WO2004099239A1

WO2004099239A1 - Acylierte nonadepsipeptide vom lysobactin-typ

Info

Publication number: WO2004099239A1
Application number: PCT/EP2004/004416
Authority: WO
Inventors: Franz Von Nussbaum; Nina Brunner; Sonja Anlauf; Rainer Endermann; Chantal FÜRSTNER; Elke Hartmann; Johannes KÖBBERLING; Jacques Ragot; Guido Schiffer; Joachim Schuhmacher; Niels Svenstrup; Joachim Telser; Michael-Alexander BRÜNING
Original assignee: Bayer Healthcare Ag
Priority date: 2003-05-09
Filing date: 2004-04-27
Publication date: 2004-11-18
Also published as: UY28313A1; CA2524722A1; US7368424B2; GT200400090A; EP1625153B1; DE10320781A1; AR044256A1; TW200510449A; PT1625153E; DE502004009971D1; US20050075281A1; EP1625153A1; CL2004000979A1; ES2330221T3; JP4557232B2; PL1625153T3; DK1625153T3; ATE440859T1; JP2007535469A

Abstract

Die Erfindung betrifft Nonadepsipeptide und Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten, insbesondere bakteriellen Infektionskrankheiten.

Description

ACY IERTE MONADEPSIPEPTIDE VOM LYSOBACTIN-TYP

Die bakterielle Zellwand wird durch eine Reihe von Enzymen synthetisiert (Zellwandbiosynthese) und ist essentiell für das Überleben bzw. die Vermehrung von Mikroorganismen. Die Struktur dieses Makromoleküls ebenso wie die an ihrer Synthese beteiligten Proteine sind innerhalb der Bakterien stark konserviert. Aufgrund ihrer essentiellen Natur und Einheitlichkeit ist die Zellwandbiosynthese ein idealer Angriffspunkt für neue Antibiotika (D.W.Green, The bacterial cell wall as a source of antibacterial targets, Expert Opin. Ther. Targets, 2002, 6, 1-19).

Vancomycin und Penicilline sind Inhibitoren der bakteriellen Zellwandbiosynthese und stellen erfolgreiche Beispiele für die antibiotische Potenz dieses Wirkprinzips dar. Sie werden seit mehreren Jahrzehnten in der Klinik zur Behandlung von bakteriellen Infektionen, vor allem mit Gram-positiven Erregern eingesetzt. Durch das wachsende Auftreten von resistenten Keimen, z.B. Methicillin-resistenten Staphylokokken, Penicillin-resistenten Pneumokokken und Vancomycin- resistenten Enterokokken (F. Baquero, Gram-positive resistance: challenge for the development of new antibiotics, /. Antimicrob. Chemother., 1997, 39, Suppl A:l-6; A.P. Johnson, D.M. Livermore, G.S. Tillotson, Antimicrobial susceptibility of Gram-positive bacteria: what's current, what's anticipated ?, /. Hosp. Infect., 2001, (49), Suppl A: 3-11) sowie jüngst auch erstmals Vancomycin-resistenten Staphylokokken (B. Goldrick, First reported case of VRSA in the United States, Am. J. Nurs., 2002, 102, 17) verlieren diese Substanzen zunehmend ihre therapeutische Wirksamkeit.

Die vorliegende Erfindung beschreibt eine neue Klasse von Zellwandbiosynthese-Inhibitoren ohne Kreuzresistenzen zu bekannten Antibiotika-Klassen.

Der Naturstoff Lysobactin und einige Derivate sind als antibakteriell wirksam beschrieben in US 4,754,018. Die Isolierung und antibakterielle Wirksamkeit von Lysobactin ist auch in EP-A-196 042 und JP 01132600 beschrieben.

Die antibakterielle Wirkung von Lysobactin und Katanosin A wird weiterhin beschrieben in O'Sullivan, J. et al, J. Antibiot. 1988, 41, 1740 - 1744, Bonner, D. P. et al, J. Antibiot. 1988, 41, 1745 - 1751, Shoji, J. et al, J. Antibiot. 1988, 41, 713 - 718 und Tymiak, A. A. et al, J. Org. Chem. 1989, 54, 1149 - 1157.

Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, alternative Verbindungen mit vergleichbarer oder verbesserter antibakterieller Wirkung und besserer Nerträglichkeit, z. B. geringerer Νephro- toxizität, zur Behandlung von bakteriellen Erkrankungen bei Menschen und Tieren zur Verfügung zu stellen.

Gegenstand der Erfindung sind Verbindungen der Formel

in welcher

R¹ Wasserstoff, C₃-C₆-Cycloalkyl, C₅-C₆-Cycloalkenyl, C₃-C₆-Cycloalkylmethyl, 5- bis 7- gliedriges Heterocyclylmethyl, Methyl, Ethyl, n-Propyl, iso-Propyl, 1-Methylprop-l-yl, 2-

Methylprop-1-yl, 2,2-Dimethylprop-l-yl, 1,1-Dimethylprop-l-yl, 1-Ethyl-prop-l-yl, 1- Ethyl-1-methylprop-l-yl, n-Butyl, 2-Methylbut-l-yl, 3-Methylbut-l-yl, 1-Ethylbut-l-yl, tert-Butyl, 4-Mefhylpent-l-yl, n-Hexyl, Alkenyl oder Aryl bedeutet,

wobei R¹ substituiert sein kann mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Amino, Cyäno, Trimethylsilyl, Alkyl, Alkoxy, Benzyloxy, C₃-C₆-Cycloalkyl, Aryl, 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl, Alkylamino, Arylamino, Alkylcarbonylarnino, Arylcarbonylamino,

Alkylcarbonyl, Alkoxycarbonyl, Arylcarbonyl und Benzyloxycarbonylamino,

worin Aryl und Heteroaryl ihrerseits substituiert sein können mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Amino, Cyano, Nitro, Alkyl, Alkoxy und Phenyl,

R² Wasserstoff oder C C₄-Alkyl bedeutet,

oder

R¹ und R² zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, einen C₃-C₆-Cycloalkyl- Ring oder einen 5- bis 7-gliedrigen Heterocyclyl-Ring bilden, wobei der Cycloalkyl-Ring und der Heterocyclyl-Ring substituiert sein können mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Trifluormethyl, Alkyl, Alkoxy und Alkylcarbonyl,

R³ Alkyl, C₃-C₆-Cycloalkyl, 5- bis 7-gliedriges Heterocyclyl, Aryl, 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl, Alkylcarbonyl, Alkoxycarbonyl, C₃-C₆-Cycloalkylcarbonyl, 5- bis 7-gliedriges

Heterocyclylcarbonyl, Arylcarbonyl, 5- oder 6-gliedriges Heteroarylcarbonyl oder Alkylaminocarbonyl bedeutet,

wobei Alkyl, Cycloalkyl, Heterocyclyl, Aryl, Heteroaryl, Alkoxycarbonyl, Cyclo- alkylcarbonyl, Heterocyclylcarbonyl, Arylcarbonyl, Heteroarylcarbonyl und Alkylaminocarbonyl substituiert sein können mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Amino, Alkyl- amino und Phenyl,

und

wobei Alkylcarbonyl substituiert ist mit einem Substituenten Amino oder Alkylamino,

und

wobei Alkylcarbonyl substituiert sein kann mit weiteren 0, 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Trimethylsilyl, Alkoxy, Alkylthio, Benzyloxy, C₃-C₆-Cycloalkyl, Phenyl, Naphthyl, 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl, Alkylcarbonylamino, Alkoxycarbonylamino, Arylcarbonylamino, Arylcarbonyloxy, Benzyloxycarbonyl und Benzyloxycarbonylamino,

worin Phenyl und Heteroaryl ihrerseits substituiert sein können mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Nitro, Alkyl, Alkoxy und Phenyl,

oder zwei Substituenten an demselben Kohlenstoffatom im Alkylcarbonyl zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, einen -Cö-Cycloalkyl-Ring oder einen 5- bis 7-gliedrigen Heterocyclyl-Ring bilden,

wobei der Cycloalkyl-Ring und der Heterocyclyl-Ring substituiert sein können mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Trifluormethyl, Alkyl und Alkoxy,

oder

wobei der Cycloalkyl-Ring Benzo-anneliert sein kann,

R⁴ Wasserstoff, Cι-C₄-Alkyl, Cyclopropyl oder Cyclopropylmethyl bedeutet,

oder

R³ und R⁴ zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen 5- bis 7-gliedrigen Heterocyclyl-Ring bilden, wobei der Heterocyclyl-Ring substituiert sein kann mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Amino, Cyano, Alkyl, Alkoxy und Alkylamino,

und

R⁵ Wasserstoff oder Methyl bedeutet,

und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze,

mit der Maßgabe, dass für den Fall, dass R¹ Wasserstoff, R² 2-Mefhylprop-l-yl, R⁴ Wasserstoff und R⁵ Methyl bedeutet und das Kohlenstoffatom, an das R¹ und R² gebunden sind, (5)-Konfiguration hat oder dass R¹ 2-Methylprop-l-yl, R² Wasserstoff, R⁴ Wasserstoff und R⁵ Methyl bedeutet und das Kohlenstoffatom, an das R¹ und R² gebunden sind, (5)-Konfigüration hat, R³ nicht Glycyl, D-Alanyl, L-Alanyl oder D-Leucyl bedeutet, und

mit der Maßgabe, dass für den Fall, dass R¹ Wasserstoff, R² 2-Methylprop-l-yl, R⁴ Wasserstoff und R⁵ Wasserstoff bedeutet und das Kohlenstoffatom, an das R¹ und R² gebunden sind, (5)- Konfiguration hat oder dass R¹ 2-Methylprop-l-yl, R² Wasserstoff, R⁴ Wasserstoff und R⁵ Wasser- Stoff bedeutet und das Kohlenstoffatom, an das R¹ und R² gebunden sind, (S)-Konfiguration hat, R³ nicht D-Leucyl bedeutet.

Erfindungsgemäße Verbindungen sind die Verbindungen der Formel (I), (Ia), (Ib) und (Ic) und deren Salze, Solvate, Solvate der Salze und Prodrugs, die von Formel (I), (Ia), (Ib) und (Ic) umfassten Verbindungen der nachfolgend genannten Formeln und deren Salze, Solvate, Solvate der Salze und Prodrugs sowie die von Formel (I), (Ia), (Ib) und (Ic) umfassten, nachfolgend als Ausführungsbeispiele genannten Verbindungen und deren Salze, Solvate, Solvate der Salze und Prodrugs, soweit es sich bei den von Formel (I), (Ia), (Ib) und (Ic) umfassten, nachfolgend genannten Verbindungen nicht bereits um Salze, Solvate, Solvate der Salze und Prodrugs handelt.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in Abhängigkeit von ihrer Struktur in stereoisomeren Formen (Enantiomere, Diastereomere) existieren. Die Erfindung betrifft deshalb die Enantiomeren oder Diastereomeren und ihre jeweiligen Mischungen. Aus solchen Mischungen von Enantiomeren und/oder Diastereomeren lassen sich die stereoisomer einheitlichen Bestandteile in bekannter Weise isolieren.

Sofern die erfindungsgemäßen Verbindungen in tautomeren Formen vorkommen können, umfasst die vorliegenden Erfindung sämtliche tautomere Formen.

Als Salze sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung physiologisch unbedenküche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen bevorzugt. Umfasst sind aber auch Salze, die für pharmazeutische Anwendungen selbst nicht geeignet sind aber beispielsweise für die Isolierung oder Reinigung der erfindungsgemäßen Verbindungen verwendet werden können.

Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen Säureadditionssalze von Mineralsäuren, Carbonsäuren und Sulfonsäuren, z.B. Salze der Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Methansulfonsäure, Ethansulfonsäure, Toluolsulfonsäure, Benzolsulfonsäure, Naphthalindisulfonsäure, Essigsäure, Trifluoressigsäure, Propionsäure, Milchsäure, Weinsäure, Äpfelsäure, Zitronensäure, Fumarsäure, Maleinsäure und Benzoesäure.

Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen auch Salze üblicher Basen, wie beispielhaft und vorzugsweise Alkalimetallsalze (z.B. Natrium- und Kaliumsalze), Erdalkalisalze (z.B. Calcium- und Magnesiumsalze) und Ammoniumsalze, abgeleitet von Ammoniak oder organischen Aminen mit 1 bis 16 C-Atomen, wie beispielhaft und vorzugsweise Ethylamin, Diethylamin, Triethylamin, Ethyldiisopropylamin, Monoethanolamin, Diethanolamin, Trietha_Qθlamin, Dicyclohexylamin, Dimemylaminoethanol, Prokain, Dibenzylamin, N- Methylmorpholin, Arginin, Lysin, Ethylendiamin und N-Methylpiperidin.

Als Solvate werden im Rahmen der Erfindung solche Formen der erfindungsgemäßen Verbindungen bezeichnet, welche in festem oder flüssigem Zustand durch Koordination mit Lösungsmittelmolekülen einen Komplex bilden. Hydrate sind eine spezielle Form der Solvate, bei denen die Koordination mit Wasser erfolgt. Im Rahmen der vorliegenden Erfindung haben die Substituenten, soweit nicht anders spezifiziert, die folgende Bedeutung:

Alkyl per se und "Alk" und "Alkyl" in Alkoxy, Alkylarnino. Alkylcarbonyl, Alkoxycarbonyl Alkylaminocarbonyl. Alkylcarbonylamino und Alkoxycarbonylamino steht für einen linearen oder verzweigten Alkylrest mit in der Regel 1 bis 6, vorzugsweise 1 bis 4, besonders bevorzugt 1 bis 3 Kohlenstoffatomen, beispielhaft und vorzugsweise für Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, tert-Butyl, 2,2-Dimethylprop-l-yl, n-Pentyl und n-Hexyl.

Alkoxy steht beispielhaft und vorzugsweise für Methoxy, Ethoxy, n-Propoxy, Isopropoxy, tert- Butoxy, n-Pentoxy und n-Hexoxy.

Alken l steht für einen geradkettigen oder verzweigten Alkenykest mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen. Bevorzugt ist ein geradkettiger oder verzweigter Alkenykest mit 2 bis 4, besonders bevorzugt mit 2 bis 3 Kohlenstoffatomen. Beispielsweise und vorzugsweise seien genannt: Vinyl, Allyl, n-Prop-1-en- 1-yl, n-But-2-en-l-yl, 2-Methylprop-l-en-l-yl und 2-Methylprop-2-en-l-yl.

Alkylarnino steht für einen Alkylaminorest mit einem oder zwei (unabhängig voneinander gewählten) Alkylsubstituenten, beispielhaft und vorzugsweise für Methylamino, Ethylamino, n- fropylamino, Isopropylamino, tert-Butylamino, n-Pentylamino, n-Hexylamino, N,N-Dimemylamino, N,_V-Diethylamino, -V-Ethyl-N-methylamino, iV-Methyl-N-n-propylamino, -V-Isopropyl-N-n- propylamino, -V-tert-Butyl-N-methylamino, N-Ethyl-N-n-pentylamino und N-n-Hexyl-ZV- methylamino. CrC₃-Alkylamino steht beispielsweise für einen Monoalkyla ninorest mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen oder für einen Dialkylaminorest mit jeweils 1 bis 3 Kohlenstoffatomen pro Alkylsubstituent.

Arylamino steht für einen über eine Aminogruppe gebundenen Arylsubstituenten, wobei an die Aminogruppe gegebenenfalls ein weiterer Substituenten, wie z.B. Aryl oder Alkyl, gebunden ist, beispielhaft und vorzugsweise für Phenylamino, Naphfhylamin, Phenylmethylamino oder Diphenyl- amino.

Alkylcarbonyl steht beispielhaft und vorzugsweise für Methylcarbonyl, Ethylcarbonyl, n- Propylcarbonyl, Isopropylcarbonyl, tert-Butylcarbonyl, n-Pentylcarbonyl und n-Hexylcarbonyl.

Alkoxycarbonyl steht beispielhaft und vorzugsweise für Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, n- Propoxycarbonyl, Isopropoxycarbonyl, tert-Butoxycarbonyl, n-Pentoxycarbonyl und n- Hexoxycarbonyl.

Alkoxycarbonylamino steht beispielhaft und vorzugsweise für Methoxycarbonylamino, Ethoxycarbonylamino, n-Propoxy-carbonylamino, Isopropoxycarbonylamino, tert-Butoxycarbonyl- a ino, n-Pentoxycarbonylamino und n-Hexoxycarbonylamino.

Cycloalkylcarbonyl steht für einen über eine Carbonylgruppe gebundenen Cycloalkylsubstituenten, beispielhaft und vorzugsweise für Cyclopropylcarbonyl, Cyclobutylcarbonyl, Cyclopentylcarbonyl und Cyclohexylcarbonyl.

Heterocvclylcarbonyl steht für einen über eine Carbonylgruppe gebundenen Heterocyclylsubsti- tuenten, beispielhaft und vorzugsweise für Tetrahydrofuran-2-ylcarbonyl, Pyrrolidin-2-ylcarbonyl, Pyrrolidin-3-ylcarbonyl, Pyrrolinylcarbonyl, Piperidinylcarbonyl, Morpholinylcarbonyl und Per- hydroazepinylcarbonyl.

Arylcarbonyl steht für einen über eine Carbonylgruppe gebundenen Arylsubstituenten, beispielhaft und vorzugsweise für Phenylcarbonyl, Naphthylcarbonyl und Phenanthrenylcarbonyl.

Heteroarylcarbonyl steht für einen über eine Carbonylgruppe gebundenen Heteroarylsubstituenten, beispielhaft und vorzugsweise für Thienylcarbonyl, Furylcarbonyl, Pyrrolylcarbonyl, Thiazolylcarbonyl, Oxazolylcarbonyl, Imidazolylcarbonyl, Pyridylcarbonyl, Pyrimidylcarbonyl, Pyridazinylcarbonyl, idolylcarbonyl, Indazolylcarbonyl, Benzofuranylcarbonyl, Benzothiophenyl- carbonyl, Chinolinylcarbonyl und Isochinolinylcarbonyl.

Alkylcarbonylamino steht beispielhaft und vorzugsweise für Methylcarbonylamino, Ethylcarbonyl- amino, n-Propylcarbonylamino, Isopropylcarbonylamino, tert-Butylcarbonylamino, n-Pentyl- carbonylamino und n-Hexylcarbonylamino.

Arylcarbonylamino steht beispielhaft und vorzugsweise für Phenylcarbonylamino, Naphthyl- carbonylamino und Phenantlirenyl-carbonylarnino.

Alkylaminocarbonyl steht für einen -Ukylaminocarbonykest mit einem oder zwei (unabhängig voneinander gewählten) Alkylsubstituenten, beispielhaft und vorzugsweise für Methylaminocarbonyl, Ethylaminocarbonyl, n-Propylaminocarbonyl, Isopropylaminocarbonyl, tert- Butylaminocarbonyl, n-Pentylaminocarbonyl, n-Hexylaminocarbonyl, -V,N-Dimemylaminocarbonyl, N,N-Diethylaminocarbonyl, N-Ethyl-N-methylaminocarbonyl, N-Methyl-N-n-propylaminocarbonyl, N-Isopropyl-N-n-propylaminocarbonyl, N-tert-Butyl-N-memylaminocarbonyl, N-Ethyl-N-n- pentylamino-carbonyl und N-n-Hexyl-N-memylaminocarbonyl. Cι-C₃-Alfylaminocarbonyl steht beispielsweise für einen Monoalkylaminocarbonykest mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen oder für einen Dialkylaminocarbonykest mit jeweils 1 bis 3 Kohlenstoffatomen pro Alkylsubstituent.

Cvcloalkyl steht für eine Cycloalkylgruppe mit in der Regel 3 bis 6 Kohlenstoffatomen, beispielhaft und vorzugsweise für Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl und Cyclohexyl.

Cycloalkenyl steht für eine Cycloalkenylgruppe mit in der Regel 5 bis 6 Kohlenstoffatomen und einer oder zwei Doppelbindungen, beispielhaft und vorzugsweise für Cyclopent-1-en-l-yl, Cyclopent-2-en- 1-yl, Cyclopent-3-en-l-yl, Cyclohex-1-en-l-yl, Cyclohex-2-en-l-yl und Cyclohex-3-en-l-yl.

Aryl steht für einen mono- bis tricyclischen aromatischen, carbocyclischen Rest mit in der Regel 6 bis 14 Kohlenstoffatomen; beispielhaft und vorzugsweise für Phenyl, Naphthyl und Phenanthrenyl.

Heterocyclyl steht für einen mono- oder polycyclischen, vorzugsweise mono- oder bicyclischen, heterocyclischen Rest mit in der Regel 5 bis 7 Ringatomen und bis zu 3, vorzugsweise bis zu 2 Heteroatomen und/oder Heterogruppen aus der Reihe N, O, S, SO, S0₂. Die Heterocyclyl-Reste können gesättigt oder teilweise ungesättigt sein. Bevorzugt sind 5- bis 7-gliedrige, monocyclische gesättigte Heterocyclykeste mit bis zu zwei Heteroatomen aus der Reihe O, N und S, wie beispielhaft und vorzugsweise Tetrahydrofuran-2-yl, Pyrrolidin-2-yl, Pyrrolidin-3-yl, Pyrrolinyl, Piperidinyl, Morpholinyl und Perhydroazepinyl.

Heteroaryl steht für einen aromatischen, mono- oder bicyclischen Rest mit in der Regel 5 bis 10, vorzugsweise 5 bis 6 Ringatomen und bis zu 5, vorzugsweise bis zu 4 Heteroatomen aus der Reihe S, O und N, beispielhaft und vorzugsweise für Thienyl, Furyl, Pyrrolyl, Thiazolyl, Oxazolyl, Imidazolyl, Pyridyl, Pyrimidyl, Pyridazinyl, kidolyl, Indazolyl, Benzofuranyl, Benzothiophenyl, Chinolinyl und Isochinolinyl.

Carbonylgebundene Aminosäure steht für eine Aminosäure, der über die Carbonylgruppe der Aminosäure-Säurefunktion gebunden ist. Bevorzugt sind dabei α-Aminosäuren in der L- oder in der D-Konfiguration, insbesondere natürlich vorkommende α-Aminosäuren, wie z.B. Glycin, L- Alanin, L-Valin, L-Leucin, L-Isoleucin, L-Prolin, L-Phenylalanin, L-Tryptophan oder natürlich vorkommende α-Aminosäuren in der unnatürlichen D-Konfiguration, wie z.B. D-Alanin, D-Valin, D-Leucin, D-Isoleucin, D-Prolin, D-Phenylalanin, D-Tryptophan oder unnatürliche Aminosäuren, mit einer an das α-Kohlenstoffatom der Aminosäure gebundenen Seitengruppe, wie z.B. C₃-C₆- Cycloalkylmefhyl, C₃-C₆-Cycloalkyl, Ethyl, n-Propyl, 2,2-Dimethylpropyl, tert-Butyl, 3- Methylbutyl, n-Hexyl oder Allyl, oder die Seitenkette bildet mit dem α-Kohlenstoffatom der Aminosäure einen Ring, wie z.B. Cyclopropyl (Aminosäure: 1-Amino-l-cyclopropancarbonsäure), Cyclobutyl, Cyclopentyl, Cyclohexyl oder einen 5- bis 7-gliedrigen Heterocyclus, wobei der Ring Benzo-anneliert sein kann, oder ß-Aminosäuren (zur Nomenklatur vgl.: D. Seebach, M. Overhand, F. N. M. Kühnle, B. Martinoni, L. Oberer, U. Hommel, H. Widmer, Helv. Chim. Acta 1996, 79, 913-941), wie z.B. ß-Alanin, ß-Phenylalanin, ß-Aib oder Derivate der 2,3-Diaminopropionsäure (z.B . 2,3-Diamino-3-phenylpropionsäure). Halogen steht für Fluor, Chlor, Brom und Jod, bevorzugt Fluor und Chlor.

Beschreibung der Abbildungen

Abb.l: *H NMR (500 MHz, DMSO, 302 K) von Beispiel IA

Abb.2: ^!H NMR (500 MHz, -4-DMSO, 302 K) von Beispiel 2A

Abb.3: MALDI-MS Sequenzierung von hydrolytisch Ring-geöffnetem Lysobactin.

Abb.4: MALDI-MS Sequenzierung von hydrolytisch Ring-geöffnetem Deca-depsipeptid (Beispiel HA).

Abb.5: MALDI-MS Sequenzierung von hydrolytisch Ring-geöffnetem Undecadepsipeptid (Beispiel 1).

Abb.6: MALDI-MS Sequenzierung von hydrolytisch Ring-geöffnetem Undecadepsipeptid (Beispiel 2).

Abb.7: MALDI-MS Sequenzierung von hydrolytisch Ring-geöffnetem Undecadepsipeptid (Beispiel 8).

Abb.8: ^XH NMR (200 MHz, d₆-OMSO) von Benzyl-3-cyclopropyl-L-alaninat-hydrochlorid (Beispiel 3A).

Abb.9: *H NMR (500 MHz, d₆-OMSO) von N-(tert-butoxycarbonyl)-D-leucyl-3-cycloρropyl- L-alanin (Beispiel 5A).

Abb.10: 1H NMR (500 MHz, - -DMSO) von Methyl-iV-(tert-butoxycarbonyl)-D-leucyl-L- norvalinat (Beispiel 6A).

Abb.ll: *H NMR (200 MHz, -fc-DMSO) von N-(tert-Butoxycarbonyl)-D-leucyl-L-norvalin (Beispiel 7A).

Abb.12: ^!H NMR (500 MHz, d^-OMSO) von Benzyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-D-leucyl-3-tert- butyl-L-alaninat (Beispiel 8A).

Abb.13: ^!H NMR (400 MHz, 338 K, - ₅-Pyridin) von Desleucyllysobactin-bistrifluoracetat (Beispiel HA).

Abb.14: ^JH NMR (500 MHz, --₅-Pyridin) von D-Leucyl-N¹-{(3S,6S,12S,15S,18_?,21S,24S,27S,- 28_?)-6-[(lι_ -2-amino-l-hydroxy-2-oxoethyl]-18-(3-{[a_ϊήno(imino)methyl]amino}propyl)-12- [(lS)-l-hydroxye l]-3-(hydroxymethyl)-24-[(lR)-l-hydroxy-2-methylpropyl]-21-isobutyl-15- [(lS)-l-methylpropyl]-2,5,8,ll,14,17,20,23,26-nonaoxo-28-phenyl-l-oxa-4,7,10,13,16,19,22,25- octaazacyclooctacosan-27-yl}-3-cyclopropyl-L-alaninamid-bistrifluoracetat (Beispiel 1).

Abb.15: ¹³C NMR (126 MHz, rfj-Pyridin) von D-Leucyl-N¹-{(35,6S,12S,155,18R,215,24S,27S,- 28_?)-6-[(15)-2-amino-l-hyckoxy-2-oxoethyl]-18-(3-{[amino(imino)methyl]amino}propyl)-12- [(lS)-l-hydroxyethyl]-3-(hydroxymethyl)-24-[(lR)-l-hydroxy-2-methylpropyl]-21-isobutyl-15- [(15)-l-methylρropyl]-2,5,8,ll,14,17,20,23,26-nonaoxo-28-phenyl-l-oxa-4,7,10,13,16,19,22,25- octaazacyclooctacosan-27-yl}-3-cyclopropyl-L-alaninamid-bistrifluoracetat (Beispiel 1).

Abb.16: HSQC NMR (500 MHz, -.₅-Pyridin) von D-Leucyl-N¹-{(3S,6_.,125,15S,18R,21S,24S,27S,- 28R)-6-[(lS)-2-an_ino-l-hydroxy-2-oxoethyl]-18-(3-{[aιmno(imino)methyl]arnino}propyl)-12- [(lS)-l-hydroxyethyl]-3-(hydroxymethyl)-24-[(lR)-l-hydroxy-2-methylpropyl]-21-isobutyl-15- [(lS)-l-methylρroρyl]-2,5,8, 11,14, 17,20,23,26-nonaoxo-28-phenyl-l-oxa-4,7, 10, 13,16, 19,22,25- octaazacyclooctacosan-27-yl}-3-cyclopropyl-L-alaninamid-bistrifluoracetat (Beispiel 1).

Abb.17: COSY NMR (500 MHz, ^-Pyridin) von D-Leucyl-N¹-{(3S,6S,12S,15S,18i?,21S,24S,27S,- 28-?)-6-[(15)-2-amino-l-hyc oxy-2-oxoethyl]-18-(3-{[anrdno(imino)memyl]amino}propyl)-12- [(l^-l-hydroxyethyl]-3-(hydroxymethyl)-24-[(lR)-l-hydroxy-2-methylpropyl]-21-isobutyl-15- [(lS)-l-methylpropyl]-2,5,8,ll,14,17,20,23,26-nonaoxo-28-phenyl-l-oxa-4,7,10,13,16,19,22,25- octaazacyclooctacosan-27-yl}-3-cyclopropyl-L-alaninarnid-bistrifluoracetat (Beispiel 1).

