WO2002006505A1 - Procédé de production de glycérides à l'aide de lipases - Google Patents

Procédé de production de glycérides à l'aide de lipases Download PDF

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lipase
dha
fat
producing
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Irimescu Roxana
Kiyomi Furihata
Kazuhiko Hata
Tsuneo Yamane
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Nippon Suisan Kaisha, Ltd.
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Definitions

  • the present invention relates to a method for producing glyceride using lipase. More specifically, the present invention relates to the production of 2-glyceride or triglyceride using lipase, particularly triglyceride (TG) having a polyunsaturated fatty acid (PUFA) residue at sn-2 position. About the method.
  • TG triglyceride
  • PUFA polyunsaturated fatty acid
  • DHA is used as an abbreviation for docosahexanoic acid
  • EPA is used as eicosapentaenoic acid
  • ARA is used as arachidonic acid.
  • DHA concentrated fats and oils and tri-DHA-triglyceride it is used as an abbreviation for docosahexaenoic acid residue.
  • MG is used as a monoglyceride
  • 2-MG is used as a monoglyceride
  • TG is used as a triglyceride.
  • first lipase refers to a lipase that is selective at the 1- and 3-positions and, when subjected to alcoholysis, also acts on fatty acids having a long chain length.
  • “Secondary lipase” means a lipase that is selective at the 1- and 3-positions and that produces TG when 2-MG is reacted with fatty acid esters or free fatty acids.
  • lipases varies greatly depending on the chain length of the fatty acid, and the activity on long-chain fatty acids such as DHA is extremely weak, so that the desired structural fat may not be obtained.
  • Lipase reactions include hydrolysis, transesterification, acid lysis, esterification, etc., but not all lipases show the same level of activity for all reactions under the same conditions.
  • lipases of various properties For example, the use of 1,3-lipase, which has a strong activity against acidolysis, is advantageous for the substitution of fatty acids at the 1,3-positions, but this lipase has a + minute activity against DHA, etc.
  • An object of the present invention is to provide a method for producing 2-MG or TG, particularly TG having a polyunsaturated fatty acid (PUFA) residue at sn-2 position, with very high purity and high efficiency.
  • the starting material TG is subjected to alcoholysis with the first 1, 3 lipase,
  • the gist is a method for producing glyceride, which is characterized by producing MG.
  • the fatty acid residue at position 2 is a DHA, EPA or ARA residue.
  • the present invention provides a method wherein the raw material TG is subjected to alcoholysis with the first 1,3 lipase to obtain a DHA, E
  • the raw material TG is a fat or oil containing a polyunsaturated fatty acid, preferably a fat or fat concentrated with DHA, a fat or oil concentrated with EPA, or a fat or oil concentrated with ARA.
  • the present invention relates to a fat or oil containing a polyunsaturated fatty acid, preferably a fat or fat with DHA concentration.
  • This is a method for producing glyceride which comprises subjecting EPA-enriched fat or ARA-enriched fat or oil to alcoholysis with first 1, 3 lipase to produce 2-MG.
  • the oil or fat is fish oil, and in this case, the present invention is characterized in that fish oil, preferably DHA-enriched fish oil, or EPA-enriched fish oil is subjected to alcoholysis with the first 1,3 lipase to produce 2-MG.
  • the starting TG is avian DHA—TG, avian EPA—TG, or avian ARA—TG, and in this case, the present invention provides an alcoholysis of avian DHA—TG or avian EPA—TG with a first lipase.
  • This is a method for producing glyceride characterized by producing MG.
  • the present invention provides the above-mentioned 2-MG, that is, the raw material TG as the first 1, 3
  • a method for producing glyceride characterized in that a target TG is obtained by introducing a fatty acid residue at the 1,3-position with a second 1,3-lipase via 2-MG obtained by alcoholysis with lipase. It is a gist.
  • the fatty acid residue at position 2 is a DHA, EPA or ARA residue.
