WO2007139128A1 - クレアチンホスホキナーゼ分泌抑制組成物 - Google Patents

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Kenichi Masuda
Yoshikatsu Ushijima
Yasuyuki Uchida
Motohiro Maebuchi
Akihiko Samoto
Mitsutaka Kohno
Motohiko Hirotsuka
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Fuji Oil Company, Limited
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Definitions

  • Creatine phosphokinase secretion inhibitory composition Creatine phosphokinase secretion inhibitory composition
  • the present invention provides a creatine phosphokinase (CPK) secretion inhibitory composition comprising an 11S soybean protein enzyme-degraded peptide mixture as an active ingredient.
  • CPK creatine phosphokinase
  • Non-patent Document 1 Delayed muscle pain that occurs after sports or physical labor is thought to be caused by minute damage on muscle fibers caused by repeated stretching contraction and subsequent inflammatory reaction
  • Creatine phosphokinase is a transferase that reversibly catalyzes the transfer of a high-energy phosphate group (Lohmann transfer) between ATP and creatine.
  • CPK is a deviating enzyme that exists in tissue cells and escapes into the blood by cell damage, destruction, and increased permeability of the cell membrane. Blood CPK activity is clinically used as an indicator of muscle damage (Non-patent Document 3).
  • Non-Special Reference 1 Armstrong RB. Mechanisms of exercise-induced delayed onset muscul ar soreness: a brief review. Med Sci Sports Exerc 1984; 16: 529-538.
  • Patent Document 2 Maclntyre DL, Reid WD, McKenzie DC.Delayed muscle soreness.T he inflammatory response to muscle injury and its clinical implications.Sports Med 1 995; 20: 24-40.
  • Non-Special Terms 3 Clarkson PM, Nosaka K, Braun B. Muscle function after exercise- ind uced muscle damage and rapid adaptation. Med Sci Sports Exerc. 1992; 24: 512-520 Disclosure of the Invention
  • An object of the present invention is to provide a composition for inhibiting CPK secretion.
  • the inventors of the present invention administered soy peptide or its substrate protein to men immediately after exercise, and examined the effect of suppressing CPK secretion.
  • the present invention is a creatine phosphokinase secretion inhibiting composition comprising a peptide mixture obtained by enzymatic degradation of 11S soybean protein as an active ingredient.
  • the creatine phosphokinase secretion inhibitory composition can be an agent or a food.
  • the drug is preferably taken orally.
  • a CPK secretion inhibitory composition comprising a peptide mixture obtained by enzymatic degradation of 11S soybean protein as an active ingredient is completed, thereby preventing or efficiently repairing muscle damage after exercise.
  • physical fatigue such as late onset muscle pain can be reduced.
  • the 11S soy protein is obtained from a conventional isolated soy protein or soy milk containing soy ⁇ -conglycinin (7S globulin) and soy glycinin (11S globulin) by a known method.
  • 11S globulin can be obtained by fractionation.
  • Patent Document 1 Publication number WO02 / 28 198
  • Patent Document 2 international patent application publication number WO00 / 58492
  • It can also be obtained by extracting 7S deficient soybean power genetically deficient in 7S globulin. These 11S soy proteins undergo the following degradation in water.
  • proteases used here are proteases classified as “metal protease”, “acidic protease”, “thiol protease”, “serine protease”, preferably “metal”.
  • proteases classified as “proteases”, “thiol proteases” and “serine proteases” enzymes belonging to two or more, preferably three or more different categories can be allowed to act sequentially or simultaneously.
  • protease is classified according to the type of amino acids that are active in the normal manner in the field of enzyme chemistry. As representatives of each, “metal protease” includes Bacillus neutral proteinase, Streptomyces neutral proteinase, Aspergillus neutral proteinase, samoyase, etc. “Acid protease” is pepsin, Aspergillus acid proteinase, Sumiteam AP, etc. “thiol protease” is bromelain, papine, etc.