Abb.18: *H NMR (400 MHz, -.₅-Pyridin) von Undecadepsipeptid-bistrifluoracetat (Beispiel 3).

Abb.19: 'H H-COSY (400 MHz, d₅-Pyήdin) von Undecadepsipeptid-bistrifluoracetat (Beispiel 3).

Abb.20: HSQC NMR (500 MHz, -.₅-Pyridin) D-Leucyl-N¹-{(3S,6S,125,155,18R,21S,24S,27S,- 28i?)-6-[(lS)-2-amino-l-hydroxy-2-oxoethyl]-18-(3-{[amino(incdno)me yl]a_nino}propyl)-12- [(lS)-l-hydroxyethyl]-3-(hydroxymethyl)-24-[(lR)-l-hydroxy-2-methylpropyl]-21-isobutyl-15- [(lS)-l-methylρroρyl]-2,5,8,ll,14,17,20,23,26-nonaoxo-28-phenyl-l-oxa-4,7,10,13,16,19,22,25- octaazacyclooctacosan-27-yl}-3-tert-butyl-L-alaninamid-bistrifluoracetat (Beispiel 3).

Gegenstand der Erfindung sind auch Verbindungen der Formel (I), welche der Formel

entsprechen, in welcher

R > 1 , R r>2 , τ R3 , R τ>4 und R die oben angegebene Bedeutung haben,

und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze,

mit der Maßgabe, dass für den Fall, dass R¹ 2-Methylprop-l-yl, R² Wasserstoff, R⁴ Wasserstoff und R⁵ Methyl bedeutet, R³ nicht Glycyl, D-Alanyl, L-Alanyl oder D-Leucyl bedeutet, und

mit der Maßgabe, dass für den Fall, dass R¹ 2-Methylprop-l-yl, R² Wasserstoff, R⁴ Wasserstoff und R⁵ Wasserstoff bedeutet, R³ nicht D-Leucyl bedeutet.

entsprechen, in welcher

R , R , R , R und R die oben angegebene Bedeutung haben,

und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze,

Bevorzugt sind Verbindungen der Formel (Ia) und (Ib), in welchen

R¹ 2-Methylprop-l-yl bedeutet,

R² Wasserstoff oder Cι-C₄-Alkyl bedeutet,

R³ Alkyl, C₃-C₆-Cycloalkyl, 5- bis 7-gliedriges Heterocyclyl, Aryl, 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl, Alkylcarbonyl, Alkoxycarbonyl, C₃-C₆-Cycloalkylcarbonyl, 5- bis 7-gliedriges Heterocyclylcarbonyl, Arylcarbonyl, 5- oder 6-gliedriges Heteroarylcarbonyl oder Alkylaminocarbonyl bedeutet,

wobei Alkyl, Cycloalkyl, Heterocyclyl, Aryl, Heteroaryl, Alkoxycarbonyl, Cyclo- alkylcarbonyl, Heterocyclylcarbonyl, Arylcarbonyl, Heteroarylcarbonyl und Alkylaminocarbonyl substituiert sein können mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Amino, Alkylarnino und Phenyl,

und

wobei Alkylcarbonyl substituiert ist mit einem Substituenten Amino oder Alkylarnino,

und

wobei Alkylcarbonyl substituiert sein kann mit weiteren 0, 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Trimethylsilyl, Alkoxy, Alkylthio, Benzyloxy, C₃-C₆-Cycloalkyl, Phenyl, Naphthyl, 5- bis

10-gliedriges Heteroaryl, Alkylcarbonylamino, Alkoxycarbonylamino, Arylcarbonylamino, Arylcarbonyloxy, Benzyloxycarbonyl und Benzyloxycarbonylamino,

oder zwei Substituenten an demselben Kohlenstoffatom im Alkylcarbonyl zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, einen C₃-C₆-Cycloalkyl-Ring oder einen 5- bis 7-gliedrigen Heterocyclyl-Ring bilden,

oder

wobei der Cycloalkyl-Ring Benzo-anneliert sein kann,

R⁴ Wasserstoff, Cι-C -Alkyl, Cyclopropyl oder Cyclopropylmethyl bedeutet,

oder

R³ und R⁴ zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen 5- bis 7-gliedrigen Heterocyclyl-Ring bilden, wobei der Heterocyclyl-Ring substituiert sein kann mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Amino, Cyano, Alkyl, Alkoxy und Alkylarnino, und

R⁵ Wasserstoff oder Methyl bedeutet,

und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze,

mit der Maßgabe, dass für den Fall, dass R² Wasserstoff, R⁴ Wasserstoff und R⁵ Methyl bedeutet, R³ nicht Glycyl, D-Alanyl, L-Alanyl oder D-Leucyl bedeutet,

und mit der Maßgabe, dass für den Fall, dass R² Wasserstoff, R⁴ Wasserstoff und R⁵ Wasserstoff bedeutet, R³ nicht D-Leucyl bedeutet.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (Ia) und (Ib), in welchen

R¹ 2-Methylρrop-l-yl bedeutet,

R² Wasserstoff oder Cι-C -Alkyl bedeutet,

R³ Ci- -Alkylcarbonyl oder 5- bis 7-gliedriges Heterocyclylcarbonyl bedeutet,

wobei Alkylcarbonyl substituiert ist mit einem Substituenten Amino,

und

wobei Alkylcarbonyl substituiert sein kann mit weiteren 0, 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy,

Trimethylsilyl, Alkoxy, Alkylthio, Benzyloxy, C₃-C₆-Cycloalkyl, Phenyl, Naphthyl, 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl, Alkylcarbonylamino, Alkoxycarbonylamino, Arylcarbonylamino, Arylcarbonyloxy, Benzyloxycarbonyl und Benzyloxycarbonylamino,

worin Phenyl seinerseits substituiert sein kann mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen,

Hydroxy, Alkyl, Alkoxy und Phenyl,

wobei der Cycloalkyl-Ring und der Heterocyclyl-Ring substituiert sein können mit

0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Trifluormethyl, Alkyl und Alkoxy, oder

wobei der Cycloalkyl-Ring Benzo-anneliert sein kann,

R⁴ Wasserstoff oder C_rC -Alkyl bedeutet,

und

R⁵ Methyl bedeutet,

und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze,

mit der Maßgabe, dass für den Fall, dass R² Wasserstoff und R⁴ Wasserstoff bedeutet, R³ nicht Glycyl, D-Alanyl, L-Alanyl oder D-Leucyl bedeutet.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (Ia) und (Ib), in welchen

R¹ 2-Methylρroρ-l-yl bedeutet,

R² Wasserstoff bedeutet,

R³ Cι-C₆-Alkylcarbonyl bedeutet,

wobei Alkylcarbonyl substituiert ist mit einem Substituenten Amino,

und

wobei Alkylcarbonyl substituiert sein kann mit weiteren 0, 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Trimethylsilyl, -C₄- Alkoxy, Methylhio, Benzyloxy, C₃-C₆-Cycloalkyl, Phenyl, Naphthyl, Thienyl, Pyridyl, Indolyl, Cι-C -Alkoxycarbonylamino, Benzyloxycarbonyl und Benzyloxycarbonylamino,

worin Phenyl seinerseits substituiert sein kann mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Cr

C₄-Alkyl, -C₄-Alkoxy und Phenyl,

oder zwei Substituenten an demselben Kohlenstoffatom im Alkylcarbonyl zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, einen C₃-C₆-Cycloalkyl-Ring bilden,

wobei der Cycloalkyl-Ring Benzo-anneliert sein kann,

R⁴ Wasserstoff bedeutet, und

R³ Methyl bedeutet,

und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze,

mit der Maßgabe, dass R³ nicht Glycyl, D-Alanyl, L-Alanyl oder D-Leucyl bedeutet.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), welche der Formel

entsprechen, in welcher

R¹ 2-Methylprop-l-yl bedeutet,

R Wasserstoff bedeutet,

R⁴ Wasserstoff bedeutet,

R⁵ Methyl bedeutet,

R⁶ Methyl, iso-Propyl, 1-Methylprop-l-yl, 2,2-Dimethylprop-l-yl, C₃-C₆-Cycloalkyl, Phenyl, Thienyl, tert-Butoxycarbonylaminopropyl, tert-Butoxycarbonylaminobutyl, Benzyloxy- carbonylaminopropyl oder Benzyloxycarbonylaminobutyl bedeutet,

wobei Phenyl substituiert sein kann mit 0, 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Methoxy und Phenyl,

und

wobei Methyl substituiert ist mit einem Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Trimethylsilyl, tert-Butoxy, Benzyloxy, C₃-C₆-Cycloalkyl, Phenyl, Naphthyl, Pyridyl, Indolyl und Benzyloxycarbonyl,

worin Phenyl seinerseits substituiert sein kann mit 0, 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen Methoxy und Phenyl,

und

R⁷ Wasserstoff bedeutet,

oder

R⁶ und R⁷ zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, einen C₃-C₆-Cycloalkyl- Ring bilden,

und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (Ia) und (Ib), in welchen

R¹ Wasserstoff, C₃-C₆-Cycloalkyl, C₅-C₆-Cycloalkenyl, C₃-C₆-Cycloalkylmethyl, 5- bis 7- gliedriges Heterocyclylmethyl, Methyl, Ethyl, n-Propyl, iso-Propyl, 1-Methylprop-l-yl,

2,2-Dimethylprop-l-yl, 1,1-Dimethylprop-l-yl, 1-Ethyl-prop-l-yl, 1-Ethyl-l-methylprop-l- yl, n-Butyl, 2-Methylbut-l-yl, 3-Methylbut-l-yl, 1-Ethylbut-l-yl, tert-Butyl, 4-Methylpent- 1-yl, n-Hexyl, Alkenyl oder Aryl bedeutet,

wobei R¹ substituiert sein kann mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Amino, Cyano, Trimethylsilyl, Alkyl, Alkoxy, Benzyloxy, C₃-C₆-Cycloalkyl, Aryl, 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl, Alkylarnino, Arylamino, Alkylcarbonylamino, Arylcarbonylamino, Alkylcarbonyl, Alkoxycarbonyl, Arylcarbonyl und Benzyloxycarbonylamino,

worin Aryl und Heteroaryl ihrerseits substituiert sein können mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Amino, Cyano, Nitro, Alkyl, Alkoxy und Phenyl, R² Wasserstoff oder -C₄-Alkyl bedeutet,

oder

R³ Alkyl, C₃-C₆-Cycloalkyl, 5- bis 7-gliedriges Heterocyclyl, Aryl, 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl, Alkylcarbonyl, Alkoxycarbonyl, C₃-C₆-Cycloalkylcarbonyl, 5- bis 7-gliedriges Heterocyclylcarbonyl, Arylcarbonyl, 5- oder 6-gliedriges Heteroarylcarbonyl oder

Alkylaminocarbonyl bedeutet,

und

wobei Alkylcarbonyl substituiert sein kann mit weiteren 0, 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Trimethylsilyl, Alkoxy, Alkylthio, Benzyloxy, C₃-C6-Cycloalkyl, Phenyl, Naphthyl, 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl, Alkylcarbonylamino, Alkoxycarbonylamino, Arylcarbonylamino, Arylcarbonyloxy, Benzyloxycarbonyl und Benzyloxycarbonylamino,

worin Phenyl und Heteroaryl ihrerseits substituiert sein können mit 0, 1, 2 oder 3

Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Nitro, Alkyl, Alkoxy und Phenyl,

oder zwei Substituenten an demselben Kohlenstoffatom im Alkylcarbonyl zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, einen C₃-C₆-Cycloalkyl-Ring oder einen 5- bis 7-gliedrigen Heterocyclyl-Ring bilden, wobei der Cycloalkyl-Ring und der Heterocyclyl-Ring substituiert sein können mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Trifluormethyl, Alkyl und Alkoxy,

oder

wobei der Cycloalkyl-Ring Benzo-anneliert sein kann,

R⁴ Wasserstoff, Cι-C -Alkyl, Cyclopropyl oder Cyclopropylmethyl bedeutet,

oder

R³ und R⁴ zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen 5- bis 7-gliedrigen Heterocyclyl-Ring bilden, wobei der Heterocyclyl-Ring substituiert sein kann mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus

Halogen, Hydroxy, Amino, Cyano, Alkyl, Alkoxy und Alkylarnino,

und

R⁵ Wasserstoff oder Methyl bedeutet,

und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (Ia) und (Ib), in welchen

R¹ 5- bis 7-gliedriges Heterocyclylmethyl, Methyl, Ethyl, n-Propyl, iso-Propyl, 1-Methylprop- 1-yl, 2,2-Dimethylprop-l-yl, 1,1-Dimethylprop-l-yl, 1-Ethyl-prop-l-yl, 1-Ethyl-l- methylprop-1-yl, n-Butyl, 2-Methylbut-l-yl, 3-Methylbut-l-yl, 1-Ethylbut-l-yl, rt-Butyl, 4-Methylpent-l-yl oder n-Hexyl bedeutet,

wobei R¹ substituiert sein kann mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Trimethylsilyl, Alkoxy, Benzyloxy, C₃-C₆- Cycloalkyl, Aryl, 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl, Alkylarnino, Alkylcarbonylamino, Alkylcarbonyl, Alkoxycarbonyl, Arylcarbonyl und Benzyloxycarbonylamino,

worin Aryl und Heteroaryl ihrerseits substituiert sein können mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus

Halogen, Hydroxy, Nitro, Alkyl, Alkoxy und Phenyl,

R² Wasserstoff oder - -Alkyl bedeutet,

oder R¹ und R² zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, einen C₃-C₆-Cycloalkyl- Ring oder einen 5- bis 7-gliedrigen Heterocyclyl-Ring bilden, wobei der Cycloalkyl-Ring und der Heterocyclyl-Ring substituiert sein können mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Trifluormethyl, Alkyl, Alkoxy und Alkylcarbonyl,

R³ Alkylcarbonyl oder 5- bis 7-gliedriges Heterocyclylcarbonyl bedeutet,

wobei Alkylcarbonyl substituiert ist mit einem Substituenten Amino,

und

Trimethylsilyl, Alkoxy, Alkylthio, Benzyloxy, C₃-C₆-Cycloalkyl, Phenyl, Naphthyl, 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl, Alkylcarbonylamino, Alkoxycarbonylamino, Arylcarbonylamino, Arylcarbonyloxy, Benzyloxycarbonyl und Benzyloxycarbonylarnino,

Hydroxy, Alkyl, Alkoxy und Phenyl,

0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Trifluormethyl, Alkyl und Alkoxy,

oder

wobei der Cycloalkyl-Ring Benzo-anneliert sein kann,

R⁴ Wasserstoff oder C C₄-Alkyl bedeutet,

und

R⁵ Methyl bedeutet,

und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze. Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (Ia) und (Ib), in welchen

R¹ Methyl, Ethyl, n-Propyl, iso-Propyl, 1-Methylρrop-l-yl, 2,2-Dimethylprop-l-yl, 1,1- Dimethylproρ-1-yl, 1-Ethyl-prop-l-yl, 1-Ethyl-l-methylρroρ-l-yl, n-Butyl; 2-Methylbut-l- yl, 3-Methylbut-l-yl, 1-Ethylbut-l-yl, tert-Butyl, 4-Methylpent-l-yl oder n-Hexyl bedeutet,

wobei R¹ substituiert sein kann mit 0 oder 1 Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Trimethylsilyl, C C -Alkoxy, Benzyloxy, C₃-C₆-Cycloalkyl, Phenyl, Naphthyl, Pyridyl, Indolyl, - -Alkoxycarbonyl und Benzyloxycarbonylamino,

worin Phenyl und Pyridyl ihrerseits substituiert sein können mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Nitro, Cι-C₄-Alkyl, Cι-C₄-Alkoxy und Phenyl,

R² Wasserstoff bedeutet,

oder

R¹ und R² zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, einen C₃-C₆-Cycloalkyl- Ring bilden, wobei der Cycloalkyl-Ring substituiert sein kann mit 0 oder 1 Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Trifluormethyl und Cι-C₄-Alkoxy,

R³ Cι-C₆-Alkylcärbonyl bedeutet,

wobei Alkylcarbonyl substituiert ist mit einem Substituenten Amino,

und

wobei Alkylcarbonyl substituiert sein kann mit weiteren 0, 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Trimethylsilyl, Q-C₄-

Alkoxy, Methylhio, Benzyloxy, C₃-C₆-Cycloalkyl, Phenyl, Naphthyl, Thienyl, Pyridyl, Indolyl, C C₄-Alkoxycarbonylamino, Benzyloxycarbonyl und Benzyloxycarbonylamino,

worin Phenyl seinerseits substituiert sein kann mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, - C₄-Alkyl, C C₄-Alkoxy und Phenyl,

wobei der Cycloalkyl-Ring Benzo-anneliert sein kann, R⁴ Wasserstoff bedeutet,

und

R^s Methyl bedeutet,

und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (Ic), in welcher

R¹ Methyl, Phenylethyl, n-Propyl, 1-Methylprop-l-yl, 2,2-Dimethylprop-l-yl, Benzyloxy- carbonylaminopropyl oder Benzyloxycarbonylaminobutyl bedeutet,

wobei Methyl substituiert ist mit einem Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus tert-Butoxy, Benzyloxy, C₃-C₆-Cycloalkyl, Phenyl, Naphthyl, Pyridyl, Indolyl und tert-Butoxycarbonyl,

worin Phenyl seinerseits substituiert sein kann mit 0, 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Nitro, Methoxy und Phenyl,

R² Wasserstoff bedeutet,

oder

R¹ und R² zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, einen C₃-C₆-Cycloalkyl- Ring bilden,

R⁴ Wasserstoff bedeutet,

R⁵ Methyl bedeutet,

R⁶ Methyl, iso-Propyl, 1-Methylprop-l-yl, 2-Methylprop-l-yl, 2,2-Dimethylprop-l-yl, C₃-C₆- Cycloalkyl, Phenyl, Thienyl, tert-Butoxycarbonylaminopropyl, tert-Butoxycarbonyl- aminobutyl, Benzyloxycarbonylaminopropyl oder Benzyloxycarbonylaminobutyl bedeutet,

und

R⁷ Wasserstoff bedeutet,

oder

R⁶ und R⁷ zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, einen C₃- -Cycloalkyl- Ring bilden,

und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.

Gegenstand der Erfindung sind auch solche Verbindungen der Formel (I), (Ia) und (Ib), in welchen

R¹ Wasserstoff, C₃-C₆-Cycloalkyl, C₅-C₆-Cycloalkenyl, C₃-C₆-Cycloalkylmethyl, 5- bis 7- gliedriges Heterocyclylmethyl, Methyl, Ethyl, n-Propyl, iso-Propyl, 1-Methylprop-l-yl, 2,2-Dimethylprop-l-yl, 1,1-Dimethylprop-l-yl, 1-Ethyl-prop-l-yl, 1-Efhyl-l-methylρrop-l- yl, 2-Methylbut-l-yl, 3-Methylbut-l-yl, 1-Ethylbut-l-yl, t_τt-Butyl, 4-Methylpent-l-yl, n-

Hexyl, Alkenyl oder Aryl bedeutet,

wobei R¹ substituiert sein kann mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Amino, Cyano, Alkyl, Alkoxy, C₃-C₆-Cycloalkyl, Aryl, Alkylarnino, Arylamino, Alkylcarbonylamino,

Arylcarbonylamino, Alkylcarbonyl und Arylcarbonyl,

R² Wasserstoff oder Cι-C₄-Alkyl bedeutet,

oder

R¹ und R² zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, einen C₃-C₆-Cycloalkyl- Ring oder einen Cs- -Heterocyclyl-Ring bilden, wobei der Cycloalkyl-Ring und der

Heterocyclyl-Ring substituiert sein können mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Alkyl und Alkylcarbonyl,

R³ eine carbonylgebundene Aminosäure bedeutet, wobei die Aminofunktion der Aminosäure substituiert sein kann mit 0, 1 oder 2 Substituenten C C -Alkyl,

oder

Alkylaminocarbonyl bedeutet,

wobei Alkyl, C₃-C₆-Cycloalkyl, 5- bis 7-gliedriges Heterocyclyl, Aryl, 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl, Alkylcarbonyl, Alkoxycarbonyl, C₃-C₆-Cycloalkylcarbonyl, 5- bis 7-gliedriges Heterocyclylcarbonyl, Arylcarbonyl, 5- oder 6-gliedriges Heteroarylcarbonyl und Alkylaminocarbonyl substituiert sein können mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Amino und Alkylarnino,

R⁴ Wasserstoff, CrQ-Alkyl, Cyclopropyl oder Cyclopropylmethyl bedeutet,

oder

R³ und R⁴ zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen C₅-C₇-Heterocyclyl- Ring bilden, wobei der Heterocyclyl-Ring substituiert sein kann mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Amino, Cyano, Alkyl, Alkoxy und Alkylarnino,

und

R⁵ Wasserstoff oder Methyl bedeutet.

Bevorzugt sind auch solche Verbindungen der Formeln (I), (Ia) und (Ib), in welchen

R¹ Cyclopropylmethyl, Cyclopentylmethyl, Cyclohexylmethyl, Ethyl, n-Propyl, iso-Propyl, 2,2-Dimethylprop-l-yl oder 2-Methylbut-l-yl bedeutet,

R² Wasserstoff bedeutet,

R³ eine carbonylgebundene Aminosäure bedeutet,

R⁴ Wasserstoff bedeutet,

und R⁵ Wasserstoff oder Methyl bedeutet.

R¹ Cyclopropylmethyl oder n-Propyl bedeutet,

R² Wasserstoff bedeutet,

R³ eine carbonylgebundene Aminosäure bedeutet,

R⁴ Wasserstoff bedeutet,

und

R⁵ Methyl bedeutet.

Bevorzugt sind auch solche Verbindungen der Formeln (I), (Ia) und (Ib), in welchen R¹ Cyclopropylmethyl bedeutet.

Bevorzugt sind auch solche Verbindungen der Formeln (I), (Ia) und (Ib), in welchen R² Wasserstoff bedeutet.

Bevorzugt sind auch solche Verbindungen der Formeln (I), (Ia) und (Ib), in welchen R³ eine carbonylgebundene Aminosäure bedeutet.

Bevorzugt sind auch solche Verbindungen der Formeln (I), (Ia) und (Ib), in welchen R⁴ Wasserstoff bedeutet.

Bevorzugt sind auch solche Verbindungen der Formeln (I), (Ia) und (Ib), in welchen R⁵ Methyl bedeutet.

Die in den jeweiligen Kombinationen bzw. bevorzugten Kombinationen von Resten im einzelnen angegebenen Restedefinitionen werden unabhängig von den jeweiligen angegebenen Kombinationen der Reste beliebig auch durch Restedefinitionen anderer Kombination ersetzt.

Ganz besonders bevorzugt sind auch Kombinationen von zwei oder mehreren der oben genannten Vorzugsbereiche.

Gegenstand der Erfindung ist weiterhin ein Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formeln (I), wobei Verbindungen der Formel

in welcher

R die oben angegebene Bedeutung hat,

mit Verbindungen der Formel

in welcher

_R , R , R und R die oben angegebene Bedeutung haben, und

X¹ Halogen, bevorzugt Brom, Chlor oder Fluor, oder Hydroxy bedeutet,

umgesetzt werden.

Falls X¹ für Halogen steht, erfolgt die Umsetzung im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, gegebenenfalls in Gegenwart einer Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von -30°C bis 50°C bei Normaldruck.

Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Tetrahydrofuran, Methylenchlorid, Pyridin, Dioxan oder Dimethylformamid, bevorzugt ist Pyridin oder Dimethylformamid. Als inerte Lösungsmittel sind Tetrahydrofuran oder Methylenchlorid bevorzugt.

Basen sind beispielsweise Triethylamin, Diisopropylethylamin oder N-Methylmorpholin, bevorzugt ist Diisopropylethylamin.

Falls X¹ für Hydroxy steht, erfolgt die Umsetzung im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, in Gegenwart eines Dehydratisierungsreagenzes, gegebenenfalls in Gegenwart einer Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von -30°C bis 50°C bei Normaldruck.

Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Dichlormethan oder Trichlormethan, Kohlenwasserstoff wie Benzol, Nitromethan, Dioxan, Dime ylfoπnamid oder Acetonitril. Ebenso ist es möglich, Gemische der Lösemittel einzusetzen. Besonders bevorzugt ist Dichlormethan oder Dimethylformamid.

Als Dehydratisierungsreagenzien eignen sich hierbei beispielsweise Carbodiimide wie z.B. N,N'- Diethyl-, N,N, -Dipropyl-, _V,iV'-Diisopropyl-, N.N'-Dicyclohexylcarbodiimid, JV-(3-Di- methylaminoisopropyl)-JV'-ethylcarbodiimid-hydrochlorid (EDC), N-Cyclohexylcarbodiimid-N'- propyloxymethyl-Polystyrol (PS-Carbodiimid) oder Carbonylverbindungen wie Carbonyldiimida- zol, oder 1,2-Oxazoliumverbindungen wie 2-Ethyl-5-phenyl-l,2-oxazolium-3-sulfat oder 2-tert- Butyl-5-methyl-isoxazolium-perchlorat, oder Acylaminoverbindungen wie 2-Ethoxy-l-ethoxy- carbonyl-l,2-dihydrochinolm, oder Propanphosphonsäureanhydrid, oder Isobutylchloroformat, oder Bis-(2-oxo-3-oxazolidinyl)-ρhosphorylchlorid oder Benzotriazolyloxy-tri(dimethylamino)- phosphoniumhexafluorophosphat, oder 0-(Benzotriazol-l-yl)-Λ^N,N',Λ^'-tetra-methyluronium- hexafluorophosphat (HBTU), 2-(2-Oxo-l-(2H)-pyridyl)-l,l,3,3-tetramethyluroniumtetrafluoro- borat (TPTU) oder 0-(7-Azabenzotriazol-l-yl)-N,N,N',N'-tetramemyl-uroniumhexafluorophosphat (HATU), oder 1-Hydroxybenztriazol (HOBt), oder Benzotriazol-l-yloxytris(dimethylamino)-phos- phoniumhexafluorophosphat (BOP), oder N-Hydroxysuccinimid, oder Mischungen aus diesen, mit Basen.

Basen sind beispielsweise Alkalicarbonate, wie z.B. Natrium- oder Kaliumcarbonat, oder -hy- drogencarbonat, oder organische Basen wie Trialkylamine z.B. Triethylamin, N-Methylmorpholin, N-Methylpiperidin, 4-Dimethylaminopyridin oder Diisopropylethylamin.

Vorzugsweise w d die Kondensation mit HATU oder mit EDC in Gegenwart von HOBt durchgeführt.

Die Verbindungen der Formel (IH) tragen gegebenenfalls Schutzgruppen, so dass sich in diesen Fällen der Umsetzung von Verbindungen der Formel (II) mit Verbindungen der Formel (_H) eine Abspaltung der Schutzgruppen mit Trifluoressigsäure nach dem Fachmann bekannten Methoden anschließt.

Die Verbindungen der Formel (II) lassen sich durch doppelten Edmann-Abbau aus Lysobactin (Beispiel IA) bzw. Katanosin (Beispiel 2A) synthetisieren, wie im experimentellen Teil unter Beispiel 10A bis 13A beschrieben.

Die Verbindungen der Formel (IH) sind bekannt oder lassen sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Edukten synthetisieren.

Die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen kann durch folgendes Syntheseschemata verdeutlicht werden.

Svntheseschema;

Die erfindungsgemäßen Verbindungen zeigen ein nicht vorhersehbares, wertvolles pharmakologisches Wkkspektrum- Sie zeigen eine antibakterielle Wkkung.

Sie eignen sich daher zur Verwendung als Arzneimittel zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten bei Menschen und Tieren.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen zeichnen sich durch eine geringere Nephrotoxizität gegenüber Lysobactin aus. Die beschriebenen Nonadepsipeptide wirken als Inhibitoren der bakteriellen Zellwandbiosynthese.

Besonders wkksam sind die erfindungsgemäßen Zubereitungen gegen Bakterien und bakterienähnliche Mikroorganismen. Sie sind daher besonders gut zur Prophylaxe und Chemotherapie von lokalen und systemischen Infektionen in der Human- und Tiermedizin geeignet, die durch diese Erreger hervorgerufen werden.

