WO2005085418A1 - 新規な乳酸菌 - Google Patents

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WO2005085418A1
WO2005085418A1 PCT/JP2005/003762 JP2005003762W WO2005085418A1 WO 2005085418 A1 WO2005085418 A1 WO 2005085418A1 JP 2005003762 W JP2005003762 W JP 2005003762W WO 2005085418 A1 WO2005085418 A1 WO 2005085418A1
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lactobacillus delbrueckii
animal
improvement
feed
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PCT/JP2005/003762
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Taku Miyamoto
Yoshio Naito
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Biobalance Co., Ltd.
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    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
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    • A23V2400/137—Delbrueckii
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    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
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    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus

Definitions

  • the present invention relates to a novel lactic acid bacterium having antifungal activity and excellent probiotic activity.
  • Lactic acid bacteria are lactic acid, organic acid, volatile fatty acid, hydrogen peroxide, benzoic acid, bacteriocin.
  • antibacterial substances such as niacin and collicin. (Base).
  • Bactiacin and collicin. Base
  • animal feed may cause a decrease in animal feed intake due to fever and foul odor caused by mold breeding, which is easy for mold to breed.
  • mold growth could clog the feed tank hopper exit, preventing feed from being produced.
  • lactic acid bacteria have been used as pronotics.
  • Patent Document 2 veterinary drugs comprising the Lactobacillus' salivarius, the mixed microorganism number of bacteria mainly consisting of NX 10 6 or more lactococcal and spore-forming bacteria, at least 0.1%
  • Add deodorant feed see Patent Document 3
  • feed containing high-grade organic substances, antioxidants and viable bacteria placed in a sealed container and fermented at a temperature of 25 ° C-37 ° C
  • Patent Document 4 There are many proposals such as products (see Patent Document 4).
  • probiotics means viable bacteria and And, according to the most general definition, “live microbial supplements that benefit the host animal by improving the balance of intestinal microorganisms” (Fuller, R .: Probiotics in man and animals., J. Appl. BacterioL, 66, 365-378 (1989)). Recently, ⁇ microorganisms that are beneficial for maintaining the health of the host '' (Lee, YK and Salminen, S .: The coming of age of probiotics., Trends Food Sci. Technol. 6, 241-245 ( (1995))), and there is also an idea that even dead cells are included in pronotics (Salminen, S.
  • probiotics how should they be defined ?, Trends Food Sci. Technol, 10, 107-110 (1999)) 0
  • a typical microorganism for probiotics is a lactic acid bacterium including bifidobacteria.
  • Bacillus subtilis, butyric acid bacteria, propionic acid bacteria, yeast, etc. are also used as probiotics.
  • Patent Document 1 JP 2002-291466 A
  • Non-patent document 1 Pana Lavermicocca et al. Apphed ana Environmental Micro Diology, Sept. 2000, p4084—p4090, vol.66, No9)
  • Patent Document 2 Japanese Patent Laid-Open No. 50-132115
  • Patent Document 3 Japanese Patent Laid-Open No. 9-322714
  • Patent Document 4 Japanese Patent Laid-Open No. 2001-299230
  • the present invention has been made in view of the above circumstances, and an object of the present invention is to provide a novel lactic acid bacterium having antifungal activity and excellent probiotic activity even when used alone. Means for solving the problem
  • a novel lactic acid according to the first aspect of the present invention is Lactobacillus delbrueckii having antifungal activity.
  • Lactobacillus delbrueckii Lactobacillus delbrueckii ANTI MUFFA (FERM P- 19705) is preferable.
  • Lactobacillus delbrueckii (Lactobacillus delbrueckii) is preferably Lactobacillus delbrueckii, which has antifungal activity against fungi belonging to the genus Pecilium! / ⁇ .
  • Second aspect (aspect) of the present invention This animal feed is supplemented with the aforementioned Lactobacillus delbrueckii.
  • the third aspect (aspect) of the present invention is an animal beverage to which the above-mentioned Lactobacillus delbrueckii is added.
  • the fourth aspect (aspect) of the present invention is a lactic acid bacteria viable agent comprising the above-mentioned Lactobacillus delbrueckii as an active ingredient.
  • the animal feed additive according to the present invention contains the aforementioned Lactobacillus delbrueckii as an active ingredient.
  • a method for improving animal rearing according to a sixth aspect (aspect) of the present invention is the above-mentioned Lactobacillus delbrueckii;
  • the improvement of animal husbandry is any of improvement of deodorization of animal excrement, improvement of animal survival rate, improvement of egg-laying rate of hens or improvement of milk quality of dairy cows.
  • the improvement of animal breeding broadly encompasses the effects obtained by the probiotic activity possessed by the lactic acid bacteria of the present invention.
  • the fermented food according to the seventh aspect of the present invention is produced using the aforementioned Lactobacillus delbrueckii.
  • a method for producing a fermented food according to an eighth aspect (aspect) of the present invention is the above-mentioned Lactobacillus delbrueckii;
  • a method for preserving a fermented food according to a ninth aspect (aspect) of the present invention is for the above-mentioned Lattobacillus tenolebritz or Lactobacillus delbrueckii.
  • the method for purifying a stable is to spray the Lactobacillus delbrueckii on the floor or ground of the stable.
  • a method for purifying underwater according to the present invention is such that the above-mentioned Lactobacillus delbrueckii is directly sprayed into water, or is applied to a container having water permeability. Contain and sink in water.
  • novel lactic acid bacteria according to the present invention have antifungal activity, they are useful for controlling fungi during storage of foods, controlling fungi in feeds, etc. The problem can be avoided. Moreover, since the novel lactic acid bacteria according to the present invention are excellent in probiotic activity, they improve intestinal flora and improve the breeding of hosts such as poultry and livestock. Furthermore, animal feeds, animal beverages, lactic acid bacteria live bacteria agents, animal feed additives, animal feed improvement methods, fermented foods, fermented food production methods, food storage methods, stables using such novel lactic acid bacteria This purification method and underwater purification method also exhibit the same effect.
  • FIG. 1 shows phylogenetic classification by 16S rDNA gene base sequence analysis of Lactobacillus delbrueckii ANTI MUFFA (FERM P- 19705) according to the present invention.
  • FIG. 2 is a photographic image showing the livestock feed of Comparative Example 1.
  • FIG. 3 is a photographic image showing the livestock feed of Example 1.
  • FIG. 4 is a graph comparing the antifungal activity and pH change over time of 10% skim milk of Lactobacillus delbrueckii ANTI MUFFA (FERM P-19705) according to the present invention. (Study example 4).
  • FIG. 5 is a photographic image showing the antifungal activity of Lactobacillus delbrueckii ANTI MUFFA (FERM P-19705) according to the present invention when added to a feed in comparison with a comparative example. (Study example 5).
  • Fig. 6 is a photomicrograph of contaminated blue mold isolated from the feed force of the comparative example in Fig. 5.
  • FIG. 7 shows Lactobacillus delbrueckii according to the present invention.
  • FIG. 6 is a photographic image showing the antifungal activity when ANTl MUFFA (FERM P-19705) is added to a feed in comparison with a comparative example (Study Example 6).
  • Lactobacillus delbrueckii (Lactobacillus delbrueckii) of the present invention is preferably Lactobacillus delbrueckii ANTl MUFFA (hereinafter sometimes referred to as this strain or this strain!).
  • This strain has been deposited at the Patent Deposit Center (Tsukuba Sakai Higashi 1 11 1 Chuo No. 6), Ibaraki Prefecture, Japan. The deposit number is FERM P-19705.
