WO2008007004A2 - Procede d'obtention d'un principe actif augmentant la longevite cellulaire et tissulaire cutanee, principe actif et compositions - Google Patents

Procede d'obtention d'un principe actif augmentant la longevite cellulaire et tissulaire cutanee, principe actif et compositions Download PDF

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Definitions

  • the present invention relates to a method for obtaining an active ingredient derived from Myrtus communis, for increasing the cellular and tissue longevity and limiting the appearance of signs of skin aging.
  • the invention also relates to the active ingredient that can be obtained by this method and the associated cosmetic compositions.
  • the active ingredient that can be obtained by this method and the associated cosmetic compositions.
  • Aging is a complex process that depends on genetic determinism, epigenetic mechanisms, and various external influences such as the sun, air pollution, food, lifestyle, etc.
  • the present invention proposes a process for obtaining an active ingredient derived from Myrtus communis, capable of limiting and reversing the appearance signs of skin aging by acting on at least three molecular mechanisms strongly involved in cell and tissue longevity.
  • SIRT-I proteins In humans, aging is associated with an increase in body fat. Recently, activation of SIRT-I proteins has been shown to reduce fat accumulation in adipose tissue by repressing a transcription factor involved in adipogenesis. By simulating a calorie restriction, SIRT-I has beneficial effects on longevity.
  • SIRT-I is also involved in various biological functions such as transcription, DNA repair, apoptosis and cell senescence processes. These are key regulators of cell survival.
  • SIRT-I the endogenous expression of SIRT-I decreases progressively in aged human fibroblasts.
  • the object of the present invention is to promote the expression of the SIRT-I longevity genes and thus reduce the phenomena of cellular senescence and increase the longevity of the cells and tissues of the skin.
  • Epigenetic factors are also involved in explaining the decline of functions during aging.
  • All communication between cells and tissues passes through receivers that recognize a messenger and transmit a message inside the cell.
  • a major aspect of membrane transmission is the need to assemble rapidly and efficiently all components involved in signal transduction. This assembly is enabled by the presence of specialized membrane micro-domains, such as caveolae, which ensure contact between the receptor and its activation pathways. Caveolae are specialized structures enriched in lipids characterized by the presence of proteins called caveolins. Caveolins interact directly with signaling molecules such as the EGF (Epidermal Growth Factor) receptor, protein G 1, protein kinase C 1 etc.
  • EGF Epidermatitis
  • the senescent cells are characterized by the alteration of their membrane causing a dysfunction of the signaling membrane equipment.
  • the senescence state of the cells can be returned to an active functional state by restoring the signaling membrane equipment.
  • the present invention also proposes to reduce the expression of caveolin in skin cell membranes and thereby stimulate cell signaling and limit cell senescence.
  • One of the characteristics of aging is the slowing of cellular functioning that can lead to the production of modified molecules and therefore unable to perform their tasks normally.
  • glycation is known to be one of the main causes of aging of the skin.
  • Glycation is the set of reactions that occur in the absence of enzymes between reducing sugars, such as glucose, and free amino groups of proteins. It leads to the formation of abnormal and irreversible cross-links between matrix macromolecules via training of glycation residues. It thus modifies the properties of the macromolecules constituting the extracellular matrix, in particular collagens.
  • the glycated proteins lose their biological functionality: the cutaneous tissues stiffen and ossify and tissue aging accelerates. This is why the present invention also aims at blocking the glycation reaction of the proteins involved in accelerated aging, so as to preserve the functionality of the cutaneous tissues and to increase the tissue longevity of the skin.
  • the active principle according to the present invention thus makes it possible to delay the cellular senescence phenomena of the skin and to limit tissue degeneration by acting on both genetic and epigenetic factors, namely:
  • the active ingredient according to the invention makes it possible to preserve the functionality of the skin tissues. It limits the degeneration of the cutaneous tissues and the appearance of the signs of the aging at the level of the skin.
