WO2002002569A1 - Substituierte thienopyrimidin derivate und ihre verwendung zur prophylaxe und therapie der zerebralen ischämie - Google Patents

Substituierte thienopyrimidin derivate und ihre verwendung zur prophylaxe und therapie der zerebralen ischämie Download PDF

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WO2002002569A1
WO2002002569A1 PCT/EP2001/007573 EP0107573W WO0202569A1 WO 2002002569 A1 WO2002002569 A1 WO 2002002569A1 EP 0107573 W EP0107573 W EP 0107573W WO 0202569 A1 WO0202569 A1 WO 0202569A1
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Gerd Steiner
Kurt Schellhaas
Laszlo Szabo
Berthold Behl
Francisco Javier Garcia-Ladona
Liliane Unger
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Abbott Gmbh & Co. Kg
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D495/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D495/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D495/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D495/14—Ortho-condensed systems

Definitions

  • the invention relates to pyrimidine derivatives for the prophylaxis and therapy of cerebral ischemia.
  • A represents NH or an oxygen atom
  • C represents hydrogen, methyl or hydroxy
  • EC NR 3 R4 means or
  • X represents a nitrogen atom
  • Y is CH 2 , CH 2 -CH 2 , CH 2 -CH 2 -CH 2 or CH 2 -CH,
  • Z represents a nitrogen atom, carbon atom or CH, where the bond between Y and Z can also be a double bond,
  • R 1 is a hydrogen atom, a C 1 -C 4 alkyl group, an acetyl or benzoyl group, a phenylalkyl C 1 -C 4 radical or phenyl alkoxy C 2 -C 5 radical, the aromatic optionally being replaced by halogen, C ⁇ - C 4 alkyl, trifluoromethyl, hydroxy, C 4 -C 4 alkoxy, amino, cyano or nitro groups is substituted, a naphthylalkyl C 3 -C 4 radical, a phenylalkanone CC 4 radical or a phenyl - or pyridylcarbamoylalkyl-C 2 radical, where the phenyl or pyridyl group can be substituted by halogen, a C 1 -C 3 -alkyl group, a methoxy group and by a nitro or amino group,
  • R 2 is optionally halogen, C 1 -C 4 alkyl, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, hydroxy, C 4 -C 4 alkoxy, amino, monomethylamino, diethylamino, cyano or nitro groups mono, di or trisubstituted phenyl, pyridyl, pyrimidinyl or pyrazinyl group, optionally with a benzene nucleus, optionally by halogen atoms, -CC 4 alkyl, hydroxy, trifluoromethyl, C ⁇ -C 4 alkoxy, amino, cyano - Or nitro groups can be mono- or disubstituted and optionally contain 1 nitrogen atom, or can be fused with a 5- or 6-membered ring, which can contain 1 to 2 oxygen atoms, or by a phenyl -CC alkyl -respectively. alkoxy group may be substituted, where the phenyl radical may be substituted by
  • R 3 and R 4 independently of one another represent a hydrogen atom or a C ⁇ -C 4 alkyl group.
  • these compounds are suitable for the treatment of cerebral ischemia, in particular stroke.
  • 5-HT ⁇ A agonism plays a special role here, as can be seen from the works of SMITHKLINE BEECHAM (EP 345 948), BAYER / TROPON (EP 749 970; De Vry et al., Drugs of the Future 1997, 22 (4) , Pp. 341-349) and SUNTORY (WO 96/24594, WO 99/03847) can be seen. It has now been found that the 3-substituted 5, 6, 7, 8-tetrahydropyrido- [4 ', 3': 4,5] thieno [2,3-d] pyrimidine contained in the general formula (1) -4 (3H) -one derivatives of the formula I.
  • R 1 represents a hydrogen atom or a C 1 -C 4 -alkyl group
  • One use according to the invention also relates to neuroprotection.
  • R 1 has the meaning given above or represents an acetyl group
  • R 3 represents a C1-C3-alkyl-carboxylic acid ester group
  • R 4 is C ⁇ -C 3 -alkyl, with ethanolamine of the formula IV
  • a halogenating agent such as, for example, thionyl chloride or hydrobromic acid
  • organic solvent such as a halogenated hydrocarbon or without a solvent
  • the acetyl group for R 1 can easily be split off by heating with aqueous hydrochloric acid.
