WO2005015217A1

WO2005015217A1 - 測定対象物測定器具、測定装置および測定方法

Info

Publication number: WO2005015217A1
Application number: PCT/JP2004/011792
Authority: WO
Inventors: Akira Miike; Haruki Tsunoda
Original assignee: Kyowa Medex Co., Ltd.
Priority date: 2003-08-11
Filing date: 2004-08-11
Publication date: 2005-02-17
Also published as: EP1662257A4; US20070031286A1; JPWO2005015217A1; EP1662257A1; CN1833169A

Abstract

本発明によれば、試料中の測定対象物が展開液の毛管流により移動可能であるような支持体上に試料添加部位（Ｓ）と検出部位（Ｑ）とを有する測定対象物測定用器具であって、該検出部位は２つの電極に挟まれた圧電振動子を有し、該圧電振動子上にはトラッパーＡ（ｃ１）または測定対象物類似物（ｃ１’）が固定されており、該支持体上には、標識化バインダー（ｂ１）が展開液の毛管流により移動可能であるように保持されている標識化バインダー保持部位（ＢＲ）を有することを特徴とする測定対象物測定用器具および該器具を用いる試料中の測定対象物の定量方法が提供される。

Description

明細書

測^ f象物測定器具、測定装置および測定方法

技術分野

本発明は、生体試料、食品、土壌等の分析対象試料に含有される測定対象物を測定するための器具、装置および方法に関する。

Ά

試料中の測定対象物を測定するための方法の 1つに、

による測定法がある。ィムノクロマトグラフィーは、その測^理から、フロースルー型およびラテラルフロー型に分類されるが、近年では、ラテラルフロー型のィムノクロマトグラフィーが主流となっている。ラテラルフロー型のィムノクロマトグラフィ一においては、例えば同一平面上に存在する、互いに毛管流により連絡可能な第 1部分および第 2部分からなるィムノクロマトグラフィ一用装置を用いる試料中の測定対象物の測定法が報告されている（例えば、特開平 1— 6 3 8 6 5号公報、特閧平 1 0 - 7 3 5 9 2号公報を参照)。

ここで、該第 1部分は、移動可能なように支持されたトレーサーを含有する試料添加部位であり、該トレ一サ一は、例えば、着色リボソーム、着色重合体ビーズなどの標識で標識された測定対象物に特異的なリガンドからなり、該第 2部分は、固定化された結合剤含有し、該不溶性小胞マ一力一の存否を可視的に検出する部位であり、該結合剤は、測定対象物に特異的であり、第 2部分において結合したトレーサ一が可視化される量で存在する。

また、準可溶性タンパク質の存在下でコロイド粒子標識物質を含浸させ乾燥させたものを含有する第 1部分と、測定対象物およびコロイド粒子標識物質と結合し得る固定化試薬を含有する第 2部分とを含有するィムノクロマトグラフィ一用装置を用いる試料中の測定対象物の測定法も報告されている（例えば、特開平 1— 3 2 1 6 9号公報)。

しかしながら、これらの方法はいずれも、 ,中の測定対象物を可視的に検出する測定方法であるため、定性分析または半定量分析に専ら用いられ、定量分析には適用され得なかった。従って、のィムノクロマトグラフィーによる測定は、その適用範囲が妊娠判定等のごく限られた範囲に限られていた（例えば、特表平 1— 5 0 3 1 7 4号公報を参照)。 —方、水晶振動子等の圧動子を用、る定量分析および定性分析が知られている。本方法は、抗原一抗体間の相互作用や相補的核酸間の相互作用を利用して水晶振動子上に複合体を生成させ、複合体生成に伴う質量変化を水晶振動子の振動数の変化として捉える方法である。これまでも、例えば水晶振動子上に固定化したプロティン Aを用いて試料中の I gGを検出する方法や（例えば、「アナリティカル'ケミストリー (Analytical Chemistry)j₃ ァメリカィ匕学会， 1987年，第 59卷，第 23号， 2760— 2763頁を参照)、水晶振動子上に固定化したプローブ DN Aを用いて試料中の標的核酸を検出する方法等が報告されている（例えば、特開平 1—35269号公報を参照)。

近年、方法の迅速化、多様化の流れから、被の近傍での試料の採取から測定結果の出力までを行うポイントォブケアテスティング（POCT)が盛んになってきており、 P 0 C Tに対応可能な定量分析可能な測定装置および測定方法の開発が望まれている。

発明の開示

本発明の目的は、生体試料等の試料に含まれる測定対象物を迅速かつ簡便に精度よく定量分析するための器具、装置および方法をすることにある。

本発明は、以下の（1)〜（35) に関する。

( 1 ) 試料中の測定対象物が展開液の毛管流により移動可能であるような支持体上に試料添加部位 (S) と検出部位 (Q) とを有する測定対象物測定用器具であって、該検出部位は 2つの βに挟まれた圧電振動子を有し、該圧電振動子上にはトラヅパ一 A (c 1)または測^] "象物類似物（c 1，）が固定されており、該支持体上には、バインダー (b 1)が展開液の毛管流により移動可能であるように保持されているバインダー保持部位（BR) を有することを特徴とする測定対象物測

( 2 ) 該バインダ一保持部位が、該試料添加部位と該検出部位との間に設けられている ΐίΙ3 (1)記載の器具。

( 3 ) 該バインダ一保持部位が、該検出部位を挟んで該試料添加部位と反対側に設けられている前記 (1)記載の器具。

(4) 試料中の測定対象物が展開液の毛管流により移動可能であるような支持体上に試料添加部位 (S) と検出部位 (Q) とを有する測定対象物測定器具であつて、該検出部位は 2つのに挟まれた圧 ®動子からなり、該圧電振動子上には測定対象物に結合するトラヅパー A (c 1)、あるいは、標識化測象物類似物もしくは測定対象物とバインダーとの複合物、及び、測定対象物もしくは測定対象物類似物と標識化バインダ一に結合するトラヅパ一 B ( c 3 ) が固定されており、該支持体上には、バインダー (b 1)が展開液の毛管流により移動可能であるように保持されているバインダー保持部位（BR) を有し、さらに該支持体上には測定対象物類似物 (b5) が展開液の毛管流により移動しないように該バインダー保持部位と検出部位の間に固定されているかもしくは該支持体上に測定対象物類似物 (b 5 ) が展開液の毛管流により移動可能であるように保持されている測象物類似物固定部位 (DF) または測定対象物類似物保持部位 (DR) を有することを特徴とする測定対象物測定用器具。

(5) ノインタ"一が標識されたものである前記（1)〜（4)のいずれかに記載の觀。

( 6 ) 試料中の測定対象物が展開液の毛管流により移動可能であるような支持体上に試料添加部位 (S) と検出部位 (Q) とを有する測定対象物測定器具であつて、該検出部位は²つの misに挟まれた圧辰動子を有し、該圧電振動子上にはバインダー (c2)が固定されており、該支持体上には、測定対象物類似物 (b 2 ) が展開液の毛管流により移動可能であるように保持されている測ォ象物類似物保持部位 (DR) を有することを特徴とする測象物測定用器具。

(7) 該測定対象物類似物保持部位が、該試料添加部位と該検出部との間に設けられている編 3 (6)記載の器具。

( 8 ) 該測定対象物類似物保持部位が、該検出部を挟んで該試料添加部位と反対側に設けられている前記 (6)記載の器具。

( 9 ) 試料中の測定対象物が展開液の毛管流により移動可能であるような支持体上に試料添加部位 (S) と検出部位（Q) とを有する測定対象物測定器具であつて、該検出部位は 2つのに挟まれた圧 βί辰動子からなり、該圧電振動子上にトラヅパ一 B (c3)が固定されており、該支持体上には、測定対象物類似物 (b 2)およびバインダー (b3)が展開液の毛管流により移動可能であるように保持されている測定対象物類似物保持部位 (DR)およびバインダー保持部位（BR) を有することを特徴とする測定対象物測定用器。 (10) 試料中の測ォ象物が展開液の毛管流により移動可能であるような支持体上に試料添加部位（S) と検出部位（Q) とを有する測定対象物測定器具であって、該検出部位は 2つの β¾に挟まれた圧電振動子を有し、該圧電振動子上には測定対象物に結合するバインダー（c 2)が固定化されており、該支持体上には、測定対象物類似物 (b2) が展開液の毛管流により移動可能であるように保持されている測定対象物類似物保持部位 (DR) を有し、さらに該支持体上には、バインダー (b4)が展開液の毛管流により移動しないように該測定対象物類似物保持部位と検出部位との間の支持体中に固定されているバインダー固定部位（BF) を有することをとする測定対象物測定用器具。，

(11) 測定対象物類似物が標識されたものである前記（ 6 )〜（ 10 ) のいずれかに記載の器具。

(12) 該標識が不溶性小胞体である iI3 ( 5 ) または（ 11 ) に言 3載の器具。

(13) 該不溶性小胞体が金属コロイド又はラテックスである前記 (12) 記載の器具。

(14) 試料中の測定対象物が展開液の毛管流により移動可能であるような支持体上に試料添加部位 (S) と検出部位 (Q) とを有する測定対象物測定器具であって、該検出部位は 2つのに挟まれた圧電振動子からなり、該圧電振動子上にはトラッパ一 A (c 1)、測定対象物類似物（c 1，）、バインダー (c2) またはトラヅパ一 B (c3)が固定されていることを特徴とする測定対象物測定用器具。

(15) さらに、展開液吸収部位 (d) を含有する前記（ 1 )〜 .（ 14 ) のいずれかに記載の^。

( 16) 該検出部位には、トラッパ一 A (c 1)ヽ測象物類似物（c 1，)、バインダー (c 2) またはトラッパ一 B (c 3)が固定されている 2つの ® に挟まれた圧電振動子の他にもう一つの 2つの電極に挟まれた圧電振動子を有し、該圧電振動子は、トラッパ一 A ( c 1 )、測定対象物類似物（ c 1，）ヽノインダー（ c 2 ) およびトラヅパ一 B (c 3)の何れも固定されていないものである前記（1)〜（1 5)のいずれかに記載の器具。

(17) 該圧電振動子が水晶振動子である前記（ 1 )〜（ 16 ) のいずれかに記載の器具。 (18) 前記（ 1 )〜（ 17 )のいずれかに記載の器具と、該器具の圧電振動子の ®ϋに連絡し、該圧 ¾ig動子の振動子数を測定する振動数測定回路と、該振動衡則定回路に連絡し、振動数から測定対象物濃度を演算する濃度演算回路とを有する測定対象物測定装置。 '

( 19) 圧電振動子上に固定された物質と特異的に結合することにより生じる該圧 SiS動子の振動数の変化から試料中の測定対象物を定量する方法において、圧 Sf辰動子上にはトラヅパ一 A (c 1) または測^ f象物類似物（c 1，）が固定されており、試料中の測定対象物およびバインダ一が展開液の毛管流により移動可能であるような支持体を用いて、試料と該ノン夕"一とを該トラッノー Aまたは該測定対象物類似物に供給し、圧電振動子上に固定された物質と特異的に結合させることを特徴と,する 1¾中の測 ¾¾f象物の定量方法。

(20) 該試料と該バインダ一が該トラヅパ一 Aまたは該測定対象物類似物に対し同じ方向の毛管流により供給される flB (19)記載の方法。

(21) 該試料と該バインダ一がトラッパ一 Aまたは測定対象物類似物に対し逆の方向の毛管流により供給される前記 (19)記載の定量方法。

, (22) 圧電振動子上に固定された物質と特異的に結合することにより生じる該圧電振動子の振動数の変化から試料中の測定対象物を定量する方法において、圧電振動子上にはトラヅパ一 A (c 1) またはトラヅパ一 B (c 3)が固定されており、測定対象物類似物 (b5) が展開液の毛管流により移動しないように固定されているが、試料中の測定対象物およびバインダー (b 1)が展開液の毛管流により移動可能であるような支持体を用いて、試料と該バインダーとを該トラッパ一 A またはトラヅパー Bに供給し、圧電振動子上に固定された物質と特異的に結合させることを特徴とする試料中の測寸象物の定量方法。

(23) 圧電振動子上に固定された物質と特異的に結合することにより生じる該圧電振動子の振動数の変化から試料中の測定対象物を定量する方法において、圧電振動子上にはトラッパ一 A (c 1) またはトラッパ一 B (c 3)が固定されており、試料中の測定対象物、バインダー (bl)および測定対象物類似物

(b5) が展開液の毛管流により移動可能であるような支持体を用いて、試料と該ノインダ一と該測定対象物類似物とを該トラヅパ一 Aまたはトラヅパ一 Bに供給し、圧電振動子上に固定された物質と特異的に結合させることを特徵とする試料中の測定対象物の定量方法。

(24) クインダ一が標識されたものである前記 (17)〜（23)のいずれかに記載の方法。

(25) 圧電振動子上に固定された物質と特異的に結合することにより生じる該圧竃振動子の振動数の変化から試料中の測定対象物を定量する方法において、圧電振動子上にはバインダー (c2) が固定されており、試料中の測定対象物および測定対象物類似物 (b2)が展開液の毛管流により移動可能であるような支持体を用いて、試料と該測定対象物類似物とを該バインダーに供給し、圧電振動子上に固定された物質と特異的に結合させることを待数とする試料中の測定対象物の定量方。

(26) 該試料と該測定対象物類似物が該バインダ一に対し同じ方向の毛管流により供給される前記 (25)記載の定量方法。

(27) 該試料と該測定対象物類似物が該バインダ一に対し逆の方向の毛管流により供給される前記 (25)記載の定量方法。

(28) 圧電振動子上に固定された物質と特異的に結合することにより生じる該圧電振動子の振動数の変化から試料中の測定対象物を定量する方法において、圧電振動子上にはトラッパ一 B (c 3)が固定されており、試料中の測定対象物、測定対象物類似物 (b2)およびバインダー (b3)が展開液の毛管流により移動可能であるような支持体を用いて、試料と該測定対象物類似物と該バインダ一とを該トラッパ一 Bに供給し、圧電振動子上に固定された物質と特異的に結合させることを特徴とする試料中の測 ¾ 象物の定量方法。

(29) 圧電振動子上に固定された物質と特異的に結合することにより生じる該圧電振動子の振動数の変化から試料中の測定対象物を定量する方法において、圧電振動子上にはバインダー (c2)が固定されており、バインダー (b4) が展開液の毛管流により移動しないように固定されているが、試料中の測定対象物および測定対象物類似物（ b 2 ) が展開液の毛管流により移動可能であるような支持体を用いて、試料と測定対象物類似物とを該バインダーに供給し、圧電振動子上に固定された物質と特異的に結合させることを特徴とする試料中の測定対象物の定量方法。

(30) .測定対象物類似物が標識された物である前記（ 25 )〜（ 29 ) のいずれかに記載の方法。

(31) 該標識が、不溶性小胞体である前記 (24) または（30) に記載の定量方法。

(32) 該不溶†生小胞体が、金属コロイド又はラテックスである前記 (31) 記載の定量方法。

(33) 圧電振動子上に固定された物質と特異的に結合することにより生じる該圧電振動子の振動数の変化から試料中の測定対象物を定量する方法において、圧電振動子上にはトラヅパー A (c 1) が固定されており、試料中の測定対象物が展開液の毛管流により移動可能であるような支持体を用いて、試料を該トラヅパー Aに供給し、圧電振動子上に固定された物質と特異的に結合させることを ¾とする試料中の測定対象物の定量方法。