  • the present invention relates to a method for preparing a fatty acid residue at position 2 obtained by alcoholysis of the raw material TG with the first 1,3 lipase.
  • a method for producing glyceride comprising obtaining a target TG by introducing a fatty acid residue at the 1,3-position with a second 1,3-lipase via MG, which is a DHA, EPA or ARA residue. It is.
  • the fatty acid residue introduced at the 1,3-position is a medium-chain saturated fatty acid residue having 8, 10 or 12 carbon atoms.
  • 3-MG obtained by alcoholysis with 3 lipases preferably the second fatty acid residue at position 2 is MG via DHA, EPA or ARA residue.
  • the raw material TG is a fat or oil containing a polyunsaturated fatty acid, preferably a DHA-concentrated fat, an EPA-concentrated fat or an ARA-condensed fat, in which case, the present invention provides a fat or oil containing a polyunsaturated fatty acid, preferably a DHA-condensed fat or oil, Introduction of fatty acid residues at the 1- and 3-positions with the second 1,3-lipase via 2-MG obtained by alcoholysis of EPA-enriched fat or ARA-enriched fat with the first 1,3 lipase
  • a glyceride production method characterized in that a target TG is obtained by the above method.
  • the oil or fat is fish oil.
  • the present invention relates to a method for producing a fish oil, preferably a fish oil enriched in DHA, or fish oil enriched in EPA, via 2-MG obtained by alcoholysis with a first 1,3 lipase.
  • This is a method for producing glyceride, characterized in that the target TG is obtained by introducing a fatty acid residue at the 1,3 position with a second 1,3-lipase.
  • the raw material TG is tri-DHA—TG, tri-EPA—TG, or tri-ARA—TG.
  • the present invention relates to tri-DHA—TG, tri-EPA—TG, or tri-ARA—TG.
  • the starting TG is subjected to alcoholysis with the first 1,3 lipase via 2-MG, and the second 1,3-lipase is used to give the fatty acid at the 1,3-position. It is characterized in that a target TG is obtained by introducing a residue.
  • the present invention divides the lipase reaction into two steps, prepares 2-MG from TG by alcoholysis using the first 1,3-lipase, and then introduces the fatty acid to be introduced into the 1,3-position.
  • TG is prepared by esterification of 2-MG with a second 1,3-lipase using a lower alkyl ester or free fatty acid.
  • the present inventors have found that even if certain lipases do not produce the desired result by acidolysis or hydrolysis by reaction with TG, alcoholysis allows fatty acids, such as DHA, to be less susceptible to lipase action.
  • the first lipase used in the first step should be selective at positions 1 and 3 and be able to act on long chain fatty acids such as DHA when subjected to alcoholysis such as ethanolysis and methanolysis. It is not particularly limited.
  • C andidaantarctica lipase for example, Novozym 435 [Novo nordisk Bioindustry Co., Ltd.]
  • the second lipase used in the second step is not particularly limited as long as it is selective at the 1- and 3-positions and can produce TG by reacting 2-MG with a fatty acid ester or free fatty acid under reduced pressure.
  • Rhizom cormiehei lyase eg, Liozyme IM [Novo Nordisk Pio Industry Co., Ltd.]
  • a preferable lipase is exemplified as a preferable lipase.
  • fatty acid ester examples include lower alkyl esters such as ethyl ester.
  • the most preferred embodiment of the production method of the present invention is a method for producing a lipozyme via 2-MG obtained by subjecting a raw material TG to alcoholysis with NoV ozym 435.
  • the raw material TG is preferably an oil or fat containing a polyunsaturated fatty acid,
  • the highly unsaturated fatty acids are DHA, EPA or ARA.
  • the raw material TG used in the method of the present invention is, for example, fish oil, preferably DHA-enriched fat or tri-DHA-TG, or EPA-enriched fat or tri-EPA-TG, or ARA-enriched fat or ARA. — TG.
  • the fatty acid introduced at the 1,3-position used in the method of the present invention is preferably a saturated fatty acid having 8, 10, or 12 carbon atoms.
