WO2007007781A1 - ブルーベリー葉の加工処理物の新規用途 - Google Patents

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WO2007007781A1
WO2007007781A1 PCT/JP2006/313830 JP2006313830W WO2007007781A1 WO 2007007781 A1 WO2007007781 A1 WO 2007007781A1 JP 2006313830 W JP2006313830 W JP 2006313830W WO 2007007781 A1 WO2007007781 A1 WO 2007007781A1
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blueberry
leaf
composition
cells
hepatitis
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PCT/JP2006/313830
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English (en)
French (fr)
Inventor
Hirohito Tsubouchi
Hirofumi Uto
Hisato Kunitake
Masao Yamasaki
Takanori Kai
Hideaki Hirabaru
Chizuko Yukizaki
Miho Sakai
Ena Akamatsu
Original Assignee
Japan Science And Technology Agency
University Of Miyazaki
Unkai Shuzo Co., Ltd.
Miyazaki Prefecture
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    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
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    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Definitions

  • the present invention relates to a novel use of a processed product of Blueberry leaf, particularly as a pharmaceutical or a functional food (health food). More specifically, the present invention relates to a novel use based on the inhibitory effect on hepatitis C virus production or the growth inhibitory action of cancer cells and cancer-onset virus-infected cells of a processed product of Blueberry single leaf.
  • HCV Hepatitis C virus
  • carriers Infected virus carriers (carriers) are said to be persistently inflamed and eventually become chronic hepatitis and cirrhosis, and to develop liver cancer approximately 30 years after onset. Interferon is effective for treatment, and the virus disappears in about 30% of people on average. In addition, when combined with the antiviral drug ribavirin, the disappearance rate is slightly better than 30%. In recent years, interferon has been used for treatments that suppress the progression of chronic hepatitis and liver cirrhosis and delay the onset of liver cancer without aiming to destroy the virus. There is also a problem with long-term continuous treatment with strong side effects such as decline, depression, platelets and leukopenia (Non-patent Document 1).
  • Kyushu (Japan) is a region with a high incidence of leukemia, including adult T-cell leukemia (ATL), and liver cancer.
  • ATL adult T-cell leukemia
  • HTLV-1 human T cell leukemia virus type 1
  • HTLV-1 carriers Many people (HTLV-1 carriers).
  • HTLV-1 is strongly related to the development of ATL, and it is known that ATL occurs only in HTLV-1-infected individuals.
  • the treatment of leukemia has progressed greatly and some leukemias are completely cured.
  • ATL is the most resistant leukemia.
  • HCV hepatitis C virus
  • Non-Patent Document 2 describes that as a result of an epidemiological study, the intake of a large amount of green-yellow vegetables and fruits reduces the risk of cancer.
  • Patent Document 1 discloses that anthocyanin glycosides derived from blueberry fruits have an anticancer effect
  • Non-Patent Document 3 describes plants belonging to the genus Vaccinium such as blueberries.
  • the extract of fruits and leaves of ethyl acetate has quinone reductase-inducing activity, which is one of the indicators of cancer promoter suppression.
  • Non-Patent Document 4 describes the callus derived from the bilberry tissue of the genus Vacdnium. It is described that a culture solution (including flavonoids and the like) has an action of suppressing the growth of breast cancer cells.
  • anthocyanin derivatives described as an active ingredient of anticancer action in Patent Document 1 are contained in a large amount in blueberry fruits, only about 2% of the fruits are contained in one blueberry leaf.
  • the anti-cancer action of the blueberry leaf extract of ethyl acetate described in Non-Patent Document 3 is to induce quinone reductase to inhibit the production of active oxygen and suppress carcinogenesis. It is not effective against cancer caused by other than oxygen. In addition, since it prevents cancer by removing the cause of cancer, it is not effective against cells that have already become cancerous. Furthermore, it is well known in the industry that drugs that are effective for cancer in general vary depending on the type of cancer.
  • Non-Patent Document 5 leukemia is a group of cancers that can be completely cured by chemotherapy (anticancer drugs), and liver cancer cannot be expected to have a therapeutic effect, and the cancer becomes smaller. Each is divided into no cancer group. Therefore, the breast cancer cell growth inhibitory component described in Non-Patent Document 4 is not always effective against other cancer cells.
  • Patent Document 2 includes Blueberry, Escherichia coli, Staph vococcus epidermidis, equine myocarditis virus (EMV), Shiyuudomonasu aeruginosa (£ seudomonas aeruginosa ;, S. ⁇ 1 / Reus d aureus), describes that there is a significant antibacterial and antiviral action against Roh Chinoresu-Safuchirisu (Bacilus su btilis) Has been.
  • Non-Patent Document 6 describes that various foods containing blueberries have antiviral activity
  • Non-Patent Document 7 describes that blueberry-containing anthocyanins have antiviral activity.
  • Non-Patent Document 6 only describes that blueberry fruits have antiviral activity against influenza A, but does not describe that blueberry leaves have an inhibitory effect on hepatitis C virus production.
  • Non-Patent Document 7 describes blueberries as foods containing anthocyanins, but there is no specific description of their antiviral effects.
  • Patent Documents 3 to 6 listed below can be cited as documents showing the anticancer effect of anthocyanins.
  • Patent Document 3 suggests that Delphi-gin, a kind of anthocyanin, has an anti-cancer activity against hepatocellular carcinoma. The blueberry leaves do not contain the Delphi-din.
  • Patent Document 4 does not describe the ability of anthocyanin to prevent or ameliorate infection by retroviruses, but that anti-HCV activity is found in Blueberry one leaf itself.
  • Patent Document 5 does not indicate that the force bush that has been shown to have a pile cancer action in the high bush brewery has a pile cancer action.
  • Patent Document 6 does not describe the ability of anthocyanin to inhibit canceration, and that Blueberry one leaf itself has a canceration-inhibiting effect. That is, none of these references disclose or suggest that Blueberry Ichiha has anti-cancer or anti-HCV activity! /.
  • Patent Document 1 Japanese Patent Laid-Open No. 2003-277271
  • Patent Document 2 Special Table 2001-56565
  • Patent Document 3 Japanese Patent Laid-Open No. 2002-332055
  • Patent Document 4 WO97Z041137 pamblet
  • Patent Document 5 US 2003/00317
  • Patent Document 6 Japanese Patent Laid-Open No. 2003-531592
  • Non-Patent Document 1 "Recent Topics on Chronic Hepatitis C Side Effects of IFN and Countermeasures" Med Dig Vol.46, No.6, 19—22 (1997.11)
  • Non-Patent Document 2 M.M.Mathews- Roth, Pure Apll.Chem., 63, 147-156 (2004)
  • Patent Document 3 J. Bomse et ai., 'In vitro anticancer activity of fruit extracts from Vac cinium species. "Planta Medica, 62, 212-216 (1996)
  • Non-Patent Literature 4 Shika Hamamatsu “Functional Study of Blueberries; Production of Useful Substances by Cultured Blueberry Cells” Food Industry 43 [2] 44 (2000)
  • Non-Patent Document 5 “Pharmacotherapy for Treatment” in the “Information on Cancer” website of the National Cancer Center http://www.ncc.go.jp/jp/ncc-cis/pub/treatment/010708. html
  • Non-Patent Document 6 Satoshi Mochida “Studies on Physiological Activity (Anticancer Activity, Antiviral Activity) of Food Ingredients from Shimane Prefecture” Bulletin of Shimane Institute for Health and Environmental Science [43] 51—76 (2002)
  • Non-Patent Document 7 Toshiro Tsushida “Research on Health Materials and Functions of Interest: Physiological Functionality of Blueberries” Food and Development 31 [3] 5-8 (1996)
  • An object of the present invention is to provide a hepatitis C virus production inhibitor that is derived from a natural plant component and can be taken for a long time with few side effects and has an excellent effect.
  • the present invention is also intended to provide a pharmaceutical composition or a food composition containing the hepatitis C virus production inhibitor as an active ingredient.
  • the present invention is a cancer cell (liver cancer cell, leukemia cell) or cancer pathogenicity that is derived from a natural plant component and can be taken for a long time with few side effects.
  • An object of the present invention is to provide a growth inhibitor of virus-infected cells (HTLV-1-infected cells).
  • an object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition or a food composition containing such a cancer cell growth inhibitor as an active ingredient.
  • an object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition or food composition for anti-liver disease or anti-leukemia.
  • blueberry leaves have a specific inhibitory effect on hepatitis C virus production, and are specific to blueberry leaves. In addition, it has the effect of inhibiting the growth of hepatoma cells and leukemia cells, and the growth of HTLV-1-infected cells that cause adult T cell leukemia (ATL) specifically in blueberry leaves.
  • the processed product of Blueberry Ichiyo is found to have an inhibitory effect, and is intended for the prevention or treatment of hepatitis C or leukemia based on the above-mentioned various effects.
  • a hepatitis C virus production inhibitor comprising a processed product of Blueberry leaf as an active ingredient.
  • (1-3) Processed product power of Blueberry single leaf Hepatitis C virus as described in (G 1) or (1-2), which is at least one selected from the group power consisting of ground product, juice, and solvent extract of Blueberry single leaf Production inhibitor.
  • composition comprising the hepatitis C virus production inhibitor described in any one of (1-1) to (1-3) as an active ingredient.
  • composition according to (1-4), which is a pharmaceutical composition is a pharmaceutical composition.
  • composition according to (1-4) which is a pharmaceutical composition for anti-hepatic diseases for the purpose of suppressing the onset of hepatitis, the progression of hepatitis, the prevention of chronic hepatitis, the onset of cirrhosis, or the onset of liver cancer.
  • composition according to (1-4), which is a food composition is a food composition.
  • composition according to (1-4) which is a food composition for anti-hepatic diseases for the purpose of suppressing the onset of hepatitis, progression of hepatitis, prevention of chronic hepatitis, suppression of the onset of cirrhosis, or the development of liver cancer.
  • (1-9) having a step of blending as an active ingredient a solvent extract of Blueberry single leaf prepared by drying Blueberry single leaf within the range of 30-50 ° C and then solvent extracting;
  • (1-1) A method for preparing a hepatitis C virus production inhibitor described in any of (1-3).
  • ( ⁇ -3) Processing power of Blueberry single leaf Cell as described in (II-1) or ( ⁇ -2) which is at least one selected from the group power consisting of crushed material, juice and solvent extract of Blueberry single leaf Growth inhibitor.
  • (IV-4) A composition comprising the cell growth inhibitor described in any one of (II-1) to (II-3) as an active ingredient.
  • composition according to ( ⁇ -5) which is a pharmaceutical composition.
  • composition according to ( ⁇ -7) The composition according to ( ⁇ -4), which is a food composition.
  • the HTLV-1-related disease is HAM (HTLV-1-related myelopathy), HAU (HTLV-1-related uveitis), or HAB (HTLV-1-related bronchial 'pulmonary disorder) ( ⁇ -8 ).
  • (III-2) The composition for anti-liver disease according to (III-1), wherein the blueberry is rabbit eye blueberry.
  • ( ⁇ -3) Processed power of Blueberry single leaf Anti-hepatic disease described in (III-1) or () -2), which is at least one selected from the group power consisting of ground product, juice and solvent extract of Blueberry single leaf Composition.
  • (III-4) The composition for anti-liver disease according to any one of (III-1) to ( ⁇ -3), which is a composition for preventing or treating hepatitis C or a liver disease caused thereby object.
  • composition for anti-liver disease according to any one of ( ⁇ -1) to ( ⁇ -5), which is a pharmaceutical product for preventing or treating liver disease.
  • composition for anti-liver disease according to any one of ( ⁇ -1) to ( ⁇ -5), which is a food for preventing liver disease.
  • (Ii-8) having a step of blending as an active ingredient a solvent extract of Blueberry single leaf prepared by drying Blueberry single leaf within the range of 30-50 ° C and then solvent extracting;
  • (III-1) A method for preparing an anti-hepatic disease composition as described in any one of (IV-7).
  • (IV-4) The anti-leukemia composition described in any of (IV-l) to (IV-3), which is a pharmaceutical agent for preventing or treating leukemia.
  • (IV-6) having a step of blending as an active ingredient a solvent extract of Blueberry single leaf prepared by drying Blueberry single leaf within the range of 30-50 ° C and then solvent extracting, (IV-1)
  • V-1 Use of a processed blueberry leaf for the preparation of a hepatitis C virus production inhibitor.
  • V-2 For the preparation of a cytostatic agent that suppresses at least one selected cell from the processed power of Blueberry one leaf, liver cancer cells, leukemia cells and HTLV-1 infecting cells use.
  • V-3 Use of a processed blueberry leaf for the preparation of an anti-liver composition.
  • V-4 Use of a processed blueberry leaf for the preparation of an anti-leukemic composition. The invention's effect
  • the hepatitis C virus production inhibitor and the composition containing the same as an active ingredient of the present invention have the following effects by using a processed product of Blueberry leaf as an active ingredient.
  • Blueberry one leaf specifically inhibits the production of hepatitis C virus compared to other parts of blueberry.
  • the cell growth inhibitor of the present invention and the composition containing the same as an active ingredient have the following effects by using a processed product of Blueberry leaf as an active ingredient.
  • Benole Berry is an American deciduous or evergreen, shrub (or semi-tree) fruit berry classified as Ericaceae Vaccinium Cyano coccus .
  • Blueberry is composed of approximately six species, but the three most important species in fruit gardening are:
  • Rabbiteye blueberry (Rabbiteye blueberry, V.ashei Reade): Woodard, Garden Buenore, Tifbunore, Home Benole, Meyer, etc.
  • Blue Berri can be used without any particular limitation on the type, origin and place of origin. Rabbit eye blueberry is preferred.
  • the power of the blueberry leaves that can be used as they are, preferably those that have been subjected to a cache treatment (processed product).
  • the processed product include a pulverized product (raw or dried product) of a blueberry leaf, a juice obtained by squeezing a blueberry leaf, or an extract obtained by extracting a blueberry leaf with an arbitrary solvent.
  • the processed product of blueberry leaves is preferably a solvent extract.
  • the dried pulverized product can be prepared, for example, by drying the blueberry leaves as they are and then crushing them, or by cutting the raw leaves into small pieces and drying them.
  • the drying method is not particularly limited as long as it is a method that does not impair the medicinal effects of the blueberry leaf intended by the present invention, such as vacuum freeze drying, hot air drying, far infrared drying, vacuum drying, microwave vacuum drying, superheated steam drying, etc. Can be widely used.
  • Preferred is vacuum freeze-drying with little change in components.
  • the vacuum freeze-drying conditions cannot be specified because they vary depending on the state of the raw material leaves. For example, when fresh leaves are dried as they are, it is desirable that the freezing temperature is 30 ° C to 20 ° C, the drying temperature is 30 ° C to 30 ° C, and the drying time is 15 hours to 24 hours.
  • the solvent extract of Blueberry leaves can be prepared, for example, by subjecting the leaves as they are or after being crushed to the extraction operation, or by drying and then pulverizing if necessary for the extraction operation.
  • the drying conditions can range from -30 to 50 ° C. Under this temperature condition, any drying treatment such as vacuum freeze-drying, hot-air drying, far-infrared drying, vacuum drying, microwave vacuum drying, and superheated steam drying can be performed.
  • the juice obtained by squeezing the leaves can also be used as an extraction material, which can be concentrated or dried as necessary to be subjected to the extraction operation.
  • the solvent used for the extraction of blueberry leaves is not particularly limited, and may be a deviation of water, a polar organic solvent or a nonpolar organic solvent! /.
  • water or a polar solvent compatible with water can be used.
  • polar solvents that are compatible with water include lower alkyl alcohols having 1 to 4 carbon atoms such as methanol, ethanol, propanol, and butanol; glycols such as ethylene glycol, butylene glycol, propylene glycol, and glycerin; ethyl ether, acetone, Acetonitrile can be mentioned.
  • a polar solvent is preferably a lower alcohol, and particularly preferably ethanol.
  • these solvents may be used alone or in combination of two or more.
  • a mixed solvent of the above polar organic solvent and water hydroous solvent
  • Preferred examples of the water-containing solvent include a mixture of lower alkyl alcohol and water (water-containing alcohol), and more preferably a mixture of ethanol and water (water-containing ethanol).
  • the concentration of the lower alkyl alcohol in the hydrous alcohol is not particularly limited, and examples thereof include 5 to 90% by volume, preferably 30 to 90% by volume, and more preferably 50 to 90% by volume.
  • any generally used method can be employed.
  • a blueberry leaf in raw solvent including crude powder and shredded products
  • those A dried product including dry pulverized products such as powder
  • a method of extracting with stirring and filtering to obtain an extract or a bar-collation method, etc. it can.
  • water-containing ethanol containing ethanol at a ratio of about 80% by volume is used as the extraction solvent
  • extraction at room temperature can be mentioned as a method for stable extraction. In this case, specifically, a method of performing extraction for 30 seconds to 1 hour while standing or stirring at room temperature can be exemplified.
  • the obtained extract solids are removed by an operation such as filtration or centrifugation, if necessary.
  • the obtained filtrate may be used as it is or depending on the next step, or may be partially concentrated or dried by distilling off the solvent. Further, after concentration or drying, it can be further purified by washing with an appropriate washing solvent such as a non-soluble solvent, or it can be further dissolved or suspended in an appropriate solvent.
  • the solvent extract obtained as described above can be used as a dry leafy leaf extract by ordinary drying means such as vacuum drying and freeze drying. .
  • the processed product of Blueberry Ichiyo mentioned above has an inhibitory effect on hepatitis C virus production.
  • the hepatitis C virus production inhibitor of the present invention contains such a processed product of Blueberry leaf as an active ingredient, and is based on the hepatitis C virus production inhibitory effect of the processed product of Blueberry leaf. Demonstrates the effect of suppressing hepatitis C virus production.
  • the amount of the processed Blueberry leaf product contained in the hepatitis C virus production inhibitor is particularly limited as long as the hepatitis C virus production inhibitor is an effective amount that exerts an inhibitory effect on hepatitis c virus production. First, it can be adjusted as appropriate according to the shape of the processed product of Blueberry leaf. Specifically, the amount of the processed blueberry leaf product contained in the hepatitis C virus production inhibitor is at least about 2 g, preferably 2 g to 1800 g, in terms of the dry weight of blueberry leaf. be able to.
  • the hepatitis C virus production inhibitor of the present invention may be 100% by weight, or may contain other components in addition to the processed blueberry single-leaf processed product.
  • the other components include pharmaceutically or food acceptable carriers or additives.
  • additives include stabilizers, antioxidants, preservatives, fragrances, coloring agents, and flavoring agents.
  • the hepatitis C virus production inhibitor of the present invention can be prepared as a pharmaceutical composition or a food composition by further blending a pharmaceutically or food acceptable carrier or additive or a food material. Therefore, as one embodiment of the present invention, there can be mentioned a pharmaceutical thread and a food thread and a composition containing the aforementioned hepatitis C virus production inhibitor as an active ingredient.
  • the pharmaceutical composition or food composition of the present invention that is profitable has a hepatitis C virus production inhibitory action (in other words, a processed product of Blueberry Ichiyoha) possessed by the hepatitis C virus production inhibitor of the present invention.
  • a hepatitis C virus production inhibitory action in other words, a processed product of Blueberry Ichiyoha
  • hepatitis C virus production suppression effect hepatitis C virus production suppression effect, hepatitis onset suppression effect, hepatitis progression suppression effect, cirrhosis onset prevention effect, or liver cancer onset prevention effect can be exhibited.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is effective as a drug for patients infected with hepatitis C virus. For example, before the onset of hepatitis, acute or chronic phase of hepatitis, or cirrhosis of the patient. And can be effectively used to suppress hepatitis C virus production, suppress hepatitis, suppress hepatitis progression, prevent chronic hepatitis, prevent cirrhosis, or prevent liver cancer.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited in form, but is preferably in a form suitable for oral administration.
  • Solid pharmaceutical preparations for oral administration are in the form of tablets, pills, capsules, fine granules, granules, etc.
  • liquid pharmaceutical preparations for oral administration are emulsions, solutions, suspensions, syrups.
  • the form of an agent etc. can be mentioned.
  • excipients, binders, disintegrants, lubricants, colorants, flavoring agents, pH adjusters, etc. may be appropriately blended. it can.
  • the dosage of the pharmaceutical composition of the present invention varies depending on the desired therapeutic effect, administration method, treatment period, sex, route of administration, and other conditions such as the patient's medical condition, so it is not easy to specify the dosage. Yes.
  • a single dose for a human with a body weight of 60 kg can be an amount that is about 100 to: LOOOmg (dry weight of blueberry leaf) when converted to the dry weight of blueberry leaf.
  • the amount (% by weight) of the active ingredient contained in the pharmaceutical composition (100% by weight) of the present invention is calculated when the amount of the active ingredient contained per administration is converted to the dry weight of Blueberry leaf. As long as the amount falls within the above range, it can be set appropriately according to the formulation form.
  • the food composition of the present invention is useful as a food or drink (for example, a dietary supplement, a functional food, a food for specified health use, etc.) for a patient infected with hepatitis C virus.
  • a food or drink for example, a dietary supplement, a functional food, a food for specified health use, etc.
  • Ingestion of the patient prior to the onset of hepatitis, the acute or chronic phase of hepatitis, or the time of cirrhosis suppresses hepatitis C virus production, suppresses hepatitis, suppresses hepatitis progression, prevents chronic hepatitis, develops cirrhosis It can be effectively used for prevention or prevention of liver cancer.
