WO2004050122A1

WO2004050122A1 - 高血糖症に起因する疾患の予防又は治療剤

Info

Publication number: WO2004050122A1
Application number: PCT/JP2003/015503
Authority: WO
Inventors: Fumiaki Ito; Toshihide Shibazaki; Masaki Tomae; Nobuhiko Fushimi; Masayuki Isaji
Original assignee: Kissei Pharmaceutical Co., Ltd.
Priority date: 2002-12-04
Filing date: 2003-12-04
Publication date: 2004-06-17
Also published as: EP1568380A4; KR20050089156A; EP1568380A1; CA2507665A1; US20060035844A1; AU2003289156A1; CN1744916A; JPWO2004050122A1

Abstract

本発明は、広範な糖質吸収阻害作用を発現し、また通常の食事におけるフルクトースの摂取に基づく血糖降下作用を兼備し、卓越した血糖降下作用を発揮することができる、高血糖症に起因する疾患(例えば、糖尿病、耐糖能異常、糖尿病性合併症、肥満症)の予防又は治療剤として好適な、選択的なSGLT1阻害薬(例えば、GLUT2及び/又はGLUT5阻害作用を実質的に示さないSGLT1阻害薬)を有効成分として含有する医薬組成物を提供するものである。

Description

明細書高血糖症に起因する疾患の予防又は治療剤〔技術分野〕

本発明は、選択的なナトリウム依存性グルコース輸送担体（以下 S G L Tと称する） 1阻害薬を有効成分として含有する、高血糖症に起因する疾患の予防又は治療剤に関するものである。

更に詳しく述べれば、本発明は、例えば、促進拡散型グルコース輸送担体（以下 G L UTと称する） 2及びノ又は G L UT 5阻害作用を実質的に示さない S G L T 1阻害薬等の、小腸からのフルクト一ス吸収を阻害する活性を実質的に示さない S G L T 1阻害薬を有効成分として含有する、高血糖症に起因する疾患の予防又は治療剤に関するものである。〔背景技術〕

近年の糖尿病患者数の急増、および大規模臨床試験により証明された厳密な血糖コントロールの必要性を背景に（例えば、下記文献 1〜 3参照）、糖尿病治療薬として種々の薬剤が開発又は使用されている。例えば、食後高血糖の是正には、小腸における炭水化物の消化を抑制することにより糖質吸収を遅延させる薬剤である、ァカルポース、ミグリトール、ポグリポース等のひ—ダルコシダーゼ阻害薬が現在使用されており、これらの薬剤を 2型糖尿病患者に投与した場合、有意に血糖値や H b A_lcが低下したことが報告されている（例えば、下記文献 4〜 6参照）。また、その一つであるァカルポースは、耐糖能異常者に適用することにより、糖尿病の発症を予防又は遅延させる効果があることが報告されている（例えば、下記文献 7参照）。しかしながら、食事中の糖質構成の変化に伴い、最近ではグルコース等の単糖を直接摂取する機会が増加しているが、一ダルコシダ一ゼ阻害薬は、単糖に対して吸収阻害作用を示さないため（例えば、下記文献 8参照）、更に広範な糖質吸収阻害作用を有する薬剤の開発が嘱望されている。

糖質の吸収を司る小腸には、 SGLT 1が存在することが知られている。また、ヒト SGLT1に先天的異常がある機能不全の患者では、グルコース及びガラクト一スの吸収が不良となることが報告されており（例えば、下記文献 9 〜11参照）、 SGLT1はグルコースとガラクト一スの吸収に関与することが確認されている（例えば、下記文献 12及び 13参照）。更に、糖尿病症状では、一般的に糖質の消化 ·吸収が亢進しており、例えば、 OLETFラットやストレプトゾトシン誘発糖尿病モデルラットにおいて S G L T 1の mR N A やタンパクが増加し、グルコース等の吸収が亢進していることが確認されている（例えば、下記文献 14及び 15参照）。また、ヒト小腸において、 SGL T 1の mRN Aやタンパクが高発現していることが確認されている（例えば、下記文献 16参照）。それ故、 SGLT1阻害薬は小腸でのグルコース等の糖質吸収を阻害して血糖値の上昇を抑制することができ、特には、上記作用機作に基づき糖質吸収を抑制または遅延させて食後高血糖の是正に有用であると考えられる。

フロリジンは、 SGLT阻害剤として広く知られている。また、フロリジンには、尿糖排泄を促進することにより血糖値を低下させる作用があることが知られているが（例えば、下記文献 17〜20参照）、消化管内で )3—ダルコシダーゼにより素早く分解されるため、この作用は経口投与では認められていない（例えば、下記文献 21及び 22参照）。

フルク卜一スは、生理的条件を越えた高用量では脂質、プリン及び銅の代謝に悪影響を及ぼすことが知られているが（例えば、下記文献 23参照）、近年、ヒト、ィヌ及びラットにおいて、少量のフルクトース摂取により食後高血糖が抑制されることが報告された（例えば、下記文献 24〜28参照）。この作用は、肝でのグルコース取り込み及びグリコーゲン蓄積の促進、並びに糖産生の抑制に基づくものであると考えられている（例えば、下記文献 24, 25, 2 7, 29参照）。詳述すると、第一に、消化管より吸収されたフルクトースが肝細胞内に取り込まれ、フルクトキナーゼによりフルクトース— 1一リン酸に変換されて核内に移行する。核内にはダルコキナーゼが、調節タンパク質及びフルクト一ス一 6—リン酸と結合して非活性な状態で存在している。この酵素は糖尿病患者において減少していることが知られている。フルクト一ス— 1一リン酸は、ダルコキナーゼ複合体のフルクト一ス一 6—リン酸と置換し、これに伴い調節タンパク質が外れて活性化したダルコキナーゼが細胞質に移行し、取り込まれたグルコースをグルコース— 6 -リン酸に変換する。このようにしてグルコースの利用が亢進した結果、肝へのグルコースの取り込みが増大する (例えば、下記文献 2 3参照）。また、ヒト又はィヌのフルクトースを添加したブドウ糖負荷試験において、血漿中ィンスリン濃度が減少したことが報告されている（例えば、下記文献 2 4及び 2 6参照）。以上の如く、少量のフルクト一スは、肝でのグルコースの取り込み及びグリコーゲン蓄積を促進し、並びにィンスリン分泌を抑制させるため、糖尿病患者における血糖値の低下作用に加え、糖尿病患者で低下しているグリコーゲン合成の改善、食後高血糖による大血管障害のリスク低減や疲弊した S萃臓の保護などの効果を発揮すると考えられる。

本発明で解決しょうとする課題は、高血糖症に起因する疾患の予防又は治療に好適である、小腸において広範な糖質吸収阻害作用を有する新規な薬剤を開発することである。

フロリジンは、上述の如く、 S G L T阻害作用を有する薬剤であるが、消化管内で) 3—ダルコシダーゼにより素早く分解されてフロレチンを生成させ（例えば、下記文献 3 0及び 3 1参照）、このフロレチンが G L UTを阻害することが知られている（例えば、下記文献 3 2参照）。このように、フロリジンは、消化管内では S G L T阻害作用のみならず、 G L UT阻害作用も有している。また、小腸上皮細胞においては、小腸管腔側の刷子縁膜には G L UT 5が、毛細血管側の基底側壁部細胞膜には G L UT 2が局在しており、これらの G L U Tは小腸におけるフルク 1 ^一スの吸収に ¾与していることが知られている（例えば、下記文献 3 3参照）。

