KR102428082B1 - 항염증 면역활성 및 항산화 활성을 가지며, 노인의 근력 또는 근육 강화를 위한 근세포 조성에 우수한 효과를 제공하는 프테로카리아 스테놉테라 추출물을 포함하는 화장료 조성물, 약학적 조성물, 및 식품 조성물 - Google Patents
항염증 면역활성 및 항산화 활성을 가지며, 노인의 근력 또는 근육 강화를 위한 근세포 조성에 우수한 효과를 제공하는 프테로카리아 스테놉테라 추출물을 포함하는 화장료 조성물, 약학적 조성물, 및 식품 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 프테로카리아 스테놉테라(Pterocarya stenoptera C. DC.) 에탄올 추출물을 포함하는 항염증 면역활성 및 항산화 활성을 갖는 화장료 조성물, 약학적 조성물 및 식품 조성물에 관한 것이다.
Description
본 발명은 항염증 면역활성 및 항산화 활성을 가지며, 노인의 근력 또는 근육 강화를 위한 근세포 조성에 우수한 효과를 제공하는 프테로카리아 스테놉테라 추출물을 포함하는 화장료 조성물, 약학적 조성물, 및 식품 조성물에 관한 것이다.
최근 국민 소득의 향상 및 급격한 경제 성장으로 인하여, 영양과다, 운동부족, 과도한 음주 그리고 심한 흡연 등과 같은 건강 위협 요인들에 대한 노출 가능성이 높아지고 있다. 따라서, 이로 인해 생기기 쉬운 질병 예방 및 회복, 노화 억제 등을 위한 기능성 건강제품에 대한 관심이 점차 높아지고 있다(Oh et al., 2016).
노화와 질병은 인체대사 중 산화반응에 기인하며, 이 과정 중에 만들어지는 활성산소는 불안정하고 산화력이 높아 생체 내 물질과 쉽게 반응하기 때문에 산화적 스트레스를 유발하게 된다. 이러한 산화적 스트레스는 단백질, 탄수화물 지질 및 DNA와 반응하여 여러 조직의 세포를 손상시켜 당뇨, 비만, 동맥경화, 치매 등 다양한 질병을 유발할 수 있다(Kim et al., 2008).
항산화 물질은 체내 생성 활성산소에 의한 동맥경화, 암 및 염증의 예방과 감소에 기여하는 것으로 알려지고 있다. 이에 활성산소를 조절하거나 제거하는 능력을 지닌 생리활성물질에 대한 연구의 필요성이 대두되면서 천연물을 이용한 바이오 건강 소재 개발 연구가 활발히 진행되고 있다(Seo et al. 2011).
여러 원인들에 의해 발병하는 성인병 질환들은 염증성 질환의 성격을 많이 가지고 있다. 염증은 세균 감염, 화학물질 등에 대해 생체가 재생이나 회복 등을 하기 위한 방어적 반응으로 나타내는 증세이다(Kawamata et al. 2000). 이 과정에서 활성산소 nitric oxide (NO)는 외부 균감염이나 cytokines 등에 의해 대식세포와 같은 면역세포에 의해 생성되어 각종 생리 및 병리적 과정에 있어 중요한 역할을 한다(Aktan 2004). 하지만 과도하게 생성된 NO는 체내 부작용을 일으켜 염증반응을 과도하게 촉진시킬 뿐만 아니라 지속적인 만성염증 반응은 인체조직의 손상 및 유전자 변이 등을 촉진시켜, 관절염, 동맥경화 및 암 등을 일으킨다고 보고되고 있다(Liao et al. 2011).
최근에 개발된 염증성 질환을 치료하는 항염증 면역활성제로 사용되는 약제는 신장염, 위염, 심장질환 등을 초래함으로써 인체 안전성 측면에서 문제점을 안고 있어, 보다 안전한 맞춤형 항염증 면역활성 치료후보제 소재를 식물 천연물에서 찾는 연구가 활발하게 이루어지고 있다(Dogne et al. 2006).
