WO2006080463A1

WO2006080463A1 - ビタミンｋヒドロキノン誘導体を用いる癌治療剤および再発予防剤

Info

Publication number: WO2006080463A1
Application number: PCT/JP2006/301363
Authority: WO
Inventors: Jiro Takata; Kazuhisa Matsunaga; Yoshiharu Karube; Misa Matsubara
Original assignee: Fukuoka University
Priority date: 2005-01-28
Filing date: 2006-01-27
Publication date: 2006-08-03
Also published as: JP4040082B2; JPWO2006080463A1

Description

ビタミン Kヒドロキノン誘導体を用いる癌治療剤および再発予防剤関連出願

[0001] 本出願は、 2005年 1月 28日付け出願の日本国特許出願 2005— 22301号の優先権を主張しており、ここに折り込まれるものである。

技術分野

[0002] 本発明は癌疾患に適用される薬剤、特にビタミン Κヒドロキノン誘導体を用いる癌治療剤、癌予防剤及びキノン系抗癌剤の作用増強補助剤に関する。

背景技術

[0003] 天然型ビタミン Κはフイロキノン (ビタミン Κ )とメナキノン- 4 (ビタミン Κ )であるが、

1 2(20) これらの天然型ビタミン Κ類は γ -カルボキシグルタミン酸残基 (Gla)を有する Prothro mbinや他のビタミン K依存性タンパク質類の生合成に必須であり、止血剤、骨粗鬆症治療剤として用いられている。ビタミン K依存性タンパク質の生合成において、ビタミン Kは二電子還元体であるビタミン Kヒドロキノンとなり、グルタミン酸残基 (Glu)を γ - カルボキシグルタミン酸残基 (Gla)に変換する酵素（ γ -ダルタミルカルボキシラーゼ）の補因子として働くことが知られている。そしてビタミン Κ欠乏時やヮルフアリンなどのクマリン系薬物によるビタミン Κサイクル阻害時には、 Glaィ匕が不完全になり脱 γカルボキシルイ匕されたビタミン Κ依存性タンパク質が生成される。

[0004] 一方、天然型ビタミン Κであるフイロキノン (ビタミン Κ )とメナキノン- 4 (ビタミン Κ )

1 2(20) は癌細胞に対する抗腫瘍効果を有することが知られている（非特許文献 1、 2)。特に、メナキノン- 4 (ビタミン Κ )は、ビタミン Κ欠乏時と同様に Gluが Glaに変換されてヽ

2(20)

な、異常プロトロンビン（DCP、 Des- y - Carboxy Prothrombin)を放出する DCP陽性肝細胞癌に対して抗腫瘍効果と肝細胞癌の門脈浸潤抑制効果を有することが知られている（特開 2004-107330、非特許文献 3)。さらに、メナキノン- 4には細胞分化誘導作用による抗腫瘍効果が知られている（特開平 6-305955)。また、合成ビタミン Kであるビタミン K3やその誘導体が肝細胞癌に対して抗腫瘍効果を有することが知られている。（非特許文献 1、 4参照）しかし、天然型ビタミン Kの抗腫瘍効果はビタミン K3やその誘導体に比較して非常に低いことが報告されている（非特許文献 1、 2 参照)。

[0005] 一方、ビタミン Κ類は水に全く溶解しない化合物である。経口投与においては、溶解性がバイオアベイラビリティの律速過程となるため、ビタミン Κ類の水溶性製剤の調製には、大量の非イオン性界面活性剤の添カ卩による可溶ィ匕の方法が用いられている。し力し大量の非イオン性界面活性剤の添カ卩はアナフィラキシーショック等の重篤な問題を生じる場合がある。したがって反復して投与する場合には、その有害性を完全に払拭することはできない。

天然型ビタミン Κ類が抗腫瘍効果を有することは前述の通りであるが、確認されている顕著な抗癌効果が肝細胞癌に限定されること、抗癌効果が比較的低いこと、水溶解性に起因する低いバイオアベイラビリティなどの現状が抗癌作用を効果的に発揮させるための障害となっている。したがって、抗癌効果を各種癌に対して有し、抗癌効果が高ぐバイオアベイラビリティが高くあることで、抗癌作用を効率良く発揮できる医薬品の開発が強く望まれている。

[0006] 本発明者等は、特定の構造を有するビタミン Κヒドロキノン誘導体が投与後に還元過程を経な、で活性型ビタミン Κであるビタミン Κヒドロキノンを生成し、高ヽバイオアベイラピリティを発揮してビタミン Κの水不溶性問題を克服すること、および低プロトロンビン血症に対してすぐれた効果を呈することを既に開示した (特許第 3088137号、非特許文献 5、 6)。しかし、ビタミン Κヒドロキノン誘導体が抗癌効果を示すか否かにつ!/、ては明らかにはされて!、な!/、。

特許文献 1：特開 2004-107330

特許文献 2：特許第 3088137号

非特許文献 l :Wu et al, Life Sci., 52, 1797-1804(1993).

非特許文献 2 : Wang et al" Hepatology, 22, 876-882(1995).

非特許文献 3 : Otsuka et al" Hepatology, 40, 243-251(2004).

非特許文献 4 : Nishikawa et al., J. Biol. Chem., 270, 28304-28310 (1995).

非特許文献 5 : Takata et al., Pharm Res., 12, 18-23(1995).

非特許文献 6 : Takata et al., Pharm. Res., 12, 1973-1979(1995). 発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0007] 本発明の課題は、水溶性が高ぐ投与後、還元過程を経ないで活性型ビタミンであるビタミン Kヒドロキノンへと変換し、高、バイオアベイラビリティを発揮できる特定の構造を有する化合物を用いた抗癌剤、癌再発予防剤を提供することである。

課題を解決するための手段

[0008] 前述のとおり、本発明者等はビタミン Kヒドロキノン誘導体が、投与後に還元過程を経な、で活性型ビタミン Kであるビタミン Kヒドロキノンへと変換し、高、バイオアベィラビリティを発揮してビタミン Kの水不溶性問題を克服すること、および低プロトロンビン血症に対してすぐれた効果を呈することを既に報告している（特許第 3088137号、非特許文献 5、 6)。引き続き他の疾患への有効性を検討した結果、ビタミン Kヒドロキノン誘導体が各種癌に対する治療剤、再発予防剤として有効であることを見出し、本発明を完成するに至った。前記ビタミン Kヒドロキノン誘導体は下記一般式 (I)で表される。

一般式 (I)

[化 1]

(式中、 Rおよび Rはそれぞれ水素原子、またはアミノ酸、 N-ァシルアミノ酸、 N-アル

1 2

キルアミノ酸、 Ν,Ν-ジアルキルアミノ酸、ピリジンカルボン酸及びそれらのハロゲン化水素酸塩、アルキルスルホン酸塩または糖酸塩の残基カゝら選ばれる窒素置換基を有するカルボン酸残基、またはジカルボン酸及びそのアルカリ金属塩の残基力選ばれるジカルボン酸残基を表し、 R ,

