合成紫杉烷类物质的制备方法
(一) 技术领域:
本发明涉及合成紫杉烷类物质的制备方法。
(二) 背景技术 -.
从红豆杉属植物的树皮、 枝叶和根中, 除可提取分离得到抗 癌药物紫杉醇外, 还可得到三尖杉宁碱、 巴卡亭 111、 10-去乙酰 巴卡亭 III、 10-去乙酸紫杉醇、 10-去乙酰三尖杉宁碱、 7-木糖紫 杉醇、 7-木糖三尖杉宁碱、 7-木糖 -10-去乙酰紫杉醇和 7-木糖 -10- 去乙酰三尖杉宁碱等。 这些紫杉烷类物质有些具有一定的抗癌活 性, 有些没有抗癌活性, 但可利用它们通过半合成的方法制备具 有高抗癌活性的紫杉醇或其它紫杉烷类物质 (如多烯紫杉醇) 。 这方面的研究已有很多, 而且已形成成熟的方法。 大体有三个方 向: 一是对 7-木糖基紫杉烷类物质的转化, 二是用侧链与紫杉醇 母核反应半合成紫杉醇, 三是用不同侧链与紫杉醇母核反应开发 出新型的非天然的紫杉烷类物质。 Semilh等曾用酶法使 7-木糖基 断裂 J.Nat.Prod. , 1984,47,131 ) , 张宏杰在催化剂 LX-97615 下 用 HCL 水解 7-木糖紫杉醇 (公开号 CN1241565A ) , 用高碘酸 盐氧化裂解 7-木糖基的方法被普遍采用 ( US5200534A, US5367086A , US5856532A ) 。 侧链与紫杉醇母核的反应更是有 大量的专利和论文。 在这些研究工作之中, 都不可避免地要解决 10-OH 的酰化与 2,, 7-OH 的保护的矛盾。 现在普遍采用的是先 用保护剂多甲基硅烷、 多乙基硅烷、 多曱 (乙) 基氯硅烷、 氯乙 酸盐 (酐) 等保护 2,, 7-OH , 然后用酰化剂如乙酸酐或氯乙酰 对 10-OH进行酰化, 最后用脱保护剂硫脲等将 2,, 7-OH的保护 基脱去。 US5200534A 用氯乙酸 (盐) 作保护剂, 醋酸酐作酰化 剂, 硫脲作脱保护剂, 是解决跣化与保护矛盾的典型方法。 在上 述的方法中, 保护的效果不十分令人满意, 大约会产生 11 %的 2,, 7, 10-三乙跣紫杉烷, 这将降低 10-OH酰化的产物收率, 最终会 降低 10-乙酰紫杉烷的收率。 虽然 2,, 7 位的酯基又可通过弱碱 进行水解得到 2,, 7-OH 的产物, 但要做到将 7 位的酯完全水解
而不影响 10 位的酯是很难的。 此外, 在酰化反应时, 以往的方 法釆用的惰性溶剂有氯代烃、 乙醚类、 分子硅类、 分子脂肪酮、 叔胺化合物等, 其中用得最多、 效果最好的是吡啶, 但吡啶的臭 味实在难闻, ΐ χΐο-6 以下时即有强烈的恶臭, 空气中最高允许浓 度 5χ10Λ 对生产设备的密闭性和生产现场的通风性的要求极高。
全合成紫杉烷类物质已有很多研究成果问世, 只是目前尚未 正式用于工业生产。 全合成紫杉烷类物质的制备过程是由一些化 学中间体通过多个步骤反应而合成紫杉醇母核, 然后再在 C-13 位引入相关侧链。 由于 7-OH和 10-OH或 10-OAc的活性, 在上 述反应的过程中, 也少不了要对 7-OH进行保护, 对 10-OH进行 酰化。 以往在保护与酰化方面的作法, 与半合成紫杉坑类物质的 作法是一样的, 因而也存在半合成紫杉烷类物质制备过程中的同 样的问题。 所以解决保护与酰化的矛盾, 对于全合成紫杉烷类物 质来说也是必须要深入研究的课题。
(三) 发明内容:
本发明的目的在于提供经改进的合成紫杉烷类物质的方法。 本发明的目的是通过下述内容实现的。
本发明的第一方面在于提供一种在合成紫杉烷类物质的过程 中改进对 7-OH 保护的合成紫杉烷类物质的制备方法, 该方法可 使 7-OH的保护变得简单而可靠, 脱保护时无需特定的脱保护剂。
在本发明的合成紫杉烷类物质的方法中, 对 7-OH 的保护采 用稀土元素化合物。
上述方法中所用的稀土元素化合物包括稀土元素的盐、 复盐、 碱、 氯化稀土、 氯氧化稀土, 优选氯化稀土, 氢氧化稀土, 氯氧 化稀土, 稀土的硫酸盐复盐, 更优选氯化稀土与铈盐, 特别优选 三氯化铈。