한편, 활성산소(oxygen radical)는 생체의 가장 기본 성분인 단백질, 지방, 핵산 등을 무차별 파괴시킴으로써 인체의 주요 세포들 특히 근육세포, 면역세포와 같은 여러 조직의 세포들의 기능을 상실케 하여 노화를 야기 시키고, 동시에 근감소증, 관절염, 골다공증 등 여러 주요 노인성 질병들을 발생시킨다. 특히 노화과정에서 말초 조직에는 저산소증이 쉽게 발생하고, 이것이 말초 조직의 미토콘드리아에서 ATP의 생성을 저하시킨다. 따라서, ATP 생성 저하로 인해 세포의 기능이 잘 유지되지 못하게 되고, 결국 세포사가 발생하며, 죽은 세포를 제거하기 위해 염증세포들이 모여들게 된다. 또한 상기 염증세포들이 분비하는 염증 매개 물질들에 의해 미세염증이 유발되고 이 염증들이 축적되면서 노화현상이 더욱 더 촉진된다.
그러므로, 의료복지 비용절감의 측면에서, 노화 및 근감소증 등 노인성질환을 감소시키는 방안으로, 항산화 효능과 항염증 효능을 동시에 가지며, 인체에 안전한 새로운 기능성 소재의 탐색 및 개발이 요구되고 있다.
본 발명은 항염증 면역활성 및 항산화능이 우수한 식물 추출물을 포함함으로써, 인체에 안전하며 우수한 항염증 면역활성 및 항산화 효능을 갖는 화장료 조성물, 약학적 조성물, 및 식품 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
특히, 우수한 항염증 면역활성 및 항산화 효능으로 인하여 노인의 근력 또는 근육 강화를 위한 근세포 조성에 우수한 효과를 제공하는 약학적 조성물 및 식품 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명은
프테로카리아 스테놉테라(Pterocarya stenoptera C. DC.) 에탄올 추출물을 포함하는 항염증 면역활성 및 항산화 활성을 갖는 화장료 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은
프테로카리아 스테놉테라(Pterocarya stenoptera C. DC.) 에탄올 추출물을 포함하는 염증성 질환 또는 활성산소로 인해 발생하는 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은
프테로카리아 스테놉테라(Pterocarya stenoptera C. DC.) 에탄올 추출물을 포함하는 항염증 면역활성 및 항산화 활성을 갖는 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 화장료 조성물, 약학적 조성물, 및 식품 조성물은 식물 성분인프테로카리아 스테놉테라(Pterocarya stenoptera C. DC.) 에탄올 추출물을 포함함으로써 인체에 안전하며, 우수한 항염증 면역활성 및 항산화 활성을 제공한다.
특히, 본 발명의 약학적 조성물 및 식품 조성물은 우수한 항염증 면역활성 및 항산화 효능으로 인하여 노인의 근력 또는 근육 강화를 위한 근세포 조성에 우수한 효과를 제공한다.
도 1 내지 3은 실험예 1에서 실시된 항산화 효능 테스트 결과를 나타낸 그래프이며,
도 4 내지 6은 실험예 2에서 실시된 항염증 면역활성 효능 테스트 결과를 나타낸 그래프이며,
도 7 내지 9는 실험예 3에서 실시된 세포 독성 테스트 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4 내지 6은 실험예 2에서 실시된 항염증 면역활성 효능 테스트 결과를 나타낸 그래프이며,
도 7 내지 9는 실험예 3에서 실시된 세포 독성 테스트 결과를 나타낸 그래프이다.
이하에서 본 발명을 자세하게 설명한다.
본 발명은 프테로카리아 스테놉테라(Pterocarya stenoptera C. DC.) 에탄올 추출물을 포함하는 항염증 면역활성 및 항산화 활성을 갖는 조성물을 제공한다.
상기 조성물은 항염증 면역활성 및 항산화 활성을 갖는 화장료 조성물, 염증성 질환 또는 활성산소로 인해 발생하는 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물, 항염증 면역활성 및 항산화 활성을 갖는 식품 조성물일 수 있다.