Rの少なくとも一方は窒素置換基を有するカルボン酸残基、またはジカルボン酸残

2

基である。 Rは水素原子または下記一般式 (II) [化 2]

もしくは下記一般式 (m)

[化 3]

H

CH， CH， (I")

で示される基を表す。 nは 1〜14の整数を意味する。）で表されるビタミン Kヒドロキノンのカルボン酸エステル類またはその塩。

[0009] 即ち、本発明は、前記一般式 (I)で表されるビタミン Kヒドロキノンのカルボン酸エステル類またはその塩の少なくとも一種類を含有する抗癌剤、癌予防剤を提供する。発明の効果

[0010] 以上説明したように本発明にかかる癌疾患用薬剤によれば、ビタミン Kヒドロキノンのカルボン酸エステルまたはその塩を適用することにより、各種の癌に対し優れた治療、予防効果を発揮することができる。

図面の簡単な説明

[0011] [図 1]本発明に力かるビタミン Kヒドロキノン誘導体による肝細胞癌 (PLC/PRF/5)に対する増殖抑制効果を示す説明図である。

[図 2]本発明に力かるビタミン Kヒドロキノン誘導体による肺癌細胞 (A549)に対する増殖抑制効果を示す説明図である。

[図 3]本発明に力かるビタミン Kヒドロキノン誘導体による白血病細胞 (HL60)のカスバーゼ -3Z7活性に対する影響を示す説明図である。

[図 4]本発明に力かるビタミン Kヒドロキノン誘導体による胃癌細胞 (SDT4)に対する増殖抑制効果を示す説明図である。

[図 5]本発明に力かるビタミン Kヒドロキノン誘導体によるマイトマイシン C耐性胃癌細胞 (ST4)に対する増殖抑制効果を示す説明図である。

[図 6]本発明に力かるビタミン Kヒドロキノン誘導体による大腸癌細胞 (HT29)に対する増殖抑制効果を示す説明図である。

[図 7]本発明にかかるビタミン Kヒドロキノン誘導体によるキノン系抗癌剤の抗癌作用に対する作用増強効果を示す説明図である。

[図 8]本発明に力かるビタミン Kヒドロキノン誘導体によるマウス移植ヒト肝細胞癌に対する抗癌作用を示す説明図である。

発明を実施するための最良の形態

[0012] 以下、本発明の好適な実施形態について詳細な説明を行う。

本発明は、前記一般式 (I)で表される化合物またはその塩を含有する抗癌剤、癌再発予防剤に関する。前記一般式 (I)で表される化合物は、単独で製剤に含有させることもできるし、その塩として製剤に配合することもできる。本発明において、窒素置換基を有するカルボン酸残基 R ,

Rとしては次のものが例示される。

2

窒素原子に対し水素原子；

窒素原子に対し 1または 2のアルキル基；

窒素原子に対しァシル基。

前記アルキル基としては、炭素数 1〜6の直鎖、もしくは分枝のアルキル基であり次のものが例示される。

メチル基、ェチル基、 n-プロピル基、 n-ブチル基、 n-ペンチル基、 n-へキシル基、ィソプロピル基、イソブチル基、 1-メチルプロピル基、 tert-ブチル基、 1-ェチルプロピル基、イソアミル基。

上記アルキル基としてはメチル基、ェチル基が特に好ましい。また、ァシル基を有する場合の炭化水素鎖も同様に定義可能である。

[0013] ァミノ基とカルボニル基の間は、好ましくは炭素数 1〜7の直鎖、分枝または環状のアルキレン基で結合される。前記分枝状のアルキレン基としては、次のものが例示される。

イソプロピル、イソブチル、 tert-ブチル、 1-ェチルプロピルなどのアルキル基から誘導されたもの。

前記環状アルキレン基としては、次のものが例示される。

シクロペンタン環、シクロへキサン環、あるいはメチルシクロへキサン環などを構造中に含むもの。

上記アルキレン基としては、メチレン基またはエチレン基が特に好まし!/、。

[0014] ノ、ロゲン化水素酸塩としては、塩酸塩、臭化水素酸塩などが好ま U、。本発明において、ハロゲンィ匕水素酸塩は結晶化ないし固形ィ匕する場合が多ぐ製剤化にあたつての取り扱、が容易になると、う利点がある。

その他の塩としては次のものが例示される。

アルキルスルホン酸塩としてはメタンスルホン酸塩等、糖酸塩としてはダルコン酸塩、ダルコヘプタン酸塩、ラタトビオン酸塩等。

[0015] 本発明にお、て、ジカルボン酸残基 R ,

Rはジカルボン酸及びそのアルカリ金属塩の残基力選ばれる。ジカルボン酸残基

2

のカルボ-ル基間は炭素数 2〜4の直鎖のアルキレン基で結合される。アルキレン基として特に好ましいのは、エチレン基である。アルカリ金属塩としてナトリウム塩、力リウム塩が好ましい。

[0016] 本発明において、前記一般式 (I)で表される化合物の式中、 R , Rとしてはそれぞ

1 2

れ水素原子、または前記窒素置換基を有するカルボン酸残基、または前記ジカルボン酸残基から選ばれる基である。 R ,

Rの少なくとも一方は前記窒素置換基を有するカルボン酸残基または前記ジカルボ

2

ン酸残基であるが、より好ましくは窒素置換基を有するカルボン酸残基である。

[0017] また、本発明において、一般式 (I)で表される化合物の製造方法は種々考えられる力代表的な方法を述べれば以下の通りである.

[化 4]

(式中、 R₃は前 ¾Gの; 味を有する。）

1

(式中、 κ₃は前纪の意味を有する。）

1

エスケル化

[0018] 一般式 (IV)で表されるビタミン K類を還元剤で還元し、一般式 (V)で表されるビタミン Κヒドロキノンとし、このビタミン Κヒドロキノンと、窒素置換基を有するカルボン酸、若しくはその反応性酸誘導体またはこれらのハロゲンィ匕水素酸塩とを常法によりエステルイ匕反応を行なうことにより、本発明の目的物質 (I)を得ることができる。ここで用いられる還元剤はビタミン κ類のナフトキノン骨格をナフトヒドロキノン骨格に還元するものであり、次のものが例示される。