  • a tri-DHA-TG composed of only highly purified DHA is used as a raw material TG
  • a fatty acid to be introduced at the 1- and 3-positions is selected to be a medium-chain fatty acid having 8 to 12 carbon atoms, a TG containing DHA with excellent absorbability can be obtained. The effect can be expected.
  • EPA-containing TG containing EPA can be prepared in the same way and a highly absorbable TG containing EPA is obtained, foods and pharmaceuticals that are expected to have many physiological activities of EPA can be expected.
  • DHA is originally localized at the s ⁇ 2 position in fish oil, and if the present invention is applied to tuna oil or bonito oil having a relatively high DHA content, nutritional aspects with increased absorbability will be obtained. Excellent oils and fats can be obtained.
  • the use of fish oil in which the DHA concentration of the raw fish oil is concentrated by wintering or other techniques can be used to obtain a TG having a higher DHA content and a target structure (the lipase reaction is divided into two stages. In the first stage, the first 1, 3 Alcoholysis using lipase makes it possible to almost completely remove fatty acids at positions 1 and 3 and obtain 2-MG, even if fatty acids such as DHA that are difficult to act on are at positions 1 and 3. it can.
  • Example 1 Example 1
  • the enzyme was filtered off from the reaction mixture obtained in the same manner as in Example 3, and the remaining ethanol was distilled off under reduced pressure.Ethyl octanoate (0.345 g), water (0.15 g) ,: 4.00 g of Lipozyme IM was caloried, and the mixture was stirred at 35 ° C. for 30 minutes under a nitrogen stream. Next, the reaction volume is The vessel was evacuated to 3-5 mmHg and stirring continued at 35 ° C for 3.5 hours.