  • the food and drink of the present invention has a hepatitis C virus production-inhibiting action on its packaging or container to suppress the onset or progression of hepatitis C, or cirrhosis or liver Indication of being used to suppress progression to cancer, specifically, hepatitis C virus production inhibitory effect, hepatitis onset inhibitory effect, hepatitis progression inhibitory effect, chronic hepatitis preventive effect, cirrhosis onset preventive effect, or It is displayed that it has the effect of preventing liver cancer development!
  • the form of the food composition of the present invention is not particularly limited.
  • the above-described C-type hepatitis virus production inhibitor may be added to a carrier or an additive that can be blended on food as necessary.
  • the dosage form include tablets, pills, capsules, granules, powders, powders, troches, solutions (drinks), etc. (for example, supplements).
  • the food composition of the present invention may be a functional food or drink containing the hepatitis C virus production inhibitor of the present invention together with other food ingredients.
  • Examples of application of functional foods and drinks include the following.
  • Pudding such as custard pudding, milk pudding, souffle pudding, pudding with fruit juice, desserts such as jelly, bavaroa, yogurt,
  • coated chocolates such as Marb Nore chocolate, strawberry chocolate, bunore chocolate and chicory chocolate such as chocolate with melon chocolate added flavor
  • Hard candy including bonbon, butterball, marble, etc.
  • soft candy including caramel, nougat, gummy candy, marshmallow, etc.
  • caramels such as drop, toffee
  • Consomme soup soups such as potage soup
  • the amount of the hepatitis C virus production inhibitor of the present invention contained in the food composition and the intake of the food composition are not particularly limited as long as they are effective in suppressing hepatitis C virus production. It can be suitably selected according to the type of product composition and other various conditions. Although not particularly limited, for example, a range of about 100 to LOOOmg (dry weight of blueberry leaf) when converted to the dry weight of blueberry leaf as a single intake for a human weighing 60 kg is suitable.
  • the intake time is not limited, it is preferably the time before the onset of hepatitis, the acute phase of chronic hepatitis, the time of cirrhosis.
  • the processed product of Blueberry Ichiyoha has an action of suppressing the growth of various cancer cells, particularly liver cancer cells and leukemia cells.
  • leukemia cells are all human leukemia cells, and include acute promyelocytic leukemia cells, acute lymphocytic (T cell) leukemia cells, and adult T cell leukemia cells.
  • processed products of Blueberry one leaf are human retrovirus HTLV-1-infected cells (HTLV-1-infected cells) that are virus-infected cells that develop adult T-cell leukemia. Cell) has an action of inhibiting the growth of cells.
  • the cancer or cancer-onset virus-infected cell growth inhibitor of the present invention contains a processed product of Blueberry leaf as an active ingredient.
  • the processed product of the Blueberry leaf has the effect of inhibiting the growth of cancer or cancer-causing virus-infected cells (hereinafter simply referred to as “cancer cell growth inhibition”). Based on this, the cancer cell proliferation inhibitory effect is exhibited.
  • the cell growth inhibitory effect is that if the effect of reducing the total number of target cells (total number of cells) is observed, it is sufficient to prevent cell growth or growth and kill the cells. Regardless of the mechanism of action such as action.
  • the amount of processed blueberry leaves contained in the cancer cell growth inhibitor is the same as the growth rate of cancer cells such as liver cancer and leukemia cells or HTLV-1-infected cells. It is not particularly limited as long as it is an effective amount that exerts an effect of suppressing water, and can be appropriately adjusted according to the form of the processed product of Blueberry one leaf. Specifically, the amount of processed blueberry leaves contained in the cancer cell growth inhibitor is specifically the dry weight of blueberry leaves. A range of at least about 15 g, preferably 15 to 30 g can be exemplified.
  • the cancer cell growth inhibitor of the present invention may contain 100% by weight of a processed processed blueberry single leaf or contain other components in addition to the processed blueberry single leaf product. It may be a thing.
  • the other components include pharmaceutically or food acceptable carriers or additives.
  • additives include stabilizers, antioxidants, preservatives, fragrances, coloring agents, and flavoring agents.
  • ( ⁇ -2) A pharmaceutical or food composition comprising a cancer cell growth inhibitor as an active ingredient
  • the cancer cell growth inhibitor of the present invention can be prepared as a pharmaceutical composition or a food composition by further blending a pharmaceutically or food-acceptable carrier, an additive, or a food material. Therefore, one embodiment of the present invention includes a pharmaceutical composition or a food composition containing the above-described cancer cell proliferation inhibitor as an active ingredient.
  • the powerful pharmaceutical composition or food composition of the present invention is a hepatoma cell or leukemia cell (for example, acute promyelocytic leukemia cell, T cell lineage) possessed by the cancer cell proliferation inhibitor of the present invention.
  • leukemia cell for example, acute promyelocytic leukemia cell, T cell lineage
  • cancer cell proliferation inhibitor of the present invention Based on the growth inhibitory action on cancer cells such as leukemia cells and adult ⁇ -cell leukemia cells (in other words, the above-mentioned cancer cell growth inhibitory action of processed products of Blueberry leaf) it can.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is a pile cancer intended for patients suffering from liver cancer or leukemia (for example, acute promyelocytic leukemia, T cell leukemia, adult T cell leukemia). It is effective as an agent.
  • the food composition of the present invention is a food or drink (for example, a dietary supplement, a dietary supplement for patients suffering from liver cancer or leukemia (eg, acute promyelocytic leukemia, T cell leukemia, adult T cell leukemia)). It is useful as a functional food, food for specified health use, etc.
  • the food composition of the present invention has a preventive or ameliorating effect on liver cancer in its packaging or container based on the preventive or ameliorating effect on liver cancer due to the liver cancer cell growth inhibitory effect, or An indication that it is used for preventing or improving liver cancer may be provided.
  • the food composition of the present invention is used for the prevention or improvement of leukemia or the prevention or improvement of leukemia in its packaging or container based on the prevention or improvement of leukemia caused by the leukemia cell proliferation inhibitory action. A message stating that you will be able to do it!
  • the pharmaceutical composition or food composition of the present invention comprises a growth inhibitory action against retorvirus HTLV-1-infected cells (in other words, a processed product of Blueberry one leaf, which the cancer cell growth inhibitor of the present invention has). Based on the above-mentioned HTLV-1-infected cell growth inhibitory action), it prevents and prevents the onset of adult T-cell leukemia (anti-leukemia action), and prevents and prevents the development of diseases involving HTLV-1 infected cells The effect can be exerted.
  • a growth inhibitory action against retorvirus HTLV-1-infected cells in other words, a processed product of Blueberry one leaf, which the cancer cell growth inhibitor of the present invention has. Based on the above-mentioned HTLV-1-infected cell growth inhibitory action), it prevents and prevents the onset of adult T-cell leukemia (anti-leukemia action), and prevents and prevents the development of diseases involving HTLV-1 infected cells The effect
  • HTLV_1-related diseases Diseases involving HTLV-1-infected cells
  • HAM HTLV-1-related myelopathy
  • HAU HAU HTLV-1-related uveitis
  • HAB HAB
  • Tubular lung disorder
  • the pharmaceutical composition of the present invention is effective as a drug for patients infected with HTLV-1, for example, before the onset of adult T-cell leukemia in the patient or HTLV-1-related diseases.
  • HTLV-1-related myelopathy, HTLV-1-related uveitis, HTLV-1-related bronchi, lung disorder, etc. is administered before the onset of the disease and is effective in preventing the leukemia or HTLV-1-related diseases Can be used.
  • the food composition of the present invention is useful as a food or drink (for example, a dietary supplement, a functional food, a food for specified health use, etc.) for a patient infected with HTLV-1, for example, the patient Can be used effectively for the prevention of leukemia or HTLV-1-related diseases by ingesting before the onset of adult T-cell leukemia or before the onset of HTLV-1-related diseases.
  • the food composition of the present invention has a preventive effect against leukemia in its packaging or container based on the inhibitory action against the onset of adult T-cell leukemia and the onset action against HTLV-1-related diseases by inhibiting the growth of HTLV-1-infected cells. Or the indication that it is used for the prevention of HTLV-1 related diseases and the indication that it is used for the prevention of HTLV-1 related diseases! /.
  • the pharmaceutical composition containing the cancer cell proliferation inhibitor targeted by the present invention as an active ingredient is not particularly limited in form, as is the case with the pharmaceutical composition described in (viii) above. It is preferable to be in a form suitable for oral use.
  • the forms of solid pharmaceutical preparations for oral administration and liquid pharmaceutical preparations for oral administration, and carriers and additives used for the preparation thereof can be the same as those described above.
  • the dosage of the pharmaceutical composition of the present invention can be easily specified in the same manner as the pharmaceutical composition of ( ⁇ -2). is not.
  • an amount that can be about 600 to 6000 mg (dry weight of blueberry leaf) when converted to the dry weight of blueberry leaf is exemplified.
  • the amount of the active ingredient contained in the pharmaceutical composition (100% by weight) can be appropriately set.
  • the food composition containing the cancer cell growth inhibitor targeted by the present invention as an active ingredient is also not particularly limited in form as in the food composition described in (v-2) above.
  • various preparations that contain cancer cell growth inhibitors together with other food ingredients such as tablets (for example, supplements) that contain a carrier or additive that is allowed to be formulated in foods. It may be a functional food or drink.
  • the amount of the cancer cell proliferation inhibitor of the present invention contained in the food composition and the intake amount of the food composition are not particularly limited as long as they are effective in suppressing cancer cell proliferation. It can be appropriately selected according to the type of object and other various conditions. Although not limited, for example, as a single intake for a person weighing 60 kg, increase the amount to about 600 to 6000 mg (dry weight of Blueberry leaf) when converted to the dry weight of Blueberry leaf. Can be.
  • the processed product of Blueberry one leaf has an effect of suppressing hepatitis C virus production and an effect of suppressing hepatoma cell growth. Therefore, the processed product of Blueberry Ichiyo is based on its action to suppress hepatitis C virus production, hepatitis onset suppression effect, hepatitis progression suppression effect, chronic hepatitis prevention effect, cirrhosis onset prevention effect, or liver cancer onset It can exert a preventive effect.
  • the processed product of Bull One leaf can exert an effect of suppressing or improving the progression of liver cancer (anti-hepatoma effect) based on its liver cancer cell growth inhibitory action. .
  • the processed product of Blueberry Ichiyo can be effectively used as an active ingredient of a composition for anti-liver diseases having a preventive or therapeutic effect on these liver diseases.
  • one embodiment of the present invention includes an anti-liver disease composition comprising a processed product of Blueberry leaf as an active ingredient.
  • the composition for anti-liver diseases includes a pharmaceutical composition and a food composition.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is effective as an anti-hepatic drug for patients suffering from hepatitis C virus or liver cancer.
  • the pharmaceutical composition for anti-hepatic diseases targeted by the present invention is not particularly limited in form as in the case of the pharmaceutical composition described in (IV-2) above, but is suitable for oral use. It is preferred that Examples of solid pharmaceutical preparations for oral administration and liquid pharmaceutical preparations for oral administration, and carriers and additives used for the preparation thereof can be the same as those described above.
  • the dosage of the pharmaceutical composition of the present invention varies depending on the type of liver disease and intended use (use).
  • the amount of the pharmaceutical composition administered once to a human body weight of 60 kg is about 600 when converted to the dry weight of a blueberry leaf.
  • the amount can be ⁇ 6000 mg (dry weight of Blueberry leaf).
  • the pharmaceutical composition of the present invention is used as an anti-hepatitis C agent, the amount of the pharmaceutical composition to be administered once to a human with a body weight of 6 Okg is as follows when converted to the dry weight of Blueberry leaf: About 100-: LOOOmg (dry weight of Blueberry leaf) can be mentioned. Within these ranges, the amount of the active ingredient (blueberry leaf processed product) contained in the pharmaceutical composition (100% by weight) can be appropriately set.
  • the food composition of the present invention is a food or drink for anti-liver diseases intended for patients suffering from hepatitis C virus or liver cancer (for example, dietary supplements, functional foods, foods for specified health use, etc.) ) Is useful.
  • the food composition of the present invention is based on its inhibitory action on hepatitis C virus production, and suppresses the onset or progression of hepatitis C in its packaging or container, or progresses to cirrhosis or liver cancer. Indication that it is used for suppression, hepatitis C virus production suppression effect, hepatitis onset suppression effect, hepatitis progression suppression effect
  • the food composition of the present invention has a preventive or ameliorating effect on liver cancer or a preventive or ameliorating effect on liver cancer, or on preventing or improving liver cancer based on the effect of preventing or improving liver cancer by inhibiting the growth of liver cancer cells. An indication that it will be used for improvement is displayed!
  • the food composition for anti-hepatic diseases targeted by the present invention is not particularly limited in form as in the food composition described in (ii-2) above, Food distribution It may be a preparation (supplement) that is contained together with carriers and additives that are allowed to be combined, or various functional foods and drinks that are contained together with other food materials.
  • the amount of processed blueberry leaves and the intake amount of the food composition contained in the food composition are not particularly limited as long as they are effective in preventing or ameliorating liver disease. It can select suitably according to a kind and other various conditions.
  • the amount of food composition taken once by a human weighing 60 kg is approximately 600 when converted to the dry weight of Blueberry leaf.
  • An amount of ⁇ 6000 mg (dry weight of Blueberry leaf) can be mentioned.
  • anti-hepatitis C the amount of a food composition taken once by a human weighing 60 kg is about 100 to 1000 mg (blueberry when converted to the dry weight of blueberry leaf).
  • the dry weight of a leaf can be mentioned.
  • the processed product of Blueberry one leaf has the effect of suppressing the growth of leukemia cells and leukemia-onset HTLV-1 virus-infected cells. ing. For this reason, the processed product of Blueberry Ichiyo can be effectively used as an active ingredient of an anti-leukemia composition having a preventive or therapeutic effect against leukemia.
  • an anti-leukemic composition comprising a processed product of Blueberry single leaf as an active ingredient can be mentioned.
  • the anti-leukemia composition includes a pharmaceutical composition and a food composition.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is a leukemia disease intended for patients suffering from leukemia (eg, acute promyelocytic leukemia, T cell leukemia, adult T cell leukemia) or patients infected with HTLV-1. It is effective as a drug for prevention or treatment of (anti-leukemia).
  • leukemia eg, acute promyelocytic leukemia, T cell leukemia, adult T cell leukemia
  • HTLV-1 transforming growth factor-1
  • the pharmaceutical composition targeted by the present invention is not particularly limited in form as in the case of the pharmaceutical composition described in (ii-2) above, but is preferably in a form suitable for oral administration.
  • Examples of solid pharmaceutical preparations for oral administration and liquid pharmaceutical preparations for oral administration, and carriers and additives used for the preparation thereof can be the same as those described above.
  • the dosage of the pharmaceutical composition of the present invention can be easily specified in the same manner as the pharmaceutical composition of ( ⁇ -2). is not.
  • the amount of the medicinal thread composition that is administered once to a human with a body weight of 60 kg can be an amount that is about 600 to 6000 mg when converted to the dry weight of Blueberry leaf. .
  • the amount of the active ingredient contained in the pharmaceutical composition (100% by weight) can be appropriately set.
  • the food composition of the present invention is a food or drink for leukemia prevention or treatment (for anti-leukemia) intended for patients suffering from leukemia or patients infected with HTLV-1. Food, functional food, food for specified health use, etc.).
  • the food composition of the present invention has a preventive or ameliorating effect on leukemia, or a leukemia cell or HTLV-1-infected cell based on the prophylactic or ameliorating effect on leukemia due to the growth inhibitory effect on leukemia cells or HTLV-1 infected cells It is displayed that it is used for the prevention or improvement of leukemia! / ⁇ !
  • the food composition targeted by the present invention is not particularly limited in form as in the food composition described in (ii-2) above. It may be a preparation such as a tablet (supplement etc.) contained together with an acceptable carrier or additive, or various functional foods and drinks contained together with other food materials.
  • the amount of the processed blueberry leaf contained in the food composition and the intake of the food composition are not particularly limited as long as they are effective for the prevention or treatment of leukemia. It can be suitably selected according to various other conditions. Although not limited, for example, the amount of food thread and adult that a human with a body weight of 60 kg ingests is about 600 to 6000 mg (dry weight of one blueberry leaf) when converted to the dry weight of blueberry leaves. Can be mentioned.
  • Preparation Example 5 Preparation of ethyl acetate extract of blueberry leaf The extraction solvent was changed to 80% by volume ethanol aqueous solution ethyl acetate, and a dry extract of the ethyl acetate extract was obtained from the leaves of a rabbit bell of a kind of rabbit eye blueberry in the same manner as in Preparation Example 2.
  • the extraction solvent was changed to 80% by volume ethanol aqueous solution acetone, except that the leaf force of a kind of rabbit eye blueberry was obtained in the same manner as in Preparation Example 2 to obtain a dry extract of acetone extract.
  • HCV genomic RNA is broadly divided into the core that constitutes the viral particle, the structural protein translation region of the envelope, and the nonstructural protein translation region that functions for viral genome replication.
  • a subgenome replicon RNA in which this structural protein translation region is replaced with a luciferase translation region 'EMCV IRES (Brain Myocardial Virus Internal Ribosome Binding Sequence)' neomycin resistance gene was prepared, and the resulting RNA was transformed into human hepatoma cell Huh-7. Introduce into the cytoplasm.
  • Huh-7 into which the subgenomic replicon RNA has been introduced, has neomycin resistance at the same time, so that selection with neomycin becomes possible.
  • the cells thus obtained are used for evaluation of the amount of HCV replicon RNA produced.
  • the amount of HCV replicon RNA produced is measured by the luciferase assay method described below.
  • DMEM10 GIBCO GlutaMAX Media Dulbecco's Modified Eagle Medium (D-MEM) (l X), liquid (High glucose, contains sodium pyruvate)] in FBS (Hyclone) 10%
  • D-MEM Dulbecco's Modified Eagle Medium
  • FBS Hexe
  • assembly medium use DMEM10 supplemented with 5% FBS and 1% phenicillin-streptomycin (however, geneticin is not added).
  • Luciferase catalyzes the reaction of luciferin and ATP to produce oxidized luciferin and AMP in the presence of magnesium.
  • the Luciferase Atssey method emits the light generated at this time. This is a method for evaluating luciferase activity based on the amount of light obtained by detection with a photodetector. In the present invention, for the sake of convenience, this light amount is defined as the amount of HCV replicon RNA.
  • MTT [3- (4,5-dimethy ⁇ 2-thiazolyl) -2,5-diphenyl-2H-tetr azolium bromide] used in the MTT attachi method is a yellow compound and serves as a substrate for dehydrogenase. This is reduced to a blue pigment (formazan) by mitochondrial dehydrogenase in living cells. Since the amount of formazan produced is proportional to the number of living cells, in the present invention, the number of living cells is evaluated from the absorbance of formazan, and the cytotoxic effect of the test sample is determined.
  • Test Example 1 A dry extract (about 500 mg) of a water-containing ethanol extract of the leaves of a rabbit eye blueberry (14) prepared by the method described in Preparation Example 2 in DMSO (dimethylsulfoxide) at 200 mg / ml The following test sample 1 was used after adjusting the concentration.
  • test cells replicon cells
  • a suspension of test cells (replicon cells) (2.5 x 10 4 cells / ml) to a transparent 96-well plate at a rate of 90 / zl at 37 ° C in the presence of 5% CO and a relative humidity of 100% for 24 hours.
  • test sample 1 Adjusts the test sample 1 to the final concentration of 0.01, 0.03, 0.12, 0.49, 1.95, 7.81, 31.25, 125.00 / zg / m 1 using Atsy's medium and add 10 ⁇ 1 / well to the 96-well plate. I was accompanied. Thereafter, the cells were further cultured for 72 hours. Next, MTT reagent (Donjin Institute of Science Co., Ltd., trade name: ⁇ 1 1 6 (1)) was cultured for 10 1 ⁇ 11 and further cultured for 4 hours. (0.04M The dye was dissolved by pipetting well (dissolved culture medium).
  • the absorbance (570 nm) of the lysis culture solution at each concentration of the test sample 1 was measured with an absorption microplate reader (trade name: EMax TM, manufactured by Nihon Molecular Device Co., Ltd.) using 650 ° as a control wavelength.
  • an absorption microplate reader (trade name: EMax TM, manufactured by Nihon Molecular Device Co., Ltd.) using 650 ° as a control wavelength.
  • the absorbance of the lysed culture prepared using the solvent DMSO used for the preparation of the test sample instead of the above test sample 1 was measured.
  • test cells replicon cells
  • a suspension of test cells (replicon cells) (2.5 X 10 4 cells / ml) to a white 96-well plate in 90 / zl increments at 37 ° C in the presence of 5% CO and a relative humidity of 100% for 24 hours. Cultured.
  • test sample 1 Adjusts the test sample 1 to the final concentration of 0.01, 0.03, 0.12, 0.49, 1.95, 7.81, 31.25, 125.00 g / ml with Atsy's medium, and add to the 96-well plate at a rate of 10 / zl / well. did. Thereafter, the cells were further cultured for 72 hours. The plate was taken out of the incubator and allowed to stand at room temperature for 30 minutes or more. Then, Luciferase Atssey reagent (Promega, trade name: Steady-Glo TM Luciferase Assay System) was added to 100 ⁇ l / well and well pipetted.
