WO2002088137A1 - Substance pkb-3564 dotee d'une activite d'inhibition de la neovascularisation - Google Patents

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Hideaki Kakeya
Hiroshi Konno
Susumu Kanazawa
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Definitions

  • the present invention relates to a novel compound useful as an active ingredient of a drug such as an angiogenesis inhibitor.
  • Apoptosis a form of cell death proposed in the 1970s, is different from necrosis, and is cell death induced through a specific intracellular signal transduction system [Cell, 88, 355-365 (1997)]. Apoptosis is involved in the pathology of many diseases, and controlling apoptosis is likely to contribute to the advancement of these therapies.
  • the normal apoptosis control mechanism deviates and cell death is enhanced, resulting in viral infections such as rheumatoid arthritis, hepatitis B and hepatitis C, fulminant hepatitis, diabetes, myocardial infarction, ulcerative colitis It is thought to cause neurodegenerative diseases such as Parkinson's disease, ischemic encephalopathy, acquired immunodeficiency syndrome, and dilated cardiomyopathy. ), 267, 1456-1462 (1995)].
  • viral infections such as rheumatoid arthritis, hepatitis B and hepatitis C, fulminant hepatitis, diabetes, myocardial infarction, ulcerative colitis It is thought to cause neurodegenerative diseases such as Parkinson's disease, ischemic encephalopathy, acquired immunodeficiency syndrome, and dilated cardiomyopathy. ), 267, 1456-1462 (1995)].
  • Physiological stimuli that induce apoptosis include Fas / Apo-1 / CD95 ligand II, Fas antibody, TNF (tumor necrosis factor), etc. [Cell, 88, 355-365 (1997)]
  • various peptide caspase inhibitors are known as cysteine protease inhibitors, but they have problems in terms of instability and activity due to peptides. I have.
  • anticancer drugs currently used clinically can achieve regression or elimination of cancer temporarily due to their cell killing effect, but they also act on normal cells and cause serious side effects. There are significant restrictions on its use. Also, stomach cancer, colorectal cancer, knee cancer In many cases, there is a serious problem that many anti-cancer drugs are almost ineffective, or that the initially effective anti-cancer drug is not effective, and that acquired resistant cancer cells appear.
  • tumor angiogenesis for supplying nutrients and oxygen to cancer cells has attracted attention as a mechanism for solid tumors to become larger than a certain level.
  • tumor angiogenesis inhibition therapy which suppresses the growth of cancer by inhibiting tumor angiogenesis.
  • vascular endothelial cells are recruited to cancerous tissue
  • drugs that inhibit vascular endothelial cell chemotaxis are considered to inhibit angiogenesis. It is expected to have potential as an anti-inflammatory agent as well as an agent [Immunity, 12, 121-127 (2000)]. Disclosure of the invention
  • the present inventors have conducted intensive studies to solve the above-mentioned problems, and as a result, a novel compound contained in a culture solution of a newly collected microorganism BAUA3564 strain has angiogenesis inhibitory activity, apoptosis inhibitory activity, and cell cycle inhibition. It has activity and was found to be useful as an active ingredient of a medicine.
  • the present invention has been completed based on the above findings. That is, the present invention provides a compound represented by the general formula (I):
  • R 1 represents a hydrogen atom
  • R 2 represents a hydroxy group, but R 1 and R 2 may be taken together to represent an oxo group or an oxime group
  • R 3 represents a hydrogen atom
  • R 4 represents a hydroxy group, but R 3 and R 4 may be taken together to represent an oxo group or an oxime group
  • R 5 represents a hydrogen atom
  • R 6 represents a hydroxy group, 5 and R 6 may together represent an oxo or oxime group
  • R 7 represents a hydrogen atom
  • R 8 represents a hydrogen atom, but R 7 and R 8 together represent an oxo group or R 9 and ° each independently represent a hydrogen atom, an alkyl group which may have a substituent, or an alkenyl group which may have a substituent
  • the compound is provided.
  • Ri Oh R 1 is a hydrogen atom
  • R 2 is hydroxy
  • R 3 and R 4 represents together a connexion Okiso group
  • R 6 is a hydroxy group
  • R 7 and R 8 together represent an oxo group
  • R 9 and R 1Q are both methyl groups
  • R 1 and R 2 Together represent an oxo group
  • R 3 and R 4 together form an oxo group
  • R 5 and R 6 together form an oxo group
  • R 7 and R 8 together Also provided is a compound showing an oxo group, wherein R 9 and R w are both methyl groups.
  • R ′′ represents a hydrogen atom
  • R 12 represents a hydroxy group
  • R 11 and R 12 may be linked together to represent an oxo group or an oxime group
  • R 13 represents a hydrogen atom.
  • R "is indicating the hydrin port alkoxy group, R 13 ⁇ Pi R" may have indicated the combined such connection Okiso group or Okishimu group
  • R 15 represents a hydrogen atom
  • R 16 represents a hydroxy group
  • R 15 and R 16 may be linked together to represent an oxo group or an oxime group
  • R 17 represents a hydrogen atom
  • R 18 represents a hydrogen atom
  • R 19 and R 2 ° each independently represent a hydrogen atom, an alkyl group which may have a substituent, or an alkenyl group which may have a substituent.
  • the present invention provides a compound represented by the formula:
  • the present invention provides a drug containing, as an active ingredient, a compound represented by the above general formula (I) or (II). It is useful as an inhibitor or a cell cycle inhibitor, and can be used as an antitumor agent or a medicament for preventing and / or treating a disease associated with abnormally enhanced apoptosis.
  • the medicament of the present invention includes, for example, Hepatitis associated with viral infections such as rheumatoid arthritis, hepatitis B and hepatitis C, fulminant hepatitis, diabetes and its complications, myocardial infarction, ulcerative colitis, chronic nephritis, alopecia, Alzheimer's disease and Parkinson's disease Prevention and / or treatment of diseases such as neurodegenerative diseases, ischemic encephalopathy, acquired immunodeficiency syndrome, and dilated cardiomyopathy It is useful as a medicament.
  • diseases such as neurodegenerative diseases, ischemic encephalopathy, acquired immunodeficiency syndrome, and dilated cardiomyopathy It is useful as a medicament.
  • a use of the compound represented by the above general formula (I) or the general formula (II) for the manufacture of the above medicament A method comprising the step of administering an effective amount of the compound represented by the formula (I) or the general formula (II) to a mammal including a human; a method for regulating apoptosis, preferably a method for inhibiting apoptosis; A method comprising the step of administering an effective amount of the compound represented by the formula (I) or the general formula (II) to a mammal including a human; a method for treating a malignant tumor; There is provided a method comprising the step of administering an effective amount of a compound represented by the formula (II) to mammals including humans.
  • a method for preventing and / or treating a disease associated with abnormally enhanced apoptosis wherein an effective amount of the compound represented by the above general formula (I) or the above general formula ( ⁇ ) is used for humans.
  • a method for treating excessive inflammation comprising administering an effective amount of the compound represented by the above general formula (I) or (II) to a mammal including a human.