  • subtilisin subtilisin
  • Streptomyc es alkaline proteinase Aspergillus alkaline proteinase, Alcalase
  • P H or inhibitor in force other enzymes Pio Buraze etc. can confirm the classification.
  • Enzymes with different active centers can be obtained efficiently because the site of action on the substrate is greatly different.
  • oligopeptides can be produced more efficiently by using enzymes of different origins (origin organisms) together. Even in the same classification, if the origin is different, the site of action on the protein substrate is also different, and as a result, the yield of di- and tripeptides can be increased. 2 or more
  • three or more enzymes of different origins can be allowed to act sequentially or simultaneously. It is also preferable to use one or more enzymes of different origins in the same class in combination with two or more different enzymes.
  • proteases preferably have low exo activity.
  • crude enzymes and enzyme preparations may contain multiple types of proteases.
  • proteases that exhibit substantial activity can be treated as if they exist separately.
  • Each protease can be classified according to its active center and origin.
  • the reaction pH and the reaction temperature are the optimum conditions for each protease, or the conditions for obtaining the activity. In particular, when two or more proteases are used at the same time, the conditions for obtaining the activities are selected. select.
  • the reaction pH is around the optimum pH of each enzyme, and the reaction is carried out at a temperature of 0 to 100 ° C, preferably 20 to 80 ° C, more preferably 40 to 60 ° C.
  • the reaction time also varies depending on the pH and temperature, and is not particularly limited, but is generally 5 minutes to 24 hours, preferably 10 minutes to 12 hours, and more preferably 30 minutes to 6 hours. After the reaction, the reaction solution is heated at 60 ° C to 100 ° C to deactivate the remaining enzyme activity.
  • the reaction solution can be dried as it is, can be adjusted to any pH, and precipitates and suspensions generated during pH adjustment can be removed by centrifugation, filtration, or the like. Further, after this, purification can be carried out by activated carbon or adsorption resin.
  • the obtained peptide mixture is measured for molecular weight distribution and the like by the following method.
  • a gel filtration system for peptides was assembled by connecting two types of columns in series, and a known peptide, which is the molecular weight marker, was charged, and a calibration curve was obtained in relation to the molecular weight and retention time.
  • the supernatant obtained by centrifuging the enzyme-degraded degradation product (1%) at 10,000 X g for 10 minutes was diluted 2-fold with a solvent for gel filtration, and 51 was applied.
  • the content ratio% for each molecular weight fraction was determined by the ratio of the area of a specific molecular weight range (time range) to the total absorbance chart area (1st column: Superdex 75 10 / 300GL, 2nd column: Superdex Petide 7.5 / 300GL, solvent: 1% SDS / 10 mM phosphate buffer, pH 8.0, 25 ° C, flow rate: 0.25 ml / min, detection: OD220 nm).
  • Average molecule of peptide mixture obtained by enzymatic degradation of 11S soybean protein used in the present invention An amount of 200-15000, preferably ⁇ 200-10000, more preferably ⁇ 200-5000, and more preferably 200-3000 is excellent in suppressing the secretion of CPK.
  • the CPK secretion-suppressing composition of the present invention can be used as an agent or food with the peptide mixture as an active ingredient.
  • it can be in the form of tablets, powders, granules, solids, fluids, liquids, and the like.
  • the active ingredient when the composition of the present invention is administered as an agent, can be prepared in various dosage forms alone or mixed with a pharmaceutically acceptable carrier and administered.
  • a pharmaceutically acceptable carrier for example, these can be formulated according to a usual method using an appropriate pharmaceutically acceptable carrier.
  • the carrier used here include various substances commonly used in ordinary drugs, such as diluents or excipients such as fillers, binders, disintegrants, surfactants, lubricants, and the like.
  • the dosage form is not particularly limited and can be appropriately selected depending on the purpose of treatment.
  • tablets, pills, powders, solutions, suspensions, emulsions, granules, hard capsules, soft capsules It can be administered in the form of a capsule or the like. Oral administration is also desirable for simplicity.