  • Luciferase Atssey reagent Promega, trade name: Steady-Glo TM Luciferase Assay System
  • the percentage with respect to the control was obtained, and the relative luciferase activity (%) of the test cell at each concentration of the test sample 1 was calculated.
  • the relative luciferase activity (%) reflects the amount of HCV replicon RNA.
  • a value relative luciferase activity is 5 0% L (50% luciferase activity concentration: ⁇ g / ml) was.
  • the final concentration of Comparative Sample 1 is 0.5, 5.0, 5
  • the HCV replicon cytotoxicity test and the HCV replicon RNA production inhibition test were conducted after adjusting with 0.09 medium to 0.0 and 500.0 g / ml.
  • a luminescence detector (Centro LB960) manufactured by Berthold was used for luminescence measurement of luciferase (the same applies to (3) to (5) below). The result is shown in figure 2.
  • a quinic acid solution was prepared by dissolving quinic acid in a phosphate buffer solution (PBS (-)) to a concentration of 24 mg / ml.
  • PBS (-) phosphate buffer solution
  • the final concentration of quinic acid is 0.1, 0.4, 1.5, 6.0, 24. ⁇ / zg / ml (this is 7.81, 31.25 when converted to the amount of the dried Blueberry leaf extract) , 125, 500, 2000 / zg / ml) and adjust to HCV replicon cytotoxicity test and HCV replicon RNA production according to the method described in (1-1) and (1-2) A suppression test was conducted. For control, PBS (-) was used instead of the quinic acid solution. The results are shown in Figure 3.
  • a chlorogenic acid solution was prepared by dissolving chlorogenic acid in a phosphate buffer (PBS (-)) at a concentration of 40 mg / ml.
  • PBS (-) phosphate buffer
  • Interferon was used as comparative sample 4.
  • Final concentrations of interferon (IFN) (Funakoshi Co., Ltd., trade name: IFN-a 2 (Q; 2b), Human, Recombinant) are 0.08, 0.40, 2.
  • the HCV replicon cytotoxicity test and the HCV replicon RNA production inhibition test were performed according to the method described in (1_1) and (1_2) after adjusting with Atsy's medium to 00, 10.00, 50.00 U / ml. The results are shown in FIG.
  • the water-containing ethanol extract sample (Test sample 1) from Blueberry leaves is strong.
  • HCV replicon RNA production inhibitory effect As shown in Fig. 1, C is 29.
  • the L of luciferase activity was 0.85 ⁇ g / ml and the SI was 34 ⁇ g / ml.
  • Test sample 1 The L of luciferase activity was 0.85 ⁇ g / ml and the SI was 34 ⁇ g / ml.
  • the relative viable cell count was suppressed to 55.49% of the control, but the relative luciferase activity was suppressed to 0.39%. This effect is comparable to that of IFN.
  • the aqueous ethanol extract of Blueberry leaves had a concentration of 10 / zg / ml and an inhibitory effect on HVC replicon RNA production (antiviral suppression) similar to the interferon (IFN) shown in Fig. 5. Effect).
  • test sample 1 (Blueberry leaf) was 0.85 ⁇ g / ml, a 71-fold difference. From this, it can be seen that Blueberry Ichiyo has a higher inhibitory effect on HCV rebricon RNA production than blueberry fruits.
  • a dry extract of the water-containing ethanol extract of a kind of rabbit eye blueberry (14) leaf prepared according to the method described in Preparation Example 2 with DMSO (dimethylsulfoxide).
  • test sample 2 (Example 2) of the blueberry one leaf.
  • a dry extract of a leaf extract of a rabbit eye blueberry home bell (14) prepared according to the method described in Preparation Examples 3 to 4 and a dry extract of a hot water extract were mixed with a phosphate buffer ( PBS (-)) to a concentration of 200 mg / ml, and water extraction sample of blueberry leaves (test sample 3) (Example 3) and hot water extraction sample (test sample 4) (Example 4) and did.
  • PBS (-) phosphate buffer
  • test sample 2 to 4 was adjusted with Atsy's medium so that the final concentrations were 0.8, 4.0, 20.0, 100.0, and 500.0 ⁇ g / ml, respectively, and (1-1) and (1- According to the method described in 2), an HC V replicon cytotoxicity test and an HCV replicon RNA production inhibition test were performed.
  • PBS (-) was used as a control instead of the test sample.
  • a luminescence detector (Centro LB960) from Berthold was used for luminescence measurement of luciferase (the same applies to Comparative Example 4 below). The results for test samples 2, 3 and 4 are shown in Figures 6, 7 and 8, respectively.
  • luciferase activity L was 1.46 ⁇ g / ml
  • SI was 62. Also shown in Figure 7.
  • the viable cell count C of the blueberry leaf extract was 225.68 ⁇ g / ml, HCV replicon.
  • RNA production IC was 1.46 ⁇ g / ml, and the SI was 155.
  • Figure 8 The RNA production IC was 1.46 ⁇ g / ml, and the SI was 155.
  • the viable cell count C of a single leaf hot water extract sample is 130.51 g / ml, and the luciferase activity L is 1.75.
  • HCV revlikon RNA production-suppressing component HCV revlikon RNA production-suppressing component
  • the green tea leaf freeze-dried powder lg was subjected to water extraction to obtain about 224 mg of a dry extract of the green tea leaf water extract. This was adjusted to a concentration of 200 mg / ml with a phosphate buffer (PBS (-)) to obtain a green tea water extraction sample (Comparative Sample 5).
  • PBS (-) phosphate buffer
  • the green tea leaf freeze-dried powder lg was subjected to hot water extraction to obtain about 385 mg of a dry extract of the green tea leaf hot water extract. This was adjusted to a concentration of 200 mg / ml with a phosphate buffer (PB S ( ⁇ )) to obtain a green tea hot water extraction sample (Comparative Sample 6).
  • PB S ( ⁇ ) phosphate buffer
  • luciferase activity LC is 299.26 ⁇ g / ml.
  • Sample (comparative sample 6) has a live cell count C of 118.65 g / ml, luciferase activity L «359.91 ⁇ g
  • Rabbit eye blueberry a kind of home bell prepared according to the methods described in Preparation Examples 2, 5 and 6.
  • (14) Dry extract of water-containing ethanol extract of leaves, dry extract of ethyl acetate extract, and dry extract of acetone extract Each sample was adjusted to a concentration of 200 mg / ml with DMSO (dimethylsulfoxide), and a water-containing ethanol extract sample (Test sample 5) (Example 5), an ethyl acetate extract sample (Test sample 6) (Example 6), and acetone extracted Sample (test sample 7) (Example 7) was used.
  • DMSO dimethylsulfoxide
  • Extraction sample of water-containing ethanol from Blueberry single leaf (test sample 5) to final concentrations of 0.8, 4.0, 20.0, 100.0, 500.0 g / ml, and extract sample of blueberry single leaf from ethyl acetate (test sample 6) And acetone-extracted sample (test sample 7) were adjusted with Atsy's medium to final concentrations of 0.5, 5.0, 50.0, and 500.0 g / ml, respectively.
  • the HCV replicon cytotoxicity test and the HCV replicon RNA production suppression test were performed according to the methods described in 1. For control, DMSO was used in place of each test sample.
  • a luminescence detector (ARVO Light) manufactured by Perkin Elmer was used for luminescence measurement. The results of test samples 5, 6, and 7 are shown in FIGS. 11, 12, and 13, respectively.
  • the luciferase activity L of the blueberry leaf extract (test sample 6) is 61.49 ⁇ g / ml, and the acetone extract sample (test sample 7) is luciferase.
  • the Lase activity L was 56.76 ⁇ / 1 ⁇ 21, and the SI value was 2, which was very low. On the contrary,
  • the water-containing ethanol extract sample of Blueberry leaf has a low cytotoxic effect (live cell count C is 80.80 ⁇ g / ml), while suppressing HCV replicon RNA production.
  • the inhibitory effect was high (luciferase activity L was 3.13 ⁇ g / ml) and SI was 26.
  • test sample was adjusted with Atsy's medium to a final concentration of 5, 50, 500 ⁇ g / ml, and according to the method described in Test Example (1-1) and (1-2), HCV replicon cytotoxicity test and HCV replicon RNA production suppression test were performed. Instead of each test sample, DMSO was used as a control. A luminescence detector (AR VO Light) manufactured by Perkin Elmer was used for luminescence measurement. The results are shown in FIG.
  • Rabbit eye Blueberry a kind of home bell leaf, was used as a test leaf. (1) After freezing at -30 ° C and then drying at 30 ° C for 24 hours (freeze drying), (2) Drying at 45 ° C for 19 hours, (3) At 65 ° C A method of drying for 5 hours and (4) a method of drying at 85 ° C for 3.5 hours were adopted. Each test leaf was pulverized after the above-mentioned various drying treatments.
  • the SI of the water-extracted blueberry single leaf ethanol extract samples (1) freeze-dried and (2) dried at 45 ° C was 245 and 298, respectively.
  • the SI values of the blueberry single leaf water-containing ethanol-extracted samples dried at (3) 65 ° C and (4) 85 ° C tended to decrease to 71 and 63, respectively. From this, it seems that it is desirable that the dry treatment of blueberry leaves be freeze-dried or performed at a drying temperature of 50 ° C or lower, that is, -30 to 50 ° C, preferably 45 ° C or lower.
  • WST-8 Atsey is a method for measuring the number of living cells. That is, WST-8 [2- (2-Methoxy-4-nitrophenyl) -3- (4-mtrophenyl) -5- (2,4-disulfophenyl) -2H-tetrazolium, monosodium salt] used in WST-8 assembly is In the presence of cells, it is reduced by intracellular dehydrogenase to produce water-soluble formazan S, and the amount of formazan produced is proportional to the number of living cells. This is a method to measure the number of viable cells by directly measuring the control wavelength (650 nm).
  • the cells were cultured at 100% relative humidity for 48 hours. Subsequently, 101 WST-8 mixed reagents (trade name: Tetra Color ONE, manufactured by SEIKAGAKU CORPORATION) were added and cultured for further 4 hours, and then the absorbance at 450 nm was measured using 650 ⁇ m as a control wavelength. In place of the test sample, extraction Using only a phosphate buffer solution to which no product (dry extract) was added, the number of viable HL 60 cells was measured as absorbance (wavelength 450 nm) in the same manner as described above. Using this as a control, the survival rate of the HL60 cells treated with the extract was determined as a percentage of the control. The results are shown in Table 1 and Fig. 16.
  • each well has a final concentration of 62.5 Adjust the concentration with phosphate buffer (PBS (-)) to 125 / zg / ml, g / ml and 500 / zg / ml, and add 1 ⁇ l of the extract ( Test sample), cultured at 37 ° C in the presence of 5% CO at a relative humidity of 100% for 72 hours.
  • PBS (-) phosphate buffer
  • WST-8 mixed reagent trade name: T
  • etra Color ONE manufactured by SEIKAGAKU CORPORATION
  • SEIKAGAKU CORPORATION was further cultured for 4 hours, and the absorbance at 450 nm was measured using 650 nm as a control wavelength.
  • the number of viable cells was measured as absorbance (wavelength: 450) in the same manner as described above using only a phosphate buffer without adding an extract instead of the test sample. In this case, using this as a control (100%), the survival rate of various hepatoma cells (HuH-7, HLE, HLF) treated with the water-containing ethanol extract of Blueberry leaf was determined as a percentage. The results are shown in Table 2 and Fig. 17.
  • ATL cells adult T cell leukemia cells (ED, Su9T01, SIT)
  • HTLV-1 Human T cell leukemia virus type 1
  • ATL adult T cell leukemia
  • MTT [3- (4,5-Dimethyl-2-thiazolyl) -2,5-diphenyl-2H tetr azolium bromide] used in MTT assembly is a yellow compound that acts on the mitochondrial respiratory chain of living cells.
  • the tetrazolium ring is cleaved by the existing enzyme to produce blue formazan. Since the amount of formazan produced is proportional to the number of living cells, the number of living cells can be measured by directly measuring the absorbance of formazan.
  • MTT reagent (trade name: MTT lyophilized, manufactured by Dojindo Laboratories) After culturing for 4 hours, 100 ⁇ l of the lysis solution (0.04M / HC1 / isopropyl alcohol) was pipetted thoroughly to dissolve the dye. Thereafter, the absorbance at 570 ° was measured using 650 ° as a control wavelength.
  • the number of viable cells was measured as absorbance (wavelength 570) in the same manner as described above using only the phosphate buffer without adding the extract instead of the test sample. Using this as a control (100%), the survival rate of various cancer cells treated with the extract was calculated as a percentage.
  • the water-containing ethanol extract of Blueberry leaf was used for human T-cell leukemia cells (Jurkat, M0LT4), HTLV-1-infected cells (HUT102, MT2) and adult T-cell leukemia cells (ED , Su9T01, SIT) was found to have a strong effect of inhibiting proliferation.
  • Test Example 7 Cancer cell growth inhibition test of blueberry leaves or fruits
  • a water-containing ethanol extract (dried extract) of Blueberry single leaf (Rabbit Eye Blueberry species: Homebell (14)) prepared according to the method described in Preparation Example 2 and described in Comparative Example 1 (2-1)
  • the cell growth inhibitory effect on human acute promyelocytic leukemia cells was obtained using a water-containing ethanol extract (dried extract) of Blueberry leaf prepared according to the method described above. Evaluated.
  • Atsei first extracts each extract (dried extract) to a final concentration of 62.5 ⁇ g / ml, 125 ⁇ g / ml, 25
  • the sample was diluted with a phosphate buffer [PBS (-)] so that the concentration was 0 ⁇ g / ml or 500 ⁇ g / ml (test sample, comparative sample), and dispensed one by one into a 96-well plate.
  • PBS (-) phosphate buffer
  • the cells were cultured at 100% relative humidity for 48 hours. Subsequently, 101 WST-8 mixed reagents (trade name: Tetra Color ONE, manufactured by SEIKAGAKU CORPORATION) were added and cultured for further 4 hours, and then the absorbance at 450 nm was measured using 650 ⁇ m as a control wavelength. In place of the test sample or the comparative sample, the number of viable HL60 cells was measured as the absorbance (wavelength 450 nm) in the same manner as described above, using only the phosphate buffer without adding the extract (dry extract). . Using this as a control, the viability of HL60 cells treated with each extract was determined as a percentage.
  • the DMSO in the culture solution was adjusted to a final concentration of 1%.
  • Table 4 and Figure 22 show the number of viable cells (cells / ml) and viability (%) after culturing S1T cells (24 or 48 hours) using dried extracts of Blueberry leaves at various concentrations. .
  • Table 5 and Figure 23 also show the number of viable cells (cells / ml) and survival rate after culturing Su9T01 cells (24 or 48 hours) using water-containing ethanol extracts of Blueberry leaves at various concentrations. %).
  • Annexin V staining was used for the evaluation of apoptosis.
  • Cells Using Su9T01 cells a blueberry single leaf water-containing ethanol extract (dried solution) at 37 ° C and 5% CO in a relative humidity of 100%
  • the final concentration of Kiss was 0 ⁇ g / ml (untreated) or 50 ⁇ g / ml. After completion of the cultivation, the cells were washed with PBS, stained for apoptotic cells using Annexin V-FITC staining kit (Immunotech, PN I 3 546), and measured with a flow cytometer. The results are shown in FIG. In FIG. 24, the cell population shown in the B4 fraction is a population of apoptosis-positive cells (Annexin V positive and Propidium iodide negative).
  • the hepatitis C virus production inhibitor of the present invention can be used as a medicine and a functional food or drink. As a medicine, it can be effectively used to suppress the progression of liver cancer, which has been conventionally difficult to treat, especially from chronic hepatitis to cirrhosis and liver cancer. Similar effects can be expected for functional foods and drinks. Since the hepatitis C virus production inhibitor of the present invention has a natural edible plant called blueberry leaf as an active ingredient, it has fewer side effects than IFN. The applicability in the field of foods and drinks that can be safely taken for a long time is particularly high.
  • the growth inhibitory agent for cancer cells or cancer-onset virus-infected cells of the present invention is difficult to treat in the past, and it is said that liver cancer and leukemia (especially difficult to treat U, adult T cells). It can be effectively used for improvement and prevention of leukemia).
  • the hepatitis C virus production inhibitor, cancer cell growth inhibitor and the composition containing these as active ingredients of the present invention contain ingredients derived from natural edible plants as active ingredients. It can also be used safely as a medicine or food and drink taken for a long time.
  • FIG. 1 A graph showing the results of an HCV replicon RNA production suppression test (bite-) and a cytotoxicity test (- ⁇ -) using an 80% ethanol extract of Blueberry leaf.
  • the vertical axis represents the luciferase activity of the control sample (reflecting the amount of HCV replicon RNA production) or the number of living cells as 100% of the luciferase activity of the test sample (HCV replicon RNA production amount) or the number of living cells. Is expressed as a percentage (the same applies to Figures 2 to 13 below).
  • FIG. 2 is a graph showing the results of an HCV replicon RNA production inhibition test (one bite) and a cytotoxicity test (- ⁇ ichi) with 80% ethanol extract of blueberry fruit.
  • FIG. 3 is a graph showing the results of a quinic acid-induced HCV replicon RNA production inhibition test (a bite) and a cytotoxicity test (—fist-).
  • FIG. 4 A graph showing the results of a chlorogenic acid-induced HCV revlikon RNA production inhibition test (one bite) and a cytotoxicity test (- ⁇ -).
  • FIG. 5 is a graph showing the results of an interferon-induced HCV replicon RNA production inhibition test (one mouthful) and a cytotoxicity test (- ⁇ ichi).
  • FIG. 6 is a graph showing the results of an HCV replicon RNA production inhibition test (—mouth—) and a cytotoxicity test (—fist—) using 80% ethanol extract of Blueberry leaf.
  • FIG. 7 is a graph showing the results of an HCV revlikon RNA production inhibition test (one mouthful) and a cytotoxicity test (- ⁇ ichi) with an aqueous extract of Blueberry single leaf.
  • FIG. 9 is a graph showing the results of an HCV revlikon RNA production inhibition test (one bite) and a cell toxicity test (-fist-) using an aqueous extract of green tea leaves.
  • FIG. 10 is a graph showing the results of a HCV revlikon RNA production suppression test (bite-) and a cytotoxicity test using hot water extract of green tea leaves.
  • FIG. 11 is a graph showing the results of an HCV replicon RNA production suppression test and a cytotoxicity test (— ⁇ ichi) using 80% ethanol extract of Blueberry leaf.
  • ⁇ -) is a graph showing the results of cytotoxicity test (-fist-).
  • FIG. 14 is a graph showing the results of comparing the HCV revlikon RNA production inhibitory effect and cytotoxicity effect between cultivars of Blueberry leaves.
  • the black bar (C50) indicates the extract concentration when the number of viable cells is 50%
  • the gray bar (L50) indicates the extract concentration when the luciferase activity is 50% (same for FIG. 15). ).
  • FIG. 15 is a graph showing the results of comparing the HCV replicon RNA production inhibitory effect and cytotoxic effect due to the difference in drying temperature of fresh blueberry leaves.
  • FIG. 16 is a graph showing the growth inhibitory effect of 80% ethanol extract of Blueberry leaf on human acute promyelocytic leukemia cells (HL 60).
  • FIG. 17 is a graph showing the growth inhibitory effect of 80% ethanol extract of Blueberry leaf on human hepatoma cells.
  • FIG.18 Suppression of growth of 80% ethanol extract of Blueberry leaf on human T cell leukemia cells (Jurkat, MOLT4), HTLV-1 infected cells (HUT102, MT2) and ATL cells (ED, Su9T01, SIT) It is a graph which shows an effect.
  • FIG. 19 A graph comparing the cytostatic effect of 80% ethanol extract of Blueberry Ichiyo (Ichikoku-) and Blueberry Fruit (101) on human acute promyelocytic leukemia cells (HL60). .
  • FIG. 21 Human T-cell leukemia cells (Jurkat, MOLT4), HTLV-1-infected cells (HUT102, MT2) of 80% ethanol extract of Blueberry Ichiyo (Ichikoku-) and Blueberry Fruit (101) ) And ATL cells (ED, Su9T01, SIT).
  • FIG.22 Viable cell counts (cells / ml) and cell viability (%) after culturing ATL cells (S1T) (80 hours or 48 hours) with 80% ethanol extract of Blueberry leaves at various concentrations
  • FIG. 23 Viable cell count (cells / ml) and cell viability (%) after culturing ATL cells (Su9T01) (24 hours or 48 hours) using 80% ethanol extract of Blueberry leaves at various concentrations
  • FIG. 23 Viable cell count (cells / ml) and cell viability (%) after culturing ATL cells (Su9T01) (24 hours or 48 hours) using 80% ethanol extract of Blueberry leaves at various concentrations
  • FIG. 24 is a diagram showing the results of examining the apoptosis-inducing action of an 80% ethanol extract of Blueberry leaf using a flow cytometer using ATL cells (Su9T01).

