ァシクロビル耐性へルぺスウィルスによる疾患の予防 ·治療剤 技術分野
[0001] 本発明は、新規テトラヒドロー 2H チォピランー4 カルボキサミド誘導体を有効 成分として含有する、ァシクロビル (ACV)耐性のへルぺスウィルスが関与する疾患の 予防又は治療剤に関する。
背景技術
[0002] ヘルぺスウィルス科のウィルスはヒト及び動物に対し様々な感染症を引き起こす。
例えば、水痘帯状疱疹ウィルス(varicella zoster virus ;VZV)は、水痘、帯状疱疹を 引き起こし、単純へルぺスウィルス- 1型及び- 2型(herpes simplex virus typel及び- 2 ; HSV-1及び HSV- 2)は口唇ヘルぺス、性器へルぺス等の感染症を引き起こすことが 知られている。現在、 VZVや HSVの抗ヘルぺスウィルス薬として、ァシクロビル (ACV) やそのプロドラッグであるバラシクロビル (VCV)、またペンシクロビルのプロドラッグで あるファンシクロビル (FCV)などの核酸系の抗ヘルぺス剤が主に使用されている。現 在までのところ、これらの抗ヘルぺス剤に対する耐性ウィルスの出現率は免疫系の正 常な患者においては 1%以下と報告されている。し力しながらガンや AIDS、臓器移植 などで免疫不全状態となった患者では、耐性ウィルスの出現率カ^- 30%に昇り、臨床 上問題となっている(Journal of Clinical Virology, 26, 29-37, 2003)。さらに問題な点 は、これらの耐性へルぺスウィルスは ACV、 VCV、 FCV全てに交差耐性を獲得する ため、いずれの薬剤も治療効果がなくなる点である。核酸系抗ヘルぺスウィルス剤の ビダラビンやフォスカルネットはこれらの耐性へルぺスウィルスに交差耐性を示さない 場合が有り、代替の治療剤として用いることが出来るが、血球減少、腎機能障害など の副作用が高頻度に観察されるため問題となっている。
本出願人等は、先に良好な抗ヘルぺスウィルス活性を有する、下式で示されるアミ ド基の N原子に基 Aとして芳香環基であるァリール又はへテロアリール基が直接置換 して 、る点に特徴を有するチアゾリルフヱ-ルカルバモイルメチル基で置換されたァ ミドィ匕合物又はその塩を見出し特許出願した (特許文献 1及び特許文献 2)。
[化 1]
(式中、 Ri、 R2は、 H、 一低級アルキル、 NRaRb等を、 Aは 置換基を有してい てもよぃァリール、—置換基を有していてもよいへテロアリール等を、 Xは CO又は SO
2を、 R3は、—置換基を有していてもよいァリール、—置換基を有していてもよいへテ 口環、等を意味する。詳細は当該公報参照。 )
また、本願の優先日後に公開となった本出願人等による出願 (特許文献 3)には、 下式で示される化合物が開示されている。
[化 2]
(式中、 Zは、 1, 2, 4 ォキサジァゾ一ルー 3 ィル、 4ーォキサゾリル等を、 Aは置 換基を有していてもよいァリール等を、 Xは CO又は SOを、 R3は置換基を有していて
2
もよいへテロ環等を意味する。詳細は当該公報参照。 )
しかし、これらの化合物の ACV耐性ウィルスに対する活性については何ら開示が無 い。
特許文献 1:国際公開第 02/38554号パンフレット
特許文献 2:国際公開第 03/95435号パンフレット
特許文献 3:国際公開第 05/014559号パンフレット
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0004] ACV耐性へルぺスウィルスによって引き起こされる疾患に対する、新しいタイプの 予防若しくは治療剤の創製が切望されて!ヽる。
課題を解決するための手段
[0005] 本発明者等は、抗ヘルぺスウィルス作用を有する化合物につき鋭意検討した結果 、下記一般式 (I)に示すように、従来のァミノ置換チアゾール環に代えて、 Z環として 1 , 2, 4 ォキサジァゾ一ルー 3—ィル又は 4 ォキサゾリル基を導入した点に特徴を 有する新規なテトラヒドロ 2H チォピラン 4 カルボキサミド誘導体が、予想外 に良好な抗ヘルぺスウィルス活性を有することを知見した。更に、これらの化合物が ACV耐性へルぺスウィルスに対して良好な抗ウィルス活性を有することを見出し、本 発明を完成したものである。
[0006] 即ち、本発明は、下記一般式 (I)で示される N—{ 2— [ (4 置換フ -ル)ァミノ]— 2 -ォキソェチル }テトラヒドロ一 2H チォピラン 4 カルボキサミドィ匕合物を有効 成分とする、 ACV耐性へルぺスウィルスが関与する疾患の予防又は治療剤に関する
