WO2004051276A1 - Magnetische partikel zur abtrennung von mikroorganismen aus technischen medien - Google Patents

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WO2004051276A1
WO2004051276A1 PCT/EP2003/012915 EP0312915W WO2004051276A1 WO 2004051276 A1 WO2004051276 A1 WO 2004051276A1 EP 0312915 W EP0312915 W EP 0312915W WO 2004051276 A1 WO2004051276 A1 WO 2004051276A1
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oil
methacrylate
magnetic particles
acrylate
magnetic
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PCT/EP2003/012915
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Olaf Lammerschop
Roland Breves
Marcel Roth
Stefan Stumpe
Mirko Weide
Michael Heinzel
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Henkel Kommanditgesellschaft Auf Aktien
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    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
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    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54393—Improving reaction conditions or stability, e.g. by coating or irradiation of surface, by reduction of non-specific binding, by promotion of specific binding
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    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
    • G01N33/54326—Magnetic particles

Definitions

  • the present invention relates to new magnetic particles for separating microorganisms from technical media, processes for producing such particles and uses of such particles.
  • Magnetic polymer particles are known from the field of life sciences. They are used for the analysis, diagnosis or purification of cells and biomolecules such as antibodies or other proteins, nucleic acids and other biopolymers.
  • magnetic beads are a preferably bead-shaped particle consisting of a polymer shell and having a particle size of 1 to 100 ⁇ m, in which a magnetic colloid or a micro- or nanoparticulate magnetic substance (e.g. magnetite) is encapsulated and thus the polymer particle gives magnetic properties.
  • a magnetic colloid or a micro- or nanoparticulate magnetic substance e.g. magnetite
  • certain ligands can be chemically coupled to the polymer shell, which are capable of selectively binding the biomolecules or cells.
  • the target substances in question can be separated from the substance mixture and analyzed by magnetic separation, in the simplest case by applying a hand magnet to the reaction vessel.
  • Cell separation using magnetobeads is based on the interaction of microorganisms with the particle surface, in particular with functional groups on the surface, which interact with the cell membrane or cell wall of the microorganisms via electrostatic or van der Waals interactions.
  • State of the art are magnetic polymer particles which provide free amino or carboxyl groups directly on the particle surface for interaction with microorganisms. Leave in technical media conventional magnetic beads do not use at all or only insufficiently, since the additives and / or impurities contained in these media, such as detergents, cold flow improvers, antioxidants,
  • Corrosion protection agents primarily interact directly with the free amino or carboxyl groups on the particle surface and thus thus the capacity or the efficiency of the magnet beads for cell separation reduce drastically.
  • microbicides are added to coolants and cooling lubricants, for example, in order to kill bacteria, fungi, viruses or algae contained therein.
  • microbicides are not toxicologically and / or ecologically harmless. For this reason, many have largely disappeared from the market again (acrolein, formaldehyde, chlorophenols,
  • microbicides act undirected, i.e. they develop their effect both at the site of action (e.g. against harmful microorganisms in a cooling circuit) and subsequently against potentially useful microorganisms e.g. in a sewage treatment plant, which among other things justify the environmental concerns about many microbicides.
  • microbicides Depending on the concentration, microbicides also act not only against microbial cells such as bacteria and fungi, but also against animal and human cells. This results, among other things, in the toxicological potential of many microbicides.
  • the present invention is therefore based on the object of providing means for combating microbes in technical media which avoid the disadvantages of the prior art.
  • This object is achieved according to the invention by providing new magnetic particles for separating microorganisms from technical ones Media which are characterized in that they carry polyfunctional polymers on the surface.
  • microorganisms refers in particular to unicellular pro- or eukaryotes, preferably viruses, bacteria, fungi (including yeasts and molds) and algae in dormant, immature developmental stages and / or in the mature state.
  • “technical media” means in particular aqueous and / or oily systems such as those used, for. B. in the paint, wood, textile, cosmetics, leather, tobacco, fur, rope, paper, pulp, plastic, fuel, oil, rubber and machine industries.
  • Coolants are mentioned as examples; Lubricant; Coolants; Cooling water; Klärciesser; sewage sludge; Colours; paints; adhesives;
  • Wood treatment products mineral oils; Vegetable oils; Anti-fouling paints; Service and wash water, e.g. B. in exhaust air scrubber systems, swimming pools, water systems of pulp and paper mills and in industrial fresh water supply systems; Oil drilling fluids and muds as well as clay and pigment muds.
  • the polyfunctional polymers can be linear or branched, as in the case of hyperbranched or dendritic polymers.
  • such magnetic polymer beads according to the invention are not or only slightly influenced in their ability to interact with cells / microorganisms by the impurities or additives in technical media.
  • B. can be used in the separation of bacteria from cooling lubricants.
  • Preferred particles according to the invention contain at least one magnetic component a), embedded in a polymer matrix b) and on the surface thereof polyfunctional polymers c).
  • the magnetic component a) is preferably polymerized into the polymeric matrix b).
  • the polymer matrix b) in a first step can first be produced by polymerizing suitable monomers and in a second step polyfunctional polymers c) can be coupled to suitable reactive groups on the surface of the matrix b).
  • suitable reactive groups such as hydroxyl, halogen, amino, epoxy, isocyanate, thiol, anhydride, acid chloride and aziridino groups, which subsequently enable polyfunctional polymers to be bound.
  • polyfunctional polymers c) by copolymerizing suitable monomers for the preparation of the matrix b) with monomers or oligomers suitable for producing polyfunctional polymers c) in one step on the surface of the matrix b).
  • the polyfunctional polymers c) are dendritic polymers (dendrimers).
  • dendrimers are highly three-dimensionally ordered polymers. They can be obtained by repeated iterative reaction sequences starting from an initiator core with one or more reactive sites.
  • a magnetic core equipped with reactive groups is suitable for producing a particle according to the invention.
  • So z. B polyamidoamine (PAMAM) dendrimers, based on ammonia as a core, which is allowed to react via Michael addition with methyl acrylate (stage A).
  • the carboxyl group of the acrylate molecule is allowed to react with only one amino group of ethylenediamine (stage B).
  • the resulting triamine nucleus is called Generation 0.
  • a further repetition of stages A and B provides a hexamine, referred to as generation 1. Further repetitions of stages A and B generate higher generations, which after generation 4 lead to concentric spheres of cells, the outermost sphere carrying outwardly pointing reactive groups to which, for example, surface proteins of microbial cells can bind.
  • dendrimers described include polyethyleneimine, hydrocarbon, polyether, polythioether, polyamide, polyamido alcohol and
  • Dendrimers based on polyamide and ester can also be prepared, such as. B. from Newkome et al., J. Am. Chem. Soc, 112 (1990), 8458.
  • the use of long chain alkylene dibromide as the core provides a dendrimer in the form of two spheres linked by an alkylene chain.
  • the number of layers that can be used to construct varies with the reactants, such as the density of the packing within the dendrimer and thus the size of the channels within its branches.
  • PAMAM dendrimers have a large inner surface that increases in proportion to the outer surface with the number of generations.
  • polyether dendrimers have very little proportional inner surface that reaches a maximum in generations 3 to 4.
  • the successive layers of cells can be the same or different and mixtures of two or more reactants, such as described by Tomalia on page 148, can be used.
  • a magnetic component a) is made the center ("core") of a dendritic polymerization scheme.
  • the only requirement from the point of view of the synthesis process is that the magnetic component a) must have or have added chemical functional groups which allow the structural units for the dendritic polymer to be attached. If the magnetic component has a high symmetry of functional groups, which lend themselves well to derivatization, then the dendrimer units can be initiated directly on the magnetic component by "growing" the dendrimer main branches or “dendrons" layer by layer from the core to the outside. become.
  • the Magnetic particles according to the invention become larger when dendrimer units are added in successive layers, which is also referred to as "generations" or "shells".
  • Each new layer is added by reacting monomeric building blocks, also called “polymer units”, “repeating units” or “branch cells”, with the active sites on the previous layer.
  • polymer units also called “polymer units”, “repeating units” or “branch cells”
  • This divergent in-situ construction of the dendrons around an initiator core is known in the literature as a successful route for the production of dendritic polymers.
  • the dendrons can be manufactured separately and fed into the synthetic reaction, whereby complete dendrons are coupled to the core, that acts as an attraction.
  • This method of adding preformed dendrons to the core is also known in the literature as a successful way to make dendritic polymers, but it can produce less symmetrical but still monodisperse comb-type polymers. This process is called divergent core anchoring.
  • Convergent methods include "reiterative coupling of protected / unprotected branch cells to create a focus functionalized dendron, followed by divergent core anchoring to create different multidendron dendrimers" (Tomalia, see above). Such processes are also suitable for producing magnetic particles according to the invention.
  • the preferred active sites for expanding or “growing” the dendrons include nitrogen, sulfur, oxygen, silicon and phosphorus containing sites.
  • Such active sites on the growth dendrimer will create families of dendrimers that contain poly (amidoamines), poly (ethers), poly (siloxanes), Poly (amide alcohols), poly (amines), poly (phosphonium), poly (alkanes), poly (acrylates).
  • the active site on the end of the growth dendrimer may be the same or different in successive layers.
  • the polyfunctional polymers c) are hyperbranched polymers (hyperbranched polymers).
  • a hyperbranched polymer is less regular than a dendrimer. In terms of its properties, however, it can approach the properties of dendrimers in at least some of the desirable properties.
  • Hyperbranched polymers produced by condensation reactions are described, for example, by Kim and co-workers, J. Am. Chem. Soc. 1990, 112, 4592 and from Hawker et al., Ibid, 1991, 113.4583.
  • hyperbranched polymers based on vinyl monomers can be obtained by chain polymerization of branched vinyl monomers (US Pat. Nos. 5,587,441 and 5,587,446). Since then, various hyperbranched vinyl polymers have been made by cationic polymerization (US-A-5 587 441), by atom-transfer radical polymerization (US-A-5 763 548), by group-transfer polymerization [Muller et al., Polymer Preprint , 1997, 38 (1) 498] and by stable radical polymerization (Hawker and co-workers, J. Am. Chem. Soc. 1991, 113, 4583).
  • Hyperbranched vinyl polymers with different structures such as. B. Random copolymers (Gaynor et al., Macromolecules, 1996, 29, 1079), hyperbranched graft copolymers and hyperbranched block copolymers have been prepared by atom transfer radical polymerization processes.
  • Each of the hyperbranched polymers useful in this invention has a molecular weight of at least 200, preferably at least 500, and most preferably at least 8000.
  • the upper limit of the molecular weight can be extremely high due to the highly branched nature of the polymers. In general, however, the molecular weight is up to 10,000,000, preferably up to 1,000,000 and particularly preferably up to 100,000.
  • the polymers consist, for example, of vinyl homopolymers or copolymers, made from one or more ethylenically unsaturated polymerizable monomers, which are reacted using known polymerization processes and reaction components.
  • they can consist of addition homopolymers or copolymers (such as polyethers), made from one or more heterocyclic monomers, which are reacted with one another by known polymerization processes and using known reaction components.
  • they can be condensation type polymers (such as, for example, polyesters, polyimides, polyamides or polyurethanes), produced by known polymerization processes and using known reaction components.
  • hyperbranched materials examples include hyperbranched homopolymers and hyperbranched random copolymers as described, for example, in US-A-5,587,441 and US-A-5,587,446.
  • Hyperbranched blocks are also suitable Copolymers and hyperbranched graft copolymers.
  • Hybrid, hyperbranched block copolymers can be prepared from a "macro-initiator", for example a magnetic particle covalently linked to a hyperbranched polymer segment with multifunctional end groups, and a solution of monomers or macromonomers which are copolymerized therewith.
  • Hyperbranched graft hybrid copolymers can be prepared, for example, by radical copolymerization of a solution of at least one branching vinyl monomers and at least one non-branching vinyl macromonomer.
  • a large number of known polymerization processes can be used to produce a hyperbranched architecture in the case of hyperbranched polymers.
  • the hyperbranched segments of the hyperbranched polymers are obtained by controlled polymerization (living / controlled) of one or more special monomers (referred to herein as "branching monomers") that can be copolymerized with or without additional non-branching monomers or macromonomers.
  • Suitable polymerization processes include, but are not limited to, stable radical polymerization, atom transfer radical polymerization (referred to herein as "ATRP"), anionic polymerization, cationic polymerization, coordination polymerization, group transfer polymerization, ring-opening polymerization and condensation polymerization.
  • ATRP atom transfer radical polymerization
  • anionic polymerization cationic polymerization
  • coordination polymerization coordination polymerization
  • group transfer polymerization group transfer polymerization
  • ring-opening polymerization condensation polymerization.
  • the hyperbranched segments are obtained by a radical polymerization process, such as. B. by a polymerization with stable radicals or by an atom transfer radical polymerization (ATRP).
  • a radical polymerization process such as. B. by a polymerization with stable radicals or by an atom transfer radical polymerization (ATRP).
  • ATRP atom transfer radical polymerization
  • hyperbranched segments are obtained which are produced by the mentioned ATRP process, as described, for example, in US Pat. No. 5,763,548.
  • one or more radical polymerizable monomers are polymerized in the presence of an initiator having a radical transferable atom or group, in the presence of a transition metal compound and a ligand to produce a copolymer.
  • the ligand can consist of a nitrogen, oxygen, or phosphorus Sulfur-containing compound that coordinates in an s bond or any carbon-containing compound that coordinates in p bond to the transition metal such that direct bonds (ie, covalent bonds) between a transition metal and a growing polymer radical do not be formed.
  • hyperbranched segments can be used in the hyperbranched polymers, including, but not limited to:
  • the hyperbranched polymers useful in this invention generally have a molecular weight ranging from 200 to 10,000,000, preferably 500 to 1,000,000, and more preferably 1,000 to 100,000, and further is preferably at least 8000. Mixtures of hyperbranched polymers with the same or different molecular weights and the same or different microorganism-binding active end groups can also be used to produce the magnetic particles according to the invention.
  • the magnetic component a) can be embedded in the matrix b) by making suitably coated magnetic cores the starting point of the polymerization reaction and thus the center of the Form particles of the invention.
  • the magnetic components a) in the magnetic particles according to the invention are not in the center but at random locations within the particle.
  • the magnetic particles according to the invention are produced by copolymerization
  • At least one crosslinker with at least two non-conjugated, ethylenically unsaturated double bonds and
  • the above-mentioned components are preferably suspended in a water-immiscible organic phase and then free-radically crosslinked to form polymer particles.
  • the monomers suitable for producing the matrix b) can be the same or different from the monomers suitable for producing polyfunctional polymers c). It is therefore also possible according to the invention to construct matrix b) from polyfunctional polymers.
  • Monomers which can be used according to the invention for the preparation of the matrix b) are, for example, acrylic acid, methacrylic acid, acrylamide, methacrylamide, ethyl methacrylate, allyl methacrylate, benzyl methacrylate, cyclohexyl methacrylate, 2- Ethylhexyl methacrylate, i-butyl methacrylate, isodecyl methacrylate, methyl methacrylate, methacrylonitrile, n-butyl methacrylate, n-hexyl methacrylate, stearyl methacrylate.
  • the basic acrylates and methacrylates are preferably used in the form of their salts with strong mineral acids, sulfonic acids or carboxylic acids or in quaternized form.
  • Preferred monomers for the preparation of the matrix b) are acrylic acid, methacrylic acid, acrylamide, methacrylamide and ethyl methacrylate.
  • Monomers suitable for the preparation of polyfunctional polymers c) are, for example, 1,3-butanediol dimethacrylate, 1,4-butanediol dimethacrylate, 1,6-hexanediol dimethacrylate, 2-dimethylaminoethyl methacrylate, 2-hydroxyethyl acrylate, 2-hydroxyethyl methacrylate, 2-trimethylammoniumethyl methacrylamino propyl acrylate, 3 Trimethylammonium propyl methacrylamide chloride, butyl diglycol methacrylate, diethylene glycol dimethacrylate,
  • the acid groups of the abovementioned acids can be used in the polymerization either in non-neutralized form or in partially or up to 100% neutralized form.
  • Preferred monomers for the production of polyfunctional polymers c) are
  • These monomers can be copolymerized with one another in any ratio, particularly preferably using partially neutralized acids.
  • the monomers for the preparation of polyfunctional polymers c) are used in an amount of 30 to 95% by weight, preferably 40 to 90% by weight, in particular 50 to 85% by weight, based on the total amount of monomers used.
  • Polyfunctional polymers c) preferred according to the invention are polyethyleneimines, polyethyleneamines and polyacrylates.
  • the mixture to be polymerized contains at least one crosslinker with at least two non-conjugated, ethylenically unsaturated double bonds.
  • Suitable crosslinkers are, for example, N, N'-methylenebisacrylamide, polyethylene glycol diacrylates and polyethylene glycol dimethacrylates, which are each derived from polyethylene glycols with a molecular weight of 120 to 8500, preferably 400 to 2000, trimethylolpropane triacrylate,
  • Trimethylolpropane trimethacrylate ethylene glycol diacrylate
  • acrylic acid or methacrylic acid esterified polyhydric alcohols such as glycerol or pentaerythritol, triallylamine, tetraallylethylened
  • water-soluble crosslinking agents are used, e.g. B. 1, 1, 1, tris (hydroxymethyl) propane triacrylate, 3- (acryloyloxy) -2-hydroxypropyl methacrylate, methacrylic acid allyl ester, acrylic acid vinyl ester N, N'-methylene-bisacrylamide,
  • crosslinkers Compounds which contain at least one polymerizable ethylenically unsaturated group and at least one further functional group are also suitable as crosslinkers.
  • the functional group of these crosslinkers must be able to react with the functional groups, essentially the carboxyl groups or sulfonic acid groups, of the monomers suitable for the preparation of polyfunctional polymers c) and / or of the monomers suitable for the preparation of the matrix b).
  • Suitable functional groups are e.g. B. hydroxyl, amino, epoxy, isocyanate, ester, amide and aziridino groups.
  • crosslinkers are those compounds which carry at least two of the aforementioned functional groups and which can react with carboxyl and sulfonic acid groups of the monomers suitable for the preparation of polyfunctional polymers c) and / or the monomers suitable for the preparation of the matrix b).