  • the present invention is now described in detail to allow a better understanding of the results obtained grouped in tables.
  • the process for obtaining the active ingredient according to the present invention comprises the following succession of steps: solubilization of Myrtus powder in water in an acidic medium, preferably of Myrtus communis leaf powder,
  • the rate of solids is measured by passing in an oven at 105 ° C. of a sample of initial weight given until a constant weight is obtained.
  • the solids content is between 20 and 200 g / l, more particularly between 28 and 42 g / l. II.2 / pH measurement
  • the pH measured by the potentiometric method at room temperature leads to values between 3.0 and 6.0, more particularly between 3.5 and 4.5.
  • the DUBOIS method (DUBOIS M. et al [1956], Analytical Chemistry, 28, No. 3, p 350-356) is used.
  • the total sugar content of a sample can be determined.
  • the total sugar level of the active ingredient according to the present invention is from 5 to 64 g / l, preferably from 7 to 14 g / l.
  • the polymerization analysis shows that the glucidic fraction of the active principle according to the present invention is essentially composed of glucose and galacturonic acid present in the form of oligosaccharides.
  • the phenolic compounds form colored compounds, the intensity of this coloration being proportional to the amount of phenolic compounds.
  • the amount of phenolic compounds can be deduced.
  • the results give 0.5 to 10.5 g / l and more particularly 0.9 to 2.3 g / l.
  • the chromatogram of the active principle according to the invention shows the presence of hydroxybenzoic compounds and flavonols, the proportions being substantially of the order of the values given in the following table:
  • the cells are then incubated at 37 ° C.
  • the cell extracts are recovered by potterization of the cells and then stored at -80 ° C. while waiting for the SIRT-I assay.
  • the SIRT-I assay is performed by Western Blot. The results, given as a percentage of SIRT-I expression relative to the untreated control on normal human fibroblasts, are presented in the following table:
  • TL1-Z / Evaluation of the effect on the expression of caveolin-1 The objective of the study is to evaluate the effect of the active ingredient obtained according to the invention on the expression of caveolin-1, proteins involved in cell signaling.
  • the operating protocol is as follows.
  • the fibroblasts are seeded in complete medium and then incubated at 37 ° C.
  • the culture medium is removed and replaced: for young cells, by culture medium for the untreated control, for senescent cells,
  • the cells are then incubated at 37 ° C.
  • caveolin-1 by seroblock fibroblasts is significantly increased by 50% compared with normal human fibroblasts.
  • the active ingredient according to the invention dosed at 1% renormalizes the expression of caveolin-1 by senescent fibroblasts.
  • ITL.3 Evaluation of the effect on the qlycation of collagen This study aims to evaluate the capacity of the active principle according to the invention to limit the glycation reaction of collagen. The study is carried out according to the operating protocol that follows. At 0, test samples are prepared in sterile hemolysis tubes:
  • the active ingredient according to the invention at 1%, 2.5% and 5%.
  • the samples are incubated at 37 ° C in the dark for 14 days.
  • the active ingredient according to the invention inhibits the glycation reaction of collagen. This effect is dose-dependent.
  • This study aims to quantify in vivo the anti-wrinkle efficacy of the active ingredient according to the invention formulated at 4% emulsion against placebo. It is performed on 21 healthy female volunteers aged between 43 and 69 years.
  • the anti-wrinkle efficacy is measured by means of silicone impressions made at the crow's feet of the volunteers.
  • the analysis of these impressions using a profilometer equipped with an image analyzer provides three parameters: the number of wrinkles, the total wrinkled surface and the total length of the wrinkles.
  • two symmetrical cutaneous areas are determined at the level of crow's feet, one intended to be treated by the placebo, the other by the active principle, and impressions are taken on these two zones.
  • the active ingredient and the placebo are applied twice a day.
  • the active ingredient and the placebo are applied twice a day.