(34) さらに、トラッパ一 A (c 1)、測^象物類似物 (c 1，）ヽバインダ一 (c 2) およびトラヅパ一 B (c 3) の何れも固定されていない第二の圧電振動子を用い、顯を、トラッパ一 A (c 1)、測定対象物類ィ议物（c 1')、バインダ一（c2) またはトラッパ一 B (c 3) が固定化された第一の圧電振動子並びに第二の圧辰動子に供給し、第二の振動数を対照として用いる前記（17).〜（29) のいずれかに記載の方法。

(35) 圧電振動子が水晶振動子である前記（ 19 ) 〜（ 34 ) のいずれかに記載の方法。

本発明の試料中の測定対象物測定用器具及び試料中の測定対象物測定方法は、ィムノクロマトグラフィ一用器具およびィムノクロマトグラフィ一用器具を用いた方法で、検出器具および検出方法としてそれそれ圧電振動子およびそれを用いる検出方法を利用することを特徴としている。本発明は、支持体上に設けられた §¾添加部位に添カロした試料を展開液の毛管流により支持体を移動させ、最終的に、検出部位にある圧電振動子上に複合体を形成させ、複合体形成量を振動数の変化として検出することを特徴とする。

本発明において使用できる試料には特に制限はないが、 ί列えば全血、血漿、血清、臍帯血、髄液、唾液、羊水、尿、汗、膝液、涙等の生体試料や、食品、土壌等があげられる。また、これらの生体試料に水性媒体や有機溶媒、先述の水性媒体と先述の有機溶媒との混合溶媒等を添加して希釈したものも試料として使用することができる。

水性媒体としては、生体,を溶解するものであれば特に制限はないが、例えば脱イオン水、蒸留水、緩衝液等があげられるが、緩衝液が好ましい。緩衝液に用いる緩衝剤は緩衝能を有するものならば特に限定されないが、 p H 1〜 11の例えば乳酸緩衝剤、クェン酸緩衝剤、酢酸緩衝剤、コハク酸緩衝剤、フ夕ル酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、トリエタノールァミン緩衝剤、ジェタノ一ルァミン緩衝剤、リジン緩衝剤、ノレビヅール緩衝剤、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメ夕ン緩衝剤、ィミダゾ一ル緩衝剤、リンゴ酸!爱衝斉 U、シユウ酷锾衝剤、グリシン緩衝剤、ホウ酸緩衝剤、炭酸緩衝剤、グリシン緩衝剤、グッド緩衝剤等があげられる。ッド緩衝剤としては、例えば 2—モルホリノエ夕ンスルホン酸（MES)、ビス（2—ヒドロキシェチル) イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン (B i s-T r i s)、 N— (2 —ァセトアミド）ミノニ酢酸（ADA)ヽピぺラジン一 N, N，一ビス（2—エタンスルホン酸）（PIPES)、 N— (2—ァセトアミド）一 2—アミノエ夕ンスルホン酸（ACES)、 3—モルホリノ一 2—ヒドロキシプロパンスルホン酸（MOP SOX N, N—ビス（2—ヒドロキシェチル）一 2—アミノエ夕ンスルホン酸（B ES)、 3—モルホリノプロパンスルホン酸（MOPS)、 N- [トリス（ヒドロキシメチル）メチル]—2—アミノエタンスフレホン酸 (TESX 2- [4- (2—ヒドロキシェチル）一1—ピペラジニル]エタンスルホン酸（HEPES)、 3- [N, N—ビス (2—ヒドロキシェチル) ァミノ] 一 2—ヒドロキシプロパンスルホン酸 (DIPSO N— [トリス（ヒドロキシメチル）メチル]—2—ヒドロキシ一 3 —ァミノプロパンスルホン酸（TAPSO)、ピぺラジン一 N， N，一ビス（2—ヒドロキシプロパンスルホン酸）（POPSO)、 3- [4- (2—ヒドロキシェチル） —1—ピペラジニル]—2—ヒドロキシプロパンスルホン酸 (HEPPSO 3— [4- (2—ヒドロキシェチル）一1—ピペラジニル] プロパンスルホン酸 [ (H) EPPSls N- [トリス（ヒドロキシメチル）メチル] グリシン（Trie ine)、 N, N—ビス（2—ヒドロキシェチル）グリシン（Bicine)ヽ N— トリス（ヒドロキシメチル）メチル一3—ァミノプロパンスルホン酸（TAPS)、 N—シクロへキシルー 2—アミノエ夕ンスルホン酸 (CHES N—シクロへキシル一3—アミノー 2—ヒドロキシプロパンスルホン酸（CAPSO)、 N—シクロへキシル—3—ァミノプロパンスルホン酸（CAPS)等があげられる。緩衝液の濃度は測定に適した濃度であれば特に制限はされないが、 0. 001〜 2. Omol /Lが好ましく、 0. 005〜1. Omo 1/Lがより好ましく、 0. 01〜0. Imo 1/Lが特に好ましい。

有機溶媒としては、ァセトニトリル、へキサン、メタノーノレ、ェ夕ノ一ノレ、ジクロロメタン、クロ口ホルム、アセトン、ジメチルホルムアミド、ジォキサン、ジメチルスルホキシド等が挙げられる。

また、食品や土壌については、これらを前処理したものも試料として使用することができる。ここで、食品や土壌の前処理とは、例えば食品や土壌中の成分を先述の水性媒体や先述の有機溶媒、 '先述の水性媒体と先述の有機溶媒との混合溶媒等の適当な溶媒による抽出、化学的修飾等があげられる。

ィ匕学的修飾としては例えば、食品や土壌中の成分の化学試薬による構造変換等があげられる。

本発明で測定対象物としては、特定の物質と特異的に複合体を形成する物であれば特に制限はなく、例えば酵素反応を用いて測定される成分、 ί¾抗体反応を用いて測定される成分、その他の特異的反応により測定される成分等があげられる。酵素反応を用いて測定される生体成分としては例えば、グルコース、 1, 5—ァンヒドログルシトール、グリコアルブミン、ヘモグロビン A 1 c、フコース、尿素、尿酸、アンモニア、クレアチニン、総コレステロール、遊離コレステロール、高密度リポタンパク中のコレステロール（HDL— C)、低密度リポタンパク中のコレステロール（LDL— C)、超低密度リポタンパク中のコレステロール（VLDL— C)、レムナント様リポタンパク中のコレステロール（RLP— C)、トリグリセライド、リン脂質、総蛋白、アルブミン、グロブリン、ビリルビン、胆汁酸、シアル酸、乳酸、ピルビン酸、遊離脂肪酸、セル口プラスミン、ァラニンアミノトランスフェラーゼ (ALT)ヽァスパラギン酸アミノトランスフェラ一ゼ（AST)、クレアチンホスホキナーゼ（CPK)、ホスホキナ一ゼ（PK)、アミラーゼ、リパーゼ、コリンエステラーゼ、ァ一グル夕ミルトランスぺプチダーゼ、ロイシンアミノぺプチ夕" ーゼ、 L—乳酸デヒドロゲナ一ゼ（ L D Η )、アルドラーゼ、アルカリフォスファタ —ゼ、酸フォスファタ一ゼ、 Ν—ァセチルグルコサミニダーゼ、グアナ一ゼ、モノアミンォキシダーゼ等があげられる。

碰抗体反応により測定される成分としては例えば、 I gG I gM、 I As IgE、アポ蛋白 AI、アポ蛋白 AII、. アポ蛋白 B、アポ蛋白 E、リウマチファクタ一、 D—ダイマー、酸化 LDL、糖化 LDL、グリコアルブミン、トリョ一ドサイロニン（T3)、総サイロキシン（Τ4)、薬剤（抗テンカン剤等)、 C—反応性蛋白（CRP)、サイト力イン類、ーフエトプロテイン（AFP)、癌胎児性

(CEA)s'CA 19— 9 (carbohydrate antigen 19-9), CA15-3 (carbohydrate antigen 15—3)、 CA— 125 (carbohydrate antigen 125)、 P I VK A- I I

(Protein induced by vitamin K absence- 11)、副甲状腺ホルモン（PTH)、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（hCG)、甲状腺刺激ホルモン（TSH)、インスリン、 C ーぺズタイド、エストロゲン、抗グルタミン廳兌炭酸酵素（GAD)抗体、ぺプシノ一ゲン、 HBV観、抗 B型肝炎ウィルス（HBV)抗体、 C»炎ウィルス（H CV) i¾ ヽ抗 HCV抗体、成人 T細胞性白血病ウィルス 1型（HTLV— I)抗原、抗 HTLV - I抗体、ヒト免疫不全ウィルス (HI V)抗体、インフルエンザウィルス ί¾Ι、抗インフルエンザウイルス抗抗結核菌抗体、結核菌 ί¾ (ΤΒ GL)マイコプラズマ抗ヘモグロビン A 1 c、心房性ナトリゥム利尿ぺプチド

(ANP)、脳性ナトリウム利尿ペプチド（BNP)、トロポニン T、トロポニン I、クレアチニンキナーゼー MB (CK-MB ミオグロビン、 H— FABP (ヒト心臓由来脂肪酸結合蛋白)、力ビ毒類 [デォキシニバレノール（DON)、二バレノ一ル（NIV)ヽ T-2トキシン（T2)等]、内分泌撹乱物質類 [ビスフヱノール A、ノニルフエノール、フ夕ル酸ジブチル、ポリ化ビフエニル（PCB)類、ダイォキシン類、 ρ， ρ'—ジクロロジフエニルトリクロロェタン、トリブチルスズ等]、大腸菌等の菌類、卵、乳、小麦、そば、落花生等の食物アレルギー物質ゃコナヒョゥダニやトャヒヨウダニ等のダニ類等のアレルギー物質、抗ァレルギ一物質抗体等があげられる。

その他の特異的結合により測定される成分としては、核酸、レクチン等があげられ、例えば： Γ as等のガン遺伝子、 p 53等のガン抑制遺伝子等をコードする DN Aまたは RNA、ペプチド核酸、アブ夕マー、糖蛋白質等があげられる。

本発明の測定対象物測定器具は、■添加部位（S)、支持体（Θ)および検出部位（Q)が上に設けられており、必要に応じて展開液添加部位 (B)s展開液吸収部位 (d)等を設けることができる。

本発明における支持体（e)は、試料添加部位 (S) と検出部位 (Q) とを展開液の毛管流により連結するものであって、必要に応じてさらに、バインダー、標識化バインダ一、測定対象物類似物または標識化測定対象物類似物等を含有するまたは含有しない展開液を添加する展開液添加部位 (B) とも連結するものであり、試料中の測定対象物が、試料添加部位と検出部位、必要に応じて展開液添加部位との間を展開液の毛管流により移動可能とし、さらに、必要に応じて標識化バインダ一、標識化測定対象物類似物、バインダー及び測ォ象物類似物を展開液とともに移動可能なように保持又は固定できるようなものであれば特に制限はない。

試料添加部位 ( S ) および支持体 ( Θ ) の材質としては、同一または異なってよく、例えばガラス繊維、セルロース、ナイロン、架橋デキストラン、各種のクロマトグラフィ一用紙、二トロセルロース等があげられ、二トロセルロースが好ましい。展開液としては、例えば前述の水性媒体や有機溶媒等があ ifられる。 ' 本発明において、展開液とともに移動可能なように支持体上に保持もしくは固定または水晶発振子上に固定されるバインダ一は、測定対象物に特異的に結合するものであれば特に制限はないが、例えば、抗原と該抗原に特異的に結合する抗体ゃァプ夕マーからなる組み合わせのいずれか一方の要素、糖類と該糖類に対するレクチンからなる組み合わせのいずれか一方の要素、 D N Aと該 D N Aに相補的な D N A からなる組み合わせいずれか一方の要素等が挙げられる。

本発明において、支持体もしくは圧電振動子上に固定または標識を結合させて展開液と共に移動可能な支持体に保持される測^ t象物類似物としては、バインダーに対して試料中の測定対象物と競合的に反応するものであれば特に制限はなく例えば、測定対象物それ自体、バインダ一に対するェピトープを含有する物質等があげられる。，

本発明において、バインダ一又は測定対象物類似物に結合させる標識としては、圧電振動子上に生成した複合体を振動数の変化量として検出できるものであれば特に制限はないが、質量の大きい標識が好ましい。質量の大きい標識としては例えば、不溶性小胞体等があげられる。不溶性小胞体としては例えば、金属コロイド、ラテックス等があげられる。^!コロイドとしては例えば、金コロイド等があげられる。金コロイドの粒子径としては、 1〜5 0 O nmが好ましく、 1 0〜1 0 0 11111がょり好ましい。ラテックスの粒子径としては、 1〜2， O O O nmが好ましく、 5 0 〜5 0 O nmがより好ましい。本発明において、展開液とともに移動可能なように支持体上に保持される標識化バインダーは、測定対象物に特異的に結合し、かつ、圧電振動子上に生成した標識化バインダーを含有する複合体の量に依存した情報を発信するものであれば特に制限はない。本発明において、展開液とともに移動可能なように支持体上に保持される標識化測定対象物類似物は、バインダーに特異的に結合し、かつ、圧電振動子上に生成した標識化測定対象物類似物を含有する複合体の量に依存した情報を発信するものであれば特に制限はない。

バインダーまたは測定対象物類似物と標識とは物理的に結合してもよいが、化学的に結合してもよい。物理的結合としては、例えば物理吸着等があげられる。化学的な結合としては、例えば共有結合、非共有結合等があげられる。非共有結合としては、例えば静電的結合、水素結合、結合、配位結合等があげられる。標識とバインダーまたは測定対象物類似物とを共有結合により結合させて標識化バインダ

—を調製する方法としては、例えば 2価性の架橋剤等の架橋剤を用いて、架橋剤を介して標識とバインダーとを結合させる方法があげられる。

本発明において、試料中の測定対象物の検出部位に使用される圧電振動子は、圧電効果を有する結晶からなるものであれば特に制限はなく、結晶としては、例えば水晶、ロッシエル塩、電子石などの結晶、タンタル酸リチウム（L i T a 02)、二ォブリチウム（L i N b 03)などの酉変化物単結晶や、酸化亜鉛 ( Z nO)等があげられ、水晶が好ましい。

圧電振動子は適当な振動数測定回路に連結させ、圧電振動子の振動数を表示等により検出出来るようにするのが好ましく、さらに、検出された振動数の変ィ匕から測定対象物濃度を演算する濃度演算回路に連結されているのが好ましい。圧 βί辰動子としては、に挟まれた圧電振子であれば特に制限はないが、水晶振動子としては、例えばセイコー '東京電波やィニシアム社製の水晶振動子からなるセンサーチップが用いられる。 .

