WO2008010463A1

WO2008010463A1 - Conjugué polymère d'une combrétastatine

Info

Publication number: WO2008010463A1
Application number: PCT/JP2007/063990
Authority: WO
Inventors: Masayuki Kitagawa; Keizou Ishikawa; Akira Masuda; Kazutoshi Takashio
Original assignee: Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha
Priority date: 2006-07-19
Filing date: 2007-07-13
Publication date: 2008-01-24
Also published as: KR20090031597A; AU2007274402A1; RU2009105670A; JPWO2008010463A1; US20100004403A1; CN101489592A; CA2658100A1; TW200813115A; EP2042195A1

Description

明細書

コンブレタスタチン類の高分子結合体

技術分野

[0001] 本発明は、ポリエチレングリコール構造部分と 2以上のカルボン酸基を有するポリマ一部分とのブロック共重合体における該ポリマー部分のカルボン酸基と、コンブレタスタチン類の水酸基とがエステル結合しているコンブレタスタチン類の高分子結合体、その製造方法及びその用途に関する。

背景技術

[0002] コンブレタスタチンは、 1980年代にアフリカの樹木である Combretum caffrum 等から単離され、チューブリン重合阻害活性が確認された。特に、血管内皮細胞に形態学的な変化を引き起こして血流抑制活性を有する。従って、固形癌や慢性関節リウマチ等の新血管形成に関連した疾患の治療剤として期待されている。なお、コンブレタスタチン類の製造法は非特許文献 1に開示されている。しかし、コンブレタスタチン類は一般に水に極めて難溶性であるため水溶性を付与する研究や、患部で効率的に薬効を発揮させるための研究が行われてきた。

[0003] これまでに、コンブレタスタチンのリン酸エステル型プロドラッグの製造法が特許文献 1に開示されている。又、非特許文献 2にはアミノ基を有するコンブレタスタチン誘導体、およびその誘導体が患部で選択的に薬効を発現するためのアミノ酸結合プロドラッグが記述されている。

[0004] 一方、難水溶性杭がん剤への水溶性の付加や患部への集積を目的に、高分子を担体とする研究も行われている。例えば、特許文献 2や特許文献 3にはポリエチレングリコールを結合したプロドラッグとしての難水溶性杭がん剤の高分子誘導体について記載されている。し力、しながら、コンブレタスタチン類の結合体については記載されていない。又、これらの難水溶性抗がん剤の高分子誘導体は、構造上ポリエチレングリコール一分子に対して 1〜2個の分子しか結合できなレ、。このため、有効量の薬剤を投与するためには大量のポリマーの投与が必要となる。

[0005] 特許文献 4にはミセルを形成し水溶性を示すポリエチレングリコールとポリアスパラギン酸のブロック共重合体に薬剤を結合した分子が記載されている。特許文献 5にはポリエチレングリコール類とポリ酸性アミノ酸とのブロック共重合体の側鎖カルボン酸基に疎水性物質を結合した高分子薬物運搬体となる高分子担体が記載されている。特許文献 6には、ポリエチレングリコール類とポリグルタミン酸とのブロック共重合体の側鎖カルボン酸基と、カンプトテシン類のフヱノール性水酸基を結合させたカンプトテシン類の高分子誘導体が記載されている。し力、しながら、特許文献 4、特許文献 5、特許文献 6にはコンブレタスタチン類の結合体については記載されていない。

特許文献 1：国際公開第 02/06279号パンフレット

特許文献 2：国際公開第 93/24476号パンフレット

特許文献 3 :特表平 10— 513187号公報

特許文献 4：特許第 2694923号公報

特許文献 5：特許第 3268913号公報

特許文献 6 :国際公開第 04/39869号パンフレット

非特許文献 1 :J. Org. Chem. , 66, 8135— 8138 (2001)

非特許文献 2 : Anti— Cancer Drug Design, 14, 539— 548 (1999)

発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0006] 非特許文献 2に記載のコンブレタスタチンのプロドラッグは、コンブレタスタチン A—

4と比較して水への溶解度は増加している。し力し、コンブレタスタチン A— 4の放出は投与される被験体の血液中の内因性アミノぺプチダーゼに依存するため、放出される薬剤の効果に個体差を生じることが危惧される。

[0007] 特許文献 1のコンブレタスタチンのリン酸エステル型プロドラッグは、コンブレタスタチン A— 4と比較して水への溶解度は増加している。しかし、生体投与直後にリン酸エステルが加水分解されることが予想され、疾患部までプロドラッグがデリバリーされ、効率よくコンブレタスタチン A— 4が効果を発揮するか不明である。特許文献 2ゃ特許文献 3に記載のポリエチレングリコール類部分と薬剤との結合も生体の加水分解酵素によって切断されることを利用して薬剤の運搬と放出を制御している。し力しながら、生体の加水分解酵素は、種差はもとより同一種においても個体差が大きいと考えられている。従って、これらの文献に記載されている薬剤結合体については、薬剤との結合の切断が生体の加水分解酵素に依存するため、放出される薬剤の効果に個体差を生じることが危惧される。

[0008] 又、特許文献 5に記載されているアドリアマイシン結合体は、ブロック共重合体とァドリアマイシンがアミド結合で結合されている。し力ながら、アミド結合は化学的に安定な結合様式であるため加水分解による薬剤の放出が遅ぐその薬効には疑問がある。

[0009] コンブレタスタチン A—4等のコンブレタスタチン類化合物は有用な抗癌剤であるが難溶性である。従って、水溶性を有し抗癌活性に優れる新規な誘導体が求められている。

課題を解決するための手段

[0010] 本発明者等は前記の課題を解決すべく鋭意努力した結果、ポリエチレングリコール構造部分と 2以上のカルボン酸基を有するポリマー部分とのブロック共重合体における該ポリマー部分のカルボン酸基と、コンブレタスタチン類の水酸基とがエステル結合したコンブレタスタチン類の高分子結合体が、加水分解酵素に依存することなくコンブレタスタチン類を放出することを見出し、本発明を完成した。

[0011] 即ち、本発明は以下の：！）〜 15)に関する。

1)ポリエチレングリコール構造部分と 2以上のカルボン酸基を有するポリマー部分とのブロック共重合体における該ポリマー部分のカルボン酸基と、コンブレタスタチン類の水酸基とがエステル結合しているコンブレタスタチン類の高分子結合体。

2)カルボン酸基を有するポリマー部分がコハク酸モノアミド構造部分を有するポリマ一である上記 1)記載のコンブレタスタチン類の高分子結合体。

3)コハク酸モノアミド構造部分を有するポリマーがポリアスパラギン酸である上記 2) 記載のコンブレタスタチン類の高分子結合体。

[0012] 4)コンブレタスタチン類の高分子結合体が、一般式 (I)

