FR2900822A1 - Utilisation de principes actifs agissant sur la proteine xpc pour leur active cosmetique photo-reparatrice - Google Patents
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Abstract
L'objet de l'invention est l'utilisation d'au moins un principe actif capable de stimuler l'activité de la protéine XPC, pour la préparation d'une composition destinée à une activité photo-réparatrice.L'invention se rapporte également aux compositions photo-réparatrices comprenant au moins un principe actif agissant sur la protéine XPC.L'invention couvre aussi un principe actif particulier agissant sur la protéine XPC obtenu à partir de tourteau de graines de coton, et son procédé d'obtention.
Description
UTILISATION DE PRINCIPES ACTIFS AGISSANT SUR LA PROTEINE XPC POUR LEUR
ACTIVITE COSMETIQUE PHOTO-REPARATRICE
La présente invention concerne l'utilisation cosmétique de principes actifs stimulant l'activité de la protéine XPC pour lutter contre les effets néfastes des radiations ultraviolettes (UV) sur la peau. L'invention se rapporte également aux compositions photo-réparatrices comprenant au moins un principe actif agissant sur la protéine XPC. L'invention couvre aussi un principe actif particulier agissant sur la protéine XPC obtenu à partir de tourteau de graines de coton, et son procédé d'obtention. Le soleil est indispensable à la vie et essentiel à une bonne santé physique et mentale, mais il émet des radiations nocives, les rayonnements UV, capables de pénétrer dans les tissus cutanés. Une exposition excessive au soleil a donc des effets néfastes sur l'organisme en particulier au niveau de la peau qui devient lâche, profondément ridée, rugueuse et parsemée de tâches hypo- ou hyper-pigmentées et de vaisseaux dilatés. De plus, on sait que les surexpositions aux irradiations UV sont associées à un risque croissant de vieillissement et de cancers cutanés. C'est pourquoi la présente invention a pour objectif de lutter contre les effets néfastes des radiations UV et de réparer les dommages occasionnés au niveau de la peau. La pénétration des rayonnements UV dans les tissus cutanés est dépendante de leur longueur d'onde : les UVA pénètrent profondément dans la peau pour atteindre le derme, alors que les UVB sont majoritairement arrêtés au niveau de l'épiderme.
A l'échelle cellulaire, au niveau de l'épiderme, de faibles expositions aux UV provoquent une hyperprolifération des kératinocytes et un épaississement de la couche cornée. A fortes doses, on voit apparaître des cellules apoptotiques. On assiste également à une forte activation des kératinocytes qui produisent et sécrètent des cytokines pro inflammatoires et immunosuppressives ainsi que des facteurs de croissance qui affectent aussi l'activité des cellules environnantes. Dans le derme les UV provoquent des modifications très importantes dans la composition de la matrice extracellulaire et de son organisation, dont la caractéristique majeure est la formation d'élastose solaire.
A l'échelle moléculaire, les UV induisent d'importants dommages. En particulier, les UVB, les plus énergétiques et donc les plus biologiquement actifs, provoquent des lésions directes au niveau de l'ADN qui résultent de l'absorption immédiate des photons sur les bases de l'ADN. Ces altérations sont majoritairement des dimères de pyridine du type cyclobutane (CPD) et des photo-produits pyrimidine (6-4) pyrimidone (6-4PP). Pour lutter contre ces lésions photo-induites, les cellules sont capables de réparer l'ADN. Néanmoins, si les lésions induites sont trop importantes, les capacités de réparation de la cellule deviennent saturées. On sait notamment que plus le taux de CPD occasionnés augmente plus leur taux de réparation diminue.