[0007] [化 3]
(式中の記号は以下の意味を示す。
Z: l, 2, 4 ォキサジァゾ一ルー 3—ィル又は 4ーォキサゾリル基、
A:少なくとも 1つのメチル基で置換され、更にメチル基及びハロゲン原子力ゝらなる 群から選択される 1〜2個の置換基を有して 、てもよ 、フエ-ル基、又は 5 インダニ ル基。以下同様。 )
[0008] 殊に、本発明医薬の有効成分である一般式 (I)で示される化合物としては、以下の 化合物が好ましい。
(1) Z力 1, 2, 4 ォキサジァゾ一ルー 3—ィル基である化合物。
(2) Z力 4ーォキサゾリル基である化合物。
(3) A力 少なくとも 1つのメチル基で置換され、更にメチル基及びノヽロゲン原子か らなる群力も選択される 1〜2個の置換基を有していてもよいフエニル基である化合物
(4) A力 5—インダニル基である化合物。
(5) N- (2,6-ジメチルフヱ-ル)- N- (2- {[4- (1,3-ォキサゾール -4-ィル)フエ-ル]アミノト 2-ォキソェチル)テトラヒドロ- 2H-チォピラン- 4-カルボキサミド 1 , 1-ジォキシド、
N- (4-メチルフエ-ル)- N- (2- {[4- (1,3-ォキサゾール -4-ィル)フエ-ル]アミノ}- 2-ォキ ソェチル)テトラヒドロ- 2H-チォピラン- 4-カルボキサミド 1 , 1-ジォキシド、
N- (3-メチルフエ-ル)- N- (2- {[4- (1,3-ォキサゾール -4-ィル)フエ-ル]アミノ}- 2-ォキ ソェチル)テトラヒドロ- 2H-チォピラン- 4-カルボキサミド 1 , 1-ジォキシド、
N- (2-メチルフエ-ル)- N- (2- {[4- (1,3-ォキサゾール -4-ィル)フエ-ル]アミノ}- 2-ォキ ソェチル)テトラヒドロ- 2H-チォピラン- 4-カルボキサミド 1 , 1-ジォキシド、
N- (2,4-ジメチルフエ-ル)- N- (2- {[4- (1,3-ォキサゾール -4-ィル)フエ-ル]アミノト 2- ォキソェチル)テトラヒドロ- 2H-チォピラン- 4-カルボキサミド 1 , 1-ジォキシド、
N- (3,4-ジメチルフエ-ル)- N- (2- {[4- (1,3-ォキサゾール -4-ィル)フエ-ル]アミノト 2- ォキソェチル)テトラヒドロ- 2H-チォピラン- 4-カルボキサミド 1 , 1-ジォキシド、
N- (2,3-ジヒドロ- 1H-インデン- 5-ィル) -N- (2- {[4- (1,3-ォキサゾール -4-ィル)フエ- ル]アミノ}-2-ォキソェチル)テトラヒドロ- 2H-チォピラン- 4-カルボキサミド 1 , 1-ジォキ シド、
N- (4-クロ口- 3-メチルフエ-ル)- N- (2- {[4- (1,3-ォキサゾール -4-ィル)フエ-ル]アミノ} -2-ォキソェチル)テトラヒドロ- 2H-チォピラン- 4-カルボキサミド 1 , 1-ジォキシド、 N- (3-フルォロ- 4-メチルフエ-ル)- N- (2- {[4- (1,3-ォキサゾール -4-ィル)フエ-ル]ァ ミノ }-2-ォキソェチル)テトラヒドロ- 2H-チォピラン- 4-カルボキサミド 1 , 1-ジォキシド、 N- (3-フルォロ- 2,4-ジメチルフエ-ル)- N- (2- {[4- (1,3-ォキサゾール -4-ィル)フエ- ル]アミノ}-2-ォキソェチル)テトラヒドロ- 2H-チォピラン- 4-カルボキサミド 1 , 1-ジォキ シド、
N- (3,5-ジフルォロ- 4-メチルフエ-ル)- N- (2- {[4- (1,3-ォキサゾール -4-ィル)フエ- ル]アミノ}-2-ォキソェチル)テトラヒドロ- 2H-チォピラン- 4-カルボキサミド 1 , 1-ジォキ シド、
N- (2-フルォロ- 4-メチルフエ-ル)- N- (2- {[4- (1,3-ォキサゾール -4-ィル)フエ-ル]ァ ミノ }-2-ォキソェチル)テトラヒドロ- 2H-チォピラン- 4-カルボキサミド 1 , 1-ジォキシド、 N- (2,3-ジメチルフエ-ル)- N- (2- {[4- (1,2,4-ォキサジァゾール- 3-ィル)フエ-ル]アミ ノ}-2-ォキソェチル)テトラヒドロ- 2H-チォピラン- 4-カルボキサミド 1 , 1-ジォキシド、 N- (2,4-ジメチルフエ-ル)- N- (2- {[4- (1,2,4-ォキサジァゾール- 3-ィル)フエ-ル]アミ ノ}-2-ォキソェチル)テトラヒドロ- 2H-チォピラン- 4-カルボキサミド 1 , 1-ジォキシド、 N- (2,6-ジメチルフエ-ル)- N- (2- {[4- (1,2,4-ォキサジァゾール- 3-ィル)フエ-ル]アミ ノ}-2-ォキソェチル)テトラヒドロ- 2H-チォピラン- 4-カルボキサミド 1 , 1-ジォキシド、 N- (4-フルォロ- 2,6-ジメチルフエ-ル)- N- (2- {[4- (1,2,4-ォキサジァゾール- 3-ィル)フ ェニル]アミノ}- 2-ォキソェチル)テトラヒドロ- 2H-チォピラン- 4-カルボキサミド 1 , 1-ジ ォキシド、