  • crosslinkers examples include ethylene glycol, diethylene glycol, triethylene glycol, tetraethylene glycol, polyethylene glycol, glycerol, polyglycerol, propylene glycol, diethanolamine, triethanolamine, polypropylene glycol,
  • Polypropylene glycol diglycidyl ether polyaziridine compounds such as 2,2-bishydroxymethylbutanoltris [3- (l-aziridinyl) propionate], 1,6-hexamethylene-diethyleneurea, diphenylmethane-bis ⁇ '- N.N'-diethylene urea,
  • Halogenepoxy compounds such as epichlorohydrin and a-methylfluorohydrin, polyisocyanates such as 2,4-tolylene diisocyanate and hexamethylene diisocyanate, alkylene carbonates such as 1, 3-dioxolan-2-one and 4-methyl-1, 3-dioxolan-2-one, polyquaternary amines such as condensation products of dimethylamine with epichlorohydrin, homopolymers and copolymers of diallyldimethylammonium chloride and homopolymers and copolymers of dimethylaminoethyl (meth) acrylate, which are optionally quaternized with, for example, methyl chloride.
  • polyisocyanates such as 2,4-tolylene diisocyanate and hexamethylene diisocyanate
  • alkylene carbonates such as 1, 3-dioxolan-2-one and 4-methyl-1, 3-dioxolan-2-one
  • polyquaternary amines
  • crosslinkers are polyvalent metal ions, which are able to form ionic crosslinks.
  • examples of such crosslinkers are magnesium, calcium, barium and aluminum ions. These crosslinkers are added, for example, as hydroxides, carbonates or hydrogen carbonates to the aqueous polymerizable solution.
  • crosslinkers are multifunctional bases, which are also able to form ionic crosslinks, for example polyamines or their quaternized salts.
  • polyamines are ethylenediamine, diethylene triamine, triethylene tetramine, tetraethylene pentamine, pentaethylene hexamine and polyethyleneimines, and polyvinylamines each with molecular weights of up to 4,000,000.
  • crosslinkers can be used individually or in mixtures.
  • the crosslinking agents are particularly preferred in an amount of 0.1 to 60% by weight, preferably 1 to 50% by weight, in particular 1.5 to 40% by weight, preferably 2 to 35% by weight preferably from 3 to 30% by weight, based on the total amount of monomers used.
  • water-soluble initiators is preferred.
  • mixtures of different polymerization initiators e.g. B. mixtures of hydrogen peroxide and sodium or potassium peroxydisulfate. Mixtures of hydrogen peroxide and sodium peroxydisulfate can be used in any ratio.
  • Suitable organic peroxides are, for example, acetylacetone peroxide, methyl ethyl ketone peroxide, tert-butyl hydroperoxide, cumene hydroperoxide, tert-amyl perpivalate, tert-butyl perpivalate, tert-butyl pemeohexanoate, tert-butyl perisobutyrate, tert-butyl per-2-ethylhexanoate , tert-butyl perisononanoate, tert-butyl permaleate, tert-butyl perbenzoate, tert-butyl per-3,5,5-trimethylhexanoate and tert-amyl perneodecanoate.
  • Particularly suitable polymerization initiators are N, N, N ', N'-tetramethylethylenediamine (TEMED) and ammonium persulfate (APS), the combined addition of which can significantly accelerate the polymerization.
  • TEMED N, N, N ', N'-tetramethylethylenediamine
  • APS ammonium persulfate
  • the preferred concentrations of TEMED and APS (40% aqueous solution), based on the monomer phase, are in the range of 1-10% by volume for TEMED and 1-20% for APS, with an increasing concentration of TEMED and APS generally is accompanied by a proportional increase in the rate of polymerization. It could be shown that the polymerization acceleration described above only occurs if the APS addition occurs before the TEMED addition. In this way, the polymerization and thus the bead formation can be completed within a few minutes.
  • water-soluble azo starters e.g. B. N, N-azobisisobutyronitrile (AIBN), 2,2'-azobis- (2-amidinopropane) dihydrochloride, 2,2'-azobis (N, N'-dimethylene) iso-butyramidine dihydrochloride, 2- (Carbamoylazo) isobutyronitrile, 2,2'-azobis [2- (2'-imidazolin-2-yl) propane dihydrochloride and 4,4'-azobis (4-cyanovaleric acid).
  • AIBN N-azobisisobutyronitrile
  • 2,2'-azobis- (2-amidinopropane) dihydrochloride 2,2'-azobis (N, N'-dimethylene) iso-butyramidine dihydrochloride
  • 2- (Carbamoylazo) isobutyronitrile 2,2'-azobis [2- (2'-imidazolin-2-yl) propane dihydrochloride
  • Redox catalysts can also be used as initiators.
  • Redox catalysts contain as oxidizing component at least one of the above per compounds and as reducing component z.
  • Ascorbic acid or sodium sulfite is preferably used as the reducing component of the redox catalyst.
  • the oxidizing component of the redox catalyst one or more water-soluble azo starters can also be used.
  • polymerization initiators mentioned are used in customary amounts, which can be suitably adapted by the person skilled in the art depending on the desired course of the reaction.
  • Magnetic components a) which are suitable according to the invention are, in particular, magnetic colloids or magnetic powders.
  • ferro-, ferri- or superparamagnetic substances which enter into a homogeneous mixture with the monomer phase can be used as magnetic colloids or magnetic powder.
  • Substances of this type are commercially available, for example, under the trade name Bayferrox.
  • the production of such colloids is general prior art and has been described, inter alia, by Shinkai et al., Biocatalysis, Vol. 5, 1991, pp61, Reimers and Khalafalla, Br. Patent 1, 439,031 or Kondo et al., Appl. Microbiol. Biotechnol., Vol 41, 1994, pp 99.
  • the concentrations of the colloids in the polymer phase are preferably in the range from about 1 to about 40% by volume, in particular 5 to 10% by volume, in the case of the colloids which, as a result of the preparation, are already present as aqueous colloids, and in the range from about 1 to about 20% by weight, in particular 5 to 10% by weight, of the solid substances.
  • the magnetic properties of the polymer particles according to the invention are achieved by directly admixing a suitable magnetic colloid or magnetic powder before the suspension to the monomer phase.
  • a suitable magnetic colloid or magnetic powder before the suspension to the monomer phase.
  • the possibility of precise metering of the magnetic substance enables the magnetic properties of the polymer particles to be set or changed in a targeted manner.
  • the monomer mixture In order to ensure the most finely dispersed, uniform distribution of the magnetic particles in the polymer, it is advantageous to briefly sonicate the monomer mixture using an ultrasound finger or in an appropriate ultrasound bath or, for example, by using conventional homogenizers, to apply high shear forces to the mixture.
  • those substances can also be added to the magnetic powders which have emulsion-stabilizing properties and thereby promote a more homogeneous distribution of the magnetic substances in the monomer phase.
  • Substances of this type are, for example, poly-N-vinylpyrrolidone, cellulose acetate butyrate, serum albumin, aliphatic and aromatic sulfonic acid derivatives, gelatin or polyethylene glycols.
  • the amounts of the emulsifiers used are usually in the range from about 0.5 to about 5% by weight, based on the magnetic substance used.
  • the homogeneous distribution of the magnetic substances in the monomer phase can also be promoted, for example, by allowing high shear forces to act on the mixture. Homogenizers known to those skilled in the art are used for this.
  • Examples include:
  • These devices are usually operated at speeds of 1000 to 25,000 per minute, preferably 2000 to 25,000 per minute.
  • the high shear forces can also Pressurizing the mixture under high pressure through a narrow gap or through small diameter nozzles, colloid mills, or other suitable homogenizers.
  • the particles produced according to the invention preferably have a particle size in the range from approximately 1 to approximately 100 ⁇ m, preferably 1 to 60 ⁇ m, in particular 10 to 40 ⁇ m.
  • oils preferably mineral oil, animal or vegetable oils (vegetable oils) as a suspension medium with a viscosity in the range from 25 to 150 mPa-s, in particular in the range from 30 to 80 mPa-s (or centipoise) possible.
  • the monomer phase is preferably prepolymerized for about 5 to about 180 seconds before being suspended in the organic phase.
  • Oils which can preferably be used according to the invention are selected from a) mineral oils, ie liquid distillation products which have been obtained from mineral raw materials (petroleum, lignite and hard coal, wood, peat) and which consist essentially of mixtures of saturated hydrocarbons, b) oils of animal origin , in particular technical fish oils, such as capelin oil, herring oil, mackerel oil, orange-roughy oil, sardine oil, tuna oil and others, and c) oils of vegetable origin, in particular apricot kernel oil, argan oil, avocado oil, babassu oil, cottonseed oil, borage seed oil, calendula oil, camelina oil, peanut oil Deep-frying oil, rosehip seed oil, hemp oil, hazelnut oil, currant seed oil, St.
  • mineral oils ie liquid distillation products which have been obtained from mineral raw materials (petroleum, lignite and hard coal, wood, peat) and which consist essentially of mixtures of saturated hydrocarbons
  • oils of animal origin in particular
  • the polymerization reaction is preferably carried out in a manner known to the person skilled in the art, either in the batch reactor, in the continuous flow tube, in the stirred tank cascade or in the continuous stirred tank reactor.
  • the boiler reactors have gained the greatest importance in the chemical industry because they have a very high degree of flexibility with regard to the operating conditions and the mode of operation and can be adapted to almost all process requirements.
  • Stirred tank reactors are suitable for discontinuous and continuous operation and they have a wide range of applications, from the laboratory tank to the large reactor. Stirred tank reactors are available in a standardized design for numerous applications in a wide variety of materials and material combinations. Stirred tank reactors are easy to walk on and clean and allow a relatively simple switch to other polymerization reactions (see e.g. Ullmann, Volume 3, 4th ed., Pp. 505-510).
  • the reactor containers suitable for carrying out the process according to the invention have stirring devices, which usually consist of a stirrer driven by an agitator shaft and, for certain applications, also have stators for better mixing serve as baffle.
  • the stirrers themselves are attached to mostly vertical stirrer axes, which project either from below or from above into the generally cylindrical reactor vessel. Centric installation from above into the reactor vessel is generally preferred, since the stirrer shaft can be sealed relatively easily.
  • a wide variety of stirrers for example propeller stirrers, disc stirrers, anchor stirrers, impeller stirrers, blade stirrers, MIG stirrers, etc., are known from the prior art.
  • the suspension process is preferably carried out using a conventional propeller stirrer.
  • stirring speeds between 1000 and 4000 rpm. required, with a direct proportionality between the stirring speed and the fineness of the particles.
  • Particle sizes of ⁇ 10 ⁇ m can be consistently achieved with stirring speeds of> 2000 rpm. and those> 10 ⁇ m with stirring speeds of ⁇ 1000-2000 rpm. achieve.
  • Protective colloids, polymerization accelerators or emulsifiers are particularly suitable as further constituents which can be used according to the invention. These are known from the prior art and can be added by the person skilled in the art to the reaction as needed, although their use - as already described above - is not preferred.
  • a further constituent which is preferred according to the invention, on the other hand, is pyrrolidone, which can be added to the mixture to be polymerized in order to increase the swellability of the particles according to the invention, as a result of which their surface area is additionally increased.
  • the magnetic particles according to the invention can essentially be completely recovered by application of a magnetic field.
  • the particles according to the invention are preferably recovered by means of acidic or basic rinsing solutions in the pH range from about 3 to 12, in particular 6 to 10.
  • acidic or basic rinsing solutions in the pH range from about 3 to 12, in particular 6 to 10.
  • the person skilled in the art will set a suitable pH range on the polyfunctional polymers c) depending on the reactive groups chosen.
  • the magnetic particles according to the invention are suitable for removing microbial growth from all technical media in which microorganisms are undesirable, e.g. B. in aqueous systems in a number of industrial applications such as papermaking.
  • a number of important industries are severely affected by the activity of these bacteria, algae and fungi on the raw materials used, on various aspects of their manufacturing activities or on the end products produced. These industries include the paint, wood, textile, cosmetic, leather, tobacco, fur, rope, paper, pulp, plastic, fuel, oil, rubber and machine industries.
  • Important applications of the magnetic particles according to the invention include: removal of bacteria and fungi from coolants, lubricants, cooling lubricants, aqueous paints, adhesives, latex emulsions and potting compounds; Bohrölentkeimung; Control of slime-producing bacteria and fungi in pulp and paper mills and cooling water; in disinfection processes in spray or immersion treatment for textiles and leather to prevent mold growth; Disinfection of anti-decay paints to prevent the attachment of putrefactive organisms; Protection of processing equipment from slime deposits in the production of cane and beet sugar; Prevention of the accumulation and deposition of microorganisms in exhaust air scrubber systems and in industrial fresh water supply systems; combating contamination and deposition of microorganisms in oil drilling fluids and muds as well as in secondary petroleum treatment processes; Inhibition of bacterial and fungal growth in paper coating processes, which affects the quality of the Can affect paper coating; combating bacterial and fungal growth and deposits in the manufacture of various special cardboards, e.
  • clay and pigment sludge Another important area in which the control of bacterial and fungal growth is crucial is the clay and pigment sludge.
  • These slurries consist of different clays, e.g. B. kaolin, and pigments, e.g. B. calcium carbonate and titanium dioxide. They are usually manufactured in a location that is different from that of their final use, e.g. B. is removed in the paper coating and paint production and then stored for later transport to the end use location.
  • the high quality standards for the paper and paint end products in which the slurry is used require that the clay or pigment slurry have a very low microorganism content so that it can be used for paper coating or paint production.
  • CIP Cleaning in Place
  • cooling systems such as those with circulation cooling towers.
  • These systems expose a large amount of water to the atmosphere for a significant length of time under conditions that do not include adequate ventilation and exposure to sunlight to control microbial growth, particularly bacterial and fungal growth.
  • Many cooling towers also use a filling of beads made of synthetic polymer or other materials to increase the heat exchange surface. This design exacerbates the problem of microbial growth because it provides the ideal physical environment for the growth of troublesome microbes.
  • These microorganisms thrive unchecked and produce colonies sufficient to block the heat exchange surfaces with a biofilm and to clog the components of the water transport device used to operate the cooling system.
  • the magnetic particles of the invention provide excellent microbial growth control in these systems.
  • the magnetic particles according to the invention are also suitable for combating the harmful effects of microorganisms in water or aqueous media.
  • Systems that use circulating water or circulating aqueous media are infected with microorganisms and their effectiveness is significantly impaired if microorganism deposits accumulate in the system.
  • the deposits called slime cover the walls of containers and other vessels, any machinery and processing equipment used, and create blockages in pipes and valves.
  • the formation of slime promotes the corrosion of metal surfaces and facilitates the rotting of wooden towers.
  • the slimes also create discoloration and other defects in all manufactured products and force costly business interruptions.
  • the control of microorganisms in aqueous media is particularly important when there are dispersed particles or fines, e.g. B. dispersed cellulose fibers and dispersed fillers and pigments in paper manufacture and dispersed pigments in paint manufacture.
  • the magnetic particles according to the invention can be used in pure form or in combination with conventional microbicidal agents, for example in combination with sterilizing, disinfecting, impregnating or preserving agents which, owing to the advantageous action of the magnetic particles according to the invention, only in low doses if at all must be used.
  • the combined use of the magnetic particles according to the invention with microbicidal agents can take place at different times, e.g. B. by first freeing a cooling lubricant with the aid of the magnetic particles of the invention from microbes and then adding a low-dose preservative for the purpose of preservation.
  • the simultaneous use of the magnetic particles according to the invention with microbicidal agents is preferred, since the particles according to the invention - in contrast to magnetobeads from the prior art - are largely insensitive to chemical or mechanical contamination of the technical media to be decontaminated.
  • the present invention therefore furthermore relates to microbicidal mixtures or microbicidal compositions comprising magnetic particles according to the invention and microbicidal agents.
  • microbicidal agents which may be present in the mixtures according to the invention are, for example
  • Oxidizing biocides chlorine and bromine-releasing compounds, chlorine dioxide, ozone, permanganate and peroxides,
  • non-oxidizing biocides aldehydic agents, quaternary ammonium compounds, isothiazolone compounds as well
  • microbicidal active ingredients such as.
  • the mixtures intended for practical use still contain a total of 0 to about 99, preferably 90 to 10% by weight of further commonly used constituents which are selected depending on the intended form of use and the intended use.
  • water-miscible organic solvents are suitable as solvents, for example ethanol, isopropanol and ethylene glycol, propylene glycol, ethylethylene glycol, propylpropylene glycol 20 and water-immiscible solvents such as white spirit, benzene, toluene, ethyl acetate or dimethylene chloride.
  • the mixtures according to the invention can also contain surfactants, in particular nonionic surfactants.
  • suitable surfactants are C8-C18-alkyl glucosides with about 1 to 10 glucose units in the molecule, addition products of 4 to 40, preferably 4 to 20, moles of ethylene oxide with one mole of fatty alcohol, alkylcyclohexanol, alkylphenol, fatty acid, fatty acid amide or alkanesulfonamide.
  • Addition products of 5 to 16 moles of ethylene oxide with coconut or tallow fatty alcohols, with oleyl alcohol, a mixture of oleyl alcohol and cetyl alcohol and with mono-, di- or trialkylphenols and with monoalkylcyclohexanols with 6 to 14 carbon atoms in the alkyl radicals are of particular interest.
  • Mixed addition products of ethylene oxide and propylene oxide onto the compounds mentioned with an active hydrogen atom are also suitable.
  • the alkoxylation products mentioned can also be end-capped, for example by ether or acetal groups.
  • Builders may also be present in the mixtures according to the invention; Suitable as such are, for example, alkali metal salts of gluconic acid, in particular sodium gluconate, the alkali metal salts of nitrilotriacetic acid, ethylenediaminetetraacetic acid, hydroxyethane diphosphonic acid, phosphonobutane tricarboxylic acid, lactic acid, citric acid or tartaric acid.
  • Water-soluble salts of higher molecular weight polycarboxylic acids such as polymers of maleic acid, itaconic acid, fumaric acid and citraconic acid, are also suitable as builders.
  • Copolymers of these acids with one another or with other polymerizable monomers such as, for example, ethylene, propylene, acrylic acid, vinyl acetate, isobutylene, acrylamide and styrene
  • ethylene, propylene, acrylic acid, vinyl acetate, isobutylene, acrylamide and styrene can be used.
  • Cleaning enhancers such as fatty acid mono- and diethanolamides, for example coconut fatty acid monoethanolamide and coconut fatty acid diethanolamide, and addition products of up to 4 moles of ethylene oxide or propylene oxide with fatty alcohols with 8 to 12 carbon atoms and free fatty alcohols with 8 to 12 carbon atoms as well as cleaning enhancers based on cellulose can also be incorporated into the mixtures according to the invention ,
  • B. pyrethroids (permethrin, cypermethrin, decamethrin and fenvalerate) and / or lindane, endosulfan, dieldrin can be incorporated into the mixtures according to the invention.
