WO2000029436A1 - Proteine amsh et son adn complementaire - Google Patents

Proteine amsh et son adn complementaire Download PDF

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WO2000029436A1
WO2000029436A1 PCT/JP1999/006309 JP9906309W WO0029436A1 WO 2000029436 A1 WO2000029436 A1 WO 2000029436A1 JP 9906309 W JP9906309 W JP 9906309W WO 0029436 A1 WO0029436 A1 WO 0029436A1
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hamsh
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Kazuo Sugamura
Nobuyuki Tanaka
Original Assignee
Japan Science And Technology Corporation
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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4702—Regulators; Modulating activity

Definitions

  • This application relates to the human and mouse proteins hAMSH and mAMSH and the cDNAs encoding these proteins. More specifically, this application relates to a novel signaling molecule, AMSH, in human and mouse cells, and human and mouse genetics encoding these proteins, their cDNAs, and antibodies to proteins. Background art
  • Site force-in is a protein responsible for such cell-to-cell communication, and molecules such as interleukin (IL) -1-18, colony stimulating factor (CSF), interferon (IFN), and chemokines are involved.
  • IL interleukin
  • CSF colony stimulating factor
  • IFN interferon
  • chemokines chemokines
  • Cytokines bind to specific receptors on the cell membrane to generate signals in the cells, and the signaling controls the survival, proliferation, differentiation, and function of the cells. Therefore, when a series of functions of site force-in-receptor-signal transduction malfunction, immunity and hematopoietic system related to host defense are disrupted, and severe infectious disease, cancer, autoimmune disease, etc. are caused. Is done.
  • the inventors of the present application have performed the isolation of the gene for the shared r-chain J that has been shared among multiple cytokines among cytokine receptors. It has greatly contributed to the elucidation of Noh.
  • the r-chain is an essential receptor subunit for the expression of IL-2, IL-4, IL-7 and I-9, and the r-chain mutation is one in human X-linked severe combined immunodeficiency. It is evident that T cell early development is impaired through the dysfunction of the gene (Science, 262: 1874-1877, 1993; Int. Immunol., 6: 1451 -1454). , 1994; Science, 263: 1453-1454, 1994; Eu. Immunol., 25: 3001-3005, 1995).
  • STAM STAM
  • the present inventors have been elucidating some important mechanisms of the intracellular signaling pathway through the binding of the site force receptor to the cell, but the overall structure and function thereof have been elucidated. In order to elucidate this, identification of further novel molecules is indispensable. This is because the signal transduction pathway involves multiple molecules involved in a continuous and complex manner, and is thought to reach the final expression of function by constituting a so-called cascade.
  • This application was made in view of the above circumstances, and interacts with the SH3 domain of the signal molecule STAM found by the inventors of the present application and is essential for downstream signal transduction from STAM. The aim is to provide novel signaling molecules that act.
  • the purpose of this application is also to provide a gene of the novel molecule and its cDNA, an antibody against the novel molecule, and the like. Disclosure of the invention
  • This application provides a human protein hAMSH having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 as an invention for solving the above problems.
  • the present application also provides a human gene encoding the above-mentioned human protein hAMSH, a cDNA of this gene, a cDNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2, and a DNA fragment comprising the-part sequence of SEQ ID NO: 2.
  • this application provides a recombinant vector having the above cDNA or a partial sequence thereof, and an antibody against the above human protein hAMSH.
  • This application also relates to a mouse protein mAMSH having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3, a mouse gene encoding this mAMSH, a cDNA of this gene, a mAMSH cDNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 4, Provided are a DNA fragment comprising a partial sequence, a recombinant vector having the cDNA or a partial sequence thereof, and an antibody against mAMSH.
  • the cDNA of the human protein hAMSH of the present invention was obtained by the far-western method using a chimeric gene of the SH3 domain of the STAM gene and glutathione S transferase (GST), which the inventors have already identified. This is the human gene cDNA isolated by screening the library. This cDNA has the nucleotide sequence of 1910 base pairs shown in SEQ ID NO: 2, and encodes the protein hAMSH whose amino acid sequence is shown in SEQ ID NO: 1.