[0013] [化 1] R1 -0-(CH₂CH₂0)_t-R2-[(NHCOCH)_d-(NHCOCH₂CH)_e-(NHCOCH)_f -

CH₂C0₂ 4 CH₂COR5

COR5 C0₂H

-(NHCOCH2CH)_g-(NHCOCH)_h-(NHCOCH₂CH)i-(NCOCH)j]-NHR3

CH₂C0₂H COCH₂

[式中、 Rlは水素原子又は（C1〜C6)アルキル基を示し、 R2は結合基を示し、 R3 は水素原子又は（C1〜C6)ァシル基を示し、 R4はコンブレタスタチン類の水酸基の残基を示し、 R5は（C1〜C30)アルコキシ基、（C7〜C30)ァラルキルォキシ基、（C 1〜C30)ァノレキノレアミノ基、ジ（C1〜C30)アルキルアミノ基、カルボキシ基が保護されたァミノ酸及び_1^ (1 6)〇〇^«^ (1¾7)カ、らなる群カ、ら選ばれる基を示し、 R6、 R7 は同一でも異なっていてもよぐ（C3〜C6)環状アルキル基若しくは三級アミノ基で置換されていてもよい（C1〜C5)アルキル基を示し、 tは 5〜： 11500の整数を示し、 d 、 e、 f、 g、 h、 i若しくは jは各々独立に 0〜200の整数を示し、ただし d + eは:!〜 200 の整数を示し、且つ、 d + e + f + g + h + i+jは 3〜200の整数を示し、ポリアスパラギン酸の各構成単位の結合順は任意である]

で表される化合物である上記:!）〜 3)のいずれか一項に記載のコンブレタスタチン類の高分子結合体。

5) R1が（C1〜C6)アルキル基であり、 R2が（C2〜C6)アルキレン基であり、 R3が（ C1〜C6)ァシル基であり、 tが 100〜300の整数であり、 d、 e、 f、 g、 h、 i若しくは jが各々独立に 0〜100の整数であり、ただし d+ eが:!〜 100の整数であり、ただし d + e + f + g+h+i+jが 6〜： 100の整数である上記 4)のコンブレタスタチン類の高分子結合体。

6) R1が（C 1〜C3)アルキル基であり、 R2が（C2〜C4)アルキレン基であり、 R3が（ C1〜C3)ァシル基であり、 tが 100〜300の整数であり、 d、 e、 f、 g、 h、 i若しくは jが各々独立に 0〜90の整数であり、ただし d+ eが:!〜 90の整数であり、ただし d + e + f + g+h+i+jが 15〜90の整数である上記 4)又は 5)に記載のコンブレタスタチン類の高分子結合体。

[0015] 7)カルボン酸基を有するポリマー部分がポリグルタミン酸である上記 1)記載のコンブレタスタチン類の高分子結合体。

[0016] 8)コンブレタスタチン類の高分子結合体が、一般式 (II)

[0017] [化 2]

CH₂CH₂C0₂R5

R1 -0-(CH₂CH₂0)_t-R2-[(NHCOCH)_k-(NHCOCH)_m -(NHCOCH)_n]-NHR3

CH₂CH₂C0₂ 4 CH₂CH₂C0₂H (ェ¹)

[式中、 R1は水素原子又は（C1〜C6)アルキル基を示し、 R2は結合基を示し、 R3 は水素原子又は（C1〜C6)ァシル基を示し、 R4はコンブレタスタチン類の水酸基の残基を示し、 R5は（C1〜C30)アルコキシ基、（C7〜C30)ァラルキルォキシ基、（C 1〜C30)アルキルアミノ基、ジ（C1〜C30)アルキルアミノ基、カルボキシ基が保護されたァミノ酸及びーN (R6) C〇NH (R7)カらなる群カら選ばれる基を示し、 R6、 R7 は同一でも異なっていてもよぐ（C3〜C6)環状アルキル基若しくは三級アミノ基で置換されていてもよい（C1〜C5)アルキル基を示し、 tは 5〜： 11500の整数を示し、 k は 1〜200の整数を示し、 m、 nは各々独立に 0〜200の整数を示し、ただし k+m + nは 3〜200の整数を示し、ポリグルタミン酸の各構成単位の結合順は任意である] で表される化合物である上記 1)又は 7)に記載のコンブレタスタチン類の高分子結合体。

[0018] 9) R1が（C1〜C6)アルキル基であり、 R2が（C2〜C6)アルキレン基であり、 R3が（ C1〜C6)ァシル基であり、 tが 100〜300の整数であり、 kが:!〜 90の整数であり、 m , nが各々独立に 0〜90の整数であり、ただし k+m + nが 6〜90の整数である上記 8 )記載のコンブレタスタチン類の高分子結合体。

10) R1が（C1〜C3)アルキル基であり、 R2が（C2〜C4)アルキレン基であり、 R3が (C1〜C3)ァシル基であり、 tが 100〜300の整数であり、 kが 3〜60の整数であり、 m, nが各々独立に 0〜60の整数であり、ただし k+m+nが 6〜60の整数である上記 8)又は 9)に記載のコンブレタスタチン類の高分子結合体。

[0019] 11)コンブレタスタチン類がコンブレタスタチン A— 4である上記：!）〜 10)のいずれか一項に記載のコンブレタスタチン類の高分子結合体。

12)ポリエチレングリコール構造部分と 2以上のカルボン酸基を有するポリマー部分とのブロック共重合体における該ポリマー部分のカルボン酸基と、コンブレタスタチン類の水酸基とを、有機溶媒中、脱水縮合剤を用いてエステル結合させて得られるコンブレタスタチン類の高分子結合体。

13)ポリエチレングリコール構造部分と 2以上のカルボン酸基を有するポリマー部分とのブロック共重合体における該ポリマー部分のカルボン酸基と、コンブレタスタチン類の水酸基とを有機溶媒中、脱水縮合剤を用いてエステル結合させることを特徴とする上記：!）〜 11)のいずれか一項に記載のコンブレタスタチン類の高分子結合体の製造方法。

