WO2007043202A1

WO2007043202A1 - 安定な新規ニトロン化合物とその用途

Info

Publication number: WO2007043202A1
Application number: PCT/JP2006/306588
Authority: WO
Inventors: Masato Kamibayashi; Hiroaki Kameda; Taiichi Okada
Original assignee: Mikuni Pharmaceutical Industrial Co., Ltd.; Hetero Research Co., Ltd.
Priority date: 2005-10-06
Filing date: 2006-03-23
Publication date: 2007-04-19
Also published as: JPWO2007043202A1

Description

明細書安定な新規二ト口ン化合物とその用途

技術分野

本発明は、電子スピン共鳴測定法および診断用薬剤に用いるラジカル捕捉剤として用いる新規二トロン化合物に関する。背景技術

電子スピン共鳴法（E S R、 E P Rとも称す）は、フリーラジカルおよび遷移金属ィォンを計測する方法として不対電子を有する各種の液体試料或いは固体試料におけるフリーラジカル種の検出と同定などに汎用されている。 E S Rは、計測目的に応じて in vitro X—バンド E S R、生体にスピントラップ剤を投与する in vivo L—バンド E S R、 E S Rィメージング或いは E S Rイメージングと MR I (磁気共鳴イメージング）との併用による生体内ラジカルの検出と計測に有用な手段として期待される。近年、医学、薬学、動植物学領域におけるラジカル研究の進展により、各種のラジカルが動物のみならず植物において、生体の恒常性の維持、生体内情報伝達機構、成長と老化に重要な役割を有し、且つ、各種の病態の発症と進展の過程などに深く関わることが明らかにされてきた。これらの研究の進展には、より精度の高いラジカル計測手段の開発が不可欠である。通常、前記分野におけるラジカル計測は、多くの場合、試料水溶液中に存在する消失速度が極めて速いラジカル種、例えば、ヒドロキシルラジカルおよひスパーオキサイドなどのラジカル種および一酸化窒素（N O) などを対象とするか、或いは試料が有するラジカル消去能もしくは還元能の測定を目的としている。一般に、このような測定環境下においては、短寿命のラジカル種を直接計測することは困難である。従って、測定対象のラジカル種を、一度、スピントラップ剤との反応により、より安定なスピンァダクトに変換した後、 E S R装置を用いてスピンァダクトのシグナルを計測する間接的な方法が汎用されている。このような現状から、特に水溶液中において安定、且つ、高いスピントラップ能を発揮する高性能-トロン化合物の開発が求められている。ラジカルを捕捉するスピントラップ剤が具備すべき特性としては、物理化学的に安定で室温保存性に優れ、低毒性で取り扱い易く、且つ、正確なラジカル測定を行うために、好適なシグナル強度を有し、スピンァダクトの半減期が長く、スピンァダクト由来の副生物を生じることもなく、且つ、測定試料に存在する複数の物質に由来する複数のシグナルの分離同定と帰属が容易であることなどが挙げられる。しかしながら、このような特性を持つスピントラップ用二トロン化合物は知られていない。また、安全な製造方法により安価で安定した供給が出来ることも重要な課題である。電子スピン共鳴測定法に用いるスピントラップ剤において、ピロリジン環を有する二トロン化合物としては、 DMPO (5, 5- Dimethyl- pyrrol ine N - oxide) が世界的に汎用されている。し力、しな力 Sら、 DMPOは、スピンァダクトの半減期が短く、且つ、スピンァダクトから新たに副生成物を生じることなどが測定上の問題点として指摘されている（小中隆盛ファルマシア Vol 28 1347 - 1352 (1992)。一方、 DM P Oと比較してスピンァグ-ク卜の半減期力 S長レヽ D E PMP O (5— Diethoxyphosphoryl— 5— methyl— 1— pyrrol ine N - oxide:特表平 8— 50 "1 808号， Roubaud V. et al. , Ana lytical Biochemistry Vol 247 404-411(1997)、 Tuccio B et al. Journ al of Chemical Society Perkin Trans 2， 295— 298 (1995)など）は、強レヽ吸湿性を有する油状物で、通常- 70°Cで保存される（Frejaville C et al , Journal of Medicinal Chem]stry Vol.38 258-265(1995)、 CALBI0CHEM 社製品カタログ DE PMPO (Cat No 261502))。また非常に高価であるために DMPOのようには普及していない。発明の開示