Grundsätzlich können die erfindungsgemäßen Zubereitungen gegen alle Bakterien und bakterienähnlichen Mikroorganismen verwendet werden, die im Besitz einer bakteriellen Zellwand (Murein sacculus) bzw. den dazugehörigen Enzymsystemen sind, beispielsweise durch die folgenden Erreger oder durch Mischungen der folgenden Erreger:

Gram-negative Kokken (Neisseria gonorrhoeae) sowie Gram-negative Stäbchen wie Enterobakteriaceen, z.B. Escherichia coli, Hämophilus influenzae, Pseudomonas, Klebsiella, Citrobacter (C. freundii, C. divernis), Salmonella und Shigella; ferner Enterobacter (E. aerogenes, E. agglomerans), Hafhia, Serratia (S. marcescens), Providencia, Yersiniä, sowie die Gattung Acinetobacter, Branhamella und Chlamydia. Darüber hinaus umfasst das antibakterielle Spektrum strikt anaerobe Bakterien wie z.B. Bacteroides fragilis, Vertreter der Gattung Peptococcus, Peptostreptococcus sowie die Gattung Clostridium; ferner Mykobakterien, z.B. M. tuber culosus. Besonders ausgeprägte Wkkung zeigen die erfindungsgemäßen Verbindungen gegen Gram-positive Kokken, z.B. Staphylokokken (S. aureus, S. epidermidis, S. haemolyticus, S. carnosui), Enterokokken (E. faecalis, E. faecium) und Streptokokken (S. agalactiae, S. pneumoniae, S. pyogenes).

Die obige Aufzählung von Erregern ist lediglich beispielhaft und keineswegs beschränkend aufzufassen. Als Krankheiten, die durch die genannten Erreger oder Mischinfektionen verursacht und durch die erfindungsgemäßen Zubereitungen verhindert, gebessert oder geheilt werden können, seien beispielsweise genannt:

Infektionskrankheiten beim Menschen wie z.B. unkomplizierte und komplizierte Harnwegsinfekte, unkomplizierte Haut- und Oberflächeninfektionen, komplizierte Haut- und Weichteilinfektionen, im Hospital und ambulant erworbene Lungenentzündung, nosokomiale Pneumonien, akute Exazerbationen und sekundäre bakterielle Infektionen der chronischen Bronchitis, akute Otitis media, akute Sinusitis, streptokokkale Pharyngitis, bakterielle Meningitis, unkomplizierte gonokokkale und nicht-gonokokkale Urethritis/Cervizitis, akute Prostatitis, Endocarditis, unkomplizierte und komplizierte intra-abdominale Infektionen, gynäkologische Infektionen, pelvische Entzündungskrankheit, bakterielle Vaginose, akute und chronische Osteomyelitis, akute bakterielle Arthritis, empirische Therapie in febrilen neutropenischen Patienten, desweiteren Bakterämien, MRSA Infektionen, akute infektiöse Diarrhöe, Helicobacter pylori Infektionen, postoperative Infektionen, odontogene Infektionen, ophthalmologische Infektionen, postoperative Infektionen (inkl. periproktaler Abszess, Wundinfektionen, Galleninfektionen, Mastitis und akute Appendizitis), zystische Fibröse und Bronchiectasis.

Außer beim Menschen können bakterielle Infektionen auch bei anderen Spezies behandelt werden. Beispielhaft seien genannt:

Schwein: Diarrhöe, Enterotoxamie, Sepsis, Dysenterie, Salmonellose, Metritis-Mastitis- Agalaktiae-Syndrom, Mastitis;

Wiederkäuer (Rind, Schaf, Ziege): Diarrhöe, Sepsis, Bronchopneumonie, Salmonellose, Pasteurellose, Genitalinfektionen;

Pferd: Bronchopneumonien, Fohlenlähme, puerperale und postpuerperale Infektionen, Salmonellose;

Hund und Katze: Bronchopneumonie, Diarrhöe, Dermatitis, Otitis, Harnwegsinfekte, Prostatitis;

Geflügel (Huhn, Pute, Wachtel, Taube, Ziervögel und andere): E. coZz-Infektionen, chronische Luftwegserkrankungen, Salmonellose, Pasteurellose, Psittakose.

Ebenso können bakterielle Erkrankungen bei der Aufzucht und Haltung von Nutz- und Zierfischen behandelt werden, wobei sich das antibakterielle Spektrum über die vorher genannten Erreger hinaus auf weitere Erreger wie z.B. Pasteurella, Brucella, Campylobacter, Listeria, Erysipelothris, Corynebakterien, Borellia, Treponema, Nocardia, Rikettsia, Yersinia, erweitert.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist der Einsatz der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere von bakteriellen Infektionskrankheiten.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen.

Bevorzugt werden die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Herstellung von Arzneimitteln ver- wendet, die zur Prophylaxe und/oder Behandlung von bakteriellen Erkrankungen geeignet sind.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen, unter Verwendung einer antibakteriell wkksamen Menge der erfindungsgemäßen Verbindungen.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, enthaltend mindestens eine erfindungsgemäße Verbindung und mindestens einen oder mehrere weitere Wkkstoffe, insbesondere zur Behandlung und/oder Prophylaxe der zuvor genannten Erkrankungen. Bevorzugte Kombinationswkkstoffe sind antibakteriell wkkende Verbindungen, die ein anderes Wkkspektrum, insbesondere ergänzendes Wkkspektrum, haben und oder synergistisch zu den erfindungsgemäßen Verbindungen sind.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können systemisch und/oder lokal wkken. Zu diesem Zweck können sie auf geeignete Weise appliziert werden, wie z.B. oral, parenteral, pulmonal, nasal, sublingual, lingual, buccal, rectal, dermal, transdermal, conjunctival, otisch oder als Implantat bzw. Stent.

Für diese Applikationswege können die erfindungsgemäßen Verbindungen in geeigneten Applikationsformen verabreicht werden.

Für die orale Applikation eignen sich nach dem Stand der Technik funktionierende schnell und/oder modifiziert die erfindungsgemäßen Verbindungen abgebende Applikationsformen, die die erfindungsgemäßen Verbindungen in kristalliner und/ oder amorphisierter und/oder gelöster Form enthalten, wie z.B. Tabletten (nichtüberzogene oder überzogene Tabletten, beispielsweise mit magensaftresistenten oder sich verzögert auflösenden oder unlöslichen Überzügen, die die Freisetzung der erfindungsgemäßen Verbindung kontrollieren), in der Mundhöhle schnell zerfallende Tabletten oder Filme/Oblaten, Filme/Lyophylisate, Kapseln (beispielsweise Hart- oder Weichgelatinekapseln), Dragees, Granulate, Pellets, Pulver, Emulsionen, Suspensionen, Aerosole oder Lösungen.

Die parenterale Applikation kann unter Umgehung eines Resorptionsschrittes geschehen (z.B. intravenös, intraarteriell, intrakardial, intraspinal oder intralumbal) oder unter Einschaltung einer Resorption (z.B. intramuskulär, subcutan, intracutan, percutan oder intraperitoneal). Für die parenterale Applikation eignen sich als Applikationsformen u.a. Injektions- und Infusionszubereitungen in Form von Lösungen, Suspensionen, Emulsionen, Lyophilisaten oder sterilen Pulvern.

Für die sonstigen Applikationswege eignen sich z.B. Inhalationsarzneiformen (u.a. Pulverinhalatoren, Nebulizer), Nasentropfen, -lösungen, -sprays; lingual, sublingual oder buccal zu applizierende Tabletten, Filme/Oblaten oder Kapseln, Suppositorien, Ohren- oder Augenpräparationen, Vaginalkapseln, wäßrige Suspensionen (Lotionen, Schüttelmixturen), lipophile Suspensionen, Salben, Cremes, transdermale therapeutische Systeme (wie beispielsweise Pflaster), Milch, Pasten, Schäume, Streupuder, Implantate oder Stents.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in die angeführten Applikationsformen überführt werden. Dies kann in an sich bekannter Weise durch Mischen mit inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoffen geschehen. Zu diesen Hilfsstoffen zählen u.a. Trägerstoffe (beispielsweise mikrokristalline Cellulose, Laktose, Mannitol), Lösungsmittel (z.B. flüssige Polyethylenglycole), Emulgatoren und Dispergier- oder Netzmittel (beispielsweise Natriumdodecylsulfat, Polyoxysorbitanoleat), Bindemittel (beispielsweise Polyvinylpyrrolidon), synthetische und natürliche Polymere (beispielsweise Albumin), Stabilisatoren (z.B. Antioxidantien wie beispielsweise Ascorbinsäure), Farbstoffe (z.B. anorganische Pigmente wie beispielsweise Eisenoxide) und Geschmacks- und / oder Geruchskorrigentien.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, die mindestens eine erfindungsgemäße Verbindung, üblicherweise zusammen mit einem oder mehreren inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoffen enthalten, sowie deren Verwendung zu den zuvor genannten Zwecken.

Im Allgemeinen hat es sich als vorteilhaft erwiesen, bei intravenöser Applikation Mengen von etwa 0.001 bis 100 mg/kg, vorzugsweise etwa 0.1 bis 10 mg/kg Körpergewicht zur Erzielung wkksamer Ergebnisse zu verabreichen, und bei oraler Applikation beträgt die Dosierung etwa 0.01 bis 50 mg kg, vorzugsweise 0.5 bis 10 mg/kg Körpergewicht.

Trotzdem kann es gegebenenfalls erforderlich sein, von den genannten Mengen abzuweichen, und zwar in Abhängigkeit von Körpergewicht, Applikationsweg, individuellem Verhalten gegenüber dem Wkkstoff, Art der Zubereitung und Zeitpunkt bzw. Intervall, zu welchem die Applikation erfolgt. So kann es in einigen Fällen ausreichend sein, mit weniger als der vorgenannten Mindestmenge auszukommen, während in anderen Fällen die genannte obere Grenze überschritten werden muss. Im Falle der Applikation größerer Mengen kann es empfehlenswert sein, diese in mehreren Einzelgaben über den Tag zu verteilen.

Die Prozentangaben in den folgenden Tests und Beispielen sind, sofern nicht anders angegeben, Gewichtsprozente; Teile sind Gewichtsteile. Lösungsmittelverhältnisse, Verdünnungsverhältnisse und Konzentrationsangaben von flüssig/flüssig-Lösungen beziehen sich jeweils auf das Volumen. A. Beispiele

Abkürzungen

Allg. Allgemein(e)

Area (Peak)fläche ber. berechnet

BHI Brain Heart Infusion

Boc t_τt-Butyloxyca bonyl br. breites Signal (bei NMR-Spektren)

Bsp. Beispiel d Dublett (bei NMR-Spektren)

DC Dünnschichtchromatographie

DCI direkte chemische Ionisation (bei MS)

DCM Dichlormethan

DIEA N,_v^"-Diisoρropylethylamin

DMSO Dimethylsulfoxid

DMF N,N-Dimethylformamid d. Th. der Theorie

EDC l-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide (auch EDCI)

EDCxHCl l-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiirnide-hydrochlorid

EE Ethylacetat (Essigsäureethylester)

EI Elektronenstoß-Ionisation (bei MS)

ESI Elektrospray-Ionisation (bei MS)

Fp. Schmelzpunkt gef. gefunden ges. Gesättigt h Stunde

HATU 0-(7-Azabenzo azol-l-yl)-N,N,iV',N'-tetramethylιιror-ium-hexa- fluorphosphat

HOBt 1-Hydroxybenzotriazol

HPLC Hochdruck-, Hochleistungsflüssigchromatographie

HR High Resolution (Hochauflösung) i. V. im Vakuum konz. Konzentriert

LC-MS Müssigchromatographie-gekoppelte Massenspekkoskopie

LDA Lithium-Diisopropylamid m middle ( ittel) (bei UV- und IR-Spektren) m Multiplett (bei NMR-Spektren)

MALDI Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization

MHK Minimale Hemmkonzentration min Minute/Minuten

MRSA Methicillin-resistenter Staphylococcus aureus

MS Massenspektroskopie

NCCLS National Committee for Clinical Laboratory Standards neg. negativ

NMM N-Methylmorpholin

NMR Kernresonanzspektroskopie (nuclear magnetic resonance) p.a. pro analysi

Pd-C Palladium auf Kohle pos. positiv proz. Prozentig quant. quantitativ

RP-HPLC Reverse Phase HPLC

RT Raumtemperatur t Retentionszeit (bei HPLC) s strong (stark) (bei UV- und IR-Spektren) s Singulett (bei NMR-Spektren)

TBTU ^-(Benzotriazol-l-yy-iv^Λ^N'.N'-tetramethyluronium-

Tetrafluoroborat

TCTU 0-(lH-6-Chlorbenzotriazol-l-yl)-l,l,3,3-tetramethyluronium-

Tetrafluoroborat

TFA Trifluoressigsäure

TFE 2,2,2-Trifluorethanol

THF Tetrahydrofuran

TOF Flugzeit (time of flight)

UV Ultraviolett

Vis sichtbar (visible)

VRSA Vancomycin-resistenter Stapylococcus aureus w weak (schwach) (bei UV- und IR-Spekken)

Z, Cbz Benzyloxycarbonyl Literatur

Zur Nomenklatur der Peptide und Cyclodepsipeptide vergleiche:

1. A Guide to IUPAC Nomenclature of Organic Compounds (Recommendations 1993), 1993, Blackwell Scientific publications.

2. Nomenclature and symbolism for amino acids and peptides. Recommendations 1983. IUPAC- IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature, UK. Biochemical Journal 1984, 219, 345-373. Sowie zitierte Literatur.

Allgemeine Methoden LC-MS. HR-MS. HPLC und Gelchromatographie

Methode 1 (HPLC): Gerät: HP1100 mit DAD (G1315A) und Autosampier (G1329A), Auto- samplertherme (G1330A, 5°C), Degaser (G1322A) und Binäre Pumpe (G1312A); Vorsäule: Waters Symmetry C-18, 10 x 2.1 mm, 3.5 im; Analytiksäule: Waters Symmetry C-18, 50 x 2.1 mm, 3.5 μm; Säulenofen: 45°C; Eluent A: Wasser/0.05% Trifluoressigsäure; Eluent B: Acetonitril 0.05% Trifluoressigsäure; Fluss: 0.4 ml/min.; Gradient 0-100% B in 9 min, hiernach 3 min bei 100% B, hiernach Regeneration der Säule.

Methode 2 (LC-MS): Gerät: Micromass LCT; Ionisation: ESI positiv/negativ; HPl 100 mit DAD und Autosampier; Ofen 40°C; Säule: Waters Symmetry C-18, 50 x 2.1 mm, 3.5 μm; Eluent A: 0.1% Ameisensäure/Acetonitril, Eluent B: 0.1% Ameisensäure/Wasser; Fluss: 0.5 ml/min.; Gradient: 0-1 min 0% A, 1-6 min 90% A, 6-8 min 100% A, 8-10 min 100% A, 10-15 0% A.

Methode 3 (HPLC): Gerät: Gilson Abimed HPLC; UV Detektor 254 nm; binäres Pumpeösystem; Säule: Nucleosil RP-18, 7 μm; 250 x 50 mm; Fluss: 30 ml/min; Eluent A: Wasser/0.1% Trifluoressigsäure, Eluent B: Acetonitril/0.1% Trifluoressigsäure; Gradient: 0-40 min 20-25% B, 40-60 min 25% B, 60-110 min 25-50% B, 110-120 min 50% B, 120-130 min 50-100% B, 130-160 min 100% B, anschließend Regeneration der Chromatographiesäule.

Methode 4 (HPLC): Gerät:_. Gilson Abimed HPLC; UV Detektor 254 nm; binäres Pumpensystem; Säule: Nucleosil RP-18, 7 μm; 250 x 50 mm; Fluss: 40 ml/min; Eluent A: Wasser/0.05% Trifluoressigsäure, Eluent B: Acetonitril/0.05% Trifluoressigsäure; Gradient: 0-105 min 20-25% B, 105-111 min 25% B, 111-131 min 25-27% B, 131-157 min 27-35% B, 157-192 min 35-40% B, 192-207 min 40-45% B, anschließend Regeneration der Chromatographiesäule.

Methode 5 (HPLC): Gerät: Gilson Abimed HPLC; UV Detektor 254 nm; binäres Pumpensystem; Säule: Nucleosil RP-18, 7 μm; 250 x 50 mm; Fluss: 40 ml min; Eluent A: Wasser/0.05%

Trifluoressigsäure, Eluent B: Acetonitril/0.05% Trifluoressigsäure; Gradient: 0-40 min 20-25% B, 40-105 min 25% B, 105-130 min 25-27% B, 130-170 min 27-40% B, 170-190 min 40% B, 190- 210 min 40-45% B, anschließend Regeneration der Chromatographiesäule.

Methode 6 (Gelchromatographie an Sephadex LH-20): Gelchromatographie wkd ohne Druck an Sephadex LH-20 (Firma Pharmacia) durchgeführt. Es wkd nach UV-Aktivität (UV Detektor für 254 nm, Firma Knauer) fraktioniert (Fraktionssammler ISCO Foxy 200). Säulendimensionen: 32 x 7 cm (1000-100 μmol Maßstab); 30 x 4 cm (100-10 μmol Maßstab); 25 x 2 cm (10-1 μmol Maßstab).

Methode 7 (präparative HPLC; Symmetry; Essigsäure): Gerät: Gilson Abimed HPLC; UV Detektor 210 nm; binäres Pumpensystem; Säule: SymmetryPreρ™Cι₈, Firma Waters, 7 μm; 300 x 19 mm; Fluss: 7 ml/min; Eluent A: Wasser/0.5-0.25% Essigsäure, Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0-2 min 5% B, 2-60 min 5-90% B, 60-80 min 100% B, anschließend Regeneration der Chromatographiesäule.

Methode 8 (präparative HPLC; Symmetry; TFA): Gerät: Gilson Abimed HPLC; UV Detektor 210 nm; binäres Pumpensystem; Säule: Syι__metryPrep™Cι₈, Firma Waters, 7 μm; 300 x 19 mm; Fluss: 7 ml/min; Eluent A: Wasser/0.1-0.25% Trifluoressigsäure, Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0-8 min 5% B, 8-40 min 5-60% B, 40-60 min 60% B, 60-75 min 60-100% B, 75-80 min 100% B, anschließend Regeneration der Chromatographiesäule.

Methode 9 (präparative HPLC; Kromasil, Essigsäure): Gerät: Gilson Abimed HPLC; UV Detektor 210 nm; binäres Pumpensystem; Säule: Kromasil-IOOA Cι₈, 5 μm; 250 x 20 mm; Fluss: 25 ml/min; Eluent A: Wasser/0.25-0.5% Essigsäure, Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0-3 min 5% B, 3-30 min 5-100% B, 30-38 min 100% B, anschließend Regeneration der Chromatographiesäule.

Methode 10 (präparative HPLC; Kromasil, TFA): Gerät: Gilson Abimed HPLC; UV Detektor 210 nm; binäres Pumpensystem; Säule: Kromasil-IOOA Cι₈, 5 μm; 250 x 20 mm; Fluss: 25 ml/min; Eluent A: Wasser/0.1-0.25% Trifluoressigsäure, Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0-3 min 5% B, 3- 30 min 5-100% B, 30-38 min 100% B, anschließend Regeneration der Chromatographiesäule.

Methode 11 (LC-MS): Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; Säule: Grom-Sil 120 ODS-4 HE 50 x 2 mm, 3.0 μm; Eluent A: Wasser/0.025% Ameisensäure/1, Eluent B: Acetonitril/0.025% Ameisensäure; Gradient: 0-2.9 min 0-70% B, 2.9-3.1 min 70-90% B, 3.1-4.5 min 70-90% B; Ofen: 50°C, Fluss: 0.8 ml/min, UV-Detektion: 210 nm.

Methode 12 (LC-MS): Gerätetyp MS: Micromass LCT (ESI pos./neg.); Gerätetyp HPLC: HP 1100 Series; UV DAD 1100 Series; Säule SymmetryPreρ™C₁₈, Firma Waters, 50 x 2.1 mm, 3.5 μm; Eluent A: Wasser/0.1% Ameisensäure, Eluent B: Acetonitril/0.1% Ameisensäure; Gradient: 0-1 min 0% B, 1-5.5 min 0-95% B, 5.5-8 min 95% B, 8-8.1 min 95-0% B, 8.1-10 min 0% B, anschließend Regeneration der Chromatographiesäule. Ofen: 40°C, Fluss: 0.5 ml/min (bei 8.1- 10 min kurzfristig auf 1 ml min), UV-Detektion: 210 nm.

Methode 13 (HPLC): Gerätetyp HPLC: HP 1050 Series; UV DAD 1100 Series; Säule Symmetry- Prep™Cι₈, Firma Waters, 50 x 2.1 mm, 3.5 μm; Eluent A: Wasser/0.05% Trifluoressigsäure, Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0-9 min 0-100% B, 9-11 min 100% B, 11-12 min 100-0% B, anschließend Regeneration der Chromatographiesäule. Ofen: 40°C, Fluss: 0.4 ml/min, UV- Detektion: 210 nm.

Methode 14 (präparative HPLC; Nucleodur C_iS, Essigsäure): Gerät: Gilson Abimed HPLC; UV Detektor 210 nm; binäres Pumpensystem; Säule: Nucleodur ₈ Gravity, Firma Macherey- Nagel, 5 μm; 250 x 21 mm; Fluss: 20 ml/min; Eluent A: Wasser/0.25-0.5% Essigsäure, Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0-3 min 5% B, 3-30 min 5-100% B, 30-38 min 100% B, anschließend Regeneration der Chromatographiesäule.

Methode 15 (präparative HPLC; Nucleodur Cι₈, TFA): Gerät: Gilson Abimed HPLC; UV Detektor 210 nm; binäres Pumpensystem; Säule: Nucleodur s Gravity, Firma Macherey-Nagel, 5 μm; 250 x 21 mm; Fluss: 7 ml/min; Eluent A: Wasser/0.1-0.25% Trifluoressigsäure, Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0-8 min 5% B, 8-40 min 5-60% B, 40-60 min 60% B, 60-75 min 60-100% B, 75-80 min 100% B, anschließend Regeneration der Chromatographiesäule.

Methode 16 (präparative HPLC; YMC Gel ODS-AQ5-5 ; Essigsäure): Gerät: Gilson Abimed HPLC; UV Detektor 254 nm; binäres Pumpensystem; Säule: YMC Gel ODS-AQ5-5, 15 μm; 250 x 50 mm; Fluss: 25 ml/min; Eluent A: Wasser/0.5% Essigsäure, Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0-3 min 20% B, 3-25 min 20-95% B, anschließend Regeneration der Chromatographiesäule.

Methode 17 (LC-MS): Gerät: Micromass Quattro LCZ, mit HPLC Agilent Serie 1100; Säule: Grom-SIL120 ODS-4 HE, 50 x 2.0 mm, 3 μm; Eluent A: Wasser/0.05% Ameisensäure, Eluent B: Acetonitril 0.05% Ameisensäure; Gradient: 0.0-0.2 min 100% A, 0.2-2.9 min 100-30% A, 2.9- 3.1 min 30-10% A, 3.1-4.5 min 10% A; Ofen: 55°C, Fluss: 0.8 ml/min, UV-Detektion: 208-400 nm.

Methode 18 (HPLC): Gerätetyp HPLC: HP 1050 Series; UV DAD 1100 Series; Säule: Kromasil Cis, 60 x 2 mm, 3.5 μm; Eluent A: Wasser/0.5% HC10₄, Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0-0.5 min 2% B, 0.5-4.5 min 2-90% B, 4.5-6.5 min 90% B, 6.5-6.7 min 90-2% B, 6.7-7.5 min 2% B; Fluss: 0.75 ml/min, Ofen: 30°C, UV-Detektion 210 nm. Methode 19 (LC-MS): Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: Waters Alliance 2790; Säule: Grom-Sil 120 ODS-4 HE 50 x 2 mm, 3.0 μm; Eluent B: Acetonitril/0.05% Ameisensäure, Eluent A: Wasser/0.05% Ameisensäure; Gradient: 0.0-2.0 min 5%-40%B, 2.0-4.5 min 40-90% B, 4.5-5.5 min 90%B; Fluss: 0.0 min 0.75 ml/min, 4.5 min 0.75ml/min, 5.5 min 1.25 ml/min; Ofen: 45°C; UV-Detektion: 210 nm.

Methode 20 (MALDI-MS): Die MALDI-MS/MS-Untersuchungen werden auf einem 4700 Proteomics Analyzer (Applied Biosystems, Framingham, MA, USA) durchgeführt, der mit TOF/TOF Ionenoptik und 200 Hz Nd:YAG Laser (355 nm) ausgestattet ist. Die Quasimolekül- ionen werden in der Ionenquelle mit 8 kV beschleunigt, mit einem elektrischen Deflektor selektiert (MSI), und in einer Stoßzelle, die zwischen MSI und MS2 angeordnet ist, mit Argonatomen gestoßen. Die entstehenden Fragmentionen werden mit 15 kV nachbeschleunigt und mit dem zweiten Flugzeit-Massenanalysator (MS2) charakterisiert.

Methode 21 (TOF-HR-MS): TOF-HR-MS-ESI+ Spektren werden mit einem Micromass LCT Gerät (Kapillarspannung: 3.2 KV, Cone-Spannung: 42 V, Quellentemperatur: 120°C, Desolvations-Temperatur: 280°C) aufgenommen. Hierzu wkd eine Spritzenpumpe (Firma Harvard Apparatus) für die Probenzuführung verwendet. Als Standart dient Leucin-Enkephalin (Tyr-Gly- Gly-Phe-Leu).

Methode 22 (LC-MS): Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: Waters Alliance 2795; Säule: Phenomenex Synergi 2 m Hydro-RP Mercury 20 x 4 mm; Eluent A: Wasser/0.25% Ameisensäure, Eluent B: Acetonitril/0.25% Ameisensäure; Gradient: 0.0-2.5 min, 90-30% A, Fluss 1-2 ml/min, 2.5-3.0 min, 30-5% A, Fluss 2.0 min, 3.0-4.5 min, 5% A; Ofen: 50°C; UV-Detektion: 210 nm.

Methode 23 (FT-ICR-HR-MS): Die Massenpräzisionsmessungen werden an einem hochauflösenden Apex II Fourier-Transform Ionen-Cyclotron-Resonanz Massenspektrometer (Bruker Daltonik GmbH, Bremen) durchgeführt, das mit einem 7 Tesla Magneten, einer externen Elektrospray-Ionenquelle und einem Unix-basierten XMASS-Datensystem ausgestattet ist. Die Massenauflösung beträgt ca. 40.000 (50%-Tal-Definition).

Methode 24 (präparative HPLC; Nucleodur Cι₈, Essigsäure): Gerät: Gilson Abimed HPLC; UV Detektor 210 nm; binäres Pumpensystem; Säule: Nucleodur C_J8 Gravity, Firma Macherey- Nagel, 5 μm; 250 x 40 mm; Fluß: 15-45 ml/min; Eluent A: Wasser/0.2% Essigsäure, Eluent B: Acetonitril0,2%Essigsäure; Gradient: 0-10 min 10% B, 10-24 min 10-30% B, 24-28 min 30- 50% B, 28-35 min 50% B, 35-45 min 50-60% B, 45-53 min 60-70% B, 53-60 min 60-90% B, 60-70 min 100% B, anschließend Regeneration der Chromatographiesäule. Methode 25 (präparative HPLC; Nucleodur Cι₈, Trifluoressigsäure): Gerät: Gilson Abimed HPLC; UV Detektor 210 nm; binäres Pumpensystem; Säule: Nucleodur Cι₈ Gravity, Firma Macherey-Nagel, 5 μm; 250 x 40 mm; Fluß: 15-45 ml/min; Eluent A: Wasser/0.1% Trifluoressigsäure, Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0-12 min 10% B, 12-20 min 10-35% B, 20- 25 min 35-40% B, 25-35 min 40% B, 35-Φ5 min 40-50% B, 45-50 min 50-60% B 100% B, 50- 60 min 60-100% B, 60-75 min 100% B, anschließend Regeneration der Chromatographiesäule.

Methode 26 (LC-MS): Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; Säule: Phenomenex Synergi 2 μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90%A ^■» 2.5 min 30%A -» 3.0 min 5%A -» 4.5 min 5%A; Fluss: 0.0 min 1 ml/min, 2.5 min/3.0 min/4.5 min. 2 ml/min; Ofen: 50°C; UV-Detektion: 210 nm.