Selon l'importance des lésions induites, l'élimination des photo-produits est également corrélée à l'induction de l'apoptose ou à la réduction des capacités de prolifération cellulaire, afin d'empêcher la division de la cellule dont le génome est altéré. S'il n'y a pas apoptose, lorsque la cellule retrouve ses capacités de prolifération, les CPD abondamment formés et faiblement réparés persistent dans le génome. Cet excès de photo-produits entraîne des processus inflammatoires et immunosuppressifs. Il interfère avec la réplication, perturbe la transcription et aboutit à des mutations au niveau de l'ADN, dont l'accumulation conduit à un dysfonctionnement cellulaire résultant au vieillissement prématuré cutané et dans certains cas au cancer de la peau. La principale voie d'élimination des photo-produits, notamment des CPD et des 6-4PPs, est le mécanisme de réparation par excision de nucléotides (NER). Ce système de réparation permet de reconnaître et d'exciser le fragment d'ADN défectueux, puis de le synthétiser correctement. L'identification des lésions de l'ADN est un processus complexe impliquant de nombreux facteurs protéiques dont la protéine XPC, facteur précoce de la voie globale de réparation NER. Cette protéine XPC joue également un rôle primordial dans l'initiation de l'assemblage de la machinerie protéique du mécanisme de réparation globale. Si les lésions induites sont trop importantes, le système de réparation est débordé et devient insuffisant pour rétablir l'intégrité de l'ADN. Pour limiter les altérations de l'ADN dans les peaux photo exposées il est donc 15 nécessaire de booster les équipements de réparation cutanés dont les capacités sont dépassées. Aussi, pour répondre à son objectif, la présente invention vise à utiliser des principes actifs capables d'augmenter la capacité des cellules de la peau à réparer les lésions photo-induites de l'ADN. 20 En particulier, la présente invention se propose d'utiliser des principes actifs capables de stimuler les processus naturels de réparation de l'ADN, notamment de stimuler l'activité de la protéine XPC, pour la préparation d'une composition destinée à une activité photo-réparatrice. L'utilisation d'au moins un principe actif capable de stimuler l'activité de la 25 protéine XPC selon l'invention, permet donc d'éliminer les photo-produits, notamment les CPD et les 6-4PPs, par le mécanisme de réparation par excision de nucléotides, et ainsi de limiter les dommages macromoléculaires induits par des expositions solaires répétées ou trop intenses.
Ainsi l'utilisation d'au moins un principe actif capable de stimuler l'activité de la protéine XPC selon l'invention permet d'améliorer les manifestations caractéristiques des peaux photo-exposées. De manière préférentielle les principes actifs capables de stimuler l'activité de la protéine XPC selon la présente invention sont des actifs obtenus à partir de végétaux. En particulier, ces végétaux peuvent être choisis par exemple parmi une plante de la famille des Malvacées. Les principes actifs capables de stimuler l'activité de la protéine XPC selon l'invention sont destinés à être incorporés au sein de compositions cosmétiques et/ou dermopharmaceutiques. La composition selon l'invention peut contenir de 0,01 à 20 % d'au moins un principe actif capable de stimuler l'activité de la protéine XPC. L'administration d'une composition contenant au moins un principe actif capable de stimuler l'activité de la protéine XPC selon l'invention est de préférence effectuée par voie topique. La composition selon l'invention peut se présenter sous forme de crèmes, émulsions huile-dans-eau, eau-dans-huile ou émulsions multiples, solutions, suspensions ou encore poudres.
La présente invention est maintenant décrite en s'appuyant sur un exemple particulier de principe actif capable de stimuler l'activité de la protéine XPC, obtenu à partir de graines de coton. 1. EXEMPLE DE PRINCIPE ACTIF ISSU DE GRAINES DE COTON CAPABLE D'AGIR SUR LA PROTEINE XPC Un exemple de substance capable de stimuler l'activité de la protéine XPC selon l'invention est un principe actif riche en peptides purifiés de tourteau de graines de coton, Gossypium hirsutum.
Avantageusement, ce principe actif issu de graines de coton selon l'invention est également capable de réduire le taux de CPb UV-induits et de réduire les risques d'inflammation et d'érythèmes en limitant l'augmentation du taux d'interleukine- la.