亜リン酸に結合するエチルアルコールのような直鎖型低級アルコール、例えば、 DE PMPOの原料であるジェチル亜リン酸は、安定性に欠けることが知られ、ジオールとの加熱反応においてより安定な環状フォスファィト構造を形成することが報告されている（Oswald A A. et al. , Canadi an Journal Of Chemistry Vol 37 1498-1504 (1959) ₀ 一方、 DE PMPO は、化学反応で容易にエチルアルコールを脱離して DH PMPO (5- eth y丄ー ΰ— phosphono— 1一 pyrroline N— oxide Clement J.—し. et al. , Journal of Chemical Society, Perk in Tran s 2, 2001, 1471-1475)を生成する。従って、 DE PMPO関連化合物（Stoize K. et al. , Free Radical B lology & Medicine Vol.29 1005 - 1014 (2000)、 Chalier F et al , Journa 1 of Chemical Society, Perkin Trans 2, 2002, 2110 - 2117、 Karoui H et al , Journal of Organic Chemistry Vol.64 147ト 1477 (1999)、 Janse n E G et al , Journal of Organic Chemistry Vol.60 5441-5445(1995) 、 Hardy M. et al. , Journal of Organic Chemistry Vol 70 2135-2142 (2 005)) などが有する直鎖型ジ低級アルキルフォスファイト構造に比べ、より安定な環状フォスフアイト構造を導入したピロリジン化合物は、物理化学的に安定であると考えられる。従って、環状フォスフアイ卜構造を導入したピロリジン化合物は、 in vitroにおけるラジカル計測および生体組織における in vivo ラジカル計測において半減期が長く安定した計測を可能にする二トロン化合物、即ち、新しいラジカル捕捉剤として期待される。本発明者らは、上記の期待に答えるためにラジカル捕捉剤として有用な新しい二トロン化合物を開発すべく、鋭意研究を行った結果、一般式（1

) で表される環状フォスファイト化合物、即ち、 2—才キソ一 [1， 3， 2] ージォキサフォスフオリナン又は [1， 3， 2] ージォキサフォスフィナン 2—ォキサイド構造を持つ新規二トロン化合物が安定性に優れ、且つ、安全性が高いことを見出し、本発明を完成するに至った。即ち、本発明は、下記一般式（1)

[式中、 I^、 R₂は各々水素原子、炭素数 1〜 4個の低級アルキル基、カルボキシル基、アルコキシカルボ二ル基もしくは力ルバモイル基を表し、 R₃、 R₄は各々水素原子もしくは炭素数 1〜4個の低級アルキル基を表す。 ] で示される新規二トロン化合物およひその塩を提供するものであり、また、当該一般式（1) で表される新規二トロン化合物あるいはその塩を含有するラジカル捕捉剤および診断用薬剤を提供するものである。発明の効果

本発明の一般式（1) で表される新規二トロン化合物は、 DEPMPO などの含リン構造を持つ公知の二ト口ン化合物と異なり、安定な結晶性化合物である。また本化合物の 100 /xmol/ml水溶液は、室温遮光下に 1 週間放置後、薄層ク口マトグラフィ一により分解物は検出されなかった。またフェントン反応により発生させたヒドロキシルラジカルと該溶液とのスピンァダクトの E SRシグナル（図 1) は、同溶液を 1ヶ月後に測定した結果、シグナル強度の減衰は殆んど観察されなかった。生体成分中には、複数のラジカル種が混在することが多く、 ESRによる生体成分のラジカル計測においては、例えば、ヒドロキシルラジカルァダクトとスパーォキサイドラジカルァダクトの信号分離が重要である。図 2は、本発明化合物（ファイナル濃度 5rariol) のヒドロキシルラジカルァダクトの ESRスぺクトノレと、常法によりキサンチン Zキサンチンォキシダーゼ系で発生させた本発明化合物（ファイナル濃度 5瞧 ol) のスバーオキサイドラジカルァダクトの E S Rスぺクトルとを比較するために同一チヤート上に表示したものである。図 2に示されるように、本発明化合物のスパーォキサイドラジカルァダク卜およびヒドロキシルラジカルァダクトのスペクトルは、それぞれのシフト値が異なり、各シグナルの分離測定が可能である。予備的な検討において、スパーォキサイドラジカルァダクトおよひヒドロキシルラジカルァダクトの半減期は、 pH 7. 4 リン酸緩衝液中の測定条件下において 2 0分以上である。また、循環系に対する影響は殆んどないと考えられることから、 in vivo E S Rにおいて使用するスピントラップ剤として有用である。また、木発明化合物からなるスピントラップ剤は、短寿命ラジカルを測定する迅速流通法（小沢俊彦ぶんせき 2 000 (2) 68-74)、 E S Rフローインジェクションセ /レを用いた高感度、高分解能の測定方法に有用である。本発明化合物は、物理化学的に安定性に優れていることから、測定時における利便性と迅速性を図るために、溶液又は結晶の必要量を予め、 E S R測定用セルと嵌合が可能で計量可能な目盛り線付きの小型容器、例えば、シリンジ類に封入したプレフィルドタイプとして使用することができる