本発明は、フルク卜一ス摂取による効果を発現し、高血糖症に起因する疾患に対して有用である、選択的な S G L T 1阻害薬を有効成分として含有する新規な予防又は治療剤を提供するものである。文南犬 1 ： The Diabetes Control ana Complications Trial Research Group, 「 N. Engl. J. Med. 」， 1993年 9月，第 329巻，第 14号， p. 977 - 986 ;

文献 2 ： UK Prospective Diabetes Study Group, 「 Lancet 」， 1998年 9月，第 352巻，第 9131号， p. 837— 853 ;

文献 3 :富永真琴，「内分泌 ·糖尿病科」， 2001年 11月，第 13巻，第 5号， p. 534- 542 ；

文献 4 ：宮下洋、他 8名，「糖尿病」， 1998年，第 41卷，第 8号， p . 655-661 ；

文献 5 ：坂本信夫、他 6名，「臨床と研究」， 1990年，第 61巻，第 1号， p. 219 - 233 ；

文献 6 ：船間敬子、他 8名，' 「薬理と治療」， 1997年，第 25巻，第 8号， p. 2177-2186 ；

文献 7 ： Jean-Louis Chiasson, 外 5名，「 Lancet 」， 2002年 6月，第 359巻，第 9323号， p. 2072-2077 ；

文献 8 ：小高裕之、外 3名，「日本栄養 ·食糧学会誌」， 1992年，第 45巻， p. 27 ；

文献 9 ：馬場忠雄、外 1名，「別冊日本臨床領域別症候群シリーズ」， 1998年，第 19号， p. 552- 554 ;

文献 10 ：笠原道弘、外 2名，「最新医学」， 1996年 1月，第 51巻，第 1·号， P. 84- 90 ；

文献 11 ：土屋友房、外 1名，「日本臨牀」， 1997年 8月，第 55巻，第 8号， p. 2131-2139 ;

文献 12 :金井好克，「腎と透析」， 1998年 12月，第 45巻，臨時増刊号， p. 232 - 237 ；文献 13 : E.Turk、外 4名，「 Nature」， 1991年 3月，第 350巻， p . 354-356 ；

文献 14 ： Y. Fujita、外 5名，「 Diabetologia」， 1 998年，第 41巻 , . 1459- 1466 ；

文献 15 ： J.Dyer, 外 5名，「 Biochem. Soc. Trans. 」， l 997年，第 25巻， p. 479 S ；

文献 16 ： J.Dyer, 外 4名，「 Am. J. Physiol. 」， 2002年 2月，第 2 82巻，第 2号， p. G241-G248 ；

文献 1 Ί ： O.Blondel, 外 2名，「 Metabolism」， 1990年，第 39巻， P. 787 - 793 ；

文献 18 ： A.Khan、外 1名，「 Am. J. Phisiol. 」， 1995年，第 269 卷， p. E623 -E 626 ；

文献 1 9 ： A.Krook、外 6名，「 Diabetes 」， 1 997年，第 46巻， p . 21 10-21 14 ;

文献 20 ： L.Rossetti、外 2名，「 Diabetes Care」， 1 990年，第 13 巻， p. 610- 630 ;

文献 21 ： P.Malathi、外 1名，「 Biochim.Biophys.Acta 」， 1969年，第 173巻， p. 245-256 ；

文献 22 ： K.Tsujihara, 外 6名，「 Chem.Pharm.Bull. (Tokyo) 」， 199 6年，第 44卷， p. 1 174- 1 180 ；

文献 23 ： M.Watford, 「 Nutr.Rev. 」， 2002年 8月，第 60巻， p. 253-264 ;

文献 24 :M.Shiota、外 6名，「 Diabetes」， 2002年，第 51巻， p. 469-478 ；

文献 25 :M.Shiota、外 4名，「 Diabetes」， 1998年，第 47巻， p. 867 - 873 ；

文献 26 ： M.C.Moor, 外 3名，「 Diabetes Care」， 2001年，第 24巻， p. 1882- 1887 ；文献 27 : M.Hawkins、外 5名，「 Diabetes」， 2002年，第 51巻， p . 606-614 ;

文献 28 ： B.W. olf, 外 5名，「 J.Nutr. 」， 2002年，第 132巻， p . 1219-1223 ;

文献 29 ： K.F.Petersen、外 4名，「 Diabetes」， 2001年，第 50巻， p. 1263-1268

文献 30 ： P.Malathi、外 1名，「 Biochim. Biophys. Acta」， 1969年, 第 173巻， p. 245- 256 ；

文献 31 ： K.Tsujihara, 外 6名，「 Chem. Pharm. Bui 1. (Tokyo) 」， 199 6年，第 44巻， p. 1174- 1180 ；

文献 32 ： C.P.Corpe, 外 5名，「 Pflugers Arch. -Eur. J.Physiol. 」， 1 996年，第 432巻， p. 192 - 201 ；

文献 33 ：高田邦昭，「 Bio. Clinica」， 1999年，第 14巻，第 10 号， p. 893 - 898

〔発明の開示〕

本発明者らは、フルクトース摂取による効果を発現する、広範な糖質吸収阻害作用を有する新規な薬剤を見出すべく鋭意研究した結果、選択的な S GLT 1阻害薬が優れた血糖降下作用を発揮し、高血糖症に起因する疾患の予防又は治療に好適であるという驚くべき知見を得、本発明を成すに至った。

具体的には、本発明は、

1) 選択的な SGLT1阻害薬を有効成分として含有する、高血糖症に起因する疾患の予防又は治療剤；

2) GLUT2及び/又は G LUT 5阻害作用を実質的に示さない S G L T 1阻害薬を有効成分として含有する、高血糖症に起因する疾患の予防又は治療剤；

3) 投与形態が経口剤である、前記 1) 又は 2) の予防又は治療剤；

4) 高血糖症に起因する疾患が糖尿病である、前記 1) 〜3) の何れかの予防又は治療剤；

5) 糖尿病が食後高血糖である、前記 4) の予防又は治療剤；

6) 高血糖症に起因する疾患が耐糖能異常（I GT) である、前記 1) 〜3 ) の何れかの予防又は治療剤；

7) 高血糖症に起因する疾患が糖尿病性合併症である、前記 1) 〜3) の何れかの予防又は治療剤；

8) 高血糖症に起因する疾患が肥満症である、前記 1) 〜3) の何れかの予防又は治療剤；

9) 選択的な SGLT1阻害薬を有効量投与することからなる、高血糖症に起因する疾患の予防又は治療方法；

10 ) 選択的な S G L T 1阻害薬が G L UT 2及び/又は G L UT 5阻害作用を実質的に示さない SGLT 1阻害薬である、前記 9)の予防又は治療方法；