Ainsi ce principe actif issu de graines de coton selon l'invention permet d'améliorer les manifestations caractéristiques des peaux photo-exposées. Il réduit le vieillissement prématuré de la peau ainsi que les réactions de type inflammatoire. I.1/ PROCEDE D'OBTENTION D'UN EXEMPLE DE PRINCIPE ACTIF ISSU DE GRAINES DE 10 COTON SELON L'INVENTION Le procédé d'obtention comprend la succession des étapes suivantes - solubilisation aqueuse de tourteau de graines de Gossypium hirsutum, - hydrolyses enzymatiques successives, - séparation des phases soluble et insoluble, 15 - traitement thermique, - purification et concentration de la fraction active, et -filtration stérilisante. I.2/ CARACTERISATION DE L'EXEMPLE DE PRINCIPE ACTIF ISSU DE GRAINES DE COTON SELON L'INVENTION 20 I.2-1/ Matières sèches : On mesure le taux de matières sèches par passage à l'étuve à 105 C en présence de sable d'un échantillon de poids initial donné jusqu'à obtention d'un poids constant. Le taux de matières sèches est compris entre 15 et 200 g/I, plus 25 particulièrement entre 38 et 52 g/I.
I.2-2/ Mesure du pH : Le pH mesuré par la méthode potentiométrique à température ambiante conduit à des valeurs comprises entre 5,5 et 9,5, plus particulièrement entre 7 et 8 .
I.2-3/ Détermination de la teneur en protéines : La mesure de la teneur en protéines est déterminée par la méthode de Lowry. Dans le cas présent, la teneur en protéines est comprise entre 4,5 et 77 g/I, plus particulièrement entre 12 et 20 g/I.
I.2-4/ Caractérisation de la fraction protéique : La répartition des masses moléculaires des différentes espèces moléculaires présentes dans le principe actif obtenu par la mise en oeuvre du procédé selon l'invention est déterminée par FPLC (Fast Protein Liquid Chromatography).
Des marqueurs permettent de servir d'étalons et on constate que la fraction protéique est de masse moléculaire supérieur à 5000 boitons. I.2-5/ Identification de la fraction active Ce sont les protéines de la fraction entre 243 et 5000 boitons qui confèrent au principe actif selon l'invention son activité photo-réparatrice.
I.3/EVALUATION DE L'EFFET DE L'EXEMPLE DE PRINCIPE ACTIF ISSU DE GRAINES DE COTON SELON L'INVENTION I.3-1/ Evaluation de l'effet sur le système naturel de réparation de l'ADN après irradiation UVA Le but de cette étude est d'évaluer la capacité de l'exemple de principe actif issu de graines de coton selon l'invention à augmenter la synthèse de la protéine XPC après irradiation UVA, la protéine XPC étant impliquée dans la phase initiale du système de réparation NER (réparation par excision de nucléotides) des lésions génomiques.
L'étude est réalisée sur culture de fibroblastes humains normaux selon un protocole opératoire particulier. A JO, les cellules sont ensemencées dans un milieu complet. A J3, le milieu est éliminé et remplacé par du milieu complet.
A J4, le milieu de culture est éliminé et remplacé. Une partie des cellules est irradiée aux UVA 20J/cm2, et l'autre partie, non irradiée, reste en attente à l'obscurité. Environ 20 minutes après l'irradiation, le milieu est éliminé et remplacé par du milieu complet contenant le principe actif selon l'invention dosé à 0,5%, 1 % ou 2%. Les cellules sont ensuite incubées pendant 2 heures à l'étuve. A la fin de l'incubation, les extraits cellulaires sont récupérés et stockés à -80 C. On réalise ensuite un dosage par Western Blot. L'électrophorèse est réalisée sur gel SbS-polyacrylamide et l'immunomarquage est réalisé avec un anticorps primaire de souris anti-XPC, un anticorps secondaire de souris couplé à la peroxydase. Les bandes obtenues sont semi-quantifiées par densitométrie après analyse d'images à l'aide d'un logiciel. Les résultats obtenus, présentés dans le tableau qui suit, sont exprimés en 20 pourcentage de protéine XPC exprimée : Taux de protéine XPC (%) Non irradié Irradié UVA Témoin 100 135 principe actif à 0,5% 99 140 principe actif à 1% 117 161 principe actif à 2% 125 191 On constate que l'exemple de principe actif issu de graines de coton selon l'invention augmente la synthèse de la protéine XPC par des fibroblastes humains normaux. Testé à 2%, il permet d'augmenter la synthèse de la protéine XPC de 25% sur des cellules non irradiées et de 91% sur des cellules soumises à une irradiation UVA. I.3-2/ Evaluation de l'effet sur la dégradation de l'ADN après irradiation UVB L'objectif de cette étude est d'évaluer l'effet de l'exemple de principe actif issu de graines de coton selon l'invention sur la capacité de réparation de l'ADN de kératinocytes après une irradiation UV. La capacité de réparation des cellules dépendant du stress induit et du modèle choisi pour l'étude, un modèle particulier, sur l'expression des dimères de thymine (CPD), a été établi, en étudiant leur cinétique de formation après une irradiation.