  • the active ingredient obtained according to the invention formulated at 4% in emulsion decreases both the number of wrinkles by 16%, the total wrinkled surface by 33% and the total length of the wrinkles by 25%. After 56 days the decrease is 30% for the number of wrinkles, 39% for the total wrinkled surface and 36% for the total length of wrinkles.
  • the present invention also covers cosmetic compositions including the active ingredient according to the present invention in different galenical forms, in particular gel, solution, emulsion, cream, etc.
  • the stability of the dosage forms including the active ingredient according to the invention is characterized by a lack of precipitation of the asset, an absence of creaming and a lack of phase shift.
  • Opaque gel - Sepigel 305: 2.0%
  • Emulsified gel - Montanov 202: 3.0%

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Abstract

Procédé d'obtention d'un principe actif à partir de Myrtus communis pour augmenter la longévité des cellules et des tissus de la peau.

Description

PROCEDE D'OBTENTION D'UN PRINCIPE ACTIF AUGMENTANT LA
LONGEVITE CELLULAIRE ET TISSULAIRE CUTANEE,
PRINCIPE ACTIF ET COMPOSITIONS
La présente invention se rapporte à un procédé d'obtention d'un principe actif issu de Myrtus communis, pour augmenter la longévité cellulaire et tissulaire et limiter l'apparition des signes du vieillissement cutané.
L'invention concerne également le principe actif susceptible d'être obtenu par ce procédé et les compositions cosmétiques associées. l'augmentation de la durée de vie, on accorde de plus en plus d'importance au vieillissement de la peau. Femmes et hommes ont tendance à vouloir rester jeunes le plus longtemps possible et cherchent à retarder et limiter l'apparition des marques du vieillissement cutané, premiers signes extérieurs du vieillissement.
Le vieillissement est un processus complexe dépendant du déterminisme génétique, de mécanismes épigénétiques, et de diverses influences externes telles que le soleil, la pollution atmosphérique, l'alimentation, l'hygiène de vie, etc.
La longévité et le déclin des cellules et des tissus de la peau sont donc sous l'influence de nombreux facteurs.
Pour prévenir efficacement le vieillissement cutané et limiter l'apparition des effets néfastes qui en découlent, il est important de retarder les phénomènes de sénescence cellulaire et de limiter la dégénération tissulaire.
C'est pourquoi la présente invention propose un procédé d'obtention d'un principe actif issu de Myrtus communis, capable de limiter et faire reculer l'apparition des signes du vieillissement cutané en agissant sur au moins trois mécanismes moléculaires fortement impliqués dans la longévité cellulaire et tissulaire.
Chez l'homme, le vieillissement est associé à une augmentation du taux de graisse corporelle. Récemment, il a été démontré que l'activation des protéines SIRT-I réduit l'accumulation des graisses dans les tissus adipeux en réprimant un facteur de transcription participant à l'adipogenèse. En simulant une restriction calorique, SIRT-I entraîne des effets bénéfiques au niveau de la longévité.
Les SIRT-I interviennent également dans diverses fonctions biologiques comme la transcription, la réparation de l'ADN, les processus d'apoptose et de sénescence cellulaire. Ce sont des régulateurs clés de la survie cellulaire.
Or l'expression endogène des SIRT-I décroît progressivement dans les fibroblastes humains vieillis.
De fait, la présente invention a pour objectif de favoriser l'expression des gènes de longévité SIRT-I et ainsi réduire les phénomènes de sénescence cellulaire et augmenter la longévité des cellules et des tissus de la peau.
Des facteurs épigénétiques sont aussi impliqués dans l'explication du déclin des fonctions au cours du vieillissement.
C'est le cas notamment de la communication entre les cellules qui est essentielle à leur bon fonctionnement et donc garante de leur longévité. Elle est en effet impliquée dans de nombreux mécanismes biologiques comme l'assimilation des nutriments, l'apoptose, la transmission d'informations, etc.
