WO2004101621A1 - Immunoglobuline (ig) y specifique contre le syndrome respiratoire aigu severe (sras), technique de preparation de celle-ci et combinaison de preparations contenant celle-ci - Google Patents
Immunoglobuline (ig) y specifique contre le syndrome respiratoire aigu severe (sras), technique de preparation de celle-ci et combinaison de preparations contenant celle-ci Download PDFInfo
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Classifications
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- C12N2770/38034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Definitions
- the invention relates to an anti-atypical pneumonia (SARS) specific IgY and a preparation method thereof, in particular to a multiple IgY composite preparation method and a combined preparation for preventing and treating atypical pneumonia.
- SARS anti-atypical pneumonia
- Atypical pneumonia also known as "Severe Acute Respiratory Syndrome (SARS)
- SARS severe Acute Respiratory Syndrome
- WHO World Health Organization
- a variant of the virus is the pathogen that causes atypical pneumonia. This disease is acute, with fever as the first symptom, and has cough (mostly dry), less sputum, and severe cases of rapid breathing, shortness of breath, or obvious breathing Distressed.
- SARS atypical pneumonia
- antiviral drugs such as Ribavirin (triazole), etc.
- glucocorticoids and antibiotics or Chinese herbal medicine At present, there are no chemicals that have a true cure for the virus worldwide, and severe side effects are widespread. Health Canada based on the clinical experience of experts from the Canadian and U.S. Centers for Disease Control and Prevention, and Ribavirin's ineffective testing of the disease-causing coronavirus, plus many serious drug response reports, which were published in 2003. On May 1st, Ribavirin was discontinued.
- the use of glucocorticoids can damage the body's immune system. Large doses of glucocorticoids are often the main reason that patients eventually die without responding to the drug. Chinese herbal medicine only has a conditioning effect on atypical pneumonia (SARS), and it is difficult to have a precise and effective treatment effect.
- IgY immunoglobulin of Yoik
- IgG immunoglobulin that can specifically bind to the corresponding antigen, thereby inhibiting or changing the state or activity of the antigen (for certain bacteria or viruses), and promoting leaf separation through conditioning Nuclear cells or macrophages engulf bacteria or viruses; it can bind to viruses, change the conformation of the virus surface, prevent the virus from adsorbing to susceptible cells, and at the same time, the formed virus-IgY immune complex will be engulfed by macrophages.
- the purpose of the present invention is to provide a specific IgY that directly inhibits the main pathogenic virus of atypical pneumonia (SARS) and a method for preparing the same; the object of the present invention is also to provide a method that can directly inhibit the main cause of atypical pneumonia (SARS).
- the virus-specific IgY is a new combination of natural and safe, and effective, preventive and treatment of atypical pneumonia (SARS).
- SARS atypical pneumonia
- SARS atypical pneumonia coronavirus
- SARS coronavirus coronavirus as a representative atypical pneumonia (SARS) pathogen.
- SARS coronavirus coronavirus
- the representative pathogenic combination of atypical pneumonia (SARS) can be adjusted and changed in time.
- the present invention takes the Hong Kong group as an example.
- the Vero E6 cells were seeded in 10% FCS DMEM culture medium, the final cell concentration of IX 10 5 / ml.
- 15 ml of the above-mentioned culture solution was placed in a 100 ml culture flask, and the culture flask was placed at 37 ° C in a 5% CCh saturation incubator to culture into monolayer cells.
- the culture medium was then discarded, and the 4 different SARS coronavirus strains collected in Hong Kong were diluted to 100 TCID 50 with 2% FCS and 1% penicillin DMEM culture medium.
- the atypical pneumonia (SARS) pathogenic virus antigen prepared by the above method will be used to immunize laying hens separately; then strengthen every two weeks One injection and three immunizations are counted; 20 days after the first immunization, the immune eggs produced by the hens after immunization are detected, and corresponding detected antigens are coded and labeled.
- SARS atypical pneumonia
- the above immunization method and injection frequency can be appropriately adjusted and changed according to the actual situation; the same immunization technology can also be applied and the above antigens can be used to lay laying ducks, laying geese, laying turkeys, or laying ostriches, etc. Laying birds are immunized to obtain corresponding immune eggs.
- SARS virus specific IgY crude extracts First, classify and label the immune eggs according to the different immunized birds and the antigens used for immunization, and wash the immune eggs with flowing water. , And then scrub and disinfect with alcohol; use an eggbeater to break the detected immune eggs, filter the egg white with an yolk sieve, leave the egg yolks, stir the hooks, and measure the volume of the resulting egg yolks. Add distilled water twice, dilute and mix well, adjust the pH to 5.5-6.0 with NaOH solution;
- the diluted diluent with the adjusted pH value is further fully stirred and homogenized, and then it is cooled to 2-6 ° C and left to stand for 12 hours to 24 hours.
- the diluent is added to a high-speed centrifuge and centrifuged for 20 minutes.
- the supernatant was added to an ultrafilter for ultrafiltration and concentrated 10-20 times.
- Sodium alginate was added to the concentrated slurry at a ratio of 0.1 to 0.3%, and stirred thoroughly; and then added to a high-speed centrifuge to centrifuge.
- the SDS-PAGE electrophoresis assay was used to detect the crude IgY extracts specific to the atypical pneumonia (SARS) pathogenic virus prepared according to the above process, and the pure IgY content was measured to be above 50%.
- SARS atypical pneumonia
- the anti-atypical pneumonia (SARS) pathogenic virus-specific IgY prepared by the above method is mixed with distilled water or physiological saline to prepare a solvent with a concentration of 0.01% or more, to prepare a new type of atomizer, and add it to various atomizers. After aerosolization, it can be used for patients with atypical pneumonia to inhale the respiratory tract and lungs, and can effectively inhibit the pathogenic virus that causes atypical pneumonia, thereby playing an effective therapeutic role.
- SARS anti-atypical pneumonia
- various clinically acceptable dosage forms can be made, such as nebulizer, nasal spray, nasal drops, and throat spray.
- Oral sprays, buccal tablets and other dosage forms are used to prevent and treat atypical pneumonia (SARS).
- SARS atypical pneumonia
- this anti-atypical pneumonia (SARS) pathogenic virus-specific IgY can also be added to our company's published patent technology (Patent Application No. 00101270.3, patent, patent No. 00101270.3, 2 : 1 or 3: 1 or other appropriate ratio).
- Publication No. 1307061 prepared anti-caries IgY, a new type of multi-functional specific composite IgY. Mixing this multi-effect specific compound IgY with excipients to make a spray or buccal tablet, as long as the spray is often used to spray the mouth and throat, or the new buccal tablet is often taken, it can be very convenient, Easily both prevent atypical pneumonia (SARS), prevent tooth decay, and eliminate oral inflammation and halitosis.
- SARS prevent atypical pneumonia
- the present invention also designs the practically applied dosage form and application method to directly apply to the lungs with the most concentrated pathogen And breathing channels, so the effect is direct, the target is accurate, the root cause is broken, and the effect is significant.
- the present invention fundamentally changes the current situation of treating atypical pneumonia (SARS), which generally requires a large number of internal medicines and hormones with indefinite curative effects, avoids damaging the patient's immune function, and overcomes the need for conventional methods of administration. A lot of chemicals enter the body ,
- the anti-atypical pneumonia (SARS) -specific IgY prepared by the present invention is also a unique pure natural biological agent, which is very safe to use without any toxic and side effects. Because it only directly targets the pathogenic pathogen of atypical pneumonia, The beneficial bacteria have a good protective effect; at the same time, it will not induce the production of drug-resistant strains at all, and it will also kill the beneficial bacteria together with the pathogens and cause "imbalance of the flora" like the general conventional drugs; The specific IgY of the present invention against atypical pneumonia (SARS) pathogens can build a normal flora ecology in pneumonia and the respiratory tract that is not easily infected by viruses and pathogenic bacteria, forming a natural protective barrier for the human body to achieve both treatment and prevention Dual purpose.
- SARS atypical pneumonia
- the specific IgY prepared by the present invention is a polyclonal antibody, which can inhibit several different pathogens, which is particularly significant for the pathogen-variant coronavirus of atypical pneumonia (SARS). Because this new type of coronavirus is particularly susceptible to mutation, only four have been found in Hong Kong. If a vaccine is to be developed, multiple vaccines are needed to achieve effective control. This greatly increases the prevention of this. Difficulty of a malignant infectious disease.
- SARS pathogen-variant coronavirus of atypical pneumonia
- the specific Ig of the present invention not only has an effect on mutant coronavirus of arbitrary type atypical pneumonia (SARS) directly immunized as an antigen, but also because highly conserved mammalian proteins are germlineally distant to birds It has strong immunogenicity; therefore, as long as a certain antigen is used to immunize birds with the patented immune activation patented technology (patent application number 02121244.9) invented by the company, the specific IgY produced will have a "common antigen" with the antigen. "Determinant" pathogens have strong inhibitory activity. That is, even if the coronavirus is mutated to some extent, its important part will not change in fact; the specific IgY of the present invention will still have an effect on its important part.
- SARS arbitrary type atypical pneumonia
- the Hong Kong type 1 coronavirus prepares the antigen according to the method of Article 2 of the above technical content, and hens are immunized with this antigen, and the method of Article 6 of the present invention is used to prepare the anti-Hong Kong type 1 coronavirus-specific IgY. Then, using Hong Kong type 1 coronavirus as the detection antigen, the anti-atypical pneumonia (SARS) -specific IgY antibody binding titer was measured by "ELISA method" (enzyme-linked immunosorbent assay). The results are shown in the following table
- the method of the present invention is used to prepare pathogenic virus antigens, and the immune activation method of the present invention is used to immunize eggs and poultry and prepare corresponding IgY.
- the prepared anti-Hong Kong type 1 coronavirus-specific IgY has The ideal broad spectrum not only has a strong inhibitory effect on the direct immunization of Hong Kong type 1 coronavirus antigen as shown in Experimental Example 1 above, the measured antibody binding titer is quite high (up to 1: 1024); The three other atypical pneumonia (SARS) coronaviruses that are mutated and not directly immunized also have a certain inhibitory effect, and the detected antibody binding titer is still ideal.