14)上記:！）〜 12)のレ、ずれか一項に記載のコンブレタスタチン類の高分子結合体を有効成分とする抗癌剤。

15)上記:！）〜 12)のレ、ずれか一項に記載のコンブレタスタチン類の高分子結合体を有効成分とする血管標的化剤。

発明の効果

[0020] 本発明のコンブレタスタチン類の高分子結合体は、ポリエチレングリコール構造部分と 2以上のカルボン酸基を有するポリマー部分とのブロック共重合体における該ポリマー部分のカルボン酸基と、コンブレタスタチン類の水酸基とがエステル結合している。このため、本発明のコンブレタスタチン類の高分子結合体は、生体の加水分解酵素に依存することなく薬剤放出が可能であり、個体差に影響されにくい有効な治療効果を示す。

発明を実施するための最良の形態

[0021] 本発明のコンブレタスタチン類の高分子結合体は、ポリエチレングリコール構造部分と 2以上のカルボン酸基を有するポリマー部分とのブロック共重合体における該ポリマー部分のカルボン酸基と、コンブレタスタチン類の水酸基とがエステル結合している。本発明において 2以上のカルボン酸基を有するポリマーとは特に限定されない力例えば、 2以上のコハク酸モノアミド構造部分を有するポリマーゃポリグノレタミン酸等が挙げられる。

[0022] 本発明においてコハク酸モノアミド構造部分とは、 -HNCO -C-C-CO H構造

2 を意味する。例えば、コハク酸モノアミド（一 HNCO— CH -CH -CO H)や、ァス

2 2 2 パラギン酸の 2個のカルボン酸基のうち 1個がアミド化された構造（一HNC〇一CH ( — NH— )— CH -CO Hあるいは一 HNCO— CH— CH (— NH— )— C〇 H)等

2 2 2 2 が挙げられる。これらコハク酸モノアミド構造部分は、例えば、ポリアスパラギン酸のようにポリマーの主鎖を構成していてもよレ、。あるいは、デキストラン等のポリアルコール、ポリリジン等のポリアミン、ポリアスパラギン酸以外のポリカルボン酸（例えば、ポリ乳酸等）からなる主鎖ポリマーの官能基に結合したものでもよレ、。

コハク酸モノアミド構造部分は環化構造 (コハク酸イミド）へ変化するのに伴って水酸基を有する化合物を遊離すると考えられる。

[0023] 本発明のコンブレタスタチン類の高分子結合体のポリマーにおけるポリエチレンダリコール構造部分としては両末端又は片末端が修飾されたポリエチレングリコールが挙げられ、両末端が修飾されている場合、その修飾基は同一でも異なっていてもよい。該修飾基としては置換基を有していてもよい（C1〜C6)アルキル基が挙げられる。置換基を有していてもよい（C1〜C6)アルキル基のアルキル基としては後記のアルキル基が挙げられ、好ましくは（C1〜C4)アルキル基が挙げられ、例えば、メチル基、ェチル基、 n—プロピル基、 n—ブチル基等が挙げられる。置換基を有していてもよレ、（C1〜C6)アルキル基の置換基としては、例えば、アミノ基、メチノレアミノ基、ジメチルァミノ基、ェチルァミノ基、ジェチルァミノ基等が挙げられる。

[0024] ポリエチレングリコール構造部分の分子量としては 300〜500000程度であり、好まし <は 500〜100000程度、更に好まし <は 1000〜50000程度である。

[0025] 本発明におけるポリエチレングリコール構造部分と 2以上のカルボン酸基を有するポリマー部分とのブロック共重合体の分子量は 500〜500000程度、好ましくは 600 〜100000程度、更に好まし <は 800〜80000程度である。

なお、本発明における分子量とは GPC法で測定した重量平均分子量である。

[0026] 本発明のコンブレタスタチン類の高分子結合体において、ポリエチレングリコール構造部分と 2以上のカルボン酸基を有するポリマー部分とのブロック共重合体に結合するコンブレタスタチン類の結合量は、総力ルボン酸基数の 1〜： 100%、好ましくは 1 〜90%、更に好ましくは 2〜60%である。

[0027] 本発明においてコンブレタスタチン類としては、水酸基を有し、且つ、抗腫瘍活性を有しているコンブレタスタチン骨格化合物、即ち、酸素官能基を有するスチルベン構造を有する化合物であれば特に限定されない。該コンブレタスタチン類としては、例えば、下記式で表されるコンブレタスタチン A— 1 (111)、コンブレタスタチン A_4 (IV )、AC_ 7700 (V)等が挙げられる。コンブレタスタチン類の水酸基としては、下記式のようにフエノール性水酸基もアルコール性水酸基も挙げられ、その置換位置も限定されない。

[0028] [化 3]

[0029] [化 4]

[0030] [化 5]

[0031] 本発明において 2以上のコハク酸モノアミド構造部分としてはポリアスパラギン酸が好ましレ、。又、その他の 2以上のカルボン酸基を有するポリマー部分としてはポリダルタミン酸が好ましい。

[0032] 本発明のコンブレタスタチン類の高分子結合体として好ましくは、ポリアスパラギン酸を含む上記一般式 (I) [式中、 R1は水素原子又は（C1〜C6)アルキル基を示し、 R2は結合基を示し、 R3は水素原子又は（C1〜C6)ァシル基を示し、 R4はコンブレタスタチン類の水酸基の残基を示し、 R5は（C1〜C30)アルコキシ基、（C7〜C30) ァラルキルォキシ基、（C1〜C30)アルキルアミノ基、ジ（C1〜C30)アルキルアミノ基、カルボキシ基が保護されたアミノ酸及び N (R6) CONH (R7)からなる群から選ばれる基を示し、 R6、 R7は同一でも異なっていてもよぐ（C3〜C6)環状アルキル基若しくは三級アミノ基で置換されてレ、てもよレ、（C 1〜C5)アルキル基を示し、 tは 5〜 1 1500の整数を示し、 d、 e、 f、 g、 h、 i若しくは jは各々独立に 0〜200の整数を示し、ただし d + eは:!〜 200の整数を示し、且つ、 d + e + f + g + h + i+jは 3〜200の整数を示し、ポリアスパラギン酸の各構成単位の結合順は任意である]で表される化合物、あるいは、ポリグルタミン酸を含む上記一般式 (II) [式中、 R1は水素原子又は（C1 〜C6)アルキル基を示し、 R2は結合基を示し、 R3は水素原子又は（C1〜C6)ァシル基を示し、 R4はコンブレタスタチン類の水酸基の残基を示し、 R5は（C1〜C30) アルコキシ基、（C7〜C30)ァラルキルォキシ基、（C1〜C30)アルキルアミノ基、ジ（ C1〜C30)ァノレキノレアミノ基、カルボキシ基が保護されたアミノ酸及び _N (R6) CO NH (R7)力なる群から選ばれる基を示し、 R6、 R7は同一でも異なっていてもよぐ (C3〜C6)環状アルキル基若しくは三級アミノ基で置換されてレ、てもよレ、（CI〜C5) アルキル基を示し、 tは 5〜： 11500の整数を示し、 kは:!〜 200の整数を示し、 m、ま各々独立に 0〜200の整数を示し、ただし k+m+nは 3〜200の整数を示し、ポリグルタミン酸の各構成単位の結合順は任意である]で表される化合物が挙げられる。