1 1) 投与形態が経口剤である、前記 9) 又は 10) の予防又は治療方法；

12) 高血糖症に起因する疾患が糖尿病である、前記 9) 〜11) の何れかの予防又は治療方法；

13) 糖尿病が食後高血糖である、前記 12) の予防又は治療方法；

14) 高血糖症に起因する疾患が耐糖能異常（I GT) である、前記 9) 〜 11) の何れかの予防又は治療方法；

15) 高血糖症に起因する疾患が糖尿病性合併症である、前記 9) 〜11) の何れかの予防又は治療方法；

16) 高血糖症に起因する疾患が肥満症である、前記 9) 〜1 1) の何れかの予防又は治療方法；

17) 高血糖症に起因する疾患の予防又は治療用の医薬組成物を製造するための、選択的な SGLT 1阻害薬の使用；

18) 選択的な S G L T 1阻害薬が G L UT 2及び Z又は G L UT 5阻害作用を実質的に示さない SGLT 1阻害薬である、前記 17) の使用；

19) 医薬組成物が経口剤である、前記 17) 又は 18) の使用；

20) 高血糖症に起因する疾患が糖尿病である、前記 17) 〜19) の何れかの使用；

21) 糖尿病が食後高血糖である、前記 20) の使用；

22) 高血糖症に起因する疾患が耐糖能異常（I GT) である、前記 17) 〜 19) の何れかの使用；

23) 高血糖症に起因する疾患が糖尿病性合併症である、前記 17) 〜19 ) の何れかの使用；

24) 高血糖症に起因する疾患が肥満症である、前記 17) 〜19) の何れかの使用；等に関するものである。

本発明において、選択的な SGLT1阻害薬とは、有効成分又は/及びその代謝物が小腸からのフルクトース吸収を阻害する活性を実質的に示さず、 SG LT1阻害作用を発揮する薬剤を意味する。フルクトース吸収を阻害する活性とは、例えば、 GLUT2阻害作用、 GLUT 5阻害作用等を挙げることができる。選択的な SGLT1阻害薬としては、具体的には、実施例 1又は 2記載の化合物、その薬理学的に許容される塩、若しくはそれらの水和物を挙げることができるが、本発明には上記活性を有するその他の化合物も含まれる。ヒト及びその他の哺乳動物における S G L T 1阻害作用の評価は、下記実施例 3記載の試験方法又はそれに準拠した方法により実施することができる。同様に、 GLUT2阻害作用及び G L U T 5阻害作用の評価は、下記文献 33及び 34 記載の試験方法又はそれに準拠した方法により実施することができる。

本発明において、高血糖症に起因する疾患とは、糖尿病（特には食後高血糖 ) 、耐糖能異常（I GT) 、空腹時血糖異常（I FG) 、糖尿病性合併症（例えば、網膜症、神経障害、腎症、潰瘍、大血管症）、肥満症、高インスリン血症、高脂質血症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、脂質代謝異常、ァテローム性動脈硬化症、高血圧、うつ血性心不全、浮腫、高尿酸血症、痛風等の疾患を挙げることができる。

第一に、本発明者らは、既存の SGLT阻害薬としてフロリジン、 SGLT 1阻害薬として本発明の実施例 2記載の化合物を用いて、フルクトース負荷試験を実施し、フルクト一スの消化管内の残存量を確認した。その結果、フロリジンがフルクトースの吸収を有意に阻害するのに対し、本発明の化合物はフルクト一ス吸収阻害活性を実質的に示さないことが判った。

次に、本発明者らは、フルクト一ス摂取による効果の有無を検討するために、 2型糖尿病のモデル動物である Z u c k e r f a t t y f aZf aラットを用いて下記の通り試験を実施した。試験薬物としては、 —ダルコシダーゼ阻害薬としてァカルポースとミグリトール、 SGLT阻害薬としてフロリジン、並びに S G L T 1阻害薬として本発明の下記実施例 1及び 2記載の化合物を用いた。フルクトース存在群には、通常の食事中における炭水化物の比率に相当する、デンプン：ショ糖：乳糖（6 : 3 : 1) の混合炭水化物を負荷した（例えば、下記文献 35参照）。他方、フルクト一ス非存在群には、消化管内においてフルクト一スとグルコースに分解される二糖類であるショ糖のグルコース相当分をデンプンと置き換えたものを負荷し、比較検討した。その結果、ひ— ダルコシダ一ゼ阻害薬及びフロリジンでは、ショ糖添加炭水化物負荷時にショ糖非添加炭水化物負荷と比較して血漿グルコース濃度の低下は認められなかつたのに対し、本発明の化合物では有意な低下が認められた。これらの事から、 GLUT 2及び GLUT 5に対して阻害作用を示さない選択的な SGLT 1阻害薬は、フルクト一ス摂取により有意に血漿グルコース濃度を低下させることが判った。他方、ひ—ダルコシダーゼ阻害薬ではショ糖の分解を抑制することによりフルクトースの摂取が阻害されるため、またフロリジンでは消化管内での分解により産生するフロレチンの GLUT阻害活性によりフルクトースの吸収が阻害されるため、血漿中グルコース濃度の改善は全く認められなかった。以上の事から、選択的な S GLT 1阻害薬を有効成分として含有する医薬組成物は、広範な糖質吸収阻害作用に加えて、通常の食事におけるフルクト一スの摂取に基づく上述の効果を兼備しており、卓越した血糖降下作用を発揮することができる。それ故、本発明の医薬組成物は、高血糖症に起因した上記の各種疾患に対する予防又は治療剤として極めて好適である。

また、本発明の医薬組成物においては、有効成分として選択的な SGLT 1 阻害薬の他に、フルク卜ース吸収を実質的に阻害しないその他の血糖降下薬及び Z又は糖尿病性合併症治療薬を適宜配合し、若しくは組合わせて同時に又は間隔をずらして併用することができる。本発明の化合物と配合又は組合わせて使用することができる血糖降下薬としては、例えば、インスリン感受性増強薬

(塩酸ピオダリ夕ゾン、マレイン酸口シグリ夕ゾン等）、 S G L T 2阻害薬、ビグアナイド薬（塩酸メトホルミン、塩酸ブホルミン等）、インス'リン分泌促進薬（トルプ夕ミド、ァセトへキサミド、トラザミド、グリクロビラミド、グリブゾ一ル、グリブリド Zダリベンクラミド、ダリクラジド、ナテグリニド、レパグリニド、ミチグリニド、グリメピリド等）、インスリン製剤等を挙げることができる。また、糖尿病性合併症治療薬としては、例えば、アルド一ス還元酵素阻害薬（ェパルレスタツト等）、ナトリウムチャンネルアン夕ゴニスト (塩酸メキシレチン等）、アンジォテンシン変換酵素阻害薬（塩酸イミダプリル、リシノプリル等) 、アンジォテンシン I I受容体拮抗薬 (口サルタンカリゥム、ィルベサルタン等）、止瀉薬又は瀉下薬（ポリ力ルポフィルカルシウム、タンニン酸アルブミン、次硝酸ビスマス等）等を挙げることができる。