  • the compounds of the formula I according to the invention can either be recrystallized by recrystallization from the customary organic solvents, preferably from a lower alcohol, such as ethanol, or purified by column chromatography.
  • the free 3-substituted 5, 6, 7, 8-tetrahydropyrido [4 ', 3': 4, 5] thieno [2,3-d] pyrimidine-4 (3H) -one derivatives of the formula I can be found in customarily in the acid addition salts of a solution with the stoichiometric amount of the corresponding acid.
  • Pharmaceutically acceptable acids are, for example, hydrochloric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, methanesulfonic acid, amidosulfonic acid, maleic acid, fumaric acid, oxalic acid, tartaric acid or citric acid.
  • the compounds of the present invention have a surprisingly high affinity for the 5-HT ⁇ A receptor, as shown by binding studies with cloned human 5-HT ⁇ A receptors.
  • 5-HT ⁇ A receptor expressing HEK293 cells are in RPMI / Glutamax medium (RPMI 1640, 25 mM Hepes, 2 mM Glutamax, 10% FCS, 2 mM Glutamine, penicillin / streptomycin (100 IU / ml each), Geneticin G-418 sulfates 400 mg / 1, NaHC0 3 1.2 g / 1) in culture bottles (TripleFlasks T - 175)
  • the medium is removed and the bottles are filled with 15 ml of sterile PBS (phosphate buffered saline).
  • the cells are incubated for 10 minutes (incubator, 37 ° C) with a trypsin solution (0.05% trypsin, 0.0004% EDTA, 0.02% EGTA, 2.682 mM KCL, 1.47 mM KH 2 P0 , 6.46 mM NaHP0, 136.89 mM NaCl).
  • trypsin solution 0.05% trypsin, 0.0004% EDTA, 0.02% EGTA, 2.682 mM KCL, 1.47 mM KH 2 P0 , 6.46 mM NaHP0, 136.89 mM NaCl.
  • the detachment of the cells is promoted by tapping the bottom of the bottle.
  • the cells After transferring them into 50 ml tubes (Greiner), the cells are centrifuged at 250 xg at room temperature. The supernatant is discarded and the cells are resuspended in 10 ml of medium. The cells are redistributed to culture bottles and cultivated for a further 5 to 6 days until the membranes are prepared.
  • the supernatants from the cells are removed and the culture bottles are filled with PBS.
  • the cells are then incubated for 10 minutes with a trypsin solution (for composition, see above).
  • the cells are detached by tapping on the. Bottled bottle promoted.
  • the cell suspension is removed and the remaining cells are also taken up in PBS by washing the culture bottles twice with PBS.
  • the collected cell suspension is distributed into 150 ml Falcon tubes and centrifuged for 10 minutes at 250 xg at 4 ° C.
  • the supernatants are discarded and the cells in the pellet are resuspended in PBS. 20 ⁇ l of the cell suspension are removed and the cell density is determined.
  • the cells are centrifuged again at 250 xg (4 ° C.) for 10 minutes, the supernatant is discarded and the cells in the pellet in 50 mM Tris-HCl pH 7.4 (1 ml / 10 8 cells) using an Ultra-Turrax (30 sec) homogenized. The homogenate is distributed into cryotubes (1 ml / Kry tube) and stored in liquid nitrogen until use in the binding assay.
  • the frozen membranes are thawed at 37 ° C, centrifuged at 48000 * g (20 minutes), and resuspended in binding buffer (50 mM Tris-HCl pH 7.4, 5 mM CaCl 2 ).
  • binding buffer 50 mM Tris-HCl pH 7.4, 5 mM CaCl 2 .
  • the non-specific binding is determined in the presence of 10 -5 M 5-carboxamidotryptamine. After incubation at 22 ° C.
  • the bound and free ligand is separated from one another by filtration through CF / B filters and subsequent washing with 5 to 9 ml of ice-cold binding buffer.
