WO2006030889A1 - リパーゼ粉末、その製造方法及びその使用 - Google Patents

リパーゼ粉末、その製造方法及びその使用 Download PDF

Info

Publication number
WO2006030889A1
WO2006030889A1 PCT/JP2005/017125 JP2005017125W WO2006030889A1 WO 2006030889 A1 WO2006030889 A1 WO 2006030889A1 JP 2005017125 W JP2005017125 W JP 2005017125W WO 2006030889 A1 WO2006030889 A1 WO 2006030889A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
lipase
powder
aqueous solution
carbon atoms
lipase powder
Prior art date
Application number
PCT/JP2005/017125
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Tomomi Suganuma
Tadashiro Hirose
Junko Suzuki
Shin Arimoto
Hideaki Maki
Satoshi Negishi
Original Assignee
The Nisshin Oillio Group, Ltd.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by The Nisshin Oillio Group, Ltd. filed Critical The Nisshin Oillio Group, Ltd.
Priority to CN2005800313147A priority Critical patent/CN101023167B/zh
Priority to AT05783308T priority patent/ATE555195T1/de
Priority to EP05783308A priority patent/EP1795591B1/en
Priority to CA2580259A priority patent/CA2580259C/en
Priority to DK05783308.9T priority patent/DK1795591T3/da
Publication of WO2006030889A1 publication Critical patent/WO2006030889A1/ja
Priority to US11/716,580 priority patent/US8580550B2/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6436—Fatty acid esters
    • C12P7/6445—Glycerides
    • C12P7/6454—Glycerides by esterification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
    • C12N9/20—Triglyceride splitting, e.g. by means of lipase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/62—Carboxylic acid esters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6436—Fatty acid esters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6436—Fatty acid esters
    • C12P7/6445—Glycerides
    • C12P7/6458—Glycerides by transesterification, e.g. interesterification, ester interchange, alcoholysis or acidolysis