本発明において使用される医薬組成物としては、種々の剤形の医薬組成物を使用することができるが、例えば、錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、ドライシロップ剤、液剤等の経口の医薬組成物が好ましい。また、本発明の医薬組成物には、消化管粘膜付着性製剤、胃滞留型製剤等を含む徐放性製剤（例えば、下記文献 3 6〜 3 9参照）も含まれる。

これらの医薬組成物は、その剤型に応じ調剤学上使用される手法により適当な賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、希釈剤、緩衝剤、等張化剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、溶解補助剤などの医薬品添加物と適宜混合または希釈 ·溶解し、常法に従い調剤することにより製造することができる。また、他の薬剤と組合わせて使用する場合は、それぞれの活性成分を同時に或いは別個に上記同様に製剤化することにより製造することができる。

本発明の医薬組成物における選択的な S G L T 1阻害薬の投与量は、対象となる患者の性別、年齢、体重、疾患および治療の程度などにより適宜決定される。例えば、実施例 1又は 2記載の化合物は、経口投与の場合は概ね成人 1日当たり 0. 1〜100 Omgの範囲内で、一回または数回に分けて適宜投与することができる。また、その他の薬剤と組合わせて使用する場合、本発明の化合物の投与量は、他の薬剤の投与量に応じて減量することができる。文献 33 ： Christopher P. Corpe、他 5名，「 Pflugers Arch. -Eur. J. Physiol. J , 1996年，第 432巻， p.192— 201 ；

文献 34 : Mueckler M、他 5名，「 J. Biol. Chem.」， 1994年，第 26 9卷，第 27号， p.17765— 17767 ;

文献 35 ：武藤泰敏，「消化 ·吸収一消化管機能の調節と適応一」， 198 8年，第一出版株式会社， p. 228 ;

文献 36 ：国際公開第 WO 99/10010号パンフレツト；

文献 37 ：国際公開第 WO 99/26606号パンフレツト；

文献 38 ：国際公開第 WO 98/55107号パンフレツト；

文献 39 ：国際公開第 W〇01/97783号パンフレツト

〔図面の簡単な説明〕

第 1図は、フルクト一ス摂取による各種薬物のグルコース低下作用を示したグラフである。縦軸はショ糖非添加炭水化物負荷時に対するショ糖添加炭水化物負荷時におけるグルコースの血漿中濃度下面積の割合（％) 、横軸は薬物の種類を表す。薬物は、左から実施例 1記載の化合物、実施例 2記載の化合物、ァカルポ一ス、ミグリトール、フロリジンを示す。尚、図中の *は Pく 0. 0 5を、 * *は P<0. 01を表す。

〔発明を実施するための最良の形態〕

本発明の内容を以下の実施例および試験例でさらに詳細に説明するが、本発明はその内容に限定されるものではない。参考例 1 3, 5—ジメトキシ一 2— （4一二トロべンゾィル）トルエン

3，' 5—ジメトキシトルエン（8 g) と 4一二トロべンゾイルクロリド（1 0. 7 g) の塩化メチレン（15 OmL) 溶液に氷冷下塩化アルミニウム（7. 36 g) を加え、室温で 14時間撹拌した。反応混合物に氷水を加えた後、混合物を 1 mo 1/L塩酸中に注ぎ、有機層を分取した。有機層を 1 mo 1/L 塩酸、 lmo 1 ZL水酸化ナトリゥム水溶液および飽和食塩水で順次洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去した。残渣を n—へキサンで処理し、析出した結晶をろ取し、減圧下乾燥することにより標記化合物（8. 72 g) を得た。

½— NMR (CDC 1₃) δ p pm：

2.19 (3H, s), 3.6 (3H, s)， 3.86 (3H, s), 6.36 (1H, d， J=1.9Hz)， 6.43 (1H, d, J=1.9Hz)， 7.92 (2H,. d, J=9.2Hz), 8.26 (2H, d, J=9.2Hz) 参考例 2

5—ヒドロキシ— 3—メチルー 2一 (4—ニトロべンゾィル) フエノール

3， 5—ジメトキシー 2— （4—ニトロべンゾィル）トルエン（8. 65 g ) の塩化メチレン（14 OmL) 溶液に氷冷下三臭化ホウ素（6. 79mL) を加え、 40t:に昇温し、 15時間撹拌した。反応混合物に氷水を加え、有機層を分取した。有機層を lmo 1/L塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で順次洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒： n—へキサン7酢酸ェチル=771〜371) で精製して標記化合物（6. 3 g) を得た。

iH— NMR (CDC 1₃) δ p pm：

1.85 (3H, s)， 5.83 (1H, s)， 6.2-6.3 (1H, m)， 6.36 (1H, d， J=2.6Hz), 7.7-7.8 (2H, m), 8.25-8.4 (2H, m), 10.98 (1H, s) 参考例 3 5—メトキシカルポニルォキシー 3—メチル— 2— （4一二トロベンジル）フェノール

5—ヒドロキシー 3—メチルー 2 _ (4—二トロべンゾィル）フエノール（ 1. 65 g) およびトリェチルァミン（2. lmL) のテトラヒドロフラン（ 2 OmL) 溶液に氷冷下クロ口ぎ酸メチル（1. 03mL) を加え、室温で 4 時間撹拌した。反応混合物に水を加え、ジェチルエーテルで抽出した。抽出液を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去することにより 3， 5—ジメトキシカルポニルォキシー 2— (4—ニトロべンゾィル）トルエン（2. 37 g) を得た。これをテトラヒドロフラン（2 OmL ) —水（2 OmL) に懸濁し、氷冷下水素化ホウ素ナトリウム（921mg) を加え、室温で 2時間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニゥム水溶液を加え、ジェチルエーテルで抽出した。抽出液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で順次洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒： n—へキサン Z酢酸ェチル =3Z1) で精製して標記化合物（1. 62 g) を得た。 ^!H-NMR (CDC 1₃) (5 p pm：

2.23 (3H, s)， 3.91 (3H, s)， 4.1 (2H, s), 5.1-5.25 (1H, brs), 6.5-6.6 (1H, m)， 6.6-6.7 (1H, m)， 7.3 (2H, d, J-9.1Hz), 8.1 (2H, d, J=9.1Hz) 参考例 4

5—メトキシカルポニルォキシ〜 3—メチル— 2 _ (4—二トロベンジル）フェニル 2, 3， 4, 6—テトラー O—ァセチル一 jS— D—ダルコピラノシド

5—メトキシカルボニルォキシー 3—メチルー 2— (4—ニトロベンジル）フエノール（1 g) および 2， 3， 4, 6—テトラ— ( ーァセチル _ 1—O— トリクロロアセトイミドイル一ひ—D—ダルコピラノース（2. 02 g) の塩化メチレン（3 OmL) 溶液に氷冷下三フッ化ホウ素 ·ジェチルェ一テル錯体 (0. 2mL) を加え、室温で 4時間撹拌した。反応混合物を水中に注ぎ、酢酸ェチルで抽出した。抽出液を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ一（溶出溶媒： n—へキサン Z酢酸ェチル =2Zl〜3/2) で精製して標記化合物（1. 93 g) を得た。

