 -40.193  1.00 30.00  O  
ATOM 2643  O   HOH C 112      -9.447  36.637 -40.470  1.00 30.00  O  
ATOM 2644  O   HOH C 113     -12.700  28.002 -48.985  1.00 30.00  O  
ATOM 2645  O   HOH C 114       7.483  17.800 -49.255  1.00 30.00  O  
ATOM 2646  O   HOH C 115      -8.550  38.067 -44.729  1.00 30.00  O  
ATOM 2647  O   HOH C 116      -0.169  25.445 -12.192  1.00 30.00  O  
ATOM 2648  O   HOH C 117      10.890  30.469 -23.294  1.00 30.00  O  
ATOM 2649  O   HOH C 118      -9.067   1.422 -35.546  1.00 30.00  O  
ATOM 2650  O   HOH C 119       4.325  10.200 -66.076  1.00 30.00  O  
ATOM 2651  O   HOH C 120     -20.791  23.480 -54.447  1.00 30.00  O  
ATOM 2652  O   HOH C 121     -11.009  38.418 -41.185  1.00 30.00  O  
ATOM 2653  O   HOH C 122      15.201  37.271 -35.594  1.00 30.00  O  
ATOM 2654  O   HOH C 123     -17.531  18.330 -26.916  1.00 30.00  O  
ATOM 2655  O   HOH C 124     -13.042  27.100 -15.982  1.00 30.00  O  
ATOM 2656  O   HOH C 125      -9.710  34.966 -37.850  1.00 30.00  O  
ATOM 2657  O   HOH C 126       1.153  -0.184 -66.252  1.00 30.00  O  
ATOM 2658  O   HOH C 127      -9.588  37.421 -27.013  1.00 30.00  O  
ATOM 2659  O   HOH C 128      11.319  43.712 -23.078  1.00 30.00  O  
ATOM 2660  O   HOH C 129       4.572   5.168 -23.778  1.00 30.00  O  
ATOM 2661  O   HOH C 130       6.057  12.563 -24.837  1.00 30.00  O  
ATOM 2662  O   HOH C 131       0.711  21.540 -59.090  1.00 30.00  O  
ATOM 2663  O   HOH C 132      11.795  32.765 -22.407  1.00 30.00  O  
ATOM 2664  O   HOH C 133       6.550  26.332 -13.169  1.00 30.00  O  
ATOM 2665  O   HOH C 134       1.810  14.686 -14.355  1.00 30.00  O  
ATOM 2666  O   HOH C 135      17.251  15.177 -32.609  1.00 30.00  O  
ATOM 2667  O   HOH C 136     -10.895  35.903 -35.230  1.00 30.00  O  
ATOM 2668  O   HOH C 137      -9.059  20.944 -22.630  1.00 30.00  O  
ATOM 2669  O   HOH C 138      12.293  29.604 -45.259  1.00 30.00  O  
ATOM 2672  O   HOH C 141      -1.037  36.155 -43.204  1.00 30.00  O  
ATOM 2673  O   HOH C 142       1.082  25.832 -51.921  1.00 30.00  O  
ATOM 2674  O   HOH C 143      -2.450   2.546 -20.956  1.00 30.00  O  
ATOM 2675  O   HOH C 144      -7.978  40.912 -43.510  1.00 30.00  O  
ATOM 2676  O   HOH C 145     -10.301  19.191 -63.552  1.00 30.00  O  
ATOM 2677  O   HOH C 146       7.198  12.119 -27.077  1.00 30.00  O  
ATOM 2678  O   HOH C 147      -8.442   7.340 -66.926  1.00 30.00  O  
ATOM 2679  O   HOH C 148      -6.597   4.720 -20.108  1.00 30.00  O  
ATOM 2680  O   HOH C 149      16.408  30.902 -37.014  1.00 30.00  O  
ATOM 2681  O   HOH C 150      14.728  21.080 -30.890  1.00 30.00  O  
ATOM 2682  O   HOH C 151      -9.687   9.762 -65.728  1.00 30.00  O  
ATOM 2683  O   HOH C 152      -9.887  34.194 -50.763  1.00 30.00  O  
ATOM 2684  O   HOH C 153      15.841  19.672 -32.700  1.00 30.00  O  
ATOM 2685  O   HOH C 154      12.832  17.817 -31.060  1.00 30.00  O  
ATOM 2686  O   HOH C 155      17.460  38.108 -36.805  1.00 30.00  O  
ATOM 2687  O   HOH C 156       2.667   3.747 -22.742  1.00 30.00  O  
ATOM 2689  O   HOH C 158       1.806  22.266 -61.250  1.00 30.00  O  
ATOM 2690  O   HOH C 159      16.440  28.462 -35.842  1.00 30.00  O  
ATOM 2691  O   HOH C 160      -8.582  37.405 -35.441  1.00 30.00  O  
ATOM 2693  O   HOH C 162      -4.983  40.946 -43.126  1.00 30.00  O  
ATOM 2695  O   HOH C 164      -5.177   2.339 -20.105  1.00 30.00  O  
ATOM 2696  O   HOH C 165      -9.654   4.777 -67.672  1.00 30.00  O  
ATOM 2697  O   HOH C 166      -1.738   0.099 -19.501  1.00 30.00  O  
ATOM 2699  O   HOH C 168      -4.068  40.094 -45.561  1.00 30.00  O  
END
[規則26に基づく補充 28.08.2009] 
Figure WO-DOC-RO134