  • the pharmaceutical product according to the present invention contains an 11S peptide, and may contain other than the 11S peptide as long as it has an action to prevent and ameliorate at least one of muscle damage accompanied by CPK secretion, muscle pain, and physical fatigue.
  • the pharmaceutical product is preferably in a dosage form that can be administered orally. Specific examples include tablets, granules, powders, drinks, syrups and the like.
  • the composition of the present invention when it is a food, it can be a liquid food such as a beverage or a solid food such as a protein bar.
  • the peptide mixture of the present invention can be mixed and eaten with general foods. That is, it may be a food that only has 11S peptide, or a food containing components other than 11S peptide.
  • dietary supplements for example, as so-called dietary supplements (supplements), tablets containing 11S peptide, granules, powders, drinks and the like can be mentioned.
  • the agents and foods related to the present invention are intended for humans, but are not limited to humans, and can be used for a wide range of animals.
  • defatted soybeans was added to 10 parts of water, and extraction was performed with stirring at pH 7.0 for 1 hour, and okara was removed by centrifugation to obtain defatted soymilk.
  • 0.01% sodium bisulfite was added to the defatted soymilk and the pH was adjusted to 6.4 with hydrochloric acid.
  • the defatted soymilk was allowed to stand at 2 to 5 ° C for 6 hours, and the precipitate was collected by centrifugation, neutralized with sodium hydroxide, then subjected to high-temperature sterilization and spray drying to obtain 11S soy protein.
  • Peptides were prepared according to the following method using the 11S soybean protein thus obtained as a substrate.
  • the reaction was stopped by heating at 90 ° C. for 20 minutes.
  • the solid content yield of the raw material 11S soybean protein was 96% by weight.
  • CP was 87% and free amino acid content was 8% per dry solid content.
  • the molecular weight distribution measured by SDS solvent gel filtration analysis was molecular weight 1000 or more, force%, 500-1000 was 20%, and 500 or less was 72%.
  • the subjects were 16 healthy 20-year-old men who had no previous medical history and were not taking any medication. During the study period, subjects were prohibited from taking supplements that could affect the test results.
  • subjects were given 4 sets of 25 full squats without weight load at 1-minute intervals and each test beverage was ingested over 30 seconds immediately after exercise. Blood sampling after exercise was performed 30 minutes later and 18 hours later.
  • a beverage containing 8 g of 11S soy protein or 8 g of 11S peptide was ingested.
  • the sodium concentration in the beverage was combined with salt, sugar for taste masking, and caramel color so that the subject could not identify the test beverage.
  • the reference placebo beverage had the same composition as the other test beverages except that it contained a nitrogen source.
  • Table 1 shows the results of blood parameters before and after exercise for each test beverage. “**” in the table indicates p ⁇ 0.01, and p ⁇ 0.05 relative to the value before ingestion.
  • the significance test was performed by Dunnett's method. When a placebo that did not contain a nitrogen source was ingested, the C PK value did not change at 30 minutes after exercise, but a significant increase was confirmed after 18 hours (p ⁇ 0.01). . This trend was similar for 11S soy protein (p ⁇ 0.05). However, when the 11S peptide was ingested, there was no significant difference in the value after 18 hours, which was almost the same as the value before the exercise load.
  • the amount of change in the 11S soy protein intake group was significantly lower than the change in the blood CPK activity relative to the initial value when the placebo drink was consumed, so the effect of the 11S globulin was less than that of the 11S peptide. Is considered to have the effect of keeping the degree of muscle damage relatively mild.
  • the CPK secretion-suppressing thread and the composition of the present invention are taken during exercise to prevent physical damage such as delayed muscle pain by preventing or efficiently repairing muscle damage. It can be implemented as an effective food material, food and medicine. Therefore, food It can be used in industry and pharmaceutical industry.