상기 조성물은 가르시니아 코와(Garcinia cowa Roxb .) 에탄올 추출물 및 나제이아 플루리(Nageia fleuryi ( Hickel ) de Laub) 에탄올 추출물 중에서 선택되는 1종 이상의 성분을 더 포함할 수 있다.
프테로카리아 스테놉테라(Pterocarya stenoptera C. DC.)는 쌍떡잎 식물 가래나무목 가래나무과의 낙엽교목으로 개굴피나무속 중국굴피나무로 열매가 열린다. 영문으론 Chinese Wingnut으로 불린다.
상기 가르시니아 코와(Garcinia cowa Roxb .)는 동남아지역 자생하는 열대식물로 체내 지방 생성을 억제해 체중감량을 유도하거나 뇌에서 세로토닌 분비를 증가시켜 식욕을 억제하는 기능 성분(HCA; hydroxycitric acid)이 껍질에 들어있다고 알려져 있다.
상기 나제이아 플루리(Nageia fleuryi ( Hickel ) de Laub)는 중국남부, 캄보디아, 라오스, 베트남 등 동남아 지역 자생하는 식물이다.
하기 실험예의 DPPH 분석에 따르면, 상기 프테로카리아 스테놉테라의 에탄올 추출물은 비타민 C 대조군에 비해 33.53% 더 높은 활성 산소 억제 활성을 가질 수 있다. 가르시니아 코와와 나제이아 플루리 에탄올추출물은 비타민 C 대조군보다는 낮지만 활성 산소 억제 활성을 나타낸다.
또한, 하기 실험예의 항염증 면역활성 측정을 위해 생성 산화질소를 분석한 결과에 따르면, 프테로카리아 스테놉테라, 가르시니아 코와 및 나제이아 플루리 에탄올 추출물은 LPS 대조군과 비교하여 각각 19.9%, 16.06% 및 48.70% 더 많은 항염증 면역활성을 나타낸다.
또한, 하기 실험예의 세포 독성을 결정하기 위한 MTT 분석 결과에 의하면, 프테로카리아 스테놉테라 및 가르시니아 코와 에탄올 추출물은 LPS 대조군과 비교하여 2.60%, 4.60% 강한 세포 독성을 보이며, 나제이아 플루리의 에탄올 추출물은 LPS 대조군에 비해 29.30% 더 강한 세포 독성을 나타낸다. 그러나, 이들 추출물을 사용하는 데에는 문제가 없는 것으로 확인된다.
상기와 같은 결과에 따르면, 프테로카리아 스테놉테라 에탄올 추출물이 상당히 우수한 활성산소억제활성을 가지며, 비교적 낮은 세포 독성을 가지고 있음을 나타낸다. 따라서 프테로카리아 스테놉테라가 에탄올 추출물은 항염증 면역활성을 갖는 잠재적 항산화제 치료제로 사용될 수 있을 것으로 보인다.
상기 프테로카리아 스테놉테라 에탄올 추출물은 프테로카리아 스테놉테라 잎 을 에탄올에 넣고 섭씨 25도에서 15시간 동안 추출한 후, 에탄올을 증발시켜서 분말 형태로 제조할 수 있다.
상기 가르시니아 코와 에탄올 추출물은 가르시니아 코와 잎을 에탄올에 넣고 섭씨 25도에서 15시간 동안 추출한 후, 에탄올을 증발시켜서 분말 형태로 제조할 수 있다.
상기 나제이아 플루리 에탄올 추출물은 나제이아 플루리 잎을 에탄올에 넣고 섭씨 25도에서 15시간 동안 추출한 후, 에탄올을 증발시켜서 분말 형태로 제조할 수 있다.
본 발명에서 상기 에탄올의 농도는 특별히 한정되지 않으나, 바람직하게 20 내지 80%(w/w), 더욱 바람직하게 70%(w/w) 에탄올 수용액이 사용될 수 있다.