Claims (29)

  1.  以下のステップを含む、変異型酵素の設計法:
     (1)蛋白質脱アミド酵素(変異対象酵素)のアミノ酸配列において、以下の群、即ち配列番号:2に示すアミノ酸配列の35位アミノ酸に相当するアミノ酸、38位アミノ酸に相当するアミノ酸、39位アミノ酸に相当するアミノ酸、40位アミノ酸に相当するアミノ酸、41位アミノ酸に相当するアミノ酸、42位アミノ酸に相当するアミノ酸、43位アミノ酸に相当するアミノ酸、45位アミノ酸に相当するアミノ酸、46位アミノ酸に相当するアミノ酸、49位アミノ酸に相当するアミノ酸、79位アミノ酸に相当するアミノ酸、80位アミノ酸に相当するアミノ酸、81位アミノ酸に相当するアミノ酸、82位アミノ酸に相当するアミノ酸、83位アミノ酸に相当するアミノ酸、84位アミノ酸に相当するアミノ酸、103位アミノ酸に相当するアミノ酸、104位アミノ酸に相当するアミノ酸、105位アミノ酸に相当するアミノ酸、106位アミノ酸に相当するアミノ酸、117位アミノ酸に相当するアミノ酸、142位アミノ酸に相当するアミノ酸、143位アミノ酸に相当するアミノ酸、146位アミノ酸に相当するアミノ酸、166位アミノ酸に相当するアミノ酸、及び185位アミノ酸に相当するアミノ酸からなる群より選択される一又は二以上のアミノ酸を特定するステップ;
     (2)変異対象酵素のアミノ酸配列を基にして、ステップ(1)で特定されたアミノ酸が他のアミノ酸に置換された、又は削除されたアミノ酸配列を構築するステップ。
  2.  ステップ(1)において、配列番号:2に示すアミノ酸配列の39位アミノ酸に相当するアミノ酸、40位アミノ酸に相当するアミノ酸、41位アミノ酸に相当するアミノ酸、43位アミノ酸に相当するアミノ酸、79位アミノ酸に相当するアミノ酸、80位アミノ酸に相当するアミノ酸、81位アミノ酸に相当するアミノ酸、82位アミノ酸に相当するアミノ酸、142位アミノ酸に相当するアミノ酸、143位アミノ酸に相当するアミノ酸、146位アミノ酸に相当するアミノ酸、166位アミノ酸に相当するアミノ酸、及び185位アミノ酸に相当するアミノ酸からなる群より選択される一又は二以上のアミノ酸が特定される、請求項1に記載の変異型酵素の設計法。
  3.  ステップ(1)において、配列番号:2に示すアミノ酸配列の82位アミノ酸に相当するアミノ酸が特定される、請求項1に記載の変異型酵素の設計法。
  4.  ステップ(1)において、配列番号:2に示すアミノ酸配列の35位アミノ酸に相当するアミノ酸、38位アミノ酸に相当するアミノ酸、40位アミノ酸に相当するアミノ酸、41位アミノ酸に相当するアミノ酸、42位アミノ酸に相当するアミノ酸、43位アミノ酸に相当するアミノ酸、45位アミノ酸に相当するアミノ酸、46位アミノ酸に相当するアミノ酸、49位アミノ酸に相当するアミノ酸、80位アミノ酸に相当するアミノ酸、81位アミノ酸に相当するアミノ酸、82位アミノ酸に相当するアミノ酸、83位アミノ酸に相当するアミノ酸、84位アミノ酸に相当するアミノ酸、103位アミノ酸に相当するアミノ酸、104位アミノ酸に相当するアミノ酸、105位アミノ酸に相当するアミノ酸、106位アミノ酸に相当するアミノ酸、及び117位アミノ酸に相当するアミノ酸からなる群より選択される一又は二以上のアミノ酸が特定される、請求項1に記載の変異型酵素の設計法。
  5.  ステップ(1)において、配列番号:2に示すアミノ酸配列の84位アミノ酸に相当するアミノ酸が特定される、請求項1に記載の変異型酵素の設計法。
  6.  ステップ(1)におけるアミノ酸の特定が、前記変異対象酵素のアミノ酸配列と配列番号:2に示すアミノ酸配列との比較、及び/又は前記変異対象酵素の立体構造と配列番号:2に示すアミノ酸配列からなる酵素の立体構造との比較によって行われる、請求項1~5のいずれか一項に記載の変異型酵素の設計法。