  • liquid medium for subculture of lactic acid bacteria (glucose 5.0 g, ratatoose 5.0 g, tryptone 10.0 g, yeast extract 5.0 g, twin -80 1.0 g, L-cystine hydrochloride 9.1 g with distilled water to a total volume of 1000 ml
  • the bacteriological properties of Lactobacillus delbrueckii ANTl MUFFA (FERM P-19705) cultured at 121 ° C for 15 minutes under high pressure sterilization after adjustment to pH 6.8-7.0 are as follows. It is.
  • the basic medium for sugar fermentability test (tryptone 10.0 g, yeast extract 5.0 g, bromtalesol purple 0.06 g and distilled water was added to make a total volume of 1000 ml, adjusted to pH 6.8, The mixture was cultured at 121 ° C for 15 minutes under high pressure sterilization.
  • the culture temperature is 20-50 ° C, preferably 30-40 ° C
  • the culture pH is pH 3.5-9.0, preferably 4.5-7.0
  • the culture time is 6-30 hours.
  • This fungus has an antifungal activity, particularly an antifungal activity against fungi belonging to the genus Bacillus, is easy to reproduce in animal feed, and has an inhibitory effect against Penicillium olsonii. In addition, it has an inhibitory effect against Penicillium chrysogenum and Penicillium roquefortii, which have the ability to produce mycotoxin mycotoxins. Further, this strain strongly suppresses the growth of Kluyveromyces marxianus var. Lactis 5Y307, which is a representative yeast present in kefir.
  • This fungus is added to poultry feed, livestock feed such as cattle and pigs, pet feed such as dogs and cats, fish culture feed such as eel, etc. You can control the force.
  • the bacterium may be added to beverages such as poultry, livestock, and drinking water given to pets.
  • the present bacterium can be used as a lactic acid bacteria viable agent containing this as an active ingredient.
  • the lactic acid bacteria biobacterial agent may be usually prepared only with this bacterium, but may also be mixed with substances that serve as a nutrient source for this bacterium, such as corn, bran and rice bran.
  • the lactic acid bacterium viable agent may be used in combination with other microorganisms or other useful substances that do not inhibit the growth of the bacterium. Lactic acid bacteria can be used in addition to animal feed and animal beverages.
  • This bacterium is safe and can be used as a starter for fermented foods. In addition, it has antifungal activity, so it can be added to foods to control pathogenic bacteria and spoilage bacteria and used for food preservation.
  • the present bacterium can be used as a useful probiotic.
  • Provititas is an orally ingestible microorganism that improves the intestinal flora of the host and has a beneficial effect on the host.
  • the beneficial effects on the host can be obtained by ingestion by animals, promoting animal growth, improving feed requirements, preventing bowel disease, improving excreta deodorization, improving survival, Various things such as improving the egg-laying rate and milk quality of dairy cows It is synonymous with improvement.
  • animal feed supplemented with animal feed additives containing this as an active ingredient can be consumed by animals, and animal breeding can be improved by probiotic activity.
  • the MRS liquid medium was inoculated with this bacterium, and primary cultured at 30-40 ° C for 24 hours.
  • the culture broth was sprayed onto sterilized bran and subcultured at 30-40 ° C for 3 days to obtain viable lactic acid bacteria.
  • the number of bacteria of this bacterium contained in the obtained lactic acid bacteria viable agent was 5.3 ⁇ 10 9 / g.
  • Skim milk agar plate (sterilized 10% skim milk 10ml, BCP (100mg / l) dissolved 2% agar 5ml,
  • TYLG broth (containing 10 il of this fungus) 150 ⁇ 1) After smearing mold spores of the test strains listed in Table 1 on top of each other, add 50 ⁇ l of TYLG broth (containing 10 6 / ml of this fungus). 5 ml of 0.15% soft agar was overlaid and cultured at 30 ° C for 2 days. After culturing, the growth inhibitory effect of mold was determined by comparison with a control in which mold spores were not smeared. As shown in Table 1, the results showed a strong inhibitory effect against P. pyrium fungi.
  • the present bacterium was added to livestock feed to test whether it was possible to control the growth of fungi on livestock feed.
  • Livestock feed (cereals (corn, rye) 60wt%, vegetable oil cake 26wt%, algae 2wt%, others (confectionery, molasses, etc.) 12wt%)
  • the agent was added with lg (5.3 ⁇ 10 9 pieces), and 20 ml of distilled water was added into the cup and left at room temperature for 377 days (Example 1).
  • 20 g of livestock feed with only 20 ml of distilled water was left untreated (Comparative Example 1). As shown in FIGS.
  • Comparative Example 1 the contaminated fungus, Besylium olsonii (Penicillium olsonii) of the livestock feed propagated and turned blue-green.
  • Example 1 the propagation of Penicillium olsonii was inhibited.
  • Comparative Example 1 in FIG. 2 is 31 days after being left unattended
  • Example 1 in FIG. 3 is that after 377 days after being left unattended.
  • Penicillium roqueforti PR-1 strain was used as the indicator bacterium (hereinafter referred to as PR-1 strain). is there).
  • PR-1 strain Penicillium roqueforti PR-1 strain was used as the indicator bacterium (hereinafter referred to as PR-1 strain). is there).
  • PR-1 strain the indicator bacterium
  • this strain was found to be one of the three species of the genus Pecilium, which is a blue fungus that adversely affects feed, namely Penicillium chrysogenum (JCM2056) and Penicillium olsonii (wild Antifungal activity was confirmed for 'Penocillium roqueforti (PR-1). Among them, Penicillium chrysogenum (JCM2056) was confirmed to be completely inhibited from growing. It was.
  • the antifungal activity of this strain in 10% skim milk (Study Example 4) and the change in pH over time were examined by the colony plate count method.
  • the line graph in Fig. 4 (line 3) shows the pH of skim milk, and the first line with a triangle point shows the time course of the pH of skim milk inoculated with only this strain, and the second line with a diamond point.
  • the line (uppermost line) shows the time course of the pH of skim milk inoculated with Penicillium roqueforti PR-1 strain only.
  • the third line with a round dot shows the Penicillium roqueforti PR-1
  • the changes over time in the pH of skim milk inoculated with both PR_1 and this strain are shown.
  • the bar graphs (3) in FIG. 4 show the numbers of the bacterial strains and PR-1 strains, the left bar graph shows the bacterial counts of the cultivated strain alone, and the central graph shows the cultivated strains alone.
  • the number of PR-1 strains and the bar graph on the right show the number of PR-1 strains when this strain is added.
  • the growth of PR-1 strain when this strain was added was suppressed, and after 36 hours, the number of residual bacteria in PR-1 strain was not detected. Tsuta (zero bacterial count). This indicates that the present strain can be suitably used for dairy products (fermented foods) such as yogurt.
  • the laying hen feed to which this strain was added and the laying hen feed to which this strain was not added were each left for 1 year to confirm the occurrence of mold.
  • the photographic image on the left shows the occurrence of mold when the strain is added to the laying hen feed and the photographic image on the right shows the mold when the strain is added to the laying hen feed. Indicates the occurrence status.
  • the laying hen feed without the addition of this strain has the ability to grow mold and completely rots.
  • the laying hen feed with this strain added has no mold, and it rots. Not.
  • Fig. 5 the photographic image on the left shows the occurrence of mold when the strain is added to the laying hen feed and the photographic image on the right shows the mold when the strain is added to the laying hen feed. Indicates the occurrence status.
  • the laying hen feed without the addition of this strain has the ability to grow mold and completely rots.