水素化ホウ素ナトリウム、ノ、イドロサルファイトナトリウム、トリ- η-ブチルホスフィン、塩化亜鉛、塩化第一スズ。

[0019] ビタミン Κヒドロキノンのエステルイ匕反応は常法に従うが、 1級、 2級ァミノ基あるいは側鎖に水酸基、チオール基を有するアミノ酸のエステル化を行なう際は、 tert-ブトキシカルボニル基（以下 t-BOC基と略記）、ベンジルォキシカルボ-ル基（以下 Z基と略記）、 9-フルォレニルメトキシカルボ-ル基（以下 FMOC基と略記）などの適切な保護基で保護して用い、 Ν,Ν-ジアルキルアミノ酸はハロゲンィ匕水素酸塩を用いて、ジシクロへキシルカルポジイミド（以下 DCCと略記）、 Ν,Ν-ジサクシ-ミドォキザレート（以下 DSOと略記)などの活性エステル化試薬の存在下に反応を行なうことが好ま、結果を与える。前記反応の際の反応溶媒としては無水ピリジンが好ましい。また、反応性酸誘導体を用いる方法では、酸ハロゲナイト、中でも酸クロリドを用いる方法が特に好ましい。この場合の反応溶媒としては無水ベンゼン無水ピリジン混合物が好ましい。ハロゲンィ匕水素酸塩、アルキルスルホン酸塩、糖酸塩は常法により遊離のビタミン Κヒドロキノン窒素含有カルボン酸エステルとハロゲン化水素酸、アルキルスルホン酸、酸性糖のラタトン体を反応させて製造する。また、 Ν-ァシルアミノ酸エステルを製造した後、常法によりハロゲン化水素酸で脱保護基ィ匕することによってハロゲン化水素酸塩を製造することができる。

実施例

[0020] 以下、本発明のより具体的な実施例について説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

例 ί〜28

下記の製造方法 A〜Gに示す方法により表 1〜 5に示すビタミン Kヒドロキノン誘導体を製造した。また、得られた物質の質量スペクトル (イオン化方法; FD法および FAB 法）および¹!" I- NMR ^ベクトルの値を表 6〜8に示す。

[0021] [製造方法 A]

アミノ酸 O.lmolを蒸留水-ジォキサン（1 : 1 vZv) 100mlに溶解し、トリェチルァミン 3 0mlを加え、ジ -tert-ブチルジカルボネートを徐々に加え 30分間室温で撹拌する。減圧下ジォキサンを留去し、炭酸水素ナトリウム水溶液 (0.5M) 50mlをカ卩ぇ酢酸ェチル 1 00mlで洗う。酢酸ェチル層を 50mlの炭酸水素ナトリウム液で洗い、水層を合わせて氷冷下でクェン酸水溶液 (0.5M)をカ卩えて酸性 (pH3)とし、塩ィ匕ナトリウムを飽和させた後、酢酸ェチルで抽出する (100ml X 3回)。抽出液を無水硫酸ナトリウムで脱水後減圧下溶媒を留去し、油状残渣にイソプロピルエーテルをカ卩える力、または冷却にて結晶化させて、 N-t- BOC-アミノ酸を得る。ビタミン K6.75mmolをイソプロピルエーテル 4 0mlに溶解し、水素化ホウ素ナトリウム 47mmolをメタノール 15mlに溶解してカ卩え、溶液の黄色が無色になるまで室温で撹拌する。反応液にイソプロピルエーテル 60mlと蒸留水 100mlを加え、イソプロピルエーテル層を分離し、更に水層にイソプロピルエーテル 100mlをカ卩えて可溶画分を抽出し、イソプロピルエーテル層を合わせて無水硫酸ナトリウムで脱水後減圧下濃縮する。残渣に n-へキサンを加えて白色沈殿を析出させてビタミン Kヒドロキノンを得る。

[0022] ビタミン Kヒドロキノン、 N- 1- BOC-アミノ酸 13.55mmol、 DCC13.55mmolを無水ピリジン 50mlに加え室温で 20時間撹拌する。溶媒を減圧下留去し、残渣に酢酸ェチルを加えて可溶画分を抽出する (100ml X 2回)。抽出液を減圧下濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (溶離溶媒; n-へキサン-イソプロピルエーテル)で分離精製し、ビタミン Kヒドロキノン- 1,4-ビス- N- 1- BOC-アミノ酸を得る。ビタミン Kヒドロキノン- 1,4-ビス- N-t- BOC-アミノ酸を少量のアセトンに溶解し、塩酸-ジォキサン (2.5〜4 .ON)をエステル量の約 20倍モル量の塩酸量に相当する量カ卩ぇ 1時間撹拌後、減圧下溶媒を留去する。残渣をアセトン-メタノール系で再結晶してビタミン Kヒドロキノン- 1 ,4-ビス-アミノ酸エステルの塩酸塩を得る。

[0023] [製造方法 B]

ビタミン K6.75mmolをイソプロピルエーテル 40mlに溶解し、水素化ホウ素ナトリウム 4 7mmolをメタノール 15mlに溶解してカ卩え、溶液の黄色が無色になるまで室温で撹拌する。反応液にイソプロピルエーテル 60mlと蒸留水 100mlをカ卩え、イソプロピルエーテル層を分離し、更に水層にイソプロピルエーテル 100mlをカ卩えて可溶画分を抽出、ィソプロピルエーテル層を合わせて無水硫酸ナトリウムで脱水後減圧下濃縮する。残渣に n-へキサンをカ卩えて白色沈殿を析出させてビタミン Kヒドロキノンを得る。ビタミン Kヒドロキノン、塩酸 Ν,Ν-ジアルキルアミノ酸 13.55mmol、 DCC13.55mmolを無水ピリジン 50mlに加え室温で 20時間撹拌する。溶媒を減圧下留去し、残渣を、蒸留水に懸濁させ炭酸水素ナトリウムを加えて溶液の pHを 7〜8に調整した後に酢酸ェチルで抽出する (100ml X 3回)。抽出液を無水硫酸ナトリウムで脱水後減圧下溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離溶媒;イソプロピルエーテル-酢酸ェチル）で分離精製し、ビタミン Kヒドロキノン- 1,4-ビス- Ν,Ν-ジアルキルアミノ酸エステルを得る。

[0024] [製造方法 C]

ビタミン K6.75mmolをイソプロピルエーテル 40mlに溶解し、ハイドロサルファイトナトリゥム 50mmolを蒸留水 50mlに溶解して加え、イソプロピルエーテルが褐色を呈し、さらに無色になるまで室温で撹拌する。イソプロピルエーテル層を分離し、更に水層にィソプロピルエーテル 100mlをカ卩えて可溶画分を抽出、イソプロピルエーテル層を合わせて無水硫酸ナトリウムで脱水後減圧下濃縮する。残渣に n-へキサンを加えて白色沈殿を析出させてビタミン Kヒドロキノンを得る。ビタミン Kヒドロキノンに塩酸 Ν,Ν-ジァルキルアミノ酸 6.75mmol、 DCC6.75mmolをカ卩ぇ無水ピリジン 50ml中で 20時間撹拌する。溶媒を減圧下留去し、残渣を、蒸留水に懸濁させ炭酸水素ナトリウムを加えて溶液の pHを 7〜8にした後酢酸ェチルで抽出する (100ml X 3回)。抽出液を無水硫酸ナトリウムで脱水後減圧下溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (溶離溶媒;イソプロピルエーテル-酢酸ェチル、 3 : 2)で分離精製し、ビタミン Kヒドロキノン- 1-Ν,Ν-ジアルキルアミノ酸エステルおよびビタミン Kヒドロキノン- 4-Ν,Ν-ジアルキルアミノ酸エステルを得る。