  • the GF / B filters are treated with 0.3% polyethyleneimine for at least 2 hours before use. After filtration the filters are mixed with 3 to 4 ml Packard Ultima Gold XR and the radioactivity is determined by liquid scintillation counting in the Packard Tricarb.
  • V erdrfitungs curves are by nonlinear regression using a modified version of the "igand" program of Munson and Rodbard (Anal. Biochem., 107: 220 (1980)) analyzed.
  • the value for the theoretical non-specific binding is estimated as the theoretical radioligand binding with an infinitisimally high ligand concentration.
  • the measured values are used for the non-specific binding as data points of the V ⁇ erdrfitungskurve treated, the measurement points correspond to concentration of ligand at a high infinitisimal.
  • an IC 50 value is estimated using the Hill equation and the Ki value according to the equation by Cheng and Prusoff ( Biochem. Pharmacol. 22, 3099 (1973) ) .
  • the reaction mixture was concentrated on a rotary evaporator, the residue was taken up in dichloromethane and washed with saturated aqueous sodium chloride solution and dried over sodium sulfate. After the solvent had been distilled off, a crude product was obtained which was purified by medium-pressure liquid chromatography (silica gel; MeOH in CH 2 Cl 2 0 to 100%). The main fraction obtained was 1.63 g of the slightly contaminated product, which was dissolved in dichloromethane and converted into the hydrochloride by adding 1M ethereal HC1. The solid was filtered off, dichloromethane was added and the mixture was washed with 2 M sodium hydroxide solution. The organic phase was dried over sodium sulfate and concentrated.

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Abstract

3-substituierte 5,6,7,8-Tetrahydropyrido [4',3' :4,5]-thieno [2,3-d]pyrimidin-4(3H)-on-Derivate der Formel (I), worin R<1> ein Wasserstoffatom oder eine C1-C4-Alkylgruppe darstellt sowie deren physiologisch verträglichen Salze.

Description

SUBSTITUIERTE THIENOPYRIMIDIN DERIVATE
UND IHRE VERWENDUNG ZUR PROPHYLAXE ' UND
THERAPIE DER ZEREBRALEN ISCHÄMIE
Beschreibung
Die Erfindung betrifft Pyrimidinderivate zur Prophylaxe und Therapie der zerebralen Ischämie.
In DE 19900545.1 werden 3-substituierte Pyrimidin-Derivate der Formel 1 beschrieben
Figure imgf000002_0001
worin
A NH oder ein Sauerstoffatom darstellt,
B Wasserstoff oder Methyl bedeutet,
C Wasserstoff, Methyl oder Hydroxy darstellt,
D Methyl bedeutet,
E C NR3R4 bedeutet oder
II
0
D mit E zusammen für -CH2-CH2-NR1-CH2-, -CH2-NR1-CH2-, -CH2-NR1-CH2-CH2- stehen,
X ein Stickstoffatom bedeutet,
Y CH2, CH2-CH2, CH2-CH2-CH2 oder CH2-CH ist,
Z ein Stickstoffatom, Kohlenstoffatom oder CH darstellt, wobei die Bindung zwischen Y und Z auch eine Doppelbindung sein kann,
n die Zahl 2, 3 oder 4 bedeutet, R1 ein Wasserstoffatom, eine Cι-C4-Alkylgruppe, eine Acetyl- oder Benzoylgruppe, ein Phenylalkyl-Cι-C4-Rest oder Phenyl- alkoxy-C2-C5-Rest , wobei der Aromat gegebenenfalls durch Halogen, Cι-C4-Alkyl-, Trifluormethyl-, Hydroxy-, Cι-C4-Alkoxy-, Amino-, Cyano- oder Nitrogruppen substituiert ist, ein Naphthylalkyl-Cι-C3~Rest, ein Phenylalkanon- C-C4~Rest oder ein Phenyl- bzw. Pyridylcarbamoylalkyl-C2-Rest bedeutet, wobei die Phenyl- bzw. Pyridylgruppe durch Halogen, eine Cι-C3-Alkylgruppe, eine Methoxygruppe sowie durch eine Nitro- oder Aminogruppe substituiert sein kann,