  • a method for regulating chemotaxis of vascular endothelial cells which comprises administering an effective amount of the compound represented by the above general formula (I) or (II) to mammals including humans.
  • a method for regulating cell cycle progression comprising the step of contacting a cell with an effective amount of the compound represented by the above general formula (I) or (II). Is done.
  • the alkyl group represented by R 9 , R 10 , R 19 , or R 2Q may be linear, branched, cyclic, or a combination thereof.
  • an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms preferably a linear or branched alkyl group having 1 to 6 carbon atoms can be used. More specifically, methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, ⁇ -pentyl, ⁇ -hexyl, etc. Can be used.
  • R 10, R 19, or an alkyl group represented by R 2G may have a substituent. Substituent number Although the number, type, and substitution position are not particularly limited, examples thereof include a halogen atom, an amino group, a hydroxy group, a carboxyl group, and an oxo group.
  • the alkenyl group represented by R 9 , R 1G , R 1 or R 2G is preferably a group containing one or more double bonds in the alkyl group described above.
  • the alkenyl group represented by R g , R 1G , R 19 , or R 2 ° may have a substituent.
  • the number, type and substitution position of the substituents are not particularly limited, and examples thereof include a halogen atom, an amino group, a hydroxy group, a carboxyl group, and an oxo group.
  • R 9 , R 1G , R 19 or R 2e is preferably a methyl group.
  • the compound of the present invention represented by the general formula (I) or (II) has a plurality of asymmetric carbons, and may further have one or more asymmetric carbons depending on the type of the substituent. is there.
  • stereoisomers such as optical isomers or diastereomers based on these asymmetric carbons
  • the scope of the present invention includes pure stereoisomers as well as mixtures or racemates of any stereoisomers. Included.
  • the compound of the present invention has an olefinic double bond, there are geometric isomers based on the double bond. In addition to the pure form of the geometric isomer, a mixture of arbitrary geometric isomers is also used. It is included in the scope of the invention.
  • the compounds of the present invention may exist as tautomers, any tautomers or mixtures thereof are included in the scope of the present invention.
  • the compounds of the present invention can exist in any crystalline form, and may exist as hydrates or solvates. It goes without saying that all of these substances are included in the scope of the present invention.
  • R 1 is a hydrogen atom
  • R 2 is a hydroxy group
  • R 3 and R 4 together represent an oxo group
  • 5 is a hydrogen atom
  • R 6 is a hydroxy group
  • R 7 and R 8 are taken together to represent an oxo group
  • RKB-3564A or RKB-3564B R 1 and R 2 together represent an oxo group
  • R 3 and R 4 together form an oxo group
  • R 5 and R 6 represent Together, they represent an oxo group
  • R 7 and R 8 are linked together to represent an oxo group
  • two isomers wherein R 9 and R 1Q are both methyl groups.
  • RKB-3564E RKB-3564F.
  • RKB-3564D compounds represented by, R "is a hydrogen atom, an R 12 is hydroxy group, R 13 and R" represents together a connexion Okiso group, R 15 is hydrogen
  • R 16 is a hydroxy group
  • R 17 and R 18 together form an oxo group
  • R 19 and R 2 ° are both methyl groups
  • RKB-3564D compounds represented by, R "is a hydrogen atom, an R 12 is hydroxy group, R 13 and R" represents together a connexion Okiso group
  • R 15 is hydrogen
  • R 16 is a hydroxy group
  • R 17 and R 18 together form an oxo group
  • R 19 and R 2 ° are both methyl groups
  • the compound of the present invention represented by the general formula (I) or ( ⁇ ) can be separated and collected from a culture of a microorganism, or a compound of the present invention separated and collected from a culture of a microorganism. It can be produced by a method of chemically modifying a starting material.
  • a filamentous fungus strain BAUA-3564 can be exemplified. This microorganism is cultured under a commonly used medium composition and culture conditions, and RKB-3564A, RKB-3564B, RKB_3564D, RKB-3564E, and RKB-3564F contained in the culture can be separated and collected.
  • the BAUA-3564 strain was granted to the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, Patent Organism Depositary Center (1-1, Higashi 1-1-chome, Tsukuba, Ibaraki, Japan) under the accession number FERM BP-8001 on April 5, 2002.
  • An international deposit has been made in accordance with the Budapest Treaty on a date basis (the deposit was transferred from FERM P-18284, which was deposited at the Center on April 2, 2001).
  • any of a synthetic medium and a natural medium can be suitably used as long as the medium appropriately contains a carbon source, a nitrogen source, and an inorganic salt. If necessary, vitamins or other nutrients may be added as appropriate.
  • the carbon source include sugars such as glucose, maltose, fructose, sucrose and starch; alcohols such as glycerol and mannitol; amino acids such as dalysin, alanine and asparagine; oils and fats such as soybean oil and olive oil.
  • One or more types may be appropriately selected and used from general carbon sources such as those in consideration of the assimilation of microorganisms.
  • Nitrogen sources include soybean flour, corn steep liquor, beef extract, peptone, yeast extract, amino acid mixture, organic nitrogen-containing compounds such as fish meal, and inorganic nitrogen compounds such as ammonium salt and nitrate.
  • inorganic salts include: For example, calcium carbonate, sodium chloride, chloride chloride, magnesium sulfate, copper sulfate, manganese chloride, zinc sulfate, cobalt chloride, and various phosphates may be added as necessary.
  • an antifoaming agent for example, vegetable fat, polypropylene alcohol, or the like can be added as needed.
  • the culturing temperature can be appropriately changed within a range in which the microorganism grows and the compound of the present invention is efficiently produced, but is preferably 10 to 32 ° C, more preferably 20 to 25 ° C.
  • the pH at the start of the cultivation is preferably around 6 to 8, and the culturing time is usually about a day to several weeks.
  • the culture method any of the commonly used methods such as solid phase culture and ordinary stirring culture can be suitably used.
  • the compound of the present invention can be separated and collected from the culture solution by appropriately using a method generally used to collect a metabolite of a microorganism.
  • a method generally used to collect a metabolite of a microorganism For example, separation methods using various ion exchange resins, nonionic adsorption resins, etc., gel filtration chromatography, chromatography using adsorbents such as activated carbon, alumina or silica gel, and chromatographic methods such as high performance liquid chromatography It is possible to use a separation method using, or a means of crystallization, concentration under reduced pressure, or freeze-drying alone or in an appropriate combination, or repeatedly.
  • Another compound of the present invention can be produced by further chemically modifying the compound of the present invention separated and collected from the culture solution.
  • a compound having an oxime group can be produced by ordinary chemical modification using a compound having an oxo group.
  • the functional group conversion from an oxo group to an oxime group can be easily carried out according to a method well known to those skilled in the art and commonly used, for example, by reacting hydroxylamine in an inert organic solvent at room temperature or under heating.
  • the compound of the present invention has angiogenesis inhibitory activity, apoptosis inhibitory activity, and cell cycle inhibitory activity as shown in the test examples described below.
