WO2007148713A1

WO2007148713A1 - リファマイシン誘導体を有効成分とする血管性疾患処置剤または細胞増殖調節剤

Info

Publication number: WO2007148713A1
Application number: PCT/JP2007/062384
Authority: WO
Inventors: Takaoki Saneyasu; Masaki Ichimura; Shinji Hayashi; Masaji Kawatsu; Kazunori Hosoe
Original assignee: Kaneka Corporation
Priority date: 2006-06-21
Filing date: 2007-06-20
Publication date: 2007-12-27

Abstract

本願は、血管性疾患、例えば経皮的血管形成術後の再狭窄等に対する予防及び治療のための血管性疾患処置剤または細胞増殖調節剤を提供することを課題とする。この課題は、血管内皮細胞に比べ、血管平滑筋増殖を強く抑制する、リファマイシン誘導体を有効成分とする血管性疾患処置剤または細胞増殖調節剤とすることにより解決される。リファマイシン誘導体を有効成分として含有する製剤等は、血管性疾患（例えば、動脈硬化症、動脈瘤、仮性瘤、動脈解離症、炎症性動脈疾患、非炎症性動脈疾患、透析シャント、経皮的血管形成術後の再狭窄及び再閉塞）の予防または治療に有用である。

Description

明細書

リファマイシン誘導体を有効成分とする血管性疾患処置剤または細胞増殖調節剤

技術分野

[0001] 本発明は、血管性疾患処置剤および細胞増殖調節剤に関する。

背景技術

[0002] 冠動脈硬化性血管狭窄等にお!、て、最近、バルーンカテーテルゃステント等のィンプラント (生体内留置器具)を利用した、血管閉塞を拡張する経皮的血管形成術が行われている。しかし、この方法においては、血管の平滑筋が肥大することにより術後に再狭窄が起き、これが臨床上の問題となっている。

[0003] そのような術後の再狭窄を防止するために、マクロライド系化合物に属するラバマイシン (rapamycin)が使用される場合がある。ラパマイシン等は、種々のサイト力イン等による増殖刺激を阻害することで、血管平滑筋の増殖抑制活性を示すことが知られており、これにより、血管の再狭窄が防止される (非特許文献 1)。

非特許文献 l : Konstantinos Toutouzas, et al. Z Kardiol, 2002, Suppl.3, 49-57. 発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0004] しかし、ラバマイシンは細胞毒性が強ぐこれを投与すると動物の免疫力が低下するために、種々の副作用が生じるという問題点がある。さらに、ラバマイシンは、血管平滑筋細胞に比べ血管内皮細胞に対して強い増殖抑制作用を有することから (Paul J. Mohacsi, MD, et al. The Journal of Heart and Lung Transplantation, 1997, 16(5), 484-492)、内皮形成が遅延することにより血栓が形成するという問題点もある。

課題を解決するための手段

[0005] 本願では、血管内皮細胞の増殖を強く抑制することなく血管平滑筋細胞の増殖を抑制する作用（または新生内膜の肥大防止）に基づき、有効でかつ実用的な疾患の治療剤を提供することに想到した。

[0006] 本発明者は鋭意研究した結果、リファマイシン誘導体が、ラバマイシンとは異なり、血管内皮細胞の増殖を強く抑制することなく血管平滑筋増殖抑制作用を有することを見出し、本発明を完成させるに至った。

[0007] すなわち、本発明は、リファマイシン誘導体を有効成分とし、血管内皮細胞に比べ、血管平滑筋細胞に対して強く増殖抑制作用を示すことを特徴とする血管性疾患処置剤または細胞増殖調節剤に関する。このうち、血管内皮細胞に対して細胞増殖抑制作用を示さな、ものがより好ま、。

[0008] また、上記リファマイシン誘導体は、下記式 (I)：

[0009] [化 14]

[0010] で表される化合物またはその生理学的に許容される塩であるのが好ましい。このうち、リファマイシン誘導体は、リファラジル {Rifalazil、 3'- Hydroxy- 5'- (4- isobuty卜 1- piper azinyDbenzoxazinorifamycin, KRM1648} , KRM1657、 KRM1671、 KRM1689 、 KRM1690またはそれらの生理学的に許容される塩であるのが好ましい。なお、 K RM1648、 KRM1657, KRM1671, KRM1689, KRM1690のィ匕学式は、後述の実施形態の項目で説明する。

[0011] また、本発明の血管性疾患処置剤または細胞増殖調節剤は、自然発生的血管性疾患または非自然発生的血管性疾患の予防または治療のために使用するものであるのが好ましい。