  • This protein, hAMSH was confirmed to be a novel molecule because a putative nuclear localization signal and a JAB1-like structure were confirmed in the molecule, but the corresponding molecule did not exist in the protein database.
  • this protein is a novel molecule involved in cell proliferation signaling by associating with the STAM downstream of the cytoplasmic receptor, hAMSH force, '.
  • AMSH-dc2 deleted from the C-terminal half of hAMSH suppresses DNA synthesis signaling after IL-2 or GM-CSF stimulation.
  • the AMSH-dc2 mutant suppresses c-myc-induced signal transduction after stimulation with GM-CSF.
  • the cDNA of the mouse protein mAMSH of the present invention comprises the hAMSH cDNA described above.
  • Mouse gene cDNA isolated by screening a mouse cDNA library as a lobe. This cDNA has a nucleotide sequence consisting of 1384 base pairs shown in SEQ ID NO: 4, and encodes the protein mAMSH whose amino acid sequence is shown in SEQ ID NO: 2.
  • the proteins hAMSH and mAMSH of the present invention can be obtained by known methods, that is, a method of isolating from human or mouse organs, cell lines, etc., or a peptide obtained by chemical synthesis based on the amino acid sequence provided by the present invention.
  • RNA is prepared by in vitro transcription from a vector having the cDNA fragment of SEQ ID NO: 2, and this is used as a type III protein for in vitro translation to perform in vitro translation.
  • RNA is prepared by in vitro transcription from a vector having the cDNA fragment of SEQ ID NO: 2, and this is used as a type III protein for in vitro translation to perform in vitro translation. Can be expressed.
  • the translation region is recombined into an appropriate expression vector by a known method, so that a large amount of the protein encoded by the cDNA can be expressed in Escherichia coli, Bacillus subtilis, yeast, animal and plant cells, and the like.
  • the protein of the present invention When the protein of the present invention is produced by expressing DNA by in vitro translation, the above cDNA or its translation region is recombined into a vector having an RNA polymerase promoter, and a heron reticulocyte lysate containing an RNA polymerase corresponding to a promoter is used.
  • the protein of the present invention can be produced in vitro by adding it to an in vitro translation system such as wheat or wheat germ extract.
  • the RNA polymerase promoter include T6, T3, and SP6.
  • vectors containing these RNA polymerase promoters include pKA1, pCDM8, pT3 / 718, ⁇ 7 / 319, pBluescript II and the like.
  • the cDNA of the present invention or a cDNA thereof may be added to an expression vector having an origin, a promoter, a ribosome binding site, a cDNA cloning site, a terminator, etc., which can be replicated in the microorganism.
  • An expression vector is created by inserting a translation region, and a host cell is transformed with the expression vector. After culturing the resulting transformant, the protein encoded by the cDNA is transformed into a microorganism. Can be mass-produced within.
  • a protein molecule containing an arbitrary region can be obtained by adding a start codon and a stop codon before and after an arbitrary translation region for expression. be able to.
  • it can be expressed as a fusion protein with another protein, and the fusion protein can be cleaved with an appropriate protease to obtain only the target protein portion.
  • the expression vector for Escherichia coli include a pUC system, pBluescript II, a pET expression system, and a pGEX expression system.
  • this cDNA or its translation region is inserted into an expression vector for eukaryotic cells having a promoter, a splicing region, a poly (A) addition site, and the like.
  • the protein of the present invention can be produced in animal cells by introducing the recombinant vector into eukaryotic cells.
  • expression vectors include pKA1, pCDM8, pSVK3, pMSG, pSV, pBK-CMV, pBK-RSV, EBV vector, pRS, and pYES2.
  • mammalian cultured cells such as monkey kidney cells C ⁇ S7, Chinese hamster ovary cells CHO, budding yeast, fission yeast, silkworm cells, African egg cells and the like are generally used. Any eukaryotic cell that can express the protein may be used.