Modèle de cinétique d'apparition des CPD après irradiation UVB Le modèle consiste à examiner, sur kératinocytes humains normaux, la cinétique de formation des CPD après une irradiation UVB. Elle est réalisée par immunocytologie, en fluorescence selon le protocole qui suit. A JO, les cellules sont ensemencées sur des lames de verre dans un milieu de culture complet. A J3, les cellules sont traitées comme suit - à T0, le milieu de culture est éliminé et remplacé, et les cellules sont irradiées aux UVB 80mJ/cm2, - à Tlh, T3h, T5h et T16h, on réalise un marquage immunocytologique des CPD, avec un anticorps monoclonal de souris antiCPb comme anticorps primaire et un anticorps anti-Ig6 de souris couplé FITC ( Fluoresceine isothiocyanate) comme anticorps secondaire.
Les résultats de l'immunomarquage sont visualisés sur un microscope couplé à un système d'analyse d'images. L'intensité du marquage des CPD est proportionnelle à l'intensité de la fluorescence présente dans les kératinocytes : plus la fluorescence est importante, plus le taux de synthèse des CPD est élevé. Les résultats étant qualitatifs, ils sont exprimés selon quatre niveaux d'expression des CPD : pas de détection d'immunoréactivité (pas de fluorescence) - faible détection d'immunoréactivité (fluorescence faible) + moyenne détection d'immunoréactivité (fluorescence moyenne) ++ forte détection d'immunoréactivité (fluorescence intense) +++ Les résultats pour le modèle de cinétique d'apparition des CPD après irradiation UVB de kératinocytes humains sont présentés dans le tableau suivant : Expression des CPD Témoin non irradié - Cellules UVB + 1h + Cellules UVB + 3h ++ Cellules UVB + 5h +++ Cellules UVB + 16h + On constate que les CPD commencent à être exprimés une heure après l'irradiation UVB, pour atteindre un maximum d'expression après 5 heures. En outre, l'expression des CPD est fortement réduite 16 heures après induction du stress. Les CPD sont donc naturellement réparés par les enzymes de réparation de l'ADN entre 5 heures et 16 heures après une irradiation UVB.
Pour évaluer la capacité de l'exemple de principe actif issu de graines de coton selon l'invention à réparer l'ADN de kératinocytes irradiés, il a donc été étudié son effet sur l'expression des CPD par des kératinocytes humains 5 heures après une irradiation UVB. Etude de l'effet sur l'expression des CPD après irradiation Le but de l'étude est d'évaluer l'effet de l'exemple de principe actif issu de graines de coton sur l'expression des dimères de thymine (CPD), lésions de l'ADN induites après irradiation UVB. a. Etude par dot blot Le protocole opératoire est le suivant A J1, les kératinocytes humains normaux sont ensemencés et incubés. A J3, le milieu de culture est éliminé et remplacé par du milieu neuf. A J5, le milieu de culture est éliminé et remplacé, et les cellules sont irradiées aux UVB 150mJ/cm2. Environ 20 minutes après l'irradiation, le milieu est éliminé et remplacé par du milieu complet contenant le principe actif selon l'invention dosé à 0,5%, 1 % ou 2%. Les cellules sont ensuite incubées pendant 5 heures à l'étuve. A la fin de l'incubation, l'ADN est extrait des kératinocytes et on réalise le Dot Blot : l'ADN des différents échantillons est immobilisé sur une membrane et l'ADN est fixé en incubant la membrane pendant 30 minutes. Après fixation de l'ADN, on procède à un immunomarquage avec un anti-corps primaire de souris antiCPb et un anticorps secondaire anti-IgG de souris couplé à la peroxydase.