  • the enzyme was filtered off from the reaction mixture obtained in the same manner as in Example 6, and the remaining ethanol was distilled off under reduced pressure.To the total amount, 0.40 g of ethyl decanoate, 0.010 g of water, 50 g of Lipozym e IM was added, and the mixture was stirred at 35 ° C for 30 minutes under a nitrogen stream. Then, the pressure in the reaction vessel was reduced to 3 to 5 mmHg by a vacuum pump, and stirring was continued at 35 ° C for 3.5 hours.

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Description

リパーゼを用いたグリセライ ドの製造方法
技術分野
明
本発明はリパーゼを用いたグリセライ ドの製造方法に関する。 より詳 細には本発明は、 リパーゼを用いた田 2—モノグリセライ ドまたはトリグ リセライ ド、 特に s n- 2位に高度不飽和脂肪酸 （PUFA) 残基を有す る トリグリセライ ド （TG) の製造方法に関する。
本発明において、 「DHA」 はドコサへキサェン酸、 「E PA」 はェ ィコサペンタエン酸、 「ARA」 はァラキドン酸の略称として使用して いる。 なお、 DHA濃縮油脂、 トリ DHA—トリグリセライ ドという使 い方の場合、 ドコサへキサェン酸残基の略称として使用している。
また、 「MG」 はモノグリセライ ド、 「2—MG」 は 2 _モノグリセ ライ ド、 「TG」 はトリグリセライ ドの略称として使用している。
また、 「第一のリパーゼ」 とは 1、 3位に選択的で、 アルコリシスを 行った場合に、 鎖長の長い脂肪酸にも作用するリパーゼを意味する。
「第二のリパーゼ」 とは 1、 3位に選択的で， 2— MGと脂肪酸エス テルまたは遊離脂肪酸を反応させた場合に TGを生成するリパーゼを意 味する。
背景技術
1， 3位に特異的なリパーゼを用いて TGの 1， 3位に任意の脂肪酸 を導入する場合、 一般的には目的脂肪酸でァシドリシスする、 または目 的脂肪酸エステルをエステル交換するなどの方法が用いられる。 しかし、 この場合には非常に過剰量の脂肪酸やエステルを用いなければならず、 また確率論的に一部は元の 1， 3位の脂肪酸が残存するため目的構造脂 質を高純度で得ることは比較的むづかしい。
さらにリパーゼによっては脂肪酸の鎖長に応じて活性が大きく変化し、 D H Aなどの長鎖脂肪酸に対する活性が著しく弱いため、 目的の構造脂 質を得られない場合もある。 また、 リパーゼの反応には加水分解反応、 エステル交換反応、 ァシド リシス、 エステル化反応などが挙げられるが全てのリパーゼが何れの反 応に対しても同条件で同程度の活性を示すわけではなく様々な特性のリ パーゼが存在する。 例えば、 ァシドリシスに対して強い活性を持った 1， 3 —リパーゼを利用すれば 1 , 3位の脂肪酸の置換に有利であるが、 こ のリパーゼが D H Aなどに対して +分な活性を持っていない場合には 1 , 3位に D H Aが位置した T Gから他の目的脂肪酸への置換は非常に困難 となる。 もちろん、 ァシドリシスに高活性で D H Aにも活性の高いリパ ーゼを用いれば目的は達成できるがこのようなリパーゼは入手が困難で あるか、 極めて高価であるため工業的な用途に用いるのは好ましくない c
発明の開示
本発明は、 2— M Gまたは T G、 特に s n - 2位に高度不飽和脂肪酸 ( P U F A ) 残基を有する T Gを非常に高純度で高効率で製造する方法 の提供を目的としている。 本発明は、 原料 T Gを第一の 1， 3リパーゼでアルコリシスして 2— MGを製造することを特徴とするグリセライ ドの製造方法を要旨として いる。