상기에서 프테로카리아 스테놉테라 에탄올 추출물과, 가르시니아 코와 에탄올 추출물 및 나제이아 플루리 에탄올 추출물 중에서 선택되는 1종 이상은 1~3 : 1~3의 중량비로 포함될 수 있으며,
상기 가르시니아 코와 에탄올 추출물 및 나제이아 플루리 에탄올 추출물이 모두 포함되는 경우, 이들은 3:7 내지 7:3의 중량비로 포함될 수 있다.
상기 프테로카리아 스테놉테라(Pterocarya stenoptera C. DC.) 에탄올 추출물은 10 내지 20 %(w/v) 농도로 사용되는 것이 바람직할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조될 수 있다. 상기 유화 제형으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등을 들 수 있으며, 상기 가용화 제형으로는 유연화장수 등을 들 수 있다.
상기 화장료 조성물의 적합한 제형은 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱, 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태일 수 있으나, 이에 제한되는 것 아니다.
상기 화장료 조성물은 추가적으로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제, 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장료 조성물에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 항염증 면역활성 효과 및 활성산소를 제거하는 항산화 효과를 갖기 때문에, 염증성 질환들 또는 활성산소로 인해 발생하는 질환들의 예방, 개선 및 치료에 사용될 수 있다.
상기 염증성 질환은 염증을 주병변으로 하는 질병을 총칭하는 의미로서, 이에 제한되지는 않으나, 알러지성 천식, 알러지성 비염, 알러지성 점막염, 두드러기 및 아나필락스(anaphylax)를 포함하는 알러지성 질환, 경피증(systemic sclerosis), 피부근염(dermatomyositis) 및 포함체 근육염(inclusion body myositis)을 포함하는 근병증, 관절염, 아토피성 피부염, 건선, 천식, 다발성 경화증, ssRNA 및 dsRNA 바이러스 감염증, 패혈증, 다발성 연골염, 경피증, 습진, 통풍, 치주질환, 베체트 증후군, 부종, 맥관염, 가와사키병, 당뇨병성 망막염, 자가 면역 췌장염, 혈관염, 사구체 신염, 급성 및 만성 기관지염, 및 인플루엔자 감염증일 수 있다.
상기 활성산소로 인해 발생하는 질환은 이에 제한되지는 않으나, 동맥경화증, 루게릭병, 파킨슨병, 알츠하이머, 근위축색경화증 및 헌팅톤병을 포함하는 퇴행성 신경질환, 심근경색, 협심증, 관상동맥질환, 허혈성 심장질환을 포함하는 심혈관 질환, 뇌졸중을 포함하는 허혈성 뇌질환, 노화 등 다양한 질환을 포함할 수 있으며, 구체적으로 활성산소에 의해 발생되는 노화일 수 있다.
상기 본 발명의 약학조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 용어 "약학적으로 허용가능한"이란 상기 조성물에 노출되는 세포나 인간에게 독성이 없는 특성을 나타내는 것을 의미한다. 상기 담체는 완충제, 보존제, 무통화제, 가용화제, 등장제, 안정화제, 기제, 부형제, 윤활제 등 당업계에 공지된 것이라면 제한없이 사용할 수 있다.
또한, 본 발명의 약학조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 나아가, 연고제, 로션제, 스프레이제, 패취제, 크림제, 산제, 현탁제, 겔제 또는 젤의 형태의 피부 외용제의 형태로 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.
경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 프테로카리아 스테놉테라 에탄올 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다.
경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.
좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명의 용어 "투여"란, 적절한 방법으로 개체에게 소정의 물질을 도입하는 것을 의미하며 상기 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 국소 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
상기 용어 "개체"란 는 인간을 포함한 쥐, 생쥐, 가축 등의 모든 동물을 의미한다. 바람직하게는, 인간을 포함한 포유동물일 수 있다.