本发明的另一方面在于提供一种在合成紫杉烷类物质的过程 中改进酰化反应的合成紫杉烷类物质的制备方法。 为了改进合成 紫杉烷制备方法中的酰化反应, 本发明用四氢呋喃作为酰化反应 介质。
在上述方法中用四氢呋喃作为酰化反应介质时, 优选对四氢
呋喃预先除水。
本发明的再一方面在于提供一种合成紫杉烷类物质的制备方 法, 该方法包括下述主要步骤: (1 ) 用保护剂对 7-OH进行保护; ( 2 )、 用酰化剂对紫杉烷类物质中的 OH 进行酰化 (3 ) 脱去 7- 位的保护剂而还原成 7-OH; 其中在该方法中用四氢呋喃作为酰 化反应的介质。
在上述任意一方面所述的合成紫杉烷类物质的制备方法中优 选所合成的紫杉烷类物质是紫杉醇。
本发明发现稀土元素化合物对紫杉醇母核中的 7-OH 有高度 选择性, 而对 2,-OH 和 10-OH 则几乎不反应。 因此, 采用稀土 元素化合物作保护剂, 只保护 7-OH , 反应比较简单, 而且结合 牢固可靠。 当其后进行酰化反应时, 只在 2,, 10-位成酯, 不会 在 7-位成酯, 因而不产生 2,, 7, 10-三酯基紫杉烷这种副产物。 这样一来, 首先是提高了主产物的收率, 而且为 2,-酯基紫杉烷 的水解带来方便。 对 2,-OH、 7-OH, 10-OH的研究表明, 这三个 -OH 的活性排列顺序为 2,>7>10 , 酰化成酯后的水解难度为 2,<7<10。 倘若形成三乙酰基化合物, 则在水解时若要完全水解 7- 位的酯, 则很容易使 10-位的酯也水解。 现在, 本发明中无 7-位 酯, 利用 2,-位酯和 10-位酯的较大的难度差异, 可以很方便地通 过控制碱量实现尽可能完全地水解 2,-位酯,又尽可能少地水解 10- 位酯, 从而提高 10-乙酰紫杉烷这个主产物的收率。
本发明人还发现当用稀土元素化合物对紫杉醇母核中的 7-OH 进行保护后, 其后的脱保护十分简单, 无需特定的脱保护剂, 后 续的很多处理工序中的物质就可实现脱保护, 如中和用的碱等。
本发明人还发现当用稀土元素化合物对紫杉醇母核中的 7-OH 进行保护后, 后续的酰化反应很容易进行, 即稀土元素化合物对 后续的酰化反应有催化促进作用。
在涉及酰化反应的合成紫杉烷类物质的制备方法中, 为使酰 化反应进行得充分完全, 应使反应物呈溶液状态, 而且溶剂应是 惰性的。 惰性溶剂实际上只起溶媒或介质的作用。 虽然已知可用 作酰化反应的介盾的惰性溶剂很多, 但吡啶的效果最好。 如前所 述使用吡啶, 在生产上会带来一定的难度。 本发明采用四氢呋喃
作酰化反应的介质, 能取得与吡啶同样的效果, 而且避免了臭味, 解决了对生产现场极高要求的难题。 四氢呋喃气味似乙醚, 工作 场所最高允许浓度 100mg/m3。
本发明合成紫杉烷类物质的制备方法, 既可用于以天然紫杉 烷类物质为前体的半合成紫杉烷类物质的制备过程中, 也可用于 全合成紫杉烷类物质的制备过程中, 因为全合成紫杉烷类物质的 制备过程中, 也必须有对 7-OH的保护和对其他 OH的酰化。
半合成紫杉烷类物质的制备过程中, 若以 10-去乙酰紫杉烷 类物质为原料, 其典型方法过程例如: (1 ) 、 用保护剂对 7-OH 进行保护; (2 ) 、 用酰化剂对 10-OH 进行酰化, 同时对 2,-OH 也进行了酰化; (3 ) 、 用弱碱对 2,-酯基进行水解, 同时脱去 7- 位的保护剂而还原成 7-OH。 经过这三个步骤, 使 10-去乙酰紫杉 烷类物质转化成 10-乙酰紫杉烷类物质。 三个步骤均在常温下进 行, 无需考虑加温措施。 但第三步水解时, 为了控制反应速率, 最好采取一定的降温措施, 如冰浴, 使反应在≤31条件下进行。 用上述的稀土元素化合物对 7-OH 进行保护时, 为了简化方法, 使保护与酰化这二步操作能更好衔接, 保护反应用四氢呋喃作介 质, 即先用四氢呋喃溶解 10-去乙酰紫杉烷类物质, 然后加入保 护剂进行反应, 形成 7-OH 被保护的化合物后, 直接往反应器中 加入酰化剂如乙酸酐进行酰化反应, 生成 2,, 10-双乙酰酯紫杉 烷类物质。 除了乙酸酐外, 常用的酰化剂还有氯乙酰等。 也可用 其它有机酸酐来进行酰化, 所得产物为 2,, 10-双其它有机酸酯 的紫杉烷类物质。 其它有机酸酐例如琥珀酸酐、 丙酸犴、 苯酰氯、 碳环苯基丙氨酰、 丁酰氯、 硝基苯酰、 肉桂酰等, 无论何种酰化 剂, 酰化反应的条件是一样的。