  7.  ステップ(1)において特定されたアミノ酸を、電荷状態の異なるアミノ酸に置換する、請求項1~6のいずれか一項に記載の変異型酵素の設計法。
  8.  前記変異対象酵素が野生型酵素である、請求項1~7のいずれか一項に記載の変異型酵素の設計法。
  9.  前記変異対象酵素が微生物由来の蛋白質脱アミド酵素である、請求項1~8のいずれか一項に記載の変異型酵素の設計法。
  10.  前記変異対象酵素がクリセロバクテリウム属由来のプロテイングルタミナーゼである、請求項9に記載の変異型酵素の設計法。
  11.  前記変異対象酵素がクリセロバクテリウム・プロテオリティカム由来のプロテイングルタミナーゼである、請求項9に記載の変異型酵素の設計法。
  12.  前記変異対象酵素のアミノ酸配列が、配列番号:2に示すアミノ酸配列と70%以上の同一性を有する、請求項1~11のいずれか一項に記載の変異型酵素の設計法。
  13.  以下のステップを含む、変異型酵素の設計法:
     (1)蛋白質脱アミド酵素(変異対象酵素)のプロ体の構造解析を行い、基質特異性又は酸化安定性に関与する、一又は二以上のアミノ酸を特定するステップ;
     (2)変異対象酵素のアミノ酸配列を基にして、ステップ(1)で特定されたアミノ酸が他のアミノ酸に置換された、又は削除されたアミノ酸配列を構築するステップ。
  14.  以下のステップを含む、変異型酵素の調製法:
     (1)請求項1~13のいずれか一項に記載の設計法によって構築されたアミノ酸配列をコードする核酸を用意するステップ;
     (2)前記核酸を発現させるステップ、及び
     (3)発現産物を回収するステップ。
  15.  蛋白質脱アミド酵素(変異対象酵素)のアミノ酸配列において、以下の群、即ち配列番号:2に示すアミノ酸配列の35位アミノ酸に相当するアミノ酸、38位アミノ酸に相当するアミノ酸、39位アミノ酸に相当するアミノ酸、40位アミノ酸に相当するアミノ酸、41位アミノ酸に相当するアミノ酸、42位アミノ酸に相当するアミノ酸、43位アミノ酸に相当するアミノ酸、45位アミノ酸に相当するアミノ酸、46位アミノ酸に相当するアミノ酸、49位アミノ酸に相当するアミノ酸、79位アミノ酸に相当するアミノ酸、80位アミノ酸に相当するアミノ酸、81位アミノ酸に相当するアミノ酸、82位アミノ酸に相当するアミノ酸、83位アミノ酸に相当するアミノ酸、84位アミノ酸に相当するアミノ酸、103位アミノ酸に相当するアミノ酸、104位アミノ酸に相当するアミノ酸、105位アミノ酸に相当するアミノ酸、106位アミノ酸に相当するアミノ酸、117位アミノ酸に相当するアミノ酸、142位アミノ酸に相当するアミノ酸、143位アミノ酸に相当するアミノ酸、146位アミノ酸に相当するアミノ酸、166位アミノ酸に相当するアミノ酸、及び185位アミノ酸に相当するアミノ酸が他のアミノ酸に置換された、又は削除されたアミノ酸配列からなる変異型酵素。
  16.  置換又は削除されるアミノ酸が、以下の群、即ち配列番号:2に示すアミノ酸配列の39位アミノ酸に相当するアミノ酸、40位アミノ酸に相当するアミノ酸、41位アミノ酸に相当するアミノ酸、43位アミノ酸に相当するアミノ酸、79位アミノ酸に相当するアミノ酸、80位アミノ酸に相当するアミノ酸、81位アミノ酸に相当するアミノ酸、82位アミノ酸に相当するアミノ酸、142位アミノ酸に相当するアミノ酸、143位アミノ酸に相当するアミノ酸、146位アミノ酸に相当するアミノ酸、166位アミノ酸に相当するアミノ酸、及び185位アミノ酸に相当するアミノ酸からなる群より選択される一又は二以上のアミノ酸である、請求項15に記載の変異型酵素。
  17.  置換又は削除されるアミノ酸が、配列番号:2に示すアミノ酸配列の82位アミノ酸に相当するアミノ酸である、請求項15に記載の変異型酵素。