Methode 27 (LC-MS): Instrument: Micromass Platform LCZ mit HPLC Agilent Serie 1100; Säule: Phenomenex Synergi 2 μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90%A -> 2.5 min 30%A ^■ 3.0 min 5%A --> 4.5 min 5%A; Fluss: 0.0 min 1 ml min, 2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 ml/min; Ofen: 50°C; UV-Detektion: 210 nm.

Methode 28 (analytische HPLC): Gerätetyp HPLC: HP 1050 Series; UV DAD 1100 Series; Säule: Kromasil ₈, 60 x 2 mm, 3.5 μm; Eluent A: Wasser/0.5% Perchlorsäure, Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0-0.5 min 2% B, 0.5-4.5 min 2-90% B, 4.5-9.0 min 90% B, 9.0-9.2 min 90-2% B, 9.2-10.0 min 2% B; Fluss: 0.75 ml/min, Ofen: 30°C, UV-Detektion 210 nm.

Methode 29 (LC-MS): Gerätetyp MS: Micromass LCT (ESI pos./neg.); Gerätetyp HPLC: HP 1100 Series; UV DAD 1100 Series; Säule SymmetryPrep™Cι₈, Firma Waters, 50 x 2.1 mm, 3.5 μm; Eluent A: Wasser/0.1% Ameisensäure, Eluent B: Acetonitril/0.1% Ameisensäure; Gradient: 0-1 min 0% B, 1-6 min 0-90% B, 6-8 min 90-100% B, 8-10 min 100% B, 10-10.1 min 100-0% B, 10.1-12 min 0% B, anschließend Regeneration der Chromatographiesäule. Ofen: 40°C, Fluss: 0.5 ml/min (bei 10.1 min kurzfristig auf 1 ml/min), UV-Detektion: 210 nm.

Methode 30 (LC-MS): Gerätetyp MS: Micromass LCT (ESI pos./neg.); Gerätetyp HPLC: HP 1100 Series; UV DAD 1100 Series; Säule SymmetryPreρ^'rMCι₈, Firma Waters, 50 x 2.1 mm, 3.5 μm; Eluent A: Wasser/0.1% Ameisensäure, Eluent B: Acetonitril/0.1% Ameisensäure; Gradient: 0-1 min 0% B, 1-5.5 min 0-95% B, 5.5-8 min 95% B, 8-8.1 min 95-0% B, 8.1-10 min 0% B, anschließend Regeneration der Chromatographiesäule. Ofen: 40°C, Fluss: 0.5 ml/min (bei 10.1 min kurzfristig auf 1 ml/min), UV-Detektion: 210 nm. Methode 31 (präparative HPLC): Gerät: Gilson Abimed HPLC; UV-Detektor 210 nm; binäres Pumpensystem; Säule: Reprosil ODS-A, 5 μm, 250 x 20 mm; Eluent A: 0.2% Trifluoressigsδure in Wasser, Eluent B: Acetonitril; Flussrate: 25 ml/min; Säulentemperatur 40°C; 0-10 min 20% B, 10-15 min 80% B.

Methode 32 (präparative HPLC): Gerät: Gilson Abimed HPLC; UV-Detektor 210 nm; binäres Pumpensystem; Säule: Kromasil C₁₈, 5 μm, 100 E, 250 x 20 mm; Eluent A: 0.05% Trifluoressigsäure in Wasser, Eluent B: 0.05% Trifluoressigsäure in Acetonitril: Flussrate: 20 ml/min; 0-3 min 10% B, Rampe, 30-38 min 90% B, 38-45 min 10% B. Für N-Butoxycarbonyl- geschützte Substanzen wkd die Trifluoressigsäure im Laufmittel grundsätzlich durch 0.05% Essigsäure ersetzt.

Methode 33 (präparative HPLC): Gerät: Gilson Abimed HPLC; UV-Detektor 210 nm; binäres Pumpensystem; Säule: Waters Symmetry-Prep™ Cι₈, 7 μm, 300 x 19 mm; Eluent A: 0.05% Trifluoressigsäure in Wasser, Eluent B: 0.05% Trifluoressigsäure in Acetonitril: Flussrate: 20 ml/min; 0-3 min 10% B, Rampe, 30-38 min 90% B, 38-45 min 10% B. Für N-Butoxycarbonyl- geschützte Substanzen wird die Trifluoressigsäure im Laufmittel grundsätzlich durch 0.05% Essigsäure ersetzt.

Methode 34 (Gelchromatographie, Sephadex LH-20): Die Probe wkd an Sephadex LH-20 bei Normaldruck mit einem Fließmittel aus Methanol + Aceton 9 + 1 + 0.5% Essigsäure chromatographiert. UV-Detektion bei 210 nm.

Methode 35 (LC-MS) : Instrument: Micromass Quattro LCZ mit HPLC Agilent Serie 1100; Säule: Phenomenex Synergi 2 μm Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50% Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90%A - 2.5 min 30%A - 3.0 min 5%A - 4.5 min 5%A; Fluss: 0.0 min 1 ml/min, 2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 ml/min; Ofen: 50°C; UV-Detektion: 208-400 nm.

Methode 36 (analytische HPLC): Gerät: Agilent 1100 mit DAD (G1315B), binärer Pumpe (G1312A), Autosampier (G1313A), Lösemittel-Entgaser (G1379A) und Säulenthermostat (G1316A); Säule: Agilent Zorbax Eclipse XDB-C8 4.6 x 150 x 5 mm; Säulentemperatur: 30°C; Eluent A: 0.05% 70% Perchlorsäure in Wasser; Eluent B: Acetonitril; Fluss: 2.00 ml/min; Gradient: 0-1 min 10% B, Rampe, 4-5 min 90% B, Rampe, 5.5 min 10% B.

Methode 37 (LC-MS): Instrument: Micromass Quattro LCZ mit HPLC Agilent Serie 1100; Säule: Phenomenex Synergi 2 μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90%A ^■» 2.5 min 30%A -> 3.0 min 5%A -» 4.5 min 5%A; Fluss: 0.0 min 1 ml/min, 2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 ml/min; Ofen: 50°C; UV-Detektion: 208-400 nm.

Allgemeine Arbeitsvorschriften

Allgemeine Arbeitsvorschrift 1 (Edman°' ^;'⁵)

Zu einer Lösung des N-terminal freien Peptids (0.3 mmol) in trockenem Pyridin (30 ml) wkd unter Argonschutzgasatmosphäre Phenylisothiocyanat (50 mmol) getropft. Das Reaktionsgemisch wkd bei 37°C solange (ca. 1 h) gerührt bis die analytische HPLC-Kontrolle (Methode 13) ausreichenden Umsatz anzeigt (>95%). Das Reaktionsgemisch wkd unter Temperaturkontrolle (<40°C) im Vakuum eingeengt und dann lyophilisiert.

Allgemeine Arbeitsvorschrift 2 (Edman^{7,0 md2}'°)

Unter Argonschutzgasatomosphäre wird der Peptid-Thioharnstoff (0.2 mmol) als Feststoff bei starkem Rühren mit trockener Trifluoressigsäure versetzt und dann bei 40°C solange gerührt (ca. 20 min) bis die analytische HPLC-Kontrolle ausreichenden Umsatz (>95%) anzeigt. Das Reaktionsgemisch wkd zügig bei Raumtemperatur (Temperaturkontrolle) im Vakuum eingeengt. Um das Rohprodukt von weiterer Trifluoressigsäure zu befreien, wird das Rohprodukt in Dichlormethan aufgenommen und erneut im Vakuum von Lösungsmittel befreit. Dieser Vorgang wird mehrfach mit Toluol (zweimal) und mit Dichlormethan (zweimal) wiederholt. Abschließend wkd das Rohprodukt lyophilisiert.

Allgemeine Arbeitsvorschrift 3 (Acylierung Edman^{7,0 md2}'°)

Zu einer Lösung des am N-Terminus freien Depsipeptids (Amin-Komponente, 1.0 Äquivalente, 4 μmol), der freien Carbonsäure (Carbonsäure-Komponente, 5-20 Äquivalente, 20-80 μmol), HOBt (10-40 Äquivalente, 40-160 μmol) und EDCxHCl (10-25 Äquivalente, 40-100 μmol) in trockenem DMF (1.0 ml) wkd bei 0°C zunächst N-Methylmorpholin (0.3 Äquivalente, 1.3 μmol) gegeben. Das Reaktionsgemisch wkd gerührt (ca. 15 min) und erneut mit iV-Methylmorpholin (0.7 Äquivalente, 2.7 μmol) versetzt. Das Reaktionsgemisch erwärmt sich langsam (3-18 h) auf Raumtemperatur, wobei nahezu vollständiger Umsatz der Aminkomponente mittels HPLC (beispielsweise Methode 13) beobachtet wkd. Das Reaktionsgemisch wkd im Hochvakuum eingedampft und chromatographisch aufgereinigt.

Allgemeine Arbeitsvorschrift 4 (Acylierung Edman^{7,0 md2fi})

Zu einer Lösung des am N-Terminus freien Depsipeptids (Amin-Komponente, 1.0 Äquivalente, 88 μmol), der freien Carbonsäure (Carbonsäure-Komponente, 4.0 Äquivalente, 350 μmol) und N-Methylmorpholin (4.0 Äquivalente, 350 μmol) in trockenem DMF (2.0 ml) wkd bei 0°C zunächst HATU (4.1 Äquivalente, 360 μmol) gegeben. Das Reaktionsgemisch wkd gerührt (ca. 15 min) und erneut mit N-Methylmorpholin (5.0 Äquivalente, 438 μmol) versetzt. Das Reaktionsgemisch erwärmt sich langsam (ca. 1 h) auf Raumtemperatur und wkd anschließen bis zu vollständigem Umsatz der Amin-Komponente (HPLC-Kontrolle, beispielsweise Methode 13) nachgerührt (ca. 3 h). Das Reaktionsgemisch wkd im Hochvakuum eingedampft und chromatographisch aufgereinigt.

Allgemeine Arbeitsvorschrift 5 (Abspaltung der tert-Butoxycarbonyl-Schutzgruppe)

Das N-(tert-Butoxycarbonyl)-Peptid (30 μmol) wird als Suspension in wenig Dichlormethan (5 ml) vorgelegt, mit Trifluoressigsäure/Dichlormethan (1/3, 30 ml) versetzt und bei RT gerührt (ca. 40 min) bis die analytische HPLC vollständigen Umsatz anzeigt (beispielsweise Methode 13). Um das Rohprodukt von weiterer Trifluoressigsäure zu befreien wkd das Rohprodukt in Dichlormethan aufgenommen und erneut im Vakuum von Lösungsmittel befreit. Dieser Vorgang wkd mehrfach mit Toluol (zweimal) und mit Dichlormethan (zweimal) wiederholt. Abschließend wird das Rohprodukt lyophilisiert.

Allgemeine Arbeitsvorschrift 6 (Peptidkupplung)

Zu einer Lösung der Amin-Komponente (1.0 Äquivalente, 2 mmol), der freien Carbonsäure (Carbonsäure-Komponente, 1.2 Äquivalente, 2.4 mmol), HOBt (4 Äquivalente, 8 mmol) und EDC (2 Äquivalente, 4 mmol) in trockenem Methylenchlorid (75 ml) wkd bei -10°C langsam N-Methylmorpholin (3 Äquivalente, 6 mmol) gegeben. Das Reaktionsgemisch erwärmt sich langsam (ca. 12 h) auf Raumtemperatur, wobei vollständiger Umsatz der Amin-Komponente mittels HPLC (beispielsweise Methode 13) beobachtet wkd. Das Reaktionsgemisch wkd im Vakuum eingedampft.

Aufarbeitung Methode 1: Für eine wässrige Aufarbeitung wird das Rohprodukt in Ethylacetat (200 ml) aufgenommen. Anschließend wird dreimal mit ges. wässriger Natriumhydrogencarbonat- Lösung, einmal mit 2 N wässriger Citronensäure, erneut einmal mit ges. wässriger Natriumhydrogencarbonat-Lösung und einmal mit ges. Natriumchlorid-Lösung gewaschen. Man trocknet über Natriumsulfat und filtriert. Im Vakuum wkd bis zur Trockne eingedampft und anschließend im Hochvakuum getrocknet.

Aufarbeitung Methode 2: Das Rohprodukt wkd in Acetonitril (2 ml) aufgenommen und dann dkekt chromatographisch aufgereinigt. Allgemeine Arbeitsvorschrift 7 (Hydrolytische Esterspaltung, Verseifung)

Der Carbonsäureester (3 mmol) wird unter Argonschutzgasatmosphäre in THF/Wasser/DMF 200/100/2.5 (20 ml) vorgelegt. Bei 0°C wird unter strikter Temperaturkontrolle gepulvertes Lithiumhydroxid (3.6 mmol, 1.2 Äquivalente) portionsweise in die stark gerührte Lösung gegeben. Wkd nach 2 h mittels analytischer HPLC (Methode 13) kein vollständiger Umsatz beobachtet, so wird erneut festes Lithiumhydroxid zugesetzt (3.3 mmol, 1.1 Äquivalente). Dieser Vorgang wkd bis zu vollständigem Umsatz wiederholt, woraufhin man das Reaktionsgemisch bei 0°C mit 0.1 N wässriger Salzsäure auf pH 3-4 einstellt im Vakuum einengt und anschließend gefriertrocknet. Das Rohprodukt kann nun gelchromatographiert werden (Methode 6; Methanol/0.25% Essigsäure) und/oder mittels präparativer HPLC (Methode 9 oder Methode 14) feingereinigt werden.

Allgemeine Arbeitsvorschrift 8 (Hydrogenolytische Esterspaltung)

Der peptidische Benzylester (1.2 mmol) wkd in Methanol (60 ml) gelöst und unter Argonschutzgasatmosphäre mit lOproz. Palladium-Kohle (100 mg) versetzt. Bei RT und Normaldruck wird so lange hydriert bis die analytische HPLC (Methode 13) vollständigen Umsatz anzeigt. Das Reaktionsgemisch wkd filtriert (z. B. über Kieselgur, Celite^®), im Vakuum eingeengt und am Hochvakuum getrocknet.

Allgemeine Arbeitsvorschrift 9 (Abspaltung der iV-tert-Butoxycarbonyl-Schutzgruppe, Dioxan, Chlorwasserstoff)

Die iV-(t-τt-Butoxycarbonyl)-geschützte Verbindung (1 mmol) wird in Dioxan (2-3 ml) vorgelegt. Bei RT und unter starkem Rühren wird 4 N Salzsäure in Dioxan (30 ml) zugetropft. Man rührt, bis die analytische HPLC (Methode 13) vollständigen Umsatz anzeigt (ca.2 h). Das Reaktionsgemisch wkd bei RT im Vakuum eingedampft. Das Rohprodukt wird in wenig Dichlormethan aufgenommen und erneut im Vakuum von Lösungsmittel befreit. Dieser Vorgang wkd mehrfach mit Toluol (zweimal) und mit Dichlormethan (zweimal) wiederholt. Abschließend wird das Rohprodukt lyophilisiert oder direkt weiter umgesetzt.

Allgemeine Arbeitsvorschrift 10 (Hydrolytische Probenvorbereitung für MALDI-MS)

Das zu öffnende Depsipeptid (z.B. Lysobactin, 0.05 μMol) wkd in einem Microvial zunächst mit einem Borat-Salzsäure Puffer (Fa. Merck) pH 8 (250 μl) versetzt. Man lässt über Nacht stehen, versetzt mit Essigsäure (100 μl) und gefriertrocknet die Probe. Das Rohprodukt wkd ohne weitere Reinigungsschritte mittels MALDI-MS-Sequenzierung untersucht. Allgemeine Arbeitsvorschrift 11 (Peptidkupplung mit Kaliumdihydrogenphosphat-Quench)

Zu einer Lösung des am N-Terminus freien Depsipeptids (Amin-Komponente, 1.0 Äquivalente, 88 μmol), der freien Carbonsäure (Carbonsäure-Komponente, 4.0 Äquivalente, 350 μmol) und N-Methylmorpholin (4.0 Äquivalente, 350 μmol) in trockenem Dimethylformamid (2.0 ml) wkd bei 0°C zunächst HATU (4.1 Äquivalente, 360 μmol) gegeben. Das Reaktionsgemisch wkd gerührt (ca. 15 min) und erneut mit N-Methylmorpholin (5.0 Äquivalente, 438 μmol) versetzt. Das Reaktionsgemisch erwärmt sich langsam (ca. 1 h) auf Raumtemperatur und wkd anschließen bis zu vollständigem Umsatz der Amin-Komponente (HPLC-Kontrolle, Methode 13) nachgerührt (ca. 3 h). Das Reaktionsgemisch wird mit festem Kaliumdihydrogenphosphat (10 Äquivalente, 500 μmol) versetzt und dann im Hochvakuum eingedampft und chromatographisch aufgereinigt.

Allgemeine Arbeitsvorschrift 12 (Festphasensynthese Dipeptide)

1.0 g Tritylharz (entspricht 1 mmol) in Dichlormethan vorlegen, 5 Äquivalente N-Fmoc-geschützte Aminosäure und 10 Äquivalente Ethyldiisopropylamin zugegeben, 20 h bei Raumtemperatur schütteln, absaugen, nachwaschen dreimal mit DicUoirαethan/Methanol/Εthyldiisopropylamin (17/2/1), dreimal Dichlormethan, zweimal Dimethylformamid, dreimal Dichlormethan. Trocknen im Hochvakuum über Kaliumhydroxid.

Entschützen mit Piperidin, Dimethylformamid 1/4 (zweimal 15 min), achtmal mit Dimethylformamid nachwaschen. Kupplung von 5 Äquivalente _V-Boc-geschützten Aminosäure mit 5 Äquivalente TBTU und 10 Äquivalente Ethyldiisopropylamin in Dimethylformamid, Raum- temperatur über Nacht. Waschen dreimal mit Dichlormethan/Methanol/Ethyldiisopropylarnin (17/2/1), dreimal Dichlormethan, dreimal Dimethylformamid, zweimal Dichlormethan, einmal Diethylether.

Abspaltung mit je 2.5 ml Essigsäure/Trifluorethanol/Dichlormethan (1/1/3) 2 h Raumtemperatur, dann absaugen, dreimal mit je 500 μl Spaltlösung nachwaschen, mit 2.5 ml Cyclohexan versetzen, einengen, wiederholt mit 5 ml Cyclohexan versetzt einengen.

Allgemeine Arbeitsvorschrift 13 (Reduktive N-Alkylierung)

Zu einer Mischung von Beispiel IA (15 mg, 10 μmol) und aktiviertem Molsieb (3 Ä, 400 mg) in trockenem Methanol (2 ml) wird unter Argon-Schutzgasatmosphäre wahlweise der entsprechende Aldehyd (0.10 mmol, 10 Äquivalente) oder aber das entsprechende Keton (0.10 mmol, 10 Äquivalente) zugegeben. Das Reaktionsgemisch wkd für 30 min bei Raumtemperatur gerührt und dann mit Natriumcyanoborhydrid (6 mg, 0.1 mmol, 10 Äquivalente) versetzt. Nach weiteren 18 h wkd das Reaktionsgemisch durch Zugabe von 4 N Salzsäure (500 μl) gequencht und dann gefriergetrocknet, wobei man ein festes Rohprodukt erhält, das durch präparative HPLC/UV-Vis (beispielsweise Methode 15) gereinigt wkd. Die Produktfraktionen werden erneut gefriergetrocknet, wobei man feste Schäume als Produkte erhält.

Allgemeine Arbeitsvorschrift 14 (Kupplung zum Dipeptid, EDC)

Eine N-geschützte Aminosäure und der Ester (beispielsweise Methyl- oder Benzylester) einer Aminosäure werden in äquimolarem Verhältnis unter Argon in Dichlormethan (40 ml/mmol der Aminosäure) vorgelegt und auf -8°C gekühlt. 1-Hydroxybenzotriazol (3 Äquivalente), N- Methylmorpholin (3 Äquivalente), EDC (2 Äquivalente) werden in dieser Reihenfolge zugetropft. Anschließend werden weitere 2 Äquivalente N-Methylmorpholin zugesetzt. Man lässt auf Raumtemperatur erwärmen und über 12 h rühren. Das Dichlormethan wkd am Rotationsverdampfer abdestilliert, der Rückstand wkd in Ethylacetat aufgenommen und mit gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung gewaschen. Die wässrige Phase wkd noch einmal mit Ethylacetat gewaschen, die vereinigten organischen Extrakte werden mit wässriger 5%iger Citronensäure und anschließend abermals mit gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung ge- waschen. Anschließend wird die organische Phase über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt.

Allgemeine Arbeitsvorschrift 15

Eine 1 M Lösung von N-Methylmorpholin in Dime ylformamid wkd vorbereitet. Eine N-geschützte Aminosäure und der Ester (Methyl- oder Benzyl-) einer Aminosäure werden in äquimolarem Verhältnis unter Argon in Dimethylformamid (14 ml/mmol) gelöst und auf 0°C gekühlt. Dann wird zunächst 1 Äquivalent der N-Methylmorpholinlösung, dann TCTU (1.5 Äquivalente) und nach 15 min N-Methylmorpholinlösung (1 Äquivalent) zugegeben. Dann wkd über Nacht bei Raumtemperatur weitergerührt. Der Ansatz wkd dkekt auf auf eine Reversed- Phase Flash-Kartusche (Biotage 40M ₈) aufgegeben und mit Wasser-Acetonitril-Gradienten (10- 90% Acetonitril in 15 min, dann 5 min Haltezeit) gereinigt. Das Produkt wkd anschließend chromatographiert (Methode 31).

Allgemeine Arbeitsvorschrift 16

Eine 1 M Lösung von N-Methylmorpholin in Dimethylformamid wkd vorbereitet.

Eine N-geschützte Aminosäure und der Ester (beispielsweise Methyl- oder Benzyl-) einer Amino- säure werden in äquimolarem Verhältnis unter Argon in Dimethylformamid (14 ml/mmol) gelöst und auf 0°C gekühlt. Dann wkd zunächst N-Methylmorpholin-Lösung (1 Äquivalent), dann HATU

(1.5 Äquivalente) und nach 15 min N-Methylmorpholin-Lösung (1 Äquivalent) zugegeben. Dann wkd über Nacht bei Raumtemperatur weitergerührt. Der Ansatz wkd dkekt auf auf eine Reversed- Phase Flash-Kartusche (Biotage 40M Cι₈) aufgegeben und mit Wasser-Acetonitril-Gradienten (10- 90% Acetonitril in 15 min, dann 5 min Haltezeit) gereinigt.

Allgemeine Arbeitsvorschrift 17

Der Ester wkd in Tetrahydrofuran/Wasser 2/1 (15 ml/mmol) gelöst und die Lösung auf 0°C gekühlt. Festes Lithiumhydroxid-Monohydrat (2 Äquivalente) wkd zugegeben. Das Reaktionsgemisch wird etwa 1 h bei 0°C gerührt. Wenn die Umsetzung vollständig ist (Reaktionskontrolle mit HPLC, Methode 36), wkd mit Eisessig angesäuert. Das Tetrahydrofuran wkd im Vakuum abdestilliert, der Rückstand wkd mit Ethylacetat extrahiert und die vereinigten organischen Phasen werden über Natriumsulfat getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wkd durch Reversed-Phase-Flashchromatographie (Biotage ₈ 40M, Wasser + 0.05% Trifluoressigsäure -Acetonitril + 0.05% Trifluoressigsäure-Gradient 10-90% in 15 min, 10 min Haltezeit) gereinigt. Produkthaltige Fraktionen werden am Rotationsverdampfer eingeengt oder lyophilisiert.

Allgemeine Arbeitsvorschrift 18

Der Benzylester wkd in Methanol (36 ml/mmol) gelöst. Dann gibt man unter Argon 10%iges Palladium auf Aktivkohle (228 mg/ mol) zu und hydriert unter hydrostatischem Druck für 1 h. Es wird vom Katalysator abfiltriert, das Filtrat eingeengt und durch Flashchromatographie (Kieselgel, Cyclohexan/Ethylacetat 3/1 mit 0.05% Essigsäure) gereinigt.

Allgemeine Arbeitsvorschrift 19 (Methode HATU)

Eine 1 M Lösung von N-Methylmorpholin in Dimethylformamid wkd vorbereitet. Beispiel HA (1 Äquivalent) und geschützte Aminosäure (4 Äquivalente) werden in Dimethylformamid (10 ml/mmol Beispiel HA) vorgelegt und auf 0°C gekühlt. Dann werden zunächst 2 Äquivalente der N-Methylmorpholinlösung, dann HATU (4.1 Äquivalente), dann nach 15 min wieder 2 Äquivalente der N-Methylmorpholinlösung und nach 15 min die restlichen 5 Äquivalente der N-Methylmorpholinlösung, zugegeben. Dann wkd über Nacht bei Raumtemperatur weitergerührt. Der Ansatz wkd anschließend an Sephadex LH-20 chromatographiert (Methode 34) getrennt. Produkthaltige Fraktionen werden vereinigt und am Rotationsverdampfer bei einer Badtemperatur von maximal 30°C eingeengt. Allgemeine Arbeitsvorschrift 20

Die N-(tert-Butoxycarbonyl)-geschützte Verbindung wird in Dichlormethan suspendiert (ca 1.6 ml 10 mg Edukt). Eine Lösung von 30%iger Trifluoressigsäure in Dichlormethan wkd zugegeben (ca 0.32 ml/10 mg Edukt) und die Mischung wird 30 min bei Raumtemperatur gerührt. Dann wkd das Lösungsmittel im Vakuum abdestilliert, wobei die Badtemperatur 30°C nicht übersteigen soll. Der Rückstand wkd chromatographisch gereinigt (Methode 33).

Allgemeine Arbeitsvorschrift 21

Die N-(tert-Butoxycarbonyl)-geschützte Verbindung wkd in 30%iger Trifluoressigsäure in Dichlormethan (ca 1 ml/10 mg Edukt) gelöst und 30 min bei Raumtemperatur gerührt. Dann wkd das Lösungsmittel im Vakuum abdestilliert, wobei die Badtemperatur 30°C nicht übersteigen soll. Der Rückstand wkd chromatographisch gereinigt (Methode 33).

Allgemeine Arbeitsvorschrift 22

Das Edukt wkd in Eisessig/Wasser (1/2) aufgenommen, mit 10%igem Palladium auf Aktivkohle (ca. 30 Gewichtsprozent vom Edukt) versetzt und 1 h bei Normaldruck und Raumtemperatur hyάnert. Wenn die Reaktionskontrolle mit analytischer HPLC vollständige Umsetzung anzeigt, filtriert man vom Katalysator ab und destilliert das Lösungsmittel im Vakuum ab, wobei die Badtemperatur 30°C nicht übersteigen soll. Der Rückstand wkd chromatographisch gereinigt (Methode 33).

Allgemeine Arbeitsvorschrift 23

Herstellung der Pufferlösung: eine 0.1 M Natriumacetat-Lösung wkd durch Zugabe von Eisessig auf pH 5 gebracht.

Das Edukt wird in einer Mischung aus Puffer/Methanol (2/3) gelöst, mit 10%igem Palladium auf Aktivkohle (ca 20 Gewichtsprozent vom Edukt) versetzt und bis zur vollständigen Umsetzung (ca 1 h, Kontrolle mit analytischer HPLC) bei Normaldruck und Raumtemperatur hydriert. Dann filtriert man vom Katalysator ab und destilliert das Lösungsmittel im Vakuum ab, wobei die Badtemperatur 30°C nicht übersteigen soll. Der Rückstand wkd chromatographisch gereinigt (Methode 33). Ausgangsverbindungen

Beispiel IA

D-Leucyl-N⁷-{(3S,6S,12S,15S,18_?,21S,24S,27S,28R)-6-[(lS)-2-amino-l-hydroxy-2-oxoethyl]-18- (3-{[arιιino(in_ino)methyl]an_ino}propyl)-12-[(lS)-l-hydroxyemyl]-3-(hydroxymethyl)-24-[(i/.)-l- hydroxy-2-methylpropyl]-21-isobutyl-15-[(lS)-l-methylρropyl]-2,5,8,ll,14,17,20,23,26-nonaoxo- 28-phenyl-l-oxa4 ,10,13,16,19,22,25-octaazacyclooctacosan-27-yl}-L-leucinamid-bistrifluor- acetat

Beispiel 2A

D-Leucyl-N⁷-{(3S,6S,12S,15S,18/.,21S,24S,27S,28i?)-6-[(lS)-2-amino-l-hydroxy-2-oxoethyl]-18- (3-{[an_ino(imino)memyl]amino}propyl)-12-[(lS)-l-hydroxyethyl]-3-(hydroxymethyl)-24-[(lR)-l- hydroxy-2-methylpropyl]-21-isobutyl-15-isopropyl-2,5,8,ll,14,17,20,23,26-nonaoxo-28-phenyl-l- oxa4,7, 10, 13, 16, 19,22,25-octaazacyclooctacosan-27-yl } -L-leucinamid-bistrifluoracetat

Fermentation von Beispiel IA und Beispiel 2A

Kultur Medium:

YM: Hefe-Malz Agar: D-Glucose (4 g/1), Hefe Extrakt (4 g/1), Malz Extrakt (10 g/1), 1 Liter Lewatit Wasser. Vor dem Sterilisieren (20 Minuten bei 121°C) wkd der pH auf 7.2 eingestellt.