- SARS atypical pneumonia
- SARS serum-binding titers of specific IgY to these 5 different antigens.
- the test results are as follows
- SARS Anti-atypical pneumonia
- the method of the present invention uses a variety of pathogenic viruses to prepare a special complex antigen containing a variety of viral components, and then uses this special complex antigen to apply the immune activation method of the present invention to immunize egg-laying poultry.
- the prepared anti-atypical pneumonia (SARS) -specific IgY is particularly good in broad-spectrum.
- SARS atypical pneumonia
- SARS atypical pneumonia coronaviruses that are directly immunized as antigens
- SARS atypical pneumonia
- Atypical pneumonia (SARS) pathogenic virus antigens were prepared according to the method of the technical content (2) of the present invention, and then this antigen was used to immunize laying hens, laying hens, laying geese, laying hens, Egg turkey and laying ostrich. Then, the method of the present invention is used to prepare: (1) anti-atypical pneumonia (SARS) specific chicken IgY, (2) anti-atypical pneumonia (SARS) specific duck IgY, (3) anti-atypical pneumonia (SARS) Specific goose IgY, (4) anti-atypical pneumonia (SARS) specific turkey IgY, (5) anti-atypical pneumonia (SARS) specific ostrich IgY.
- SARS anti-atypical pneumonia
- Hong Kong type 4 coronavirus 1 256 From the above test results, it can be seen that the method of the present invention is used to make antigens, and the immune activation method is used to immunize hens, female ducks, female geese, laying turkeys or laying ostriches.
- the method of the invention is to prepare anti-atypical pneumonia (SARS) specific chicken IgY, anti-atypical pneumonia (SARS) specific duck IgY, anti-atypical pneumonia (SARS) specific goose IgY, and anti-atypical pneumonia (SARS) specific Turkey IgY, anti-atypical pneumonia (SARS) specific ostrich IgY five different IgY, although the immunized birds are different, the specific IgY prepared is very effective against several pathogenic viruses that cause atypical pneumonia Good suppression effect. Since duck IgY does not have an Fc segment, if duck IgY is made into a dosage form for injection and injected into the human body, the human body is unlikely to produce a rejection reaction, which is the greatest advantage of duck IgY.
- SARS anti-atypical pneumonia
- SARS moderate to severe atypical pneumonia
- the "anti-atypical pneumonia (SARS) specific composite IgY combination nebulizer" of the present invention is atomized using a compressed atomizing air pump. After the patient inhaled. Inhale every two hours for 5-10 minutes.
- SARS anti-atypical pneumonia
- the "anti-atypical pneumonia (SARS) specific IgY” of the present invention can directly and effectively target the pathogenic virus that causes atypical pneumonia, and solve the problem from the root cause of the disease; on the one hand, neutralize these pathogens and change these The activity of pathogens and promote the body's immune system to eliminate these pathogens.
- the specific IgY of the present invention has a strong broad-spectrum inhibitory ability, and even if certain mutations occur in the pathogenic virus, a certain inhibitory effect will still be produced.
- Antigens were made with Pneumococcus pneumoniae, and 1,000 female ducks were immunized with 1 ml of antigen each time. After the first injection, they were boosted once every two weeks for a total of three times. Seven months after the first injection, The eggs produced by these ducks were labeled and the IgY was extracted according to conventional methods. The titer of the prepared IgY was detected by ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay). The immune system with an IgY titer of 256 was selected. 200 ducks with particularly strong response ability, and then use the eggs produced by this batch of ducks to hatch excellent duck breeds, which will grow up to 2-3 months as the preferred special female duck with high immune response ability, and select among them 40
- the present invention takes the Hong Kong group as an example. Vero E6 cells were seeded in 10% FCS DMEM culture medium with a final cell concentration of 1 X 10 5 / mlo. 15 ml of the above culture solution was placed in a 100 ml culture flask, and the culture flask was placed at 37 ° C, saturated with 5% C0 2 Monolayer cells are cultured in an incubator. Then discard the culture solution, dilute the 4 different SARS coronavirus strains collected in Hong Kong with 2% FCS and 1% penicillin DMEM culture solution to 100 TCID 50 / mL. Take 10 ml of this dilution and add to the cell culture.