La visualisation de l'immunomarquage permet de quantifier l'ADN par mesure de densités optiques (DO). Les spots sont semi-quantifiés par densitométrie après analyse d'images à l'aide d'un logiciel. L'intensité du marquage des CPD est proportionnelle à l'intensité de coloration du spot : plus la coloration du spot est importante, plus le taux de synthèse de CPD est élevé. Les résultats obtenus, exprimés en pourcentage de CPD exprimés, sont présentés dans le tableau suivant : Taux des CPD (%) Témoin non irradié 100 Témoin irradié UVB 150mJ/cm2 293 UVB + principe actif à 0,5% 218 UVB + principe actif à 1% 185 UVB + principe actif à 2% 160 On constate que l'exemple de principe actif issu de graines de coton selon l'invention diminue le taux de CPD exprimés par des kératinocytes humains 5 heures après irradiation aux UVB. Testé à 2%, le principe actif selon l'invention diminue de 45% le taux des CPD exprimés par rapport au témoin irradié non traité. b. Etude par immunocytologie Le protocole opératoire est le suivant : A J1, les kératinocytes humains normaux sont ensemencés et incubés. A J3, le milieu de culture est éliminé et remplacé par du milieu neuf.
A J5, le milieu de culture est éliminé et remplacé, et les cellules sont irradiées aux UVB 150mJ/cm2. Environ 20 minutes après l'irradiation, le milieu est éliminé et remplacé par du milieu complet contenant l'exemple de principe actif issu de graines de coton selon l'invention dosé à 0,5%, 1 % ou 2%. Les cellules sont ensuite incubées pendant 5 heures à l'étuve. A la fin de l'incubation, l'ADN est extrait des kératinocytes et on réalise un marquage immunocytologique des CPD avec un anticorps monoclonal de souris anti-CPb comme anticorps primaire et un anticorps anti-Ig6 de souris couplé FITC comme anticorps secondaire. Les résultats de l'immunomarquage sont visualisés sur un microscope couplé à un système d'analyse d'images. L'intensité du marquage des CPb est proportionnelle à l'intensité de la fluorescence présente dans les kératinocytes : plus la fluorescence est importante, plus le taux de synthèse des CPb est élevé. Les résultats, exprimés selon les quatre niveaux d'expression des CPb établis pour la réalisation du modèle de cinétique d'apparition des CPb, sont présentés dans le tableau qui suit : Expression des CPb Témoin non irradié - Témoin irradié UVB 150mJ/cm2 +++ UVB + principe actif à 0,5% ++ UVB + principe actif à 1% + UVB + principe actif à 2% - Cette étude confirme bien que l'exemple de principe actif issu de graines de coton selon l'invention diminue bien l'expression des CPb par kératinocytes humains 5 heures après irradiation aux UVB.
I.3-3/ Evaluation de l'effet sur la sénescence des fibroblastes après irradiation UVA Cette étude a pour objet l'évaluation de la capacité de l'exemple de principe actif issu de graines de coton selon l'invention à réduire la sénescence des fibroblastes après induction d'un stress UVA.
Elle est réalisée sur des fibroblastes humains normaux, la mort cellulaire UVA-induite étant visualisée par marquage f3-galactosidase, marqueur spécifique de la sénescence.
Le protocole opératoire est décrit ci-dessous. A J1, les cellules sont ensemencées sur des lames de verre dans un milieu de culture complet. A J2, le milieu de culture est éliminé et remplacé et les fibroblastes sont irradiés avec 4J/cm2 d'UVA, 3 fois par jour. Après l'irradiation, le principe actif selon l'invention est ajouté au milieu de culture à 0,5%, 1% ou 2%. A J3, J4 et J5, les cellules subissent le même traitement qu'à J2. A J8, on réalise le marquage de la f3-galactosidase, et on visualise les résultats sur un microscope couplé à un système d'analyse d'images.