[0025] [製造方法 D]

ビタミン K6.75mmolをイソプロピルエーテル 40mlに溶解し、水素化ホウ素ナトリウム 4 7mmolをメタノール 15mlに溶解してカ卩え、溶液の黄色が無色になるまで室温で撹拌する。反応液にイソプロピルエーテル 60mlと蒸留水 100mlをカ卩え、イソプロピルエーテル層を分離し、更に水層にイソプロピルエーテル 100mlをカ卩えて可溶画分を抽出、ィソプロピルエーテル層を合わせて無水硫酸ナトリウムで脱水後減圧下濃縮する。残渣に n-へキサンをカ卩えて白色沈殿を析出させてビタミン Kヒドロキノンを得る。ビタミン Kヒドロキノンを無水ベンゼン-無水ピリジン（1： 1、 vZv) 30mlに溶解し、塩酸ピリジンカルボン酸クロリドを加え室温で 3時間撹拌する。不溶物を濾過で取り除き、濾液を減圧下濃縮する。残渣を蒸留水 100mlに懸濁させ、炭酸水素ナトリウムを加え (pH7〜 8)、酢酸ェチルに可溶分画を抽出する (100ml X 3回)。抽出液を減圧下濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離溶媒;イソプロピルエーテル-酢酸ェチル、 9 : 1)で分離精製し、ビタミン Kヒドロキノン- 1,4-ビス-ピリジンカルボン酸エステルを得る。

[0026] [製造方法 E]

ビタミン Kヒドロキノン- 1,4-ビス- Ν,Ν-ジアルキルアミノ酸エステル又はビタミン Kヒドロキノン- 1,4-ビス-ピリジンカルボン酸 2mmolをアセトン 20mlに溶解し、塩酸-ジォキサン (2.5〜4.0N)を塩酸量がエステルの 10倍モル量に相当する量カ卩え、溶媒を減圧下留去し、残渣をアセトン-メタノールで再結晶してビタミン Kヒドロキノン- 1,4-ビス- Ν,Ν- ジアルキルアミノ酸又はビタミン Κヒドロキノン- 1,4-ビス-ピリジンカルボン酸の塩酸塩を得る。

[0027] [製造方法 F]

ビタミン Κヒドロキノン- 1,4-ビス- Ν,Ν-ジアルキルアミノ酸又はビタミン Κヒドロキノン- 1,4-ビス-ピリジンカルボン酸 2mmolをジクロロメタン 20mlに溶解し、アルキルスルホン酸 2mmolをカ卩ぇ撹拌する。析出する結晶を濾取してビタミン Kヒドロキノン- 1,4-ビス- N ,Ν-ジアルキルアミノ酸エステル又はビタミン Kヒドロキノン- 1,4-ビス-ピリジンカルボン酸エステルのアルキルスルホン酸塩を得る。

[0028] [製造方法 G]

ビタミン K4.55mmolをイソプロピルエーテル 40mlに溶解し、水素化ホウ素ナトリウム 3 1.5mmolをメタノール 15 mlに溶解してカ卩え、溶液の黄色が無色になるまで室温で撹拌する。反応液にイソプ口ピルエーテル 60mlと精製水 100mlをカ卩え、イソプロピルエーテル層を分離し、更に水層にイソプロピルエーテル 100mlを加えて可溶画分を抽出、イソプロピルエーテル層を合わせて、無水硫酸ナトリウムで脱水後、減圧下溶媒を留去する。残渣にジメチルァミノピリジン 8.97mmol、無水コハク酸 18.0mmolを加え、イソプロピルエーテル-ジォキサン（6:4,

v/v) 100mlに溶解して、室温で 3時間撹拌後、 50〜60°Cに加熱しながら 2時間反応させ、さらに室温で放冷しながら 10時間反応させる。反応液に精製水 100mlを加え、ィソプロピルエーテル層を分離し、無水硫酸ナトリウムで脱水後、減圧下溶媒を留去する。残渣をイソプロピルエーテルに懸濁し、遠心して得た沈殿物に酢酸ェチル 100ml と精製水 100mlを加え酢酸ェチル可溶画分を抽出し、無水硫酸ナトリウムで脱水後、減圧下溶媒を留去する。残渣をイソプロピルエーテルに懸濁し不溶物を酢酸ェチルで再結晶して、ビタミン Kヒドロキノン- 1,4-ビス-コハク酸エステルを得る。

[表 1]

〔s〔003

实施例化合物名 Ri n 製造方法

7 ビタミン κ_{2 (20)}ヒド {CH₃)2NCH₂CO- (CH₃)₂NCH₂CO- 4 B, C ロキノン— 1, 4-ビス- Ή , Ν-ジメチルグリシ CH₃

n

ネ一卜

8 ビタミン κ_{2 (20)}ヒド (CH₃)₂NCH₂CO- H 4 B, C ロキノン- 1- ΝΉ Ή メチルダリシネート CH₃

n

9 ビタミン ¾₍₂₀₎ヒド H (CH₃)₂NCH₂CO- 4 B, C^ 〔〕〔〕00313 口キノン -4 ジ Ή

メチルグリシネー卜 CH₃

n

1 0 ビタミン Κ_{2 (20)}ヒド HCI■ {CH₃)₂NCH₂CO- HCI · (CH₃)₂NCH₂CO- 4 E ロキノン- 1, 4 ビス- Ή ^ジメチルダリシ CH₃

n

ネ一ト塩酸塩

1 1 ビタミン κ_{2 (20})ヒド HCI · (CH3)₂NCH₂CO- H 4 E ロキノン- 1- ジ -^¾¾^^ Ή メチルダリシネート CH₃ 塩酸塩

1 2 ビタミン (20)ヒド H HCI · (CH₃)₂NCH₂CO- 4 E 口キノン- 4 ^ジ Ή

CH₃

メチルダリシネ一卜 n 塩酸塩

実施化合物名 n 製造例方法

〔〕0032 1 3 ビタミン K_{2 (20)}ヒド CH3SO3H · (C )つ NCH₂CO- CH₃S0₃H · {CH₃)₂NCH₂CO-

Ή 4 F 口キノン— 1，ビス—

Ν，Ν-ジメチルグリシ CH₃

n

ネートメタ

オン酸塩

1 4 ビタミン κ_{2 (20})ヒド HCI · NH₂CH₂CO- HCI · NH₂CH₂CO- 4 A キノ 1, 4- Ή

グリシネート塩酸塩 CH₃

n

1 5 ビタミン (20)ヒド HCI， CH₃NHCH₂CO- HCI · CH₃NHCH₂CO- 4 A 口キノン— 1，4—ビス Ή

サルコシネ一ト塩酸 CH₃ 塩 n

1 6 ビタミン κ_{2 (20)}ヒド 4 A 口キノン 1, 4-ビス— HCI ' NH₂CH ")-00— HCI - NH₂CH₂— ^ ト CO— Ή

