WO2005121112A1

WO2005121112A1 - ６－ヒドロキシベンズブロマロン又はその塩からなる医薬組成物

Info

Publication number: WO2005121112A1
Application number: PCT/JP2005/010671
Authority: WO
Inventors: Hitoshi Endou; Toshihiro Oikawa
Original assignee: Torii Pharmaceutical Co., Ltd.; Human Cell Systems, Inc.
Priority date: 2004-06-10
Filing date: 2005-06-10
Publication date: 2005-12-22
Also published as: US7521570B2; EP1767531A1; JPWO2005121112A1; JP4814789B2; EP1767531A4; US20070185195A1

Abstract

【課題】　本発明は、尿酸排泄促進作用が強く、かつ重篤な肝障害を引き起こすことなく、安全性の高い高尿酸血症の治療又は予防剤、より詳細には、尿酸排泄促進剤を提供する。【解決手段】　本発明は、６－ヒドロキシベンズブロマロン又はその塩、及び製薬上許容される担体を含有してなる高尿酸血症又は高尿酸血症に起因する疾患の治療・予防のための医薬組成物、並びに６－ヒドロキシベンズブロマロン又はその塩を含有してなる、尿酸排泄促進剤、キサンチンオキシダーゼ阻害剤、及び腎臓における尿酸の取り込み抑制剤に関する。また、本発明は、６－ヒドロキシ－ベンズブロマロンを製造する方法に関する。

Description

6—ヒドロキシベンズブロマロン又はその塩からなる医薬組成物

技術分野

[0001] 本発明は、 6—ヒドロキシベンズブロマロン又はその塩、及び製薬上許容される担体を含有してなる医薬組成物、より詳細には、 6—ヒドロキシベンズブロマロン又はその塩、及び製薬上許容される担体を含有してなる高尿酸血症又は高尿酸血症に起因する疾患の治療'予防のための医薬組成物、並びに 6—ヒドロキシベンズブロマロン又はその塩を含有してなる、尿酸排泄促進剤、キサンチンォキシダーゼ阻害剤、及び腎臓における尿酸の取り込み抑制剤に関する。また、本発明は、 2—ェチルー 6— ヒドロキシ一 3— (p—ヒドロキシ一ベンゾィル）一ベンゾフラン（これらの水酸基は必要により保護されていてもよい。）を、ブロム化剤を用いてブロム化し、次いで水酸基の保護基を脱保護することからなる 6—ヒドロキシ一ベンズブロマロンを製造する方法に関する。

背景技術

[0002] 痛風は、関節炎 (痛風発作)、痛風結節、尿路結石などの各種の症状を伴う重篤な病気である。痛風は生活習慣と深く関わっており、 1960年以前では我が国では希な病気であつたが、経済の高度成長と共に増加し、現在では約 60万人以上の患者が居るといわれている。また、痛風発症年齢も従来は 50才代であったものが、現在では 30才代がピークになってきており、発症年齢も若年化の傾向にある。さらに、痛風の基礎病体である高尿酸血症も増加してきている。血清尿酸値が高くなると、痛風の危険性だけでなぐ虚血性心疾患の危険性も高くなることも報告されている。

[0003] 高尿酸血症の病態には尿酸産生促進型と尿酸排泄抑制型の二種類があり、高尿酸血症患者全体におけるそれぞれの比率は、尿酸産生促進型が約 2割、尿酸排泄抑制型が約 6割、両者の混合型が約 2割と言われている。現在、前者に対してはキサンチンォキシダーゼ阻害剤であるァロプリノール、後者に対しては尿酸排泄促進剤であるべンズブロマロンの使用が推奨されて、る。両薬剤とも発売から 20年以上を経過しており、これまでにァロプリノールでは肝障害 (劇症肝炎を含む）、骨髄抑制、重篤な皮膚炎等の副作用や、ァロプリノールの代謝物であるォキシプリノールは透析患者において、体内に高濃度に蓄積することから血液障害、肝障害をきたすことが報告されている。ベンズブロマロンでは肝障害 (劇症肝炎を含む）が報告されており、それぞれ副作用の少ない新たな薬剤の開発が求められている。

尿酸排泄促進剤としては、ベンズブロマロンのベンゾフラン骨格を残して側鎖部分を各種の化学修飾したものが報告されている (特許文献 1〜4参照)。また、尿酸排泄促進剤として、非ペプチド系アンジォテンシン II受容体拮抗作用を有する化合物を用 V、るもの（特許文献 5参照）、ジヒドロピリジン誘導体を用いるもの（特許文献 6参照）、ヒダントイン誘導体を用いるもの（特許文献 7参照）、ビアリールイ匕合物又はジァリールエーテルィ匕合物を用いるもの (特許文献 8参照)などが報告されてヽる。

また、尿酸産生を抑制するためのキサンチンォキシダーゼ阻害剤としては、ピラゾ口トリアジン誘導体を用いるもの（特許文献 9参照）、 3—フエ-ルビラゾールイ匕合物を用 V、るもの（特許文献 10参照）、 1—フエ二ルビラゾールイ匕合物を用いるもの（特許文献 11参照）、バラ科の多年草植物のセィヨウナツユキソゥ（一般名：シモッケソゥ、 Filipe ndula ulmaria)や、それから単離されたケルセチン 4' 配糖体及びケルセチン 3 —配糖体を用いるもの（特許文献 12及び 13参照）、 2 フエ二ルチアゾール誘導体を用いるもの（特許文献 14参照）、ドコウジュ、セキコウジュ、ナギナタコウジュ、レモンバーム、ローズマリー、スペアミント、ペパーミント、ウィンターサボリ、キンマ及びフクマンギカも選ばれた植物体及び Z又は該植物体の抽出物を用いるもの（特許文献 1 5参照）などが報告されてヽる。