本発明の器具には、バインダー、トラッパ一 A、トラヅパ一 B又は測定対象物類似物を固定した第一の圧電振動子を有するが、第一の圧電振動子に加えて、バインダ一、トラッパ一 A、トラヅパー Bおよび測寸象物類似物の何れも固定していない、第二の圧電振動子を有するものが好ましい。

複合体としては、圧電振動子上のバインダー、トラヅパ一 A、トラッパ一 B又は測定対象物類似物と特異的に結合して形成されるものであればいかなるものでもよいが、例えばサンドィヅチ法によって生成する複合体や競合法によって生成する複合体等があげられる。複合体の具体的形態としては、例えばトラッパ一 A—測定対象物一標識化バインダ一の構成を有する複合測寸象物類似物一標識化バインダ一、バインダ一一標識化測定対象物類似物、トラッパ一 B—バインダ一一標識化測定対象物類似物、トラッパ一 B—標識化バインダ一一測定対象物、トラッパ一 A 一測定対象物等があげられる。

本発明において、圧電振動子上に固定化されるトラッパ一 Aは、測定対象物に結合し、それ自体、測定対象物及び標識化バインダーが関与するサンドイッチ反応により、サンドイッチ型複合体（トラヅパ一 A—測定対象物一標識化バインダー）を生成し得るものであれば特に制限はない。標識化バインダ一における測定対象物認識部位と、トラヅパ一 Aにおける測定対象物認識部位とは同じであってもよいが、異なっていることが好ましい。トラッパ一 Aとしては例えば、測定対象物である抗原に結合する抗体、測定対象物である一本鎖 D N Aと相補的な標識された P N Aとが結合して得られる二本鎖 D N Aに特異的に結合する物質や一本鎖 D N A等があげられる。

' 本発明において、圧電振動子上に固定化されるトラヅパ一 Bは、標識化測定対象物類似物もしくは測定対象物とバインダーとの複合体、及び、測定対象物もしくは測定対象物類似物と標識化バインダ一との複合体に結合するが、測定対象物を中間に挟んだサンドィツチ型複合体を生成しないものであれば特に制限はない。トラヅパ一 Bとしては例えば、測定対象物である源に結合する抗体の: F c領域を認識する抗体等があげられる。

圧電振動子上へのバインダ一、トラヅパー A、トラヅパ一 B又は測定対象物類似物の固定化は、' トラヅパー A、トラヅパー B又は測定対象物類似物が、支持体を展開液の毛管流により移動してきた液体が圧電振動子を通過する際に移動せずに固定化されていれば、特に制限はないが、物理的または化学的に結合することができ、物理的結合としては、例えば物理吸着等が、ィ匕学的結合としては、例えば共有結合、水素結合、 ¾ 結合、配位結合等があげられる。具体的には、圧電振動子上の金電極にスルフヒドリル化したトラッパ一 Α、スルフヒドリルイ匕したトラヅパー Β又はスルフヒドリル化した測定対象物類似物を結合させることによって固定化する方法があげられる。

本発明において、パインダーもしくは標識化バインダーまたは測定対 ,象物類似物もしくは標識ィ匕測定対象物類似物を保持する部位を支持体上に展開液添加部位として設けることができる。展開液添加部位に用いる材料としては、試料中の測定対象物が、添加部位と支 ί ί本との間を展開液の毛管流により移動可能とし、さらに、必要に応じて標識化バインダー、標識化測定対象物類似物、ノインダー及び測定対象物類似物を展開液とともに移動可能なように保持又は固定できるようなものであれば特に制限はない。

展開液添加部位の材質としては、試料添加部位および支持体の材質と同一または異なってよく、例えばガラス繊維、セルロース、ナイロン、架橋デキストラン、各種のクロマトグラフィー用紙、ニトロセルロース等があげられ、二卜ロセルロースが好ましい。

本発明において、圧電振動子上に固定化されたバインダー、トラヅパ一 Α、トラヅパー Β又は測定対象物類似物に捕捉されなかった成分を含有する展開液を吸収' 保持する目的で、支持体上に展開液吸収部位（d) を設けることができる。展開液吸収部位には吸水性高分子化合物を使用することができる。吸水性高分子化合物としては例えば、セルロース、グラスファイノ一、コットン、ポリウレ夕ン等があげられる。

振動数測定回路は、本発明の測定対象測定器具の 2つの電極に連結させて用いることができ、圧電振動子の振動数を検出できるものであれば特に制限がなく、公知のものが使用しうる。振動数測定回路には振動数を表示する表示部を有するものが好ましいが、表示部を有さないものでもよい。濃度演算回路としては、該振動数測定回路に結させて用いることができ、既知濃度の標準品を用いて得られる振動数のデ一夕を元に未知濃度の試料で得られる振動数から濃度を計算出来るものであれば特に制限がなく公知のものが使用しうる。該濃度演算回路には濃度を表示する表示部を有するものが好ましいが、表示部を有さないものでもよい。

振動数測定回路および濃度演算回路は、本発明の測定対象物測定用器具内に一体となって組み込まれているものが好ましいが、振動数測定回路または濃度演算回路を連結した振動数測定回路とが別々の部分品として構成されていてもよい。

振動数測定回路および濃度演算回路としては、ィニシアム社製のァフィニクス Q に使用される恒温測定部およびデータ処理装置等があげられる。該演算回路には、結果を示す表示板が組み込まれているのが好ましい。

検量線作製のための既知濃度の標準品を用いた測定は、同一の測定対象物測定用装置を用いて、時系列に行っても良いが、測定対象物測定用装置を複数組み合わせて構成した装置を用いて、 |¾中の測定対象物の測定と標準試料の測定とを同時に行うのが好ましい。さらに、同一の支持体に圧電振動子を 2つ併置した器具であつてヽ一方の圧電振動子には、トラッパ一 A ( c I X 測定対象物類似物

( c 1，）、バインダー ( c 2 ) またはトラッパ一 B ( c 3 ) が固定されている第一の圧電振動子を用い、一方の圧電振動子にはトラヅパー A ( c 1 )、測定対象物類ィ议物（c l，）、バインダー ( c 2 )およびトラッパ一； B ( c 3 ) の何れも固定されていない第二の圧電振動子を用い、第一の圧電振動子の振動数の変化から試料中の測定対象物濃度を求めるに際し、第二の圧電子の振動数の変化を差し弓 1いて補正する方法が特に好ましい。 ' 試料中の測定対象物および標準品を測定する際の反応温度としては、特異的反応を行うことが出来る条件であれば特に制限はないが、通常 0〜1 0 0 °C；、好ましくは 1 0〜6 0°C、より好ましくは 2 0〜4 0 °Cで行われる。

本発明の測定対象物測定用装置には、試料が確実に添加されたことを判別するためのコントローノレラインが含有されてもよい。コントロールラインは、通常ィムノクロマトグラフィーに使用されているものが使用され、支持体上にも、圧電振動子上にも形成されるが、支持体上に形成されることが好ましい。コントロールラインとしては、次のような態様があげられる。試料が生体試料である場合には、アルブミン等のタンパクに結合する 2次抗体に、酵素、蛍光物質、発光物質等の機能性物質が結合した機能性物質結合 2次抗体が移動可能なように保持されている支持体上の部位、及び、生体試料中に含有されるアルブミン等のタンパクに結合する 1次抗体が固定化された支持体上の部位を含有するコントロールラインがあげられる。試料として、生体試料が確実に添加されると、中のアルブミン等のタンパクがコントロールラインに到達し、このコントロールライン上でサンドィツチ反応により複合体（1次抗アルブミン等のタンパク及び標識化 2次抗体を含有する複合体）を形成する。この複合体中の機能性物質を例えば比色法、蛍光法、発光法により検出することにより、試料添加の有無を¾ ；することができる。また、標識化バインダーが試料と同じ方向に支持体上を移動し、圧電振動子上でサンドィツチ型複合体が形成される場合には、例えば圧電振動子上に捕捉されなかつた標識化バインダーを検出するようなコントロールラインがあげられる。このようなコントロールラインとしては、例えば標識化バインダ一と結合するトラッパ一を支持体上の任意の位置に固定したコントロールラインがあげられる。試料が確実に添加されると、圧電振動子に捕捉されなかった標識化バインダーがこのコント口ールラインで捕捉される。このコントロールラインで標識化バインダ一が捕捉されると、標識化バインダー中の標識（例えば、金コロイド粒子、着色ラテックス等）によりコントロールラインが着色するため、試料が添加されたか否かを目視で判定することができる。コントロールラインは、例えば検出部位に対し試料添加部位と反対側の支持体上に設けることが好ましい。

測定対象物、標識化測定対象物類似物およびバインダーの比率は、特に制限はないが、好ましくは 0〜 1 ， 0 0 0 ， 0 0 0 ： 1 ： 1〜 1 ， 0 0◦, 0 0 0、より好ましくは 0〜 1 ， 0 0 0： 1： 1 〜 1 , 0 0◦になるように設定することができる。

' 以下に、本発明の試料中の測定対象物濃度測定用装置及び測定方法を具体的に説明する。

図 1は、本発明の測定対象物測定用器具の具体的態様の一例を示す概略図であり、図 1 ( a) は平面図を、また図 1 (t は、側面図である。

この^^は、 ¾ 上に,添加部位 ( S 支持体 ( e )および 2つの «gに挟まれた水晶振動子を有する検出部位（Q) が設けられており、該試料添加部位、支持体および検出部位は上部カバ一により覆われており、展開液の毛管流により移動可能であるように連結されている。水晶振動子には、トラヅパー A、測定対象物類似物、ノ 'インダ一またはトラッパ一 Bが固定されている。試料添加部位は、支持体と同一の素材を用いることもできるが、異なっていてもよい。試料添加部位では、上部カバーには、試料が添加出来るように穴が設けてある。基材の材質は特に制限は無いが、樹脂を用いるのが好ましい。水晶振動子の 2つのは、'外部と接続可能となっている。

図 2は、本発明の測定対象物測定用器具の具体的態様の一例を示す概略図であり、図 2 ( a) は平面図を、また図 2 (b) は、，側面図である。

この器具は、翻'上に添加部位（S)、展開液添加部位（B)ヽ支持体 ( e ) および 2つの電極に挟まれた水晶振動子を有する検出部位（Q)が設けられており、該試料添加部位、展開液添加部位、支持体および検出部位は上部カバこより覆われており、展開液の毛管流によ.り移動可能であるように連結されている。なお試料添加部位および展開液添加部位は、支持体と同一の素材を用、ることもできるが、異なっていてもよい。試料添加部位では、上部カバーには、試料が添加出来るように穴が設けてある。また、展開液添加部位は、穴が設けて有っても設けていなくても良い。また、展開液添加部位には、ノンダ一が展開液の毛管流により移動しないように支持体に固定されているバインダー固定部位、ノンダ一が展開液の毛管流により移動可能であるように保持されるノンダー保持部位、測定対象物類似物が展開液の毛管流により移動しないように支持体に固定されている測定対象物類似物固定部位または測定対象物類似物が展開液の毛管流により移動可能であるように保持される測定対象物類似物保持部位を設けることが出来る。 ¾ の材質は特に制限は無いが、樹脂を用いるのが好ましい。

図 3は、本発明の測定対象物測定用器具の具体的態様の一例を示す概略図であり、図 3 ( a) は平面図を、また図 3 (b) は、側面図である。

この器具は、基材上に試料添加部位（S )ヽ展開液添加部位（B)、支持体 ( e)_s 2つの I!に挟まれた水晶振動子を有する検出部位（Q)および展開液吸収部位 ( d ) が設けられており、該試料添加部位、展開液添加部位、支持体、検出部位および展閧液吸収部位は上部カバーにより覆われており、展開液の毛管流により移動可能であるように連結されている。なお試料添加部位および展開液添加部位は、支持体と同一の素材を用いることもできるが、異なっていてもよい。試料添加部位では、上部カバーには、試料が添加出来るように穴が設けてある。また、展開液添加部位は、穴が設けて有っても設けていなくても良い。また、展開液添加部位には、バインダ一が展開液の毛管流により移動しないように支持体に固定されているバインダ一固定部位、ノ 'ィンダ一が展開液の毛管流により移動可能であるように保持されるノンダ一保持部位、測定対象物類似物が展開液の毛管流により移動しないように支持体に固定されている測定対象物類似物固定部位または測定対象物類似物が展開液の毛管流により移動可能であるように保持される測定対象物類似物保持部位を設けることが出来る。の材質は特に制限は無いが、樹脂を用いるのが好ましい。展開液吸収部位には吸水性高分匕合物を使用することができる。 bK性高分匕合物としては例えば、セル口一ス、グラスファイノ —、コヅトン、ポリウレ夕ン等があげられる。

図 4は、本発明の測定対象物測定用器具の具体的態様の一例を示す概略図であり、図 4 ( a) は平面図を、また図 4 (b) は、側面図である。

この器具は、謝上に試料添加部位（S )、展開液添加部位（B)、支樹本（e )、 2つの βに挟まれた水晶振動子を有する検出部位（Q)、展開液吸収部位 ( d)およびコントロールラインが設けられており、該試料添加部位、展開液添加部位、支持体、検出部位、展開液吸収部位およびコントロールラインは上部カバ一により覆われており、展開液の毛管流により移動可能であるように連結されている。なお試料添加部位および展開液添加部位は、支持体と同一の素材を用いることもできるが、異なっていてもよい。試料添加部位では、上部カバ一には、試料が添加出来るように穴が設けてある。また、展開液添加部位は、穴が設けて有っても設けていなくても良い。また、展開液添加部位には、ノンダ一が展開液の毛管流により移動しないように支持体に固定されているバインダ一固定部位、バインダ一が展開液の毛管流により移動可能であるように保持されるバインダ一保持部位、測定対象物類ィ以物が展開液の毛管流により移動しないように支持体に固定されている測定対象物類似物固定部位または測定対象物類似物が展開液の毛管流により移動可能であるように保持される測定対象物類似物保持部位を設けることが出来る。の材質は特に制限は無いが、樹脂を用いるのが好ましい。展開液吸収部位には bK性高分^^合物を使用することができる。吸水性高分子化合物としては例えば、セルロース、グラスフアイバー、コットン、ポリウレタン等があげられる。

図 5は、本発明の測定対象物測定用器具の具体的態様の一例を示す概略図であり、図 5 ( a) は平面図を、また図 5 (b) .は、側面図である。

この器具は、謝上に試料添加部位（S)、展開液添加部位（B)ヽ支持体（e )、 2つのこ挟まれた水晶振動子を有する検出部位（ Q)および展開液吸収部位 ( d ) が設けられており、該試料添加部位、展開液添加部位、支持体、検出部位および展開液吸収部位は上部カバ一により覆われており、展開液の毛管流により移動可能であるように連結されている。なお試料添加部位および展開液添加部位は、支持体と同一の素材を用いることもできるが、異なっていてもよい。試料添加部位では、上部カバ一には、試料が添加出来るように穴が設けてある。また、展開液添加部位は、穴が設けて有っても設けていなくても良い。また、展開液添加部位には、バインダ —が展開液の毛管流により移動しないように支持体に固定されているバインダー固定部位、ノィンダ一が展開液の毛管流により移動可能であるように保持されるノインダ一保持部位、測定対象物類似物が展開液の毛管流により移動しないように支持体に固定されている測定対象物類似物固定部位または測定対象物類似物が展開液の毛管流により移動可能であるように保持される測定対象物類似物保持部位を設けることが出来る。の材質は特に制限は無いが、樹脂を用いるのが好ましい。展開液吸収部位は、展開液吸収部位には Ι¾ _Κ性高分子化合物を使用することができる。