  • the laying hen feed with this strain added has no mold, and it rot
  • ammonia concentration in the pig house, poultry house and cow house was measured, and the deodorizing action of this bacterium was examined as follows.
  • natto bacteria is 0.2 wt.
  • pig feed cereals (corn, rye) 60 wt%, vegetable oil cake 26 wt%, alga 2 wt%, and others (confectionery waste, molasses, calcium phosphate, etc. 12 wt%). What added% was prepared.
  • the pig feed of Comparative Example 2 was ingested for a certain period by a total of 2000 pigs raised in each of the weaned piglet breeding house, the breeding house, and the mother pig house.
  • the ammonia concentration of was measured.
  • the ammonia concentration was measured by installing an ammonia detector tube (manufactured by Gastec Co., Ltd., 3DL) at a height of 1.5 m in the pig house.
  • Example 2 the above-mentioned swine feed was prepared by adding the live lactic acid bacteria obtained in the above production example so that 4 g (2.12 X 10 1Q ) per day per day could be ingested. . Then, the pig feed of Example 2 was fed to each of the 2000 pigs after the period of breeding with the pig feed of Comparative Example 2, and after the period of breeding with the pig feed of Comparative Example 2 20 The concentrations of ammonia after and after 40 days were measured in the same manner as in Comparative Example 2. That is, the test of Example 2 was performed after the test of Comparative Example 2 was completed. As shown in Table 2, the results of Example 2 showed a remarkable deodorizing action compared to Comparative Example 2, and almost no ammonia odor was generated after 40 days.
  • feed for egg-laying chicken corn 59% by weight, vegetable oil 23% by weight, soko 3 wt%, animal feed (fish meal) 1%, others (calcium carbonate, animal fats, corn steep liquor, etc. 14 wt%) commercially available lactic acid bacteria materials (composition is lactic acid bacteria, yeast, filamentous fungi, etc.) ) was added at 2.0 wt%. Then, the feed for egg-collecting chickens of Comparative Example 3 was ingested by 12,000 egg-collecting chickens (Isa Brown) for a certain period, and the ammonia concentration in the chicken house was measured.
  • lactic acid bacteria materials composition is lactic acid bacteria, yeast, filamentous fungi, etc.
  • Example 3 was prepared by adding 1.0 wt% of the lactic acid bacteria viable agent obtained in the above Production Example to the same egg-laying chicken feed as described above. Then, after the breeding period of the egg-laying hen feed of Example 3 was elapsed after the breeding period of the egg-laying hen feed of Comparative Example 3, the 12,000 egg-laying hens (Isabouron) were ingested for a certain period, and the ammonia concentration in the poultry house was measured. did. The results are shown in Table 3.
  • Example 3 was conducted for 15 months after the test of Comparative Example 3 was conducted for 15 months, and then the feed for the egg-collecting hens was added to the egg-collecting hens for 3 months. is there .
  • the rearing conditions were the same in order to prepare the comparative conditions.
  • the number of chicken house wings (area per bird) and the environment of the chicken house (equipment, etc.) were the same, but the breeding period was varied in the form of the first and second periods as described above.
  • Table 3 shows the average values of the results of regular measurements during each 15 month test period of Comparative Example 3 and Example 3. As a result, as shown in Table 3, the deodorizing action of this bacterium was also excellent in poultry.
  • Example 4 was prepared by adding the lactic acid bacteria inoculum obtained in the above production example to the same feed for dairy cows as described above so that 40 g per cow could be ingested per day. Then, the dairy cattle feed of Example 4 was ingested by each of the 130 dairy cows for a certain period, and the ammonia concentration in the barn was measured. In the test of Example 4, after the test of Comparative Example 4 was completed, each of the 130 dairy cows was fed with a feed for dairy cows that had not been added for a certain period. The ammonia concentration was measured using the same measurement method and measurement apparatus as in Example 2 above. As a result, as shown in Table 5, the deodorizing action of this bacterium was excellent even in dairy cows.
  • Example 3 [Examination of survival rate and egg-laying rate of laying hens] [0053] In each 15-month test conducted in the examination of the deodorizing action of Example 3 above, the survival rate and the egg-laying rate were examined together with the test of the deodorizing action. As described above, Comparative Example 3 was obtained by ingesting poultry feed with commercially available lactic acid bacteria material added, and Example 3 was used for poultry feed as described above. A poultry supplement is added to a poultry. As a result, as shown in Table 6, the survival rate of egg-laying hens ingesting this bacterium was extremely high. Moreover, as shown in Table 7, egg-laying hens that ingested this fungus were excellent in egg-laying rate.
  • Example 4 In the examination of the deodorizing action in Example 4 above, the dairy cattle feed was supplemented with a commercially available lactic acid bacteria material (Comparative Example 4) and the same dairy cattle feed (Comparative Example 5) and the dairy cattle feed were obtained in the production examples. Each dairy cow is bred using the same dairy cattle material (Example 5) with the addition of lactic acid bacteria (Example 4), and milked 17 times at 10-day intervals. The milk protein rate and the non-fat milk solid content rate were examined. In Comparative Example 5, 130 dairy cows (Holstein) were fed dairy cattle feed supplemented with commercially available lactic acid bacteria materials.
  • Holstein dairy cows
  • Example 5 In the test of Example 5, after completion of the test of Comparative Example 5, a dairy cow's feed without addition for a certain period of time was ingested, and then 130 dairy cows (Holstein) were made into a dairy cow feed. This was carried out by ingesting the product obtained by adding the live lactobacillus agent (feed of Example 5). The milk fat ratio, milk protein ratio, and non-fat milk solid content ratio of each milk squeezed from the cow was measured using a milk component analyzer (Milco Scan FT120, manufactured by Fujihira Co., Ltd.). Table 8 shows the tests conducted. Shows the average of the measured values. As shown in Table 8, the milk fat percentage, milk protein percentage, and non-fat milk solid content of milk produced from dairy cows ingesting this bacterium were higher than those in Comparative Example 5. Had improved.
  • this bacterium has improved digestion and absorption, which is highly settled in the intestines of poultry and livestock, and has excellent probiotic activity even when used alone. Therefore, the present invention can be concretely used as a probiotic (viable fungicide) and exhibits the effects as described above.
  • the present invention may be applied not only to animal feed additives, but also to animal feeds to which the present strain is added and animal beverages to which the present strain is added. Even in this case, the same effect as described above is exhibited.
  • this strain is effective in improving the breeding of animals such as livestock and poultry, but when added to food, it can be used for food preservation or food microorganism control (biopreservation).
  • this strain can also be added to fermented foods and used for the production of fermented foods. Demonstrate the effect.
  • animal feed supplemented with this strain may be intentionally or unintentionally sprayed on the ground, floor, drainage, etc. of stables when feeding animals.
  • the spraying place can be cleaned or non-brominated according to the above-described properties or characteristics, and an unprecedented unique effect can be exhibited.
  • animal feed to which this strain has been added can be sprayed directly into the water of animal beverage containers, etc. when feeding to animals, etc. It is housed in a container and deposited in the water to control the microorganisms in the water, and the water is cleaned and disinfected according to the properties and characteristics as described above. It is also possible to exert unique effects.