Definitions

  • the present invention relates to a lipase powder that can be suitably used for various esterification reactions, transesterification reactions, and the like, a production method thereof, an esterification method using the lipase powder, a transesterification method, and the like.
  • Lipases are widely used in esterification reactions of various carboxylic acids such as fatty acids with alcohols such as monoalcohols and polyhydric alcohols, and transesterification reactions between a plurality of carboxylic acid esters. Of these, transesterification is an important technology for the production of various fatty acid esters, sugar esters and steroids, including the modification of animal and vegetable fats and oils.
  • lipase an oil and fat hydrolase
  • lipase as a catalyst is a natural product.
  • the target product can be efficiently produced due to its substrate specificity and position specificity.
  • lipase powder when used in the transesterification reaction as it is, the activity is not sufficiently exhibited, and it is difficult to uniformly disperse the originally water-soluble lipase in the oily raw material, and the recovery is difficult. is there.
  • lipase is conventionally treated with some kind of carrier, for example, anion exchange resin (Patent Document 1), phenol adsorption resin (Patent Document 2), hydrophobic carrier (Patent Document 3), cation exchange resin (Patent Document). 4), chelating resin (Patent Document 5) and the like, and generally used for ester ester exchange reaction and the like.
  • lipase is immobilized and used for transesterification.
  • powerful immobilized lipase is not only accompanied by loss of original lipase activity due to the treatment of immobilized lipase.
  • the pores were clogged with raw materials and products, and as a result, the transesterification rate was lowered.
  • the water retained by the carrier is brought into the reaction system, so that side reactions such as the formation of diglycerides and monoglycerides in the transesterification of fats and oils should be avoided. It was difficult.
  • lipase powder in the presence or absence of an inert organic solvent, the lipase is added to the ester-containing raw material so that 90% or more of the dispersed lipase powder particles are maintained at a particle size in the range of 1 to 100 ⁇ m during the transesterification reaction.
  • a method of transesterifying by dispersing powder has been proposed (Patent Document 6). It has also been proposed to use an enzyme powder obtained by drying an enzyme solution containing phospholipids and fat-soluble vitamins (Patent Document 7).
  • Patent Document 1 JP-A-60-98984
  • Patent Document 2 Japanese Patent Laid-Open No. 61-202688
  • Patent Document 3 JP-A-2-138986
  • Patent Document 4 JP-A-3-61485
  • Patent Document 5 Japanese Patent Laid-Open No. 1-262795
  • Patent Document 6 Japanese Patent No. 2668187
  • Patent Document 7 Japanese Unexamined Patent Publication No. 2000-106873
  • An object of the present invention is to provide a lipase powder having improved lipase activity.
  • Another object of the present invention is to provide a method for producing the above lipase powder. Another object of the present invention is to provide an esterification method and a transesterification method using the lipase powder.
  • the present invention has been made based on the knowledge that when lipase is granulated using a medium chain fatty acid, an alcohol ester thereof, or a mixture thereof and powdered, the lipase activity is improved in each stage.
  • the present invention provides a lipase powder characterized by comprising a lipase and a granulated product containing at least one selected from a fatty acid having 8 to 12 carbon atoms, an alcohol ester thereof, and a mixture thereof. provide.
  • the present invention also provides a fatty acid having 8 to 12 carbon atoms, an alcohol thereof, in a lipase-containing aqueous solution.
  • the present invention provides a method for producing a lipase powder characterized in that at least one selected from esters and their mixture is added and spray-dried or freeze-dried.
  • the present invention also provides a lipase for esterification or transesterification containing the lipase powder.
  • the present invention also provides a method for esterification or transesterification of fatty acid and alcohol, characterized by using the above lipase.
  • lipase used in the present invention examples include lipoprotein lipase, monoacyl daricello lipase, diacyl glycero lipase, triacinole glycero lipase, galacto lipase, and phospho lipase. Of these, triacyldaricerolipase is preferred.
  • the microorganisms that produce these lipases are not particularly limited to bacteria, yeasts, filamentous fungi, actinomycetes, etc., but include genus Pseudomonas (Psudomonas sp.), Genus Alcaligenes sp. Arthrobacter sp.), Staphyl ococcus sp.
  • Chromobacterum sp. Chromobacterum sp., Xanthomonas sp., Lactobacillus sp., Clostridium sp., Candida sp., Geotrichum sp., Sacch romycopsis sp., Nocardia sp., Fuzanum spj, "7 Spenoreginoles ( Aspergillus sp.), Penicillium sp., Mucor sp., Rhizopus sp., Phycomycese sp., Puccinia sp., Notinoles Genus (Bacillus sp.), Streptomyces (Streptmycese sp.) And the like.
  • 1,3-specific lipase is preferred, in particular, 1,3-specific lipase derived from the genus Mucor and Alkaligenes is preferable, and Rhizomu cor miehei and Alkagenes belonging to the genus Mucoyl are more preferable. 1,3-specific lipase derived from Alcaligenes sp.
  • Fatty acids having 8 to 12 carbon atoms used for granulating lipase in the present invention include saturated, Any of saturated, straight chain and branched chain fatty acids can be used. Of these, saturated fatty acids are preferred, more preferably fatty acids having 8 to 10 carbon atoms, particularly saturated fatty acids having 8 or 10 carbon atoms. These can be used alone or in combination of two or more. A part of the fatty acid may form a salt with an alkali metal or alkaline earth metal. Of these, sodium and potassium form a salt with the alkali metal, and you should! /.
  • Examples of the alcohol ester include esters of the above fatty acids with various alcohols such as monoalcohols, polyhydric alcohols, and mixtures thereof.
  • examples of the alcohol include glycols such as ethylene glycol, propylene glycol, and butylene glycol, glycerin, erythritol, pentaerythritol, and trimethylol bread.
  • partial esters having at least one alcoholic hydroxyl group are preferred.
  • monoglycerides and diglycerides are preferred, and monoglycerides are particularly preferred. These can be used alone or in combination of two or more.
  • the above fatty acid and its alcohol ester can be used in combination.
  • the ratio of lipase and fatty acids is various ratios. Force that can be used It is preferably 0.1 to 20 times the amount of lipase mass, and more preferably 1 to 20 times the amount.
  • Lipase powder of the present invention is preferably the water content is not more than 10 wt% instrument particularly, 6. and even preferably at 5 to 8.5 mass 0/0! /,.
  • the particle size of the lipase powder of the present invention can be arbitrary, but it is preferable that 90% by mass or more of the lipase powder has a particle size of 1 to 100 / ⁇ ⁇ .
  • the particle size of the lipase powder is preferably spherical.
  • the particle size of the lipase powder can be measured, for example, using a particle size distribution measuring device (LA-500) manufactured by HORIBA.
  • LA-500 particle size distribution measuring device manufactured by HORIBA.
  • the lipase powder of the present invention can be obtained, for example, by adding a fatty acid or the like to a lipase-containing aqueous solution, followed by spray drying or freeze drying.
  • the lipase-containing aqueous solution includes a lipase culture solution from which bacterial cells have been removed, a purified culture solution, a lipase powder obtained from these dissolved and dispersed again in water, a commercially available lipase.
  • examples thereof include those obtained by dissolving and dispersing the powder again in water and commercially available liquid lipases.
  • those obtained by removing low-molecular components such as salts in order to further increase the lipase activity are more preferred, and those obtained by removing low-molecular components such as sugars are more preferred in order to further enhance the powder properties.
  • lipase culture solution examples include soybean flour, peptone, corn “stape” liquor, K H
  • soy flour 0.1 to 20 wt% preferably from 1.0 to 10 wt%, peptone 0.1 to 30 mass 0/0, preferably from 0.5 to 10 weight 0/0, corn ' Suthep 'liquor from 0.1 to 30 weight 0/0, preferably rather is from 0.5 to 10 weight 0/0, ⁇ ⁇ 0. 01 ⁇ 20 mass 0/0, preferably from 0.1 to 5 mass 0/0
  • soy flour 0.1 to 20 wt% preferably from 1.0 to 10 wt%, peptone 0.1 to 30 mass 0/0, preferably from 0.5 to 10 weight 0/0, corn ' Suthep 'liquor from 0.1 to 30 weight 0/0, preferably rather is from 0.5 to 10 weight 0/0, ⁇ ⁇ 0. 01 ⁇ 20 mass 0/0, preferably from 0.1 to 5 mass 0/0