^!H-NMR (CDC 1₃) δ p pm：

1.75 (3H, s), 2.0 (3H, s), 2.04 (3H， s), 2.08 (3H, s), 2.19 (3H, s)， 3.8-4.05 (5H, m), 4.05-4.2 (2H, m), 4.24 (IH, dd, J-12.5Hz, 6.1Hz), 5.05-5.2 (2H, m), 5.2-5.35 (2H, m), 6.75-6.9 (2H, m), 7.21 (2H, d, J=8.6Hz), 8.1 (2H, d, J=8.6Hz) 参考例 5

2 - (4ーァミノベンジル） — 5—メトキシカルポニルォキシ— 3—メチルフェニル 2, 3， 4, 6—テトラ一 O—ァセチル— /3—D—ダルコビラノシド

5ーメトキシカルポニルォキシー 3—メチル— 2一（4—ニトロベンジル）フエニル 2, 3, 4, 6ーテトラ—0—ァセチルー /3—D—ダルコビラノシド（0. 61 g) の酢酸ェチル（7mL) 溶液に 10 %パラジウム炭素粉末（ 0. 2 g) を加え、水素雰囲気下室温で 13時間撹拌した。不溶物をろ去し、ろ液の溶媒を減圧下留去して標記化合物（0. 58 g) を得た。

JH-NMR (CDC 1₃) δ p pm：

1.67 (3H, s)， 1.99 (3H, s)， 2.04 (3H, s)， 2.09 (3H, s)， 2.17 (3H, s), 3.5 (2H, brs), 3.73 (IH, d， J=15.4Hz), 3.8-3.95 (4H, m), 3.97 (IH, d， J=15.4Hz), 4.1-4.2 (IH, m), 4.24 (IH, dd, J=11.9Hz, 6.0Hz), 5.0-5.2 (2H, in), 5.2-5.35 (2H, m), 6.5-6.6 (2H, m), 6.75-6.85 (4H, m) 実施例 1

5—ヒドロキシ— 3—メチル— 2— {4_ 〔3— (3—ピリジルメチル）ウレイド〕ベンジル } フエニル |3— D—ダルコピラノシド

2— (4—ァミノベンジル） — 5—メトキシカルポニルォキシ— 3—メチルフエニル 2, 3， 4, 6—テトラァセチルー jS— D—ダルコビラノシド（0. 25 g) およびピリジン（0. 043mL) の塩化メチレン（10m L) 溶液にクロ口ぎ酸 4_ニトロフエニル（90mg) を加え、室温で 12時間撹拌した。反応混合物に 3—ァミノメチルピリジン（0. 045mL) およびトリエチルァミン（0. l lmL) を加え、室温で 5時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮後、残渣をメタノール（8mL) に溶解し、ナトリウムメトキシド（28%メタノール溶液、 0. 39mL) を加え、室温で 2時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮後、残'渣を ODS固相抽出法（洗浄溶媒：蒸留水、溶出溶媒：メタノール）および VAR I AN社製 BOND ELUT—SCX (溶出溶媒：メタノール）で順次精製することにより標記化合物（ 0. 17 g ) を得た。

^-NMR (CD₃OD) δ p pm：

2.11 (3H, s)， 3.3-3.5 (4H， m), 3.65-3.75 (1H, m), 3.8-3.95 (2H, in), 4.07 (1H, d, J=15.4Hz), 4.41 (2H, s)， 4.8-4.9 (1H, m), 6.32 (1H, d, J=2.2Hz)， 6.56 (1H, d， J=2.2Hz), 7.04 (2H, d， J=8.7Hz), 7.17 (2H, d， J=8.7Hz), 7.4 (1H， dd， J=7.8Hz, 5.1Hz), 7.75-7.85 (1H, m), 8.35-8.45 (1H, m), 8.45-8.55 (1H, m) 参考例 6

〔4— (2—ベンジルォキシェ卜キシ) —2—メチルフエニル〕メタノール 4ーブロモー 3—メチルフエノール (3 g) の TV, V—ジメチルホルムアミド（16mL) 溶液に炭酸セシウム（5. 75 g) 、ベンジル 2—プロモェチルエーテル（2. 66mL) および触媒量のヨウ化ナトリウムを加え、室温で 16時間撹拌した。反応混合物を水中に注ぎ、ジェチルエーテルで抽出した。有機層を水洗し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧下留去することにより 4一（2 _ベンジルォキシエトキシ）一 1—ブロモー 2—メチルベンゼンを得た。これをテトラヒドロフラン（80mL) に溶解し、 — 78°Cァルゴン雰囲気下 n—ブチルリチウム（2. 66mo 1 ZLn—へキサン溶液、 6. 63mL) を加え、 5分間撹拌した。反応混合物に V, iV—ジメチルホルムァミド（3. 09mL) を加え、 0°Cに昇温し、 1時間撹拌した。反応混合物を水中に注ぎ、ジェチルェ一テルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧下留去することにより 4一 (2—ベンジルォキシエトキシ） _ 2—メチルベンズアルデヒドを得た。これをエタノール（40mL) に溶解し、水素化ホウ素ナトリウム（607mg) を加え、室温で 3時間撹拌した。反応混合物にメタノールを加え、減圧下濃縮した後、残渣に水を加え、ジェチルェ一テルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒： n—へキサン酢酸ェチル =6Z1〜1. 5Z1) で精製して標記化合物（3. 34g ) を得た。

^-NMR (CDC 1₃) <5 p pm：

1.39 (1H, t, J=5.8Hz), 2.35 (3H, s), 3.8-3.85 (2H, m), 4.1-4.2 (2H, m), 4.6-4.65 (4H, m), 6.73 (1H， dd, J=8.2Hz, 2.6Hz), 6.78 (1H, d, J=2.6Hz)_! 7.22 (1H, d, J=8.2Hz), 7.25-7.4 (5H, m) 参考例 7

4— { 〔4_ (2 _ベンジルォキシエトキシ) _ 2—メチルフエニル〕メチル } - 1, 2—ジヒドロー 5—イソプロピル _ 3/7—ピラゾールー 3—オン

〔4一（2 _ベンジルォキシエトキシ） —2—メチルフエニル〕メタノール (3. 34 g) のテトラヒドロフラン (22mL) 溶液に氷冷下トリェチルァミン（1. 97mL) およびメタンスルホニルクロリド（1. 04mL) を加え、 1時間撹拌後、不溶物をろ去した。得られたメシル酸〔4一（2—べンジルォキシエトキシ）一 2—メチルフエニル〕メチルのテトラヒドロフラン溶液を、水素化ナトリウム（60%、 564mg) および 4—メチル _ 3 _ォキソ吉草酸ェチル（2. 13 g) のテトラヒドロフラン（4 OmL) 懸濁液に加え、 8時間加熱還流した。反応混合物に 1 mo 1ZL塩酸を加え、ジェチルエーテルで抽出した。有機層を水洗し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧下留去した。残渣のトルエン（5mL) 溶液にヒドラジン 1水和物（1. 7 9 mL) を加え、 100°Cで一晩撹拌した。反応混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：塩化メチレン Zメタノール =40/1〜1 5Z1 ) で精製して標記化合物（3. 72 g) を得た。

