WO2005039575A1

WO2005039575A1 - 高脂血症治療剤

Info

Publication number: WO2005039575A1
Application number: PCT/JP2003/013592
Authority: WO
Inventors: Kouichi Kino; Katsuhisa Ioriya; Hajime Okuyama
Original assignee: Sumitomo Pharmaceuticals Co., Ltd.
Priority date: 2003-10-24
Filing date: 2003-10-24
Publication date: 2005-05-06
Also published as: AU2003275633A1

Abstract

本発明は、ＬＤＬ受容体のｍＲＮＡ転写後のタンパク質発現プロセスを制御することによってＬＤＬ受容体タンパク質の発現を促進する化合物のスクリーニング方法、該スクリーニング方法によって得られ得る化合物を提供する。転写活性化経路に依存することなくＬＤＬ受容体のｍＲＮＡ転写後のタンパク質発現プロセスを制御することによってＬＤＬ受容体の発現を促進することが可能な化合物は、従来にない新しい作用機序を有する高脂血症治療剤等として有用である。

Description

明細書

高脂血症治療剤

技術分野

本発明は、 LDL受容体発現上昇をターゲットにした高脂血症治療薬のスクリ一ユング方法に関する。更に詳しくは転写制御を介さない LDL受容体発現上昇作用に基づく高脂血症治療薬のスクリーニング方法ならぴに該スクリーニングによって得られ得る高脂血症治療に有用な物質に関するものである。

背景技術

ここ数年間で、ァテローム性の冠動脈疾患（CAD) による死亡率の減少という点が非常に大きく進歩したにもかかわらず、ほとんどの先進国において、心臓血管疾患は、依然として主要な死亡原因となっている。 CADと血清総コレステロール濃度、特に低密度リポタンパク質（LDL) コレステロール濃度の上昇との関係は文献で十分に実証されている。冠動脈性心疾患（CHD) の進行において、脂質の変調が重要な因子であることは十分に確証されている [S c h e t t 1 e r, G. 著、 "心筋梗塞後の患者の血清コレステロールの低下における食事と薬物の役割，，「Ca r d i o v a s c. Dr u g s Th e r . J, 1989年， 2/6 (795〜 799) を参照]。

一方、高脂血症治療薬のターゲットとして、肝臓中の LDL受容体の上昇が考えられることは既に知られている（参考文献： New. En g. J. Me d 305 (1981) 515— 517等)。 LD L受容体は、各臓器に発現しており、 LDLを血中から取り込む際に必要な受容体であり、生体内各臓器へのコレステロール分配に重要であるだけでなく、血中コレステロール量の調節においても主要な役割を担っている。

例えば、ゴールドシュタイン（Go l d s t e i n, J. L.) らは、 "家族性高コレステロール血症における LDL受容体欠損、病因おょぴ治療とのかかわり " 「Me d. C l i . No r t h Am. J, 1982年， 66/2 (335

〜362) において、『家族性高コレステロール血症は、心筋梗塞の原因となることが認められた最初の遺伝性疾患であった。高コレステロール血症およぴ冠動脈ァテロ一ム性硬ィヒの両方を引き起こす単一遺伝子突然変異の未解決の実例が今日まで残っている。』ことを指摘している。

生体内における LD L受容体の発現制御は、細胞内コレステロール量に依存した遺伝子転写段階で行われていると考えられている（細胞内コレステロール量によるネガティブフィードパックレギュレーション)。転写後、 LDL受容体 mR NAはまず、前駆体（未成熟型）としてタンパク質に翻訳され、糖鎖付加を受けて成熟型の LDL受容体として細胞表面に発現するが、この翻訳後の制御については、現在のところ、その存在も含めてほとんど判っていない。また、 mRNA より合成される LDL受容体タンパク質の一部が、分解され細胞表面に発現しない経路の存在が考えられるが、その詳細は不明である。

また、転写活性（mRNA合成）が上昇するのに LDL受容体タンパク質発現量は上昇しないという報告（Eu r . J. B i o c h em. (1993) v o 1. 216， 527— 38等）はあるが、転写後の mRNAの安定性等が関与する可能性も考えられており、翻訳後（タンパク合成後）の作用については不明である。

肝細胞中の遊離コレステロール量が減少することにより、肝細胞表面上の L D L受容体が誘導される。 LDL受容体は血中の LDLと結合し、肝細胞内に取り込むことによつて血中の L D Lを減少させる。肝細胞内に取り込まれた L D L中のコレステロールは、胆汁酸等に変換され腸管へ排出される。より細胞表面上の LD L受容体量を上昇させることにより、血中の LD L量をより低減化することができ、従って、高脂血症等の LDLが悪玉として作用する種々の疾患の予防 · 治療への用途が期待できる。力べして LDL受容体の発現上昇をターゲットにした高脂血症治療薬開発は、広く行われている。最もよく知られているのは、 HM G— Co A還元酵素阻害剤で、コレステロールの生合成を阻害することで、間接的に L D L受容体遺伝子の転写を活性ィ匕させ L D L受容体発現を上昇させる（参考文献： S c i e n c e 232 (1986) 34-47 ； J. L i p i d Re s. 25 (1984) 1450— 1461等）。

このほか、文献的に LD L受容体の発現上昇作用を持つ薬剤の報告は多数ある力いずれも何らかの（詳細なメカニズムが不明なものも含めて）転写活性化を介したものである。 L i f i b r o 1のように、明確に転写活性ィ匕を示してはいないが、コレステロール生合成阻害があり、恐らく転写活性ィ匕によると考えられている化合物もある（At he r o s c l e r o s i s (2000) v o l . 153， 69— 80)。現状で、 LDL受容体の発現上昇作用に関して転写活性化を経由しないルートが存在するという報告はない。

発明の開示

本発明は、 LDL受容体の発現を促進する作用、特に LDL受容体遺伝子の転写活性化という経路を介さずに LDL受容体タンパク質の発現を促進する作用を有する、従来になかった新しい作用機序を有する高脂血症治療剤ならびに血中脂質低下剤を提供することを目的とする。さらに本発明の別の目的は、かかる用途に有用な、 LDL受容体タンパク質の発現を促進する化合物のスクリーニング方法ならびに当該スクリーニング方法により得られ得る、あるいは選択され得る化合物を提供することである。

本発明者等は鋭意検討を進めた結果、転写活性化経路に依存しない L D L受容体タンパク質発現上昇作用が存在することを見出し、その作用による血中脂質低下作用を確認した。さらにかかる作用を有する化合物を見出し、 LDL受容体遺伝子の転写後の過程が、当該ィ匕合物の LDL受容体タンパク質発現調節に関与しているという明確な知見を得て、そしてそのような化合物のスクリーユング方法を確立して本発明を完成するに至つた。

即ち本発明は下記の通りである。

[1] 式 1

〔式中、環 Aは置換基を有していてもよいピリジン環を表す。 Xは、式

(式中、 R ¹は水素原子、アルキル基、置換アルキル基、アルケニル基、置換ァルケニル基、アルキニル基、置換アルキニル基、シクロアルキル基、または置換シクロアルキル基を表す。 ) または式

[式中、 Wは水素原子または式—O R ^a (R ^aはアルキル基、置換アルキル基、アルケニル基、置換アルケニル基、アルキニル基、または置換アルキニル基を表す。）を表す。 ] で示される基を表す。 Zは結合手、一 NH—、炭素原子数 1もしくは 2のアルキレン基または一 CH= C H—を表す。 Yはアルキル基、置換ァルキル基、シクロアルキル基、置換シクロアルキル基、芳香族基または置換芳香族基を表す。 Bはアルキル基、置換アルキル基、アルケニル基、置換アルケニル基、シクロアルキル基、置換シクロアルキル基、芳香族基、または置換芳香族基を表す。〕で表されるナフチリジン誘導体もしくはそのプロドラッグまたはそれ • らの薬学上許容される塩を有効成分として含有する、 L D L受容体タンパク質の発現促進剤。 [ 2 ] 式 1で表されるナフチリジン誘導体が式 2

〔式中、環 Aは置換基を有していてもよいピリジン環を表す。

Yはアルキル基、置換アルキル基、シクロアルキル基、置換シクロアルキル基、芳香族基または置換芳香族基を表す。

R ¹は水素原子、アルキル基、置換アルキル基、アルケニル基、.置換アルケニル基、アルキニル基、置換アルキニル基、シクロアルキル基、または置換シクロアルキル基を表す。

R ²は水素原子または低級アルキル基を表す。

R ³は低級アルキル基を表す。

Z ^aは、

1 ) 一 D ¹— Q

[式中、 D ¹は結合手または不飽和結合を含んでいてもよい炭素原子数 1〜 8 の 2価の炭化水素基を表し、 Qは水酸基、カルボキシル基、ヘテロァリール基、置換へテロアリーノレ基、または式：一 NR ⁴ R ⁵ (R ⁴および R ⁵は互いに独立して、水素原子、低級アルコキシ基、低級アルキル基、置換低級アルキル基、シク口アルキル基またはァラルキル基を表すか、または R ⁴および R ⁵が互いに結合してそれらが結合する窒素原子とともに、環中にさらに式：一 N R ⁸— (R ⁸は水素原子、低級アルキル基、置換低級アルキル基、フエニル基、置換フエニル基、ベンジル基、置換べンジル基、または低級アルコキシカルボ二ル基を表す。 ) で表される基を 1個、または酸素原子 1個を含んでもよい、環を構成する炭素原子数が 4〜 8個の飽和環状アミノ基を表す。 ) を表す。但し、 Qがへテロアリール基または置換へテロアリール基である場合は、 D¹は結合手とはならない。 ] または、

2) 一 D²— M— E— W

[式中、 D ²は結合手または不飽和結合を含んでいてもよい炭素原子数 1〜 8 の 2価の炭化水素基を表し、 Mは酸素原子、硫黄原子、スルブイニル基もしくはスルホニル基、または式一 NHC (=θ) ―、一 C (=O) NH—もしくは一 N R⁶— （R ⁶は水素原子もしくは低級アルキル基を表す。 ) で表される基を表し、 Eは結合手または不飽和結合を含んでいてもよい炭素原子数 1〜 8の 2価の炭化 K素基を表し、 Wは水酸基、力ルポキシル基、ヘテロァリール基、置換へテロアリーノレ基、または式：一 NR⁴R⁵ (R⁴および R⁵は前記の意味を表す。）で表される基を表す。但し、 Wが水酸基、カルボキシル基もしくは式一 NR⁴R⁵で表される基の時は Eは結合手とはならない。 ] を表す。〕で表される化合物である、上記 [1] 記載の LDL受容体タンパク質の発現促進剤。

[3] ナフチリジン誘導体が下記式 A

〔式中、 n— B uは n—ブチノレ基を、 i一 P rはイソプロピル基を表す。 ] で表される化合物である、上記 [1] 記載の LDL受容体タンパク質の発現促進剤。

[4] LDL受容体タンパク質の発現促進が、 LDL受容体の mRNA転写後のタンパク質発現プロセスを制御することによって誘導されるものである、上記 [1] 〜 [3] のいずれかに記載の LDL受容体タンパク質の発現促進剤。

[5] さらに、 LDL受容体の遺伝子発現に影響を与えないことを特徴とする上記 [4] 記載の LDL受容体タンパク質の発現促進剤。

[6] LD L受容体の mR N A転写後のタンパク質発現プロセスを制御することによって L D L受容体タンパク質の発現を促進する化合物のスクリ一ユング方法であって、以下の工程を含むスクリーニング方法：

(1) LDL受容体発現細胞を使用し、

(2) LDL受容体の転写抑制因子の存在下、被検物質の存在下または非存在下で当該細胞を培養し、

( 3 ) 被検物質存在下または非存在下で培養した L D L受容体発現細胞の L D L 受容体タンパク質発現量を測定し、

(4) LDL受容体タンパク質の発現量を増加させる物質を選択する。

[7] LDL受容体タンパク質の未成熟型と成熟型の量を測定し、未成熟型に対する成熟型の比が大きい物質を選択する工程をさらに含む上記 [6] 記載のスクリーユング方法。

[8] LDL受容体の m R N A転写後のタンパク質発現プロセスを制御することによって LDL受容体タンパク質の発現を促進する化合物のスクリーニング方法であって、以下の工程を含むスクリーニング方法：

(1) LDL受容体発現細胞を使用し、

(3) 被検物質の存在下または非存在下で培養した LDL受容体発現細胞に、放射性同位元素で標識されたアミノ酸を添加し、

(4) 経時的に一定量の細胞を採取し、細胞を可溶化後、細胞タンパク質画分を調製し、

( 5 ) 得られた細胞タンパク質画分中に存在する L D L受容体タンパク質を免疫沈降させ、

( 6 ) 免疫沈降物中の L D L受容体タンパク質の量を測定し、

(7) LDL受容体タンパク質の発現量を増加させる物質を選択する。 [ 9 ] 免疫沈降物中の未成熟型 LDL受容体タンパク質と成熟型 LDL受容体タンパク質の量を測定し、未成熟型 LDL受容体タンパク質量に対する成熟型 L D L受容体タンパク質量の比が大きい物質を選択する工程をさらに含む上記 [8] 記載のスクリーニング方法。