  18.  置換又は削除されるアミノ酸が、以下の群、即ち配列番号:2に示すアミノ酸配列の35位アミノ酸に相当するアミノ酸、38位アミノ酸に相当するアミノ酸、40位アミノ酸に相当するアミノ酸、41位アミノ酸に相当するアミノ酸、42位アミノ酸に相当するアミノ酸、43位アミノ酸に相当するアミノ酸、45位アミノ酸に相当するアミノ酸、46位アミノ酸に相当するアミノ酸、49位アミノ酸に相当するアミノ酸、80位アミノ酸に相当するアミノ酸、81位アミノ酸に相当するアミノ酸、82位アミノ酸に相当するアミノ酸、83位アミノ酸に相当するアミノ酸、84位アミノ酸に相当するアミノ酸、103位アミノ酸に相当するアミノ酸、104位アミノ酸に相当するアミノ酸、105位アミノ酸に相当するアミノ酸、106位アミノ酸に相当するアミノ酸、及び117位アミノ酸に相当するアミノ酸からなる群より選択される一又は二以上のアミノ酸である、請求項15に記載の変異型酵素。
  19.  置換又は削除されるアミノ酸が、配列番号:2に示すアミノ酸配列の84位アミノ酸に相当するアミノ酸である、請求項15に記載の変異型酵素。
  20.  前記変異対象酵素が野生型酵素である、請求項15~19のいずれか一項に記載の変異型酵素。
  21.  前記変異対象酵素が微生物由来の蛋白質脱アミド酵素である、請求項15~20のいずれか一項に記載の変異型酵素。
  22.  前記変異対象酵素がクリセロバクテリウム属由来のプロテイングルタミナーゼである、請求項21に記載の変異型酵素。
  23.  前記変異対象酵素がクリセロバクテリウム・プロテオリティカム由来のプロテイングルタミナーゼである、請求項21に記載の変異型酵素。
  24.  前記変異対象酵素のアミノ酸配列が、配列番号:2に示すアミノ酸配列と70%以上の同一性を有する、請求項15~23のいずれか一項に記載の変異型酵素。
  25.  基質蛋白質に対する作用性が、前記変異対象酵素に比べて変化している、請求項16、17、20~23のいずれか一項に記載の変異型酵素。
  26.  過酸化水素に対する安定性が、前記変異対象酵素に比べて向上している、請求項18~23のいずれか一項に記載の変異型酵素。
  27.  請求項15~26のいずれか一項に記載の変異型酵素をコードする遺伝子。
  28.  請求項27に記載の遺伝子を含む組換えDNA。
  29.  請求項28に記載の組換えDNAを保有する微生物。
PCT/JP2009/003870 2008-09-09 2009-08-12 変異型酵素の設計法、調製法、及び変異型酵素 Ceased WO2010029685A1 (ja)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP09812834.1A EP2351837B1 (en) 2008-09-09 2009-08-12 Method for designing mutant enzyme, method for preparing mutant enzyme, and mutant enzyme
JP2010528603A JP5623282B2 (ja) 2008-09-09 2009-08-12 変異型酵素の設計法、調製法、及び変異型酵素
CN200980134865.4A CN102597232B (zh) 2008-09-09 2009-08-12 变异型酶的设计法、制备方法和变异型酶
US13/062,798 US8735131B2 (en) 2008-09-09 2009-08-12 Method for designing mutant protein deamidase
DK09812834.1T DK2351837T3 (da) 2008-09-09 2009-08-12 Fremgangsmåde til at designe mutant enzym, fremgangsmåde til at fremstille mutant enzym og mutant enzym