[0033] 上記一般式（I)あるいは（II)の R1における（C1〜C6)アルキル基としては、直鎖又は分岐鎖の炭素数 1〜6のアルキル基を挙げることができる。なかでも直鎖又は分岐鎖の（C1〜C4)アルキル基が好ましぐ特に直鎖又は分岐鎖の（C1〜C3)アルキル基が好ましい。直鎖又は分岐鎖の（C1〜C6)アルキル基としては、例えば、メチル基、ェチル基、 n—プロピル基、 i—プロピル基、 n_ブチル基、 t_ブチル基、 n—ペンチル基、 n_へキシル基等が挙げられ、特にメチル基、ェチル基、 n_プロピル基、 i —プロピル基が好ましぐ中でもメチル基が好ましい。

[0034] 上記一般式 (I)あるいは (II)の R2で表される結合基としては、特に限定されないが、例えば、（C2〜C6)アルキレン基が挙げられ、なかでも（C2〜C4)アルキレン基が好ましい。（C2〜C4)アルキレン基としては例えば、エチレン基、トリメチレン基、プチレン基等が挙げられ、特にトリメチレン基が好ましい。

[0035] 上記一般式（I)あるいは（II)の R3における（C1〜C6)ァシル基としては、特に限定されないが、例えば、ホルミル基、ァセチル基、プロピオニル基、ビバロイル基等が挙げられ、ァセチル基が好ましい。

[0036] 上記一般式（I)あるいは（II)の R4におけるコンブレタスタチン類の水酸基の残基においてコンブレタスタチン類としては、上記のコンブレタスタチン類を挙げることができる。ポリマー部分のカルボン酸基と脱水縮合剤によりエステル結合をする水酸基を有し、且つ、抗腫瘍活性を有するコンブレタスタチン類であれば特に限定されない。該コンブレタスタチン類として好ましくは、例えば、上記のコンブレタスタチン A— 4が挙げられる。

[0037] 上記一般式（I)あるいは（II)の R5としては、（C1〜C30)アルコキシ基、（C7〜C3 0)ァラルキルォキシ基、（C1〜C30)アルキルアミノ基、ジ（C1〜C30)アルキルアミノ基、カルボキシ基が保護されたアミノ酸及び _N (R6) CONH (R7)からなる群から選ばれる基を示し、 R6、 R7は同一でも異なっていてもよぐ（C3〜C6)環状アルキル基若しくは三級アミノ基で置換されてレ、てもよレ、（CI〜C5)アルキル基である。一般式（I)あるいは（II)の R5としては、一分子中同一でも異なっていてもよぐ又、コンブレタスタチン類の高分子結合体に使用されるポリマーにおいて、単一でも混合物であつてもよい。

[0038] 該（C1〜C30)アルコキシ基としては、直鎖又は分岐鎖の（C1〜C30)アルコキシ基を挙げることができる。なかでも直鎖又は分岐鎖の（C1〜C10)アルコキシ基が好ましぐ例えば、メトキシ基、エトキシ基、 n_プロポキシ基、 i_プロポキシ基、 n_ブトキシ基、 t—ブトキシ基等を挙げることができる。（C7〜C30)ァラルキルォキシ基としては、直鎖又は分岐鎖の（C7〜C30)ァラルキルォキシ基、又は直鎖又は分岐鎖の (C7〜C12)ァラルキルォキシ基が好ましい。例えば、 4—フエニルブトキシ基等を挙げ'ること力 Sできる。

[0039] 該（C1〜C30)アルキルアミノ基又はジ（C1〜C30)アルキルアミノ基としては、直鎖又は分岐鎖の（C1〜C30)アルキルアミノ基又はジ（C1〜C30)アルキルアミノ基が挙げられ、直鎖又は分岐鎖の（C1〜C20)アルキルアミノ基又はジ（C1〜C20)ァルキルアミノ基が好ましぐ例えば、メチルァミノ基、ェチルアミノ基、 n—プロピルアミノ基、 i—プロピルアミノ基、 n—ブチルァミノ基、 t—ブチルァミノ基、ジメチルァミノ基、ジェチルァミノ基、ジブチルァミノ基等が挙げられる。

[0040] 該カルボキシ基が保護されたアミノ酸としては、通常のペプチド合成で用いられる力ルポキシ基が保護されたアミノ酸が挙げられる。例えば、フエ二ルァラニンベンジルェステル等が好ましい。

[0041] 一般式（I)あるいは（II)の R5における一 N (R6) C〇NH (R7) [R6、 R7は同一でも異なっていてもよく、（C3〜C6)環状アルキル基若しくは三級アミノ基で置換されていてもよい（C1〜C5)アルキル基である]とは、特に限定されない。例えば、シクロへキシルァミノカルボニルシクロへキシルァミノ基、イソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミノ基等が挙げられる。

[0042] 本発明の上記一般式 (I)で表されるコンブレタスタチン類の高分子結合体における

2以上のコハク酸モノアミド構造部分であるポリアスパラギン酸には、ひ一アミノ酸型、 β—アミノ酸型、環化したもの等の構成単位がある力ポリアスパラギン酸のすべてが環化したものは含まない。これらの構成単位の結合順は限定されず、ブロック型でもランダム型でもよレ、。又、各構成単位は L型でも D型でもよい。

[0043] 上記一般式 (I)で表されるコンブレタスタチン類の高分子結合体における全ァスパラギン酸数は d+ e + f + g +h+i+jで表され、 3〜200個程度であり、好ましくは 6〜 100個程度であり、特に好ましくは 15〜90個である。全ァスパラギン酸数は、例えば、ポリエチレングリコール構造部分とポリアスパラギン酸のブロック共重合体の製造時における反応仕込み量により自由に変えることができる。

全ァスパラギン酸数（d + e + f + g + h + i+j)に対するコンブレタスタチン類の結合したァスパラギン酸数（d + e)の割合は 1〜： 100%、好ましくは 3〜90%、更に好ましくは 4〜60%である。又、ァスパラギン酸数（d + e)として 1〜200個程度、好ましくは：!〜 100個程度、特に好ましくは 1〜90個程度である。コンブレタスタチン類の結合割合は、例えば、ブロック共重合体とコンブレタスタチン類の結合反応時における反応仕込み量により変えることができ、後記するように反応液の分析により求めることができる。