Toute communication entre cellules et tissus passe par des récepteurs qui reconnaissent un messager et transmettent un message à l'intérieur de la cellule.
Un aspect majeur de la transmission membranaire est la nécessité d'assembler rapidement et efficacement tous les composants impliqués dans la transduction du signal. Cet assemblage est permis grâce à la présence de micro-domaines membranaires spécialisés, tels que les cavéoles, qui assurent le contact entre le récepteur et ses voies d'activation. Les cavéoles sont des structures spécialisées enrichies en lipides caractérisées par la présence de protéines appelées cavéolines. Les cavéolines interagissent directement avec les molécules de signalisation telles que le récepteur de l'EGF (Epidermal Growth Factor), la protéine G1 la protéine kinase C1 etc.
Les cellules sénescences sont caractérisées par l'altération de leur membrane entraînant un dysfonctionnement des équipement membranaires de signalisation.
Ces cellules sénescences ne réagissent plus aux facteurs de croissance type EGF ce qui conduit à la perte de leur capacité proliférative. Cette réponse limitée des cellules sénescences à des stress intrinsèques ou extrinsèques est due à une augmentation du taux de cavéoline au niveau des cavéoles qui provoque un dysfonctionnement de l'endocytose.
L'état de sénescence des cellules peut être reversé en un état fonctionnel actif en restaurant les équipements membranaires de signalisation. Notamment, en limitant la formation des structures cavéoles, il est possible de restaurer les voies de signalisation régulées par l'EGF dans les cellules sénescences et stimuler à nouveau leurs capacités prolifératives.
Aussi, la présente invention se propose donc également de réduire l'expression des cavéolines dans les membranes des cellules de la peau et ainsi stimuler la signalisation cellulaire et limiter la sénescence cellulaire.
Une des caractéristiques du vieillissement est le ralentissement du fonctionnement cellulaire pouvant conduire à la production de molécules modifiées et donc incapables d'effectuer normalement leurs tâches.
Parmi ces modifications, la glycation est connue pour être l'une des causes principales du vieillissement de la peau.
La glycation est l'ensemble des réactions qui se produisent en l'absence d'enzymes entre les sucres réducteurs, comme le glucose, et les groupements aminés libres des protéines. Elle entraîne la formation de liaisons croisées anormales et irréversibles entre les macromolécules matricielles via la formation de résidus de glycαtion. Elle modifie ainsi les propriétés des macromolécules constitutives de la matrice extracellulaire, en particulier des collagènes. Les protéines glyquées perdent leur fonctionnalité biologique : les tissus cutanés se rigidif ient et se sclérosent et le vieillissement tissulaire s'accélère. C'est pourquoi, la présente invention vise également à bloquer la réaction de glycation des protéines impliquées dans le vieillissement accéléré, de façon à préserver la fonctionnalité des tissus cutanés et à augmenter la longévité tissulaire de la peau.
Le principe actif selon la présente invention permet donc de retarder les phénomènes de sénescence cellulaire de la peau et de limiter la dégénération tissulaire en agissant à la fois sur des facteurs génétiques et épigénétiques, à savoir :
- en stimulant l'expression du gène de restriction calorique SIRT-I,
- en contrôlant la signalisation intercellulaire, notamment en réduisant l'expression de la cavéoline-1, et
- en limitant le phénomène de glycation, en particulier la glycation du collagène.
Ainsi en stimulant les mécanismes moléculaires fortement impliqués dans la longévité cellulaire et tissulaire, le principe actif selon l'invention permet de préserver la fonctionnalité des tissus de la peau. Il limite la dégénération des tissus cutanés et l'apparition des signes du vieillissement au niveau de la peau. La présente invention est maintenant décrite en détail pour permettre de mieux appréhender les résultats obtenus regroupés en tableaux.