HPM: Mannit (5.4 g 1), Hefe Extrakt (5 g/1), Fleischpepton (3 g/1).

Arbeitskonserve: Der lyophilisierte Stamm (ATCC 53042) wkd in 50 ml YM Medium angezogen.

Kolbenfermentation: 150 ml YM Medium oder. 100 ml HPM Medium in einem 1 1 Erlenmeyerkolben werden mit 2 ml der Arbeitskonserve beimpft und für 3048 Stunden bei 28°C auf einem Schüttler bei 240 Upm wachsen gelassen.

30 1 Fermentation: 300 ml der Kolbenfermentation (HPM Medium) werden zum Animpfen einer sterilen 30 1 Nährmedienlösung verwandt (1 ml Antifoam SAG 5693/1). Diese Kultur wkd für 21 Stunden bei 28°C, 300 Üpm und einer Belüftung mit steriler Luft von 0.3 vvm wachsen gelassen. Der pH wkd mit 1 M Salzsäure auf pH = 7.2 konstant gehalten. Insgesamt werden während der Kultivierungszeit 880 ml 1 M Salzsäure zugeführt.

Hauptkultur (200 1): 15 x 150 ml YM Medium in 1 1 Erlenmeyerkolben werden mit 2 ml der Arbeitskonserve beimpft und bei 28°C für 48 Stunden und 240 Upm auf dem Schüttler wachsen gelassen. 2250 ml dieser Kultur werden zum Beimpfen einer sterilen 200 1 Nährmedienlösung (YM) verwandt (1 ml Antifoam SAG 5693/1) und für 18.5 Stunden bei 28°C, 150 Upm und einer Belüftung mit steriler Luft von 0.3 vvm wachsen gelassen.

Zur Kontrolle des Fermentationsverlaufs werden stündlich Proben (50 ml) entnommen. 2 ml dieser Kulturbrühe werden mit 1 ml Methanol (0.5% Trifluoressigsäure) versetzt und über einen 0.45 μm Filter filtriert. 30 μl dieser Suspension werden mittels HPLC analysiert (Methode 1 und Methode 2).

Nach 18.5 Stunden wkd die Kulturbrühe der Hauptkultur bei 17000 Upm in Überstand und Sediment getrennt.

Isolierung von Beispiel IA und Beispiel 2A

Der Überstand (183 1) wkd mit konzentrierter Trifluoressigsäure bzw. Natronlauge auf pH 6.5-7 eingestellt und auf eine Lewapolsäule (OC 1064, 60 1 Inhalt) aufgetragen. Anschließend wkd mit reinem Wasser, Wasser/Methanol 1:1 und anschließend mit reinem Methanol (mit 0.1% Trifluoressigsäure) eluiert. Diese organische Phase wkd im Vakuum bis zu einem verbleibenden wässrigen Rest von 11.5 1 eingeengt.

Die verbleibende wässrige Phase wkd an Kieselgel Cι₈ gebunden und aufgetrennt (MPLC, Biotage Flash 75, 75 x 30 cm, KP-C18-WP, 15-20 μm, Fluss: 30 ml; Eluent: Acetonitril/ Wasser mit 0.1% Trifluoressigsäure; Gradient: 10%, 15% and 40% Acetonitril). Die 40% Acetonitril Phase, die die Hauptmenge von Beispiel IA und Beispiel 2A enthält, wkd im Vakuum eingeengt und anschließend lyophilisiert (-13 g). Dieses Feststoffgemisch wird in 1.2 g Portionen zunächst an einer präparativen HPLC (Methode 3), anschließend durch Gelfiltration an Sephadex LH-20 (5 x 70 cm, Acetonitril/Wasser 1:1, jeweils mit 0.05% Trifluoressigsäure) und einer weiteren präparativen HPLC (Methode 4) getrennt.

Dieser Prozess liefert 2250 mg Beispiel IA und 33 mg Beispiel 2A.

Das Sediment wird in 4 1 Aceton/Wasser 4:1 aufgenommen, mit 2 kg Celite versetzt, mit Trifluoressigsäure auf pH = 6 eingestellt, ausgerührt und zentrifugiert. Das Lösungsmittel wkd im Vakuum eingeengt und der Rückstand gefriergetrocknet. Das erhaltene Lyophilisat (89.9 g) wkd in Methanol aufgenommen, abfiltriert, eingeengt und an Kieslegel (Methode 5) in Beispiel IA und Beispiel 2A aufgetrennt. Beispiel IA wkd danach per Gelfiltration (Sephadex LH-20, 5 x 68 cm, Wasser/Acetonitril 9:1 (mit 0.05% Trifluoressigsäure), Fluss: 2.7 ml/min, Fraktionsgröße 13.5 ml) zur Reinsubstanz aufgereinigt.

Dieser Prozess liefert 447 mg Beispiel 1 A.

Beispiel IA:

HPLC (Methode 1): R_t = 6.19 min

MS (ESIpos): m/z = 1277 (M+H)⁺

H NMR (500.13 MHz, -t_ö-DMSO): δ = 0.75 (d, 3H), 0.78 (d, 6H), 0.80 (t, 3H), 0.82 (d, 3H), 0.90 (d, 3H), 0.91 (d, 3H), 0.92 (d, 3H), 0.95 (d, 3H), 0.96 (d, 3H), L05 (m, IH), 1.19 (d, 3H), 1.25 (m, 2H), 1.50 (m, 4H), 1.51 (m, 2H), 1.55 (m, IH), 1.61 (m, IH), 1.65 (m, IH), 1.84 (m, IH), 1.85 (m, IH), 1.86 (m, IH) , 1.89 (m, IH), 1.95 (m, IH), 2.75 (m, 2H), 3.40 (m, IH), 3.52 (m, 2H), 3.53 (dd, IH), 3.64 (m, 2H), 3.66 (m, IH), 3.68 (dd, IH), 3.73 (m, 2H), 4.00 (dd, IH), 4.02 (br., IH), 4.13 (br., IH), 4.32 (dd, IH), 4.39 (t, IH), 4.55 (m, IH), 4.75 (dd, IH), 5.19 (t, IH), 5.29 (d, IH), 5.30 (br., IH), 5.58 (m, 2H), 6.68 (m, 3H), 6.89 (d, IH), 6.93 (m, 3H), 6.94 (br., IH), 6.98 (d, IH), 7.12 (br., IH), 7.20 (br., 2H), 7.23 (m, 2H), 7.42 (m, 2H), 7.54 (d, IH), 7.58 (d, IH), 8.32 (br., IH), 9.18 (br., IH), 9.20 (m, 2H), 9.50 (br., IH).

¹³C-NMR (125.77 MHz, d₆-OMSO): δ = 10.3, 15.3, 19.0, 19.2, 19.6, 20.0, 20.9, 22.0, 22.4, 23.0, 23.2, 24.3, 24.4, 25.0, 25.4, 26.0, 27.8, 30.9, 35.4, 39.5, 40.8, 40.9, 41.6, 44.1, 51.5, 52.7, 55.9, 56.2, 56.4, 57.9, 58.8, 60.2, 61.1, 62.6, 70.1, 71.6, 71.7, 75.5, 128.1, 128.6, 136.7, 156.8, 168.2, 170.1, 170.4, 171.2, 171.5, 171.9, 172.2, 172.4, 173.7.

Die Zuordnung der Signale erfolgte nach der in der Literatur beschriebenen Zuordnung (T. Kato, H. Hinoo, Y. Terui, J. Antibiot., 1988, 61, 719-725). *H NMR (500 MHz, d₆-OMSO, 302 K) und ¹³C-NMR (d₆-DMSO) Daten:

Beispiel 2A:

HPLC (Methode 1): R_t = 6.01 min

MS (ESIpos): m/z = 1263 (M+H)⁺

Η NMR (500.13 MHz, - -DMSO): δ = 0.75 (d, 3H), 0.78 (d, 9H), 0.79 (d, 3H), 0.90 (d, 3H), 0.92 (d, 3H), 0.96 (d, 3H), 0.97 (d, 3H), 0.98 (d, 3H), 1.16 (d, 3H), 1.25 (m, IH), 1.50 (m, IH), 1.55 (m, 4H), 1.65 (m, IH), 1.33 (m, IH), 1.62 (m, 2H), 1.84 (m, IH), 1.85 (m, 2H), 1.90 (m, IH), 1.95 (m, IH), 2.78 (m, 2H), 3.43 (m, IH), 3.52 (m, 2H), 3.63 (m, IH), 3.65 (m, 2H), 3.67 (dd, IH), 3.70 (m, IH), 3.71 (br., IH), 4.01 (dd, IH), 4.04 (br., 2H), 4.29 (t, IH), 4.30 (dd, IH), 4.54 (m, IH), 4.73 (dd, IH), 5.19 (t, IH), 5.23 (d, IH), 5.31 (br., IH), 5.57 (br., IH), 5.63 (d, IH), 6.68 (m, 3H), 6.90 (m, 3H), 6.98 (d, IH), 7.01 (br., IH), 7.20 (br., 2H), 7.21 (br., IH), 7.23 (m, 3H), 7.24 (br., IH), 7.42 (m, 2H), 7.50 (br., IH), 7.57 (d, IH), 8.16 (br., IH), 9.18 (br., IH), 9.19 (d, IH), 9.20 (br., IH), 9.57 (br., IH).

¹³C-NMR (125.77 MHz, -k-DMSO): δ = 19.0, 19.2, 19.3, 19.4, 19.6, 20.9, 21.9, 22.0, 22.4, 23.0, 23.2, 23.7, 24.3, 24.5, 26.8, 27.8, 30.4, 35.4, 31.5, 39.0, 40.3, 40.9, 41.8, 44.3, 52.2, 52.4, 55.2, 55.4, 55.9, 56.5, 57.9, 60.0, 60.8, 61.1, 62.6, 71.1, 71.9, 74.8, 75.1, 127.9, 129.1, 136.1, 156.2, 167.4, 168.1, 171.0, 172.0, 172.2, 172.4, 172.5, 172.9, 173.3.

Die Zuordnung der Signale erfolgte nach der in der Literatur beschriebenen Zuordnung (T. Kato, H. Hinoo, Y. Terui, J. Antibiot., 1988, 61, 719-725). Η NMR (500 MHz, -t₆-DMSO, 302 K) und ¹³C-NMR (d₆-OMSO) Daten:

Bestimmung der Stereochemie von Beispiel IA

Zur Identifizierung der relativen Stereochemie von Beispiel IA, wkd das Depsipeptid mit Salzsäure hydrolysiert. Dazu werden 100 μg Beispiel IA mit 200 μl 6M Salzsδure versetzt, das Probenröhrchen unter Vakuum zugeschmolzen und bei 166°C für 1 Stunde erhitzt. Nach der Hydrolyse wird die Probe im Hochvakuum eingeengt. Der verbliebene Rückstand wkd mit 400 μl Natriumeitratpuffer auf pH = 2.2 eingestellt. Interner Standard: Homoarginin.

Nach der Derivatisierung wird das Hydrolysat an einer Permabond-L-Chkasil-Val- und FS- LipodexE-Säule analysiert. Die Retentionszeit der einzelnen Aminosäurederivate aus Beispiel IA wird mit D- bzw. L-Aminosäuren (nach Derivatisierung) verglichen. Alle natürlichen Aminosäuren haben L-Konfiguration.

Anhand der großen Übereinstimmung von Beispiel IA mit den Literaturdaten, wkd davon ausgegangen, dass Beispiel IA in seiner Stereochemie der in der Literatur beschriebenen Stereochemie entspricht (T. Kato, H. Hinoo, Y. Terui, J. Antibiot., 1988, 61 (6), 719-725).

Die bei der Fermentation entstandene Verbindung IA wkd in weiteren Reaktionen eingesetzt (siehe Beispiel 10A). Sollte sich die Zuordnung der Stereochemie in Verbindung IA tatsächlich anders sein, so ist auch die Stereochemie der Folgeprodukte dementsprechend anders.

Darstellung der Dipeptide

Beispiel 3A

Benzyl-3-cyclopropyl-L-alaninat-hydrochlorid

Benzyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-3-cyclopropyl-L-alaninat (260 mg, 0.81 mmol) (Neil W. Boaz, Sheryl D. Debenham, Elaine B. Mackenzie, Shannon E. Large, Org. Lett., 2002, 14, 2421-2424) wird nach der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 9 umgesetzt. Das Produkt erhält man in quantitativer Ausbeute.

HPLC/UV-Vis (Methode 13): R_t = 5.13 min, λ_max (qualitativ) = 220 nm (s), 250-275 (w). LC-MS (Methode 12): R_t = 3.93 min; MS (ESIpos.): m/z (%) = 220 (100) [M + H]⁺.

Beispiel 4A

Benzyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-D-leucyl-3-cyclopropyl-L-alaninat

Nach der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 6 werden N-(tert-Butoxycarbonyl)-D-Leucin (540 mg, 2.32 mmol) und Benzyl-3-cycloρropyl-L-alaninat-hydrochlorid (Beispiel 3A, 490 mg, 1.93 mmol) umgesetzt. Das Rohprodukt wkd mittels präparativer HPLC (Methode 16) aufgereinigt, wobei man das Produkt in quantitativer Ausbeute erhält.

[α]²⁰ _Νa = + 30° (c = 0.1 in Methylenchlorid). HPLC/UV-Vis (Methode 13): R_t = 9.00 min, λ_max (qualitativ) = 220 nm (s), 250-275 (w). LC-MS (Methode 17): R_t = 3.40 min;

MS (ESIpos.): m/z (%) = 333 (100) [M - Boc + H]⁺, 433 (15) [M + H]⁺. Beispiel 5A

N-(tert-Butoxycarbonyl)-D-leucyl-3-cyclopropyl-L-alanin

Benzyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-D-leucyl-3-cyclopropyl-L-alaninat (Beispiel 4A, 500 mg, 1.16 mmol) wird nach der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 8 umgesetzt. Man erhält 366 mg (92% d. Th.) Produkt.

[α]²⁰Na = + 15° (c = 0.1 in Methylenchlorid). HPLC/UV-Vis (Methode 13): R_t = 7.16 min. LC-MS (Methode 12): R_t = 5.28 min; MS (ESIpos.): m/z (%) = 343 (30) [M + H]⁺.

Beispiel 6A

Methyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-D-leucyl-L-norvalinat

Nach der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 6 werden N-(t--rt-Butoxycarbonyl)-D-Leucin (1000 mg, 4.32 mmol) und Methyl-L-norvalinat-hydrochlorid (1090 mg, 6.49 mmol) umgesetzt. Das Rohprodukt wkd nach der Aufarbeitung Methode 1 gereinigt. Man erhält das Produkt in quantitativer Ausbeute. HR-TOF-MS (Methode 21): C₁₇H₃₃N₂0₅ ber. 345.2389, gef. 345.2406;

- C₁₇H₃₂N₂0₅Na ber. 367.2209, gef. 367.2207. LC-MS (Methode 11): R_t = 3.62 min; MS (ESIpos.): m/z (%) = 245 (30) [M - Boc + H]⁺; MS (ESIneg.): m/z (%) = 389 [M + HC0₂H - Hf, 343 (20) [M - Hf.

Beispiel 7A

N-(tert-Butoxycarbonyl)-D-leucyl-L-norvalin

Methyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-D-leucyl-L-norvalinat (Beispiel 6A, 1000 mg, 2.9 mmol) wkd nach der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 7 umgesetzt. Man erhält 808 mg (84% d. Th.) Produkt.

[α = + 24° (c = 0.1 in Methanol). HPLC/UV-Vis (Methode 13): R_t = 6.97 min. LC-MS (Methode 12): R_t = 5.33 min; MS (ESIpos.): m/z (%) = 331 (20) [M + H]⁺; MS (ESIneg.): m/z (%) = 329 (20) [M - Hf.

HR-TOF-MS (Methode 21): C₁₆H₃₁N₂0₅ ber. 331.2233, gef. 331.221.

Beispiel 8A

BenzyI-N-(tert-butoxycarbonyl)-D-leucyl-3-t-!rt-butyl-L-alaninat

Nach der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 6 werden N-(teτt-Butoxycarbonyl)-D-Leucin (230 mg, 1.0 mmol) und Benzyl-3-t-^,rt-butyl-L-alaninat-hydrochlorid (300 mg, 1.10 mmol) (John X. He, Wayne L. Cody, Annette M. Doherty, J. Org. Chem., 1995, 60, 8262-8266) umgesetzt. Das Rohprodukt wkd mittels präparativer HPLC (Methode 16) aufgereinigt (Aufarbeitung Methode 2), wobei man 362 mg (80% d. Th.) Produkt erhält.

[α_²⁰ _Νa = + 19° (c = 0.1 in Methylenchlorid). HPLC/UV-Vis (Methode 18): R_t = 5.3 min. LC-MS (Methode 22): R_t = 2.83 min; MS (ESIpos.): m/z (%) = 349 (100) [M - Boc + H]⁺, 449 (85) [M + H]⁺.

Beispiel 9A

N-(tert-Butoxycarbonyl)-D-leucyl-3-tert-butyl-L-alanin

Benzyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-D-leucyl-3-tert-butyl-L-alaninat (Beispiel 8A, 308 mg, 0.69 mmol) wkd nach der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 8 umgesetzt. Man erhält 245 mg (99% d. Th.) Produkt.

[α]²⁰ _Na = - 2° (c = 0.1 in Methylenchlorid) HPLC/UV-Vis (Methode 13): R_t = 7.70 min. HR-TOF-MS (Methode 21): C₁₈H₃₅N₂0₅ ber. 359.2546, gef. 359.2535.

Beispiel 10A

N-(AnilinocarbonotMoyl)-D-leucyl-N¹-{(3S,6S,12S,15S,18R,21S,24S,27S,28R)-6-[(lS)-2-amino-l- hydroxy-2-oxoe yl]-18-(3-{[ann^o(iι no)me yl]amino}propyl)-12-[(lS)-l-hydroxyethyl]-3- (hydroxymethyl)-24-[(lR)-l-hydroxy-2-methylpropyl]-21-isobutyl-15-[(lS)-l-methylpropyl]- 2,5,8,11, 14,17,20,23,26-nonaoxo-28-phenyl-l-oxa4,7,10,13,16,19,22,25-octaazacyclooctacosan- 27-yl } -L-leucinamid-monotrifluoracetat

{ N-(Anilinocarbonothioyl)lysobactin-monotrifluoracetat }

Gemäß der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 1 wkd Lysobactin-bistrifluoracetat (500 mg, 0.33 mmol) (Beispiel IA) umgesetzt. Man erhält 600 mg (quant.) Produkt, das ungereinigt weiter umgesetzt werden kann.

Zur weiteren Aufreinigung kann das Rohprodukt gelchromatographiert (Methode 6; Methanol/0.1% Essigsäure) werden. Die Produkt-haltigen Fraktionen werden im Vakuum bei Raumtemperatur eingeengt und dann lyophilisiert. Man erhält das Produkt in 80% Ausbeute.

HPLC/UV-Vis (Methode 13): R_t = 6.84 min, _max (qualitativ) = 220 nm (s), 248 (m), 269 (m). LC-MS (Methode 11): R_t = 2.64 min; MS (ESIpos.): m/z (%) = 706.5 (50) [M + 2H]²⁺, 1412 (20) [M + H]⁺; LC-MS (Methode 12) : R_t = 4.95 min; MS (ESIpos.): m/z (%) = 1412 (100) [M + H]⁺.

Beispiel 11A

N¹-{(3S,65,12S,15S,18_-,21S,24S,27S,28R)-6-[(lS)-2-Amino-l-hydroxy-2-oxoethyl]-18-(3- {[amino(imino)methyl]amino}proρyl)-12-[(lS)-l-hydroxyethyl]-3-(hydroxy-methyl)-24-[(l_?)-l- hydroxy-2-methylρropyl]-21-isobutyl-15-[(lS)-l-methylρropyl]-2,5,8,ll,14,17,20,23,26-nonaoxo- 28-phenyl- 1 -oxa-4,7, 10, 13 , 16, 19,22,25-oc taazacyclooctacosan-27-yl } -L-leucinamid-bistrifluor- acetat

{ Des-D-leucylly sobactin-bistrifluor acetat }

Thiohamstoff (Beispiel 10A) (300 mg, 0.2 mmol) wkd gemäß der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 2 umgesetzt. Das Rohprodukt wkd gelchromatographiert (Methode 6; Methanol/0.25% Essigsäure) und anschließend mittels präparativer HPLC (Methode 8) feingereinigt. Man erhält 147 mg (65% d. Th.) Produkt. HPLC/UVNis (Methode 13): R_t = 4.96 min, λ_max (qualitativ) = 220 nm (s), 255-270 (w). LC-MS (Methode 12): R_t = 3.84 min;

MS (ESIpos.): m/z (%) = 582.4 (100) [M + 2H]²⁺, 1164 (20) [M + H]⁺. FT-ICR-HR-MS (Methode 23):

C₅₂H₈₈Ν₁₄0₁₆ [M + 2H]²⁺ ber. 582.32459, gef. 582.32460;

C₅₂H₈₇N₁₄Na0₁₆ [M + H + Na]²⁺ ber. 593.31556, gef. 593.31564.

Zur Aminosäure-Sequenzbestimmung wkd eine analytische Probe des Produkts nach der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 10 hydrolysiert.

MALDI-MS (Methode 20): m/z (%) = 1181.7 (100) [M + H]⁺.

Alternatives Darstellungsverfahren in größerem Maßstab:

Beispiel 2A (6.47 g, 4.30 mmol) wird unter Argonatmosphäre in Pyridin (90 ml) gelöst. Dann wird Phenylisothiocyanat (1.16 g, 8.60 mmol, 2 Äquivalente) zugegeben und die Reaktionsmischung bei 37°C für 1 h gerührt. Anschließend wkd das Lösungsmittel am Rotationsverdampfer abdestilliert und der Rückstand über Nacht am Olpumpenvakuum getrocknet. Man erhält das Zwischenprodukt Beispiel 10A in einer Rohausbeute von 6.60 g. Das Zwischenprodukt wird ohne Reinigung weiter umgesetzt. Dazu wird Beispiel 10A (6.60 g) unter Argonatmosphäre in Trifluoressigsäure (107 ml) gelöst und 30 min bei Raumtemperatur gerührt. Dann wkd die Lösung am Rotationsverdampfer unter Vakuum aufkonzentriert, kurz am Olpumpenvakuum getrocknet, in Methyl-tert-butylether (250 ml) aufgenommen und so lange heftig gerührt, bis ein pulvriger amorpher Feststoff entstanden ist. Dieser wkd mit Vakuum abfiltriert und mit Methyl-tert-butylether (200 ml) gewaschen, dann wkd noch mit Dichlormethan (zweimal 100 ml) nachgewaschen. Der Feststoff wird in einen Kolben überfuhrt und am Olpumpenvakuum getrocknet. Man erhält Beispiel 11A in einer Rohausbeute von 6.0 g (quant.). Das Produkt kann ohne weitere Reinigung umgesetzt werden. Beispiel 12A

N²-(Anilinocarbonothioyl)-N¹-{(3S,6S,12S,15S,18R,21S,24S,27S,28R)-6-[(lS)-2-arnino-l-hydroxy- 2-oxoethyl]-18-(3-{[amino(imino)methyl]amino}propyl)-12-[(lS)-l-hydroxyethyl]-3- (hydroxymethyl)-24-[(lR)-l-hydroxy-2-methylpropyl]-21-isobutyl-15-[(lS)-l-methylpropyl]- 2,5,8,11, 14,17,20,23,26-nonaoxo-28-phenyl-l-oxa-4,7,10,13,16,19,22,25-octaazacyclooctacosan- 27-yl } -L-leucinamid-monotrifluoracetat

Gemäß der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 1 wkd Des-D-leucyllysobactin-bistrifluoracetat (Beispiel HA, 255 mg, 0.18 mmol) umgesetzt. Man erhält 322 mg (quant.) Produkt, das ungereinigt weiter umgesetzt werden kann.

Zur weiteren Aufreinigung kann das Rohprodukt gelchromatographiert (Methode 6; Methanol/0.1% Essigsäure) werden. Die Produkt-haltigen Fraktionen werden im Vakuum bei Raumtemperatur eingeengt und dann lyophilisiert.

HPLC/UVNis (Methode 13): R_t = 6.56 min, λ--,- (qualitativ) = 220 nm (s), 245 (m), 268 (m). LC-MS (Methode 12): R_t = 4.85 min; MS (ESIpos.): m/z (%) = 1299 (100) [M + H]⁺. Beispiel 13A

(2S)-2-{(3S,6S,12S,15S,18R,21S,24S,27S,28R)-27-Armno-18-(3-{[amino(inιino)methyl]aιn_no}- propyl)-12-[(lS)-l-hydroxyethyl]-3-(hydroxymethyl)-24-[(lR)-l-hydroxy-2-methylpropyl]-21-iso- butyl-15-[(lS)-l-methylpropyl]-2,5,8,ll,14,17,20,23,26-nonaoxo-28-phenyl-l-oxa- 4,7, 10, 13, 16, 19,22,25-octaazacyclooctacosan-6-yl } -2-hydroxyethanamid-bistrifluoracetat

{ Des( 1 -D-leucyl-2-L-leucyl)lysobactin-bistrifluoracetat }

Der Thiohamstoff (Beispiel 12A, 66 mg, 34 μmol) wird gemäß der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 2 umgesetzt. Das Rohprodukt kann durch zügige Gelchromatographie (Methode 6; Methanol/0.25% Essigsäure) vorgereinigt werden. Präparative HPLC (Methode 8 oder Methode 9 gefolgt von anschließendem Umsalzen des Chromatographieprodukts durch Zusatz von TFA (100 μmol)) liefert 45 mg (75% d. Th.) Produkt.

HPLC/UV-Vis (Methode 13): R_t = 4.71 min, λ_max (qualitativ) = 220 nm (s), 255-270 (w). LC-MS (Methode 11): R_t = 1.65 min;

MS (ESIpos.): m/z (%) = 526 (100) [M + 2H]²⁺, 1051 (15) [M + H]⁺.

Alternatives Darstellungsverfahren in größerem Maßstab:

Beispielverbindung HA (6.47 g, 4.30 mmol) wkd unter Argonatmosphäre in Pyridin (92 ml) gelöst. Dann wird Phenylisothiocyanat (8.75 g, 64.68 mmol, 15 Äquivalente) zugegeben und die Reaktionsmischung bei 37°C für 1 Stunde gerührt. Anschließend wkd das Lösungsmittel am Rotationsverdampfer abdestilliert und der Rückstand über Nacht am Olpumpenvakuum getrocknet. Man erhält Beispiel 12A in einer Rohausbeute von 6.0 g. Das Zwischenprodukt wird ohne Reinigung weiter umgesetzt. Dazu wkd das rohe Beispiel 12A unter Argonatmosphäre in Trifluoressigsäure (82 ml) gelöst und 30 min bei Raumtemperatur gerührt. Dann wkd die Lösung am Rotationsverdampfer unter Vakuum aufkonzentriert, kurz am Olpumpenvakuum getrocknet, in Methyl-tert-butylefher (250 ml) aufgenommen und so lange heftig gerührt, bis ein pulvriger amorpher Feststoff entstanden ist. Dieser wkd mit Vakuum abfiltriert und mit weiterem Methyl- tert-butylether (200 ml) gewaschen, dann wkd noch mit zwei Portionen je 100 ml Dichlormethan nachgewaschen. Der Feststoff wkd in einen Kolben überführt und am Olpumpenvakuum getrocknet. Man erhält die Titelverbindung in einer Rohausbeute von 5.4 g (quant.). Das Produkt wkd durch präparative HPLC weiter aufgereinigt (Methode 31). Man erhält 1.79 g der Titelverbindung (32% d. Th.).