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Abstract

　本発明は、ブルーベリー葉の加工処理物を有効成分とするＣ型肝炎ウイルス産生抑制剤、およびがん細胞（肝がん細胞、白血病細胞）若しくはがん発症性ウイルス感染細胞に対する増殖抑制剤を提供する。また本発明は、上記Ｃ型肝炎ウイルス産生抑制剤または細胞増殖抑制剤を有効成分とする医薬組成物または食品組成物を提供する。かかる本発明の抑制剤ならびに医薬および食品組成物は、天然の植物成分に由来するため、副作用が少なく長期の服用が可能であり、また優れたＣ型肝炎ウイルス産生抑制作用、またはがん細胞またはがん発症性細胞に対する増殖抑制作用を発揮することができる。

Description

明 細 書
ブルーベリ一葉の加工処理物の新規用途
技術分野
[0001] 本発明は、ブルーベリ一葉の加工処理物の新規用途、特に医薬品または機能性 食品 (健康食品）としての新規用途に関する。より具体的には、本発明はブルーベリ 一葉の加工処理物が有する C型肝炎ウィルス産生抑制作用、またはがん細胞および がん発症性ウィルス感染細胞の増殖抑制作用に基づく新規用途に関する。
背景技術
[0002] C型肝炎ウィルス (HCV)は血液感染性ウィルスである。感染したウィルス保有者 ( キャリア）は、持続的に炎症を繰り返し、やがては慢性肝炎、肝硬変となり、発症後約 30年を経て肝がんになると言われている。治療には、インターフェロンが有効で、平 均して約 3割の人でウィルスが消失する。また、抗ウィルス薬リバビリンを併用すると、 消失率は 3割よりもややよくなる。近年、ウィルス駆逐を目的とせず、慢性肝炎、肝硬 変の進行を抑制し、肝がんの発症を遅延させる治療にも、インターフ ロンが使用さ れてきているが、インターフェロンは、脱毛、食欲減退、鬱、血小板、白血球減少など 副作用も強ぐ長期にわたる継続的治療には問題もある (非特許文献 1)。
[0003] また日本人の死亡原因の第一位はがんであり、がん予防とがん治療は国民の健康 上極めて重要な課題である。特に九州（日本）は、がんの中でも、成人 T細胞白血病 (Adult T-cell leukemia:ATL)を始めとする白血病、及び肝がんの発生率が高いとさ れている地域である。その理由の一つとして、九州にはヒトレトロウイルス HTLV-1 (ヒト T細胞白血病ウィルス 1型）に感染して!/、る人（HTLV-1キャリア）が多 、ことが挙げら れる。 ATLの発生には HTLV-1が強く関係しており、 HTLV-1感染者だけに ATLが発 生することが知られている。近年白血病の治療は非常に進歩しており、完治する白血 病もある中で、 ATLは最も治療に抵抗性の白血病である。カロえて、他のウィルスと異 なって、ー且 HTLV-1に感染すると、一生涯身体の中にそのウィルスが存在し続ける 。また、肝がんも前述する C型肝炎ウィルス（Hepatitis C Virus : HCV)による持続感 染が原因となって発症することが知られて 、る。 [0004] 従って、がん細胞の増殖を抑制するというだけでなぐがんを発症する可能性のあ るウィルス感染細胞の増殖を抑制することによってがんの発症を予防することも必要 である。
[0005] 非特許文献 2には、疫学調査の結果として、緑黄色野菜や果物を多く摂取すると発 がんのリスクが軽減されることが記載されている。例えば果物の一種であるブルーベリ 一に関して、特許文献 1には、ブルーベリーの果実由来のアントシァニン配糖体に抗 がん作用があること、非特許文献 3には、ブルーベリーなどの Vaccinium属に属する 植物の果実及び葉の酢酸ェチル抽出物にがんプロモーター抑制の指標の 1つであ るキノンレダクターゼ誘導活性があること、さらに、非特許文献 4には、 Vacdnium属の ビルべリー組織から誘導したカルスの培養液 (フラボノイド等を含む）に乳がん細胞の 増殖を抑制する作用があることが記載されて 、る。
[0006] しかし、特許文献 1に抗がん作用の有効成分として記載されているアントシァニン誘 導体は、ブルーベリーの果実に多く含まれるものの、ブルーベリ一葉には果実の 2% 程度しか含まれていない。また、非特許文献 3に記載されているブルーベリ一葉の酢 酸ェチル抽出物の抗がん作用は、キノンレダクターゼを誘導させて活性酸素の生成 を阻止して発がんを抑制するというものであり、活性酸素以外を原因とするがんに対 しては有効とはいえない。また、がんの原因を除去することで発がんを防止するもの であるため、既にがん化した細胞に対しては有効とはいえない。さらに、当業界では 、がん全般に効く薬剤はなぐがんの種類によって治療薬物が異なることが周知とな つている。例えば、非特許文献 5によると、白血病は、化学療法 (抗がん剤）で完治す る可能性のあるがんの群に、また肝がんは治療効果が期待できずまたがんも小さくな らないがんの群に、各々分類されている。従って、非特許文献 4に記載されている乳 がん細胞増殖抑制成分が、直ちに他のがん細胞に有効であるとは限らない。
[0007] また、ブルーベリーには抗がん作用のほか抗ウィルス作用があること、具体的には、 特許文献 2には、ブルーべリーに、大腸菌、スタフイロコッカス ·ェピデルミジス (Staph vlococcus epidermidis)、馬心筋炎ウィルス (EMV)、シユウドモナス ·エルギノーザ（£ seudomonas aeruginosa;、 S .ァ1/レウス d aureus)、ノ チノレス ·サフチリス (Bacilus su btilis)に対する顕著な抗菌作用および抗ウィルス作用があることが記載されている。 また、非特許文献 6には、ブルーベリーを含む各種食材に抗ウィルス作用があること 、非特許文献 7には、ブルーベリー含有アントシァニンに抗ウィルス活性があることが 記載されている。
[0008] し力しながら、特許文献 2に抗ウィルス作用の有効成分として記載されているアント シァニン誘導体は、前述するようにブルーベリーの果実に多く含まれるものの、ブル 一べリー葉には果実の 2%程度し力含まれていない。また非特許文献 6は、ブルーべ リー果実に A型インフルエンザに対する抗ウィルス作用があることを記載するだけで、 ブルーベリ一葉に C型肝炎ウィルス産生抑制作用があることについては記載されて いない。さらに非特許文献 7は、アントシァニンを含む食材としてブルーベリーが記載 されて 、るが、その抗ウィルス作用につ 、て具体的な記載はな 、。
[0009] またアントシァニンの制癌効果を示す文献として下記の特許文献 3〜6を挙げること ができる。特許文献 3にはアントシァニンの一種であるデルフィ-ジンに肝細胞癌に 対する制癌作用があることが示唆されている力 ブルーベリーの葉に当該デルフィ- ジンは含まれていない。特許文献 4は、アントシァニンにレトロウイルスによる感染を 予防または改善する作用があることが記載されている力 ブルーベリ一葉そのものに 抗 HCV活性があることについては記載されていない。特許文献 5は、ハイブッシュブ ルーべリーの実に杭がん作用があることが示されている力 葉に杭がん作用があるこ とは示されていない。さらに特許文献 6には、アントシァニンの癌化抑制作用が記載 されている力 ブルーベリ一葉そのものに癌化抑制作用があることについては記載さ れていない。すなわち、これらの文献はいずれもブルーベリ一葉に制癌作用または 抗 HCV作用があることを開示な 、し示唆するものではな!/、。
[0010] 特許文献 1 :特開平 2003— 277271号公報
特許文献 2：特表 2001— 56565号公報
特許文献 3：特開 2002— 322055号公報
特許文献 4:WO97Z041137号パンブレット
特許文献 5： US 2003/00317
特許文献 6 :特開 2003— 531592号公報
非特許文献 1 :「C型慢性肝炎に対する最近の話題 IFNの副作用とその対策」 Med Dig Vol.46, No.6, 19—22 (1997.11)
非特許文献 2 : M.M.Mathews- Roth,Pure Apll.Chem.,63, 147-156 (2004)
特許文献 3 : J. Bomse et ai., 'In vitro anticancer activity of fruit extracts from Vac cinium species." Planta Medica, 62, 212—216 (1996)
非特許文献 4：浜松潮香「ブルーベリーの機能性研究；ブルーベリー培養細胞による 有用物質生産」食品工業 43 [2]44 (2000)
非特許文献 5：国立がんセンターホームページ「がんに関する情報」の中の「治療 かんの薬物療法」 http://www.ncc.go.jp/jp/ncc-cis/pub/treatment/010708.html 非特許文献 6 :持田恭「島根県産食材の生理活性 (抗癌活性、抗ウィルス活性)に関 する研究」島根県保健環境科学研究所報 [43] 51— 76 (2002)
非特許文献 7：津志田藤ニ郎「注目の健康素材と機能研究：ブルーベリーの生理的 機能性」食品と開発 31 [3] 5— 8 (1996)
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0011] 本発明は、天然の植物成分に由来して副作用が少なぐ長期の服用が可能で、か つ効果の優れた C型肝炎ウィルス産生抑制剤を提供することを目的とする。また本発 明は、当該 C型肝炎ウィルス産生抑制剤を有効成分とする医薬組成物または食品組 成物を提供することを目的として!ヽる。
[0012] また本発明は、天然の植物成分に由来して副作用が少なぐ長期の服用が可能で 、かつ効果の優れた、がん細胞 (肝がん細胞、白血病細胞)またはがん発症性ウィル ス感染細胞 (HTLV-1感染細胞)の増殖抑制剤を提供することを目的とする。さらに本 発明は、かかるがん細胞増殖抑制剤を有効成分とする医薬組成物または食品組成 物を提供することを目的とする。
[0013] 特に本発明は、抗肝疾病用または抗白血病用の医薬組成物または食品組成物を 提供することを目的とする。
課題を解決するための手段
[0014] 本発明者らは、前記目的を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、ブルーベリーの葉 に特異的に C型肝炎ウィルス産生抑制作用があること、またブルーベリーの葉に特異 的に肝がん細胞及び白血病細胞の増殖を抑制する作用があること、さらにブルーべ リーの葉に特異的に成人 T細胞白血病 (ATL)等の原因となる HTLV-1感染細胞の増 殖を抑制する作用があることを見いだし、当該ブルーベリ一葉の加工処理物が上記 各種の作用に基づいて、 C型肝炎の予防または治療を目的とした組成物、肝がんや 白血病の予防または治療を目的とした組成物、また成人 T細胞白血病 (ATL)や肝が んの発症を予防することを目的とした組成物、具体的には医薬組成物または食品（ 機能性食品、健康食品）の有効成分として有効であることを確信した。
[0015] 本発明は力かる知見に基づいて完成したものであって下記の態様を包含するもの である。
[0016] (I) C型肝炎ウィルス産生抑制剤およびそれを有効成分とする組成物
(1-1)ブルーベリ一葉の加工処理物を有効成分とする C型肝炎ウィルス産生抑制剤。 (1-2)ブルーベリーがラビットアイブルーベリーである（1-1)記載の C型肝炎ウィルス産 生抑制剤。
(1-3)ブルーベリ一葉の加工処理物力 ブルーベリ一葉の粉砕物、搾汁および溶媒 抽出物からなる群力 選択される少なくともひとつである（ト 1)または（1-2)記載の C型 肝炎ウィルス産生抑制剤。
(1-4) (1-1)〜 (1-3)の 、ずれかに記載する C型肝炎ウィルス産生抑制剤を有効成分 として含む組成物。
(1-5)医薬組成物である（1-4)記載の組成物。
(1-6)肝炎発症抑制、肝炎進行、慢性肝炎予防、肝硬変発症抑制、または肝がん発 症抑制を目的とした抗肝疾患用医薬組成物である (1-4)記載の組成物。
(1-7)食品組成物である（1-4)記載の組成物。
(1-8)肝炎発症抑制、肝炎進行、慢性肝炎予防、肝硬変発症抑制、または肝がん発 症抑制を目的とした抗肝疾患用食品組成物である（1-4)記載の組成物。
(1-9)ブルーベリ一葉を— 30〜50°Cの範囲内で乾燥し、次いで溶媒抽出して調製さ れるブルーベリ一葉の溶媒抽出物を有効成分として配合する工程を有する、 (1-1)〜 (1-3)の 、ずれかに記載する C型肝炎ウィルス産生抑制剤の調製方法。
[0017] (II)細胞増殖抑制剤およびそれを有効成分とする組成物 (π-i)ブルーベリ一葉の加工処理物を有効成分とする、肝がん細胞、白血病細胞お よび HTLV-1感染細胞力 なる群力 選択される少なくとも 1つの細胞を抑制する細 胞増殖抑制剤。
(ΙΙ-2)ブルーベリーがラビットアイブルーベリーである（II-1)記載の細胞増殖抑制剤
(Π- 3)ブルーベリ一葉の加工処理物力 ブルーベリ一葉の粉砕物、搾汁および溶媒 抽出物からなる群力 選択される少なくともひとつである（II-1)または (Π-2)に記載す る細胞増殖抑制剤。
(Π-4) (II-1)〜（Π-3)の 、ずれかに記載する細胞増殖抑制剤を有効成分として含む 組成物。
(Π-5)医薬組成物である（Π-4)記載の組成物。
(Π-6)抗肝がん剤、抗白血病剤または抗 HTLV-1関連疾病剤である（Π-4)記載の組 成物。
(Π-7)食品組成物である（Π-4)記載の組成物。
(Π-8)抗肝がん、抗白血病または抗 HTLV-1関連疾病を目的とした食品組成物であ る（Π-4)記載の組成物。
(ΙΙ-9) HTLV-1関連疾病が HAM(HTLV-1関連脊髄症)、 HAU(HTLV-1関連ぶどう膜 炎)、または HAB (HTLV-1関連気管支 '肺障害)である（Π-8)記載の組成物。
(11-10)ブルーベリ一葉を— 30〜50°Cの範囲内で乾燥し、次いで溶媒抽出して調製 されるブルーベリ一葉の溶媒抽出物を有効成分として配合する工程を有する、 (II-1) 〜（Π-3)の 、ずれかに記載する細胞増殖抑制剤の調製方法。
(III)抗肝疾患用組成物
(III-1)ブルーベリ一葉の加工処理物を有効成分とする抗肝疾患用糸且成物。
(III- 2)ブルーベリーがラビットアイブルーベリーである（III- 1)記載の抗肝疾患用組成 物。
(ΠΙ- 3)ブルーベリ一葉の加工処理物力 ブルーベリ一葉の粉砕物、搾汁および溶媒 抽出物からなる群力 選択される少なくともひとつである（III-1)または（ΠΙ-2)記載の 抗肝疾患用組成物。 (III-4) C型肝炎またはそれに起因して生じる肝疾患の予防または治療用の組成物 である、 (III-1)〜（ΙΠ-3)の 、ずれかに記載の抗肝疾患用組成物。
(III-5) C型肝炎に起因して生じる肝疾患が、慢性肝炎、肝硬変または肝がんである (ΠΙ-4)に記載の抗肝疾患用組成物。
(ΠΙ-6)肝疾患の予防または治療用の医薬品である、（ΙΠ-1)〜（ΠΙ-5)のいずれかに 記載する抗肝疾患用組成物。
(ΠΙ-7)肝疾患の予防用の食品である、（ΙΠ-1)〜（ΠΙ-5)のいずれかに記載する抗肝 疾患用組成物。
(ΠΙ-8)ブルーベリ一葉を— 30〜50°Cの範囲内で乾燥し、次いで溶媒抽出して調製 されるブルーベリ一葉の溶媒抽出物を有効成分として配合する工程を有する、 (III-1 )〜（ΠΙ-7)の ヽずれかに記載する抗肝疾患用組成物の調製方法。
[0019] (IV)抗白血病用組成物
(IV-1)ブルーベリ一葉の加工処理物を有効成分とする抗白血病用組成物。
(IV-2)ブルーベリーがラビットアイブルーベリーである（IV-1)記載の抗白血病用組 成物。
(IV- 3)ブルーベリ一葉の加工処理物力 ブルーベリ一葉の粉砕物、搾汁および溶 媒抽出物からなる群力も選択される少なくともひとつである（IV-1)または（IV-2)に記 載する抗白血病用組成物。
(IV-4)白血病予防または治療用の医薬品である、（IV-l)〜（IV-3)のいずれかに記 載する抗白血病用組成物。
(IV-5)白血病予防用の食品である、（IV-l)〜（IV-3)のいずれかに記載する抗白血 病用組成物。
(IV-6)ブルーベリ一葉を— 30〜50°Cの範囲内で乾燥し、次いで溶媒抽出して調製 されるブルーベリ一葉の溶媒抽出物を有効成分として配合する工程を有する、 (IV-1 )〜（IV-5)の ヽずれかに記載する抗白血病用組成物の調製方法。
[0020] (V)ブルーベリ一葉の加工処理物の使用
(V-1)ブルーベリ一葉の加工処理物の、 C型肝炎ウィルス産生抑制剤の調製のため の使用。 (V- 2)ブルーベリ一葉の加工処理物の、肝がん細胞、白血病細胞および HTLV-1感 染細胞力 なる群力 選択される少なくとも 1つの細胞を抑制する細胞増殖抑制剤の 調製のための使用。
(V-3)ブルーベリ一葉の加工処理物の、抗肝疾患用組成物の調製のための使用。 (V-4)ブルーベリ一葉の加工処理物の、抗白血病用組成物の調製のための使用。 発明の効果
[0021] 本発明の C型肝炎ウィルス産生抑制剤およびこれを有効成分とする組成物は、ブ ルーベリ一葉の加工処理物を有効成分とすることにより、下記の効果を有する。
(1)ブルーベリ一葉は、ブルーベリーの他の部位に比べて、特異的に C型肝炎ウイ ルスの産生を抑制する。
(2) C型肝炎ウィルス保有者の肝炎発症の予防、急性期および慢性期の肝炎治療、 並びに慢性肝炎力 肝硬変および肝がんへの進行を抑制する。
(3)元来食用に供することのできる天然由来のブルーベリ一葉を有効成分としている ので、副作用が少なぐ安全に長期にわたって服用または摂取が可能である。
[0022] 本発明の細胞増殖抑制剤およびこれを有効成分とする組成物は、ブルーベリ一葉 の加工処理物を有効成分とすることにより、下記の効果を有する。
(A)肝がん細胞、及び白血病細胞に対して増殖抑制作用を有する。
(B)このため、既にがん化した細胞にも作用し、その増殖を抑制することによって、肝 がんの改善または治療、及び白血病の改善または治療に有効に用いることができる
(C)成人 T細胞白血病発症性の HTLV-1感染細胞に対して増殖抑制作用を有する 。このため下記 (0および GOの効果を有する：
(i) HTLV-1感染によるがんの発症、とくに成人 T細胞白血病の発症を阻止し予防す るために有効に用いることができる。
(ii) HTLV-1感染細胞が関与する疾患 (HTLV-1関連脊髄症、 HTLV-1関連ぶどう膜 炎、 HTLV-1関連気管支 ·肺障害など)の発症を阻止し予防するために有効に用いる ことができる。
(D)元来食用に供することのできる天然由来のブルーベリ一葉を有効成分としている ので、副作用が少なぐ安全に長期にわたって服用または摂取が可能である。
発明を実施するための最良の形態
[0023] (I)ブルーベリ一葉の加工処理物
ブノレーべリーは、ッッジ科（Ericaceae)スノキ属（Vaccinium)サイァノココス節 (Cyano coccus)に分類される、アメリカ原産の落葉性あるいは常緑性の、低木性 (または半高 木性)の果榭である。ブルーベリ一はおよそ 6種類からなるが、果榭園芸上重要な種 は下記の 3種である：
(1)ノヽィフッンュブノレ ~~ヘリ ~~ (Highbush blueberry, Vaccininum corymbosum.L ：ォ ニーノレ、シャープブノレー、ジョージア、フローダブノレ一、レべレイ、スパノレタン、ダロウ 、デューク、バークレイ、ハリソン等、
(2)ラビットアイブルーベリー（Rabbiteye blueberry, V.ashei Reade)：ウッダード、ガー デンブノレー、ティフブノレ一、ホームべノレ、マイヤー等、
(3)口 ~~ブッンュブノレ1 ~~ヘリ1 ~~ (Lowbush blueberry, V.angstifolium iichauxと V.myrtill oides Aition)：チグネタト、ブロンズウィック、ブロミドン等。
[0024] 本発明にお ヽてブルーベリ一は、その種類、由来および原産地などを特に制限さ れることなぐいずれをも使用することができる。好ましくはラビットアイブルーベリーで ある。
[0025] ブルーベリーの葉はそのままでも使用できる力 好ましくはカ卩ェ処理を施したもの（ 加工処理物）が用いられる。加工処理物としては、ブルーベリーの葉の粉砕物（生、 乾燥物）、ブルーベリ一葉を搾って得られる搾汁またはブルーベリ一葉を任意の溶媒 で抽出して得られる抽出物を例示することができる。ブルーベリーの葉の加工処理物 として、好ましくは溶媒抽出物である。