  • solid products preferably in powder or granule form, which contain the antimicrobially active mixtures according to the invention can also be provided for the production of ready-to-use preservatives.
  • the magnetic particles according to the invention can be separated from the antimicrobially active mixtures by simple application of a magnetic field, even in the solid phase.
  • Tetrahydrofuran, Bayferrox 318 (Bayer) and monomers (ethylene glycol dimethacrylate, glycidyl methacrylate, vinyl pyrrolidone) are mixed in a 250 ml three-necked flask with a reflux condenser and gassed with nitrogen through an inlet tube for 15 min with stirring. The dispersion is heated under reflux, stirred and the reaction started with AIBN. After 24 hours, a solution of diethylamine and THF is added and the mixture is heated under reflux for a further 6 hours. To purify the particles, they are washed five times with 0.1 M hydrochloric acid and five times with water. The particles are dried in a vacuum drying cabinet at 50 ° C.
  • Iron (III) chloride is dissolved in 90 ml of deionized water. Iron (II) chloride is concentrated in a separate beaker in a mixture of 5 ml. Hydrochloric acid and 10 ml of deionized water dissolved. Another solution is concentrated from 650 ml deionized water and 125 g. Ammonia produced. Before the iron salt solution is poured into the alkaline receiver with vigorous stirring, the iron salt solutions are combined. Oleic acid is then added to the suspension with vigorous stirring and heated to 90 ° C. for one hour. The foamy suspension is then stirred with conc. Hydrochloric acid added (about 10 ml) until the coated particles settle completely on the bottom. The precipitate is washed 5 times with deionized water. The paste is dried in vacuo at 60 ° C.
  • Tetrahydrofuran, Bayferrox and monomers (ethylene glycol dimethacrylate, glycidyl methacrylate, vinyl pyrrolidone) are mixed in a 1000 ml three-necked flask and gassed with nitrogen through an inlet tube for 15 min. The temperature of the monomer dispersion is raised to 65 ° C. with stirring and started by adding AIBN. After 6 hours, a solution of Lupasol FG and THF is added and the mixture is heated under reflux for a further 6 hours. The particles are washed with ethanol, 0.01 M hydrochloric acid, 0.1 M ammonia solution and deionized water. The particles are dried in a vacuum drying cabinet at 80 ° C.
  • Tetrahydrofuran, ferrofluid paste and monomers (ethylene glycol dimethacrylate, glycidyl methacrylate, vinyl pyrrolidone) are mixed in a 1000 ml three-necked flask and gassed with nitrogen through an inlet tube for 15 min. The temperature of the monomer dispersion is raised to 65 ° C. with stirring and by means of AIBN addition started. After 6 hours, a solution of Lupasol FG and THF is added and the mixture is heated under reflux for a further 6 hours. The particles are washed with ethanol, 0.01 M hydrochloric acid, 0.1 M ammonia solution and deionized water. The particles are dried in a vacuum drying cabinet at 80 ° C.
  • a non-polar phase consisting of 300 ml of vegetable oil is placed in a suspension reactor.
  • a solution of 4 ml of water, 10 ml of dimethylaminoethyl methacrylate, 1 ml of methylene bisacrylamide, 6 ml of acrylamide and 5 ml of ferrofluid EMG 707 (Ferrotec) is dispersed in the vegetable oil with vigorous stirring.
  • 0.2 ml of 1.8 M ammonium peroxodisulfate solution is added with vigorous stirring and then the polymerization is started by adding the catalyst 0.1 ml of N, N, N ', N'-tetramethylethylene diamine.
  • the suspension is stirred for 10-30 minutes.
  • the magnetic beads are then separated off, washed with water and used in suspension or as a dried powder.
  • Example 9 Cell separation from contaminated solution
  • Modified Magnetobeads are suitable due to their functionalized, porous surface for cell separation, e.g. B. for cell depletion of microbially contaminated products or systems that are subject to a longer service life.
  • the following test approach was established to check the biological activity:
  • the germs to be used are isolated from a cooling lubricant (eg Pseudomonas aeruginosa).
  • the respective germ is incubated overnight in Caso nutrient medium at 30 ° C (depending on the germ at 30 ° C or 37 ° C) (1st passage).
  • the next day germs are transferred from the grown liquid culture into fresh Caso nutrient medium and again incubated overnight. From this second passage, a bacterial count of 10 7 is set for the test.
  • the Magnetobeads are weighed 1% or 5% into the buffer.
  • Phosphate buffer is used for the neutral to basic range
  • acetate buffer for the neutral to acid range, which is mixed with sterile 1 N NaOH solution.
  • test batches in the shaking flask, between 20-40 ml
  • the test batches are inoculated with 1% with the germ suspension set to 10 7 (germ count in the test batch 10 5 ) and shaken at room temperature at 150 rpm.
  • Samples are taken after 1h, 3h and 24h or 48h.
  • the shaking flasks are placed on a magnet, the magnetobeads are separated and 1 ml of the particle-free supernatant is pipetted into 9 ml of the inactivator solution.
  • the subsequent dilution series is carried out in tryptone-NaCl solution. 1ml samples are taken from this dilution series and medium is added using the plate casting method.
  • the resulting plates are incubated for 24 hours and then counted.
  • Fig. 1 Separation of P. aeruginosa from phosphate buffer
  • cooling lubricant mixtures mixture of various KSM products
  • Dominant germs in these mixtures are usually pseudomonas.
  • the procedure corresponds to that described under 1, except that the germs are already included (in the KSM).
  • the batches were adjusted to pH 9 with 1M monoethanolamine and 1N HCl.
  • the respective control (without magnetobead) receives the same amount of monoethanolamine or HCl in order to rule out the effects of these chemicals on microbial growth.
  • Example 1-4 do not separate any germs from the KSM solution (not shown), while the particle described in Example 6/7 causes a germ reduction of approximately three log steps after 24 hours (from 10 6 to 10 3 Germs / ml, Fig. 2).
  • the latter has a denser surface finish with functional groups, which presumably also enable interaction with germs in emulsions such as KSM and thus an improved separation capacity.
  • thermophilic Bacillus or Pseudomonas putida is adapted to the neutral cleaner as germs and then separated by adding magnetobeads (Example 6/7).
  • the efficiency of the particles therefore depends not only on the surface finish, but also on the product matrix to be examined.

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Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft neue magnetische Partikel zur Abtrennung von Mikroorganismen aus technischen Medien, Verfahren zur Herstellung solcher Partikel sowie Verwendungen solcher Partikel.

Description

Beschreibung:
MAGNETISCHE PARTIKEL ZUR ABTRENNUNG VON MIKROORGANISMEN AUS TECHNISCHEN MEDIEN
Die vorliegende Erfindung betrifft neue magnetische Partikel zur Abtrennung von Mikroorganismen aus technischen Medien, Verfahren zur Herstellung solcher Partikel sowie Verwendungen solcher Partikel.
Magnetische Polymerpartikel sind aus dem Bereich der Biowissenschaften bekannt. Sie werden für die Analyse, Diagnostik oder Aufreinigung von Zellen und Biomolekülen wie Antikörpern oder anderen Proteinen, Nukleinsäuren und anderen Biopolymeren eingesetzt.
Bei diesen sogenannten Magnetbeads handelt es sich um ein aus einer Polymerhülle bestehendes, vorzugsweise periförmiges Partikel mit einer Teilchengröße von 1 bis 100 μm, in das ein magnetisches Kolloid oder eine mikro- bzw. nanopartikuläre magnetische Substanz (z.B. Magnetit) eingekapselt ist und so dem Polymerteilchen magnetische Eigenschaften verleiht. Zur Auftrennung von Biomolekülen oder Zellen können bestimmte Liganden ("Fängermoleküle") an die Polymerhülle chemisch gekoppelt werden, die die Biomoleküle oder Zellen selektiv zu binden vermögen. Durch magnetische Separation, im einfachsten Fall durch Anlegen eines Handmagneten an das Reaktionsgefäß, können die betreffenden Zielsubstanzen aus dem Substanzgemisch abgetrennt und analysiert werden.
Die Zellabtrennung mittels Magnetobeads beruht auf der Wechselwirkung von Mikroorganismen mit der Partikeloberfläche im speziellen mit funktioneilen Gruppen auf der Oberfläche, die über elektrostatische bzw. van-der-Waals Wechselwirkungen mit der Zellmembran bzw. der Zellwand der Mikroorganismen interagieren. Stand der Technik sind magnetische Polymerpartikel, die freie Amino- oder Carboxylgruppen direkt auf der Partikeloberfläche zur Wechselwirkung mit Mikroorganismen bereitstellen. In technischen Medien lassen sich herkömmliche Magnetbeads gar nicht oder nur unzureichend einsetzen, da die in diesen Medien enthaltenen Additive und/oder Verunreinigungen, wie beispielsweise Detergentien, Kaltfließverbesserer, Antioxidantien,
Korrosionsschutzmittel, Enttrübungsmittel, Demulgatoren, Metalldesaktivatoren, Antischaummittel, Dispergiermittel, Schmierfähigkeitsverbesserer, Antistatikmittel, Viskositätsmodifizierungsmittel, Biozide sowie Öle oder Fette, vorrangig mit den freien Amino- oder Carboxylgruppen direkt auf der Partikeloberfläche wechselwirken und somit somit die Kapazität bzw. die Effizienz der Magnetobeads zur Zellseparation drastisch reduzieren.
Technische Medien werden nach dem Stand der Technik durch Zugabe antimikrobieller Mittel, sogenannter Mikrobizide, entkeimt. Diese werden beispielsweise Kühlmitteln und Kühlschmiermitteln zugesetzt, um darin enthaltene Bakterien, Pilze, Viren oder Algen abzutöten.
Viele Mikrobizide sind jedoch toxikologisch und/oder ökologisch nicht unbedenklich. Etliche sind deswegen sogar wieder weitgehend vom Markt verschwunden (Acrolein, Formaldehyd, Chlorphenole,
Schwermetallverbindungen). Andere jedoch werden weiterhin eingesetzt, z. B. bromorganische und schwefelorganische Verbindungen.
Der Einsatz üblicher Mikrobizide ist jedoch mit weiteren nicht unerheblichen Problemen verbunden, die bislang nicht zufriedenstellend gelöst werden konnten.
Gängige Mikrobizide wirken ungerichtet, d.h. sie entfalten ihre Wirkung sowohl am Wirkort (z.B. gegen schädliche Mikroorganismen in einen Kühlkreislauf) als auch anschließend gegen möglicherweise nützliche Mikroorganismen z.B. in einer Kläranlage, woraus sich u.a. die ökologischen Bedenken gegen viele Mikrobizide begründen.
Mikrobizide wirken, konzentrationsabhängig, auch nicht nur gegen mikrobielle Zellen, wie z.B. Bakterien und Pilze, sondern auch gegen tierische und menschliche Zellen. Hieraus resultiert u.a. das toxikologische Potential vieler Mikrobizide.
In Kreislaufsystemen kann außerdem gegenüber jedem der vorgenannten Wirkstoffe nach einiger Zeit eine gewisse Immunität eintreten. Hierfür gibt es im wesentlichen zwei Gründe.
1. Selektion: In wasserführenden Systemen können viele Arten von Mikroorganismen auftreten, die auf bestimmte biozide Wirkstoffe unterschiedlich empfindlich reagieren. Die Beseitigung einiger Arten kann für andere mit höherer Widerstandsfähigkeit die Erweiterung ihres Lebensraumes bewirken, so daß langfristig nur eine Veränderung der Artenzusammensetzung erreicht wird.
2. Adaptation: Mikroorganismen haben, begünstigt durch ihren kurzen Generationswechsel, eine bemerkenswerte Eigenschaft, sich veränderten Lebensbedingungen anzupassen. So reagieren z.B. manche Bakterienarten auf Zellgifte mit erhöhter Glycogenproduktion und bauen auf diese Weise eine Schutzhülle auf.
Eine derartige Ausbildung weniger empfindlicher Arten und Stämme führt allmählich zu einer Einschränkung der Wirksamkeit von Bioziden.
Durch eine Optimierung der Dosierintervalle und gelegentlichen Wechsel der Wirkstoffe können derartige Nachteile jedoch nur unvollkommen vermieden werden.
Der vorliegenden Erfindung liegt daher die Aufgabe zugrunde, Mittel zur Bekämpfung von Mikroben in technischen Medien bereitzustellen, die die Nachteile des Standes der Technik vermeiden.
Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß gelöst durch die Bereitstellung neuer magnetischer Partikel zur Abtrennung von Mikroorganismen aus technischen Medien, die dadurch gekennzeichnet sind, daß sie auf der Oberfläche polyfunktionale Polymere tragen.
Im Rahmen der vorliegenden Erfindung bezeichnet der Begriff "Mikroorganismen" insbesondere einzellige Pro- oder Eukaryonten, vorzugsweise Viren, Bakterien, Pilze (einschließlich Hefen und Schimmelpilze) und Algen in ruhenden, unreifen Entwicklungsstufen und/oder im reifen Zustand.
"Technische Medien" bedeutet im Rahmen der vorliegenden Erfindung insbesondere wässrige und/oder ölige Systeme, wie sie z. B. in der Farben-, Holz- , Textil-, Kosmetik-, Leder-, Tabak-, Pelz-, Seil-, Papier-, Zellstoff-, Kunststoff-, Treibstoff-, Öl-, Kautschuk- und Maschinenindustrie eingesetzt werden. Beispielhaft genannt seien Kühlmittel; Schmiermittel; Kühlschmiermittel; Kühlwässer; Klärwässer; Klärschlämme; Farben; Lacke; Klebstoffe;
Polymerdispersionen; Latexemulsionen und Vergussmassen;
Holzbehandlungsmittel; Mineralöle; Pflanzenöle; Antifäulnisfarben; Brauch- und Waschwässer, z. B. in Abluftwäscher-Systemen, Schwimmbädern, Wassersystemen von Zellstoff- und Papiermühlen und in industriellen Frischwasserversorgungssystemen; Ölbohrflüssigkeiten und -schlämme sowie Ton- und Pigmentschlämme.
Die polyfunktionalen Polymere können linear oder verzweigt sein, wie im Falle von hyperbranched oder dendritischen Polymeren.
Überraschenderweise werden solche erfindungsgemäßen magnetischen Polymerbeads in ihrer Fähigkeit mit Zellen/Mikroorganismen wechselzuwirken durch die Verunreinigungen bzw. Zusatzstoffe in technischen Medien gar nicht oder nur gering beeinflusst, so dass diese z. B. in der Abtrennung von Bakterien aus Kühlschmiermitteln eingesetzt werden können.
Bevorzugte erfindungsgemäße Partikel enthalten mindestens eine magnetische Komponente a), eingebettet in eine polymere Matrix b) sowie an deren Oberfläche polyfunktionale Polymere c).
Vorzugsweise ist die magnetische Komponente a) in die polymere Matrix b) einpolymerisiert.
Erfindungsgemäß kann in einem ersten Schritt zunächst die polymere Matrix b) durch Polymerisation geeigneter Monomere erzeugt werden und in einem zweiten Schritt können polyfunktionale Polymere c) an geeignete reaktive Gruppen auf der Oberfläche der Matrix b) angekoppelt werden. Eine solche Ausführungsform ist beispielsweise die Herstellung von Magnetobeads mit reaktiven Gruppen wie Hydroxyl-, Halogen-, Amino-, Epoxi-, Isocyanat-, Thiol-, Anhydrid-, Säurechlorid- und Aziridinogruppen, die nachträglich eine Anbindung von polyfunktionalen Polymeren ermöglichen.
Es ist jedoch gleichfalls möglich, die polyfunktionalen Polymere c) durch Copolymerisation geeigneter Monomere zur Herstellung der Matrix b) mit zur Herstellung polyfunktionaler Polymere c) geeigneter Monomere oder Oligomere in einem Schritt an der Oberfläche der Matrix b) zu erzeugen.
In einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung sind die polyfunktionalen Polymere c) dendritische Polymere (Dendrimere).
Wie von Tomalia et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 29 (1990), 138, beschrieben, worauf hiermit in vollem Umfang Bezug genommen wird, sind Dendrimere in hohem Maß dreidimensional geordnete Polymere. Sie sind durch wiederholt iterative Reaktionssequenzen ausgehend von einem Initiatorkern mit einer oder mehreren reaktiven Stellen erhältlich. Zur Herstellung eines erfindungsgemäßen Partikels ist beispielsweise ein mit reaktiven Gruppen ausgerüsteter magnetischer Kern geeignet.
An jede reaktive Stelle wird nur eine funktioneile Gruppe eines polyfunktionellen Reaktanten gebunden. Der Reaktant wird dann über seine verbleibende funktioneile Gruppe oder Gruppen mit zusätzlichen Molekülen reagieren gelassen, entweder denselben wie dem ursprünglichen Kern, wenn dieser polyfunktional ist, oder einem anderen polyfunktionalen Molekül oder Molekülen und so weiter, in jedem Fall unter Reaktionsbedingungen, so daß unerwünschte Nebenreaktionen, beispielsweise Vernetzung, vermieden werden.
Auf diese Weise wird ein dendritischer Körper um den zentralen Kern herum aufgebaut, wobei jede wiederholte iterative Reaktionssequenz weitere Reaktanten (oder "Einheiten") an die Enden der Dendriten addiert.
So können z. B. Polyamidoamin (PAMAM)-Dendrimere, basierend auf Ammoniak als Kern hergestellt werden, der über Michael-Addition mit Methylacrylat (Stufe A) reagieren gelassen wird. Die Carboxylgruppe des Acrylatmoleküls wird mit nur einer Aminogruppe von Ethylendiamin (Stufe B) reagieren gelassen. Die resultierende Triaminkemzelle wird als Generation 0 bezeichnet. Eine weitere Wiederholung der Stufen A und B liefert ein Hexamin, als Generation 1 bezeichnet. Weitere Wiederholungen der Stufen A und B erzeugen höhere Generationen, die nach Generation 4 zu konzentrischen Kugeln von Zellen führen, wobei die äußerste Kugel nach außen zeigende reaktive Gruppen trägt, an die beispielsweise Oberflächenproteine von mikrobiellen Zellen binden können.
Andere beschriebene Dendrimere schließen Polyethylenimin, Kohlenwasserstoff, Polyether, Polythioether, Polyamid, Polyamidoalkohol und
Polyarylamindendrimere ein.
Auch auf Polyamid und Ester basierende Dendrimere sind herstellbar, wie z. B. von Newkome et al., J. Am. Chem. Soc, 112 (1990), 8458, beschrieben. Die Verwendung von langkettigem Alkylendibromid als Kern liefert ein Dendrimer in Form von zwei Kugeln, die über eine Alkylenkette verbunden sind.