図面の簡単な説明

図 1は、実施例 2の化合物のフェントン反応により発生させたヒドロキシルラジカルの溶液と、新しく調製した同化合物の溶液と混合後、直ちに測定した E S Rスぺクトル。

図 2は、実施例 2の化合物のヒドロキシルラジカルァダクトと、キサンチンキサンチンォキシダーゼ系で発生させたスパーォキサイドラジカルァダク卜の E S Rスぺクトル。

図 3は、実施例 2の化合物を使用し、過酸化水素水溶液を用いて、 U V 照射法によってラジカルを発生させた直後に測定したスピンァダクトの E S Rスペクトル。なお、 10%過酸化水素水を用いて測定した値である。図 4は、 DM P Oを使用し、過酸化水素水溶液を用いて、 U V照射法によってラジカルを発生させた直後に測定したスピンァダク卜の E S Rスぺクトル。なお、 10%過酸化水素水を用いて測定した値である。

発明を実施するための最良の形態

以下、本発明を詳細に説明する。

木発明の一般式（1 ) で表される化合物において、低級アルキル基としては、炭素数 1〜 4個のアルキル基を示し、例えば、メチル基、ェチル基、プロピル基、イソプロピル基、 n—ブチル基、 1—ブチル基、 sec—ブチル基、 t _ブチル基が挙げられる。当該低級アルキル基としては、通常メチル基が好ましいが、脂溶性を高めるためには炭素数の多いアルキル基、例えば、 t一ブチル基などを選択することができる。水溶性を高める場合には、もしくは R₂ として、カルボキシル基またはその塩が適している。生体内における代謝を利用してカルボキシル基に変換したい場合には、アルコキシカルボエル基或いは力ルバモイル基を選択するのがよい。ァルコキシカルボニル基としては、低級アルコキシカルボ二ル基を示しており、例えば、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボ二/レ基、 n—ブトキシカルボニル基、イソブトキシカルボニル基、 sec—ブトキシカルボニル基、 t—ブ卜キシカルボニル基などの、炭素数 2〜 5個のアルコキシカルボニル基が挙げられる。

本発明の化合物の塩の例としては、ナトリウム、カリウム、リチウム、マグネシウム、カルシウム、バリウムなどの金属塩、アルギニン、リジン、ヒスチジンなどのアミノ酸などが挙げられ、適宜、使用目的に応じて選択することができる。本発明において、上記一般式（1 ) の化合物における分子中の水素原子は、用途に応じて原料中間体或いは目的物に至る各反応段階において文献 fiC載の変換法 (Pou S et al , Journal of Organic Chemistry Vol 56 4438-4443 (1990)、 Clement J. - Organic Biomolecular Chemistry Vol . 1 1591-1595 (2003)、 affei . et al , Tetrahedron Vol. 59 8821-8825 (2003)など）に準じて重水素と置換することができる。