[0012] また、前記自然発生的血管性疾患が、動脈硬化症、動脈瘤、仮性瘤、動脈解離症、炎症性動脈疾患、非炎症性動脈疾患、および透析シャントからなる群力選ばれることを特徴とする血管性疾患処置剤または細胞増殖調節剤であるのが好まし、。このうち、前記非自然発生的血管性疾患が、経皮的血管形成術後の血管再狭窄または再閉塞であることを特徴とする血管性疾患処置剤または細胞増殖調節剤であるのが好ましい。

[0013] また、本発明に力かる血管性疾患処置剤または細胞増殖調節剤は、リファマイシン誘導体の血中への徐放が、経口投与、あるいは、筋肉内投与、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、経皮投与、粘膜投与、吸入投与、およびインプラントを利用した投与力もなる群より選択される非経口投与により実施されるのが好ましい。このうち、インプラントが、ステント、ステントグラフト、人工血管、力テーテノレ、人工心弁、ペースメーカーのリード線、骨ネジ、人工骨、人工気管、または縫合糸であるのが好ましい。

[0014] 本発明の別の態様として、前記血管性疾患処置剤または細胞増殖調節剤を含むィンプラントがある。

[0015] 本発明の別の態様として、血管性疾患処置剤製造のための、前記リファマイシン誘導体の使用がある。

[0016] 本発明の別の態様として、前記リファマイシン誘導体を使用する細胞の増殖抑制方法がある。

[0017] 本発明の別の態様として、前記リファマイシン誘導体を使用する血管性疾患の治療方法がある。

[0018] 本発明のその他の態様およびこれらの効果は、以下に説明する実施形態および図面によって明らかにされる。

発明の効果

[0019] 本発明にかかるリファマイシン誘導体を含有する血管性疾患処置剤および細胞増殖調節剤は、血管内皮細胞に比べ、血管平滑筋細胞の増殖を強く抑制する。このため、血管の内皮再生を阻害することなく平滑筋の肥大が抑制され、血管の狭窄または再狭窄が防止される。従って、血管性疾患 (例えば、動脈硬化症、動脈瘤、仮性瘤、動脈解離症、炎症性動脈疾患、非炎症性動脈疾患、透析シャント、経皮的血管形成術後の再狭窄及び再閉塞)の予防または治療に有用である。図面の簡単な説明

[0020] [図 1]図 1はステントの展開図である。

[図 2]図 2はステントの模式図である。

[図 3]図 3は、リファラジルの各濃度と CASMCの増殖抑制作用との関係を示すグラフである。

[図 4]図 4は、リファラジルの各濃度と CAECの増殖抑制作用との関係を示すグラフである。

[図 5]図 5、ラバマイシンの各濃度と CASMCの増殖抑制作用との関係を示すグラフである。

[図 6]図 6は、ラバマイシンの各濃度と CAECの増殖抑制作用との関係を示すグラフである。

[図 7]図 7は、 KRM1657の各濃度と CASMCおよび CAECの増殖抑制作用との関係を示すグラフである。

[図 8]図 8は、 KRM1671の各濃度と CASMCおよび CAECの増殖抑制作用との関係を示すグラフである。

[図 9]図 9は、 KRM1689の各濃度と CASMCおよび CAECの増殖抑制作用との関係を示すグラフである。

[図 10]図 10は、 KRM1690の各濃度と CASMCおよび CAECの増殖抑制作用との関係を示すグラフである。

発明を実施するための最良の形態

[0021] 以下、本発明の実施形態として、リファマイシン誘導体を利用した血管性疾患処置剤および細胞増殖調節剤、およびこれらを利用したインプラントについて詳細に説明する力本発明はこれらに限定されるものではない。

[0022] 1.リファマイシン誘導体

(1)本願発明で用いられるリファマイシン誘導体は、以下の式 (I)

[0023] [化 15]

[0024] (式 (I)中、 X¹は酸素原子または硫黄原子を示し、 R¹はァセチル基または水素原子を示し、 R²はメチル基またはヒドロキシメチル基を示し、

R⁴は同一または相異なり、水酸基、水素原子、炭素数 1から 3のアルキル基、下記式 (II)で表される基、または、下記新規 (IV)で表される基を示す。 )で表される化合物またはその生理学的に許容される塩であるのが好まし！/、。

[0025] [化 16]

[0026] [化 17]

R⁷ R⁸

- X² (IV)

[0027] 上記式 (II)中、 R⁵、 R⁶は同一または相異なり、炭素数 1から 3のアルキル基、または下記式 (ΠΙ)で表される基を示す。

[0028] [化 18]

— (CH₂) , (I")

[0029] (式（III)中、 jは 1から 3の整数を示す。）

[0030] 上記式 (IV)中、 R⁷、 R⁸は同一または相異なり、水素原子または炭素数 1から 3のァルキル基を示し、 X²は酸素原子、硫黄原子、カルボニル基、下記式 (V)で表される基、または、下記式 (VI)で表される基を示す。

[0031] [化 19]

[0032] [化 20]