  • Medicine for the prevention and treatment of Z or treatment, or excessive blood It is useful as a medicament for preventing and treating or treating diseases associated with angiogenesis.
  • Diseases in which the normal apoptosis control mechanism deviates and cell death is enhanced include, for example, hepatitis associated with viral infections such as rheumatoid arthritis, hepatitis B and hepatitis C, fulminant hepatitis, diabetes, myocardial infarction Ulcerative colitis, chronic nephritis, alopecia, neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease and Parkinson's disease, ischemic encephalopathy, 'acquired immunodeficiency syndrome, dilated cardiomyopathy, etc.'.
  • diseases associated with excessive angiogenesis include malignant tumors and diabetic vascular complications (eg, diabetic retinopathy).
  • the administration method, dosage form, or dosage of the medicament of the present invention can be appropriately determined according to the purpose of use.
  • the dosage form of the medicament of the present invention may be oral or parenteral.
  • the form of the medicament of the present invention is not particularly limited, for example, oral administration preparations such as tablets, powders, capsules, granules, extracts, syrups, and the like, or parenterals such as injections, drops, or suppositories Administration may be mentioned.
  • oral administration preparations such as tablets, powders, capsules, granules, extracts, syrups, and the like
  • parenterals such as injections, drops, or suppositories Administration may be mentioned.
  • These preparations can be prepared as a pharmaceutical composition by a known method using pharmaceutically acceptable additives such as excipients and binders.
  • the dosage of a medicament containing the compound of the present invention as an active ingredient varies depending on the patient's age, body weight, sensitivity, degree of symptoms, and the like.For example, 0.1 mg to 100 mg / day for an adult per day orally. kg, preferably lmg to 20mg / kg, and for parenteral administration it is about 0.01mg to 10mg / kg, preferably about 0.1 to 2mg.
  • the above dose can be administered once or several times a day, and if necessary, an amount outside the above range can be used.
  • the use of the compound of the present invention represented by the above general formula (I) or (II) is not limited to the above-mentioned use as a medicine.
  • the compound of the present invention when used as a reagent, it can be used by dissolving it in an organic solvent or a water-containing organic solvent.
  • an organic solvent or a water-containing organic solvent For example, direct administration to various cultured cell lines can inhibit cell growth.
  • usable organic solvents include methanol, ethanol, and dimethyl sulfoxide.
  • the form of the reagent is not particularly limited.
  • a solid agent such as a powder or a liquid agent dissolved in an organic solvent or a water-containing organic solvent is used. Can be mentioned.
  • the effective amount used to exert the cell growth inhibitory effect by using the above compound as a reagent is 0.1 to 100 ⁇ g / ml, but the appropriate amount is the type of cultured cell line and purpose of use. And can be appropriately selected by those skilled in the art. If necessary, an amount outside the above range can be used.
  • BAUA-3564 strain (FERM P-18284) and cultured with shaking at 28 ° C for 72 hours.
  • 210 ml of this culture was inoculated into 15 liters of a medium having the same composition, and cultured with shaking at 28 ° C for 96 hours.
  • the culture broth was separated into cells and supernatant using a centrifuge, and the supernatant was adjusted to pH 7.0 and extracted with 15 liters of ethyl acetate. After the extraction, all the ethyl acetates were combined and concentrated under reduced pressure to obtain 5.0 g of a brown syrup.
  • This syrup was dissolved in 10 ml of black-mouthed form and infiltrated into a silica gel column (4 cm in diameter and 60 cm in length) packed with black-mouthed form.
  • RKB-3564E and RKB-3564F can be isolated from the main culture product in the same purification step, the hydroxyl groups at positions 3 and 3 'can be isolated from RKB-3564A and RKB-3564B, respectively, by a conventional method. It can also be produced by oxidizing the group (for example, oxidizing using Dess-Martin Periodinate).
  • Solubility Easily soluble in methanol and dimethyl sulfoxide. Insoluble in n-hexane.
  • Solubility Easily soluble in methanol and dimethylsulfoxide. Insoluble in n-hexane.
  • the R data is shown in Table 3 (solvent: heavy acetone, ⁇ ppm, internal standard: TMS, 13 C: 125 ⁇ , ⁇ : 500 MHz :).
  • Solubility Easily soluble in methanol and dimethyl sulfoxide. Insoluble in n-hexane.
  • All of them can be colored by heating after fog of 10% sulfuric acid, and are easily soluble in methanol and dimethyl sulfoxide and insoluble in n-hexane.
  • Test Example 1 Inhibition of vascular endothelial cell chemotaxis by RKB_3564A RKB_3564B RKB-3564D RKB-3564E and RKB-3564F
  • HUVEC cells normal human umbilical vein endothelial cells
  • HuMedia-EG2 HuMedia-EG2
  • HuMedia-EG2 HuMedia-EG2
  • VEGF endothelial cell growth factor
  • RKB-3564A, RKB-3564B, RKB-3564D, RKB-3564E, and RKB-3564F each inhibited VEGF-induced HUVEC cell chemotaxis at a concentration of 0.1 to l / g / ml.
  • RKB-3564A, RKB-3564B, RKB-3564D, RKB-3564E, or RKB-3564F 1 g, lactose 98 g, and hydroxypropyl cellulose 1 g are mixed well, and then granulated according to a standard method.
  • the obtained granules were dried well to produce granules suitable for bottles, heat seal packaging and the like.
  • the granules can be administered orally at a dose of 100 to 1000 mg per day depending on the symptoms.
  • the compound of the present invention has angiogenesis inhibitory activity, apoptosis inhibitory activity, and cell cycle inhibitory activity, and is useful as an antitumor agent or a medicament for preventing and treating diseases associated with abnormally enhanced apoptosis. Useful as an ingredient.