N- (2,3-ジヒドロ- 1H-インデン -5-ィル) - N- (2-{[4-(1,2,4-ォキサジァゾール -3-ィル)フ ェニル]アミノ}- 2-ォキソェチル)テトラヒドロ- 2H-チォピラン- 4-カルボキサミド 1 , 1-ジ ォキシド、
N- (3-フルォロ- 4-メチルフエ-ル)- N- (2- {[4- (1,2,4-ォキサジァゾール- 3-ィル)フエ- ル]アミノ}-2-ォキソェチル)テトラヒドロ- 2H-チォピラン- 4-カルボキサミド 1 , 1-ジォキ シド、
N- (4-クロ口- 3-メチルフエ-ル)- N- (2- {[4- (1,2,4-ォキサジァゾール- 3-ィル)フエ-ル ]アミノ}-2-ォキソェチル)テトラヒドロ- 2H-チォピラン- 4-カルボキサミド 1 , 1-ジォキシド 、及び、
N-(3-フルォロ- 2,4-ジメチルフエ-ル)- N- (2-{[4-(1,2,4-ォキサジァゾール -3-ィル)フ ェニル]アミノ}- 2-ォキソェチル)テトラヒドロ- 2H-チォピラン- 4-カルボキサミド 1 , 1-ジ ォキシド
からなる群より選択される化合物。
更に、本発明は、ァシクロビル耐性へルぺスウィルスが関与する疾患の予防又は治
療剤製造のための、上記一般式 (I)で示される N— { 2— [ (4 置換フエ-ル)ァミノ] 2 ォキソェチル }テトラヒドロー 2H チォピラン 4 カルボキサミド化合物の使 用、並びに、有効量の上記一般式 (I)で示される N— { 2— [ (4 置換フエ-ル)ァミノ 1- 2-ォキソェチル }テトラヒドロー 2H チォピラン 4 カルボキサミド化合物を哺 乳動物に投与することからなる、ァシクロビル耐性へルぺスウィルスが関与する疾患 を予防又は治療する方法にも関する。
[0010] 本発明にお 、て、 ACV而ォ性のへルぺスウィルスとしては、ァシクロビルに而性を有 するヘルぺスウィルスであり、好ましくは、 ACV耐性の水痘帯状疱疹ウィルス (VZV)、 ACVffif性の単純へルぺスウィルス- 1型及び- 2型(herpes simplex virus typel及び- 2 ; HSV- 1及び HSV- 2)である。
発明の効果
[0011] 本発明化合物は ACV耐性のへルぺスウィルスに対して良好な抗ウィルス作用を有 しており、抗 ACV耐性へルぺスウィルス剤として、 ACV耐性 VZV感染に伴う水痘(水 疱瘡)、帯状疱疹、 ACV耐性 HSV- 1および ACV耐性 HSV- 2感染に伴う口唇へルぺス 、ヘルぺス脳炎、性器へルぺス等の各種 ACVffif性へルぺスウィルス感染症の予防 若しくは治療に有用である。
また、本発明化合物は従来の抗ヘルぺスウィルス剤に比して良好な体内動態を有 し、低用量の経口投与においても良好な抗ウィルス活性を有する。また、核酸系薬剤 とは異なり変異原性の懸念も低く安全性が高い。
発明を実施するための最良の形態
[0012] 本発明の有効成分である一般式 (I)の N— { 2— [ (4 置換フエ-ル)ァミノ] 2— ォキソェチル }テトラヒドロ 2H チォピラン 4 カルボキサミドィ匕合物をさらに説 明する。
本発明において「ノヽロゲン原子」としては、 F、 Cl、 Br及び I原子が挙げられる。 本発明の一般式 (I)で示される N— { 2— [ (4 置換フエ-ル)ァミノ] 2 ォキソェ チル }テトラヒドロ 2H チォピラン 4 カルボキサミドィ匕合物には、その水和物や 各種の溶媒和物及び結晶多形の物質も包含される。
[0013] 以下、本発明の有効成分である化合物 (I)の代表的な製造法を説明する。なお、製
造法は以下の例に限られるわけではない。