また、 ¹⁵N-ラベルスピンドラップ剤（Sa tto K. et al , Biosci. Biotec hnol. Biochem. , Vol. 66 (10)， 2189-2193 (2002) )の合成法に準じて、下記反応経路 Bにおいて、窒素源として ¹⁵NH₄C1より生成される ¹⁵NH₃を使用することにより、 ¹⁵N-ラベルされた化合物を合成することができる。本発明の一般式（1 ) で表される二卜ロン化合物は、相当するピロリジン化合物を酸化することによって製造することができる。このピロリジン化合物は、新規化合物であり、本願出願人により先に出願した特願 2 0 0 5— 0 0 5 4 3 1号の明細書に詳細に報告されている。そして、当該ピロリジン化合物は、環状フォスファイト（Oswald A A Canadian Journal of Chemistry Vol. 37 1498-1504 (1959)、 Zwierzak A Journal of Chemi stry Vol 45 2501-2510 (1967)、し ucas H. J. et al ， Journal of Orgam c Chemistry 5491-5497 (1950)など）とピロリン誘導体との反応（反応経路 A) 或いはアンモニアの存在下に 5—クロ口一 2—ペンタノン誘導体との反応（反応経路 B ) などに関する文献記載の方法（Moigne F. L. et al. , Journal of Organic Chemi s try Vol. 59 3365-3367 (1994)、 Frejavi l le C. et al. , Journal of Medicinal Chemistry Vol 38 258-265 (1999)、 Ba rbati S. et al.， Synthesis No. 12 2036- 2040 (1999)など）に準じて合成することができる。

(反応経路 A)

(ノ P— H +

(反応経路 B)

[式中、 R 、 R₂ 、 R₃および R₄は前記と同義であり、 R₅はハロゲン原子、一O—ベンゼンスノレフォニル基、 _〇_ トルエンスルフォ二ル基もしくは一〇一メタンスルフォニル基を表す。 ]

上記ピロリジン誘導体の好適な化合物を以下に例示するが、これらの例示化合物の中から目的とする二トロン化合物の合成に好適な化合物を適宜選択して用いる。

2 - Methyl - 2 - (2 - OXO - 2 λ ⁵ - [1， 3， 2] dioxaphosphinan-2-yl) -pyrrol ldine 2 - Methy 2- (5- methy 2-οχο- 2λ⁵ - [1, 3, 2] dioxaphosphinan-2-yl) - pyrrolidine

2-Methyl-2-(5-tert-Butyl-2-oxo-2 λ ⁵ - [1， 3， 2] dioxaphosphinan-2-yl) - pyrrolidine

2 -（4， 5-Dimethyl-2-oxo-2 λ ⁵ - [1， 3, 2] dioxaphosphi垂- 2 - yl) -2-mothyl- pyrrolidme

2- (4， 6-Dimethyl-2-oxo-2 ⁵ _ [1， 3, 2] dioxaphosphinan-2-yl) -2-methyl- pyrrolidine

2- (5， 5-Dimethyl -2-0x0-2 ⁵ - [1, 3, 2] d 1 oxaphosph 1隱- 2_y 1) - 2- methy pyrrolidine

51

でyolldlneMcaTDOXllceldll- ,y〕 ( 555 ethl2o2 λdloxa1nanD1ョxo:I12>1I--ll-

Pyrroli esterJ

でy,〕¾y) λdlox 555122 hoshlp5nthllDlet20X02l5mem11l11llll fy,,p,〕y (〔)ll 3dloxa3llos1n 55hl222l1n:oxo>2l5mei———— l-l-ll ラムクロマ卜グラフィーなどにより精製して目的とする新規二トロン化合物を得ることができる。上記反応に用いる溶媒としては、ジクロルメタン、クロ口ホルムなどのハロゲン系溶媒、ベンゼン、クロルベンゼン、トノレェン、酢酸ェチル、水、重水、テトラハイドロフラン、ジメチルァセトアミド、シメチルフオルムアミド、ジメトキシェタン、ァセトニトリルなどの中から選択し、原料化合物と溶媒の性質に適した酸化法を選択して、副反応物の生成を避けるために、冷却下に下記の合成経路により製造することができる。

以下に代表的な二ト口ン化合物を例示する。

2-Methyl-2- (2-0X0-2 λ ⁵- [1, 3， 2] dioxaphosphinan-2-yl) -3, 4- dihydro- 2H - pyrrole 1 -oxide