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2008230559 2008-09-09
JP2008-230559 2008-09-09

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2010029685A1 true WO2010029685A1 (ja) 2010-03-18

Family

ID=42004951

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2009/003870 Ceased WO2010029685A1 (ja) 2008-09-09 2009-08-12 変異型酵素の設計法、調製法、及び変異型酵素

Country Status (6)

Country Link
US (1) US8735131B2 (ja)
EP (1) EP2351837B1 (ja)
JP (1) JP5623282B2 (ja)
CN (1) CN102597232B (ja)
DK (1) DK2351837T3 (ja)
WO (1) WO2010029685A1 (ja)

Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107325977A (zh) * 2016-04-28 2017-11-07 华东师范大学 一种产蛋白质谷氨酰胺酶的方法、纯化及应用
CN107325978A (zh) * 2016-04-28 2017-11-07 华东师范大学 蛋白质谷氨酰胺酶产生菌及发酵产物的制备与应用
WO2019049927A1 (ja) 2017-09-07 2019-03-14 天野エンザイム株式会社 安定化蛋白質脱アミド酵素乾燥組成物
CN114149934A (zh) * 2020-09-07 2022-03-08 华东师范大学 一种蛋白质谷氨酰胺酶生产菌株、筛选、及特性分析方法
WO2022107885A1 (ja) 2020-11-20 2022-05-27 天野エンザイム株式会社 耐熱性プロテイングルタミナーゼ
WO2022118914A1 (ja) 2020-12-04 2022-06-09 天野エンザイム株式会社 液体酵素製剤
CN116676295A (zh) * 2023-05-30 2023-09-01 江南大学 一种耐有机试剂的β-琼胶酶突变体及固定化酶的应用
WO2023176943A1 (ja) * 2022-03-16 2023-09-21 天野エンザイム株式会社 改変型プロテイングルタミナーゼ
WO2023228953A1 (ja) 2022-05-23 2023-11-30 天野エンザイム株式会社 液体酵素製剤
WO2024257876A1 (ja) 2023-06-14 2024-12-19 天野エンザイム株式会社 液体酵素製剤
WO2025164794A1 (ja) * 2024-02-01 2025-08-07 天野エンザイム株式会社 改変型プロテイングルタミナーゼ