以下の製造方法において、官能基の種類によっては、当該官能基を原料ないし中 間体の段階で適当な保護基、すなわち容易に当該官能基に転ィ匕可能な基に置き換 えておくことが製造技術上効果的な場合がある。しかるのち、必要に応じて保護基を 除去し、所望の化合物を得ることができる。このような官能基としては例えばアミノ基、 水酸基、カルボキシル基等を挙げることができ、それらの保護基としては例えば、 Prot ective Groups in Organic synthesis 第 d/¾¾ (T. W. tureenおよび P. G. M. Wuts著、 J OHN WILLY & SONS, INC.発行)に記載の保護基を挙げることができ、これらを反応 条件に応じて適宜用いればよい。保護基の導入及び脱保護は当該参考書記載の方 法を適時適用できる。
第一製法
[化 4]
化合物 (I)はカルボン酸ィ匕合物(III)とァ-リン誘導体 (II)をアミドィ匕反応に付すこと によって容易に製造できる。
アミドィ匕反応は常法により行うことができ、例えば、 日本化学会編「実験化学講座」 第 4版 (丸善) 22卷 pl37〜173に記載の方法を適用できる。好ましくは、カルボン酸ィ匕 合物(III)を反応性誘導体、例えば酸ハロゲン化物(酸クロリド等)又は酸無水物に変 換した後、ァ-リン誘導体 (II)に反応させることにより行うことができる。カルボン酸の 反応性誘導体を用いる場合、塩基 (炭酸カリウム、水酸化ナトリウム等の無機塩基、 又は、トリェチルァミン(TEA)、ジイソプロピルェチルァミン、ピリジン等の有機塩基) を添加することが好ましい。更に、アミドィ匕はカルボン酸を、縮合剤(1—ェチル—3— (3 ジメチルァミノプロピル)カルボジイミド (WSC)、 1,1,一カルボ-ルビスー 1H— イミダゾール (CDI)等)の存在下に反応させることにより行うこともできる。その際、 1 ヒドロキシベンゾトリアゾール (HOBt)等の添加剤をカ卩えてもよい。反応温度は、原料 化合物に応じて適宜選択できる。溶媒は、反応に不活性な溶媒、例えばベンゼン、ト
ルェン等の芳香族炭化水素系溶媒、テトラヒドロフラン (THF)、 1, 4 ジォキサン等 のエーテル系溶媒、ジクロロメタン、クロ口ホルム等のハロゲン化炭化水素系溶媒、 N , N ジメチルホルムアミド(DMF)、 N, N ジメチルァセトアミド等のアミド系溶媒、ピ リジン等の塩基性溶媒等が挙げられる。溶媒は原料ィ匕合物の種類等に従 、適宜選 択され、単独で、又は 2種以上混合して用いられる。
[0015] 前記の各原料化合物は、公知の反応、例えば日本化学会編「実験化学講座」 (丸 善)や国際公開第 02/38554号パンフレットに記載の反応等を用いて、容易に製造す ることができる。以下にその代表的な製法を示す。
化合物 (III)の製法
[化 5]
(VI)
(式中、 Halはハロゲンを、 Rは低級アルキル、ァラルキル等のエステル残基を形成し うる基を意味する。 )
上記反応経路図中、アミドィ匕は前記第一製法記載の方法と同様にして行うことがで きる。
化合物(VI)の N アルキル化は、ハロゲン化アルキル化合物(VII)を用いて、常法 、例えば、前出の「実験化学講座」第 4版 (丸善) 20卷 p279〜318記載の方法により 行うことができる。反応温度は冷却下乃至加熱下行うことができ、溶媒は反応に不活 性な溶媒、例えば前記第一製法のアミド化に例示される溶媒等が挙げられる。反応 は、炭酸カリウム、水酸化ナトリウム、水素化ナトリウム等の塩基の存在下行うことが好 ましい。アミド化は前記第一製法と同様に行う事ができる。なお、先にアミド化を実施 した後、 N—アルキル化を行ってもよい。
[0016] カルボン酸ィ匕合物(III)を得るための脱保護は、エステルの種類に応じて適宜常法 を適用して行うことができる。好ましくは、ェチルエステル等のアルキルエステルの場
合は、水酸化ナトリウム水溶液等の塩基で処理することにより、ベンジルエステル等 のァラルキルエステルの場合は水素雰囲気下パラジウム 炭素(Pd-C)で還元する ことにより行うことができる。反応は、目 ij記 Protective Groups in Organic Synthesis 第 3版記載の方法に準じて行うことができる。
また、置換基の種類によっては、更に当業者によく知られる置換基修飾反応に付し て、所望の原料ィ匕合物を製造することができる。
このようにして製造された本発明の有効成分である化合物 (I)は、遊離のまま、又は 常法による造塩処理を施し、その塩として単離 '精製される。単離 '精製は抽出、濃縮 、留去、結晶化、濾過、再結晶、各種クロマトグラフィー等の通常の化学操作を適応 して行われる。