2-Methyl-2- (5- methyl - 2_oxo_2 λ ⁵- [ΐ, 3, 2] di oxaphosphinan-2-yl) -3， 4一 dihydo - 2H - pyrrole 1 -oxide

2- (5-tert-butyl-2-oxo-2 λ ⁵ - [1， 3, 2] dioxaphosphinan-2-yl) -2-methyl- 3， 4- dihydo - 2H - pyrrole 1 - oxide

2- (4, 5-Dimethyl-2-oxo-2 λ ⁵- [l, 3, 2] dioxaphosphinan-2-yl) -2-methyl- 3， 4- c hydro - 2H- pyrrole 1 - oxide

2- (4, 6 - Dimethyl - 2-oxo - 2え ^J-[ 1， 3, 2] dioxaphosphinan-2-yl) -2-methyl- 3, 4 - dihydro - 2H - pyrrole 1 - oxiae

2- (5， 5-Dimethyl-2-oxo-2 λ ⁵- [l, 3, 2] dioxaphosphinan - 2 - yl) - 2- methyト 3， 4 - dihydro - 2H - pyrrole 1 -oxide

5 -（5， 5 - Dimethyl - 2 -（2- oxo - 2 λ ⁵ - [1， 3， 2] dioxaphosphinan-2-yl) -2-

p,ypy ( () 5methl2OXO2 λ13hoxahoslnan2l55522 ch-——------ - y,y,-pp( ()5 55DlmethT22OXO2 λ13loxahoslnan2l 52 dh—------ -—

esoter lxldel.

ester- yy,pp, ( ()li2 λ 3loxoslnan2l5 555Dmeth2OXO22 dahh———I------ - oxlde

Pyyyyy,o3ie2caTllchls me_h45dl-drHrrobox acid et eter li>-—lll¬Ill..

py,,py,()(o;ll 32lxahoslnanl5 5522oxo2 dh25Dmeth—,--—--- -- yyyPyy,llcero3le2carbox acidoxl mtll 5dlldHrro ldel-llll—Il 2 _メチルピロリン 13 9g(167mmol)を室温で混合した。混合物が完全に固化したところで 1N塩酸（180mL) を加えて溶解し、酢酸ェチル 90mLで 2回洗浄した。水層を飽和炭酸ナトリゥム水溶液で塩基性とした後、食塩を飽和するまで加えて、酢酸ェチル 90mL で 3回抽出した。有機層を減圧濃縮し、得られた結晶をトルエンで再結晶して 15.3g (収率 44.7%)得た。 IRスぺクトル（KBr cm—¹): 3284 0， 2961 8, 1249.9， 1157.0, 1140.0， 964 5, 940.3, 880.5， 804.4

〔参考例 2〕 2— （5， 5—ジメチル一 2 _ォキソ一 2え⁵— 〔1， 3, 2〕ジォキサフォスフィナン一 2—ィル）一 2—メチル一ピロリジンの合成

5， 5—ジメチルー 2 _ォキソ一 1， 3, 2—ジォキサフォスフィナン 43.0g(0 286mol)と 2—メチルピロリン 23.8g (0.286mol)を室温にて混合し攪拌した。反応終了後、 1N 塩酸（300mL) を加えて溶解し、酢酸ェチルエステル i50mLで 2回/先净した。水層を飽和炭酸ナトリゥム水溶液で塩基性とした後、食塩を飽和するまで加えて、酢酸ェチルエステル 150mLで

6回抽出した。有機層を減圧濃縮し、得られた結晶をトルエンで再結晶して 37 lg (収率 55.7%)を得た。

IRスペクトル（KBr cm— 3296.4， 2960 7, 2868.2， 1473.6, 1458.2， 1367.5， 1253.7， 1232 5, 1190.1, 1136 1, 1062 8， 947.1, 839.0， 817.8 実施例 1

2—メチルー 2— (2—ォキソ一 2 λ⁵— [1， 3， 2] ジォキサフォスフィナン一 2—ィル）一 3， 4ージヒドロ一 2 Η—ピロール 1—ォキサィドの合成