[0044] 全ァスパラギン酸数（d+ e + f + g +h+i+j)に対する α—アミノ酸型（d + f +h)の割合は 10〜： 100%であり、好ましくは 20〜： 100%である。この割合は、例えば、ポリァスパラギン酸の保護基の脱保護条件等を選ぶことにより適宜変えることができる。

[0045] 本発明の上記一般式 (II)で表されるコンブレタスタチン類の高分子結合体におけるポリグルタミン酸は、 α —アミノ酸型であり、 L型でも D型でもよレ、。

本発明の上記一般式 (II)で表されるコンブレタスタチン類の高分子結合体における全グルタミン酸数は k+m+nで表され、 3〜200個程度であり、好ましくは 6〜90 個程度であり、特に好ましくは 6〜60個程度である。全グルタミン酸数は、例えば、ポリエチレングリコール構造部分とポリグノレタミン酸のブロック共重合体の製造時における反応仕込み量により自由に変えることができる。

[0046] 全グルタミン酸数（k+m + n)に対するコンブレタスタチン類の結合したグルタミン酸数（k)の割合は 1〜： 100%、好ましくは 3〜90%、更に好ましくは 4〜60%である。又、グノレタミン酸数 (k)として 1〜200個程度、好ましくは 1〜90個程度、特に好ましくは 3〜60個程度である。コンブレタスタチン類の結合割合は、例えば、ブロック共重合体とコンブレタスタチン類の結合反応時における反応仕込量により変えることができ、又、反応液の分析により求めることができる。

[0047] 上記一般式 (II)で表されるコンブレタスタチン類の高分子結合体におけるグノレタミン酸構造の各構成部分は、その結合順は限定されず、ブロック型でもランダム型でもよい。

[0048] 上記一般式 (I)あるいは（II)の tとしては 5〜11500程度の整数である力好ましくは 8〜2300程度の整数であり、更に好ましくは 100〜300程度の整数である。

[0049] 本発明のコンブレタスタチン類の高分子結合体は、水中でポリエチレングリコール構造部分を外殻とするミセルを形成してもよレヽ。

[0050] 本発明のコンブレタスタチン類の高分子結合体は、ポリエチレングリコール構造部分と 2以上のカルボン酸基を有するポリマー部分とのブロック共重合体における該ポリマーのカルボン酸基と、コンブレタスタチン類の水酸基とを有機溶媒中、脱水縮合剤を用いてエステル結合させることにより得られ、当該製造方法も本発明に含まれる。即ち、例えば、特許文献 5に記載の方法にて調製されるポリエチレングリコール構造部分—ポリアスパラギン酸のブロック共重合体、あるいは、特開平 5— 955号公報に記載された方法にて調製されるポリエチレングリコール構造部分ポリグルタミン酸ブロック共重合体と、必要に応じて反応させる基以外の官能基を保護したコンブレタスタチン類とを、両者が溶解する有機溶媒中、 0〜180°C、好ましくは 5〜50°Cで脱水縮合剤を用いた縮合反応に付す製造方法である。又、該縮合反応の際に反応補助剤を用いてもよい。該縮合反応に用いる有機溶媒は、特に限定はないが、好ましくは N, N ジメチルホルムアミド（DMF)、 1 , 3—ジメチルー 2—イミダゾリジノン（D MI)、 N メチルピロリドン (NMP)等の非プロトン性極性溶媒である。脱水縮合剤としてはジシクロへキシルカルボジイミド（DCC)、ジイソプロピルカルボジイミド（DIPC) 、 1 _ェチル _ 3 _ (3—ジメチルァミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩 (WSC)、 1 - エトキシカルボニル一 2 _エトキシ一1 , 2—ジヒドロキシキノリノン（EEDQ)等を用レヽること力 Sできる。反応補助剤は N， N—ジメチルァミノピリジン (DMAP)等を用いることができる。縮合反応後、通常の分離精製等の操作によりコンブレタスタチン類の高分子結合体が得られる。必要に応じて脱保護を行こともある。例えば、コンブレタスタチン類が AC— 7700 (V)の場合には、アミノ基を t—ブトキシカルボニル基等の保護基により保護し、ブロック共重合体と縮合反応に供した後、トリフルォロ酢酸等で脱保護することにより製造可能である。

[0051] 又、 R5が— N (R6) CONH (R7)基であり、 R6、 R7は同一でも異なっていてもよぐ

(C3〜C6)環状アルキル基若しくは三級アミノ基で置換されてレ、てもよレ、（CI〜C5) アルキル基であるコンブレタスタチン類の高分子結合体は、上記のカルポジイミド類を縮合剤として用いる反応によっても得られる。

[0052] 一般式（I)あるいは（II)の化合物中の R5が（C1〜C30)アルコキシ基、（C1〜C30 )ァラルキルォキシ基、（C1〜C30)アルキルアミノ基、ジ（C1〜C30)アルキルアミノ基又はカルボキシ基が保護されたアミノ酸である化合物の製造方法としては、ポリマ一のカルボン酸基を活性化してから結合させたい量の対応するアルコール又は対応するアミンゃカルボキシ基が保護されたアミノ酸等を塩基性条件下に縮合反応させる方法、あるいは、対応するアルコール、対応するァミンやカルボキシ基が保護されたアミノ酸等を活性化させてからポリマーに縮合反応させる方法等が挙げられる。ポリマーを精製した後に同様の反応でポリマー中の未反応のカルボン酸基を再活性化させ、ここにコンブレタスタチン類の水酸基を縮合させてもよぐあるいは、異なるアルコール、アミン等を繰り返し反応させて、 R5が種々の置換基で置換されている混成体ポリマーを合成し、次いで、コンブレタスタチン類の水酸基を縮合させてもよレ、。又、コンブレタスタチン類を縮合させた後に（C 1〜C30)アルコキシ基、（C 1〜C30)ァラルキルォキシ基、（C1〜C30)アルキルアミノ基、ジ（C1〜C30)アルキルアミノ基又はカルボキシ基が保護されたアミノ酸等を導入してもよい。