상기 용어 "약학적으로 유효한 양"이란 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분하며 부작용을 일으키지 않을 정도의 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 성별, 연령, 체중, 건강상태, 질병의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 방법, 투여 시간, 투여 경로, 및 배출 비율, 치료 기간, 배합 또는 동시에 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 투여는 상기 권장 투여량을 하루에 한 번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다.
본 발명의 식품 조성물은 상기 프테로카리아 스테놉테라 에탄올 추출물을 그대로 사용하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용하여, 통상의 방법에 따라 적절하게 제조될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있으며, 식품학적으로 허용가능한 식품 보조 첨가제를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물은 천연물로부터 유래한 추출물을 유효성분으로 하므로 안정성 면에서 문제가 없기 때문에 혼합량에 큰 제한은 없다.
본 발명의 식품 조성물은 통상적인 의미의 식품을 모두 포함할 수 있으며, 기능성 식품, 건강기능식품 등 당업계에 알려진 용어와 혼용 가능하다.
본 발명의 용어 "기능성 식품"은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.
또한, 본 발명의 용어 "건강기능식품"은 건강보조의 목적으로 특정성분을 원료로 하거나 식품 원료에 들어있는 특정성분을 추출, 농축, 정제, 혼합 등의 방법으로 제조, 가공한 식품을 말하며, 상기 성분에 의해 생체방어, 생체리듬의 조절, 질병의 방지와 회복 등 생체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발휘할 수 있도록 설계되고 가공된 식품을 말하는 것으로서, 상기 건강식품용 조성물은 질병의 예방 및 질병의 회복 등과 관련된 기능을 수행할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물이 사용될 수 있는 식품의 종류에는 제한이 없다. 아울러 본 발명의 식품 조성물에는 당업자의 선택에 따라 식품에 함유될 수 있는 적절한 기타 보조 성분과 공지의 첨가제가 포함될 수 있다.
상기 보조 성분의 예로는 육류, 소세지, 빵, 초콜렛, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림 류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있다.
또한, 본 발명에 적용될 수 있는 식품에는 예컨대, 특수영양식품(예: 노인 영양식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예: 라면류, 국수류 등), 건강보조식품, 조미식품(예: 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예:스낵류), 유가공품(예: 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예: 과실, 채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료(예, 라면스프 등) 등 모든 식품을 포함할 수 있다.
본 발명의 건강기능식품 조성물이 음료의 형태로 사용될 경우에는 통상의 음료와 같이 여러 가지 감미제, 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 외에 본 발명의 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 천연 과일주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
이하에서, 제조예 및 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명한다. 그러나, 하기의 실시예는 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 하기의 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다. 하기의 실시예는 본 발명의 범위 내에서 당업자에 의해 적절히 수정, 변경될 수 있다.
[
실시예
]
(1) 시료
아열대 지방 원산지인 식물 프테로카리아 스테놉테라(Pterocarya stenoptera C. DC.), 가르시니아 코와(Garcinia cowa Roxb .) 및 나제이아 플루리(Nageia fleuryi ( Hickel ) de Laub .)는 한국생명공학연구원(KRIBB) 바이오의약인프라사업부 해외생물소재센터(IBMRC)로부터 구했다.
(2) 세포배양
Mouse 대식세포 RAW 264.7는 한국세포주연구재단 한국세포주은행로부터 구하였다. 배지 DMEM, 10% 혈청, 10 mg/L 페니실린, 글루타맥스, 히피스(HEPES) 버퍼(GIBCO, U.S.)를 이용하여, 섭씨 37도, 5% 탄산가스 배양기를 사용하여 세포를 배양하였다. 세포 안전성을 측정하기위해, SIGMA에서 MTT를 구하였고, DMSO와 Griess 시약도 SIGMA에서 구입하였다.
(3) 통계처리
하기 실험은 각각 세 번 반복해서 처리했고, EXCEL 2013 이용해 통계분석을 수행하였다(p값 < 0.05).