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Description

明 細 書 血管新生阻害作用を有する R K B— 3 5 6 4物質 技術分野
本発明は、 血管新生抑制剤などの医薬の有効成分として有用な新規化合物に関 するものである。 背景技術
1970年代に提案された細胞死の一形態であるアポトーシスは、ネクローシスと は異なり、 ある特定の細胞内情報伝達系を介して誘導される細胞死である 〔セル (Cell) , 88, 355-365 (1997)〕。 アポトーシスは多くの疾患において病態に関与し ており、 アポトーシスを制御することがそれらの治療法の進歩に寄与する可能性 が高い。 例えば、 正常のアポトーシス制御機構が逸脱して細胞死が亢進すること により、 関節リウマチ、 B型肝炎および C型肝炎等のウィルス感染に伴う肝炎、 劇症肝炎、 糖尿病、 心筋梗塞、 潰瘍性大腸炎、 慢性腎炎、 脱毛症、 アルッハイマ —病おょぴパーキンソン氏病などの神経変性疾患、 虚血性脳障害、 後天性免疫不 全症候群、拡張性心筋症などを惹起すると考えられている〔サイエンス（Science) , 267, 1456-1462 (1995)〕。
アポトーシスを誘導する生理的な刺激としては、 Fas/Apo- 1/CD95のリガンドゃ、 Fas抗体、 TNF (腫瘍壊死因子）などが挙げられる〔セル (Cell) , 88, 355-365 (1997) ]0 アポトーシスを抑制する化合物としては、 システィンプロテアーゼ阻害剤として 各種べプチド性カスパーゼ阻害剤などが知られているがぺプチドであるが故の不 安定性、 活性の強さの点で問題を抱えている。
一方、 現在、 臨床的に使用されている抗癌剤は、 その殺細胞効果により一時的 に癌の退縮や消失を達成できるものの、 正常細胞にも作用して重篤な副作用を引 き起こすため、 その使用には大きな制約がある。 また、 胃癌、 大腸癌、 膝臓癌な どには抗癌剤がほとんど無効な自然耐性癌も多く、 あるいは最初は奏効した抗癌 剤が効かなレ、獲得耐性癌細胞が出現するという深刻な問題がある。
近年、 固形癌がある一定以上より大きくなるためのメカニズムとして、 癌細胞 に栄養や酸素を供給するためのいわゆる腫瘍血管新生が注目されている。 この腫 瘍血管新生を阻害することにより癌の増殖を押さえる 「腫瘍血管新生阻害療法」 という概念が確立しつつある [ヨロビアン ジャーナルォブ キャンサー（Eur. J. Cancer) , 32A, 2534-2539 (1996) ]。 すでに多数の化合物が抗腫瘍剤として実用化 されているが、 血管新生阻害剤は従来の抗癌剤にない利点をもっているため、 臨 床での 1日も早い使用が待ち望まれている。 現在、 いくつかの血管新生阻害剤が 開発研究されてはいるが、 リード化合物となりうる新しい化合物は不断の希求と 考えられる。
また、 血管内皮細胞の癌組織へのリクルート機構は、 白血球などが炎症部位に リクルートされる機構に似ている点が多いことから、 血管内皮細胞の走化性を阻 害する薬剤は、 血管新生阻害剤としてだけではなく、 抗炎症剤としての可能性も 期待される [イミュ-ティー（Immunity) , 12, 121-127 (2000) ]。 発明の開示
本発明の課題は、 医薬の有効成分として有用な新規化合物を提供することにあ る。 より具体的には、 血管新生を阻害することにより、 又は細胞周期を阻害する ことにより抗腫瘍効果を発揮する化合物を提供することが本発明の課題である。 また、 本発明の別の課題は、 アポトーシス抑制作用を有し、 関節リウマチ、 B型 肝炎おょぴ C型肝炎等のウィルス感染に伴う肝炎などの疾患の予防及び/又は治 療に有用な化合物を提供することにある。
本発明者らは上記の課題を解決すベく鋭意研究を行つた結果、 新たに採取した 微生物 BAUA3564株の培養液に含まれる新規化合物が血管新生抑制活性、アポトー シス抑制活性、 及び細胞周期阻害活性を有しており、 医薬の有効成分として有用 であることを見出した。 本発明は上記の知見を基にして完成されたものである。 すなわち、 本発明は、 一般式 （ I ) ：
Figure imgf000005_0001
(式中、 R1は水素原子を示し、 R2はヒドロキシ基を示すが、 R1及び R2が一緒にな つてォキソ基又はォキシム基を示してもよく ； R3は水素原子を示し、 R4はヒドロ キシ基を示すが、 R3及び R4が一緒になつてォキソ基又はォキシム基を示してもよ く ； R5は水素原子を示し、 R6はヒドロキシ基を示すが、 R5及び R6が一緒になつて ォキソ基又はォキシム基を示してもよく ； R7は水素原子を示し、 R8は水素原子を 示すが、 R7及び R8が一緒になってォキソ基又はォキシム基を示してもよく ； R9及 び °はそれぞれ独立に水素原子、置換基を有していてもよいアルキル基、置換基 を有していてもよいアルケニル基を示す） で表される化合物を提供するものであ る。
上記一般式 （I ) で表される化合物の好ましい態様として、 R1が水素原子であ り、 R2がヒドロキシ基であり、 R3及び R4が一緒になつてォキソ基を示し、 R5が水 素原子であり、 R6がヒドロキシ基であり、 R7及び R8が一緒になつてォキソ基を示 し、 R9及び R1Qがともにメチル基である化合物、 及び R1及び R2が一緒になってォ キソ基を示し、 R3及び R4が一緒になつてォキソ基を示し、 R5及ぴ R6が一緒になつ てォキソ基を示し、 R7及び R8が一緒になつてォキソ基を示し、 R9及び Rwがとも にメチル基である化合物が提供される。
また、 別の観点からは、 一般式 （Π) ：
Figure imgf000006_0001
(式中、 R"は水素原子を示し、 R12はヒドロキシ基を示すが、 R11及ぴ R12がー緒に なってォキソ基又はォキシム基を示してもよく； R13は水素原子を示し、 R"はヒド 口キシ基を示すが、 R13及ぴ R"が一緒になつてォキソ基又はォキシム基を示して もよく ； R15は水素原子を示し、 R16はヒドロキシ基を示すが、 R15及び R16がー緒に なってォキソ基又はォキシム基を示してもよく； R17は水素原子を示し、 R18は水素 原子を示すが、 R17及び R18が一緒になってォキソ基又はォキシム基を示してもよ く ； R19及ぴ R2°はそれぞれ独立に水素原子、 置換基を有していてもよいアルキル 基、 置換基を有していてもよいアルケニル基を示す） で表される化合物が本発明 により提供される。