[0053] ただし、本発明のコンブレタスタチン類の高分子結合体の製造法は上記の方法に限定されるわけではない。

[0054] 本発明には、本発明のコンブレタスタチン類の高分子結合体を有効成分とする抗癌剤も含まれる。また、本発明には、本発明のコンブレタスタチン類の高分子結合体を有効成分とする血管標的化剤、即ち、血流の抑制による新血管形成に関連した疾患の治療剤、例えば、慢性関節リウマチ、加齢性黄斑変性症、糖尿病性網膜症等の治療剤も含まれる。該高分子結合体は、注射剤、錠剤、散剤等の通常使用されている剤型にて使用され得る。製剤化に当たり通常使用されている薬学的に許容される担体や、例えば、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、溶剤、賦形剤、可溶化剤、分散剤、安定化剤、懸濁化剤、保存剤、無痛化剤、色素、香料等が使用できる。中でも、注射剤としての使用が好ましぐ通常、例えば、水、生理食塩水、 5%ブドウ糖又はマンニトール液、水溶性有機溶媒（例えば、グリセロール、エタノール、ジメチルスルホキシド、 N —メチルピロリドン、ポリエチレングリコール、クレモフォア等又はそれらの混合液）あるいは水と該水溶性有機溶媒の混合液等が使用される。

[0055] 本発明のコンブレタスタチン類の高分子結合体の投与量は、患者の性別、年齢、生理的状態、病態等により当然変更され得るが、例えば、非経口的に、通常、成人 1 曰当たり、活'性成分として 0. 01〜500mg/m²、好ましくは 0. l~250mg/m¾¾ 与する。注射による投与は、静脈内、動脈内、患部 (腫瘍部）等に行われる。

実施例

[0056] 以下、本発明を実施例により更に具体的に説明するが、本発明がこれらの実施例に限定されるものではない。

[0057] 実施例 1 化合物 1 (分子量 5000のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が 30のポリアスパラギン酸部分からなるブロック共重合体と、コンブレタスタチン A— 4との結合体：一般式（I)の Rl =Me (メチル基）、 R2 =トリメチレン基、 R3 =Ac (ァセチル基）、 R4 =コンブレタスタチン A—4残基、 R5 =イソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミノ基、 d + e + f + g + h + i+j = 30、 t= 113)の合成

特許文献 5に記載された方法によって調製したメトキシポリエチレングリコール—ポリアスパラギン酸ブロック共重合体（ァスパラギン酸部分：ひ型と j3型の混合体、重合数 30、 2670mg)と非特許文献 1に記載の方法で合成したコンブレタスタチン A_4 ( 600mg)を DMF (60ml)に溶角军し、 DMAP (174mg) , DIPC (2. 97ml)をカロ免、 2 5°Cにて 20時間撹拌した。反応液に酢酸ェチル（180ml)及びジイソプロピルエーテノレ（720ml)をカ卩え、室温にて 30分攪拌した後沈析物を濾取し、酢酸ェチル /ジイソプロピルエーテル（1/4 (v/v)、 30ml)で洗浄した。得られた沈析物をァセトニトリル/水（1/1 (v/v)、 100ml)に溶解後、イオン交換樹脂 (ダウケミカル社製ダウェックス 50 (H+)、 15ml)に通塔し、ァセトニトリル/水（1/1 (v/v)、 20ml)にて溶出した。得られた溶出画分に水（60ml)をカ卩え、ァセトニトリルを減圧下留去し、その後凍結乾燥することによって化合物 1 (2670mg)を得た。

[0058] HPLC (高速液体クロマトグラフィー：カラム；イナ一トシル ODS - 3 (GLサイエンス社製）、溶媒系； 0. 1%リン酸水溶液ーァセトニトリル（50%— 50% (v/v) ) )による反応液中の未反応コンブレタスタチン A—4量の計量から、化合物 1中のコンブレタスタチン A— 4含量は 10. 4% (w/w)、 d + e + f + g + h + i+jに対する d + eの割合は 10. 6%であった。化合物 1中、遊離のコンブレタスタチン A—4は未検出であった。又、 R5としてイソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミノ基が導入され、その存在比は化合物 1を重水酸化ナトリウム Z重水 Z重ァセトニトリルに溶解したものの¹ H — NMR (水素核磁気共鳴スペクトル)から求められる。化合物 1におけるイソプロピルァミノカルボニルイソプロピルアミノ基がポリアスパラギン酸に占める割合、即ち、 d + e + f + g + h + i+jに対する f + gの割合は 16. 2%であった。その他のァスパラギン酸は遊離カルボン酸 (h + i)あるいは環状構造 (j)である

[0059] 実施例 2 化合物 2 (分子量 12000のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数力 ¾3のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体と、コンブレタスタチン A— 4との結合体）の合成：一般式（Π)の Rl = Me (メチル基）、 R2 =トリメチレン基、 R3 = A c (ァセチル基）、 R4 =コンブレタスタチン A— 4残基、 R5 =イソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミノ基、 k+m+n= 23、 t = 273)の合成

特開平 5— 955号公報に記載された方法によって調製したメトキシポリエチレンダリコールーポリグノレタミン酸ブロック共重合体（581mg)と非特許文献 1記載の方法で合成したコンブレタスタチン A— 4 (100mg)を DMF (4. 5ml)に溶解し、 DMAP (16 . 5mg)、 DIPC (0. 283ml)をカロえ、 20°Cにて 40時間撹拌した。反応液に DIPC (0 . 070ml)をカ卩え、 25°Cに昇温後 1. 5時間攪拌を継続した。反応液にエタノール（6 0ml)及びジイソプロピルエーテル（240ml)を加え、室温にて 3時間攪拌した後沈析物を濾取し、エタノール/ジイソプロピルエーテル（lZ4 (vZv)、 50ml)で洗浄した。得られた沈析物をァセトニトリル Z水（lZl (v/v)、 50ml)に溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル社製ダウエックス 50 (H⁺ )、 15ml)に通塔し、ァセトニトリル Z水（1 /1 (v/v)、 50ml)にて溶出した。得られた溶出画分に水（3ml)を加えた後ァセトニトリルを減圧下留去し、その後凍結乾燥することによって、化合物 2 (550mg)を得た [0060] HPLCによる反応液中の未反応コンブレタスタチン A— 4量の計量から化合物 2中のコンブレタスタチン A— 4含量は 11 · 2% (w/w)であった。化合物 2中、遊離のコンブレタスタチン A—4は未検出であった。

[0061] 又、 R5としてイソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミノ基が導入され、その存在比は化合物 2を重水酸化ナトリウム Z重水 Z重ァセトニトリルに溶解したものの¹ H — NMR (水素核磁気共鳴スペクトル）力求められ、イソプロピルアミノカルボ二ルイソプロピルアミノ基がポリアスパラギン酸に占める割合、即ち、 k+m+nに対する mの割合は 32%だった。

