WO1999053355A1

WO1999053355A1 - Microscope generant une representation tridimensionnelle d'un objet et images generees par ce microscope

Info

Publication number: WO1999053355A1
Application number: PCT/FR1999/000854
Authority: WO
Inventors: Vincent Lauer
Original assignee: Vincent Lauer
Priority date: 1998-04-15
Filing date: 1999-04-13
Publication date: 1999-10-21
Also published as: DE69914473D1; EP1071974B1; US6525875B1; EP1071974A1

Abstract

L'invention concerne un microscope qui calcule une représentation tridimensionnelle complexe de l'objet à partir d'une série d'enregistrements de l'onde lumineuse issue de l'objet et de l'onde éclairant l'objet, l'onde éclairant l'objet variant entre chaque enregistrement. Le microscope comprend une partie optique permettant la génération de figures d'interférences entre une onde lumineuse de référence et une onde lumineuse diffractée par l'objet observé, des capteurs permettant de numériser ces figures d'interférences, des actionneurs permettant d'agir sur le système optique, et un ordinateur recevant les figures d'interférence numérisées, contrôlant les actionneurs, et doté de mémoire et de moyens de calcul lui permettant de calculer des images tridimensionnelles à partir des figures d'interférences selon un principe analogue à l'holographie. La partie optique permet l'enregistrement sur une surface de capteurs (118) de l'onde issue de l'objet (112) par mesure des figures d'interférences produites par le faisceau de référence Fr et l'onde issue de l'objet. Le miroir (109) permet de faire varier la direction du faisceau d'éclairage parallèle de l'objet. La différence de phase entre l'onde d'éclairage et l'onde de référence est contrôlée pour la série d'enregistrements. Application: microscopie en biologie, métrologie, ou lecture de mémoires optiques.

Description

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Microscope générant une représentation tridimensionnelle d'un objet et images générées par ce microscope.

1. Domaine technique:

La présente invenuon concerne un microscope générant une représentation en trois dimensions de l'objet observé, fonctionnant sur un pnncipe dénvé de la « formation d'image par inversion du champ diflracté », de la tomographie et des systèmes à ouverture synthétique

2. Technique antérieure:

2.1. Références

[Wolf] Three-dimensional structure détermination of semi-transparent objectsfrom holographie data, Emil

Wolf, Optics communications volume 1 numéro 4 p 153, octobre 1969

[Dandliker] Reconstruction ofthe three-dimensional refracttve index from scattered waves, R Dandliker, K Weiss, Optics communications volume 1 numéro 7 p 323, févπer 1970

[Fercher] Image formation by inversion of scattered field data expenments and computatwnal simulation

A F Fercher, H Bartelt, H Becker, E Wiltschko, Applied optics vol 18 no 14 p 2427, juillet 1979

[Kawata] Optical microscope tomography 1 Support constraint , S Kawata,0 Nakamura & S Minami, Journal ofthe Optical Society of Amenca A, vol 4, No 1, p 292, janvier 1987 [Noda] Three-dimensional phase-contrast imaging by a computed-tomography microscope, Tomoya Noda,

Satoshi Kawata & Shigeo Minami, Applied Optics vol 31 no 5 p 670, 10 février 1992

[Devaney] The Cohérent Optical Tomographie Microscope, A J Devaney and A Schatzberg, SPIE vol 1767 p 62,

1992

{Wedberg] Expérimental simulation ofthe quantitative imaging properties of optical diffraction tomography, Torolf A Wedberg et Jacob J Stamnes, Journal ofthe Optical Society of Amenca A vol 12 no 3 p 493, mars

1995

[Wisï yakov]' Interferometric computed-microtomogrαphy of3D phase objects, Gennady N Vishnyakov &

Gennady G Levin, SPIE proceedings vol 2984 p 64, 1997

[Ausherman] Developments in Radar Imaging, D A Ausherman, A Kozma, J L Walker, H M Jones, E C Poggio, IEEE transactions on aerospace and electronic Systems vol 20 no 4 p 363, juillet 1984