酰化反应完成后, 可以用与四氢呋喃不相混溶的溶剂萃取出 2,, 10-双酰酯紫杉烷。 本发明中对上述的萃取用溶剂没有特别的 限定, 但其中优选二氯甲烷、 三氯曱烷。 萃取液经浓缩后用惰性 有机溶剂溶解, 降温至≤31C, 加入弱碱的惰性溶液, 选择性水解 2,-位酯, 同时脱去 7-位的保护剂, 使 2,-位和 7-位均还原成羟基。 这里, 惰性溶剂优选醇类, 特别优选曱醇。 弱碱有无机和有机两 类, 优选重碳酸钠、 重碳酸钾、 二曱胺、 二乙胺、 苯胺等。
也可用 7-木糖 -10-去乙酰紫杉烷类物质作为原料来制备半合 成紫杉烷类物质。 采取各种有效的办法如酶解、 水解、 氧化裂解 等, 使 7-木糖基转化成 7-OH , 或者先转化成二醛, 再进一步氧 化成 7-OH。 这个过程与以往文献的报道并无不同。 经过上述步 骤后, 形成了 10-去乙酰紫杉烷类物质, 之后, 即可用以 10-去乙 酰紫杉烷类物质为原料制备半合成紫杉烷类物质的相同方法, 来 制备半合成紫杉烷类物质。
全合成紫杉烷类物质已有很多研究成果问世, 只是目前尚未 正式用于工业生产。 全合成紫杉烷类物质的制备过程是由一些化 学中间体通过多个步骤反应而合成紫杉醇母核, 然后再在 C-13 位引入相关侧链。 由于 7-OH和 10-OH或 10-OAc的活性, 在上 述反应的过程中, 也少不了要对 7-OH进行保护, 对 10-OH进行 酰化。 现在, 本发明提供的制备方法可以像应用于半合成紫杉烷 类物质制备中一样, 完全地应用于全合成紫杉烷类物质的制备 中。
无论是半合成还是全合成, 在上述的步骤完成后, 再用常规 的分离、 纯化和结晶等手段, 即可获得各种所需的紫杉烷类物质。
(四) 附图说明
图 1是实施例 1中的所得产物的红外光谱图。
图 2是实施例 2中的所得产物的红外光谱图。
图 3是实施例 3中的所得产物的红外光谱图。
图 4是实施例 4中的所得产物的红外光谱图。
图 5是实施例 5中的所得产物的红外光谱图。
图 6是实施例 6中的所得产物的红外光谱图。
图 7-1是天然三尖杉宁碱的红外光谱图。
图 7-2是实施例,中本发明所得三尖杉宁碱的红外光谱图。 图 8是实施例 8中的所得产物的红外光谱图。
图 9是实施例 9中的所得产物的红外光谱图。
图 10是天然紫杉醇的红外光谱图。
(五) 具体实施方案:
下面的实施例可以对本发明作进一步的说明, 但本发明内容 并不局限于这些实施例。 实施例 1
从 10-去乙酰紫杉醇制取紫杉醇
取 10-去乙酰紫杉醇 4.5g, 加入 100ml 脱水四氢呋喃溶解。 搅拌, 加入 120mg三氯化铈, 在室温条件下连续搅拌 30min, 待 三氯化铈完全扩散, 往溶液中緩慢滴加 7.0ml 乙酸酐, 室温条件 下连续搅拌 2 个小时, 薄层层析检识 (TLC ) 反应进行完全后, 加入 50ml 水稀释。 反应混合液中的醋酸以饱和碳酸氢钠水溶液 中和完全后, 产生的不溶物以 250ml 三氯甲烷萃取, 萃取三次后 合并三氯曱烷萃取液, 减压浓缩至干, 得 4.7g 淡黄色 2,, 10-二 乙酰紫杉烷固体。
取 4.7g 淡黄色 2,, 10-二乙酰紫杉烷固体, 加入 200ml 曱醇 溶解后置水水浴中冷却至 3 TC以下, 加入 200ml 温度在 3 C以下 的 0.4M二曱胺曱醇溶液, 在小于 3 TC的水浴条件下, 连续搅拌 1.5 小时, 薄层层析检识 (TLC ) 反应进行完全后, 加入 0.2M 盐酸 水溶液 400ml, 析出的淡黄色絮状晶体以 250ml 三氯甲烷萃取三 次, 萃取液减压浓缩后进行干燥得 4.6g 含量为 40%的淡黄色紫 杉醇固体。 纯化后, 经与天然提取的紫杉醇作红外光谱对照, 鉴 别证实, 所得产物与天然提取的紫杉醇结构一致。
实施例 2
从 7-木糖 -10-去乙酰紫杉醇制取紫杉醇
1 ) 7-木糖 -10-去乙酰紫杉醇原料的预处理