さらに、新しいタイプの高尿酸血症の治療剤として、チアゾリジンジオンィ匕合物などのインスリン抵抗性改善物質を用いるもの（特許文献 16参照）、炭素数 20のモノエン酸及び Z又はその誘導体、並びに炭素数 22のモノエン酸及び Z又はその誘導体を有効成分として含有する高尿酸性疾患予防治療剤に関するもの (特許文献 17参照）、イチヨウ葉抽出物を有効成分とする尿酸値低下剤に関するもの (特許文献 18参照）、コンドロィチン硫酸タンパク複合体を有効成分として含有する、高尿酸血症治療又は予防用組成物に関するもの (特許文献 19参照)なども報告されている。

これらの中で、新規のキサンチンォキシダーゼ阻害剤に関しては、国内および国外において既にいくつかが開発段階に入っているが、尿酸排他促進剤に関しては世界的にみても開発される動きは見られず、高尿酸血症患者の QOL向上のために、副作用の少ない新たな尿酸排泄促進剤の開発が求められている。

[0005] 一方、次式で示されるベンズブロマロンは、

[0006] [化 1]

ペンズブロマロン

[0007] ベンゾフラン誘導体の 1種であり、その強い尿酸排泄促進作用により長年にわたって広く使用されてきている。ベンズブロマロンの薬物代謝に関しては、 1972年のヒトにおける報告 (非特許文献 1参照）において、ベンズブロマロンは肝臓において脱臭素代謝され、臭素が 1つ取られたブロモベンザロン、あるいは臭素が 2つとも取られたベンザロンに代謝されると考えられていた。しかし、その後の研究によりべンズブロマ口ンの代謝産物は脱臭素体ではなぐ主にべンゾフラン環の 1 '位あるいは 6位が水酸ィ匕された水酸ィ匕物であると報告された (非特許文献 2〜6参照)。そして、ベンズブロマンの尿酸排泄促進作用の持続性に関しては、血中の代謝産物が関与しているのではな!/ヽかとの示唆も示されてきた (非特許文献 5参照)。

また、ベンズブロマロン、ベンザロン、ベンズィオダロンなどのべンゾフラン誘導体を服用中の患者において、重篤な肝障害が報告されるようになり、これらに共通の代謝産物が肝障害発現に関与して、る可能性が指摘されてきた。特にベンザロンはベンズィオダロン及びべンズブロマロンの脱ハロゲン体であることから、ベンザロン自体が肝障害を引き起こす可能性も未だ完全に否定されていない。

このように、ベンズブロマロン、ベンザロン、ベンズィオダロンなどのべンゾフラン誘導体の代謝産物や、その副作用について多くの研究がなされてきたが、重篤な肝障害を引き起こすことなぐ安全性が高ぐかつ尿酸排泄促進作用の強い高尿酸血症の治療、予防剤の開発は未だなされて、な、のが現状である。 [0008] 特許文献 1 特開昭 59 - 73579号

特許文献 2 特開平 01 - 216984号

特許文献 3 特開平 03 - 261778号

特許文献 4特開平 06 - 184132号

特許文献 5特開平 05 - 25043号

特許文献 6特開平 05 - 279255号

特許文献 7 WO 97Z02033号

特許文献 8特開 2000- - 1431号

特許文献 9特開平 06 - - 316578号

特許文献 10 :特開平 10— 310578号

特許文献 l l :WO 98Z18765号

特許文献 12 :特開 2002— 121145号

特許文献 13 :特開 2003— 171283号

特許文献 14 :特開 2002— 105067号

特許文献 15：特開 2003 - 252776号

特許文献 16：特開平 11 255669号

特許文献 17 :特開 2001— 278786号

特許文献 18 :特開 2002— 212085号

特許文献 19：特開 2003 - 335698号

非特許文献 l : Broekhuysen， J., et al., Eur. J. Clin. Pharmacol., 4, 125-130 (1972) 非特許文献 2 : Walter- Sack, I., et al., Eur. J. Clin. Pharmacol., 39, 577-581 (1990) 非特許文献 3 : De Vries, J. X" et al" Clin. Investig" 71, 947-952 (1993) 非特許文献 4 : De Vries, J. X" et al., Xenobiotica, 23, 1435-1450 (1993) 非特許文献 5 : Walter- Sack, I., et al., Eur. J. Med. Res., 1， 16 - 20 (1995) 非特許文献 6 : Walter- Sack, 1·， et al., Eur. J. Med. Res., 3， 45 - 49 (1998) 発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0009] 本発明は、尿酸排泄促進作用が強ぐかつ重篤な肝障害を引き起こすことなぐ安全性の高い高尿酸血症の治療又は予防剤、より詳細には、尿酸排泄促進剤を提供することを目的としている。

課題を解決するための手段

[0010] ベンズブロマロンは肝臓において酸ィ匕および抱合の 2段階の代謝を受けることが報告されている。第一層の代謝は、薬物代謝酵素である P450による酸ィ匕反応であり、これにより、ベンズブロマロンは主に 6-ヒドロキシベンズブロマロンに変換される。第二層の代謝は、抱合酵素による抱合反応であり、 6-ヒドロキシベンズブロマロンは、この反応により抱合体を形成し胆汁あるいは尿中に排泄される。ベンズブロマロンによる副作用は、この第一層の反応において未知の毒性代謝物が産生されることが原因であると推察した。