[10] LDL受容体の mRNA転写後のタンパク質発現プロセスを制御することによって LDL受容体タンパク質の発現を促進する化合物のスクリーニング方法であって、以下の工程を含むスクリーニング方法：

(1) LDL受容体発現細胞を使用し、

(3) 被検物質の存在下または非存在下で培養した LDL受容体発現細胞に、放射性同位元素で標識されたアミノ酸を添加後、一定期間培養し、

(4) 放射性同位元素を含まない培養液に交換後、経時的に一定量の細胞を採取し、細胞を可溶化した後、細胞タンパク質画分を調製し、

(5) 得られた細胞タンパク質画分中に存在する LDL受容体タンパク質を免疫沈降させ、

( 6 ) 免疫沈降物中の LD L受容体タンパク質の量を測定し、

(7) LDL受容体タンパク質の発現量を増加させる物質を選択する。

[11] 免疫沈降物中の未成熟型 LDL受容体タンパク質と成熟型 LDL受容体タンパク質の量を測定し、未成熟型 LDL受容体タンパク質量に対する成熟型 L D L受容体タンパク質量比が大きい物質を選択する工程をさらに含む上記 [ 1 0] 記載のスクリーニング方法。

[12] LDL受容体の転写抑制因子が 25—ヒドロキシコレステロールである、上記 [6] 、 [8] および [10] のいずれかに記載のスクリーニング方法。

[13] 陽性対照として、式 Aで表される化合物を用いることを特徴とする上記

[6] 、 [8] および [10] のいずれかに記載のスクリーニング方法。

[14] LDL受容体タンパク質の発現量を増加させる物質を選択する工程が、式 Aで表される化合物が有する LDL受容体タンパク質発現促進活性以上の活性を有する物質を選択する工程である、上記 [6] 、 [8] および [10] のいずれかに記載のスクリ一ユング方法。

[15] 未成熟型 LDL受容体タンパク質量に対する成熟型 LDL受容体タンパク質量の比が大きい物質を選択する工程が、式 Aで表される化合物を添加した場合に得られる比以上の値である物質を選択する工程である、上記 [7] 、 [9] および [11] のいずれかに記載のスクリーニング方法。

[16] 上記 [6] 〜 [15] のいずれかに記載のスクリーニング方法によって得られる、 LDL受容体タンパク質の発現を促進する化合物もしくはそのプロドラッグまたはそれらの薬学上許容される塩を有効成分として含有する、 LDL受容体タンパク質の発現促進剤。

[17] 上記 [6] 〜 [15] のいずれかに記載のスクリーニング方法によって得られる、 LDL受容体タンパク質の発現を促進する化合物が、式 1で表されるナフチリジン誘導体もしくはそのプロドラッグまたはそれらの薬学上許容される塩である、上記 [16] 記載の LDL受容体タンパク質の発現促進剤。

[18] 上記 [6] 〜 [15] のいずれかに記載のスクリーニング方法によって得られる、 L D L受容体タンパク質の発現を促進する化合物もしくはそれらのプ口ドラッグまたはそれらの薬学上許容される塩を有効成分として含有する、血中脂質低下剤。

[19] 上記 [6] 〜 [15] のいずれかに記載のスクリーニング方法によって得られる、 LDL受容体タンパク質の発現を促進する化合物もしくはそのプロドラッグまたはそれらの薬学上許容される塩を有効成分として含有する、高脂血症治療剤。

[20] 式 1、好ましくは式 2、特に好ましくは式 Aで表されるナフチリジン誘導体もしくはそのプロドラッグまたはそれらの薬学上許容される塩の有効量を投与対象に投与することを含む、該対象内における LD L受容体タンパク質の発現を促進する方法。 [21〕 LDL受容体タンパク質の発現促進が、 LDL受容体のmRNA転写後のタンパク質発現プロセスを制御することによつて誘導されるものである、上記 [20〕記載の方法。

[22] さらに、 LDL受容体の遺伝子発現に影響を与えないことを特徴とする上記 [21] 記載の方法。

[23] LDL受容体タンパク質の発現促進剤を製造する為の、式 1、好ましくは式 2、特に好ましくは式 Aで表されるナフチリジン誘導体もしくはそのプロドラッグまたはそれらの薬学上許容される塩の使用。

[24] LDL受容体タンパク質の発現促進が、 LDL受容体の:mRNA転写後のタンパク質発現プロセスを制御することによって誘導されるものである、上記 [23] 記載の使用。

[25] さらに、 LDL受容体の遺伝子発現に影響を与えないことを特徴とする上記 [24] 記載の使用。

[26] 上記 [6] 〜 [15] のいずれかに記載のスクリーニング方法によって得られる、 LDL受容体タンパク質の発現を促進する化合物もしくはそのプロドラッグまたはそれらの薬学上許容される塩の有効量を投与対象に投与することを含む、該対象内における L D L受容体タンパク質の発現を促進する方法。

[27] LDL受容体タンパク質の発現促進が、 LDL受容体の mRNA転写後のタンパク質発現プロセスを制御することによって誘導されるものである、上記 [26] 記載の方法。

[28] さらに、 LDL受容体の遺伝子発現に影響を与えないことを特徴とする上記 [27] 記載の方法。

[29] LDL受容体タンパク質の発現促進剤を製造する為の、上記 [6] 〜

[15] のいずれかに記載のスクリーニング方法によって得られる、 LDL受容体タンパク質の発現を促進するィ匕合物もしくはそのプロドラッグまたはそれらの薬学上許容される塩の使用。

[30] LDL受容体タンパク質の発現促進が、 LDL受容体の mRNA転写後のタンパク質発現プロセスを制御することによつて誘導されるものである、上記

[29〕記載の使用。

[31] さらに、 LDL受容体の遺伝子努現に影響を与えないことを特徴とする上記 [30] 記載の使用。

[32] 上記 [6] 〜 [15] のいずれかに記載のスクリーニング方法によって得られる、 LDL受容体タンパク質の発現を促進する化合物もしくはそのプロドラッグまたはそれらの薬学上許容される塩の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、血中脂質を低下する方法。

[33] LDL受容体タンパク質の発現促進が、 LDL受容体の mRNA転写後のタンパク質発現プロセスを制御することによって誘導されるものである、上記 [32] 記載の方法。

[34] さらに、 LDL受容体の遺伝子発現に影響を与えないことを特徴とする上記 [33] 記載の方法。

[35] 血中脂質低下剤を製造する為の、上記 [6] 〜 [15] のいずれかに記載のスクリ一エング方法によって得られる、 LDL受容体タンパク質の発現を促進する化合物もしくはそのプロドラッグまたはそれらの薬学上許容される塩の使用。

[36] LDL受容体タンパク質の発現促進が、 LDL受容体の mRNA転写後のタンパク質努現プロセスを制御することによつて誘導されるものである、上記 [35] 記載の使用。

[37] さらに、 LDL受容体の遺伝子発現に影響を与えないことを特徴とする上記 [36] 記載の使用。

[38] 上記 [6] 〜 [15] のいずれかに記載のスクリーニング方法によって得られる、 LDL受容体タンパク質の発現を促進する化合物もしくはそのプロドラッグまたはそれらの薬学上許容される塩の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、高脂血症の治療方法。

[39] LDL受容体タンパク質の発現促進が、 LDL受容体の mRNA転写後のタンパク質発現プロセスを制御することによって誘導されるものである、上記

[38] 記載の方法。

[40] さらに、 LDL受容体の遺伝子発現に影響を与えないことを特徴とする上記 [39] 記載の方法。

[41] 高脂血症治療剤を製造する為の、上記 [6：] 〜 [15] のいずれかに記載のスクリーニング方法によって得られる、 LDL受容体タンパク質の発現を促進する化合物もしくはそのプロドラッグまたはそれらの薬学上許容される塩の使用。

[42] LDL受容体タンパク質の発現促進が、 01^受容体の1111 転写後のタンパク質発現プロセスを制御することによって誘導されるものである、上記 [41] 記載の使用。

[43] さらに、 LDL受容体の遺伝子発現に影響を与えないことを特徴とする上記 [42] 記載の使用。

図面の簡単な説明

図 1は、培養肝細胞株を用いたインビトロでの化合物 Aの LDL受容体タンパク質量おょぴ mRNA量に対する影響を調べた結果を示す図である。

(A) 実験条件の要約を示す図である。

(B) 化合物 Aの、 LDL受容体タンパク質量への影響を調べた、ィムノプロッティングの結果を示す図である。

(C) 化合物 Aの、 LDL受容体 mRNA量への影響を調べたグラフである。図 2は、培養肝細胞株を用いたィンビトロでの被験物質の L D L受容体タンパク質量および mRNA量に対する影響（スタチン系薬剤との対比）を調べた結果を示す図である。

(A) 実験条件の要約を示す図である。

(B) 化合物 A及びアト口パスタチンの、 LDL受容体タンパク質量への影響を調べた、ィムノブロッテイングの結果を示す図である。

(C) 化合物 A及ぴアト口パスタチンの、 LDL受容体 mRNA量への影響を調ベたグラフである。

図 3は、培養細胞株を用いたインビトロでの被験物質の LD L受容体 mRNA の安定性に対する影響を調べた結果を示す図である。

(A) 実験条件の要約を示す図である。

(B) 化合物 Aの、 LDL受容体 mRNAの安定性に及ぼす影響を調べた結果を示すグラフである。

(C) PMAの、 LDL受容体 mRNAの安定性に及ぼす影響を調べた結果を示すグラフである。

図 4は、ハムスターを用いたインビポでの被験物質の LDL受容体タンパク質量および mRNA量に対する影響を調べた結果を示す図である。

(A) 実験条件の要約を示す図である。

(B) (上段）化合物 Aの、 LDL受容体タンパク質量への影響を調べたィムノプロッティ'ングの結果を示す図である。（下段）ィ匕合物 Aの、血清総コレステロール値に及ぼす影響を調べた結果である。

(C) 化合物 Aの、 LDL受容体 mRNA量への影響を調べた結果を示すグラフである。

図 5は、培養肝細胞株を用いたィンビトロでの被験物質の L D L受容体タンパク質合成に対する影響を調べた結果を示す図である。

(A) 実験条件の要約を示す図である.。

(B) 未成熟型 LDL受容体と成熟型 LDL受容体の合成量の経時的変ィ匕を示したグラフである。

( C ) 未成熟型 LDL受容体と成熟型 LDL受容体の比の経時的変動を示したグラフである。

図 6は、培養肝細胞株を用いたィンビトロでの被験物質の L D L受容体タンパク質成熟過程に対する影響を調べた結果を示す図である。

(A) 実験条件の要約を示す図である。

(B) LD L受容体の成熟過程を測定したォートラジォグラフィ一の結果を示す W 図である。

( C ) 未成熟型 L D L受容体量と成熟型 L D L受容体量の経時的変化を示したグラフである。

(D) 未成熟型 L D L受容体と成熟型 L D L受容体の比の経時的変動を示したグラフである。

図 7は、培養肝細胞株を用いたインビトロでの被験物質の S R— B I、インスリン受容体発現に対する効果を示した図である。

(A) 実験条件の要約を示す図である。

(B) 化合物 Aの S R— B I発現に及ぼす影響を調べたィムノブロッテイングの結果を示す図である。

(C) 化合物 Aのィンスリン受容体サブュニット発現に及ぼす影響を調べたィムノブ口ッティングの結果を示す図である。

図 8は、ハムスターを用いたインビポでの被験物質の S R— B I発現に対する効果を調べた結果を示す図である。

(上段）化合物 Αの、 S R— B I発現量への影響を調べたィムノプロッティングの結果を示す図である。

(下段）化合物 Aの、血清総コレステロール値に及ぼす影響を調べた結果である。

発明の詳細な説明

本発明において、「L D L受容体の mR NA転写後のタンパク質発現プロセス」とは、 L D L受容体タンパク質合成経路において、 L D L受容体の mR NA 転写後の工程であれば全て包含される。より具体的には、翻訳（タンパク質合成）、糖鎖付加（未成熟型から成熟型への移行）、膜表面への輸送、リソゾームやプロテアソムによる分解等が例示される。該「タンパク質発現プロセス」を制御するとは、上記の種々の工程における制御を意図し、例えば、翻訳効率の向上、成熟化の促進、膜表面への輸送の効率化、分解の抑制等が挙げられる。

本発明の L D L受容体タンパク質の発現促進剤は、 L D L受容体の mRNA転写後のタンパク質発現プロセスを制御することによって L D L受容体発現を上昇させるものであれば特に制限されず、好ましくは L D L受容体遺伝子の発現ならぴに mR N A転写には影響を与えない。具体的には式 1

(式中、 R ¹は水素原子、アルキル基、置換アルキル基、アルケュル基、置換ァルケニル基、アルキニル基、置換アルキニル基、シクロアルキル基、または置換シクロアルキル基を表す。 ) または式