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Abstract

　本発明は、CPK分泌抑制組成物の提供を目的とした。本発明は、11S大豆蛋白を酵素分解して得られるペプチド混合物を有効成分とするクレアチンホスホキナーゼ分泌抑制組成物である。

Description

明 細 書
クレアチンホスホキナーゼ分泌抑制組成物
技術分野
[0001] 本発明は、 11S大豆蛋白の酵素分解ペプチド混合物を有効成分とするクレアチンホ スホキナーゼ (CPK)分泌抑制組成物を提供するものである。
背景技術
[0002] スポーツや肉体労働の後に生じる遅発性筋肉痛は、伸張性収縮を繰り返すことに よる筋繊維上の微小な損傷とその後の炎症反応が原因と考えられている (非特許文 献 1、 2)。
[0003] クレアチンホスホキナーゼ (creatine phosphokinase (CPK) )は ATPとクレアチンとの 間での高エネルギーリン酸基の転移 (Lohmann転移)を可逆的に触媒する転移酵素 である。 CPKは組織細胞内に存在し、細胞の損傷、破壊および細胞膜の透過性亢進 により、血中に逸脱してくる逸脱酵素である。血中 CPK活性は、筋損傷の指標として 臨床的に用いられて 、る（非特許文献 3)。
[0004] すなわち、筋肉が損傷している状態では、血中 CPK活性が高い値を示し、遅発性 筋肉痛などの肉体疲労が生じるということである。
[0005] 日経バイオテク ·ニュース（http：〃 biotech.nikke¾p.co.jp/news/detail.jsp?id=20025 780)にあるように、 1日 4000mgの大豆蛋白由来ペプチドを飲料で補給すると、 CPKが 減少する効果が、 2004年 6月 23日「大豆ペプチド健康フォーラム 第 3回マスコミセミ ナー」において発表されている。しかし、この大豆蛋白由来ペプチドは所謂 7S蛋白と 11 S蛋白を含むものであり、特に 11 S蛋白由来のペプチドが CPK減少効果に優れる ことを教示するものではな 、。
[0006] (参考文献）
非特干文献 1： Armstrong RB. Mechanisms of exercise-induced delayed onset muscul ar soreness: a brief review. Med Sci Sports Exerc 1984; 16: 529 - 538.
特許文献 2 : Maclntyre DL, Reid WD, McKenzie DC. Delayed muscle soreness. T he inflammatory response to muscle injury and its clinical implications. Sports Med 1 995; 20: 24-40.
非特言午文献 3 : Clarkson PM, Nosaka K， Braun B. Muscle function after exercise- ind uced muscle damage and rapid adaptation. Med Sci Sports Exerc. 1992; 24: 512 - 520 発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0007] 本発明は、 CPK分泌抑制組成物の提供を目的とした。
課題を解決するための手段
[0008] 本発明者等は運動負荷直後の男性に大豆ペプチドまたはその基質蛋白質を投与 し、 CPK分泌抑制に関する効果を検討した。
その結果、 11S大豆蛋白よりも 11S大豆蛋白を酵素分解して得た 11S大豆ペプチド混 合物が CPKの分泌を抑制する効果があることを見出し本発明を完成するに到った。 即ち、本発明は、 11S大豆蛋白を酵素分解して得られるペプチド混合物を有効成分 とするクレアチンホスホキナーゼ分泌抑制組成物である。クレアチンホスホキナーゼ 分泌抑制組成物は剤または食品とすることができる。剤は経口摂取用が好まし 、。 発明の効果