[0017] 化合物 (I)の 1種又は 2種以上を有効成分として含有する本発明の医薬は、当分野 にお 、て通常用いられて 、る薬剤用担体、賦形剤等を用いて通常使用されて 、る方 法によって調製することができる。投与は錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液 剤等による経口投与、又は、静注、筋注等の注射剤、軟膏剤、硬膏剤、クリーム剤、 ゼリー剤、パップ剤、噴霧剤、ローション剤、点眼剤、眼軟膏等の外用剤、坐剤、吸入 剤等による非経口投与の 、ずれの形態であってもよ 、。
[0018] 経口投与のための固体組成物としては、錠剤、散剤、顆粒剤等が用いられる。この ような固体組成物においては、一つ又はそれ以上の活性物質力 少なくとも一つの 不活性な賦形剤、例えば乳糖、マン-トール、ブドウ糖、ヒドロキシプロピルセルロー ス、微結晶セルロース、デンプン、ポリビュルピロリドン、メタケイ酸アルミン酸マグネシ ゥム等と混合される。組成物は、常法に従って、不活性な添加剤、例えばステアリン 酸マグネシウム等の滑沢剤やカルボキシメチルスターチナトリウム等の崩壊剤、溶解 補助剤を含有していてもよい。錠剤又は丸剤は必要により糖衣又は胃溶性若しくは 腸溶性コーティング剤で被膜してもよ ヽ。
経口投与のための液体組成物は、薬剤的に許容される乳剤、液剤、懸濁剤、シロッ プ剤、エリキシル剤等を包含し、一般的に用いられる不活性な溶剤、例えば精製水、 エタノール等を用いることができる。この組成物は不活性な溶剤以外に可溶化剤、湿 潤剤、懸濁化剤のような補助剤、甘味剤、矯味剤、芳香剤、防腐剤を含有していても
よい。
非経口投与のための注射剤としては、無菌の水性又は非水性の液剤、懸濁剤、乳 剤を包含する。水性の溶剤としては、例えば注射用蒸留水及び生理食塩水が含まれ る。非水性の溶剤としては、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ォ リーブ油のような植物油、エタノールのようなアルコール類、ポリソルベート 80 (局方 名)等がある。このような組成物は、さらに等張化剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散 剤、安定化剤、溶解補助剤を含んでもよい。これらは例えばバクテリア保留フィルタ 一を通す濾過、殺菌剤の配合又は照射によって無菌化される。また、これらは無菌の 固体組成物を製造し、使用前に無菌水又は無菌の注射用溶媒に溶解、懸濁して使 用することちでさる。
[0019] 外用剤としては、軟膏剤、硬膏剤、クリーム剤、ゼリー剤、パップ剤、噴霧剤、ローシ ヨン剤、点眼剤、眼軟膏等を包含する。一般に用いられる軟膏基剤、ローション基剤 、水性又は非水性の液剤、懸濁剤、乳剤等を含有する。例えば、軟膏又はローション 基剤としては、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、白色ワセリン、サラシミ ッロウ、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、モノステアリン酸グリセリン、ステアリルアル コーノレ、セチルアルコール、ラウロマクロゴール、セスキォレイン酸ソノレビタン、カルボ キシビュルポリマー等が挙げられる。
[0020] 本発明の有効成分である化合物 (I)の 1日の投与量は、通常、経口投与の場合、 体重当たり約 0. 001力ら 50mg/kg、好ましく ίま 0. 01〜30mg/kg、更に好ましく は、 0. 05〜: LOmgZkg力 静脈投与される場合、 1日の投与量は、体重当たり約 0. 0001力ら 10mg/kg、好ましく ίま 0. 001〜1. Omg/kg力 Sそれぞれ適当であり、こ れを 1日 1回乃至複数回に分けて投与する。投与量は症状、年令、性別等を考慮し て個々の場合に応じて適宜決定される。また、外用剤として用いる場合は、化合物(I )を 0. 0001〜20%、好ましくは 0. 01〜10%を含む外用剤が好ましい。これを 1日 1
〜数回、症状に応じて局所に投与する。
実施例
[0021] 本発明の ACV耐性のへルぺスウィルスが関与する疾患の予防又は治療剤の効果 は以下の実施例に示す薬理試験により確認された。
実施例 1 抗 ACV耐性 VZV活性試験
実験 ίま、 Shigeta S. The Journal of Infectious Diseases, 147, 3, 576—584, (1983)g己 載の方法に従って実施した。具体的には、 10,000個のヒト胎児繊維芽 (HEF)細胞を増 殖培地(10% (v/v)のゥシ胎児血清(FBS、シグマ社)を補給した Eagle MEM (二ッスィ 社))を用いて 96ゥエル'ミクロタイタ一'プレートに播き、 37°C、 5%CO下で 4日間、 mon