[Goodman] Synthetic Aperture Optics, Progress in Optics volume VIII, 1970, North Holland Pubhshing

Company

[Walker] Range-Doppler Imaging ofRotating Objects, Jack L Walker, IEEE transactions on aerospace and electronic Systems vol 16 no 1 p 23, janvier 1980 [Brown] Walker modelfor Radar Sensing ofRtgtd Target Fields, William M Brown, IEEE transactions on aerospace and electronic Systems vol 16 no 1 p 104, janvier 1980

[Turpm l] brevet US 5,384,573 -2-

[Turpin 2] Theory ofthe Synthetic Aperture Microscope, Terry Turpm, Leshe Gesell, Jeffrey Lapides, Craig Pnce, SPIE proceedings vol.2566 p 230, 1995

[Turpin 3]. The Synthetic Aperture Microscope, Expérimental results, P Woodford, T Turpm, M Rubin, J.Lapides, C Pnce, SPIE proceedings vol.2751 p.230, 1996 [Lauer l] brevet WO 98/13715

2.2. Description de la technique antérieure.

Un objet tridimensionnel peut être caracténsé optiquement par un certain nombre de paramètres locaux, par exemple son indice et son absorptivité en chaque point Mathématiquement, ceci peut se traduire par la donnée en chaque point d'un nombre complexe qui est fonction des paramètres locaux au point considéré Une représentation spatiale tridimensionnelle de l'objet pouna alors être expnmée sous la forme d'un tableau à trois dimensions de nombres complexes

En effectuant la transformation de Founer tndimensionnelle de cette représentation spatiale tndimensionnelle on obtient une représentation fréquentielle tndimensionnelle de l'objet

[Wolfl a montré qu'une représentation tndimensionnelle d'un objet faiblement diffractant peut être obtenue à partir de l'acquisition de l'onde diffractée par cet objet lorsqu'il est éclairé successivement par une séné d'ondes planes de direction vanable [Wolf] a également détermine la résolution maximale pouvant être ainsi obtenue, expnmée en fonction de la longueur d'onde d'éclairage Cette résolution correspond à une pénode λ maximale de — pour les composantes sinusoïdales de la représentation de l'objet, soit une penode λ d'échantillonnage au sens de Nyquist de — , ce qui est une resolution deux fois plus fine que celle des microscopes classiques [Dandliker] a amélioré le formalisme de [Wolf] et en a donné une interprétation géometnque A partir de l'onde diffracté par l'objet sous un éclairage donné, on obtient une partie de la représentation fréquentielle tridimensionnelle de l'objet Cette partie est une sphère dans un espace frequentiel tridimensionnel En combinant les sphères ainsi obtenues pour diverses ondes d'éclairage, on peut remplir l'espace des fréquences, obtenant la représentation fréquentielle tridimensionnelle de l'objet Celle-ci peut alors être inversée pour obtemr une représentation spatiale

[Fercher] a réalise un microscope constituant la première application pratique des pnncipes défims par [Wolf] et Pandliker] Dans ce microscope, l'onde diffractée par l'objet est captée sur une surface de réception, sur laquelle elle interfère avec une onde de référence n'ayant pas traversé l'objet et dont la phase peut être modifiée A partir de plusieurs figures d'interférence différant entre elles par la phase de l'onde de référence, [Fercher] obtient en chaque point de la surface de réception, l'amplitude et la phase de l'onde diffractée par l'objet

[Fercher] n'utilise pas plusieurs ondes d'éclairage successives mais plusieurs ondes d'éclairages générées simultanément au moyen d'un réseau de diffraction, ce qui limite le nombre de directions d'éclairage possibles, alors même que l'utilisation de plusieurs ondes d'éclairage successives ne présente aucune difficulté technique particulière La raison de ce choix n'est pas clairement explicitée Toutefois, il semble que cette technique soit adoptée pour obtemr des ondes d'éclairage ayant toutes la même phase en un point donné de l'image En effet -3-

l'équation (1) du document [Wolf] suppose que chaque onde d'éclairage ait une phase nulle au point origine des vecteurs position.