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020176469A1 (en) * 2019-02-26 2020-09-03 Amano Enzyme Usa Co., Ltd. Stable protein formulations
CN111593038B (zh) * 2020-06-23 2022-02-15 江南大学 一种稳定性提高的谷氨酰胺酶突变体
DE112023001290T5 (de) * 2022-03-09 2025-01-02 Amano Enzyme Inc. Modifizierte Proteinglutaminase
CN116200323B (zh) * 2023-03-16 2025-04-25 江南大学 一株产蛋白质谷氨酰胺酶的菌株及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2000050887A (ja) 1998-06-04 2000-02-22 Amano Pharmaceut Co Ltd 新規蛋白質脱アミド酵素、それをコ―ドする遺伝子、その製造法並びにその用途
JP2001218590A (ja) 1999-12-03 2001-08-14 Amano Enzyme Inc 新規蛋白質脱アミド酵素、それを生産する微生物、それをコードする遺伝子、その製造法及び用途
JP2004097099A (ja) 2002-09-10 2004-04-02 Amano Enzyme Inc トランスグルタミナーゼ生産菌
WO2008138900A2 (en) * 2007-05-11 2008-11-20 Novozymes A/S Method for producing an acidified milk drink

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2256767A1 (en) * 1996-07-01 1998-01-08 Novo Nordisk A/S Use of a deamidase in baking
US6756221B1 (en) * 1999-06-03 2004-06-29 Amano Enzyme Inc. Protein-deamidating enzyme, microorganism producing the same, gene encoding the same, production process therefor, and use thereof
US6251651B1 (en) * 1998-06-04 2001-06-26 Amano Pharmaceutical Co., Ltd. Protein-deamidating enzyme, gene encoding the same, production process therefor, and use thereof
WO2001042453A1 (fr) 1999-12-06 2001-06-14 Biomolecular Engineering Research Institute Coordonnees structurales et decalage chimique rmn de proteine; utilisation
JP5571274B2 (ja) 2000-03-08 2014-08-13 ノボザイムス アクティーゼルスカブ 改変された特性を有する変異体
JP2002306178A (ja) 2001-04-13 2002-10-22 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd デカルバミラーゼ複合体
JPWO2003040361A1 (ja) 2001-11-06 2005-03-03 独立行政法人理化学研究所 Dna組換え修復酵素の立体構造及びその使用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2000050887A (ja) 1998-06-04 2000-02-22 Amano Pharmaceut Co Ltd 新規蛋白質脱アミド酵素、それをコ―ドする遺伝子、その製造法並びにその用途
JP2001218590A (ja) 1999-12-03 2001-08-14 Amano Enzyme Inc 新規蛋白質脱アミド酵素、それを生産する微生物、それをコードする遺伝子、その製造法及び用途
JP2004097099A (ja) 2002-09-10 2004-04-02 Amano Enzyme Inc トランスグルタミナーゼ生産菌
WO2008138900A2 (en) * 2007-05-11 2008-11-20 Novozymes A/S Method for producing an acidified milk drink