2位の脂肪酸残基が DHA、 E PAまたは A R A残基であり、 その場 合、 本発明は、 原料 TGを第一の 1， 3 リパーゼでアルコリシスして 2 位の脂肪酸残基が DHA、 E PAまたは A R A残基である MGを製造す ることを特徴とするグリセライ ドの製造方法である。 原料 TGが高度不飽和脂肪酸を含有する油脂、 好ましくは DHA濃縮 油脂、 E P A濃縮油脂または AR A濃縮油脂であり、 その場合、 本発明 は、 高度不飽和脂肪酸を含有する油脂、 好ましくは DHA濃縮油脂、 E P A濃縮油脂または A R A濃縮油脂を第一の 1， 3リパーゼでアルコリ シスして 2— MGを製造することを特徵とするグリセライ ドの製造方法 である。 上記の油脂が魚油であり、 その場合、 本発明は、 魚油、 好ましくは D HA濃縮魚油、 または E P A濃縮魚油を第一の 1， 3リパーゼでアルコ リシスして 2— MGを製造することを特徴とするグリセライ ドの製造方 法である。 原料 TGがトリ DHA— TG、 トリ E PA— TG、 またはトリ ARA — TGであり、 その場合、 本発明は、 トリ DHA— TG、 またはトリ E P A— TGを第一のュ， 3リパーゼでアルコリシスして 2— MGを製造 することを特徴とするグリセライ ドの製造方法である。 また、 本発明は、 上記の 2— MG、 すなわち原料 TGを第一の 1， 3 リパーゼでアルコリシスして得られる 2— MGを経由し第二の 1， 3— リパーゼで 1， 3位に脂肪酸残基を導入することで目的 T Gを得ること を特徴とするグリセライ ドの製造方法を要旨としている。
2位の脂肪酸残基が DHA、 E PAまたは AR A残基であり、 その場 合、 本発明は、 原料 TGを第一の 1， 3リパーゼでアルコリシスして得 られる 2位の脂肪酸残基が DHA、 E P Aまたは A R A残基である MG を経由し第二の 1， 3—リパーゼで 1， 3位に脂肪酸残基を導入するこ とで目的 T Gを得ることを特徴とするグリセライ ドの製造方法である。
1， 3位に導入される脂肪酸残基が炭素数 8， 1 0または 1 2の中鎖 飽和脂肪酸残基であであり、 その場合、 本発明は、 原料 TGを第一の 1 ,
3リパーゼでアルコリシスして得られる 2— MG、 好ましくは 2位の脂 肪酸残基が DHA、 E P Aまたは ARA残基である MGを経由し第二の
1， 3—リパーゼで 1， 3位に炭素数 8， 1 0または 1 2の中鎖飽和脂 肪酸残基を導入することで目的 T Gを得ることを特徴とするグリセライ ドの製造方法である。 原料 TGが高度不飽和脂肪酸を含有する油脂、 好ましくは DHA濃縮 油脂、 E P A濃縮油脂または ARA濃縮油脂であり、 その場合、 本発明 は、 高度不飽和脂肪酸を含有する油脂、 好ましくは DHA濃縮油脂、 E P A濃縮油脂または AR A濃縮油脂を第一の 1， 3リパーゼでアルコリ シスして得られる 2—MGを経由し第二の 1， 3—リパーゼで 1， 3位 に脂肪酸残基を導入することで目的 TGを得ることを特徴とするグリセ ライ ドの製造方法である。 上記の油脂が魚油であり、 その場合、 本発明は、 魚油、 好ましくは D HA濃縮魚油、 または E P A濃縮魚油を第一の 1 , 3リパーゼでアルコ リシスして得られる 2—MGを経由し第二の 1， 3—リパーゼで 1， 3 位に脂肪酸残基を導入することで目的 T Gを得ることを特徴とするグリ セライ ドの製造方法である。 原料 T Gがトリ DHA— T G、 トリ E PA— TG、 またはトリ ARA —TGであり、 その場合、 本発明は、 トリ DHA— TG、 トリ E PA— TG、 またはトリ ARA— TGを第一の 1， 3リパーゼでアルコリシス して得られる 2—MGを経由し第二の 1 , 3—リパーゼで 1， 3位に脂 肪酸残基を導入することで目的 TGを得ることを特徴とするグリセライ ドの製造方法である。 本発明のグリセライ ドの製造方法の好ましい態様は、 原料 TGを第一 の 1， 3リパーゼでアルコリシスして得られる 2— MGを経由し第二の 1， 3—リパーゼで 1， 3位に脂肪酸残基を導入することで目的 TGを 得ることを特徴とする。 すなわち、 本発明は、 リパーゼの反応を二段階 に分け、 TGから第一の 1， 3—リパーゼを用いてアルコリシスによつ て 2— MGを調製し、 その後、 1， 3位に導入したい脂肪酸の低級アル キルエステルまたは遊離脂肪酸を用いて第二の 1， 3—リパーゼで 2— MGのエステル化反応によって TGを調製する方法である。 