[式中、 Wは水素原子または式一 O R ^a (R ^aはアルキル基、置換アルキル基、アルケニル基、置換アルケニル基、アルキニル基、または置換アルキニル基を表す。 ) を表す。 ] で示される基を表す。 Zは結合手、一 NH—、炭素原子数 1もしくは 2のアルキレン基または一 C H = C H—を表す。 Yはアルキル基、置換ァルキル基、シクロアルキル基、置換シクロアルキル基、芳香族基または置換芳香族基を表す。 Bはアルキル基、置換アルキル基、アルケュル基、置換アルケニル基、シクロアルキル基、置換シクロアルキル基、芳香族基、または置換芳香族基を表す。〕で表されるナフチリジン誘導体もしくはそのプロドラッグまたはそれらの薬学上許容される塩を有効成分として含有するものである。〔式 1化合物〕

本明細書中、式 1中の各種の基を詳細に説明すると次の通りである。なお、特に指示のない限り、各々の基の説明は他の置換基の一部である場合も含む。

環 Aは置換基を有していてもよいピリジン環を表し、その窒素原子は縮合環の縮合位置を除くいずれの場所にあってもよい（縮合環の橋頭原子にならない）が、下記（a ) 、 ( b ) 、 ( c ) で表されるものが好ましい。

ヽ

(a) (b) (c)

また、ピリジン環の置換基としては、例えば低級アルキル基、ハロゲン原子、シァノ基、トリフルォロメチル基、ニトロ基、アミノ基、モノ低級アルキルアミノ基、ジ低級アルキルアミノ基、水酸基、低級アルコキシ基、低級アルキルチオ基、低級アルキルスルブイ二ル基、低級アルキルスルホ -ル基等が挙げられる。本発明でいう低級とは当該基のアルキル部分が低級アルキル基であることを意味し、そのような低級アルキル基としてはメチル、ェチル、プロピル、 2—プロピル、プチル、ペンチル、へキシル等の炭素原子数が 1〜 6個の低級アルキル基を挙げることができる。ハロゲン原子としては例えばフッ素、塩素、臭素、ヨウ素が挙げられる。上記ピリジン環の置換基は 1個または同一もしくは異なって複数個あってもよい。

好ましくは、環 Aは無置換のピリジン環、特に式（a ) で表される。

R R ^a及び Yにおけるアルキル基、または置換アルキル基のアルキル基部分としては、例えば直鎖または分枝した炭素原子数 1〜8個のアルキル基が挙げられ、具体的には例えばメチル、ェチル、プロピル、 2—プロピル、プチル、 2 一プチル、 2 _メチルプロピル、 1， 1—ジメチルェチル、 3—ペンチル、 3— へキシル、 4一へプチル、 4ーォクチル等が挙げられる。 R ¹及ぴ R ^aにおけるアルケニル基、または置換アルケニル基のアルケニル基部分としては、例えば直鎖または分枝した炭素原子数 2〜 8個のアルケニル基が挙げられ、具体的には例えばビニル、ァリル、 2—プロピュ /レ、 2—プテ-ノレ、 3—メチルー 2—プテ- ノレ、 3一へキセニノレ、 3ーェチ /レー 2—ペンテ二ノレ、 4ーェチノレ一 3—へキセニル等が挙げられる。 R ¹及ぴ; R ^aにおけるアルキニル基、または置換アルキニル基のアルキニル基部分としては、例えば直鎖または分枝した炭素原子数 3〜 8個のアルキニル基が挙げられ、具体的には例えば 2—プロピエル、 3—プチエル、 4—ペンチ二ノレ、 3—へキシュル、 5—メチノレ一 2—へキシニノレ、 6—メチノレー 4一ヘプチュル等が挙げられる。

Bにおけるアルキル基または置換アルキル基のアルキル基部分としては、例えば直鎖または分枝した炭素原子数 1〜 2 0個のアルキル基が挙げられ、具体的には例えばメチル、ェチル、プロピル、 2—プロピル、プチル、 2—プチル、 2 - メチルプロピル、 1， 1ージメチルェチル、ペンチル、 3—ペンチル、へキシル、ヘプチル、ォクチル、ゥンデシル、ドデシル、へキサデシル、 2， 2—ジメチルドデシル、 2—テトラデシル、 n—ォクタデシル等が挙げられる。 Bにおけるァルケニル基または置換アルケ-ル基のアルケニル基部分としては、例えば 1〜 2 個の二重結合を有する直鎖または分枝した炭素原子数 3〜 2 0個のアルケニル基が挙げられ、具体的には例えば 2—プロべニル、 2—ブテニル、 3—メチルー 2 一プテニノレ、 3—ペンテュル、 2—ォクテニル、 5—ノネニル、 4ーゥンデセニル、 5—ヘプタデセニル、 3—ォクタデセ -ル、 9ーォクタデセニル、 2， 2— ジメチル一 9ーォクタデセニル、 9， 1 2—ォクタデカジエエル等が挙げられる。

Y及び Bにおけるシク口アルキル基または置換シク口アルキル基のシク口アルキノレ基部分としては、例えば炭素原子数 3〜 7個のシクロアルキル基が挙げられ、具体的には例えばシクロプロピル、シクロプチル、シクロペンチル、シクロへキシル、シクロへプチル等が挙げられる。

Y及び Bにおける芳香族基または置換芳香族基の芳香族基部分としてはァリ一ル基、ヘテロァリール基が挙げられる。ァリール基としては、例えばフエュル基、ナフチル基等の炭素原子数 1 0個以下のァリール基が挙げられる。ヘテロァリール基としては、例えば窒素原子を 1〜 2個含む 5〜 6員単環式の基、窒素原子を 1〜 2個と酸素原子を 1個もしくは硫黄原子を 1個含む 5〜 6員単環式の基、酸素原子を 1個もしくは硫黄原子を 1個含む 5員単環式の基、窒素原子 1〜 4個を含み、 6員環と 5または 6員環が縮合した二環式の基等が挙げられ、具体的には、例えば、 2—ピリジル、 3—ピ! ジル、 4—ピリジル、 2—チェニル、 3—チェニル、 3—ォキサジァゾリル、 1一イミダゾリル、 2—イミダゾリル、 2—チアゾリル、 3—イソチアゾリル、 2—ォキサゾリル、 3—イソォキサゾリル、 2— フリル、 3—フリル、 3—ピロリル、 8—キノリル、 2—キナゾリニル、 8—プリュル等が挙げられる。

Y及び Bにおける置換芳香族基の置換基としては、 1個または同一もしくは異なって複数個あってもよく、例えばハロゲン原子、シァノ基、トリフルォロメチル基、ニトロ基、水酸基、メチレンジォキシ基、低級アルキル基、低級アルコキシ基、低級アルカノィルォキシ基、アミノ基、モノ低級アルキルアミノ基、ジ低級アルキルアミノ基、カルパモイル基、低級アルキルアミノカルボニル基、ジ低級アルキルアミノカルボニル基、カルボキシル基、低級アルコキシカルポニル基、低級アルキルチオ基、低級アルキルスルフィエル基、低級アルキルスルホニル基、低級アルカノィルァミノ基、低級アルキルスルホンアミド基または式一D " — E， - F {D ¹ ' は、結合手、酸素原子、硫黄原子もしくは式一 NR ³ ' —

(R ³ ' は水素原子もしくは低級アルキル基を表す。 ) を表し、 E ' は不飽和結合を'含んでいてもよレ、炭素原子数 1〜 6の 2価の炭化水素基もしくはフエ二レン基を表し、 Fは、水酸基、カルボキシル基、低級アルコキシカルボ二ル基、ベンジルォキシカルボ二ル基、ハロゲン原子、シァノ基、ベンジルォキシ基、低級ァルコキシ基、低級アルカノィルォキシ基、低級アルキルチオ基、低級アルキルスルフィニル基、低級アルキルスルホニル基、低級アルカノィルァミノ基、低級ァルキルスルホンアミド基、フタルイミド基、ヘテロァリール基、

式一 N R ⁴， R ⁵ ' (R ⁴，および R ⁵，は互いに独立して、水素原子もしくは低級アルキル基を表すか、または R ^{4 >} および R ⁵ ' が互いに結合して、それらが結合する窒素原子とともに、環中にさらに一 NR ⁸ ' ― (R ^{8 >} は水素原子、低級アルキル基、フエニル基、またはベンジル基を表す。：）を 1個、または酸素原子 1個を含んでもよい飽和 5ないし 7員環の環状アミノ基を表す。 ) 、もしくは式— C ( = 0 ) N R ⁴ ' R ⁵ ' ( ⁴ ' 、 R ⁵ ' は前記の意味を表す。）を表す。 } で示される基が挙げられる。不飽和結合を含んでいてもよい炭素原子数 1 〜6の 2価の炭化水素基としては、例えばメチレン、エチレン、トリメチレン、テトラメチレン、ペンタメチレン、またはへキサメチレン等のアルキレン鎖、プロぺエレン等のアルケニレン鎖、プロピ-レン等のアルキニレン鎖が挙げられる。

Fにおけるヘテロァリール基としては、例えば窒素原子を 1〜 3個含む 5〜 6員環の基、酸素原子を 1個もしくは硫黄原子を 1個含む 5員環の基等が挙げられ、具体的には、例えば 2—ピリジル、 3—ピリジル、 4一ピリジル、 1 ピロリル、 1—イミダゾリル、 1一（1， 2 , 4—トリァゾリル) 、 2—チェニル、 3—チェニル、 2—フリル、 3—フリル等が挙げられる。これらのヘテロァリール基は低級アルキル基で 1個または同一もしくは異なって複数個置換されていてもよい。 NR ⁴ ' R ⁵ ' が形成する環状アミノ基としては、例えば 4一低級アルキル一 1 —ピぺラジュノレ、 4一フエ二ルー 1ーピぺラジュル、 4—ベンジル一 1—ピペラジニル等の

(R ⁸ ' は前記と同じ意味を表す。 ) で表される基、または 1—ピロリジニル、

1ーピペリジニル、 1一ホモピベリジ二ル、 4一モルホリ -ル等が挙げられる。置換アルキル基、置換シクロアルキル基、置換アルケニル基、置換アルキニル基の置換基は 1個または同一もしくは異なって複数個あってもよく、置換基としては、例えばノヽ口ゲン原子、シァノ基、ベンジルォキシ基、トリフルォ口メチル基、水酸基、低級アルコキシ基、低級アルカノィルォキシ基、アミノ基、モノ低級アルキルアミノ基、ジ低級アルキルアミノ基、カルパモイル基、低級アルキルァミノカルボニル基、ジ低級アルキルアミノカルボ二ル基、低級アルコキシカルボエルアミノ基、カルボキシル基、低級アルコキシカルボニル基、低級アルキルチォ基、低級アルキルスルフィエル基、低級アルキルスルホニル基、低級アル力ノィルァミノ基、低級アルキルスルホンァミド基、フタルイミド基、ヘテロァリ一ノレ基、飽和へテロ環基または式一 D ² ' — E，一 F {D ² ' は、酸素原子、硫黄原子もしくは式一 N R ³ ' ― (R ³ ' は前記の意味を表す。）を表し、 Eおよぴ Fは前記の意味を表す } で示される基が挙げられる。ヘテロァリール基としては前記 Fと同様のへテロアリール基が挙げられる。飽和へテロ環基としては、例えば 1一ピぺリジ-/レ、 1一ピロリジュル等の窒素原子 1個を有する 5〜 8員環の基、窒素原子 2個を有する 6〜8員環の基、窒素原子 1個および酸素原子 1個を有する 6〜 8員環の基が挙げられる。また置換アルキル基としては、シクロアルキル基もしくは置換シク口アルキルに置換された炭素原子 1〜 6個のアルキル基、またはァラルキル基もしくは置換ァラルキル基が挙げられる。ァラルキル基および置換ァラルキル基としては前記ァリール基、置換ァリール基に置換された炭素原子数 1〜 6個のアルキル基が挙げられ、例えばべンジル、 1—フエニルェチル、 2—フエニルェチル、 2—ナフチルメチルが挙げられる。