上記一般式 （II) で表される化合物の好ましい態様として、 R11が水素原子であ り、 R12がヒドロキシ基であり、 R13及び R"が一緒になってォキソ基を示し、 R15が 水素原子であり、 R16がヒドロキシ基であり、 R17及び R18が一緒になつてォキソ基 を示し、 R19及ぴ R2Dがともにメチル基である化合物が本発明により提供される。 さらに別の観点からは、 上記の一般式 （I ) 又は一般式 （II) で表される化合 物を有効成分として含む医薬が本発明により提供される。 この医薬は血管新生阻 害剤、 アポトーシス抑制剤、 又は細胞周期阻害剤として有用であり、 抗腫瘍剤又 はアポトーシスの異常亢進が関与する疾患の予防及ぴ 又は治療のための医薬と して用いることができる。 より具体的には、 本発明の医薬は、 例えば、 抗腫瘍剤 のほか、 関節リウマチ、 B型肝炎および C型肝炎等のウィルス感染に伴う肝炎、 劇症肝炎、 糖尿病およびその合併症、 心筋梗塞、 潰瘍性大腸炎、 慢性腎炎、 脱毛 症、 アルツハイマー病およびパーキンソン氏病などの神経変性疾患、 虚血性脳障 害、 後天性免疫不全症候群、 拡張性心筋症などの疾患の予防及び 又は治療のた めの医薬として有用である。
さらに別の観点からは、 上記の医薬の製造のための上記の一般式 （I ) 又は一 般式 （II) で表される化合物の使用；血管新生の阻害方法であって、 上記の一般 式 （I ) 又は一般式 （II) で表される化合物の有効量をヒトを含む哺乳類動物に 投与する工程を含む方法；アポトーシスの調節方法、 好ましくはアポトーシスの 抑制方法であって、 上記の一般式 （I ) 又は一般式 （Π) で表される化合物の有 効量をヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法；悪性腫瘍の治療方法で あって、 上記の一般式 （I ) 又は一般式 （II) で表される化合物の有効量をヒト を含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法が提供される。
また、 本発明により、 アポトーシスの異常亢進が関与する疾患の予防及び/又 は治療方法であって、 上記の一般式 （I ) 又は一般式 （Π) で表される化合物の 有効量をヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法；過度の炎症の治療方 法であって、 上記の一般式 （I ) 又は一般式 （I I) で表される化合物の有効量を ヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法；血管内皮細胞の走化性の調節 方法であって、 上記の一般式 （I ) 又は一般式 （Π) で表される化合物の有効量 をヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法；及び細胞周期進行の調節方 法であって、 上記の一般式 （I ) 又は一般式 （I I) で表される化合物の有効量を 細胞に接触させる行程を含む方法が提供される。 発明を実施するための最良の形態
R9、 R10, R19、 又は R2Qが示すアルキル基は直鎖状、 分枝鎖状、 環状、 又はそれら の組み合わせのいずれでもよい。 アルキル基としては、 例えば、 炭素数 1ないし 6個のアルキル基、 好ましくは直鎖状又は分枝鎖状の炭素数 1ないし 6個のアル キル基を用いることができる。 より具体的には、 メチル基、 ェチル基、 n—プロ ピル基、 イソプロピル基、 n—ブチル基、 イソブチル基、 s e c—ブチル基、 t e r t一ブチル基、 η—ペンチル基、 η —へキシル基などを用いることができる。 、 R10, R19、又は R2Gが示すアルキル基は置換基を有していてもよい。 置換基の個 数、 種類、 及ぴ置換位置は特に限定されないが、 例えば、 ハロゲン原子、 ァミノ 基、 ヒドロキシ基、 カルボキシル基、 ォキソ基などを例示することができる。
R9、 R1G、 Rl 又は R2Gが示すアルケニル基は、 上記に説明したアルキル基におい て 1個又は 2個以上の二重結合を含む基であることが好ましい。 Rg、 R1G、 R19、 又 は R2°が示すアルケニル基は置換基を有していてもよレ、。置換基の個数、種類、及 び置換位置は特に限定されないが、 例えば、 ハロゲン原子、 アミノ基、 ヒドロキ シ基、 カルボキシル基、 ォキソ基などを例示することができる。 R9、 R1G、 R19、 又 は R2eとしてはメチル基が好ましい。
一般式 （I ) 又は一般式 （II) で表される本発明の化合物は複数の不斉炭素を 有しており、 また、 置換基の種類によりさらに 1個以上の不斉炭素を有する場合 がある。 これらの不斉炭素に基づく光学異性体又はジァステレオマーなどの立体 異性体が存在するが、 本発明の範囲には純粋な形態の立体異性体のほか、 任意の 立体異性体の混合物又はラセミ体などが包含される。 また、 本発明の化合物がォ レフイン性二重結合を有する場合には二重結合に基く幾何異性体が存在するが、 純粋な形態の幾何異性体のほか、 任意の幾何異性体の混合物も本発明の範囲に包 含される。さらに、本発明の化合物は互変異性体として存在する可能性もあるが、 任意の互変異性体又はそれらの混合物も本発明の範囲に包含される。 本発明の化 合物は任意の結晶形として存在することができ、 水和物又は溶媒和物として存在 する場合もある。 これらの物質がいずれも本発明の範囲に包含されることは言う までもない。
本明細書において、 一般式 (I)で表される化合物のうち、 R1が水素原子であり、 R2がヒドロキシ基であり、 R3及び R4が一緒になつてォキソ基を示し、 R5が水素原 子であり、 R6がヒドロキシ基であり、 R7及ぴ R8が一緒になつてォキソ基を示し、 R9及び Rieがともにメチル基である化合物の 2つの異性体を RKB- 3564A、RKB- 3564B と呼ぶ場合があり、 R1及び R2が一緒になつてォキソ基を示し、 R3及び R4がー緒に なってォキソ基を示し、 R5及び R6が一緒になつてォキソ基を示し、 R7及ぴ R8がー 緒になってォキソ基を示し、 R9及び R1Qがともにメチル基である 2つの異性体を RKB-3564E, RKB - 3564Fと呼ぶ場合がある。 また、 一般式 （Π) で表される化合物 のうち、 R"が水素原子であり、 R12がヒドロキシ基であり、 R13及び R"が一緒にな つてォキソ基を示し、 R15が水素原子であり、 R16がヒドロキシ基であり、 R17及び R18が一緒になつてォキソ基を示し、 R19及び R2°がともにメチル基である化合物を RKB-3564Dと呼ぶ場合がある。
本発明の一般式 （I ) 又は一般式 （Π) で表される化合物は微生物の培養物か ら分離 ·採取することができ、 あるいは微生物の培養物から分離 ·採取された本 発明の化合物を出発原料として化学的修飾を施す方法により製造することができ る。 本発明の化合物を産生しうる微生物としては糸状菌 BAUA- 3564株を例示する ことができる。 この微生物を通常用いられる培地組成及び培養条件で培養し、 培 養物に含まれる RKB- 3564A、 RKB-3564B, RKB_3564D、 RKB- 3564E、 及び RKB- 3564F を分離'採取することができる。 BAUA-3564株については、 独立行政法人産業技 術総合研究所特許生物寄託センター （日本国茨城県つくば市東一丁目 1番地 1 中央第 6 ) に受託番号 FERM BP- 8001号として 2002年 4月 5日付けでブタぺスト 条約に従う国際寄託がなされている（上記寄託は 2001年 4月 2日に同センターに 寄託された FERM P - 18284号から移管されたものである）。