R¾TK性高分子化合物としては例えば、セルロース、グラスファイバ一、コヅトン、ポリウレタン等があげられる。検出部位に挿入される水晶振動子は着脱可能なように、水晶振動子揷入スペースが設けられている。

図 6は、本発明の測定対象物測定用装置の具体的態様の一例を示す概略図であり、図 6 ( a) は平面図を、また図 6 (b ) は、側面図である。

この装置は、纏上に試料添加部位（S )ヽ展開液添加部位（B)、支持体（e )、 2つの電極に挟まれた水晶振動子を有する検出部位（ Q)および展開液吸収部位（ d ) が設けられており、該試料添加部位、展開液添加部位、支持体、検出部位および展開液吸収部位は上部カバーにより覆われており、展開液の毛管流により移動可能であるように連結されているが、振動数測定回路および濃度演算回路を有する振動数測定装置に該驟の水晶振動子のを通じて連結されて Vヽる o

図 Ίは、本発明の測定対象物測定用装置の具体的態様の一例を示す概略図であり、図 7 ( a) は外観平面図、図 7 ( b ) は、外観側面図、図 7 ( c ) は上部カバ一を取り除いた平面図、図 7 ( d) は上部カバ一を取り除いた側面図である。

この装置は、謝上に試料添加邵位（S )、展開液添加部位（B )ヽ支持体（e )、 2つの Silに挟まれた水晶振動子を有する検出部位（ Q)および展開液吸収部位 ( d ) が設けられており、該試料添加部位、展開液添加部位、支持体、検出部位および展開液吸収部位は上部カバ一により覆われており、展開液の毛管流により移動可能であるように連結されているの中に、振動数測定回路および濃度測定回路を有する振動数測定装置が設けてあり、該器具が該装置と水晶振動子の ¾ϋを通じて連結されている。

図 8は、試料添加部位 ( S ) と展開液添加部位 (Β ) の連結部を模式的に例示したものであ.る。それそれの部材は、展開液が毛管流により移動可能な異なる材質または同一の材質からなり、例えば、第 1の態様、第 2の態様、第 3の態様、第 4の態様で図示した様に配置することが出来る。

図 9は、支持体 ( Θ ) と検出部位（Q) と展開液吸収部位（d) の連結部を模式的に例示したものである。検出部位は、圧 mf辰動子が挿入されており、上部カバ一、支持体または吸収性素材と圧電振動子の微少な間隙により展開液が支持体から展開液吸収部位に毛管流により移動可能となっている。吸収性素材は、展開液吸収部位を構成する素材と同一であってもよい。

図 1 0は、本発明の測定対象物測定用器具の具体的態様の一例を示す平面の概略図である。

この器具は、謝上に試料添加部位（S )、展開液添加部位（B)、支持体（e )、 2つの ¾fSに挟まれた水晶振動子を有する検出部位 (Q)および展開液吸収部位（ d ) が設けられており、該試料添加部位、展開液添加部位、支持体、検出部位および展開液吸収部位は上部カバ一により覆われており、展開液の毛管流により移動可能であるように連結されている。この器具では、検出部位に二個の水晶振動子が水晶振動子挿入スペースに揷入されている。，

この例では、 2つの水晶振動子が展開液の移動方向に対して平行に設置されているが、 2つの水晶振動子を展開液の移動方向に対して垂直に設置することもできる。一つの水晶振動子上には、トラッパ一A ( c 1 )ヽ測象物類似物（c 1，）、ノインダ一 ( c 2 ) またはトラッパ一 B ( c 3 ) が固定されているが、もう一つの水晶振動子上には、トラッパー A ( c I X測定対象物類似物（ c )ヽバインダ一 ( c 2 ) およぴトラッパ一 B ( c 3 ) の何れも固定されていない。この装置を用いることにより、非特異的反応を補正することが出来る。

図 1 1は、測定対象物測定器具を 1から n個の複数を円盤状に配置したの例を示す。試料および賺 Π濃度の標準物質を同時に■添加部位に添加することで、検量線を作成すると同時に、試料中の測定物質濃度を求めることが出来る。

図 1 2は、測定対象物測定器具を 1から n個の複数長方形に配置した器具の例を示す。試料および既知濃度の標準物質を同時に、試料添加部位に添加することで、検量線を作成すると同時に、試料中の測定物質濃度を求めることが出来る。

本発明の試料中の測定対象物測定用器具としては、例えば以下の態様の方法があげられる。

測定対象物測定用器具の第 1の例（図 1 3及び図 1 4参照）としては、例えば、測定対象物を含有する試料が展開液の毛管流により移動可能な支持体上に設けられた顯添加部位（S )、測象物に結合するバインダーに標識が結合しており、かつ、展開液の毛管流により移動可能なように支持体上に保持される標識化バインダ — (b 1 )、および測定対象物に結合するトラヅパー A ( c 1 ) が固定化された圧電振動子、もしくは測定対象物類似物（c )が固定化された圧辰動子を有し、試料および該標識化バインダ一が、同じ方向の毛管流により支持体上を圧電振動子上に固定されたトラッパ一 Aまたは測定対象物類似物へ向かって移動するように設計された,中の測寸象物測定用器具があげられる。

標識化バインダーは、あらかじめ支持体上のバインダー保持部位 (BR) に保持されているのが好ましいが、標識化バインダ一が支持体上に保持されることなくキットとして供給される形態であってもよい。また、該器具には、試料添加部位と検出部位の間に展開液添加部位を設けることもできる。該標識化バインダーは、必要に応じ展開液に溶解し、試料と共に、もしくは別々に試料添加部位から、または試料添加部位と検出部の間に設けられる展開液添加部位から、必要に応じ展開液に溶解し、試料添加と同時にもしくは異なる時期に添加して使用することができる。

ここで、圧電振動子上に測定対象物に結合するトラッパ一 A ( c 1 ) が固定化されている場合（図 1 3参照）には、該器具は、いわゆるサンドイッチ測定法の原理に基づく測定方法に使用され、圧電振動子上に標識化バインダ一に結合する測定対象物類似物（c Γ) が固定化されている場合（図 1 4参照）には、該装置は、いわゆる競合測定法の原理に基づく測定方法に使用される。なお、標識化バインダーの代わりに標識されていないバインダーも使用することができる。

測定対象物測定用器具の第 2の例（図 1 5及び図 1 6参照）としては、例えば測定対象物を含有する試料が展開液の毛管流により移動可能な支持体上に設けられた試料添加部位（ S )、測定対象物に結合するバインダ一に標識が結合しており、かつ、毛管流により移動可能なように支持体上に保持される標識化バインダー（b 1 )、および測 ¾ 象物に結合するトラッパ一 A ( c 1 ) が固定化された圧電振動子、もしくは測象物類似物 ( c I ⁵)が固定化された圧辰動子を有し、ぉよび標識化バインダ一が、逆の方向の毛管流により支持体上を圧電振動子上に固定されたトラヅパ一 Aまたほ測定対象物類似物へ向かって移動するように設計された試料中の測定対象物測定用器具があげられる。

標識化バインダ一は、あらかじめ検出部位に対して試料添加部位とは反対側の支持体上のバインダー保持部位 (B R) に保持されているのが好ましいが、標識化バィンダ一が支持体上に保持されることなくキットとして供給される形態であってもよい。また、該器具には、検出部位に対して^ ^添加部位とは反対側に設けられる展開液添加部位を設けることもできる。標識化バインダ一が予め支持体上に保持されている場合は、展開液添加部位を設けても設けなくてもよいが、展開液添加部位を設けたものが好ましい。この場合、該展開液添加部位からは、前述の展開液を添加し、該標識化バインダーを検出部位に向かって移動させることができる。標識化バインダ一が予め支持体上に保持されていない場合は、展開液添加部位を設け、標識化バインダ一は、試料の添加と同時にまたは異なる時期に該展開液添加部位から添加して使用することができる。

ここで、圧電振動子上に測定対象物に結合するトラッパ一 A ( c 1 ) が固定化されている場合（図 1 5参照）には、該器具は、いわゆるサンドイッチ測定法の原理に基づく測定方法に使用され、圧電振動子上に標識化バインダ一に結合する測定対象物類似物 ( c Γ) が固定化されている（図 1 6参照）には、該器具は、いわゆる競合測定法の原理に基づく測定方法に使用される。なお、標識化バインダーの代わりに標識されていないバインダ一も使用することができる。

測定対象物測定用器具の第 3の例（図 1 7又は図 1 8参照）としては、例えば測定対象物を含有する試料が毛管流により移動可能な支持体上に設けられた試料添加部位 ( S 測象物に結合するバインダーに標識が結合しており、かつ、毛管流により移動可能なように支樹本上に保持される標識化バインダ一 (b l 標識化バインダ一に結合し、かつ、支持体上に固定化されているかもしくは移動可能なように支持体に保持されている測定対象物類似物（b 5 )、および標識化バインダーに結合した測定対象物に結合するトラヅパ一 A ( c 1 ) が固定化された圧電振動子を有し、試料、標識化バインダーが、同じ方向の毛管流により支持体上を圧電振動子上に固定されたトラヅパ一 Aへ向かって移動可能なように設計されており、かつ測定対象物類似物が試料添加部位と検出部位との間の支持体上に保持または固定されて V、る試料中の測定対象物測定用があげられる。測定対象物類似物が試料添加部位と検出部位の間の支持体上に固定されており、標識化バインダーがあらかじめ支持体上に保持されているのが好ましいが、標識化バインダ一が支持体上に保持されることなくキットとして供給される形態であってもよい。また、該器具には、試料添加部位と測定対象物類似物の固定部位の間に展開液添加部位を設けることもできる。標識化バインダーは、必要に応じ展開液に溶解し、試料と共に、もしくは別々に試料添加部位から、または試料添加部位とバインダー固定部位との間に設けられる展開液添加部位から、，必要に応じ展開液に溶解し、試料添加と同時にもしくは異なる時期に添加して使用される。

なお、標識化バインダ一の代わりに標識されていないバインダ一も使用することができる。この例では、測象物類似物 (b 5 ) とトラッパ一 A ( c 1 ) が特異的結合反応を起こさない組み合わせが好ましい。

測定対象物測定用器具の第 4の例（図 1 9又は図 2 0参照）としては、例えば測定対象物を含有する試料が毛管流により移動可能な支持体上に設けられた添加部位（S)、測^ f象物に結合するバインダーに標識が結合しており、かつ、毛管流により移動可能なように支榭本上に保持される標識化バインダー（b 1 )、標識化バィンダ一に結合し、かつ、.支持体上に固定化されているかもしくは移動可能なように支持体に保持されている測定対象物類似物（b 5 )、およびォ票識化バインダーに結合するトラヅパ一 B ( c 3 ) が固定化された圧電振動子を有し、試料、標識化バイン夕 "一が、同じ方向の毛管流により支持体上を圧電振動子上に固定されたトラッノ —Bへ向かって移動可能なように設計されており、かつ測定対象物類似物が試料添加部位と検出部位との間の支持体上に保持または固定されている試料中の測定対象物測定用器具があげられる。

測定対象物類似物が試料添加部位と検出部位の間の支持体上に固定されており、標識化バインダ一があらかじめ支持体上に保持されているのが好ましいが、標識ィ匕バインダ一が支持体上に保持されることなくキットとして供給される形態であってもよい。また、該器具には、試料添加部位と測定対象物類似物の保持または固定部位の間に展開液添加部位を設けることもできる。標識化バインダーは、必要に応じ展開液に溶解し、試料と共に、もしくは別々に試料添加部位から、または添加部位とバインダー固定部位との間に設けられる展開液添加部位から、必要に応じ展開液に溶解し、添加と同時にもしくは異なる時期に添加して使用される。なお、標識化バインダ一の代わりに標識されていないバインダーも使用することができる。この例では、測定対象物類似物 ( b 5 ) と試料中の測定対象物が異なる物質となるような組み合わせが好ましい。

測定対象物測定用器具の第 5の例（図 2 1参照）としては、例えば測定対象物を含有する試料が毛管流により移動可能な支樹本上に設けられた試料添加部位（ S )、測定対象物類似物に標識が結合しており、かつ、毛管流により移動可能なように支持体上に保持される標識化測定対象物類似物（b 2 )、及び、測定対象物及び標識化測定対象物類似物に結合するバインダー ( c 2 ) 固定化された圧電振動子を含有し、試料および標識化測定対象物類似物が、同じ方向の毛管流により支持体上を圧電振動子上に固定されたバインダ一へ向かって移動するように設計された試料中の測ォ象物測定用器具があげられる。

標識化測定対象物類似物は、あらかじめ支持体上に保持されているのが好ましいが、標識化測定対象物類似物が支持体上に保持されることなくキットとして供給される形態であってもよい。また、該器具には、試料添加部位と検出部位の間に展開液添加部位を設けることもできる。標識化測定対象物類似物は、必要に応じ展開液に溶角军し、試料と共に、もしくは別々に試料添加部位から、または試料添加部位と検出部位の間に設けられる展開液添加部位から、必要に応じ展開液に溶解し、試料添加と同時にもしくは異なる時期に添加して使用される。

測定対象物測定用器具の第 6の例（図 2 2 ) としては、例えば測定対象物を含有する試料が毛管流により移動可能な支持体上に設けられた,添加部位（S )、測定対象物類似物に標識が結合しており、かつ、毛管流により移動可能なように支持体上に保持される標識化測定対象物類似物（b 2 )、及び、測定対象物及ひ標識化測定対象物類似物に結合するバインダー ( c 2 ) が固定化された圧電振動子を含有し、試料および標識化測定対象物類似物が、逆の方向の毛管流により支持体上を圧電振動子上に固定されたバインダ一へ向かって移動するように設計された試料中の測定対象物測定用器具があげられる。

標識化測定対象物類似物は、あらかじめ検出部位に対して,添加部位とは反対側の支持体上に保持されているのが好ましいが、標識化測定対象物類似物が支持体上に保持されることなく別々に分けられたキットの形態であってもよい。また、該器具には、検出部位に対して試料添加部位とは反対側に設けられる展開液添加部位を設けることもできる。標識化測定対象物類似物が予め支持体上に保持されている場合は、展開液添加部位を設けても設けなくてもよいが、展開液添加部位を設けたものが好ましい。この場合、該展開液添加部位からは、前述の展開液を添加し、該標識化測定対象物類似物を検出部位に向かって移動させることができる。標識化測定対象物類似物が予め支持体上に保持されていない場合は、展開液添加部位を設け、標識化測定対象物類似物は、試料の添加と同時にまたは異なる時期に該展開液添加部位から添加して使用される。 ―

なお、標識化バインダ一の代わりに標識されていないバインダ一も使用することができる。

測定対象物測定用器具の第 7の例（図 2 3 ) としては、例えば測定対象物を含有する試料が毛管流により移動可能な支持体上に設けられた試料添加部位（S )、測定対象物類似物に標識が結合しており、かつ、毛管流により移動可能なように支持体上に保持される標識化測定対象物類似物（b 2 )、測定対象物及び測定対象物類似物に結合し、かつ、毛管流により移動可能なように支持体上に保持されるバインダー

(b 3 )ヽおよび標識化測定対象物類似物が結合したバインダ一及び測定対象物が結合したバインダーに結合するトラ.ヅパ一 B ( c 3 ) が固定化された圧電振動子を含有し、試料、標識化測定対象物類似物およびバインダーが、同一の毛管流により支持体上を圧電振動子上に固定されたトラヅパー Bへ向かって移動可能なように設計された中の測象物測定用装置があげられる。