Non-Patent Citations (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Current protocols in molecular biology", 1987
"Molecular Cloning", COLD SPRING HARBOR LABORATORY PRESS
ALTSCHUL ET AL., AMINO ACIDS RESEARCH, vol. 25, no. 17, 1997, pages 3389 - 3402
ALTSCHUL ET AL., J. MOL. BIOL., vol. 215, 1990, pages 403 - 10
CHUNG ET AL., PROC. NATL. ACAD. SCI. U.S.A., vol. 86, 1989, pages 2172
FELGNER, P.L. ET AL., PROC. NATL. ACAD. SCI. U.S.A., vol. 84, 1984, pages 7413 - 7417
GENE, vol. 96, 1990, pages 23
J. MOL. BIOL., vol. 166, 1983, pages 557
J. MOL. BIOL., vol. 331, 2003, pages 585 - 592
J. MOL. BIOL., vol. 53, 1970, pages 159
KARLIN, ALTSCHUL, PROC. NATL. ACAD. SCI. USA, vol. 87, 1990, pages 2264 - 68
KARLIN, ALTSCHUL, PROC. NATL. ACAD. SCI. USA, vol. 90, 1993, pages 5873 - 77
KIKUCHI, M., HAYASHIDA, H., NAKANO, E., SAKAGUCHI K.: "Peptidoglutaminase. Enzymes for selective deamidation of y-amido of peptide-bound glutamine", BIOCHEMISTRY, vol. 10, 1971, pages 1222 - 1229, XP000990230, DOI: doi:10.1021/bi00783a019
MYERS, MILLER, COMPUT APPL BIOSCI., vol. 4, 1988, pages 11 - 17
NUCLEIC ACID RES., vol. 16, 1988, pages 7351 - 7367
POTTER, H. ET AL., PROC. NATL. ACAD. SCI. U.S.A., vol. 81, 1984, pages 7161 - 7165
SAMBROOK ET AL.: "Molecular Cloning: a laboratory manual", 1989, COLD SPRING HARBOR LABORATORY PRESS
SHIMIZU, Y. ET AL., NATURE BIOTECH., vol. 19, 2001, pages 751 - 755
TAKAYUKI UWAJIMA: "Industrial Enzymes", 1995, MARUZEN CO., LTD.
VAINTRAUB, I.A., KOTOVA, L.V., SHAHA, R.: "Protein deamidases from germinating seeds", PHYSIOL. PLANTARUM., vol. 96, 1996, pages 662 - 666
YAMAGUCHI, S., JEENS D.J., ARCHER, D.B.: "Protein-glutaminase from Chryseobacterium proteolyticum, an enzyme that deamidates glutaminyl residues in proteins. Purification, characterization and gene cloning", EUR. J. BIOCHEM., vol. 268, 2001, pages 1410 - 1421, XP055044783, DOI: doi:10.1046/j.1432-1327.2001.02019.x

Cited By (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107325978A (zh) * 2016-04-28 2017-11-07 华东师范大学 蛋白质谷氨酰胺酶产生菌及发酵产物的制备与应用
CN107325978B (zh) * 2016-04-28 2020-10-16 华东师范大学 蛋白质谷氨酰胺酶产生菌及发酵产物的制备与应用
CN107325977A (zh) * 2016-04-28 2017-11-07 华东师范大学 一种产蛋白质谷氨酰胺酶的方法、纯化及应用
US11685914B2 (en) 2017-09-07 2023-06-27 Amano Enzyme Inc. Stabilised dry protein deamidase composition
WO2019049927A1 (ja) 2017-09-07 2019-03-14 天野エンザイム株式会社 安定化蛋白質脱アミド酵素乾燥組成物
JPWO2019049927A1 (ja) * 2017-09-07 2020-10-22 天野エンザイム株式会社 安定化蛋白質脱アミド酵素乾燥組成物
JP7315461B2 (ja) 2017-09-07 2023-07-26 天野エンザイム株式会社 安定化蛋白質脱アミド酵素乾燥組成物
CN114149934A (zh) * 2020-09-07 2022-03-08 华东师范大学 一种蛋白质谷氨酰胺酶生产菌株、筛选、及特性分析方法
WO2022107885A1 (ja) 2020-11-20 2022-05-27 天野エンザイム株式会社 耐熱性プロテイングルタミナーゼ
JPWO2022118914A1 (ja) * 2020-12-04 2022-06-09
WO2022118914A1 (ja) 2020-12-04 2022-06-09 天野エンザイム株式会社 液体酵素製剤
JP7829496B2 (ja) 2020-12-04 2026-03-13 天野エンザイム株式会社 液体酵素製剤
WO2023176943A1 (ja) * 2022-03-16 2023-09-21 天野エンザイム株式会社 改変型プロテイングルタミナーゼ
WO2023228953A1 (ja) 2022-05-23 2023-11-30 天野エンザイム株式会社 液体酵素製剤
CN116676295A (zh) * 2023-05-30 2023-09-01 江南大学 一种耐有机试剂的β-琼胶酶突变体及固定化酶的应用
CN116676295B (zh) * 2023-05-30 2024-02-27 江南大学 一种耐有机试剂的β-琼胶酶突变体及固定化酶的应用
WO2024257876A1 (ja) 2023-06-14 2024-12-19 天野エンザイム株式会社 液体酵素製剤
WO2025164794A1 (ja) * 2024-02-01 2025-08-07 天野エンザイム株式会社 改変型プロテイングルタミナーゼ