Yにおける好ましい基としては、例えば置換基を有していてもよいフエ二ノレ基もしくはピリジル基が挙げられる。置換基は 1個または同一もしくは異なって複数個あってもよく、好ましい置換基としては、例えば、フッ素、塩素等のハロゲン原子、シァノ基、トリフルォロメチル基、ニトロ基、水酸基、メチレンジォキシ基、低級アルキル基、低級アルコキシ基、低級アルカノィルォキシ基、ァミノ基、モノ低級アルキルアミノ基、ジ低級アルキルアミノ基、カルパモイル基、低級アルキルァミノカルボ-ル基、ジ低級アルキルァミノカルポニル基、カルボキシル基、低級アルコキシカルポニル基、低級アルキルチオ基、低級アルキルスルフィニル基、低級アルキルスルホニル基、低級アルカノィルァミノ基、低級アルキルスルホンアミド基または式一 D ¹ ' — E， - F (D ¹ ' 、 E，および Fは前記の意味を表す。 ) で示される基が挙げられる。 D ¹ ' における好ましい基としては結合手もしくは酸素原子が挙げられる。特に好ましくは酸素原子である。 E，における好ましい基としては、炭素原子数 1〜6のアルキレン鎖、アルケニレン鎖もしくはアルキニレン鎖が挙げられ、更に好ましくは、炭素数原子数 1〜 3個の直鎖のアルキレン鎖、もしくはアルキニレン鎖が挙げられる。特に好ましくは炭素原子数 1〜 3個の直鎖のアルキレン鎖である。 Fにおける好ましい基としては、水酸基、ハロゲン原子、シァノ基、低級アルコキシ基、低級アルカノィルォキシ基、低級アルキルチオ基、低級アルキルスルフィニノレ基、低級アルキルスルホ-ル基、低級アル力ノィルァミノ基、低級アルキルスルホンァミド基、へテロアリール基、式—NR⁴， R⁵' ( ⁴' 、 R⁵' は前記の意味を表す）で示される基が挙げられる。具体的には、ヘテロァリール基としては、例えば、 2— ピリジル、 3—ピリジル、 4一ピリジル、 1—イミダゾリル、 1一（1， 2, 4 一トリァゾリル）等が挙げられる。式一 NR⁴' R⁵' (R^4> 、 R⁵' は前記の意味を表す) としては、例えばジメチルァミノ、ジェチノレアミノ、ピぺリジニル等が挙げられる。特に好ましくは Fは水酸基である。

Bにおける好ましい基としては、例えば置換基を有していてもよいフエニル基もしくはヘテロァリーノレ基が挙げられる。更に好ましい基としては、例えばフッ素、塩素等のハロゲン原子、アミノ基、低級アルキル基、低級アルコキシ基もしくは低級アルキルチオ基が 1〜 3個置換したフエニル基もしくはピリジル基が挙げられる。具体的には例えば 2, 6—ジイソプロピルフエニル、 4—ァミノ一 2, 6—ジイソプロピルフエニル、 2, 4, 6—トリメチルフエニル、 2， 4, 6— トリメトキシフエュル、 2， 4—ジフルオロフェニル、 2， 4, 6—トリフルォ口フエニル、 2, 6—ジメチルチオ一 3—ピリジル、 2, 6—ジメチルチオ一 4 ーメチ /レー 3—ピリジル等が挙げられる。

Xの好ましい基としては、例えば以下の基が挙げられる。

〔式中、 R¹は前記の意味を表す〕 R ¹における好ましい基としては、例えば水素原子、アルキル基、置換アルキル基が挙げられる。置換アルキル基の置換基としては、 1個または同一もしくは異なって複数個あってもよく、好ましくは、フッ素、塩素等のハロゲン原子、シァノ基、ベンジルォキシ基、水酸基、低級アルコキシ基、低級アルカノィルォキシ基、カルパモイル基、低級アルキルアミノカルボ二ル基、ジ低級アルキルアミノカルポエル基、カルボキシル基、低級アルコキシカルボ二ル基、低級アルキルチォ基、低級アルキルスルフィニル基、低級アルキルスルホニル基、ァリール基、低級アル力ノィルァミノ基、低級アルキルスルホンァミド基、フタルイミド基、ヘテロァリール基、飽和へテロ環基等が挙げられる。更に好ましい置換基としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、シァノ基、水酸基、カルパモイル基、 2— ピリジル基、 3—ピリジル基、 4 _ピリジル基等が挙げられる。 R ¹におけるさらに好ましい基としては無置換のアルキル基もしくはアルケニル基が挙げられる。式 1中、特に好ましくは式 2

R ¹は水素原子、アルキル基、置換アルキル基、アルケニル基、置換アルケニル基、アルキニル基、置換アルキニル基、シクロアルキル基、または置換シクロアルキル基を表す。

2は水素原子または低級アルキル基を表す。

3は低級アルキル基を表す。 z^aは、

1) 一 D¹— Q

[式中、 D¹は結合手または不飽和結合を含んでいてもよい炭素原子数 1 〜8の 2価の炭化水素基を表し、 Qは水酸基、カルボキシル基、ヘテロァリール基、置換へテロアリーノレ基、または式：一 NR⁴R⁵ (R⁴および R⁵は互いに独立して、水素原子、低級アルコキシ基、低級アルキル基、 '置換低級アルキル基、シクロアルキル基またはァラルキル基を表すか、または R ⁴および R ⁵が互いに結合してそれらが結合する窒素原子とともに、環中にさらに式：一 NR⁸—

(R⁸は水素原子、低級アルキル基、置換低級アルキル基、フエニル基、置換フェ-ル基、ベンジル基、置換べンジル基、または低級アルコキシ力ルポ二ル基を表す。 ) で表される基を 1個、または酸素原子 1個を含んでもよい、環を構成する炭素原子数が 4〜 8個の飽和環状アミノ基を表す。 ) を表す。但し、 Qがへテロアリ一ル基または置換へテロアリール基である場合は、 D ¹は結合手とはならない。 ]

または、

2) 一 D²— M— E— W

[式中、 D ²は結合手または不飽和結合を含んでいてもよい炭素原子数 1 〜8の 2価の炭化水素基を表し、 Mは酸素原子、硫黄原子、スルフィエル基もしくはスルホニル基、または式一 NHC (=0) 一、一 C (=θ) NH—もしくは一 NR⁶— （R ⁶は水素原子もしくは低級アルキル基を表す。）で表される基を表し、 Eは結合手または不飽和結合を含んでいてもよい炭素原子数 1〜 8の 2価の炭化水素基を表し、 Wは水酸基、力ルポキシル基、ヘテロァリール基、置換へテロアリール基、または式：一 NR⁴R⁵ (R⁴および R⁵は前記の意味を表す。 ) で表される基を表す。但し、 Wが水酸基、カルボキシル基もしくは式一 N R⁴R⁵で表される基の時は Eは結合手とはならない。 ] を表す。〕で表される化合物である。

〔式 2化合物〕本明細書中、式 2中の各種の基を詳細に説明すると次の通りである。なお、特に指示のない限り、各々の基の説明は他の置換基の一部である場合も含む。

ここで、低級とは当該基のアルキル部分が低級アルキル基であることを意味し、そのような低級アルキル基としてはメチル、ェチル、プロピル、 2—プロピル、ブチル、 t e r t—ブチル、ペンチル、へキシル等の炭素原子数が 1〜 6個の低級アルキル基を挙げることができる。

ハロゲン原子としては例えばフッ素、塩素、臭素、ヨウ素が挙げられる。

環 A、 Y及ぴ R ¹については、それぞれ上記式 1で述べた定義と同様の意味を表す。

R ²及び R ³における低級アルキル基としては、例えば直鎖または分枝した炭素原子数 1〜 6個のアルキル基が挙げられ、具体的には例えばメチル、ェチル、プロピル、イソプロピル、プチル、 2—プチル、 2—メチルプロピル、 1， 1— ジメチノレエチノレ、ペンチ/レ、 3—ペンチ/レ、 3—メチノレプチ/レ、へキシノレ、 3 - へキシル等が挙げられる。

Ό \ D ²及ぴ Εにおける不飽和結合を含んでいてもよい炭素原子数 1〜8の 2価の炭化水素基としては、例えばメチレン、エチレン、トリメチレン、テトラメチレン、ペンタメチレン、へキサメチレン等のアルキレン鎖、プロぺニレン、プテ-レン等のァ /レケニレン鎖、ェチニレン、プロピュレン、プチ二レン等のァルキニレン鎖が挙げられる。

Q及び Wにおけるへテロアリ一ル基または置換へテロアリール基のへテロアリール基部分としては、例えば窒素原子を 1〜 3個含む 5〜 6員環の基、酸素原子を 1個もしくは硫黄原子を 1個含む 5員環の基、窒素原子 1〜 4個を含み 6員環と 5または 6員環が縮合した二環式の基等が挙げられ、具体的には、例えば 1— ピロリル、 1一ピラゾリル、 1一イミダゾリル、 1， 2 , 4—トリァゾール一 1 —ィル、 2—ピリジル、 3—ピリジル、 4一ピリジル、 2—チェニル、 3—チェニル、 2—フリル、 3—フリル、 2—キノリル等が挙げられる。 Q及び Wにおける置換へテロアリール基の置換基としては、低級アルキル基、低級アルコキシ基またはハロゲン原子が挙げられ、 1個または同一もしくは異なって複数個置換されていてもよい。

R ⁴及び R ⁵における置換低級アルキル基の置換基は、 1つまたは複数、同一または異なって置換していてよく、例えば水酸基、ハロゲン原子または低級アルコキシ基が挙げられる。

R ⁸における置換低級アルキル基、置換フエニル基および置換べンジル基の置換基は、 1つまたは複数、同一または異なって置換していてよく、例えば水酸基、ハ口ゲン原子または低級アルコキシ基が挙げられる。

一 N R ⁴ R ⁵で表される基が形成する環状アミノ基としては、例えば環を構成する原子数が 6個、即ち 6員環である基、例えば 1ーピペリジニル、 4一モルホリニル、 4一低級アルキル一 1一ピペラジ-ル、 4—フエ二ルー 1—ピペラジ- ルもしくは 4—ベンジルー 1ーピペラジニル等、 5員環である基、例えば 1一ピ口リジニル基等、または 7員環である基、例えば 1—ホモピペリジニル等が挙げられる。

R ²における好ましい基としては水素原子、メチル、ェチル、プロピルまたはィソプロピルが挙げられる。 R ³における好ましい基としてはィソプロピルまたは e r t一プチノレである。

D ¹における好ましい基としては、単結合、メチレンまたはエチレンが挙げられる。 Qにおける好ましい基としては、水酸基、ヘテロァリール基、置換へテロァリール基、または式：一 N R ⁴ R ⁵ (R ⁴および R ⁵は前記の意味を表す。 ) で表される基が挙げられる。さらに好ましい基としては、水酸基、 1一ピラゾリル、 3 , 5—ジメチルー 1—ピラゾリル、 1—イミダゾリル、 2—メチルー 1—イミダゾリル、 1， 2， 4—トリァゾーノレ一 1一ィル、 1—ピペリジ-ル、 1—ピロリジュル、 4ーメチルー 1ーピペラジニル、モルホリノ、ジェチルァミノまたはジプロピルアミノ等が挙げられる。 Qとして、特に好ましくは一 N R ⁴ R ⁵であつてその中でも R ⁴及ぴ； ⁵が水素原子であるものが好ましい。

D ²における好ましい基としては、結合手、メチレンもしくはエチレンが挙げられる。 Mにおける好ましい基としては、酸素原子または式：一NH C (= 0) 一、 - c (= 0) NH—もしくは一N R ⁶—で表される基が挙げられる。 Eにおける好ましい基としては、メチレン、エチレンもしくはトリメチレンが挙げられる。

Wにおける好ましい基としては、水酸基、ヘテロァリール基、置換へテロァリール基、または式：一 N R ⁴ R ⁵ (R ⁴および R ⁵は前記の意味を表す。）で表される基が挙げられる。さらに好ましい基としては、水酸基、 2—ピリジル、 3— ピリジル、 4一ピリジル、 1—ピラゾリル、 3， 5—ジメチル一 1—ビラゾリル. 1一イミダゾリル、 2—メチル一 1一イミダゾリル、 1 , 2， 4—トリァゾール _ 1一ィル、 1—ピペリジェル、 1—ピロリジニル、 4—メチルー 1ーピペラジュル、モルホリノ、ジェチルァミノまたはジプロピルァミノ等が挙げられる。

「プロドラッグ」としては、生体内で容易に加水分解され、式 1または式 2の化合物を再生するものが挙げられ、例えば力ルポキシル基を有する化合物であればそのカルボキシル基がアルコキシカルボニル基となった化合物、アルコキシ力ルポニル基により置換されアルコキシカルボニルァミノ基となった化合物、アルキルチオ力ルポニル基となつた化合物、またはアルキルァミノ力ルポニル基となつた化合物が挙げられる。また、例えばアミノ基を有する化合物であれば、そのァミノ基がアル力ノィル基で置換されアル力ノィルアミノ基となった化合物、ァシロキシメチルァミノ基となった化合物、またはヒドロキシルァミンとなった化合物が挙げられる。また、例えば水酸基を有する化合物であれば、その水酸基が前記ァシル基により置換されてァシロキシ基となった化合物、リン酸エステルとなつた化合物、またはァシロキシメチォキシ基となつた化合物が挙げられる。これらのプロドラッグ化に用いる基のアルキル部分としては前記アルキル基が挙げられ、そのアルキル基は置換（例えば炭素数 1〜 6のアルコキシ基等により）されていてもよい。好ましい例としては、例えば力ルポキシル基がアルコキシ力ルポニル基となった化合物を例にとれば、メトキシカルボニル、エトキシカルボニルなどの低級（例えば炭素数 1〜 6 ) アルコキシ力ルポニル、メトキシメトキシカルボ二 Λ\ エトキメトキシカルポ-ル、 2—メトキシエトキシカルボニル、 2—メトキシエトキシメトキシカルポュルまたはピパロイロキシメトキシカルポニル等のアルコキシ基により置換された低級（例えば炭素数 1〜 6 ) アルコキシカルボニルが挙げられる。