L'intensité du marquage est proportionnelle à l'intensité de coloration bleue présente dans le cytoplasme des fibroblastes. Plus la couleur bleue est importante, plus le taux de synthèse de la f3-galactosidase est élevé. Les résultats étant qualitatifs, quatre niveaux d'expression de la f3-galactosidase ont été définis : pas de détection d'immunoréactivité (pas de couleur bleue) - faible détection d'immunoréactivité (couleur bleue faible) + moyenne détection d'immunoréactivité (couleur bleue moyenne) ++ forte détection d'immunoréactivité (couleur bleue intense)+++ Les résultats obtenus sont exprimés selon ces quatre niveaux d'expression de la f3-galactosidase dans le tableau suivant : Expression de la f3-galactosidase Témoin non irradié - Témoin irradié UVA 4J/cm2 +++ UVA + principe actif à 0,5% ++ UVA + principe actif à 1% + UVA + principe actif à 2% -25 On constate que l'exemple de principe actif issu de graines de coton selon l'invention réduit la sénescence de fibroblastes humains irradiés aux UVA. Testé à 2%, il permet de revenir à un niveau d'expression de la f3-galactosidase pour des cellules irradiées similaire au niveau d'expression pour des cellules non irradiées. 3-4/ Evaluation de l'effet sur la sénescence des kératinocytes après irradiation UVB Cette étude a pour objet l'évaluation de la capacité de l'exemple de principe actif issu de graines de coton selon l'invention à réduire la sénescence des kératinocytes après induction d'un stress UVB. Elle est réalisée sur des kératinocytes humains normaux, la mort cellulaire UVB-induite étant visualisée par marquage f3-galactosidase. Le protocole opératoire est décrit ci-dessous. A J1, les cellules sont ensemencées sur des lames de verre dans un milieu de culture complet. A J2, le milieu de culture est éliminé et remplacé et les kératinocytes sont irradiés avec 10mJ/cm2 d'UVB, 2 fois par jour. Après l'irradiation, le principe actif selon l'invention est ajouté au milieu de culture à 0,5%, 1% ou 2%. A J3, J4 et J5, les cellules subissent le même traitement qu'à J2.
A J8, on réalise le marquage de la f3-galactosidase, et on visualise les résultats sur un microscope couplé à un système d'analyse d'images. L'intensité du marquage est proportionnelle à l'intensité de coloration bleue présente dans le cytoplasme des kératinocytes. Plus la couleur bleue est importante, plus le taux de synthèse de la f3-galactosidase est élevé. Les résultats étant qualitatifs, quatre niveaux d'expression de la f3-galactosidase ont été définis . pas de détection d'immunoréactivité (pas de couleur bleue) - faible détection d'immunoréactivité (couleur bleue faible) + moyenne détection d'immunoréactivité (couleur bleue moyenne) ++ 5 forte détection d'immunoréactivité (couleur bleue intense)+++ Les résultats obtenus sont exprimés selon ces quatre niveaux d'expression de la f3-galactosidase dans le tableau suivant : Expression de la f3- galactosidase Témoin non irradié - Témoin irradié UVB 10mJ/cm2 +++ UVB + principe actif à 0,5% ++ UVB + principe actif à 1% + UVB + principe actif à 2% - On constate que l'exemple de principe actif issu de graines de coton selon l'invention réduit la sénescence de kératinocytes humains irradiés aux UVB. Testé à 2%, il permet de revenir à un niveau d'expression de la f3-galactosidase pour des cellules irradiées similaire au niveau d'expression pour des cellules non 20 irradiées. I.3-5/ Evaluation de l'effet sur l'érythème actinique L'objectif de cette étude est d'évaluer l'effet anti-inflammatoire de l'exemple de principe actif issu de graines de coton selon l'invention après induction d'un érythème actinique par une dose d'UV correspondant à 2 DEM 25 (dose érythémateuse minimale). L'étude est réalisée sur volontaires sains, de sexe féminin et masculin, d'âge compris entre 19 et 41 ans. Les volontaires sont irradiés selon une méthode 10 15 particulière et l'inflammation est évaluée par mesure du taux d'interleukine-la et de la couleur de la peau grâce à un chromamètre. L'irradiation UV est réalisée sur une surface de 4cm2 à l'aide d'une lampe xénon. Les volontaires reçoivent une dose d'UV de 2bEM, la DEM correspondant à la dose d'irradiation minimale capable d'induire un érythème clairement défini sur la totalité de la zone exposée. Pour chaque volontaire, il y a quatre zones de mesure : - une zone non traitée, non irradiée : il n'y a ni d'application de crème, ni d'irradiation UV, - une zone non traitée, irradiée : il n'y a pas d'application de crème, mais il y a une irradiation UV, - une zone placebo, irradiée : il y a une application biquotidienne d'une formule placebo, et une irradiation UV, et - une zone traitée, irradiée : il y a une application biquotidienne du principe actif selon l'invention dosé à 4%, et une irradiation UV. Pour doser les interleukines-1a, on les récupère à l'aide de Sebutapes appliqués sur la peau avec un temps de contact de 30 secondes pour chaque. Les Sebutapes sont ensuite mis dans 1mL de NaCl à 0,9% et agités. Les échantillons sont congelés avant d'être dosés à l'aide d'un kit de dosage ELISA.