2—メチル一 2— (2—ォキソ一 2 ぇ⁵— 〔丄， 3， 2〕ジォキサフォスフイナン一 2—ィノレ）一ピロリジン 11.9 g (58 0 mmol)のジク口ロメタン溶液（170 ml) に m—クロ口過安息香酸 28 6g (116 mmol)のジクロロメタン溶液（230 ml) を氷冷下に滴下した。滴下終了後、シリカゲル薄層クロマトグラフィー（展開溶媒，クロロホルム .エチルアルコール = 9

1) により反応の終了を確認した後に反応液中の不溶物を濾去した。有機層を飽和炭酸ナトリゥム水溶液 50 ml と飽和食塩水 50 mlで洗浄し、有機層を無水硫酸マグネシゥムで乾燥後に有機層を減圧濃縮し、残渣をシリ力ゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒，トルエンェチルアルコール = 9 1) により分離精製を行い目的物の分画を集めた後、減圧濃縮して目的物 3.08 g (mp 115-117°C、収率 24.2%) を得た。

IRスぺクトノレ（KBr cm"¹) 2983.0, 1585 6， 1459.2, 1239 3, 1062 8， 972.2, 944.2， 886.3, 810 1

^!H 删 R (CDC1₃) δ 1.77 (3ト 1， d, J = 14.8 Hz), 1.84-1.92 (1H， m), 2.20 (1H， dddd, J = 7.1, 9 5, 13 9, 20 0 Hz), 2 27-2.38 (1H, m)， 2.60-2 71 (1H， m), 2.72—2 83 (1H, m), 3 00 (1H， dddd, J = 3 8, 9.2， 13 9， 15.9 Hz), 4.37—4 53 (3H, m) , 5 05 (1H， ddt, J = 3 1, 3.8, 10 6 Hz), 6 96 (1H， q, J = 2.7 Hz)

¹³C NMR (CDCI3) δ 20.6, 25 6, 26 4， 30 8， 68 4, 69 9， 75.3， 135.0 ³¹P NMR (CDCI3) δ 15.1 実施例 2

2 - (5， 5—ジメチルー 2—ォキソ一 2 λ⁵— 〔丄， 3， 2] ジォキサフォスフィナン一 2—ィル）一 2—メチル一 3， 4—ジヒドロ一 2Η—ピロール 1ーォキサイドの合成

2— (5, 5—ジメチル一 2—ォキソ一 2え⁵— C 1 , 3， 2〕ジォキサフォスフィナン一 2 _ィル）一 2—メチル一ピロリジン 12.0 g (51.6 mmol)のジクロロメタン溶液（170 ml) に m—クロ口過安息香酸 25.5g (1 03 隱 ol)のジクロロメタン溶液（230 ml) を氷冷下に滴下した、シリカゲル薄層クロマトグラフィー（展開溶媒，クロロホルム .エチルアルコール = 9 1) により反応の終了を確認した後、反応液中の不溶物を吸引濾過により取り除いた。液を飽和炭酸ナトリゥム水溶液 80 ml と飽和食塩水 80 ml で洗浄、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後に、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒，トルエンエチルアルコール = 9 1) により分離精製を行った。目的とする分画を減圧濃縮し、目的物 6 3 _g ( mp 126°C、収率 49%) を得た。元素分析（。!^^^⁵ ol. Wt. 247.23)： Calc C 48 58， H 7.34, N 5 67, Found C 48 83， H 7.16, N 5.50

IRスぺクトル（KBr cm"¹)： 2956.9, 1573 9， 1473 6， 1465.9， 1249 9， 1060.9， 1020.3, 991.4， 831.3， 792.7

マススぺクトル FAB+, m/z (%) 248 M +l (100)， 149(33), 98 (82)

^!H 删 R (CDC1₃) 50.91 (3H, s)， 1.29 (3H, s)， 1 77 (3H, d, J = 15.0

Hz), 2.20 (1H， dddd, J = 7.0， 9 5, 13.9, 19 8 Hz), 2.60-2.70 (1H, m), 2 71-2.82 (1H, m)， 3 01 (1H, dddd, J = 4.0, 9.5， 13.9, 16 1 Hz), 3 91-4.01 (2H, m), 4 22 (1H， dd, J = 3.8, 10.3 Hz), 4.79 (1H， dd, J = 3.7， 10.4 Hz), 6 94 (1H, q, J = 2.8 Hz)