Erfindungsgemäß einsetzbar ist auch der in der US-A-5 041 516 beschriebene "konvergente" Ansatz, bei dem von der äußeren Oberfläche des Dendrimers ausgegangen, ein keilförmiges Molekül aufgebaut und schließlich eine Vielzahl der "Keile" mit einem Kernmolekül umgesetzt wird. In Chemical and Engineering News vom 16. August 1993 beschreibt O'Sullivan ein Polypropylenimindendrimer, das durch Michael-Addition von Acrylnitril an 1 ,4- Diaminobutan und Reduktion der Nitrilgruppe zu Aminogruppen über Raney- Kobalt erhalten wird. Vier Mal wiederholt ergibt dies Verfahren ein Dendrimer, das theoretisch 64 Aminogruppen aufweist. Die PCT-Anmeldung WO 93/14147 enthält eine ähnliche Offenbarung.
Auf die Offenbarungen von allen obigen Dokumenten wird hier Bezug genommen.
Die Anzahl von Schichten, mit denen ein Konstruieren möglich ist, variiert mit den Reaktanten wie die Dichte der Packung innerhalb des Dendrimers und somit die Größe der Kanäle innerhalb seiner Verzweigungen. PAMAM-Dendrimere haben eine große innere Oberfläche, die proportional zu der äußeren Oberfläche mit der Anzahl der Generationen zunimmt. Im Gegensatz dazu haben Polyetherdendrimere sehr wenig proportionale innere Oberfläche, die bei den Generationen 3 bis 4 ein Maximum erreicht.
Wie oben gesagt, können die aufeinanderfolgenden Schichten von Zellen gleich oder unterschiedlich sein und Mischungen von zwei oder mehr Reaktanten, wie beispielsweise von Tomalia auf Seite 148 beschrieben, können verwendet werden.
Vorzugsweise wird eine magnetische Komponente a) zur Mitte ("Kern") eines dendritischen Polymerisationsschemas gemacht. Die einzige Anforderung aus dem Blickwinkel des Syntheseverfahrens besteht darin, daß die magnetische Komponente a) chemische Funktionsgruppen besitzen muß oder zu sich hinzugefügt haben muß, die eine Anbringung der Baueinheiten für das dendritische Polymer erlauben. Wenn die magnetische Komponente eine hohe Symmetrie von Funktionsgruppen hat, die sich selbst für eine Derivatisierung gut anbieten, dann können die Dendrimerbaueinheiten direkt auf der magnetischen Komponente initiiert werden, indem die Dendrimerhauptzweige oder "Dendronen" Schicht um Schicht von dem Kern nach außen "gewachsen" werden. Das erfindungsgemäße magnetische Partikel wird größer, wenn Dendrimerbaueinheiten in aufeinanderfolgenden Schichten hinzugefügt werden, was auch als "Generationen" oder "Schalen" bezeichnet wird. Jede neue Schicht wird durch Reagieren von monomerischen Baueinheiten, die auch "Polymereinheiten", "Wiederholungseinheiten" oder "Zweigzellen" genannt werden, mit den aktiven Stellen auf der vorherigen Schicht, hinzugefügt. Dieser divergente In-Situ-Aufbau der Dendronen um einen Initiatorkern ist in der Literatur als erfolgreicher Weg für die Herstellung von dendritischen Polymeren bekannt.
Wenn alternativ die magnetische Komponente a) keine ausreichende Symmetrie aufweist oder auf andere Art und Weise sich nicht selbst gut für eine Derivatisierung anbietet, dann können die Dendronen getrennt hergestellt werden und in die synthetische Reaktion gespeist werden, wodurch komplette Dendronen mit dem Kern gekoppelt werden, der als Anziehungseinrichtung wirkt. Dieses Verfahrens des Hinzufügens von vorgeformten Dendronen zu dem Kern ist ebenfalls in der Literatur als erfolgreicher Weg für die Herstellung von dendritischen Polymeren bekannt, dasselbe kann jedoch weniger symmetrische, jedoch noch monodisperse Kamm-Typ-Polymere erzeugen. Dieses Verfahren wird als divergentes Kernverankern bezeichnet.
Alternative Verfahren zum Dendrimeraufbau, die konvergente Verfahren genannt werden, werden in der Literatur ebenfalls diskutiert. Konvergente Verfahren umfassen eine "reiterative Kopplung von geschützten/ungeschützten Zweigzellen, um ein Brennpunkt-funktionalisiertes Dendron zu erzeugen, gefolgt von einer divergenten Kernverankerung, um verschiedene Multidendron-Dendrimere zu erzeugen" (Tomalia, siehe oben). Auch solche Verfahren sind zur Herstellung erfindungsgemäßer magnetischer Partikel geeignet.
Die bevorzugten aktiven Stellen für ein Erweitern oder "Wachsen" der Dendronen umfassen Stickstoff-, Schwefel-, Sauerstoff-, Silizium- und Phosphor-enthaltende Stellen. Solche aktiven Stellen auf dem Wachstumsdendrimer werden Familien von Dendrimeren erzeugen, die Poly(Amidoamine), Poly(Ether), Poly(Siloxane), Poly(Amidalkohole), Poly(Amine), Poly(Phosphonium), Poly(Alkane), Poly (Acrylate) umfassen.
Die aktive Stelle auf dem Endbereich des Wachstumdendrimers kann die gleiche oder in aufeinanderfolgenden Schichten unterschiedlich sein.
In einer weiteren Ausführungsform der vorliegenden Erfindung sind die polyfunktionalen Polymere c) hyperverzweigte Polymere (hyperbranched Polymers).
Im Vergleich zu einem Dendrimer ist ein hyperverzweigtes Polymer weniger regulär. In seinen Eigenschaften kann es sich jedoch mindestens in einigen der wünschenswerten Eigenschaften den Eigenschaften von Dendrimeren nähern . Hyperverzweigte Polymere, hergestellt durch Kondensationsreaktionen, sind beispielsweise aus Kim und Mitarbeiter, J. Am. Chem. Soc. 1990, 112, 4592 und aus Hawker und Mitarbeiter, ibid, 1991 ,113,4583 bekannt.
Bekannt ist auch, daß eine große Anzahl von hyperverzweigten Polymeren auf Basis von Vinylmonomeren durch eine Ketten-Polymerisation von verzweigten Vinylmonomeren (US-A-5 587 441 und 5 587 446) erhalten werden kann. Seitdem wurden verschiedene hyperverzweigte Vinylpolymere hergestellt durch kationische Polymerisation (US-A-5 587 441), durch Atom-Übertragungs-Radikal- Polymerisation (US-A-5 763 548), durch Gruppen-Übertragungs-Polymerisation [Muller und Mitarbeiter, Polymer Preprint, 1997, 38(1) 498] und durch stabile Radikal-Polymerisation (Hawker und Mitarbeiter, J. Am. Chem. Soc. 1991, 113, 4583).
Hyperverzweigte Vinylpolymere mit verschiedenen Strukturen, wie z. B. Random- Copolymere (Gaynor und Mitarbeiter, Macromolecules, 1996, 29, 1079), hyperverzweigte Pfropf-Copolymere und hyperverzweigte Block-Copoiymere wurden durch Atom-Übertragungs-Radikal-Polymerisations-Prozesse hergestellt. Ein jedes der hyperverzweigten Polymeren, die für diese Erfindung geeignet sind, weist ein Molekulargewicht von mindestens 200, vorzugsweise von mindestens 500 und in besonders bevorzugter Weise von mindestens 8000 auf. Die obere Grenze des Molekulargewichtes kann extrem hoch sein, aufgrund der hoch verzweigten Natur der Polymeren. Im allgemeinen jedoch liegt das Molekulargewicht bei bis zu 10 000 000, vorzugsweise bei bis zu 1 000 000 und in besonders bevorzugter Weise bei bis zu 100000.
Die Polymeren bestehen beispielsweise aus Vinylhomopolymeren oder - copolymeren, hergestellt aus einem oder mehreren ethylenisch ungesättigten polymerisierbaren Monomeren, die unter Anwendung bekannter Polymerisations- Verfahren und Reaktions-Komponenten umgesetzt werden. Alternativ können sie bestehen aus Additions-Homopolymeren oder -copolymeren (wie z. B. Polyethern), hergestellt aus einem oder mehreren heterocyclischen Monomeren, die miteinander nach bekannten Polymerisations-Verfahren und unter Verwendung bekannter Reaktions-Komponenten umgesetzt werden. Zusätzlich können sie Polymere vom Kondensations-Typ sein (wie z. B. Polyester, Polyimide, Polyamide oder Polyurethane), hergestellt nach bekannten Polymerisations- Verfahren und unter Verwendung bekannter Reaktions-Komponenten.
Zu Beispielen von hyperverzweigten Materialien gehören, ohne daß eine Beschränkung hierauf erfolgt, hyperverzweigte Homopolymere und hyperverzweigte Random-Copolymere, wie sie beispielsweise beschrieben werden in den US-A-5 587 441 und US-A-5 587 446. Ferner geeignet sind hyperverzweigte Block-Copolymere und hyperverzweigte Pfropf-Copolymere. Hybride, hyperverzweigte Block-Copolymere können hergestellt werden aus einem "Macro-Initiator", beispielsweise einem Magnetpartikel, das kovalent mit einem hyperverzweigten Polymersegment mit mehrfach funktionalisierten Endgruppen verknüpft ist, und einer Lösung von Monomeren oder Macromonomeren, die damit copolymerisiert werden.
Hyperverzweigte Pfropf-Hybrid-Copolymere lassen sich beispielsweise herstellen durch radikalische Copolymerisation einer Lösung von mindestens einem sich verzweigenden (branching) Vinylmonomeren und mindestens einem sich nicht verzweigenden (non-branching) Vinylmacromonomeren.
Eine große Anzahl von bekannten Polymerisations-Verfahren kann dazu angewandt werden, um im Falle von hyperverzweigten Polymeren eine hyperverzweigte Architektur zu erzeugen.
Im Falle von bevorzugten Ausführungsformen der Erfindung werden die hyperverzweigten Segmente der hyperverzweigten Polymeren erhalten durch eine gesteuerte Polymerisation (living/controlled) von einem oder mehreren speziellen Monomeren (die hier bezeichnet werden als "Verzweigungs-Monomere"), die copolymerisiert werden können mit oder ohne zusätzlichen Nicht-Verzweigungs- Monomeren oder Macromonomeren.
Zu geeigneten Polymerisations-Verfahren gehören, ohne daß eine Beschränkung hierauf erfolgt, die stabile Radikal-Polymerisation, die Atom-Übertragungs-Radikal- Polymerisation (hier bezeichnet als "ATRP"), die anionische Polymerisation, die kationische Polymerisation, die Koordinations-Polymerisation, die Gruppen- Übertragungs-Polymerisation, die Ring-Öffnungs-Polymerisation und die Kondensations-Polymerisation.
Im Falle einer Ausführungsform werden die hyperverzweigten Segmente erhalten durch einen Radikal-Polymerisationsprozeß, wie z. B. durch eine Polymerisation mit stabilen Radikalen oder durch eine Atom-Übertragungs-Radikal-Polymerisation (ATRP).
Im Falle von weiteren Ausführungsformen der Erfindung werden hyperverzweigte Segmente erhalten, die hergestellt werden nach dem erwähnten ATRP-Prozeß, wie er beispielsweise in der US-A-5 763 548 beschrieben wird. Im Falle eines solchen Verfahrens wird ein oder werden mehrere durch Radikale polymerisierbare Monomere in Gegenwart eines Initiators polymerisiert, der ein über ein Radikal übertragbares Atom oder eine Gruppe aufweist, in Gegenwart einer Übergangs-Metallverbindung und einem Liganden unter Erzeugung eines Copolymeren. Der Ligand kann aus einer Stickstoff, Sauerstoff, Phosphor oder Schwefel enthaltenden Verbindung bestehen, die in einer s-Bindung koordiniert, oder irgend einer Kohlenstoff enthaltenden Verbindung, die in einer p-Bindung zum Übergangsmetall koordiniert, derart, daß direkte Bindungen (d. h. kovalente Bindungen) zwischen einem Übergangsmetall und einem wachsenden Polymer- Radikal nicht gebildet werden. Derartige Verfahren ermöglichen einen hohen Grad der Steuerung der Polymerisation und ermöglichen die Formation von verschiedenen Polymeren und Copolymeren mit gleichförmigeren Eigenschaften.
In den hyperverzweigten Polymeren können spezifische Beispiele von hyperverzweigten Segmenten verwendet werden, wozu beispielsweise gehören, ohne daß eine Beschränkung hierauf erfolgt:
Polymere, die sich ableiten von einem oder mehreren "Verzweigungs- Monomeren", wie z. B. m-Vinylbenzylchlorid, p-Vinylbenzylchlorid, m,p- Vinylbenzylchlorid, Trichloroethylacrylat, Trichloroethylmethacrylat, σ-Chloro- acrylnitril, σ-Chloroacrylat, α-Chloroacrylsäure, Maleinsäureanhydrid, α-Bromo- maleinsäureanhydrid, α-Chloromaleinsäureanhydrid, 2-(2-Chloropropionyl- oxy)ethylacrylat, 2-(2-Bromopropio-nyloxy)ethylacrylat, 2-(2-Chloropropio- nyloxy)ethylmethacrylat und 2-(2-Bromopropionyloxy)ethylmethacrylat.
Die hyperverzweigten Polymeren, die für diese Erfindung geeignet sind, weisen im allgemeinen ein Molekulargewicht auf, das im Bereich von 200 bis 10 000 000, vorzugsweise bei 500 bis 1 000 000, und in besonders bevorzugter Weise bei 1000 bis 100 000, und in weiter bevorzugter Weise bei mindestens 8000 liegt. Auch können Mischungen von hyperverzweigten Polymeren verwendet werden mit gleichen oder unterschiedlichen Molekulargewichten und den gleichen oder unterschiedlichen Mikroorganismen-bindenden aktiven Endgruppen, um die erfindungsgemäßen magnetischen Partikel herzustellen.
In den obengenannten Ausführungsformen der Erfindung, bei denen die polyfunktionalen Polymere c) Dendrimere oder hyperverzweigte Polymere sind, kann die magnetische Komponente a) in die Matrix b) eingebettet werden, indem geeignet beschichtete magnetische Kerne zum Ausgangspunkt der Polymerisationsreaktion gemacht werden und somit das Zentrum des erfindungsgemäßen Partikels bilden. Es ist jedoch auch möglich, die Polymerisationsreaktionen einfach in Gegenwart hinreichend vieler und hinreichend gleichmäßig verteilter magnetischer Komponenten a) durchzuführen, um zu gewährleisten, daß statistisch mindestens eine magnetische Komponente in jeden neu polymerisierten Partikel eingebettet wird. Im letztgenannten Fall liegen die magnetischen Komponenten a) in den erfindungsgemäßen magnetischen Partikeln nicht im Zentrum sondern an zufälligen Orten innerhalb des Partikels vor.
In einer weiteren und bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung erzeugt man die erfindungsgemäßen magnetischen Partikel durch Copolymerisation
• geeigneter Monomere zur Herstellung der Matrix b) mit
• zur Herstellung polyfunktionaler Polymere c) geeigneter Monomere oder Oligomere in Gegenwart
• magnetischer Komponenten a),
• mindestens eines Vernetzers mit mindestens zwei nicht konjugierten, ethylenisch ungesättigten Doppelbindungen sowie
• mindestens eines Polymerisationsinitiators und gegebenenfalls
• weiterer Bestandteile.
Vorzugsweise suspendiert man die vorstehend genannten Komponenten in einer mit Wasser nicht mischbaren organischen Phase und vernetzt sie dann radikalisch zu Polymerpartikeln.
Die zur Herstellung der Matrix b) geeigneten Monomere können gleich oder verschieden sein von den zur Herstellung polyfunktionaler Polymere c) geeigneten Monomeren. Es ist also erfindungsgemäß auch möglich, die Matrix b) aus polyfunktionalen Polymeren aufzubauen.
Erfindungsgemäß einsetzbare Monomere zur Herstellung der Matrix b) sind beispielsweise Acrylsäure, Methacrylsäure, Acrylamid, Methacrylamid, Ethylmethacrylat, Allylmethacrylat, Benzylmethacrylat, Cyclohexylmethacrylat, 2- Ethylhexylmethacrylat, i-Butylmethacrylat, Isodecylmethacrylat, Methylmethacrylat, Methacrylnitril, n-Butylmethacrylat, n-Hexylmethacrylat, Stearylmethacrylat. Die basischen Acrylate und Methacrylate werden vorzugsweise in Form ihrer Salze mit starken Mineralsäuren, Sulfonsäuren oder Carbonsäuren oder in quaternisierter Form verwendet.
Bevorzugte Monomere zur Herstellung der Matrix b) sind Acrylsäure, Methacrylsäure, Acrylamid, Methacrylamid und Ethylmethacrylat.
Zur Herstellung polyfunktionaler Polymere c) geeignete Monomere sind beispielsweise 1 ,3-Butandioldimethacrylat, 1 ,4-Butandioldimethacrylat, 1 ,6- Hexandioldimethacrylat, 2-Dimethylaminoethylmethacrylat, 2-Hydroxyethylacrylat, 2-Hydroxyethylmethacrylat, 2-Trimethylammoniumethylmethacrylatchlorid, 3- Dimethylaminopropylmethacrylamid, 3-Trimethylammoniumpropylmethacrylamid- chlorid, Butyldiglykolmethacrylat, Diethylenglykoldimethacrylat,
Dimethylaminoethylacrylat, Diethylaminoethylacrylat,
Dimethylaminoneopentylacrylat, Dimethylaminopropylacrylat,
Dimethylaminoneopentylacryiat und Dimethylaminoneopentylmethacrylat, Diurethandimethacrylat, Ethylenglykoldimethacrylat, Glycidylmethacrylat, Glycerindimethacrylat, Hydroxypropylacrylat, Hydroxypropylmethacrylat,
Isobornylmethacrylat, Methacrylsäuranhydrid,
Methoxypolyethylenglykolmethacrylat, N-(2-Methacryloyloxyethyl)ethylenhamstoff, N-Butoxymethylmethacrylamid, N-Methylolmethacrylamid,
Polyethylenglykoldimethacrylat, Tetraethylenglykoldimethacr lat,
Tetrahydrofurfurylmethacrylat, Triethylenglykoldimethacrylat,
Trimethylolpropantrimethacrylat, Sulfoethylacrylat, Sulfoethylmethacrylat, Sulfopropylacrylat, Sulfopropylmethacrylat, 2-Hydroxy-3-methacryloxypropylsul- fonsäure und 2-Acrylamido-2-methylpropansulfonsäure.