R2 eine gegebenenfalls durch Halogenatome, Cι-C4~Alkyl, Trifluormethyl-, Trifluormethoxy- , Hydroxy-, Cχ-C4-Alkoxy- , Amino-, Monomethylamino-, Di ethylamino- , Cyano- oder Nitrogruppen mono, di- oder trisubstituierte Phenyl-, Pyridyl-, Pyrimidinyl- oder Pyrazinyl-Gruppe darstellt, die gegebenenfalls mit einem Benzolkern, der gegebenenfalls durch Halogenatome, Cι-C4-Alkyl, Hydroxy-, Trifluormethyl, Cχ-C4-Alkoxy- , Amino-, Cyano- oder Nitrogruppen mono- oder disubstituiert sein kann und gegebenenfalls 1 Stickstoffatom enthalten, kann, oder mit einem 5- oder 6-gliedrigen Ring, der 1 bis 2 Sauerstoffatome enthalten kann, anelliert sein kann, oder durch eine Phenyl-Cι-C -alkyl-bzw. -alkoxy-Gruppe substituiert sein kann, wobei der Phenylrest durch Halogen, eine Methyl-, Trifluormethyl- oder Methoxygruppe substituiert sein kann,
R3 und R4 unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom oder eine Cχ-C4-Alkylgruppe bedeuten.
Diese Verbindungen eignen sich aufgrund ihrer 5-HTIA Affinität für die Behandlung von zerebraler Ischämie, insbesondere von Schlaganfall.
Hierbei spielt der 5-HTιA Agonismus eine besondere Rolle, wie man aus den Arbeiten von SMITHKLINE BEECHAM (EP 345 948), BAYER/ TROPON (EP 749 970; De Vry et al . , Drugs of the Future 1997, 22(4), S. 341-349) und SUNTORY (WO 96/24594, WO 99/03847) ersehen kann. Es wurde nun gefunden, daß sich die in der allgemeinen Formel (1) mit enthaltenen 3-substituierten 5, 6, 7, 8-Tetrahydropyrido- [4' ,3 ' :4,5]thieno[2,3-d]pyrimidin-4 (3H) -on-Derivate der Formel I
Figure imgf000004_0001
worin
R1 ein Wasserstoffatom oder eine Cι~C4-Alkylgruppe darstellt,
sowie deren physiologisch verträgliche Salze,
zur Herstellung von Medikamenten zur Prophylaxe und Therapie von Neurodegeneration, Hirntrauma und zerebraler Ischämie, insbesondere Schlaganfall, bzw. den durch diese Krankheiten hervorgerufenen Folgeerkrankungen, ganz besonders eignen.
Eine erfindungsgemäße Verwendung betrifft auch die Neuro- protektion.
Diese Verbindungen der Formel I lassen sich herstellen, indem man eine Verbindung der Formel II
Figure imgf000004_0002
in der R1 die oben angegebene Bedeutung hat oder eine Acetylgruppe darstellt, R3 eine C1-C3 -Alkyl-carbonsäureestergruppierung darstellt und R4 Cχ-C3-Alkyl bedeutet, mit Ethanolamin der Formel IV
/-\^0H (IV)
H2N^ κ '
i. einem inerten Lösungsmittel, vorzugsweise Alkoholen wie z.B. Ethanol, r>ei Temperaturen zwischen 60 und 120°C zum Cyclisierungs- produkt V (D = OH) um
Figure imgf000004_0003
das anschließend mit einem Halogenierungsmittel, wie z.B. Thionylchlorid oder Bromwasserstoffsäure, in einem organischen Lösungsmittel wie einem Halogenkohlenwasserstoff oder ohne Lösungsmittel bei Temperaturen zwischen Raumtemperatur und 100°C in das entsprechende Halogenderivat V (D = Cl, Br) überführt wird. Zuletzt setzt man das Halogenderivat der Formel V (D = Cl, Br) mit 8- (1-Piperazinyl) -chinolin der Formel VI
Figure imgf000005_0001
zum erfindungsgemäßen Endprodukt der Formel I um. Diese Umsetzung verläuft am besten in einem inerten organischen Lösungsmittel , vorzugsweise Toluol oder Xylol, in Gegenwart einer Base, wie z . B . Kaliumcarbonat oder Kaliumhydroxyd, bei Temperaturen zwischen 60 und 150°C .