^-NMR (CDC 1₃) (5 p pm

1.1 (6H， d, J=6.9Hz), 2.3 (3H, s), 2.75-2.9 (1H, m), 3.6 (2H, s)， 3.75-3.85 (2H, m), 4.05-4.15 (2H, m), 4.62 (2H, s)， 6.64 (1H, dd， J=8..5Hz, 2.5Hz), 6.74 (1H, d, J=2.5Hz), 6.94 (1H， d, J=8.5Hz), 7.25-7.4 (5H, m) 参考例 8

3 - (2, 3， 4, 6—テトラ一 O—ァセチルー j8—D—ダルコピラノシルォキシ） _4_ { 〔4— (2—べンジルォキシエトキシ） —2—メチルフエニル〕メチル } — 5—ィソプロピル一 1 H—ピラゾール

4— { C4- ( 2—ベンジルォキシェ卜キシ) _ 2 _メチルフエニル〕メチル} 一 1， 2ージヒドロ _ 5—イソプロピル _ 3/ /—ピラゾール— 3—オン（ 3. 72 g) 、ァセトブロモ _Q!—D_グルコース（6. 03 g) およびベンジルトリ（n—プチル）アンモニゥムクロリド（1. 52 g) の塩化メチレン (18mL) 溶液に 5 mo 1ZL水酸化ナトリウム水溶液（5. 9mL) を加え、室温で 5時間撹拌した。反応混合物をァミノプロピルシリカゲルカラムク口マトグラフィー（溶出溶媒： n—へキサン Z酢酸ェチル = 1Z1〜1Z3) で精製後、さらにシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒： n—へキサン/酢酸ェチル =1/2〜1Z3) で精製して標記化合物 (4. 33 g) を得た。

一 NMR (CDC 1₃) δ p pm：

1.05-1.15 (6H， m), 1.81 (3H, s), 1.99 (3H, s)， 2.02 (3H, s), 2.06 (3H, s)， 2.25 (3H, s), 2.7-2.85 (1H, m), 3.5 (1H, d, J=16.6Hz)， 3.59 (1H, d, J=16.6Hz) 3.75-3.9 (3H, m), 4.05-4.2 (3H, m), 4.3 (1H, dd， J=12.2Hz, 4.1Hz), 4.62 (2H, s), 5.1-5.3 (3H, m), 5.55 (1H, d， J=8.0Hz), 6.6 (1H， dd, J=8.5Hz, 2.5Hz) 6.71 (1H， d, J=2.5Hz), 6.8 (1H, d, J=8.5Hz), 7.25-7.4 (5H, m) 参考例 9

3 - (2, 3， 4, 6—テトラ— O—ァセチル一/3—D—ダルコピラノシルォキシ） —4一 { 〔4— (2—ヒドロキシエトキシ）一 2—メチルフエニル〕メチル } — 5—ィソプロピル— 1 H—ピラゾール

3 - (2， 3， 4， 6—テトラ— O—ァセチル— )3— D—ダルコピラノシル才キシ) -4- { 〔4一 (2—べンジルォキシエトキシ) —2—メチルフエ二ル〕メチル } _ 5 _イソプロピル一 1 ーピラゾール（4. 33 g) をメ夕ノール（24mL) に溶解し、 10%パラジウム炭素粉末（80 Omg) を加え、水素雰囲気下室温で 8時間撹拌した。不溶物をろ去し、ろ液の溶媒を減圧下留去することにより標記化合物（3. 7 g) を得た。

JH-NMR (CDC 13) 6 p pm：

1.1-1.2 (6H, m), 1.83 (3H, s), 1.99 (3H, s), 2.02 (3H, s)， 2.06 (3H, s), 2.26 (3H, s), 2.75-2.9 (1H, m)， 3.51 (1H， d, J=16.9Hz), 3.59 (1H, d, J=16.9Hz), 3.8-3.85 (1H, m), 3.9-3.95 (2H, m)， 4.0-4.1 (2H, m), 4.11 (1H, dd, J=12.5Hz, 2.5Hz), 4.28 (1H, dd, J=12.5Hz, 4.1Hz), 5.1-5.3 (3H, m), 5.55 (1H, d， J=7.9Hz), 6.6 (1H, dd, J=8.3Hz, 2.7Hz), 6.71 (1H, d, J=2.7Hz), 6.82 (1H, d， J=8.3Hz) 参考例 10

3 - (2, 3, 4, 6—テトラー O—ァセチルー) 3— D—ダルコピラノシルォキシ） —4一 { 〔4一（2—アジドエトキシ） —2—メチルフエニル〕メチル } — 5—イソプロピル— 1 if—ピラゾール

3— (2, 3, 4， 6—テトラ— O—ァセチルー i3—D—ダルコビラノシルォキシ）一4一 { 〔4一（2—ヒドロキシエトキシ） —2—メチルフエニル〕メチル } 一 5一イソプロピル一 1 ■/一ピラゾ一ル (1 g) の塩化メチレン (1 OmL) 溶液にトリェチルァミン（0. 34mL) およびメタンスルホニルクロリド（0. 1 5mL) を加え、室温で 1時間撹拌した。反応混合物を 0. 5 mo lZL塩酸中に注ぎ、酢酸ェチルで抽出した。有機層を水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧下留去することにより 3— (2, 3， 4, 6—テトラー O—ァセチルー j3—D—ダルコピラノシルォキシ）一 5—ィソプロピル— 4一 ( {4- 〔2— (メタンスルホニルォキシ）エトキシ〕 —2 —メチルフエ二ル} メチル）一 1 /一ピラゾ一ルを得た。これを i , —ジメチルホルムアミド（7mL) に溶解し、アジ化ナトリウム（0. 31 g) を加え、 100°Cで 3時間撹拌した。反応混合物を水中に注ぎ、酢酸ェチルで抽出した。有機層を水で 3回洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒： n—へキサンノ酢酸ェチル =2/3〜1/2) で精製して標記化合物（0. 79 g) を得た。

^-NMR (CDC 1₃) δ p pm：

1.05-1.2 (6H， m)， 1.82 (3H, s)， 2.0 (3H, s)， 2.02 (3H, s)， 2.06 (3H, s)， 2.27 (3H, s), 2.75-2.9 (1H, m), 3.45-3.65 (4H, m), 3.8-3.9 (1H, m),

4.05-4.15 (3H, m), 4.29 (1H, dd, J=12.2Hz, 4.2Hz) , 5.1-5.3 (3H, m)， 5.56 (1H， d， J=7.7Hz), 6.6 (1H, dd, J=8.3Hz， 2.6Hz), 6.71 (1H, d， J=2.6Hz), 6.82 ( ， d, J=8.3Hz) 参考例 1 1