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Abstract

　抗カビ活性を有する新規な乳酸菌として、抗カビ活性を有するラクトバチルス・デルブリッキー（Lactobacillus delbrueckii）が提供される。ラクトバチルス・デルブリッキー（Lactobacillus delbrueckii）は、ラクトバチルス・デルブリッキー（Lactobacillus delbrueckii）ANTI MUFFA(FERM P-19705)である。ラクトバチルス・デルブリッキー（Lactobacillus delbrueckii）は、ペニシリウム属のカビ類に対する抗カビ活性を有し、且つ単独で用いてもプロバイオティクス活性に優れる。

Description

新規な乳酸菌
技術分野
[0001] 本発明は、抗カビ活性を有し、且つプロバイオテイクス活性に優れる新規な乳酸菌 に関する。
背景技術
[0002] 乳酸菌は、乳酸、有機酸、揮発性脂肪酸、過酸化水素、安息香酸、バクテリオシン
(ナイァシン、コリシンなど)など様々な抗菌性物質 (抗細菌性物質)を産生することが 知られており、乳製品のスタータとしてのみならず、抗細菌性を利用して食品の保存 ( バイオプリザべーシヨン）にも用いられている。しかし、食品の保存中、病原菌や腐敗 菌として細菌が繁殖するだけでなく力ビ類も繁殖し、ほとんどの乳酸菌はカビの繁殖 には有効ではな力つた。特に、動物用飼料にはカビが繁殖し易ぐカビの繁殖による 飼料の発熱や悪臭のため、動物の飼料摂取率の低下を招くことがあった。また、カビ の繁殖により飼料用タンクのホッパーの出口が詰まり、飼料が出なくなることがあった 。一方、カビの繁殖を防除するため、動物用飼料に抗カビ活性のある抗生物質や蟻 酸などの抗カビ剤が添加されることがあつたが、抗カビ剤が腐蝕を招くという問題や、 抗生物質により動物に下痢や消化不良を招いたり、耐性菌の出現や腸内フローラの 異常を招く等の問題があった。従来、抗カビ活性を有する乳酸菌は、ラクトバチルス' サンフランシスェンシス（Lactobacillus sanfranciscencis) (特許文献 1参照）、ラタトバ チルス 'プランタラム（Lactobacillus plantrum) (非特許文献 1参照）以外はほとんど知 られていない。
[0003] また、従来、乳酸菌はプロノィォテイクスとして用いられて 、る。このようなものとして 、ラクトバチルス 'サリバリウスを含有してなる家畜用薬剤 (特許文献 2参照）、菌数が N X 106以上の乳酸球菌及び芽胞菌から主としてなる混合微生物を、少なくとも 0. 1 %含む消臭性飼料 (特許文献 3参照）、高級有機物に、抗酸化物質と、生菌剤とを加 え、密閉容器に入れ、 25°C— 37°Cの温度下で発酵させた飼料添加物（特許文献 4 参照）など多くの提案がある。ここで、「プロバイオテイクス (probiotics)」とは、生菌剤と も呼ばれ、最も一般的な定義によれば、「腸内微生物のバランスを改善することによ つて宿主動物に有益に働く生きた微生物添カ卩物」（Fuller, R.: Probiotics in man and animals., J. Appl. BacterioL, 66, 365- 378(1989))のことである。し力し、最近では、「 宿主の健康維持に有益な働きをする微生物」 (Lee, Y. K. and Salminen, S.: The coming of age of probiotics., Trends Food Sci. Technol. 6, 241-245(1995))として広 い意味で用いられることもあり、死菌体でもプロノィォテイクスに含めるという考えもみ られる (Salminen, S. et al.: probiotics: how should they be defined?, Trends Food Sci. Technol, 10, 107-110(1999)) 0そして、プロバイオテイクスとして代表的な微生 物が、ビフィズス菌を含む乳酸菌である。なお、その他、枯草菌、酪酸菌、プロピオン 酸菌、酵母などもプロバイオテイクスとして利用されて 、る。
特許文献 1：特開 2002-291466号公報
非特干文献 1 : Paola Lavermicocca et al.Apphed ana Environmental Micro Diology, Sept.2000,p4084— p4090, vol.66,No9)
特許文献 2 :特開昭 50-132115号公報
特許文献 3：特開平 9— 322714号公報
特許文献 4 :特開 2001— 299230号公報
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0004] しかし、これまでに抗カビ活性を有するラクトバチルス ·デルプリッキー（
Lactobacillus delbrueckii)についての報告はない。また、従来のプロバイオテイクスと して用いられる乳酸菌は、特許文献 2に記載のように乳酸菌単独で用いる提案もある 力 十分な効果が得られな力 たため、上記のように乳酸菌と他の微生物を併用する ものや他の有用物質を併用するものが大半を占め、最近では、単独で十分なプロバ ィォテイクス活性が得られる乳酸菌についての提案はほとんどない。
[0005] 本発明は、上記の事情に鑑みなされたもので、抗カビ活性を有し、且つ単独で用 いてもプロバイオテイクス活性に優れる新規な乳酸菌を提供することを課題とする。 課題を解決するための手段
[0006] 上記の課題を解決するため、本発明の第 1の態様 (アスペクト）に係る新規な乳酸 菌は、抗カビ活性を有するラクトバチルス 'デルプリッキー（Lactobacillus delbrueckii) を要旨とする。
[0007] ラクトバチルス ·デルプリッキー（Lactobacillus delbrueckii)としては、ラクトバチルス · デルプリッキー（Lactobacillus delbrueckii) ANTI MUFFA(FERM P- 19705)が好ましい
[0008] ラクトバチルス ·デルプリッキー（Lactobacillus delbrueckii)は、ぺ-シリウム属のカビ 類に対する抗カビ活性を有するラクトバチルス ·デルブリツキ一（Lactobacillus delbrueckii)とすることが好まし！/ヽ。
[0009] 本発明の第 2の態様 (アスペクト）〖こ係る動物用飼料は、上記ラクトバチルス.デルプ リッキー（Lactobacillus delbrueckii)が添加されてなる。
[0010] 本発明の第 3の態様 (アスペクト）〖こ係る動物用飲料は、上記ラクトバチルス ·デルプ リッキー（Lactobacillus delbrueckii)が添加されてなる。
[0011] 本発明の第 4の態様 (アスペクト）〖こ係る乳酸菌生菌剤は、上記ラクトバチルス ·デル ブリッキー (Lactobacillus delbrueckii)を有効成分とする。
[0012] 本発明の第 5の態様 (アスペクト）〖こ係る動物用飼料添加剤は、上記ラクトバチルス. ァノレブリッキー (Lactobacillus delbrueckii)を有効成分とする。
[0013] 本発明の第 6の態様 (アスペクト）に係る動物飼育の向上方法は、上記ラクトバチル ス ·テノレブリツや一 (Lactobacillus delbrueckii; 用 ヽる。