式 1およぴ式 2における各定義ならぴに好ましい基の例示、具体的な化合物の詳細については、特開平 9— 4 8 7 8 0号公報ならぴに国際公開第 0 0ノ0 9 5 0 5号パンフレツトの記載に準じることができる。さらに式 1およぴ式 2で表される化合物、そのプロドラッグ及びそれらの薬学上許容される塩は、これらの文献に記載の方法に従つて調製することができる。

本発明の L D L受容体タンパク質の発現促進剤に有効成分として含められる式 1化合物としては、特に下記式 A

〔式中、 n— B uは n—プチル基を、 i—P rはイソプロピル基を表す〕で表される化合物が好ましい。

式 1または式 2で表される化合物、特に式 Aで表される化合物、それらのプロドラッグの薬学上許容される塩としては、例えば酸付加塩が挙げられる。酸付加塩としては、具体的には、例えば塩酸塩、硝酸塩、硫酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、トリフルォロ酢酸塩、プロピオン酸塩、マレイン酸塩、クェン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩等の有機酸塩が挙げられる。また、該化合物がカルボキシル基等を有する場合、例えばジエタノールアミン塩、ェチレンジァミン塩もしくは N—メチルダルカミン塩等の有機塩基との塩、カルシゥム塩もしくはマグネシウム塩等のアル力リ土類金属との塩、またはリチウム塩、力リゥム塩もしくはナトリゥム塩等のアルカリ金属との塩であってもよい。

本発明はまた、上記した化合物（式 1化合物、式 2化合物、特に式 A化合物）の、 LDL受容体タンパク質の発現促進剤製造の為の使用、ならびに当該化合物を投与対象に投与することを含む、当該対象内での L D L受容体タンパク質の発現を促進する方法をも提供する。ここで、「投与対象」とは、 LDL受容体タンパク質の発現の促進を期待するか、あるいは促進されるか否かの判定を必要とする対象であり、上記した化合物が投与され得るものであれば特に限定されず、ヒトをはじめゥシ、ゥマ、ィヌ、マウス、ラット等の哺乳動物に加え（インビポ）、当該動物から単離、採取される（必要に応じて遺伝子工学的な処理を施すこともできる）ような組織や細胞（インビトロ）が意図される。

本発明はまた、 LDL受容体タンパク質の発現促進剤として、また該剤に有効成分として含めるに有用な、 LDL受容体タンパク質の発現を促進する化合物をスクリーニングする方法を提供する。ここで、スクリーニングする対象としては、天然あるいは合成の化合物に加え、組成物や混合物等の任意の態様であってもよい。

本発明のスクリ一ユング方法は具体的には以下の工程を含む。

(1) LDL受容体発現細胞を使用する工程（工程 1) 。

当該工程に使用する細胞は LDL受容体を発現し得る細胞であれば特に限定されず、例えば初代培養細胞、株化細胞、あるいは LDL受容体遺伝子を導入し人ェ的にあるいは過剰に LDL受容体を発現している形質転換細胞等が挙げられる。好ましくは肝臓由来の細胞である。当該細胞を、次工程（工程 2) に付すまで適当な培養条件にて培養あるいは継代培養する。かかる培養は、 LDL受容体を発現する能力を維持し得る条件であれば、当分野で通常行われてレヽる条件下で実施することができる。

(2) LDL受容体の転写抑制因子の存在下、被検物質の存在下または非存在下で上記 LDL受容体発現細胞を培養する工程（工程 2)。

「被検物質」とは、 LDL受容体タンパク質の発現促進作用の有無を調べるために選択あるレヽは合成された化合物、あるいは当該化合物を有効成分とする薬剤であり、当該化合物は新規な化合物以外に、既に別の作用を有することが報告されている既知化合物をも包含する。例えば前述の特開平 9— 4 8 7 8 0号公報に開示されている一連の化合物群（式 1で表される）、国際公開第 0 0ノ 0 9 5 0 5号パンフレットに開示されている一連の化合物（式 2で表される）等が挙げられる。既に L D L受容体タンパク質の発現促進作用が知られている化合物に対しても、その効果の程度を知る目的で本発明のスクリ一ユング方法の被検物質として使用することができる。後述するが、被検物質の L D L受容体タンパク質の発現促進作用の有無を確認するための対照（陰性対照）として、被検物質の非存在下で培養した細胞を用いることが好ましい。

目的とする L D L受容体タンパク質の発現促進作用が、 L D L受容体の m R N A転写後のタンパク質発現プロセスを制御することによってもたらされるものであることを明確にするために、本工程は L D L受容体の転写抑制因子の存在下で実施されることが好ましい。「L D L受容体の転写抑制因子」としては、通常当分野で使用される転写抑制因子が挙げられ、例えば 2 5—ヒドロキシコレステロール、コレステロール、一 V L D L等が挙げられ、好ましくは 2 5—ヒドロキシコレステロ一ルが用いられる。かかる転写抑制因子の存在下で発揮される L D L受容体タンパク質の発現促進作用は、 L D L受容体の遺伝子発現（mRNAへの転写）の上昇によるものではなく転写後のタンパク質発現プロセスの制御によるものである。当該転写抑制因子は、培養細胞の培養液中に添加することができ、その用量、処理時間等は十分な転写抑制効果が得られるように適宜設定されるが、通常、被検物質と一緒に処理に付される。

当該工程は培養細胞の培養液中に、被検物質を添加することによって行われる。当該被検物質の添加量は、被検物質の種類、細胞の種類に応じて適宜設定される。好ましくは添加量を段階的に変化させて調べることが好ましい。温度、処理時間も被検物質や細胞の種類、培養条件に応じて適宜設定されるが、通常、 0 °C〜5

0 °Cで処理し、数十分〜数時間の範囲内で当該処理を完了する。また、処理時間は経時的に数種類設定することが好ましい。

( 3 ) 被検物質存在下または非存在下で培養した L D L受容体発現細胞の L D L 受容体タンパク質発現量を測定する工程（工程 3 ) 。

本工程は、上記工程 2で調製された、被検物質存在下または非存在下で培養した LD L受容体発現細胞の L D L受容体タンパク質の発現量が測定できる方法であれば特に限定されず、当分野で通常実施される任意の技術を用いることができる。例えばィムノブロッティング法や免疫沈降法等の抗体を利用した手法が用いられ、必要に応じて、蛍光色素や放射性同位元素等の標識化合物を用いることができる。より具体的には以下の工程により実施されるが、本発明はこれらの例示になんら限定されるものではない。

( 3 - 1 ) 上記工程 2で調製された、被検物質存在下または非存在下で培養した L D L受容体発現細胞に、放射性同位元素で標識されたアミノ酸を添加する工程 (工程 3— 1 ) 。

本工程で使用される「放射性同位元素で標識されたアミノ酸」としては、当分野で通常タンパク質の生合成研究に使用し得るものであれば特に限定されないが、具体的には^{3 5} S—メチォユンや^{3 5} S—システィン、またはそれらの混合物（^{3 5} S—メチォニン ·システィン）が挙げられる。

当該アミノ酸を添加、あるいは当該アミノ酸を含有する培養液に交換してから、次の工程（即ち細胞タンパク質の抽出）に付すまでの培養時間（あるいは処理時閒）は、使用する細胞ゃ被検物質の種類等に応じて適宜設定される。また、生合成されたタンパク質の挙動を追跡するためには、上記放射性同位元素でのパルスラベルが好ましく、この場合、一定期間（当該期間も、使用する細胞ゃ被検物質の種類、スクリーニングの対象となる所望する化合物の特徴等に応じて適宜設定される）、該放射性同位元素で標識されたアミノ酸存在下で培養（あるいは処理）した後、当該アミノ酸を含有しない培養液に交換する。

該「一定期間」は、通常 3 0分間〜 2 4時間、好ましくは 3 0分間〜 2時間、特に好ましくは 3 0分程度である。本工程により、放射性同位元素で標識されたアミノ酸添加後、あるいはその存在下で培養していた期間に合成されたタンパク質が放射標識される。

( 3— 2 ) 経時的に一定量の細胞を採取し、細胞を可溶化後、細胞タンパク質画分を調製する工程（工程 3— 2 ) 。

本工程では、まず、放射性同位元素で標識されたアミノ酸存在下で培養した細胞、あるいは放射性同位元素で標識されたアミノ酸で一定期間処理した細胞を、経時的に一定量採取する。浮遊系の細胞であれば、フラスコ等の同一の培養器から経時的に容易に一定量採取することができるが、接着細胞等、細胞の採取に剥離操作を伴う場合には予め測定ボイントの数に応じて複数の培養皿等の培養器を用いて同一条件で培養、処理した細胞を経時的に使用する。

培養物を遠心分離等の常法に付して細胞を回収する。当該回収した細胞を適当な緩衝液剤中に懸濁して、さらに界面活性剤を適当な濃度で加えて細胞を可溶化し、細胞タンパク質を抽出液として得る。得られる粗抽出液は、必要ならば界面活性剤の存在下で、一般に用いられる方法を適宜組み合わせることによって精製することもできる。界面活性剤としては、細胞を可溶化し、タンパク質を抽出し得るものであれば当分野で通常使用されるものが使用でき、例えばドデシル硫酸ナトリウム（S D S ) 、セチルトリメチルアンモ -ゥムブロマイド（C TA B ) 等が挙げられるが、これらは強力なタンパク質変性作用を有するので、後の工程、例えば免疫沈降法等の抗体を用いる工程における抗体との反応性を考慮して、穏やかな界面活性剤、例えば C HA P S等の両イオン性界面活性剤や T r i t o n

X - 1 0 0等の非イオン性界面活性剤を用いることが好ましい。

( 3 - 3 ) 得られた細胞タンパク質画分中に存在する L D L受容体タンパク質を免疫沈降させる工程（工程 3— 3 ) 。

本工程も通常、当分野で実施される免疫沈降法と同様にして実施することができる。すなわち、 L D L受容体タンパク質に特異的に結合する抗体ならぴにセファロース等の担体が結合しているプロティン Aやプロティン G等の抗体に特異的に結合する物質を用い、免疫沈降物を得る。本発明において使用し得る抗体としては LDL受容体タンパク質を特異的に認識し得る抗体であれば特に限定されなレ、が、その種類や濃度、処理条件等は実施する実験条件に応じて適宜設定することが好ましい。

(3-4) 免疫沈降物中の LDL受容体タンパク質の量を測定する工程（工程 3 -4) 。

本工程も、免疫沈降物中の L D L受容体タンパク質の量を測定することが可能な方法であれば任意の方法が利用できる。例えば上記の工程 3-3で調製した免疫沈降物を電気泳動に付し、オートラジオグラフィーを行う。デンシトメーターで放射活性の強きを測定し、免疫沈降物中の LDL受容体タンパク質を定量する。

LDL受容体は、およそ 12 OKDaの前駆体（未成熟型）とおよそ 16 OK D aの糖鎖付加を受けた成熟型が存在し、その分子量の違いに基づいて未成熟型と成熟型を区別し割合を算出することもできる。

(4) LDL受容体タンパク質の発現量を増加させる物質を選択する工程（工程 4) 。

上記工程 3で得られた結果をもとに、 LDL受容体タンパク質の発現量を増加させる物質を選択する。 LDL受容体は糖鎖付加され、成熟型として細胞膜表面で発現している。従って、高脂血症への適用や血中脂質低下剤としての用途を想定した場合、 LDL受容体タンパク質の発現を促進する化合物、特に成熟型 LD L受容体タンパク質の発現を促進する化合物を選択することが好ましい。すなわち未成熟型 L D L受容体タンパク質量に対する成熟型 L D L受容体タンパク質量の比（以下、成熟型 Z未成熟型一比ともいう）が大きい物質を選択する。

陰性対照としては被検物質非存在下で同様に処理した細胞において測定される LDL受容体タンパク質の発現量、あるいは成熟型 Z未成熟型一比である。スクリーユングするにあたり、陽性対照を設けることが好ましく、例えば式 Aで表される化合物（以下単に化合物 Aともいう）存在下で培養した細胞において測定される LDL受容体タンパク質の発現量、あるいは成熟型 Z未成熟型一比が用いられる。特に好ましくはかかる陽性対照以上の結果を得ることのできる物質を選択する。