I/ PROCEDE D'OBTENTION E)U PRINCIPE ACTIF SELON L 'INVENTION :
Le procédé d'obtention du principe actif selon la présente invention comprend la succession des étapes suivantes : - solubilisαtion de poudre de Myrtus communis dans l'eau en milieu acide, préférentiellement de poudre de feuilles de Myrtus communis,
- hydrolyse(s) enzymatique(s) simultanée(s) et/ou successive(s),
- séparation des phases soluble et insoluble par f iltration, centrifugation ou décantation,
- inactivation par traitement thermique,
- purification par clarification,
- concentration de la fraction active,
- f iltration, et
- f iltration stérilisante.
Il/ Caractérisation du principe actif II.l/ Matières sèches
On mesure le taux de matières sèches par passage à l'étuve à 1050C d'un échantillon de poids initial donné jusqu'à obtention d'un poids constant. Le taux de matières sèches est compris entre 20 et 200 g/1, plus particulièrement entre 28 et 42 g/1. II.2/ Mesure du pH
Le pH mesuré par la méthode potentiométrique à température ambiante conduit à des valeurs comprises entre 3,0 et 6,0, plus particulièrement entre 3,5 et 4,5.
II.3/ Détermination de la teneur en sucres totaux
On utilise la méthode de DUBOIS (DUBOIS M. & al [1956], Analytical chemistry, 28, n°3 p 350-356).
En présence d'acide sulfurique concentré et de phénol, les sucres réducteurs donnent un composé jaune-orangé.
A partir d'une gamme étalon, on peut déterminer le taux de sucres totaux d'un échantillon. Le taux de sucres totaux du principe actif selon la présente invention est de 5 à 64 g/1, préférentiellement de 7 à 14 g/1. TLA/ Caractérisation des carbohydrates a. Dosage de sucres simples
Le taux de sucres simples est réparti en 35,3% de glucose, 30,2% d'acide galacturonique, 15,3% d'arabinose, 10,1% de galactose, 5,2% de rhamnose, 2,8% de xylose et 1,1% de mannose. b. Degré de polymérisation
L'analyse de polymérisation montre que la fraction glucidique du principe actif selon la présente invention est composé essentiellement de glucose et d'acide galacturonique présents sous forme d'oligosaccharides.
Figure imgf000007_0001
II.5/ Détermination de la teneur en composés phénol iques
Les composés phénoliques forment en présence de ferricyanure de potassium des composés colorés, l'intensité de cette coloration étant proportionnelle à la quantité de composés phénoliques.
En se rapportant à une gamme étalon d'acide gallique, en l'occurrence de 10 à 120mg/l, on peut déduire la quantité de composés phénoliques.
Les résultats donnent 0,5 à 10,5g/l et plus particulièrement 0,9 à 2,3g/l.
II.6/ Caractérisation des composés phénoliques La caractérisation et la quantification des composés phénoliques du principe actif selon la présente invention sont réalisées par HPLC, (High Performance Liquid Chromatography).
Le chromatogramme du principe actif selon l'invention montre la présence de composés hydroxybenzoïques et de flavonols, les proportions étant sensiblement de l'ordre des valeurs données dans le tableau suivant :
Figure imgf000008_0001
IH/ Evaluation de l'effet du principe actif obtenu selon l'invention III.l/Evaluation de l'effet sur l'expression des SIRT-I Cette étude a pour objectif d'évaluer l'effet du principe actif selon l'invention sur l'expression des SIRT-I, protéines impliquées dans la longévité.
Cette étude est réalisée sur f ibroblastes humains normaux et f ibroblastes humains sénescents, dont le vieillissement est induit par traitements successifs d'H2θ2, selon le protocole opératoire qui suit. A Jl, les fibroblastes sont ensemencés dans un milieu complet puis incubés à 37°C. A J4, le milieu de culture est éliminé et remplacé :
- pour les cellules jeunes,
• par du milieu de culture pour le témoin non traité,
• par du milieu de culture contenant le principe actif selon l'invention à 0,25%, 0,5% et 1%,
- pour les cellules sénescences, • par du milieu de culture contenant de IΗ2O2 à 60μM, pour induire la sénescence, pour le témoin non traité,
• par du milieu contenant de IΗ2O2 à 60μM, pour induire la sénescence, et le principe actif selon l'invention à 0,25%, 0,5% et 1%.