そこで、本発明者らは、ベンズブロマロンの第一層の代謝産物である 6—ヒドロキシベンズブロマロンに着目した。仮にこの物質が尿酸排泄促進活性を有しているならば、ベンズブロマロンの第一層の反応における未知の毒性代謝物の産生を抑制することができ、副作用の少ない安全性の高い尿酸排泄促進剤を開発することが可能となると考え、 6—ヒドロキシベンズブロマロンの生理活性を検討したところ、従来注目されていなかった 6—ヒドロキシベンズブロマロンに腎臓における尿酸の取り込みの強い抑制作用があること、及びァロプリノールの代謝産物であるォキシプリノールと同様なキサンチンォキシダーゼ阻害作用があることを見出し、本発明に至った。

[0011] 本発明は、 6—ヒドロキシベンズブロマロン又はその塩、及び製薬上許容される担体を含有してなる医薬組成物、より詳細には、高尿酸血症又は高尿酸血症に起因する疾患の治療 ·予防剤である医薬組成物に関する。

本発明は、 6—ヒドロキシベンズブロマロン又はその塩を含有してなる尿酸排泄促進剤に関する。また、本発明は、 6—ヒドロキシベンズブロマロン又はその塩を含有してなるキサンチンォキシダーゼ阻害剤に関する。さらに、本発明は、 6—ヒドロキシべンズブロマロン又はその塩を含有してなる、腎臓における尿酸の取り込み抑制剤に関する。

本発明は、高尿酸血症又は高尿酸血症に起因する疾患の治療'予防のための医薬組成物の製造のための、 6—ヒドロキシベンズブロマロン又はその塩の使用に関すまた、本発明は、高尿酸血症又は高尿酸血症に起因する疾患の患者に、有効量の

6—ヒドロキシベンズブロマロン又はその塩、及び製薬上許容される担体を含有してなる医薬組成物を投与することからなる高尿酸血症又は高尿酸血症に起因する疾患の治療又は予防方法に関する。

さらに、本発明は、 2 ェチル 6 ヒドロキシ一 3— (p ヒドロキシ一ベンゾィル） —ベンゾフラン (これらの水酸基は必要により保護されていてもよい。）を、ブロム化剤を用いてブロム化し、次いで水酸基の保護基を脱保護することからなる 6—ヒドロキシ一べンズブロマロンを製造する方法に関する。

[0012] 本発明の 6 ヒドロキシベンズブロマロンは、次式、

[0013] [化 2]

[0014] で示される 2 ェチルー 6 ヒドロキシー 3—（3，， 5，一ジブ口モー 4，ーヒドロキシーベンゾィル）一ベンゾフランである。本発明の 6—ヒドロキシベンズブロマロンの塩としては、製薬上許容される塩が好ましぐ例えば、ナトリウム塩、カリウム塩などが挙げられる。

[0015] 本発明の 6 ヒドロキシベンズブロマロンは、各種の方法により化学合成することができ、例えば、必要により水酸基が保護されている 2 ェチル—6 ヒドロキシ— 3— ( p ヒドロキシ一ベンゾィル）一ベンゾフランを、 N ブロモサクシンイミドなどのブロムィ匕剤を用いてブロム化し、次いで水酸基の保護基を脱保護することにより製造することができる。水酸基の保護基としては、ペプチド化学における各種の公知の保護基を使用することができ、例えば、メチル基、ェチル基、 t ブチル基などの低級アルキルでエーテル化する方法、メチルカルボ-ル基、ェチルカルボ-ル基、 t ブチルカルボニル基などの低級ァシル基でエステルイ匕する方法などが挙げられる。原料となる 2 -ェチル 6 ヒドロキシ一 3— (p ヒドロキシベンゾィル）ベンゾフランは、必要により水酸基が保護されて、る 2 ェチル 6 ヒドロキシベンゾフランと、 p ヒドロキシー安息香酸の酸ハロゲン化物などの反応性誘導体とを反応させて製造することができる。この際の原料となる 2 -ェチル 6 ヒドロキシ -ベンゾフランは、必要により水酸基が保護されている 2 ァセチルー 6 ヒドロキシ一べンゾフランのカルボ-ル基を還元して製造することができる。

[0016] 本発明の 6 ヒドロキシベンズブロマロンの好ましい製造例としては、例えば、 2 ァセチル 6 メトキシ一ベンゾフランをヒドラジンを用 V、て還元して、 2 -ェチル 6— メトキシベンゾフランとし、これに 4—メトキシ安息香酸の酸塩化物を四塩化スズの存在下に反応させて、 2 ェチル—6—メトキシ— 3— (p—メトキシ—ベンゾィル） —ベンゾフランとし、次!、でエタンチオールナトリウム塩の存在下でベンゾィル基のメトキシ基を選択的に脱保護して 2 -ェチル 6 メトキシ一 3— (p ヒドロキシ一ベンゾィル）一べンゾフランとし、これをジメチルスルフイドの存在下でナトリウム N ブロモサクシンイミドによりブロム化して、 2 ェチルー 6—メトキシー3—（3，， 5，一ジブ口モー 4，ーヒドロキシ一べンゾィル）一べンゾフランとし、次いで塩化アルミニウムの存在下で 6位のメトキシ基を脱保護して製造することができる。