Di ■ e Acetylgruppe für R l kann lei ■ cht durch Erhitzen mit wäßriger Salzsäure abgespalten werden.
Die Verbindungen der Formeln II und V sind auch in der DE 19900545.1 beschrieben.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel I können entweder durch Umkristallisation aus den üblichen organischen Lösungsmitteln, bevorzugt aus einem niederen Alkohol, wie Ethanol, umkristallisiert oder durch Säulenchromatographie gereinigt werden.
Die freien 3-substituierten 5, 6, 7, 8-Tetrahydropyrido [4' ,3 ' :4, 5] - thieno[2,3-d] -pyrimidin-4 (3H) -on-Derivate der Formel I können in üblicher Weise in die Säureadditionssalze einer Lösung mit der stöchiometrischen Menge der entsprechenden Säure. Pharmazeutisch verträgliche Säuren sind beispielsweise Salzsäure, Phosphorsäure, Schwefelsäure, Methansulfonsäure, Amidosulfonsäure, Maleinsäure, Fumarsäure, Oxalsäure, Weinsäure oder Zitronensäure.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung besitzen eine überraschend hohe Affinität zum 5-HTχA-Rezeptor, wie Bindungsstudien mit klonierten humanen 5-HTχA-Rezeptoren zeigten.
Die folgende Testanordnung benutzte man zur Bestimmung der Rezeptorbindungs-Affinität :
5-HTιA-Bindungsassay mit Membranen von 5-HTiA-Rezeptor exprimierenden HEK293-Zellen
Kultur von 5-HTχA-Rezeptor exprimierenden HEK293-Zellen 5-HTιA exprimierende HEK293-Zellen werden in RPMI/Glutamax-Medium (RPMI 1640, 25 mM Hepes, 2 mM Glutamax, 10 % FCS, 2 mM Glutamin, Penicillin/Streptomycin (100 IU/ml each) , Geneticin G-418-Sulfate 400 mg/1, NaHC03 1,2 g/1) in Kulturflaschen (TripleFlasks T - 175)
in einer 5 % C0 Atmosphäre bei 37°C in kultiviert. Nach Erreichen der Konfluenz wird das Medium entnommen und die Flaschen mit 15 ml sterilen PBS (phosphate buffered saline) gefüllt. Die Zellen werden durch 10-minütige Inkubation (Brutschrank, 37°C) mit einer Trypsin-Lösung (0,05 % Trypsin, 0,0004 % EDTA, 0,02 % EGTA, 2,682 mM KCL, 1,47 mM KH2P0 , 6,46 mM NaHP0 , 136,89 mM NaCl) gelöst. Das Ablösen der Zellen wird durch Klopfen auf den Flaschenboden gefördert. Nach Überführen in 50-ml-Röhrchen (Greiner) werden die Zellen bei 250 x g bei Raumtemperatur zentrifugiert . Der Überstand wird verworfen und die Zellen in 10 ml Medium resuspendiert. Die Zellen werden erneut auf Kulturflaschen verteilt und weitere 5 bis 6 Tage bis zur Präparation der Membranen kultiviert .