本発明の化合物の製造用培地としては、 炭素源、 窒素源、 および無機塩を適当 に含有するものであれば合成培地または天然培地のいずれでも好適に用いること ができる。必要に応じて、ビタミン類またはその他栄養物質を適宜加えてもよい。 炭素源としては、 例えば、 グルコース、 マルトース、 フラクトース、 シユークロ ース、 デンプン等の糖類、 グリセロール、 マンニトール等のアルコール類、 ダリ シン、 ァラニン、 ァスパラギン等のアミノ酸類、 大豆油、 ォリーブ油等の油脂類 等の 般的な炭素源より微生物の資化性を考慮して 1種または 2種以上を適宜選 択して用いればよい。 窒素源としては、 大豆粉、 コーンスチープリカー、 ビーフ エキス、 ペプトン、 酵母エキス、 アミノ酸混合物、 魚粉等の有機含窒素化合物ま たはアンモユウム塩、 硝酸塩等の無機窒素化合物が挙げられ、 微生物の資化性を 考慮して 1種または 2種以上を適宜選択して用いればよい。 無機塩としては、 例 えば炭酸カルシウム、 塩化ナトリゥム、 塩化力リゥム、 硫酸マグネシウム、 硫酸 銅、 塩化マンガン、 硫酸亜鉛、 塩化コバルト、 各種リン酸塩を必要に応じて添カロ すればよい。 また、 消泡剤、 例えば植物脂、 ポリプロピレンアルコール等を必要 に応じて添加することができる。
培養温度は、 微生物が成育し、 かつ本発明の化合物が効率的に産生される範囲 で適宜変更できるが、 好ましくは 10ないし 32°Cであり、 さらに好ましくは 20な いし 25°Cである。 培養開始時の pHは 6ないし 8付近が望ましく、 培養時間は通 常日〜数週間程度である。 一般的には、 本発明の化合物の生産量が採取可能な量 に達したとき、 好ましくは最高に達したときに培養を終了すればよレ、。 培養法と しては、 固層培養、 通常攪拌培養等の通常用いられる方法をいずれも好適に用い うる。
培養終了後、 培養液から本発明の化合物を分離 ·採取するには、 一般に微生物 代謝産物を採取するのに通常用いられる手段を適宜利用して行うことができる。 例えば、 各種イオン交換樹脂、 非イオン性吸着樹脂などを用いた分離方法、 ゲル 濾過クロマトグラフィー、 活性炭、 アルミナ若しくはシリカゲル等の吸着剤によ るクロマトグラフィー、 又は高速液体クロマトグラフィ一などのクロマトグラフ ィーを用いた分離方法、 あるいは結晶化、 減圧濃縮、 又は凍結乾燥の手段を単独 でまたは適宜組み合わせて、 あるいは反復して用いることが可能である。
培養液から分離 ·採取された本発明の化合物をさらに化学的に修飾することに より本発明の他の化合物を製造することができる。 例えば、 ォキソ基を有する化 合物を用いて、 通常の化学的修飾によりォキシム基を有する化合物を製造するこ とができる。 ォキソ基からォキシム基への官能基変換は当業者に周知かつ慣用の 方法に従って、 例えば不活性有機溶媒中でヒ ドロキシルァミンを室温又は加温下 に反応させることにより容易に行うことができる。
本発明の化合物は、 後述の試験例に示すように血管新生抑制活性、 アポトーシ ス抑制活性、 及び細胞周期阻害活性を有しており、 抗腫瘍剤のほか、 アポトーシ スの異常亢進が関与する疾患の予防及び Z又は治療のための医薬、 又は過度の血 管新生に関連する疾患の予防及びノ又は治療のための医薬として有用である。 正 常のアポト一シス制御機構が逸脱して細胞死が亢進している疾患として、例えば、 関節リゥマチ、 B型肝炎および C型肝炎等のウィルス感染に伴う肝炎、劇症肝炎、 糖尿病、 心筋梗塞、 潰瘍性大腸炎、 慢性腎炎、 脱毛症、 アルツハイマー病および パーキンソン氏病などの神経変性疾患、 虚血性脳障害、 '後天性免疫不全症候群、 拡張性心筋症などを例示することができる。 また、 過度の血管新生に関連する疾 患としては、 悪性腫瘍のほか、 糖尿病血管合併症 （例えば糖尿病性網膜症） など を例示することができる。
本発明の医薬は、 使用目的にあわせて投与方法、 剤型、 又は投与量を適宜決定 することが可能である。 本発明の医薬の投与形態は、 経口投与でも非経口投与で もよい。 本発明の医薬の形態は特に限定されないが、 例えば、 錠剤、 粉剤、 カブ セル剤、 顆粒剤、 エキス剤、 シロップ剤等の経口投与剤、 又は注射剤、 点滴剤、 若しくは坐剤等の非経口投与剤を挙げることができる。これらの製剤は、賦形剤、 結合剤等の製薬上許容される添加剤を用いて既知の方法で医薬組成物として調製 することができる。 本発明の化合物を有効成分として含む医薬の投与量は、 患者 の年齢、 体重、 感受性、 症状の程度などにより異なるが、 例えば、 成人 1日あた り経口投与では 0. 1 mg〜100 mg/kg、 好ましくは l mg〜20 mg/kgであり、 非経口 投与では 0. 01 mg〜10 mg/kg, 好ましくは 0. 1〜2 mg程度である。 上記の投与量 を 1日一回又は数回にわけて投与することも可能であり、 必要により上記範囲外 の量を用いることができる。
上記一般式 （I ) 又は一般式 （II) で表される本発明の化合物の用途は上記の 医薬としての用途に限定されることはない。 例えば、 本発明の化合物を試薬とし て使用する場合には、有機溶剤又は含水有機溶剤に溶解して用いることができる。 例えば、 各種培養細胞系へ直接投与すると細胞成長を抑制することができる。 使 用可能な有機溶剤としては、 例えばメタノール、 エタノール、 又はジメチルスル ホキシド等を挙げることができる。 試薬の形態は特に限定されないが、 例えば、 粉末などの固形剤、 又は有機溶剤若しくは含水有機溶剤に溶解した液体剤などを 挙げることができる。 通常、 上記の化合物を試薬として用いて細胞成長抑制作用 を発揮させるための効果的な使用量は、 0.1〜100 ^g/ml であるが、 適切な使用 量は培養細胞系の種類や使用目的により異なり、 当業者が適宜選択可能である。 また、 必要により上記範囲外の量を用いることができる。 実施例
実施例 1
グルコース 1.0%、 可溶性デンプン 2.0%、 大豆粉 1.5%、 麦芽抽出液 0.5%、 野 菜抽出液 10%、 リン酸第 2カリゥム 0.05%、 ポテトデキス 卜ロース 2.6%、硫酸マ グネシゥム 0.05%からなる組成の培地に BAUA- 3564株 （FERM P- 18284) を接種し て 28°Cで 72時間振盪培養を行った。 この培養液 210 mlを同組成の培地 15 リッ トルに接種し、 28°Cで 96時間振盪培養を行った。
上記培養液を遠心分離器で菌体と上清に分離し、 上清を PH7.0に調整し、 15リ ットルの酢酸ェチルで抽出した。 抽出後、 すべての酢酸ェチルを合わせて減圧濃 縮し、 褐色のシロップ 5.0 gを得た。 このシロップをクロ口ホルム 10 mlに溶解 し、 クロ口ホルムで充填したシリカゲルカラム （直径 4 cm、 長さ 60 cm) に浸潤 させた。 最初に、 クロ口ホルム 600 mlで溶出した後、 割合配合を順次変えたクロ 口ホルム -メタノール溶液 （100:1, 50:1, 20:1, 10:1, 5:1, 1:1) 各 6り0 mlずつ で溶出した。