[0017] 本発明の 6 ヒドロキシベンズブロマロン又はその塩は、通常の製薬上許容される各種の担体と共に、医薬組成物とすることができる。製薬上許容される担体としては、製剤化のために通常使用される賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、稀釈剤などが挙げられる。本発明の医薬組成物は治療目的に応じて各種の投与形態を選択でき、例えば、経口投与、経粘膜投与、非経口投与などにより投与することができる。これらの投与形態に応じて、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、坐剤、注射剤 (液剤、懸濁剤等)などに製剤化することができる。錠剤、顆粒剤などの経口投与製剤とする際には、担体としては、例えば、乳糖、白糖、塩ィ匕ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケィ酸等の賦形剤、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビュルピロリドンなどの結合剤、デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン未、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、乳糖などの崩壊剤、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコールなどの滑沢剤などが挙げられる。これらの担体を用いて公知の手法により各種の剤型に製剤化することができる。

本発明の医薬組成物中に含有される 6—ヒドロキシベンズブロマロン又はその塩の量は、広範囲に選択される力通常は組成物全体の 1〜80重量％、 10〜70重量％程度とすることができる。

[0018] 本発明の医薬組成物の投与量としては、患者の年齢、性別、症状、疾患の程度などにより適宜選択することができる力通常は一日当り、体重 lkg当り 0. 01〜500m g、好ましくは 0. 1〜： LOOmg、 0. l〜50mg程度とするの力よく、 1曰に 2〜4回に分けて投与するのが好まし、。

[0019] 本発明の 6—ヒドロキシベンズブロマロン又はその塩は、尿酸排泄促進作用及びキサンチンォキシダーゼ阻害作用を有し、高尿酸血症又は高尿酸血症に起因する疾患の治療や予防に有効である。高尿酸血症に起因する疾患としては、痛風、尿酸（塩)結晶沈着症、関節炎 (痛風発作)、尿路結石、虚血性心疾患などが挙げられる。また、これらの疾患に伴う肥満症、高血圧、高脂血症などの各種の合併症の治療や予防も包含される。

[0020] 本発明の尿酸排泄促進剤、キサンチンォキシダーゼ阻害剤、及び腎臓における尿酸の取り込み抑制剤は、それぞれ医薬組成物として使用されるのが好ましいが、これに限定されるものではなぐ各種の試験に使用される試薬としての使用や、食品に添加される食品添加剤としての使用なども包含される。

本発明の腎臓における尿酸の取り込み抑制剤は、より詳細には、腎臓における尿酸の取り込みに関与している尿酸特異的トランスポーターである URAT1 (Atsushi, E ., et al.， Nature, 417(6887) , 447-452 (2002))による取り込みの抑制が挙げられる。

[0021] 次に本発明の 6—ヒドロキシベンズブロマロン又はその塩の作用について説明する本発明者らは、 6—ヒドロキシベンズブロマロン、及び従来から高尿酸血症の治療剤として使用されているベンズブロマロンの、腎臓における尿酸の取り込みに関与している尿酸特異的トランスポーターである URAT1 (Atsushi, E., et al.， Nature, 417(68 87) , 447-452 (2002))に対する作用を検討した。

MDCK細胞に URAT1の cDNAを導入し、安定発現細胞（MDCK— URAT1)を作出した。この細胞を用いて、 100 /z Mの [¹⁴C]尿酸を含有するダルベッコ修飾 PBS 液に種々の濃度の 6—ヒドロキシベンズブロマロン又はべンズブロマロンを含む溶液をカロえて後、液体シンチレーシヨンカウンターで細胞内に取り込まれた [¹⁴C]尿酸の d pmをカウントした。それぞれ 3回実験を行い、 IC の値をプロフィット（profit)で解析し

50

た。

6—ヒドロキシベンズブロマロン、及びべンズブロマロンの結果をそれぞれ図 1及び図 2にグラフで示す。図 1及び図 2の縦軸は尿酸の取り込み量 (pmolZmgタンパク質 Z分)を示し、横軸はそれぞれの濃度（ μ Μ)を示す。図 1の場合の IC の値は 0.

50

13 μ Μであり、図 2に場合の IC の値は 0. 031 μ Μであった。

50

3回の実験の結果、 6—ヒドロキシベンズブロマロン及びべンズブロマロンはいずれも濃度依存的に尿酸の取り込みを抑制し、 3回の実験の結果、 6—ヒドロキシベンズブロマロンの IC の値は 0. 20 ±0. 06 であり、ベンズブロマロンの IC の値は 0

50 50

. 0345±0. 003 であった。このことは、 6—ヒドロキシベンズブロマロンは、ベンズブロマロンと同様に濃度依存的に尿酸の取り込みを抑制し、尿酸排泄促進作用を有していることを明らかにするものである。そして、その強さはべンズブロマロンの約 1 Ζ6であるが、かなり強い尿酸排泄促進作用を有していることがわ力つた。

[0022] 次に、 6—ヒドロキシベンズブロマロンのキサンチンォキシダーゼ阻害活性を検討した。ゥシミルク由来のキサンチンォキシダーゼの活性を、 100 μ Μのキサンチンを基質にして、 0. 1Mリン酸緩衝液を半分の量の水で希釈した 1Z15Mリン酸緩衝液（ ΡΗ7. 4)中で、 37°Cで生成する尿素の吸光度（292nm)を経時的に測定する系を用いて、 6—ヒドロキシベンズブロマロン、又はァロプリノールの代謝産物であるォキシプリノールの阻害活性を測定し、 IC を解析した。この結果、 6—ヒドロキシベンズ