- the cell culture flask was placed in a 37 ° C, 5% CO 2 saturated humidity incubator for 24 hours, and the virus was harvested when the cell lesion reached ++.
- the culture bottle was thawed three times, and the culture supernatant was collected, put into a high-speed centrifuge, centrifuged at 15000 rpm, and the supernatant was collected.
- Formaldehyde was added to a final concentration of 0.1%, and the four cultured SARS viruses were inactivated at 37 ° C for 24 hours.
- Cultured inactivated virus Store at 4 ° C or -20 ° C.
- the pulper is pulverized and homogenized at a high speed at a speed of 10,000 to 30,000 rpm to form an oil-in-water solution by high-speed stirring, that is, a special complex antigen containing a plurality of different types of viruses caused by atypical pneumonia (SARS) pathogenic viruses is made.
- SARS atypical pneumonia
- SARS coronavirus complex antigen Using the prepared (SARS) coronavirus complex antigen, a combination of subcutaneous injection and wing vein injection was used to intensify the immune system to select special female ducks, and the injection volume of each female duck reached 1-2nd antigen. Intensify the injection once every two weeks, and immunize a total of three times within one month; 20 days after the first immunization, 1,000 immune eggs produced by female ducks were seized;
- SARS anti-atypical pneumonia
- SARS anti-atypical pneumonia
- SARS Anti-Atypical Pneumonia
- SARS anti-atypical pneumonia
- IgY combination solution 200 liters of anti-atypical pneumonia (SARS) pathogenic virus IgY combination solution was formulated according to the following formula;
- SARS Anti-Atypical Pneumonia
- SARS anti-atypical pneumonia
- SARS anti-atypical pneumonia
- SARS anti-atypical pneumonia
- SARS anti-atypical pneumonia
- SARS anti-atypical pneumonia
- SARS anti-caries IgY dry powder
- small mixer to make 300 parts by weight of anti-atypical pneumonia (SARS) and oral inflammation compound IgY dry powder ;
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Description
抗非典型肺炎（SARS)特异性 IgY制备方法及其组合制剂
技术领域
本发明涉及一种抗非典型肺炎（SARS)特异性 IgY及其制备方法， 特别是涉及用于预 防和治疗非典型肺炎的多种组合的复合 IgY制备方法和组合制剂。 背景技术
非典型肺炎又称为 "严重急性呼吸综合症 （Severe Acute Respiratory Syndrome, 简称 SARS), 是一种传染性强的急性呼吸系统疾病， 世界卫生组织 （WHO) 于 2003年 4月 16日 正式确认冠状病毒的一个变种是引起非典型肺炎的病原体。这种病起病急， 以发热为首发 症状， 并有咳嗽 （多为干晐）、 少痰， 严重者出现呼吸加速、 气促， 或明显呼吸窘迫。
目前世界上治疗非典型肺炎（SARS)的方法主要是使用抗病毒药物 [如 Ribavirin (三氮 唑核苷） 等]和糖皮质激素以及抗生素或中草药。 目前， 全世界尚无真正对病毒有确切疗 效的化学药物， 而且普遍存在严重的副作用。加拿大卫生部根据加拿大与美国疾病控制及 预防中心专家的临床经验， 以及 Ribavirin (三氮唑核苷） 对引发疾病的冠状病毒无效的测 试， 加上不少严重的药物反应报告， 已于 2003年 5月 1日宣布停止使用 Ribavirin (三氮唑核 苷)。 使用糖皮质激素会使人体的免疫系统受损， 大剂量使用糖皮质激素往往是导致病人 最后对药物毫无反应， 最后无药可救而死亡的主要原因。 中草药对非典型肺炎 （SARS) 只有调理作用， 很难有确切有效的治疗效果。
IgY (Immunoglobulin of Yoik) 属 IgG类免疫球蛋白， 能与相应抗原发生特异性结合， 从而抑制或改变了该抗原 （为某些细菌或病毒）的状态或活性， 并通过调理作用， 促进分 叶核细胞或巨噬细胞对细菌或病毒的吞噬； 它能与病毒结合， 改变病毒表面的构象， 阻止 病毒吸附于易感细胞， 同时， 形成的病毒 -IgY免疫复合物会被巨噬细胞吞噬。
由于 IgY能够特异性与病原体结合并将其有效抑制， 就可以克服抗病毒化学药物对病 毒实际杀灭作用不大、而对人体毒副作用又十分明显的致命缺点， 从而达到有的放矢地从 发病根源上预防和治疗由变异的冠状病毒这种病原体引发的非典型肺炎（SARS) 的目的。 技术内容
本发明的目的是提供一种直接抑制非典型肺炎（SARS)主要致病病毒的特异性 IgY及 其制备方法； 本发明的目的还在于提供一种由可直接抑制非典型肺炎 （SARS) 主要致病 病毒的特异性 IgY制成的天然安全又具有特效作用的、 预防和治疗非典型肺炎（SARS) 的 新型组合制剂。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
( 1)优选引致非典型肺炎（SARS) 的主要致病病毒： 根据世界卫生组织（WHO) 的 确认， 冠状病毒的一个变种是引发非典型肺炎 （SARS) 的病原体。 但是， 在抽取含有冠 状病毒的样本进行基因分析中发现， 这种病毒变异速度快， 仅香港就巳发现 4种非典型肺 炎 （SARS) 冠状病毒的病源。 本发明根据基因图谱分析不同国家和地区的非典型肺炎
(SARS) 冠状病毒的基因排序的结果， 按大致相似的原则进行分类组合， 选取有明显差 异的几种非典型肺炎（SARS)冠状病毒作为代表性的主要致病病毒。 现优选香港的 4种不 同的非典型肺炎 （SARS) 冠状病毒以及北京传播的和加拿大传播的共 6种非典型肺炎
(SARS) 冠状病毒作为代表性的非典型肺炎 （SARS) 病原体。 今后， 随着这种冠状病毒 在人传人的过程中不断变异， 以及对这种冠状病毒基因排序组合工作的进一步完善和深 入， 可以及时调整和变更代表性的非典型肺炎 （SARS) 的病原体组合。 另外， 也可以按 照不同国家和地区编组， 选取不同的 SARS冠状病毒组合， 如香港组（若干型组成)、 北京 组 （若干型组成）、 加拿大组 （若干型组成） 等等。
(2) 非典型肺炎 （SARS) 致病病毒特殊复合抗原的制备： 本发明以香港组为例。 将 Vero E6细胞接种于 10% FCS DMEM培养液中， 细胞终浓度 I X 105 /ml。将 15ml上述培养液置 于 100ml培养瓶中， 将此培养瓶放置在 37°C， 5% CCh饱和培养箱中培养成单层细胞。 然后 弃掉培养液， 将收集到的香港地区 4种不同的 SARS冠状病毒毒株用 2%FCS和 1%青链霉素 DMEM培养液稀释至 100 TCID 50 。取此稀释液 10ml加入细胞培养瓶中，并将此细胞培养 瓶放置在 37°C， 5% C02饱和湿度培养箱中培养 24小时后，待细胞病变达 + + + +时收获病毒。 收获病毒时将培养瓶冻融三次， 收集培养上清， 放入高速离心机中， 以 15000rpm转速离心 分离， 收集上清。 再加入甲醛至 0.1%的终浓度，在 37°C温度下， 经过 24小时分别灭活这 4种 培养的 SARS病毒。培养好的灭活病毒在 4°C或- 20°C保存。然后,将培养好的香港地区 4种不 同的 SARS冠状病毒按 1:1:1:1的比例或其他适当比例混合，再按 1:1比例或其他适当比例加入 福氏佐剂， 置入高速匀桨机中以 10000~30000rpm转速高速粉碎匀化， 通过高速搅拌形成油