La méthode définie par [Wolf], pândliker] et [Fercher] est généralement appelée « formation d'image par inversion du champ diffracté ». Une autre approche classique de l'obtention d'images tridimensionnelles est constituée par la tomographie. La tomographie, utilisée par exemple en rayons X, consiste à reconstruire une image à partir d'un ensemble de projections de cette image selon différentes directions. Chaque projection dépend linéairement d'une fonction de densité à trois dimensions caractérisant l'objet, et à partir d'un nombre suffisant de projections on peut reconstituer l'objet, en inversant cette conespondance linéaire.

La tomographie a été adaptée à la microscopie optique par [Kawata]. Dans son microscope tomographique, une onde d'éclairage plane et non cohérente, de direction variable, est utilisée. Cette onde d'éclairage traverse un échantillon puis un objectif de microscope focalisé dans le plan de l'échantillon. Elle est reçue sur une surface de réception placée dans le plan ou l'objectif forme l'image de l'échantillon. Du fait que l'éclairage est non cohérent, les intensités provenant de chaque point de l'objet s'additionnent et l'image en intensité produite sur la surface de réception dépend donc linéairement de la fonction de densité à trois dimensions caractérisant l'absorptivité de l'objet. A partir d'un nombre suffisant d'images on peut reconstituer l'objet, en inversant cette conespondance linéaire. Ce microscope diffère des systèmes usuels de tomographie en ce que la correspondance linéaire entre la fonction de densité de l'objet et une image donnée n'est pas une projection, mais est caractérisée par une fonction de transfert optique tridimensionnelle.

Ce microscope est peu adapté à l'obtention d'images prenant en compte l'indice de l'échantillon. [Noda] a réalisé un microscope modifié permettant de prendre en compte cette phase. L'idée de départ du microscope de [Noda] est d'utiliser le contraste de phase pour obtenir une image dépendant de l'indice de l'échantillon et d'adapter à cette configuration le principe d'inversion de la conespondance linéaire déjà mis en oeuvre par [Kawata]. L'utilisation du microscope de [Noda] est cependant limitée à l'étude d'objets non absorbants et dont les variations d'indice sont extrêmement faibles. Le texte de [Noda] ne se réfère pas à l'holographie ni à la « formation d'image par inversion du champ diffracté », cependant son fonctionnement peut s'interpréter dans ce cadre. En effet, la technique adoptée par [Noda] revient à utiliser sur la surface de réception une onde de référence constituée par l'onde d'éclairage seule. A partir des images reçues pour un ensemble d'ondes d'éclairage de direction variable, une représentation fréquentielle tridimensionnelle est obtenue. L'onde complexe détectée sur la surface de réception est ici remplacée par une valeur imaginaire pure obtenue en multipliant par y la valeur réelle obtenue en utilisant l'onde de référence unique constituée par l'onde d'éclairage décalée en phase de — . Si l'onde de référence est suffisamment supérieure, en chaque point de la surface de réception, à l'onde diffractée, alors la quantité ainsi obtenue est la partie imaginaire de l'onde complexe réellement reçue sur la surface de réception, la référence de phase étant la phase de l'onde d'éclairage. L'objet générant sur la surface de réception une onde imaginaire pure équivalente à celle détectée par [Noda] est constitué par la superposition de l'objet réel observé et d'un objet virtuel dont la représentation spatiale complexe est obtenue à partir de celle de l'objet réel par symétrie par rapport au plan de l'objet conespondant à la surface de réception, et par inversion du signe de la partie réelle. En utilisant la partie imaginaire ainsi détectée d'une manière analogue à celle dont [Fercher] utilise l'onde complexe détectée, on -4-