標識化測定対象物類似物およびノンダ一は、あらかじめ支持体上に保持されているのが好ましいが、標識化測定対象物類似物およびバインダ一からなる群より選ばれる一つ又は二つが支持体上に保持されることなく、支持体に保持されない成分と該器具がキットとして供給される形態であってもよい。ま、該器具には、試料添加部位と検出部位の間に展開液添加部位を設けることもできる。標識化測定対象物類似物およびバインダーは、必要に応じ展開液に溶解し、試料と共に、もしくはそれそれ別々に試料添加部位から、または試料添加部位と検出部の間に設けられる展開液添加部位から、必要に応じ展開液に溶解し、試料添加と同時にもしくは異なる時期にそれそれ添加して使用される。

標識化測定対象物類似物が保持される部位とバインダーが保持される部位とは、試料添加部位と検出部位の間に位置すればよく、同一部位でも異なった部位でもよい。

測定対象物測定用器具の第 8の例（図 2 4 ) としては、例えば測定対象物を含有する試料が毛管流により移動可能な支持体上に設けられた試料添加部位（S )、測定対象物類似物に標識が結合しており、かつ、毛管流により移動可能なように支持体上に保持される標識化測定対象物類似物（b 2 )、測定対象物及び測 ¾f象物類似物に結合し、かつ、支持体上に固定化されているバインダー（b 4 )、および測定対象物及び標識化測定対象物類似物に結合するバインダー ( c 2 ) が固定化された圧電振動子を含有し、試料および標識化測定対象物類似物が、同じ方向の毛管流により支持体上を圧電振動子上に固定されたバインダ一へ向かつて移動可能なように設計されており、かつバインダ一が試料添加部位と検出部位との間の支持体上に固定されてヽる試料中の測定対象物測定用器具があげられる。

ノインダ一が試料添加部位と検出部位の間の支持体上に固定されており、標識化測定対象物類似物があらかじめ支持体上に保持されているのが好ましいが、標識ィ匕測定対象物類似物が支持体上に保持されることなくキットとして供給される形態であってもよい。また、該器具には、試料添加部位とバインダー固定部位の間に展開液添加部位を設けることもできる。標識化測定対象物類似物は、必要に応じ展開液に溶解し、試料と共に、もしくは別々に試料添加部位から、または試料添加部位とバインダー固定部位との間に設けられる展開液添加部位から、必要に応じ展開液に溶解し、試料添加と同時にもしくは異なる時期に添加して使用される。 >

また、前述の測定対象物測定器具の第 1〜 8の態様のそれそれに於いて、図 1 0 に例示するように、検出部位には圧電振動子を²つ併置したり、展開液吸収部位を設けたり、図 4に例示するようにコントロールラィンを設けることもできる。

検出部位に 2つの圧 ®辰動子を有する本発明のは、特に好ましい態様であり、この場合、一つの圧《S動子上には、トラッパ一 A ( c 1 )、測定対象物類似物（c Χ バインダー ( c 2 ) またはトラッパ一 B ( c 3 ) のいずれかが固定されており、他の圧電振動子上には、何れも固定されていないことを特徴とする。具を用いることにより、測定対象物を含有する試料に由来する非特異的反応に由来する測定の不正確さを減少させることができ、非特異的反応の影響を受けないより正確な洵 j定が可會 gとなる。

またコントロールラインは、目的の反応が起こったことを確認する為の部位であり、支持体上の任意の位置〖こ設けることがでる。展開液吸収部位または支本上の任意の位に、例えばトラヅパ一 Bを固定させることにより、コントロールラインを开诚することができる。

' 前述の測定対象物測定器具の図 13〜24の例においては、前述の通り、振動数測定回路または振動数測定回路及び濃度演算装置を連結した振動数測定回路を連結させた装置として組み立てることができる。

本発明の器具は、その大きさは特に制限はないが、好ましくは幅 0. 01〜30 cm、長さ 0. 1〜300111、厚み1〜10, 000〃m、より好ましくは幅 0. 1〜10。111、長さ0. 5〜： L 5cm、厚み 10〜： L, 000〃m、特に好ましくは幅 0. 2〜5cm、長さ 1. 0〜： L 0 cm、厚み 50〜500 zmである。本発明の試料中の測定対象物の測定方法としては、例えば以下の態様の方法があげられる。

測定方法の第 1の例（図 13及び図 14参照）としては、例えば、 (1)試料中の測定対象物と測定対象物に結合する標識化バインダー (bl) とを同じ方向の毛管流により H電振動子上に固定されたトラヅパ一 A (c 1) または測定対象物類似物 (c Γ) に供給する工程；（2)標識化バインダーと測定対象物とをトラヅパ一 A または測定対象物類似物に反応させ、反応複合体を形成させる工程；（3)反応開始後の任意の時間で圧電振動子の振動数を測定する工程；（4) (3)の工程で測定した振動数と、既知濃度の測定対象物を用いて作成した振動数と濃度の関係を示す検量線とから、試料中の測定対象物の濃度を求める工程を含む試料中の測定対象物の測定方法があげられる。

本測定方法としては例えば、前記の測定用器具の第 1の例を用いた方法があげられる ο

本測定方法においては、試料中の測定対象物が標識化バインダ一とともに支持体上を毛管流によって移動してもよいが、試料中の測定対象物と標識化バインダ一とが時間差をもって移動させてもよい。試料中の測定対象物と標識化バインダーとをともに毛管流によって支持体を移動させる方法としては、例えば試料添加時にすでに標識化バインダ一が保持されている支持体上に試料を添加する方法や、試料と標識化バインダーとを混合して得られる混合液を試料添加部位に添加する方法等があげられる。試料中の測定対象物と標識化バインダ一とを時間差をもって移動させる方法としては、例えば試料を試料添加部位に添加した後、同じ部位に標識化バインダーを添加する方法等があげられる。

トラッパ一 Aが固定化された圧電振動子を用いる場合には、トラヅパー A、測定対象物および標識化バインダ一を含有する複合体が圧電振動子上に形成される。一方、測定対象物類似物が固定化された圧電振動子を用いる場合には、測定対象物類似物および標識化ノンダーを含有する複合体が圧電振動子上に形成される。

複合体が固定化された圧電振動子の振動数を測定し、一方、試料中の測定対象物が標識化ノンダーとともに支持体上を毛管流によつて移動する前の圧電振動子の振動数を測定しておき、測定された 2つの振動数の差（ブランク差し引き振動数）を算出する。

このブランク差し引き振動数と、予め既知の測定対象物の溶液を用いて作成した検量線（測定対象物の濃度とブランク差し弓 Iき振動数との関係を表す鍾線）とから、試料中の測定対象物濃度を測定することができる。

測定方法の第 2の例（図 1 5及び図 1 6参照）としては、例えば（1 )測定対象物と標識化バインダ一とが毛管流により支持体上を、標識化バインダ一に結合した測定対象物に結合するトラッパ一 Aが固定化された圧電振動子、又は、標識化バインダ一に結合する測定対象物類似物が固定化された圧電振動子に向かって、お互いに逆方向に移動する工程； ( 2 )標識化バインダ一に結合した測 ¾M象物に結合するトラッパ一 Aが固定化された圧電振動子、又は、標識化バインダーに結合する測定対象物類似物が固定化された圧電振動子上で、サンドィツチ反応または競合反応が進行する工程 ; ( 3 ) ( 2 )の工程後の圧電振動子の振動数を測定する工程 ; ( 4 ) ( 3 ) の ®で測定した振動数と、既知濃度の測定対象物を用いて作成した線とから、試料中の測定対象物の濃度を測定する工程を含む測定対象物の測定方法があげられる。

本測定方法としては例えば、前記の測定用器具の第 2の例を用いた方法があげられる。

本測定方法においては、試料中の測定対象物が支持体上を移動する方向と、標識化バインダ一が支持体上を移動する方向とが逆である。試料中の測定対象物と標識化バインダ一とが圧電振動子上でサンドィツチ反応または競合反応する条件が好ましい。このような条件としては ί列えば、標識化バインダーが支持体上に予め保持されている場合には、試料の,添加部位への添加と、展開液の展閧液添加部位への添加とを同時に行う態様が挙げられ、標識化バインダ一が支持体上に予め保持されていない場合には、試料の顯添加部位への添加と、標識化バインダー含有溶液の展開液添加部位への添加とを同時に行う態様があげられる。

トラッパ一 Aが固定化された圧電振動子を用いる場合には、トラッパ一 A、測定 '対象物および標識化バインダーを含有する複合体が圧電振動子上に形成される。一方、測定対象物類似物が固定化された圧電振動子を用いる場合には、測定対象物類似物および標識化バインダーを含有する複合体が圧電振動子上に形成される。複合体が固定化された圧電振動子の振動数が測定される。一方、試料中の測定対象物が標識化バインダーとともに支持体上を毛管流によつて移動する前の圧電振動子の振動数を測定しておき、測定された 2つの振動数の差（ブラシク差し引き振動数）を算出する。

このブランク差し引き振動数の差と、予め既知濃度の測定対象物の溶液を用いて作成した検量線（測定対象物の濃度とブランク差し弓振動数との関係を表す検量線）とから、試料中の測定対象物濃度を測定する。

測定方法の第 3の例（図 1 7及び図 1 8参照）としては、例えば（1 )支持体上で、測定対象物と支持体に保持または固定化された測定対象物類似物（b 5 )とが、標識化バインダー (b 1 ) に対して競合反応する工程；（2 ) ( 1 ) の競合反応で測定対象物類似物に捕捉されなかった成分、もしくは支持体上を移動可能なように保持された測定対象物類似物に捕捉された成分が毛管流により支持体を移動し、さらに、測定対象物及び測定対象物類似物に結合するトラッパ一 A ( c 1 ) が固定化された圧電振動字を通過する工程； ( 3 ) ( 2 ) の工程後の圧電振動子の振動数を測定する工程；（4 ) ( 3 ) の工程で測定した振動数と、既知濃度の測定対象物を用いて作成した検量線とから、 '試料中の測定対象物の濃度を測定する工程を含む試料中の測 ¾f象物の測定方法があげられる。 ■

本測定方法としては例えば、前記の測定用器具の第 3の例を用いた方法があげられる。

本測定方法においては、支持体上での競合反応によって支持体上に捕捉されなかつた測定対象物と標識化バインダ一とを含有する複合体、または測定対象物類似物と標識化バインダ一とを含有する複合体が、トラッパー Aが固定化された圧電振動子上で捕捉される。ま持体上での競合反応の態様としては、標識化バインダーが予め支持体上に保持されて、る（試料添加部位と測定対象物類似物固定化部位との間の領域に保持されている）場合には、試料を試料添加部位に添加する方法等が挙げられ、標識化バインダーが予め支持体上に保持されていない場合には、試料と標識化ノ、'ィンダ一の混合溶液を顯添加部位に添加する方法等があげられる。

圧電振動子上には、トラッパー A、測ォ象物及び標識化バインダ一を含有する複合体、または、トラヅパ一 A、測定対象物類似物及び標識化バインダーとを含有する複合体が固定化される。複合体が固定化された圧電振動子の振動数を測定し、一方、競合反応が支持体上で起こる前の圧電振動子の振動数を測定しておき、測定された 2つの振動数の差（ブランク差し引き振動数）を算出する。

このブランク差し引き振動数と、予め既知濃度の測定対象物の溶液を用いて作成した検量線（測定対象物の U¾とブ'ランク差し弓 (き振動数との関係を表す線）とから、試料中の測定対象物濃度を測定する。この例では、測定対象物類似物 (b 5 )とトラッパ一 A ( c 1 )が特異的結合反応を起こさない組み合わせが好ましい。測定方法の第 4の例（図 1 9及び図 2 0参照) としては、例えば（1 ) 支持体上で、測定対象物と測定対象物類似物 (b 5 ) とが、標識化バインダー (b 1 ) に対して競合反応する工程； ( 2 ) ( 1 ) の競合反応で測定対象物と標識化バインダ一とを含有する複合体、または、測定対象物類似物と標識化バインダーとを含有する複合体が毛管流により支持体を移動し、さらに測定対象物が結合したバインダーに結合するトラッパ一 B ( c 3 )が固定化された圧電振動子を«する工程； ( 3 ) ( 2 ) の工程後の圧電振動子の振動数を測定する工程；（4) ( 3 ) の工程で測定した振動数と、既知濃度の測定対象物を用いて作成した検量線とから、試料中の測^寸象物のを測定する ¾を含む試料中の測定対象物の測定方法があげられる。

本測定方法としては例えば、前記の測定用器具の第 4の例を用いた方法があげられる。

本測定方法においては、支持体上での競合反応によって支持体上に捕捉されなかつた測定対'象物と標識化ノンダ一とを含有する複合体が、トラッパ一: Bが固定化された圧電振動子上で捕捉される。支持体上での競合反応の態様としては、標識化バインダ一が予め支持体上に保持されている（試料添加部位と測定対象物類似物固定化部位との間の領域に保持されている）場合には、試料を試料添加部位に添加する方法等が挙げられ、標識ィ'匕バインダ一が予め支持体上に保持されていない場合には、試料と標識化バインダ一の混合溶液を試料添加部位に添加する方法等があげられる。

圧電振動子上には、トラッパ一 B、測定対象物及び標識化バインダーを含有する複合体、または、トラッノ一 B、測定対象物類似物及び標識化バインダーを含有する複合体が固定化される。複合体が固定化された圧《ί辰動子の振動数を測定し、一方、競合反応が支持体上で起こる前の圧電振動子の振動数を測定しておき、測定された 2つの振動数の差（ブランク差し引き振動数）を算出する。

このブランク差し引き振動数と、予め既知濃度の測定対象物の溶液を用いて作成した ί嬉線（測定対象物のとブランク差し弓振動数との関係を表すネ鐘線）とから、試料中の測定対象物濃度を測定する。この例では、測定対象物類似物 ( b 5 ) 及び標識化バインダーを含有する複合体が、測定対象物及び標識化バインダーを含有する複合体より、トラヅパ一 Bに対する反応性が異なるような組み合わせが好ましい。

測定方法の第 5の例（図 2 1参照）としては、例えば（1 )試料中の測定対象物と、標識化測象物類似物 (b 2 ) とが、支持体上を毛管流により移動する工程；

( 2 )移動した溶液がさらに、バインダー ( c 2 ) が固定化された圧電振動子を通. 過する工程； ( 3 ) ( 2 )の工程後の圧電振動子の振動数を測定する工程； ( 4 ) ( 3 ) ので測定した振動数と、既知濃度の測定対象物を用いて作成した ¾S線とから、試料中の測定対象物の濃度を測定する工程を含有する試料中の測定対象物の測定方法があげられる。

本測定方法としては例えば、前記の測定用器具の第 5の例を用いた方法があげられる。

本測定方法においては、麵中の測定対象物と標識ィ匕測定対象物類似物とが圧電振動子上で競合反応する条件が好ましい。このような条件としては例えば、標識化測定対象物類似物が支持体上に予め保持されている場合には、試料を試料添加部位へ添加する態様や、標識化測定対象物類似物が支持体上に予め保持されていない場合には、試料と標識化測定対象物類似物との混合物が試料添加部位に添加される態様があげられる。