[0033] 上記式 (V)中、 R⁹、 R^1Qは同一または相異なり、水素原子、炭素数 1から 3のアルキル基、または R⁹と R^1Qが結合して下記式で表される基を示す。

(CH ) —

2 k

(式中、 kは 1から 4の整数を示す。）

[0034] 上記式 (VI)中、 mは 0または 1を示し、 R¹¹は水素原子、炭素数 1から 7のアルキル基、または下記式で表される基を示す。

(CH ) X³

2 n

(式中、 nは 1から 4の整数を示し、 X³は炭素数 1から 3のアルコキシ基、ビニル基、ェチュル基、または下記式 (VII)で表される基を示す。

[0035] [化 21]

[0036] で表される基を示す)で表される基を示す }で表される基を示す]で表される基を示す

)で表される化合物またはその生理学的に許容される塩であるのが好ましい。

[0037] 上記式 (I)にお、て、 R³、

R⁹および R^1Qの炭素数 1から 3のアルキル基としては、メチル基、ェチル基、プロピル基、イソプロピル基およびシクロプロピル基が挙げることができ、 R¹¹の炭素数 1から 6のアルキル基としては、メチル基、ェチル基、プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ブチル基、イソブチル基、 sec ブチル基、 tert ブチル基、シクロブチル基、シクロプロピルメチル基、ペンチル基、イソペンチル基、 sec ペンチル基、 tert ペンチル基、シクロペンチル基、シクロブチルメチル基、へキシル基、 4ーメチルペンチル基、シクロへキシル基、 3—メチルシクロペンチル基、ヘプチル基、イソへプチル基などの鎖状または環状アルキル基を挙げることができる。

[0038] X³の炭素数 1から 3のアルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基およびシクロプロポキシ基を挙げることができる。

[0039] (2)好ましくは、リファマイシン誘導体は、前記式 (I)の X¹が酸素原子であり、 R¹がァセチル基または水素原子を示し、 R²はメチル基またはヒドロキシメチル基を示し、

R⁴は同一または相異なり、水酸基、水素原子、炭素数 1から 3のアルキル基、または式（VIII)：

[0040] [化 22]

—— N N R¹² (VIII)

[0041] (式 (VIII)中、 R¹²は水素原子、または炭素数 1から 7のアルキル基を示す)で表されるリファマイシン誘導体またはその生理学的に許容される塩である。

[0042] R¹²の炭素数 1から 7のアルキル基としては、メチル基、ェチル基、プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ブチル基、イソブチル基、 sec ブチル基、 tert ブチル基、シクロブチル基、シクロプロピルメチル基、ペンチル基、イソペンチル基、 sec ペンチル基、 tert ペンチル基、 1, 2—ジメチルプロピル基、 1 ェチルプロピル基、シクロペンチル基、シクロブチルメチル基、へキシル基、 4ーメチルペンチル基、シクロへキシキル基、 3—メチルシクロペンチル基、ヘプチル基、イソへプチル基などの鎖状または環状のアルキル基を挙げることができる。

[0043] (3)以下、上記リファマイシン誘導体の例示として、 5つの具体的な化合物を説明する。ただし、本発明で用いられるリファマイシン誘導体は、これらの化合物に限定されるものではない。

[0044] (3— 1)例示としてのリファマイシン誘導体は、前記式 (I)の X¹が酸素原子であり、 R¹ がァセチル基であり、 R²力メチル基であり、 R³が水酸基であり、 R⁴が式 (IX)：

[0045] [化 23] 一 N CH„CH (CH,)„ (IX)

^{2 3 2}

[0046] で表されるリファラジル {Rifalazil、 3'- Hydroxy- 5'- (4- isobuty卜 1- piperazinyl)benzoxaz inorifamycin, KRM 1648 }またはその生理学的に許容される塩である。

[0047] (3— 2)例示としてのリファマイシン誘導体は、前記式 (I)の X¹が酸素原子であり、 R¹ がァセチル基であり、 R²力メチル基であり、 R³が水酸基であり、 R⁴が式 (X)：

[0048] [化 24]

—— N CH,CH.CH„ (X)

^{2 2 3}

[0049] で表される KRM1657またはその生理学的に許容される塩である。

[0050] (3— 3)例示としてのリファマイシン誘導体は、前記式 (I)の X¹が酸素原子であり、 R が水酸基であり、 R²カチル基であり、 R³が水酸基であり、 R⁴が式 (IX)：

[0051] [化 25] 一 N CH„CH (CH,)„ (IX)

^{2 3 2}

[0052] で表される KRM1671またはその生理学的に許容される塩である。

[0053] (3— 4)例示としてのリファマイシン誘導体は、前記式 (I)の X¹が酸素原子であり、 R がァセチル基であり、 R²力 Sメチル基であり、 R³および R⁴が式 (IX)：

[0054] [化 26] 一 N CH„CH (CH,)„ (IX)