  • known methods such as an electroporation method, a calcium phosphate method, a ribosome method, and a DAE dextran method can be used.
  • a known protein After expressing the protein of the present invention in a microorganism or eukaryotic cell, a known protein can be isolated and purified from the culture by a combination of known separation procedures. For example, treatment with denaturing agents such as urea or surfactants, sonication, enzyme digestion, salting-out / solvent precipitation, dialysis, centrifugation, ultrafiltration, gel filtration, SDS-PAGE, isoelectric focusing Ion chromatography, hydrophobic chromatography, affinity chromatography, reverse phase chromatography and the like.
  • denaturing agents such as urea or surfactants, sonication, enzyme digestion, salting-out / solvent precipitation, dialysis, centrifugation, ultrafiltration, gel filtration, SDS-PAGE, isoelectric focusing Ion chromatography, hydrophobic chromatography, affinity chromatography, reverse phase chromatography and the like.
  • the proteins hAMSH and mAMSH of the present invention include peptide fragments (5 or more amino acid residues) containing any partial amino acid sequence of the amino acid sequences represented by SEQ ID NOS: 1 and 3, respectively. These peptide fragments can be used as antigens for producing antibodies.
  • the protein of the present invention also includes a fusion protein with any other protein.
  • the gene of the present invention is a human gene encoding the above-mentioned protein.
  • an existing genomic library can be used. Rally.
  • the cDNA of the present invention is obtained by screening cDNA libraries derived from human cells or mouse cells by known colony or plaque hybridization using oligonucleotide probes synthesized based on the nucleotide sequences of SEQ ID NOs: 2 and 4, respectively. Can be obtained. In addition, an oligonucleotide that hybridizes to both ends of the cDNA fragment is synthesized, and using this as a primer, the cDNA fragment of the present invention is obtained by RT-PCR from mRNA isolated from human cells or mouse cells. Can also be prepared.
  • the cDNA of SEQ ID NO: 2 or 4 in which one or more nucleotides have been added, deleted and / or substituted by other nucleotides are also included in the cDNA of the present invention.
  • proteins having one or more amino acids added, deleted, and substituted with amino acids or other amino acids resulting from these changes are also proteins having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or 3. As long as it has activity, it is included in the protein of the present invention.
  • the DNA fragment of the present invention includes a cDNA fragment (10 bp or more) containing any partial base sequence of the base sequence represented by SEQ ID NO: 2 or 4. DNA fragments consisting of the sense strand and the antisense strand also fall into this range. These DNA fragments can be used as probes for gene diagnosis.
  • An antibody against the protein of the present invention can be obtained as a polypolyclonal antibody or a monoclonal antibody by a known method using the protein itself or a partial peptide thereof as an antigen.
  • a part of the hAMSH cDNA (383-550 of SEQ ID NO: 2, corresponding to amino acid numbers 125-180 of SEQ ID NO: 1) was amplified by PCR and inserted into a GST fusion protein expression vector.
  • This vector was transformed into host E. coli by transformation, and the transformant was stimulated with IPTG to induce the expression of the GST fusion protein.
  • Glutathione kara The purified GST fusion protein was obtained by purification. Rabbits were immunized using the GST fusion protein as an antigen to obtain antisera.
  • the present invention provides a novel signaling molecule involved in the site-in signaling pathway and a material for genetically manipulating the same. These molecules and genetically engineered materials are useful for the development of methods, drugs, etc. for diagnosis and treatment of human diseases caused by impaired function of cytokine signaling pathways such as severe infectious diseases, cancer, and autoimmune diseases. It is.