Also Published As

Publication number Publication date
US20110165605A1 (en) 2011-07-07
US8735131B2 (en) 2014-05-27
JP5623282B2 (ja) 2014-11-12
EP2351837B1 (en) 2019-04-03
EP2351837A4 (en) 2013-01-02
CN102597232A (zh) 2012-07-18
DK2351837T3 (da) 2019-05-13
CN102597232B (zh) 2014-08-13
JPWO2010029685A1 (ja) 2012-02-02
EP2351837A1 (en) 2011-08-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5623282B2 (ja) 変異型酵素の設計法、調製法、及び変異型酵素
JP7590508B2 (ja) 改変型トランスグルタミナーゼ
CN110846291A (zh) 热稳定性提高的胺脱氢酶突变体及其基因工程菌的构建和应用
CN116574709A (zh) 一种DNA聚合酶BstX突变体及其构建方法和应用
Martínez-Rodríguez et al. Mutational and structural analysis of L-N-carbamoylase reveals new insights into a peptidase M20/M25/M40 family member
EP2058394B1 (en) Method for designing mutated enzyme, method for preparing the same and mutated enzyme
WO2025148187A1 (zh) 一种aroG突变体及其应用
CN118581057A (zh) 一种热稳定性提高的异柠檬酸脱氢酶突变体及其应用
CN114480345B (zh) MazF突变体、重组载体、重组工程菌及其应用
WO2010015264A1 (en) L-asparaginase from helicobacter pylori
CN104164441A (zh) 三个抗草丁膦水稻细胞质型谷氨酰胺合成酶突变体
CN117230034A (zh) 一种高稳定性哺乳动物尿酸氧化酶突变体
CN112626044B (zh) 一种突变体及其构建方法和应用
CN116694596A (zh) 热稳定性提高的DNA聚合酶BstX突变体及其构建方法和应用
Omi et al. Expression, purification and preliminary X-ray characterization of DL-2-haloacid dehalogenase from Methylobacterium sp. CPA1
WO2021177181A1 (ja) 改変型トランスグルタミナーゼ
Pereira-Rodriguez et al. Crystallization and preliminary X-ray crystallographic analysis of β-galactosidase from Kluyveromyces lactis
Wang et al. Enhancing the stability of a novel D-allulose 3-epimerase from Ruminococcus sp. CAG55 by interface interaction engineering and terminally attached a self-assembling peptide
Kikuchi et al. Roles of the hydroxy group of tyrosine in crystal structures of Sulfurisphaera tokodaii O6-methylguanine-DNA methyltransferase
CN115896052B (zh) 一种突变体及其构建方法和应用
Pampa et al. The first crystal structure of NAD-dependent 3-dehydro-2-deoxy-D-gluconate dehydrogenase from Thermus thermophilus HB8
Singh et al. Overexpression, purification, crystallization and preliminary X-ray analysis of uracil N-glycosylase from Mycobacterium tuberculosis in complex with a proteinaceous inhibitor
CN108624574A (zh) 一种s-腺苷同型半胱氨酸水解酶突变体及其应用和制法、核酸、表达载体及宿主细胞
CN116590254A (zh) 一种dna聚合酶突变体及其构建方法和应用
Miyazono et al. Cloning, purification, crystallization and preliminary crystallographic analysis of acylphosphatase from Pyrococcus horikoshii OT3

Legal Events

Date Code Title Description
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 200980134865.4

Country of ref document: CN

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 09812834

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2010528603

Country of ref document: JP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 13062798

Country of ref document: US

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2009812834

Country of ref document: EP