실시예
1:
프테로카리아
스테놉테라
추출물 제조
프테로카리아 스테놉테라( Pterocarya stenoptera C. DC) 잎 20g을 70% 에탄올 수용액에 넣고, 섭씨 25도에서 15시간 동안 추출한 후, 감압하에 에탄올을 증발시켜서 분말형태의 프테로카리아 스테놉테라 추출물을 제조하였다.
실시예
2:
가르시니아
코와 추출물 제조
가르시니아 코와(Garcinia cowa Roxb .) 잎 20g을 70% 에탄올 수용액에 넣고, 섭씨 25도에서 15시간 동안 추출한 후, 감압하에 에탄올을 증발시켜서 분말형태의 가르시니아 코와 추출물을 제조하였다.
실시예
3:
나제이아
플루리
추출물 제조
나제이아 플루리(Nageia fleuryi ( Hickel ) de Laub) 잎 20g을 70% 에탄올 수용액에 넣고, 섭씨 25도에서 15시간 동안 추출한 후, 감압하에 에탄올을 증발시켜서 분말형태의 나제이아 플루리 추출물을 제조하였다.
실험예
1: 항산화 효능 테스트
(1) 실험방법
항산화 효능 검사를 위해 DPPH를 시그마에서 구입했고, 상기 실시예 1 내지 3에서 제조된 각각의 식물 추출물을 에탄올 용매에 녹여 각각 3, 5, 8, 10, 15, 20, 23, 및 25%(w/v) 농도의 시료를 제조하였다. 상기 시료 100 μl와 DPPH 시약 용액 100 μl(농도 0.2 mM)를 96 well 플레이트에서 혼합했다. 섭씨 37도에서 30분간 반응시킨 후, 517 nm에서 ELISA 기기로 흡광도를 측정했다(Epoch, Biotek, U.S.). 비타민C(500 μg/ml) 100 μl와 DPPH 용액(0.2 mM) 100 μl를 혼합해서 표준용액을 만들었다. 메탄올 100 μl와 DPPH 용액(0.2 mM) 100 μl를 blank 표준용액으로 사용하였다. 라디칼저해율(%)은 아래와 같은 수학식을 이용하였다.
[수학식]
라디칼 저해율(%) = [(표준물질 흡광 - 샘플 흡광) / (표준물질 흡광)] X 100
(샘플 흡광 = DPPH 흡광 - 메탄올 흡광)
(2) 실험결과
상기 DPPH 항산화 활성을 테스트한 결과를 도 1 내지 도 3에 나타내었다. 도 1은 상기 실시예 1 내지 3에서 제조된 각각의 식물 추출물 각각 10%(w/v) 농도의 시료 100 μl를 사용한 결과를 나타냈으며, 도 2에는 실시예 1의 프테로카리아 스테놉테라(Pterocarya stenoptera C. DC.) 에탄올 추출물 3 내지 25%(w/v) 농도의 시료 100 μl를 사용한 결과를 나타냈으며, 도 3에는 실시예 3의 나제이아 플루리(Nageia fleuryi ( Hickel ) de Laub) 에탄올 추출물 3 내지 25%(w/v) 농도의 시료 100 μl를 사용한 결과를 나타었다.
도 1에서 확인되는 바와 같이, 비타민C 표준물질과 비교하여, 실시예 1의 프테로카리아 스테놉테라(Pterocarya stenoptera C. DC.) 에탄올 추출물은 32.0% 더 우수한 항산화능을 나타냈다. 실시예 2의 가르시니아 코와(Garcinia cowa Roxb .) 에탄올 추출물과 실시예 3의 나제이아 플루리(Nageia fleuryi ( Hickel ) de Laub) 에탄올 추출물은 비타민C 표준물질과 비교하여 각각 23.0% 및 49.6% 낮은 항산화능을 나타냈다.