  • peptone 0.1 to 30 mass 0/0 preferably from 0.5 to 10 weight 0/0
  • ⁇ ⁇ is 0.01 to 20% by mass, preferably 0.05 to 5% by mass.
  • the culture conditions are the culture temperature
  • UF membrane treatment Specifically, by performing the UF membrane treatment, concentrating the aqueous solution containing lipase to a volume of 1Z2 and then adding the same amount of phosphate buffer as the concentrate, it is repeated 1 to 5 times. A lipase-containing aqueous solution from which low-molecular components have been removed can be obtained.
  • Centrifugation is preferably performed at 200 to 20,000 Xg, and membrane filtration is preferably performed at a pressure of 3.0 kg / m 2 or less with an MF membrane or a filter press.
  • the homogenizer has a stirring speed of 500 to 30,000 rpm, preferably ⁇ is 1,000 to 15,000 rpm, and the speed of the waging blender is 500 to 10,000 rpm, preferably ⁇ is 1,000 to 5, OOOrpm. is there.
  • the stirring time is 0.5 to 10 minutes, preferably 1 to 5 minutes.
  • the ultrasonic crushing is performed under conditions of 1 to 50 KHz, preferably 10 to 20 KHz.
  • the ball mill should use glass balls with a diameter of 0.1 to 0.5 mm. In the present invention, it is preferable to use a lipase-containing aqueous solution containing 5 to 30% by mass as a solid content.
  • the amount of fatty acid to be added is preferably 0.1 to 20 times the solid mass of the lipase-containing aqueous solution, and more preferably 0.3 to 10 times. A volume of ⁇ 5 times is most preferred.
  • the solid content concentration in the lipase-containing aqueous solution can be determined as Brix.% Using, for example, a saccharimeter (BRX-242, manufactured by Shiichi 'IS Co., Ltd.).
  • the pH of the lipase-containing aqueous solution is adjusted to 10 or less, preferably 6 to: LO.
  • the pH adjustment is preferably performed immediately before the drying step such as spray drying, but the lipase is added in advance so that the pH immediately before the drying step, which may be performed in any of the previous steps, is within the above range.
  • the pH of the aqueous solution may be adjusted.
  • alkali metal hydroxides such as sodium hydroxide, which can use various alkaline agents and acids! /.
  • the concentration method is not particularly limited, but evaporator, flash evaporator, UF membrane concentration, MF membrane concentration, salting out with inorganic salts, solvent precipitation method, ion exchange cellulose adsorption method, water-absorbing gel, etc. And the water absorption method.
  • UF membrane concentration and evaporator are used.
  • the UF membrane concentration module is a flat membrane or hollow fiber membrane with a molecular weight cut off of 3,000 to 000, preferably ⁇ 6,000 to 50,000, and the material is positive acrylic-tolyl, polysulfone, etc. Is preferred.
  • the spray drying may be performed using, for example, a spray dryer such as a nozzle countercurrent type, a disk countercurrent type, a nozzle cocurrent type, or a disk cocurrent type.
  • a spray dryer such as a nozzle countercurrent type, a disk countercurrent type, a nozzle cocurrent type, or a disk cocurrent type.
  • the atomizer rotation speed is preferably 4,000 to 20,000 rpm, and the calorific heat has an inlet temperature of 100 to 200. It is preferable to perform spray drying by controlling at C, outlet temperature of 40 to 100 ° C.
  • Freeze-drying is also preferable. For example, it is preferably performed by a lab-size small-scale freeze-dryer or shelf-type freeze-drying. Further, it can be prepared by drying under reduced pressure.
  • the lipase is a 1,3-specific lipase, in particular when the lipase is derived from Rhizomucor miehei or Alcalig enes sp.
  • the 1,3-selectivity is very high according to the present invention.
  • the lipase powder can be suitably used as a transesterification lipase. Then, this lipase powder can be used to efficiently carry out a transesterification reaction of fats and oils by a conventional method.
  • esterification can be performed using the powder lipase composition of the present invention.
  • examples of the compound having at least one alcoholic hydroxyl group in the molecule as a target for esterification include various compounds such as various monoalcohols, polyhydric alcohols, and amino alcohols. Specific examples include polyhydric alcohols such as short chain, medium chain, and long chain saturated, unsaturated, linear, branched alcohol, glycols, glycerin, and erythritols. Of these, glycerin is preferred.
  • examples of the carboxylic acid include short chain, medium chain, and long chain saturated, unsaturated, linear, and branched carboxylic acids.
  • fatty acids having 6 to 30 carbon atoms such as octanoic acid, decanoic acid, lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, oleic acid, linoleic acid, linolenic acid and the like can be mentioned. These can be used alone or in combination of two or more.
  • unsaturated fatty acids are preferred, and conjugated linoleic acid is particularly preferred.
  • the esterification conditions are the same as those described in, for example, JP-A Nos. 13-169795 and 15-113396.
  • 0.1 to 2% by mass of the powder lipase composition of the present invention is added to the total mass of the substrate, that is, the total mass of the compound having an alcoholic hydroxyl group and the carboxylic acid, and 30 to 60 ° C. It is better to react for 24 to 72 hours. At this time, it is preferable to carry out the reaction while reducing the pressure of the reaction system and removing water generated by esterification.
  • Rhizomucor miehe oil-borne liquid lipase (trade name Palatase) manufactured by Novo Nordisk in a form in which lipase is dissolved and dispersed in an aqueous solution, using UF module (SIP-0013 manufactured by Asahi Kasei Kogyo Co., Ltd.) Remove lipase-containing aqueous solution 1 (solid content 20 1 mass
  • liquid lipase (paratase) was treated with a UF membrane under ice-cooling, concentrated to a volume of 1/2, and then added with 0.01 M phosphate buffer having the same amount of pH 7 as the concentrated liquid. In the same manner, the operation of adding a phosphate buffer after UF membrane treatment was repeated twice for the obtained solution, and further UF membrane treatment was performed. The resulting lipase concentrate was designated as Lipase-containing aqueous solution 1.
  • This liquid is sprayed using a spray dryer (SD-1000 type: manufactured by Tokyo Rika Kikai Co., Ltd.) under the conditions of an inlet temperature of 130 ° C, a dry air amount of 0.7 to 1. lmVmin, and a spraying pressure of ll to 12 kpa.
  • a lipase powder was obtained.
  • the shape of the lipase powder particles was spherical, and 90% by mass or more of the lipase powder was in the range of particle size 1 to: LOO ⁇ m, and the average particle size was 7.6 ⁇ m.
  • the particle size was measured using a particle size distribution measuring apparatus (LA-500) manufactured by HORIBA.
  • the solid content concentration in the lipase-containing aqueous solution was determined as Brix.% Using a saccharimeter (BRX-242 manufactured by CIS Co., Ltd.).
  • Fatty acid aqueous suspension (5 mass% aqueous suspension of n-decanoic acid (C10FA)) was used instead of fatty acid monoglyceride aqueous suspension (3 mass% aqueous suspension of n-decanoic acid) Obtained lipase powder in the same manner as in Example 1.
  • Lipase concentrate A lipase powder was obtained in the same manner as in Example 1 except that 0.01 M phosphate buffer of PH7 was used at a volume ratio of 1: 1.
  • the lipase activity of the lipase powder thus obtained was measured by the following method. The results are shown in Table 1.
  • Powder lipase is added to oil mixed with triolein and tricaprylin at a ratio of 1: 1 (w).
  • the reaction was performed at 60 ° C.
  • a sample of 101 was sampled over time, diluted with 1.5 ml of hexane, and the solution obtained by filtering the powder lipase was used as a gas chromatograph sample.
  • the reaction rate was calculated from the following equation after gas chromatography (column: DB-lht).
  • the gas chromatographic conditions are: column temperature: initial 150 ° C, temperature increase 15 ° C / min, final 370 ° C. Other conditions are the same as in the 1.3-selectivity test below.
  • Reaction rate (%) ⁇ C34 area / (C24 area + C34 area) ⁇ X 100
  • C24 indicates tricaprylin
  • C34 indicates that one fatty acid of tricaprylin is replaced with 18, and area is the area of those areas.
  • the reaction rate constant K value was obtained by analysis software (Orijin ver.6.1).
  • the lipase activity was expressed as a relative activity when the threshold value of Comparative Example 1 was 100.
  • suspension 1 (5 wt% aqueous suspension of n-octanoic acid (C8FA)
  • suspension 2 5 wt% aqueous suspension of n-decanoic acid (C10FA)
  • suspension 3 5% by mass aqueous suspension of n-dodecanoic acid (C12FA)
  • a lipase powder was obtained in the same manner as in Example 2.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)