包水溶液， 即制成非典型肺炎 （SARS) 致病病毒的含多种不同型的全病毒的特殊复合抗 原。
(3) 制备免疫蛋
应用本公司已申请的专利技术（专利申请号： 00101270.3和 021021244.9)， 将采用上述 方法制备的非典型肺炎 （SARS) 致病病毒抗原， 分别对产蛋母鸡进行免疫； 每隔二周再 强化注射一次， 计免疫三次； 第一次免疫 20天后， 检取免疫后的母鸡所产免疫蛋， 并对应 不同的抗原， 对所检取的免疫蛋进行编码标记。
以上免疫方法和注射频率可根据实际情况适当调整和变化；也可应用上述同样的免疫 技术，采用上述抗原， 分别对产蛋母鸭或产蛋母鹅或产蛋火鸡或产蛋鸵鸟等不同产蛋禽类 进行免疫， 得到相应的免疫蛋。
(4) 抗非典型肺炎 （SARS)致病病毒特异性 IgY粗提物的制备： 首先根据被免疫的 禽类不同以及免疫所用抗原不同， 将免疫蛋分类并标记编码， 用流动水洗净免疫蛋， 再用 酒精擦洗消毒； 用打蛋机将检取的免疫蛋打碎， 用蛋黄筛筛滤去蛋清， 留下蛋黄， 搅拌均 勾，测量所得的蛋黄的体积，按此体积的 4-6倍加入蒸馏水，进行稀释并混合均匀，用 NaOH 溶液调整 pH至 5.5-6.0之间；
将调整好 pH值的稀释液进一步充分搅拌均匀， 然后将其冷却至 2 - 6°C， 静置 12小时 - 24小时； 将稀释液加入高速离心分离机中， 离心分离 20分钟； 将分离所得的上清再加入超 滤器中进行超滤并浓缩 10-20倍， 按 0.1〜0.3%的比例将海藻酸钠加入浓缩后的浆料中， 充 分搅拌； 再加入高速离心机中离心， 取上清， 去除脂蛋白； 将离心分离后的浆料加入超滤 机， 过超微膜， 进行过滤除菌； 将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥， 即制得 抗非典型肺炎 （SARS)致病病毒特异性 IgY粗提物干粉成品； 最后， 将所制备的对应不同 抗原的特异性 IgY粗提物进行编码标记。
(5) 抗非典型肺炎 （SARS) 致病病毒特异性 IgY的纯化： 采用本公司已公开的专利 技术（专利申请号 00101270.3， 专利公开号 1307061)分别过离子交换柱 R凝胶交换柱对按以 上工艺所制取的抗非典型肺炎 （SARS) IgY粗提物进行缠化， 即得纯 IgY。
应用 SDS-PAGE电泳测定法， 对按以上工艺所制取的抗非典型肺炎（SARS)致病病毒 特异性 IgY粗提物进行检测， 测得其中纯 IgY含量为 50%以上。
(6) 采用本发明人发明的特殊免疫激活方法和改进的工艺技术所制得的抗非典型肺
炎 （SARS) 致病病毒特异性 IgY参照常规 "ELISA法" （酶联免疫吸附试验）进行活性检 检测结果显示， 抗非典型肺炎 （SARS) 致病病毒特异性 IgY对香港 4种代表性非典型 肺炎 (SARS) 冠状病毒的抗体结合效价都达到 1:512以上。
将用以上方法制备的抗非典型肺炎（SARS)致病病毒特异性 IgY配以蒸馏水或生理盐 水调配成浓度 0.01%以上的溶剂， 制成一种新型雾化剂， 加入各种雾化器中， 经过雾化后， 供非典型肺炎患者吸入呼吸道和肺部产生作用，就可以有效抑制引起非典型肺炎的致病病 毒， 从而起着有效的治疗作用。
将 0.01-80%这种抗非典型肺炎特异性 IgY配以 99.99-20%的辅料， 可制成各种临床可接 受的剂型， 如雾化剂、 鼻喷剂、 滴鼻剂、 喷喉剂、 口喷剂、 口含片等剂型， 用于预防和治 疗非典型肺炎 （SARS)。
作为预防用的剂型， 这种抗非典型肺炎 （SARS) 致病病毒特异性 IgY还可以 2 : 1或 3 ： 1或其他适当比例加入用本公司已公开的专利技术（专利申请号 00101270.3， 专利公开号 1307061)制备的抗龋齿菌 IgY,制成一种新型的多功效特异性复合 IgY。将这种多功效特异 性复合 IgY配以辅料制成喷雾剂或口含片， 只要经常使用这种喷雾剂喷口腔和咽喉部位， 或者经常含服这种新型口含片， 就可以十分方便、 轻松地既预防非典型肺炎 （SARS), 又 防止蛀牙、 消除口腔炎症和口臭， 达到一举多得的目的。
目前对非典型肺炎 （SARS)无特效药物， 一般釆用对症治疗和大量投服抗生素、 广 谱抗病毒药以及免疫抑制剂的糖皮质激素。众所周知， 抗生素对病毒并没有杀灭作用， 广 谱抗病毒的抗生素的滥用反而破坏了人体的正常人 "菌群平衡" ， 造成 "菌群失调" 。 临 床实践已证实， "菌群失调" 不仅仅是疾病发生的结果，也是病毒感染性疾病的促进因素， 反过来会使病情加重甚至恶化。免疫抑制剂和激素的大量使用， 会直接造成患者免疫系统 受损， 使免疫机能愈治愈差， 极易继发细菌感染， 最终更难治愈。
由于本发明制备的特异性 IgY最大特点是直接针对非典型肺炎（SARS)的病原体发生 特异性抑制作用，本发明又将实际应用的剂型和施药方式设计成直接施于病原体最集中的 肺部和呼吸通道， 因而作用直接、 目标准确、 治本断源、 效果显著。 同时， 本发明从根本 上改变了目前治疗非典型肺炎 （SARS) —般需要大量内服疗效并不确切的化学药品和激 素的状况， 避免损害患者的免疫机能， 也克服了常规施药方式要使大量化学药物进入人体
,
循环后才产生作用而会给人体带来种种不良影响的弊病。
本发明所制备的抗非典型肺炎 （SARS)特异性 IgY又是一种独特的纯天然生物制剂， 使用十分安全， 无任何毒副作用， 由于它仅仅针对非典型肺炎的致病病原体直接作用， 对 有益菌都有很好的保护作用； 同时， 它完全不会诱发抗药菌株的产生， 也会象一般常规药 物那样， 将有益菌也和病原体一道杀灭而造成 "菌群失调" ； 反过来， 本发明的抗非典型 肺炎 （SARS)病原体的特异性 IgY可以在肺炎和呼吸道构建一种不易被病毒和致病菌感染 的正常菌群生态， 形成一道人体天然保护屏障， 达到既治疗又预防的双重目的。 另外， 本 发明所制备的特异性 IgY是一种多克隆抗体，它可以对几种不同的病原体都产生抑制作用， 这一点对于非典型肺炎 （SARS) 的病原体一 变异的冠状病毒特别有意义。 由于这种新 型冠状病毒特别容易变异， 仅在香港目前已发现有 4种之多； 如果要研制疫苗， 则需要有 多种疫苗， 才会真正达到有效控制的效果， 这就大大增加了预防这种恶性传染病的难度。
而本发明的特异性 Ig不仅对直接作為抗原免疫的任意型的非典型肺炎（SARS)的变异 冠状病毒有效果； 而且， 由于高度保守的哺乳动物蛋白质对种系发生学上距离较远的禽类 有较强的免疫原性； 因此， 只要以某种抗原采用我公司发明的免疫激活专利技术（专利申 请号 02121244.9)免疫禽类， 所制得的特异性 IgY， 对凡是与该抗原有 "共同抗原决定簇" 的病原体都会有强烈的抑制活性。也就是说， 既使冠状病毒发生了一定的变异， 实际上其 重要部分是不会变的； 本发明的特异性 IgY仍然会针对其重要部分产生作用。 因此， 照样 会使发生了新变异的冠状病毒受到抑制而失活。正因为采用本发明的方法制备的抗非典型 肺炎 （SARS)特异性 IgY具有特殊的广谱抑制能力； 所以， 可以解决因这种新冠状病毒变 异特别快而给相关疫苗和新药的研制带来相当大阻力的难题。 实验例 1:将来自香港的 4种不同的非典型肺炎（SARS)冠状病毒依次编码为香港 1型、 香港 2型、 香港 3型、 香港 4型。 香港 1型冠状病毒按上述技术内容第 2条的方法制作抗原， 再用这种抗原免疫母鸡，并采用本发明技术内容第 6条的方法制备抗香港 1型冠状病毒特异 性 IgY。 然后， 以香港 1型冠状病毒为检测抗原， 用 "ELISA法" （酶联免疫吸附试验）检 测所制得的抗非典型肺炎 （SARS)特异性 IgY抗体结合效价。 结果如下表
IgY 检测用抗原 抗体结合效价
抗香港 1型冠状病毒特 香港 1型冠状病毒 1： 1024
异性 IgY
实验例 2: 分别以香港 2型冠状病毒、 香港 3型冠状病毒、 香港 4型冠状病毒为检测用抗 原， 采用 "ELISA法" （酶联免疫吸附试验） 分别检测抗香港 1型冠状病毒特异性 IgY对这 三种检测抗原的抗体结合效价。 结果如下表
(酶联免疫吸附试验） 分别以香港 1型冠状病毒、 香港 2型冠状病毒、 香港 3型冠状病毒、 香港 4型冠状病毒以及北京传播的冠状病毒作为检测用抗原， 检测所制得的抗非典型肺炎
(SARS)特异性 IgY对这 5种不同抗原的抗体结合效价。 检测结果如下表
IgY 检测用抗原 抗体结合效价
抗非典型肺炎（SARS)
特异性 IgY 香港 1型冠状病毒 1： 512
抗非典型肺炎（SARS)
特异性 IgY 香港 2型冠状病毒 1： 512 抗非典型肺炎（SARS)
特异性 IgY 香港 3型冠状病毒 1： 512 抗非典型肺炎（SARS)
特异性 IgY 香港 4型冠状病毒 1： 512 抗非典型肺炎（SARS)
特异性 IgY 北京传播的冠状病毒 1： 256
从以上结果可以看到，以本发明的方法用多种致病病毒制作含多种病毒成份的特殊复 合抗原， 再用这种特殊复合抗原， 应用本发明的免疫激活方法免疫产蛋禽类， 所制备的抗 非典型肺炎 （SARS)特异性 IgY, 广谱性特别好， 除了对作为抗原直接免疫的几型非典型 肺炎 （SARS) 冠状病毒具有相当高的抗体结合效价外， 对没有作为抗原直接免疫的同种 不同型的非典型肺炎 （SARS) 冠状病毒也有很好的抑制作用， 达到相当理想的效果。 实验例 4: 分别按照本发明技术内容 （2) 的方法制作非典型肺炎 （SARS) 致病病毒 抗原，然后分别用这种抗原免疫产蛋母鸡、产蛋母鸭、产蛋母鹅、产蛋火鸡以及产蛋鸵鸟。 再分别采用本发明的方法制备得到： （1) 抗非典型肺炎 （SARS)特异性鸡 IgY、 (2) 抗非 典型肺炎 （SARS)特异性鸭 IgY、 （3)抗非典型肺炎 （SARS)特异性鹅 IgY、 (4)抗非典 型肺炎 （SARS) 特异性火鸡 IgY、 (5)抗非典型肺炎 （SARS)特异性鸵鸟 IgY。 然后， 釆 用 "ELISA法" （酶联免疫吸附试验）分别以香港 1型冠状病毒、 香港 2型冠状病毒、 香港 3 型冠状病毒、香港 4型冠状病毒为检测抗原， 检测这三种抗非典型肺炎（SARS)特异性 IgY 的抗体结合效价。 结果如下表
IgY 检测用抗原 抗体结合效价
香港 1型冠状病毒 1： 1024