本発明者らは、 ある種のリパーゼが TGとの反応でァシドリシスや加 水分解では望む結果が得られない場合であっても、 アルコリシスを行な うことにより、 DHAなどリパーゼの作用しにくい脂肪酸が 1 , 3位に ある場合でも、 ほぼ完璧に 1， 3位の脂肪酸を除去し 2— MGを得るこ とができることを発見した。 ついで 2—MGには 1， 3位に導入したい 脂肪酸のエステルまたは遊離脂肪酸を作用させることで目的の構造の T Gを非常に高純度で高効率で得られることを発見し、 これらの手順を順 番に組み合わせることによって本発明を完成した。 第一段階で使用される第一めリパーゼは、 1， 3位に選択的で、 エタ ノリシス、 メタノリシスなどのアルコリシスを行なった場合に DH Aな どの鎖長の長い脂肪酸にも作用できるものであれば特に限定されない。 この目的で利用できるリパーゼとして C a n d i d a a n t a r c t i c a リパーゼ （例えば N o v o z y m 43 5 [ノボノルデイスクバ ィォインダストリ一（株）] ) が好ましいものとして例示される。 第二段階で使用される第二のリパーゼは 1， 3位に選択的で、 2— M Gと脂肪酸エステルまたは遊離脂肪酸を減圧下で反応させ TGを生成で きるのであれば特に限定されない。 この目的で利用できるリパーゼとし て Rh i z om c o r m i e h e i リ ノ ーゼ (例 は L i o z y m e I M [ノボノルディスクパイオインダストリー（株）] ) が好 ましいものとして例示される。 脂肪酸エステルとしてェチルエステルな どの低級アルキルエステルが例示される。 本発明の製造方法の最も好ましい態様は、 原料 TGを N o V o z y m 43 5でアルコリシスして得られる 2— MGを経由し L i p o z y m e
I Mで 1， 3位に脂肪酸残基を導入することで目的構造の TGを得るこ とを特徴とする。 原料 TGは、 好ましくは高度不飽和脂肪酸を含有する油脂であり、 高 度不飽和脂肪酸は DHA、 E PAまたは AR Aである。 本発明の方法で 用いられる原料 TGは例えば魚油であり、 好ましくは DH A濃縮油脂、 またはトリ DHA— TG、 あるいは E PA濃縮油脂、 またはトリ E PA 一 TG、 あるいは AR A濃縮油脂またはトリ AR A— TGである。 本発 明の方法で用いられる 1， 3位に導入される脂肪酸は好ましくは炭素数 8、 1 0または 1 2の飽和脂肪酸である。 本発明において原料の TGとして高度に精製された DHAのみから構 成される トリ DHA— TGを用いた場合、 高純度で X— DHA— X型の TGを得ることが可能であり、 これは従来のァシドリシスと市販リパー ゼの組み合わせでは調製が非常に困難である。 また、 このとき 1 , 3位 に導入する脂肪酸に炭素数 8〜 1 2の中鎖脂肪酸を選択すれば吸収性に 優れた DHA含有 TGを得ることができ乳児用の粉乳などに利用すれば 大きな効果が期待できる。 また、 E P Aを含有した構造脂質も同様に調製可能で吸収性の高い E P A含有 TGを得た場合には E P Aの持つ多くの生理活性を期待した食 品、 医薬品などが期待できる。 さらに魚油にはもともと s η 2位に DHAが局在していることが知ら れており、 本発明を DHA含量の比較的高いマグロ油やカツォ油に適用 すれば吸収性を増大させた栄養面に優れた油脂を得ることができる。 ま た、 原料の魚油の DH A濃度をウインタリングなどの手法で濃縮した魚 油を用いればさらに DH Aを高含量とした目的の構造の TGが得られる ( リパーゼの反応を二段階に分け、 第一段階で TGから第一の 1 , 3— リパーゼを用いてアルコリシスすることで、 DH Aなどリパーゼの作用 しにくい脂肪酸が 1， 3位にある場合にも、 ほぼ完ぺきに 1 , 3位の脂 肪酸を除去し 2— MGを得ることができる。
その後、 第二段階で 1， 3位に導入したい脂肪酸の低級アルキルエス テルまたは遊離脂肪酸を用いて第二の 1 , 3—リパーゼで 2— MGのェ ステル化反応をすることで、 目的の構造の T Gを非常に高純度で高効率 で得ることができる。