Pour mesurer la couleur de la peau, on utilise un chromamètre qui convertit les couleurs en un code numérique composé de trois paramètres dont a*, paramètre de chrominance qui représente la gamme des verts aux rouges, qui permet d'évaluer l'érythème photo-induit : une diminution du paramètre a* correspond à une diminution de l'érythème actinique.
Le protocole opératoire qui a été suivi pour cette étude est indiqué ci-dessous. A J-1 : les volontaires sont irradiés sur le dos en vue de déterminer leur DEM.
A JO, tOh : on détermine la DEM, on définit les quatre zones au niveau du dos, on mesure la couleur de la peau sur les trois zones irradiées, on induit un érythème actinique sur ces mêmes zones et on applique le placebo et le principe actif selon l'invention sur les zones prévues.
A t2h : on prélève des interleukines-1a sur les quatre zones. A t5h, on mesure la couleur de la peau sur les trois zones irradiées, et on applique le placebo et le principe actif selon l'invention sur les zones prévues. A t7h : on mesure la couleur de la peau sur les trois zones irradiées, on applique le placebo et le principe actif selon l'invention sur les zones prévues.
Entre t7h et t48h, on applique biquotidiennement le placebo et le principe actif selon l'invention sur les zones prévues. A t48h on mesure la couleur de la peau sur les trois zones irradiées. Les résultats obtenus sont présentés pour le principe actif selon l'invention en pourcentage de variation par rapport au placebo : Variation/placebo (%) Taux d'interleukines-la -18 Evolution du paramètre a* -7 Ces résultats montrent qu'après induction d'une inflammation par irradiation UV, 20 comparé au placebo, l'exemple de principe actif issu de graines de coton selon l'invention entraîne une diminution du taux d'interleukines-la et une diminution de l'érythème photo-induit.
II/ COMPOSITIONS COSMETIQUES PHOTO-REPARATRICES INCLUANT AU MOINS UN 25 PRINCIPE ACTIF AGISSANT SUR LA PROTEINE XPC La présente invention couvre aussi les compositions cosmétiques et/ou dermopharmaceutiques incluant au moins un principe actif capable d'agir sur15 l'activité de la protéine XPC selon la présente invention dans différentes formes galéniques, adaptées à l'administration par voie topique cutanée. Ces compositions peuvent se présenter notamment sous forme de crèmes, émulsions huile-dans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples, solutions, suspensions ou poudres. Elles peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse, ou sous forme solide. Ces compositions contiennent entre 0,01 et 20% en poids de principe(s) actif(s) capable(s) d'agir sur l'activité de la protéine XPC selon la présente invention.