3 - (2, 3, 4, 6—テトラー O—ァセチルー) 3— D—ダルコピラノシルォキシ） —4一 { 〔4— (2—アミノエトキシ）一2—メチルフエニル〕メチル } 一 5—イソプロピル— 1 ピラゾ一ル

3— (2, 3， 4, 6—テトラー O—ァセチル一 )9一 D—ダルコピラノシルォキシ）一 4一 { 〔4一（2—アジドエトキシ） —2—メチルフエニル〕メチル} 一 5—イソプロピル一 17—ピラゾ一ル（0. 79 g) のテトラヒドロフラン（8mL) 溶液に 10%パラジウム炭素粉末（50mg) を加え、水素雰囲気下室温で 1時間撹拌した。不溶物をろ去し、ろ液の溶媒を減圧下留去することにより標記化合物（0. 75 g) を得た。

^-NMR (CDC 1₃) δ p pm：

1.05-1.15 (6H, m), 1.82 (3H, s)， 2.0 (3H, s)， 2.02 (3H, s), 2.06 (3H, s), 2.26 (3H, s)， 2.75-2.85 (1H， m)， 3.0-3.1 (2H, m), 3.5 (1H, d， J=16.3Hz), 3.59 (1H, d, J=16.3Hz), 3.8-3.9 (1H， m), 3.9-4.0 (2H, in), 4.12 (1H, dd， J=12.4Hz, 2.4Hz), 4.29 (1H, dd， J=12.4Hz, 4.0Hz), 5.15-5.3 (3H, m), 5.55 (1H, d, J=7.9Hz), 6.59 (1H, dd, J=8.5Hz, 2.6Hz), 6.7 (1H, d, J=2.6Hz), 6.81 (1H, d， J=8.5Hz) 実施例 2

3— (i3— D—ダルコピラノシルォキシ）一 4— { 〔4一（2—グァニジノエトキシ） —2—メチルフエニル〕メチル } 一 5—イソプロピル一 1 / _ピラゾール

3— （2， 3， 4， 6—テトラ— O—ァセチルー jS—D—ダルコピラノシルォキシ）一 4一 { 〔4一（2—アミノエトキシ）一 2—メチルフエニル〕メチル} — 5—イソプロピル一 1 if—ピラゾ一ル（0. 6 g) のテトラヒドロフラン（5mL) —N, i —ジメチルホルムアミド（lmL) 溶液に — （ベンジルォキシカルポニル） — 1 ピラゾ一ルー 1—力ルポキサミジン（1. 89 g) を加え、 60°Cで 20時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒： n—へキサン/酢酸ェチル = 1Z1〜酢酸ェチル〜酢酸ェチルエタノール = 10/1) で精製して 3— (2， 3, 4, 6—テトラ一 O—ァセチルー /3— D—ダルコビラノシルォキシ ) —4一 ( {4- 〔2— （iV' —ベンジルォキシカルポニルダァニジノ）エトキシ〕一2—メチルフエ二ル} メチル）一 5—イソプロピル一 1 /—ピラゾール（0. 31 g) を得た。これをメタノール（6mL) に溶解し、ナトリウムメトキシド（28%メタノール溶液、 0. 023mL) を加え、室温で 1時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、残渣を ODS固相抽出法（洗浄溶媒：蒸留水、溶出溶媒：メタノール）で精製することにより 4_ ( {4- 〔2— ( N, 一ベンジルォキシカルポニルダァニジノ）エトキシ〕一 2 _メチルフエ二ル} メチル） _3_ (/3—D—ダルコピラノシルォキシ） —5—イソプロピル — ピラゾ一ル（0. 2 g) を得た。これをメタノール（3mL) に溶解し、 10%パラジウム炭素粉末（50mg) を加え、水素雰囲気下室温で 1時間撹拌した。不溶物をろ去し、ろ液の溶媒を減圧下留去することにより標記化合物（0. 15 g) を得た。

^-NMR (CD₃OD) (5 p pm：

1.05-1.15 (6H, m), 2.3 (3H, s)， 2.75-2.9 (1H, m), 3.25-3.4 (4H, m), 3.55 (2H, t, J=5.0Hz), 3.6-3.75 (3H, m), 3.75-3.85 (1H, m), 4.06 (2H, t, J=5.0Hz), 5.02 (1H, d, J=7.0Hz), 6.65 (1H, dd， J=8.5Hz, 2.6Hz), 6.75 (1H, d, J=2.6Hz), 6.88 (1H, d, J=8.5Hz) 実施例 3

ラット S G L T 1活性阻害作用確認試験

1) ラット SGLT 1のクローニングおよび発現べクタ一への組み換え

Ka s ah a r aらにより報告されたラットの SGLT 1遺伝子（ACCE SS I ON : M16101) の 11 1番から 2203番までの塩基配列を，ラット腎臓の cDNA (QU I CK—C 1 on e (登録商標） cDNA ; C l o n t e c h) を铸型に用いて PC R法により増幅し、 pCMV— S c r i p t (S t r a t agene) の S r f I部位に挿入した。揷入した DN Aの塩基配列は、報告されている塩基配列とアミノ酸レベルで一致していた。

2) ラット SGLT 1安定発現株の樹立

ラット SGLT 1発現ベクターを Ml u Iで消化して直鎖状 DN Aとした後、 CH〇一 K 1細胞にリポフエクション法（Sup e r f e c t Tr an s f e c t i o n Re agen t ： Q I AGEN) にて導入した。 lmgZmL G418 (L I FE TECNOLOG I ES) にてネオマイシン耐性細胞株を得、後述する方法にてメチルー《— D—ダルコピラノシドの取り込み活性を測定した。最も強い取り込み活性を示した株を選択して C r S 1とし、以後、 200 gZmLの G418存在下で培養した。