1.2g7-木糖 -10-去乙酰紫杉醇加入 60ml曱醇 /氯仿 (4:1 ) 溶液 中, 加入 0.7g 高碘酸钠和 5ml、 0.5M 的硫酸, 在室温下反应 3 小时。 反应混合物加 60ml的水稀释, 用 60ml氯仿萃取 3次。 有 机相萃取物浓缩干燥, 得到无色固体 1.2g。
该固体物质 ( 1.2g ) 用 40ml曱醇溶解, 向溶液中加 4ml浓度 为 50%的醋酸和 0.5ml苯肼, 混合液在 50* 反应 2小时。 加 40ml 的水稀释, 用 40ml 氯仿萃取 3 次。 有机相萃取物浓缩干燥, 得 到固体 1.23g。 该固体经硅胶层析, 层析液浓缩干燥收得 10-去乙
酰紫杉醇 l.lg。
2 ) 紫杉醇的制备
按实施例 1的方法, 最终可得淡黄色紫杉醇 1.15g。 将所得物 经过硅胶吸附层析 -C-18 反相层析 ( 乙腈 -水) -丙酮结晶, 即得 0.376g 含量为 99.6%的紫杉醇白色结晶物。 经与天然提取的紫杉 醇作红外光谱对照, 鉴别证实, 所得产物与天然提取的紫杉醇结 构一致。 另外经 iH-NMR 和 "C-NMR 的数据确证, 样品编号为 FJ030702-5 的白色结晶的化学结构与天然紫杉醇完全一致。 实验 数据及分析如下。
(一) 质谱
1. 高分子辨质谱
( 1 ) 结果: 测定分子量 853.3334
理论分子量 853.3310
测定分子式 C47H51N014
理论分子式 C47HS1N014
( 2 ) 解析 高分辨质谱测定分子量为 853.3334, 从而确定分 子式为 C47H51N014, 与紫杉醇的分子组成相符, 因此确证样品 FJ030702-5为紫杉醇。
2. 质 i普
( 1 ) 测定数据 m/z 854 , 836 , 776 , 569, 551, 509 , 286等 离子峰。
( 2 ) 解析 采用阳离子 ESI-MS 方法测定样品 FJ030702-5 的质谱, 给出分子离子峰 m/z 854[M+H]+和主要碎片峰 m/z 776[M+H-AcOH-H20]+, m/z 569[M+H-ScH]+ , m/z 551 [Μ+Η- ScH-H20]+, m/z 509[M+H-ScH-AcOH]+ , 286[ScH+H】+。 与文献 上的数据比较基本一致。
(二) 综合解析
样品 FJ030702-5的高分辨质谱测定分子量为 853.3334, 则分 子式为 C47HS1N014, 核磁共振氢谱中四个季碳曱基信号 (δ 1.14, 1.24, 1.68 , 1.79 )和 δ 3·79 ( d, J=6.5Hz )处 3α-Η信号以及由 δ 4.19 和 4.30组成的 ΑΒ 系统二重峰为 C-20位的二个氢, 再结合碳谱 数据表明该化合物为具有四元氧环的紫杉烷类三环二萜。 氢谱中
δ 7.01 (d, J=8.8) 的信号归属为氮上的氢, 结合质谱碎片分析, 证明化合物有含氮侧链。 氢 i普中可看到 10α-Η, 13β-Η, 3'-Η, 2β-Η, 5α-Η, 2,-Η和 7α-Η的信号分别在 δ 6.27 (S) , 6.23 ( t, J=9.0 ), 5.78 ( dd, J=2.5, 9.0 ) 5.67 ( d, J=7.0 ), 4.94 ( d, J=9.0 ), 4.79 ( d, J=2.0 ) , 4.39 ( dd, J=7.5, 11.0) , 说明在这几位上 均有杂质子取代。 碳谱中 δ 79.04 和 δ 81.16 的信号指出有二个含 氧季碳, 另外核磁共振谱还出现二个乙酰基, 二个苯曱酰基和一 个单取代苯的信号。 通过以上光谱分析并与紫杉醇的文献值
(G. N. Chmumy, B. D. Hilton, S. Brobst, S. A. Look, K. M. Witherup and J. A. Bnitlen. Ή- and l3C-N R assignments for taxol,7-epi-taxol and cephalomannine. J. Nat. Prod.1992, 55(4), 414- 423) 比较, 二者基本一致, 因此确证样品 FJ030702-5 的化学结构为 紫杉醇。