Präparation der Membranen von 5-HTιA-Rezeptor-exprimierenden HEK293-Zellen
Die Überstände der Zellen werden abgenommen und die Kulturflaschen mit PBS gefüllt. Die Zellen werden daraufhin 10 Minuten mit einer Trypsin-Lösung (zur Zusammensetzung siehe oben) inkubiert . Das Ablösen der Zellen wird durch Klopfen auf den . Flaschenboden gefördert. Die Zellsuspension wird entnommen und die verbleibenden Zellen durch 2-maliges Waschen der Kulturflaschen mit PBS ebenfalls in PBS aufgenommen. Die gesammelte Zellsuspension wird auf 150-ml-Falcon-Röhrchen verteilt und 10 Minuten bei 250 x g bei 4°C zentrifugiert. Die Überstände werden verworfen und die Zellen im Pellet in PBS resuspendiert. 20 μl der Zeil-Suspension werden entnommen und die Zelldichte bestimmt. Die Zellen werden erneut 10 Minuten bei 250 x g (4°C) zentrifugiert, der Überstand verworfen und die Zellen im Pellet in 50 mM Tris-HCl pH 7,4 (1 ml / 108 Zellen) mit Hilfe eines Ultra-Turrax (30 sec) homogenisiert. Das Homogenat wird auf Kryo-Röhrchen verteilt (1 ml / Kry-Röhrchen) und bis zur Verwendung im Bindungsassay in flüssigen Stickstoff gelagert.
5-HTiA-Bindungsassay
Die eingefrorenen Membranen werden bei 37°C aufgetaut, bei 48000 * g (20 Minuten) zentrifugiert, und in Bindungspuffer (50 mM Tris- HCl pH 7,4, 5 mM CaCl2) resuspendiert. Ein Inkubationsansatz enthält Membranmaterial von 50 mg/Probe, 0,15 pmol (= 0,15 nM) 3H-8-OH-DPAT sowie die zu testenden Substanzen in insgesamt 1 ml Bindungspuffer. Die unspezifische Bindung wird in Gegenwart von 10-5 M 5-Carboxamidotryptamine bestimmt. Nach erfolgter 90-minütiger Inkubation bei 22°C wird gebundener und freier Ligand durch Filtration über CF/B-Filter und anschließendem Waschen mit 5 bis 9 ml eiskaltem Bindungspuffer voneinander getrennt. Die GF/B-Filter werden vor Verwendung mindestens 2 Stunden mit 0,3 % Polyethylenimin behandelt. Nach erfolgter Filtration werden die Filter mit 3 bis 4 ml Packard Ultima Gold XR versetzt und die Radioaktivität durch Flüssigkeits-Scintillationszählung im Packard Tricarb bestimmt.
Auswertung der Daten des 5-HTlA-Bindungsassays Die Verdrängungs-Kurven werden durch nichtlineare Regression mit Hilfe einer modifizierten Version des " igand"-Programmes von Munson & Rodbard (Anal. Biochem. , 107, 220 (1980)) analysiert. Der Wert für die theoretische unspezifische Bindung wird als theoretische Radioligand-Bindung bei infinitisimal hohen Ligandenkonzentration geschätzt. Dabei werden die gemessenen Werte für die unspezifische Bindung als Daten¬ punkte der Verdrängungskurve behandelt, die Meßpunkte bei einer infinitisimal hohen Liganden-Konzentration entsprechen. Bei Testung von weniger als 4 Konzentrationen einer Substanz oder bei spezifischer Verdrängung des Radioliganden < 25 % (bei allen getesteten Konzentrationen) wird ein IC50-Wert unter Verwendung der Hill-Gleichung geschätzt und der Ki-Wert nach der Gleichung von Cheng und Prusoff (Biochem. Pharmacol . 22, 3099 (1973)) berechnet .
Die folgenden Resultate (Ki-Werte) werden erhalten:
Figure imgf000008_0001
Die folgenden Beispiele dienen zur Erläuterung der Erfindung:
A Herstellung der Ausgangsmaterialien der Formel II, V und VI
Die Ausgangsmaterialien der Formel II und V sind in der DE 19636769.7 beschrieben.