Les cellules sont ensuite incubées à 37°C.
A Jd, J6 et J7, les cellules sont traitées de la même manière qu'à J4.
A J8, les extraits cellulaires sont récupérés par potterisation des cellules puis stockés à -8O0C en attente du dosage des SIRT-I.
Le dosage des SIRT-I est réalisé par Western Blot. Les résultats, donnés en pourcentage d'expression de SIRT-I par rapport au témoin non traité sur f ibroblastes humains normaux, sont présentés dans le tableau suivant :
Expression des SIRT-I (%)
Fibroblastes humains Fibroblastes humains normaux sénescents
Témoin (non traité) 100 77
Principe actif selon l'invention à 0,25% 102 88
Principe actif selon l'invention à 0,5% 111 97
Principe actif selon l'invention à 1% 136 108
On constate que l'expression des SIRT-I par les fibroblastes sénescents est réduite significativement de 23% par rapport aux fibroblastes humains normaux.
Le principe actif selon l'invention dosé à 1% augmente significativement de 36% l'expression des SIRT-I par les fibroblastes normaux et restaure significativement l'expression des SIRT-I par les fibroblastes sénescents. TLl-Z/ Evaluation de l'effet sur l'expression des cavéolines-1 L'objectif de l'étude est d'évaluer l'effet du principe actif obtenu selon l'invention sur l'expression des cavéolines-1, protéines impliquées dans la signalisation cellulaire.
Cette étude est réalisée sur fibroblastes humains sénescen^s, dont le vieillissement est induit par traitements successifs d'V\zOz en comparaison à des fibroblastes humains normaux.
Le protocole opératoire est le suivant.
A Jl, les fibroblastes sont ensemencés dans un milieu complet puis incubés à 37°C.
A J4, le milieu de culture est éliminé et remplacé : pour les cellules jeunes, par du milieu de culture pour le témoin non traité, pour les cellules sénescences,
' par du milieu de culture contenant de IΗ2O2 à 60μM, pour induire la sénescence, pour le témoin non traité,
• par du milieu contenant de I' H2O2 à 60μM, pour induire la sénescence, et le principe actif selon l'invention à 0,25%, 0,5% et 1%.
Les cellules sont ensuite incubées à 37°C.
A J5, J6 et J7, les cellules sont traitées de la même manière qu'à J4. A J8, les extraits cellulaires sont récupérés par potterisation des cellules puis stockés à -8O0C en attente du dosage des cavéolines-1. Le dosage des cavéolines-1 est réalisé par Western Blot. Les résultats, donnés en pourcentage d'expression de cavéolines-1 par rapport au témoin non traité sur fibroblastes humains normaux, sont présentés dans le tableau suivant :
Figure imgf000011_0001
On constate que l'expression des cavéolines-1 par les fibroblastes sér\escerx\s est augmentée significativement de 50% par rapport aux fibroblastes humains normaux.
Le principe actif selon l'invention dosé à 1% renormalise l'expression des cavéolines-1 par les fibroblastes sénescents. ITL.3/ Evaluation de l'effet sur la qlycation du collaqène Cette étude a pour objectif d'évaluer la capacité du principe actif selon l'invention à limiter la réaction de glycation du collagène. L'étude est réalisée selon le protocole opératoire qui suit. A JO, on prépare des échantillons à tester dans des tubes à hémolyse stériles :
- un témoin collagène non glyqué, contenant
• ImI de collagène de queue de rat 3mg/ml,
- un témoin collagène glyqué, contenant
• ImI de collagène de queue de rat 3mg/ml, et
• 0,3ml d'une solution de glycolaldéhyde à 143mM, induisant la réaction de glycation,
- un témoin positif, contenant
• ImI de collagène de queue de rat 3mg/ml, • 0,3ml d'une solution de glycolαldéhyde à 143mM, induisant la réaction de glycation, et
• 32μl d'aminoguanidine à 3,39M, inhibiteur de la réaction de glycation,
- des essais produits, contenant
• ImI de collagène de queue de rat 3mg/ml,
• 0,3ml d'une solution de glycolaldéhyde à 143mM, induisant la réaction de glycation, et
• le principe actif selon l'invention à 1%, 2,5% et 5%. Les échantillons sont incubés à 37°C à l'abri de la lumière pendant 14 jours.