圧電振動子上には、測定対象物とバインダーとを含有する複合体、及び、標識化測定対象物類似物とバインダ一とを含有する複合体が形成される。これらの複合体が固定化された圧電振動子の振動数を測定する。一方、試料中の測定対象物が標識化測定対象物類似物とともに支持体上を毛管流によつて移動する前の圧電振動子の振動数を測定しておき、測定された 2つの振動数の差（ブランク差し引き振動数）を算出する。

ここで、測定対象物とバインダーとを含有する複合体に由来する振動数は、標識化測定対象物類似物とバインダーとを含有する複合体に由来する振動数に比較して極めて小さい。試料中の測定対象物が標識化測定対象物類似物とともに支持体上を毛管流によって移動する前の圧電振動子の振動数は一定であるので、ブランク差し弓 Iき振動数についても、測定対象物とバインダ一とを含有する複合体に由来するブランク差し引き振動数は、標識化測定対象物類似物とバインダ一とを含有する複合体に由来するブランク差し弓振動数よりも圧倒的に小さい。従って、測^象物とバインダーとを含有する複合体、及び、標識化測定対象物類似物とバインダーとを含有する複合体が固定ィ匕された圧電振動子に由来するブランク差し引き振動数は、標識化測定対象物類ィ议物とバインダーとを含有する複合体が固定化された圧霉振動子に由来するブランク差し弓 1き振動数とほぼ等しいと考えることができる。

このブランク差し引き振動数の差と、予め離口濃度の測定対象物の溶液を用いて作成した検量線（測定対象物の濃度とブランク差し引き振動数との関係を表す検量線）とから、試料中の測定対象物濃度を測定する。

測定方法の第 6の例（図 2 2参照）としては、例えば（1 )測定対象物と標識化測定対象物類似物 (b 2 ) とが毛管流により支持体上を、測定対象物及び標識化測定対象物類似物に转合するバインダー ( c 2 ) が固定化された圧電振動子に向かつて、お互いに逆方向に移動する工程；（2 ) ノ 'インダ一が固定化された圧電振動子上で、競合反応が進行する工程；（3 ) ( 2 ) の工程後の圧電振動子の振動数を測定する工程；（4 ) ( 3 ) の工程で測定した振動数と、既知濃度の測定対象物を用いて作成した検量線とから、試料中の測定対象物の濃度を測定する工程を含有する試料中の測定対象物の測定方法があげられる。

本測定方法としては例えば、前記の測定用器具の第 6の例を用いた方法があげられる。

本測定方法においては、中の測定対象物が支持体上を移動する方向と、標識化測定対象物類似物が支持体上を移動する方向とが逆である。試料中の測定対象物と標識化測定対象物類似物とが圧電振動子上で競合反応する条件が好ましい。このような条件としては例えば、標識化測定対象物類似物が支持体上に予め保持されている場合には、試料の試料添加部位への添加と、展開液の展開液添加部位への添加とを同時に行う態様が挙げられ、標識化測定対象物類似物が支持体上に予め保持されていない場合には、試料の試料添加部位への添加と、標識化測定対象物類似物含有§夜の展開液添加部位への添加とを同時に行う態様があげられる。

圧電振動子上には、測定対象物とバインダーとを含有する複合体、及び、標識化測定対象物類似物とバインダ一とを含有する複合体が形成される。前記の測定方法

3で述べたように、測定対象物とバインダーとを含有する複合体、及び、標識化測定対象物類似物とバインダーとを含有する複合体が固定化された圧電振動子に由来するブランク差し引き振動数は、標識ィ匕測定対象物類似物とバインダ一とを含有する複合体が固定化された圧雷辰動子に由来するブランク差し引き振動数とほぼ等しいと考えることができる。

このブランク差し引き振動数の差と、予め濃度の測定対象物の溶液を用いて作成した検量線（測定対象物の濃度とプランク差し引き振動数との関係を表す検量線）とから、試料中の測定対象物濃度を測定する。

測定方法の第 7の例（図 2 3参照）としては、例えば（1 )支持体上で、試料中の測定対象物が、バインダー ( b 3 ) に対して標識化測定対象物類似物 (b 2 ) と競合反応する工程； ( 2 ) ( 1 ) の競合反応で形成される反応生成物が毛管流により支持体を移動し、さらに、測定対象物が結合したバインダー及び/又は標識化測定対象物類似物が結合したバインダーに結合するトラッパ一 B ( c 3 ) が固定化された圧電振動子を通過する工程； ( 3 ) ( 2 ) の:! ¾後の圧電振動子の振動数を測定する工程；（4 ) ( 3 ) の工程で測定した振動数と、既知濃度の測定対象物を用いて作成した検量線とから、試料中の測定対象物の濃度を測定する工程を含有する試料中の測定対象物の測定方法があげられる。

本測定方法としては例えば、前記の測定用器具の第 7の例を用いた方法があげられる。

本測定方法においては、支持体上での競合反応により形成された測定対象物とバインダ一とを含有する複合及び、標識化測定対象物類似物とバインダーとを含有する複合体が毛管流によつて支持体上を移動し、圧電振動子上でこれらの複合体がトラッパ一 Bによって捕捉される。支持体上での競合反応の態様としては、標識化測定対象物類似物とバインダーの両方が予め支持体上に保持されている場合には、該支持体上に試料を支持体上の試料添加部位に添加する方法等が挙げられ、標識化測定対象物類似物とバインダ一のいずれか一方のみが支持体に保持されている場合には、該支持体に試料ともう一方の要素の混合溶液を支持体上の試料添加部位に添加する方法等があげられる。また標識化測^寸象物類似'物とバインダーの両方が支持体上に保持されていない場合には、試料、標識化測定対象物類似物及びバインダ一の混合激夜を支持体上の試料添加部位に添加する方法等があげられる。

圧電振動子上には、標識化測定対象物類似物、バインダー及びトラッパ一 Bを含有する複合体と、測定対象物、ノインダ一及びトラヅパ一 Bを含有する複合体とが固定化される。前記の測定方法 3の場合と同様に、標識化測定対象物類似物、バインダ一及びトラッパ一 Bを含有する複合体と、測定対象物くバインダー及びトラッパ一Bを含有する複合体とが頃定化された圧 Sf辰動子に由来するブランク差し引き振動数は、標識化測定対象物類似物、バイン夕"一及びトラッパ一 Bを含有する複合体が固定化された圧電振動子に由来するブランク差し引き振動数とほぼ等しいと考えることができる。

このプランク差し引き振動数の差と、予め嫩 Π濃度の測定対象物の溶液を用いて作成した検量線（測定対象物の濃度とブランク差し弓振動数との関係を表す検量線）とから、試料中の測定対象物濃度を測定する。

測定方法の第 8の例（図 2 4参照）としては、例えば（1 ) 支持体上で、測定対象物と標識化測象物類似物（b 2 )とが、支持体に固定化されたバインダー (b 4 ) に対して競合反応する工程；（2 ) ( 1 ) の競合反応でバインダーに捕捉されなかった成分が毛管流により支持体を移動し、さらに、ノイン夕"一が固定化された圧電振動子を通過する工程；（3 ) ( 2 ) の工程後の圧電振動子の振動数を測定するェ程；（4) ( 3 ) の工程で測定した振動数と、既知濃度の測定対象物を用いて作成した検量線とから、試料中の測定対象物の濃度を測定する工程を含有する試料中の測定対象物の測定方法があげられる。

本測定方法としては例えば、前記の測定用 #1*の第 8の例を用いた方法があげられる。本測定方法においては、支持体上での競合反応によって支持体上に捕捉されなかつた測定対象物及び標識化測定対象物類似物が、ノインダ一が固定化された圧電振動子上で捕捉される。支持体上での競合反応の態様としては、標識化測定対象物類似物が予め支持体上に保持されている（試料添加部位とバインダー固定化部位との間の領域に保持されている）場合には、試料を試料添加部位に添加する方法等が挙げられ、標識化測定対象物類似物が予め支持体上に保持されていない場合には、試料と標識化測定対象物類似物の混合溶液を試料添加部位に添加する方法等があげられる。

圧電振動子上には、標識化測象物類似物及びバインダ一を含有する複合体と、測定対象物及びバインダーを含有する複合体とが固定化される。前記の測定方法 3 で述べたように、標識化測象物類似物及びバインダ一を含有する複合体を含有する複合体と、測定対象物及びバインダーを含有する複合体とが固定化された圧電振動子に由来するブランク差し引き振動数は、標識化測定対象物類似物及びバインダー及びトラヅパ一 Bを含有する複合体が固定化された圧電振動子に由来するブランク差し引き振動数とほぼ等しいと考えることができる。

このブランク差し引き振動数の差と、予め赚ロ濃度の測定対象物の溶液を用いて作成した検量線（測定対象物の濃度とブランク差し引き振動数との関係を表す検量線）とから、試料中の測定対象物濃度を測定する。

また、前述の測定方法の第 1〜 8の態様のそれそれに於いて、図 1 0に例示するように、検出部位には圧電振動子を 2つ併置した装置、展開液吸収部位を設けた装置、図 4に例示するようなコントロールラインを設けた装置を用いて測定することもできる。

検出部位に 2つの圧電振動子を有する装置を用いて測定する方法は、特に好ましい態様であり、この場合、第一の圧電振動子上には、トラッパ一 A ( c l )、測定対象物類似物 ( c 1，）ヽパインダ一 ( c 2 ) またはトラッパ一 B ( c 3 ) のいずれかが固定されており、他の第二の圧電振動子上には、何れも固定されていない圧電振動子を用いる。試料を、例えば測定方法第 1〜8 (図 1 3〜2 4参照）のいずれかの方法により検出部位に移動させ特異的反応を開始した後、第一の圧電振動子の振動数と第二の圧電振動子の振動数を測定し、第二の圧電振動子の振動数を対照として用いることを特徴とする。第一の振動数と第二の振動数の差から、予め既知濃度の測^:ォ象物を用いて得られるデータから作成される検量線により、測定すべき物質の濃度を求めることができる。本方法を用いることにより、測定対象物を含有する試料に由来する非特異的反応に由来する測定の不正確さを減少させることができ、非特異的反応の影響を受けないより正確な測定が可能となる。

また例えば、図 4に示す支持体上に設けられたコントロールラインは、目的の反が起こつたことを確認する為の部位であり、コントロールラインの反応を確認することにより、目的の反応が確実に起なわれたことが判断できる。コントロールラィンで反応が起こったことは、例えば標識により色調の変ィ匕によりとらえることができる。，

前述の測定方法の第 1〜 8の例においては、前述の通り、振動数測定回路または振動数測定回路および濃度演算回路を連結した振動数測定回路を連結させた装置を使用することにより、振動数または濃度を求めることができる。

以下、実施例により本発明をより詳細に説明するが、これらは本発明の範囲を何ら限定するものではない。尚、本実施例においては、下記メーカーの試薬および機器を使用した。.

抗ヒト C R P 'ャギポリクロ一ナル抗体（I g G；コスモバイオ社製)、抗ヒト C R P 'マウスモノクローナル抗体（I g G コスモバイオ社製)、抗ヒトインスリン ' マウスモノクローナル抗体 ( I g G ;コスモバイオ社製)、金コロイド標識化抗ヒトィムノグロブリン ·ャギポリクローナル抗体 ( I g G ;プリティッシュ ·バイォセル'イン夕一ナショナル社製)、 CR P標準液（コスモバイオ社製)、ホウ酸（関東化学社製)、イミダゾ一ル（関東化学社製)、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（以下、トリスと記す）（関東化学社製)、 2—イミノチオラン塩酸塩（関東化学社製)、ヅィ一ン 2 0 (関東化学社製)、 B SA (オリエンタル酵母社製)、ポリスチレンマイクロスフィァ D S 0 2 B (バングス社製)、グルタルアルデヒド（関東化学社製)、へキサン（関東化土製)、セフアデックス G— 2 5カラム（アマシャム · バイオサイエンス社製)、マイクロドーザ（バイオ' ドヅト社製)、バイオジェヅト · クアンチ 3 0 0 0 (バイオ' ドヅト社製)、水晶振動子センサーチップ（ 2 7 MH z )

(ィニシアム社製)、ニトロセル口一スメンプレン [A c c u F 1 o wGタイプ（シュライヒャ一 &シユエル社製）； F 8 5 (シュライヒヤー &シユエル社製)]、吸収紙 [ 3 0 0タイプ、 4 7 0タイプ（シュライヒヤー &シユエル社製）図面の簡単な説明

第 1図測定対象物測定用器具の一例を示す図である。

第 2図測定対象物測定用器具の一例を示す図である。

第 3図測定対象物測定用器具の一例を示す図である。

第 4図測定対象物測定用器具の一例を示す図である。

第 5図測定対象物測定用器具の一例を示す図である。

第 6図測定対象物測定用装置の一例を示す図である。

第 7図測定対象物測定用装置の一例を示す図である。

第 8図測定対象物測定用器具の試料添加部位と展開液添加部位の連結の例を示す図である。

第 9図測定対象物測定用器具の支持体、検出部位および展開液吸収部位の連結の例を示す図である。

第 1 0図測定対象物測定用器具の一例を示す図である。

第 1 1図測定対象物測定用器具の一例を示す図である。

第 1 2図測定対象物測定用器具の一例'を示す図である。

第 1 3図トラッパー Aが固定化された水晶振動子を組み込んだ測定対象物測定用器具の第 1の例を示す模式図である。

第 1 4図測定対象物類似物が固定化された水晶振動子を組み込んだ測定対象物測定用器具の第 1の例を示す模式図である。 '

第 1 5図トラヅパ一 Aが固定化された水晶振動子を組み込んだ測定対象物測定用器具の第 2の例を示す模式図である。

第 1 ⁶図測定対象物類似物が固定化された水晶振動子を組み込ん'だ測定対象物測定用器具の第 2の例を示す模式図である。

第 1 7図トラヅパー Aが固定化された水晶振動子を組み込んだ測定対象物測定用器具の第 3の例を示す模式図である。

第 1 8図トラヅパ一 Aが固定化された水晶振動子を組み込んだ測定対象物測定用器具の第 3の例を示す模式図である。

第 1 9図トラヅパ一 Bが固定化された水晶振動子を組み込んだ測定対象物測定用器具の第 ⁴の例を示す模式図である。

第 2 0図トラヅパー Bが固定化された水晶振動子を組み込んだ測定対象物測定用器具の第 4の例を示す模式図である。

第 2 1図ノ 'ィンダ一が固定化された水晶振動子を組み込んだ測定対象物測定用器具の第 5の例を示す模式図である。

第 2 2図ノ Wンダ一が固定化された水晶振動子を組み込んだ測定対象物測定用器具の第 6の例を示す模式図である。

第 2 3図トラヅパー Bが固定化された水晶振動子を組み込んだ測定対象物測定用器具の第 7の例を示す模式図である。

第 2 4図ノィンダ一が固定化された水晶振動子を組み込んだ測定対象物測定用器具の第 8の例を示す模式図である。

. 第 2 '5図実施例 1で製造した測定対象物測定用器具の一例を示す図である。第 2 6図実施例 1の測定対象物測定用器具を用いた試料中の CR P濃度の測定における 1ϊ»中の C R Ρ と振動数の減少量との関係を示す線。 '