a) tert-Butyl 4- (8-chinolinyl) -1-piperazin-carboxylat
Eine Lösung von 9,0 g 8-Chlorchinolin (55,0 ol) , 10,2 g tert-Butyl-1-piperazin-carboxylat (55,0 mmol), 0,66 g 2- (Di- ( ert-butyl) -phosphino) -1, 1 ' -biphenyl (2,2 mmol) und 8,23 g Natrium-tert-butoxid (85,6 mmol) in 300 ml wasserfreiem Toluol wurde mit 0,25 g Palladium(II) -acetat (1,1 mmol) versetzt und 10 h unter Stickstoff zum Rück- fluss erhitzt. Das Reaktionsgemisch wurde abgekühlt und vom Lösemittel befreit. Der erhaltene Rückstand wurde in Essigester aufgenommen und mit gesättigter wässriger Natriumchloridlösung extrahiert und über Natriumsulfat getrocknet. Nach dem Entfernen des Lösemittels erhielt man 17,6 g eines Rohproduktes , das durch Flash-Säulenchromatographie (Kieselgel; Heptan/Essigester, 3/1) gereinigt wurde . Als Hauptfraktion erhielt man 13 , 3 g (77 %) der Titelverbindung: iH-NMR (CDC13, 270 MHz) d = 1.5 (s, 9 H), 3.35 (t, 4 H) , 3.8 (t, 4 H) , 7.17 ( , 1 H) , 7.4 (m, 1 H) , 7.45 (m, 2 H) , 8.15 (dd, 1H) , 8.9 (m, 1H) .
b) 8-(l-Piperazinyl) -chinolin
Eine Mischung aus 13,28 g tert-Butyl-4-(8-chinolinyl) - 1-piperazin-carboxylat (42,38 mmol), 13 , 0 g Trifluor- essigsäure (169,5 mmol) und 9,2 ml Anisol (84,8 mmol) wurde 3 h unter Rühren auf 80°C erhitzt. Anschließend wurden die flüchtigen Bestandteile unter Vakuum abdestilliert, der erhaltene Rückstand in Dichlormethan aufgenommen, mit gesättigter wässriger Natriumhydrogen- carbonatlösung gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Nach dem Abziehen des Lösemittels erhielt man 7,16 g der leicht verunreinigten Titelverbindung, die ungereinigt weiter umgesetzt wurde: ^-NMR (CDCI3, 400 MHz) d = 2.0 (br, 1H) , 3.25 (m, 4 H) , 3.4 (m, 4 H) , 7.15 (m, 1 H) , 7.4 (m, 1 H) , 7.45 (m, 2 H) , 8.1 (dd, 1 H) , 8.9 (m, 1H) .
7-Acetyl-3- [2- (4- (8-chinolinyl) -1-piperazinyl) -ethyl] -5, 6, 7, 8- tetrahydropyrido [4 ' , 3 ' : 4 , 5] thieno [2 , 3 - d] pyrimidin-4 (3H) -on
Ein Gemisch von 3,1 g 3- (2-Chlorethyl) -7-acetyl~5,6, 7,8- tetrahydropyrido [4' ,3' :4,5]thieno [2,3-d]pyrimidin-4(3iϊ)-on (10,0 mmol), 2,2 g 8- (1-Piperazinyl) -chinolin (10,0 mmol) und 1,4 g fein pulverisiertem Kaliumcarbonat (10,0 mmol) wurde mit 50 ml Xylol versetzt und 18 h unter Rühren am Rückfluß gekocht.Nach dem Abkühlen engte man das Reaktionsgemisch am Rotationsverdampfer ganz ein und verteilte den Rückstand zwischen Methylenchlorid und Wasser bei pH = 10. Nach dem Nachextrahieren der wäßrigen Phase mit Methylenchlorid engte man die vereinigten organischen Phasen nach dem Trocknen ein. Man isolierte 3.8 g (78%) Produkt, das für die weitere Umsetzung genügend rein ist. Herstellung der Endprodukte
Beispiel 1
7-Methyl-3- [2- (4- (8-chinolinyl) -1-piperazinyl) -ethyl] -
5,6,7, 8-tetrahydropyrido [4 ' , 3 ' : 4, 5] thieno [2 , 3-d]pyrimidin-
4(3H)-on