Die Säuregruppen der vorgenannten Säuren können entweder in nicht neutralisierter Form oder in partiell bzw. bis zu 100% neutralisierter Form bei der Polymerisation eingesetzt werden. Bevorzugte Monomere zur Herstellung polyfunktionaler Polymere c) sind
Ethylenglykoldimethacrylat, Glycidylmethacrylat, 2-
Dimethylaminoethylmethacrylat, 2-Hydroxyethylacrylat und 2- Hydroxyethylmethacrylat.
Diese Monomeren können in jedem beliebigen Verhältnis miteinander copolymerisiert werden, wobei besonders bevorzugt partiell neutralisierte Säuren verwendet werden.
Die Monomere zur Herstellung polyfunktionaler Polymere c) werden in einer Menge von 30 bis 95 Gew.-%, vorzugsweise von 40 bis 90 Gew.-%, insbesondere von 50 bis 85 Gew.-%, bezogen auf die eingesetzte Monomergesamtmenge eingesetzt.
Erfindungsgemäß bevorzugte polyfunktionale Polymere c) sind Polyethylenimine, Polyethylenamine und Polyacrylate.
Zur Herstellung vernetzter Polymerisate enthält die zu polymerisierende Mischung wenigstens einen Vernetzer mit mindestens zwei nicht konjugierten, ethylenisch ungesättigten Doppelbindungen.
Geeignete Vernetzer sind beispielsweise N,N'-Methylenbisacrylamid, Polyethylenglykoldiacrylate und Polyethylenglykoldimethacrylate, die sich jeweils von Polyethylenglykolen eines Molekulargewichts von 120 bis 8500, vorzugsweise 400 bis 2000, ableiten, Trimethylolpropantriacrylat,
Trimethylolpropantrimethacrylat, Ethylenglykoldiacrylat,
Ethylenglykoldimethacrylat, Propylenglykoldiacrylat, Butandioldiacrylat,
Hexandioldiacrylat, Hexandioldimethacrylat, Diacrylate und Dimethacrylate von Blockcopolymerisaten aus Ethylenoxid und Propylenoxid, zweifach bzw. dreifach mit Acrylsäure oder Methacrylsäure veresterte mehrwertige Alkohole, wie Glycerin oder Pentaerythrit, Triallylamin, Tetraallylethylendiamin, Divinylbenzol, Diallylphthalat, Polyethylenglykoldivinylether von Polyethylenglykolen eines Molekulargewichts von 126 bis 4000, Trimethylolpropandiallylether, Butandioldivinylether, Pentaerythrittriallylether und/oder Divinylethylenhamstoff.
Vorzugsweise setzt man wasserlösliche Vernetzer ein, z. B. 1 ,1 ,1,-Tris-(Hydroxy- methyl)propantriacrylat, 3-(Acryloyloxy)-2-hydroxypropylmethacrylat, Methacryl- säureallylester, Acrylsäuevinylester N,N'-Methylen-bisacrylamid,
Polyethylenglykoldiacrylate und Polyethylenglykoldimethacrylate, die sich von Additionsprodukten von 2 bis 400 Mol Ethylenoxid an 1 Mol eines Diols oder Polyols ableiten, Vinylether von Additionsprodukten von 2 bis 400 Mol Ethylenoxid an 1 Mol eines Diols oder Polyols, Ethylenglykoldiacrylat, Ethylenglykoldimethacrylat oder Triacrylate und Trimethacrylate von Additionsprodukten von 6 bis 20 Mol Ethylenoxid an ein Mol Glycerin, Pentaerythrittriallylether und/oder Divinylharnstoff.
Als Vernetzer sind außerdem Verbindungen geeignet, die mindestens eine polymerisierbare ethylenisch ungesättigte Gruppe und mindestens eine weitere funktioneile Gruppe enthalten. Die funktioneile Gruppe dieser Vernetzer muß in der Lage sein, mit den funktioneilen Gruppen, im wesentlichen den Carboxylgruppen oder Sulfonsäuregruppen der zur Herstellung polyfunktionaler Polymere c) geeigneten Monomere und/oder der zur Herstellung der Matrix b) geeigneten Monomere zu reagieren. Geeignete funktioneile Gruppen sind z. B. Hydroxyl-, Amino-, Epoxi-, Isocyanat-, Ester-, Amid- und Aziridinogruppen.
Als Vernetzer kommen außerdem solche Verbindungen in Betracht, die mindestens zwei der vorgenannten funktioneilen Gruppen tragen, die mit Carboxyl- und Sulfonsäuregruppen der zur Herstellung polyfunktionaler Polymere c) geeigneten Monomere und/oder der zur Herstellung der Matrix b) geeigneten Monomere reagieren können.
Beispiele für solche Vernetzer sind Ethylenglykol, Diethylenglykol, Triethylenglykol, Tetraethylenglykol, Polyethylenglykol, Glycerin, Polyglycerin, Propylenglykol Diethanolamin, Triethanolamin, Polypropylenglykol,
Blockcopolymerisate aus Ethylenoxid und Propylenoxid, Sorbitanfettsäureester, ethoxylierte Sorbitanfettsäureester, Trimethylolpropan, Pentaerythrit, Polyvinylalkohol, Sorbit, Polyglycidylether wie Ethylenglykoldiglycidylether, Polyethylenglykoldiglycidylether, Glycerindiglycidylether, Glycerinpolyglycidylether, Diglycerinpolyglycidylether, Polyglycerinpolyglycidylether, Sorbitpolyglycidylether, Pentaerythritpolyglycidylether, Propylenglykoldiglycidylether und
Polypropylenglykoldiglycidylether, Polyaziridinverbindungen wie 2,2- Bishydroxymethylbutanoltris[3-(l-aziridinyl)propionat], 1 ,6-Hexamethylen- diethylenharnstoff, Diphenylmethan-bis^^'-N.N'-diethylenhamstoff,
Halogenepoxyverbindungen wie Epichlorhydrin und a-Methylfluorhydrin, Polyisocyanate wie 2,4-Toluylendiisocyanat und Hexamethylendiisocyanat, Alkylencarbonate wie 1 ,3-Dioxolan-2-on und 4-Methyl-1 ,3-dioxolan-2-on, polyquaternäre Amine wie Kondensationsprodukte von Dimethylamin mit Epichlorhydrin, Homo- und Copolymere von Diallyldimethylammoniumchlorid sowie Homo- und Copolymerisate von Dimethylaminoethyl(meth)acrylat, die gegebenenfalls mit beispielsweise Methylchlorid quatemiert sind.
Weitere geeignete Vernetzer sind polyvalente Metallionen, die in der Lage sind, ionische Vernetzungen auszubilden. Beispiele für solche Vernetzer sind Magnesium-, Calcium-, Barium- und Aluminiumionen. Diese Vernetzer werden beispielsweise als Hydroxide, Carbonate oder Hydrogencarbonate der wäßrigen polymerisierbaren Lösung zugesetzt.
Weitere geeignete Vernetzer sind multifunktionelle Basen, die ebenfalls in der Lage sind, ionische Vernetzungen auszubilden, beispielsweise Polyamine oder deren quaternierte Salze. Beispiele für Polyamine sind Ethylendiamin, Diethy- lentriamin, Triethylentetramin, Tetraethylenpentamin, Pentaethylenhexamin und Polyethylenimine sowie Polyvinylamine mit Molmassen von jeweils bis zu 4000000.
Die vorgenannten Vernetzer können einzeln oder in Mischungen verwendet werden. Die Vernetzer werden in einer Menge von 0,1 bis 60 Gew.-%, vorzugsweise von 1 bis 50 Gew.-%, insbesondere von 1,5 bis 40 Gew.-%, bevorzugt von 2 bis 35 Gew.-%, besonders bevorzugt von 3 bis 30 Gew.-%, bezogen auf die Monomergesamtmenge, eingesetzt.
Als Polymerisationsinitiatoren können sämtliche unter den Polymerisationsbedingungen in Radikale zerfallende Verbindungen eingesetzt werden, z. B. Peroxide, Hydroperoxide, Wasserstoffperoxid, Persulfate, Azoverbindungen sowie Redoxkatalysatoren.
Bevorzugt ist der Einsatz von wasserlöslichen Initiatoren. In manchen Fällen ist es vorteilhaft, Mischungen verschiedener Polymerisationsinitiatoren zu verwenden, z. B. Mischungen aus Wasserstoffperoxid und Natrium- oder Kaliumperoxidisulfat. Mischungen aus Wasserstoffperoxid und Natriumperoxidisulfat können in jedem beliebigen Verhältnis verwendet werden.
Geeignete organische Peroxide sind beispielsweise Acetylacetonperoxid, Methylethylketonperoxid, tert.-Butylhydroperoxid, Cumolhydroperoxid, tert.-Amyl- perpivalat, tert.-Butylperpivalat, tert.-Butylpemeohexanoat, tert.-Butyl-periso- butyrat, tert.-Butylper-2-ethylhexanoat, tert.-Butylperisononanoat, tert.-Butylper- maleat, tert.-Butylperbenzoat, tert.-Butylper-3,5,5-trimethylhexanoat und tert- Amylperneodekanoat.
Besonders geeignete Polymerisationsinitiatoren sind N,N,N',N'-Tetramethyl- ethylendiamin (TEMED) und Ammoniumpersulfat (APS), durch deren kombinierte Zugabe eine signifikante Beschleunigung der Polymerisation erzielt werden kann.
Die bevorzugten Konzentrationen von TEMED und APS (40%ige wäßrige Lösung) liegen, bezogen auf die Monomerphase, im Bereich von 1-10 Vol. % für TEMED und 1-20% für APS, wobei generell eine steigende Konzentration an TEMED und APS mit einem proportionalen Anstieg der Polymerisationsgeschwindigkeit einhergeht. Es konnte gezeigt werden, daß die oben beschriebene Polymerisationsbeschleunigung nur dann eintritt, wenn die APS Zugabe zeitlich vor der TEMED Zugabe erfolgt. Auf diese Weise kann die Polymerisation und somit die Beadbildung innerhalb weniger Minuten abgeschlossen werden.
Weiterhin geeignet sind wasserlösliche Azostarter, z. B. N,N-Azobisisobutyronitril (AIBN), 2,2'-Azobis-(2-amidinopropan)dihydrochlorid, 2,2'-Azobis-(N,N'-dimethy- len)iso-butyramidin-dihydrochlorid, 2-(Carbamoylazo)isobutyronitril, 2,2'-Azobis [2- (2'-imidazolin-2-yl)propan-dihydrochlorid und 4,4,-Azobis-(4-cyanovaleriansäure).
Als Initiatoren können weiterhin Redoxkatalysatoren verwendet werden. Redoxkatalysatoren enthalten als oxidierende Komponente mindestens eine der oben angegebenen Perverbindungen und als reduzierende Komponente z. B. As- corbinsäure, Glukose, Sorbose, Ammonium- oder Alkalimetall-hydrogensulfit, - sulfit, -thiosulfat, -hyposulfit, -pyrosulfit oder -sulfid, Metallsalze, wie Eisen-ll-ionen oder Silberionen oder Natriumhydroxymethylsulfoxylat.
Vorzugsweise verwendet man als reduzierende Komponente des Redoxkatalysators Ascorbinsäure oder Natriumsulfit. Anstelle der oxidierenden Komponente des Redoxkatalysators kann man auch einen oder mehrere wasserlösliche Azostarter verwenden.
Die genannten Polymerisationsinitiatoren werden in üblichen Mengen eingesetzt, die in Abhängigkeit von dem gewünschten Reaktionsverlauf durch den Fachmann in geeigneterweise angepaßt werden können.
Erfindungsgemäß geeignete magnetische Komponenten a) sind insbesondere Magnetkolloide oder magnetische Pulver. Als magnetische Kolloide bzw. Magnetpulver können grundsätzlich solche ferro-, ferri- oder superparamagnetischen Substanzen eingesetzt werden, die eine homogene Mischung mit der Monomerphase eingehen. Als bevorzugte magnetische Substanz wird Magnetit mit Partikelgrößen im Bereich von etwa 10 nm bis etwa 600 nm, insbesondere etwa 20 bis etwa 400 nm eingesetzt. Substanzen solcher Art sind z.B. unter der Handelsbezeichnung Bayferrox im Handel erhältlich. Die Herstellung solcher Kolloide ist allgemeiner Stand der Technik und wurde u.a. von Shinkai et al., Biocatalysis, Vol. 5, 1991 , pp61 , Reimers und Khalafalla, Br. Patent 1 ,439,031 oder Kondo et al., Appl. Microbiol. Biotechnol., Vol 41 , 1994, pp 99, beschrieben.
Die Konzentrationen der Kolloide in der Polymerphase liegen, jeweils bezogen auf die Monomerphase, vorzugsweise im Bereich von etwa 1 bis etwa 40 Vol.-%, insbesondere 5 bis 10 Vol.-% bei den Kolloiden, die herstellungsbedingt bereits als wäßrige Kolloide vorliegen, und im Bereich von etwa 1 bis etwa 20 Gew.-%, insbesondere 5 bis 10 Gew.-% bei den Festsubstanzen.
Die magnetischen Eigenschaften der erfindungsgemäßen Polymerpartikel werden durch direktes Zumischen eines geeigneten Magnetkolloids oder magnetischen Pulvers vor der Suspension zu der Monomerphase erzielt. Durch die Möglichkeit des genauen Zudosierens der magnetischen Substanz können parallel damit die magnetischen Eigenschaften der Polymerpartikel in gezielter Weise eingestellt bzw. verändert werden.
Bei der anschließenden Suspension in der organischen Phase werden die Magnet-Kolloide dann simultan in die sich bildenden Polymertröpfchen eingekapselt. Diese Verfahrensweise stellt eine deutliche verfahrenstechnische Vereinfachung gegenüber bekannten Verfahren dar, womit auch eine erhebliche Zeitersparnis verbunden ist.
Um eine möglichst feindisperse, gleichmäßige Verteilung der Magnetpartikel in dem Polymeren zu gewährleisten, ist es vorteilhaft eine kurzzeitige Beschallung der Monomermischung mit Hilfe eines Ultraschallfingers oder in einem entsprechenden Ultraschallbad vorzunehmen oder, beispielsweise durch Einsatz üblicher Homogenisatoren, hohe Scherkräfte auf die Mischung einwirken zu lassen. Neben der Beschallung können den magnetischen Pulvern auch solche Substanzen zugesetzt werden, die emulsionsstabilisierende Eigenschaften besitzen und dadurch eine homogenere Verteilung der Magnetsubstanzen in der Monomerphase fördern. Substanzen dieser Art sind z.B. Poly-N-Vinylpyrrolidon, Celluloseacetat-butyrat, Serum-Albumin, aliphatische und aromatische Sulfonsäure-Derivate, Gelatine oder Polyethylenglykole. Die Mengen der eingesetzten Emulgatoren liegen zumeist im Bereich von etwa 0.5 bis etwa 5 Gew.-%, bezogen auf die eingesetzte Magnetsubstanz.
Die Zugabe solcher Substanzen wird jedoch in aller Regel nicht notwendig sein, da ein besonderer Vorzug dieser Ausführungsform der vorliegenden Erfindung darin besteht, die Herstellung von Magnetobeads zur Abtrennung von Mikroorganismen ohne Emulgatoren, Tenside oder Schutzkolloide zu ermöglichen.
Die homogene Verteilung der Magnetsubstanzen in der Monomerphase läßt sich auch fördern, indem man beispielsweise hohe Scherkräfte auf die Mischung einwirken läßt. Dazu verwendet man Homogenisatoren, die dem Fachmann bekannt sind.
Beispielhaft seien genannt:
Labordissolver Dispermat, Fa. VMA-Getzmann, Reichshof, DE Ultra-Turax, Fa. Janke und Kunkel, Staufen, DE Druckhomogenisator, Fa. Gaulin, Lübeck, DE Geräte mit einem Rotor-Stator-System, etwa
Dispax, Fa. Janke und Kunkel, Staufen, DE
Cavitron-Homogenisatoren, Fa. v. Hagen & Funke, Sprochhövel, DE
Homogenisatoren der Fa. Kotthoff, Essen, DE
Homogenisatoren der Fa. Dorr Oliver, Grevenbroich, DE.
Üblicherweise betreibt man diese Geräte bei Drehzahlen von 1000 bis 25.000 pro Minute, bevorzugt 2000 bis 25.000 pro Minute. Weiterhin können die hohen Scherkräfte ebenso durch Hindurchpressen der Mischung unter hohem Druck durch einen engen Spalt oder durch Düsen kleinen Durchmessers, Kolloidmühlen, oder andere geeignete Homogenisatoren erzeugt werden.
Die erfindungsgemäß hergestellten Partikel weisen vorzugsweise eine Teilchengröße im Bereich von etwa 1 bis etwa 100 μm, vorzugsweise 1 bis 60 μm, insbesondere 10 bis 40 μm auf.
Teilchengrößen im Bereich von etwa 1 bis etwa 100 μm zu erhalten, wird insbesondere durch die Verwendung von Ölen, vorzugsweise Mineralöl, tierischen oder pflanzlichen Ölen (Pflanzenölen) als Suspensionsmedium mit einer Viskosität im Bereich von 25 bis 150 mPa-s, insbesondere im Bereich von 30 bis 80 mPa-s (bzw. Centipoise) ermöglicht.
Vorzugsweise wird die Monomerphase vor der Suspension in der organischen Phase etwa 5 bis etwa 180 Sekunden vorpolymerisiert.
Erfindungsgemäß bevorzugt einsetzbare Öle sind ausgewählt unter a) Mineralölen, d. h. flüssigen Destillationsprodukten, die aus mineralischen Rohstoffen (Erdöl, Braun- u. Steinkohlen, Holz, Torf) gewonnen wurden und die im wesentlichen aus Gemischen von gesättigten Kohlenwasserstoffen bestehen, b) Ölen tierischen Ursprungs, insbesondere technischen Fischölen, wie Capelinöl, Heringsöl, Makrelenöl, Orange-Roughy-Öl, Sardinenöl, Thunfischöl und anderen, sowie c) Ölen pflanzlichen Ursprungs, insbesondere Aprikosenkernöl, Arganöl, Avocadoöl, Babassuöl, Baumwollsaatöl, Boragesamenöl, Calendulaöl, Camelinaöl, Erdnussöl, Frittieröl, Hagebuttenkernöl, Hanföl, Haselnussöl, Johannisbeersamenöl, Johanniskrautöl, Jojobaöl, Kakaobutter, Knoblauchöl, Kokosöl, Kürbiskemöl, Kukuinussöl, Leinöl, Lorbeeröl, Maiskeimmöl, Makadamianussöl, Mandelöl, Mangofett, M.C.T.-ÖI, Mohnöl, Nachtkerzenöl, Olivenöl, Palmkemöl, Palmöl, Paranussöl, Pekannussöl, Perillaöl, Pfirsichkemöl, Pistazienkernöl, Rain Forest Öle, Reiskeimöl, Rizinusöl, Gemischen aus Rüböl / Rapsöl, Gemischen aus Safloröl / Distelöl, Sanddornfruchtfleischöl, Schwarzkümmelöl, Senföl, Sesamöl, Sheabutter, Sojaöl, Sonnenblumenöl, Traubenkernöl, Walnussöl und Weizenkeimöl, oder Mischungen davon.