o t o
表 1 样 0品 FJ030702- 5与紫杉醇文献值的1 H— NMR化学位移比较(CDC13, 500 MHz) 质子 r 0 c 化学位移 偶合常数 文献值
2-H 5.67 d 7.0 5.67 d (7.1)
3-H 3.79 d 6.5 3.79 dd (7.0, 1.0)
5-H 4.49 d 9.0 4.94 dd (9.6, 2.3)
6— Ha 2.54 ddd 7.0, 9.5, 15.0 2.54 ddd (6.7 , 9.7, 14.8)
6-Hb 1.88 ddd 2.0, 12.5, 14.6 1.88 ddd (2.3 , 11.0, 14.7)
7-H 4.39 dd 7.5, 11.0 4.40 dd (6.7, 10.9)
6.27 s 6.27 s
13— H 6.23 t 9.0 6.23 tq(9.0, 1-5)
2.35 dd 9.0, 15.5 2.35 dd (9.0, 15.4)
14一 Hb 2.28 dd 9.0, 15.5 2.28 ddd (0.6 , 9.0, 15.3)
16-CH3 1.14s 1.14s
1.79 s 1.79 s
1.68 s 1.68 s
4.30 d 8.5 4.30 ddd (0.8 , 1.1, 8.4)
4.19 d 8.5 4.19 dd (1.0, 8.5)
2 ' -H 4.79 d 2.0 4.78 d (2.7)
3 ' -H 5.78 dd 2.5, 9.0 5.78 dd (2.8, 8.9)
3 ' -NH 7.00 d 9.0 7.01 d (8.9) o-OBz 8.13 d 7.5 8.13 dd(1.3, 8.4) m-OBz 7.38-7.52 m 7.51 m
p-OBz 7.61 t 7.5 7.61 tt(1.4, 7.4)
0-3' Ph 7.38-7.52 m 7.48 m
m- Ph 7.38-7.52 m 7.42 m
p-y Ph 7.35 t 7.5 7.35 tt(1.6, 7.3) o-NBz 7.74 d 7.5 7.74 dd(1.2, 8.3)
,"-NBz 7.38-7.52 m 7.40 m
p-NBz 7.38-7.52 m 7.49 m
4-OAc 2.38 s 2.38 s
10-O Ac 2.23 s 2.23 s
1-OH 1.98 brs
7— OH 2.48 brs
3.61 brs
表 2 样品 FJ 030702-5与紫杉醇文献值的' 3C— NMR化学位移比较(CDC13, 125 MHz) 碳原子 DEPT 样品值 文献值 碳原子 DEPT 样品值 文献值
C-1 C 79.04 79.0 C-2 ' CH 73.20 73.2
C-2 CH 74.95 74.9 C-3 ' CH 55.04 55.0
C-3 CH 45.63 45.6 4-OCOCHj CH3 22.62 22.6
C-4 C 81.16 81.1 10-OCOCHj CH3 20.84 20.8
C-5 CH 84.40 84.4 4-OCOCHj C 170.36 170.4
C-6 CH2 35.61 35.6 10-OCOCHj C 171.24 171.2
C-7 CH 72.17 72.2 CO-OBz C 167.00 167.0
C-8 C 58.62 58.6 q—O z C 129.15 129.1
C-9 C 203.61 203.6 o-OBz CH 130.20 130.2
C-10 CH 75.56 75.5 m-OBz CH 128.72 128.71
C-11 C 133.19 133.2 p-OBz CH 133.71 133.7
C-12 C 141.96 142.0 q-3 ' Ph C 133.63 133.6
C-13 CH 72.36 72.3 o-3 ' Ph CH 127.03 127.03
C-14 CH2 35.69 35.7 m-3 ' Ph CH 128.69 128.68