Abstract

　リパーゼと、炭素数８～１２の脂肪酸、そのアルコールエステル及びそれらの混合物から選ばれる少なくとも１種を含有する造粒物であるリパーゼ粉末を提供する。このリパーゼ粉末は、向上したリパーゼ活性を有する。

Description

リパーゼ粉末、その製造方法及びその使用 技術分野
[0001] 本発明は、各種エステル化反応、エステル交換反応などに好適に使用することが できるリパーゼ粉末、その製造方法、該リパーゼ粉末を用いるエステルイ匕方法及び エステル交換方法などに関するものである。
(発明の背景技術）
リパーゼは、脂肪酸などの各種カルボン酸とモノアルコールや多価アルコールなど のアルコール類とのエステル化反応、複数のカルボン酸エステル間のエステル交換 反応などに幅広く使用されている。このうち、エステル交換反応は動植物油脂類の改 質をはじめ、各種脂肪酸のエステル、糖エステルやステロイドの製造法として重要な 技術である。これらの反応の触媒として、油脂加水分解酵素であるリパーゼを用いる と、室温ないし約 70°C程度の温和な条件下でエステル交換反応を行うことができ、従 来の化学反応に比べ、副反応の抑制やエネルギーコストが低減ィヒされるだけでなぐ 触媒としてのリパーゼが天然物であることから安全性も高い。また、その基質特異性 や位置特異性により目的物を効率良く生産することができる。ところが、リパーゼ粉末 をそのままエステル交換反応に用いても活性が十分に発現しないばかりか、元来が 水溶性のリパーゼを油性原料中に均一に分散させることは困難であり、その回収も困 難である。このため、従来はリパーゼを何らかの担体、たとえば陰イオン交換榭脂 (特 許文献 1)、フエノール吸着榭脂 (特許文献 2)、疎水性担体 (特許文献 3)、陽イオン 交換榭脂 (特許文献 4)、キレート榭脂 (特許文献 5)等に固定化してエステルイ匕ゃェ ステル交換反応などに用いることが一般的である。
[0002] このように、従来はリパーゼを固定ィ匕してエステル交換反応に用いて 、たが、力か る固定化リパーゼは固定ィ匕処理による本来のリパーゼ活性の損失を伴うだけでなぐ 多孔性担体を用いた場合は細孔に原料や生成物が詰まり、結果としてエステル交換 率の低下を招いていた。さらに、従来の固定化リパーゼを用いたエステル交換反応 においては、担体が保持する水分が反応系に持ち込まれるため、副反応、たとえば 油脂類のエステル交換反応におけるジグリセリドゃモノグリセリドの生成等を避けるこ とは困難であった。
このような状況に鑑み、リパーゼ粉末を用いる各種技術が開発されている。例えば 、不活性有機溶媒の存在下または非存在下、エステル交換反応時に分散リパーゼ 粉末粒子の 90%以上を 1〜100 μ mの範囲の粒径に保つように、エステルを含有す る原料にリパーゼ粉末を分散させてエステル交換反応を行う方法が提案されて ヽる ( 特許文献 6)。又、リン脂質および脂溶性ビタミンを含む酵素溶液を乾燥して得た酵 素粉末を用いることが提案されて 、る (特許文献 7)。
し力しながら、さらにリパーゼ活性が向上したリパーゼ粉末が求められている。
[0003] 特許文献 1 :特開昭 60— 98984号公報
特許文献 2：特開昭 61 - 202688号公報
特許文献 3 :特開平 2— 138986号公報
特許文献 4：特開平 3 - 61485号公報
特許文献 5：特開平 1― 262795号公報
特許文献 6 :特許第 2668187号公報
特許文献 7：特開 2000— 106873号公報
発明の開示
[0004] 本発明は、リパーゼ活性が向上したリパーゼ粉末を提供することを目的とする。
本発明は、又、上記リパーゼ粉末の製造方法を提供することを目的とする。 本発明は、又、上記リパーゼ粉末を用いるエステルイ匕方法及びエステル交換方法 を提供することを目的とする。
本発明のこれらの目的及び他の目的は、以下の記載から明ら力となるであろう。
[0005] 本発明は、リパーゼを中鎖脂肪酸、そのアルコールエステル又はそれらの混合物を 用いて造粒し、粉末状にすると、リパーゼ活性が各段に向上するとの知見に基づい てなされたのである。
すなわち、本発明は、リパーゼと、炭素数 8〜12の脂肪酸、そのアルコールエステ ル及びそれらの混合物カゝら選ばれる少なくとも 1種を含有する造粒物であることを特 徴とするリパーゼ粉末を提供する。
本発明は、又、リパーゼ含有水溶液に、炭素数 8〜 12の脂肪酸、そのアルコール エステル及びそれらの混合物力 選ばれる少なくとも 1種を添加し、スプレードライ又 はフリーズドライすることを特徴とするリパーゼ粉末の製造方法を提供する。
本発明は、又、上記リパーゼ粉末を含有するエステルイ匕用又はエステル交換用リ パーゼを提供する。
本発明は、又、上記リパーゼを用いることを特徴とする脂肪酸とアルコールのエステ ルイ匕方法又はエステル交換方法を提供する。
発明を実施するための最良の形態
[0006] 本発明で用いるリパーゼとしては、リポプロテインリパーゼ、モノァシルダリセロリパ ーゼ、ジァシルグリセロリパーゼ、トリアシノレグリセロリパーゼ、ガラクトリパーゼ、フォス フォリパーゼ等が挙げられる。これらのうち、トリァシルダリセロリパーゼが好ましい。 これらのリパーゼを産生する微生物としては、細菌、酵母、糸状菌、放線菌等特に 限定されるものではないが、シユードモナス属（Psudomonas sp.)、アルカリゲネス属（ Alcaligenes sp.)、ァスロノくクター属 (Arthrobacter sp.)、スタフイロコッカス属 (Staphyl ococcus sp.ノ、トノレロプンス晨、Tormopsis sp.ノ、エスチェリンフ J¾ (Escherichia sp.)、 マイコトノレラ属 (Micotorula sp.)、プロピオ-ノ クテリゥム属 (Propionibacterum sp.)、ク 口モノくクテリゥム属 (Chromobacterum sp.) ,キサントモナス属 (Xanthomonas sp.) ,ラ タトバチルス属（Lactobacillus sp.)、クロストリディウム属（Clostridium sp.)、キャンディ ダ属 (Candida sp.)、ジォトリカム属 (Geotrichum sp.)、サッカロマイコプシス属 (Sacch romycopsis sp.)、ノカノレアイァ J禺 (Nocardia sp.)、フザリウム属（Fuzanum spj、 "7ス ぺノレギノレス属 (Aspergillus sp.)、ぺ-シリウム属 (Penicillum sp.)、ムコーノレ属 (Mucor sp.)、リゾプス属 (Rhizopus sp.)、フイコマイセス属 (Phycomycese sp.)、プチニァ属 (P uccinia sp.)、ノ チノレス属 (Bacillus sp.)、ストレプトマイセス属 (Streptmycese sp.)など が挙げられる。
本発明では、これらのうち、 1,3-特異性リパーゼが好ましぐ特に、ムコール属及び アルカリゲネス属由来の 1 ,3-特異性リパーゼが好ましく、さらにムコ一ル属の Rhizomu cor miehei及びアルカリゲネス属の Alcaligenes sp.由来の 1,3-特異性リパーゼが好ま しい。