실험예
2: 항염증 면역활성 효능 테스트
(1) 실험방법
RAW 264.7 대식세포를 3.0 x 105 세포수/웰 농도로 96웰 플레이트에 같은 양을 나누어서 분주한 후, 세포 착상을 위해 24시간 배양했다. 그 다음에 상기 실시예 1 내지 3에서 제조된 각각의 식물 추출물을 에탄올 용매에 녹여 각각 3, 5, 8, 10, 15, 20, 23, 및 25%(w/v) 농도의 시료를 제조하고, 각각의 시료 100 μl로 세포를 처리하였다. 또한, LPS(농도 10 μg/ml) 100 μl를 세포에 처리하였다. 이후, 24시간 배양한 후, 96웰 플레이트의 상층액 100 μl와 Griess시약 100 μl를 혼합해서 섭씨 37도에서 10분 동안 배양한 후, 540 nm에서 ELISA 기기로 흡광도를 측정하였다.
상기와 같은 산화질소 (Nitric Oxide) 분석법은 항염증 면역활성 활성도 측정에 많이 사용되는 분석 방법이다.
(2) 실험결과
상기 Nitric Oxide Assay 결과를 도 4 내지 도 6에 나타내었다. 도 4는 상기 실시예 1 내지 3에서 제조된 각각의 각각 10%(w/v) 농도의 시료 100 μl를 사용한 결과를 나타냈으며, 도 5에는 실시예 1의 프테로카리아 스테놉테라(Pterocarya stenoptera C. DC.) 에탄올 추출물 3 내지 25%(w/v) 농도의 시료 100 μl를 사용한 결과를 나타냈으며, 도 6에는 실시예 3의 나제이아 플루리(Nageia fleuryi ( Hickel ) de Laub) 에탄올 추출물 3 내지 25%(w/v) 농도의 시료 100 μl를 사용한 결과를 나타내었다.
도 4에서 확인되는 바와 같이, 상기 실시예 1 내지 3에서 제조된 각각의 식물 추출물 시료는 각각 LPS 표준물질에 비해서 19.5%, 16.1% 및 48.7% 더 증가된 항염증 면역활성면역기능을 나타냈다. 이 항염증 면역활성 Assay 실험 조건하에서 3가지 추출물중에서 실시예 3의 나제이아 플루리(Nageia fleuryi ( Hickel ) de Laub) 에탄올 추출물이 제일 항염증 면역활성 활성이 높았다(도 4 내지 6). 이 추출물 성분을 더 조사해보면, 새로운 형태의 항염증 면역활성 compound를 찾아낼 가능성이 있을 것으로 추측된다.
실험예
3: 세포 안전성 테스트
(1) 실험방법
RAW 264.7 대식세포를 5Х104 세포수/웰 농도로 24 well plate에 같은 양을 나누어 분주했다. 배양접시 바닥에 부착을 위해 24시간 배양한 후, 세포를 LPS(농도 10 μg/ml) 100 μl와 상기 실시예 1 내지 3에서 제조된 각각의 식물 추출물을 에탄올 용매에 녹여 각각 3, 5, 8, 10, 15, 20, 23, 및 25%(w/v) 농도의 시료를 제조하고, 각각의 시료 100 μl로 24시간 처리했다. 표준용액으로 PBS를 넣은 후 같은 조건에서 세포배양을 했다. MTT는 최종 농도 5 mg/mL로 PBS이용하여 용액을 만들었다. 각 웰에 MTT 용액 200 μl를 넣은 후, 섭씨 37도에서 이산화탄소 배양기에서 3시간 30분 동안 배양했다. 상층액을 제거한 후 DMSO 1 ml를 각 웰에 넣었다. 배양접시를 shaking 배양기에 넣어 15분 동안 배양했다. 595 nm에서 ELISA기기 이용해 흡광도를 측정했다.
(2) 실험결과
상기 MTT assay로 검사한 결과를 도 7 내지 도 9에 나타내었다. 도 7은 상기 실시예 1 내지 3에서 제조된 각각의 식물 추출물 10%(w/v) 농도의 시료 100 μl를 사용한 결과를 나타냈으며, 도 8에는 실시예 1의 프테로카리아 스테놉테라(Pterocarya stenoptera C. DC.) 에탄올 추출물 3 내지 25%(w/v) 농도의 시료 100 μl를 사용한 결과를 나타냈으며, 도 9에는 실시예 3의 나제이아 플루리(Nageia fleuryi ( Hickel ) de Laub) 에탄올 추출물 3 내지 25%(w/v) 농도의 시료 100 μl를 사용한 결과를 나타내었다.