^{2 3 2}

[0055] で表される KRM1689またはその生理学的に許容される塩である。

[0056] (3— 5)例示としてのリファマイシン誘導体は、前記式 (I)の X¹が酸素原子であり、 R がァセチル基であり、 R²がヒドロキシメチル基であり、 R³が水酸基であり、 R⁴が式 (IX)

[0057] [化 27] 一 N CH„CH (CH,)„ (IX)

^{2 3 2}

[0058] で表される KRM1690またはその生理学的に許容される塩である。

[0059] 2.リファマイシン誘導体による作用

本願では、血管性疾患処置剤や細胞増殖調節剤にリファマイシン誘導体を用い、この際、血管内皮細胞に比べ、血管平滑筋細胞に対して強く増殖抑制作用を示すようにする。リファマイシン誘導体は、従来、肺炎クラミジァやへリコパクター 'ピロリに対して極めて強い抗菌活性を有する抗生物質であることが知られており、使用の際は、極めて低濃度で用いられていた。本願発明は、リファマイシン誘導体が上記のような細胞増殖抑制作用を有するという、抗菌活性とは関連のない意外な効果を有することを初めて見出したことによりなされたものである。また、肺炎クラミジァやへリコバクタ一 ·ピロリと血管狭窄との関連性が指摘されていることから (John Danesh, et al. Lance t, 1997, 350, 430-436)、リファマイシン誘導体を有効成分とする血管性疾患処置剤は、細胞増殖抑制作用に加え、従来力も知られている抗菌作用も期待できる。

[0060] ここで、「内皮細胞に比べ、血管平滑筋細胞に対して強く増殖抑制作用を示す」とは、「血管内皮細胞に対しては細胞増殖抑制作用を示さず、血管平滑筋細胞に対する細胞増殖抑制作用を示す」場合を含む。例えば、リファマイシン誘導体は、濃度（量)を調節する等により、血管平滑筋細胞に対して増殖抑制活性を示すが、血管内皮細胞に対して増殖抑制活性を示さないように調節することが可能である。なお、血管性疾患処置剤や細胞増殖抑制剤の形態によって適切な量が変化するため、その形態に応じて適宜その量を調節する必要がある。

[0061] また、「細胞増殖抑制作用を示す」とは統計学的に有意に増殖抑制を示す場合をいう。一方、「細胞増殖抑制作用を示さない」とは、統計学的に有意でない場合をいう

[0062] 3.血管性疾患の例

本発明においては、リファマイシン誘導体は、血管性疾患 {例えば、動脈硬化症 (ァテローム性動脈硬化症、中膜石灰化硬化症)、細小動脈硬化症、動脈瘤、仮性瘤、動脈解離症、炎症性動脈疾患、非炎症性動脈疾患、または透析シャントを含む自然発生的血管性疾患、経皮的血管形成術後の血管再狭窄または再閉塞を含む非自然発生的血管性疾患 }の予防または治療のために利用される。血管形成術としては、例えば、バルーン拡張術、ステント留置術、ァテレクトミー、レーザー血管形成術が挙げられる。

[0063] 4.血管性疾患処置剤または細胞増殖調節剤

「リファマイシン誘導体を有効成分とする血管性疾患処置剤」とは、リファマイシン誘導体を有効成分とする血管性疾患治療用組成物または製剤（医薬品)を含む概念である。同様に、「リファマイシン誘導体を有効成分とする細胞増殖調節剤」とは、リファマイシン誘導体を有効成分とする細胞増殖調節用組成物または製剤（医薬品)を含む概念である。

[0064] 「血管性疾患処置」とは、血管性疾患を治療する、またはその進行を軽減する概念

(血管性疾患治療剤）のほか、その血管性疾患を治療するための作用と同様の作用を利用することにより、その血管性疾患を予防する概念 (血管性疾患予防剤)を含む

[0065] (4 1)他の薬剤を含む実施形態

血管性疾患の予防または治療を目的とした製剤を製造する際に、他の薬剤 (抗凝固薬、抗血小板物質、抗痙薬、抗菌薬、抗腫瘍薬、抗微生物剤、抗炎症剤、抗物質代謝剤、免疫抑制剤等)と組み合わせてもよい。

[0066] 本実施態様において、リファマイシン誘導体は、血管内皮細胞に比べ、血管平滑筋細胞に対してより強く増殖を抑制するように用いる。これにより、血管の内皮再生を阻害することなく平滑筋の肥大が抑制され、血管の狭窄または再狭窄が防止される。

[0067] (4 2)血中に徐放させる実施形態

リファマイシン誘導体を予防及び治療の目的で血中に徐放させる場合、投与経路は特に限定されず、経口投与若しくは非経口投与 (例えば、筋肉内投与、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、経皮投与、鼻腔などへの粘膜投与または吸入投与、ィンプラントを利用した投与）の、ずれでもよ、。