トラネキサメート CH₃

酸塩 n

1 7 ビタミン κ_{2 (20)}ヒド HCI · NH₂(CH₂}₅CO- HCI · NH₂CCH₂)5CO- 4 A 口キノンー 1， 4-ビス H

-ァミノ力プロェ CH₃

卜塩酸 n

1 8 ビタミン Κ₂ (20)ヒド 4 D 口キノレー 1, 4-ビス Ή

ニコチネート Or^c。— CT^C。—

CH₃

n

実施化合物名 R₃ n 製造例方法^ §sa 1 9 ビタミン K₂₍₂₀₎ヒド

H 4 E 口キノン— 1,4-ビス— 。—

ニコチネート塩酸塩 N CH₃

n

2 0 ビタミン κ₂₍₂₀)ヒド 4 F 口キノン— 1, 4 ビス— CH₃S0₃H - J CH₃S0₃H - f ( H

ニコチネートメタン N CH₃ スルフォン酸塩 n

2 1 ビタミンヒド (CH₃)₂NCH₂CO- (CH₃)₂NCH₂CO- B C 口キノン— 1,4—ビス Ή

N N-ジメチルダリシ CH₃ CH₃ ネート 3

2 2 ビタミン Kiヒド (CH₃)₂NCHつ CO- H B,C 口キノン- 1 N is^T -ジ Ή メチダリシネート CH₃ CH₃

3

2 3 ビタミンヒド IH (CH₃)₂NCH₂CO- B,C 口キノンー 4 N, N—ジ Ή メチルダリシネ一ト CH₃ CH₃

3

2 4 ビタミンヒド HCI * (CHQ)₂NCH₂CO- HCI (CH₃)2NCH₂CO- E 口キノン- 1,4 ビス- •H

N N-ジメチルダリシ CH₃ CH₃ ネート塩酸塩 3

実施化合物名 R₃ n 製造例方法

2 5 ビタミンヒド HCI · (CH₃}2NCH₂CO- H E 口キノン— 1一 Γί, Ν-ジ •H sffi メチルグリシネ一卜 CH₃ CH₃

0034 塩酸塩 3

2 6 ビタミン ]^ヒド H HCI · (CH₃)₂NCH₂CO- E ロキノン- 4一 N N -ジ Ή メチルグリシネー卜 CH₃ CH₃ 塩酸塩 3

2 7 ビタミン K₃ヒド (CH₃)₂NCH₂CO- H H - B ロキノン- 1- Ν, Ιί-ジ

メチルグリシネート

2 8 ビタミン κ₃ヒド HCI■ (CH₃)₂NCH₂CO- H H E 口キノン- 1 - Ν, Ν-ジ

メチルグリシネート

塩酸塩

2 9 ビタミン Κ_{2 (20})ヒド HOOCCH₂CH₂CO- HOOCCH₂CH₂CO- 4 G 口キノン -1, 4-ビス- H サクシネー卜 CH₃

n

[0037] 次に本発明を具体的に説明するために以下に適用例をあげる力本発明はこれらに限定されるものではない。

[0038] 本発明化合物の抗癌剤、癌再発予防剤としての有用性を示すため、各種ヒト培養細胞系による増殖抑制実験例および in vivoにおけるマウス移植ヒト癌に対する抑制効果の実験例をあげる。

実験に用いたヒト培養癌細胞は PLC/PRF/5 (肝細胞癌）、 H印 G2細胞 (肝細胞癌）、 Hep3B細胞 (肝細胞癌）、 A549 (肺癌）、 HL60 (白血病）、 SDT4細胞（胃癌）、 ST4細胞（胃癌、マイトマイシン C耐性株）、 HT29細胞（大腸癌）、 HT29/MMC細胞（大腸癌、マイトマイシン C耐性株)である。

[0039] ヒト肝細胞癌である PLC/RPF/5細胞、 Hep3B細胞と HepG2細胞は 10%ゥシ胎児血清、ペニシリン、ストレプトマイシンを含む Dulbecco' s

modified Eagle' s medium (DMEM)培地を用い、 SDT4細胞、 ST4細胞、 HT29細胞、 H T29/MMC細胞は 10%ゥシ胎児血清、カナマイシンを含む RPMI1640培地を用い、 H L60細胞は 10%ゥシ胎児血清、ペニシリン、ストレプトマイシンを含む RPMI1640培地を用、継代培養して用ヽた。

[0040] 評価方法 i :WST- 8 用いる細朐数評による増 ¾制効菜評

PLC/RPF/5細胞、 Hep3B細胞、 HepG2細胞、 A549細胞の各細胞を 96well plateに 0 .5xl0⁴cells/well播種し、 24時間培養後、培地をメナテトレノン、メナジオン、化合物 N

0.

10、 11、 12、 24、 25、 29を添加した培地に交換し、 37。C、 5%CO条件で 24時間、

2

48時間、 72時間培養後に薬物を含む培地を取り除き、薬物を含まない培地に交換し、 WST-8試薬を加え 2時間培養した後、 450nm,

655應の吸光度測定により細胞数を測定し、細胞増殖抑制効果を評価した。

[0041] 評方法 2 :^aH- thvmidineのり认みの阳.害による谐 ¾制効菜評

Hep3B細胞、 HepG2細胞の各細胞を 24weU- plateに 2xl0⁴ cells/well播種し、 24時間培養後、培地をメナテトレノン、メナジオン、化合物 No.

10、 11、 12、 24、 25を添カ卩した培地に交換し 3日間培養した。培地を³ H-thymidine を0.5m _iu Ci/mL含む培地に交換し、 4時間培養した後、培地を除去し、細胞を等張リン酸緩衝液で 2回洗浄後、 Lysis

Buffer 400 Lで細胞を溶解した。細胞溶解液をシンチレーシヨンバイアルに移し、シンチレーシヨンカクテルをカ卩え、液体シンチレーシヨンカウンタ一により放射能を測定し、 ³H-thymidineの DNA取り込みの阻害力細胞増殖抑制効果を評価した。

[0042] 評価方法 3 : CellTiter- Glo Luminescent Cell Viability Assay試薬を用いる細朐数評価による ¾1 評 HL60細胞を 96 well plateに lxlO⁴ cells /well播種し、さらに薬物を添カ卩後、 37°C、 5

%

CO条件で培養し、薬物添加から 3、 6、 12、 24時間後に Celltiter- Glo Luminescent

2

Cell

Viability Assay試薬（プロメガ）を 100 μ L各ゥエルに添カ卩し、 96ゥエルプレートルミノメ一ターで発光量を測定して細胞増殖抑制効果を評価した。

[0043] (適用例 1)

[肝細胞癌に対するビタミン Kヒドロキノン誘導体の増殖抑制効果]