発明を実施するための最良の形態
本願発明の詳細を実施例で説明する。 本願発明はこれら実施例によつ て何ら限定されるものではない。 実施例 1
カツォ油 l g、 ェタノ一ノレ 3 g、 N o v o z ym4 3 5 0. 4 gを 混合し、 窒素気流下 3 5°Cで 2時間攪拌した。 反応後、 反応混合物の脂 質組成をィアトロスキャンにて測定した結果、 ェチルエステル 6 9. 5 %、 ジグリセライ ド 2. 3 %、 MG 2 8. 3 %であり TG、 遊離脂肪酸 は検出されなかった。 薄層クロマトグラフィー分析の結果、 MGは 2— MGであることを確認した。 またガスクロマトグラフィーにて脂肪酸組 成を測定した結果、 原料カツォ油の DHAは 2 7. 9%であったのに対 し、 MGの DHAは 5 1. 5 %であった。 実施例 2
イワシ油を原料として、 PUFAの濃縮を目的にアセトンを溶媒とし たウィンタリングを行い得られた油 1 g、 エタノール 3 g、 N o V o z y m4 3 5 0. 4 gを混合し、 窒素気流下 3 5 °Cで 3時間攪拌した。 反応後、 反応混合物の脂質組成をィァトロスキャンにて測定した結果、 ェチルエステル 6 7. 7%、 ジグリセライ ド 1. 9 %、 MG 30. 4 % であり TG、 遊離脂肪酸は検出されなかった。 薄層クロマトグラフィー 分析の結果、 MGは 2—MGであることを確認した。 またガスクロマト グラフィ一にて脂肪酸組成を測定した結果、 ウインタリング油の DHA は 1 3. 0 %であったのに対し、 MGの DHAは 2 8. 8 %であった。 実施例 3
グリセリン 0. 1 84 g、 水 0. 1 84 g、 N o v o z ym4 3 5
0, 2 3 9 gを混合し 3 0分間攪拌後、 DHA 1. 9 7 1 gを加え、 6 0°C、 3〜5mmH gの減圧下で一夜攪拌した。 酵素を濾別し、 反応混 合物をシリカゲルカラムで精製した結果、 トリ DHA— TG 1. 8 3 g (純度 9 9%、 収率 8 9%) を得た。
得られたトリ DHA—TG 0. 1 0 2 g、 エタノール 0. 30 6 g、
No v o z ym4 3 5 0. 046 gを混合し 3 5 °C、 窒素気流中で 4 時間攪拌した。 酵素を濾別し、 グリセリ ド画分の組成をィアトロスキヤ ンで分析したところ、 MG 9 2. 7%、 ジグリセライ ド 5. 3 5 %、 T G 1. 9 6 %であった。 薄層クロマトグラフィーにより MGは 1 0 0% 2—MGであることを確認した。 実施例 4
実施例 3と同様に操作して得られた反応混合物から酵素を濾別後残存 するエタノールを減圧下留去しこもの全量に、 オクタン酸ェチル 0. 3 45 g、 水 0. O l O g、 ： L i p o z yme I M 0. 0 5 0 gをカロ え、 窒素気流下 3 5°Cで 3 0分間攪拌した。 次いで真空ポンプで反応容 器を 3〜 5 mmH gに減圧し、 3 5°Cで 3. 5時間攪拌を継続した。 得 られた反応混合物のグリセリ ド画分の組成をガスクロマトグラフィ一お よび銀イオンカラム高速液体クロマトグラフィ一により分析した結果、 2位に DHA, 1、 3位にオクタン酸を有する TGが 8 1. 4%含まれ ていた。 実施例 5
実施例 3と同様に操作して得られた反応混合物から分画して得られた 2 -DHA-MG 0. 040 gに、 オクタン酸 0. 2 8 9 g、 水 0. 0 1 0 g, L i p o z yme I M 0. 0 5 0 gを加え、 窒素気流下 3 5°Cで 3 0分間攪拌した。 次いで真空ポンプで反応容器を 3〜 5 mmH gに減圧し、 3 5°Cで 3. 5時間攪拌を継続した。 得られた反応混合物 のグリセリ ド画分の組成をガスクロマトグラフィ一および銀イオンカラ ム高速液体クロマトグラフィーにより分析した結果、 2位に DHA, 1、 3位にオクタン酸を有する TGが 7 8. 8 %含まれていた。 実施例 6