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Description

明細書 タンパク質 AMSHとその cDNA 技術分野
この出願は、 ヒ トおよびマウスのタンパク質 hAMSH および mAMSH と、 これら のタンパク質をコードする cDNA に関するものである。 さらに詳しくは、 この出願 は、 ヒ トおよびマウス細胞における新規なシグナル伝達分子 AMSH と、 これらのタ ンパク質をコードするヒ トおよびマウス遺伝、 それらの cDNA、 ならびにタンパク質 に対する抗体に関するものである。 背景技術
造血、 免疫、 神経系等の生体高次機能の発現には、 機能の異なる多種多様な細胞 が共同して作用する必要があり、 そのためには細胞間のコミュニケーションが不可 欠である。 サイ ト力インは、 このような細胞間のコミュニケーションを担うタンパ ク質であり、 インターロイキン （IL) -1〜18、 コロニー刺激因子 （CSF) 、 インター フエロン （IFN) 、 ケモカイン等の各分子が知られている。
サイ トカインが細胞膜上の特異的受容体に結合することによって細胞内にシグナ ルが発生し、 このシグナル伝達によって細胞の生存、 増殖、 分化、 機能発現等が制 御されている。 従って、 サイ ト力イン一受容体一シグナル伝達の一連の作用に機能 不全が生じた場合には生体防御に関わる免疫、 造血系が破綻し、 重症感染症、 がん、 自己免疫疾患等が惹起される。
このような理由から、 サイ ト力インとその受容体、 および細胞内シグナル伝達経 路の解明は、 細胞の増殖や分化といった基本的な現象を分子レベルで理解するため、 そしてさらには各種の疾患の原因解明、 診断、 治療法等を開発するためにも極めて 重要である。
この出願の発明者らは、 これまでにサイ トカイン受容体の中で、 複数のサイ トカ インに共有される 「共有 r鎖 J の遺伝子単離を行い、 サイ ト力イン受容体の構造と機 能の解明に大きく貢献している。 特に、 r鎖が IL-2、 IL-4、 IL-7および Iし 9の機能発 現に必須の受容体サブュニッ トであり、 ヒ ト X連鎖重症複合免疫不全症において r鎖 変異が 1レ7 の機能不全を介して T細胞初期発生障害を惹起していることなどを明ら カゝ Iこしてしゝる ( Science, 262: 1874-1877, 1993; Int. Immunol., 6: 1451 -1454, 1994; Science, 263: 1453-1454, 1994; Euに丄 Immunol., 25:3001 -3005, 1995) 。
最近、 この出願の発明者らは、 サイ ト力インによる細胞内増殖シグナル伝達に関 与する新たなシグナル分子として 「STAM」 を同定し、 この STAMが IL-2 GM-CSF 受容体の下流に存在して JAK3/2 と直接会合し、 かつ c-myc発現と DNA合成のシグ ナル伝達に重要な役割を果たしていることを見出している （Immunity, 6:449-457, 1997) 。
以上のとおり、 この出願人の発明者らによって、 サイ ト力インの受容体結合によ る細胞内シグナル伝達経路の重要な幾つかの機構が明らかにされつつあるが、 その 全体の構造と機能を解明するためには、 さらなる新規分子の同定が不可欠である。 シグナル伝達経路は、 複数の分子が連続的かつ複合的に関与し、 いわゆるカスケ一 ドを構成することによって最終的な機能発現に到達すると考えられるからである。 この出願は、 以上のとおりの事情に鑑みてなされたものであって、 この出願の発 明者らが見出したシグナル分子 STAMの SH3 ドメインと相互作用し、 STAM より下 流のシグナル伝達に必須の作用を及ぼす新規のシグナル伝達分子を提供することを 目的としている。
この出願はまた、 この新規分子の遺伝子とその cDNA、 およびこの新規分子に対す る抗体等を提供することを目的としている。 発明の開示