50

ブロマロンの IC の値は 68 μ Μ、ォキシプリノールの IC の値は 13 μ Μであった。こ

50 50

の結果、本発明の 6—ヒドロキシベンズブロマロンは、ォキシプリノールの約 1Z5のキサンチンォキシダーゼの阻害活性を有していることがわ力つた。

[0023] 次に、ベンズブロマロンの健康成人男性における単回経口投与した場合の臨床薬物動態試験を行った。投与後の 6—ヒドロキシベンズブロマロン又はべンズブロマロンの血漿及び尿中の濃度を LCZMSZMSを用いて測定した。

血漿についての結果を図 3に、尿についての 6—ヒドロキシベンズブロマロンの結果を図 4にそれぞれ示す。図 3の縦軸は血漿中の濃度 (ngZmL)を示し、横軸は時間（時間）を示す。図 3中の点線でのバッ印（ X )は 6—ヒドロキシベンズブロマロンの場合を示し、白三角印（△)はべンズブロマロンの場合を示す。図 4の縦軸は尿中の濃度（ ng/mL)を示し、横軸は時間（時間）を示す。

この結果、血漿中のベンズブロマロンの濃度は、投与後速やかに上昇した後、徐々に減少して投与 48時間後には消失した。一方、 6—ヒドロキシベンズブロマロンはより長く血漿中に存在し、投与 72時間後においても平均約 llOngZmLが検出され、 A UCもべンズブロマロンに比べて 2倍以上高い値を示した。尿中にはべンズブロマ口ンはほとんど検出されなかったのに対して、 6—ヒドロキシベンズブロマロンは投与 72 時間後にお、ても平均約 170ngZmLが認められた。

[0024] 以上のことから、 6-ヒドロキシベンズブロマロンは、トランスポーター URAT1による尿酸の取り込みを、ベンズブロマロンとほぼ同程度に阻害する事が明らかになり、ベンズブロマロンと同様に尿酸排泄促進効果を示すことが示された。 URAT1は腎尿細管上皮細胞の管腔側に存在していることから、尿中の 6—ヒドロキシベンズブロマ口ンが URAT1による尿酸の再吸収の阻害に寄与して、ることが示された。

また、ベンズブロマロンのヒト臨床薬物動態試験の結果、ベンズブロマロンを単回経口投与した健康成人男性にぉ、て、尿中にはべンズブロマロンはほとんど認められず、一方、投与 72時間後まで、尿中に高い濃度の 6-ヒドロキシベンズブロマロンが検出された。

さらに、 6—ヒドロキシベンズブロマロンがキサンチンォキシダーゼを阻害することが明ら力となったことから、 6-ヒドロキシベンズブロマロンは尿酸産生促進型の病態に対しても有効であることが示された。

発明の効果

[0025] 本発明の 6—ヒドロキシベンズブロマロン又はその塩は、強い尿酸排泄促進作用と共に、キサンチンォキシダーゼ阻害作用も有しており、高尿酸血症及び高尿酸血症に起因する疾患に治療や予防のための有効成分として有用であるだけでなぐ本発明の 6—ヒドロキシベンズブロマロン又はその塩は、肝臓での代謝を受けにくく従来の尿酸排泄促進剤のような重篤な肝障害などの副作用が無ぐ長時間にわたって血中濃度を高く維持することができ、さらに、毒性が低ぐ安全係数が大きいことから、極めて安全性の高いものである。本発明の医薬組成物は、尿酸排泄促進作用が強ぐかつ重篤な肝障害を引き起こすことなぐ安全性の高い高尿酸血症の治療又は予防剤、より詳細には、尿酸排泄促進剤を提供するものである。

図面の簡単な説明

[図 1]図 1は、 URAT1による尿酸の取り込みにおける、本発明の 6 ヒドロキシベンズプロマロンの取り込み抑制作用の実験結果を示すグラフである。

[図 2]図 2は、 URAT1による尿酸の取り込みにおける、ベンズブロマロンの取り込み抑制作用の実験結果を示すグラフである。

[図 3]図 3は、健常人男性におけるベンズブロマロンの臨床薬物動態試験の結果における血漿中の 6—ヒドロキシベンズブロマロン（点線 X印）及びべンズブロマロン（△ 印）の濃度 (ngZmL)を示すグラフである。

[図 4]図 4は、健常人男性におけるベンズブロマロンの臨床薬物動態試験の結果における尿中の 6—ヒドロキシベンズブロマロンの濃度（ngZmL)を示すグラフである。

[図 5]図 5は、本発明の 6 ヒドロキシベンズブロマロンの¹ H— NMR(300MHz、重クロロホルム）のチャートである。

[図 6]図 6は、 S2細胞における、ヒト OAT4 (ヒト有機ァ-オントランスポーター 4)による、ベンズブロマロン及び 6—ヒドロキシベンズブロマロンの存在下における基質³ H 硫酸エステロン (estrone sulfate)の取り込み阻害作用を測定した結果を示すものである。

[図 7]図 7は、 S2細胞における、ヒト OAT3 (ヒト有機ァ-オントランスポーター 3)による、ベンズブロマロン及び 6—ヒドロキシベンズブロマロンの存在下における基質³ H 硫酸エステロン (estrone sulfate)の取り込み阻害作用を測定した結果を示すものである。