C-15 C 43.17 43.2 p-31 Ph CH 131.96 131.9
C-16 CH3 21.80 21.8 CO-NBz C 167.05 167.02
C-17 CH3 26.86 26.6 广 NBz C 137.98 138.0
C-18 CH3 14.83 14.8 o-NBz CH 127.03 127.04
C-19 CH3 9.55 9.5 m-NBz CH 129.02 129.0
C-20 CH2 76.50 76.5 p-NBz CH 128.34 128.3
C-1 ' C 172.70 172.7 此外, 经与天然提取的紫杉醇作红外光谱对照, 鉴别证实, 所得产物与天然提取的紫杉醇结构一致。
实施例 3
从 10-去乙酰紫杉醇制取紫杉醇
取 10-去乙酰紫杉醇 4.5g, 加入 100ml 四氢呋喃溶解。 搅拌, 加入 150mg氯化稀土, 在室温条件下连续搅拌 30min, 待氯化稀 土完全扩散, 往溶液中緩慢滴加 7.0ml 乙酸肝, 室温条件下连续 搅拌 2个小时, 薄层层析检识(TLC )反应进行完全后,加入 50ml 水稀释。 反应混合液中的醋酸以饱和碳酸氢钠水溶液中和完全 后, 产生的不溶物以 250ml 三氯曱烷萃取, 萃取三次后合并三氯 甲烷萃取液, 减压浓缩至干, 得 4.74g淡黄色 2,, 10-二乙酰紫杉 烷固体。
取 4.74g淡黄色 2,, 10-二乙酰紫杉烷固体, 加入 200ml 甲醇 溶觯后 水浴中 3 TC以下, 加入 200ml 温唐左 3 1C以下
的 0.4M二曱胺曱醇溶液, 在小于 3 TC的冰浴条件下, 连续搅拌 1.5 小时, 薄层层析检识 (TLC ) 反应进行完全后, 加入 0.2M 盐酸 水溶液 400ml, 析出的淡黄色絮状晶体以 250ml 三氯曱烷萃取三 次, 萃取液减压浓缩后进行干燥得 4.65g 含量为 39.1 %的淡黄色 紫杉醇固体。 纯化后, 经与天然提取的紫杉醇作红外光谱对照, 鉴别证实, 所得产物与天然提取的紫杉醇结构一致。
实施例 4
从 10-去乙酰紫杉醇制取紫杉醇
取 10-去乙酰紫杉醇 4.5g, 加入 100ml四氢呋喃溶解。 搅拌, 加入 140mg氢氧化稀土, 在室温条件下连续搅拌 30min, 待氢氧 化稀土完全扩散, 往溶液中緩慢滴加 7.0ml 乙酸酐, 室温条件下 连续搅拌 2 个小时, 薄层层析检识 (TLC ) 反应进行完全后, 加 入 50ml 水稀释。 反应混合液中的醋酸以饱和碳酸氢钠水溶液中 和完全后, 产生的不溶物以 250ml三氯曱烷萃取, 萃取三次后合 并三氯甲烷萃取液, 减压浓缩至干, 得 4.75g淡黄色 2,, 10-二乙 酰紫杉烷固体。
取 4.75g淡黄色 2,, 10-二乙酰紫杉烷固体, 加入 200ml 曱醇 溶解后置冰水浴中冷却至 3 TC以下, 加入 200ml 温度在 31C以下 的 0.4M二甲胺甲醇溶液, 在小于 3 TC的水浴条件下, 连续搅拌 1.5 小时, 薄层层析检识 (TLC ) 反应进行完全后, 加入 0.2M 盐酸 水溶液 400ml, 析出的淡黄色絮状晶体以 250ml 三氯甲烷萃取三 次, 萃取液减压浓缩后进行干燥得 4.68g 含量为 39.6%的淡黄色 紫杉醇固体。 纯化后, 经与天然提取的紫杉醇作红外光谱对照, 鉴别证实, 所得产物与天然提取的紫杉醇结构一致。
实施例 5
从 10-去乙酰紫杉醇制取紫杉醇
取 10-去乙酰紫杉醇 4.5g, 加入 100ml四氢呋喃溶解。 搅拌, 加入 200mg稀土硫酸钠复盐, 在室温条件下连续搅拌 30min, 待 稀土硫酸钠复盐完全扩散, 往溶液中緩慢滴加 7.0ml 乙酸酐, 室 温条件下连续搅拌 2 个小时, 薄层层析检识 (TLC ) 反应进行完 全后, 加入 50ml 水稀释。 反应混合液中的醋酸以饱和碳酸氢钠 水溶液中和完全后, 产生的不溶物以 250ml 三氯甲烷萃取, 萃取
三次后合并三氯曱烷萃取液, 减压浓缩至干, 得 4.67g淡黄色 2,, 10-二乙酰紫杉烷固体。