[0014] 動物飼育の向上は、動物の排泄物の消臭の向上、動物の生存率の向上、採卵鶏 の産卵率の向上あるいは乳牛の乳質の向上の 、ずれかであることが好まし 、。し力し
、動物飼育の向上とは、本発明の乳酸菌の有するプロバオテイクス活性により得られ る効果を広く包含する。
[0015] 本発明の第 7の態様 (アスペクト）に係る発酵食品は、上記ラクトバチルス 'デルブリ ツキ一（Lactobacillus delbrueckii)を用いて製造したものである。
[0016] 本発明の第 8の態様 (アスペクト）に係る発酵食品の製造方法は、上記ラクトバチル ス ·テノレブリツや一 (Lactobacillus delbrueckii; 用 ヽる。
[0017] 本発明の第 9の態様 (アスペクト）に係る発酵食品の保存方法は、上記のラタトバチ ノレス ·テノレブリツや一 (Lactobacillus delbrueckii) 用 ヽる。 [0018] 本発明の第 10の態様 (アスペクト）に係る厩舎の浄ィ匕方法は、上記ラクトバチルス' デルブリツキ一（Lactobacillus delbrueckii)を厩舎の床面または地面に散布する。
[0019] 本発明の第 11の態様 (アスペクト）〖こ係る水中の浄ィ匕方法は、上記ラクトバチルス- デルプリッキー（Lactobacillus delbrueckii)を直接水中に散布、または、透水性を有 する収容体に収容して水中に沈積する。
発明の効果
[0020] 本発明に係る新規な乳酸菌は、抗カビ活性を有するので、食品の保存中のカビの 防除、飼料のカビの防除などに有用であり、抗生物質や抗カビ剤の添カ卩による問題 点を回避できる。また、本発明係る新規な乳酸菌は、プロバイオテイクス活性に優れ るので、腸内フローラを改善し、家禽や家畜などの宿主の飼育を向上させる。更に、 かかる新規な乳酸菌を利用した動物用飼料、動物用飲料、乳酸菌生菌剤、動物用 飼料添加剤、動物飼育の向上方法、醱酵食品、発酵食品の製造方法、食品保存方 法、厩舎の浄化方法及び水中の浄化方法も、同様の効果を発揮する。
図面の簡単な説明
[0021] [図 1]図 1は本発明に係るラクトバチルス.デルプリッキー（Lactobacillus delbrueckii) ANTI MUFFA(FERM P- 19705)の 16S rDNA遺伝子塩基配列解析による系統分類を 示す。
[図 2]図 2は比較例 1の家畜用飼料を示す写真像である。
[図 3]図 3は実施例 1の家畜用飼料を示す写真像である。
[図 4]図 4は本発明に係るラクトバチルス.デルプリッキー（Lactobacillus delbrueckii) ANTI MUFFA(FERM P-19705)の 10% skim milk中における抗カビ活性と pHとの経時 変化を比較例と比較して示すグラフである (検討例 4)。
[図 5]図 5は本発明に係るラクトバチルス 'デルブリツキ一（Lactobacillus delbrueckii) ANTI MUFFA(FERM P-19705)を飼料に添カ卩した場合の抗カビ活性を比較例と比較 して示す写真像である (検討例 5)。
[図 6]図 6は図 5における比較例の飼料力 分離された汚染青カビの顕微鏡写真像で ある。
[図 7]図 7は本発明に係るラクトバチルス 'デルブリツキ一（Lactobacillus delbrueckii) ANTl MUFFA(FERM P-19705)を飼料に添カ卩した場合の抗カビ活性を比較例と比較 して示す写真像である (検討例 6)。
発明を実施するための最良の形態
[0022] 本発明のラクトバチルス ·デルプリッキー（Lactobacillus delbrueckii)は、ラタトバチ ルス'デルプリッキー（Lactobacillus delbrueckii) ANTl MUFFA (以下、本菌乃至本菌 株と!/、うことがある）が好ましぐこの菌株は財団法人特許寄託センター（日本国茨城 県つくば巿東 1 1 1中央第 6)に寄託されており、受託番号は FERM P-19705である
[0023] 本菌は、乳酸菌の抗菌活性の検索中に見出された。本菌は、図 1に示すように、
16s rDNA塩基配列分析による系統解析の結果、ラクトバチルス ·デルプリッキーサブ スピーシーズラクテイス（Lactobacillus delbrueckii subsp. Lactis)と 99.5%の相同性が あり、ラクトバチルス ·デノレブリッキーサブスピーシーズラクテイス (Lactobacillus delbrueckii subsp. Lactis)に属する菌株であると考えられる。ここで、乳酸菌継代用 液体培地（グルコース 5.0g、ラタトース 5.0g、トリプトン 10.0g、酵母エキス 5.0g、ツイン -80 1.0g、 L-システィン塩酸塩 9.1gに蒸留水をカ卩えて全量 1000mlとし、 pH6.8— 7.0に 調整後、 121°C、 15分間高圧滅菌）を用いて培養したラクトバチルス 'デルブリツキ一（ Lactobacillus delbrueckii) ANTl MUFFA (FERM P-19705)の菌学的性質は以下の通 りである。なお、糖資化性については、糖類発酵性試験用基礎培地（トリプトン 10.0g、 酵母エキス 5.0g、ブロムタレゾールパープル 0.06gに蒸留水をカ卩えて全量 1000mlとし 、 pH6.8に調整後、 121°C、 15分間高圧滅菌）を用いて培養した。
[0024] 細胞の形態:桿菌、胞子形成:無、運動性:無、グラム染色： +、酸素に対する態度 ：通性嫌気性、 15°Cでの生育:一、 45°Cでの生育： +、乳酸発酵:ホモ型、グルコース 力ものガスの生成：一、アルギニンからのアンモニアの生成：—、馬尿酸ナトリウムの加 水分解性: -、 4%塩化ナトリウム耐性: -、糖資化性:ァラビノース-、キシロース-、ラム ノース一、リボース一、グルコース +、マンノース +、フルクトース+、ガラクトース+、ス クロース +、マノレトース+、セロビオース +、ラタトース+、トレハロース+、メリビオー スー、ラフイノースー、メレチトースー、マンニトール一、ソルビトールー、エスクリン +、サリ シン +、アミグダリン一、ダルコン酸ナトリウム一、生成乳酸: D乳酸、生成乳酸の立体 異性（HPLC, 24Hrs) : D(-)(90.7%), L(- )(9.3%)、 DNAの GC含有量（HPLC) :48.7% [0025] 本菌は、乳酸菌の培養に一般的な、 MRS培地、 TYLG培地、ミルク培地などを用い て培養できる。培養温度は、 20— 50°C、好ましく 30— 40°C、培養 pHは pH3.5— 9.0、 好ましくは 4.5— 7.0、培養時間は 6— 30時間が好ましい。本菌は、抗カビ活性を有し、 特にべ-シリウム属のカビ類に対する抗カビ活性を有し、動物用飼料に繁殖し易 、 ぺ-シリウム 'オルソニー（Penidllium olsonii)の阻止作用を有する。また、カビ毒マイ コトキシン産生能を有するぺ-シリウム'タリソゲナム（Penicillium chrysogenum)及び ぺ-シリウム.ロックフォルティ（Penidllium roquefortii)の阻止作用を有する。更に、本 菌株は、ケフィァに存在する代表的な酵母であるクリュイべ口ミセス ·マルキシアヌス · ノ フエアイ'フクアイス (Kluyveromyces marxianus var. lactis 5Y307)に对して 、その 生育を強く抑制する。