上記の方法、ならびに上記以外の方法を使用する場合でも必要な試薬、手法等は公知あるいは商業的に入手可能である。

本発明は、上記スクリーユング方法によって得られ得る L D L受容体タンパク質の発現を促進する化合物またはその薬学上許容される塩を有効成分として含有する、 L D L受容体タンパク質の発現促進剤を提供する。本発明の L D L受容体タンパク質の発現促進剤は、ヒトをはじめゥシ、ゥマ、ィヌ、マウス、ラット等の投与対象となる哺乳動物に対し L D L受容体量を上昇させる作用を有し、血中の L D L量を低減化することができ、従って、高脂血症等の L D Lが悪玉として作用する種々の疾患の予防'治療に有用である。従って、本発明は、上記スクリ一ニング方法によって得られ得る L D L受容体タンパク質の発現を促進する化合物もしくはそのプロドラッグまたはそれらの薬学上許容される塩を有効成分として含有する、血中脂質低下剤ならびに高脂血症治療剤を提供する。尚、本発明において、単に治療剤という場合でも、当該治療には、予防、症状の軽減、症状の減退、進行停止等、あらゆる管理が含まれるものとする。上記スクリーニング方法によって得られ得る L D L受容体タンパク質の発現を促進する化合物としては、具体的には陽性対照として使用し得る化合物 Aをはじめとする上述の式 1化合物が挙げられる。

高脂血症治療剤、ならぴに血中脂質低下剤や L D L受容体タンパク質の発現促進剤を医薬として使用する場合は、一般的な医薬製剤として調製され、経口または非経口的に投与される。

経口的に投与する場合、通常当分野で用いられる投与形態で投与することができる。非経口的に投与する場合には、局所投与剤（経皮剤等）、直腸投与剤、注射剤、経鼻剤等の投与形態で投与することができる。

経口剤または直腸投与剤としては、例えばカプセル、錠剤、ピル、散剤、ドロップ、カシエ剤、座剤、液剤等が挙げられる。注射剤としては、例えば、無菌の溶液又は懸濁液等が挙げられる。局所投与剤としては、例えば、クリーム、軟膏、ローション、経皮剤（通常のパッチ剤、マトリクス剤）等が挙げられる。

上記の剤形は当分野で通常行われている手法により、薬学的に許容される賦形剤、添加剤とともに製剤化され得る。薬学的に許容される賦形剤、添加剤としては、.担体、結合剤、香料、緩衝剤、増粘剤、着色剤、安定剤、乳化剤、分散剤、懸濁化剤、防腐剤等が挙げられる。

薬学的に許容される担体としては、例えば、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タノレク、砂糖、ラタトース、ぺクチン、デキストリン、激粉、ゼラチン、トラガント、メチノレセルロース、ナトリウムカルポキシメチルセルロース、低融点ワックス、カカオパター等が挙げられる。

さらに、錠剤は必要に応じて通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、腸溶性コーティング錠、フィルムコーティング錠あるいは二層錠、多層錠とすることができる。散剤は、薬学的に許容される散剤の基剤と共に製剤化される。基剤としては、タルク、ラグトース、澱粉等が挙げられる。ドロップは水性又は非水性の基剤と一種またはそれ以上の薬学的に許容される拡散剤、懸濁化剤、溶解剤等と共に製剤化できる。カプセルは、有効成分となる化合物を薬学的に許容される担体と共に中に充填することにより製造できる。当該化合物は薬学的に許容される賦形剤と共に混合し、または賦形剤なしでカプセルの中に充填することができる。カシエ剤も同様の方法で製造できる。本発明を座剤として調製する場合、植物油

(ひまし油、オリープ油、ピーナッツ油等）や鉱物油（ワセリン、白色ワセリン等）、ロウ類、部分合成もしくは全合成グリセリン脂肪酸エステル等の基剤と共に通常用いられる手法によって製剤化される。

注射用液剤としては、溶液、懸濁液、乳剤等が挙げられる。例えば、 7溶液、水一プロピレングリコール溶液等が挙げられる。液剤は、水を含んでも良い、ポリエチレンダリコールおよび/またはプロピレンダリコールの溶液の形で製造することもできる。

経口投与に適切な液剤は、有効成分となる化合物を水に加え、着色剤、香料、安定化剤、甘味剤、溶解剤、増粘剤等を必要に応じて加え製造することができる。また経口投与に適切な液剤は、当該化合物を分散剤とともに水に加え、粘重にすることによつても製造できる。増粘剤としては、例えば、薬学的に許容される天然または合成ガム、レジン、メチノレセノレロース、ナトリウムカノレポキシメチノレセルロースまたは公知の懸濁化剤等が挙げられる。

局所投与剤としては、上記の液剤おょぴ、クリーム、エアロゾル、スプレー、粉剤、ローション、軟膏等が挙げられる。上記の局所投与剤は、有効成分となるィ匕合物と薬学的に許容される希釈剤およぴ担体と混合することによつて製造できる。軟膏およびクリームは、例えば、水性または油性の基剤に増粘剤および Zまたはゲル化剤を加えて製剤化する。該基剤としては、例えば、水、液体パラフィン、植物油等が挙げられる。增粘剤としては、例えばソフトパラフィン、ステアリン酸アルミニウム、セトステアリルアルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ラノリン、水素添加ラノリン、蜜蝶等が挙げられる。局所投与剤には、必要に応じて、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プ口ピル、クロロタレゾール、ベンザルコニゥムク口リド等の防腐剤、細菌增殖防止剤を添加することもできる。ローションには、水性又は油性の基剤に、一種類またはそれ以上の薬学的に許容される安定剤、懸濁化剤、乳化剤、拡散剤、増粘剤、着色剤、香料等を加えることができる。

投与量、投与回数は使用する化合物の種類、患者の症状、年齢、体重、投与形態等によって異なるが、例えば式 1で表される化合物を有効成分として含める場合であれば、経口投与する場合には、通常は成人に対し 1日あたり約 1〜約 5 0 O m gの範囲、好ましくは約 1〜約 1 0 0 m gの範囲を 1回または数回に分けて投与することができる。注射剤として投与する場合には約 0 . 1〜約 1 0 O m g の範囲、好ましくは約 0 . 1〜約 1 O m gの範囲を 1回または数回に分けて投与することができる。

実施例

以下、本発明を実施例にて具体的且つ詳細に説明するが、本発明はこれらに何ら限定されるものではない。又、本実施例では下記式 Aで表される化合物 Aを用いて、その LDL受容体（以下 LDLR、あるいは LD L— Rともいう）タンパク質発現促進作用を確認した。

実施例 1 ：培養肝細胞株を用いたィンビトロでの被験物質の L D L受容体タンパク質量および mRNA量に対する影響

①タンパク質量への影響

[方法]

H e p G 2細胞を 1 0% L i p o p r o t e i n d e f i c i e n t s e r um (LPDS) 1. 5 μ g /m 1 25—ヒドロキシコレステロ一ノレおょぴ各種濃度の被験物質（化合物 A) あるいは対照としての DMSO (化合物 A の添加量と等量）を含む DMEMZF— 1 2培地中で培養した。 24時間培養後、細胞を細胞溶解液（ 1 25 mM T r i s— HC 1 (pH7. 9) ， 2 mM C a C 1 ₂, 1%T r i t o nX- 1 00, プロテアーゼ阻害剤）で溶解し、 1 2 000 r pm、 4°Cで遠心分離した。遠心後の上清を細胞タンパク質画分とした。タンパク質濃度を測定し、サンプル間のタンパク質濃度をそろえ、ィムノブロッティング法にて LDL受容体タンパク質量を評価した。実験条件を図 1 (A) に示す。

3

結果を図 1 (B) に示す。 2 5—ヒドロキシコレステロールの添加により、 L DL受容体遺伝子の転写が抑制された条件下、化合物 Aは LDL受容体タンパク質量の発現を 0. 1 の処置濃度より上昇させた。

② mRNA量への影響 [方法]

He p G2細胞を 1 0%LPDS、 1. 5 μ g/m 1 25—ヒドロキシコレステロールおよび上記①で十分に LDL受容体タンパク質の発現を引き起こすことが確認された量の被験物質（化合物 A； 10 ^M) を含む DMEMZF— 1 2 培地中で培養を開始した。培養開始後、経時的に TR I z o 1 r e a g e n t (G I B CO社）を用いて全 RNAを調製した。これを用いて、 T a qma n PCR (AB I PR I SM 7700 s e q u e n c e d e t e c t o r (A l i e d B i o t e c h n o l o g y社） ) にて LDL受容体 mR NA量を定量し、 βーァクチン mRNAの発現量に対する比として結果を表した ₍ 実験条件を図 1 (A) に示す。

[：結果] '

結果を図 1 (C) に示す。 25—ヒドロキシコレステロールの添加により、 L D L受容体遺伝子の転写が抑制された条件下、化合物 Aは LD L受容体 mRNA を誘導しなかった。

以上の結果より、化合物 Aは、肝細胞（インビトロ）中の LDL受容体 mRN A発現に変化を与えることなく、 L D L受容体タンパク質の発現を上昇させることを確認した。

実施例 2.：培養肝細胞株を用いたィンビトロでの被験物質の L D L受容体タンパク質量およぴ m R N A量に対する影響（スタチン系薬剤との対比）

①タンパク質量への影響

[方法]

He pG2細胞を 1 0 % L P D Sおよび各種濃度の被験物質（化合物 A) 、スタチン系薬剤の代表薬物であるアト口パスタチン（a t o r v a s t a t i n ; 各種濃度）あるいは対照としての DMSO (化合物 Aあるいはアト口パスタチンの添加量と等量）を含む DMEMZF— 1 2培地で処置し、 24時間の培養後、細胞を実施例 1①と同様にして可溶ィヒし細胞タンパク質画分を調製し、ィムノブ口ティング法にて LDL受容体タンパク質量を評価した。実験条件を図 2 (A) に示す。

C結果 3

結果を図 2 (B) に示す。培地中のリポタンパク質を除いた、スタチン系の薬剤が LDL受容体の発現を引き起こすことが良く知られている条件で、化合物 A は、 LDL受容体タンパク質量を上昇させた。アト口パスタチンの効果を調べたところ発現上昇が認められた。

② mRNA量への影響

は法 3

. He p G2細胞を 1 0 % L P D Sおよび実施例 1①で十分に L D L受容体タンパク質の発現を引き起こすことが確認された量の被験物質（化合物 A ； 1 0 μ Μ) あるいはアト口パスタチン（1 / Μ) を含む培地中で培養を開始した。培養開始後、経時的に RN Αを調製した。調製した RNAを用いて、 T a qma n PCR法にて LDL受容体 mRNA量を定量し、 βーァクチン mRN Αの発現量に対する比として結果を表した。

[結果]

結果を図 2 (C) に示す。培地中のリポタンパク質を除き、スタチン系の薬剤が LDL受容体の発現を引き起こすことが良く知られている条件で、化合物 Aは、処置後 8時間で、 LDL受容体 mRNAに対して弱い転写活性化を示したがァトロバスタチンと比較して弱いものであった。 24時間の処置では、この作用は認められなかった。

実施例 3 ：培養細胞株を用いたインビトロでの被験物質の LDL受容体 mRN A の安定性に対する影響

[方法]

He pG2細胞を 1 0%LPDS、 5 μ g/m 1 ァクチノマイシン D (Ac t i n omy c i n D) および被験物質（化合物 A； 1 0 μΜ) 、あるいは陽性対照として 1 6 0 ηΜのホルポーノレミリステートアセテート（ΡΜΑ； LDL 受容体の mR Ν Α安定化作用を有することが文献的に公知）を含む培地で処置し、経時的に RNAを調製した。また、コントロールとしては無処置群を用いた。調製した RNAを用いて、 SYBR G r e e i^ (AB I P I SM 770 0 s e q u e n c e d e t e c t o r (Ap p l i e d B i o t e c hn o l o g y社） ) にて LDL受容体 mRNA量を定量し、 GAPDH mRNA の比として結果をあらわした。実験条件を図 3 (A) に示す。

PMAは、 LDL受容体 mRNAの安定化を示した（図 3 (C) ) 1) 化合物 Aは影響を及ぼさなかった（図 3 (B) ) 。

実施例 4 ：ハムスターを用いたインビポでの被験物質の LDL受容体タンパク質量および mRNA量に対する影響

①タンパク質量への影響

[方法]

ハムスターを、普通食飼育下で、 7日間化合物 Aを 3、 1 Omg/k g/d a y経口投与した。対照には、化合物 Aの代わりに、化合物 Aの調製に用いた媒体 (Ve i c l e ;メチルセルロース溶液）のみを投与した。 8ョ目に解剖し、月刊蔵を摘出し、それにホモジナイズバッファー（20mM T r i s—HC l

(pH8) , ImM C a C 1₂, 1 50 mM N a C 1 ) を加え、ホモジナイズした。ホモジネートを 8000 X g、 1 0分、 4°Cで、遠心し、その上清を 1 00， 000 x g、 60分、 4。Cで遠心した沈殿を膜画分とした。これに、ホモジナイズパッファーを添加し、 100， 000 x g、 20分、 4 °Cで遠心し、洗浄の後、懸濁用バッファー（1 25mM T r i s -ma l e a t e (pH6) ， ImM C a C 12， 1 60 mM N a C' 1、 1%T r i t o n X— 1 00) で懸濁し、このタンパク濃度を測定の後、サンプル間のタンパク量をそろえ、ィムノプロッティング法にて LD L受容体タンパク質量を評価した。実験条件を図 4 (A) に示す。