[図 8]図 8は、ヒト OAT3 (ヒト有機ァ-オントランスポーター 3)における、 6 ヒドロキシベンズブロマロンの基質³ H 硫酸エステロン（estrone sulfate)の取り込み阻害作用の定数 (Ki値)を分析した結果を示すものである。

発明を実施するための最良の形態

[0027] 以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれら実施例により何ら限定されるものではない。

実施例 1

[0028] 6 ヒドロキシベンズブロマロンの製造

(1) 2-ェチル 6 メトキシベンゾフランの調製

2 ァセチルー 6—メトキシベンゾフラン（3. 30g、 17. 3mmol)のジエチレングリコール溶液にヒドラジン（4. l lg、 69. 4mmol、〜55%、オルドリツチ）を添カ卩した。この混合物を 190°Cまで加熱し、 10分間撹拌した。常温まで冷却後、水酸化カリウム（ 2. 92g、 52. lmmol)を添加し、 120。C〜130。Cにて 6時間撹拌した。その後、その反応液を水に投入し、ジクロロメタンで抽出し、 MgSOで乾燥し、減圧下で濃縮した

4

。残留した油分を HPLC (シリカゲル、 CHC1 )にて精製し、目的の生成物（2. 98g、

3

16. 9mmol、 97%)を得た。

[0029] (2) 3 - (p ァ-ソィル） 2 ェチル 6—メトキシベンゾフランの調製

2 ェチル 6—メトキシベンゾフラン（2. 76g、 15. 6mmol)及び p ァ-ソイルク口ライド（3. 48g、 20. 3mmol)の乾燥二硫ィ匕炭素（20ml)溶液を氷冷し、これに、塩化スズ（IV) (5. 25g、 20. 3mmol)を撹拌下に滴下した。この混合物を 5〜10°Cで 3 時間撹拌し、水に投入した。有機層を希塩酸と水とで洗浄し、 MgSOで乾燥し、減

4

圧下で濃縮した。この粗製生成物を HPLC (シリカゲル、酢酸ェチル：へキサン = 2 : 8)にて精製し、淡黄色油状の目的の生成物（2. 98g、 9. 60mmol、 58%)を得た。

[0030] (3) 2 ェチル 3— (p ヒドロキシベンゾィル） 6—メトキシベンゾフランの調製

3— (p ァ-ソィル） 2 ェチル 6—メトキシベンゾフラン（2. 39g、 7. 7mmol) 及びエタンチオールナトリウム塩（971mg、 11. 5mmol)のジメチルホルムアミド溶液を 80°Cにて 4時間撹拌した。この反応を NH C1溶液を用いて終了させ、クロ口ホルム

4

で抽出した。抽出物を水と食塩水で洗浄し、 Ma SOで乾燥し、減圧下で濃縮した。

2 4

その残留物を HPLC (シリカゲル、酢酸ェチル：へキサン = 2 : 8)にて精製し、目的の生成物（2. 28g、 7. 70mmol、 100%)を得た。

[0031] (4) 6—メトキシベンズブロマロンの調製

N—ブロモサクシンイミド（12. 0g、67. 5mmol)のジクロルメタン溶液にジメチルフイド（5. Oml、 68mmol)を氷と食塩の浴の冷却下に、添加した。 10分間撹拌後、 2— ェチル 3— (p ヒドロキシベンゾィル）一6—メトキシベンゾフラン（2. 00g、6. 75 mmol)のジクロルメタン溶液を同温度で添カ卩した。この混合物を常温で 15時間撹拌した。この反応液に水を添加し、有機層を単離し、水と食塩水で洗浄し、 MgSOで

4 乾燥し、減圧下で濃縮した。その残留物を HPLC (クロ口ホルム）にて精製し、目的の生成物（1. 70g、 3. 74mmol、 55%)を得た。

[0032] (5) 6 ヒドロキシベンズブロマロンの調製

A1C1 (2. 346mg、 17. 6mmol)にエタンチオール 7mlを氷浴下に滴下した。この

3

溶液を 6—メトキシベンズブロマロン（1. 70g、 3. 74mmol)のジクロルメタン溶液（35 ml)に添加した。同温度で 10分間撹拌後、水を添加し、 IN HC1溶液を添加した。その有機層を単離し、水層を酢酸ェチルで 2回抽出した。合わせた有機層を食塩水にて洗浄し、 MgSOで乾燥し、減圧下で濃縮した。残留物を HPLC (シリカゲル、 C

4

HC1： MeOH = 30 : 1)にて精製し、イソプロピルエーテルから再結晶し、目的の生

3

成物 1. 00g (2. 35mmol、 63%)を得た。

得られた 6—ヒドロキシベンズブロマロンの純度は、 HPLCにより 99. 8%であった。このものの¹ H— NMR(300MHz、重クロ口ホルム）のチャートを図 5に添付する。実施例 2

[0033] MDCK細胞に哺乳類発現ベクター pcDNA3. 1に URAT1の cDNAを組み込んだもの、あるいは pcDNA3. 1を遺伝子導入して、安定発現細胞（MDCK—URAT 1)及び mock細胞を作出した。