Beispiel 14A

N-(tert-Butoxycarbonyl)-D-leucyl-N¹-{(3S,6S,12S,15S,18R,21S,24S,27S,28_^)-6-[(lS)-2-amino-l- hydroxy-2-oxoethyl]-18-(3-{[arnino(imino)methyl]amino}propyl)-12-[(lS)-l-hydroxyethyl]-3- (hydroxymethyl)-24-[(lR)-l-hydroxy-2-methylpropyl]-21-isobutyl-15-[(lS)-l-methylpropyl]- 2,5,8, 11, 14, 17,20,23,26-nonaoxo-28-phenyl-l-oxa4,7, 10, 13, 16,19,22,25-octaazacyclooctacosan- 27-yl } -3-cyclopropyl-L-alaninamid-monotrifluoracetat

Des(l-D-leucyl-2-L-leucyl)lysobactin-bistrifluoracetat (Beispiel 13A, 112 mg, 88 μmol) und N- (tert-Butoxycarbonyl)-D-leucyl-3-cyclopropyl-L-alanin (Beispiel 5A, 120 mg, 350 μmol) werden gemäß der Allgemeinen Arbeits Vorschrift 4 umgesetzt. Das Rohprodukt wkd durch präparative HPLC feingereinigt (Methode 8; bzw. Methode 7 gefolgt von anschließendem Umsalzen des Chromatographieprodukts durch Zusatz von TFA (200 μmol)). Man erhält 87 mg (63% d. Th.) Produkt.

HPLC/UV-Vis (Methode 13): R, = 7.04 min, λmax (qualitativ) = 220 nm (s), 255-270 (w). LC-MS (Methode 11): R_t = 2.61 min;

MS (ESIpos.): m/z (%) = 638 (100) [M - Boc + 2H]²⁺, 1375 (15) [M + H]⁺. LC-MS (Methode 12): R_t = 5.27 min; MS (ESIpos.): m/z (%) = 638 (30) [M - Boc + 2H]²⁺, 1375 (100) [M + H ⁺. Beispiel 15A

N-(tert-Butoxycarbonyl)-D-leucyl-N¹-{(3S,6S,12S,15S,18R,21S,24S,27S,28R)-6-[(lS)-2-amino-l- hydroxy-2-oxoethyl]-18-(3-{[ammo(iιιύno)memyl]amino}propyl)-12-[(l_lS^,)-l-hydroxyethyl]-3- (hydroxymethyl)-24-[( 1R)-1 -hydroxy-2-methylpropyl] -21 -isobutyl- 15-[(1S)-1 -methylpropyl]- 2,5,8,11, 14,17,20,23,26-nonaoxo-28-phenyl-l-oxa-4,7,10,13,16,19,22,25-octaazacyclooctacosan- 27-yl } -L-norvalinamid-monotrifluoracetat

Des(l-D-leucyl-2-L-leucyl)lysobactin-bistrifluoracetat (Beispiel 13A, 5 mg, 4 μmol) und N-(tert- Butoxycarbonyl)-D-leucyl-L-norvalin (Beispiel 7A, 5 mg, 16 μmol) werden gemäß der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 4 umgesetzt. Das Rohprodukt wird durch präparative HPLC feingereinigt (Methode 10; bzw. Methode 9 gefolgt von anschließendem Umsalzen des Chromatographieprodukts durch Zusatz von TFA (10 μmol)). Man erhält 2.7 mg (51% d. Th.) Produkt.

HPLC/UV-Vis (Methode 13): R_t = 6.97 min, λ_max (qualitativ) = 220 nm (s), 255-270 (w). LC-MS (Methode 11): R_t = 2.49 min;

MS (ESIpos.): m/z (%) = 632 (100) [M - Boc + 2H]²⁺, 1363 (10) [M + H]⁺. Beispiel 16A

N-(tert-Butoxycarbonyl)-D-leucyl-N¹-{(3S,6S,12S,15S,18R,21_.,24S,27S,28R)-6-[(lS)-2-amino-l- hydroxy-2-oxoethyl]-18-(3-{[armno(imino)methyl]amino}ρroρyl)-12-[(lS)-l-hydroxyethyl]-3- (hydroxymethyl)-24-[( 1R)- 1 -hydroxy-2-methylpropyl]-21 -isobutyl- 15-[( 1 S)-l -methylpropyl] - 2,5,8,11, 14,17,20,23,26-nonaoxo-28-phenyl-l-oxa4,7,10,13,16,19,22,25-octaazacyclooctacosan- 27-yl}-3-tert-butyl-L-alaninamid-monotrifluoracetat

Des(l-D-leucyl-2-L-leucyl)lysobactin-bistrifluoracetat (Beispiel 13A, 21 mg, 14 μmol) und N- (tert-Butoxycarbonyl)-D-leucyl-3-tert-butyl-L-alanin (Beispiel 9A, 24 mg, 66 μmol) werden gemäß der Allgemeinen Arbeits Vorschrift 4 umgesetzt. Das Rohprodukt wkd durch präparative HPLC feingereinigt (Methode 15; bzw. Methode 14 gefolgt von anschließendem Umsalzen des Chromatographieprodukts durch Zusatz von TFA (30 μmol)). Man erhält 19 mg (75% d. Th.) Produkt.

HPLC/UV-Vis (Methode 13): R_t = 7.31 min, λ_max (qualitativ) = 220 nm (s), 255-270 (w). LC-MS (Methode 11): R_t = 2.59 min;

MS (ESIpos.): m/z (%) = 646 (100) [M - Boc + 2H ⁺, 1391 (20) [M + H] Beispiel 17A

N- tert-ButoxycarbonyD-L-leucyl-N'- (3S,6S, 12S, 15S, 18R,21S,24S,27S,28R)-6-[(lS)-2-amino-l- hydroxy-2-oxoethyl] - 18-(3-{ [amino(imino)methyl] amino Jpropyl)- 12-[( IS)- 1 -hydroxyethyl] -3- (hydroxymethyl)-24-[(lR)-l-hydroxy-2-methylpropyl]-21-isobutyl-15-[(lS)-l-methylpropyl]- 2,5,8,11, 14,17,20,23,26-nonaoxo-28-phenyl-l-oxa-4,7,10,13,16,19,22,25-octaazacyclooctacosan- 27-yl } -L-leucinamid-monotrifluoracetat

{N-(tgrt-Butoxycarbonyl)-epz-Lysobactin-monotrifluoracetat}

Analog der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 3 wkd Des-D-leucyllysobactin-bistrifluoracetat (Beispiel HA, 2.2 mg, 2 μmol) mit N-(t-τt-Butoxycarbonyl)-leucin (7.9 mg, 32 μmol) umgesetzt. Das Rohprodukt wkd gelchromatographiert (Methode 6; Methanol/0.25% Essigsäure) und anschließend mittels präparativer HPLC (Methode 14 gefolgt von anschließendem Umsalzen des Chromatographieprodukts durch Zusatz von TFA (10 μmol)) feingereinigt. Nach Gefriertrocknung der Produktfraktionen erhält man 1.5 mg (64% d. Th.) Produkt.

HPLC/UV-Vis (Methode 13): R, = 6.97 min, λ_max (qualitativ) = 220 nm (s), 255-270 (w). LC-MS (Methode 12): R_t = 4.76 min; MS (ESIpos.): m/z (%) = 1377 (100) [M + H]⁺; MS (ESIneg.): m/z (%) = 1375 (100) [M - H]^_. Beispiel 18A

N²-{4-[(tert-Butoxycarbonyl)amino]butanoyl}-N¹-{(35,6S,12S,15S,18-?,21S,24S,27S,28R)-6-[(lS)- 2-amino-l-hy<koxy-2-oxoethyl]-18-(3-{[amino(inιino)memyl]aιnino}propyl)-12-[(lS)-l- hydroxyethyl]-3-(hydroxymethyl)-24-[(lR)-l-hydroxy-2-methylρropyl]-21-isobutyl-15-[(lS)-l- methylpropyl]-2,5,8,ll,14,17,20,23,26-nonaoxo-28-phenyl-l-oxa4,7,10,13,16,19,22,25- octaazacyclooctacosan-27-yl } -L-leucinamid-monotrifluoracetat

[{4-[(tert-Butoxycarbonyl)amino]butanoyl}-des(leucyl)lysobactin-monotrifluoracetat]

Analog der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 3 wkd Des-D-leucyllysobactin-bistrifluoracetat (Beispiel HA, 4.0 mg, 3 μmol) mit 4-[(tert-Butoxycarbonyl)amino]-butansäure (11.7 mg, 57 μmol) umgesetzt. Das Rohprodukt wkd gelchromatographiert (Methode 6; Metha- nol/0.25% Essigsäure) und anschließend mittels präparativer HPLC (Methode 14 gefolgt von anschließendem Umsalzen des Chromatographieprodukts durch Zusatz von TFA (10 μmol)) feingereinigt. Nach Gefriertrocknung der Produktfraktionen erhält man 2.3 mg (59% d. Th.) Produkt.

HPLC/UV-Vis (Methode 13): R_t = 6.67 min, λ_π_,_x (qualitativ) = 220 nm (s), 255-270 (w). LC-MS (Methode 12): R_t = 4.76 min; MS (ESIpos.): m/z (%) = 1349 (100) [M + H]⁺; MS (ESIneg.): m/z (%) = 1346 (100) [M - Hf- Beispiel 19A

N-(tert-Butoxycarbonyl)-N-methyl-D-leucyl-N¹-{(3S,6S,12S,15S,18i.,21S,24S,27S,28R)-6-[(lS)-2- amino-l-hydroxy-2-oxoethyl]-18-(3-{ [armno(imino)me yl]amino}propyl)-12-[(lS)-l- hydroxyethyl]-3-(hydroxymethyl)-24-[(lR)-l-hydroxy-2-methylpropyl]-21-isobutyl-15-[(lS)-l- methylρropyl]-2,5,8,ll,14,17,20,23,26-nonaoxo-28-phenyl-l-oxa4,7,10,13,16,19,22,25- octaazacyclooctacosan-27-yl } -L-leucinamid-monotrifluoracetat

{N-(tert-Butoxycarbonyl)-N-methyl-lysobactin-monotrifluoracetat}

Analog der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 3 wkd Des-D-leucyllysobactin-bistrifluoracetat (Beispiel HA, 5.0 mg, 4 μmol) mit N-(tert-Butoxycarbonyl)-N-methyl-D-Leucin-hydrat (17.6 mg, 72 μmol) umgesetzt. Das Rohprodukt wkd gelchromatographiert (Methode 6; Metha- nol/0.25% Essigsäure) und anschließend mittels präparativer HPLC (Methode 14 gefolgt von anschließendem Umsalzen des Chromatographieprodukts durch Zusatz von TFA (10 μmol)) feingereinigt. Nach Gefriertrocknung der Produktfraktionen erhält man 2.0 mg (40% d. Th.) Produkt.

HPLC/UV-Vis (Methode 13): R_t = 7.41 min, _∞a (qualitativ) = 220 nm (s), 255-270 (w). LC-MS (Methode 12): R_t = 5.11 min; MS (ESIpos.): m/z (%) = 1391 (100) [M + H]⁺; MS (ESIneg.): m/z (%) = 1389 (100) [M - H]-. Beispiel 20A

N²-{ 6-[(tert-Butoxycarbonyl)amino]hexanoyl } -N*-{ (3S,6S, 12S, 15S, 18_?,21S,24S,27S,28R)-6-[( 1S)- 2-amino- 1 -hydroxy-2-oxoethyl] -18-(3-{ [amino(imino)methyl] amino }propyl)- 12-[(1S)-1- hydroxyethyl]-3-(hydroxymethyl)-24-[(lR)-l-hydroxy-2-methylpropyl]-21-isobutyl-15-[(lS)-l- methylpropyl]-2,5,8,ll,14,17,20,23,26-nonaoxo-28-phenyl-l-oxa4,7,10,13,16,19,22,25- octaazacyclooctacosan-27-yl } -L-leucinamid-monotrifluoracetat

[N-{6-[(tert-Butoxycarbonyl)amino]hexanoyl}-des(leucyl)lysobactin-monotrifluoracetat]

Analog der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 3 wkd Des-D-leucyllysobactin-bistrifluoracetat (Beispiel HA, 5.0 mg, 4 μmol) mit 6-[(tert-Butoxycarbonyl)amino]hexansäure (4.2 mg, 18 μmol) umgesetzt. Das Rohprodukt wird gelchromatographiert (Methode 6; Methanol/0.25% Essigsäure) und anschließend mittels präparativer HPLC (Methode 14 gefolgt von anschließendem Umsalzen des Chromatographieprodukts durch Zusatz von TFA (10 μmol)) feingereinigt. Nach Gefriertrocknung der Produktfraktionen erhält man 900 μg (18% d. Th.) Produkt.

LC-MS (Methode 11): R_t = 2.57 min;

MS (ESIpos.): m/z (%) = 639 (100) [M -Boc + 2H]²⁺, 1377 (10) [M + H ⁺; MS (ESIneg.): m z (%) = 1375 (100) [M - HT^". Beispiel 21A

N²-{ 3-[(tert-Butoxycarbonyl)amino]propionyl} -N^J-{ (3S,6S, 12S, 15S, 18R,21S,24S,27S,28R)-6- [(lS)-2-aιmno-l-hydroxy-2-oxoethyl]-18-(3-{[amino(in_ino)methyl]amino}propyl)-12-[(lS)-l- hydroxyethyl]-3-(hydroxymethyl)-24-[(lR)-l-hydroxy-2-methylpropyl]-21-isobutyl-15-[(lS)-l- methylpropyl]-2,5,8,ll,14,17,20,23,26-nonaoxo-28-phenyl-l-oxa4,7,10,13,16,19,22,25- octaazacyclooctacosan-27-yl } -L-leucinamid-monotrifluoracetat

[N-{3-[(t-^,rt-Butoxycarbonyl)amino]propionyl}-des(leucyl)lysobactin-monotrifluoracetat]

Analog der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 3 wkd Des-D-leucyllysobactin-bistrifluoracetat (Beispiel 11 A, 4.4 mg, 4 μmol) mit 3-[(tert-Butoxycarbonyl)amino]-propionsäure (700 μg, 20 μmol) umgesetzt. Das Rohprodukt wird gelchromatographiert (Methode 6; Metha- nol/0.25% Essigsäure) und anschließend mittels präparativer HPLC (Methode 14 gefolgt von anschließendem Umsalzen des Chromatographieprodukts durch Zusatz von TFA (10 μmol)) feingereinigt. Nach Gefriertrocknung der Produktfraktionen erhält man 2.0 mg (40% d. Th.) Produkt.

HPLC/UV-Vis (Methode 13): R_t = 6.45 min, λ_max (qualitativ) = 220 nm (s), 255-270 (w). LC-MS (Methode 12): R_t = 4.73 min; MS (ESIpos.): m/z (%) = 1335.6 (100) [M + H]⁺; MS (ESIneg.): m/z (%) = 1333 (100) [M - Hf. Beispiel 22A

N²-({l-[(tert-Butoxycarbonyl)amino]cyclopropyl}carbonyl)-N¹-{(3S,6S,12S,15S,18i?,21S,24S,- 27S,28R)-6-[(lS)-2-amino-l-hydroxy-2-oxoethyl]-18-(3-{[amino-(imino)methyl]amino}propyl)- 12-[(lS)-l-hydroxyethyl]-3-(hydroxymethyl)-24-[(l/?)-l-hydroxy-2-methylpropyl]-21-isobutyl-15- [(lS)-l-methylpropyl]-2,5,8,ll,14,17,20,23,26-nonaoxo-28-phenyl-l-oxa-4,7,10,13,16,19,22,25- octaazacyclo-octacosan-27-yl } -L-leucinamid-monotrifluoracetat

[N-({l-[(tert-Butoxycarbonyl)amino]cyclopropyl}carbonyl)-des(leucyl)lysobactin- monotrifluoracetat]

Analog der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 3 wkd Des-D-leucyllysobactin-bistrifluoracetat (Beispiel HA, 5.0 mg, 4 μmol) mit l-[(tert-Butoxycarbonyl)amino]cyclopropancarbonsäure (3.6 mg, 18 μmol) umgesetzt. Das Rohprodukt wkd gelchromatographiert (Methode 6; Metha- nol/0.25% Essigsäure) und anschließend mittels präparativer HPLC (Methode 14 gefolgt von anschließendem Umsalzen des Chromatographieprodukts durch Zusatz von TFA (10 μmol)) fein- gereinigt. Nach Gefriertrocknung der Produktfraktionen erhält man 650 μg (13% d. Th.) Produkt.

LC-MS (Methode 11): R_t = 2.54 min;

MS (ESIpos.): m/z (%) = 624 (100) [M - Boc + 2H]²⁺, 1346 (20) [M + H]⁺;

MS (ESIneg.): m/z (%) = 1345 (100) [M - H]^". Beispiel 23A

N-[(Benzyloxy)carbonyl]-3-[(tert-butoxycarbonyl)amino]-L-alanyl-N¹-{(3S₎6_-,12S,15S,187.,- 21S,24S,27S,28R)-6-[(lS)-2-a_mno-l-hydroxy-2-oxoethyl]-18-(3-{taιnino-(imino)methyl]amino}- propyl)-12-[(lS)-l-hydroxyethyl]-3-(hydroxymethyl)-24-[(lR)-l-hydroxy-2-methylpropyl]-21- isobutyl-15-[(lS)-l-methylpropyl]-2,5,8,ll,14,17,20,23,26-nonaoxo-28-phenyl-l-oxa-4,7,10,13- ,16,19,22,25-octaazacyclo-octacosan-27-yl}-L-leucinamid-monotrifluoracetat

[N-[(Benzyloxy)carbonyl]-3-[(tert-butoxycarbonyl)amino]-L-alanyl}-des(leucyl)lysobactin- monotrifluoracetat]

Analog der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 3 wkd Des-D-leucyllysobactin-bistrifluoracetat (Beispiel HA, 1.9 mg, 1.3 μmol) mit N-[(Benzyloxy)carbonyl]-3-[(tert-butoxycarbonyl)amino]-L- alanin (2.3 mg, 6.7 μmol) umgesetzt. Das Rohprodukt wkd gelchromatographiert (Methode 6; Methanol/0.25% Essigsäure) und anschließend mittels präparativer HPLC (Methode 14 gefolgt von anschließendem Umsalzen des Chromatographieprodukts durch Zusatz von TFA (10 μmol)) feingereinigt. Nach Gefriertrocknung der Produktfraktionen erhält man 900 μg (46% d. Th.) Produkt.

LC-MS (Methode 19): R_t = 2.79 min;

MS (ESIpos.): m z (%) = 693 (100) [M - Boc + 2H]²⁺, 1484 (5) [M + HJ⁺;

MS (ESIneg.): m/z (%) = 628 (100), 1482 (60) [M - HT. Beispiel 24A

N- ert-Butoxycarbonyrj-D-leucyl-N¹-!_. (3S,6S, 12S, 15S, 18R,21S,24S,27S,287?)-6-[(lS)-2-amino-l- hydroxy-2-oxoethyl]-18-(3-{[a-_ιino(iπύno)methyl]amino}propyl)-12-[(lS)-l-hydroxyethyl]-3- (hydroxymethyl)-24-[(lR)-l-hydroxy-2-methylpropyl]-21-isobutyl-15-[(lS)-l-methylpropyl]- 2,5,8,11, 14, 17,20,23,26-nonaoxo-28-phenyl-l-oxa-4,7, 10, 13, 16, 19,22,25-octaazacyclooctacosan- 27-yl } -L-leucinamid-monotrifluoracetat

{ N-(tert-Butoxycarbonyl)-lysobactin-monotrifluoracetat }

Analog der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 3 wkd Des-D-leucyllysobactin-bistrifluoracetat (Beispiel HA, 4.4 mg, 4 μmol) mit N-(tert-Butoxycarbonyl)-D-Leucin-hydrat (16 mg, 64 μmol) umgesetzt. Das Rohprodukt wkd gelchromatographiert (Methode 6; Methanol/0.25% Essigsäure) und anschließend mittels präparativer HPLC (Methode 14 gefolgt von anschließendem Umsalzen des Chromatographieprodukts durch Zusatz von TFA (20 μmol)) feingereinigt. Nach Gefriertrocknung der Produktfraktionen erhält man 1.3 mg (27% d. Th.) Produkt.

HPLC/UV-Vis (Methode 13): R_t = 7.07 min, _max (qualitativ) = 220 nm (s), 255-270 (w). LC-MS (Methode 12): R_t = 5.01 min; MS (ESIpos.): m/z (%) = 1377 (100) [M + H]⁺; MS (ESIneg.): m/z (%) = 1375 (100) [M - EQ-. Aminosäuren und Derivate

Beispiel 25A und Beispiel 26A

(2_-)-N-(tert-Butoxycarbonyl)-3-(trimethylsilyl)alanin und (2S)-N-(tert-Butoxycarbonyl)-3- (trimethylsilyl)alanin

Die Synthese erfolgt nach M. Merget, K. Günther, M. Bernd, E. Günther, R. Tacke, /. Organomet. Chem. 2001 625, 183-194. Die Trennung der Enantiomere erfolgt durch präparative HPLC an chkaler Phase:

Gilson Abimed HPLC, UV-Detektor 212 nm, Säule: Daicel Chiralpak AD-H 5 μm; 250 x 20 mm; Fluss: 15 ml/min; Eluent A: wo-Hexan, Eluent B: 0.2% Essigsäure/1% Wasser/2-Propanol; isokratisch!

Beispiel 25A (22? Verbindung)

Präparative HPLC: R_t = 4.16 min [ ]_D ²⁰ = +1.1 (c = 0.83, Methanol)

Beispiel 26A (2S Verbindung)

Präparative HPLC: R_t = 9.27 min [α]_D ²⁰ = -1.6 (c = 0.66, Methanol)

Beispiel 27A

(2Z)-2-{[(Benzyloxy)carbonyl]aιnino}-3-(l-methylcyclohexyl)acrylsäure-methylester

1-Methylcyclohexancarbaldehyd (2.66 g, 21.08 mmol) und Methyl{[(benzyloxy)carbonyl]- amino}(dimethoxyphosphoryl)acetat (6.63 g, 20.02 mmol, 0.95 Äquivalente) werden in 75 ml Tetrahydrofuran gelöst und auf -78°C gekühlt. Bei -78°C wkd NNNN-Tetramethylguanidin (27.92 g, 0.24 mol, 11.5 Äquivalente) zugetropft und dann 15 min bei -78°C, anschließend 4 Tage bei Raumtemperatur gerührt. Dann wkd mit Ethylacetat (zweimal 100 ml) gegen Wasser ausgeschüttelt, die vereinigten organischen Phasen mit gesättigter Νatriumchloridlösxing gewaschen und über Νatriumsulfat getrocknet. Nach dem Einengen wkd das Rohprodukt chromatographiert (Biotage 40M, Cyclohexan/Ethylacetat 6/1, 27.5 ml/min). Es werden 0.91 g (13% d. Th.) der Titelverbindung erhalten.

LC-MS (Methode 26): R_t = 2.74 min,

MS (ESIpos.): m/z (%) = 332.3 (70) [M + H]⁺.

Beispiel 28A

N-[(Benzyloxy)carbonyl]-3-(l-methylcyclohexyl)-D-alanin-methylester

Beispielverbindung 27A (310 mg, 0.94 mmol) wkd in Ethanol p.a. (60 ml) gelöst. Mit einer Kanüle wird etwa 5 min Argon hindurchgeleitet, dann wird (-)-l,2-Bis-[(2i?,57?)diethylphospho- lano]benzen(cyclooctadien)rhodium(I)-Triflat (2.7 mg, 4 μmol, 0.004 Äquivalente) zugegeben und im Ultraschallbad gelöst. Es wird über 3 Tage bei 3 bar Wasserstoffdruck und Raumtemperatur hydriert. Der Ansatz wkd mit einer weiteren Portion (2.7 mg, 4 μmol, 0.004 Äquivalente) des Katalysators versetzt und einen weiteren Tage bei 3 bar Wasserstoffdruck hydriert. Die Zugabe von Katalysator wird in Abständen von 24 h wiederholt, bis die Umsetzung vollständig ist. Die Reaktionskontrolle erfolgt über LC-MS (Methode 35). Dann wkd über Kieselgel filtriert (Ethylacetat) und das Eluat eingeengt. Ausbeute: 181 mg (58% d. Th.) der Titelverbindung.

*H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ = 0.94 (s, 3H), 1.23-1.55 (m, 11H), 1.78 (dd, IH), 3.71 (s, 3H), 4.42 (m, IH), 5.02 (m, IH), 5.11 (s, IH), 7.36 (m, 5H). LC-MS (Methode 35): R_t = 2.85 min, MS (ESIpos.): m z (%) = 334 (25) [M + H . MS (DCI): m/z (%) = 351 (100) [M + NHtf.

Beispiel 29A

N-[(Benzyloxy)carbonyl]-3-(l-methylcyclohexyl)-D-alanin

Die Beispielverbindung 28 A (180 mg, 0.54 mmol) wkd in THF (3 ml) gelöst. Bei 0°C wkd Lithiumhydroxid (2 M in Wasser, 0.59 ml, 1.19 mmol, 2.2 Äquivalente) zugetropft und dann über 4 h bei 0°C gerührt. Dann wkd über Nacht bei 7°C stehengelassen. Der Ansatz wkd unter Eiskühlung mit Trifluoressigsäure (0.12 ml, 1.62 mmol, 3 Äquivalente) versetzt, mit Ethylacetat extrahiert und der organische Extrakt über Natriumsulfat getrocknet. Das Rohprodukt wkd mit präparativer HPLC (Methode 31) gereinigt. Ausbeute: 135 mg (78% d. Th.) der Titelverbindung.

*H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ = 0.95 (s, 3H), 1.20-1.54 (m, 11H), 1.90 (m, IH), 4.43 (m, IH), 5.01 (d, IH), 5.13 (s, 2H), 7.28-7.40 (m, 5H). HPLC (Methode 18): R_t = 4.8 min.

MS (Methode ESI): /z (%) = 318.1 (4), [M - Hf. Beispiel 30A

(2Z)-2-{[(Benzyloxy)carbonyl]amino}-3-(4-isopropylphenyl)acrylsäure-methylester

4-Isopropylbenzaldehyd (2.00 g, 13.50 mmol) und Methyl {[(benzyloxy)carbonyl]amino}- (dimethoxyphosphoryl)acetat (3.58 g, 10.80 mmol, 0.8 Äquivalente) werden in Tetrahydrofuran (20 ml) gelöst und auf -78°C gekühlt. Bei -78°C wkd N,N,N,N-Tetramethylguanidin (27.92 g, 0.24 mol, 11.5 Äquivalente) zugetropft und dann 3 h bei -78°C, anschließend 3 Tage bei Raumtemperatur gerührt. Dann wkd mit Ethylacetat (zweimal 100 ml) gegen Wasser ausgeschüttelt, die vereinigten organischen Phasen werden mit gesättigter Νatriumchloridlösung gewaschen und es wkd über Νatriumsulfat getrocknet. Nach dem Einengen wkd das Rohprodukt chromatographiert (Biotage 40M, Cyclohexan Ethylacetat 5/1). Es werden 3.47 g (73% d. Th.) der Titelverbindung erhalten.

Η NMR (300 MHz, CDC1₃): δ = (1.25 (d, 6H), 2.90 (sept, IH), 3.80 (s, 3H), 5.13 (s, 2H), 6.22 (br s, IH), 7.20 (d, 2H), 7.37 (m, 5H), 7.46 (d, 2H). HPLC (Methode 28): R_t = 5.10 min.

MS (DCI): m/z (%) = 371.1 (100) [M + NHtf.

Beispiel 31A

(N-Benzyloxycarbonyl)4-isopropyl-D-phenylalanin-methylester

Die Beispielverbindung Beispiel 30A (3.47 g, 9.82 mmol) wkd in Ethanol p.a. (60 ml) gelöst. Mit einer Kanüle wird etwa 10 min Argon hindurchgeleitet, dann wird (-)-l,2-Bis-((2R,5_?)Diethyl- phospholano)benzen(cyclooctadien)rhodium(I)-Triflat (28 mg, 39 μmol, 0.004 Äquivalente) zugegeben und im Ultraschallbad gelöst. Es wkd über 3 Tage bei 3 bar und Raumtemperatur hydriert. Der Ansatz wkd mit einer weiteren Portion (28 mg, 39 μmol, 0.004 Äquivalente) des Katalysators versetzt und einen weiteren Tag bei 3 bar hydriert. Die Zugabe von Katalysator wkd in Abständen von 24 h wiederholt, bis die Umsetzung vollständig ist. Die Reaktionskontrolle erfolgt über LC-MS (Methode 26). Dann wkd über Kieselgel filtriert (Ethylacetat) und das Eluat eingeengt. Ausbeute: 3.27 g (89% d. Th.) der Titelverbindung.