genère donc en représentation fréquentielle une fonction représentant la superposition de l'objet réel et de l'objet virtuel. Lors de chaque acquisition, la représentation fréquentielle bidimensionnelle obtenue par transformation de Founer de la valeur détectée sur la surface de réception comporte une partie conespondant à l'objet réel et une partie conespondant à l'objet virtuel, qui ne se recoupent qu'au point conespondant à la fréquence d'éclairage II est donc possible de ne sélectionner que la partie conespondant à l'objet réel, de manière à obtenir une représentation de celui-ci [Noda] utilise en fait la superposition de l'objet réel avec l'objet virtuel qu'il symétnse par rapport au plan de l'objet conespondant à la surface de réception, obtenant ainsi une représentation imaginaire pure représentant la partie imaginaire de la représentation qui serait obtenue par la méthode de [Wolf] Les explications théonques données dans le document [Noda] sont très différentes de celles présentées ici et sont parfaitement valables Le pnncipe consistant à inverser un filtre par multiplication dans le domaine frequentiel, tel qu'il est appliqué par [Noda], se trouve être équivalent aux explications données ci-dessus, bien qu'étant obtenu par un raisonnement différent On peut considérer que les Fig 2 et 3 du document [Noda] illustrent la manière dont la représentation fréquentielle tndimensionnelle de l'objet est générée à partir des représentations fréquentielles bidimensionnelles [Devaney] a proposé un microscope tomographique dont le mode de fonctionnement est essentiellement inspiré de la méthode de [Wolf] Dans le microscope de [Devaney] l'onde de référence est confondue avec l'onde d'éclairage De ce fait, ce microscope ne comporte pas de moyens pour faire vaner la phase de l'onde de référence Comme dans le cas de [Noda], l'onde détectée conespond donc à celle qui serait formée par la superposition d'un objet réel et d'un objet virtuel [Devaney] résout le problème en plaçant la surface de réception hors de l'objet, de manière à ce que l'objet réel et l'objet virtuel ne se recouvrent pas Lorsque la direction de l'onde d'éclairage vane, seul un des deux objets est reconstitué Deux versions du microscope sont proposées une première version dans laquelle l'objet est fixe et la direction de l'onde d'éclairage est vanable, et une seconde version dans laquelle l'objet est en rotation autour d'un point fixe, l'onde d'éclairage étant alors de direction fixe par rapport au récepteur La première version du microscope de [Devaney] a été réalisée par [Wedberg] Une autre approche permettant d'adapter la tomographie à la réalisation d'images de phase est celle de

[Vishnyakov] [Vishnyakov] introduit une onde de référence distincte de l'onde d'éclairage et effectue une détection de l'onde reçue sur une surface de réception selon une méthode analogue a celle utilisée par [Fercher] Il génère ensuite un profil caracténstique de la différence de phase entre l'onde reçue et l'onde d'éclairage Cette différence de phase étant considérée comme la projection de l'mdice selon la direction de l'onde d'éclairage, il régénère la distribution de l'indice dans l'objet selon la méthode tomographique classiquement utilisée en rayons X Cette méthode peut être comparée à une méthode du type [Wolf], mais dans laquelle la portion de sphère acquise dans l'espace frequentiel serait assimilée à une portion de plan, ce qui est largement injustifié dans le cas d'un objectif à forte ouverture comme celui utilisé ici