この MDCK—URAT1を 5%仔牛胎児血清及び 400 μ g/mLのゲネチシン（gene ticin)を含む最小必須培地（minimal essential medium)で培養し、 24穴のディッシュの 1穴当たり 10⁵個の細胞を植え込んで 2日培養した。その後、ダルベッコ修飾 PBS ( Dulbecco modified PBS)液で洗い、その後ダルベッコ修飾 PBS液中で 10分間プレインキュペートした。その後、 100 Mの [^MC]尿酸を含有するダルベッコ修飾 PBS液に種々の濃度の 6—ヒドロキシベンズブロマロン又はべンズブロマロンを含む溶液をカ卩えて、 37°Cで 2 分間インキュベートした。その後、ダルベッコ修飾 PBS液で 3回洗浄後、 0. 1Nの Na OHで細胞を回収した。そして、シンチレーシヨンカクテル（scintillation cocktail)をカロえて、液体シンチレーシヨンカウンターで細胞内に取り込まれた [¹⁴C]尿酸の dpmをカウントした。 IC の値はプロフィット（profit)で解析した。

50

結果を図 1及び図 2に示す。 3回の実験の結果、 6—ヒドロキシベンズブロマロン及びべンズブロマロンはいずれも濃度依存的に尿酸の取り込みを抑制し、 3回の実験の結果、 6—ヒドロキシベンズブロマロンの IC の値は 0. 20±0. 06 μ Μであり、ベ

50

ンズブロマロンの IC の値は 0. 0345±0. 003 であった。

50

実施例 3

[0034] ゥシミルク由来のキサンチンォキシダーゼの活性を、 100 Μのキサンチンを基質にして、 0. 1Mリン酸緩衝液を半分の量の水で希釈した 1/15Mリン酸緩衝液 (ρΗ7 . 4)中で、 37°Cで生成する尿素の吸光度（292nm)を経時的に測定する系を用いて、 6—ヒドロキシベンズブロマロン、又はォキシプリノールのそれぞれ 0. 0 M、 0. 1 M、 0. 3 M、 1. 0 M、 3. 0 M、 10. 0 M、 30. 0 M、 100 μ M、及び 3 00 μ Μの濃度での阻害活性を測定し、 IC を解析した。

50

この結果、 6—ヒドロキシベンズブロマロンの IC の値は 68 μ Μ、ォキシプリノール

50

の IC の値は 13 であった。

50

実施例 4

[0035] 年齢 20〜27歳の健常人男性 6名を対象に、ユリノーム 2錠 (登録商標）（ベンズブロマロンとして lOOmg)を空腹時に水 180mLと共に単回経口投与し、以後、 72時間後まで、経時的に採血および蓄尿を行った。得られた血漿及び尿について、 LCZ MS/MSを用いてベンズブロマロン、 6—ヒドロキシベンズブロマロン、ブロモベンザロン及びベンザロンを測定した。なお、 6名の被験者については、事前にベンズブロマロンの代謝に関与する CYP2C9に遺伝子変異 (CYP2C9*3)がないことを確認した。

結果を図 3及び図 4に示す。実施例 5

[0036] ベンズブロマロン及び 6—ヒドロキシベンズブロマロンの単回投与薬物動態試験ベンズブロマロン及び 6—ヒドロキシベンズブロマロンを、それぞれ lOOmgZkgの用量でラットに単回投与した結果、ベンズブロマロンの C 、及び AUC は、そ max 0— 24hr れぞれ 90. lg ^ g/mL, 886. 56 g 'hr/mLであったの【こ対して、 6—ヒドロキシベンズブロマロンの C 、及び AUC は、それぞれ 34. 55 μ gZmL、 290. 80 max 0― 24hr

μ g · r/ mLであつ 7こ。

この結果、 6—ヒドロキシベンズブロマロンは、ベンズブロマロンと同様に経口投与により良好に消化管力も血中に吸収されることがわ力つた。したがって、 6—ヒドロキシベンズブロマロンは経口投与後、血中に吸収された後、尿中に排泄され、近位尿細管上皮細胞の管腔側膜に存在する URAT1を阻害し、尿酸の再吸収を阻害すると考えられる。

実施例 6

[0037] ベンズブロマロン及び 6—ヒドロキシベンズブロマロンの 2週間反復投与毒性試験ベンズブロマロン及び 6—ヒドロキシベンズブロマロンをそれぞれ lOOmgZkgZda yの用量でラットに 14日間投与した結果、ベンズブロマロン投与群では肝臓重量の増加（13. 59g)が認められ、一方、 6—ヒドロキシベンズブロマロン投与群では薬物投与による肝臓重量の増加は認められな力つた (9. 90g)。なお、正常対照群の肝重量は、 9. 43gであった。

上記の結果から、 6—ヒドロキシベンズブロマロンは、ベンズブロマロンよりも肝臓に対する影響が少な、ものであることがわ力つた。

実施例 7

[0038] OAT4 (有機ァ-オントランスポータ）による作用機序の試験結果

OAT4 (有機ァ-オントランスポータ）は近位尿細管管腔側膜に存在し、尿酸などの有機ァ-オンを細胞内に取り込む有機ァ-オントランスポーターであり、その代表的な基質として硫酸エステロン（estrone sulfate)が知られている。そこで、 OAT4を発現している S2細胞を用いて、ベンズブロマロン及び 6—ヒドロキシベンズブロマロンの、 OAT4による硫酸エステロン (estrone sulfate)の取り込みの阻害作用を実験した。ベンズブロマロン及び 6—ヒドロキシベンズブロマロンが、それぞれ 0. 01 ^ mol/L, 0. 1 μ mol/L, 1 μ mol/L,及び 30 μ molZL存在下における³ Η—硫酸エステ口ン（estrone sulfate) (50nmolZL)の取り込み量を測定した。この結果を図 6に、なにも存在しないときの³ H—硫酸エステロン（estrone sulfate)の取り込み量（control)を、 100%としたときの相対値として示した。