肝細胞癌である PLC/RPF/5細胞の細胞増殖は、メナキノン- 4、メナヒドロキノン- 4 誘導体 (化合物 10、 11、 12)の添カ卩によって用量依存的に抑制された。しかし、増殖抑制効果の発現時間は薬物によって大きく異なり、添加 8時間ではメナヒドロキノン- 4 誘導体 (化合物 10、 11、 12)で僅かに増殖抑制効果が観察されたが、添加 24時間では化合物 10、 12に顕著な増殖抑制効果が観られ、添加 48時間でィ匕合物 11の顕著な増殖抑制効果が発現した。メナキノン- 4は添加 48時間まで増殖抑制効果は観られず 72時間で増殖抑制効果が発現した。典型例として図 1に評価方法 1による PL C/RPF/5細胞の細胞増殖に及ぼす増殖抑制効果を示した。表 9に PLC/RPF/5細胞に対する 50%生育阻止濃度 (IC )を示した。図 1と表 9から明らかなように、メナヒドロ

50

キノン- 4誘導体 (化合物 10、 11、 12)はメナキノン- 4に比較して素早く細胞増殖抑制効果を発現することが明らかになった。また、メナヒドロキノン- 4誘導体 (ィ匕合物 10 、 11、 12)の添加 72時間における IC は何れもメナキノン- 4に比較して低用量です

50

ぐれた癌細胞増殖抑制効果を示した。

[0044] HepG2細胞と Hep3B細胞の細胞増殖は、メナキノン- 4、メナヒドロキノン- 4誘導体（化合物 10、 11、 12、 29)、メナジオン (ビタミン K3)の添カ卩によって用量依存的に抑制された。増殖抑制効果の発現時間は薬物によって大きく異なり、添加 24時間では化合物 10、 11、 12、 29およびメナジオンに顕著な増殖抑制効果が観られた力メナキノン- 4は添加 72時間でわずかな増殖抑制効果が観られた。表 10と表 11にそれぞれ評価方法 1による HepG2細胞と Hep3B細胞に対する 50%生育阻止濃度 (IC )を示

50 した。さらに、表 12に評価方法 2による HepG2細胞と Hep3B細胞に対するメナキノン- 4、メナヒドロキノン- 4誘導体 (ィ匕合物 10、 11、 12)、フイロキノン、フイロヒドロキノン誘導体 (化合物 24、 25)、メナジオン (ビタミン K3)の 50%生育阻止濃度 (IC )を示した

50

。 HepG2細胞と Hep3B細胞に対するメナジオンとメナヒドロキノン- 4誘導体 (化合物 1 0、 11、 12、 29)はメナキノン- 4に比較して素早く細胞増殖抑制効果を発現することが明らかになり、添加 72時間における IC は何れもメナキノン- 4に比較して低用量で

50

すぐれた癌細胞増殖抑制効果を示した。 DCP陽性の HepG2細胞と DCP陰性の H印 3 B細胞のどちらの肝細胞癌に対しても低濃度で効果を示すことが明らかになった。表 12から、 Hep3B細胞に対してフイロヒドロキノン誘導体 (ィ匕合物 24)はフイロキノンよりも優れた増殖抑制効果を示していることが明らかである。しかし、メナヒドロキノン- 4誘導体の効果に比較してフイロヒドロキノン誘導体の効果は低力つた。

[0045] 肝細胞癌に対してビタミン Kヒドロキノン誘導体はメナキノン- 4に比較して速く増殖抑制効果を発現し、その速度は化合物 10>化合物 12>化合物 11であった。また、高田等は肝臓ミクロソーム中の酵素によって化合物 10〜 12からメナヒドロキノン- 4が生成される速度は化合物 10く化合物 12 <化合物 11であることを既に報告して、る (Takata et al.， Pharm Res., 12, 18-23(1995))。すなわち、ビタミン Kヒドロキノン誘導体力らメナヒドロキノン- 4 (ィ匕合物 V)への変換が遅、ィ匕合物ほど、増殖抑制効果を速やかに発揮することになり、ビタミン Kヒドロキノン誘導体 (ィ匕合物 10〜 12)はメナヒドロキノン- 4 (化合物 V)に変換されずに、誘導体の構造の状態で癌細胞増殖抑制効果を発揮できることを示唆して、る。

したがって、ビタミン Kヒドロキノン誘導体自身、およびその二次代謝産物であるビタミン Kヒドロキノンにも特定の肝臓癌において癌細胞増殖抑制効果があることとなり、より効率の良い、安全な癌治療剤の提供が可能になることが明らかである。

[0046] [ビタミン Kヒドロキノン誘導体投与後の標的臓器への送達性]

肝細胞癌に対してビタミン Kヒドロキノン誘導体がすぐれた効果を持つことを適用例 1で示したが、このすぐれた効果がさらに効率良く発揮されるためには、ビタミン Kヒドロキノン誘導体が標的臓器である肝臓に送達されることが好ましい結果をあたえる。高田等は、メナヒドロキノン- 4誘導体 (ィ匕合物 10、 11、 12)はラットにおいて静脈内投与後 15分でほぼ肝臓に移行することを明らかにしている（Takata et al, Pharm. R es.， 12, 1973-1979(1995))。すなわち、メナヒドロキノン- 4誘導体（ィ匕合物 10、 11、 12)はメナヒドロキノン- 4誘導体 (ィ匕合物 10、 11、 12)の肝臓への選択的送達法であることから、メナヒドロキノン- 4誘導体は肝細胞癌の効率的な治療法を提供できることを示している。また、高田等はメナヒドロキノン- 4誘導体は肝臓中でメナヒドロキノン- 4 およびメナキノン- 4に変換されることを明らかにしており（Takata et al., Pharm. Re s.， 12, 1973-1979(1995))、メナキノン- 4は肝細胞癌に対して抗癌効果を有することが明らかにされていることからメナキノン- 4としても抗癌剤として機能できる。さら〖こ、メナヒドロキノン- 4誘導体はメナキノン- 4に代謝されること、メナキノン- 4は骨粗鬆症治療にお、て重篤な副作用が報告されて、な、安全な化合物であることから、メナヒドロキノン- 4誘導体は肝細胞癌に対して優れた効果を発揮でき、さらに安全性が高 V、肝細胞癌の効率的な治療法を提供できることを示して、る。

[0047] [表 9]

PLC/PRF/5細胞に対するビタミン Kヒドロキノン誘導体の増殖抑制作用

[0048] [表 10]

HepG2細胞に対するビタミン Kヒドロキノン誘導体の増殖抑制作用

[0049] [表 11] 表 1 1 Hep3B細胞に対するビタミン Kヒドロキノン誘導体の増殖抑制作用

[0050] [表 12]

表 1 2 Hep3B細胞および HepG2細胞に対するビタミン Kヒドロキノン誘導体の増殖抑制作用

[0051] (適用例 2)

[肺癌細胞に対するビタミン Kヒドロキノン誘導体の増殖抑制効果]