この出願は、 上記の課題を解決する発明として、 配列番号 1 のアミノ酸配列を有 するヒ トタンパク質 hAMSHを提供する。
また、 この出願は、 上記のヒ トタンパク質 hAMSH をコードするヒ ト遺伝子、 この 遺伝子の cDNAであって、 配列番号 2の塩基配列を含む cDNA、 並びに配列番号 2の —部配列からなる DNA断片を提供する。 さらにまた、 この出願は、 上記 cDNA またはその一部配列を保有する組換えべク ター、 および上記のヒ トタンパク質 hAMSHに対する抗体を提供する。
この出願は、 また、 配列番号 3のアミノ酸配列を有するマウスタンパク質 mAMSH、 この mAMSH をコ一ドするマウス遺伝子、 この遺伝子の cDNA であって、 配列番号 4の塩基配列を含む mAMSHcDNA、 配列番号 4の一部配列からなる DNA 断片、 こ の cDNA またはその一部配列を保有する組換えベクター、 および mAMSH に対する 抗体を提供する。 発明を実施するための最良の形態
先ず、 この発明のヒ トタンパク質 hAMSHおよびその cDNAについて、 取得の経緯 および機能について説明する。
この発明のヒ トタンパク質 hAMSHの cDNAは、発明者等が既に同定している STAM 遺伝子の SH3 ドメインとグルタチオン S トランスフェラーゼ （GST) とのキメラ遺 伝子を用いて、 ファーウェスタン法により、 ヒ ト cDNA ライブラリーをスクリー二 ングすることによって単離されたヒ ト遺伝子 cDNA である。 この cDNA は、 配列番 号 2に示した 1910塩基対からなるヌクレオチド配列を有しており、 配列番号 1 にァ ミノ酸配列を示したタンパク質 hAMSHをコードしている。
このタンパク質 hAMSHは、 分子内に推定核移行シグナルと JAB1 類似構造が確認 されたが、 タンパク質データベースには対応する分子が存在しないことから、 新規 分子であるることが確認された。
このタンパク質 hAMSH 力、'、 サイ トカイン受容体の下流において STAM と会合す ることによって、 細胞増殖シグナル伝達に係わっている新規分子であることは、 以 下によつて確認されている。
(1 ) hAMSHの C端半分の領域を欠失した AMSH-dc2が IL-2や GM-CSF刺激後の DNA 合成シグナル伝達を抑制すること。
(2) 上記 AMSH-dc2変異体が Iし 2や GM-CSF刺激後の c-myc誘導シグナル伝達を抑 制すること。
また、 この発明のマウスタンパク質 mAMSHの cDNAは、 前記 hAMSHcDNA をプ ローブとしてマウス cDNA ライブラリーをスクリーニングすることによって単離さ れたマウス遺伝子 cDNAである。 この cDNAは、 配列番号 4に示した 1384塩基対か らなるヌクレオチド配列を有しており、 配列番号 2にアミノ酸配列を示したタンパ ク質 mAMSHをコードしている。
この発明のタンパク質 hAMSH および mAMSH は、 公知の方法、 すなわちヒ トま たはマウスの臓器、 細胞株などから単離する方法、 この発明によって提供されるァ ミノ酸配列に基づき化学合成によってべプチ ドを調製する方法、 あるいはこの発明 によって提供される cDNA断片を用いて組換え DNA技術で生産する方法などによリ 取得することができる。 例えば、 組換え DNA 技術によってタンパク質 hAMSH を取 得する場合には、 配列番号 2の cDNA 断片を有するベクターからインビトロ転写に よって RNA を調製し、 これを錶型としてインビトロ翻訳を行なうことによリインビ トロで発現できる。 また翻訳領域を公知の方法により適当な発現ベクターに組換え れぱ、 大腸菌、 枯草菌、 酵母、 動植物細胞等で、 cDNA がコードしているタンパク質 を大量に発現させることができる。