[0068] 5.血管性疾患処置剤を含むインプラントの実施形態

「インプラント」としては、例えば、ステント、ステントグラフト、人工血管、力テーテノレ（バルーンカテーテルも含む）、人工心弁、ペースメーカーのリード線、骨ネジ、人工骨、人工気管、縫合糸等が挙げられ、中でも、生体の狭窄が起こるような血管、尿管、尿道、リンパ管等の脈管に留置して、十分に内腔を確保するために使用されるステントが好適である。ただし、リファマイシン誘導体は、ステントに限らず、当業者に周知のインプラントに適用可能である。そのようなインプラントの作製方法等として、例えば、特開平 9— 38195号公報、特開 2003— 24452号公報に開示されている当業者に公知の方法を採用することができる。

[0069] 6.ステントの実施形態

以下、本発明の実施形態としての生体留置用ステントの全体的な構造の一例を図 1および図 2を参照して説明する。図 1はステントの展開図、図 2は模式図である。後述するステントの作製方法およびステントに薬剤を固定する方法等として、例えば特開 2005— 65981号公報、特開 2004— 222953号公報に開示されている当業者に公知の方法を採用することができる。

[0070] ステントとは、血管あるいは他の生体内管腔が狭窄もしくは閉塞することによって生じる様々な疾患を治療するために、その狭窄もしくは閉塞部位を拡張し、その管腔サィズを維持するためにそこに留置する医療用具である。ステントは一般的には、血管内にカテーテルによって挿入され、血管内腔の機械的支持を行なうために動脈壁の不健全な部分と接触するように拡張される。また、ステントの拡張は、自身の物理的特性 (形状記憶性、超弾性等）による自己拡張か、バルーンカテーテルの拡張力による強制的拡張か、いずれかの方法で拡張される。 [0071] (6— 1)材料

薬剤層をコーティングするためのベースとなるステントは、ステンレス鋼、 Ni— Ti合金、 Cu—Al—Mn合金、 Co— Cr合金、マグネシウム合金、イリジウム、イリジウムォキサイド、ニオブ等の金属力作製可能である。ステントの作製は、当業者が通常作製する方法と同様に、筒状の金属材料チューブをレーザーカットによりステントデザインにカットし、電解研磨を施すことで作製することが可能である。しかし、作製方法はこの方法に限定されず、エッチングによる加工方法や、平板金属をレーザーカットしてから丸めて溶接する方法、金属ワイヤーを編みこむ加工方法等の手法も可能である

[0072] また、金属材料に限定されず、ポリオレフイン、ポリオレフインエラストマ一、ポリアミド、ポリアミドエラストマ一、ポリウレタン、ポリウレタンエラストマ一、ポリエステル、ポリエステルエラストマー、ポリイミド、ポリアミドイミド、ポリエーテルエーテルケトンのような高分子材料、セラミック、ハイドロキシアパタイト等の無機材料も使用され得る。

[0073] (6— 2)ポリマー層

ステント表面には、薬剤を固定する等の目的のためにポリマー層を設けてもよい。

[0074] 生体に用いられるものであるため、ポリマーとしては、生体適合性ポリマーや生分解性ポリマーを用いるのが好まし、。

[0075] ステント表面にポリマー層を設ける方法としては、ステントをポリマー溶液にディツビングする方法、ポリマー溶液をスプレーによりステントに噴霧する方法等の方法が使用可能である。上述した方法はいずれもコーティングによる方法であるが、別途作製したポリマーのシートをステント表面に貼り付けても構わない。コーティングによる場合、ポリマー溶液を作製する際に使用する溶媒はポリマーの溶解性を有する任意の溶媒を選択することができる。溶媒の揮発性等を調整するために 2つ以上の溶媒を用いた混合溶媒としてもよい。ポリマー溶液の濃度は特に制限されず、ポリマー層の表面性、必要となる薬剤保持量、保持させた薬剤の放出挙動等を勘案して任意の濃度とすることができる。

[0076] このような溶媒を用いて作製したポリマー溶液をステントに塗布し乾燥させる操作または当該液にステントを浸漬し乾燥させる操作を少なくとも 1回以上繰り返すことにより、ステントへポリマー層を設けることができる。スプレーによりコーティングを行う際、ポリマー層の表面を均一化するためスプレーノズルとステントとの距離を 50cm以下とすることが好ましぐ 10cm以上、 30cm以下がより好ましい。また、スプレーコーティングまたはデイツビングを行う際ステントを回転させてもよぐポリマー層の表面を均一化するためには 50rpm以上が好まし!/、。

[0077] さらに、ポリマー層の表面性を制御するために、ステントにポリマー溶液を塗布する途中および Zまたは塗布した後に余分なポリマー溶液を除去してもよい。除去する手段としては、振動、回転、減圧等が挙げられ、これらを複数組み合わせてもよい。