La technique du radar a ouverture synthétique est une méthode d'imagene utilisée dans le domaine des ondes radar et que l'on a envisagé très tôt d'appliquer au domaine de l'optique [Ausherman] présente un histonque de cette technique L'application de la technique du radar à ouverture synthétique dans le domaine des longueurs d'onde optiques permettrait en pnncipe d'obtemr des images d'un objet observé Toutefois, pour que la technique soit réalisable, il est nécessaire de disposer en permanence des valeurs de position, dans un repère lie a -5-

l'objet, de chaque élément de l'ensemble émetteur-récepteur Ces valeurs doivent être connues a une fraction de longueur d'onde près Ceci est réalisable dans le domaine des fréquences radar, ou les longueurs d'ondes sont macroscopiques et peuvent être par exemple de quelques dizaines de centimètres Dans le domaine de l'optique, ou les longueurs d'onde sont sub-rmcrométnques, ceci est difficilement réalisable Ce problème est la raison essentielle pour laquelle le système est difficilement adaptable à l'optique, comme indiqué dans [Goodman], pages 36 à 39

[Walker] et [Brown] ont formalisé la méthode du radar a ouverture synthétique sous une forme analogue à celle déjà obtenue par [Wolf] pour les systèmes optiques Ce formalisme a été à l'ongine utilisé par [Walker] à une méthode d'imagene radar dans laquelle l'ensemble émetteur-récepteur est fixe et dans laquelle l'objet est en rotation autour d'un point fixe Ceci permet de s'affranchir du problème consistant à déterminer à chaque instant la position de l'objet

[Turpin] a récemment décnt plusieurs microscopes constituant une adaptation dans le domaine de l'optique des pnncipes du radar à ouverture synthétique

Dans le microscope mis en oeuvre dans [Turpin 3], la configuration physique employée est conforme au pnncipe utilisé dans [Walker] pour s'affranchir du problème consistant à déterminer à chaque instant la position de l'objet, c'est-à-dire que l'émetteur et le récepteur sont fixes et l'objet est en rotation autour d'un axe fixe Ce microscope est également analogue à la deuxième version du microscope de Pevaney] Du fait que l'axe de rotation, l'émetteur et le récepteur sont fixes, la position de l'ensemble émetteur-récepteur dans un repère lié a l'objet peut être connue avec la précision nécessaire Toutefois une resolution effective suppose non seulement un système mécanique permettant la connaissance du mouvement de l'objet, mais également dans la pnse en compte de ce mouvement dans la définition des algonthmes et ou un réglage approprié du système En l'abscence de précautions particulières, le point d'ongme de l'onde de référence se déplace par rapport à l'objet sur un cercle centré sur l'axe de rotation de l'objet Si ce déplacement est important, cet effet détruit l'image Si ce déplacement est faible, la résolution dans le plan de ce cercle est affectée en proportion de l'amplitude du déplacement

Pour résoudre ce problème en l'abscence d'algonthme de compensation spécifique, le point d'ongme de l'onde de référence doit être sur l'axe de rotation de l'objet Cette condition est à pnon difficile à réaliser [Turpin] ne mentionne pas ce problème et ne précise aucun moyen de réglage appropné

Ce problème peut cependant être résolu, lorsque on utilise par exemple un échantillon plan, en effectuant un réglage destiné à vérifier les conditions suivantes

(ι)- L'image de l'onde de référence sur le « image CCD anay » de la Fig 1 du document [Turpin 3] doit être ponctuelle

(u)- Lorsque l'objet effectue une rotation de 180 degrés, l'image obtenue doit être symetnsee par rapport a un axe passant par le point image de l'onde de référence La position du « image CCD anay » doit être ajustée pour vérifier (î)

La position de l'ensemble du récepteur doit être ajustée pour vérifier (n)

Cette solution est toutefois assez imparfaite, dépendant essentiellement d'une appréciation visuelle Elle ne peut raisonnablement être utilisée que pour des objets très simples -6-

Le microscope décrit dans [Turpin 3] est un cas particulier du système généralisé décrit dans [Turpin 1] et [Turpin 2]. Le système généralisé spécifie que l'onde d'éclairage et/ou la position du récepteur peuvent varier. Mais les configurations physiques proposées ne permettent pas la résolution du problème consistant à connaître, à une fraction de longueur d'onde près, la position de l'émetteur et du récepteur par rapport à l'objet. En effet, l'onde d'éclairage de direction variable est produite par des dispositif mécaniques qui ne peuvent pas être contrôlés avec une précision sub-micrométrique.