[0007] 本発明でリパーゼを造粒するのに用いる炭素数 8〜12の脂肪酸としては、飽和、不 飽和、直鎖、分岐鎖脂肪酸のいずれをも用いることができる。このうち、飽和脂肪酸 が好ましぐより好ましくは炭素数 8〜10の脂肪酸、特に、炭素数 8又は 10の飽和脂 肪酸が好ましい。これらは、 1種でも、又 2種以上併用することができる。尚、脂肪酸の 一部がアルカリ金属やアルカリ土類金属と塩を形成していてもよい。これらのうち、ナ トリウムやカリウムと 、つたアルカリ金属と塩を形成して 、るのがよ！/、。
そのアルコールエステルとしては、上記脂肪酸と各種アルコール、例えば、モノアル コール、多価アルコール、これらの混合物とのエステルがあげられる。これらのうち、 アルコールとしては、エチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール などのグリコール類、グリセリン、エリスリトール、ペンタエリスリトール、トリメチロールプ 口パンなどがあげられる。これらのうち、アルコール性水酸基を少なくとも 1つ有する部 分エステルであるのが好ましい。なかでも、モノグリセリド、ジグリセリドが好ましぐ特 にモノグリセリドが好ましい。これらは、 1種又は 2種以上併用することができる。
[0008] 本発明では、上記脂肪酸とそのアルコールエステルを併用することもできる。
リパーゼと脂肪酸など (炭素数 8〜 12の脂肪酸、そのアルコールエステル及びそれ らの混合物力も選ばれる少なくとも 1種を、 "脂肪酸など"と略称することがある)の割 合は、種々の割合とすることができる力 リパーゼ質量の 0.1〜20倍の量とするのが 好ましぐ 1〜20倍の量とするのがより好ましい。
本発明のリパーゼ粉末は、水分含量が 10質量％以下であるのが好ましぐ特に、 6. 5〜8.5質量0 /0であるのが好まし!/、。
本発明のリパーゼ粉末の粒径は任意とすることができるが、リパーゼ粉末の 90質量 %以上が粒径 1〜100 /ζ πιであるのが好ましい。又、リパーゼ粉末の粒径は球状であ るのが好ましい。
リパーゼ粉末の粒径は、例えば、 HORIBA社の粒度分布測定装置 (LA—500)を 用いて測定することができる。
[0009] 本発明のリパーゼ粉末は、例えば、リパーゼ含有水溶液に脂肪酸などを添加し、ス プレードライ又はフリーズドライすることにより得ることができる。
ここで、リパーゼ含有水溶液としては、菌体を除去したリパーゼ培養液、精製培養 液、これらから得たリパーゼ粉末を再度水に溶解 ·分散させたもの、市販のリパーゼ 粉末を再度水に溶解'分散させたもの、市販の液状リパーゼ等が挙げられる。さらに 、リパーゼ活性をより高めるために塩類等の低分子成分を除去したものがより好ましく 、また、粉末性状をより高めるために糖等の低分子成分を除去したものがより好まし い。
リパーゼ培養液としては、例えば、大豆粉、ペプトン、コーン'ステープ'リカー、 K H
2
PO、 (NH ) SO、 MgSO · 7Η Ο等含有する水溶液があげられる。これらの濃度と
4 4 2 4 4 2
しては、大豆粉 0. 1〜20質量％、好ましくは 1. 0〜10質量％、ペプトン 0. 1〜30質 量0 /0、好ましくは 0. 5〜10質量0 /0、コーン 'ステープ'リカー 0. 1〜30質量0 /0、好まし くは 0. 5〜10質量0 /0、 Κ ΗΡΟ 0. 01〜20質量0 /0、好ましくは 0. 1〜5質量0 /0であ
2 4
る。又、 (NH ) SO ίま 0. 01〜20質量0 /0、好ましく ίま 0. 05〜5質量0 /0、 MgSO · 7
4 2 4 4
Η Οは 0. 01〜20質量％、好ましくは 0. 05〜5質量％である。培養条件は、培養温
2
度 ίま 10〜40°C、好ましく ίま 20〜35°C、通気量 ίま 0. 1〜2. 0WM、好ましく ίま 0. 1 〜1. 5WM、攪拌回転数は 100〜800rpm、好ましくは 200〜400rpm、 ρΗは 3. 0 〜10. 0、好ましく ίま 4. 0〜9. 5に帘1』御するの力よ!/、。
菌体の分離は、遠心分離、膜濾過などで行うのが好ま 、。また、塩類や糖等の低 分子成分の除去は、 UF膜処理により行うことができる。具体的には、 UF膜処理を行 い、リパーゼを含有する水溶液を 1Z2量の体積に濃縮後、濃縮液と同量のリン酸バ ッファーを添加するという操作を 1〜5回繰り返すことにより、低分子成分を除去したリ パーゼ含有水溶液を得ることができる。
遠心分離は 200〜20, 000 X g、膜濾過は MF膜、フィルタープレスなどで圧力を 3 . 0kg/m2以下にコントロールするのが好ましい。菌体内酵素の場合は、ホモジナイザ 一、ワーリンダブレンダー、超音波破砕、フレンチプレス、ボールミル等で細胞破砕し 、遠心分離、膜濾過などで細胞残さを除去することが好ましい。ホモジナイザーの攪 拌回転数は 500〜30, 000rpm、好まし <は 1, 000〜15, 000rpm、ワージングブレ ンダ一の回転数は 500〜10, 000rpm、好まし <は 1, 000〜5, OOOrpmである。攪拌 時間は 0. 5〜10分、好ましくは 1〜5分がよい。超音波破砕は l〜50KHz、好ましく は 10〜20KHzの条件で行うのが良い。ボールミルは直径 0. 1〜0. 5mm程度のガラ ス製小球を用いるのがよ 、。 本発明では、リパーゼ含有水溶液としては、固形分として 5〜30質量％含むものを 用いるのが好ましい。
[0011] 添加する脂肪酸などは、リパーゼ含有水溶液の固形分質量の 0.1〜20倍の量であ るのが好ましぐ 0. 3〜10倍の量であるのがより好ましぐ 0. 3〜5倍の量が最も好ま しい。
ここで、リパーゼ含有水溶液中の固形分濃度は、例えば、糖度計（(株)シ一'アイ' エス社製 BRX-242)を用いて Brix.%として求めることができる。
上記脂肪酸などを添加した後、リパーゼ含有水溶液の pHを 10以下、好ましくは 6 〜： LOに調整するのがよい。 pH調整は、スプレードライなどの乾燥工程の直前に行う のが好ましいが、その前のいずれかの工程において行ってもよぐ乾燥工程の直前 の pHが上記範囲内となるように、予めリパーゼ含有水溶液の pHを調整しておいても よい。
pH調整には、各種アルカリ剤や酸を用いることができる力 水酸ィ匕ナトリウムなどの アルカリ金属水酸化物を用いるのが好まし！/、。
又、乾燥工程前の途中の工程において、リパーゼ含有水溶液を濃縮してもよい。濃 縮方法は、特に限定されるものではないが、エバポレーター、フラッシュエバポレータ 一、 UF膜濃縮、 MF膜濃縮、無機塩類による塩析、溶剤による沈殿法、イオン交換 セルロース等による吸着法、吸水性ゲルによる吸水法等があげられる。好ましくは UF 膜濃縮、エバポレーターがよい。 UF膜濃縮用モジュールとしては、分画分子量 3, 0 00〜風 000、好まし <は 6, 000〜50, 000の平膜または中空糸膜、材質はポジ アクリル-トリル系、ポリスルフォン系などが好ましい。