[0078] (6 3)薬剤（リファマイシン誘導体)のコーティング

ステントを利用した血管性疾患処置剤や細胞増殖調節剤においては、薬剤（リファマイシン誘導体）がステントにコーティングされる。

[0079] ステントに薬剤（リファマイシン誘導体)をコーティングする方法としては、薬剤を溶液状態でステントに添加した後、溶媒を除去することによってステントに付着させることができる。また、生体適合性ポリマーや生分解性ポリマーを用いて、薬剤をステントに付着させることも可能である。例えば、薬剤（リファマイシン誘導体)と共に生体適合性ポリマーおよび Zまたは生分解性ポリマーを、液状または適切な溶媒、例えば、水、緩衝液、酢酸、塩酸、メタノール、エタノール、アセトン、ァセトニトリル、塩化メチレン、クロ口ホルム、テトラヒドロフラン等の溶液としてステントに接触させた後、溶媒を除去することにより、生体適合性ポリマーもしくは生分解性ポリマーを用いた薬剤コーティングステントを作製することができる。

[0080] より具体的な例としては、生体適合性ポリマーおよび Zまたは生分解性ポリマーを低沸点溶媒に溶解して調製した溶液に薬剤を溶解または懸濁して得られる液でステントをコーティングし、乾燥させる操作または当該液にステントを浸漬し乾燥させる操作を少なくとも 1回以上繰り返すことにより、ステントへの薬剤の付着および生体適合性ポリマーおよび Zまたは生分解性ポリマーによるコーティングをすることができる。コーティングの方法としては、ステントを溶液にデイツビングする方法、もしくはスプレ一により噴霧する方法などが実施可能である。

[0081] コーティング層の厚みに関しては、コーティング層を厚くすると血管内での凹凸から、血栓の生成を促進してしまう可能性があり、再狭窄率を上昇させてしまう可能性が存在する。しかし、治療に必要な十分な薬量をコーティングするためにはある程度の厚みを必要とすることになる。この観点から、コーティング層の厚みは 1 m以上、 10 μ m以下、更には 3 μ m以上、 5 μ m以下であることが好ましい。

実施例

[0082] 以下の実施例ではヒト冠動脈平滑筋細胞 (CASMC)及びヒト冠動脈内皮細胞 (C

AEC)の細胞増殖抑制試験を利用して、実施形態としてのリファマイシン誘導体が血管内皮細胞に比べ血管平滑筋細胞に対して強い増殖抑制作用を示すことを説明する力 S、本発明の範囲は下記の実施例により限定されるものではない。

[0083] (実施例 1) CASMCの培養

CASMC (タカラバイオ社製）を、付属の培地（SmGM— 2 BulletKit)を用いて、 100mmディッシュにて 37°Cの 5%CO条件下で 70〜80%コンフルェントに達する

2

. ί·口し/こ o

[0084] (実施例 2) CAECの培養

CAEC (タカラバイオ社製）を、付属の培地（EGM— 2— MV BulletKit)を用いて、 100mmディッシュにて 37°Cの 5%CO条件下で 70〜80%コンフルェントに達

2

するまで培養した。

[0085] (実施例 3) CASMC及び CAEC増殖抑制試験

前記 70〜80%コンフルェントに達した CASMC及び CAECを、サブカルチャー試薬セット (タカラバイオ社製)を用いて 100mmディッシュより回収した。得られた細胞を 96穴プレートに播種し、 37°Cの 5%CO条件下で 24時間培養した。次に、 24時間

2

の血清非存在条件下による細胞の栄養枯渴状態を設定した後、種々の濃度（10、 1 00、 1, OOOnM)のリファラジルを含む上述の培地で 48時間培養を行った。培養を行った後、ロシュ'ダイァグノスティック社の細胞増殖 ELISA(BrdU) (発色）を用いて BrdU取り込み能を測定した。 BrdU取り込み能は、細胞増殖のパラメーターである D NA合成能を表す。

[0086] 図 3および後述する図 4〜6は、薬剤の各濃度と両細胞の増殖抑制作用との関係を示すグラフである。縦軸は BrdU取り込み能を表す吸光度であり、薬剤非添加群 (コントロール)での吸光度に対する各濃度における値をグラフにした。また、グラフ中の、 * *は統計学的に有意であることを示す。統計処理は、例示としてダネット検定を行った。

[0087] 図 3にわカゝるように、リファラジルは、リファラジル非添加群と比較して、 100および 1 , OOOnMにおいて、統計学的に有意に CASMCの増殖抑制を示していた。

[0088] 一方、図 4からわ力るように、試験した濃度において、リファラジルは、リファラジル非添加群と比較して、統計学的に有意には CAECの増殖抑制を示さな力つた。

