JP2019064997A - 健康増進組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
DNA抽出:アクロモペプチダーゼ(Wako Pure Chemical Indutrises,Japan)
PCR増幅:PrimeSTAR HS DNA Polymerase(Takara Bio,Japan)
サイクルシーエンス:BigDye Terminater v3.1 Cycle Sequencing Kit(Applied Biosystems,USA)
塩基配列決定:ChromasPro 1.7(Technelysium,AUS)
ソフトウェア:テクノスルガ・ラボ微生物同定システム(TechnoSuruga Laboratory,Japan)
データベース:DB-BA11.0(TechnoSuruga Laboratory)
国際塩基配列データベース(DDBJ/ENA(EMBL)/GenBank)
同定判断:16S rDNA部分塩基配列に基づく解析
〔M−4菌株〕
〇同定種:Bacillus amyloliquefaciens、バイオセーフティレベル1。
〇BLAST検索による最も高い相同性の種(基準株):Bacillus amyloliquefaciens subsp.amyloliquefaciens NBRC 15535T株・・・相同率99.8%。
〔M−5菌株〕
〇同定種:Bacillus subtilisに近縁なBacillus sp.、バイオセーフティレベル1
〇BLAST検索による最も高い相同性の種(基準株):Bacillus subtilis subsp.subtilis DSM 10T株・・・相同率99.6%
〔M−6菌株〕
〇同定種:Bacillus subtilisに近縁なBacillus sp.、バイオセーフティレベル1
〇BLAST検索による最も高い相同性の種(基準株):Bacillus subtilis subsp.subtilis DSM 10T株・・・相同率99.6%
〇セルロース分解性細菌・・・バチルス・アミロリクエフアシエンスM−4菌株(受託番号:NITE P−02538)、バチルス・ズブチルスM−5菌株(受託番号:NITE P−02539)、バチルス・スピーシーズ(受託番号:NITE P−02540)の3種
〇乳酸菌・・・ラクトバチルス・カゼイNBRC15883菌株
〇ビフィズス菌・・・ビフィドバクテリウム・ビフィダムNBRC100015菌株
〇麹菌・・・アスペルギルス・オリゼーNBRC6215菌株
得られたMAX組成物について、一般財団法人 日本食品分析センターに依頼し、食品の衛生検査指針に沿って有害菌である大腸菌、黄色ブドウ球菌、サルモネラ、腸炎ビブリオ、セレクス菌、ウェルシュ菌の各分析試験(分析試験成績書 第15107227001-0201号
2015年10月26日)を行ったところ、次の表1に示すように全て陰性の結果が得られ、食品としての安全性が確認された。
ホリスティック統合医療研究所の協力により、男性24名及び女性39名の計63名(11歳〜86歳)をモニターとして、MAX組成物を継続的に毎日1回約1gずつ経口摂取してもらい、1カ月後及び3カ月後に身体症状の変化についてアンケート調査したところ、次の結果が得られた。
摂取者の72%が何らかの身体症状の変化を感じており、表2に示すように、特に排便状態の改善が顕著である他、便尿の臭いが減った、疲れにくくなった、元気になった、胃痛が解消した、食欲が出てきた、痩せた等の多くの体調改善の回答が各々複数人にあった。
表3に示すように、1カ月後と同様の回答に加え、風邪にかかりにくくなった、アトピー性皮膚炎が改善した、生理不順が治った、更年期の障害が出ない、二日酔いがなくなった、喘息が治った等の更なる体調改善の回答が各々複数人にあった。
大阪成蹊女子大学の協力により、18歳〜24歳の女性20人をモニターとして、MAX組成物を冬季(2月)に毎日1回約1gずつ七日間経口摂取してもらい、便通効果、皮膚効果(化粧のり、むくみ等)、手足の保温効果についてアンケート調査したところ、次の結果が得られた。
便通効果・・・有効15名、やや有効4名
皮膚効果・・・有効6名、やや有効9名
手足の保温効果・・・有効11名、やや有効6名
マウスを対象として、MAX組成物の摂取による体重増の抑制効果を調べた。その方法は、ヒト成人女性30〜39歳の平均体重53.7kg(平成25年厚労省保険局国民健康・衛生調査)が本健康増進組成物を一日1.3gずつ摂取するのを、マウス12週齢メス(平均体重21.7g)の体重割合の摂取量に換算し、一匹あたり粉末状のマウス高脂肪食(日本クレア社製の商品名HFD32)の一日平均食餌量2.2gにMAX組成物0.253mgを加える形で8週間投与したマウス群と、マウス高脂肪食のみを8週間投与したマウス群について、体重増加量推移、摂餌量推移、明期・暗期運動量、24時間周期運動量を調べるものである。