2
olayerとなるまで培養した。細胞を維持培地で洗浄後に、 20〜70pfoZl00 Lとなるよ うに維持培地(2%の FBSを補給した Eagle MEM)で希釈した ACVffif性 VZV (Kanno-Br ACV"¾)を 100 μ LZゥエルずつ接種した。プレートを 2000rpmで 20分間室温で遠心後 、 37°C、 5%CO下で 3時間保温し、 VZVを感染させた。維持培地で 3回洗浄後、維持
2
培地で希釈された適当な濃度の試験薬剤 100 Lを各ゥ ルに添加した。細胞を 37 °C、 5%CO下で 3〜4日間培養した後に、 10%ホルマリン ZPBSを 100 μ LZゥエルカロ
2
え、 2〜3時間細胞を固定した。固定液と培養上清を捨てて、プレートを水洗した後、 染色液(0.025%クリスタルバイオレット)を 50 LZゥエルずつ添カ卩し、 2〜3分間染色 後、水洗を行い 37°Cでプレートを乾燥させた。 VZVに感染した HEF細胞が細胞死を 起こし、 monolayerの HEF細胞中に死細胞よりなるプラークが形成される。顕微鏡でプ ラーク数を計測し、試験薬剤の EC 値をこのプラーク数を 50%抑制する濃度として算
50
出した。
本発明の有効成分である化合物 (I)の EC
50値 ( M)を後記表 1に示す。これらの化 合物は ACV耐性 VZVに対する良好な抗ウィルス作用を有して!/ヽた。
実施例 2 抗 ACV耐性 HSV-1活性試験
100,000〜150,000個のアフリカミドリザル腎細胞(Vero細胞)を増殖培地(10%の FBS を補給した Eagle MEM (二ッスィ社))を用いて 24ゥエル'プレートに播き、 37°C、 5%CO 下で 3- 4日間、 monolayerとなるまで培養した。細胞を維持培地で洗浄後に、 100〜2
2
50 pfo/200 /ζ Lとなるように維持培地(2%の FBSを補給した Eagle MEM)で希釈した AC V耐性 HSV- 1 (A4-3ACV"¾)を 200 μ LZゥエルずつ接種した。プレートを 1500rpmで 4 0分間室温で遠心後、 37°C、 5%CO下で 1時間保温し、 HSV-1を感染させた。維持培
2
地で 3回洗浄後、維持培地で希釈された適当な濃度の試験薬剤 100 Lを各ゥエル に添加した。細胞を 37°C、 5%CO下で 3〜4日間培養した後に、 10%ホルマリン ZPB
Sを 200 LZゥェルカ卩ぇ、 2〜3時間細胞を固定した。固定液と培養上清を捨てて、 プレートを水洗した後、染色液(0.025%クリスタルバイオレット)を 100 LZゥエルず つ添加し、 2〜3分間染色後、水洗を行い 37°Cでプレートを乾燥させた。 HSV-1に感 染した Vero細胞が細胞死を起こし、 monolayerの Vero細胞中に死細胞よりなるブラー クが形成される。顕微鏡でプラーク数を計測し、試験薬剤の EC 値をこのプラーク数
50
を 50%抑制する濃度として算出した。
本発明の有効成分である化合物 (I)の EC 値 ( M)を後記表 1に示す。これらの化
50
合物は ACV耐性 HSV-1に対する良好な抗ウィルス作用を有して 、た。
[0023] [表 1]
[0024] 実施例 3 in vivo動物モデルにおける体内動態
H.Machidaらの方法(Antiviral Res. 1992 17 133- 143)に準じ、 HSV- 1皮膚感染マウ スモデルを用いて本発明医薬組成物の in vivo動物モデルにおける体内動態を試験 した。ジェチルエーテル麻酔下の HR-1無毛マウス(メス、 7週令)の皮膚を注射針で 縦横数回擦過し、当該部位に、ウィルス液(HSV- 1 WT- 51株 1.5 X 104 PFU/15 μ L) を滴下し浸透させることにより HSV-1を感染させた。
被験化合物はメチルセルロース懸濁液 (但し、 *は 20%CremophorEL (ナカライテスタ) Z20%ポリエチレングリコール (PEG)400Z60%H 0溶液)として、 10 mg/kgの用量で 1日
2
2回 5日間、感染 3時間後から経口投与した。 HSV-1感染による皮膚病変部の症状を 以下の 7段階にスコア化し 17曰間評価した。
Score 0:病変なし
Score 1:視覚できる 1個ないし 2個程度の小さな水疱形成
Score 2:数個の水疱形成
Score 3:部分的に融合した大きな水疱形成
Score 4:帯状疱疹様の水疱形成
Score 5:部分的な潰瘍形成