*H ΝMR (300 MHz, CDC1₃): δ = 1.21 (d, 6H), 2.87 (sept, IH), 3.08 (d, IH), 3.68 (s, 3H), 4.63 (m, IH), 5.10 (s, 2H), 5.20 (m, IH), 7.01 (d, 2H), 7.13 (d, 2H), 7.42 (m, 5H). HPLC (Methode 36): R_t = 3.88 min. LC-MS (Methode 26): R_t= 2.84 min, MS (ESIpos.): m/z (%) = 356 (15) [M + H]⁺. MS (DCI): m/z (%) = 373 (100) [M + ΝHtf. Beispiel 32A

(N-Benzyloxycarbonyl)-4-isopropyl-D-phenylalanin

Die Beispielverbindung 31A (240 mg, 0.68 mmol) wkd in Tetrahydrofuran (3 ml) gelöst. Bei 0°C wkd Lithiumhydroxid (2 M in Wasser, 0.74 ml, 1.49 mmol, 2.2 Äquivalente) zugetropft und dann über 1 h bei 0°C gerührt. Der Ansatz wkd unter Eiskühlung mit Trifluoressigsäure (0.16 ml, 2.03 mmol, 3 Äquivalente) versetzt, mit Ethylacetat extrahiert und der organische Extrakt über Natriumsulfat getrocknet. Das Rohprodukt wkd mit präparativer HPLC (Methode 31) gereinigt. Ausbeute: 86% d. Th.

^!H NMR (200 MHz, CDC1₃): δ = 1.22 (d, 6H), 2.87 (sept, IH), 3.13 (m, 2H), 4.69 (m, IH), 5.10 (s, 2H), 5.18 (s, IH), 7.05 (d, 2H), 7.15 (d, 2H), 7.36 (m, 5H). HPLC (Methode 36): R_t = 3.64 min. MS (DCI): m/z (%) = 359.1 (100), [M + HJ⁺.

Dipeptidester

Beispiel 33A

N-(tert-Butoxycarbonyl)-3-t-^,rt-butyl-D-alanyl-3-tert-butyl-L-alanin-benzylester

Nach der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 6 (hier 5 Äquivalente N-Methylmorpholin) werden N- (tert-Butoxycarbonyl)-3-t- t-butyl-D-alanin (3.28 g, 13.4 mmol) und Benzyl-3-tert-butyl- L-alaninat-hydrochlorid (4.0 g, 14.7 mmol; J. X. He, W. L. Cody, A. M. Doherty, J. Org. Chem. 1995, 60, 8262-8266) umgesetzt. Nach wässriger Aufarbeitung erhält man 6.0 g Produkt (97% d. Th.). Das Produkt kann mittels präparativer HPLC (Methode 16) feingereinigt werden.

Η NMR (400 MHz, - -DMSO): δ = 0.85 (s, 9H, tBu), 0.86 (s, 9H, tBu), 1.31 (s, 9H, OtBu), 1.35

(m, 2H, S-CH₂), 1.55 (m, 2H, ß- Α₂), 3.98 (m, IH, α-CH), 4.22 (m, IH, -CH), 5.04 (d, J =

1.8 Hz, 2H, CH₂Ph), 6.72 (d, /= 9.2Hz, IH, NH), 7.25-7.35 (m, 5H, Ph), 7.94 (d, /= 7.8 Hz, IH,

NH).

[o]²⁰ _Na = + 17° (c = 0.1 in Methylenchlorid). HPLC/UV-Vis (Methode 13): R_t = 9.6 min, λ_max (qualitativ) = 220 nm (s), 250-275 (w).

LC-MS (Methode 26): R_t = 3.09 min;

MS (ESIpos.): m/z (%) = 363 (30) [M - Boc + H]⁺, 463 (100) [M + H]⁺, 926 (50) [2M + H]⁺.

HR-TOF-MS (Methode 21): C_ZÖH_ÖN_ZO_S ber. 463.3172, gef. 463.3185 [M + H]⁺. Beispiel 34A

N-(tert-Butoxycarbonyl)-3-(t-^,rt-butyl)-D-alanyl-3-(3-pyridyl)-L-alanin-methylester

Zu einer Lösung N-(tert-Butoxycarbonyl)-3-t-τt-butyl-D-alanin (1.0 Äquivalente, 1.2 mmol) und 3- (3-Pyridyl)-L-alanin-methylester (1.0 Äquivalente, 1.2 mmol) in trockenem Dichlormethan (3 ml) werden bei -30°C langsam N-Methylmorpholin (5 Äquivalente, 6.0 mmol), EDC (2.5 Äquivalente, 3.0 mmol) und HOBt (2.5 Äquivalente, 3.0 mmol) gegeben. Das Reaktionsgemisch erwärmt sich langsam (ca. 12 h) auf Raumtemperatur, wobei vollständiger Umsatz mittels HPLC (Methode 36) beobachtet wkd. Zur Aufarbeitung wkd das Reaktionsgemisch mit Dichlormethan (20 ml) ver- dünnt und mit gesättigter Νatriumhydrogencarbonat-Lösung (10 ml) gewaschen. Die organische Phase wkd mittels Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und eingeengt. Das Rohprodukt wird mittels Flashchromatographie (Kieselgel, Gradient Dichlormethan 100% bis Dichlor- methan/Methanol: 4/1) aufgereinigt, wobei man 466 mg (96% d. Th.) Produkt erhält.

*H ΝMR (400 MHz, J_ö-DMSO): δ = 0.78 (s, 9H, tBu), 1.17 (m, 2Α, ß-CΑ₂), 1.36 (s, 9H, OtBu), 3.00 (m, 2H, ß- Α₂), 3.64 (s, 3H, OMe), 3.98 (m, IH, α-CH), 4.49 (m, IH, α-CH), 6.80 (d, =

7.0 Hz, IH, ΝH), 7.26 (dd, /= 4.0, 6.5 Hz, IH, PyrH), 7.63 (d, J= 6.5 Hz, IH, PyrH), 8.27 (d, / =

6.5 Hz, IH, ΝH), 8.40 (d, J =_ 4.0 Hz, IH, PyrH), 8.42 (s, IH, PyrH).

[ ]²⁰ _Νa = +5° (c = 0.19 in Methanol).

HPLC/UV-Vis (Methode 28): R_t = 4.0 min. HPLC/UV-Vis (Methode 36): R_t = 3.80 min.

¹³C NMR (500 MHz, -k-DMSO): δ = 172.9, 171.6, 154.7, 150.2, 147.7, 136.6, 132.6, 123.1, 77.8,

52.6, 51.9, 51.4, 44.9, 33.6, 30.0, 29.2, 28.1.

LC-MS (Methode 26): R_t = 1.75 min;

MS (ESIpos.): m/z (%) = 308 (60), 352 (100), 408 (100) [M + H]⁺; MS (ESIneg.): m/z (%) = 332 (100), 406 (5) [M - HT.

HR-TOF-MS (Methode 21): C₂₁H₃ N₃0₅ [M + H]⁺ ber. 408.2498, gef.408.2458. Tabelle 1: Dipeptidester

Hf ,

+ Hf

,

Tri¬

-

9H,

Hz,

52.4,

Hf

.

und

und und

.

Dipeptidsäuren

Beispiel 59A

^(t-Tt-Butoxycarbony -S-tert-butyl-D-alanyl-S-tert-butyl-L-alanin

N-(tert-Butoxycarbonyl)-3-tert-butyl-D-alanyl-3-tert-butyl-L-alanin-benzylester (Beispiel 33A, 285 mg, 0.62 mmol) wird nach der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 8 umgesetzt. Man erhält 225 mg (98% d. Th.) Produkt.

Η ΝMR (400 MHz, -DMSO): δ = 0.83 (s, br, 18H, tBu), 1.31 (s, 9H, OtBu), 1.40 (d, /= 6.1 Hz,

2H, y?-CH₂), 148 (dd, /= 14.1, 9.4 Hz, lH,yS-CH), 1.59 (dd, /= 14.1, 2.7 Hz, lH^-CH'), 3.98 (m, IH, α-CH), 4.12 (m, IH, α-CH), 6.73 (d, J = 9.1 Hz, IH, ΝH), 7.72 (d, J = 7.9 Hz, IH, ΝH), 12.42

(s, br, IH, CO₂H).

¹³C ΝMR (125 MHz, -4-DMSO): δ = 28.49 (3C), 29.66 (3C), 29.78 (3C), 30.52, 30.58, 44.63

(ß-CH.₂), 45.24 (ß-CR₂), 49.67 (α-CH), 52.40 (α-CH), 78.29, 155.05, 172.97, 174.61.

[cc]²⁰ _Νa = + 25° (c = 0.1 in Chloroform). HPLC/UV-Vis (Methode 13): R_t = 7.95 min.

LC-MS (Methode 22): R_t = 2.26 min;

MS (ESIpos.): m/z (%) = 373 (100) [M + Hf .

HR-TOF-MS (Methode 21): Cι₉H₃₇N₂0₅ ber. 373.2702, gef. 373.2717 [M + Hf . Beispiel 60A

N-tert-Butoxycarbonyl-3-tert-butyl-D-alanyl-3-(3-pyridyl)-L-alanin

Zu einer Lösung 34A (1.0 Äquivalente, 12.8 mmol) in Tetrahydrofuran (104 ml) und Wasser (6.2 ml) wkd bei -20°C eine Lösung Lithiumhydroxid-hydrat (2.5 Äquivalente, 31.9 mmol) in Wasser (1.2 ml) gegeben. Das Reaktionsgemisch erwärmt sich (ca. 1.5 h) auf +15°C, wobei vollständiger Umsatz mittels HPLC/UV-Vis (Methode 36) beobachtet wkd. Zur Aufarbeitung wird Kaliumdihydrogenphosphat (10 Äquivalente, 127 mmol) zugegeben (pH 7). Das Reaktionsgemisch wird filtriert und im Vakuum aufkonzentriert. Das Rohprodukt (5.5 g) wkd mittels Gelchromato- graphie (Methode 6, Laufmittel Methanol/Aceton 4/1) aufgereinigt, wobei man 3.7 g (70% d. Th.) Produkt erhält.

[α]²⁰ _Νa = +39.3° (c = 0.33 in Methanol). HPLC/UVNis (Methode 28): R_t = 3.8 min. HPLC/UVNis (Methode 36): R_t = 3.64 min. LC-MS (Methode 26): R_t = 1.59 min;

MS (ESIpos.): m/z (%) = 338 (100), 394 (40) [M + Hf ; MS (ESIneg.): m/z (%) = 318 (60), 392 (100) [M - Hf. HR-TOF-MS (Methode 21): C₂oH₃₂Ν₃θ₅ [M + Hf ber. 394.2342, gef. 394.2322. Tabelle 2: N-Geschützte Dipeptidsäuren

. 9H),

(d,

Hf .

IH).

Tabelle 3; N-Geschfltzte Nonadepsipeptide

ber.

Beispiel 155A

N-(tert-Butoxycarbonyl)-3-tert-butyl-D-alanyl-N¹-{(3S,6S,12S,155,18i?,21S,24S,275,28_?)-6-[(lS)- 2-aιni_ιo-l-hydroxy-2-oxoethyl]-18-(3-{[amino(in_ino)methyl]aιmno}propyl)-12-[(15)- l-hydroxyethyl]-3-(hydroxymethyl)-24-[(lR)-l-hydroxy-2-methylpropyl]-21-isobutyl-15-[(lS)- l-methylpropyl]-2,5,8,ll,14,17,20,23,26-nonaoxo-28-phenyl-l-oxa-4,7,10,13,16,19,22,25- octaazacyclooctacosan-27-yl } -3-tert-butyl-L-alaninamid-trifluoracetat

{N-tert-Butoxycarbonyl-3-tert-butyl-D-alanyl-3-tert-butyl-L-alanyl-des(l-D-leucyl-2-L-leucyl)- lysobactin-trifluoracetat }

Des(l-D-leucyl-2-L-leucyl)lysobactin-bistrifluoracetat (Beispiel 13A, 500 mg, 0.39 mmol) und N- (t--rt-Butoxycarbonyl)-3-tert-butyl-D-alanyl-3-tert-butyl-L-alanin (Beispiel 59A, 583 mg,

1.56 mmol) werden gemäß der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 4 umgesetzt. Das Rohprodukt wird durch präparative HPLC feirigereinigt (Methode 24). Man erhält 445 mg (95% d. Th.) Produkt.

HPLC/UVNis (Methode 13): R_t = 7.9 min, λ-_ax (qualitativ) = 220 nm (s), 255-270 (w). LC-MS (Methode 26): R_t = 2.16 min;

MS (ESIpos.): m/z (%) = 653 (100) [M - Boc + 2HJ²⁺, 1404 (30) [M + Hf . MS (ESIneg.): m/z (%) = 701 (100), 1403 (20) [M - Hf, 1449 [M - H + HCO₂H]^_. LC-MS (Methode 29): R_t = 5.5 min;

MS (ESIpos.): m/z (%) = 653 (100) [M - Boc + 2H]²⁺, 1405 (90) [M + Hj⁺.

HR-TOF-MS (Methode 21): C₆₅H₁₁₀Nι₅O₁₉ ber. 1404.8102, gef. 1404.8057 [M + Hf

Beispiel 156A

N-tert-Butoxycarbonyl-3-tβrt-butyl-D-alanyl-3-(3-pyridyl)-L-alanyl-des(l-D-Ieucyl- 2-L-leucyl)lysobactin-bistrifluoracetat

Zu einer Lösung von Beispiel 13A (1.0 Äquivalente, 0.03 mmol) und Beispiel 60A (2.5 Äquivalente, 0.08 mmol) in trockenem Dimethylformamid (2 ml) werden bei -78°C langsam N- Methylmorpholin (4 Äquivalente, 0.13 mmol) und HATU (2.6 Äquivalente, 0.08 mmol) gegeben. Das Reaktionsgemisch erwärmt sich langsam (ca. 2 h) auf 0°C, wobei vollständiger Umsatz mittels HPLC/UV-Vis (Methode 36) beobachtet wkd. Die Reaktion wurde mit Kaliumdihydrogen- phosphat (5.0 Äquivalente, 0.16 mmol) gestoppt. Das Reaktionsgemisch wkd mittels Gelchromatographie (Methode 6, Laufmittel Methanol/Aceton 4/1) aufgereinigt, wobei man 53.6 mg (80% d. Th.) Produkt erhält.

HPLC/UV-Vis (Methode 36): R_t = 3.83 min. LC-MS (Methode 26): R_t = 2.08 min;

MS (ESIpos.): /z (%) = 713 (100) [M + 2H]²⁺, 1425 (15) [M + Hf ; MS (ESIneg.): m/z (%) = 711 (100) [M - 2HJ^2", 1423 (30) [M - Hf . HR-TOF-MS (Methode 21): CA-Νi-Oi_. [M + Hf ber. 1425.7742, gef. 1425.7722. Tabelle 4; N-Geschutzte Nonadepsipeptide

(s),

nach

1523

nach

nach

nach

nach

(20)

ber.

88A

Ausftthrungsbeispiele

Beispiel 1

D-Leucyl-N¹-{(3S,6S,12S,15S,18_?,21S,24S,27S,28R)-6-[(lS)-2-a_mino-l-hydroxy-2-oxoethyl]-18- (3-{[a_nino(immo)memyl]anιino}propyl)-12-[(lS)-l-hydroxyethyl]-3-(hydroxymethyl)-24-[(l^ hydroxy-2-methylproρyl]-21-isobutyl-15-[(lS)-l-methylρropyl]-2,5,8,ll,14,17,20,23,26-nonaoxo- 28-phenyl-l-oxa-4,7,10,13,16,19,22,25-octaazacyclooctacosan-27-yl}-3-cyclopropyl-L-alanin- amid-bistrifluoracetat

Gemäß der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 5 wkd das N-(tert-Butoxycarbonyl)-Depsipeptid (Beispiel 14A, 40 mg, 30 μmol) umgesetzt. Nach chromatographischer Reinigung mittels präparativer HPLC (Methode 8; bzw. Methode 7 gefolgt von anschließendem Umsalzen des Chromatographieprodukts durch Zusatz von TFA (300 μmol) erhält man durch Gefriertrocknung 36 mg (89% d. Th.) Produkt.

HPLC/UVNis (Methode 13): R_t = 5.64 min, λ-^ (qualitativ) = 220 nm (s), 255-270 (w). LC-MS (Methode 11): R_t = 2.0 min;

MS (ESIpos.): m/z (%) = 638 (100) [M + 2H]²⁺, 1275 (8) [M + Hf . FT-ICR-HR-MS (Methode 23): C5₈H₉₇Νi5θ₁₇ [M + 2H]²⁺ ber. 637.85880, gef. 637.85878; C₅₈H₉₆N₁₅Na0₁₇ [M + H + Na] 2+ ber. 648.84977, gef. 648.84990.

MALDI-MS (Methode 20): m/z (%) = 1292.5 (100) [M + Hf .

Beispiel 2

D-Leucyl-N¹-{(3S,6S,125,15S,18_?,21S,24S,27S,28i-)-6-[(lS)-2-amino-l-hydroxy-2-oxoethyl]-18- (3-{[arnino(imino)methyl]amino}ρropyl)-12-[(l_))-l-hydroxyethyl]-3-(hydroxymethyl)-24-[(ljR)-l- hydroxy-2-methylpropyl]-21-isobutyl-15-[(lS)-l-methylpropyl]-2,5,8,ll,14,17,20,23,26-nonaoxo- 28-phenyl-l-oxa-4,7, 10, 13, 16, 19,22,25-octaazacyclooctacosan-27-yl} -3-cyclopropyl-L-norvalin- amid-bistrifluoracetat

Gemäß der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 5 wkd das N-(tert-Butoxycarbonyl)-Depsi- peptid (Beispiel 15A, 3.1 mg, 2 μmol) umgesetzt. Nach chromatographischer Reinigung mittels präparativer HPLC (Methode 10; bzw. Methode 9 gefolgt von anschließendem Umsalzen des Chromatographieprodukts durch Zusatz von TFA (30 μmol) erhält man durch Gefriertrocknung 3 mg (quant.) Produkt.

HPLC/UVNis (Methode 13): R_t = 5.59 min, m_a (qualitativ) = 220 nm (s), 255-270 (w). LC-MS (Methode 11): R_t = 2.01 min;

MS (ESIpos.): m/z (%) = 632 (100) [M + 2H]²⁺, 1263 (10) [M + Hf ; LC-MS (Methode 12): R_t = 4.05 min;

MS (ESIpos.): m/z (%) = 632 (100) [M + 2H]²⁺, 1263 (10) [M + Hf . FT-ICR-HR-MS (Methode 23):

C_S7H₉₇N₁₅O₁₇ [M + 2H]²⁺ ber. 631.85879, gef. 631.85913.

MALDI-MS (Methode 20): m/z (%) = 1280.5 (100) [M + Hf .

Beispiel 3

D-Leucyl-N¹-{(3S,6S,12S,15S,18_ ,215,24S,27S,287?)-6-[(lS)-2-amino-l-hydroxy-2-oxoethyl]-18- (3-{[aιr no(in3ino)methyl]amino}propyl)-12-[(lS)-l-hydroxyethyl]-3-(hydroxymethyl)-24-[(lR)-l- hydroxy-2-methylpropyl]-21-isobutyl-15-[(lS)-l-methylpropyl]-2,5,8,ll,14,17,20,23,26-nonaoxo- 28-phenyl-l -oxa-4,7, 10, 13, 16, 19,22,25-octaazacyclooctacosan-27-yl } -3-tert-butyl-L-alaninamid- bistrifluoracetat

Gemäß der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 5 wkd das N-(tert-Butoxycarbonyl)-Depsi- peptid (Beispiel 16A, 17 mg, 113 μmol) umgesetzt. Nach chromatographischer Reinigung mittels präparativer HPLC (Methode 15) erhält man durch Gefriertrocknung 15 mg (quant.) Produkt. HPLC/UVNis (Methode 13): R_t = 5.87 min, λ_max (qualitativ) = 220 nm (s), 255-270 (w). LC-MS (Methode 11): R_t = 1.95 min ;

MS (ESIpos.): m/z (%) = 646 (100) [M + 2H]²⁺, 1291 (10) [M + Hf ; MS (ESkieg.): m/z (%) = 644 (100) [M - 2H]^2", 1289 (10) [M - Hf.

Beispiel 4

L-Leucyl-N^I-{(3S,6S,12S,15S,18R,21S,24S,27S,28Λ)-6-[(lS)-2-amino-l-hydroxy-2-oxoethyl]-18- (3-{[an_ino(in_ino)memyl]aιmno}propyl)-12-[(lS)-l-hydroxyethyl]-3-(hydroxymethyl)-24-[(li?)-l- hydroxy-2-methylpropyl]-21-isobutyl-15-[(lS)-l-methylpropyl]-2,5,8,ll,14,17,20,23,26-nonaoxo- 28-phenyl-l-oxa-4,7,10,13,16,19,22,25-octaazacyclooctacosan-27-yl}-L-leucinamid- bistrifluoracetat

{ epz-Lysobactin-bistrifluoracetat }

Analog der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 5 wird N-(tert-Butoxycarbonyl)-epi-lysobactin- monotrifluoracetat (Beispiel 17A, 1.3 mg, 1 μmol) umgesetzt. Das Rohprodukt wkd mittels präparativer HPLC (Methode 15) gereinigt. Nach Gefriertrocknung der Produktfraktionen erhält 1.0 mg (42% d. Th.) Produkt.

HPLC/UVNis (Methode 13): R_t = 5.68 min, λ_max (qualitativ) = 220 nm (s), 255-270 (w). LC-MS (Methode 12): R_t = 4.35 min;

MS (ESIpos.): m/z (%) = 639 (100) [M + 2H]²⁺, 1277 (5) [M + Hf ;

MS (ESIneg.): m/z (%) = 1275 (100) [M - Hf.

HR-TOF-MS (Methode 21): ber. 1276.7265, gef. 1276.7261 [M + H]+.

Beispiel 5

N²-(4-Aminobutanoyl)-N¹-{(3S,6S,12S,15S,18R,21S,245,27S,28R)-6-[(lS)-2-amino-l-hydroxy-2- oxoethyl]-18-(3-{[aι__ino(in_ino)methyl]amino}propyl)-12-[(lS)-l-hydroxyethyl]-3-(hydroxy- methyl)-24-[(lR)-l-hydroxy-2-methylpropyl]-21-isobutyl-15-[(lS)-l-methylpropyl]-2,5,8,ll,14,- 17,20,23,26-nonaoxo-28-phenyl-l-oxa-4,7,10,13,16,19,22,25-octaazacyclooctacosan-27-yl}-L- leucinamid-bistrifluoracetat

{ 4-Aminobutanoyl-des(leucyl)lysobactin-bistrifluoracetat }

Analog der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 5 wkd {4-[(te/?-Butoxycarbonyl)amino]butanoyl}- des(leucyl)lysobactin-trifluoracetat (Beispiel 18A, 2.3 mg, 2 μmol) umgesetzt. Das Rohprodukt wird mittels präparativer HPLC (Methode 15) gereinigt. Nach Gefriertrocknung der Produktfraktionen erhält man 1.5 mg (35% d. Th.) Produkt.

LC-MS (Methode 12): R_t = 3.93 min;

MS (ESIpos.): m/z (%) = 625 (100) [M + 2H]²⁺, 1248 (15) [M + Hf ;

MS (ESIneg.): m/z (%) = 1247 (100) [M - Hf. Beispiel 6

N-Methyl-D-leucyl-N¹-{(3S_J65,125,15S,18R,21S,24S,27S,28R)-6-[(15)-2-amino-l-hydroxy-2- oxoethyl]-18-(3-{[aιmno(imino)me yl]arruno}propyl)-12-[(lS)-l-hydroxyethyl]-3-(hydroxy- methyl)-24-[(lR)-l-hydroxy-2-methylpropyl]-21-isobutyl-15-[(lS)-l-methylpropyl]-2,5,8,ll,14,- 17,20,23,26-nonaoxo-28-phenyl-l-oxa4,7,10,13,16,19,22,25-octaazacyclooctacosan-27-yl}-L- leucinamid-biskifluoracetat

{ N-Methyl-lysobactin-bistrifluoracetat }

Analog der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 5 wkd N-(tert-Butoxycarbonyl)-N-methyl-lysobactin- monotrifluoracetat (Beispiel 19A, 1.9 mg, 1 μmol) umgesetzt. Das Rohprodukt wkd mittels präparativer HPLC (Methode 15) gereinigt. Nach Gefriertrocknung der Produktfraktionen erhält man 1.8 mg (quant.) Produkt.

LC-MS (Methode 12): R_t = 4.27 min;

MS (ESIpos.): m/z (%) = 646 (100) [M + 2H]²⁺, 1291 (15) [M + Hf ; MS (ESkieg.): m/z (%) = 1289 (100) [M - HT.

HR-TOF-MS (Methode 21): C₅₉HιooNi5θ₁₇ [M + Hf ber. 1290.7422, gef. 1290.7415. Beispiel 7

oxoethyl]-18-(3-{[aιι_ino(in_ino)nιethyl]amino}propyl)-12-[(15)-l-hydroxyethyl]-3-(hydroxy- methyl)-24-[(li-)-l-hydroxy-2-methylpropyl]-21-isobutyl-15-[(15)-l-methylpropyl]-2,5,8,ll,14,- 17,20,23,26-nonaoxo-28-phenyl-l-_Oχa4,7,10,13,16,19,22,25-octaazacyclooctacosan-27-yl}-L- leucinamid-bistrifluoracetat

{N-(6-Aminohexanoyl)-des(leucyl)lysobactin-bistrifluoracetat}

Analog der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 5 wkd {6-[(tert-Butoxycarbonyl)amino]hexanoyl}- des(leucyl)lysobactin-monotrifluoracetat (Beispiel 20A, 350 μg, 1 μmol) umgesetzt. Das Rohprodukt wird mittels präparativer HPLC (Methode 15) gereinigt. Nach Gefriertrocknung der Produktfraktionen erhält man 300 μg (quant.) Produkt.

HPLC/UVNis (Methode 13): R_t = 5.28 min, _max (qualitativ) = 220 nm (s), 255-270 (w). LC-MS (Methode 12): R_t = 4.00 min;

MS (ESIpos.): m/z (%) = 639 (100) [M + 2H]²⁺, 1277 (10) [M + Hf ; MS (ESIneg.): m/z (%) = 1275 (100) [M - Hf. Beispiel 8

N^-AπünopropionyO-N¹-!_. (35,65, 125, 155, 18i-,215_>245,275,28/?)-6-[(15)-2-amino-l-hydroxy-2- oxoethyl]-18-(3-{[amino(iιmno)memyl]amino}propyl)-12-[(15)-l-hydroxyethyl]-3-(hydroxy- methyl)-24-[(li?)-l-hydroxy-2-methylpropyl]-21-isobutyl-15-[(15)-l-methylproρyl]-2,5,8,ll,14,- 17,20,23,26-nonaoxo-28-phenyl-l-oxa-4,7,10,13,16,19,22,25-octaazacyclooctacosan-27-yl}-L- leucinamid-bistrifluoracetat

{N-(3-Aminopropionyl)-des(leucyl)lysobactin-bistrifluoracetat}

Analog der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 5 wkd {6-[(tert-Butoxycarbonyl)amino]hexanoyl}- des(leucyl)lysobactin-monotrifluoracetat (Beispiel 21A, 2.2 mg, 1.5 μmol) umgesetzt. Das Rohprodukt wird mittels präparativer HPLC (Methode 15) gereinigt. Nach Gefriertrocknung der Produktfraktionen erhält man 200 μg (11% d. Th.) Produkt.

HPLC/UVNis (Methode 13): R_t =- 4.96 min, λ_max (qualitativ) = 220 nm (s), 255-270 (w). LC-MS (Methode 12): R_t = 3.86 min;

MS (ESIpos.): m/z (%) = 618 (100) [M + 2 Hf , 1235 (15) [M + Hf ; MS (ESIneg.): m/z (%) = 1233 (100) [M - Hf.

Zur Aminosäure-Sequenzbestimmung wkd eine analytische Probe des Produkts nach der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 10 hydrolysiert. MALDI-MS (Methode 20): m/z (%) = 1252.8 (100) [M + Hf .