[0026] 乾燥粉砕物は、ブルーベリーの葉を例えばそのまま乾燥した後粉砕する力、又は 生葉を細く切断した後乾燥することによって調製することができる。乾燥方法は、本発 明が目的とするブルーベリ一葉の薬効を損なわない方法であれば特に制限されず、 真空凍結乾燥、熱風乾燥、遠赤外線乾燥、減圧乾燥、マイクロ波減圧乾燥及び過熱 蒸気乾燥等を広く用いることができる。好ましくは成分変化の少な 、真空凍結乾燥で ある。真空凍結乾燥条件は、原料葉の状態によって異なるので特定できないが、例 えば生葉をそのまま乾燥する際、凍結温度は 30°C〜一 20°C、乾燥温度は 30 〜30°C、乾燥時間は 15時間〜 24時間の範囲が望ましい。
[0027] ブルーベリ一葉の溶媒抽出物は、例えば葉をそのまま若しくは破砕物とした後抽出 操作に供するか、また乾燥後、必要に応じて粉砕して抽出操作に供することによって 調製することができる。ブルーベリ一葉を乾燥した後、溶媒抽出操作に供する場合、 その乾燥条件としては— 30〜50°Cの範囲を挙げることができる。この温度条件で、 上記の真空凍結乾燥、熱風乾燥、遠赤外線乾燥、減圧乾燥、マイクロ波減圧乾燥及 び過熱蒸気乾燥等の任意の乾燥処理を施すことができる。また、葉を搾って得られる 搾汁も抽出材料として使用することができ、これは必要に応じて濃縮または乾燥して 抽出操作に供することができる。
[0028] ブルーベリ一葉の抽出に用いる溶媒としては、特に制限されず、水、極性有機溶媒 または非極性有機溶媒の 、ずれであってもよ!/、。好ましくは水または水と相溶性のあ る極性溶媒を挙げることができる。水と相溶性のある極性溶媒としては、メタノール、 エタノール、プロパノール及びブタノール等の炭素数 1〜4の低級アルキルアルコー ル；エチレングリコール、ブチレングリコール、プロピレングリコール及びグリセリンなど のグリコール類；ェチルエーテル、アセトン、ァセトニトリルを挙げることができる。かか る極性溶媒として、好ましくは低級アルコールであり、特に好ましくはエタノールであ る。
[0029] これらの溶媒は、単独で用いてもよぐ二種以上を組み合わせて使用することもでき る。例えば、アセトンとェチルエーテルの混合溶媒 (好ましくはアセトン:ェチルエーテ ル = 1： 1 (v/v)混合液)、および上記極性有機溶媒と水との混合溶媒 (含水溶媒)を 挙げることができる。含水溶媒として好ましくは、低級アルキルアルコールと水との混 合物（含水アルコール）、より好ましくはエタノールと水との混合物（含水エタノール） を例示することができる。含水アルコール中の低級アルキルアルコール濃度は特に 制限されないが、例えば 5〜90容量％、好ましくは 30〜90容量％、より好ましくは 50 〜90容量％を挙げることができる。
[0030] 抽出方法としては、一般に用いられている方法をいずれも採用することができる。例 えば、溶媒中にブルーベリ一葉を生のまま (粗末および細切物を含む）、又はそれら の乾燥物 (粉末などの乾燥粉砕物を含む)を冷浸または温浸などによって浸漬する 方法;撹拌しながら抽出し、ろ過して抽出液を得る方法;またはバーコレーシヨン法等 を挙げることができる。なお、特に制限はされないが、例えば、抽出溶媒として約 80 容量％の割合でエタノールを含む含水エタノールを用いる場合は、安定して抽出す る方法として、室温下での抽出を挙げることができる。この場合、具体的には室温下 で静置または攪拌しながら 30秒から 1時間かけて抽出を行う方法を例示することがで きる。
[0031] 得られた抽出物は、必要に応じて、ろ過または遠心分離などの操作により固形物を 除去する。得られたろ液は、次工程に応じて、そのまま用いるか、または溶媒を留去 して一部濃縮若しくは乾燥して用いてもよい。また濃縮若しくは乾燥後、さらに適正な 洗浄溶媒、例えば、非溶解性溶媒で洗浄精製しても、またこれを更に適当な溶剤に 溶解若しくは懸濁することもできる。更に、本発明においては、例えば、上記のように して得られた溶媒抽出液を、減圧乾燥、凍結乾燥等の通常の乾燥手段により、ブル 一べリー葉乾燥抽出物として使用することもできる。
[0032] (II) C型肝炎ウィルス産生抑制剤、およびこれを有効成分とする組成物
(II-l)C型肝炎ウィルス産生抑制剤
前述するブルーベリ一葉の加工処理物は、後述する試験例 1〜5に記載するように 、 C型肝炎ウィルス産生抑制作用を有している。本発明の C型肝炎ウィルス産生抑制 剤は、かかるブルーベリ一葉の加工処理物を有効成分として含有することを特徴とし 、当該ブルーベリ一葉の加工処理物が有する C型肝炎ウィルス産生抑制作用に基 づいて、 C型肝炎ウィルス産生抑制効果を発揮する。
[0033] C型肝炎ウィルス産生抑制剤が含有するブルーベリ一葉の加工処理物の量は、 C 型肝炎ウィルス産生抑制剤が c型肝炎ウィルス産生抑制効果を発揮する有効量であ れば特に制限されず、ブルーベリ一葉の加工処理物の形態に応じて適宜調整するこ とができる。 C型肝炎ウィルス産生抑制剤が含有するブルーベリ一葉の加工処理物 の量として具体的には、ブルーベリ一葉の乾燥重量に換算して、少なくとも約 2g、好 ましくは 2g〜1800gの範囲を例示することができる。
[0034] この限りにお!/、て、本発明の C型肝炎ウィルス産生抑制剤は、ブルーベリ一葉加工 処理物 100重量％カもなるものであっても、またブルーベリ一葉加工処理物以外に 他の成分を含有するものであってもよい。当該他の成分としては、薬学上または食品 上許容される担体または添加剤を挙げることができる。添加剤としては、特に安定剤 、抗酸化剤、防腐剤、香料、着色料または矯味矯臭剤などを例示することができる。
[0035] (II-2)C型肝炎ウィルス産生抑制剤を有効成分とする医薬または食品組成物
本発明の C型肝炎ウィルス産生抑制剤は、さらに薬学的若しくは食品上許容される 担体若しくは添加剤または食品素材を配合して、医薬組成物または食品組成物とし て調製することができる。ゆえに本発明の 1つの態様として、前述する C型肝炎ウィル ス産生抑制剤を有効成分とする医薬糸且成物または食品糸且成物を挙げることができる
[0036] カゝかる本発明の医薬組成物または食品組成物は、上記本発明の C型肝炎ウィルス 産生抑制剤が有する C型肝炎ウィルス産生抑制作用（言 、換えればブルーベリ一葉 の加工処理物が有する C型肝炎ウィルス産生抑制作用）に基づいて、 C型肝炎ウイ ルス産生抑制効果、肝炎発症抑制効果、肝炎進行抑制効果、肝硬変発症予防効果 、または肝がん発症予防効果を奏することができる。
[0037] このため、本発明の医薬組成物は、 C型肝炎ウィルスに感染した患者を対象とした 薬剤として有効であり、例えば当該患者の肝炎発症前、肝炎の急性期若しくは慢性 期、または肝硬変の時期に好適に投与されて、 C型肝炎ウィルス産生抑制、肝炎発 症抑制、肝炎進行抑制、慢性肝炎予防、肝硬変発症予防、若しくは肝がん発症阻止 に有効に使用することができる。
[0038] 本発明の医薬組成物は、その形態を特に問わな 、が、経口に適した形態であるこ とが好ましい。経口投与用固形医薬製剤としては、錠剤、丸剤、カプセル剤、細粒剤 、顆粒剤等の形態を、また経口投与用液状医薬製剤としては、乳濁剤、溶液剤、懸 濁剤、シロップ剤などの形態を挙げることができる。これらの医薬組成物の製剤化に あたっては、各種製剤に応じた賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色料、矯味矯 臭剤、 pH調整剤等を適宜配合することができる。
[0039] 本発明の医薬組成物の投与量は、所望の治療効果、投与法、治療期間、性別、投 与経路、その他患者の病状等の条件に応じて異なるので特定することは容易ではな い。一例として、体重 60kgのヒトに対する 1回投与量として、ブルーベリ一葉の乾燥 重量に換算した場合に、約 100〜： LOOOmg (ブルーベリ一葉の乾燥重量）となるよう な量を挙げることができる。
[0040] 本発明の医薬組成物（100重量％)中に含まれる前記有効成分の量 (重量％)は、 1 投与あたりに含まれる有効成分の量が、ブルーベリ一葉の乾燥重量に換算した場合 に上記範囲となるような量であればよぐ製剤形態に応じて適宜設定することができる
[0041] また、本発明の食品組成物は、 C型肝炎ウィルスに感染した患者を対象とした飲食 物 (例えば、栄養補助食品、機能性食品、特定保健用食品など)として有用であり、 例えば当該患者の肝炎発症前、肝炎の急性期若しくは慢性期、または肝硬変の時 期に好適に摂取されることにより、 C型肝炎ウィルス産生抑制、肝炎発症抑制、肝炎 進行抑制、慢性肝炎予防、肝硬変発症予防、または肝がん発症阻止に有効に使用 することができる。
[0042] なお、本発明の飲食物は、 C型肝炎ウィルス産生抑制作用を有することに基づいて 、その包装または容器に、 C型肝炎の発症若しくはその進行を抑制するため、または 肝硬変若しくは肝がんへの進行を抑制するために用いられる旨の表示、具体的には 、 C型肝炎ウィルス産生抑制効果、肝炎発症抑制効果、肝炎進行抑制効果、慢性肝 炎予防効果、肝硬変発症予防効果、または肝がん発症予防効果を有している旨の 表示がなされて!/ヽてもよ!/ヽ。
[0043] 本発明の食品組成物は、その形態を特に問わないが、一例として、前述する C型肝 炎ウィルス産生抑制剤を、必要に応じて食品上配合が許容される担体や添加剤とと もに調合してなる、錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、粉末剤、トローチ剤、ま たは溶液 (ドリンク)等の製剤形態 (例えば、サプリメントなど)を挙げることができる。
[0044] また本発明の食品組成物は、本発明の C型肝炎ウィルス産生抑制剤を他の食品素 材とともに含有する機能性飲食物であってもよい。機能性飲食物の適用例としては、 次のちのを挙げることがでさる。
[0045] (1)乳飲料、乳酸菌飲料、果汁入り清涼飲料、清涼飲料、炭酸飲料、果汁飲料、野 菜飲料、野菜，果実飲料、アルコール飲料、粉末飲料、コーヒー飲料、紅茶飲料、緑 茶飲料、麦茶飲料などの飲料類、
(2)カスタードプリン、ミルクプリン、スフレプリン、果汁入りプリン等のプリン、ゼリー、 ババロア、ヨーグルト等のデザート類、
(3)アイスクリーム、アイスミルク、ラクトアイス、ミルクアイスクリーム、果汁入りアイスタリ ーム及びソフトクリーム、アイスキャンディー、シャーベット、氷菓等の冷菓類、
(4)チューインガムや風船ガム等の板状または糖衣錠ガム類、
(5)マーブノレチョコレート等のコーティングチョコレートの他、イチゴチョコレート、ブノレ 一べリーチョコレート及びメロンチョコレート等の風味を付加したチョコレート等のチヨ コレート類、
(6)ハードキャンディー（ボンボン、バターボール、マーブル等を含む）、ソフトキャン ディー（キャラメル、ヌガー、グミキャンディー、マシュマロ等を含む）、ドロップ、タフィ 等のキャラメル類、
(7)ハードビスケット、クッキー、おかき、煎餅等の焼き菓子類、
(8)コンソメスープ、ポタージュスープ等のスープ類、
(9)味噌、醤油、ドレッシング、ケチャップ、たれ、ソース、ふりかけなどの各種調味料
(10)ストロベリージャム、ブルーベリージャム、マーマレード、リンゴジャム、杏ジャム、 プレザーブ等のジャム類、
(11)赤ワイン等の果実酒、
(12)シロップ漬のチェリー、アンズ、リンゴ、イチゴ、祧等の加工果実、
(13)ハム、ソーセージ、焼き豚等の畜肉加工品、
(14)魚肉ハム、魚肉ソーセージ、魚肉すり身、蒲鋅、竹輪、はんぺん、薩摩揚げ、伊 達巻き、鯨ベーコン等の水産練り製品、
(15)うどん、冷麦、そうめん、ソノ 、中華そば、スパゲッティ、マカロニ、ビーフン、はる さめ及びワンタン等の麵類、
(16)その他、各種総菜及び麩、田麩等の種々の加工食品。
食品組成物に含まれる本発明の C型肝炎ウィルス産生抑制剤の量、及び食品組成 物の摂取量は、 C型肝炎ウィルス産生抑制に有効な量であれば特に限定されず、食 品組成物の種類やその他の諸条件に応じて適宜選択することができる。特に制限は されないが、例えば、体重 60kgのヒトに対する 1回摂取量として、ブルーベリ一葉の 乾燥重量に換算した場合に、約 100〜： LOOOmg (ブルーベリ一葉の乾燥重量)の範 囲が好適である。また、摂取時期は限定されないが、望ましくは肝炎発症前、肝炎の 急性期、慢性期、肝硬変の時期である。
[0047] (III)がん若しくはがん発症性ウィルス感染細胞の増殖抑制剤、およびこれを有効 成分とする組成物
(III-1)がん若しくはがん発症性ウィルス感染細胞の増殖抑制剤
ブルーベリ一葉の加工処理物は、後述する試験例 6〜8に記載するように、各種の がん細胞、特に肝がん細胞、及び白血病細胞の増殖を抑制する作用を有している。 ここで白血病細胞としては全てヒトの白血病細胞で、急性前骨髄性白血病細胞、急 性リンパ性（T細胞性）白血病細胞、成人 T細胞白血病細胞を挙げることができる。ま た、ブルーベリ一葉の加工処理物は、後述する試験例 6および 7に記載するように、 成人 T細胞白血病発症性のウィルス感染細胞である、ヒトレトロウイルス HTLV-1感染 細胞 (HTLV-1感染細胞）の増殖を抑制する作用を有して 、る。
[0048] ゆえに本発明のがん若しくはがん発症性ウィルス感染細胞の増殖抑制剤（以下、 単に「がん細胞増殖抑制剤」という）は、ブルーベリ一葉の加工処理物を有効成分と して含有することを特徴とし、当該ブルーベリ一葉の加工処理物が有する、がん若し くはがん発症性ウィルス感染細胞に対する増殖抑制（以下、単に「がん細胞増殖抑 制」と 、う）作用に基づ 、て、がん細胞増殖抑制効果を発揮する。
[0049] なお、細胞増殖抑制作用は、対象とする細胞の全体としての数 (総細胞数)が減少 する作用が認められればよぐ細胞の発育'成長を阻止する作用や細胞を死滅させ る作用などの作用機序の別を問わない。
[0050] がん細胞増殖抑制剤が含有するブルーベリ一葉の加工処理物の量は、がん細胞 増殖抑制剤が、肝がんや白血病細胞などのがん細胞または HTLV-1感染細胞の増 殖を抑制する効果を発揮する有効量であれば特に制限されず、ブルーベリ一葉の加 ェ処理物の形態に応じて適宜調整することができる。がん細胞増殖抑制剤が含有す るブルーベリ一葉の加工処理物の量として具体的には、ブルーベリ一葉の乾燥重量 に換算して、少なくとも約 15g、好ましくは 15〜30gの範囲を例示することができる。
[0051] この限りにおいて、本発明のがん細胞増殖抑制剤は、ブルーベリ一葉加工処理物 100重量％カもなるものであっても、またブルーベリ一葉加工処理物以外に他の成 分を含有するものであってもよい。当該他の成分としては、薬学上または食品上許容 される担体または添加剤を挙げることができる。添加剤としては、特に安定剤、抗酸 ィ匕剤、防腐剤、香料、着色料または矯味矯臭剤などを例示することができる。
[0052] (ΠΙ-2)がん細胞増殖抑制剤を有効成分とする医薬または食品組成物
本発明のがん細胞増殖抑制剤は、さらに薬学的若しくは食品上許容される担体若 しくは添加剤または食品素材を配合して、医薬組成物または食品組成物として調製 することができる。ゆえに本発明の 1つの態様として、前述するがん細胞増殖抑制剤 を有効成分とする医薬組成物または食品組成物を挙げることができる。
[0053] 力かる本発明の医薬組成物または食品組成物は、上記本発明のがん細胞増殖抑 制剤が有する肝がん細胞や白血病細胞 (例えば、急性前骨髄性白血病細胞、 T細 胞性白血病細胞、成人 τ細胞白血病細胞)などのがん細胞に対する増殖抑制作用（ 言い換えればブルーベリ一葉の加工処理物が有する上記がん細胞増殖抑制作用） に基づいて、抗がん作用を発揮することができる。
[0054] このため、本発明の医薬組成物は、肝がんや白血病 (例えば、急性前骨髄性白血 病、 T細胞性白血病、成人 T細胞白血病）に罹患した患者を対象とした杭がん剤とし て有効である。また本発明の食品組成物は、肝がんや白血病 (例えば、急性前骨髄 性白血病、 T細胞性白血病、成人 T細胞白血病）に罹患した患者を対象とした飲食 物 (例えば、栄養補助食品、機能性食品、特定保健用食品など)として有用である。 なお、本発明の食品組成物は、肝がん細胞増殖抑制作用による肝がんに対する予 防若しくは改善作用に基づいて、その包装または容器に、肝がんに対する予防若し くは改善効果、または肝がん予防若しくは改善のために用いられる旨の表示がなさ れていてもよい。また本発明の食品組成物は、白血病細胞増殖抑制作用による白血 病に対する予防若しくは改善作用に基づいて、その包装または容器に、白血病に対 する予防若しくは改善効果、または白血病予防若しくは改善のために用いられる旨 の表示がなされて!/ヽてもよ!/ヽ。 [0055] また本発明の医薬組成物または食品組成物は、上記本発明のがん細胞増殖抑制 剤が有する、レトルウィルス HTLV-1感染細胞に対する増殖抑制作用（言い換えれば ブルーベリ一葉の加工処理物が有する上記の HTLV-1感染細胞増殖抑制作用）に 基づいて、成人 T細胞白血病の発症を阻止し予防する作用（抗白血病作用）、 HTLV -1感染細胞が関与する疾病の発症を阻止し予防する作用を発揮することができる。 なお、 HTLV-1感染細胞が関与する疾病（以下、「HTLV_1関連疾病」という）として、 HAM(HTLV-1関連脊髄症)、 HAU HTLV-1関連ぶどう膜炎)、 HAB (HTLV-1関連気 管支'肺障害)が知られている。
[0056] このため、本発明の医薬組成物は、 HTLV-1に感染した患者を対象とした薬剤とし て有効であり、例えば当該患者の成人 T細胞白血病の発症前または HTLV-1関連疾 病 (HTLV-1関連脊髄症、 HTLV-1関連ぶどう膜炎、 HTLV-1関連気管支，肺障害な ど）の発症前に投与されて、当該白血病予防または HTLV-1関連疾病発症予防に有 効に使用することができる。
[0057] また本発明の食品組成物は、 HTLV-1に感染した患者を対象とした飲食物（例えば 、栄養補助食品、機能性食品、特定保健用食品など)として有用であり、例えば当該 患者の成人 T細胞白血病の発症前または HTLV-1関連疾病の発症前に摂取される ことにより、当該白血病予防または HTLV-1関連疾病発症予防に有効に使用すること ができる。なお、本発明の食品組成物は、 HTLV-1感染細胞増殖抑制作用による成 人 T細胞白血病発症阻止作用および HTLV-1関連疾病発症阻止作用に基づいて、 その包装または容器に、白血病に対する予防効果や白血病予防のために用いられ る旨の表示、または上記 HTLV-1関連疾病の発症予防効果や HTLV-1関連疾病予 防のために用いられる旨の表示がなされて!/ヽてもよ!/、。
[0058] 本発明が対象とするがん細胞増殖抑制剤を有効成分とする医薬組成物は、前述の (Π-2)に記載する医薬組成物と同様に、特にその形態を特に問わないが、経口に適 した形態であることが好まし 、。経口投与用固形医薬製剤および経口投与用液状医 薬製剤の形態およびその製剤化に使用される担体や添加剤も前述と同様のものを 挙げることができる。
[0059] 本発明の医薬組成物の投与量も、（Π-2)の医薬組成物と同様に特定することは容易 ではない。一例として、体重 60kgのヒトに対する 1回投与量として、ブルーベリ一葉の 乾燥重量に換算した場合に、約 600〜6000mg (ブルーベリ一葉の乾燥重量）となる ような量を挙げることができる。またこの範囲で、医薬組成物（100重量％)中に含まれ る前記有効成分の量は適宜設定することができる。
[0060] さらに本発明が対象とするがん細胞増殖抑制剤を有効成分とする食品組成物もま た、前述の (Π-2)に記載する食品組成物と同様にその形態を特に問わず、がん細胞 増殖抑制剤を、食品上配合が許容される担体や添加剤とともに含有してなる錠剤な どの製剤（例えば、サプリメントなど)であっても、また他の食品素材とともに含有する 各種に機能性飲食物であってもよ ヽ。
[0061] 当該食品組成物に含まれる本発明のがん細胞増殖抑制剤の量、及び食品組成物 の摂取量は、がん細胞増殖抑制に有効な量であれば特に限定されず、食品組成物 の種類やその他の諸条件に応じて適宜選択することができる。制限はされないが、例 えば、体重 60kgのヒトに対する 1回摂取量として、ブルーベリ一葉の乾燥重量に換 算した場合に、約 600〜6000mg (ブルーベリ一葉の乾燥重量）となるような量を挙 げることができる。
[0062] (IV)抗肝疾病用組成物
ブルーベリ一葉の加工処理物は、後述する試験例 1〜5および 6 (2)に記載するよ うに、 C型肝炎ウィルス産生抑制作用および肝がん細胞増殖を抑制する作用を有し ている。従って、ブルーベリ一葉の加工処理物は、その C型肝炎ウィルス産生抑制作 用に基づいて、肝炎発症抑制効果、肝炎進行抑制効果、慢性肝炎予防効果、肝硬 変発症予防効果、または肝がん発症予防効果を発揮することができる。またはブル 一べリー葉の加工処理物は、その肝がん細胞増殖抑制作用に基づいて、肝がんの 進行を抑制し、また改善する効果 (抗肝がん効果)を発揮することができる。
[0063] このため、ブルーベリ一葉の加工処理物は、これらの肝疾病に対して予防または治 療効果を有する抗肝疾病用組成物の有効成分として有効に用いることができる。