肺癌細胞である A549細胞の細胞増殖は、メナキノン- 4、メナヒドロキノン- 4誘導体（化合物 10、 11、 12、 14)の添カ卩によって用量依存的に抑制された。フイロキノンの添加によって増殖抑制は観られな力つた。増殖抑制効果の発現時間は薬物によって大きく異なり、添加 24時間ではメナヒドロキノン- 4誘導体 (ィ匕合物 10、 12、 14)で顕著な増殖抑制効果が観られ、添加 48時間でィ匕合物 11の顕著な増殖抑制効果が発現した。メナキノン- 4は添加 48時間まで増殖抑制効果は観られず 72時間で増殖抑制効果が発現した。典型例として図 2に評価方法 1による A549細胞の細胞増殖に及ぼす増殖抑制効果を示した。表 13に評価方法 1による A549細胞に対する 50%生育阻止濃度 (IC )を示した。表 13から明らかなように、メナヒドロキノン- 4誘導体 (ィ匕合物 1

50

0、 11、 12、 14)はメナキノン- 4に比較して素早く細胞増殖抑制効果を発現することが明らかになった。また、メナヒドロキノン- 4誘導体 (ィ匕合物 10、 11、 12、 14)の添カロ 72時間における IC は何れもメナキノン- 4に比較して低用量ですぐれた肺癌細胞増

50

殖抑制効果を示した。

[0052] [表 13] A549 細胞に対するビタミン Kヒドロキノン誘導体の増

殖抑制作用

[0053] (適用例 3)

[白血病細胞に対するビタミン Kヒドロキノン誘導体の増殖抑制効果]

白血病細胞である HL60細胞の細胞増殖は、メナヒドロキノン- 4誘導体 (ィヒ合物 10、 11、 12、 14)の添カ卩によって用量依存的に抑制された。増殖抑制効果の発現時間は薬物によって大きく異なり、添加 3時間ではメナヒドロキノン- 4誘導体 (ィ匕合物 14) で顕著な増殖抑制効果が観察され、添加 12時間でメナヒドロキノン- 4誘導体 (ィ匕合物 10、 12)に顕著な増殖抑制効果が観られ、添加 24時間でィ匕合物 11の顕著な増殖抑制効果が発現した。メナキノン- 4とフイロキノンは添加 24時間まで増殖抑制効果は観られなかった。表 14に評価方法 3による A549細胞に対する 50%生育阻止濃度 (I C )を示した。表 14から明らかなように、メナヒドロキノン- 4誘導体 (ィ匕合物 10、 11、 1

50

2、 14)はメナキノン- 4に比較して素早く細胞増殖抑制効果を発現することが明らかになった。また、メナヒドロキノン- 4誘導体 (ィ匕合物 10、 11、 12、 14)の添加 24時間におけるは何れもメナキノン- 4に比較して低用量で優れた癌細胞増殖抑制効果

50

を示した。

[0054] [HL60細胞中のカスパーゼ -3Z7活性に対するビタミン Kヒドロキノン誘導体の効果]

HL60細胞を 96 well plateに lxlO⁴ cells /well播種し、さらに薬物を添カ卩後、 37°C、 5

%

CO条件で培養し、薬物添加から 4、 12時間後に Caspase- Glo 3/7 Assay試薬（プロ

2

メガ）を 100 L各ゥエルに添カ卩し、 96ゥエルプレートルミノメーターで発光量を測定してカスパーゼ -3Z7活性を評価した。カスパーゼ 3の阻害剤として Z-VAD-FMKを用いた。

HL60細胞のカスパーゼ -3Z7は、メナヒドロキノン- 4誘導体（ィ匕合物 10、 14)の添加により活性ィ匕され、化合物 14の 40 M添加後 4時間で約 6倍、化合物 10の 80 M 添加後 12時間で約 7倍に上昇した（図 3)。また、誘導体によるカスパーゼ -3Z7活性の上昇は、カスパーゼ阻害剤、 Z-VAD-FMKの添カ卩により完全に抑制された。メナヒドロキノン- 4誘導体の HL60細胞の増殖抑制には、カスパーゼ 3の活性ィ匕を伴うァポトーシスの誘導が関与することが示された。

[0055] [表 14] 表 1 4 HL60細胞に対するビタミン Kヒドロキノン誘導体の増殖抑制作用

[0056] (適用例 4)

[胃癌細胞に対するビタミン Kヒドロキノン誘導体の増殖抑制効果]

胃癌細胞である SDT4細胞の細胞増殖は、メナキノン- 4、メナジオン、メナヒドロキノン -4誘導体 (化合物 10、 11、 12)の添カ卩によって何れも用量依存的に抑制された。典型例として図 4に評価方法 2による SDT4細胞に対する増殖抑制効果を示した。表 15に 50%生育阻止濃度 (IC )を示した。 SDT4細胞に対するメナキノン- 4の IC は 500

50 50 以上であった力これに比してメナヒドロキノン- 4誘導体 (ィ匕合物 10、 11、 12) のは何れも低濃度であり、特に化合物 10は約百分の 1以下の濃度であり、すぐれ

50

た胃癌増殖抑制効果を示した。 IC はメナジオン (ビタミン K3)と同程度であった。

50

[0057] [表 15] 表 1 5 胃癌細胞および大腸癌細胞に対するビタミン Kヒドロキノン誘導体の増殖抑制作用

[0058] (適用例 5)

[マイトマイシン C (MMC)耐性胃癌細胞に対するビタミン Κヒドロキノン誘導体の増殖抑制効果]

マイトマイシン C (MMC)耐性胃癌細胞である ST4細胞の細胞増殖は、メナキノン- 4 、メナジオン、メナヒドロキノン- 4誘導体 (ィ匕合物 10、 11、 12)の添カ卩によって何れも用量依存的に抑制された。典型例として図 5に ST4細胞に対する増殖抑制効果を示した。表 15に 50%生育阻止濃度 (IC )を示した。メナヒドロキノン- 4誘導体 (ィ匕合物 1

50

0、 11、 12)はマイトマイシン C (MMC)耐性胃癌細胞である ST4細胞に対しても SDT4 細胞に対する効果と同様の増殖抑制効果を示し、マイトマイシン C (MMC)耐性株に対しても有効であることが示された。

[0059] (適用例 6)

[大腸癌細胞に対するビタミン Kヒドロキノン誘導体の増殖抑制効果]

大腸癌細胞である HT29細胞の細胞増殖は、メナキノン- 4、メナジオン、メナヒドロキノン- 4誘導体 (化合物 10、 12)の添カ卩によって何れも用量依存的に抑制された。典型例として図 6に HT29細胞に対する増殖抑制効果を示した。表 15に 50%生育阻止濃度 (IC )を示した。 HT29細胞に対するメナキノン- 4の IC は 7000 M以上であった

50 50

力これに比してメナヒドロキノン誘導体 (ィ匕合物 10、 12)の IC は何れも低濃度であ

50

り、すぐれた大腸癌増殖抑制効果を示した。特に化合物 10の IC は 30 Mでありメナ

50

ジオン（ビタミン K3)の 20 μ Μと同程度であった。 [0060] (適用例 7)

[マイトマイシン C (MMC)耐性大腸癌細胞に対するビタミン Kヒドロキノン誘導体の増殖抑制効果]