[0012] スプレードライは、例えば、ノズル向流式、ディスク向流式、ノズル並流式、ディスク 並流式等の噴霧乾燥機を用いて行うのがよい。好ましくはディスク並流式が良ぐアト マイザ一回転数は 4, 000〜20, 000rpm、カロ熱は入口温度 100〜200。C、出口温 度 40〜100°Cで制御してスプレードライするのが好ましい。
又、フリーズドライ (凍結乾燥)も好ましぐ例えば、ラボサイズの少量用凍結乾燥機 、棚段式凍結乾燥により行うのが好ましい。さらに、減圧乾燥により調製することもで きる。 リパーゼが、 1,3-特異性リパーゼである場合、特に、 Rhizomucor miehei又は Alcalig enes sp.由来のリパーゼである場合には、本発明によると 1,3-選択性が極めて高くな るので、該リパーゼ粉末をエステル交換用リパーゼとして好適に使用することができ る。そして、このリパーゼ粉末を用い、常法により、油脂などのエステル交換反応を効 率的に行うことができる。
[0013] 又、本発明の粉末リパーゼ組成物を用いて、エステルイ匕を行うこともできる。ここで、 エステルイ匕で対象とするアルコール性水酸基を分子内に少なくとも 1つ有する化合物 としては、各種モノアルコール、多価アルコール、ァミノアルコールなど種々の化合物 があげられる。具体的には、短鎖、中鎖、長鎖の飽和、不飽和、直鎖、分岐アルコー ル、グリコール類、グリセリン、エリスリトール類といった多価アルコールがあげられる。 これらのうち、グリセリンが好ましい。
一方、カルボン酸としては、短鎖、中鎖、長鎖の飽和、不飽和、直鎖、分岐カルボン 酸があげられる。これらのうち、炭素数 6〜30の脂肪酸、例えば、オクタン酸、デカン 酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ォレイン酸、リノール酸、リ ノレイン酸などがあげられる。これらは 1種又は 2種以上を併用して用いることができる 。これらのうち、不飽和脂肪酸が好ましぐ特に共役リノール酸を用いるのが好ましい エステル化の条件は、例えば、特開平 13— 169795号公報ゃ特開平 15— 113396号 公報などに記載の条件に準じて行うことができる。一例をあげると、基質の合計質量 、すなわちアルコール性水酸基を有する化合物とカルボン酸の合計質量に対して、 本発明の粉末リパーゼ組成物を 0. 1〜2質量％添加し、 30〜60°Cで 24〜72時間 反応させるのがよい。この際、反応系を減圧にしてエステルイ匕により生じる水を除去し ながら反応を行うのがよい。
次に本発明を実施例により詳細に説明する。
[0014] 実施例 1
水溶液にリパーゼが溶解'分散した形態にあるノボノルディスク社製の Rhizomucor miehe油来の液状リパーゼ（商品名 Palatase)を、 UFモジュール (旭化成工業 (株)社 製 SIP-0013)を用いて低分子成分を除去してリパーゼ含有水溶液 1 (固形分濃度 20 . 1質量
%)を得た。詳しくは、液状リパーゼ (パラターゼ)を氷冷下で UF膜処理を行い、 1/ 2量の体積に濃縮後、濃縮液と同量の pH7の 0. 01Mリン酸バッファーを添カ卩した。 得られた溶液について、同じように UF膜処理後リン酸バッファーを添加する操作を 2回繰り返した後、さらに UF膜処理をし、得られたリパーゼ濃縮液をリパーゼ含有水 溶液 1とした。
このリパーゼ含有水溶液 1、 20mlに対して、水 20ml及び脂肪酸モノグリセリド水懸 濁液 (n—デカン酸モノグリセリド (C10MAG)の 3質量％水懸濁液) 40mlを添カ卩した 。このようにして得られた溶液の pHを、水酸ィ匕ナトリウム水溶液を用いて pH9.1に調 整した。
この液を、スプレードライヤー（SD- 1000型:東京理化器械 (株)社製)を用い、入口 温度 130°C、乾燥空気量 0. 7〜1. lmVmin,噴霧圧力 l l〜12kpaの条件下噴霧し、リ パーゼ粉末を得た。リパーゼ粉末粒子の形状は球状で、リパーゼ粉末の 90質量％ 以上が粒径 1〜： LOO μ mの範囲内にあり、平均粒径は 7. 6 μ mであった。粒径は、 H ORIBA社の粒度分布測定装置 (LA— 500)を用いて測定した。
尚、リパーゼ含有水溶液中の固形分濃度は、糖度計（(株)シー ·アイ 'エス社製 B RX-242)を用いて Brix. %として求めた。
[0015] 実施例 2
脂肪酸モノグリセリド水懸濁液 (n デカン酸の 3質量％水懸濁液)の代わりに、脂 肪酸水懸濁液 (n デカン酸 (C10FA)の 5質量％水懸濁液)を用いた以外は、実施 例 1と同様にしてリパーゼ粉末を得た。
比較例 1
リパーゼ濃縮液: PH7の 0. 01Mリン酸バッファーを体積比で 1： 1で用いた以外は 、実施例 1と同様にしてリパーゼ粉末を得た。
このようにして得られたリパーゼ粉末のリパーゼ活性を以下の方法により測定した。 結果を表 1に示す。
[0016] リパーゼ活性
トリオレインとトリカプリリンを 1： 1 (w)の割合で混合した油に、粉末リパーゼを添加し 60°Cで反応させた。経時的に 10 1をサンプリングし、へキサン 1. 5mlで希釈後、粉 末リパーゼをろ過した溶液をガスクロサンプルとした。ガスクロ（カラム： DB- lht)で分 祈し下式より反応率を求めた。ガスクロ条件は、カラム温度:初期 150°C、昇温 15°C/m in.、最終 370°Cであり、これ以外の条件は、下記の 1.3-選択性試験におけると同様で ある。
反応率（％) ={C34 area/ (C24 area + C34 area) }X 100
式中、 C24はトリカプリリン、 C34はトリカプリリンの 1つの脂肪酸が 18に置き換わった ものを示し、 areaはそれらのエリア面積である。
各時間における反応率に基づき解析ソフト（Orijin ver.6.1)により反応速度定数 K値 を求めた。リパーゼ活性は、比較例 1の Κ値を 100とした時の相対活性で表した。
[0017] 表 1
条件 (体穑比) 相 件
比較例 1リパーゼ濃縮液: bf(7) = 1 : 1 100
実施例 1リパーゼ濃縮液：水： C10MAG = 0.5 : 0.5 : 1 659
実施例 2リパーゼ濃縮液：水： C10FA=0.5 : 0.5 : 1 964
[0018] 実施例 3
3種類の脂肪酸水懸濁液、懸濁液 1 (n オクタン酸 (C8FA)の 5質量％水懸濁液） 、懸濁液 2 (n デカン酸 (C10FA)の 5質量％水懸濁液)又は懸濁液 3 (n—ドデカン 酸 (C12FA)の 5質量％水懸濁液)を用い、得られた水溶液について、これらの脂肪 酸の半量を NaOHで中和した以外は (pH6.8)、実施例 2と同様にしてリパーゼ粉末 を得た。
このようにして得られたリパーゼ粉末のリパーゼ活性を、上記の方法により測定した 比較例 1の結果とともに、結果を表 2に示す。
[0019] 表 2
条件 (体穑比) 相通件
比較例 1 100
懸濁液 1 (C8FA) 463 懸濁液 2(C10FA)