本発明の化合物 RKB- 3564Aは、クロ口ホルム-メタノール溶液（20: 1)の画分に溶 出した。 この分画を減圧濃縮することにより、 2.5 g の褐色シロップを得た。 次 に、 この褐色シロップ 2.5gをメタノール 25mlに溶解し、 数回に分けて逆相 0DS カラム （直径 2 cm、 長さ 25 cm、 PEGASIL 0DS、 株式会社センシユー科学製） を 用いて、 高速液体クロマトグラフィーによる分取 （ァセトニトリノレ：水 =2:8→ァ セトニトリノレ：水 =4:6；直線的グラジェント、 流速 9. Otnl/分） を行い RKB- 3564A を得た。 さらに、 酢酸ェチル /ジクロロメタン/メタノールからなる混合溶媒より 再結晶化を行い、 純粋な無色針状結晶物質 RKB-3564A(60 mg)を得た。 " 本発明の化合物 RKB-3564Bは、クロ口ホルム-メタノール溶液（10 : 1)の画分に溶 出した。 この分画を減圧濃縮することにより、 1. 1 g の褐色シロップを得た。 次 に、 この褐色シロップ 1. 1 g をメタノール 1. 1 ml に溶解し、 数回に分けて逆相 0DSカラム （直径 2 cm、 長さ 25 cm、 PEGASIL 0DS、 株式会社センシユー科学製） を用いて、 高速液体クロマトグラフィーによる分取 （ァセトニトリノレ:水 =2 : 8→ ァセトニトリル：水 = 5 : 5 ;直線的グラジェン卜、流速 9. 0 ml/分）を行い RKB- 3564B を得た。 さらに、 薄層シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロ口ホルム：メタ ノール =10： 1)により無色油状物質 RKB- 3564B (50 mg)を得た。
さらに、 クロ口ホルム-メタノール溶液（50 : 1)の画分より、 逆相 0DSカラム （直 径 2 cm、 長さ 25 cm, PEGASIL 0DS、 株式会社センシユー科学製） を用いて、 高 速液体クロマトグラフィ一による分取 （ァセトニトリル：水 =3 : 7→ァセトニトリ ル：水 =5 : 5；直線的グラジェント、 流速 9. 0 ml/分） を行い RKB- 3564Dを得た。 さらに、 薄層シリカゲノレカラムク口マトグラフィー（クロロホノレム：メタノ一ノレ =30 : 1)により無色油状物質 RKB- 3564D (9 mg)を得た。 なお、 RKB- 3564E および RKB-3564F は、 本培養生産物より同様な精製工程で単離可能であるが、 それぞれ RKB- 3564Aおよび RKB-3564Bより通常の方法で 3位及び 3'位のヒ ドロキシ基を酸 ィ匕 （例えば、 Dess - Martin Periodinate を用いて酸化） することによつても製造 できる。
RKB-3564A
NMRデータを表 1に示す （溶媒：重ァセトン、 δ ppm、 内部標準： TMS、 13C： 125 MHz, Ή： 500 MHz：)。
性状：無色針状結晶
比旋光度： +61. 0 (c=0. 146, 21度， メタノ一ル）
融点： 186度 （dec. )
分子式： C2。H2。08
高分解能質量分析 （HR- EIMS) ： (M+) 実験値 (m/z) ： 388.1148
理論値 (m/z) ： 388.1158
UV max nm (メタノール） （ ε ) ： 205 (10540), 265 (sh, 3565), 320 (930) IR vmax (KBr) cm—1 : 3350， 1705, 1675, 1370， 1280, 1050, 1685
Rf値 （シリカゲル 60 F254、 メルク社製）
0.48 (溶媒； CHC13:メタノール =10:1)
呈色反応 （陽性） ： 10%硫酸
溶解性： メタノール、 ジメチルスルホキシドに易溶。 n-へキサンに不溶。
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980蒙 Odf/JOd Z.Cl880/∑:0 OAV RKB-3564B
匪 Rデータ'を表 2に示す （溶媒：重クロ口ホルム、 δρρηκ 内部標準： TMS、 13C 125 MHzヽ Ή： 500 ΜΗζ)。
性状：無色油状
比旋光度： +153.0 (c=0.315, 21度， メタノール）
分子式： C20HO08
高分解能質量分析 （HR-EIMS) ： (M+)
実験値 (m/z) ： 388.1135
理論値 （m/z) ： 388.1158
UV max nm (メタノール） （ε) ： 205 (13140), 240 (5970)， 320 (430) IR vmax (neat) cm— 1 ： 3425, 1685, 1675， 1340, 1190, 1000
Rr値 （シリカゲル 60 F254、 メルク社製）
0.58 (溶媒; CHC13:メタノール =10:1)
呈色反応 （陽性） ： 10%硫酸
溶解性： メタノ一ル、 ジメチルスルホキシドに易溶。 n -へキサンに不溶。
Figure imgf000016_0001
position 13C (多重度） (多重度） （J/Hz)
1 73.15 d 5.06 s
2 150.03 s
3 63.76 d 4.84 br s
4 56.17 d 3.82 dd 1.3, 3.4 5 52.53 d 3.55 d 3.4 6 190.80 s
7 132.86 s
8 36.76 d 3.11 dd 1.0, 2.6 9 70.47 d 4.16 dq 2.6, 6.3
10 20.02 q 0.80 d 6.3
1' 149.87 d 6.50 s
2， 105.72 s
3' 68.36 d 4.65 br s
4， 54.59 d 3.63 dd 2.1, 3.1
5， 52.49 d 3.52 d 3.1
6， 198.85 s
7' 51.59 s
8， 41.83 d 2.78 dd 2.1, 6.3
9' 74.42 d 3.54 q 6.3
10， 19.37 q 1.28 d 6.3
3- OH 4.37 br s
3, -OH 3.98 br s RKB-3564D
應 Rデータを表 3に示す （溶媒：重ァセトン、 δ ppm、 内部標準： TMS、 13C： 125 ΜΗζ、 Ή： 500 MHz：)。
性状：無色油状物質
比旋光度： +303.3 (c=0.184, 21度， ァセトン）
分子式： C2。H2。08
高分解能質量分析 (HR-EIMS) ： (M+)
実験値 (m/z) ： 388. 1173
理論値 (m/z) ： 388. 1158
UV X ax nm (メタノール） （ ε ) ： 238 (7490), 255 (sh， 6590)
IR vmax (neat) cm"1： 3450, 1670， 1620, 1255,
Rf値 （シリカゲル 60 F2M、 メノレク社製） ： 0.67(溶媒； CHC13:メタノール =10:1) 呈色反応 （陽性） ： 10%硫酸
溶解性：メタノール、 ジメチルスルホキシドに易溶。 n-へキサンに不溶。
Figure imgf000018_0001