[0009] 本発明により 11S大豆蛋白を酵素分解して得られるペプチド混合物を有効成分とす る CPK分泌抑制組成物が完成され、これにより運動後の筋損傷を予防もしくは効率 的に修復することで、遅発性筋肉痛などの肉体疲労を軽減することができるようにな つたものである。
発明を実施するための最良の形態
[0010] まず、 11S大豆蛋白を酵素分解して得られるペプチド混合物について説明する。
該 11S大豆蛋白は公知の方法により大豆 β -コングリシニン（7Sグロブリン）と大豆グ リシニン（11Sグロブリン)を含む通常の分離大豆たん白質や豆乳から大豆グリシニン（
11Sグロブリン)を分画して得ることができる。
例 は、 Thanh & Okubo & Shibasaki, Isolation and Cnaractenzation of the Multipl e 7S Globulins of Soybean Proteins. Plant Physiol. 56, 19- 22 (1975)、 Thanh, V. H. and Shibasaki, K., Major proteins of soybean seeds. A straightforward fractionation and their characterization. J. Agric. Food Chem., 24, 1117— 1121 (1976)、及び、 Nagano, T., Hirotsuka, M., Mori, H., Kohyama, K. and Nishinari, K., Dynamic viscoelastic study on the gelation of 7S globulin from soybeans. J. Agric. F ood Chem., 40, 941-944 (1982)、特許文献 1 (国際特許出願 公開番号 WO02/28 198)、特許文献 2 (国際特許出願 公開番号 WO00/58492)等の方法に従って行 なうことができる。また遺伝的に 7Sグロブリンを欠損させた 7S欠損大豆力も抽出して得 ることもできる。これら 11S大豆蛋白は水系下で以下の分解を行なう。
[0011] 分解は、上記 11S大豆蛋白を基質とし、プロテアーゼ処理を行なう。ここで用いるプ 口テアーゼは、プロテアーゼの分類にお 、て「金属プロテアーゼ」 , 「酸性プロテア一 ゼ」， 「チオールプロテア一ゼ」， 「セリンプロテアーゼ」に分類されるプロテアーゼ、好 ましくは「金属プロテアーゼ」 , 「チオールプロテアーゼ」 , 「セリンプロテアーゼ」に分 類されるプロテアーゼの中から、 2種以上、好ましくは 3種以上の異なった分類に属 する酵素を、順次もしくは同時に作用させることができる。
[0012] このプロテアーゼの分類は、酵素化学の分野に於て通常行なわれている、活性中 心のアミノ酸の種類による分類方法であり、各々の代表として「金属プロテアーゼ」に は Bacillus中性プロティナーゼ， Streptomyces中性プロティナーゼ， Aspergillus中性 プロティナーゼ，サモアーゼ等、「酸性プロテアーゼ」にはペプシン， Aspergillus酸性 プロティナーゼ，スミチーム AP等、「チオールプロテアーゼ」にはブロメライン，パパイ ン等、「セリンプロテアーゼ」にはトリプシン，キモトリブシン，ズブチリシン， Streptomyc esアルカリプロティナーゼ， Aspergillusアルカリプロティナーゼ，アルカラーゼ，ピオ ブラーゼ等が挙げられる力 これ以外の酵素でも作用 PHや阻害剤との反応性により 、その分類を確認することができる。活性中心が異なる酵素間では、基質への作用部 位が大きく異なる為に、「切れ残り」を減らし、効率よくオリゴペプチドを得ることができ る様になる。