pH3に調整したブルセラ培地10mlを収容した試験管を用意し、その中にMAX組成物0.3mgを秤量して添加し、37℃で120時間の振盪培養を行ったのち、遠心分離により上清を採取して検体液(以下、MAX培養液という)とした。次に、ピロリ菌培養液を添加して各々pH3に調整したブルセラ培地10mlを収容した試験管10本をサンプルとして用い、MAX培養液1mlを添加した5本の試験管と、不添加の5本の試験管とについて、37℃の条件下で、各経過時間後にピロリ菌数(104CFU/ml)を調べた。その結果を表4に示す。表中の各数値はサンプル5本の平均値であり、±は該平均値に対する測定値のばらつき最大値を示す。
株式会社バイオリサーチセンターにおいて、マウスを用いるピロリ菌感染実験を行い、MAX組成物投与群と非投与群について、一定期間飼育後の胃壁に存在するピロリ菌数を調べた。その結果を図9に示す。なお、試験方法は以下のとおりである。
(1)ピロリ菌液の調製・・・冷凍保存したHelicobacter SS-1 株(岡山大学大学院
保健学研究科検査専攻 横田憲治准教授より分与)を解凍し、綿棒でコロンビアヘリコバクター寒天培地に塗抹し、37℃の恒温器内で7日間微好気培養したのち、コロニーを綿棒で釣菌し、生理食塩液5mLに浮遊させ、目視によりMcFarland 1〜2(3〜6×108CFU/mL) の濁度になるように調製した。
(2)マウス・・・日本エルエスシー株式会社より2018年2月21日に入手した8週齢の雌20匹(系統:C57BL/6JJms Slc、入手日の体重:10.0〜25.0g)を対象とし、5週間の予備飼育期間中、ピロリ菌液の接種を週に1回、体重測定を6回、一般状態の観察を一日一回行い、最終菌液接種日にELISA キットを使用して抗体価を測定し、抗体価が感染成立の0.2以上で体重推移及び一般状態に異常が認められなかったマウスを用い、無作為抽出法によって各群の抗体価がほぼ等しくなるようにMAX組成物投与群(8匹)と非投与群(8匹)とに群分けした。
(3)飼育管理・・・温度18〜28℃、湿度30〜80%、明暗各12時間に維持された飼育室において、固形飼料(オリエンタル酵母工業株式会社製:CRF-1)及び水道水を自由に摂取させる。週に1回のピロリ菌液の接種は、1個体あたり1mLの割合で経口投与した。また、MAX組成物投与群については、予備飼育期間終了後の4週間の間、毎日1回ずつMAX組成物を1個体あたり200μL(MAX組成物として20mg)の割合で経口投与した。
(4)胃内のピロリ菌測定・・・最終投与日の夕刻から絶食させ、翌日にイソフルランの過麻酔で安楽死させて胃を摘出し、剥離した胃の粘膜を生理食塩液1.5mL中に浮遊させ、100μLをコロンビアヘリコバクター寒天培地に塗抹し、37℃の恒温器内で7日間微好気培養したのち、培養後のコロニー数をハンディコロニーカウンターで計測し、生菌数を算出した。
帯広畜産大学環境保全科及び日本大学農芸科学科栄養生理学研究所の協力により、牛の飼料に対する本健康増進組成物の非投与と投与との場合について、排出された牛糞中の善玉菌及び悪玉菌の割合を調べたところ、非投与では図8(a)、投与では図8(b)で示す結果が得られた。なお、図中の記号は次の菌種を表している。
LBS:Latobacollus(有機物の好気性分解に役立つ乳酸桿菌)
VN :Veillonella(グラム染色陰性の嫌気性球菌)
ST :Streplococoua(グラム染色陰性の嫌気菌の連鎖状球菌)
EG :Enterobacleriaceal(グラム染色陰性の嫌気菌の腸内菌科・・・大腸菌のEsherichia Coli,腐敗菌のOroteus Vulgaris,霊菌のSerratia Marcescents)
NN :Nannocystis(他の細菌を溶かして栄養吸収することが多い粘液細菌目の中の球状菌)
MAX組成物の服用1〜3カ月後のアンケート調査で、大半の人が、排便状態の改善、風邪にかかりにくい、皮膚状態の改善などを自覚する。また、MAX組成物を3〜6カ月服用すると、腸管免疫系が改善され、唾液中の分泌型IgAが上昇する。従って、腸管内でもIgAが上昇していることが推察され、有害菌の感染に対する防御機構として働いている可能性があり、感染やアレルギーに対する抵抗力がつくと推察される。
<福井大学 医学部,鈴鹿医療科学大学>
高脂肪食を与える肥満動物モデルを用い、MAX組成物の投与による体重増加抑制効果を確認した。また、人では、MAX組成物の服用で食欲が出るが、普通以上に食べないことで体重がやや減少することが判った。
<酪農学園大学 畜産飼料科学研究室>
家畜(肉用豚)に対するMAX組成物の投与により、コレステロール値、中性脂肪値、血中グルコースの低下する傾向が見られ、肥育過程における代謝性疾患の予防に繋がると考えられる。