[結果]

化合物 Aは LDL受容体タンパク質量を上昇させた（図 4 (B) ：上段のィムノプロッテイング像）。

② mRNA量への影響

[方法]

上記実施例 4①で調製した肝臓より、グァニジンチオシァネート ·フエノール 'クロ口ホルム（AGPC) 法で; RNAを調製した。調製した RNAを用いて T a qma n P CR法にて LD L受容体 mRNA量を定量し、 —ァクチン m RNAとの比で結果を示した。実験条件を図 4 (A) に示す。

c結果:]

化合物 Aは、 LDL受容体 mRNA量に対して影響を及ぼさなかった（図 4 (C) ) 。

実施例 5 ：培養肝細胞株を用いたインビトロでの被験物質の LDL受容体タンパク質合成に対する影響

は法 3

He pG2細胞を 10%LPDS、 1. 5 μ g/m 1 25—ヒドロキシコレステロールおよぴ被験物質（化合物 A； 1 0 μΜ) を含むメチォニン ·システィン不含 DMEM培地で処置し、 4時間培養後、細胞内で生合成されるタンパク質の標識を目的として³⁵ S—メチォニン ·システィンを同培地に添加し、処置を続けた。 ³⁵ S—メチォニン · システィンを添加後、 0、 1、 2、 3時間後に細胞を回収し、洗浄後、 1 00 / 1の溶解液（5 OmM HE PES— N a (pH 7. 5) , 0. 1M Na C 1 , 2%CHAP S, 2 mM C a C 1 ₂, 2. 5 mM Mg C 1 ₂) で細胞を溶解させた。 4°C、 1 5000 r p m、 30分の遠心の後、調製した細胞タンパク質画分に 1 Z 9容の 10 % S D S溶液を添加し、

5分間、 9 5 °Cで処置した。これに、 9倍容の HB Sバッファー（50mM H

EPES-Na (pH7. 4) ， 0. 1M Na C 1 , 1%T r i t o nX- 1 00) を添加し、 LDL受容体タンパク質を抗 LDL受容体抗体（あら力じめ反応性が確認されている市販の抗体）を用いて免疫沈降させ、電気泳動後オートラジオグラフィーにて合成された L D L受容体タンパク質量を評価した。分子量 1 2 OKD a付近のものを未成熟型 LDL受容体、分子量 16 OKD a付近のものを成熟型 LDL受容体とした。対照には、化合物 Aのかわりに DMSOを等量投与した。実験条件を図 5 (A) に示す。

1：結果〕

化合物 A処置をすると、対照と比べて、成熟型の LDL受容体タンパク質の合成量が経時的に上昇した。一方、未成熟型の方は、 ³⁵S—メチォニン .システインを添加 2時間後をピークとした生合成増大が鞸められた。こちらのほうも、対照と比べて、増大していた（図 5 (B) ) 。成熟型と未成熟型の比の経時的変動を示したものが、図 5 (C) であるが、化合物 A処置で、対照より増大するということが判った。

この結果より、化合物 Aは、成熟型 LDL受容体の生合成を促進することが判つた。

実施例 6 ：培養肝細胞株を用いたィンビトロでの被験物質の L D L受容体タンパク質成熟過程に対する影響

[方法]

H e p G 2細胞を 10%LPDS、 1. 5 g/m 1 25—ヒドロキシコレステロールおよぴ被験物質（化合物 A； 10 ^M) を含む培地で処置し、 4時間培養後、 ³⁵S—メチォニン 'システィンを 30分間添加し、細胞内生合成タンパク質のパルス標識を行った。その後、 ³⁵S—メチォニン . システィンを含まない培地に戻し、経時的に細胞を可溶化し細胞タンパク質画分を調製した。調製した細胞タンパク質画分を用いて、 LDL受容体タンパク質を実施例 5と同様に免疫沈降させ、電気泳動後ォートラジォダラフィ一にて未成熟型 ·成熟型 LD L受容体タンパク質量を評価した。対照には、化合物 Aのかわりに DMSOを等量投与した。実験条件を図 6 (A) に示す。

[結果]

本処理条件では、未成熟型の LDL受容体タンパク質については、化合物 Aと対照群に差は認められなかった。一方で、成熟型への変換は、化合物 A処置で増大し、未成熟型と成熟型の比を算出すると、化合物 Aは、その比を増大させた。このことから、化合物 Aは、 LDL受容体タンパク質の成熟化過程を上昇させることが明らかとなった（図 6 (B) 〜図 6 (D) ) 。

実施例 7 ：培養肝細胞株を用いたィンビトロでの被験物質の S R— B I、インスリン受容体 /3サブュニット発現に対する効果

法 3

He pG 2細胞を 10 % L P D Sおよぴ被験物質（化合物 A) を含む培地で処置し、 24時間培養後、細胞を可溶化し細胞タンパク質画分を調製した。細胞を可溶ィ匕し細胞タンパク質画分を調製した。調製した細胞タンパク質画分を用いて、ィムノプロッティング法にて SR— B Iタンパク質量おょぴインスリン受容体サブユニットタンパク質量を評価した。対照には、化合物 Aのかわりに DMSO を等量投与した。実験条件を図 7 (A) に示す。

[結果 3

化合物 Aは、 S R— B Iタンパク質量およびィンスリン受容体 βサプュ二ットタンパク質量に対して影響を示さなかった（図 7 (Β) 、図 7 (C) ) 。このこと力ら、化合物 Αの LDL受容体発現に対する作用は、特異性の高いものであることが明らかとなった。

実施例 8 ：ハムスターを用いたインビボでの被験物質の SR—B I発現に対する効果

[方法]

ハムスターを普通食飼育下で、 73間化合物 Aを 3、 1 Omg/k g/d a y 経口投与した後、肝臓より実施例 4と同様にして、膜画分を調製した。調製した膜画分を用いてィムノブロッテイング法にて SR— B Iタンパク質量を評価した。対照には、化合物 Aのかわりに、化合物 Aの調製に用いた媒体（Ve h i c 1 e ；メチルセルロース溶液）のみを投与した。

[結果]

化合物 Aは、 SR— B Iタンパク質量に対しては影響を示さなかった（図 8) 。実施例 9 ：ハムスターを用いた被験物質の血清脂質低下作用についての検討

[方法]

ハムスターを普通食飼育下で、 7日間化合物 Aを 3、 1 Omg/k g/d a y 経口投与した後、血清コレステロール量を測定した。

[結果]

化合物 Aは、顕著な血清コレステロール低下作用を示した（図 4 (B) の下段、図 8の下段：血清総コレステロール低下率）。

実施例 10 ：スタリ一ユング方法

インビトロにおいて、 LDL受容体タンパク量上昇作用があるかをィムノプロッティング法等にて確認する。必要に応じて、 mRNAに対する影響（PCR法や、ノザンプロット法等） '他のタンパク質に対する影響（ィムノブロッテイング法等）を確認する。タンパク質合成以降の過程に影響があるかについては、

³⁵S—メチォニン ·システィンなどを用いた方法にて確認する。血清脂質低下作用は、各種動物（例えばゥサギ ·ハムスターなど）を用いたモデル（普通食下、高脂肪食下など）で評価する。インビポにおいて、 LDL受容体タンパク質合成以降に作用するかの確認は、ィムノブロッティング法などで L D L受容体タンパク質発現に対する影響を、 PCR法などで mRNAに対する影響を検討する。今までに、 LDL受容体は mRNAに転写され、タンパク質に翻訳された段階では、未成熟で、さらに糖鎖付加を受けて成熟型（機能的な） LDL受容体となることが明らかとなっているので、 LDL受容体の翻訳後に関与する因子としては、 Da b l， D a b 2, a b 1 b, a b 8, Ra f t等が考えられている。従って、こういった因子に作用することによっても翻訳効率の上昇 Z膜表面への輸送の効率化成熟化の効率化 Z分解の抑制などが変化し L D L受容体タンパク質の発現增加が生じることが考えられる。

産業上の利用可能性

本発明によれば、転写活性化経路に依存することなく LDL受容体の mRNA 転写後のタンパク質発現プロセスを制御することによって LDL受容体タンパク質の発現を促進することが可能な化合物ならびにそのような化合物をスクリー二ングする方法が提供され、該化合物は新しい作用機序を有する高脂血症治療剤等として有用である。

Claims

請求の範囲

1 . 式 1

(式中、 R ¹は水素原子、アルキル基、置換アルキル基、ァルケ-ル基、置換ァルケニル基、ァノレキ-ル基、置換アルキ-ル基、シクロアルキル基、または置換シクロアルキル基を表す。 ) または式

[式中、 Wは水素原子または式一 O R ^a (R ^aはアルキル基、置換アルキル基、アルケニル基、置換アルケニル基、アルキニル基、または置換アルキュル基を表す。 ) を表す。 ] で示される基を表す。 Zは結合手、一 NH—、炭素原子数 1もしくは 2のァノレキレン基または一 CH- C H—を表す。 Yはアルキル基、置換ァルキル基、シクロアルキル基、置換シクロアルキル基、芳香族基または置換芳香族基を表す。 Bはアルキル基、置換アルキル基、アルケニル基、置換アルケニル基、シクロアルキル基、置換シクロアルキル基、芳香族基、または ft換芳香族基を表す。〕で表されるナフチリジン誘導体もしくはそのプロドラッグまたはそれらの薬学上許容される塩を有効成分として含有する、 L D L受容体タンパク質の発現促進剤。

2 . 式 1で表されるナフチリジン誘導体が式 2

R ¹は水素原子、アルキル基、置換アルキル基、アルケニル基、置換アルケニル基、アルキ-ル基、置換アルキニル基、シクロアルキル基、または置換シクロアルキル基を表す。

R ²は水素原子または低級アルキル基を表す。

R ³は低級アルキル基を表す。

Z ^aは、

1 ) 一 D ¹— Q

[式中、 D ¹は結合手または不飽和結合を含んでいてもよい炭素原子数:!〜 8 の 2価の炭化水素基を表し、 Qは水酸基、カルボキシル基、ヘテロァリール基、置換へテロアリール基、または式：一 NR ⁴ R ^S (R ⁴および R ⁵は互いに独立して、水素原子、低級アルコキシ基、低級アルキル基、置換低級アルキル基、シク口アルキル基またはァラルキル基を表すか、または R ⁴およぴ: ⁵が互レヽに結合してそれらが結合する窒素原子とともに、環中にさらに式：一 NR ⁸— （R ⁸は水素原子、低級アルキル基、置換低級アルキル基、フエニル基、置換フエニル基、ベンジル基、置換べンジル基、または低級アルコキシカルボ二ル基を表す。 ) で表される基を 1個、または酸素原子 1個を含んでもよい、環を構成する炭素原子数が 4〜 8個の飽和環状アミノ基を表す。 ) を表す。伹し、 Qがへテロァリール基または換へテロアリール基である場合は、 D ¹は結合手とはならない。 ] または、

2) -D²-M-E-W .

[式中、 D ²は結合手または不飽和結合を含んでいてもよい炭素原子数 1〜 8 の 2価の炭化水素基を表し、 Mは酸素原子、硫黄原子、スルフィエル基もしくはスルホ-ル基、または式一 NHC (=0) ―、一 C (=O) NH—もしくは一 N R⁶— （R ⁶は水素原子もしくは低級アルキル基を表す。 ) で表される基を表し、 Eは結合手または不飽和結合を含んでいてもよい炭素原子数 1〜 8の 2価の炭化水素基を表し、 Wは水酸基、カルボキシル基、ヘテロァリール基、置換へテロアリール基、または式：一 NR⁴R⁵ (R⁴および R⁵は前記の意味を表す。 ) で表される基を表す。但し、 Wが水酸基、カルボキシル基もしくは式一 NR⁴R⁵で表される基の時は Eは結合手とはならない。 ] を表す。〕で表される化合物である、請求の範囲 1記載の LD L受容体タンパク質の発現促進剤。

3. ナフチリジン誘導体が下記式 A

〔式中、 n— Buは n—プチル基を、 i一 P rはイソプロピル基を表す。〕で表される化合物である、請求の範囲 1記載の LD L受容体タンパク質の発現促進剤。