도 7에서 확인되는 바와 같이, 상기 실시예 1 내지 3에서 제조된 각각의 식물 추출물 시료는 각각 LPS 표준물질에 비해서 각각 2.6%, 4.6% 및 29.30% 낮은 세포성장 활성을 나타내었다. 이러한 결과로부터 나제이아 플루리(Nageia fleuryi (Hickel) de Laub) 에탄올 추출물이 상대적으로 세포독성이 좀 더 강하다고 추측할 수 있다.
이상에서 설명한 본 발명은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에 있어 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 여러 가지 치환, 변형 및 변경이 가능하므로 전술한 실시예 및 첨부된 도면에 의해 한정되는 것이 아니라, 다양한 변형이 이루어질 수 있도록 각 실시예들의 전부 또는 일부가 선택적으로 조합되어 구성될 수 있다.
Claims (12)
- 프테로카리아 스테놉테라(Pterocarya stenoptera C. DC.) 에탄올 추출물을 포함하며,
상기 프테로카리아 스테놉테라 에탄올 추출물은
10 내지 20%(w/v) 농도 범위를 가지는 항염증 면역활성 및 항산화 활성을 갖는 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,
가르시니아 코와(Garcinia cowa Roxb .) 에탄올 추출물 및 나제이아 플루리(Nageia fleuryi ( Hickel ) de Laub) 에탄올 추출물 중에서 선택되는 1종 이상의 성분을 더 포함하는 항염증 면역활성 및 항산화 활성을 갖는 화장료 조성물.
- 제2항에 있어서,
상기 프테로카리아 스테놉테라(Pterocarya stenoptera C. DC.) 에탄올 추출물과, 상기 가르시니아 코와(Garcinia cowa Roxb .) 에탄올 추출물 및 나제이아 플루리(Nageia fleuryi ( Hickel ) de Laub) 에탄올 추출물 중에서 선택되는 1종 이상은 1~3 : 1~3의 중량비로 포함되는 것을 특징으로 하는 항염증 면역활성 및 항산화 활성을 갖는 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 에멀젼, 현탁액, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이, 콘실 스틱, 포말(foam) 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 제형인 것을 특징으로 하는 항염증 면역활성 및 항산화 활성을 갖는 화장료 조성물.
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 프테로카리아 스테놉테라(Pterocarya stenoptera C. DC.) 에탄올 추출물을 포함하며,
상기 프테로카리아 스테놉테라 에탄올 추출물은
10 내지 20%(w/v) 농도 범위를 가지는 항염증 면역활성 및 항산화 활성을 갖는 식품 조성물.
- 제9항에 있어서,
가르시니아 코와(Garcinia cowa Roxb .) 에탄올 추출물 및 나제이아 플루리(Nageia fleuryi ( Hickel ) de Laub) 에탄올 추출물 중에서 선택되는 1종 이상의 성분을 더 포함하는 항염증 면역활성 및 항산화 활성을 갖는 식품 조성물.
- 제10항에 있어서,
상기 프테로카리아 스테놉테라(Pterocarya stenoptera C. DC.) 에탄올 추출물과, 상기 가르시니아 코와(Garcinia cowa Roxb .) 에탄올 추출물 및 나제이아 플루리(Nageia fleuryi ( Hickel ) de Laub) 에탄올 추출물 중에서 선택되는 1종 이상은 1~3 : 1~3의 중량비로 포함되는 것을 특징으로 하는 항염증 면역활성 및 항산화 활성을 갖는 식품 조성물.
- 제9항에 있어서,
상기 식품 조성물은 건강기능성 식품 조성물인 것을 특징으로 하는 항염증 면역활성 및 항산화 활성을 갖는 식품 조성물.
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