この発明のタンパク質をインビトロ翻訳で DNA を発現させて生産する場合には、 前記 cDNAまたはその翻訳領域を RNAポリメラーゼプロモータ一を有するベクター に組換え、 プロモーターに対応する RNA ポリメラーゼを含むゥサギ網状赤血球溶解 物や小麦胚芽抽出物などのインビトロ翻訳系に添加すれば、 この発明のタンパク質 をインビトロで生産することができる。 RNAポリメラーゼプロモーターとしては、 T6、 T3、 SP6などが例示できる。 これらの RNAポリメラーゼプロモーターを含むベクタ —としては、 pKA1、 pCDM8、 pT3/7 18、 ρΤ7/3 19、 pBluescript IIなどが例示できる。 この発明のタンパク質を大腸菌などの微生物で生産する場合には、 微生物中で複 製可能なオリジン、 プロモーター、 リボソーム結合部位、 cDNA クローニング部位、 ターミネータ一等を有する発現ベクターに、 この発明の cDNA またはその翻訳領域 を挿入して発現べクタ一を作成し、 この発現べクタ一で宿主細胞を形質転換したの ち、 得られた形質転換体を培養すれば、 この CDNA がコードしているタンパク質を 微生物内で大量生産することができる。 この際、 任意の翻訳領域の前後に開始コ ド ンと停止コ ドンを付加して発現させれば、 任意の領域を含むタンパク質分子を得る ことができる。 あるいは、 他のタンパク質との融合蛋白質として発現させ、 この融 合蛋白質を適当なプロテアーゼで切断することによって目的タンパク質部分のみを 取得することもできる。 大腸菌用発現べクタ一としては、 pUC系、 pBluescript ll、 pET 発現システム、 pGEX発現システムなどが例示できる。
この発明のタンパク質を真核細胞で生産する場合には、 この cDNA またはその翻 訳領域を、 プロモーター、 スプライシング領域、 ポリ（A)付加部位等を有する真核細 胞用発現ベクターに挿入し、 この組換えベクターを真核細胞内に導入することによ つて、 この発明のタンパク質を動物細胞内で生産することができる。 発現べクタ一 としては、 pKA1、 pCDM8、 pSVK3、 pMSG、 pSVし、 pBK-CMV, pBK-RSV, EBVベ クタ一、 pRS、 pYES2などが例示できる。 真核細胞としては、 サル腎臟細胞 C〇S7、 チャイニーズハムスター卵巣細胞 CHO などの哺乳動物培養細胞、 出芽酵母、 分裂酵 母、 カイコ細胞、 アフリカッメガエル卵細胞などが一般に用いられるが、 この発明 のタンパク質を発現できるものであれば、 いかなる真核細胞でもよい。 発現べクタ 一を真核細胞に導入するには、 電気穿孔法、 リン酸カルシウム法、 リボソーム法、 D E A Eデキストラン法など公知の方法を用いることができる。
この発明のタンパク質を微生物や真核細胞で発現させたのち、 培養物から目的タ ンパク質を単離精製するためには、 公知の分離操作を組み合わせて行うことができ る。 例えば、 尿素などの変性剤や界面活性剤による処理、 超音波処理、 酵素消化、 塩析ゃ溶媒沈殿法、 透析、 遠心分離、 限外濾過、 ゲル濾過、 SDS-PAGE、 等電点電 気泳動、 イオン交換クロマ トグラフィー、 疎水性クロマ トグラフィー、 ァフィニテ ィークロマトグラフィー、 逆相クロマトグラフィーなどが挙げられる。
この発明のタンパク質 hAMSH および mAMSH には、 配列番号 1 および 3で各々 表されるアミノ酸配列のいかなる部分アミノ酸配列を含むぺプチド断片 （5ァミノ 酸残基以上） も含まれる。 これらのペプチド断片は抗体を作製するための抗原とし て用いることができる。 また、 この発明のタンパク質には、 他の任意のタンパク質 との融合蛋白質も含まれる。
この発明の遺伝子は、 上記タンパク質をコードするヒ トの遺伝子であって、 例え ば、 この発明の cDNA またはその一部配列をプローブとして、 既存のゲノムライブ ラリーから単離することができる。