抗非典型肺炎（SARS) 香港 2型冠状病毒 1： 1024
特异性鸡 IgY 香港 3型冠状病毒 1： 1024
香港 4型冠状病毒 1： 1024
香港 1型冠状病毒 1： 1024
抗非典型肺炎（SARS) 香港 2型冠状病毒 1： 1024
特异性鸭 IgY 香港 3型冠状病毒 1： 1024
香港 4型冠状病毒 1： 1024
香港 1型冠状病毒 1： 512
抗非典型肺炎（SARS) 香港 2型冠状病毒 1： 512
特异性鹅 IgY 香港 3型冠状病毒 1： 512
香港 4型冠状病毒 1： 512 '
, 香港 1型冠状病毒 1： 512
抗非典型肺炎（SARS) 香港 2型冠状病毒 1： 512
特异性火鸡 IgY 香港 3型冠状病毒 1： 256
香港 4型冠状病毒 1： 256
香港 1型冠状病毒 1： 256
抗非典型肺炎（SARS) 香港 2型冠状病毒 1： 256
特异性鸵鸟 IgY 香港 3型冠状病毒 1： 256
香港 4型冠状病毒 1： 256 从以上试验结果可以看出， 采用本发明的方法制作抗原， 用免疫激活方法免疫母鸡、 母鸭、 母鹅、 产蛋火鸡或产蛋鸵鸟， 再采用本发明的方法分别制得抗非典型肺炎 （SARS) 特异性鸡 IgY、抗非典型肺炎（SARS)特异性鸭 IgY、抗非典型肺炎（SARS)特异性鹅 IgY、 抗非典型肺炎 （SARS)特异性火鸡 IgY、 抗非典型肺炎 （SARS)特异性鸵鸟 IgY五种不同 的 IgY， 虽然免疫的禽类不同， 但是所制得的特异性 IgY对引致非典型肺炎的几种致病病毒 都有很好的抑制效果。由于鸭 IgY没有 Fc段，如果将鸭 IgY制成注射用剂型，注射入人体内， 人体不易产生排斥反应， 这是鸭 IgY最大的优点。 虽然免疫产蛋鸵鸟和产蛋火鸡所制得的 IgY抗体结合效价从检测数据看稍微低了一些， 但是， 由于鸵鸟和火鸡蛋个体特别大， 每
个免疫蛋所能提取得到的 IgY比鸡免疫蛋和鸭免疫蛋以及鹅免疫蛋都多得多， 这点对于工 业化大规模生产， 也是十分可取的。 实验例 5: 非典型肺炎（SA S)初发病患者使用以本发明的 "抗非典型肺炎（SARS) 特异性 Y" 为原料制作的组合雾化剂治疗的临床观察
( 1) 在刚入院隔离治疗的确诊病人中随意选 50名初发患者；
(2) 采用本发明制备的 "抗非典型肺炎 （SARS) IgY组合雾化剂" ， 药液打开后， 将其倒入 PARI型压缩雾化气泵中，经雾化供患者吸入。在给予持续鼻导管吸氧和其他相应 对症治疗措施配合的前提下， 每二小时吸入本发明的 IgY组合雾化剂一次， 每次持续 5-10 分钟。
(3) 每天观察试验患者的症状变化情况， 作详细记录；
(4) 经连续吸用 "抗非典型肺炎 （SARS) IgY组合雾化剂" 三天后， 32名患者髙热 逐步减退， 畏寒、 乏力、 全身不适等症状减轻。 吸用一周后， 只有 8名患者发热持续， 并 出现干咳、 胸痛， 其余患者全部不再发热， 症状明显减轻， 有 10名患者症状消除。 实验例 6: 非典型肺炎（SARS) 重症患者使用本发明的 "抗非典型肺炎 （SARS)特 异性复合 IgY"为原料制作的组合雾化剂治疗的临床观察结果：
( 1 ) 任选 50名住院隔离治疗的中、 重症非典型肺炎 （SARS) 患者；
(2) 在照常给予持续鼻导管吸气和其他相应对症治疗措施配合的前提下， 使用压缩 雾化气泵将本发明的 "抗非典型肺炎 （SARS)特异性复合 IgY组合雾化剂"雾化后供患 者吸入。 每二小时吸入一次， 每次持续 5-10分钟。
(3) 每夭观察试验患者症状情况， 详细记录。 结果如下表 治疗天数 发热和晐嗽等 发热和咳嗽等 无明显改善
症状减轻例数 症状消失例数
第 1-3天 18 0 32 第 4-7天 25 12 11 第 8-14天 5 27 12
第 15-21天 0 6 5
本发明的 "抗非典型肺炎 （SARS) 特异性 IgY"能够有的放矢地直接针对引致非典 型肺炎的致病病毒起有效抑制作用， 是从发病根源上解决问题； 一方面中和这些病原体， 改变这些病原体的活性， 并促进人体免疫系统清除这些病原体。特别是， 本发明的特异性 IgY具有很强的广谱抑制能力， 即使致病病毒发生了某些变异， 仍然会产生一定的抑制作 用。 实验结果证明， 本发明的 "抗非典型肺炎 （SARS)特异性 IgY"组合制剂， 对非典 型肺炎 （SARS) 的治疗效果和目前已采用的同样是 "被动免疫治疗" 的 "血清疗法"一 样， 效果比较理想； 而且， 由于本发明的特异性 IgY有较好的广谱抑制能力， 抗体活性也 强禧多， 又不会产生交叉反应等副作用， 纯度高、 来源广， 价格又低廉得多， 因此， 为预 防和治疗非典型肺炎（SARS)这种传染快、危害大的恶性传染病开辟了一条崭新的途径。 实施例 1: 制备 100g抗非典型肺炎 （SARS)特异性 IgY粗提物及纯 IgY
( 1 ) 选具高免疫应答能力的良种鸭：
用肺炎双球菌制作抗原， 分别免疫 1000只母鸭， 每次注射 lml抗原， 在第一次注射 后， 每隔二周再强化注射一次， 共三次； 于第一次注射后第 7个月， 把这些鸭所产的蛋标 记后按常规方法分别提取其中的 IgY， 以 ELISA法 （酶联免疫吸附实验） 检测所制得的 IgY的效价； 选出其中能制得 IgY效价 256的免疫应答能力特别强的鸭 200只， 再用这 批鸭所产的蛋孵出优良鸭种， 待其长大至 2— 3个月， 作为优选的高免疫应答能力的特种 母鸭， 并挑选其中 40只；
(2) 非典型肺炎 （SARS)致病病毒复合抗原的制备
本发明以香港组为例。 将 Vero E6细胞接种于 10% FCS DMEM培养液中， 细胞终浓度 1 X 105 /mlo 将 15ml上述培养液置于 100ml培养瓶中， 将此培养瓶放置在 37°C , 5% C02饱 和培养箱中培养成单层细胞。 然后弃掉培养液， 将收集到的香港地区 4种不同的 SARS冠 状病毒毒株用 2%FCS和 1%青链霉素 DMEM培养液稀释至 100 TCID 50/mL 取此稀释液 10ml加入细胞培养瓶中， 并将此细胞培养瓶放置在 37°C， 5% C02饱和湿度培养箱中培养 24小时后， 待细胞病变达 + + + +时收获病毒。 收获病毒时将培养瓶冻融三次， 收集培养上 清， 放入高速离心机中， 以 15000rpm转速离心分离， 收集上清。 再加入甲醛至 0.1%的终 浓度,在 37Ό温度下， 经过 24小时分别灭活这 4种培养的 SARS病毒。 培养好的灭活病毒
在 4°C或 -20Ό保存。然后,将培养好的香港地区 4种不同的冠状病毒按 1 : 1 : 1 : 1的比例或其 他适当比例混合， 再按 1 : 1 比例或其他适当比例加入福氏佐剂， 置入高速匀浆机中以 10000~30000rpm转速高速粉碎匀化， 通过高速搅拌形成油包水溶液， 即制成非典型肺炎 (SARS) 致病病毒的含多种不同型的病毒的特殊复合抗原。
( 3) 分别对优选的特种母鸭进行强化免疫：
用所制取的 （SARS)冠状病毒复合抗原， 采用皮下注射和翅静脉注射相结合的强化免 疫法， 分别对优选的特种母鸭进行免疫 ， 每只母鸭每次注射量达到 1- 2nd抗原， 每隔二周 再强化注射一次， 一个月内共免疫三次； 第一次免疫 20天后， 检取母鸭所产免疫蛋 1000 只；
(4) 抗非典型肺炎 （SARS)特异性 IgY的制备：
用打蛋机将检取的免疫蛋打碎， 用蛋黄筛筛滤去蛋清， 留下蛋黄， 搅拌均匀； 测量所 得的蛋黄的体积， 按此体积的 4-6倍加入蒸馏水， 进行稀释并混合均匀； 用 NaOH溶液调整 pH至 5. 5-6. 0之间；将调整好 pH值的稀释液进一步充分搅拌均勾，然后将其冷却至 2-6°C， 静置 12小时； 将稀释液加入高速离心分离机中， 以 8000- 12000rpm转速高速离心分离 20 分钟； 将分离所得的上清再入超滤器中进行超滤并浓缩 15倍， 按 0. 2%的比例将海藻酸加入 浓缩后的浆料中， 充分搅拌； 再加入高速离心机离心， 取上清， 去除脂蛋白； 将离心分离 后的浆料加入超滤机， 过超微膜， 进行过滤除菌； 将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行 冷冻干燥， 即制得抗非典型肺炎 （SARS)特异性 IgY粗提物干粉成品； 过离子交换柱 E凝 胶交换柱对抗非典型肺炎 （SARS) 特异性 IgY粗提物进行缠化， 即得纯 IgY。 实施例 2: 抗非典型肺炎 （SARS)致病病毒 IgY雾化剂的制备
抗非典型肺炎 （SARS) 致病病毒特异性 IgY干粉 300g加入小型搅拌机中充分混和; 按以下配方调配 30升抗非典型肺炎 （SARS)致病病毒 IgY组合溶液
抗非典型肺炎 （SARS) 致病病毒特异性 IgY 300g
阿斯巴甜 36g
香橙香精 90g
水蜜桃香精 30g
生理盐水 加至 30升
先调制生理盐水 25升， 然后加入阿斯巴甜和香精， 搅拌均匀后， 再边搅拌边缓缓加入
IgY; 接着， 加生理盐水至 30升， 充分搅拌均匀； 测量溶液的 pH值， 用 l.ON NaOH溶液 调节 pH至 6.5-7.5; 经细菌过滤除菌， 然后采用无菌瓶灌装抗非典型肺炎 （SARS) 致病病 毒 IgY喷雾剂， 每支装 20ml。 实施例 3: 制备抗非典型肺炎 （SARS)致病病毒 IgY手揿定量压力喷雾罐
抗非典型肺炎 （SARS) 致病病毒特异性 IgY干粉 300g加入小型搅拌机中充分混和； 按以下配方调配 200升抗非典型肺炎 （SARS) 致病病毒 IgY组合溶液；
抗非典型肺炎 （SARS) 致病病毒特异性 IgY 300g
阿斯巴甜 240g
香橙香精 600g
水蜜桃香精 200g
薄荷香精 1400g
蒸馏水 加至 200升
先取蒸馏水 180升， 然后分别加入阿斯巴甜、 香精， 搅拌均匀， 再边搅拌边缓缓加入 IgY; 接着加蒸馏水至 200升， 充分搅拌均匀， 测量溶液 pH值， 根据所测的 pH值用 1. ON NaOH溶液调节 pH至 6. 5- 7. 5; 溶液调配好后， 必须在压力罐生产线上灌装手动定量压力 喷雾罐 20000支，每支喷雾罐灌足 10ml后，必须再充入压力氮气或者氟里昂作为助推剂 (抛 射剂)， 装上定量阀门， 密封， 即得。 实施例 4: 制备抗非典型肺炎 （SARS)致病病毒 IgY定量常压喷雾罐