[0026] 本菌は、家禽用飼料や牛や豚などの家畜用飼料、犬や猫などのペット用飼料、ゥ ナギなど魚類の養殖用飼料などに添加して用い、抗カビ活性により飼料の力ビを防 除できる。また、本菌は家禽や家畜、ペットに与える飲料水などの飲料に添加しても 良い。
[0027] 本菌は、これを有効成分とする乳酸菌生菌剤として用いることができる。乳酸菌生 菌剤は、通常本菌のみで調製しても良いが、とうもろこし、ふすま、米ぬかなど本菌の 栄養源となる物質を混合しても良い。また、乳酸菌生菌剤は、本菌の生育を阻害しな い他の微生物や他の有用物質を併用しても良い。乳酸菌生菌剤は、動物用飼料や 動物用飲料に加えて用いることができる。
[0028] 本菌は、安全性があり発酵食品のスターターとして用いることができる。また、抗カビ 活性を有することにより、食品に添加して病原菌や腐敗菌を防除し、食品の保存に 用いることちでさる。
[0029] また、本菌は有用なプロバイオテイクスとして用いることができる。プロバイティタスと は、宿主の腸内フローラを改善して宿主に有益な効果をもたらす経口摂取可能な微 生物をいう。宿主にもたらす有益な効果は、動物が摂取することにより得られる、動物 の成長の促進、飼料要求率の改善、腸疾患の予防'改善、排泄物の消臭、生存率の 改善、採卵鶏の産卵率の向上、乳牛の乳質の向上など様々なものをいい、動物飼育 の向上と同義である。本菌は、これを有効成分とする動物用飼料添加剤が添加され た動物用飼料を動物に摂取させ、プロバイオテイクス活性により動物飼育の向上を図 ることがでさる。
実施例 1
[0030] 次いで、本発明を実施例を挙げて詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に 限定されるものではない。
[0031] 〔製造例〕
[0032] MRS液体培地に本菌を接種し、 30— 40°Cで 24時間 1次培養した。培養液を滅菌さ れたふすまに噴霧し、 30— 40°Cで 3日間 2次培養して乳酸菌生菌剤を得た。得られ た乳酸菌生菌剤に含まれる本菌の菌数は 5.3 X 109/gであった。
[0033] 〔抗カビ活性の検討例 1〕
[0034] 脱脂乳寒天平板 (滅菌 10%スキムミルク 10ml、 BCP(100mg/l)溶解 2%寒天 5ml、
TYLG培養液 (本菌を 10 il含む) 150 μ 1)上に表 1の被検菌種のカビ胞子を塗抹後、 TYLG培養液 (本菌を 106/ml含む)を 50 μ 1カ卩えた 0.15%軟寒天 5mlを重層し、 30°Cで 2 日間培養した。培養後、カビ胞子を塗抹しない対照と比較し、カビの増殖阻止作用 について判定した。結果は、表 1に示すように、ぺ-シリウム属のカビに対して強い阻 止作用を示した。
[表 1]
Figure imgf000009_0001
[0035] 〔抗カビ活性の検討例 2 (実施例 1)〕
[0036] 本菌を家畜用飼料に添加し、家畜用飼料のカビの繁殖を防除できるかについて試 験を行った。家畜用飼料 (穀類（とうもろこし、ライ麦) 60wt%、植物性油かす類 26wt%、 そうこう類 2wt%、その他 (菓子屑、糖蜜など） 12wt%) 20gに上記の製造例で得た乳酸 菌生菌剤を lg (5.3 X 109個）を添カ卩し、これに蒸留水 20mlをカ卩えたものをカップに入 れて常温で 377日間放置した (実施例 1)。同様の家畜用飼料 20gに蒸留水 20mlのみ をカロえたものを同様に放置した (比較例 1)。結果は、図 2及び図 3に示すように、比 較例 1においては、家畜用飼料の汚染カビのべ-シリウム 'オルソニー（Penicillium olsonii)が繁殖し、青緑色に変色していた。一方、実施例 1ではぺニシリウム.オルソ ニー（Penicillium olsonii)の繁殖を阻止していた。なお、図 2の比較例 1は、放置から 31日後のものであり、図 3の実施例 1は放置から 377日後のものである。
[0037] 〔抗カビ活性の検討例 3〕
milk agar plate法によりスクリーニングした本菌株の抗カビ活性について検討した。 指標菌としては Penicillium roqueforti PR-1株を使用した（以下、 PR-1株ということが ある）。まず、 10% skim milk 10ml, BCP (100mg/l)を含む 2%寒天溶液 5ml、本菌株培 養液 150 1を混合し、寒天が固まった後、 10倍希釈した PR1株のカビ胞子を塗抹し た。カビ胞子の調製については、 25°Cで 7日間培養した Potate Dextrose Agar斜面培 地に、 Tween80 (0.1%)を含む生理食塩水を加えて攪拌し、ガラスウールによる濾過で 調製した胞子を供試した。
[0038] 続いて、本菌株培養液 50 μ 1を加えた soft agar (0.15%)を 5ml重層し、 30°Cで 2— 5日 間培養した。その結果、カビ (PR-1株）を単独培養した培地 (コントロールプレート）に 比較して、抗カビ活性を有する本菌株を含んだ培地 (テストプレート)では、明らかに カビ（PR-1株）の生育が抑制されていることが確認された。このように、コントロールプ レートとテストプレートとにおけるカビ (PR-1株）の生育度を比較し、本菌株の抗カビ 活性を測定した。
[0039] 次に、カビ 10株に対する本菌株の抗カビ活性スペクトルを測定した。本測定は、 milk agar plate (ミルク寒天培地）を 30°Cで 5日間培養した後に行った。その結果、本 菌株は、飼料に悪影響を与える青カビであるぺ-シリウム属 3菌種、即ち、ぺ-シリウ ム'クリソゲナム (Penicillium chrysogenum (JCM2056))、ぺ-シリウム 'オルソニー (Penicillium olsonii (wild
Figure imgf000010_0001
'ロックフォノレティ (Penicillium roqueforti (PR-1)について抗カビ活性が確認された。このうち、ぺ-シリウム'タリソゲ ナム (Penicillium chrysogenum (JCM2056》については、生育が完全に抑制されること が確認された。
[0040] 〔抗カビ活性の検討例 4〕
本菌株の 10% skim milk中における抗カビ活性 (検討例 4)と pHとの経時変化につい て、 colony plate count methodにより検討した。図 4中の線グラフ（3線）は skim milkの pHを示し、三角点を有する第 1の線は、本菌株のみを接種した skim milkの pHの経時 変化を、菱形点を有する第 2の線（最も上側の線）は、 Penicillium roqueforti PR-1株 のみを接種した skim milkの pHの経時変化を、丸点を有する第 3の線 (第 1の線とほぼ 重なる線）は、 Penicillium roqueforti PR_1株及び本菌株の両者を接種した skim milk の pHの経時変化をそれぞれ示す。図 4の線グラフに示すように、本菌株のみを接種 した skim milkと、 Penicillium roqueforti PR-1株及び本菌株の両者を接種した skim milkでは pHが低下していく力 PR-1株のみを接種した skim milkでは pH低下は見ら れなかった。