3) メチルー α—D—ダルコビラノシド（《_MG) 取り込み阻害活性の測定 96穴プレートに C r S 1を 3 X 10⁴個 Z穴で播種し、 200 gZmLの G418存在下で 2日間培養した後に取り込み実験に供した。取り込み用緩衝液（ 14 OmM塩化ナトリゥム、 2mM塩化力リゥム、 1 mM塩化カルシウム、 ImM塩化マグネシウム、 10mM2— 〔4一（2—ヒドロキシェチル） — 1 ーピペラジニル〕エタンスルホン酸、 5mMトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを含む緩衝液 PH7. 4) には、非放射ラベル体（S i gma) と¹⁴ Cラベレ体 (Am e r s h am Ph a rma c i a B i o t e c h) (D 一 M Gを最終濃度が 1 mMとなるように混和して添加した。試験化合物はジメチルスルフォキシドに溶解した後、蒸留水にて適宜希釈して 1 mM «— MGを含む取り込み用緩衝液に添加し、阻害活性測定用緩衝液とした。対照群用には試験化合物を含まない測定用緩衝液を、基礎取り込み測定用には塩化ナトリウムに替えて 14 OmMの塩化コリンを含む基礎取り込み測定用緩衝液を調製した。培養した C r S 1の培地を除去し、前処置用緩衝液（ひ— MGを含まない基礎取り込み用緩衝液）を 1穴あたり 180 L加え、 37 °Cで 10分間静置した。同一操作をもう 1度繰り返した後、取り込み用緩衝液を除去し、測定用緩衝液および基礎取り込み用緩衝液を 1穴当たり 75 Lずつ加え 37 °Cで静置した。 1時間後に測定用緩衝液を除去し、 1穴当たり 180 Lの洗浄用緩衝液（1 OmM非ラベル体一 MGを含む基礎取り込み用緩衝液）で 2回洗浄した。 1穴当たり 75 Lの 0. 2 mo 1ZL水酸化ナトリウムで細胞を溶解し、その液をピコプレート（P a c k a r d) に移した。 1 50 Lのマイク口シンチ 40 (P a c k a r d) を加えて混和し、マイクロシンチレ一ションカウンタ一トップカウント（P a c k a r d) にて放射活性を計測した。対照群の取り込みから基礎取り込み量を差し引いた値を 100%として、試験化合物の各濃度におけるメチル— 一 D—ダルコビラノシドの取り込み量を算出した。試験化合物がメチルー《— D—ダルコビラノシドの取り込みを 50 %阻害する濃度（I C₅₍₎値）を、口ジットプロットにより算出した。その結果は表 1 の通りである。

[表 1]

試験例 1

SGLT1阻害薬のフルクトース吸収に対する影響

Wi s t a r系雄性ラット（8週齢）に、実施例 2 (0. 3mg/kg) またはフロリジン（40または 10 OmgZkg) を経口投与し、その直後にフルクト一スを 0. 2 gZkg負荷した。 30分後に、エーテル麻酔下で放血致死させ、速やかに胃および小腸を摘出し、それぞれ 1 OmLの冷やした生理食塩水で内容物を洗い出した。フルクトース測定キット（D—グルコース ZD 一フルクト一ス；ロッシュ ·ダイァグノスティックス社製）を用いてフルクト —ス濃度を測定し、消化管内残存量を算出して投与量に対する割合で示した。統計処理は、対照群に対して T検定にて行った。結果は表 2の通りである。尚、表中の * *は Pく 0. 01を、 * * *は Pく 0. 001を表す。

[表 2]

試験例 2

SGLT1阻害薬、 S G L T阻害薬と α—ダルコシダーゼ阻害薬のショ糖含有混合炭水化物負荷への影響

Zuc ke r f aZf aラット（15〜17週齡）を 1晚絶食した後、 S GLT1阻害薬（実施例 1記載の化合物， 0. 5mgZkg；実施例 2記載の化合物， 0. 3mgZkg) 、ひ一ダルコシダーゼ阻害薬（ァカルポース， 5 mgZkg；ミグリトール， 5mgZkg) 、または SGLT阻害薬（フロリジン， l O OmgZkg) を経口投与した。その直後にショ糖添加混合炭水化物（デンプン：ショ糖：乳糖 =6 : 3 : 1) またはショ糖非添加混合炭水化物 (デンプン：乳糖 =7. 5： 1) を 1. 6 gグルコース Z kgで負荷した。 0、 0. 5、 1、 2、 3時間後に採血し、血漿を分離して血漿中グルコース濃度を定量した。台形法にて 0から 3時間目までのグルコース血中濃度下面積を算出した。統計処理は、それぞれの薬物毎にショ糖非添加混合炭水化物負荷群とショ糖添加混合炭水化物負荷群を T検定にて行った。結果は第 1図に示す通りである。

〔産業上の利用可能性〕

本発明の選択的な S GLT 1阻害薬を有効成分として含有する医薬組成物は、広範な糖質吸収阻害作用に加えて、通常の食事におけるフルクトースの摂取に基づく上述の効果を兼備しており、卓越した血糖降下作用を発揮することがで 'きる。それ故、本発明の医薬組成物は、高血糖症に起因する上記の各種疾患に対する予防又は治療剤として極めて好適である。

Claims

請求の範囲

I. 選択的な SGLT1阻害薬を有効成分として含有する、高血糖症に起因する疾患の予防又は治療剤。

2. 有効成分が G L UT 2及び/又は G L UT 5阻害作用を実質的に示さない S GL T 1阻害薬である、請求項 1記載の予防又は治療剤。

3. 投与形態が経口剤である、請求項 1又は 2記載の予防又は治療剤。

4. 高血糖症に起因する疾患が糖尿病である、請求項 1〜 3の何れかに記載の予防又は治療剤。

5. 糖尿病が食後高血糖である、請求項 4記載の予防又は治療剤。

6. 高血糖症に起因する疾患が耐糖能異常である、請求項 1〜3の何れかに記載の予防又は治療剤。

7. 高血糖症に起因する疾患が糖尿病性合併症である、請求項 1〜3の何れかに記載の予防又は治療剤。

8. 高血糖症に起因する疾患が肥満症である、請求項 1〜3の何れかに記載の予防又は治療剤。

9. 選択的な SGLT1阻害薬を有効量投与することからなる、高血糖症に起因する疾患の予防又は治療方法。

10. 選択的な S G L T 1阻害薬が G LUT2及び Z又は GLUT 5阻害作用を実質的に示さない SGLT1阻害薬である、請求項 9記載の予防又は治療方法。

I I. 投与形態が経口剤である、請求項 9又は 10記載の予防又は治療方法。

12. 高血糖症に起因する疾患が糖尿病である、請求項 9〜11の何れかに記載の予防又は治療方法。

13. 糖尿病が食後高血糖である、請求項 12記載の予防又は治療方法。

14. 高血糖症に起因する疾患が耐糖能異常である、請求項 9〜 11の何れかに記載の予防又は治療方法。

15. 高血糖症に起因する疾患が糖尿病性合併症である、請求項 9〜 11の何れかに記載の予防又は治療方法。

1 6 . 高血糖症に起因する疾患が肥満症である、請求項 9〜 1 1の何れかに記載の予防又は治療方法。

1 7 . 高血糖症に起因する疾患の予防又は治療用の医薬組成物を製造するための、選択的な S G L T 1阻害薬の使用。

1 8 . 選択的な S G L T 1阻害薬が G L UT 2及び/又は G L UT 5阻害作用を実質的に示さない S G L T 1阻害薬である、請求項 1 7記載の使用。

1 9 . 医薬組成物が経口剤である、請求項 1 7又は 1 8記載の使用。

2 0 . 高血糖症に起因する疾患が糖尿病である、請求項 1 7〜 1 9の何れかに記載の使用。

2 1 . 糖尿病が食後高血糖である、請求項 2 0記載の使用。

2 2 . 高血糖症に起因する疾患が耐糖能異常である、請求項 1 7〜 1 9の何れかに記載の使用。

2 3 . 高血糖症に起因する疾患が糖尿病性合併症である、請求項 1 7〜 1 9 の何れかに記載の使用。

2 4. 高血糖症に起因する疾患が肥満症である、請求項 1 7〜： L 9の何れかに記載の使用。