Score 6:帯状疱疹様の潰瘍形成
Score 7:後足の麻痺および死亡
各群の平均病変スコアから AUC値を算出し、プラセボ投与群に対する各化合物投 与群の病変阻害率を求めた。結果を下表に示す。
[表 2]
被験化合物 阻害率 (%) 被験化合物 阻害率 (%)
製造例 1 * 93 製造例 19 71
製造例 2 85 製造例 20 91
製造例 3 70 製造例 24 89
製造例 4 77 製造例 25 * 70
製造例 6 92 製造例 27 86
製造例 8 91 製造例 31 * 86
製造例 1 1 92 製造例 33 79
製造例 13 89 製造例 35 82
製造例 14 98 製造例 37 100
製造例 17 94 製造例 39 80
比較化合物 A 38 比較化合物 B 2
比較化合物 C 44 比較化合物 D 43 比較化合物 A: 比較化合物 B:
特許文献 1 実施例 4 9の化合物 特許文献 1 実施例 8 5の化合物
比較化合物 C: 比較化合物 D:
特許文献 1 実施例 8 7の化合物 特許文献 1 実施例 9の化合物
本発明の有効成分である化合物(I)投与群では、その in vitroの活性を反映し HSV- 1感染による病変部の症状悪化を良好に抑え、その作用は特許文献 1に記載される 類似化合物より優れていることが確認された。よって、本発明医薬の有効成分である 化合物(I)は、 in vivo動物モデルにおいて良好な体内動態を有することが確認され た。
実施例 4 ヌードマウスを用いた ACV耐性 HSV-1感染致死モデルにおける薬効評価
ACV耐性 HSV- 1 (3 X 106 pfo)をヌードマウス(CD- l(ICR)- nu/nu, 5週齢,雌, (日本 チヤ一ルス)の腹腔内に接種しウィルスを感染させた。被験化合物はメチルセルロー ス懸濁液として、 100 mg/kgの用量で、感染 1時間後からそれぞれ 1日 2回 15日間 (感 染後 0から 14日まで)経口投与した。
感染後より 17日間、毎日 ACV耐性 HSV-1感染によるマウスの死亡を観察し、生存 数をカウントした。結果を下表に示す。対照薬剤である VCVは明確な致死抑制効果 は見られなかった力 本願の製造例 2並びに 27の化合物は完全にマウスの死亡を抑 制した。
よって、本発明の化合物は、 in vivoの動物モデルにおいても、 ACVffif性ヘルぺスゥ ィルスによる感染症を良好に抑制することが確認された。
[表 3]
(製造例)
以下に本発明の有効成分である化合物 (I)の製造例を示す。なお、以下の反応に 用いられる原料化合物の多くは、特許文献 1 (国際公開第 02/38554号パンフレット) 等により公知であり、これらの公知文献記載の方法によって容易に入手できる。原料 化合物中、新規な化合物の製造例を参考例として示す。
参考例 1: 4一(4 -トロフエニル) 1,3 ォキサゾールのエタノールとテトラヒド 口フラン混合懸濁液に 5%パラジウム一カーボン粉末を加え、水素雰囲気下室温に て 12時間攪拌した後、反応溶液をセライト濾過し、濾液を減圧留去した。得られた粗 生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、 [4一(1,3—ォキサゾールー 4—ィル)フエニル]ァミン(淡黄色固体)を得た。 Electron Impact- MS (M)+: 160。 参考例 2 : 4—メチルァ-リンの DMF溶液に炭酸カリウムとェチルブロモアセテー
トを加え加熱攪拌した。反応混合物に水、酢酸ェチルを加えた後、有機層を分液し、 洗浄'乾燥後、溶媒を減圧留去し粗生成物を得た。これを塩化メチレンに溶解し、ピ リジン、テトラヒドロー 2H チォピランー4 カルボユルク口ライド 1、 1ージオキサイド を加え攪拌した。反応溶液を濃縮後、 1M塩酸、クロ口ホルムを加え、有機層を分液 し、洗浄 ·乾燥後、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマ トグラフィ一にて精製し、ェチル { [ (1、 1ージォキソテトラヒドロー 2H チォピラン 4 —ィル)カルボ-ル] (4—メチルフエ-ル)アミノ}アセテート(無色油状物)を得た。 FA B-MS [(M+H)+] : 354。
参考例 3〜15: 参考例 2と同様に処理して、後記表 4に記載される参考例 3〜15 の化合物を得た。