抗非典型肺炎（SARS)致病病毒特异性纯 IgY干粉 300重量份， 加入小型搅拌机中充 分混和；
按以下配方调配 200重量份抗非典型肺炎 （SARS) 致病病毒 IgY组合溶液；
抗非典型肺炎 （SARS)致病病毒特异性 IgY 300重量份
阿斯巴甜 240重量份
香橙香精 600重量份
水蜜桃香精 200重量份
薄荷香精 1400重量份
蒸馏水 加至 200体积份
先取蒸馏水 180体积份， 然后分别加入阿斯巴甜、 香精， 搅拌均匀， 再边搅拌边缓缓
加入复合 IgY; 接着加蒸熘水至 200体积份， 充分搅拌均勾， 测量溶液 pH值， 根据所测 的 pH值用 1. ON NaOH溶液调节 pH至 6. 5-7. 5间； 经细菌过滤除菌，灌装手揿定量常压喷 雾罐 20000支， 每支 10ml， 每支灌装满 10ml。 实施例 5: 制备抗非典型肺炎 (SARS)和口腔炎症定量常压喷雾罐
抗非典型肺炎（SARS)特异性复合 IgY干粉 150重量份， 抗龋齿菌 IgY干粉 150重量 份， 加入小型搅拌机中充分混和， 制成抗非典型肺炎 （SARS) 和口腔炎症复合 IgY干粉 300重量份；
按以下配方调配 200重量份抗非典型肺炎 （SARS) 和口腔炎症复合 IgY组合溶液； 抗非典型肺炎 （ SARS ) 和口腔炎症复合 IgY 300重量份
阿斯巴甜 240重量份
香橙香精 600重量份
水蜜桃香精 200重量份
薄荷香精 1400重量份 蒸馏水 加至 200体积份 先取蒸熘水 180体积份， 然后分别加入阿斯巴甜、 香精， 搅拌均勾， 再边搅拌边缓缓 加入复合 IgY; 接着加蒸馏水至 200体积份， 充分搅拌均匀， 测量溶液 pH值， 根据所测 的 pH值用 1. ON NaOH溶液调节 pH至 6. 5-7. 5间； 经细菌过滤除菌，灌装手揿定量常压喷 雾罐 20000支， 每支 10ml， 每支灌装满 10ml。
Claims
1、 一种抗非典型肺炎 （SA S)特异性 IgY, 其特征在于该抗非典型肺炎 （SARS)特 异性 IgY的制备方法包括下列步骤：
优选引致非典型肺炎 （SARS) 的主要致病病毒， 制备非典型肺炎 （SARS) 致病病毒 抗原； 制备免疫蛋； 制备抗非典型肺炎 （SARS) 各种致病病毒特异性 IgY粗提物； 抗非 典型肺炎（SARS)致病病毒特异性 IgY粗提物的纯化； 制备抗非典型肺炎（SARS)特异性
2、 如权利要求 1所述的抗非典型肺炎 （SARS)特异性 IgY， 其特征在于该抗非典型肺 炎 （SARS)特异性 IgY的制备方法包括下列步骤：
筛选引致非典型肺炎 （SARS) 的主要致病病毒， 在筛选和分类组合各种致病病毒的 基础上， 分别制备单一或复合的非典型肺炎 （SARS)致病病毒抗原： 将 Vero E6细胞接种 于 FCS DMEM培养液中， 将上述培养液置于培养瓶中， 将此培养瓶放置在培养箱中培养 成单层细胞， 然后弃掉培养液， 将各组别的 SARS致病病毒毒株分别用 FCS和青链霉素 DMEM培养液稀释， 取稀释液加入细胞培养瓶中， 并将细胞培养瓶放置在培养箱中培养至 细胞病变达 + + + +时收获病毒， 放入高速离心机中高速离心分离， 收集上清， 再灭活所培 养的 SARS致病病毒， 将培养好的各组别的病毒单独或按适当比例混合， 再按 1:1比例或其 他适当比例分别加入福氏佐剂， 置入高速勾浆机中高速粉碎匀化， 通过高速搅拌形成油包 水溶液， 即制成单一或复合非典型肺炎 （SARS) 致病病毒抗原；
制备免疫蛋： 用各种单一或复合非典型肺炎 （SARS) 致病病毒抗原或非典型肺炎 (SARS) 继发感染细菌抗原， 分别对产蛋禽类进行免疫， 每隔二周再强化注射一次， 一 个月计免疫三次， 第一次免疫 20天后， 检取免疫后的禽类所产免疫蛋， 并对相应不同的抗 原， 对所检取的免疫蛋进行编码标记；
制备抗非典型肺炎 （SARS)致病病毒特异性 IgY粗提物： 用流动水洗净免疫蛋， 再用 酒精擦洗消毒， 用打蛋机将检取的免疫蛋打碎， 用蛋黄筛筛滤去蛋清， 留下蛋黄， 搅泮均 匀，测量所得的蛋黄的体积，按此体积的 4-6倍加入蒸馏水，进行稀释并混合均匀，用 NaOH 溶液调整 pH至 5.5-6.0之间， 将调整好 pH值的稀释液进一步充分搅拌均匀， 然后将其冷却至 2 - 6°C , 静置 12小时 - 24小时， 将稀释液加入髙速离心分离机中， 离心分离 20分钟， 将分 离所得的上清再加入超滤器中进行超滤并浓缩 10-20倍， 按 0.1〜0.3%的比例将海藻酸钠加 入浓缩后的桨料中， 充分搅拌， 再加入高速离心机中离心， 取上清， 去除脂蛋白， 将离心 分离后的桨料加入超滤机， 过超微膜， 进行过滤除菌， 将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机 进行冷冻干燥， 即制得抗非典型肺炎（SARS)致病病毒特异性 IgY粗提物干粉成品， 最后， 将所制备的对应不同抗原的特异性 IgY粗提物进行编码标记；
抗非典型肺炎（SARS) 致病病毒特异性 IgY粗提物的纯化： 将以上工艺所制取的抗非 典型肺炎（SARS)致病病毒特异性 IgY粗提物分别先后过离子交换柱和凝胶层析柱， 即得 纯 IgY;
3、 如权利要求 1或 2所述的抗非典型肺炎 （SARS)特异性 IgY， 其特征在于该抗非典 型肺炎（SARS)特异性 IgY的制备方法中引致非典型肺炎（SARS)的致病病毒是冠状病毒。
4、 如权利要求 3所述的抗非典型肺炎 （SA S)特异性 IgY, 其特征在于该冠状病毒是 一种变种的冠状病毒，包括它的多种变异型 '有香港传播的香港 1型冠状病毒、 香港 2型 冠状病毒、 香港 3型冠状病毒、 香港 4型冠状病毒， 北京传播的多种型冠状病毒， 加拿大型 冠状病毒，新加坡传播的冠状病毒，越南传播的冠状病毒。
5、 如权利要求 1或 2所述的抗非典型肺炎 （SARS )特异性 IgY, 其特征在于该抗非典 型肺炎 （SARS)特异性 IgY的制备方法中制备免疫蛋所采用的产蛋禽类包括母鸡， 母鸭， 母鹅、 火鸡、 鸵鸟。
6、 如权利要求 2所述的抗非典型肺炎 （SARS)特异性 IgY， 其特征在于该抗非典型肺 炎（SARS)特异性 IgY的制备方法中所述非典型肺炎（SARS)—种或多种致病病毒抗原的 制备是这样的： 首先按权利要求 2所述的方法培养优选的一种或多种病毒，选择一种致病 病毒时，直接加入福氏佐剂制作单一抗原；选择多种致病病毒时，则先将培养好的一种 以上 SARS致病病毒按 1― 10:1— 10或 1一 10:1 - 10:1— 10或 1— 10:1 - 10:1 - 10:1 - 10或 1— 10:1 - 10: 1一 10:1— 10:1— 10依此类推的比例均匀混合， 然后加入福氏佐剂制成复合抗原。
7、 如权利要求 1或 2所述的抗非典型肺炎 （SARS )特异性 IgY， 其特征在于该抗非典 型肺炎 （SARS) 特异性 IgY可以制成临床可接受的剂型。
8、 抗香港 1型冠状病毒、 香港 2型冠状病毒、 香港 3型冠状病毒、 香港 4型冠状病毒多 种致病病毒特异性 IgY，其特征在于这种抗多种致病病毒特异性 IgY的制备方法包括下列步 骤- 分别用香港 1型冠状病毒、 香港 2型冠状病毒、 香港 3型冠状病毒、 香港 4型冠状病毒制 备抗原，首先将 Vera E6细胞接种于 10% FCS DMEM培养液中，细胞终浓度 1 X lOVmL将 15ml 上述培养液置于 100ml培养瓶中， 将此培养瓶放置在 37°C， 5% C02饱和培养箱中培养成单 层细胞， 然后弃掉培养液， 将香港 1型冠状病毒、 香港 2型冠状病毒、 香港 3型冠状病毒、 香港 4型冠状病毒毒株分别用 2%FCS和 1%青链霉素 DMEM培养液稀释至 100 TCID 50/ml, 取 此稀释液 10ml加入细胞培养瓶中， 并将此细胞培养瓶放置在 37°C， 5% C02饱和湿度培养箱 中培养 24小时后， 待细胞病变达 + + + +时收获病毒， 收获病毒时将培养液冻融三次， 收集 培养上清， 放入高速离心机中， 以 15000rpm转速离心分离， 收集上清， 再加入甲醛至 0.1% 的终浓度， 在 37°C温度下， 经过 24小时分别灭活这 4种培养的 SARS病毒， 培养好的灭活病 毒在 4°C或 -20°C保存， 然后，将培养好的灭活的香港 1型冠状病毒、 香港 2型冠状病毒、 香 港 3型冠状病毒、 香港 4型冠状病毒， 按 1一 10： 1 - 10： 1 - 10： 1— 10的比例混合均匀，再 按 1:1比例或其他造当比例加入福氏佐剂，置入高速匀桨机中以 10000~30000rpm转速高速粉 碎匀化， 通过高速搅拌形成油包水溶液， 制得含四种冠状病毒抗原的复合抗原；
用制得的冠状病毒复合抗原对产蛋母鸡进行免疫， 每隔二周再强化注射一次， 计免疫 三次， 第一次免疫 20天后， 检取母鸡所产的免疫蛋；
用流动水洗净免疫蛋， 再用酒精擦洗消毒， 用打蛋机将检取的免疫蛋打碎， 用蛋黄筛 筛滤去蛋清， 留下蛋黄， 搅拌均匀， 测量所得的蛋黄的体积， 按此体积的 4-6倍加入蒸馏 7K , 进行稀释并混合均匀， 用 NaOH溶液调整 pH至 5.5-6.0之间， 将调整好 pH值的稀释液进 一步充分搅拌均匀， 然后将其冷却至 2 - 6°C , 静置 12小时 - 24小时， 将稀释液加入高速离 心分离机中， 离心分离 20分钟， 将分离所得的上清再加入超滤器中进行超滤并浓缩 10-20
倍， 按 o.i〜o.3%的比例将海藻酸钠加入浓縮后的浆料中， 充分搅拌， 再加入髙速离心机 中离心， 取上清， 去除脂蛋白， 将离心分离后的柴料加入超滤机， 过超微膜， 进行过滤除 菌， 将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥， 制得抗香港 1型冠状病毒、 香港 2型 冠状病毒、 香港 3型冠状病毒和抗香港 4型冠状病毒特异性复合 IgY粗提物干粉， 将以上 IgY 粗提物溶解于 pH7.0、 0.01MPB , 先后经 DEAE— SepliadexA50柱层析和 SephadexG200凝胶柱 层析，.把粗提物纯化， 即得抗香港 1型冠状病毒、 香港 2型冠状病毒、 香港 3型冠状病毒和 抗香港 4型冠状病毒特异性复合纯 IgY。