1³C NMR (CDCI3)： δ 20.4, 20 6, 22 0, 25.7, 30.9， 32.6， 75.3, 77.5,

79.3, 135 0

3¹P NMR (CDCI3)： 614 5 〔E SRスぺクトル測定実験〕

実験 1)

X—バンド電子スピン共鳴装置（J EOL J ES-FR80 ：ョ本電子製）を用い、フェントン反応により発生させたヒドロキシルラジカルと実施例 2の化合物の水溶液（ファイナル測定濃度 5mmol) から生成したスピンァダクトの E S Rシグナルを図 1に示す。個別に測定したヒドロキシルラジカルァダクトとスパーォキサイドラジカルァダクトとの信号分離の状態を比較するため図 2上に示す。スパーオキサイドラジカルは、常法によりキサンチン Zキサンチンォキシダーゼ系）を用いて発生させた。実験 2)

実施例 2の化合物及び DM PO (いずれも、ファイナル測定濃度 5 园 o 1 - リン酸緩衝液）を使用し、過酸化水素水溶液を用いての UV照射法（ UV照射装置 . ラジカルリサーチ㈱製）によりラジカルを発生させた。ラジカル発生開始 5秒後の E SRシグナルを X—バンド E SR装置（J ES -TE 300 E S R測定装置 . 日本電子㈱製）により測定した。その測定の結果得られた、実施例 2の化合物及び DMPOの各スピンァダク卜の E S Rシグナルを、それぞれ図 3及び図 4に示す。実施例 2の化合物のスピンァダクトの E SRシグナル（図 3) から、 UV照射直後に発生したラジ力ノレは、ヒドロキシノレラジカルではなく、スーパーオキサイド（superoxi de) であることが認められた。一方、 DMPOはシグナルを捕らえることができなかった（図 4)。

上記実験 1) 及び実験 2) の E SR測定実験により、本発明の化合物は、選択的、且つ、効率の良いラジカル捕捉能を有することが明らかにされた。産業上の利用可能性

以上詳細に説明したように、本発明の一般式（1 ) で表される新規な二トロン化合物は、そのラジカル捕捉能を利用して、食品安全管理領域、薬理生化学領域、医薬品のラジカル評価、医療機器のラジカル評価、ラジカル種が関わる病態の臨床検査ならびに酸化ストレスの評価などに用いる試薬として使用することができる。また薬学的に使用可能な製剤形態を用いて、経口投与、静脈內投与、皮下投与、各種粘膜投与によりラジカル種が関わる疾病の診断と治療に使用することが可能である。例えば、脳、心臓、肝臓、腎臓、胃腸管、網膜などで発生する虚血再灌流障害、心筋梗塞、脳梗塞、不整脈、血管攣縮、血管肥厚、動脈硬化、アルツハイマー病、パ一キンソン病、でんかん症、炎症、癌、 H I V，免疫不全、サイトカインによる病変、不妊症、アレルギー疾患、喘息、各種感染症および B S Eなどに有用である。さらに、水、空気、植物、住居および住居用素材などの環境領域におけるラジカル評価、金属、プラスッチック、ナノ炭素類、電子機器素材、燃料電池セルおよび宇宙航空領域などに用いる素材のラジカル評価への使用が期待される。

Claims

求の範

1. 下記一般式（1)

[式中、、 R₂は各々水素原子、炭素数丄〜 4個の低級アルキル基、カルボキシル基、アルコキシカルボニル基もしくは力ルバモイル基を表し R₃、 R₄は各々水素原子もしくは炭素数 1〜 4個の低級アルキル基を表す。 ] で示されるニトロン化合物およびその塩。

2. 一般式（1) で示される化合物が、 2— (5, 5—ジメチル— 2—ォキソ一2 λ⁵— 〔1, 3, 2] ジォキサフォスフィナン一 2—ィル）一2—メチル一3, 4—ジヒドロ一 2 Η—ピロール 1—オキサイドである請求項 1記載の二ト口ン化合物およびその塩。

3. 一般式（1) で示される二トロン化合物またはその塩を含有することを特徴とするラジカル捕捉剤。

4. 一般式（1) で示される二トロン化合物またはその塩を含有することを特徴とする診断用薬剤。