取 4.67g淡黄色 2,, 10-二乙酰紫杉烷固体, 加入 200ml 甲醇 溶解后置水水浴中冷却至 3 TC以下, 加入 200ml 温度在 3 TC以下 的 0.4M二曱胺曱醇溶液,在小于 3 的冰浴条件下, 连续搅拌 1.5 小时, 薄层层析检识 (TLC ) 反应进行完全后, 加入 0.2M 盐酸 水溶液 400ml, 析出的淡黄色絮状晶体以 250ml三氯曱烷萃取三 次, 萃取液减压浓缩后进行干燥得 4.56g 含量为 39.6%的淡黄色 紫杉醇固体。 纯化后, 经与天然提取的紫杉醇作红外光谱对照, 鉴别证实, 所得产物与天然提取的紫杉醇结构一致。
实施例 6
从 10-去乙酰紫杉醇制取紫杉醇
取 10-去乙酰紫杉醇 4.5g, 加入 100ml 四氢呋喃溶解。 搅拌, 加入 200mg稀土硫酸铵复盐, 在室温条件下连续搅拌 30min, 待 稀土硫酸铵复盐完全扩散, 往溶液中緩慢滴加 7.0ml 乙酸酐, 室 温条件下连续搅拌 2 个小时, 薄层层析检识 (TLC ) 反应进行完 全后, 加入 50ml 水稀释。 反应混合液中的醋酸以饱和碳酸氢钠 水溶液中和完全后, 产生的不溶物以 250ml 三氯曱烷萃取, 萃取 三次后合并三氯甲烷萃取液, 减压浓缩至干, 得 4.7g淡黄色 2,, 10-二乙酰紫杉烷固体。
取 4.7g 淡黄色 2,, 10-二乙酰紫杉烷固体, 加入 200ml 甲醇 溶解后置水水浴中冷却至 3 以下, 加入 200ml 温度在 3 "C以下 的 0.4M二曱胺甲醇溶液, 在小于 3 C的冰浴条件下, 连续搅拌 1.5 小时, 薄层层析检识 (TLC ) 反应进行完全后, 加入 0.2M 盐酸 水溶液 400ml, 析出的淡黄色絮状晶体以 250ml三氯曱烷萃取三 次, 萃取液减压浓缩后进行干燥得 4.6g含量为 38.6%的淡黄色紫 杉醇固体。 纯化后, 经与天然提取的紫杉醇作红外光谱对照, 鉴 别证实, 所得产物与天然提取的紫杉醇结构一致。
实施例 7
从 10-去乙酰三尖杉宁碱制取三尖杉宁碱
取 10-去乙酰三尖杉宁碱 4.5g, 加入 100ml 四氢呋喃溶解。 搅拌, 加入 120mg三氯化铈, 在室温条件下连续搅拌 30min, 待
三氯化铈完全扩散, 往溶液中緩慢滴加 7.0ml 乙酸酐, 室温条件 下连续搅拌 2 个小时, 薄层层析检识 (TLC ) 反应进行完全后, 加入 50ml 水稀释。 反应混合液中的醋酸以饱和碳酸氢钠水溶液 中和完全后, 产生的不溶物以 250ml 三氯曱烷萃取, 萃取三次后 合并三氯曱烷萃取液, 减压浓缩至干, 得 4.71g淡黄色 2,, 10-二 乙酰三尖杉宁碱类似物固体。
取 4.71g淡黄色 2,, 10-二乙跣三尖杉宁碱类物固体,加入 200ml 曱醇溶解后置冰水浴中冷却至 3 TC以下, 加入 200ml 温度在 3 " 以下的 0.4M二甲胺甲醇溶液, 在小于 3 X的水浴条件下, 连续搅 拌 1.5小时, 薄层层析检识 (TLC ) 反应进行完全后, 加入 0.2M 盐酸水溶液 400ml, 析出的淡黄色絮状晶体以 250ml 三氯曱烷萃 取三次, 萃取液减压浓缩后进行干燥得 4.63g 淡黄色三尖杉宁碱 固体。 将所得物经过硅胶吸附层析 -C-18反相层析 (乙腈 -水) -丙 酮结晶, 即得 3.24g 含量为 97.7%的三尖杉宁碱白色结晶物。 经 与天然提取的三尖杉宁碱作红外光谱对照, 鉴别证实, 所得产物 与天然提取的三尖杉宁碱结构一致。
实施例 8
从 10-去乙酰紫杉醇制取紫杉醇
取含量为 45%的 10-去乙酰紫杉醇 5.0g,加入 20ml吡啶溶解, 搅拌, 加入 150mg三氯化铈, 在室温条件下连续搅拌 30min, 待 三氯化铈完全扩散, 往溶液中緩慢滴加 8.0ml 乙酸酐, 室温条件 下连续搅拌 2 小时, 薄层层析检识 (TLC ) 反应进行完全后, 加 入水稀释, 沉淀物减压过滤、 干燥, 得 5.1g 淡黄色 2,, 10-二乙 酰紫杉烷固体。