グリセリン 0. 1 84 g、 水 0. 1 84 g、 N o v o z ym43 5 0. 2 3 9 gを混合し 3 0分間攪拌後、 E PA 1. 8 1 5 gを加え、 6 0°C、 3〜 5 mmH gの減圧下で一夜攪拌した。 酵素を濾別し、 反応混 合物をシリカゲルカラムで精製した結果、 トリ E PA— TG 1. 74 g (純度 9 9 %、 収率 9 2 %) を得た。
得られたトリ E P A— TG 0. 0 94 g、 エタノール 0. 2 8 3 g、 No v o z ym4 3 5 0. 0 3 8 gを混合し 3 5 °Cで 4時間攪拌した c 酵素を濾別し、 グリセリ ド画分の脂質組成をィアトロスキャンで分析し たところ、 MG 9 8. 5 %、 ジグリセライ ド 5. 3 5%、 TG 0. 42 %であった。 薄層クロマトグラフィーにより MGは 1 0 0%2— MGで あることを確認した。 実施例 7
実施例 6と同様に操作して得られた反応混合物から酵素を濾別後残存 するエタノールを減圧下留去したもの全量に、 デカン酸ェチル 0. 40 0 g、 水 0. 0 1 0 g、 L i p o z ym e I M 0. 0 50 gを加え、 窒素気流下 3 5°Cで 3 0分間攪拌した。 次いで真空ポンプで反応容器を 3〜 5 mmH gに減圧し、 3 5°Cで 3. 5時間攪拌を継続した。 反応後 得られたグリセリ ド画分の組成をガスクロマトグラフィ一および銀ィォ ンカラム高速液体クロマトグラフィ一により分析した結果、 2位に E P A, 1、 3位にデカン酸を有する TGが 7 2. 7 %含まれていた。 実施例 8
実施例 6と同様に操作して得られた反応混合物から分画して得られた 2— E PA— MG 0. 03 7 gに、 デカン酸 0. 34 5 g、 水 0. 0 1 0 g、 L i p o z ym e I M 0. 0 5 0 gを加え、 窒素気流下 3 5 °C で 3 0分間攪拌した。 次いで真空ポンプで反応容器を 3〜5mmH gに 減圧し、 3 5°Cで 3. 5時間攪拌を継続した。 反応後得られたダリセリ ド画分の組成をガスクロマトグラフィーおよび銀イオンカラム高速液体 クロマトグラフィーにより分析した結果、 2位に E PA, 1、 3位にデ カン酸を有する TGが 70. 6 %含まれていた。
産業上の利用可能性
目的の構造の TG、 特に s n- 2位に PUF Aを有する TGを非常に高 純度で高効率で製造する T Gの製造方法を提供することができる。 また、 目的の構造の T G製造のための中間体として特に有用な 2— M Gを製造する方法を提供することができる。

Claims

請 求 の 範 囲
1. 原料トリグリセライ ドを第一の 1 , 3リパーゼでアルコリシスし て 2—モノグリセライ ドを製造するこ.とを特徴とするグリセライ ドの製 造方法。
2. 原料トリグリセライ ドを第一の 1， 3リパーゼでアルコリシスし て得られる 2—モノグリセライ ドを経由し第二の 1 , 3—リパーゼで 1， 3位に脂肪酸残基を導入することで 2位に原料トリグリセライ ド由来の 脂肪酸残基を有し、 1、 3位に新たに導入した同一の脂肪酸残基を有す る構造のトリグリセライ ドを得ることを特徴とするグリセライ ドの製造 方法。
3. 2位の脂肪酸残基が DHA、 E PAまたは ARA残基である請求 項 2のグリセライ ドの製造方法。
4. 1， 3位に導入される脂肪酸残基が炭素数 8、 1 0または 1 2の 中鎖飽和脂肪酸残基である請求項 2または 3のグリセライ ドの製造方法 c
5. 原料トリグリセライ ドが高度不飽和脂肪酸を含有する油脂である 請求項 1ないし 4いずれかのグリセライ ドの製造方法。
6. 上記の油脂が DHA濃縮油脂、 E P A濃縮油脂または ARA濃縮 油脂である請求項 5のグリセライ ドの製造方法。
7. 上記の油脂が魚油である請求項 5または 6のグリセライ ドの製造 方法。
8. 原料トリダリセライ ドがトリ DHA—トリグリセライ ド、 トリ E PA—トリグリセライ ド、 またはトリ ARA—トリグリセライ ドである 請求項 1または 2のグリセライ ドの製造方法。
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