A J14, on mesure la fluorescence émise par les produits de glycation formés à l'aide d'un spectrof luorimètre.
Les résultats, exprimés en pourcentage d'efficacité sont présentés dans le tableau suivant :
Figure imgf000012_0001
On constate que le principe actif selon l'invention inhibe la réaction de glycation du collagène. Cet effet est dose-dépendant.
III.4/Etude des propriétés anti-rides
Cette étude a pour objectif de quantifier in vivo l'efficacité anti-rides du principe actif selon l'invention formulé à 4% en émulsion contre placebo. Elle est réalisée sur 21 volontaires sains de sexe féminin d'âge compris entre 43 et 69 ans.
L'efficacité anti-rides est mesurée par l'intermédiaire d'empreintes siliconées réalisées au niveau des pattes d'oie des volontaires. L'analyse de ces empreintes à l'aide d'un profilomètre muni d'un analyseur d'images permet d'obtenir trois paramètres : le nombre de rides, la surface totale ridée et la longueur totale des rides.
L'étude est réalisée selon le protocole ci-dessous.
Entre J-15 et JO, les volontaires appliquent deux fois par jour une crème placebo.
A JO, on détermine deux zones cutanées symétriques au niveau des pattes d'oie, une destinée à être traitée par le placebo, l'autre par le principe actif, et on prend les empreintes sur ces deux zones.
Entre JO et J27, le principe actif et le placebo sont appliqués deux fois par jour.
A J28, les empreintes sont prises sur les deux zones étudiées.
Entre J28 et J55, le principe actif et le placebo sont appliqués deux fois par jour.
A J56, les empreintes sont prises sur les deux zones étudiées.
Les résultats obtenus pour le principe actif par rapport à ceux obtenus pour le placebo sont exprimés en pourcentage dans le tableau qui suit :
Figure imgf000013_0001
On constate qu'après 28 jours d'applications biquotidiennes en comparaison au placebo, le principe actif obtenu selon l'invention formulé à 4% en émulsion diminue à la fois le nombre de rides de 16%, la surface totale ridée de 33% et la longueur totale des rides de 25%. Après 56 jours la diminution est de 30% pour le nombre de rides, de 39% pour la surface totale ridée et de 36% pour la longueur totale des rides.
IV/ COMPOSITION COSMÉTIQUE INCLUANT LE PRINCIPE ACTIF SELON L'INVENTION La présente invention couvre aussi les compositions cosmétiques incluant le principe actif selon la présente invention dans différentes formes galéniques, notamment gel, solution, émulsion, crème....
Il convient alors d'analyser la stabilité des formes galéniques incluant le principe actif selon l'invention, ceci dans des proportions comprises entre 1 et 5 %. La stabilité est caractérisée par une absence de précipitation de l'actif, une absence de crémage et une absence de déphasage.
On peut citer des formulations ayant montré une stabilité physique incluant 5% de principe actif selon l'invention.