Die Polymerisationsreaktion wird bevorzugtermaßen in dem Fachmann bekannter Weise entweder im Batch-Reaktor, im kontinuierlichen Strömungsrohr, in der Rührkesselkaskade oder im kontinuierlichen Rührkesselreaktor durchgeführt. Die Kesselreaktoren haben in der chemischen Industrie dabei die größte Bedeutung erlangt, da sie eine sehr große Flexibilität bezüglich der Betriebsbedingungen und der Betriebsweise aufweisen und an fast alle Prozeßerfordernisse angepaßt werden können. Rührkesselreaktoren eignen sich für diskontinuierliche und kontinuierliche Betriebsweise und sie besitzen einen weiten Einsatzbereich, der vom Laborkessel bis zum Großreaktor reicht. Rührkesselreaktoren sind in standardisierter Bauweise für zahlreiche Anwendungen in verschiedensten Werkstoffen und Werkstoffkombinationen erhältlich. Rührkesselreaktoren sind leicht begeh- und reinigbar und erlauben eine relativ einfache Umstellung auf andere Polymerisationsreaktionen (s. z. B. Ullmann, Band 3, 4. Aufl., S. 505-510).
Neben den üblichen Kühl- und Heizeinrichtungen, Zu- und Ableitungen für Reaktionsedukte und -produkte weisen die für die Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens geeigneten Reaktorbehälter Rührvorrichtungen auf, die meist aus einem über eine Rührwelle angetriebenen Rührer bestehen und für gewisse Anwendungsfälle zudem Statoren aufweisen, die zur besseren Durchmischung als Stromstörer dienen. Die Rührer selbst sind an meist senkrechten Rührerachsen befestigt, welche entweder von unten oder von oben in den im allgemeinen zylindrischen Reaktorbehälter hineinragen. Der zentrische Einbau von oben in den Reaktorbehälter ist im allgemeinen bevorzugt, da die Abdichtung der Rührerwelle relativ einfach durchgeführt werden kann. Aus dem Stand der Technik sind unterschiedlichste Rührer, beispielsweise Propellerrührer, Scheibenrührer, Ankerrührer, Impellerrührer, Blattrührer, MIG- Rührer, usw. bekannt.
Erfindungsgemäß bevorzugt wird der Suspensionsvorgang mit Hilfe eines konventionellen Propellerrührers bewerkstelligt. Um die gewünschten Teilchengrößen von 1 bis 30 μm zu erhalten, werden Rührgeschwindigkeiten zwischen 1000 und 4000 U/Min. benötigt, wobei eine direkte Proportionalität zwischen der Rührgeschwindigkeit und der Feinheit der Teilchen gegeben ist. So lassen sich Teilchengrößen von <10 μm durchweg mit Rührgeschwindigkeiten von >2000 U/Min. und solche >10 μm mit Rührgeschwindigkeiten von <1000-2000 U/Min. erzielen.
Als erfindungsgemäß einsetzbare weitere Bestandteile kommen insbesondere Schutzkolloide, Polymerisationsbeschleuniger oder Emulgatoren in Betracht. Diese sind aus dem Stand der Technik bekannt und können durch den Fachmann je nach Bedarf der Reaktion zugesetzt werden, obgleich ihr Einsatz - wie oben bereits beschrieben - nicht bevorzugt ist.
Ein erfindungsgemäß bevorzugter weiterer Bestandteil ist hingegen Pyrrolidon, das der zu polymerisierenden Mischung zugesetzt werden kann, um die Quellbarkeit der erfindungsgemäßen Partikel zu verstärken, wodurch deren Oberfläche zusätzlich vergrößert wird.
Im Gegensatz zu den aus dem Stand der Technik bekannten Suspensionsphasen werden, wie oben erwähnt, für das Verfahren zur Herstellung der erfindungsgemäßen magnetischen Partikel keine zusätzlichen oberflächenaktiven Stabilisatoren für die organische Phase benötigt. Dieser Umstand erleichtert die anschließenden Waschprozeduren, da beim Entfernen der Ölphase keine restlichen Stabilisatoren auf der Oberfläche der Beads verbleiben können.
Die erfindungsgemäßen magnetischen Partikel können durch Applikation eines Magnetfeldes im wesentlichen vollständig wiedergewonnen werden. Die Wiedergewinnung der erfindungsgemäßen Partikel erfolgt vorzugsweise mittels saurer bzw. basischer Spüllösungen im pH-Bereich von etwa 3 bis 12, insbesondere 6 bis 10. Der Fachmann wird in Abhängigkeit von den gewählten reaktiven Gruppen auf den polyfunktionalen Polymeren c) einen geeigneten pH- Bereich einstellen.
Die erfindungsgemäßen magnetischen Partikel sind zur Beseitigung von Mikrobenwachstum aus allen technischen Medien geeignet, in denen Mikroorganismen unerwünscht sind, z. B. in wässrigen Systemen bei einer Reihe industrieller Anwendungen, wie der Papierherstellung.
Eine Reihe wichtiger Industrien wird durch die Aktivität dieser Bakterien, Algen und Pilze an den eingesetzten Rohmaterialien, an verschiedenen Aspekten ihrer Herstellungstätigkeiten oder an den hergestellten Endprodukten stark beeinträchtigt. Zu diesen Industrien gehören die Farben-, Holz-, Textil-, Kosmetik-, Leder-, Tabak-, Pelz-, Seil-, Papier-, Zellstoff-, Kunststoff-, Treibstoff-, Öl-, Kautschuk- und Maschinenindustrie.
Zu wichtigen Anwendungen der erfindungsgemäßen magnetischen Partikel gehören: Beseitigung von Bakterien und Pilzen aus Kühlmitteln, Schmiermitteln, Kühlschmiermitteln, wässrigen Farben, Klebstoffen, Latexemulsionen und Vergussmassen; Bohrölentkeimung; Bekämpfung schleimproduzierender Bakterien und Pilze in Zellstoff-und Papiermühlen und Kühlwasser; in Entkeimungsverfahren bei der Sprüh- oder Tauchbehandlung für Textilien und Leder zur Verhinderung von Schimmelpilzwachstum; Entkeimung von Antifäulnisfarben zur Verhinderung der Anhaftung von Fäulnisorganismen; Schutz von Verarbeitungsausrüstung vor Schleimablagerungen bei der Herstellung von Rohr- und Rübenzucker; Verhinderung der Anreicherung und Ablagerung von Mikroorganismen in Abluftwäscher-Systemen und in industriellen Frischwasserversorgungssystemen; Bekämpfung der Kontamination mit und Ablagerung von Mikroorganismen in Ölbohrflüssigkeiten und -schlämmen sowie in sekundären Erdölaufbereitungsverfahren; Hemmung von Bakterien- und Pilzwachstum bei Papierbeschichtungsverfahren, das die Qualität der Papierbeschichtung beeinträchtigen könnte; Bekämpfung von Bakterien- und Pilzwachstum und -ablagerungen bei der Herstellung verschiedener Spezialpappen, z. B. Vollpappe und Spanplatten; Verhinderung der Zellsaftverfärbung von frisch geschlagenem Holz unterschiedlicher Art; Bekämpfung von Bakterien- und Pilzwachstum in Ton-und Pigmentschlämmen unterschiedlicher Art, die zur späteren Verwendung beispielsweise bei der Papierbeschichtung und der Farbenherstellung hergestellt werden und bei der Lagerung und beim Transport dem Abbau durch Mikroorganismen unterliegen; als Desinfektionsmittel für harte Oberflächen zur Verhinderung des Wachstums von Bakterien und Pilzen auf Wänden, Böden usw. sowie in Schwimmbecken zur Verhinderung von Algenwachstum.
Besonders wichtig ist die Bekämpfung von Bakterien und Pilzen in Wassersystemen von Zellstoff- und Papiermühlen, die wässrige Dispersionen der Fasern zur Papierherstellung enthalten. Die unkontrollierte Anreicherung von Schleim durch die Anhäufung von Bakterien und Pilzen führt zu qualitativ minderwertiger Produktion, verringerter Produktion aufgrund von Pausen und höherer Reinigungshäufigkeit, gesteigertem Verbrauch von Rohmaterialien sowie höheren Wartungskosten. Das Problem der Schleimablagerungen wird in der Papierindustrie durch die weitverbreitete Verwendung geschlossener Weißwassersysteme verschlimmert.
Ein weiterer wichtiger Bereich, in dem die Bekämpfung von Bakterien- und Pilzwachstum entscheidend ist, sind die Ton- und Pigmentschlämme. Diese Schlämme bestehen aus verschiedenen Tonen, z. B. Kaolin, und Pigmenten, z. B. Calciumcarbonat und Titandioxid. Sie werden gewöhnlich an einem Ort hergestellt, der von dem der endgültigen Verwendung, z. B. in der Papierbeschichtung und der Farbenherstellung, entfernt ist und dann zum späteren Transport an den Endverbrauchsort gelagert. Die hohen Qualitätsstandards für die Papier- und Farbenendprodukte, in denen der Schlamm verwendet wird, erfordern, dass der Ton- oder Pigmentschlamm einen sehr geringen Mikroorganismengehalt besitzt, damit er zur Papierbeschichtung oder Farbenherstellung eingesetzt werden kann. Weitere wichtige Gebiete zur Bekämpfung von Mikrobenwachstum sind CIP- Anlagen (CIP: Cleaning in Place) sowie Kühlsysteme, wie diejenigen mit Umlaufkühltürmen. Diese Systeme setzen eine große Menge Wasser beträchtlich lange der Atmosphäre aus unter Bedingungen, die keine ausreichende Belüftung und kein ausreichendes Aussetzen gegenüber Sonnenlicht beinhalten, dass Mikrobenwachstum, insbesondere Bakterien- und Pilzwachstum bekämpft würde. Viele Kühltürme setzen ausserdem eine Füllung aus Kügelchen aus synthetischen Polymer- oder anderen Materialien ein, um die Wärmeaustauschoberfläche zu vergrößern. Diese Bauweise verschlimmert das Problem des Mikrobenwachstums, da sie die ideale physikalische Umgebung für die Vermehrung lästiger Mikroben bereitstellt. Unbekämpft gedeihen diese Mikroorganismen und erzeugen Kolonien, die ausreichen, dass die Wärmeaustauschoberflächen mit einem Biofilm blockiert und die Komponenten der Wassertransportvorrichtung, die zum Betrieb des Kühlsystems verwendet wird, verstopft werden. Die erfindungsgemäßen magnetischen Partikel stellen eine ausgezeichnete Bekämpfung von Mikrobenwachstum in diesen Systemen bereit.
Die erfindungsgemäßen magnetischen Partikel sind ebenfalls geeignet zur Bekämpfung der schädlichen Wirkungen von Mikroorganismen in Wasser oder wässrigen Medien. Systeme, die umlaufendes Wasser oder umlaufende wässrige Medien verwenden, werden mit Mikroorganismen infiziert und erheblich in ihrer Wirksamkeit beeinträchtigt, wenn sich Mikroorganismenablagerungen im System anreichern. Die als Schleime bezeichneten Ablagerungen überziehen die Wände von Behältern und anderen Gefäßen, jegliche verwendete Maschinen und Verarbeitungsausrüstung und erzeugen Verstopfungen in Rohren und Ventilen. Die Schleimentstehung fördert die Korrosion von Metalloberflächen und erleichtert die Verrottung von Holztürmen. Die Schleime erzeugen auch Verfärbungen und andere Mängel in allen hergestellten Produkten und erzwingen kostenintensive Betriebsunterbrechungen. Die Bekämpfung von Mikroorganismen in wässrigen Medien ist besonders wichtig, wenn sich in diesen dispergierte Teilchen oder Feinstoffe befinden, z. B. dispergierte Zellulosefasern und dispergierte Füllstoffe und Pigmente bei der Papierherstellung sowie dispergierte Pigmente bei der Farbenherstellung.
Die erfindungsgemäßen magnetischen Partikel können in reiner Form oder in Kombination mit herkömmlichen mikrobiziden Agenzien eingesetzt werden, beispielsweise in Kombination mit Sterilisations-, Desinfektions- Imprägnier- oder Konservierungsmitteln, die aufgrund der vorteilhaften Wirkung der erfindungsgemäßen magnetischen Partikel - wenn überhaupt - nur noch in niedriger Dosierung eingesetzt werden müssen. Der kombinierte Einsatz der erfindungsgemäßen magnetischen Partikel mit mikrobiziden Agenzien kann zeitlich versetzt erfolgen, z. B., indem man zunächst ein Kühlschmiermittel mit Hilfe der erfindungsgemäßen magnetischen Partikel von Mikroben befreit und dann zum Zwecke der Konservierung ein gering dosiertes Konservierungsmittel zugibt. Bevorzugt ist jedoch der simultane Einsatz der erfindungsgemäßen magnetischen Partikel mit mikrobiziden Agenzien, da die erfindungsgemäßen Partikel - im Gegensatz zu Magnetobeads aus dem Stand der Technik - weitgehend unempfindlich gegen chemische oder mechanische Verunreinigungen der zu dekontaminierenden technischen Medien sind.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind daher mikrobizide Gemische bzw. mikrobizide Mittel, enthaltend erfindungsgemäße magnetische Partikel und mikrobizide Agenzien.
Geeignete mikrobizide Agenzien (Mikrobizide), die in den erfindungsgemäßen Gemischen enthalten sein können, sind beispielsweise
• oxidierende Biozide: Chlor- und Brom-abspaltende Verbindungen, Chlordioxid, Ozon, Permanganat und Peroxide,
• nicht-oxidierenden Biozide: aldehydische Wirkstoffe, quaternäre Ammoniumverbindungen, Isothiazolon-Verbindungen sowie
• weitere mikrobizide Wirkstoffe, wie z. B. Phenol-Derivate (insbesondere 2- Biphenylol und p-Chlor-m-kresol) und Alkohole. In der Mehrzahl der Fälle enthalten die für die praktische Anwendung bestimmten Gemische insgesamt noch 0 bis etwa 99, vorzugsweise 90 bis 10 Gew.-% weitere üblicherweise verwendete Bestandteile, die je nach der vorgesehenen Anwendungsform und dem Anwendungszweck ausgewählt werden. Für flüssige Zubereitungen beispielsweise kommen als Lösungsmittel mit Wasser mischbare organische Lösungsmittel in Betracht, beispielsweise Ethanol, Isopropanol und Ethylenglykol, Propylenglykol, Ethylethylenglykol, Propylpropylenglykol 20 sowie mit Wasser nicht mischbare Lösungsmittel wie beispielsweise Testbenzin, Benzol, Toluol, Essigsäureethylester oder Dimethylenchlorid.
Wenn neben der antimikrobiellen Wirkung eine zusätzliche Reinigungswirkung erwünscht ist, können die erfindungsgemäßen Gemische auch noch Tenside, insbesondere nichtionische Tenside enthalten. Beispiele für geeignete Tenside sind C8-C18-Alkylglucoside mit etwa 1 bis 10 Glucbseeinheiten im Molekül, Anlagerungs-Produkte von 4 bis 40, vorzugsweise 4 bis 20 Mol Ethylenoxid an ein Mol Fettalkohol, Alkylcyclohexanol, Alkylphenol, Fettsäure, Fettsäureamid oder Alkansulfonamid. Von besonderem Interesse sind Anlagerungsprodukte von 5 bis 16 Mol Ethylenoxid an Kokos- oder Taigfettalkohole, an Oleylalkohol, ein Gemisch aus Oleylalkohol und Cetylalkohol sowie an Mono-, Di- oder Trialkylphenole und an Monoalkylcyclohexanole mit 6 bis 14 Kohlenstoffatomen in den Alkylresten. Auch gemischte Anlagerungsprodukte von Ethylenoxid und Propylenoxid an die genannten Verbindungen mit einem aktiven Wasserstoffatom kommen in Betracht. Die genannten Alkoxylierungsprodukte können auch endgruppenverschlossen sein, beispielsweise durch Ether-oder Acetalgruppen.
In den erfindungsgemäßen Gemischen können ferner Gerüstsubstanzen vorhanden sein; als solche eignen sich beispielsweise Alkalisalze der Glukonsäure, insbesondere Natriumglukonat, die Alkalisalze der Nitrilotriessigsäure, Ethylendiamintetraessigsäure, Hydroxyethandiphosphonsäure, Phosphonobutantricarbonsäure, Milchsäure, Zitronensäure oder Weinsäure. Weiterhin kommen als Gerüstsubstanzen die wasserlöslichen Salze höhermolekularer Polycarbonsäuren in Betracht, etwa Polymerisate der Maleinsäure, Itakonsäure, Fumarsäure und Zitraconsäure. Auch Mischpolymerisate dieser Säuren untereinander oder mit anderen polymerisierbaren Monomeren, wie B. Ethylen, Propylen, Acrylsäure, Vinylacetat, Isobutylen, Acrylamid und Styrol sind brauchbar. In die erfindungsgemäßen Gemische können auch Reinigungsverstärker wie Fettsäuremono- und - diethanolamide, beispielsweise Kokosfettsäuremonoethanolamid und Kokosfettsäurediethanolamid, und Anlagerungsprodukte von bis zu 4 Mol Ethylenoxid oder Propylenoxid an Fettalkohole mit 8 bis 12 Kohlenstoffatomen sowie freie Fettalkohole mit 8 bis 12 Kohlenstoffatomen sowie Reinigungsverstärker auf Cellulosebasis eingearbeitet werden.
Darüber hinaus kann es für weitere Anwendungsbereiche vorteilhaft sein, wenn auch Insekticide wie z. B. Pyrethroide (Permethrin, Cypermethrin, Decamethrin und Fenvalerate) und/oder Lindan, Endosulfan, Dieldrin in die erfindungsgemäßen Gemische eingearbeitet werden.