[0013] 或いは異なった起源 (起源生物）の酵素を併用することで、更に効率良くオリゴぺプ チドを製造することができる。同分類でも起源が異なれば、基質であるたん白質への 作用部位も異なり、結果としてジ，トリペプチドの収率を増やすことが出来る。 2種以 上、好ましくは 3種以上の異なった起源の酵素を、順次もしくは同時に作用させること ができる。また、 2種以上の分類の異なる酵素に、同分類で起源の異なる酵素を 1種 以上併用することも好ましい。
[0014] これらプロテアーゼはェキソ活性が少な 、ものが好まし 、。また、粗酵素や酵素製 剤は複数種のプロテアーゼを含んでいる場合があるが、この際は実質的な活性を示 すプロテアーゼが、それぞれ別々に存在するものとして扱うことができる。またそれぞ れのプロテアーゼは活性中心や起源により分類することができる。
[0015] 反応 pHや反応温度は、それぞれのプロテア一ゼの至適条件、或いは活性の得ら れる条件であり、特に 2種以上のプロテアーゼを同時に用いる際は、共に活性が得ら れる条件を選択する。通常反応 pHは各々の酵素の至適 pH付近であり、温度は 0〜1 00°C,好ましくは 20〜80°C,更に好ましくは 40〜60°Cで反応を行なう。反応時間も pH や温度により変化するので特には限定しないが、概ね 5分〜 24時間、好ましくは 10分 〜12時間、更に好ましくは 30分〜 6時間が適当である。反応後、反応液は 60°C〜100 °Cで加熱することで残存酵素活性を失活させる。
[0016] 反応液はそのまま乾燥を行なうこともできるし、任意の pHに調整することもでき、ま た pH調整時に発生する沈澱物や懸濁物を遠心分離や濾過等により除去することも できる。また、この後に活性炭や吸着榭脂により、精製を行なうこともできる。
[0017] 得られたペプチド混合物は、以下の方法により分子量分布などを測定する。
〇分子量測定方法
2種のカラム直列接続によってペプチド用ゲルろ過システムを組み、分子量マーカ 一となる既知ペプチドをチャージし、分子量と保持時間の関係において検量線を求 めた。酵素分解した分解物（1%)を 10,000 X g、 10分で遠心した上清を、ゲルろ過用 溶媒で 2倍希釈し、その 5 1をアプライした。各分子量画分の含有量比率％について は、全体の吸光度のチャート面積に対する、特定の分子量範囲（時間範囲）の面積 の割合によつて求めた（1stカラム： Superdex 75 10/300GL、 2ndカラム： Superdex Pe ptide 7.5/300GL,溶媒： l%SDS/10mMリン酸緩衝液 ,pH8.0, 25°C,流速： 0.25ml/min ,検出： OD220nm)。
[0018] 本発明に用いる 11S大豆蛋白を酵素分解して得られるペプチド混合物の平均分子 量は 200〜15000、好まし <は 200〜10000、更に好まし <は 200〜5000、より好ま しくは 200〜3000のものが CPKの分泌を抑制する効果に優れるものである。
[0019] 本発明の CPK分泌抑制組成物は前記ペプチド混合物を有効成分として剤または 食品とすることができる。例えば、錠剤、粉末状、顆粒状、固形状、流動物状、液状 等の形態とすることができる。
[0020] 例えば、本発明の組成物が剤として投与される場合は、有効成分を単独で、又は 薬学的に許容される担体と混合して各種の投与形態に調製して投与することができ る。 V、ずれの場合もこれらは適当な薬学的に許容される担体を用いて通常の方法に 従い製剤化できる。ここで用いられる担体としては通常の薬剤に汎用される各種のも の、例えば充填剤、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤等の希釈剤乃至賦形剤 等を例示できる。投与形態は特に限定されず、治療目的に応じて適宜選択できるが 、例えば経口的投与の場合には、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、 硬カプセル剤、軟カプセル剤等の形態で投与できる。簡易性の点力も経口的投与が 望ましい。