[0041] 図 4中の棒グラフ（3本）は、本菌株及び PR-1株の菌数を示し、左側の棒グラフは、 単独培養した本菌株の菌数を、中央のグラフは、単独培養した PR-1株の菌数を、右 側の棒グラフは、本菌株を添加したときの PR-1株の菌数をそれぞれ示す。図 4の棒 グラフに示すように、本菌株を添カ卩したときの PR-1株は、その増殖が抑制され、 36時 間後には、 PR-1株の残存菌数は検出されな力つた (菌数ゼロ）。このことから、本菌株 は、例えば、ヨーグルト等の乳製品 (発酵食品）にも好適に使用できることがわ力る。
[0042] 〔抗カビ活性の検討例 5〕
本菌株を添加した産卵鶏飼料と、本菌株を添加しない産卵鶏飼料とを、それぞれ 1 年間放置し、カビの発生状況を確認した。図 5中、左側の写真像は、産卵鶏飼料に 本菌株を添加しな力つた場合のカビの発生状況を示し、右側の写真像は、産卵鶏飼 料に本菌株を添加した場合のカビの発生状況を示す。図 5に示すように、本菌株が 無添加の産卵鶏飼料は、カビが生えて完全に腐敗している力 本菌株を添加した産 卵鶏飼料は、カビの発生が認められず、腐敗していない。また、図 6に示すように、本 菌株を添加せず腐敗した産卵鶏飼料から、汚染青カビを分離して確認すると、分生 子柄や 4つの小柄のように縦に並んだ分生子が見られる。よって、その形態、選択培 地での生育、分類学的性状の結果から、このカビはべ-シリウム 'オルソニー（ Penicillium olsonii)であると同定された。このことからも、本菌株は、ぺ-シリウム'オル ソニー（Penicillium olsonii)に対して強い生育抑制効果があることが確認された。
[0043] 〔抗カビ活性の検討例 6〕
検討例 3と同様にして、 Penicillium roqueforti PR_1株に対する本菌株の抗カビ活性 について検討した。テストプレート (本菌株して PR-1株を培養した培地）と、コントロー ルプレー HPR-1株を単独培養した培地）とで、 PR-1株の生育状況を確認した。培養 は、 30°Cで 5日間行った。その結果、図 7の上側の写真像 (A)に示すように、本菌株 を含有しない培地では、 PR-1株の生育が多数確認された。一方、図 7の下側の写真 像 (B)に示すように、本菌株を含有する培地では、本菌株のみ確認することができ、 PR-1株の生育は確認できな力つた。即ち、本菌株は PR-1株の生育を抑制することが 確認された。
[0044] 〔家禽、家畜の排泄物の消臭作用につ 、ての検討〕
豚舎内、鶏舎内及び牛舎内のアンモニア濃度をそれぞれ測定して、本菌の消臭作 用を以下のように検討した。
[0045] 〔豚用飼料にっ 、ての実施例（実施例 2)〕
比較例 2として、豚用飼料 (穀類 (とうもろこし、ライ麦) 60wt%、植物性油かす類 26wt%、そうこう類 2wt%、その他（菓子屑、糖蜜、リン酸カルシウムなど） 12wt%)に納豆 菌を 0.2wt%添加したものを用意した。そして、この比較例 2の豚用飼料を、離乳後子 豚飼育舎、育成舎、母豚舎の各々で飼育されている総計 2000頭の各豚に一定期間 摂取させ、同期間経過後における豚舎内のアンモニア濃度を測定した。アンモニア 濃度は、豚舎内の高さ 1.5mの位置にアンモニア検知管 (株式会社ガステック製、 3DL )を設置して測定した。
[0046] 一方、実施例 2として、前記の豚用飼料に上記の製造例で得た乳酸菌生菌剤を 1 頭当たり 1日 4g(2.12 X 101Q)摂取できるように添加したものを用意した。そして、この実 施例 2の豚用飼料を、比較例 2の豚用飼料による飼育期間経過後、上記 2000頭の各 豚に摂取させ、比較例 2の豚用飼料による飼育期間経過後から 20日後と 40日後のァ ンモニァ濃度をそれぞれ比較例 2と同様に測定した。即ち、実施例 2の試験は、比較 例 2の試験の終了後行った。結果は、表 2に示すように、実施例 2が比較例 2に比べ 顕著な消臭作用を示し、特に 40日後は、ほとんどアンモニア臭を発生していなかつ た。
[表 2]
Figure imgf000012_0001
[0047] 〔採卵鶏用飼料にっ 、ての実施例（実施例 3)〕
比較例 3として、採卵鶏用飼料（とうもろこし 59wt%、植物性油かす類 23wt%、そうこう 類 3wt%、動物性飼料 (魚粉) 1%、その他 (炭酸カルシウム、動物性油脂、コーンスチー プリカ一など） 14wt%)に市販の乳酸菌資材 (組成は乳酸菌、酵母菌、糸状菌等。 A社 製)を 2.0wt%添加したものを用意した。そして、比較例 3の採卵鶏用飼料を、 12000羽 の採卵鶏 (ィサブラウン)に一定期間摂取させ、鶏舎内のアンモニア濃度を測定した。
[0048] 一方、実施例 3として、前記と同様の採卵鶏用飼料に上記の製造例で得た乳酸菌 生菌剤を 1.0wt%添加したものを用意した。そして、この実施例 3の採卵鶏用飼料を、 比較例 3の採卵鶏用飼料による飼育期間経過後、上記 12000羽の採卵鶏 (ィサブラウ ン)に一定期間摂取させ、鶏舎内のアンモニア濃度を測定した。結果は、表 3に示し た。
[0049] また、実施例 3と同様の採卵鶏用飼料を、比較例 3の採卵鶏用飼料による飼育期間 経過後、上記 12000羽の採卵鶏 (ィサブラウン)に一定期間摂取させ、試験開始後、即 ち、乳酸菌生菌剤の添加後 5日目、 18日目、 25日目、 37日目の鶏舎内のアンモ- ァ濃度を測定した。結果は、表 4に示した。なお、比較例 3及び実施例 3において、ァ ンモニァ濃度の測定は、上記実施例 2の場合と同様の測定方法及び測定装置で行 つた。また、実施例 3の試験は、比較例 3の試験を 15ヶ月に亘り行い、その後 3ヶ月間 無添加の採卵鶏用飼料を採卵鶏に摂取させた後、 15ヶ月間に亘り行ったものである 。更に、比較例 3及び実施例 3の各試験においては、比較条件を整えるため飼育条 件を同一にした。例えば、鶏舎羽数 (1羽あたりの面積)、鶏舎の環境 (設備等)は同 一にする一方、飼育期間に関しては、上記のように前期、後期という形で時間差をお いた。表 3は、比較例 3と実施例 3の各 15ヶ月の試験期間の間に定期的に測定した 結果の平均値を示す。結果は、表 3に示すように、家禽においても本菌の消臭作用 が優れていた。また、表 4に示すように、経時的に消臭作用が高くなつていた。更に、 実施例 3の採卵鶏用飼料で飼育した場合は、比較例 3の採卵鶏用飼料で飼育した 場合に比べ、生存率（87.39%対 52.07%で 35.32%向上）、産卵個数（3,698,683個対 3,389,253個で 309,430個増カロ）の!、ずれにお 、ても、より良 、値が得られた。
[表 3] アンモニア濃度 (ppm)
比較例 3 実施例 3
鶏舎内 1 9 . 8 3 . 0
[表 4]
Figure imgf000014_0001
[0050] 〔乳牛用飼料にっ 、ての実施例（実施例 4)〕
比較例 4として、乳牛用飼料（とうもろこし 5kg、大麦 3kg、ビート 1.5— 2.0kg、綿実 2kg 、脱脂大豆 1.2— 1.3kg、大豆 0.8kg— lkg、乾燥草 8— 10kg、水 150— 2001)に市販の 乳酸菌資材 (組成は乳酸菌、酵母菌、麹菌等。 B社製)を、乳牛 1頭当たり 1日 200gを 摂取できるように添加したものを用意した。そして、比較例 4の乳牛用飼料を乳牛 (ホ ルスタイン) 130頭に一定期間摂取させ、牛舎内のアンモニア濃度を測定した。