Die Mengen der möglichen zur Konfektionierung der erfindungsgemäßen Mittel benutzten Bestandteile richten sich im allgemeinen nach Handels- und Preisvorgaben und sind im Prinzip nicht von erfinderischer Bedeutung.
Für die Herstellung gebrauchsfertiger Konservierungsmittel können neben flüssigen Konzentraten auch feste Produkte, vorzugsweise in Pulver- oder Granulatform bereitgestellt werden, die die erfindungsgemäßen antimikrobiell wirksamen Gemische enthalten.
Die erfindungsgemäßen magnetischen Partikel lassen sich durch einfache Applikation eines Magnetfeldes auch in fester Phase von den antimikrobiell wirksamen Gemischen abtrennen.
Weitere voneinander unabhängige Gegenstände der vorliegenden Erfindung sind: Verfahren zur Herstellung erfindungsgemäßer magnetischer Partikel und deren Verwendung zur Aufreinigung von Mikroorganismen. Die nachfolgenden Beispiele erläutern die Erfindung, ohne sie jedoch darauf einzuschränken.
Beispiel 1
Herstellung magnetischer Polymerpartikel zur Bakterien-Separation
In einem 250 ml Dreihalskolben mit Rückflußkühler werden Tetrahydrofuran, redispergierbares Ferrofluid und Monomere (Ethylenglykoldimethacrylat, Glycidylmethacrylat, Vinylpyrrolidon) vermischt und 15 min unter Rühren mit Stickstoff über ein Einleitrohr begast. Die Dispersion wird unter Rückfluß erhitzt, gerührt und die Reaktion mit AIBN gestartet. Nach 24h wird eine Lösung aus Diethylamin und THF hinzugegeben und für weitere 6h unter Rückfluß erhitzt. Zur Aufreinigung der Partikel werden diese fünfmal mit 0,1 M Salzsäure und fünfmal mit Wasser gewaschen. Die Trocknung der Partikel erfolgt im Vakuumtrockenschrank bei 50°C.
Das Experiment wird in vier verschiedenen Ansätzen durchgeführt:
Ansatz Menge Edukte
I) 5 ml Ethylenglykoldimethacrylat
9 ml Glycidylmethacrylat
1 ml Vinylpyrrolidon
20 ml Tetrahydrofuran
4 g Ferrofluidpaste i g AIBN
15 ml Diethylamin
15 ml THF
II) 10 ml Ethylenglykoldimethacrylat
9 ml Glycidylmethacrylat
1 ml Vinylpyrrolidon 26 ml Tetrahydrofuran
5 g Ferrofluidpaste
1 ,3 g AIBN
15 ml Diethylamin
15 ml THF
III) 15 ml Ethylenglykoldimethacrylat
9 ml Glycidylmethacrylat
1 ml Vinylpyrrolidon
33 ml Tetrahydrofuran
6,3 g Ferrofluidpaste
1 ,6 g AIBN
15 ml Diethylamin
15 ml THF
IV) 20 ml Ethylenglykoldimethacrylat
9 ml Glycidylmethacrylat
1 ml Vinylpyrrolidon
40 ml Tetrahydrofuran
7,5 g Ferrofluidpaste
1 ,9 g AIBN
15 ml Diethylamin
15 ml THF
Beispiel 2
Herstellung magnetischer Polymerpartikel zur Bakterien-Separation
In einem 250 ml Dreihalskolben mit Rückflußkühler werden Tetrahydrofuran, redispergierbares Ferrofluid und Monomere (Ethylenglykoldimethacrylat, (2- Dimethylaminoethyl)-methacrylat, Vinylpyrrolidon) vermischt und 15 min unter Rühren mit Stickstoff über ein Einleitrohr begast. Die Dispersion wird unter Rückfluß erhitzt, gerührt und die Reaktion mit AIBN gestartet. Nach 24h wird eine Lösung aus Diethylamin und THF hinzugegeben und für weitere 6h unter Rückfluß erhitzt. Zur Aufreinigung der Partikel werden diese fünfmal mit 0,1 M Salzsäure und fünfmal mit Wasser gewaschen. Die Trocknung der Partikel erfolgt im Vakuumtrockenschrank bei 50°C.
Das Experiment wird in vier verschiedenen Ansätzen durchgeführt:
Ansatz Menge Edukte
I) 6 ml Ethylenglykoldimethacrylat EGDMA
21 ,6 ml (2-Dimethylaminoethyl)-methacrylat
2,4 ml Vinylpyrrolidon
150 ml Tetrahydrofuran (THF)
8 g Ferrofluidpaste
2 g AIBN
II) 4,5 ml Ethylenglykoldimethacrylat EGDMA
22,9 ml (2-Dimethylaminoethyl)-methacrylat
2,6 ml Vinylpyrrolidon
150 ml Tetrahydrofuran (THF)
8 g Ferrofluidpaste
2 g AIBN
III) 3 ml Ethylenglykoldimethacrylat EGDMA
24,3 ml (2-Dimethylaminoethyl)-methacrylat
2,7 ml Vinylpyrrolidon
150 ml Tetrahydrofuran (THF)
8 g Ferrofluidpaste
2 g AIBN
IV) 1 ,5 ml Ethylenglykoldimethacrylat EGDMA
25,6 ml (2-Dimethylaminoethyl)-methacrylat 2,9 ml Vinylpyrrolidon
150 ml Tetrahydrofuran (THF)
8 g Ferrofluidpaste
2 g AIBN
Beispiel 3
Herstellung magnetischer Polymerpartikel zur Bakterien-Separation
In einem 250 ml Dreihalskolben mit Rückflußkühler werden Tetrahydrofuran, Bayferrox 318 (Bayer) und Monomere (Ethylenglykoldimethacrylat, Glycidylmethacrylat, Vinylpyrrolidon) vermischt und 15 min unter Rühren mit Stickstoff über ein Einleitrohr begast. Die Dispersion wird unter Rückfluß erhitzt, gerührt und die Reaktion mit AIBN gestartet. Nach 24h wird eine Lösung aus Diethylamin und THF hinzugegeben und für weitere 6h unter Rückfluß erhitzt. Zur Aufreinigung der Partikel werden diese fünfmal mit 0,1 M Salzsäure und fünfmal mit Wasser gewaschen. Die Trocknung der Partikel erfolgt im Vakuumtrockenschrank bei 50°C.
Das Experiment wird in vier verschiedenen Ansätzen durchgeführt:
Ansatz Menge Edukte
I) 6 ml Ethylenglykoldimethacrylat EGDMA
21 ,6 ml Glycidylmethacrylat
2,4 ml Vinylpyrrolidon
150 ml Tetrahydrofuran (THF)
8 g Bayferrox 318 (Bayer)
2 g AIBN
30 ml Diethylamin
30 ml THF ιi) 4,5 ml Ethylenglykoldimethacrylat EGDMA
22,9 ml Glycidylmethacrylat
2,6 ml Vinylpyrrolidon
150 ml Tetrahydrofuran (THF)
8 g Bayferrox 318 (Bayer)
2 g AIBN
30 ml Diethylamin
30 ml THF
Hl) 3 ml Ethylenglykoldimethacrylat EGDMA
24,3 ml Glycidylmethacrylat
2,7 ml Vinylpyrrolidon
150 ml Tetrahydrofuran (THF)
8 g Bayferrox 318 (Bayer)
2 g AIBN
30 ml Diethylamin
30 ml THF
IV) 1 ,5 ml Ethylenglykoldimethacrylat EGDMA
25,6 ml Glycidylmethacrylat
2,9 ml Vinylpyrrolidon
150 ml Tetrahydrofuran (THF)
8 g Bayferrox 318 (Bayer)
2 g AIBN
30 ml Diethylamin
30 ml THF
Beispiel 4
Herstellung magnetischer Polymerpartikel zur Bakterien-Separation
In einem 250 ml Dreihalskolben mit Rückflußkühler werden Tetrahydrofuran, Bayferrox 318 (Bayer) und Monomere (Ethylenglykoldimethacrylat, (2- Dimethylaminoethyl)-methacrylat, Vinylpyrrolidon) vermischt und 15 min unter Rühren mit Stickstoff über ein Einleitrohr begast. Die Dispersion wird unter Rückfluß erhitzt, gerührt und die Reaktion mit AIBN gestartet. Nach 24h wird eine Lösung aus Diethylamin und THF hinzugegeben und für weitere 6h unter Rückfluß erhitzt. Zur Aufreinigung der Partikel werden diese fünfmal mit 0,1 M Salzsäure und fünfmal mit Wasser gewaschen. Die Trocknung der Partikel erfolgt im Vakuumtrockenschrank bei 50°C.
Das Experiment wird in vier verschiedenen Ansätzen durchgeführt:
Ansatz Menge Edukte
I) 6 ml Ethylenglykoldimethacrylat EGDMA
21 ,6 ml (2-Dimethylaminoethyl)-methacrylat
2,4 ml Vinylpyrrolidon
150 ml Tetrahydrofuran (THF)
8 g Bayferrox 318 (Bayer)
2 g AIBN
II) 4,5 ml Ethylenglykoldimethacrylat EGDMA
22,9 ml (2-Dimethylaminoethyl)-methacrylat
2,6 ml Vinylpyrrolidon
150 ml Tetrahydrofuran (THF)
8 g Bayferrox 318 (Bayer)
2 g AIBN
3 ml Ethylenglykoldimethacrylat EGDMA
24,3 ml (2-Dimethylaminoethyl)-methacrylat
2,7 ml Vinylpyrrolidon
150 ml Tetrahydrofuran (THF)
8 g Bayferrox 318 (Bayer) 2 g AIBN
IV) 1 ,5 ml Ethylenglykoldimethacrylat EGDMA 25,6 ml (2-Dimethylaminoethyl)-methacrylat 2,9 ml Vinylpyrrolidon 150 ml Tetrahydrofuran (THF)
8 g Bayferrox 318 (Bayer) 2 g AIBN
Beispiel 5
Herstellung von Ferrofluidpaste
Eisen(lll)-chlorid wird in 90 ml deionisiertem Wasser gelöst. Eisen(ll)-chlorid wird in einem separaten Becherglas in einer Mischung aus 5 ml konz. Salzsäure und 10 ml deionisiertem Wasser gelöst. Eine weitere Lösung wird aus 650 ml deionisiertem Wasser und 125 g konz. Ammoniak hergestellt. Bevor die Eisensalzlösung unter starkem Rühren in die alkalische Vorlage gegossen wird, werden die Eisensalzlösungen vereinigt. Zu der Suspension wird anschließend unter starkem Rühren Ölsäure gegeben und für eine Stunde auf 90°C erhitzt. Die schaumige Suspension wird anschließend unter Rühren solange mit konz. Salzsäure versetzt (etwa 10 ml), bis sich die umhüllten Partikel komplett am Boden absetzen. Der Niederschlag wird 5 mal mit deionisiertem Wasser gewaschen. Die Paste wird im Vakuum bei 60°C getrocknet.
Menge Edukte
27,03 g FeCI3*6H2O (M = 270,30 g/mol)
90 ml deionisiertes Wasser
9,94 g FeCI2*4H2O (M = 198,81 g/mol)
10 ml deionisiertes Wasser
5 ml konz. Salzsäure
125 g konz. Ammoniak 650 ml deionisiertes Wasser
6,3 ml Ölsäure
50 ml konz. Salzsäure
Beispiel 6
In einem 1000 ml Dreihalskolben werden Tetrahydrofuran, Bayferrox und Monomere (Ethylenglykoldimethacrylat, Glycidylmethacrylat, Vinylpyrrolidon) vermischt und für 15 min mit Stickstoff über ein Einleitrohr begast. Die Temperatur der Monomerdispersion wird unter Rühren auf 65°C hochgefahren und mittels AIBN Zugabe gestartet. Nach 6h wird eine Lösung aus Lupasol FG und THF hinzugegeben und für weitere 6 Stunden unter Rückfluß erhitzt. Die Partikel werden mit Ethanol, 0,01 M Salzsäure, 0,1 M Ammoniaklösung und deionisiertem Wasser gewaschen. Die Trocknung der Partikel erfolgt im Vakuumtrockenschrank bei 80°C.
Menge Produkt
10 ml Divinylbenzol (Isomerengemisch)
70 ml Glycidylmethacrylat
20 ml Vinylpyrrolidon
300 ml Tetrahydrofuran
10 g Bayferrox 318M
5 g AIBN
150 g Lupasol FG (BASF)
150 ml THF
Beispiel 7
In einem 1000 ml Dreihalskolben werden Tetrahydrofuran, Ferrofluidpaste und Monomere (Ethylenglykoldimethacrylat, Glycidylmethacrylat, Vinylpyrrolidon) vermischt und für 15 min mit Stickstoff über ein Einleitrohr begast. Die Temperatur der Monomerdispersion wird unter Rühren auf 65°C hochgefahren und mittels AIBN Zugabe gestartet. Nach 6h wird eine Lösung aus Lupasol FG und THF hinzugegeben und für weitere 6 Stunden unter Rückfluß erhitzt. Die Partikel werden mit Ethanol, 0,01 M Salzsäure, 0,1 M Ammoniaklösung und deionisiertem Wasser gewaschen. Die Trocknung der Partikel erfolgt im Vakuumtrockenschrank bei 80°C.
Menge Produkt
10 ml Divinylbenzol (Isomerengemisch)
70 ml Glycidylmethacrylat
20 ml Vinylpyrrolidon
300 ml Tetrahydrofuran
10 g Ferrofluidpaste
5 g AIBN
150 g Lupasol FG (BASF)
150 ml THF
Beispiel 8
In einem Suspensionsreaktor wird eine unpolare Phase bestehend aus 300 ml Pflanzenöl vorgelegt. Eine Lösung aus 4 ml Wasser, 10 ml Dimethylamino- ethylmethacrylat, 1 ml Methylenbisacrylamid, 6 ml Acrylamid und 5 ml Ferrofluid EMG 707 (Ferrotec) wird unter starkem Rühren im Pflanzenöl dispergiert. Des weiteren wird unter starkem Rühren 0,2ml 1,8 M-Ammoniumperoxodisulfatlösung hinzugefügt und anschließend die Polymerisation durch Zugabe des Katalysators 0,1ml N,N,N',N'-Tetramethylethylendiamin gestartet. Die Suspension wird für 10- 30min gerührt. Danach werden die magnetischen Beads abgetrennt, mit Wasser gewaschen und in Suspension bzw. als getrocknetes Pulver eingesetzt.
Das Experiment wird in neun verschiedenen Ansätzen durchgeführt:
Ansatz Menge Edukte
I) 300 ml Pflanzenöl (Dreigold) 4 ml Wasser
10 ml Dimethylaminoethylmethacrylat
1 ml Methylenbisacrylamid
6 ml Acrylamid
5 ml Ferrofluid EMG 707 (Ferrotec)
Partikelgröße nach Polymerisation: 10-100μm
II) 300 ml Pflanzenöl (Dreigold)
4 ml Wasser
10 ml Dimethylaminoethylmethacrylat
0,1 ml Methylenbisacrylamid
6 ml Acrylamid
5 ml Ferrofluid EMG 707 (Ferrotec)
Partikelgröße nach Polymerisation: 10-100μm
IM) 300 ml Pflanzenöl (Dreigold)
4 ml Wasser
10 ml Dimethylaminoethylmethacrylat
1 ml Methylenbisacrylamid
6 ml Acrylamid
5 ml Ferrofluid EMG 507 (Ferrotec)
Partikelgröße nach Polymerisation: 10-100μm
IV) 300 ml Pflanzenöl (Dreigold)
4 ml Wasser
10 ml Dimethylaminoethylmethacrylat
0,1 ml Methylenbisacrylamid
6 ml Acrylamid
5 ml Ferrofluid EMG 507 (Ferrotec) Partikelgröße nach Polymerisation: 10-100μm
V) 300 ml Pflanzenöl (Dreigold)
4 ml Wasser
10 ml Dimethylaminoethylmethacrylat
1 ml Methylenbisacrylamid 6 ml Acrylamid
5 ml Ferrofluid EMG 507 (Ferrotec)
Rühren mittels Ultra-Turrax
Partikelgröße nach Polymerisation: 5-30μm
VI) 90 ml Pflanzenöl (Dreigold)
1 ,5 ml Wasser
3 ml Dimethylaminoethylmethacrylat 0,1 ml Methylenbisacrylamid
2 ml Acrylamid
5 ml Ferrofluid EMG 507 (Ferrotec)
Partikelgröße nach Polymerisation: 10-40μm
VII) 300 ml Pflanzenöl (Dreigold)
4 ml Wasser
10 ml 2-Hydroxyethylmethacrylat
1 ml Methylenbisacrylamid
6 ml Acrylamid
5 ml Ferrofluid EMG 507 (Ferrotec)
Partikelgröße nach Polymerisation: 10-40μm
VIII) 300 ml Pflanzenöl (Dreigold)
4 ml Wasser
10 ml 2-Hydroxyethylmethacrylat 0,1 ml Methylenbisacrylamid
6 ml Acrylamid
5 ml Ferrofluid EMG 507 (Ferrotec)
Partikelgröße nach Polymerisation: 10-40μm
IX) 90 ml Pflanzenöl (Dreigold)
4 ml Wasser
10 ml 2-Hydroxyethylmethacrylat
0,1 ml Methylenbisacrylamid
6 ml Acrylamid
5 ml Ferrofluid EMG 507 (Ferrotec)
Partikelgröße nach Polymerisation: 10-40μm
Beispiel 9: Zellabtrennung aus verkeimter Lösung
Modifizierte Magnetobeads eignen sich aufgrund ihrer funktionalisierten, porösen Oberfläche zur Zellseparation, z. B. zur Zellabreicherung mikrobiell kontaminierter Produkte oder Anlagen, die einer längeren Standzeit unterliegen. Zur Überprüfung der biologischen Aktivität wurde folgender Testansatz etabliert :
Durchführung und Ergebnisse:
1. Abtrennung von Keimen aus Puffer
Die zu verwendeten Keime werden aus einem Kühlschmiermittel isoliert (z.B. Pseudomonas aeruginosa). Der jeweilige Keim wird über Nacht in Caso- Nährmedium bei 30°C (je nach Keim bei 30°C bzw. 37°C) inkubiert (1. Passage). Am nächsten Tag werden von der gewachsenen Flüssigkultur Keime in frisches Caso-Nährmedium überführt und wiederum über Nacht inkubiert. Aus dieser zweiten Passage wird für den Test eine Keimzahl von 107 eingestellt. Die Magnetobeads werden 1%ig bzw. 5%ig in den Puffer eingewogen. Für den neutralen bis basischen Bereich wird Phosphatpuffer, für den neutralen bis sauren Bereich Acetatpuffer verwendet, die mit steriler 1 n NaOH-Lsg. oder 1 n HCI-Lsg eingestellt werden. Die Testansätze (im Schüttelkolben, zwischen 20-40ml) werden mit der auf 107 eingestellten Keimsuspension 1%ig beimpft (Keimzahl im Testansatz 105) und bei Raumtemperatur bei 150 rpm geschüttelt. Die Probenentnahme erfolgt nach 1h, 3h und 24h bzw. 48h. Dazu werden die Schüttelkolben an einen Magneten gestellt, die Magnetobeads abgetrennt und 1ml aus dem partikelfreien Überstand in 9ml Inaktivatorlösung pipettiert. Die anschließende Verdünnungsreihe erfolgt in Trypton-NaCI-Lösung. Aus dieser Verdünnungsreihe werden 1ml-Proben entnommen und mittels Plattenguß- Verfahrens mit Medium versetzt. Die resultierenden Platten werden 24h bebrütet und danach ausgezählt. Bei den Testansätzen läuft eine Kontrolle mit, bestehend aus dem eingesetzten Puffer (eingestellt auf die zu testenden pH-Werte), der ebenfalls 1%ig mit der im Test eingesetzten Keimsuspension beimpft wird. Diese Kontrolle wird zur Berechnung der Abtrennungsfaktors der im Ansatz enthaltenen Keime benötigt.