マイトマイシン C (MMC)耐性大腸癌細胞である HT29/MMC細胞の細胞増殖は、メナキノン- 4、メナジオン、メナヒドロキノン- 4誘導体 (ィ匕合物 10、 12)の添カ卩によって何れも用量依存的に抑制された。表 15に 50%生育阻止濃度 (IC )を示した。メナヒド

50

ロキノン- 4誘導体 (化合物 10、 12)はマイトマイシン C (MMC)耐性大腸癌細胞である HT29/MMC細胞に対しても HT29細胞に対する効果と同様の増殖抑制効果を示し、マイトマイシン C (MMC)耐性株に対しても有効であることが示された。

[0061] (適用例 8)

[キノン系抗癌剤の抗癌作用に対する作用増強効果]

胃癌細胞である SDT4細胞に対するキノン系抗癌剤マイトマイシン C (MMC)の細胞増殖抑制効果に対するビタミン Kヒドロキノン誘導体 (ィ匕合物 11)の効果を、上記実験方法に従って評価した。結果を図 7に示す。 MMCの IC (0.25 μ Μ)はメナヒドロキノン

50

-4誘導体の添カ卩によって 0.8 Μまで約 1Z3に低下し、ビタミン Κヒドロキノン誘導体は MMCの細胞増殖抑制効果を増強することが示された。

[0062] (適用例 9)

[in vivoにおけるビタミン Κヒドロキノン誘導体のマウス移植ヒト肝細胞癌に対する抗腫瘍効果]

PLC/PRF/5細胞を BDマトリゲルに懸濁し lxlO⁶

cellsを 8週齢の雄性 BALB-c nu/nuマウス（日本 SLC)の側腹部皮下に移植した。移植 9日後に、 PLC/PRF/5移植マウスを 6匹 Z群とし、メナヒドロキノン- 1 ,4-ビス-ジメチルグリシネート（化合物 10)を 4%エタノールに溶解して 400 μ Μとし飲水投与した。コントロール群は 4%エタノールを飲水投与した。飲水の平均値は 4mLZ匹 Ζ日であり、化合物 10の投与量は 0.7mgZ匹 Z日である。同一実験者が、デジタル表示ノギスを用いて、腫瘍の長径及び短径を測定し、長径 X (短径) ² X 0.52を腫瘍体積とした。腫瘍体積の増加抑制から抗癌効果を評価した。図 8に PLC/PRF/5細胞移植後の腫瘍体積の変化を示した。化合物 10の投与群の腫瘍体積の増加はコントロール群に比較して有意に低ぐ化合物 10は in

vivoにおいて肝細胞癌に対して抗腫瘍効果を発揮できることが明らかになった。また、薬物投与による体重減少は観察されなかった。

以上説明したように、本発明による上記一般式 (I)で示されるビタミン Kヒドロキノンのカルボン酸エステル類を含有する癌治療剤、癌再発予防剤は、肝癌の中でメナキノン- 4が有効とされて!/、る DCP(des- g- carboxy prothrombin)陽性肝癌とメナキノン- 4 の効果が極めて低い DCP陰性肝癌のどちらに対しても優れた効果を持つ。また、本発明による上記一般式 (I)で示されるビタミン Kヒドロキノンのカルボン酸エステル類を含有する癌治療剤、癌再発予防剤はメナキノン- 4の効果が低い肺癌、胃癌、大腸癌など上皮性の癌に対して優れた効果を持つ。上記一般式 (I)で示されるビタミン Kヒドロキノンのカルボン酸エステル類を含有する癌治療剤、癌再発予防剤は、キノン系抗癌剤耐性の胃癌や大腸癌など上皮性の癌に対しても優れた効果を持つ。さらに、本発明による上記一般式 (I)で示されるビタミン Kヒドロキノンのカルボン酸エステル類を含有する癌治療剤、癌再発予防剤は、キノン系抗癌剤の作用を増強する。上記一般式 (I)で示されるビタミン Kヒドロキノンのカルボン酸エステル類を含有する癌治療剤、癌再発予防剤は、白血病に対しても優れた効果を持つ。

さらに、本発明に力かる化合物の体内における代謝産物は主としてビタミン K類であり、その安全'性はきわめて高い。

また上記一般式 (I)で示されるビタミン Kヒドロキノンのカルボン酸エステル類それ自身が抗癌作用ないし癌再発予防作用を発揮することが明らかとなり、その二次代謝産物であるビタミン K類にも抗癌作用なヽし癌再発予防作用があるので、本発明により、さらに効率の良い安全な癌治療剤、癌再発予防剤の提供が可能となる。

Claims

請求の範囲下記一般式 (I)

[化 1]

1 2

2

基である。 Rは水素原子または下記一般式 (II)

[化 2]

もしくは下記一般式 (III)

[化 3]

で示される基を表す。 ηは 1〜14の整数を意味する。）で表されるビタミン Κヒドロキノンのカルボン酸エステル類またはその塩の少なくとも一種類を含有する癌治療剤。 [2] 前記一般式 (I)で表される化合物またはその塩の少なくとも一種類を含有するキノン系抗癌剤の作用増強補助剤。

[3] 前記一般式 (I)で表される化合物またはその塩の少なくとも一種類を含有する癌予防剤。

[4] 請求項 3記載の癌予防剤は、癌再発予防剤であることを特徴とする癌予防剤。

[5] 前記一般式 (I)で表される化合物またはその塩を用いることで、効率良く体内において一般式 (V) (式中、 Rは水素原子または上記一般式 (II)もしくは上記一般式 (III)

3

で示される基を意味する。 nは 1〜14の整数を意味する。）で表されるビタミン Kヒドロキノンを生成し、一般式 (V)で表されるビタミン Kヒドロキノンによる抗癌作用な、し癌再発予防作用、キノン系抗癌剤の作用増強補助作用を発揮させる、請求項 1〜4の Vヽずれかに記載の抗癌剤な！ヽし癌予防剤、作用増強補助剤。

[化 4]

前記一般式 (I)で表される化合物またはその塩を用いることで、効率良く体内中の一般式 (IV) (式中、 Rは水素原子または上記一般式 (II)もしくは上記一般式 (III)で

3

示される基を意味する。 nは 1〜 14の整数を意味する。）で表されるビタミン Kを増加させ、一般式 (IV)で表されるビタミン Kによる抗癌作用および癌再発予防作用、キノン系抗癌剤の作用増強を発揮させる、請求項 1〜4のいずれかに記載の抗癌剤ないし癌再発予防剤、作用増強剤。

[化 5]

前記一般式 (I)で表される化合物またはその塩を用いることで、一般式 (I)で表されるビタミン Kヒドロキノン誘導体自身、およびその二次生成物である一般式 (V)で表されるビタミン κヒドロキノンおよび Zまたは一般式 (IV)で表されるビタミン κによる抗癌作用ないし癌再発予防作用、キノン系抗癌剤の作用増強作用を発揮させる請求項 1 〜4のヽずれかに記載の抗癌剤な!/ヽし癌再発予防剤、作用増強補助剤。