[0064] 従って本発明の 1つの態様として、ブルーベリ一葉の加工処理物を有効成分とする 抗肝疾病用組成物を挙げることができる。
[0065] ここで抗肝疾病用組成物には、医薬組成物と食品組成物が含まれる。 [0066] 本発明の医薬組成物は、 C型肝炎ウィルスや肝がんに罹患した患者を対象とした 抗肝疾病用薬剤として有効である。
[0067] ここで本発明が対象とする抗肝疾病用医薬組成物は、前述の (Π-2)に記載する医 薬組成物と同様に、特にその形態を特に問わないが、経口に適した形態であること が好ま ヽ。経口投与用固形医薬製剤および経口投与用液状医薬製剤の形態およ びその製剤化に使用される担体や添加剤も前述と同様のものを挙げることができる。
[0068] 本発明の医薬組成物の投与量は、肝疾病の種類や使用目的 (用途）によって異な る。例えば本発明の医薬組成物を抗肝がん剤として使用する場合、体重 60kgのヒト に対して 1回投与する医薬組成物の量としては、ブルーベリ一葉の乾燥重量に換算 した場合に、約 600〜6000mg (ブルーベリ一葉の乾燥重量）となるような量を挙げる ことができる。また本発明の医薬組成物を抗 C型肝炎剤として使用する場合、体重 6 Okgのヒトに対して 1回投与する医薬組成物の量としては、ブルーベリ一葉の乾燥重 量に換算した場合に、約 100〜： LOOOmg (ブルーベリ一葉の乾燥重量）となるような 量を挙げることができる。これらの範囲で、医薬組成物（100重量％)中に含まれる有 効成分 (ブルーベリ一葉の加工処理物）の量は適宜設定することができる。
[0069] また本発明の食品組成物は、 C型肝炎ウィルスや肝がんに罹患した患者を対象と した抗肝疾病用飲食物 (例えば、栄養補助食品、機能性食品、特定保健用食品など )として有用である。なお、本発明の食品組成物は、 C型肝炎ウィルス産生抑制作用 に基づいて、その包装または容器に、 C型肝炎の発症若しくはその進行を抑制する ため、若しくは肝硬変若しくは肝がんへの進行を抑制するために用いられる旨の表 示、または C型肝炎ウィルス産生抑制効果、肝炎発症抑制効果、肝炎進行抑制効果
、慢性肝炎予防効果、肝硬変発症予防効果、若しくは肝がん発症予防効果を有して いる旨の表示がなされていてもよい。また本発明の食品組成物は、肝がん細胞増殖 抑制作用による肝がんに対する予防若しくは改善作用に基づいて、その包装または 容器に、肝がんに対する予防若しくは改善効果、または肝がん予防若しくは改善の ために用いられる旨の表示がなされて!/ヽてもよ!/、。
[0070] 本発明が対象とする抗肝疾病用食品組成物もまた、前述の (Π-2)に記載する食品 組成物と同様にその形態を特に問わず、ブルーベリ一葉の加工処理物を、食品上配 合が許容される担体や添加剤とともに含有してなる製剤 (サプリメント)であっても、ま た他の食品素材とともに含有する各種に機能性飲食物であってもよい。
[0071] 当該食品組成物に含まれるブルーベリ一葉の加工処理物の量、及び食品組成物 の摂取量は、肝疾患の予防または改善に有効な量であれば特に限定されず、食品 組成物の種類やその他の諸条件に応じて適宜選択することができる。制限はされな いが、例えば、抗肝がんを目的とする場合、体重 60kgのヒトの 1回摂取する食品組 成物の量としては、ブルーベリ一葉の乾燥重量に換算した場合に、約 600〜6000m g (ブルーベリ一葉の乾燥重量)となるような量を挙げることができる。また、抗肝炎 (抗 C型肝炎）を目的とする場合、体重 60kgのヒトの 1回摂取する食品組成物の量として は、ブルーベリ一葉の乾燥重量に換算した場合に、約 100〜1000mg (ブルーベリ 一葉の乾燥重量)となるような量を挙げることができる。
[0072] (V)抗白血病用組成物
ブルーベリ一葉の加工処理物は、後述する試験例 6 (1)および試験例 7〜8に記載 するように、白血病細胞および白血病発症性 HTLV-1ウィルス感染細胞の増殖を抑 制する作用を有している。このため、ブルーベリ一葉の加工処理物は、白血病に対し て予防または治療効果を有する抗白血病用組成物の有効成分として有効に用いる ことができる。
[0073] ゆえに本発明が提供する 1つの態様として、ブルーベリ一葉の加工処理物を有効 成分とする抗白血病用組成物を挙げることができる。
[0074] 当該抗白血病用組成物には、医薬組成物と食品組成物が含まれる。
[0075] 本発明の医薬組成物は、白血病（例えば、急性前骨髄性白血病、 T細胞性白血病 、成人 T細胞白血病）に罹患した患者または HTLV-1に感染した患者を対象とした白 血病の予防または治療用（抗白血病用）の薬剤として有効である。
[0076] 本発明が対象とする医薬組成物は、前述の (Π-2)に記載する医薬組成物と同様に、 特にその形態を特に問わないが、経口に適した形態であることが好ましい。経口投与 用固形医薬製剤および経口投与用液状医薬製剤の形態およびその製剤化に使用 される担体や添加剤も前述と同様のものを挙げることができる。
[0077] 本発明の医薬組成物の投与量も、（Π-2)の医薬組成物と同様に特定することは容易 ではない。一例として、体重 60kgのヒトに対して 1回投与する医薬糸且成物の量として、 ブルーベリ一葉の乾燥重量に換算した場合に、約 600〜6000mgとなるような量を挙 げることができる。またこの範囲で、医薬組成物（100重量％)中に含まれる前記有効 成分の量は適宜設定することができる。
[0078] また本発明の食品組成物は、白血病に罹患した患者または HTLV-1に感染した患 者を対象とした白血病の予防または治療用（抗白血病用）の飲食物 (例えば、栄養補 助食品、機能性食品、特定保健用食品など)として有用である。なお、本発明の食品 組成物は、白血病細胞または HTLV-1感染細胞に対する増殖抑制作用による白血 病に対する予防若しくは改善作用に基づいて、その包装または容器に、白血病に対 する予防若しくは改善効果、または白血病予防若しくは改善のために用いられる旨 の表示がなされて!/ヽてもよ!/ヽ。
[0079] 本発明が対象とする食品組成物もまた、前述の (Π-2)に記載する食品組成物と同様 にその形態を特に問わず、ブルーベリ一葉の加工処理物を、食品上配合が許容され る担体や添加剤とともに含有してなる錠剤などの製剤（サプリメントなど)であっても、 また他の食品素材とともに含有する各種に機能性飲食物であってもよい。
[0080] 当該食品組成物に含まれるブルーベリ一葉の加工処理物の量、及び食品組成物 の摂取量は、白血病の予防または治療に有効な量であれば特に限定されず、食品 組成物の種類やその他の諸条件に応じて適宜選択することができる。制限はされな いが、例えば、体重 60kgのヒトが 1回摂取する食品糸且成物の量として、ブルーベリー 葉の乾燥重量に換算した場合に、約 600〜6000mg (ブルーベリ一葉の乾燥重量） となるような割合を挙げることができる。
実施例
[0081] 以下、実施例を挙げて本発明の内容をより詳細を説明する。但し、本発明は実施 例だけに限定されるものではない。なお、特に言及しない限り、下記の実施例におい て「％」は「重量％ (w/w%)」を意味するものとする。
[0082] 調製例 ί ブルーベリ一葉の乾燥粉末物の調製
ブルーベリー〔ノヽィブッシュブルーベリ一種（10品種）：（1)オニール、（2)シャープブ ルー、（3)ジョージア、（4)フローダブル一、（5)レべレイ、（6)スパルタン、（7)ダロウ、（8)デ ユーク、（9)バークレイ、（10)ハリソン；ラビットアイブルーベリ一種（5品種）：（11)ゥッダ一 ド、（12)ガーデンブルー、（13)ティフブルー、（14)ホームベル、（15)マイヤー〕の葉を品 種ごとに、凍結温度- 30°C、乾燥温度 30°C、乾燥時間 24時間で真空凍結乾燥 (真空 凍結乾燥機、 FTS SYSTEM, Dura-Top MP&Dura- Dry MP)した。次いで、超遠心粉 砕機（MRK&RETSCH、 EM- 1型）で 0.5mmのスクリーンを通して粉砕して、ブルーベリ 一葉の乾燥粉末物を調製した。
[0083] 調製例 2 ブルーベリ一葉の含水エタノール抽出物の調製
調製例 1で調製したブルーベリー〔ハイブッシュブルーベリ一種（10品種）： (1)ォ- ール、（2)シャープブルー、（3)ジョージア、（4)フローダブル一、（5)レべレイ、（6)スパル タン、（7)ダロウ、（8)デューク、（9)バークレイ、（10)ハリソン；ラビットアイブルーベリ一種（ 5品種）：（11)ウッダード、（12)ガーデンブルー、（13)ティフブルー、（14)ホームベル、（15 )マイヤー〕の葉の乾燥粉末物おのおの lgに、それぞれ 80容量％の割合でエタノー ルを含む含水エタノール約 30mLを加えて、室温で 30秒間激しく撹拌した後、ろ過し て固形物を除去した。回収したろ液を減圧濃縮して溶媒を留去し、さらに真空凍結乾 燥処理を行い、完全に溶媒を留去して、ブルーベリ一葉の含水エタノール抽出物の 乾燥エキス約 500mgを調製した。
[0084] 調製例 3 ブルーベリ一葉の水抽出物の調製
調製例 1で調製したブルーベリ一葉の乾燥粉末物のうち、ラビットアイブルーベリー 種のホームベル葉の凍結乾燥粉末物約 lgに、蒸留水約 30mlを加え、 4°Cにてスター ラーで 24時間撹拌した。その後、ろ過して固形物を除去し、回収したろ液を真空凍結 乾燥処理して、ブルーベリ一葉の水抽出物の乾燥エキス約 350mgを調製した。
[0085] 調製例 4 ブルーベリ一葉の熱水抽出物の調製
調製例 1で調製したブルーベリ一葉の乾燥粉末物のうち、ラビットアイブルーベリー 種のホームベル葉の凍結乾燥粉末物約 lgに、沸騰させた蒸留水約 30mlを加え、 95 °Cで湯煎をしながらスターラーで 30分撹拌した。その後、氷冷し粗熱をとつてから、ろ 過して固形物を除去し、回収したろ液を真空凍結乾燥処理して、ブルーベリ一葉の 熱水抽出物の乾燥エキス約 430mgを得た。
[0086] 調製例 5 ブルーベリ一葉の酢酸ェチル抽出物の調製 抽出溶媒を 80容量％エタノール水溶液力 酢酸ェチルに変え、それ以外は調製例 2と同様の方法で、ラビットアイブルーベリ一種のホームベルの葉から酢酸ェチル抽 出物の乾燥エキスを得た。
[0087] 調製例 6 ブルーベリ一葉のアセトン抽出物の調製
抽出溶媒を 80容量％エタノール水溶液力 アセトンに変え、それ以外は調製例 2と 同様の方法で、ラビットアイブルーベリ一種のホームベルの葉力もアセトン抽出物の 乾燥エキスを得た。
[0088] 試験例
以下の試験例 1〜5で用いるレブリコン細胞の調製及び試験方法は下記に従って 行った。
[0089] (1)レブリコン細胞の調製
HCVのゲノム RNAは、ウィルス粒子を構成するコアとエンベロープの構造タンパク 質翻訳領域、ウィルスゲノム複製などに機能する非構造タンパク質翻訳領域とに大 別される。この構造タンパク質翻訳領域をルシフェラーゼ翻訳領域 'EMCV IRES (脳 心筋ウィルス内部リボゾーム結合配列）'ネオマイシン耐性遺伝子に置換したサブゲ ノムレプリコン RNAを作成し、得られた RNAをヒト肝がん細胞 Huh-7の細胞質に導入 する。サブゲノムレプリコン RNAが導入された Huh-7は、同時にネオマイシン耐性能を 有するので、ネオマイシンによる選択が可能となる。このようにして得られた細胞を、 H CVレプリコン RNAの産生量の評価に供試する。なお、 HCVレプリコン RNAの産生量 は下記に説明するルシフェラーゼアツセィ法により測定する。この細胞の培養には、 DMEM10[GIBCO社の GlutaMAX Media Dulbecco' s Modified Eagle Medium (D— ME M)(l X), liquid (High glucose, contains sodium pyruvate)]に FBS (Hyclone社) 10%、 Pe nicillin- Streptomycin (GIBCO社） 1%、および Geneticin (invitrogen社） 1%を添カ卩した培 地を用いる。アツセィを行なう際のアツセィ培地には、 DMEM10に FBSを 5%、および Pe nicillin- Streptomycinを 1%添カ卩したもの（但し、 Geneticinは加えない。 )を用いる。
[0090] (2)ルシフェラーゼアツセィ法
マグネシウム存在下で、ルシフヱリンと ATPから酸化ルシフヱリンと AMPを作る反応 をルシフェラーゼが触媒する。ルシフェラーゼアツセィ法は、この時発生する光を発 光検出器で検出して、得られた光量に基づ!/、てルシフェラーゼ活性を評価する方法 である。本発明では便宜上、この光量を HCVレプリコン RNA量とする。
[0091] (3) MTTアツセィ法
MTTアツセィ法で用いる MTT[3- (4,5- dimethy卜 2- thiazolyl)- 2,5- diphenyl- 2H- tetr azoliumbromide]は、黄色の化合物で脱水素酵素の基質となる。これは生細胞のミト コンドリア内脱水素酵素により青色の色素（ホルマザン）に還元される。生成したホル マザン量が生細胞の数と比例することから、本発明ではホルマザンの吸光度から生 細胞数を評価し、被検試料の細胞毒性作用を判定する。
[0092] 試験例 1 調製例 2に記載する方法で調製したラビットアイブルーベリ一種のホームベル (14) の葉の含水エタノール抽出物の乾燥エキス（約 500mg)を、 DMSO (dimethylsulfoxide) で 200mg/ml濃度に調整して、下記の被験試料 1として用いた。
[0093] (1-1) HCVレブリコン細朐毒件試験
透明の 96wellプレートに被験細胞（レプリコン細胞）の懸濁液（2.5 X 104 cells/ml) を 90 /z lずつ加え、 37°C、 5%CO存在下、相対湿度 100%の条件で 24時間培養した。
2
上記被験試料 1の終濃度が 0.01、 0.03、 0.12、 0.49、 1.95、 7.81、 31.25、 125.00 /z g/m 1になるようにアツセィ培地で調整し、上記 96wellプレートに 10 μ 1/wellの割合で添カロし た。この後、さらに 72時間培養した。次いで MTT試薬 (株式会社 同仁ィ匕学研究所、 商品名：\1丁丁(1 0 11 6(1))を10 1^^11カ卩ぇて、さらに 4時間培養した。培養後、溶解 液（0.04M
Figure imgf000026_0001
よくピペッティングし色素を溶解し た (溶解培養液)。 650應を対照波長として、被験試料 1の各濃度における溶解培養 液の吸光度（570nm)を吸光マイクロプレートリーダー（日本モレキュラーデバイス株式 会社製 商品名： EMax™)で測定した。コントロールとして、上記の被験試料 1の代わ りに、被験試料の調整に使用した溶媒 DMSOを用いて調製した溶解培養液の吸光度 を測定した。
[0094] 吸光度測定値から、コントロールに対する百分率を求め、被験試料 1の各濃度に おける被験細胞の生細胞数（％)を算出した。生細胞数が 50%になる値を C (50% 生細胞数濃度： μ g/ml)とした。結果を図 1 (ー參一）に示す。
[0095] (1-2) HCVレプリコン RNA産生抑制試験
白色の 96wellプレートに被験細胞（レプリコン細胞）の懸濁液（2.5 X 104 cells/ml) を 90 /z lずつ加え、 37°C、 5%CO存在下、相対湿度 100%の条件で 24時間培養した。
2
被験試料 1の終濃度が 0.01、 0.03、 0.12、 0.49、 1.95、 7.81、 31.25、 125.00 g/mlにな るようアツセィ培地で調整し、上記 96wellプレートに 10 /z l/wellの割合で添カ卩した。こ の後、さらに 72時間培養した。プレートをインキュベーターから取り出し、室温で 30分 以上静置後、ルシフェラーゼアツセィ試薬（Promega社、商品名： Steady-Glo™Lucifer ase Assay System)を 100 μ 1/wellカ卩えて、よくピペッティングした。 5分以上放置してか ら発光検出器（日本モレキュラーデバイス株式会社製 商品名： LmaxII)で発光測定 を行った。コントロールとして、上記被験試料 1の代わりに DMSOを用いて上記と同様 にして調製した反応液にっ 、て、同様に発光量を測定した。
[0096] 発光測定値から、コントロールに対する百分率を求め、被験試料 1の各濃度にお ける被験細胞の相対ルシフ ラーゼ活性 (％)を算出した。前述するように、当該相対 ルシフェラーゼ活性（％)は HCVレプリコン RNA量を反映している。相対ルシフェラー ゼ活性が50%になる値を L (50%ルシフェラーゼ活性濃度： μ g/ml)とした。
50
[0097] ルシフェラーゼ活性の L に対する生細胞数の C の比を Selectivity index (SI =生
50 50
細胞数 C Zルシフェラーゼ活性 L )とした。この値が大きければ大きいほど、細胞に
50 50
障害を与えず HCVレブリコン RNA産生を抑制する作用が大きいことを意味する。結果 を図 1 (一口一）に示す。
[0098] (2)比較例 1
(2-1)ブルーベリー果実の含水エタノール抽出物の調製 (比較試料 1)
ラビットアイブルーベリ一種のホームベル果実の凍結乾燥粉末物を調製例 2に記載 する方法に従って 80容量％エタノール水溶液で抽出し、次 、で真空凍結乾燥処理 を行って、ブルーベリー果実の含水エタノール抽出物の乾燥エキス約 600mgを得た。 これを DMSOで 200mg/ml濃度に調整し、比較試料 1とした。
[0099] (2-2) HCVレプリコン RNA産生抑制試験
(1-1)および (1-2)に記載する方法に従って、上記比較試料 1の終濃度が 0.5、 5.0、 5 0.0、 500.0 g/mlになるようにアツセィ培地で調整し、 HCVレプリコン細胞毒性試験 および HCVレプリコン RNA産生抑制試験を行なった。なお、ルシフェラーゼの発光測 定には Berthold社の発光検出器 (Centro LB960)を使用した（下記（3)〜（5)におい ても同じ)。結果を図 2に示す。
[0100] (3)比較例 2
ブルーベリー（ラビットアイブルーベリ一種のホームベル）の葉に含まれる様々な有 機酸量を測定したところ、キナ酸とクロロゲン酸の含有量が高いことが判明した。ブル 一べリー葉の凍結乾燥粉末 lgに含まれるキナ酸は約 6mg、クロロゲン酸は約 lOOmg であった。そこで、キナ酸とクロロゲン酸について HCVレプリコン RNA産生抑制効果を 評価した。
[0101] (3-1)キナ酸
(i)キナ酸試料の調製 (比較試料 2)
リン酸緩衝液 (PBS(-))にキナ酸を 24mg/ml濃度となるように溶解してキナ酸溶液を 調製し、これを比較試料 2とした。
[0102] (ii) HCVレプリコン RNA産生抑制試験
上記のキナ酸溶液 (比較試料 2)を用い、キナ酸の終濃度が 0.1、 0.4、 1.5、 6.0、 24. Ο /z g/ml (これをブルーベリ一葉抽出乾燥物の量に換算すると 7.81、 31.25、 125、 500 、 2000 /z g/mlとなる）になるようにアツセィ培地で調整し、（1-1)および (1-2)に記載する 方法に従って、 HCVレプリコン細胞毒性試験および HCVレプリコン RNA産生抑制試 験を行なった。コントロールには、キナ酸溶液に代えて PBS (-)を用いた。結果を図 3 に示す。
[0103] (3-2)クロロゲン酸
(i)クロロゲン酸試料の調製 (比較試料 3)
リン酸緩衝液 (PBS(-))にクロロゲン酸を 40mg/ml濃度で溶解してクロロゲン酸溶液 を調製し、これを比較試料 3とした。
[0104] (ii) HCVレプリコン RNA産生抑制試験
上記のクロロゲン酸溶液 (比較試料 3)を用い、クロロゲン酸の終濃度力 56、 6.25、 25.00、 100.00、 400.00 g/ml (これをブルーベリ一葉抽出乾燥物の量に換算すると 7 .81、 31.25、 125、 500、 2000ug/mlとなる）になるようアツセィ培地で調整し、（1-1)およ び (1-2)に記載する方法に従って、 HCVレプリコン細胞毒性試験および HCVレプリコ ン RNA産生抑制試験を行なった。コントロールには、クロロゲン酸溶液に代えて PBS (
-)を用いた。結果を図 4に示す。
[0105] (4)比較例 3
(4-1)インターフェロン（比較試料 4)の HCVレプリコン RNA産生抑制試験
比較試料 4としてインターフェロン（IFN)を用いた。インターフェロン（IFN) (フナコシ 株式会社、商品名：IFN- a 2( Q; 2b),Human, Recombinant)の終濃度が 0.08、 0.40、 2.