[0062] 実施例 3 化合物 3 (分子量 12000のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が 33のポリアスパラギン酸部分からなるブロック共重合体とコンブレタスタチン A—4との結合体：一般式（I)の Rl =Me (メチル基）、 R2 =トリメチレン基、 R3 =Ac (ァセチル基）、 R4 =コンブレタスタチン残基、 R5 =イソプロピルアミノカルボニルイソプロピルァミノ基および O—べンジルーフエニルァラエル基、 d + e + f + g+h+i+j = 33、 t = 273)の合成

特許文献 5に記載された方法によって調製したメトキシポリエチレングリコールーポリアスパラギン酸ブロック共重合体（ァスパラギン酸部分： α型と型の混合体、重合数 33、 605. 4mg)と国際公開第 02/06279号パンフレット記載の方法で調製したコンブレタスタチン A— 4 (100mg)を DMF (8. 5ml)に溶解し、フエ二ルァラニンベンジルエステル塩酸塩（83· 4mg)、トリェチルァミン（0. 04ml)、 DMAP (16mg)および DIPC (0. 4ml)をカロえ、 15°Cにて 20時間撹拌し、その後さらに 25°Cにて 4時間攪拌した。反応液に酢酸ェチル（70ml)、ヘプタン（70ml)をカ卩え、室温にて 30分攪拌した後沈析物を濾取し、酢酸ェチル /ヘプタン（lZl (v/v)、 20ml)で洗浄した。得られた沈析物をァセトニトリル/水（1/1 (v/v)、 20ml)に溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル社製ダウエックス 50 (H⁺)、 3ml)に通塔し、ァセトニトリル Z水（lZl (v/v)、 20ml)にて溶出した。得られた溶出画分に水（35ml)を加え、ァセトニトリルを減圧下留去し、その後凍結乾燥することによって化合物 3 (710mg)を得た。

[0063] HPLC (高速液体クロマトグラフィー）による反応液中の未反応コンブレタスタチン A ー4量の計量から、化合物 3中のコンブレタスタチン A— 4含量は 7. 9% (w/w)、 d + e + f + g + h + i+jに対する d + eの割合は 14%であった。化合物 3中、遊離のコンブレタスタチン A— 4は未検出であった。

[0064] R5の一つとして導入した 0—ベンジルーフヱ二ルァラニル基は、化合物 3をァセト二トリル一水酸化ナトリウム水溶液中 40°Cで 6時間加水分解し、溶出したベンジルァルコールを定量することから求められ、〇一ベンジルーフヱニルァラニル基がポリアスパラギン酸に占める割合、即ち、 d + e + f + g + h + i+jに対する f + gの害 IJ合は、〇一ベンジル一フエニルァラニル基が結合したものについては 27%だった。又、 R5としてイソプロピルアミノカルボ二ルイソプロピルアミノ基も導入され、その存在比は化合物 3 を重水酸化ナトリウム Z重水 Z重ァセトニトリルに溶解したものの¹ H— NMR (水素核磁気共鳴スペクトル）から求められる。イソプロピルアミノカルボ二ルイソプロピルアミノ基がポリアスパラギン酸に占める割合、即ち、 d + e + f + g + h + i+jに対する f + gの割合は、イソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミノ基が結合したものについては 15%であった。この結果、 R5の総量がポリアスパラギン酸に占める割合、即ち、 d + e + f + g + h + i+jに対する f + gの割合は 42%であった。その他のァスパラギン酸は遊離カルボン酸 (h + i)あるいは環状構造 (j)であった。

[0065] 試験例 1 酵素非存在下での薬剤放出

化合物 1、化合物 2又は化合物 3を、 PBS (リン酸緩衝生理食塩水； pH7. 1)にポリマー濃度で lmg/mlで溶解し、 37°Cにてインキュベートした。該高分子結合体より放出されたコンブレタスタチン A— 4を、 HPLCにて分離し標準曲線を用いて定量した。定量値と高分子結合体の薬剤含有量力求めた全薬剤量との比を図 1に示した図 1に明らかなように、本発明の高分子結合体 (化合物 1、化合物 2及び化合物 3) は加水分解酵素がなくても有意にコンブレタスタチン A—4を放出した。特に、コハク酸モノアミド構造部分を持つ化合物 1及び化合物 3は、コハク酸モノアミド構造部分を持たない化合物 2と比較して、より早いコンブレタスタチン A—4の放出をした。図 1の結果は、酵素非存在下での本発明の高分子結合体の優れた薬剤放出性能を示している。 [0066] 試験例 2 抗腫瘍作用

マウス皮下で継代してレ、るマウス大腸癌 Colon26を約 2mm角のブロックにし、套管針を用いて雌性 CDF1マウスの背側部皮下に移植した。腫瘍移植後 7日目から本発明の高分子結合体 (化合物 1)又は対照薬（コンブレタスタチン A— 4)を、各々コンブレタスタチン A— 4換算した投与量でマウス尾静脈内に単回投与した。コントロールは薬物を投与しない群である。化合物 1は 5%ブドウ糖注射液で溶解し用いた。コンブレタスタチン A—4はジメチルスルホキシドとクレモホール EL (シグマ社製）に溶解し、使用時に 5%ブドウ糖注射液で希釈して用いた。投与後、腫瘍の長径 (Lmm)及び短径 (Wmm)を、ノギスを用いて計測し、腫瘍体積を (LxW²) /2により計算して投与開始日の腫瘍体積に対する相対腫瘍体積として表 1に示した。

[0067] [表 1]

[0068] 表 1から本発明の高分子結合体 (化合物 1)は、コンブレタスタチン A— 4よりも少ない投与量でコンブレタスタチン A— 4より優れた抗癌活性を有することが明ら力、となつた。

[0069] 試験例 3 抗腫瘍作用

マウス皮下で継代しているマウス大腸癌 Colon26を約 lmm角のブロックにし、套管針を用いて雌性 CDF1マウス 8の背側部皮下に移植した。腫瘍移植後 7日目から本発明の高分子結合体 (化合物 2および化合物 3)又は非特許文献 1に記載の方法で合成した対照薬（コンブレタスタチン A— 4リン酸エステル）を、各々コンブレタスタチン A— 4換算した投与量でマウス尾静脈内に単回投与した。コントロールは薬物を投与しない群である。化合物 2、化合物 3および対照薬はすべて 5%ブドウ糖注射液で溶解し用いた。投与後、腫瘍の長径 (Lmm)及び短径 (Wmm)を、ノギスを用いて計測し、腫瘍体積を (L X W²) /2により計算して投与開始日の腫瘍体積に対する相対腫瘍体積として表 2に示した。