<帯広畜産大学>
豚を用いる実験で、悪臭が軽減した。
<競走馬理化学研究所>
糞中の微生物を調べると、MAX組成物の投与群では病原性微生物(悪玉菌)が減少して善玉菌の比率が増えた。
<蘇州大学動物実験センター>
ネズミとウサギを用いる実験で、MAX組成物を投与すると、飼育室における室内アンモニア濃度がユウイに低下した。
<中国江蘇省研究所>
豚による投与実験で、MAX組成物の成長促進効果が顕著に認められた。また、下痢の発生率が著しく低下した。
<中国江蘇省畜牧獣医所>
鶏を用いる6カ月の実験で、飼育環境が改善し、悪臭が生じなかった。
<塩城市畜牧獣医所>
子豚を対象としてMAX組成物の投与組と非投与組を比較したところ、投与組では食欲増加及び消化機能の改善があることに加え、下痢率は投与組が非投与組より90.4%低下し、養豚リスクを減少させることが判った。また、投与組では、投与10日後から体表に著しい変化が起こり、皮膚がつるつるになり、毛も艶々しくなって健康な様子が見られた。
身体の感染防御システムでは、パイエル板のM細胞より管腔の抗原が取り込まれると、パイエル板内の樹状細胞を始めとする抗原提示細胞によりT細胞に提示されると同時に、パイエル板B細胞もその抗原を認識し、表面に膜型IgAを発現するsIgA+に分化する。そして、sIgA+B細胞はパイエル板を出て粘膜固有層へ移動し、IgA分泌細胞となる。分泌されたIgAは、上皮層を介して管腔側に排出され、腸管内で感染防御にあたる。そこで、MAX組成物が経口投与された場合、血中IgAが増加すると共に、パイエル板のNK細胞が活性化し、これらの細胞が脾臓、肺、鼻咽頭に移動することで、局所でインフルエンザ等の感染が防御される。
炎症や潰瘍等の器質的疾患がないにも関わらず、下痢や便秘、腹痛等が起こる過敏性大腸炎は、ストレス等により起こるが、MAX組成物を服用することにより著しく症状が改善することがモニターの報告から判る。これは、腸内フローラの改善の結果であると推察される。過敏性大腸炎についてもプロバイオテクスが効果を示すという報告がなされているので、MAX組成物でも改善効果が期待できる。
アトピー性皮膚炎や花粉症等のアレルギー疾患に対し、MAX組成物を服用すると、著しい改善効果が現れることが多々報告されている。その作用ついてアレルギー疾患の発症メカニズムから考察すると、a)IL-12依存的に未分化のT細胞をT1細胞へ分化誘導、b)活性化T2細胞のアポトーシスの増加によるT2細胞の減少、c)制御性T細胞の誘導及び活性化、によってT1−T2バランスが改善されるものと推察される。
MAX組成物によるNK活性の増強が報告されている。
既述のようにMAX組成物の服用後に唾液中の分泌型IgAが上昇することが認められており、このことからMAX組成物が腸内免疫機構を活性化し、腸内はもちろん、体内各所のIgAの生産が高められると推察される。従って、MAX組成物の服用により、腸管内の悪玉菌に対するIgA抗体ができ、悪玉菌の増殖が抑えられる結果、腸内フローラが改善して便秘や下痢を抑えると想定される。また、MAX組成物の服用により、生体各所の粘膜組織でIgAの生産量が増し、感染症に対する防御能が高まると考えられる。
Claims (6)
- セルロース分解性菌として、バチルス・アミロリケファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)M−4菌株(受託番号:NITE P−02538)と、バチルス・ズブチルス(Bacillus subtilis)M−5菌株(受託番号:NITE P−02539)と、バチルス・ズブチルスの近縁種であるバチルス・スピーシーズ(Bacillus sp.)M−6菌株(受託番号:NITE P−02940)との少なくとも3種のバチルス属菌を含む非病原性菌類による米糠粉末の発酵物からなる健康増進組成物。
- 前記非病原性菌類が、前記セルロース分解性菌と共に、乳酸菌及びビフィズス菌と麹菌より選ばれる少なくとも1種を含む請求項1に記載の健康増進組成物。
- 前記乳酸菌がラクトバチルス・カゼイ(Lactobacillus casei)NBRC15883菌株である請求項2に記載の健康増進組成物。
- 前記ビフィズス菌がビフィドバクテリウム・ビフィダム(Bifidobacterium bifidum)NBRC100015菌株である請求項2又は3に記載の健康増進組成物。
- 前記麹菌がアスペルギルス・オリゼー(Aspergillus oryzae)NBRC6215菌株である請求項2〜4のいずれかに記載の健康増進組成物。
- 前記非病原性菌類における総菌数の20%以上がバチルス属菌からなる請求項1〜5のいずれかに記載の健康増進組成物。
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