[0089] このように、リファラジルは、 100および 1, OOOnMにおいて CAECに対して全く増殖を抑制しないが、 CASMCに対しては増殖を抑制することがわ力つた。

[0090] (実施例 4)

実施例 4では、被験物質をリファラジルに代えて KRM1657、 KRM1671, KRM1 689、 KRM1690とし、被験物質添加後の培養時間を 72時間とした他は、上記実施例 3と同じ方法で CASMC及び CAEC増殖抑制試験を行つた。

[0091] 図 7〜10は、薬剤の各濃度と両細胞の増殖抑制作用との関係を示すグラフである。実線 (グラフ中、ひし形形状でプロットした部分を含む）が CASMC、破線 (グラフ中、正方形形状でプロットした部分を含む）が CAECを示す。縦軸は BrdU取り込み能を表す吸光度であり、リファラジル非添加群 (コントロール)での吸光度に対する各濃度における値をグラフにした。また、グラフ中の、 * *は統計学的に有意であることを示す。統計処理は、例示としてダネット検定を行った。

[0092] 図 7〜10に示されるように、リファラジル同様、試験を実施した 4種類のリファマイシン誘導体は、 CAECに比べ CASMCに対して強く増殖を抑制した。

[0093] (比較例 1)

比較例 1では、被験物質をリファラジルに代えてラパマイシン (Rapamycin)とした他は、上記実施例 3と同じ方法で CASMC及び CAEC細胞増殖抑制試験を行った

[0094] 図 5に示されるように、ラパマイシンは CASMCの増殖をラパマイシン非添加群と比ベて、実施した全ての濃度（1、 10、 100、 1, OOOnM)において、統計学的に有意に増殖抑制を示した。 [0095] また、図 6に示されるように、ラパマイシンは CAECの増殖をラパマイシン非添加群と比べて、実施した全ての濃度（1、 10、 100、 1, OOOnM)において、統計学的に有意に増殖抑制を示した。

[0096] これらのことから、ラパマイシンは CAEC及び CASMCのいずれの細胞の増殖も抑制することが示された。

[0097] 以上より、リファラジル、 KRM1657, KRM1671, KRM1689, KRM1690は CA ECに比べ CASMCに対して選択的に強く細胞増殖を抑制することがわ力つた。従つて、リファラジル、 KRM1657, KRM1671, KRM1689, KRM1690をコーティングしたインプラント (例えば、上述の生体留置用ステントを含む）は、内皮再生を阻害しない一方で血管平滑筋細胞の増殖を抑制すると考えられる。つまり、上記インブラントは抗血栓性及び組織適合性に優れ、狭窄を抑制することが可能であると考えられる。

Claims

請求の範囲

[1] リファマイシン誘導体を有効成分とし、血管内皮細胞に比べ、血管平滑筋細胞に対して強く増殖抑制作用を示すことを特徴とする血管性疾患処置剤。

[2] リファマイシン誘導体を有効成分とし、血管内皮細胞に比べ、血管平滑筋細胞に対して強く増殖抑制作用を示すことを特徴とする細胞増殖調節剤。

[3] 血管内皮細胞に対して細胞増殖抑制作用を示さないことを特徴とする請求項 1に記載の血管性疾患処置剤または請求項 2に記載の細胞増殖調節剤。

[4] 前記リファマイシン誘導体は、下記式 (I)

[化 1]

(式 (I)中、 X¹は酸素原子または硫黄原子を示し、 R¹はァセチル基または水素原子を示し、 R²はメチル基またはヒドロキシメチル基を示し、

R⁴は同一または相異なり、水酸基、水素原子、炭素数 1から 3のアルキル基、下記式 (II)で表される基、または、下記式 (IV)で表される基を示す)で表される化合物またはその生理学的に許容される塩であることを特徴とする請求項 1〜3のいずれかに記載の血管性疾患処置剤または細胞増殖調節剤。

[化 2]

(II)

[化 3]

上記式 (II)中、 R⁵、 R⁶は同一または相異なり、炭素数 1から 3のアルキル基、または式 (III)で表される基を示す。

[化 4] 、

— (CH₂) i CH (I")

ゝ

(式 (III)中、 jは 1から 3の整数を示す）

上記式 (IV)中、 R⁷、 R⁸は同一または相異なり、水素原子または炭素数 1から 3のアルキル基を示し、 X²は酸素原子、硫黄原子、カルボニル基、下記式 (V)で表される基、または、下記式 (VI)で表される基を示す。

[化 5]

R⁹

(V)

R¹⁰

[化 6]

(0) _m

A

(VI)

： N R" 上記式 (V)中、 R⁹、 R^1Qは同一または相異なり、水素原子、炭素数 1から 3のアルキル基、または R⁹と R¹⁽⁾が結合して下記式で表される基を示す。