00、 10.00、 50.00U/mlになるようにアツセィ培地で調整し、（1_1)および (1_2)に記載す る方法に従って、 HCVレプリコン細胞毒性試験および HCVレプリコン RNA産生抑制 試験を行なった。結果を図 5に示す。
[0106] (5)上記の実施例 1と比較例 1〜3の結果から、次のことがいえる。
[0107] 図 1に示すように、ブルーベリ一葉の含水エタノール抽出試料 (被験試料 1)は強い
HCVレプリコン RNA産生抑制効果を有する。図 1にも示すように生細胞数の C は 29.
50
24 μ g/ml、ルシフェラーゼ活性の L は 0.85 μ g/ml、 SIは 34であった。また被験試料 1
50
の 31.25 g/ml濃度において相対生細胞数はコントロールに対して 55.49%に抑制さ れているものの、相対ルシフェラーゼ活性は 0.39%まで抑制されていた。この効果は I FNの効果に匹敵する。具体的には、ブルーベリ一葉の含水エタノール抽出試料 (被 験試料 1)には、濃度 10 /z g/mlで、図 5に示すインターフェロン（IFN)並みの HVCレプ リコン RNA産生抑制効果 (抗ウィルス抑制効果)が認められた。
[0108] 図 2に示すブルーベリー果実の含水エタノール抽出試料 (比較試料 1)では、 SIは 2 7であり、ブルーベリ一葉の含水エタノール抽出試料 (被験試料 1) SI=34と大きな違 ヽ はないが、ルシフェラーゼ活性の L を比較すると、比較試料 1 (ブルーベリー果実）は
50
60.71 μ g/mlであるのに対し、被験試料 1 (ブルーベリ一葉）は 0.85 μ g/mlと、 71倍の 差があった。このことからもブルーベリ一葉は、ブルーベリー果実に比べて高い HCV レブリコン RNA産生抑制作用を有することが分かる。
[0109] 一方、ブルーベリ一葉に含まれるキナ酸は抗炎症作用、クロロゲン酸は抗酸ィ匕作 用を持つことが知られている。しかし、比較例 3の結果（図 3および 4)から、キナ酸お よびクロロゲン酸の 、ずれにも HCVレプリコン RNA産生抑制作用は認められなかった 。このことから、ブルーベリ一葉の HCVレプリコン RNA産生抑制作用は、キナ酸やクロ ロゲン酸とは別の作用機序によるものと推定できる。
[0110] なお、ラットを対象とした亜急性毒性試験において、ラットにブルーベリーの葉を飼 料に 3%の割合で混合して投与した場合、その血小板数はォスで 111.1 ±4.1、メスで 98.2±3.5 ( X 10000/mm3)であった。ブルーベリーの葉を与えなかったコントロールで は、ォス 111.5±4.5、メス 102.7±3.7であり、ブルーベリーの葉を与えることによる有意 な影響は見られな力つた。 IFNはその投与により約 20%血小板数が減少するとの報 告がある。これに対して、本発明のブルーベリ一葉には、上記するように、かかる IFN の副作用（血小板の減少）は見られなかった。
[0111] 試験例 2
( 細 12〜4
調製例 2に記載する方法に従って調製したラビットアイブルーベリ一種のホームべ ル (14)の葉の含水エタノール抽出物の乾燥エキスを、 DMSO (dimethylsulfoxide)で 20
Omg/ml濃度に調整して、ブルーベリ一葉の含水エタノール抽出試料 (被験試料 2) ( 実施例 2)とした。また、調製例 3〜4に記載する方法に従って調製したラビットアイプ ルーべリー種のホームベル (14)の葉の水抽出物の乾燥エキスおよび熱水抽出物の 乾燥エキスを、リン酸緩衝液 (PBS(-))で 200mg/ml濃度に調整し、それぞれブルーべ リー葉の水抽出試料 (被験試料 3) (実施例 3)および熱水抽出試料 (被験試料 4) (実 施例 4)とした。
[0112] 各被験試料 2〜4をおのおの終濃度が 0.8、 4.0、 20.0、 100.0、 500.0 μ g/mlになるよ うアツセィ培地で調整し、試験例 1の (1-1)および (1-2)に記載する方法に従って、 HC Vレプリコン細胞毒性試験および HCVレプリコン RNA産生抑制試験を行なった。コン トロールには、上記被験試料に代えて PBS (-)を用いた。ルシフェラーゼの発光測定 には Berthold社の発光検出器 (Centro LB960)を使用した（下記比較例 4にお ヽても 同じ)。被験試料 2、 3及び 4の結果をそれぞれ図 6、 7及び 8に示す。
[0113] 図 6に示すように、ブルーベリ一葉の含水エタノール抽出試料の生細胞数 C は 90.
50
52 μ g/ml、ルシフェラーゼ活性 L は 1.46 μ g/ml, SIは 62であった。また図 7に示すよ うに、ブルーベリ一葉の水抽出試料の生細胞数 C は 225.68 μ g/ml、 HCVレプリコン
50
RNA産生 IC は 1.46 μ g/ml、 SIは 155であった。さらに図 8に示すように、ブルーベリ
50
一葉の熱水抽出試料の生細胞数 C は 130.51 g/ml、ルシフェラーゼ活性 L は 1.75
50 50 μ g/ml、 SIは 75であった。いずれもルシフェラーゼ活性 L には大きな差が見られなか
50
つたが、 SI値は水抽出試料が最も高かった。このことから HCVレプリコン RNA産生成 分は耐熱性であると考えられる。また、この結果から、 HCVウィルス産生抑制成分 (H CVレブリコン RNA産生抑制成分)を効率的に抽出する溶媒として水が好ましいことが ゎカゝる。
[0114] (2)比較例 4
(2-1)緑茶の水抽出試料の調製 (比較試料 5)
調製例 3に記載する方法に従って、緑茶葉の凍結乾燥粉末 lgについて水抽出を 行ない、緑茶葉の水抽出物の乾燥エキス約 224mgを得た。これをリン酸緩衝液 (PBS( -))で 200mg/ml濃度に調整し緑茶の水抽出試料 (比較試料 5)とした。
[0115] (2-2)緑茶の熱水抽出試料の調製 (比較試料 6)
調製例 4に記載する方法に従って、緑茶葉の凍結乾燥粉末 lgについて熱水抽出 を行い、緑茶葉の熱水抽出物の乾燥エキス約 385mgを得た。これをリン酸緩衝液 (PB S (-))で 200mg/ml濃度に調整し緑茶の熱水抽出試料 (比較試料 6)とした。
[0116] (2-3) HCVレプリコン RNA産生抑制試験
上記で調製した比較試料 5および 6の各々について終濃度が 4、 20、 100、 500 μ §/ mlになるようにアツセィ培地で調整し、試験例 1の (1-1)および (1-2)に記載する方法に 従って、 HCVレプリコン細胞毒性試験および HCVレプリコン RNA産生抑制試験を行 なった。コントロールには、上記各抽出試料に代えて PBS (-)を用いた。緑茶の水抽 出試料 (比較試料 5)の結果を図 9に、熱水抽出試料 (比較試料 6)の結果を図 10に 示す。
[0117] 図 9および 10に示すように、緑茶葉の水抽出試料 (比較試料 5)の生細胞数 C は 1
50
25.60 μ g/ml、ルシフェラーゼ活性 LC は 299.26 μ g/mlであり、緑茶葉の熱水抽出試
50
料（比較試料 6)の生細胞数 C は 118.65 g/ml、ルシフェラーゼ活性 L «359.91 μ g
50 50
/mlであり、いずれもルシフェラーゼ活性 L が生細胞数 C を上回る数値となった。こ のことから緑茶葉の水および熱水抽出試料には HCVレブリコン RNA産生抑制成分（ ウィルス産生抑制成分）が含まれて 、な 、ことが分かる。
[0118] 試験例 3
調製例 2、 5および 6に記載する方法に従って調製したラビットアイブルーベリ一種 のホームベル (14)の葉の含水エタノール抽出物の乾燥エキス、酢酸ェチル抽出物の 乾燥エキス、およびアセトン抽出物の乾燥エキスを、おのおの DMSO (dimethylsulfoxi de)で 200mg/ml濃度に調整して、含水エタノール抽出試料 (被験試料 5) (実施例 5) 、酢酸ェチル抽出試料 (被験試料 6) (実施例 6)およびアセトン抽出試料 (被験試料 7) (実施例 7)とした。
[0119] ブルーベリ一葉の含水エタノール抽出試料 (被験試料 5)を終濃度が 0.8、 4.0、 20.0 、 100.0、 500.0 g/mlになるように、またブルーベリ一葉の酢酸ェチル抽出試料 (被 験試料 6)およびアセトン抽出試料 (被験試料 7)を終濃度が 0.5、 5.0、 50.0、 500.0 g /mlになるように、それぞれアツセィ培地で調整し、試験例 1の (1-1)および (1-2)に記 載する方法に従って、 HCVレプリコン細胞毒性試験および HCVレプリコン RNA産生 抑制試験を行なった。コントロールには、上記各被験試料に代えて DMSOを用いた。 発光測定には Perkin Elmer社の発光検出器 (ARVO Light)を使用した。被験試料 5、 6及び 7の結果を、それぞれ図 11、 12及び 13に示す。
[0120] 図 12および 13に示すように、ブルーベリ一葉の酢酸ェチル抽出試料 (被験試料 6) のルシフェラーゼ活性 L は 61.49 μ g/ml、アセトン抽出試料（被験試料 7)のルシフエ
50
ラーゼ活性 L は56.76 §/½1でぁり、 SIの値も非常に低く 2であった。これに対して、
50
図 11に示すようにブルーベリ一葉の含水エタノール抽出試料 (被験試料 5)は、細胞 毒性作用が低 ヽ（生細胞数 C は 80.80 μ g/ml)一方で、 HCVレプリコン RNA産生抑
50
制効果は高く（ルシフェラーゼ活性 L は 3.13 μ g/ml)、 SIは 26であった。
50
[0121] このこと力ら、ブルーベリ一葉に含まれている HCVレプリコン RNA産生抑制成分（ゥ ィルス産生抑制成分）は含水エタノールで効率よく抽出されることがわかる。
[0122] 試験例 4
調製例 2に記載する方法に従って調製した南部ハイブッシュブルーベリ一種の (2) シャープブルーおよび (5)レべレイ、北部ハイブッシュブルーベリ一種の (6)スパルタン および (8)デューク、ならびにラビットアイブルーベリ一種の（13)ティフブルーおよび (1 4)ホームベル葉の含水エタノール抽出物の乾燥エキスを、おのおの DMSO (dimethyl sulfoxide)で 200mg/ml濃度に調整して、含水エタノール抽出試料 (被験試料 8〜 13) (実施例 8〜 13)とした。
[0123] それぞれの被験試料を終濃度が 5、 50、 500 μ g/mlになるようアツセィ培地で調整し 、試験例 1の (1-1)および (1-2)に記載する方法に従って、 HCVレブリコン細胞毒性試 験および HCVレプリコン RNA産生抑制試験を行なった。各被験試料に代えて DMSO をカロえたものをコントロールとした。発光測定には、 Perkin Elmer社の発光検出器 (AR VO Light)を使用した。結果を図 14に示す。
[0124] 図 14に示すように、（6)スパルタン、（8)デューク、（5)レべレイおよび (2)シャープブル 一の SIは順に 13、 12、 13および 12であるのに対し、（14)ホームベル、（13)ティフブルー では 245、 175と非常に高い数値であった。このことから、 HCVレプリコン RNA産生抑 制成分 (ウィルス産生抑制成分）は北部ハイブッシュブルーベリーおよび南部ハイブ ッシュブルーべリーよりも、ラビットアイブルーベリ一により多く含まれていることがわか る。
[0125] 試験例 5
(1)被験試料の調製
ブルーベリーの生葉の処理方法の違いが、ブルーベリ一葉の加工処理物の HCVレ プリコン RNA産生抑制作用に影響を及ぼすかを検討した。被験葉としてラビットアイ ブルーベリ一種のホームベル葉を用いた。生葉乾燥の方法として (1) -30°Cで凍結後 、30°Cで 24時間乾燥する方法 (凍結乾燥）、（2) 45°Cで 19時間乾燥する方法、 (3) 65 °Cで 5時間乾燥する方法、および (4) 85°Cで 3.5時間乾燥する方法を採用した。各被 験葉は上記各種の乾燥処理を行なった後、粉砕した。これらの粉砕物を、調製例 2 に記載する方法に従って 80容量％エタノール水溶液で抽出し、次 、で真空凍結乾 燥処理した乾燥エキスを DMSOで 200mg/ml濃度に調整し被験試料とした。
[0126] (2) HCVレプリコン細胞毒性試験および HCVレプリコン RNA産生抑制試験
それぞれの被験試料を、終濃度が 5、 50、 500 g/mlになるようアツセィ培地で調整 し、試験例 1の (1-1)および (1-2)に記載する方法に従って、 HCVレブリコン細胞毒性 試験および HCVレプリコン RNA産生抑制試験を行なった。発光測定には、 Perkin El mer社の発光検出器 (ARVO Light)を使用した。結果を図 15に示す。
[0127] 図 15に示すように、（1)凍結乾燥処理、及び (2)45°Cで乾燥処理したブルーベリ一葉 含水エタノール抽出試料の SIはそれぞれ 245、及び 298であった。これに対して、（3)6 5°Cおよび (4)85°Cで乾燥処理したブルーベリ一葉含水エタノール抽出試料の SIの値 はそれぞれ 71および 63と下がる傾向にあった。このことからブルーベリ一生葉の乾燥 処理は凍結乾燥か乾燥温度 50°C以下、すなわち- 30〜50°C、好ましくは 45°C以下で 行うことが望まし 、と思われる。
[0128] 試験例 6 がん細胞増殖抑制試験
調製例 2に記載する方法に従って調製したブルーベリ一葉の含水エタノール抽出 物の乾燥エキスのうち、ラビットアイブルーベリ一種に属するホームベル (14)の乾燥ェ キスを用いて、各種のがん細胞の増殖抑制作用を調べた。
[0129] (1)ヒト急性前骨髄性白血病細胞 (HL60)に対する増殖抑制作用
ブルーベリ一葉の抽出物（乾燥エキス）のヒト急性前骨髄性白血病細胞 (HL60)に 対する増殖抑制作用を、 WST-8アツセィを用いて評価した。なお、 WST-8アツセィは 生細胞の数を測定する方法である。すなわち、 WST-8アツセィで用いる WST-8〔2-(2 - Methoxy- 4- nitrophenyl)- 3- (4- mtrophenyl)- 5- (2,4- disulfophenyl)- 2H- tetrazolium, monosodium salt]は、細胞共存下、細胞内脱水素酵素により還元され、水溶性のホ ルマザンを生成する力 S、この生成されたホルマザン量が生細胞の数と比例することか ら、ホルマザンの吸光度 (測定波長 450nm/対照波長 650nm)を直接測定することによ り、生細胞数の測定をする方法である。
[0130] 測定は、まず、ブルーベリ一葉の抽出物（乾燥エキス）を、終濃度が 62.5 μ g/ml、 12 5 μ g/ml、 250 μ g/ml、または 500 μ g/mlになるようにリン酸緩衝液〔PBS( -)〕で希釈し（ 被験試料）、 1 1ずつ 96穴プレートに分注した。ここにヒト急性前骨髄性白血病細胞（ HL60)の懸濁液（1 X 105cells/ml)を 100 μ 1ずつ加えて混合し、 37°C、 5%CO存在下
2
、相対湿度 100%で 48時間培養した。次いで WST- 8混合試薬（商品名： Tetra Color ONE, SEIKAGAKU CORPORATION社製）を 10 1カ卩えてさらに 4時間培養後、 650η mを対照波長として 450nmの吸光度を測定した。なお、上記被験試料に代えて、抽出 物（乾燥エキス）を添加しないリン酸緩衝液のみを用いて、上記と同様にして生存 HL 60細胞数を、吸光度 (波長 450nm)として測定した。これをコントロールとして、それに 対する百分率で、抽出物で処理した HL60細胞の生存率を求めた。結果を表 1及び 図 16に示す。
[0131] [表 1]
Figure imgf000035_0002
[0132] 表 1及び図 16からわ力るように、ブルーベリ一葉の含水エタノール抽出物には、ヒト 急性前骨髄性白血病細胞 (HL-60細胞）の増殖を抑制する非常に強い作用があるこ とがわかる。
[0133] (2)肝がん細胞 (Huh-7、 HLE、 HLF)に対する増殖抑制作用
ブルーベリ一葉の含水エタノール抽出物（乾燥エキス）の各種ヒト肝がん細胞（Huh -7、 HLE、 HLF)に対する増殖抑制作用を、上記と同様に、 WST-8アツセィを用いて 評価した。具体的には、 3種類の肝がん細胞（Huh-7、 HLE、 HLF)の懸濁液（I X 104 cells/ml)をそれぞれ 100 1ずつ 96穴プレートに分注し、 37°C、 5%CO存在下、相対
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湿度 100%で 24時間培養し細胞の接着を確認した。次いで、各ゥエルに予め、終濃 度が62.5
Figure imgf000035_0001
125 /z g/ml、 g/ml及び 500 /z g/mlになるようにリン酸緩衝液 (P BS(- ))で濃度を調整してぉ 、た抽出物を 1 μ 1ずつ添加して (被験試料）、 37°C、 5% CO存在下、相対湿度 100%で 72時間培養した。これに WST-8混合試薬 (商品名： T
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etra Color ONE, SEIKAGAKU CORPORATION社製）を 10 μ 1カ卩えてさらに 4時間培 養後、 650nmを対照波長として 450nmの吸光度を測定した。
[0134] なお、上記被験試料に代えて、抽出物を添加しな 、リン酸緩衝液のみを用いて、上 記と同様にして生存細胞数を吸光度 (波長 450應）として測定した。この場合のこれを コントロール（100%)として、それに対する百分率で、ブルーベリ一葉の含水エタノー ル抽出物で処理した各種肝がん細胞（HuH-7, HLE, HLF)の生存率を求めた。結 果を表 2及び図 17に示す。
[0135] [表 2] 被験試料中のブル一ベリー葉抽出物の濃度 （ /i g/m 1 )
0 62. 5 125 250 500
HuH-7細胞の生存率 ) 100. 0 9. 2 0. 6 <0 <0
HLE細胞の生存率 «) 100. 0 23. 1 <0 <0 <0
HLF細胞の生存率（« 100. 0 <0 0 5. 4 18. 6
[0136] 表 2及び図 17の結果から、ブルーベリ一葉の含水エタノール抽出物には、肝がん 細胞の増殖を抑制する非常に強い作用があることがわ力る。
[0137] (3)ヒト T細胞性白血病細胞（Jurkat, MOLT4)、 HTLV-1感染細胞（HUT102, MT2
)、及び成人 T細胞白血病細胞 (ATL細胞）（ED, Su9T01, SIT)に対する増殖抑制作 用
ブルーベリ一葉の含水エタノール抽出物（乾燥エキス）の、ヒト T細胞性白血病細胞 (Jurkat, MOLT4)、 HTLV- 1感染細胞（HUT102,MT2)、及び ATL細胞（ED,Su9T01, SIT)に対する増殖抑制作用を、 MTTアツセィを用いて評価した。なお、 HTLV-1 (Hu man T cell leukemia virus type 1)は、ヒトで初めて発見されたレトロウイルスのことで、 成人 T細胞白血病（ATL: Adult T cell leukemia)などを引き起こすとされている。なお 、 MTTアツセィは、 WST-8アツセィ同様、生細胞の数を測定する方法である。すなわ ち、 MTTアツセィで用いる MTT [3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H tetr azolium bromide]は黄色の化合物で、生細胞のミトコンドリアの呼吸鎖に作用し、存 在する酵素によってテトラゾリゥム環が開裂し、青色のホルマザンを生成する。この生 成されたホルマザン量が生細胞の数と比例することから、ホルマザンの吸光度を直接 測定することにより、生細胞数の測定ができるというものである。
[0138] 測定は、まず、ヒト T細胞性白血病細胞 (Jurkat, MOLT4)、 HTLV-1感染細胞（HU T102, MT2)、 ATL細胞（ED, Su9T01, SIT) (合計 7種類のがん細胞）の懸濁液（1 X 105cells/ml)をそれぞれ 99 1ずつ 96穴プレートに分注した。これに、予め終濃度が 3. 91 μ g/ml、 7.81 μ g/ml、 15.6 μ g/ml、 31.3 μ g/ml、 62.5 μ g/ml、 125 μ g/ml、 250 μ g/ ml及び 500 μ g/mlになるようにリン酸緩衝液 (PBS(-))で調整した抽出物を 1 μ 1ずつ 添加して (被験試料）、 37°C、 5%CO存在下、相対湿度 100%で 48時間培養した。次
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いで、 MTT試薬（商品名 MTT lyophilized、同仁化学研究所製）を 10 1カ卩えてさらに 4時間培養した後、 100 μ 1ずつ溶解液（0.04M/HC1/イソプロピルアルコール）をカロえ よくピペッティングし、色素を溶解した。その後 650應を対照波長とし 570應の吸光度 を測定した。
[0139] なお、上記被験試料に代えて、抽出物を添加しな 、リン酸緩衝液のみを用いて、上 記と同様にして生存細胞数を吸光度 (波長 570應）として測定した。これをコントロー ル（100%)として、それに対する百分率で、抽出物で処理した各種がん細胞の生存率 を求めた。
[0140] 7種類のがん細胞（Jurkat, MOLT4, HUT102, MT2, ED, Su9T01, SIT)に各種濃 度のブルーベリ一葉の含水エタノール抽出物を添加して 48時間培養した後の生存 率（％)を、表 3及び図 18に示す。
[0141] [表 3]
Figure imgf000037_0001