4. LDL受容体タンパク質の発現促進が、 0 受容体の1111 八転写後のタンパク質発現プロセスを制御することによつて誘導されるものである、請求の範囲 1〜 3のいずれかに記載の L D L受容体タンパク質の発現促進剤。

5. さらに、 LDL受容体の遺伝子発現に影響を与えないことを特徴とする請求の範囲 4記載の L D L受容体タンパク質の発現促進剤。

6. LDL受容体の m R N A転写後のタンパク質発現プロセスを制御することによって LDL受容体タンパク質の発現を促進する化合物のスクリーニング方法であって、以下の工程を含むスクリーニング方法：

(1) LDL受容体発現細胞を使用し、

(3) 被検物質存在下または非存在下で培養した LDL受容体発現細胞の LDL 受容体タンパク質発現量を測定し、

7. LDL受容体タンパク質の未成熟型と成熟型の量を測定し、未成熟型に対する成熟型の比が大きい物質を選択する工程をさらに含む請求の範囲 6記载のスクリーユング方法。

8. LD L受容体の niRN A転写後のタンパク質発現プロセスを制御することによって L D L受容体タンパク質の発現を促進する化合物のスクリ一ユング方法であって、以下の工程を含むスクリーニング方法：

(1) LDL受容体発現細胞を使用し、

(5) 得られた細胞タンパク質画分中に存在する L D L受容体タンパク質を免疫沈降させ、 (6) 免疫沈降物中の LDL受容体タンパク質の量を測定し、

9. 免疫沈降物中の未成熱型 LDL受容体タンパク質と成熟型 LDL受容体タンパク質の量を測定し、未成熟型 L D L受容体タンパク質量に対する成熟型 LDL 受容体タンパク質量の比が大きい物質を選択する工程をさらに含む請求の範囲 8 記載のスクリ一ング方法。

10. LDL受容体の niRNA転写後のタンパク質発現プロセスを制御することによって L D L受容体タンパク質の発現を促進する化合物のスクリ一ユング方法であって、以下の工程を含むスクリ一ユング方法：

(1) LDL受容体発現細胞を使用し、

(4) 放射性同位元素を含まない培養液に交換後、経時的に一定量の細胞を採取し、細胞を可溶ィヒした後、細胞タンパク質画分を調製し、

(5) 得られた細胞タンパク質画分中に存在する LD L受容体タンパク質を免疫沈降させ、

(6) 免疫沈降物中の LDL受容体タンパク質の量を測定し、

11. 免疫沈降物中の未成熟型 LDL受容体タンパク質と成熟型 LDL受容体タンパク質の量を測定し、未成熟型 LDL受容体タンパク質量に対する成熟型 LD L受容体タンパク質量の比が大きい物質を選択する工程をさらに含む請求の範囲 10記載のスクリ一ユング方法。

12. LDL受容体の転写抑制因子が 25—ヒドロキシコレステロールである、請求の範囲 6、 8および 10のいずれかに記載のスクリ一エング方法。

13. 陽性対照として、請求の範囲 3に記載される式 Aで表される化合物を用いることを特徴とする請求の範囲 6、 8および 10のいずれかに記載のスクリー二ング方法。

14. LDL受容体タンパク質の発現量を増加させる物質を選択する工程が、請求の範囲 3に記載される式 Aで表される化合物が有する LD L受容体タンパク質発現促進活性以上の活性を有する物質を選択する工程である、請求の範囲 6、 8 および 10のいずれかに記載のスクリーユング方法。

15. 未成熟型 LDL受容体タンパク質量に対する成熟型 LDL受容体タンパク質量の比が大きい物質を選択する工程が、請求の範囲 3に記載される式 Aで表される化合物を添加した場合に得られる比以上の値である物質を選択する工程である、請求の範囲 7、 9および 11のいずれかに記載のスクリーニング方法。

16. 請求の範囲 6〜15のいずれかに記載のスクリーニング方法よつて得られる、 LDL受容体タンパク質の発現を促進する化合物もしくはそのプロドラッグまたはそれらの薬学上許容される塩を有効成分として含有する、 LD L受容体タンパク質の発現促進剤。

17. 請求の範囲 6〜15のいずれかに記載のスクリーユング方法によって得られる、 LDL受容体タンパク質の発現を促進する化合物が、請求の範囲 1に記載される式 1で表されるナフチリジン誘導体もしくはそのプロドラッグまたはそれらの薬学上許容される塩である、請求の範囲 16記載の LDL受容体タンパク質の発現促進剤。

18. 請求の範囲 6〜15のいずれかに記載のスクリーニング方法によって得られる、 LDL受容体タンパク質の発現を促進する化合物もしくはそれらのプロドラッグまたはそれらの薬学上許容される塩を有効成分として含有する、血中脂質低下剤。

19. 請求の範囲 6〜15のいずれかに記載のスクリーニング方法によって得られる、 LDL受容体タンパク質の発現を促進する化合物もしくはそのプロドラッグまたはそれらの薬学上許容される塩を有効成分として含有する、高脂血症治療剤。

2 0 . 式 1

[式中、 Wは水素原子または式 O R ^a (R &はアルキル基、置換アルキル基、アルケニル基、置換アルケニル基、アルキニル基、または置換アルキニル基を表す。 ) を表す。 ] で示される基を表す。 Zは結合手、一 NH—、炭素原子数 1もしくは 2のアルキレン基または一 C H = C H—を表す。 Yはアルキル基、置換ァルキル基、シクロアルキル基、置換シクロアルキル基、芳香族基または置換芳香族基を表す。 Bはアルキル基、置換アルキル基、アルケニル基、置換アルケニル基、シクロアルキル基、置換シクロアルキル基、芳香族基、または置換芳香族基を表す。〕で表されるナフチリジン誘導体もしくはそのプロドラッグまたはそれらの薬学上許容される塩の有効量を投与対象に投与することを含む、該対象内における L D L受容体タンパク質の発現を促進する方法。

21. 式 1で表されるナフチリジン誘導体が式 2

Yはアルキル基、置換アルキル基、シクロアルキル基、置換シクロアルキル基芳香族基または置換芳香族基を表す。

R¹は水素原子、アルキル基、置換アルキル基、アルケニル基、置換アルケニル基、アルキニル基、置換アルキニル基、シクロアルキル基、または置換シクロアルキル基を表す。

R ²は水素原子または低級アルキル基を表す。

R ³は低級アルキル基を表す。

Z^aは、

1) 一 D¹— Q

[式中、 D¹は結合手または不飽和結合を含んでいてもよい炭素原子数 1〜8 の 2価の炭化水素基を表し、 Qは水酸基、カルボキシル基、ヘテロァリール基、置換へテロアリール基、または式：一 NR⁴R⁵ (R⁴および R⁵は互いに独立して、水素原子、低級アルコキシ基、低級アルキル基、置換低級アルキル基、シク口アルキル基またはァラルキル基を表すか、または R ⁴および: ⁵が互いに結合してそれらが結合する窒素原子とともに、環中にさらに式：一 NR⁸— （R⁸は水素原子、低級アルキル基、置換低級アルキル基、フエニル基、置換フエニル基、ベンジル基、置換べンジル基、または低級アルコキシ力ルポ二ル基を表す。 ) で表される基を 1個、または酸素原子 1個を含んでもよい、環を構成する炭素原子数が 4〜 8個の飽和環状アミノ基を表す。 ) を表す。但し、 Qがへテロァリール基または置換へテロアリール基である場合は、 D ¹は結合手とはならない。 ] または、

2) — D²— M— E—W

[式中、 D ²は結合手または不飽和結合を含んでいてもよい炭素原子数 1〜 8 の 2価の炭化水素基を表し、 Mは酸素原子、硫黄原子、スルフィエル基もしくはスルホニル基、または式一 NHC (=0) 一、一 C (=O) NH—もしくは一 N R⁶— （R ⁶は水素原子もしくは低級アルキル基を表す。）で表される基を表し、 Eは結合手または不飽和結合を含んでいてもよい炭素原子数 1〜 8の 2価の炭化水素基を表し、 Wは水酸基、力ルポキシル基、ヘテロァリール基、置換へテロアリール基、または式：一NR⁴R⁵ (R ⁴および R ⁵は前記の意味を表す。 ) で表される基を表す。伹し、 Wが水酸基、力ルポキシル基もしくは式一NR⁴R⁵で表される基の時は Eは結合手とはならない。 ] を表す。 ] で表される化合物である、請求の範囲 20記載の方法。

22. ナフチリジン誘導体が下記式 A

〔式中、 n— B uは n—プチル基を、 i— P rはイソプロピル基を表す。〕で表される化合物である、請求の範囲 20記載の方法。

23. LDL受容体タンパク質の発現促進剤を製造する為の、式 1

[式中、 Wは水素原子または式一 O R ^a (R ^aはアルキル基、置換アルキル基、アルケニル基、置換アルケュル基、アルキニル基、または置換アルキ-ル基を表す。 ) を表す。 ] で示される基を表す。 Zは結合手、一NH—、炭素原子数 1もしくは 2のアルキレン基または一 CH= C H—を表す。 Yはアルキル基、置換ァルキル基、シクロアルキル基、置換シクロアルキル基、芳香族基または置換芳香族基を表す。 Bはアルキル基、置換アルキル基、アルケニル基、置換アルケニル基、シクロアルキル基、置換シクロアルキル基、芳香族基、または置換芳香族基を表す。〕で表されるナフチリジン誘導体もしくはそのプロドラッグまたはそれらの薬学上許容される塩の使用。

2 4 . 式 1で表されるナフチリジン誘導体が式 2

R ¹は水素原子、アルキル基、置換アルキル基、アルケニル基、置換アルケニル基、. アルキニル基、置換アルキニル基、シクロアルキル基、または置換シクロアルキル基を表す。

R ²は水素原子または低級アルキル基を表す。

R ³は低級アルキル基を表す。

Z ^aは、

1 ) 一 D ¹— Q

[式中、 D ¹は結合手または不飽和結合を含んでいてもよい炭素原子数 1〜 8 の 2価の炭化水素基を表し、 Qは水酸基、カルボキシル基、ヘテロァリール基、置換へテロアリール基、または式：—N R ⁴ R ⁵ (R ⁴および R ⁵は互いに独立して、水素原子、低級アルコキシ基、低級アルキル基、置換低級アルキル基、シク口アルキル基またはァラルキル基を表すか、または R ⁴および R ⁵が互いに結合してそれらが結合する窒素原子とともに、環中にさらに式：一 N R ⁸— (R ⁸は水素原子、低級アルキル基、置換低級アルキル基、フエニル基、置換フエニル基、ベンジル基、置換べンジル基、または低級アルコキシ力ルポ二ル基を表す。 ) で表される基を 1個、または酸素原子 1個を含んでもよい、環を構成する炭素原子数が 4〜 8個の飽和環状アミノ基を表す。 ) を表す。但し、 Qがへテロァリール基または置換へテロアリール基である場合は、 D ¹は結合手とはならない。 ] または、

2) -D²-M-E-W

[式中、 D ²は結合手または不飽和結合を含んでいてもよい炭素原子数 1〜 8 の 2価の炭化水素基を表し、 Mは酸素原子、硫黄原子、スルフィニル基もしくはスルホニル基、または式一 NHC (=〇）一、一 C (=O) NH—もしくは一 N R⁶— (R⁶は水素原子もしくは低級アルキル基を表す。）で表される基を表し、 Eは結合手または不飽和結合を含んでいてもよい炭素原子数 1〜 8の 2価の炭化水素基を表し、 Wは水酸基、カルボキシル基、ヘテロァリール基、置換へテロアリール基、または式：一 NR⁴R⁵ (R ⁴および R ⁵は前記の意味を表す。 ) で表される基を表す。但し、 Wが水酸基、力ルポキシル基もしくは式一NR⁴R⁵で表される基の時は Eは結合手とはならない。 ] を表す。〕で表される化合物である、

請求の範囲 23記載の使用。

25. ナフチリジン誘導体が下記式 A

〔式中、 n— Buは n—プチル基を、 i一 P rはイソプロピル基を表す。〕で表される化合物である、請求の範囲 23記載の使用。

26. 請求の範囲 6〜15のいずれかに記載のスクリーニング方法によって得られる、 LDL受容体タンパク質の発現を促進する化合物もしくはそのプロドラッグまたはそれらの薬学上許容される塩の有効量を投与対象に投与することを含む、該対象内における L D L受容体タンパク質の発現を促進する方法。

27. LDL受容体タンパク質の発現促進剤を製造する為の、請求の範囲 6〜1 5のいずれかに記載のスクリーユング方法によって得られる、 LDL受容体タンパク質の発現を促進する化合物もしくはそのプロドラッグまたはそれらの薬学上許容される塩の使用。

28. 請求の範囲 6〜15のいずれかに記載のスクリーニング方法によって得られる、 LDL受容体タンパク質の発現を促進する化合物もしくはそのプロドラッグまたはそれらの薬学上許容される塩の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、血中脂質を低下する方法。

29. 血中脂質低下剤を製造する為の、請求の範囲 6〜15のいずれかに記載のスクリーニング方法によって得られる、 LDL受容体タンパク質の発現を促進する化合物もしくはそのプロドラッグまたはそれらの薬学上許容される塩の使用。

30. 請求の範囲 6〜15のいずれかに記載のスクリーニング方法によって得られる、 LDL受容体タンパク質の発現を促進する化合物もしくはそのプロドラッグまたはそれらの薬学上許容される塩の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、高脂血症の治療方法。

31. 高脂血症治療剤を製造する為の、請求の範囲 6〜15のいずれかに記載のスクリーニング方法によって得られる、 LDL受容体タンパク質の発現を促進する化合物もしくはそのプロドラッグまたはそれらの薬学上許容される塩の使用。