Beispiel 9

N²-({l-Aminocyclopropyl}carbonyl)-N¹-{(35,65,125,155,18R,215,245,275,28i-)-6-[(15)-2-amino- l-hydroxy-2-oxoethyl]-18-(3-{[amino(in_ino)methyl]arnino}propyl)-12-[(15)-l-hydroxyethyl]-3- (hydroxymethyl)-24-[(li?)-l-hydroxy-2-methylproρyl]-21-isobutyl-15-[(15)-l-methylpropyl]- 2,5,8, 11 , 14, 17,20,23,26-nonaoxo-28-phenyl-l-oxa-4,7, 10, 13, 16, 19,22,25-octaazacyclooctacosan- 27-yl } -L-leucinamid-bistrifluoracetat

[N-({l-Aminocyclopropyl}carbonyl)-des(leucyl)lysobactin-bistrifluoracetat]

Analog der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 5 wkd N-({ l-[(tert-Butoxycarbonyl)amino] cyclopropyl }carbonyl)-des(leucyl)lysobactin-monotrifluoracetat (Beispiel 22A, 400 μg, 0.3 μmol) umgesetzt. Das Rohprodukt wkd mittels präparativer HPLC (Methode 15) gereinigt. Nach Gefriertrocknung der Produktfraktionen erhält man 200 μg (50% d. Th.) Produkt.

HPLC/UV-Vis (Methode 13): R_t = 5.29 min, λ_max (qualitativ) = 220 nm (s), 255-270 (w). LC-MS (Methode 12): R_t = 4.08 min; MS (ESIpos.): m/z (%) = 1247 (100) [M + Hf; MS (ESkieg.): m/z (%) = 1245 (100) [M - Hf. Beispiel 10

3-Amino-N-[(benzyloxy)carbonyl]-L-alanyl-N¹-{(35,65,125,155,187-,215,245,275,28R)-6-[(15)-2- a_ώno-l-hydroxy-2-oxoemyl]-18-(3-{[amino(irx_ino)me1kyl]amino}propyl)-12-[(15)-l- hydroxyethyl]-3-(hydroxymethyl)-24-[(lR)-l-hydroxy-2-methylpropyl]-21-isobutyl-15-[(15)-l- methylproρyl]-2,5,8,ll,14,17,20,23,26-nonaoxo-28-phenyl-l-oxa-4,7,10,13,16,19,22,25- octaazacyclooctacosan-27-yl } -L-leucinamid-bis trifluoracetat

[3-Amino-N-[(benzyloxy)carbonyl] -L-alanyl } -des(leucyl)lysobactin-bistrifluoracetat]

Analog der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 5 wkd {N-[(Benzyloxy)carbonylj-3-[(tert-butoxy- carbonyl)amino] -L-alanyl }-des(leucyl)lysobactin-monotrifluoracetat (Beispiel 23A, 300 μg, 0.2 μmol) umgesetzt. Das Rohprodukt wkd mittels präparativer HPLC (Methode 15) gereinigt. Nach Gefriertrocknung der Produktfraktionen erhält man 200 μg (65% d. Th.) Produkt.

LC-MS (Methode 12): R_t = 4.20 min;

MS (ESIpos.): m/z (%) = 692.5 (100) [M + 2H]²⁺, 1384 (5) [M + Hf ; MS (ESIneg.): m/z (%) = 1382 (100) [M - Hf. Tabelle 5; Edman -Route

bzw.

8 bzw.

bzw.

2

μmol).

Beispiel 68

3-tert-Butyl-D-aIanyl-N¹-{(35,65,125,155,18R,215,245,275,28_?)-6-[(15)-2-amino-l-hydroxy- 2-oxoethyl]-18-(3-{[amino(imino)memyl]amino}propyl)-12-[(15)-l-hydroxyethyl]-3-(hydroxy- methyl)-24-[(l_.)-l-hyckoxy-2-methylpropyl]-21-isobutyl-15-[(15)-l-methylpropyl]-2,5,8,ll,14,- 17,20,23,26-nonaoxo-28-phenyl-l-oxa-4,7,10,13,16,19,22,25-octaazacyclooctacosan-27-yl}-3-tert- butyl-L-alanmamid-bistrifluoracetat

{3-tert-Butyl-D-alanyl-3-t-^,rt-butyl-L-alanyl-des(l-D-leucyl-2-L-leucyl)lysobactin-bistrifluoracetat}

Gemäß der Allgemeinen Arbeitsvorschrift 5 wkd das N-(tert-Butoxycarbonyl)-Depsi- peptid (Beispiel 155A, 103 mg, 0.07 mmol) umgesetzt. Nach chromatographischer Reinigung mittels präparativer HPLC (Methode 25) erhält man durch Gefriertrocknung 75.5 mg (73% d. Th.) Produkt.

HPLC/UVNis (Methode 13): R_t = 6.09 min, λ_max (qualitativ) - 220 nm (s), 255-270 (w). LC-MS (Methode 12): R_t = 4.62 min;

MS (ESIpos.): m/z (%) = 653 (100) [M + 2H]²⁺, 1305 (10) [M + Hf ; MS (ESIneg.): m/z (%) = 651 (40) [M - 2H]^2_, 1303 (100) [M - Wp. LC-MS (Methode 26): R_t = 1.64 min; MS (ESIpos.): m/z (%) = 653 (100) [M + 2H]²⁺, 1305 (5) [M + Hf ; MS (ESIneg.): m/z (%) = 651 (100) [M - 2H]^2_, 1303 (10) [M - H]^_.

HR-TOF-MS (Methode 21): C^H^N^Oπ ber. 1304.7578, gef. 1304.7606 [M + Hf .

Beispiel 69

3-tert-Butyl-D-alanyl-3-(3-pyridyl)-L-alanyl-des(l-D-leucyl-2-L-leucyl)lysobactin-tristrifluoracetat

Zu einer Lösung von Beispiel 156A (1.0 Äquivalente, 0.03 mmol) in Dichlormethan (3 ml) wkd bei 0°C langsam Trifluoressigsäure (13.0 mmol, 1 ml) zugetropft. Das Reaktionsgemisch wkd bei 0°C gerührt (50 min), wobei vollständiger Umsatz mittels HPLC/UV-Vis (Methode 36) beobachtet wkd. Das Reaktionsgemisch wkd einrotiert und mittels Gelchromatographie (Methode 6, Laufmittel Methanol/Aceton 4/1) aufgereinigt. Das Rohprodukt wkd mittels präparativer HPLC (Methode 8) aufgereinigt, wobei man 34 mg (59% d. Th.) Produkt erhält.

[α]²⁰Na = -36° (c = 0.24 in Wasser) HPLC/UVNis (Methode 28): R_t = 3.6 min. HPLC/UV-Vis (Methode 36) : R_t = 3.28 min. LC-MS (Methode 26): R_t = 1.49 min;

MS (ESIpos.): m/z (%) = 663 (100) [M + 2H]²⁺, 1325 (10) [M + Hf ; MS (ESkieg.): m/z (%) = 661 (100) [M - 2H]^2-, 1323 (40) [M - Hf. HR-MS (Methode 21): C₆ιH₉₇Ν₁₆O₁₇ [M + Hf ber. 1325.7218, gef. 1325.7261. Tabelle 6: Edman^ -Route

ber.

ber.

(s),

Tabelle 7; N-AIkyl-Derivate

B. Bewertung der physiologischen Wirksamkeit

Die in v-tro-Wkkung der erfindungsgemäßen Verbindungen kann in folgenden Assays gezeigt werden:

Bestimmung der minimalen Hemmkonzentration (MHK):

Die MHK wird im Flüssigdilutionstest gemäß der NCCLS-Richtlinien bestimmt. Übernachtkulturen von Staphylococcus aureus 133, Entercococcus faecalis 27159, E. faecium 4147 und Streptococcus pneumoniae G9a werden mit den beschriebenen Testsubstanzen in einer 1:2 Verdünnungsreihe inkubiert. Die MHK-Bestimmung wkd mit einer Zellzahl von 10⁵ Keimen pro ml in Isosensitest-Medium (Fa. Difco, kvine/USA) durchgeführt, mit Ausnahme von 5. pneumoniae, der in BHI-Bouillon (Fa. Difco, kvine/USA) mit 10% Rinderserum bei einer Zellzahl von 10⁶ Keimen pro ml getestet wkd. Die Kulturen werden bei 37°C für 18-24 Stunden inkubiert, 5. pneumoniae in Gegenwart von 10% C0₂.

Die jeweils niedrigste Substanzkonzenkation, bei der kein sichtbares Bakterienwachstum mehr auftritt, wkd als MHK definiert. Die MHK-Werte werden in μg/ml angegeben.

Repräsentative in-vitro-Wirkdaten für die erfindungsgemäßen Verbindungen sind in Tabelle A wiedergegeben:

Tabelle A

Die Eignung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung von bakteriellen Infektionen kann im folgenden Tiermodell gezeigt werden:

Svstemische Infektion mit Staphylococcus aureus 133:

Zellen von 5. aureus 133 werden über Nacht in BHI-Bouillon (Fa. Oxoid, New York/ USA) angezüchtet. Die Übernachtkultur wkd 1:100 in frische BHI-Bouillon verdünnt und für 3 Stunden inkubiert. Die dann in der logarithmischen Wachstumsphase befindlichen Zellen werden abzenkifugiert und zweimal mit gepufferter, physiologischer Kochsalzlösung gewaschen. Danach wkd photometrisch eine Zellsuspension in Kochsalzlösung mit einer Extinktion von 50 Einheiten eingestellt. Nach einem Verdünnungsschritt (1:15) wkd diese Suspension 1:1 mit einer 10%igen Mucinlösung gemischt. Von dieser Infektionslösung werden 0.25 ml/20 g Maus intraperitoneal (entsprechend lxlO⁶ Keimen/Maus) appliziert. Die Therapie erfolgt intraperitoneal oder inttavenös 30 Minuten nach der Infektion. Für den Infektionsversuch werden weibliche CFWl-Mäuse verwendet. Das Überleben der Tiere wkd über 6 Tage protokolliert.

Die Eigenschaften der erfindungsgemäßen Verbindungen im Hinblick auf die Nierenverträglichkeit können im folgenden Tiermodell gezeigt werden:

Maus-Modell zur Bestimmung nephrotoxischer Effekte:

Nephrotoxische Nebenwirkungen der Nonadepsipeptide werden durch histopathologische Untersuchungen der Nieren in Mäusen nach mehrfacher Gabe einer bestimmten Dosierung analysiert. Dafür werden 5 - 6 Tiere täglich entweder intravenös (i.v.) oder intraperitoneal (i.p.) mit Substanzen behandelt, die in wässriger Lösung oder unter Zusatz von Solutol gelöst werden. Nierentoxische Effekte werden durch lichtmikroskopische Auswertung Hämatoxilin und Eosin (H&E) gefärbter Paraffinschnitte der Nieren bestimmt. Eine 'Periodic-Acid Schiff (PAS)-Reaktion wkd wahlweise zur besseren Darstellung von Glykoproteinen durchgeführt. Nephrotoxische Effekte werden semiquantitativ für jedes Tier als Schweregrade der auftretenden tubulären Basophilie und Degeneration/Regeneration festgelegt (Schweregrade: 0 = kein Effekt; 1 = minimaler Effekt; 2 = leichter Effekt; 3 = moderater Effekt; 4 = schwere Läsionen). Der durchschnittliche Schweregrad der tubulären Degeneration/Regeneration sowie die kizidenz (Anzahl der betroffenen Tiere) wkd pro Tiergruppe oder Derivat berechnet. Darüber hinausgehende Nierenveränderungen wie tubuläre Dilatation sowie Nekrosen und Ansammlung nekrotischen Materials werden ebenfalls aufgeführt.

C. Ausführungsbeispiele für pharmazeutische Zusammensetzungen

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können folgendermaßen in pharmazeutische Zubereitungen überführt werden:

Tablette:

Zusammensetzung:

100 mg der Verbindung von Beispiel 1, 50 mg Lactose (Monohydrat), 50 mg Maisstärke (nativ), 10 mg Polyvinylpyrolidon (PVP 25) (Fa. BASF, Ludwigshafen, Deutschland) und 2 mg Magnesiumstearat.

Tablettengewicht 212 mg. Durchmesser 8 mm, Wölbungsradius 12 mm.

Herstellung:

Die Mischung aus Wirkstoff, Lactose und Stärke wird mit einer 5%-igen Lösung (m/m) des PVPs in Wasser granuliert. Das Granulat wkd nach dem Trocknen mit dem Magnesiumstearat für 5 min gemischt. Diese Mischung wkd mit einer üblichen Tablettenpresse verpresst (Format der Tablette siehe oben). Als Richtwert für die Verpressung wkd eine Presskraft von 15 kN verwendet.

Oral applizierbare Suspension:

Zusammensetzung:

1000 mg der Verbindung von Beispiel 1, 1000 mg Ethanol (96%), 400 mg Rhodigel (Xanthan gum der Fa. FMC, Pennsylvania, USA) und 99 g Wasser.

Einer Einzeldosis von 100 mg der erfindungsgemäßen Verbindung entsprechen 10 ml orale Suspension.

Herstellung:

Das Rhodigel wkd in Ethanol suspendiert, der Wkkstoff wkd der Suspension zugefügt. Unter Rühren erfolgt die Zugabe des Wassers. Bis zum Abschluss der Quellung des Rhodigels wkd ca. 6h gerührt.

Intravenös applizierbare Lösung:

Zusammensetzung: 100-200 mg der Verbindung von Beispiel 1, 15 g Polyethylenglykol 400 und 250 g Wasser für Injektionszwecke.

Herstellung:

Die Verbindung von Beispiel 1 wird zusammen mit Polyethylenglykol 400 in dem Wasser unter Rühren gelöst. Die Lösung wird sterilfiltriert (Porendurchmesser 0,22 μm) und unter aseptischen Bedingungen in hitzesterilisierte Infusionsflaschen abgefüllt. Diese werden mit Infusionsstopfen und Bördelkappen verschlossen.

Claims

Patentansprüche

Verbindung der Formel

in welcher

R¹ Wasserstoff, C₃-C₆-Cycloalkyl, C₅-C₆-Cycloalkenyl, C₃-C₆-Cycloalkylmethyl, 5- bis 7-gliedriges Heterocyclylmethyl, Methyl, Ethyl, n-Propyl, iso-Propyl, 1- Methylprop-1-yl, 2-Methylprop-l-yl, 2,2-Dimethylprop-l-yl, 1,1-Dimethylprop-l- yl, 1-Ethyl-prop-l-yl, 1-Ethyl-l-methylprop-l-yl, n-Butyl,

2-Methylbut-l-yl,

3- Methylbut-1-yl, 1-Ethylbut-l-yl, tert-Butyl,

4-Methylpent-l-yl, n-Hexyl, Alkenyl oder Aryl bedeutet,

wobei R¹ substituiert sein kann mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Amino, Cyano, Trimethylsilyl, Alkyl, Alkoxy, Benzyloxy, -C_δ-Cycloalkyl, Aryl, 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl, Alkylarnino, Arylamino, Alkylcarbonylamino, Arylcarbonylamino, Alkylcarbonyl, Alkoxycarbonyl, Arylcarbonyl und Benzyloxycarbonylamino,

worin Aryl und Heteroaryl ihrerseits substituiert sein können mit 0_S 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Amino, Cyano, Niko, Alkyl, Alkoxy und Phenyl,

R² Wasserstoff oder Cι-C₄-Alkyl bedeutet,

oder

R¹ und R² zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, einen C₃-C₆- Cycloalkyl-Ring oder einen 5- bis 7-gliedrigen Heterocyclyl-Ring bilden, wobei der

Cycloalkyl-Ring und der Heterocyclyl-Ring substituiert sein können mit 0, 1, 2 oder

3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus

Trifluormethyl, Alkyl, Alkoxy und Alkylcarbonyl,

R³ Alkyl, C₃-C₆-Cycloalkyl, 5- bis 7-gliedriges Heterocyclyl, Aryl, 5- oder 6- gliedriges Heteroaryl, Alkylcarbonyl, Alkoxycarbonyl, C₃-C₆-Cycloalkylcarbonyl,

5- bis 7-gliedriges Heterocyclylcarbonyl, Arylcarbonyl, 5- oder 6-gliedriges Heteroarylcarbonyl oder Alkylaminocarbonyl bedeutet,

und

wobei Alkylcarbonyl substituiert ist mit einem Substituenten Amino oder Alkyl- amino,

und

wobei Alkylcarbonyl substituiert sein kann mit weiteren 0, 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Trimethylsilyl, Alkoxy, Alkylthio, Benzyloxy, C₃-C₆-Cycloalkyl, Phenyl, Naphthyl, 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl, Alkylcarbonylamino,

Alkoxycarbonylamino, Arylcarbonylamino, Arylcarbonyloxy, Benzyloxycarbonyl und Benzyloxycarbonylamino,

worin Phenyl und Heteroaryl ihrerseits substituiert sein können mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Niko, Alkyl, Alkoxy und Phenyl, oder zwei Substituenten an demselben Kohlenstoffatom im Alkylcarbonyl zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, einen C₃-C₆- Cycloalkyl-Ring oder einen 5- bis 7-gliedrigen Heterocyclyl-Ring bilden,

oder

wobei der Cycloalkyl-Ring Benzo-anneliert sein kann,

R⁴ Wasserstoff, Cι-C -Alkyl, Cyclopropyl oder Cyclopropylmethyl bedeutet,

oder

R³ und R⁴ zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen 5- bis 7- gliedrigen Heterocyclyl-Ring bilden, wobei der Heterocyclyl-Ring substituiert sein kann mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Amino, Cyano, Alkyl, Alkoxy und

Alkylarnino,

und

R⁵ Wasserstoff oder Methyl bedeutet,

oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate und der Solvate ihrer Salze,

mit der Maßgabe, dass für den Fall, dass R¹ Wasserstoff, R² 2-Methylprop-l-yl, R⁴

Wasserstoff und R⁵ Methyl bedeutet und das Kohlenstoffatom, an das R¹ und R² gebunden sind, (5)-Konfϊguration hat oder dass R¹ 2-Methylprop-l-yl, R² Wasserstoff, R⁴ Wasserstoff und R⁵ Methyl bedeutet und das Kohlenstoffatom, an das R¹ und R² gebunden sind, (5)-Konfiguration hat, R³ nicht Glycyl, D-Alanyl, L-Alanyl oder D-Leucyl bedeutet, und

mit der Maßgabe, dass für den Fall, dass R¹ Wasserstoff, R² 2-Methylprop-l-yl, R⁴ Wasserstoff und R⁵ Wasserstoff bedeutet und das Kohlenstoffatom, an das R¹ und R² gebunden sind, (S)-Konfiguration hat oder dass R¹ 2-Methylprop-l-yl, R² Wasserstoff, R⁴ Wasserstoff und R⁵ Wasserstoff bedeutet und das Kohlenstoffatom, an das R¹ und R² gebunden sind, (5)-Konfiguration hat, R³ nicht D-Leucyl bedeutet.

Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass sie der Formel

entspricht, in welcher

R¹, R², R³, R⁴ und R⁵ die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben,

oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate und der Solvate ihrer Salze.

Verbindung nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass

R¹ 2-Methylprop-l-yl bedeutet,

R² Wasserstoff oder C C₄-Alkyl bedeutet,

R³ Alkyl, C₃-C6-Cycloalkyl, 5- bis 7-gliedriges Heterocyclyl, Aryl, 5- oder 6- gliedriges Heteroaryl, Alkylcarbonyl, Alkoxycarbonyl, C₃-C₆-Cycloalkylcarbonyl, 5- bis 7-gliedriges Heterocyclylcarbonyl, Arylcarbonyl, 5- oder 6-gliedriges Heteroarylcarbonyl oder Alkylaminocarbonyl bedeutet,

und

Alkoxycarbonylammo, Arylcarbonylamino, Arylcarbonyloxy, Benzyloxycarbonyl und Benzyloxycarbonylamino,

oder zwei Substituenten an demselben Kohlenstoffatom im Alkylcarbonyl zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, einen -C_ß- Cycloalkyl-Ring oder einen 5- bis 7-gliedrigen Heterocyclyl-Ring bilden,

oder

wobei der Cycloalkyl-Ring Benzo-anneliert sein kann,

R⁴ Wasserstoff, Cι-C -Alkyl, Cyclopropyl oder Cyclopropylmethyl bedeutet,

oder

R³ und R⁴ zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen 5- bis 7- gliedrigen Heterocyclyl-Ring bilden, wobei der Heterocyclyl-Ring substituiert sein kann mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Amino, Cyano, Alkyl, Alkoxy und Alkylarnino,

und

R⁵ Wasserstoff oder Methyl bedeutet.

Verbindung nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass

R¹ 2-Methylρrop-l-yl bedeutet,

R² Wasserstoff bedeutet,

R³ Ci- -Alkylcarbonyl bedeutet,

wobei Alkylcarbonyl substituiert ist mit einem Substituenten Amino,

und

wobei Alkylcarbonyl substituiert sein kann mit weiteren 0, 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Trimethylsilyl, Cι-C₄-Alkoxy, Methylhio, Benzyloxy, C₃-C₆-Cycloalkyl, Phenyl, Naphthyl, Thienyl, Pyridyl, Indolyl, - -Alkoxycarbonylamino, Benzyloxycarbonyl und Benzyloxycarbonylamino,

worin Phenyl seinerseits substituiert sein kann mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, C C -Alkyl, C C₄-Alkoxy und Phenyl,

oder zwei Substituenten an demselben Kohlenstoffatom im Alkylcarbonyl zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, einen C₃-C_Ö-

Cycloalkyl-Ring bilden,

wobei der Cycloalkyl-Ring Benzo-anneliert sein kann,

R⁴ Wasserstoff bedeutet,

und

R⁵ Methyl bedeutet.

Verbindung nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass R¹ Wasserstoff, C₃-C₆-Cycloalkyl, C₅-C₆-Cycloalkenyl, C₃-C₆-Cycloalkylmethyl, 5- bis 7-gliedriges Heterocyclylmethyl, Methyl, Ethyl, n-Propyl, iso-Propyl, 1-

Methylprop-1-yl, 2,2-Dimethylprop-l-yl, 1,1-Dimethylprop-l-yl, 1-Ethyl-prop-l- yl, 1-Ethyl-l-methylρrop-l-yl, n-Butyl, 2-Methylbut-l-yl, 3-Methylbut-l-yl, 1- Ethylbut-1-yl, tert-Butyl, 4-Methylpent-l-yl, n-Hexyl, Alkenyl oder Aryl bedeutet,

wobei R¹ substituiert sein kann mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Amino, Cyano, Trimethylsilyl, Alkyl, Alkoxy, Benzyloxy, C₃-C₆-Cycloalkyl, Aryl, 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl, Alkylarnino, Arylamino, Älkylcarbonylamino, Arylcarbonylamino, Alkylcarbonyl, Alkoxycarbonyl, Arylcarbonyl und

Benzyloxycarbonylamino,

R² Wasserstoff oder C C₄-Alkyl bedeutet,

oder

R¹ und R² zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, einen C₃-C₆-

Cycloalkyl-Ring oder einen 5- bis 7-gliedrigen Heterocyclyl-Ring bilden, wobei der Cycloalkyl-Ring und der Heterocyclyl-Ring substituiert sein können mit 0, 1, 2 oder

Trifluormethyl, Alkyl, Alkoxy und Alkylcarbonyl,

R³ Alkyl, C₃-C₆-Cycloalkyl, 5- bis 7-gliedriges Heterocyclyl, Aryl, 5- oder 6- gliedriges Heteroaryl, Alkylcarbonyl, Alkoxycarbonyl, C₃-C₆-Cycloalkylcarbonyl, 5- bis 7-gliedriges Heterocyclylcarbonyl, Arylcarbonyl, 5- oder 6-gliedriges

Heteroarylcarbonyl oder Alkylaminocarbonyl bedeutet,

wobei Alkyl, Cycloalkyl, Heterocyclyl, Aryl, Heteroaryl, Alkoxycarbonyl, Cyclo- alkylcarbonyl, Heterocyclylcarbonyl, Arylcarbonyl, Heteroarylcarbonyl und Alkylaminocarbonyl substituiert sein können mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen,

Hydroxy, Amino, Alkylarnino und Phenyl, und

und

wobei Alkylcarbonyl substituiert sein kann mit weiteren 0, 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Trimethylsilyl, Alkoxy, Alkylthio, Benzyloxy, C₃-C₆-Cycloalkyl, Phenyl, Naphthyl, 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl, Alkylcarbonylamino, Alkoxy- carbonylamino, Arylcarbonylamino, Arylcarbonyloxy, Benzyloxycarbonyl und Benzyloxycarbonylamino,

worin Phenyl und Heteroaryl ihrerseits substituiert sein können mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Niko, Alkyl, Alkoxy und Phenyl,

oder zwei Substituenten an demselben Kohlenstoffatom im Alkylcarbonyl zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, einen C₃-C₆-

Cycloalkyl-Ring oder einen 5- bis 7-gliedrigen Heterocyclyl-Ring bilden,

oder

wobei der Cycloalkyl-Ring Benzo-anneliert sein kann,

R⁴ Wasserstoff, C C₄-Alkyl, Cyclopropyl oder Cyclopropylmethyl bedeutet,

oder

R³ und R⁴ zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen 5- bis 7- gliedrigen Heterocyclyl-Ring bilden, wobei der Heterocyclyl-Ring substituiert sein kann mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Amino, Cyano, Alkyl, Alkoxy und Alkylarnino, und

R⁵ Wasserstoff oder Methyl bedeutet.

6. Verbindung nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass

R¹ Methyl, Ethyl, n-Propyl, iso-Propyl, 1-Methylprop-l-yl, 2,2-Dimethylprop-l-yl, 1,1-Dimethylprop-l-yl, 1-Ethyl-ρrop-l-yl, 1-Ethyl-l-methylprop-l-yl, n-Butyl, 2-

Methylbut-1-yl, 3-Methylbut-l-yl, 1-Ethylbut-l-yl, tert-Butyl, 4-Methylpent-l-yl oder n-Hexyl bedeutet,

wobei R¹ substituiert sein kann mit 0 oder 1 Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Trimethylsilyl, Cι-C -Alkoxy, Benzyloxy, C₃-C₆-Cycloalkyl, Phenyl, Naphthyl, Pyridyl, Indolyl, Cι-C -Alkoxycarbonyl und Benzyloxycarbonylamino,

worin Phenyl und Pyridyl ihrerseits substituiert sein können mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxy, Nkro, Cι-C -Alkyl, Cι-C₄-Alkoxy und Phenyl,

R² Wasserstoff bedeutet,

oder

R¹ und R² zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, einen C₃-Cβ- Cycloalkyl-Ring bilden, wobei der Cycloalkyl-Ring substituiert sein kann mit 0 oder 1 Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Trifluormethyl und

C C₄-Alkoxy,

R³ Cι-C₆-Alkylcarbonyl bedeutet,

wobei Alkylcarbonyl substituiert ist mit einem Substituenten Amino,

und

wobei Alkylcarbonyl substituiert sein kann mit weiteren 0, 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Trimethylsilyl, Cι-C -Alkoxy, Methylhio, Benzyloxy, C₃-C₆-Cycloalkyl, Phenyl, Naphthyl, Thienyl, Pyridyl, Indolyl, Cι-C -Alkoxycarbonylamino, Benzyloxycarbonyl und Benzyloxycarbonylamino, worin Phenyl seinerseits substituiert sein kann mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, C C₄-Alkyl, Cι-C₄-Alkoxy und Phenyl,

oder zwei Substituenten an demselben Kohlenstoffatom im Alkylcarbonyl zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, einen C₃-C₆- Cycloalkyl-Ring bilden,

wobei der Cycloalkyl-Ring Benzo-anneliert sein kann,

R⁴ Wasserstoff bedeutet,

und

R⁵ Methyl bedeutet.

7. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass eine Verbindung der Formel

in welcher

R⁵ die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung hat,

mit einer Verbindung der Formel

in welcher

R¹, R², R³ und R⁴ die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben und

X¹ Halogen oder Hydroxy bedeutet,

umgesetzt wkd.

8. Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 6 zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten.

9. Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 6 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten.

10. Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 6 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von bakteriellen Infektionen.

11. Arzneimittel enthaltend eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 6 in Kombination mit einem inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoff.

12. Arzneimittel nach Anspruch 11 zur Behandlung und/oder Prophylaxe von bakteriellen Infektionen.

13. Verfahren zur Bekämpfung von bakteriellen Infektionen in Menschen und Tieren durch Verabreichung einer antibakteriell wkksamen Menge mindestens einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 6, eines Arzneimittels nach Anspruch 11 oder eines nach Anspruch 9 oder 10 erhaltenen Arzneimittels.