Claims

請求の範囲
[I] リパーゼと、炭素数 8〜 12の脂肪酸、そのアルコールエステル及びそれらの混合物 力も選ばれる少なくとも 1種を含有する造粒物であることを特徴とするリパーゼ粉末。
[2] リパーゼが 1,3-特異性リパーゼである請求項 1記載のリパーゼ粉末。
[3] 1,3-特異性リパーゼが、ムコール属又はアルカリゲネス属由来のリパーゼである請 求項 2記載のリパーゼ粉末。
[4] アルコールエステルが、多価アルコールのエステルである請求項 1〜3のいずれか
1項記載のリパーゼ粉末。
[5] 多価アルコールのエステル力 モノグリセリドである請求項 4記載のリパーゼ粉末。
[6] 脂肪酸が炭素数 8又は 10の飽和脂肪酸である請求項 1〜5のいずれか 1項記載の リパーゼ粉末。
[7] リパーゼ含有水溶液に、炭素数 8〜12の脂肪酸、そのアルコールエステル及びそ れらの混合物から選ばれる少なくとも 1種を添加し、スプレードライ又はフリーズドライ することにより得られる請求項 1〜6のいずれか 1項記載のリパーゼ粉末。
[8] 炭素数 8〜 12の脂肪酸、そのアルコールエステル及びそれらの混合物力も選ばれ る少なくとも 1種を添加した後、リパーゼ含有水溶液の PHが 6〜： LOに調整されて 、る 請求項 7記載のリパーゼ粉末。
[9] リパーゼ粉末の 90質量％以上が粒径 1〜100 μ mである請求項 1〜8のいずれか 1 項記載のリパーゼ粉末。
[10] リパーゼ含有水溶液に、炭素数 8〜12の脂肪酸、そのアルコールエステル及びそ れらの混合物から選ばれる少なくとも 1種を添加し、スプレードライ又はフリーズドライ することを特徴とするリパーゼ粉末の製造方法。
[II] 添加する炭素数 8〜 12の脂肪酸、そのアルコールエステル及びそれらの混合物か ら選ばれる少なくとも 1種が、リパーゼ含有水溶液の固形分質量の 0.1〜20倍量であ る請求項 10記載の製造方法。
[12] 炭素数 8〜 12の脂肪酸、そのアルコールエステル及びそれらの混合物力も選ばれ る少なくとも 1種を添加した後、リパーゼ含有水溶液の pHを 6〜 10に調整する請求 項 10又は 11記載の製造方法。
[13] リパーゼ含有水溶液が、菌体を除去したリパーゼ培養液、またはその精製培養液 である請求項 10〜 12のいずれか 1項記載の製造方法。
[14] 請求項 1〜9のいずれか 1項記載のリパーゼ粉末を含有するエステルイ匕用又はエス テル交換用リパーゼ。
[15] 請求項 14記載のリパーゼを用いることを特徴とする脂肪酸とアルコールのエステル 化方法又は油脂のエステル交換方法。
PCT/JP2005/017125 2004-09-16 2005-09-16 リパーゼ粉末、その製造方法及びその使用 WO2006030889A1 (ja)

Priority Applications (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2005800313147A CN101023167B (zh) 2004-09-16 2005-09-16 脂肪酶粉末、其制备方法及其使用
AT05783308T ATE555195T1 (de) 2004-09-16 2005-09-16 Lipasepulver, verfahren zur herstellung davon und verwendung davon
EP05783308A EP1795591B1 (en) 2004-09-16 2005-09-16 Lipase powder, method for producing same and use thereof
CA2580259A CA2580259C (en) 2004-09-16 2005-09-16 Lipase powder, method for manufacture thereof, and use thereof
DK05783308.9T DK1795591T3 (da) 2004-09-16 2005-09-16 Lipasepulver, fremgangsmåde til fremstilling af samme og anvendelse deraf
US11/716,580 US8580550B2 (en) 2004-09-16 2007-03-12 Lipase powder, method for manufacture thereof, and use thereof

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2004-269976 2004-09-16
JP2004269976A JP4478540B2 (ja) 2004-09-16 2004-09-16 リパーゼ粉末、その製造方法及びその使用

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US11/716,580 Continuation US8580550B2 (en) 2004-09-16 2007-03-12 Lipase powder, method for manufacture thereof, and use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2006030889A1 true WO2006030889A1 (ja) 2006-03-23

Family

ID=36060136

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2005/017125 WO2006030889A1 (ja) 2004-09-16 2005-09-16 リパーゼ粉末、その製造方法及びその使用

Country Status (11)

Country Link
US (1) US8580550B2 (ja)
EP (1) EP1795591B1 (ja)
JP (1) JP4478540B2 (ja)
KR (1) KR101267920B1 (ja)
CN (1) CN101023167B (ja)
AT (1) ATE555195T1 (ja)
CA (1) CA2580259C (ja)
DK (1) DK1795591T3 (ja)
MY (1) MY147776A (ja)
TW (1) TWI403583B (ja)
WO (1) WO2006030889A1 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008114656A1 (ja) * 2007-03-16 2008-09-25 The Nisshin Oillio Group, Ltd. リパーゼ粉末製剤、その製造方法及び使用

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2186886B8 (en) * 2005-01-19 2013-06-12 The Nisshin OilliO Group, Ltd. Process for production of purified lipase