(CH ) —

2 k

(式中、 kは 1から 4の整数を示す）

上記式 (VI)中、 mは 0または 1を示し、 R¹¹は水素原子、炭素数 1から 7のアルキル基、または下記式で表される基を示す。

(式中、 nは 1から 4の整数を示し、 X³は炭素数 1から 3のアルコキシ基、ビニル基、ェチニル基、または下記式 (VII)で表される基を示す。 )

[化 7]

[5] 前記リファマイシン誘導体は、前記式 (I)の X¹が酸素原子であり、 R¹がァセチル基または水素原子を示し、 R²はメチル基またはヒドロキシメチル基を示し、

R⁴は同一または相異なり、水酸基、水素原子、炭素数 1から 3のアルキル基、または式 (VIII)：

[化 8]

— N N R12 (VIII)

(式 (VIII)中、 R¹²は水素原子、または炭素数 1から 7のアルキル基を示す)で表されるリファマイシン誘導体またはその生理学的に許容される塩であることを特徴とする請求項 4に記載の血管性疾患処置剤または細胞増殖調節剤。

[6] 前記リファマイシン誘導体は、前記式 (I)の X¹が酸素原子であり、 R¹がァセチル基であり、 R²力メチル基であり、 R³が水酸基であり、 R⁴が式 (IX)：

[化 9] 一 N N CH„CH (CHj , (IX)

\ _ / で表れるリファフンノレ {Rifalazil、 3—Hydroxy— 5— (4— isobutyl— 1— piperazinyl)benzoxaz inorifamycin, KRM 1648 }またはその生理学的に許容される塩であることを特徴とする請求項 5に記載の血管性疾患処置剤または細胞増殖調節剤。

前記リファマイシン誘導体は、前記式 (I)の X¹が酸素原子であり、 R¹がァセチル基であり、 R メチル基であり、 R³が水酸基であり、 R⁴が式 (X)：

[化 10] 一 N N CH,CH,CH„ (X)

^{2 2 3} で表される KRM1657またはその生理学的に許容される塩であることを特徴とする請求項 5に記載の血管性疾患処置剤または細胞増殖調節剤。

前記リファマイシン誘導体は、前記式 (I)の X¹が酸素原子であり、 R¹が水酸基であり、 R²力メチル基であり、 R³が水酸基であり、 R⁴が式 (IX)：

[化 11]

で表される KRM1671またはその生理学的に許容される塩であることを特徴とする請求項 5に記載の血管性疾患処置剤または細胞増殖調節剤。

前記リファマイシン誘導体は、前記式 (I)の X¹が酸素原子であり、 R¹がァセチル基であり、 R²力 Sメチル基であり、 R³および R⁴が式 (IX)：

[化 12]

で表される KRM1689またはその生理学的に許容される塩であることを特徴とする請求項 5に記載の血管性疾患処置剤または細胞増殖調節剤。

前記リファマイシン誘導体は、前記式 (I)の X¹が酸素原子であり、 R¹がァセチル基であり、 R²がヒドロキシメチル基であり、 R³が水酸基であり、 R⁴が式 (IX)：

[化 13]

で表される KRM1690またはその生理学的に許容される塩であることを特徴とする請求項 6に記載の血管性疾患処置剤または細胞増殖調節剤。

自然発生的血管性疾患または非自然発生的血管性疾患の予防または治療のために使用することを特徴とする請求項 1〜10のいずれかに記載の血管性疾患処置剤または細胞増殖調節剤。

[12] 前記自然発生的血管性疾患が、動脈硬化症、動脈瘤、仮性瘤、動脈解離症、炎症性動脈疾患、非炎症性動脈疾患、および透析シャントからなる群力選ばれる請求項 11に記載の血管性疾患処置剤または細胞増殖調節剤。

[13] 前記非自然発生的血管性疾患が、経皮的血管形成術後の血管再狭窄または再閉塞である請求項 11に記載の血管性疾患処置剤または細胞増殖調節剤。

[14] 血中への徐放が、経口投与、あるいは、筋肉内投与、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、経皮投与、粘膜投与、吸入投与、およびインプラントを利用した投与力ゝらなる群より選択される非経口投与により実施される請求項 1〜13のいずれかに記載の血管性疾患処置剤または細胞増殖調節剤。

[15] 前記インプラントが、ステント、ステントグラフト、人工血管、力テーテノレ、人工心弁、ぺースメーカーのリード線、骨ネジ、人工骨、人工気管、または縫合糸であることを特徴とする請求項 14に記載の血管性疾患処置剤または細胞増殖調節剤。

[16] 血管性疾患処置剤製造のための、請求項 1〜： LOのいずれかの前記リファマイシン誘導体の使用。

[17] 請求項 1〜10のいずれかの前記リファマイシン誘導体を使用する細胞の増殖抑制方法。

[18] 請求項 1〜10のいずれかの前記リファマイシン誘導体を使用する血管性疾患の治療方法。