Ein Gemisch von 2,66 g 3- (2-Chlorethyl) -7-methyl-5,6,7,8- tetrahydropyrido[4 ' ,3' :4,5]thieno [2,3-d]pyrimidin-4(3Jϊ)-on (9,38 mmol), 1,0 g 8- (1-Piperazinyl) -chinolin (4,69 mmol), 0,135 g Lithiumhydroxid (5,63 mmol) und 0,35 g Natriumiodid (2,35 mmol) wurde mit 25 ml Butanol versetzt und 8 h unter Rühren auf 80°C erhitzt. Das Reaktionsgemisch wurde am Rotationsverdampfer eingeengt, der Rückstand in Dichlormethan aufgenommen und mit gesättigter wässriger Natriumchloridlösung gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Nach dem Abdestillieren des Lösemittels erhielt man ein Rohprodukt, das durch Mitteldruck-Flüssikeitschromatographie (Kieselgel; MeOH in CH2CI2 0 bis 100 %) gereinigt wurde. Man erhielt als Hauptfraktion 1,63 g des leicht verunreinigten Produktes, das in Dichlormethan gelöst und durch Zugabe von IM etherischer HC1 in das Hydrochlorid überführt wurde. Der Feststoff wurde abfiltriert, mit Dichlormethan versetzt und mit 2 M Natronlauge gewaschen. Die organische Phase wurde über Natriumsulfat getrocknet und eingeengt. Man erhielt 1,07 g (50 %) der Titelverbindung: iH-NMR (CDC13, 400 MHz) d = 2.5 (s, 3H) , 2.8 (t, 2 H) , 2.85 (t, 2 H) , 2.9 (m, 4 H) , 3.4 (br, 4 H) , 3.65 (s, 2 H), 4.15 (m, 2 H) , 7.15 (m, 1 H) , 7.4 (m, 1 H) , 7.45 (m, 2 H) , 8.0 (s, 1 H) , 8.1 (dd, 1 H) , 8.9 (m, 1 H) ; LC-MS: m/z = 461.15 [MH]+.
Beispiel .2
3- [2- (4- (8-Chinolinyl) -1-piperazinyl) -ethyl] -5,6,7,8- tetrahydropyrido [4 ' , 3 ' :4,5]thieno [2,3-d]pyrimidin-4 (3H)-on
6,5 g 7-Acetyl-3- [2- (4- (8-chinolinyl) -1-piperazinyl) -ethyl] -5,6,7, 8- tetrahydropyrido [4 ' , 3 ' :4, 5] thieno [2,3-d]pyrimidin-4 (3H) -on (13 , 3 mmol) wurden in 120 ml 15-proz . Salzsäure aufgenommen und 3 h unter Rückfluß gekocht. Man stellte das Reaktionsgemisch nach dem Abkühlen alkalisch auf pH = 9 und extrahierte zweimal mit Methylenchlorid. Nach Trocknen und Einengen der organischen Phase isolierte man 5,1 g Rohprodukt, das über Säulenchromatographie (Kieselgel, Laufmittel Methylenchlorid / Methanol 9/1 gereinigt wurde. Man erhielt 4,2 g (71%) Produkt, das in Ethanol aufgenommen und unter Erhitzen mit einer etanolischen Fumarsäurelösung in das Fumarsäuresalz mit Smp. 197-199°C übergeführt wurde.
Beispiel 3
7-Ethyl-3- [2- (4- (8-chinolinyl) -1-piperazinyl) -ethyl] -5, 6, 7 , 8- tetrahydropyrido [4 ' , 3 ' :4 , 5] thieno [2 , 3-d] -pyrimidin-4 (3H) -on x 2HC1; LC-MS : [MH] + = 475 .25

Claims

Patentansprüche
1. 3-substituierte 5, 6, 7, 8-Tetrahydropyrido [4' ,3 ' :4, 5] -thieno [2,3-d]pyrimidin-4 (3H) -on-Derivate der Formel I
Figure imgf000012_0001
worin
R1 ein Wasserstoffatom oder eine Cι-C4~Alkylgruppe darstellt
sowie deren physiologisch verträglichen Salze.
2. Verwendung von Verbindungen nach Anspruch 1 zur Herstellung von Medikamenten.
3. Verwendung nach Anspruch 2 zur Prophylaxe und Therapie von Neurodegeneration, Hirntrauma und zerebraler Ischämie, insbesondere Schlaganfall, bzw. den durch diese Krankheiten hervorgerufenen Folgeerkrankungen.
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