表 3 position 13C (多重度） 'Η (多重度） （J/Hz)
1， 1' 81.57 d 4.79 br s
2, 2' 155.58 s
3, 3' 66.19 d 4.60 d 7.8
4, 4' 58.45 d 3.85 dd 0.9, 3.7
5, 5， 53.45 d 3.52 dd 0.9, 3.7
6， 6' 192.65 s
7, 7， 132.67 s
8, 8， 39.92 d 3.21 br s
9, 9， 72.82 d 4.19 d 6.4
10, 10， 23.01 q 0.76 d 6.4
3— OH, 3， -OH 4.37 br d 8.2
RKB-3564E, RKB-3564F
いずれも 10%硫酸嘖霧後加熱により呈色可能であり、 またメタノール、 ジメチ ルスルホキシドに易溶かつ n-へキサンに不溶である。
Figure imgf000019_0001
RKB-3564E RKB-3564F
性状 色
分子式 ^20^16¾ ^20^16¾
EI— MS (m/z) 384 384
試験例 1 RKB_3564A RKB_3564B RKB- 3564D RKB-3564E, 及び RKB- 3564Fによ る血管内皮細胞の走化性の阻害
HuMedia - EG2 (KURAB0)培地を用いて培養維持された HUVEC細胞（正常ヒ トさい帯 静脈血管内皮細胞）をケモタキセルチヤンバーを用いた 3次元培養の上層にまい た。下層に内皮細胞増殖因子（VEGF)を含む HuMedia-EG2を充填させることで HUVEC 細胞の走化性を誘導した。 RKB-3564A RKB-3564B RKB- 3564D RKB- 3564E、 及び RKB - 3564Fは、 それぞれ 0. l~l / g/mlの濃度で、 VEGFによって誘導される HUVEC 細胞の走化性を抑制した。 この結果は、本癸明の上記化合物が抗 VEGF作用を有し ており、 血管新生阻害剤、 抗腫瘍剤、 及び抗炎症剤などの医薬として有効である ことを示している 試験例 2 RKB_3564A RKB- 3564B RKB-3564D, RKB- 3564E、 及び RKB-3564Fによ る Fas抗体誘導アポトーシスの抑制活性
Fasを発現している成人 T細胞白血病細胞株 Jurkat細胞を Fas抗体感受性細胞 として用いた。 Jurkat細胞は、 10%子牛血清を含む RPMI培地にて 5%炭酸ガスと水 蒸気を飽和させた培養器内で培養した。対数増殖期にある Jurkat細胞に一連の希 釈系列の RKB- 3564A RKB- 3564B RKB-3564D RKB-3564E、 及び RKB- 3564Fを添加 し、 Fas抗体 CH-11 (株式会社医学生物学研究所製， 100 ng/nil)存在下で 6時間培 養し、細胞の生存率を MTT法により検定した。生存率は以下の式に従い算出した。 ルに溶解し、 0. 85%生理的食塩水 100 mlを添加して静脈内投与用製剤を調製し、 一日あたり 10〜； 100 mlを症状に応じて静脈内注射又は点滴で投与する。 製剤例 2 ：顆粒剤
RKB- 3564A、 RKB- 3564B、 RKB- 3564D、 RKB- 3564E、又は RKB-3564F 1 g、乳糖 98 g、 及びヒ ドロキシプロピルセルロース 1 gをよく混和した後、 定法にしたがって粒 状に成形する。 得られた造粒物をよく乾燥して、 瓶やヒートシ一ル包装などに適 した顆粒剤を製造した。 この顆粒剤は一日あたり 100〜1000 mgを症状に応じて経 口投与できる。 産業上の利用可能性
本発明の化合物は、 血管新生抑制活性、 アポトーシス抑制活性、 及び細胞周期 阻害活性を有しており、 抗腫瘍剤又はアポトーシスの異常亢進が関与する疾患の 予防及びノ又は治療のための医薬の有効成分として有用である。

Claims

請 求 の 範 囲
1 .一般式 （I )
Figure imgf000022_0001
(式中、 R1は水素原子を示し、 R2はヒドロキシ基を示すが、 R1及び R2が一緒にな つてォキソ基又はォキシム基を示してもよく ； R3は水素原子を示し、 R4はヒ ドロ キシ基を示す力 R3及び R4が一緒になつてォキソ基又はォキシム基を示してもよ く ； R5は水素原子を示し、 R6はヒ ドロキシ基を示すが、 R5及び R6が一緒になつて ォキソ基又はォキシム基を示してもよく ； R7は水素原子を示し、 R8は水素原子を 示すが、 R7及び R8が一緒になつてォキソ基又はォキシム基を示してもよく ； R9及 ぴ R1Qはそれぞれ独立に水素原子、置換基を有していてもよいアルキル基、置換基 を有していてもよいアルケニル基を示す） で表される化合物。
2 . R1が水素原子であり、 R2がヒ ドロキシ基であり、 R3及び R4が一緒になつてォ キソ基を示し、 R5が水素原子であり、 R6がヒ ドロキシ基であり、 R7及び R8がー緒 になってォキソ基を示し、 R9及び Rwがともにメチル基である請求の範囲第 1項に 記載の化合物。
3 . R1及び R2が一緒になつてォキソ基を示し、 R3及び R4が一緒になつてォキソ基 を示し、 R5及び R6が一緒になつてォキソ基を示し、 R7及び R8が一緒になつてォキ ソ基を示し、 R9及ぴ Rlflがともにメチル基である請求の範囲第 1項に記載の化合物。
4 .一般式 (II) ：
Figure imgf000023_0001
(式中、 R11は水素原子を示し、 R12はヒ ドロキシ基を示すが、 R11及び R12がー緒に なってォキソ基又はォキシム基を示してもよく ； R13は水素原子を示し、 RMはヒ ド 口キシ基を示すが、 R13及び R"が一緒になつてォキソ基又はォキシム基を示して もよく ； R15は水素原子を示し、 R16はヒドロキシ基を示すが、 R15及び R16がー緒に なってォキソ基又はォキシム基を示してもよく ； R17は水素原子を示し、 R18は水素 原子を示すが、 R17及び R18が一緒になつてォキソ基又はォキシム基を示してもよ く ； R19及び °はそれぞれ独立に水素原子、 置換基を有していてもよいアルキル 基、 置換基を有していてもよいァルケ-ル基を示す） で表される化合物。
5 . Rnが水素原子であり、 R12がヒ ドロキシ基であり、 R13及び R14が一緒になつて ォキソ基を示し、 R15が水素原子であり、 R16がヒ ドロキシ基であり、 R17及び R18が 一緒になつてォキソ基を示し、 R19及び R2Qがともにメチル基である請求の範囲第 4項に記載の化合物。
6 .請求の範囲第 1項から第 5項のいずれか 1項に記載の化合物を有効成分とし て含む医薬。
7 .血管新生阻害剤である請求の範囲第 6項に記載の医薬。
8 .アポトーシス抑制剤である請求の範囲第 6項に記載の医薬。
9 .細胞周期阻害剤である請求の範囲第 6項に記載の医薬。
1 0 .抗腫瘍剤である請求の範囲第 6項に記載の医薬。
1 1 .アポトーシスの異常亢進が関与する疾患の予防及びノ又は治療のための請 求の範囲第 6項に記載の医薬。
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