また、本発明に関わる医薬品は、 11Sペプチドを含み、 CPK分泌を伴う筋損傷、筋 肉痛、肉体疲労の少なくともいずれかを予防および改善する作用を有するものであ ればよぐ 11Sペプチド以外に含まれる成分として、特に限定されるものではない。本 医薬品は経口的に投与できる剤形であることが好ましい。具体的には、例えば、錠剤 、顆粒剤、散剤、ドリンク剤、シロップ剤等を挙げることができる。
[0021] また、例えば、本発明の組成物が食品の場合は、飲料のような液体食品やプロティ ンバーのような固形食品とすることができる。また一般の食品に本発明の前記べプチ ド混合物を混合して食することもできる。即ち、 11Sペプチドのみ力もなる食品でもよく 、 11Sペプチド以外の成分を含む食品でもよい。
その他にも例えば、いわゆる栄養補助食品（サプリメント）として 11Sペプチドを含む 錠剤、顆粒剤、散剤、ドリンク剤等を挙げることができる。
[0022] 本発明に関わる剤および食品はヒトを対象とするものである力 ヒトに限定されるもの ではなぐ広く動物全般を対象とすることができる。
実施例 [0023] 以下に、本発明の有効性を実施例と共に示すが、これらの例示によって本発明の 技術思想が限定されるものではない。
[0024] [製造例 1]
脱脂大豆 1部を水 10部に加え、 pH7.0で 1時間、攪拌下で抽出を行い、オカラを遠心 分離で除いて脱脂豆乳を得た。得られた脱脂豆乳に 0.01%の亜硫酸水素ナトリウムを 加え、塩酸で pH6.4とした。脱脂豆乳を 2〜5°Cで 6時間静置し、遠心分離で沈殿物を 回収し、水酸化 Naで中和後、高温殺菌及び噴霧乾燥を行って 11S大豆蛋白を得た。 このようにして得られた 11S大豆蛋白を基質にして、以下の方法に従 、ペプチドを 調製した。すなわち、 11S大豆蛋白の 8%溶液に対し、サモアーゼ（起源； Bacillus thermoproteolyticus,金属プロテアーゼ，大和化成）を対蛋白質あたり 2%加え、 pH9.0 , 58°Cで 60分間作用させた。次にビオプラーゼ（起源； Bacillus sp.セリンプロテア一 ゼ，ナガセケムテック）を対蛋白質あたり 1%カ卩え、 pH7.5, 58°Cで 60分作用させた。スミ チーム FP (起源; Aspergillus sp.,金属プロテアーゼ、新日本化学工業)を対蛋白質 あたり 1%カ卩え、 pH7.5、 58%で 60分作用させた。
以上の処理の後、 90°Cで 20分加熱して反応を停止させた。原料の 11S大豆蛋白に 対する固形分収率は、 96重量 %であった。また、乾燥固形分あたり CPは 87%、遊離ァ ミノ酸含量は 8%であった。また、 SDS溶媒系ゲルろ過分析により測定した分子量分布 は分子量 1000以上力 %、 500-1000が 20%、 500以下が 72%であった。
[0025] [実施例 1]
(実験材料および方法）
1. 11S大豆蛋白と 11Sペプチドの調製
11S大豆蛋白と 11Sペプチドは製造例 1に従 、調製した。
，被験者
既往症を持たず、薬を服用していない 20歳の健常な男性 16名を被験者とした。試 験期間中、被験者には試験結果に影響を及ぼす可能性のあるサプリメントの摂取を 禁止した。
2.運動負荷
本試験は、プラセボ飲料を対照とした二重盲検にて、 1週間のゥォッシュアゥト期間 を設定し、クロスオーバー試験にて実施した。運動負荷前に採血を行った後、被験 者には、重量負荷無しのフルスクワット 25回を 1分間のインターバルで 4セット行わせ、 運動直後に各試験飲料を 30秒かけて摂取させた。運動負荷後の採血は、 30分後、 1 8時間後に行った。なお、試験飲料として、 11S大豆蛋白 8gもしくは 11Sペプチド 8gを 含む飲料を摂取させた。飲料中のナトリウム濃度は食塩を加え合わせ、味のマスキン グのため砂糖、被験者が試験飲料を識別できないように、カラメル色素を加えた。対 照となるプラセボ飲料は窒素源が入って 、な 、以外、他の試験飲料と組成は同じに した。
3.血液パラメーター
CPKの動態を調べた。
4.統計解析