Gel limpide : - Carbopol : 0,5% a^ec Triéthanolamine : qsp pH=6,5
- Phénonip : 0,7%
- Principe actif : 5,0%
- Eau : 93,8%
Gel opaque : - Sépigel 305 : 2,0%
- Phénonip : 0,7%
- Principe actif : 5,0%
- Eau : 92,3%
Gel émulsionné : - Montanov 202 : 3,0%
- Isopropyl palmitate : 12,0% - Phénonip : 0,7%
- Sépigel 305 : 2,0%
- Principe actif : 5,0%
- Eau : 77,3% Emulsion non ionique : - Montanov 202 : 3,0%
- Simulsol 165 : 2,0%
- Isopropyl palmitate : 20,0%
- Phénonip : 0,7%
- Principe actif : 5,0%
- Eau : 69,3% Emulsion anionique : - Acide stéarique : 7,0%
- Triethanolamine : 3,5%
- Isopropyl palmitate : 20,0%
- Phénonip : 0,7%
- Principe actif : 5,0%
- Eau : 63,8% Emulsion cationique : - Quaternium-82 : 5,0%
- Alcool cétylique : 2,0%
- Isopropyl palmitate : 15,0%
- Alcool cétéarylique : 1%,
- PEG 100 stéarate : 1%,
- Phénonip : 0,7%
- Principe actif : 5,0%
- Eau : 71,3%
De plus, des tests ont montré la compatibilité du principe actif avec les matières premières utilisées en cosmétique.

Claims

REVENDICATIONS
1. Procédé d'obtention d'un principe actif cosmétique, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes :
- solubilisation de poudre de Myrtus communis dans l'eau en milieu acide,
- hydrolyse(s) enzymatique(s) simultanée(s) et/ou successive(s),
- séparation des phases soluble et insoluble par filtration, centrifugation ou décantation,
- inactivation par traitement thermique,
- purification par clarification,
- concentration de la fraction active,
- filtration, et
- filtration stérilisante.
2. Procédé d'obtention d'un principe actif selon la revendication 1, caractérisé en ce que la poudre de Myrtus communis est de la poudre de feuilles de Myrtus communis.
3. Principe actif obtenu par la mise en oeuvre du procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé par les paramètres suivants :
- taux de matières sèches compris entre 20 et 200 g/1,
- pH compris entre 3,0 et 6,0,
- teneur en sucres totaux comprise entre 5 et 64 g/1, et
- teneur en polyphénols totaux comprise entre 0,5 et 10,5 g/1.
4. Principe actif selon la revendication 3, caractérisé par les paramètres suivants :
- taux de matières sèches compris entre 28 et 42 g/1,
- pH compris entre 3,5 et 4,5,
- teneur en sucres totaux comprise entre 7et 14 g/1, - teneur en polyphénols totaux comprise entre 0,9 et 2,3g/l.
- présence de glucose et d'acide galacturonique essentiellement sous forme d'oligosaccharides, et
- présence de composés phénoliques sous forme d'hydroxybenzoïques et de flavonols.
5. Utilisation du principe actif obtenu par la mise en oeuvre du procédé selon l'une des revendications 1 ou 2 pour la fabrication d'une composition cosmétique destinée à augmenter la longévité tissulaire et cellulaire cutanée.
6. Utilisation du principe actif obtenu par la mise en oeuvre du procédé selon l'une des revendications 1 ou 2 pour la fabrication d'une composition cosmétique destinée à limiter l'apparition des signes du vieillissement.
7. Utilisation du principe actif obtenu par la mise en oeuvre du procédé selon l'une des revendications 1 ou 2 pour la fabrication d'une composition cosmétique destinée à favoriser l'expression des gènes de la longévité SIRT- 1.
8. Utilisation du principe actif obtenu par la mise en oeuvre du procédé selon l'une des revendications 1 ou 2 pour la fabrication d'une composition cosmétique destinée à favoriser la signalisation cellulaire en inhibant l'expression des cavéolines-1.
9. Utilisation du principe actif obtenu par la mise en oeuvre du procédé selon l'une des revendications 1 ou 2 pour la fabrication d'une composition cosmétique destinée à limiter la réaction de glycation du collagène.
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