Les exemples de compositions qui suivent sont obtenus par mélange des différents composants. Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Gel limpide : - Carbopol : 0,5% avec Triéthanolamine : qsppl-I=6,5 - Phénonip : 0,7% - Principe actif 5,0% - Eau:93,8% Gel opaque : - Sépigel 305: 2,0% - Phénonip : 0,7% - Principe actif : 5,0% - Eau:92,3% Gel émulsionné : - Montanov 202 : 3,0% - Isopropyl palmitate : 12,0% -Phénonip : 0,7% - Viscolam AT 64 : 2,0% - Principe actif : 5,0% - Eau : 77,3% Emulsion non ionique : - Montanov 202 : 3,0% 20 25 - Simulsol 165: 2,0% - Isopropyl palmitate : 20,0% - Phénonip : 0,7% - Principe actif : 5,0% - Eau : 69,3% Emulsion anionique : - Acide stéarique : 7,0% -Triethanolamine : 3,5% - Isopropyl palmitate : 20,0% - Phénonip : 0,7% -Principe actif : 5,0% - Eau:63,8% Emulsion cationique : - Quaternium-82 : 5,0% - Alcool cétylique : 2,0% - Isopropyl palmitate : 15,0% - Alcool cétéarylique : 1,0% - PEG 100 stéarate : 1,0% - Phénonip : 0,7% - Principe actif : 5,0% - Eau : 71,3% On peut également citer des compositions ayant montré une stabilité physique incluant 4% de principe actif selon l'invention. Exemple de composition de crème apaisante : - Glycérol : 5, 0% - Lanol 1688: 10,0% - Huile Rita canola : 10,0% - Montanov 68 : 7,0% Rita CA : 3,0% - Rita IPM NF : 2,0% - Montanov 202 : 4,0% - Micro pearl M100 : 1,0% - DC 345: 2,0% - Phenonip : 0,7% - Principe actif : 4,0% - Eau : 51,3% Exemple de composition d'émulsion légère sprayable : - Propylène glycol : 6,0% - Glycérol : 3,0% - Arlacel 83 : 3,0% - Micropearl M100 : 3,0% - Lanol 14M : 10,0% - Cetiol LC : 3,0% - Phenonip : 0,7% - Principe actif : 4,0% - Eau : 67,3% Exemple de composition de lait fluide - Lanol 1688: 10,0% - Montanox 60 : 3,35% - Montane 60 : 1,65% - Sepigel 305: 1, 6% - Phenonip : 0,7% - Principe actif : 4,0% - Eau : 78,7% De plus, des tests ont montré la compatibilité du principe actif avec les matières premières utilisées en cosmétique.
Claims (11)
1. Utilisation d'au moins un principe actif capable de stimuler l'activité de la protéine XPC, pour la préparation d'une composition destinée à une activité photo-réparatrice.
2. Utilisation d'au moins un principe actif capable de stimuler l'activité de la protéine XPC selon la revendication 1, pour la préparation d'une composition destinée à favoriser l'élimination des lésions de l'ADN photo-induites et limiter le vieillissement cellulaire en stimulant les équipements naturels de réparation des cellules cutanées.
3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que le principe actif capable de stimuler l'activité de la protéine XPC est un principe actif issu de végétaux.
4. Utilisation selon la revendication 3, caractérisée en ce que le principe actif capable de stimuler l'activité de la protéine XPC est un principe actif issu d'au moins une plante de la famille des Malvacées.
5. Procédé d'obtention d'un principe actif capable de stimuler l'activité de la protéine XPC susceptible d'être utilisé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu'il comprend la succession des étapes suivantes - solubilisation aqueuse de tourteau de graines de Gossypium hirsutum, - hydrolyses enzymatiques successives, - séparation des phases soluble et insoluble, - traitement thermique, - purification et concentration de la fraction active, et - filtration stérilisante. 25
6. Principe actif capable de stimuler l'activité de la protéine XPC obtenu par la mise en oeuvre du procédé selon la revendication 5, caractérisé par - un taux de matières sèches compris entre 15 et 200 g/I, - un pH compris entre 5,5 et 9,5, - une teneur en protéines comprise entre 4,5 et 77 g/I.
7. Principe actif capable de stimuler l'activité de la protéine XPC selon la revendication 6, caractérisé par : - un taux de matières sèches compris entre 38 et 52 g/I, - un pH compris entre 7 et 8, - une teneur en protéines comprise entre 12 et 20 g/I.
8. Composition cosmétique et/ou dermopharmaceutique destinée à une activité photo-réparatrice, adaptée pour l'utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce qu'elle contient au moins un principe actif capable de stimuler l'activité de la protéine XPC.
9. Composition cosmétique et/ou dermopharmaceutique selon la revendication 8, caractérisée en ce qu'elle contient entre 0,01% et 20% en poids du principe actif capable de stimuler l'activité de la protéine XPC.
10. Composition cosmétique et/ou dermopharmaceutique selon la revendication 8 ou 9, caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme de crèmes, émulsions huile-dans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples, solutions, suspensions ou poudres.
11. Composition cosmétique et/ou dermopharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 8 à 10, caractérisée en ce que le principe actif capable de stimuler l'activité de la protéine XPC est obtenu à partir de graines de Gossypium hirsutum.
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