この結果、 OAT4における、 ³H—硫酸エステロン（estrone sulfate)の取り込みを 6 —ヒドロキシベンズブロマロンは用量に相関して阻害し、その IC は 3. 2 μ mol/L

50

であった。また、ベンズブロマロンのそれは、 5. 4 molZLであった。

この様に 6—ヒドロキシベンズブロマロンは OAT4における基質の取り込みに対して阻害作用を有していることから、生体中の 6—ヒドロキシベンズブロマロンは OAT4による尿酸の再吸収を阻害し、尿酸の排泄を促進するものと考えられる。

実施例 8

OAT3 (有機ァ-オントランスポータ）による作用機序の試験結果

OAT3 (有機ァ-オントランスポータ）は近位尿細管基底側 (血管側)膜に存在し、尿酸などの有機ァニオンを細胞内に取り込む有機ァニオントランスポーターであり、その代表的な基質として硫酸エステロン（estrone sulfate)が知られている。そこで、実施例 7と同様にして、 OAT3を発現している S2細胞を用いて、ベンズブロマロン及び 6—ヒドロキシベンズブロマロンの、 OAT3による硫酸エステロン（estrone sulfate)の取り込みの阻害作用を実験した。ベンズブロマロン及び 6—ヒドロキシベンズブロマ口ン力それぞれ 0. 01 μ mol/L, 0. 1 mol/L, 1 μ mol/L,及び 30 μ mol/L 存在下における³ Η—硫酸エステロン（estrone sulfate) (50nmolZL)の取り込み量を測定した。この結果を図 7に、なにも存在しないときの³ H—硫酸エステロン (estrone sulfate)の取り込み量（control)を、 100%としたときの相対値として示した。

この結果、 OAT3による³ H—硫酸エステロン（estrone sulfate)の取り込みを 6—ヒドロキシベンズブロマロンは用量に相関して阻害し、その IC 値は 0. 3 molZLであ

50

つた。また、ベンズブロマロンのそれは、 0. 7 μ molZLであった。

この様に 6—ヒドロキシベンズブロマロンは OAT3における基質の取り込みに対して阻害作用を有している。 [0040] また、 OAT3による³ H—硫酸エステロン（estrone sulfate)の取り込みにおける 6—ヒドロキシベンズブロマロンの阻害作用を分析 (Ki値）した。結果を図 8に示す。図 8の横軸は lZS (LZmmol)であり、縦軸は lZV(mg蛋白 Μ·分)であり、黒四角印（國）は 6—ヒドロキシベンズブロマロン（0. 3 /z M)の場合を示し、白四角印（口）は対照 (control)を示す。その結果、その阻害様式は競合阻害と非競合阻害の混合型であった。それぞれの Ki値は、 1. O /z M (競合阻害）、 0. 7 /z M (非競合阻害)であつた。

したがって、血中の 6—ヒドロキシベンズブロマロンの一部は、 OAT3によって OAT 3の基質と競合して、近位尿細管上皮細胞内に取り込まれ、細胞内部から URATを阻害し、尿酸の再吸収を阻害すると考えられる。

産業上の利用可能性

[0041] 本発明は、尿酸排泄促進作用が強ぐかつ重篤な肝障害を引き起こすことなぐ安全性の高い高尿酸血症の治療又は予防剤、より詳細には、尿酸排泄促進剤を提供するものであり、医薬産業において極めて有用である。

Claims

請求の範囲

[I] 6—ヒドロキシベンズブロマロン又はその塩、及び製薬上許容される担体を含有してなる医薬組成物。

[2] 医薬糸且成物が、高尿酸血症又は高尿酸血症に起因する疾患の治療 ·予防剤である請求項 1に記載の医薬組成物。

[3] 医薬組成物が、痛風の治療 ·予防剤である請求項 1又は 2に記載の医薬組成物。

[4] 医薬組成物が、尿酸排泄促進剤である請求項 1に記載の医薬組成物。

[5] 医薬組成物が、キサンチンォキシダーゼ阻害剤である請求項 1に記載の医薬組成物。

[6] 6—ヒドロキシベンズブロマロン又はその塩を含有してなる、腎臓における尿酸の取り込み抑制剤。

[7] 腎臓における尿酸の取り込み力尿酸特異的トランスポーターである URAT1による取り込みである請求項 6に記載の抑制剤。

[8] 高尿酸血症又は高尿酸血症に起因する疾患の治療'予防のための医薬糸且成物の製造のための、 6—ヒドロキシベンズブロマロン又はその塩の使用。

[9] 高尿酸血症に起因する疾患が、痛風である請求項 8に記載の使用。

[10] 2 ェチル 6 ヒドロキシ一 3— (p ヒドロキシ一ベンゾィル）一ベンゾフラン（これらの水酸基は必要により保護されていてもよい。）を、ブロム化剤を用いてブロム化し

、次いで水酸基の保護基を脱保護することからなる 6—ヒドロキシ—ベンズブロマロンを製造する方法。

[II] ブロムィ匕剤力 N ブロモサクシンイミドである請求項 10に記載の方法。

[12] 水酸基の保護基が、低級アルキルエーテルによるものである請求項 10又は 11に記載の方法。