この発明の cDNA は、 配列番号 2および 4の塩基配列に基づいて合成したオリゴ ヌクレオチドプローブを用いて、 各々ヒ ト細胞またはマウス細胞由来の cDNA ライ ブラリーを公知のコロニーあるいはプラークハイプリダイゼーションによってスク リーニングすることにより得ることができる。 また、 cDNA 断片の両末端にハイプリ ダイズするオリゴヌクレオチドを合成し、 これをプライマーとして用いて、 ヒ ト細 胞またはマウス細胞から単離した mRNAから RT-PCR法によリ、 この発明の cDNA 断片を調製することもできる。
一般に動物遺伝子は個体差による多型が頻繁に認められる。 従って配列番号 2ま たは 4において、 1 または複数個のヌク レオチドの付加、 欠失および または他の ヌクレオチドによる置換がなされている cDNAもこの発明の cDNAに含まれる。 同様に、 これらの変更によって生じる、 1 または複数個のアミノ酸の付加、 欠失 およびノまたは他のアミノ酸による置換がなされているタンパク質も、 配列番号 1 または 3で表されるアミノ酸配列を有するタンパク質の活性を有する限り、 この発 明のタンパク質に含まれる。
この発明の DNA 断片には、 配列番号 2または 4で表される塩基配列のいかなる部 分塩基配列を含む cDNA断片 （10bp 以上） も含まれる。 また、 センス鎖およびアン チセンス鎖からなる DNA 断片もこの範醻に入る。 これらの DNA 断片は遺伝子診断 用のプローブ等として用いることができる。
この発明のタンパク質に対する抗体は、 タンパク質それ自体、 またはその部分べ プチドを抗原として、 公知の方法によリポリクローナル抗体またはモノクローナル 抗体として得ることができる。 実施例
hAMSHcDNAの一部 （配列番号 2の 383-550：配列番号 1 のァミノ酸番号 125-180 に対応） を PCRにて増幅し、 GST融合タンパク質発現ベクターに挿入した。 このべ クタ一を宿主大腸菌に導入して形質転換し、この形質転換体を IPTGにて刺激し、 GST 融合タンパク質の発現を誘導した。 誘導された融合タンパク質をグルタチオンカラ ムにてァファ二ティ一精製し、 純化された GST 融合タンパク質を得た。 この GST 融合タンパク質を抗原として家兎に定法によリ免疫を行い、 抗血清を得た。 産業上の利用可能性
以上詳しく説明したとおり、 この発明によって、 サイ ト力イン系シグナル伝達経 路に関与する新規のシグナル伝達分子とその遺伝子操作材料が提供される。 これら の分子および遺伝子操作材料は、 重症感染症、 がん、 自己免疫疾患等のサイ トカイ ン系シグナル伝達経路の機能障害によるヒ ト疾患の診断や治療のための方法、 薬剤 等の開発に有用である。

Claims

請求の範囲
I . 配列番号 1のアミノ酸配列を有するヒ トタンパク質 hAMSH。
2. 請求項 1のヒ トタンパク質 hAMSHをコードするヒ ト遺伝子。
3. 請求項 2のヒ ト遺伝子の cDNA であって、 配列番号 2の塩基配列を有する hAMSHcDNA。
4. 配列番号 2の塩基配列における一部配列からなる DNA断片。
5. 請求項 3の hAMSHcDNA または請求項 4の DNA 断片を保有する組換えべク ター。
6. 請求項 1のヒ トタンパク質 hAMSHに対する抗体。
7. 配列番号 3のアミノ酸配列を有するマウスタンノ ク質 mAMSH。
8. 請求項 7のマウスタンパク質 mAMSHをコ一ドするマウス遺伝子。
9. 請求項 8のマウス遺伝子の cDNA であって、 配列番号 4の塩基配列を有する mAMSHcDNA。
10. 配列番号 4の塩基配列における一部配列からなる DNA断片。
II. 請求項 9の mAMSHcDNAまたは請求項 1 0の DNA断片を保有する組換えべ クタ一。
2. 請求項 7のマウスタンパク質 mAMSHに対する抗体。
PCT/JP1999/006309 1998-11-12 1999-11-12 Proteine amsh et son adn complementaire WO2000029436A1 (fr)

Priority Applications (5)

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