[0142] これらの結果から、ブルーベリ一葉の含水エタノール抽出物には、ヒト T細胞性白血 病細胞（Jurkat, M0LT4)、 HTLV-1感染細胞（HUT102, MT2)及び成人 T細胞白血 病細胞（ED, Su9T01, SIT)の増殖を抑制する強い作用があることがわかった。
[0143] 試験例 7 ブルーベリーの葉または果実のがん細胞増殖抑制試験
(1)調製例 2に記載する方法に従って調製したブルーベリ一葉 (ラビットアイブルーべ リー種:ホームベル (14))の含水エタノール抽出物（乾燥エキス）、および比較例 1(2-1 )に記載する方法に従って調製したブルーベリ一葉の含水エタノール抽出物（乾燥 エキス）を用いて、ヒト急性前骨髄性白血病細胞 (HL60)に対する細胞増殖抑制作用 を、試験例 6 (1)と同様に WST-8アツセィにて評価した。
[0144] アツセィは、まず、各抽出物（乾燥エキス）を、終濃度が 62.5 μ g/ml、 125 μ g/ml、 25 0 μ g/ml、または 500 μ g/mlになるようにリン酸緩衝液〔PBS( -)〕で希釈し (被験試料、 比較試料）、 1 1ずつ 96穴プレートに分注した。ここにヒト急性前骨髄性白血病細胞（ HL60)の懸濁液（1 X 105cells/ml)を 100 μ 1ずつ加えて混合し、 37°C、 5%CO存在下
2
、相対湿度 100%で 48時間培養した。次いで WST- 8混合試薬（商品名： Tetra Color ONE, SEIKAGAKU CORPORATION社製）を 10 1カ卩えてさらに 4時間培養後、 650η mを対照波長として 450nmの吸光度を測定した。なお、上記被験試料または比較試 料に代えて、抽出物（乾燥エキス）を添加しないリン酸緩衝液のみを用いて、上記と 同様にして生存 HL60細胞数を、吸光度 (波長 450nm)として測定した。これをコント口 ールとして、それに対する百分率で、各抽出物で処理した HL60細胞の生存率を求 めた。
[0145] 結果を図 19に示す。図 19に示すように、ブルーベリー果実の含水エタノール抽出 物（図中、 〇一で示す）に比べて、ブルーベリ一葉の含水エタノール抽出物（図中 、 一國一で示す）には、ヒト急性前骨髄性白血病細胞 (HL60)に対して高 、増殖抑制 作用が認められた。
[0146] (2)上記（1)と同様に、ブルーベリ一葉または果実力 調製した含水エタノール抽 出物（乾燥エキス）を終濃度 4 μ g/ml、 20 μ g/ml、 100 μ g/ml, 500 μ g/mlに調整し、ヒ ト肝がん細胞 (HLE)を用いて、がん細胞増殖抑制作用を WST-8アツセィにて評価し た。結果を図 20に示す。図 20に示すように、ブルーベリ一葉の含水エタノール抽出 物（図中、ー國一で示す）には、ヒト肝がん細胞の増殖を抑制する非常に強い作用が あるのに対し、ブルーベリー果実の含水エタノール抽出物（図中、 〇一で示す）に は、その作用はほとんど認められな力つた。
[0147] (3)上記（1)と同様に、ブルーベリ一葉または果実力も調製した含水エタノール抽 出物（乾燥エキス）のがん細胞増殖抑制作用を、ヒト T細胞性白血病細胞 (Jurkat, M 0LT4)、 HTLV-1感染細胞（HUT102, MT2)、及び ATL細胞（ED, Su9T01, SIT)を用 いて、 MTTアツセィにて評価した。結果を図 21に示す。図 21〖こ示すよう〖こ、ブルーべ リー果実の含水エタノール抽出物（図中、 〇一で示す）に比べて、ブルーベリ一葉 の含水エタノール抽出物（図中、ー國一で示す）には、上記 7種類の細胞のいずれに 対しても高 、増殖抑制作用が認められた。 [0148] 試験例 8 アポトーシス誘導効果
調製例 2に記載する方法に従って調製したブルーベリ一葉 (ラビットアイブルーベリ 一種：ホームベル (14))の含水エタノール抽出物の乾燥エキスを用いて、 ATL細胞（S U9T01および S1T細胞)増殖抑制および細胞致死効果を、トリパンブルー色素排除法 により検討した。測定は、 2種類の ATL細胞 (Su9T01および S1T細胞)懸濁液（1 X 105 cells/ml)を 1 mLずつ分注した 24穴プレートに、上記抽出物（乾燥エキス）の DMSO希 釈物を、終濃度が 0 μ g/ml、 12.5 μ g/ml、 25 μ g/ml、 50 μ g/ml、 100 μ g/ml、または 20 0 /z g/ml〖こなるよう〖こ添加して、 37°C、 5%CO存在下、相対湿度 100%の条件下で、 24
2
および 48時間培養することによって行った。なお、上記培養液中の DMSOは終濃度 力 1%となるように調整した。
[0149] 表 4及び図 22に各種濃度のブルーベリ一葉の乾燥エキスを用いて S1T細胞を培養 した後（24または 48時間）の生細胞の数 (cells/ml)と生存率（％)を示す。
[0150] [表 4]
24時間培養
Figure imgf000039_0001
[0151] また、表 5及び図 23に各種濃度のブルーベリ一葉の含水エタノール抽出物を用い て Su9T01細胞を培養した後（24または 48時間）の生細胞の数 (cells/ml)と生存率（％ )を示す。
[0152] [表 5] 2 時間培養
Figure imgf000040_0001
[0153] アポトーシスの評価として、 Annexin V染色法を用いた。細胞 Su9T01細胞を用い、 3 7°C、 5%CO存在下、相対湿度 100%でブルーベリ一葉含水エタノール抽出物（乾燥ェ
2
キス）の終濃度が 0 μ g/ml (未処理)または 50 μ g/mlになるように 24時間培養した。培 養終了後、細胞は PBSで洗浄後、 Annexin V- FITC染色キット (Immunotech, PN I 3 546)を用いてアポトーシス細胞の染色を行い、フローサイトメーターにより測定を行つ た。結果を図 24に示す。図 24中、 B4画分に示す細胞集団がアポトーシス陽性細胞 (Annexin V陽性かつ Propidium iodide陰性）の集団である。図 24によると、 0 μ g/ml( 未処理）および 50 μ g/mlブルーベリ一葉抽出物を添加して Su9T01細胞を 24時間培 養した後のアポトーシス陽性細胞の割合はそれぞれ 5.1%および 34.33%であった。この ことから、ブルーベリ一葉は、 ATL細胞にアポトーシスを介した細胞死を誘導している ことがわ力ゝる。
産業上の利用可能性
[0154] 本発明の C型肝炎ウィルス産生抑制剤は、医薬及び機能性飲食物として利用可能 である。医薬としては、従来力 治療が難しいとされている肝がん、特に慢性肝炎か ら肝硬変、肝がんへの進行抑制に有効に利用できる。また機能性飲食物としても、同 様の効果が期待できる。本発明の C型肝炎ウィルス産生抑制剤は、ブルーベリーの 葉という天然食用植物を有効成分とするため、 IFNに比べると副作用が少ないため、 安全に長期にわたって服用できる飲食物の分野での利用可能性が、特に高い。
[0155] 本発明のがん細胞またはがん発症性ウィルス感染細胞に対する増殖抑制剤は、従 来力も治療が難し 、とされて 、る肝がんや白血病（中でも治療が難 U、成人 T細胞 白血病）の改善及び予防に有効に利用することができるものである。
[0156] 本発明の C型肝炎ウィルス産生抑制剤、がん細胞増殖抑制剤、およびこれらを有 効成分として含む組成物は、天然の食用植物に由来する成分を有効成分とするもの であるため、医薬品や長期にわたって服用される飲食物としても安全に用いることが できる。
図面の簡単な説明
[0157] [図 1]ブルーベリ一葉の 80%エタノール抽出物による HCVレプリコン RNA産生抑制試 験（一口-)および細胞毒性試験（-參 -)の結果を示すグラフである。グラフ中、縦 軸はコントロール試料のルシフェラーゼ活性（HCVレプリコン RNA産生量を反映する） または生細胞数を 100%とした場合の、被験試料のルシフェラーゼ活性 (HCVレプリ コン RNA産生量)または生細胞数を百分率で示したものである（以下、図 2〜13にお いて同じ)。
[図 2]ブルーベリー果実の 80%エタノール抽出物による HCVレプリコン RNA産生抑制 試験（一口一）および細胞毒性試験（ー參一）の結果を示すグラフである。
[図 3]キナ酸による HCVレブリコン RNA産生抑制試験（一口一）および細胞毒性試験（ —拳-)の結果を示すグラフである。
[図 4]クロロゲン酸による HCVレブリコン RNA産生抑制試験（一口一）および細胞毒性 試験（-參 -)の結果を示すグラフである。
[図 5]インターフェロンによる HCVレプリコン RNA産生抑制試験（一口一）および細胞 毒性試験（ー參一）の結果を示すグラフである。
[図 6]ブルーベリ一葉の 80%エタノール抽出物による HCVレプリコン RNA産生抑制試 験（—口—）および細胞毒性試験（—拳—）の結果を示すグラフである。
[図 7]ブルーベリ一葉の水抽出物による HCVレブリコン RNA産生抑制試験（一口一） および細胞毒性試験（ー參一）の結果を示すグラフである。
[図 8]ブルーベリ一葉の熱水抽出物による HCVレプリコン RNA産生抑制試験（一口 )および細胞毒性試験（ー參一）の結果を示すグラフである。
[図 9]緑茶葉の水抽出物による HCVレブリコン RNA産生抑制試験（一口一）および細 胞毒性試験（—拳—）の結果を示すグラフである。
[図 10]緑茶葉の熱水抽出物による HCVレブリコン RNA産生抑制試験（一口-)およ び細胞毒性試験の結果を示すグラフである。
[図 11]ブルーベリ一葉の 80%エタノール抽出物による HCVレプリコン RNA産生抑制試 験および細胞毒性試験（ー參一）の結果を示すグラフである。
[図 12]ブルーベリ一葉の酢酸ェチル抽出物による HCVレプリコン RNA産生抑制試験
(-□-)および細胞毒性試験（—拳—）の結果を示すグラフである。
[図 13]ブルーベリ一葉のアセトン抽出物による HCVレプリコン RNA産生抑制試験（一
□ - )および細胞毒性試験（—拳—）の結果を示すグラフである。
[図 14]ブルーベリ一葉の品種間による HCVレブリコン RNA産生抑制効果と細胞毒性 作用を比較した結果を示したグラフである。図中、黒色棒 (C50)は、生細胞数が 50% となるときの抽出物濃度、灰色棒 (L50)はルシフェラーゼ活性が 50%となるときの抽 出物濃度を示す (図 15も同じ)。
[図 15]ブルーベリ一生葉の乾燥温度の違いによる HCVレプリコン RNA産生抑制効果 と細胞毒性作用を比較した結果を示したグラフである。
[図 16]ブルーベリ一葉の 80%エタノール抽出物の、ヒト急性前骨髄性白血病細胞（HL 60)に対する増殖抑制効果を示すグラフである。
[図 17]ブルーベリ一葉の 80%エタノール抽出物の、ヒト肝がん細胞に対する増殖抑制 効果を示すグラフである。
[図 18]ブルーベリ一葉の 80%エタノール抽出物の、ヒト T細胞性白血病細胞（Jurkat, MOLT4)、 HTLV-1感染細胞（HUT102, MT2)及び ATL細胞（ED, Su9T01, SIT)に 対する増殖抑制効果を示すグラフである。
[図 19]ブルーベリ一葉（一國ー）及びブルーベリー果実（一〇一）の 80%エタノール抽 出物の、ヒト急性前骨髄性白血病細胞 (HL60)に対する細胞増殖抑制効果を対比し たグラフである。
[図 20]ブルーベリ一葉（一國ー）及びブルーベリー果実（一〇一）の 80%エタノール抽 出物の、ヒト肝がん細胞に対する増殖抑制効果を対比したグラフである。
[図 21]ブルーベリ一葉（一國ー）及びブルーベリー果実（一〇一）の 80%エタノール抽 出物の、ヒト T細胞性白血病細胞（Jurkat, MOLT4)、 HTLV-1感染細胞（HUT102, M T2)、及び ATL細胞 (ED, Su9T01, SIT)に対する細胞増殖抑制効果を対比したダラ フである。
[図 22]各種濃度のブルーベリ一葉の 80%エタノール抽出物を用いて ATL細胞（S1T) を培養した後（24時間または 48時間）の生細胞数 (cells/ml)と細胞生存率 (％)を示 す図である。
[図 23]各種濃度のブルーベリ一葉の 80%エタノール抽出物を用いて ATL細胞（Su9T0 1)を培養した後（24時間または 48時間）の生細胞数 (cells/ml)と細胞生存率 (％)を 示す図である。
[図 24]ATL細胞（Su9T01)を用いてフローサイトメーターにより、ブルーベリ一葉の 80% エタノール抽出物のアポトーシス誘導作用を調べた結果を示す図である。

Claims

請求の範囲
[I] ブルーベリ一葉の加工処理物を有効成分とする C型肝炎ウィルス産生抑制剤。
[2] ブルーベリーがラビットアイブルーベリーである請求項 1記載の C型肝炎ウィルス産 生抑制剤。
[3] ブルーベリ一葉の加工処理物力 ブルーベリ一葉の粉砕物、搾汁および溶媒抽出 物からなる群力 選択される少なくともひとつである請求項 1記載の C型肝炎ウィルス 産生抑制剤。
[4] 請求項 1記載の C型肝炎ウィルス産生抑制剤を有効成分として含む組成物。
[5] ブルーベリ一葉の加工処理物を有効成分とする、肝がん細胞、白血病細胞および
HTLV-1感染細胞力 なる群力 選択される少なくとも 1つの細胞を抑制する細胞増 殖抑制剤。
[6] ブルーベリーがラビットアイブルーベリーである請求項 5記載の細胞増殖抑制剤。
[7] ブルーベリ一葉の加工処理物力 ブルーベリ一葉の粉砕物、搾汁および溶媒抽出 物からなる群力 選択される少なくともひとつである請求項 5記載の細胞増殖抑制剤
[8] 請求項 5記載の細胞増殖抑制剤を有効成分として含む組成物。
[9] ブルーベリ一葉の加工処理物を有効成分とする抗肝疾患用組成物。
[10] ブルーベリーがラビットアイブルーベリーである請求項 9記載の抗肝疾患用組成物
[II] ブルーベリ一葉の加工処理物力 ブルーベリ一葉の粉砕物、搾汁および溶媒抽出 物からなる群力 選択される少なくともひとつである請求項 9記載の抗肝疾患用組成 物。
[12] C型肝炎またはそれに起因して生じる肝疾患の予防または治療用の組成物である
、請求項 9記載の抗肝疾患用組成物。
[13] 肝疾患の予防または治療用の医薬品である、請求項 9記載の抗肝疾患用組成物。
[14] 肝疾患の予防用の食品である、請求項 9記載の抗肝疾患用組成物。
[15] ブルーベリ一葉の加工処理物を有効成分とする抗白血病用組成物。
[16] ブルーベリーがラビットアイブルーベリーである請求項 15記載の抗白血病用組成 物。
[17] ブルーベリ一葉の加工処理物力 ブルーベリ一葉の粉砕物、搾汁および溶媒抽出 物からなる群力も選択される少なくともひとつである請求項 15記載の抗白血病用組 成物。
[18] 白血病予防または治療用の医薬品である、請求項 15記載の抗白血病用組成物。
[19] 白血病予防用の食品である、請求項 15記載の抗白血病用組成物。
[20] ブルーベリ一葉を 30〜50°Cの範囲内で乾燥し、次いで溶媒抽出して調製され るブルーベリ一葉の溶媒抽出物を有効成分として配合する工程を有する、請求項 1 または 5に記載する抑制剤の調製方法。
[21] ブルーベリ一葉を 30〜50°Cの範囲内で乾燥し、次いで溶媒抽出して調製され るブルーベリ一葉の溶媒抽出物を有効成分として配合する工程を有する、請求項 9 または 15に記載する組成物の調製方法。
[22] ブルーベリ一葉の加工処理物の、 C型肝炎ウィルス産生抑制剤の調製のための使 用。
[23] ブルーベリ一葉の加工処理物の、肝がん細胞、白血病細胞および HTLV-1感染細 胞力 なる群力 選択される少なくとも 1つの細胞を抑制する細胞増殖抑制剤の調製 のための使用。
[24] ブルーベリ一葉の加工処理物の、抗肝疾患用組成物の調製のための使用。
[25] ブルーベリ一葉の加工処理物の、抗白血病用組成物の調製のための使用。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008137879A (ja) * 2005-12-19 2008-06-19 Tdk Corp フェライト磁性材料
JP2010273650A (ja) * 2009-05-29 2010-12-09 Shimane Prefecture α−リノレン酸およびロスマリン酸を高度に保持した植物茎葉乾燥粉末の製造方法。

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1992012635A1 (en) * 1991-01-18 1992-08-06 Oncogene Science, Inc. Methods of transcriptionally modulating gene expression of viral genes and other genes
WO1997041137A1 (en) * 1996-04-17 1997-11-06 Unifob Use of anthocyanidin and anthocyanidin derivatives

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1992012635A1 (en) * 1991-01-18 1992-08-06 Oncogene Science, Inc. Methods of transcriptionally modulating gene expression of viral genes and other genes
WO1997041137A1 (en) * 1996-04-17 1997-11-06 Unifob Use of anthocyanidin and anthocyanidin derivatives

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BA SHINTEI ET AL.: "Cyanidin-3-Glucoside (C3G) o Shuseibun to suru Kurodaizu Shuhi Chushutsubutsu no Apoptosis Yudo Sayo", THE JAPANESE SOCIETY OF NUTRITION AND FOOD SCIENCE NISHINIHON SHIBU PROGRAM KOEN YOSHISHU, vol. 2003, 2003, pages 45, XP003007252 *
HAMAMATSU, SHIOKA ET AL.: "Compositions of anthocyanin and other flavonoids in cultured cells of rabbiteye blueberry (Vaccinium ashei Reade cv. Tifblue)", FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY RESEARCH, vol. 10, no. 3, 2004, pages 239 - 246, XP003007251 *
HUSSEIN G. ET AL.: "Inhibitory effects of Sudanese medicinal plant extracts on hepatitis C virus (HVC) protease", PHYTOTHERAPY RESEARCH, vol. 14, no. 7, 2000, pages 510 - 516, XP001016187 *
KIM J.H. ET AL.: "Induction of quinone reductase and glutathione S-transferase in murine hepatoma cells by flavonoid glycosides", JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND NUTRITION, vol. 8, no. 4, 2003, pages 365 - 371, XP003007254 *
KIM S.Y. ET AL.: "Two flavonoids from the leaves of Morus alba induce differentiation of the human promyelocytic leukemia (HL-60) cell line", BIOLOGICAL & PHARMACEUTICAL BULLETIN, vol. 23, no. 4, 2000, pages 451 - 455, XP003007255 *
XIONG Q. ET AL.: "Hepatoprotective effect of Apocynum venetum and its active constituents", PLANTA MEDICA, vol. 66, no. 2, 2000, pages 127 - 133, XP002979345 *
YAMADA Y.: "Murasaki Kokumai O.sativa to Beniimo I.batatas ni Yurai suru Anthocyanin no Gan Saibo Zoshoku Yokusei Koka", JAPAN SOCIETY FOR BIOSCIENCE, BIOTECHNOLOGY, AND AGROCHEMISTRY TAIKAI KOEN YOSHISHU, vol. 2005, 5 March 2005 (2005-03-05), pages 105, XP003007253 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008137879A (ja) * 2005-12-19 2008-06-19 Tdk Corp フェライト磁性材料
JP2010273650A (ja) * 2009-05-29 2010-12-09 Shimane Prefecture α−リノレン酸およびロスマリン酸を高度に保持した植物茎葉乾燥粉末の製造方法。

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