9、 一种抗北京型冠状病毒特异性 IgY, 其特征在于这种抗一种致病病毒的特异性 IgY 的制备方法包括下列步骤：
用北京型冠状病毒制备抗原， 首先将 Vero E6细胞接种于 10% FCS DMEM培养液中， 细 胞终浓度 lX 105 /ml， 将 15ml上述培养液置于 100ml培养瓶中， 将此培养瓶放置在 37°C , 5% CCh饱和培养箱中培养成单层细胞，然后弃掉培养液， 将北京传播的有代表性的冠状病毒 毒株用 2%FCS和 1%青链霉素 DMEM培养液稀释至 100 TCID 50/ml， 取此稀释液 10ml加入细 胞培养瓶中， 并将此细胞培养瓶放置在 37Ό, 5% CCb饱和湿度培养箱中培养 24小时后， 待 细胞病变达 + + + +时收获病毒， 收获病毒时将培养液冻融三次， 收集培养上清， 放入高速 离心机中， 以 15000rpm转速离心分离， 收集上清， 再加入甲醛至 0.1%的终浓度， 在 37°C温 度下， 经过 24小时灭活这 4种培养的 SARS病毒， 培养好的灭活病毒在 4°C或 -20°C保存， 再 按 1:1比例或其他适当比例加入福氏佐剂，置入高速匀浆机中以 10000~30000rpm转速高速粉 碎匀化， 通过高速搅拌形成油包水溶液， 制得匀质抗原； 用所制得的北京型冠状病毒抗原 对产蛋禽类进行免疫， 每隔二周再强化注射一次， 计免疫三次， 第一次免疫 20天后， 检取 禽类所产的免疫蛋； 用流动水洗净免疫蛋， 再用酒精擦洗消毒， 用打蛋机将检取的免疫蛋 打碎， 用蛋黄筛筛滤去蛋清， 留下蛋黄， 搅拌均勾， 测量所得的蛋黄的体积， 按此体积的 4-6倍加入蒸馏水， 进行稀释并混合均匀， 用 NaOH溶液调整 pH至 5.5-6.0之间， 将调整好 pH 值的稀释液进一步充分搅拌均匀， 然后将其冷却至 2 - 6°C, 静置 12小时 - 24小时， 将稀释 液加入高速离心分离机中， 离心分离 20分钟， 将分离所得的上清再加入超滤器中进行超滤 并浓缩 10-20倍， 按 0.1〜0.3%的比例将海藻酸钠加入浓缩后的浆料中， 充分搅拌， 再加入 高速离心机中离心， 取上清， 去除脂蛋白， 将离心分离后的浆料加入超滤机， 过超微膜， 进行过滤除菌， 将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻千燥， 制得抗北京型冠状病毒 特异性 IgY粗提物干粉， 将以上 IgY粗提物溶解于 pH7.0、 0.01MPB, 经 DEAE— SephadexA50 柱层析和 SephadexG200凝胶柱层析， 把粗提物纯化， 即得抗北京型冠状病毒特异性纯 IgY。
10、 一种抗加拿大型冠状病毒特异性 IgY, 其特征在于该抗加拿大型冠状病毒特异性 IgY的制备方法包括下列步骤：
用收集到的加拿大地区传播的有代表性的非典型肺炎 （SARS) 致病冠状病毒制备抗 原， 首先将 Vera E6细胞接种于 10% FCS DMEM培养液中， 细胞终浓度 l X lOVral, 将 15ml 上述培养液置于 100ml培养瓶中， 将此培养瓶放置在 37°C， 5% C02饱和培养箱中培养成单 层细胞， 然后弃掉培养液， 将加拿大传播的有代表性的冠状病毒毒株用 2%FCS和 1%青链 霉素 DMEM培养液稀释至 100 TCID 50/ml，取此稀释液 10ml加入细胞培养瓶中，并将此细胞 培养瓶放置在 37°C， 5% C02饱和湿度培养箱中培养 24小时后， 待细胞病变达 + + + +时收获 病毒， 收获病毒时将培养液冻融三次， 收集培养上清， 放入高速离心机中， 以 15000rpm转 速离心分离， 收集上清， 再加入甲醛至 0.1%的终浓度， 在 37Ό温度下， 经过 24小时灭活这
4种培养的 SARS病毒， 培养好的灭活病毒在 4°C或 -20°C保存， 再按 1:1比例或其他适当比例 加入福氏佐剂， 置入高速匀浆机中以 10000~30000rpm转速高速粉碎勾化， 通过高速搅拌即 制成油包水溶液状致病病毒抗原；
用制得的病毒抗原对产蛋禽类进行免疫， 每隔二周再强化注射一次， 计免疫三次， 第 一次免疫 20天后， 检取禽类所产的免疫蛋；
用流动水洗净免疫蛋， 再用酒精擦洗消毒， 用打蛋机将检取的免疫蛋打碎， 用蛋黄筛 筛滤去蛋清， 留下蛋黄， 搅拌均匀， 测量所得的蛋黄的体积， 按此体积的 4-6倍加入蒸馏 水， 进行稀释并混合均匀， 用 NaOH溶液调整 pH至 5.5-6.0之间， 将调整好 pH值的稀释液进 一步充分搅拌均匀， 然后将其冷却至 2 - 6Ό , 静置 12小时 - 24小时， 将稀释液加入高速离 心分离机中， 离心分离 20分钟， 将分离所得的上清再加入超滤器中进行超滤并浓缩 10-20 倍， 按 0.1〜0.3 %的比例将海藻酸钠加入浓缩后的桨料中， 充分搅拌， 再加入高速离心机 中离心， 取上清， 去除脂蛋白， 将离心分离后的浆料加入超滤机， 过超微膜， 进行过滤除 菌， 即得抗加拿大型冠状病毒特异性 IgY粗提物；
将以上 IgY粗提物经 DEAE— SephadexA50柱层析和 SephadexG200凝胶柱层析，得到抗加 拿大型冠状病毒特异性纯 IgY。
11、 一种抗非典型肺炎 （SARS) 特异性 IgY制剂， 其特征在于该特异性 IgY制剂的 制备方法包括下列步骤：
将用以上方法制备的抗非典型肺炎 （SARS)致病病毒特异性 IgY配以蒸馏水或生理 盐水调配成浓度 0.01%以上的溶剂， 制成一种新型雾化剂， 加入各种雾化器中， 经过雾化 后供非典型肺炎患者吸入呼吸道和肺部。
12、 一种抗非典型肺炎 （SARS)特异性鸭 IgY， 其特征在于该特异性鸭 IgY的制备 方法包括下列步骤：
选具高免疫应答能力的良种鸭： 用肺炎双球菌制作抗原， 分别免疫 1000只母鸭， 每次 注射 lml抗原， 在第一次注射后， 每隔二周再强化注射一次， 共三次； 于第一次注射后第 7 个月， 把这些鸭所产的蛋标记后按常规方法分别提取其中的 IgY， 以 ELISA法 （酶联免疫 吸附实验）检测所制得的 IgY的效价；选出其中能制得 IgY效价 256的免疫应答能力特别 强的鸭 200只， 再用这批鸭所产的蛋孵出优良鸭种， 待其长大至 2— 3个月， 作为优选的高 免疫应答能力的特种母鸭， 并挑选其中 40只；
非典型肺炎 （SARS) 致病病毒复合抗原的制备： 将 Vero E6细胞接种于 10% FCS DMEM培养液中， 细胞终浓度 1 X 105 /ml。 将 15ml上述培养液置于 100ml培养瓶中， 将 此培养瓶放置在 37°C， 5% C02饱和培养箱中培养成单层细胞， 然后弃掉培养液， 将收集 到的香港地区 4种不同的 SARS冠状病毒毒株用 2%FCS和 1%青链霉素 DMEM培养液稀 释至 100 TCID 50/ml， 取此稀释液 10ml加入细胞培养瓶中， 并将此细胞培养瓶放置在 37 V , 5% C02饱和湿度培养箱中培养 24小时后， 待细胞病变达 + + + +时收获病毒， 收获病 毒时将培养瓶冻融三次， 收集培养上清， 放入高速离心机中， 以 15000rpm转速离心分离， 收集上清， 再加入甲醛至 0.1%的终浓度,在 37Ό温度下， 经过 24小时分别灭活这 4种培 养的 SARS病毒， 培养好的灭活病毒在 4Ό或- 20°C保存， 然后，将培养好的香港地区 4种 不同的冠状病毒按 1 : 1 : 1 : 1的比例或其他适当比例混合，再按 1 : 1比例或其他适当比例加 入福氏佐剂， 置入高速匀浆机中以 10000~30000rpm转速高速粉碎匀化， 通过高速搅拌形 成油包水溶液， 即制成非典型肺炎 （SARS) 致病病毒复合抗原；
分别对优选的特种母鸭进行强化免疫： 用所制取的非典型肺炎 (SARS )冠状病毒复合
抗原，采用皮下注射和翅静脉注射相结合的强化免疫法，分别对优选的特种母鸭进行免疫 ， 每只母鸭每次注射量达到 1- 2ml抗原， 每隔二周再强化注射一次， 一个月内共免疫三次； 第一次免疫 20天后， 检取母鸭所产免疫蛋 1000只；
抗非典型肺炎 （SARS)特异性鸭 IgY粗提物的制备： 用打蛋机将检取的免疫蛋打碎， 用蛋黄筛筛滤去蛋清， 留下蛋黄， 搅拌均匀； 测量所得的蛋黄的体积， 按此体积的 4-6倍 加入蒸熘水， 进行稀释并混合均匀， 用 011溶液调整 11至5. 5-6. 0之间， 将调整好 pH值 的稀释液进一步充分搅拌均勾， 然后将其冷却至 2- 6Ό , 静置 12小时； 将稀释液加入高速 离心分离机中， 以 8000- 12000rpm转速高速离心分离 20分钟； 将分离所得的上清再入超 滤器中进行超滤并浓缩 15倍， 按 0. 2%的比例将海藻酸钠加入浓缩后的桨料中， 充分搅拌； 再加入高速离心机离心， 取上清， 去除脂蛋白， 将离心分离后的浆料加入超滤机， 过超微 膜， 进行过滤除菌， 将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥， 即制得抗非典型肺 炎 （SARS) 特异性鴨 IgY粗提物干粉成品， 过离子交换柱 E凝胶交换柱对抗非典型肺炎 (SARS) 特异性鴨 IgY粗提物进行述化， 即得纯 IgY。
13、 一种抗非典型肺炎（SARS)特异性鹅 IgY, 其特征在于该特异性鹅 IgY的制备 方法包括下列步骤：
选具高免疫应答能力的良种鹅： 用肺炎双球菌制作抗原， 分别免疫 1000只母鹅， 每次 注射 lml抗原， 在第一次注射后， 每隔二周再强化注射一次， 共三次； 于第一次注射后第 7 个月， 把这些鹅所产的蛋标记后按常规方法分别提取其中的 IgY， 以 ELISA法 （酶联免疫 吸附实验）检测所制得的 IgY的效价；选出其中能制得 IgY效价 256的免疫应答能力特别 强的鹅 200只， 再用这批鹅所产的蛋孵出优良鹅种， 待其长大至 2— 3个月， 作为优选的高 免疫应答能力的特种母鹅， 并挑选其中 40只；