[¾2]

[0071] 表 2から本発明の高分子結合体 (ィ匕合物 2および 3)は、コンブレタスタチン A— 4リン酸エステルよりも少ない投与量で、より優れた抗癌活性を有することが明らかである。図面の簡単な説明

[0072] [図 1]本発明の実施例 1の化合物 1及び 3 ( (メトキシポリエチレングリコール誘導体ポリアスパラギン酸）コンブレタスタチン A— 4結合体）と実施例 2の化合物 2 ( (メトキシポリエチレンダリコール誘導体一ポリグノレタミン酸）コンブレタスタチン A— 4結合体）の PBS溶液 (ρΗ7· 1、 37°C)中でのコンブレタスタチン A— 4の全結合量に対する放出量の割合

Claims

請求の範囲

ポリエチレングリコール構造部分と 2以上のカルボン酸基を有するポリマー部分とのブロック共重合体における該ポリマー部分のカルボン酸基とコンブレタスタチン類の水酸基とがエステル結合しているコンブレタスタチン類の高分子結合体。

カルボン酸基を有するポリマー部分がコハク酸モノアミド構造部分を有するポリマーである請求項 1記載のコンブレタスタチン類の高分子結合体。

コハク酸モノアミド構造部分を有するポリマーがポリアスパラギン酸である請求項 2 記載のコンブレタスタチン類の高分子結合体。

コンブレタスタチン類の高分子結合体が、一般式 (I)

[化 6]

C0₂R4

R1 -0-(CH₂CH₂0)_t-R2-[(NHCOCH)_d-(NHCOCH₂CH)_e-(NHCOCH)_f -

CH₂C0₂ 4 CH₂COR5

COR5 C0₂H

-(NHCOCH₂CH)g-(NHCOCH)_h-(NHCOCH₂CH)「(NCO,H)j】-NHR3

CH₂C0₂H COCH_{2 ( I )}

で表される化合物である請求項 1〜3のいずれか一項に記載のコンブレタスタチン類の高分子結合体。

[5] R1が（C1〜C6)アルキル基であり、 R2が（C2〜C6)アルキレン基であり、 R3が（C

1〜C6)ァシル基であり、 tが 8〜2300の整数であり、 d、 e、 f、 g、 h、 i若しくは jが各々独立に 0〜100の整数であり、ただし d + eが:!〜 100の整数であり、且つ、 d + e + f + g+h+i+jが 6〜100の整数である請求項 4記載のコンブレタスタチン類の高分子結合体。

[6] R1が（C1〜C3)アルキル基であり、 R2が（C2〜C4)アルキレン基であり、 R3が（C

1〜C3)ァシル基であり、 tが 100〜300の整数であり、 d、 e、 f、 g、 h、 i若しくは jが各々独立に 0〜90の整数であり、ただし d + eが:!〜 90の整数であり、且つ、 d + e + f + g + h + i+jが 15〜90の整数である請求項 4又は 5に記載のコンブレタスタチン類の高分子結合体。

[7] カルボン酸基を有するポリマー部分がポリグルタミン酸である請求項 1記載のコンブレタスタチン類の高分子結合体。

[8] コンブレタスタチン類の高分子結合体が、一般式 (II)

[化 7]

CH₂CH₂C0₂R5

R1 -0-(CH₂CH₂0)_t-R2-[(NHCOCH)_k-(NHCOCH)_m -(NHCOCH)_n]-NHR3

CH₂CH₂C0₂R4 CH₂CH₂C0₂H (ェ¹)

[式中、 R1は水素原子又は（C1〜C6)アルキル基を示し、 R2は結合基を示し、 R3 は水素原子又は（C1〜C6)ァシル基を示し、 R4はコンブレタスタチン類の水酸基の残基を示し、 R5は（C1〜C30)アルコキシ基、（C7〜C30)ァラルキルォキシ基、（C 1〜C30)ァノレキノレアミノ基、ジ（C1〜C30)アルキルアミノ基、カルボキシ基が保護されたァミノ酸及び_1^ (1 6)〇〇^«^ (1¾7)カ、らなる群カ、ら選ばれる基を示し、 R6、 R7 は同一でも異なっていてもよぐ（C3〜C6)環状アルキル基若しくは三級アミノ基で置換されていてもよい（C1〜C5)アルキル基を示し、 tは 5〜： 11500の整数を示し、 k は 1〜200の整数を示し、 m、 nは各々独立に 0〜200の整数を示し、ただし、 k+m +nは 3〜200の整数を示し、ポリグノレタミン酸の各構成単位の結合順は任意である] で表される化合物である請求項 1又は 7に記載のコンブレタスタチン類の高分子結合体。

R1が（C1〜C6)アルキル基であり、 R2が（C2〜C6)アルキレン基であり、 R3が（C 1〜C6)ァシル基であり、 tが 8〜2300の整数であり、 kが:!〜 90の整数であり、 m, n が各々独立に 0〜90の整数であり、ただし k+m+nが 6〜90の整数である請求項 8 記載のコンブレタスタチン類の高分子結合体。

R1が（C1〜C3)アルキル基であり、 R2が（C2〜C4)アルキレン基であり、 R3が（C 1〜C3)ァシル基であり、 tが 100〜300の整数であり、 kが 3〜60の整数であり、 m, nが各々独立に 0〜60の整数であり、ただし k+m+nが 6〜60の整数である請求項 8又は 9に記載のコンブレタスタチン類の高分子結合体。

コンブレタスタチン類がコンブレタスタチン A— 4である請求項 1〜10のいずれか一項に記載のコンブレタスタチン類の高分子結合体。

ポリエチレングリコール構造部分と 2以上のカルボン酸基を有するポリマー部分とのブロック共重合体における該ポリマー部分のカルボン酸基と、コンブレタスタチン類の水酸基とを有機溶媒中、脱水縮合剤を用いてエステル結合させて得られるコンブレタスタチン類の高分子結合体。

ポリエチレングリコール構造部分と 2以上のカルボン酸基を有するポリマー部分とのブロック共重合体における該ポリマー部分のカルボン酸基と、コンブレタスタチン類の水酸基とを有機溶媒中、脱水縮合剤を用いてエステル結合させることを特徴とする請求項 1〜： 11のいずれか一項に記載のコンブレタスタチン類の高分子結合体の製造方法。

請求項 1〜： 12に記載のコンブレタスタチン類の高分子結合体を有効成分とする抗癌剤。

請求項 1〜： 12に記載のコンブレタスタチン類の高分子結合体を有効成分とする血管標的化剤。