製造例 1 : ェチル {(2,6 ジメチルフエ-ル) [(1,1 ジォキシドテトラヒドロー 2H— チォピランー4 ィル)カルボ-ル]アミノ}アセテート (735mg)のエタノール (10mL)溶液 に 1M水酸ィ匕ナトリウム水溶液 (2.3mL)を加えた後、室温にて 5時間攪拌した。反応溶 液に 1M塩酸を加え液性を酸性とした後、水、クロ口ホルムを加え有機層を分液した。 更に、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥、濾過後、溶媒を減圧留去した。得られた カルボン酸粗生成物をクロ口ホルム (15mL)に溶解させた後、 WSC 'HCl(422mg)、 [4— (1,3—ォキサゾール 4 ィル)フエ-ル]ァミン (320mg)を順次カ卩ぇ室温にて 4時間 攪拌した。反応溶液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、クロ口ホルムを加えた後、有 機層を分液した。更に、有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾 燥、濾過後、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物をへキサン 酢酸ェチル(=3 /2)で洗った後、エタノールから再結晶して、 N— (2, 6 ジメチルフエ-ル) N— ( 2— { [4— ( 1 , 3 ォキサゾール 4 ィル)フエ-ル]アミノ } 2 ォキソェチル)テト ラヒドロ 2H チォピラン 4 カルボキサミド 1 , 1 -ジォキシド (無色結晶)を 610m g に。
製造例 2〜40: 製造例 1と同様に処理して、後記表 5〜12に示す製造例 2〜40の 化合物を得た。
参考例化合物の物理化学的性状を表 4に、製造例化合物の構造並びに物理化学 的性状を表 5〜 12に示す。
[0029] 表中の略号は、 Ref. '参考例; Εχ··製造例; Dat .'物理化学的性状 {F+:FAB-MS [(M+H)1; F-: FAB-MS [(M-H)"] ; N1:1!"!- NMR(DMSO- d , TMS内部標準; mp :
6
融点 (°C)、括弧の中は結晶化溶媒を示す } ; Ph:フエニル; Me:メチル; Et:ェチル ;及び iPr:イソプロピルをそれぞれ示す。なお、置換基の前の数字は置換位置を示し 、例えば、 3,4- (C1) - 5- F- Phは、 3, 4—ジクロロ— 5—フルオロフヱ-ル基を示す。
2
[0030] [表 4]
[0031] [表 5]
sffi〔〕0032
〕〔3003
[8挲] [^εοο]
9T9lOC/900Zdf/X3d 03 而 900Z OJW
so6s
s〔s〕003lo
S3〔I003
〔〕0038
F+: 501
N1: 1.84-2.34(4H+3H+3H, m), 2.48-2.55(1 H, m), 2.85-3.2
3-F-2,4-(Me)2- 2(4H, m), 3.98(1 Hx 0.9, d), 4.30(1 Hx 0.1, d), 4.65(1 H
39 Ph
O.9, d), 4.81(1HX0.1, d), 7.22(1 H, t), 7.27(1H, d), 7. 78(2H, d), 7.98(2H, d), 9.66(1 H, s), 10.37(1H x 0.9, s), 10.51(1Hx0.1, s)
F+: 487
N1: 1.90-2.18(4H, m), 2.30(3HX0.1, s), 2.36(3HX0.9, s), 2.62-2.68(1 H, m), 3.01-3.23(4H, m), 3.99(1 H, d), 4.77(1
2-F-4-Me-Ph
40 H, d), 7.13(1H, d), 7.25(1H, d), 7.50(1H, dd), 7.77(2H, d), 7.99(2H, d), 9.66(1 H, s), 10.40(1 HX0.9, s), 10.45( 1HX0.1, s)
mp: 197-198 (EtOH) 産業上の利用可能性
本発明化合物は ACV耐性のへルぺスウィルスに対して良好な抗ウィルス作用を有 しており、抗 ACV耐性へルぺスウィルス剤として、 ACV耐性 VZV感染に伴う水痘(水 疱瘡)、帯状疱疹、 ACV耐性 HSV- 1および ACV耐性 HSV- 2感染に伴う口唇へルぺス 、ヘルぺス脳炎、性器へルぺス等の各種 ACV耐性へルぺスウィルス感染症の予防 若しくは治療に有用である。
また、本発明化合物は従来の抗ヘルぺスウィルス剤に比して良好な体内動態を有 し、低用量の経口投与においても良好な抗ウィルス活性を有する。また、核酸系薬剤 とは異なり変異原性の懸念も低く安全性が高い。