非典型肺炎 （SARS)致病病毒复合抗原的制备： 将 Vero E6细胞接种于 10% FCS DMEM培养液中， 细胞终浓度 1 X 106 /ml。 将 15ml上述培养液置于 100ml培养瓶中， 将 此培养瓶放置在 37°C， 5% C02饱和培养箱中培养成单层细胞， 然后弃掉培养液， 将收集 到的香港地区 4种不同的 SARS冠状病毒毒株用 2%FCS和 1%青链霉素 DMEM培养液稀 释至 100 TCID 50/ml， 取此稀释液 10ml加入细胞培养瓶中， 并将此细胞培养瓶放置在 37 °C 5% C02饱和湿度培养箱中培养 24小时后， 待细胞病变达 + + + +时收获病毒， 收获病 毒时将培养瓶冻融三次， 收集培养上清， 放入高速离心机中， 以 15000rpm转速离心分离， 收集上清， 再加入甲醛至 0.1%的终浓度,在 37°C温度下， 经过 24小时分别灭活这 4种培 养的 SARS病毒， 培养好的灭活病毒在 4°C或- 20°C保存， 然后，将培养好的香港地区 4种 不同的冠状病毒按 1 : 1 : 1 : 1的比例或其他适当比例混合，再按 1 : 1比例或其他适当比例加 入福氏佐剂， 置入髙速匀浆机中以 10000~30000rpm转速高速粉碎匀化， 通过髙速搅拌形 成油包水溶液， 即制成非典型肺炎 （SARS) 致病病毒复合抗原；
分别对优选的特种母鹅进行强化免疫： 用所制取的非典型肺炎 (SARS)冠状病毒复合 抗原，采用皮下注射和翅静脉注射相结合的强化免疫法，分别对优选的特种母鹅进行免疫 ， 每只母鹅每次注射量达到 2-10ml抗原， 每隔二周再强化注射一次， 一个月内共免疫三次； 第一次免疫 20天后， 检取母鹅所产免疫蛋 1000只；
抗非典型肺炎 （SARS)特异性鹅 IgY粗提物的制备： 用打蛋机将检取的免疫蛋打碎， 用蛋黄筛筛滤去蛋清， 留下蛋黄， 搅拌均匀； 测量所得的蛋黄的体积， 按此体积的 4-6倍 加入蒸馏水， 进行稀释并混合均匀， 用 011溶液调整 11至5. 5-6. ()之间， 将调整好 pH值 的稀释液进一步充分搅拌均匀， 然后将其冷却至 2-6°C， 静置 12小时； 将稀释液加入高速 离心分离机中， 以 8000_12000rpm转速高速离心分离 20分钟； 将分离所得的上清再入超
滤器中进行超滤并浓缩 15倍， 按 0. 2%的比例将海藻酸钠加入浓缩后的浆料中， 充分搅拌； 再加入髙速离心机离心， 取上清， 去除脂蛋白， 将离心分离后的浆料加入超滤机， 过超微 膜， 进行过滤除菌， 将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥， 即制得抗非典型肺 炎 ( SARS) 特异性鹅 IgY粗提物干粉成品， 过离子交换柱和凝胶交换柱对抗非典型肺炎 (SARS) 特异性鹅 IgY粗提物进行纯化， 即得纯 IgY。
14、 一种抗非典型肺炎（SARS)特异性鴕鸟 IgY, 其特征在于该特异性鸵鸟 IgY的 制备方法包括下列步骤：
选具高免疫应答能力的良种产蛋鸵鸟： 用肺炎双球菌制作抗原， 分别免疫 1000只产蛋 鸵鸟， 每次注射 1ml抗原， 在第一次注射后， 每隔二周再强化注射一次， 共三次； 于第一 次注射后第 7个月， 把这些产蛋鸵鸟所产的蛋标记后按常规方法分别提取其中的 IgY， 以 ELISA法 （酶联免疫吸附实验）检测所制得的 IgY的效价； 选出其中能制得 IgY效价 256 的免疫应答能力特别强的产蛋鸵鸟 200只， 再用这批产蛋鸵鸟所产的蛋孵出优良鸵鸟种， 待其长大至 2— 3个月， 作为优选的'高免疫应答能力的特种产蛋鸵鸟， 并挑选其中 40只； 非典型肺炎 （SARS)致病病毒复合抗原的制备： 将 Vero E6细胞接种于 10% FCS
DMEM培养液中， 细胞终浓度 1 X 105 /ml。 将 15ml上述培养液置于 100ml培养瓶中， 将 此培养瓶放置在 37°C， 5% C02饱和培养箱中培养成单层细胞， 然后弃掉培养液， 将收集 到的香港地区 4种不同的 SARS冠状病毒毒株用 2%FCS和 1%青链霉素 DMEM培养液稀 释至 100 TCID 50/ml, 取此稀释液 10ml加入细胞培养瓶中， 并将此细胞培养瓶放置在 37 V , 5% C02饱和湿度培养箱中培养 24小时后， 待细胞病变达 + + + +时收获病毒， 收获病 毒时将培养瓶冻融三次， 收集培养上清， 放入高速离心机中， 以 15000rpm转速离心分离， 收集上清， 再加入甲醛至 0.1%的终浓度,在 37°C温度下， 经过^小时分别灭活这 4种培 养的 SARS病毒， 培养好的灭活病毒在 4°C或- 20°C保存， 然后,将培养好的香港地区 4种 不同的冠状病毒按 1 : h i : 1的比例或其他适当比例混合，再按 1 : 1比例或其他适当比例加 . 入福氏佐剂， 置入高速匀浆机中以 10000~30000rpm转速高速粉碎匀化， 通过高速搅拌形 成油包水溶液， 即制成非典型肺炎 （SARS) 致病病毒复合抗原；
分别对优选的特种产蛋鸵鸟进行强化免疫： 用所制取的非典型肺炎 (SARS)冠状病毒 复合抗原， 采用皮下注射和翅静脉注射相结合的强化免疫法， 分别对优选的特种产蛋鸵鸟 进行免疫 ， 每只产蛋鸵鸟每次注射量达到 5-20ml 抗原， 每隔二周再强化注射一次， 一个 月内共免疫三次； 第一次免疫 20天后， 检取产蛋鸵鸟所产免疫蛋 1000只；
抗非典型肺炎（SARS)特异性鸵鸟 IgY粗提物的制备：用打蛋机将检取的免疫蛋打碎， 用蛋黄筛筛滤去蛋清， 留下蛋黄， 搅拌均匀； 测量所得的蛋黄的体积， 按此体积的 4-6倍 加入蒸镏水， 进行稀释并混合均匀， 用 011溶液调整 11至5. 5-6. 0之间， 将调整好 pH值 的稀释液进一步充分搅拌均匀， 然后将其冷却至 2- 6°C , 静置 12小时； 将稀释液加入高速 离心分离机中， 以 8000-12000rpm转速高速离心分离 20分钟； 将分离所得的上清再入超 滤器中进行超滤并浓缩 15倍， 按 0. 2%的比例将海藻酸钠加入浓缩后的浆料中， 充分搅拌； 再加入高速离心机离心， 取上清， 去除脂蛋白， 将离心分离后的浆料加入超滤机， 过超微 膜， 迸行过滤除菌， 将过滤除菌后的产品用冷冻千燥机进行冷冻干燥， 即制得抗非典型肺 炎 （SARS)特异性鸵鸟 IgY粗提物干粉成品， 过离子交换柱 ffi凝胶交换柱对抗非典型肺炎 (SARS)特异性鸵鸟 IgY粗提物进行魏化， 即得纯 IgY。
15、 一种抗非典型肺炎（SARS)特异性 IgY制剂， 其特征在于该制剂中每升含有抗非 典型肺炎 （SARS)特异性 IgY 1— 100克。
16、 一种抗非典型肺炎 （SARS) 雾化剂的制备方法， 其特征在于该方法为： 抗非典型肺炎 （SARS)致病病毒特异性 IgY干粉 300重量份加入小型搅拌机中充分混 和；
按以下配方调配 30000重量份抗非典型肺炎 （SARS) 致病病毒 IgY组合溶液
抗非典型肺炎 （SARS)致病病毒特异性 IgY 300重量份
阿斯巴甜 36重量份
香橙香精 90重量份
水蜜桃香精 30重量份
生理盐水 力口至 30000重量份
先调制生理盐水 25000重量份， 然后加入阿斯巴甜和香精， 搅拌均匀后， 再边搅拌边 缓缓加入 IgY; 接着， 加生理盐水至 30000重量份， 充分搅拌均匀； 测量溶液的 pH值， 用 l.ON NaOH溶液调节 pH至 6.5-7.5; 经细菌过滤除菌， 然后采用无菌瓶灌装抗非典型肺炎 (SARS) 致病病毒 IgY喷雾剂， 每支装 20ml。
17、 一种抗非典型肺炎 （SARS) 喷雾剂的制备方法， 其特征在于该方法为： 抗非典型肺炎（SARS)致病病毒特异性 IgY干粉 300重量份加入小型搅拌机中充分混 和；
按以下配方调配 200000重量份抗非典型肺炎 （SARS)致病病毒 IgY组合溶液；
抗非典型肺炎 （SARS)致病病毒特异性 IgY 300重量份
阿斯巴甜 240重量份
香橙香精 600重量份
水蜜桃香精 200重量份
薄荷香精 1400重量份
蒸馏水 加至 200000重量份
先取蒸馏水 18Q000重量份， 然后分别加入阿斯巴甜、 香精， 搅拌均匀， 再边搅拌边 缓缓加入 IgY; 接着加蒸馏水至 200000重量份， 充分搅拌均匀， 测量溶液 pH值， 根据所 测的 PH值用 1. ON NaOH溶液调节 pH至 6. 5-7. 5； 溶液调配好后， 在压力罐生产线上灌装 手动定量压力喷雾罐， 每支喷雾罐灌足 10ml后， 再充入压力氮气或者氟里昂作为助推剂 (抛射剂）， 装上定量阀门， 密封， 即得。
18、 一种抗非典型肺炎 （SARS) 常压喷雾剂的制备方法， 其特征在于该方法为： 抗非典型肺炎（SARS)致病病毒特异性纯 IgY干粉 300重量份， 加入小型搅拌机中充 分混和；
按以下配方调配 200000重量份抗非典型肺炎 （SARS)致病病毒 IgY组合溶液；
抗非典型肺炎 （SARS)致病病毒特异性 IgY 300重量份
阿斯巴甜 240重量份
香橙香精 600重量份
水蜜桃香精 200重量份
薄荷香精 1400重量份
蒸馏水 加至 200000重量份
先取蒸馏水 180000重量份， 然后分别加入阿斯巴甜、 香精， 搅拌均匀， 再边搅拌边 缓缓加入复合 IgY; 接着加蒸馏水至 200000重量份， 充分搅拌均匀， 测量溶液 pH值， 根 据所测的 pH值用 1. ON NaOH溶液调节 pH至 6. 5-7. 5间； 经细菌过滤除菌,灌装手揿定量
常压喷雾罐， 每支灌装满 10ml。
19、一种抗非典型肺炎（SARS)和口腔炎症喷雾剂的制备方法，其特征在于该方法为： 抗非典型肺炎 (SARS)特异性复合 IgY干粉 150重量份， 抗龋齿菌 IgY干粉 150重量 份， 加入小型搅拌机中充分混和， 制成抗非典型肺炎 （SARS) 和口腔炎症复合 IgY干粉
300重量份；
按以下配方调配 200000重量份抗非典型肺炎 （SARS)和口腔炎症复合 IgY组合溶液； 抗非典型肺炎 （SARS) 和口腔炎症复合 IgY 300重量份
阿斯巴甜 240重量份
香橙香精 600重量份
水蜜桃香精 200重量份
薄荷香精 1400重量份
蒸馏水 加至 200000重量份 先取蒸馏水 180000重量份， 然后分别加入阿斯巴甜、 香精， 搅拌均勾， 再边搅拌& 缓缓加入复合 IgY; .接着加蒸熘水至 200000重量份， 充分搅拌均匀， 测量溶液 pH值， 根 据所测的 pH值用 1. ON NaOH溶液调节 pH至 6. 5-7. 5间； 经细菌过滤除菌,灌装手揿定量 常压喷雾罐， 每支灌装满 10ffll。
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