[0051] 一方、実施例 4として、前記と同様の乳牛用飼料に上記の製造例で得た乳酸菌生 菌剤を乳牛 1頭当たり 1日 40g摂取できるように添加したものを用意した。そして、実施 例 4の乳牛用飼料を、上記 130頭の各乳牛に一定期間摂取させ、牛舎内のアンモニ ァ濃度を測定した。実施例 4の試験は、比較例 4の試験の終了後、一定期間無添加 の乳牛用飼料を上記 130頭の各乳牛に摂取させ、その後行ったものである。アンモニ ァ濃度の測定は、上記実施例 2の場合と同様の測定方法及び測定装置で行った。 結果は、表 5に示すように、乳牛においても本菌の消臭作用が優れていた。
[表 5]
Figure imgf000014_0002
[0052] 〔採卵鶏の生存率、産卵率の検討〕 [0053] 上記実施例 3の消臭作用の検討で行った各 15ヶ月間に亘る試験において、消臭 作用の試験と共に生存率と産卵率についても検討した。なお、比較例 3は、上記のよ うに、家禽用飼料に市販の乳酸菌資材を添加したものを家禽に摂取させたものであ り、実施例 3は、上記のように、家禽用飼料に乳酸菌生菌剤を添加したものを家禽に 摂取させたものである。結果は、表 6に示すように、本菌を摂取した採卵鶏の生存率 は極めて高かった。また、表 7に示すように、本菌を摂取した採卵鶏は、産卵率にも 優れていた。
[表 6]
Figure imgf000015_0001
[表 7]
Figure imgf000015_0002
[0054] 〔乳質の向上作用の検討 (実施例 5)〕
上記実施例 4の消臭作用の検討における乳牛用飼料に市販の乳酸菌資材を添カロ したもの (比較例 4)と同様の乳牛用飼料 (比較例 5)及び乳牛用飼料に製造例で得 た乳酸菌生菌剤を添加したもの (実施例 4)と同様の乳牛用資料 (実施例 5)を使用し てそれぞれ乳牛を飼育し、 10日間隔で 17回に亘り搾乳し、牛乳の乳脂肪率、乳蛋 白質率及び無脂乳固形分率について検討した。比較例 5では、乳牛 (ホルスタイン )130頭に乳牛用飼料に市販の乳酸菌資材を添加したものを摂取させた。また、実施 例 5の試験は、比較例 5の試験の終了後、一定期間無添加の乳牛用飼料を乳牛に 摂取させ、その後、その乳牛 (ホルスタイン) 130頭に、乳牛用飼料に製造例で得た乳 酸菌生菌剤を添加したもの（実施例 5の飼料)を摂取させて行った。乳牛から搾られ た各牛乳の乳脂肪率、乳蛋白質率及び無脂乳固形分率は、乳成分分析装置 (ミル コスキャン FT120、富士平株式会社製)を用いて測定した。表 8は、試験を行った 17 回の測定値の平均を示す。結果は、表 8に示すように、本菌を摂取した乳牛から生産 される牛乳の乳脂肪率、乳蛋白質率及び無脂乳固形分率は、いずれも比較例 5の 場合に比べ高ぐ乳質が向上していた。
[表 8]
Figure imgf000016_0001
以上の結果より、本菌は家禽や家畜の腸内への定着性が高ぐ消化吸収を向上さ せ、本菌単独で用いても優れたプロバイオテイクス活性を有するものと思われる。よつ て、本発明は、プロバイオテイクス (生菌剤）として具体ィ匕でき、上記のような効果を発 揮する。また、本発明は、上記のように、動物用飼料添加剤のみならず、本菌株を添 加してなる動物用飼料や、本菌株を添加してなる動物用飲料に具体ィ匕することもでき 、この場合も、上記と同様の効果を発揮する。更に、本菌株は、上記のように、家畜や 家禽等の動物飼育の向上に効果を発揮するが、食品に添加することにより、食品保 存乃至食品微生物制御 (バイオプリザべーシヨン)の用途に使用することもでき、この 場合も、上記のような性状乃至特徴により、従来にない特有の効果を発揮する。更に 、本菌株は、上記抗カビ活性の検討例 4でも述べたように、発酵食品に添加して発酵 食品の製造に使用することもでき、上記のような性状乃至特徴により、従来にない特 有の効果を発揮する。加えて、本菌株を添加した動物用飼料等は、動物への給餌時 等に、厩舎等の地面、床面、排水溝等に意図的に散布したり、意図せずに散布され たりして、その散布場所で微生物制御を行い、上記のような性状乃至特徴により、そ の散布場所を清浄ィ匕したり無臭化したりして、従来にない特有の効果を発揮すること もできる。或いは、本菌株を添加した動物用飼料等は、動物への給餌時等に、動物 の飲料容器の水中等に直接散布したり、本菌株を添加した飼料等をネット状物等の 透水性を有する収容体に収容して、水中に沈積したりすることで、その水中で微生物 制御を行い、上記のような性状乃至特徴により、その水中を清浄ィ匕したり消毒したりし て、従来にない特有の効果を発揮することもできる。

Claims

請求の範囲
[I] 抗カビ活性を有するラクトバチルス ·デルブリツキ一（Lactobacillus delbrueckii)。
[2] ラクトバチルス ·デルプリッキー（Lactobacillus delbrueckii) ANTI MUFFA(FERM
P- 19705)である請求項 1に記載のラクトバチルス ·デルブリツキ一（Lactobacillus delbrueckii)。
[3] ぺ-シリウム属のカビ類に対する抗カビ活性を有する請求項 1又は請求項 2に記載 のラクトバチルス ·デノレブリッキー (Lactobacillus delbrueckii)。
[4] 請求項 1一請求項 3のいずれかに記載のラクトバチルス'デルプリッキー（
Lactobacillus delbrueckii)が添カ卩されてなる動物用飼料。
[5] 請求項 1一請求項 3のいずれかに記載のラクトバチルス'デルプリッキー（
Lactobacillus delbrueckii)が添カ卩されてなる動物用飲料。
[6] 請求項 1一請求項 3のいずれかに記載のラクトバチルス'デルプリッキー（
Lactobacillus delbrueckii)を有効成分とする乳酸菌生菌剤。
[7] 請求項 1一請求項 3のいずれかに記載のラクトバチルス'デルプリッキー（
Lactobacillus delbrueckii)を有効成分とする動物用飼料添加剤。
[8] 請求項 1一請求項 3のいずれかに記載のラクトバチルス'デルプリッキー（
Lactobacillus delbrueckii)を用いる動物飼育の向上方法。
[9] 動物飼育の向上が動物の排泄物の消臭の向上である請求項 8に記載の動物飼育 の向上方法。
[10] 動物飼育の向上が動物の生存率の向上である請求項 8に記載の動物飼育の向上 方法。
[I I] 動物飼育の向上が採卵鶏の産卵率の向上である請求項 8に記載の動物飼育の向 上方法。
[12] 動物飼育の向上が乳牛の乳質の向上である請求項 8に記載の動物飼育の向上方 法。
[13] 請求項 1一請求項 3のいずれかに記載のラクトバチルス 'デルブリツキ一（
Lactobacillus delbrueckii)を用いて製造した発酵食品。
[14] 請求項 1一請求項 3のいずれかに記載のラクトバチルス.デルプリッキー（ Lactobacillus delbrueckii)を用いる発酵食品の製造方法。
[15] 請求項 1一請求項 3のいずれかに記載のラクトバチルス 'デルブリツキ一（
Lactobacillus delbrueckii)を用いる食品保存方法。
[16] 請求項 1一請求項 3のいずれかに記載のラクトバチルス 'デルブリツキ一（
Lactobacillus delbrueckii)を厩舎の床面または地面に散布することを特徴とする厩舎 の浄化方法。
[17] 請求項 1一請求項 3のいずれかに記載のラクトバチルス 'デルブリツキ一（
Lactobacillus delbrueckii)を直接水中に散布、または、透水性を有する収容体に収 容して水中に沈積することを特徴とする水中の浄化方法。
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