第 2 7図比較例 1で使用した型のィムノクロマトグラフィー器具を示す図である。

第 2 8図実施例 4で製造した測定対象物測定用器具の一例を示す図である。符号の説明

測定対象物

ο

標識化バインダ一

測定対象物類似物

標識化測定対象物類似物

'

トラヅパー A

トラヅパ一 B 発明を実施するための最良の形態

実施例 1 CRP測定用器具

(1)抗ヒト CRP 'ャギポリクローナル抗体 ( I g'G)の水晶振動子への固定抗ヒト CRP ·ャギポリクローナル抗体 (I gG) を 0. lmo 1/Lのホウ酸緩衝液（PH8. 0) に溶解し、 2. OmgZmLの抗ヒト CRP ·ャギポリクロ —ナル抗体 (IgG)の溶液を調製した。この溶液 (1. OmL) に、 1. Omg /mLの 2—イミノチオラン水溶液（0. 3mL) を添加し、 30°〇で0. 5時間反応を行った後、得られた反応混合物をセフアデヅクス G— 25を用いるカラムク口マトグラフィにより分離し [溶出溶媒： 0. lmmo 1/L ホウ酸緩衝液（p H8. 0)]、 0. 2mgZmLのスルフヒドリル化された抗ヒト CRP ·ャギポリク口一ナル抗体 (I gG)のホウ酸緩衝液 ¾夜を得た。

このスルフヒドリルイ匕された抗ヒト CRP 'ャギポリクローナル抗体 (I gG) のホウ酸緩衝液溶液を、マイクロド一サバイオジェヅト ·クアンチ 3000を用いて水晶振動子センサ一チヅプ（27MHz) の表面に滴下し、室温で 15時間静置することにより、水晶振動子中央の金上に抗ヒト CRP ·ャギポリクローナル抗体（IgG) .を固定した。

さらに、 0. 1%のヅィ一ン 20 (0. 1% 1%のゥシ血清アルブミン（以下、 BSAと記す）を含有する 10 mm ol ZLリン酸緩衝液 (pH7. 4)で金を洗浄し、未反応のスルフヒドリル化された抗ヒト CRP ·ャギポリク口一ナル抗体 (IgG) を除去した。

(2)ポリスチレンマイクロスフィァ標識ィ匕抗ヒト CRP 'マウスモノクローナル抗体 (I gG)の調製

0. 0 lmgZmLの抗ヒト CRP ·マウスモノクローナル抗体 (I gG)のリン酸緩衝化生理食塩水（ 0. 15mo 1/L 塩化ナトリウムを含有する pH 7. 2、 10mmol/L リン酸緩衝液）（以下、 PBSと記す）（lmL) に、粒径 0. 5〃m以下のポリスチレンマイクロスフィァ DS 02B (バングス社製）の 0. 5%水溶液 (1 OmL) を添加し、 37 °Cで 2時間静置した後、混合物を 4°C、 1 2000 rpmで 1時間遠心分離した。上清を除去して得られた沈殿物 [ポリスチレンマイクロスフィァ標識化抗ヒト CRP ·マウスモノクローナル抗体 (I gG) を含有する¾«物] に、 0. 6%BSAを含有する ρΗ7· 8、 1 Ommo 1/L イミダゾ一ル緩衝液 (5 OmL) を添加し、混合物を超音波処理により分散させて標識液とした。

( 3 )標識化ノンダー保持部材の作成

(2)で調製した標識液を、室温で 1時間、ニトロセルロースメンブレン (Ac cuFlowGタイプ）に曼させた後、該メンプレンを室温、 3mmHg以下で真空乾燥させ、ポリスチレンマイクロスフィァ標識化抗ヒト CRP ·マウスモノク口一ナル抗体 (IgG) を保持した標識化バインダ一保持部材を作製した。

(4) CRP測定用の作製

コットン（シュライヒヤー &シユエル社製）からなる試料添加用の試料添加用部材、 (3)で作製した標識化バインダー保持部材、ニトロセルロースメンブレン（F F85)からなる支持体、 (1)で作製した抗ヒト CRP 'ャギポリクロ一ナル抗体 (IgG)が固定化された水晶振動子および吸収紙 300 (シュライヒヤー &シュエル社製）からなる展開液吸収部材を、それそれ試料添加部位、展開液添加部位、支持体、検出部位および展開液吸収部位に配置し、図 25に示すような CRP測定用を作製した。.

m 2 c R P測定用器具を用いた試料中の c R p濃度の測定

' (1)検量線の作製

試料（5〃L) を図 25の試料添加部位に滴下した。次に同部位から、 pH7. 5、 10mmol/Lトリス緩衝液を ϋ ^的に添加した。該緩衝液は試料を希釈しながら、マイクロスフィァ標識化抗ヒト CRP ·マウスモノクローナル抗体 (I g G) が結合した保持部材に到達し、ここで試料中の CRPとマイクロスフィァ標識ィ匕抗ヒト CRP 'マウスモノクローナル抗体 (IgG) が反応する。反応液は毛管流によりさらにメンブレンを進み、水晶振動子上の微小な空間に達して空間を満たした。この水晶振動子上で、 CRPとマイクロスフィァ標識化抗ヒト CRP ·マウスモノクローナル抗体（IgG) との複合体が、水晶振動子に固定化された抗ヒト CRP 'ャギポリクロ一ナル抗体 (IgG) と反応する。試料中の CRPmSに比例して、マイクロスフィァ標識化抗ヒト CRP ·マウスモノクローナル抗体 (I g G) が水晶振動子に固定化される。反応液が反応液吸収部材に吸収された後、水晶振動子を取り出しァフィニクス Q (ィニシアム社製）に装着し、織に ρΗ7· 5ヽ 1 Ommo 1/Lトリス緩衝液を加え、 5分後に振動数を測定した。試料として、 ① pH7. 5、 1 Ommo 1ZLトリス緩衝液のみ、 ② 0. 05〃 gZmLの CRP標準液、 ③ 0. 丄ぎノ！！！！^の^？^標準液ヽ ④ 0. 2〃ノ111 Lの CRP標準液、および、⑤ 0· 4〃g/mLの CRP標準液をそれそれ用いた。試料毎に水晶振動子を取り替えて、振動数を測定した。まず、試料を添加する前の振動数を測定し、次いで、 ① pH7. 5、 1 Ommo 1/Lトリス緩衝液 (5 L) のみを添加し、吸収ノヅドに緩衝液が吸収された後の振動数を測定し、両振動数の差を算出した（この振動数の差を Δ 1とする）。次に、① pH 7. 5、 1 Ommo l /Lトリス緩衝液（ 5 L ) の代わりに、 ②〜⑤の各

(5j L) を添加し、 ①の； ^と同様に、各觀を添加する前の振動数と、各試料を添加し、吸収ノ、°ヅドに反応液が吸収された後の振動数を測定し、両振動数の差を算出した（各,に対応する振動数の差を△ 2〜Δ 5とする）。各振動数の差（Δ2 -Δ5) から Δ 1を差し引いた値、すなわち、ブランクを差し引いた振動数の減少量（一AF/Hz) と、 CRP濃度との関係を第 1表および図 26に示す。

第 1表

第 1表および図 26に示すように、実施例 1の CRP測定用器具を用いることにより、 CRPが 0. 00〜0. 4 O^gZmLの範囲で良好な直線性が得られることが判明した。

(2) ヒト血清中の CRP濃度の測定

1^4として、 CRP標準液の代わりにヒト血清を用いて、（1) における検量線作製の場合と同様に振動数の変化量を測定し、 (1)で作製し検量線より該ヒト血清中の CRP濃度を算出したところ、 0. 092〃gZmLであった。一方、該ヒト血清中の CRP濃度を、 CRP測定用キットであるェクステル CRP (協和メデヅクス社製）を用いて測定したところ、 0. 094 zg/mLであった。従って、実施例 1の CRP測定器具を用いることにより、ヒト血清中の CRP濃度が正確に測定できることが判明した。

比較例 1 試料中の C R P g測定に関する難例 1の C R P測定器具と^ (5型ィムノクロマトグラフィ一用装置との比較

図 27に示すような、試料添加用の試料添加用部材、マイクロスフィァ標識化抗ヒト CRP 'マウスモノクロ一ナル抗体 (I gG) が結合した標識化バインダー保持部材、ニトロセルロースメンブレン（FF85)からなる支持ィ *s抗ヒト CRP · ャギポリクロ一ナル抗体（I gG) 固定化部位および吸収紙 300からなる展開液吸収部材を含有する型のィムノクロマトグラフィ一用器具を用いて、抖中の CRPの検出限界を検討した。試料として、 ① ρΗ7. 5、 l OmmolZLトリス緩衝液のみ、 ② 0. 05〃g/mLの CRP標準液、 ③ 0. l〃g/mLの CR P標準液、 ④ 0. 2〃 /111]^の01 ?標準液、 ⑤ 0. 4〃g/mLの CRP標準液、および、 ⑥ 4. 0〃ぎ/11^の〇1?^標準液をそれそれ用ぃた。その結果、 ⑥ 試料の場合にのみ、目視で青線が確認できた。従って、従来型のィムノクロマトグラフィ一用装置に比較して、本発明の «型のィムノクロマトグラフィ一用装置の方が高感度に試料中の C R Pを測定できることが判明した。

rnm 抗結核菌表面艙脂質腿抗体（抗 TBGL抗体）用測定器具

金コロイド標識化抗ヒトイムノグロブリン'マウスモノクローナル抗体 (I gG) を、塩ィ匕ナトリウムを 0. 15mo 1ZLの濃度で含有する、 pH7. 4 10m mo 1 Lのリン酸緩衝液で 100倍希釈し、この希釈された金コロイド標識化抗体溶液を標識液とした。この標識液を含浸させた吸収紙 470タイプを 3 mmH g 以下にて真空乾燥させ、標識化バインダ一保持部材を作製した。

トレハ口一スジミコレートを主成分とする!^菌の表面糖脂質 i¾ (TBGL) の 0. lmg/mLへキサン溶液を水晶振動子に浸漬塗布し、 3 mmH g以下で真空乾燥後、 1%BSAを含有する 10 mm o 1 /Lのリン酸緩衝液でプロッキングし、 TBGL固定化水晶振動子を作製した。

上記の標識化バインダ一保持部材及び T B GL固定化水晶振動子を用いて、実施例 1と同様の方法により、抗 TBGL抗体測定用器具を作製した。当該装置を用いて、健常人（20才以下）の血清、結核患者の血清、及び、デ夕ミナ一 TBGL抗体のカットオフ標準液（抗価： 2単位；協和メデヅクス社製）を試料として各試料における振動数を測定し、試料添加前の振動数と測定した振動数との差 [振動数の減少量（- AF/Hz)] を算出し、算出された振動数より、健常人（20才以下）の血清に含まれる抗 TBGL抗体の力価、及び、結核患者の血清に含まれる抗 TB GL抗体の力価を算出した。結果を第 2表に示す。

第 2表

第 2表に示すように、健常人の血清においては、抗 TBGL抗体の力価がカットオフ値以下であるのに対して、結核患者の血清においては、抗 TBGL抗体の力価がカットオフ値以上であった。従って、本発明の抗 TBGL測定用器具を用いることにより、結核の診断に適用可能であることが示された。

«例 4 インスリン測定用器具

(1)金コロイド標識化抗ヒトインスリン 'マウスモノクローナル抗体 (I gG) を含有する標識化バインダ一保持部材の作製

抗ヒトインスリン ·マウスモノクローナル抗体 (I gG) を 0. lmo 1/Lのホウ酸緩衝液（pH8. 0) に溶解し、 2. Omg/mLの抗ヒトインスリン 'マウスモノクローナル抗体（I gG)の溶液を調製した。この赚 (1. OmL)に、 1. Omg/mLの 2—イミノチオラン水溶液（0. 3mL) を添加し、 30°Cで 0. 5時間反応を行った後、得られた反応混合物を、セフアデックス G— 25を用いるカラムクロマトグラフィにより分離し [溶出溶媒： 0. lmmo l/L ホウ酸緩衝液（pH8. 0)]、 0. 15mgZmLのスルフヒドリル化された抗ヒトインスリン ·マウスモノクローナル抗体 (I gG) のホウ酸緩衝液夜を得た。

このスルフヒドリル化された抗ヒトインスリン ·マウスモノクローナル抗体 (I gG) のホウ酸緩衝液溶液 (lmL) に、粒径 4 Onmの金コロイド粒子 1 OmL を添加し、室温で 10分間反応させて、金コロイド粒子標識化抗ヒトインスリン · マウスモノクローナル抗体含有溶液を調製した。該溶液に、 0. 6%BSAを含有する pH7. 8、 1 Ommo 1/Lイミダゾール緩衝液（5 OmL) を添加し、さらにこの混合溶液に超音波処理を施したものを標識液とした。該標識液を二トロセルロースメンブレン [Ac cuF 1 owGタイプ] に含浸させた後、該メンプレンを室温にて 1時間、 3mmHg以下で真空乾燥させ、金コロイド粒子標識化抗ヒトインスリン -マウスモノクローナル抗体を保持した標識化バインダ一保持部材を作製した。

(2) インスリンのニトロセルロースメンブレンへの固定

ニトロセルロースメンブレン（FF85) の一定領域に、 1 %グル夕ルアルデヒド水溶液をバイオジェヅト ·クアンチ 3000を用いて滴下し、室温で 0. 5時間、乾燥させた後、 0. 2 m g/m Lのインスリン水溶液を、バイオジェット 'クアンチ 3000を用いて同一領域に滴下した。室温で 2時間反応させた後、 1%BSA の PBS溶液をバイオジェヅト ·クアンチ 300 Qを用いて同一領域に滴下し、ィンスリンがニトロセルロースメンプレン上に固定化された支持体を作製した。

( 3 )抗マウス I g G ·ャギポリク口一ナル抗体の水晶振動子への固定鐵例 1の（1) と同様の方法により、抗マウス I gG ·ャギポリクロ一ナル抗体をスルフヒドリル化、該スルフヒドリル化抗マウス I g G ·ャギボリクローナル抗体の水晶振動子センサーチヅプ（ 27 MH z ) 中央の金 S¾上への固定化を行つた。 '

( 4 ) インスリン測定用器具の作製

( 1 ) で作製した金コロイド粒子標識化抗ヒトインスリン 'マウスモノクローナル抗体.（I gG) を含有する檫識化バインダー保持部材、 (2)で作製したインスリン固定化ニトロセルロースメンブレンよりなる支持体、 (3)で作製した抗マウス I gG ·ャギポリクローナル抗体固定化水晶振動子、吸収紙 300からなる展開液吸収部材を配置し、図 28に示すようなインスリン測定用ィムノクロマトグラフィー用ストリップを作製し、ィンスリン測定用器具を作製した。

m 5 インスリン測定用器具を用いた諭抖中のィンスリンの測定

試料（5〃L) を試料添加用部材上に滴下した。次に同孔から、 pH7. 5、 1 Ommo 1/Lトリス緩衝液を糸赚的に添加した。該緩衝液はを希釈しながら、金コロイド粒子標識化抗ヒトインスリン 'マウスモノクロ一ナル抗体 (I gG) が結合した支持体に到達し、ここで試料中のインスリンと金コロイド粒子標識化抗ヒトインスリン 'マウスモノクローナル抗体 (IgG) とが反応する。反応液は毛管 2004/011792