各測定値は、平均士標準誤差で示した。一元配置分散分析により F値に有意差 (p く 0.05)が認められた場合、 Dunnett's法もしくは Student Newman Keuls法により有意 差検定を行い、有意水準 5%未満の場合に有意差ありと判断した。
(結果）
表 1に運動負荷前と運動負荷後の血液パラメーターの結果を各試験飲料別に示す 。表中の" **"は摂取前の値に対し p< 0.01、 は p< 0.05、であることを示す。なお、 有意差検定は Dunnett's法で行った。窒素源を含まないプラセボを摂取した場合、 C PKの値は運動負荷後 30分で変化は観察されな力つたが、 18時間後に初期値に対し 有意な上昇が確認された (p< 0.01)。この傾向は 11S大豆蛋白でも同様であった (p< 0.05)。しかし、 11Sペプチドを摂取した場合、 18時間後の値に有意差は見られず、運 動負荷前の値とほとんど変わらな力つた。一方、運動負荷前の値に対する 18時間後 の CPK活性の変化量を 3群間で比較したところ、プラセボ摂取群に対し、 11S大豆蛋 白摂取群、 11Sペプチド摂取群で有意な低下が認められ、 11Sペプチド摂取群は、 11 S大豆蛋白摂取群に対しても有意に低い値が確認された。成長ホルモンは、プラセボ 摂取群を除いて運動負荷後 30分で、有意な上昇が確認された (p< 0.01)。 3群間の 変化量は、プラセボ群と 11Sペプチド摂取群間に有意差が見られたが、 11S大豆蛋白 摂取群はプラセボ摂取群に対し増加傾向が見られたに過ぎな力つた。 [0027] (表 1) パラメーター 摂取後時間
試 料 摂取前 30分後 18時間後 プラセボ 165.2± 18.2 190.3±29.4 297.9±26.1**
CPK(IU/1) 11S大豆蛋白 153.0± 10.7 166.9± 12.1 202.1 ± 16.6*
11Sペプチド 151.7± 11.8 159.8± 12.3 167.4± 14.0
[0028] 20歳の男性被験者 16名に、重量負荷無しのフルスクワット 25回を 1分間のインター バルで 4セット行わせた場合、 18時間後の血中 CPK活性は運動負荷前の値に対し、 有意に上昇した。しかし、運動直後に 11Sペプチドを摂取させた場合、その上昇はほ とんど抑えられた。これらの結果は、運動直後の 11Sペプチド摂取が、運動によって 生じた筋損傷を抑制したことを示唆する。一方、同じアミノ酸組成の 11S大豆蛋白を同 量摂取させた場合、初期値に対して血中 CPK活性の有意な上昇が観察された。しか し、プラセボ飲料を摂取した場合の初期値に対する血中 CPK活性の変化量に対し、 11S大豆蛋白摂取群の変化量は有意に低力つたので、 11Sペプチドよりその効果は 低いものの、 11Sグロブリンは筋損傷の程度を比較的軽度にとどめる効果を有すると 考えられる。
結論として、 11Sペプチドを摂取することにより、同じ組成の蛋白質より筋損傷を効 果的に軽減できることを明らかにした。蛋白質に対するペプチド態の優位性は、ァミノ 酸の効率的吸収性に起因し、栄養学的に優れた大豆蛋白質のアミノ酸組成に起因 する複合的効果を、アミノ酸の効率的吸収形態であるペプチド態で摂取することによ り増強していると考えられる。
産業上の利用可能性
[0029] 本発明の CPK分泌抑制糸且成物は運動の際に摂取することにより、筋肉の損傷を予 防、もしくは効率的に修復することで遅発性筋肉痛などの肉体疲労を軽減する効果 を有する食品素材、食品および医薬品として実施することができる。したがって、食品 産業や医薬品産業において利用可能である。

Claims

請求の範囲
[1] lis大豆蛋白を酵素分解して得られるペプチド混合物を有効成分とするクレアチンホ スホキナーゼ分泌抑制組成物。
[2] クレアチンホスホキナーゼ分泌抑制組成物が剤または食品である請求項 1記載のク レアチンホスホキナーゼ分泌抑制糸且成物。
[3] 剤が経口摂取用である請求項 2記載のクレアチンホスホキナーゼ分泌抑制組成物。
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