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS61202688A (ja) 1985-02-27 1986-09-08 ノボ　ノルディスク　アクティーゼルスカブ 固定化リパーゼ調製品の製造方法
JPH01262795A (ja) 1988-04-11 1989-10-19 Kao Corp 固定化酵素の製造方法
JPH02138986A (ja) 1987-12-22 1990-05-28 Unilever Nv 脂肪酸エステルの製造方法
JPH0361485A (ja) 1989-07-31 1991-03-18 Ajinomoto Co Inc 固定化リパーゼ酵素剤
JPH04234985A (ja) * 1990-12-18 1992-08-24 Shin Nippon Kagaku Kogyo Kk 無粉塵酵素粉末を製造する方法
JP2668187B2 (ja) 1993-09-17 1997-10-27 日清製油株式会社 リパーゼ粉末を用いたエステル交換法
JPH10204494A (ja) * 1997-01-27 1998-08-04 Kao Corp 粉末状酵素製剤及びそれを用いた造粒物
JP2000106873A (ja) 1998-10-06 2000-04-18 Nisshin Oil Mills Ltd:The 熱安定性酵素およびその製造法

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK402583D0 (da) * 1983-09-05 1983-09-05 Novo Industri As Fremgangsmade til fremstilling af et immobiliseret lipasepraeparat og anvendelse deraf
DE3886412T2 (de) * 1987-09-28 1994-05-11 Novo Nordisk As Verfahren zur immobilisierung von lipasen.
US5288619A (en) * 1989-12-18 1994-02-22 Kraft General Foods, Inc. Enzymatic method for preparing transesterified oils
JPH05345900A (ja) * 1991-07-08 1993-12-27 Fuji Oil Co Ltd 硬質油脂の製造法
US6495357B1 (en) * 1995-07-14 2002-12-17 Novozyme A/S Lipolytic enzymes
US5902738A (en) * 1996-04-18 1999-05-11 Roche Vitamins Inc. Enzymatic acylation
CN1073625C (zh) * 1999-05-28 2001-10-24 无锡轻工大学 脂肪酶固相催化油脂甘油解工艺
AU2001293671A1 (en) * 2000-09-25 2002-01-08 Novozymes A/S Methods for processing crustacean material
US20030054509A1 (en) * 2001-04-06 2003-03-20 Archer-Daniels-Midland Company Method for producing fats or oils
AU2003283952A1 (en) * 2002-08-16 2004-03-03 Novozymes North America, Inc. Process for enzymatic hydrolysis of cyclic oligomers

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS61202688A (ja) 1985-02-27 1986-09-08 ノボ　ノルディスク　アクティーゼルスカブ 固定化リパーゼ調製品の製造方法
JPH02138986A (ja) 1987-12-22 1990-05-28 Unilever Nv 脂肪酸エステルの製造方法
JPH01262795A (ja) 1988-04-11 1989-10-19 Kao Corp 固定化酵素の製造方法
JPH0361485A (ja) 1989-07-31 1991-03-18 Ajinomoto Co Inc 固定化リパーゼ酵素剤
JPH04234985A (ja) * 1990-12-18 1992-08-24 Shin Nippon Kagaku Kogyo Kk 無粉塵酵素粉末を製造する方法
JP2668187B2 (ja) 1993-09-17 1997-10-27 日清製油株式会社 リパーゼ粉末を用いたエステル交換法
JPH10204494A (ja) * 1997-01-27 1998-08-04 Kao Corp 粉末状酵素製剤及びそれを用いた造粒物
JP2000106873A (ja) 1998-10-06 2000-04-18 Nisshin Oil Mills Ltd:The 熱安定性酵素およびその製造法

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008114656A1 (ja) * 2007-03-16 2008-09-25 The Nisshin Oillio Group, Ltd. リパーゼ粉末製剤、その製造方法及び使用
RU2447148C2 (ru) * 2007-03-16 2012-04-10 Дзе Ниссин Ойллио Груп, Лтд. Порошкообразный препарат липазы, способ его получения и применения
JP5145609B2 (ja) * 2007-03-16 2013-02-20 日清オイリオグループ株式会社 リパーゼ粉末製剤、その製造方法及び使用
AU2008227690B2 (en) * 2007-03-16 2013-09-05 The Nisshin Oillio Group, Ltd. Powdery lipase preparation, method for producing the same and use thereof
US8921081B2 (en) 2007-03-16 2014-12-30 The Nisshin Oillio Group, Ltd. Powdery lipase preparation, method for producing the same and use thereof

Also Published As

Publication number Publication date
JP2006081473A (ja) 2006-03-30
TWI403583B (zh) 2013-08-01
ATE555195T1 (de) 2012-05-15
DK1795591T3 (da) 2012-05-29
MY147776A (en) 2013-01-31
EP1795591B1 (en) 2012-04-25
CA2580259A1 (en) 2006-03-23
US8580550B2 (en) 2013-11-12
CN101023167B (zh) 2010-05-05
CN101023167A (zh) 2007-08-22
EP1795591A4 (en) 2008-12-17
KR20070057949A (ko) 2007-06-07
US20070155003A1 (en) 2007-07-05
JP4478540B2 (ja) 2010-06-09
CA2580259C (en) 2013-08-06
TW200617167A (en) 2006-06-01
EP1795591A1 (en) 2007-06-13
KR101267920B1 (ko) 2013-05-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4828418B2 (ja) リパーゼ粉末、その製造方法及びその使用
JP4394598B2 (ja) リパーゼ粉末組成物及びそれを用いたエステル化物の製造方法
JP5145609B2 (ja) リパーゼ粉末製剤、その製造方法及び使用
WO2005097985A1 (ja) 1,3-特異性リパーゼ粉末、その製造方法及びその使用
JP5728335B2 (ja) エステル交換油脂の製造方法及びその装置
JPWO2006077860A1 (ja) 精製リパーゼの製造方法
WO2006030889A1 (ja) リパーゼ粉末、その製造方法及びその使用
JP2007068426A (ja) リパーゼ粉末製剤、その製造方法及び使用
WO2011068076A1 (ja) リパーゼ粉末製剤及びその使用
JP5258941B2 (ja) リパーゼ活性の回復方法

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AE AG AL AM AT AU AZ BA BB BG BR BW BY BZ CA CH CN CO CR CU CZ DE DK DM DZ EC EE EG ES FI GB GD GE GH GM HR HU ID IL IN IS KE KG KM KP KR KZ LC LK LR LS LT LU LV LY MA MD MG MK MN MW MX MZ NA NG NI NO NZ OM PG PH PL PT RO RU SC SD SE SG SK SL SM SY TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN YU ZA ZM ZW

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): BW GH GM KE LS MW MZ NA SD SL SZ TZ UG ZM ZW AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HU IE IS IT LT LU LV MC NL PL PT RO SE SI SK TR BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW ML MR NE SN TD TG

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 11716580

Country of ref document: US

Ref document number: 2580259

Country of ref document: CA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2005783308

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 200580031314.7

Country of ref document: CN

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 1020077008582

Country of ref document: KR

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 2005783308

Country of ref document: EP

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 11716580

Country of ref document: US