流によりさら,にメンプレンを進み、試料中のィンスリンと結合しなかった金コロイド粒子標識化抗ヒトインスリン 'マウスモノクローナル抗体 (I gG)がインスリン固定化部位にて捕捉される。このインスリン固定部分での反応後、インスリン固定部分に固定化されなかったィンスリンと金コロイド粒子標識化抗ヒトインスリン 'マウスモノクローナル抗体 (IgG) との複合体が、毛管流により、水晶振動子上に移動し、水晶振動子上の微小空間を満たした。この複合体は、抗マウス Ig G .ャギポリクローナル抗体固定化水晶振動子上で捕捉され、反応液は吸収パッドに吸収された。反応液が吸収パヅドに吸収された後、水晶振動子を取り出しアブイニクス Q (ィニシアム社製）に装着し、容器に pH7. 5、 1 Ommo 1/Lトリス緩衝液を力！]え、 5分後に振動数を測定した。

試料として、 ① pH7. 5、 1 Ommo 1ZLトリス緩衝液、および、 300 ngZmLのィンスリン標準液をそれそれ用いた。試料毎に水晶振動子を取り替えて、振動数を測定した。まず、試料を添加する前の振動数を測定し、次いで、 ① P H7. 5、 1 Ommo 1ZLトリス緩衝液（5〃L) を添カロし、吸収パッドに緩衝液が吸収された後の振動数を測定し、両振動数の差を算出した（この振動数の差を △1とする）。次に、 ① pH7. 5、 1 Ommo 1/Lトリス緩衝液（5 L)の代わりに、 ②の試料（5〃L) を添加し、 ①の場合と同様に、各試料を添加する前の振動数と、各試料を添加し、吸収パッドに反応液が吸収された後の振動数を測定し、両振動数の差を算出した（各試料に対応する振動数の差を△ 2とする）。振動数の差 (Δ2)から Δ1を差し引いた ί直、すなわち、ブランクを差し引いた値は、 137 5 (-AF/Hz)であった。，

次に、試料として、ィンスリン標準液 (300n g/mL)の代わりに糖尿病患者の血清を用いて同様の測定を行ったところ、ブランクを差し引いた値は 577 (- 厶 F/H z )であった。この値から、該血清中のィンスリン濃度は、 126n g/m Lと算出された。一方、該血清中のィンスリン濃度を、ィンスリン測定用キヅトであるケミルミインスリン（バイエルメディカル社製）を用いて測定したところ、 1 25ngZmLであった。従って、実施例 4の器具を用いることにより、ヒト血清中のインスリン濃度が正確に測定できることが判明した。

難例 6 觸線作成用キット付き CRP測定用器具

実施例 1で作製した CRP測定用器具を 6枚用意し、図 11に示すように胁ォ状に並べた。中心付近の各試料添加部位には例えば、被検液を器具 1の添加部位に、例 2において使用した 5つの標準液、すなわちヽ ① pH 7. 5、 1 Ommo 1 /Lトリス緩衝液のみ、 ② 0. 05〃g/mLの CRP標準液ヽ ③ 0. l〃gZm Lの CRP標準液、 ④ 0. 2〃 /1111^の〇1 ?標準液ヽおよび、 ©0. 4〃gZ mLの CRP標準液を試料と同量、器具 2〜 6の添加部位にそれぞれ添加す^)。実施例 2における方法と同様に、器具 2〜 6におけるプランクを差し引いた振動数の変ィ匕量から検量線を作製し、器具 1におけるブランクを差し引いた振動数の変化量を該検量線に適用することによって、該被^ t夜中の C R P濃度を測定することができる。

産業上の利用可能！"生

本発明により、高感度な定量分析を可能とする簡便なィムノクロマトグラフィー測定用器具、装置および測定方法が提供される。

Claims

請求の範囲

1. 試料中の測定対象物が展開液の毛管流により移動可能であるような支持体上に試料添加部位（S) と検出部位 (Q) とを有する測定対象物測定用器具であつて、該検出部位は 2つの電極に挟まれた圧電振動子を有し、該圧電振動子上にはトラヅパ一 A

(c 1)または測定対象物類ィ议物（c 1，）が固定されており、該支持体上には、ノインダー（bl)が展開液の毛管流により移動可能であるように保持されているバィンダ一保持部位 (BR) を有することを碰とする測定対象物測定用器具。

2. 該バインダー保持部位が、該顯添加部位と該検出部位との間に設けられている請求項 1記載の器具。

3. 該バインダー保持部位が、該検出部位を挟んで該綱添加部位と反対側に設けられている請求項 1記載の器具。

4. 試料中の測定対象物が展開液の毛管流により移動可能であるような支持体上に試料添加部位（S)と検出部位（Q)とを有する測^ r寸象物測定器具であって、該検出部位は 2つの電極に挟まれた圧電振動子からなり、該圧電振動子上には測定対象物に結合するトラッパ一 A (cl)、あるいは、標識化測定対象物もしくは測定対象物とバインダーとの複^ k 及び、測定対象物もしくは測定対象物類似物と標識化バインダーとの複合体に結合するトラヅパー B (c3)が固定されており、該支持体上には、バインダー（bl)が展開液の毛管流により移勲可能であるように保持されているバインダー保持部位 (BR) を有し、さらに該支持体上には測定対象物類似物 (b5)が展開液の毛管流により移動しないように該バインダー保持部位と検出部位の間に固定されているかもしくは該支持体上に測定対象物類似物 (b 5 ) が展開液の毛管流により移動可能であるように保持されている測定対象物類似物固定部位 (DF) または測定対象物類似物保持部位（DR) を有することを特徴とする測象物測定用器具。

5. ノインダ一が標識されたものである請求項 1〜4のいずれかに記載の器具。

6. 試料中の測定対象物が展開液の毛管流により移動可能であるような支持体上に試料添加部位（S)と検出部位（Q)とを有する測象物測定器具であって、該検出部位は 2つの^ に挟まれた圧電振動子を有し、該圧電振動子上にはバインダー (c2)が固定されており、該支持体上には、測定対象物類似物（b2)が展開液の毛管流により移動可能であるように保持されている測定対象物類似物保持部位（D R) を有することを赚とする測定対象物測定用器具。

7. 該測象物類似物保持部位が、該添加部位と該検出部との間に設けられている請求項 6記載の器具。

8. 該測定対象物類似物保持部位が、該検出部を挟んで該添加部位と反対側に設けられている請求項 6記載の器具。

9. 試料中の測定対象物が展開液の毛管流により移動可能であるような支持体上に試料添加部位（S)と検出部位（Q)とを有する測定対象物測定器具であって、該検出部位は 2つの電極に挟まれた圧電振動子からなり、該圧電振動子上にトラッパー B ( c 3 ) が固定されており、該支持体上には、測定対象物類似物（b 2 ) およびバインダー (b 3 ) が展開液の毛管流により移動可能であるように保持されている測定対象物類似物保持部位 (D R) およびバインダー保持部位 (B R) を有することを特徴とする測寸象物測定用器具。

10. 試料中の測定対象物が展開液の毛管流により移動可能であるような支持体上に試料添加部位 ( S ) と検出部位 (Q) とを有する測定対象物測定器具であつて、該検出部位は 2つの電極に挟まれた圧電振動子を有し、該圧電振動子上には測定対象物に結合するバインダー ( c 2 ) が固定化されており、該支持体上には、測定対象物類似物 (b 2 ) が展開液の毛管流により移動可能であるように保持されている測定対象物類似物保持部位 (D R) を有し、さらに該支持体上には、バインダ一 (b 4 ) が展開液の毛管流により移動しないように該測定対象物類似物保持部位と検出部位との間の支持体中に固定されているバインダー固定部位 (B F) を有することを特徴とする測定対象物測定用器具。

11. 測定対象物類似物が標識されたものである請求項 6〜 1 0のいずれかに記載の器具。

12. 該標識が不溶性小胞体である請求項 5または 1 1に記載の器具。

13. 該不溶性小胞体が金属コロイド又はラテックスである請求項 1 2記載の

14. 試料中の測定対象物が展開液の毛管流により移動可能であるような支持体上に試料添加部位 ( S ) と検出部位 (Q) とを有する測定対象物測定器具であつて、該検出部位は 2つの電極に挟まれた圧電振動子からなり、該圧電振動子上にはトラッパ一 A (c 1)、測定対象物類ィ议物（c 1，）、バインダー（c 2) またはトラヅパ一 B (c3) が固定されていることを赚とする測定対象物測定用器具。

15. さらに、展開液吸収部位 (d) を含有する請求項 1〜14

のいずれかに記載の器具。

16. 該検出部位には、トラッパ一 A (c 1)、測定対象物類似物（c 1，）、ノインダ一 (c 2) またはトラッパ一 B (c 3) が固定されている 2つの ¾gに挟まれた圧電振動子の他にもう一つの 2つの電極に挟まれた圧電振動子を有し、該圧電振動子は、トラッパ一 A (c l)、測定対象物類似物（c 1，）、バインダー（c 2) およびトラヅパ一 B (c 3) の何れも固定されていないものである請求項 1〜15 のいずれかに記載の器具。

17. 該圧電振動子が水晶振動子である請求項 1〜 16のいずれかに記載の器具。

18. 請求項 1〜17のいずれかに記載の器具と、該器具の圧電振動子の電極に連絡し、該圧電振動子の振動子数を測定する振動数測定回路と、該振動翻 I淀回路に連絡し、振動数から測定対象物濃度を演算する濃度演算回路とを有する測定対

19. 圧電振動子上に固定された物質と特異的に結合することにより.生じる該圧電振動子の振動数の変化から試料中の測定対象物を定量する方法にぉヽて、圧電振動子上にはトラヅパ一 A (c 1) または測^寸象物類似物 (c 1') が固定されており、試料中の測定対象物およびバインダ一が展開液の毛管流により移動可肯であるような支持体を用いて、と該バインダーとを該トラッパ一 Aまたは該測定対象物類似 fJに供給し、圧電振動子上に固定された物質と特異的に結合させることを特徴とする試料中の測定対象物の定量方法。

20. 該試料と該バインダ一が該トラヅパ一 Aまたは該測定対象物類似物に対し同じ方向の毛管流により供給される請求項 19言 3載の定量方法。

21. 該試料と該バイシダ一がトラッパ一 Aまたは測定対象物類似物に対し逆の方向の毛管流により供給される請求項 19記載の定量方法。

22. 圧電振動子上に固定された物質と特異的に結合することにより生じる該圧電振動子の振動数の変ィ匕から試料中の測定対象物を定量する方法において、圧電振動子上にはトラヅパ一 A ( c 1 )またはトラッパ一 B ( c 3 )が固定されており、測定対象物類似物 (b 5 ) が展開液の毛管流により移動しないように固定されているが、試料中の測定対象物およびバインダー (b 1 ) が展開液の毛管流により移動可能であるような支持体を用いて、 .試料と該バインダ一とを該トラッパ一 Aまたはトラヅパー Bに供給し、圧 mig動子上に固定された物質と特異的に結合させることを特徴とする試料中の測定対象物の定量方法。

23. 圧電振動子上に固定された物質と特異的に結合することにより生じる該圧電振動子の振動数の変化から試料中の測定対象物を定量する方法において、圧電振動子上にはトラヅパー A ( c 1 )またはトラッパ一 B ( c 3 )が固定されており、試料中の測定対象物、バインダー (b 1 ) および測定対象物類似物 (b 5 ) が展開液の毛管流により移動可能であるような支持体を用いて、試料と該ノィンダーと該測定対象物類似物とを該トラッパ一 Aまたはトラヅパ一 Bに供給し、圧電振動子上に固定された物質と特異的に結合させることを特徴とする試料中の測定対象物の定

24. バインダ一が標識されたものである請求項 1 7〜2 3のいずれかに記載の方法。

25. 圧電振動子上に固定された物質と特異的に結合することにより生じる該圧電振動子の振動数の変化から試料中の測定対象物を定量する方法において、圧電振動子上にはバインダー ( c 2 ) が固定されており、試料中の測定対象物および測定対象物類似物 (b 2 ) が展開液の毛管流により移動可能であるような支持体を用いて、試料と該測定対象物類似物とを該バインダーに供給し、圧電振動子上に固定された物質と特異的に結合させることを特徴とする試料中の測定対象物の定量方法。

26. 該試料と該測定対象物類似物が該バインダーに対し同じ方向の毛管流により供給される請求項 2 5記載の定量方法。

27. 該試料と該測定対象物類似物が該バインダ一に対し逆の方向の毛管流により供給される請求項 2 5記載の定量方法。

28. 圧電振動子上に固定された物質と特異的に結合することにより生じる該圧電振動子の振動数の変ィ匕から試料中の測定対象物を定量する方法において、圧電振動子上にはトラヅパー B ( c 3 ) が固定されており、試料中の測定対象物、測定対象物類似物 (b 2 ) およびバインダ一 (b 3 ) が展開液の毛管流により移動可能であるような支持体を用いて、試料と該測定対象物類似物と該バインダ一とを該トラッパ一 Bに供給し、圧電振動子上に固定された物質と特異的に結合させることを特徴とする抖中の測 ^ォ象物の定量方法。

.

29. 圧電振動子上に固定された物質と特異的に結合することにより生じる該圧電振動子の振動数の変ィ匕から試料中の測定対象物を定量する方法において、圧電振動子上にはバインダ一 (c 2) が固定されており、バインダ一

(b4) が展開液の毛管流により移動しないように固定されているが、試料中の測定対象物および測定対象物類似物 (b2) が展開液の毛管流により移動可能であるような支持体を用いて、試料と測定対象物類似物とを該バインダーに供給し、圧電振動子上に固定された物質と特異的に結合させることを特徴とする試料中の測定対象物の定量方法。

30. 測定対象物類似物が標識された物である請求項 25〜 29のいずれかに記載の方法。

31. 該標識が、不溶性小胞体である請求項 24または 30に記載の定量方法。

32. 該不溶性小胞体が、金属コロイド又はラテックスである請求項 31記載の定量方法。

33. 圧電振動子上に固定された物質と特異的に結合することにより生じる該圧電振動子の振動数の変ィ匕から試料中の測定対象物を定量する方法において、圧電振動子上にはトラヅパー A (c ,l) が固定されており、試料中の測定対象物が展開液の毛管流により移動可能であるような支持体を用いて、試料を該トラヅパー Aに供給し、圧電振動子上に固定された物質と特異的に結合させることを特徴とする試料中の測定対象物の定量方法。

34. さらに、トラッパ一 A (c 1)ヽ測^ォ象物類似物（c 1，)ヽバインダ一 (c 2) およびトラヅパー B (c 3) の何れも固定されていない第二の圧慰辰動子を用い、試料を、トラヅパー A (c 1)、測定対象物類似物

(c l，）、バインダー (c 2) またはトラッパ一 B (c 3) が固定化された第一の圧電振動子並びに第二の圧電振動子に供給し、第二の振動数を対照として用いる請求項 17〜 29のいずれかに記載の方法。

35. 圧電振動子が水晶振動子である請求項 19〜34のいずれかに記載の方法。