取 5.1g 淡黄色 2,, 10-二乙酰紫杉烷固体, 加入 200ml 曱醇 溶解后置水水浴中冷却至 3 TC以下, 加入 200ml 温度在 3 1C以下 的 0.4M二甲胺曱醇溶液, 在小于 3 C的冰浴条件下, 连续搅拌 1.5 小时, 薄层层析检识 (TLC ) 反应进行完全后, 加入 0.2M 盐酸 水溶液 400ml, 析出的淡黄色絮状晶体以 250ml三氯曱烷萃取三 次, 萃取液减压浓缩后进行干燥得含量为 41.6%的淡黄色紫杉醇 固体 4.5g。 纯化后, 经与天然提取的紫杉醇作红外光谱对照, 鉴 别证实, 所得产物与天然提取的紫杉醇结构一致。
实施例 9
从 10-去乙酰紫杉醇制备紫杉醇
5.0g含量为 82.6%的 10-去乙酰基紫杉醇以 100ml 四氢呋喃 溶解, 加入 5.0g 氯乙酰胺, 加热至 100TC , 搅拌反应 3 小时, 加 水稀释, 减压过滤后所得的固体物质经 100g 的硅胶柱层析, 以 二氯曱烷 /乙酸乙酯 ( 7:3 ) 洗脱, 有效部分减压浓缩, 干燥后获 得的固体物质用丙酮 /石油醚进行重结晶, 得到产物 5.0g。 该物质 再以 100ml四氢呋喃溶解, 加入 20ml 乙酸酐, 加热至 1001C反应 3小时。
以上反应得到的产物以 100ml曱醇溶解,加入 2.0g硫脲和 l .Og 重碳酸钠, 混合液在室温下搅拌, 反应 1 小时后加水稀释, 所得 沉淀物经过滤,得到的固体经丙酮 /轻油重结晶,获得含量为 98.6 % 紫杉醇 3.3g。 经与天然提取的紫杉醇作红外光谱对照, 鉴别证实, 所得产物与天然提取的紫杉醇结构一致。 对比例 1 (按 US5,200,534A中制备方法 1所述方法)
从 10-去乙酰紫杉醇制备紫杉醇
0.5gl0-去乙酰基紫杉醇以 2ml吡啶溶解, 加入 0.5g氯乙酰胺 在室温下反应 1 小时, 加水稀释, 减压过滤后所得的固体物质经 10g 的硅胶柱层析, 以三氯甲烷 /丙酮 (2-5% ) 洗脱, 有效部分减 压浓缩, 干燥后获得的固体物质用丙酮 /正已烷进行重结晶, 得到 产物 0.5g。 该物质再以 lml吡啶溶解, 加入 2ml 乙酸酐, 加热至 100TC反应 30min。
以上反应得到的 0.2g产物以 10ml 甲醇溶解, 加入 0.2g硫脲 和 0.1g重碳酸钠, 混合液在室温下搅拌, 反应 1小时后加水稀释, 所得沉淀物经过滤, 得到的固体经丙酮 /轻油重结晶, 获得紫杉醇 0.3g。
对比例 2 (按 US5,200,534A中实施例 5所述方法)
从 7-木糖 -10-去乙酰紫杉醇制备紫杉醇
lg7-木糖 -10-去乙酰紫杉醇溶解于 50ml 甲醇 /氯仿 (4: 1 ) 溶 液中, 加入 0.6g 的高換酸钠和 1N 的硫酸 4ml, 在室温条件下连 续振荡反应 3小时。 反应混合物加 50ml的水稀释, 用 50ml氯仿
萃取 2次, 有机相萃取物经浓缩干燥, 得到白色的固体 1.0g。
该固体物盾溶于 1ml吡啶中, 加入 5ml 乙酸 Sf, 加热, 在温 度 1001C反应 30min 后冷却, 加入 50ml 水稀释, 抽滤得到固体 1.0g o 该物质以 20ml 曱醇溶解, 加入 3.0ml醋酸和 0.5ml苯肼, 将混合物加热到 50~60TC, 反应 3 小时左右冷却, 反应混合产物 以 20ml水稀释, 再以 20ml三氯曱烷萃取 2次, 有机相萃取液经 减压浓缩, 干燥, 所得的固体物质经 C-8反相柱层析, 以 25%、 30%、 35%、 40%、 45%和 50%的乙腈 /水梯度洗脱。 减压浓缩有 效部分, 先洗脱部分得到紫杉醇 O.lg; 后洗脱部分得到含 2,-乙 酰基紫杉醇的固体 0.5g, 经乙腈 /轻油重结晶后得到 0.4g 白色固 体物质 =
对比例 3 (按 US5,200,534A中制备方法 2所述方法)
从 2,-乙酰基紫杉醇制备紫杉醇
0.2g 2,-乙酰基紫杉醇固体以 10ml甲醇溶解, 加入 0.2%二曱 胺溶液进行反应, 用 TLC 检识水解反应完全后, 将反应混合液 减压浓缩, 干燥, 得到的固体物质经丙酮 /轻油重结晶, 得到 0.12g 白色紫杉醇固体。
本发明与现有技术的对比结果