Die Zellabtrennung bei pH9 ist nach einer Stunde bei 1% Magnetobead- Einsatzmenge etwas besser als bei 5%. Nach 24 Stunden sind keine Unterschiede zu erkennen (Ergebnisse nicht gezeigt). Diese Abreicherung von über 5 log-Stufen (100% der eingesetzten Zellzahl) ist bei den (unter Beispiel 1-4 beschriebenen) Partikeln nur bei pH 9 zu erreichen, welches vermutlich mit der Oberflächenmodifizierung zusammenhängen kann (Abb. 1). Diese vollständige Zellabtrennung (im Vergleich zur Kontrolle) unter Pufferbedingungen erzielen auch die unter Beispiel 6/7 beschriebenen Magnetobeads (Ergebnisse nicht gezeigt). Da viele Kühlschmierstoffe ebenfalls auf pH 9 eingestellt sind, bieten sich diese Partikel für die Keimkontrolle in Anlagen mit Kühlschmierstoffen an.
Figure imgf000045_0001
Figure imgf000045_0002
pH 7 pH 8 pH 9
D 1 Stunde 3 Stunden 24 Stunden
Abb. 1 : Abtrennung von P. aeruginosa aus Phosphat-Puffer
2. Abtrennung von Keimen aus technischen Anwendungs-Lösungen 2.1 Abtrennung von Keim-Gemischen aus Kühlschmiermitteln (KSM)
Zur anwendungsnäheren Untersuchung werden die Abtrennungs-Versuche in Kühlschmiermittel-Gemischen (Mischung aus verschiedenen KSM-Produkten) durchgeführt, die sich durch eine hohe und stabile Verkeimung auszeichnen. Dominierende Keime in diesen Gemischen sind in der Regel Pseudomonaden. Die Durchführung entspricht wie unter 1 beschrieben, nur dass die Keime bereits (im KSM) enthalten sind. Die Ansätze wurden mit 1M Monoethanolamin und 1N HCI auf pH 9 eingestellt. Die jeweilige Kontrolle (ohne Magnetobead) erhält die gleiche Menge an Monoethanolamin bzw. HCI, um Effekte dieser Chemikalien auf das mikrobielle Wachstum auszuschließen.
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Zeit
Magnetobead Kontrolle
Abb. 2 Abtrennung von Keimen aus Kühlschmiermittel
Durch den Partikel aus Beispiel 1-4 werden keine Keime aus der KSM-Lösung abgetrennt (nicht gezeigt), während der unter Beispiel 6/7 beschriebene Partikel nach 24h eine Keimreduktion von ca. drei log-Stufen bewirkt (von 106 auf 103 Keime/ml, Abb. 2). Letzterer besitzt eine dichtere Oberflächenausrüstung mit funktionellen Gruppen, die vermutlich auch eine Wechselwirkung mit Keimen in Emulsionen wie KSM ermöglichen und somit eine verbesserte Abtrennungskapazität.
Ein Transfer auf einen anwendungsnäheren Maßstab hinsichtlich des Testsystems ist durch Verwendung eines Umwälzbeckens erfolgt, in dem vier Liter verkeimtes KSM mit 2% Magnetobead (Beispiel 6/7) inkubiert werden können. Nach 48h erfolgte ebenfalls eine Keimreduktion von 3 log-Stufen. 2.2 Abtrennung von Keimen aus Neutralreinigern
Es wurden artifizielle Keimsuspensionen im Neutralreiniger (angesetzt gemäß Anwendungskonzentration) durch ständiges Beimpfen des Frischproduktes hergestellt, so dass beim abzutrennenden Keim und beim zu untersuchenden Produkt definierte Bedingungen vorliegen. Als Keime werden zum einen ein thermophiler Bacillus bzw. Pseudomonas putida an den Neutralreiniger adaptiert und anschließend durch Zugabe von Magnetobeads (Beispiel 6/7) abgetrennt.
Nach 24h wird Pseudomonas putida bei pH7 um 3,5 log-Stufen reduziert, bei pH 9 allerdings nur um 0,24 log-Stufen. Beim thermophilen Bacillus werden bereits nach einer Stunde über 90% der zu untersuchenden Keime aus dem Neutralreiniger entfernt, wobei bei pH7 die Abtrennung leicht besser erfolgt als bei pH9.
Die Effizienz der Partikel ist somit nicht nur von der Oberflächenausrüstung, sondern auch von der zu untersuchenden Produktmatrix abhängig.

Claims

Patentansprüche:
1. Magnetische Partikel zur Abtrennung von Mikroorganismen aus technischen Medien, dadurch gekennzeichnet, daß sie auf der Oberfläche polyfunktionale Polymere tragen
2. Magnetische Partikel nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, daß die technischen Medien ausgewählt sind unter Kühlmitteln; Schmiermitteln; Kühlschmiermitteln; Kühlwässern; Klärwässern; Klärschlämmen; Farben; Lacken; Klebstoffen; Polymerdispersionen; Latexemulsionen und Vergussmassen; Holzbehandlungsmitteln; Mineralölen; Pflanzenölen; Antifäulnisfarben; Brauch- und Waschwässern in Abluftwäscher-Systemen, Schwimmbädern, Wassersystemen von Zellstoff- und Papiermühlen und in industriellen Frischwasserversorgungssystemen; Ölbohrflüssigkeiten und - schlämmen sowie Ton- und Pigmentschlämmen.
3. Magnetische Partikel nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß sie mindestens eine magnetische Komponente a), eingebettet in eine polymere Matrix b) sowie an deren Oberfläche polyfunktionale Polymere c) enthalten.
4. Magnetische Partikel nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß die magnetische Komponente a) in die polymere Matrix b) einpolymerisiert ist.
5. Magnetische Partikel nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß die polyfunktionalen Polymere c) dendritische Polymere sind.
6. Magnetische Partikel nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß die polyfunktionalen Polymere c) hyperverzweigte Polymere sind.
7. Magnetische Partikel nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß die polyfunktionalen Polymere c) ausgewählt sind unter Polyethylenimin, Polyethylenaminen, Polyvinylamin, Polyvinylformamid, Polyvinylamid, Polyvinylaminal, Polyvinylurea, Polysulfonsäuren, Copolymeren aus Maleinsäureanhydrid und Polyacrylaten.
8. Magnetische Partikel nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß sie geeignete Monomere zur Herstellung der Matrix b), geeignete Monomere zur Herstellung polyfunktionaler Polymere c), mindestens eine magnetische Komponente a) sowie mindestens einen Vernetzer mit mindestens zwei nicht konjugierten, ethylenisch ungesättigten Doppelbindungen einpolymerisiert enthalten.
9. Magnetische Partikel nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß die zur Herstellung der Matrix b) geeigneten Monomere ausgewählt sind unter Acrylsäure, Methacrylsäure, Acrylamid, Methacrylamid, Ethylmethacrylat, Allylmethacrylat, Benzylmethacrylat, Cyclohexylmethacrylat, 2-Ethylhexylmeth- acrylat, i-Butylmethacrylat, Isodecylmethacrylat, Methylmethacrylat, Methacrylnitril, n-Butylmethacrylat, n-Hexylmethacrylat und Stearylmethacrylat, insbesondere unter Acrylsäure, Methacrylsäure, Acrylamid, Methacrylamid und Ethylmethacrylat.
10. Magnetische Partikel nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß die zur Herstellung polyfunktionaler Polymere c) geeigneten Monomere ausgewählt sind unter 1 ,3-Butandioldimethacrylat, 1 ,4-Butandioldimethacrylat, 1 ,6- Hexandioldimethacrylat, 2-Dimethylaminoethylmethacrylat, 2-Hydroxyethyl- acrylat, 2-Hydroxyethylmethacrylat, 2-Trimethylammoniumethylmethacrylat- chlorid, 3-Dimethylaminopropylmethacrylamid, 3-Trimethylammoniumpropyl- methacrylamidchlorid, Butyldiglykolmethacrylat, Diethylenglykoldimethacrylat, Dimethylaminoethylacrylat, Diethylaminoethylacrylat, Dimethylaminoneopentylacrylat, Dimethylaminopropylacrylat, Dimethylaminoneopentylacrylat und Dimethylaminoneopentylmethacrylat, Diurethandimethacrylat, Ethylenglykoldimethacrylat, Glycidylmethacrylat, Glycerindimethacrylat, Hydroxypropylacrylat, Hydroxypropylmethacrylat, Isobornylmethacrylat, Methacrylsäuranhydrid, Methoxypolyethylenglykolmethacrylat, N-(2-Methacryloyloxy- ethyl)ethylenhamstoff, N-Butoxymethylmethacrylamid, N-Methylolmethacryl- amid, Polyethylenglykoldimethacrylat, Tetraethylenglykoldimethacrylat, Tetrahydrofurfurylmethacrylat, Triethylenglykoldimethacrylat,
Trimethylolpropantrimethacrylat, Sulfoethylacrylat, Sulfoethylmethacrylat, Sulfopropylacrylat, Sulfopropylmethacrylat, 2-Hydroxy-3-methacryloxypropyl- sulfonsäure und 2-Acrylamido-2-methylpropansulfonsäure, insbesondere unter Ethylenglykoldimethacrylat, Glycidylmethacrylat, 2-
Dimethylaminoethylmethacrylat, 2-Hydroxyethylacrylat und 2-
Hydroxyethylmethacrylat sowie unter m-Vinylbenzylchlorid, p- Vinylbenzylchlorid, m,p-Vinylbenzylchlorid, Trichloroethylacrylat,
Trichloroethylmethacrylat, α-Chloroacrylnitril, αr-Chloroacrylat, a-
Chloroacrylsäure, αr-Bromomaleinsäureanhydrid, α-Chloromaleinsäure- anhydrid, 2-(2-Chloropropionyloxy)ethylacrylat, 2-(2-Bromopropio- nyloxy)ethylacrylat, 2-(2-Chloropropionyloxy)ethylmethacrylat und 2-(2- Bromopropionyloxy)ethylmethacrylat
11. Magnetische Partikel nach einem der Ansprüche 8 bis 10, dadurch gekennzeichnet, daß der Vernetzer ausgewählt ist unter 1,1,1,-Tris-(Hydroxy- methyl)propantriacrylat, 3-(Acryloyloxy)-2-hydroxypropylmethacrylat, Methacryl- säureallylester, Acrylsäuevinylester N,N'-Methylen-bisacrylamid, Polyethylenglykoldiacrylat, Polyethylenglykoldimethacrylat, Ethylenglykoldiacrylat und Ethylenglykoldimethacrylat.
12. Magnetische Partikel nach einem der Ansprüche 8 bis 11 , dadurch gekennzeichnet, daß die magnetische Komponente a) ausgewählt ist unter Magnetit mit Partikelgrößen im Bereich von etwa 10 nm bis etwa 600 nm, insbesondere etwa 20 bis etwa 400 nm.
13. Magnetische Partikel nach einem der Ansprüche 8 bis 12, dadurch gekennzeichnet, daß die Partikel zusätzlich Vinylpyrrolidon einpolymerisiert enthalten.
14. Verfahren zur Herstellung magnetischer Partikel gemäß der Definition in einem der Ansprüche 8 bis 13, dadurch gekennzeichnet, daß man zur Herstellung polyfunktionaler Polymere c) geeignete Monomere oder Oligomere mit zur Herstellung der Matrix b) geeigneten Monomeren in Gegenwart magnetischer Komponenten a), mindestens eines Vernetzers mit mindestens zwei nicht konjugierten, ethylenisch ungesättigten Doppelbindungen sowie mindestens eines Polymerisationsinitiators und gegebenenfalls weiterer Bestandteile copolymerisiert.
15. Verfahren nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, daß man die in Anspruch 14 genannten Komponenten in einer mit Wasser nicht mischbaren organischen Phase suspendiert und dann radikalisch zu Polymerpartikeln vernetzt.
16. Verfahren nach Anspruch 14 oder 15, dadurch gekennzeichnet, daß die organische Phase ausgewählt ist unter a) Mineralölen, b) Ölen tierischen Ursprungs, insbesondere technischen Fischölen, wie Capelinöl, Heringsöl, Makrelenöl, Orange-Roughy-Öl, Sardinenöl, Thunfischöl und anderen, sowie c) Ölen pflanzlichen Ursprungs, insbesondere Aprikosenkemöl, Arganöl, Avocadoöl, Babassuöl, Baumwollsaatöl, Boragesamenöl, Calendulaöl, Camelinaöl, Erdnussöl, Frittieröl, Hagebuttenkemöl, Hanföl, Haselnussöl, Johannisbeersamenöl, Johanniskrautöl, Jojobaöl, Kakaobutter, Knoblauchöl, Kokosöl, Kürbiskernöl, Kukuinussöl, Leinöl, Lorbeeröl, Maiskeimöl, Makadamianussöl, Mandelöl, Mangofett, M.C.T.-ÖI, Mohnöl, Nachtkerzenöl, Olivenöl, Palmkernöl, Palmöl, Paranussöl, Pekannussöl, Perillaöl, Pfirsichkernöl, Pistazienkernöl, Rain Forest Öle, Reiskeimöl, Rizinusöl, Gemischen aus Rüböl / Rapsöl, Gemischen aus Safloröl / Distelöl, Sanddomfruchtfleischöl, Schwarzkümmelöl, Senföl, Sesamöl, Sheabutter, Sojaöl, Sonnenblumenöl, Traubenkemöl, Walnussöl und Weizenkeimöl, oder Mischungen davon.
17. Verfahren nach einem der Ansprüche 14 bis 16, dadurch gekennzeichnet, daß man als weiteren Bestandteil Vinylpyrrolidon einsetzt.
18. Verfahren nach einem der Ansprüche 14 bis 17, dadurch gekennzeichnet, daß man die Monomere zur Herstellung polyfunktionaler Polymere c) in einer Menge von 30 bis 95 Gew.-%, vorzugsweise von 40 bis 90 Gew.-% und insbesondere von 50 bis 85 Gew.-%, bezogen auf die eingesetzte Monomergesamtmenge einsetzt.
19. Verfahren nach einem der Ansprüche 14 bis 18, dadurch gekennzeichnet, daß man die Vernetzer in einer Menge von 0,1 bis 60 Gew.-%, vorzugsweise von 1 bis 50 Gew.-%, insbesondere von 1 ,5 bis 40 Gew.-%, bevorzugt von 2 bis 35 Gew.-% und besonders bevorzugt von 3 bis 30 Gew.-%, bezogen auf die Monomergesamtmenge, einsetzt.
20. Verfahren nach einem der Ansprüche 14 bis 19, dadurch gekennzeichnet, daß der Polymerisationsinitiator aus einer Mischung von Ammoniumpersulfat und N,N,N',N'-Tetramethylethylendiamin besteht.
21. Verfahren nach Anspruch 20, dadurch gekennzeichnet, daß die Ammoniumpersulfat-Zugabe zeitlich vor der N,N,N',N'- Tetramethylethylendiamin-Zugabe erfolgt.
22. Mikrobizide Mittel, insbesondere Sterilisations-, Desinfektions- Imprägnieroder Konservierungsmittel, enthaltend magnetische Partikel, wie in den Ansprüchen 1 bis 13 definiert und zusätzlich mikrobizide Agenzien.
23. Mikrobizide Mittel nach Anspruch 22, enthaltend mikrobizide Agenzien, die ausgewählt sind unter oxidierenden Bioziden, wie Chlor- und Bromabspaltenden Verbindungen, Chlordioxid, Ozon, Permanganat und Peroxiden; nicht-oxidierenden Bioziden, wie aldehydischen Wirkstoffen, quaternären Ammoniumverbindungen, Isothiazolon-Verbindungen sowie weiteren mikrobiziden Wirkstoffen, wie Phenol-Derivaten und Alkoholen.
24. Verwendung magnetischer Partikel, wie in den Ansprüchen 1 bis 13 definiert, zur Abtrennung oder Entfernung von Mikroorganismen aus technischen Medien.
25. Verwendung magnetischer Partikel, wie in den Ansprüchen 1 bis 13 definiert, zur Abtrennung oder Entfernung von Bakterien, Viren, Pilzen oder Algen und/oder zur Hemmung oder Bekämpfung des Wachstums oder der Vermehrung von Bakterien, Viren, Pilzen oder Algen auf dem Gebiet der Farben-, Holz-, Textil-, Kosmetik-, Leder-, Tabak-, Pelz-, Seil-, Papier-, Zellstoff-, Kunststoff-, Treibstoff-, Öl-, Kautschuk- und Maschinenindustrie, in Wasch- und Reinigungsmitteln sowie zur Entkeimung von Kühl- und Kühlschmiermitteln.
26. Verwendung magnetischer Partikel, wie in den Ansprüchen 1 bis 13 definiert, in CIP-Anlagen.
27. Verwendung mikrobizider Mittel, wie in den Ansprüchen 22 und 23 definiert, zur Abtrennung und Abtötung von Bakterien, Viren, Pilzen oder Algen und/oder zur Hemmung oder Bekämpfung des Wachstums oder der Vermehrung von Bakterien, Viren, Pilzen oder Algen sowie zur Inaktivierung von Viren.
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