Le microscope décrit dans [Lauer 1] permet la génération de la représentation fréquentielle d'une onde issue de l'objet et la reconstitution de l'objet à partir de plusieurs de ces représentations. La méthode utilisée dans [Lauer 1] n'a pas de rapport direct avec celle décrite par [Wolf]. En effet, dans le cas ou il recombine plusieurs représentations fréquentielles pour obtenir la représentation de l'objet:

- il utilise un éclairage spatialement incohérent et non des ondes d'éclairage planes

- il combine les représentations fréquentielles des ondes reçues par sommation en intensité dans le domaine spatial

L'image obtenue par [Lauer 1] est affectée par un effet de granularité résiduelle, ne permet pas une différentiation de l'indice et de l'absorptivité, et ne permet pas d'atteindre la précision théorique indiquée par [Wolf].

3.Exposé de l'invention

3.1. Problème à résoudre par l'invention

Les systèmes dits « à formation d'image par inversion du champ diffracté », « tomographiques », ou « à ouverture synthétique » apparaissent comme équivalents les uns aux autres, du moins lorsqu'on se limite au domaine de l'optique cohérente. Deux classes de systèmes peuvent être distinguées selon le mode de génération de l'onde de référence:

- les microscopes de [Noda] et pevaney] utilisent une onde de référence confondue avec l'onde d'éclairage.

- les microscopes de [Fercher], [Vishnyakov] et [Turpin] utilisent une onde de référence distincte de l'onde d'éclairage.

Les microscopes de la première catégorie présentent des limitations en termes de taille d'image observée, de caractéristiques imposées à l'objet, ou de paramètres pouvant être visualisés. Ces limitations sont dues au fait qu'en l'abscence d'une onde de référence distincte de l'onde d'éclairage, il n'est pas possible d'acquérir dans de bonnes conditions la valeur complexe de l'onde reçue sur la surface de réception. Il est donc nécessaire de recourir à divers artifices pour éliminer les images parasites et les perturbations diverses engendrées par l'imperfection de la méthode d'acquisition.

Les microscopes du second groupe permettent de régler ce problème. En principe, les microscopes du second groupe devraient permettre la représentation de l'indice et de l'absorbtivité de l'objet en trois dimensions avec une précision d'un quart de longueur d'onde, selon la théorie élaborée par [Wolf] et [Dandliker]. De telles performances sont nettement supérieures à celles de l'ensemble des microscopes optiques existants y compris le microscope confocal, et ces microscopes devraient en toutes logique avoir donné lieu à des applications industrielles. Toutefois, aucun de ces microscopes n'a jusqu'à présent permis l'obtention d'images de qualité comparables à celles produites par exemple par le microscope de [Noda], et par conséquence ces microscopes -7-

n'ont pas dépassé le stade expérimental. La raison pour laquelle ces microscopes n'ont jamais permis l'obtention d'images de qualité élevée, malgré leurs possibilités théoriques, n'a jamais été clairement identifiée.

Une première approche du problème est contenue de manière implicite dans l'équation (1) du document [Wolf]: toutes les ondes d'éclairage doivent avoir la même phase au point origine de la représentation. Toutefois, dans un système optique, les seules grandeurs accessibles à la mesure sont les différences de phase entre une onde de référence et une onde à analyser. Le fait qu'en un point donné les ondes d'éclairage aient toutes la même phase en un point donné de l'objet, comme implicitement indiqué par l'équation (1) du document [Wolf], ne suffit donc pas à assurer le bon fonctionnement du système: il est également nécessaire que l'onde de référence vérifie des conditions appropriées, de manière à ce que les différences de phase accessibles à la mesure mènent à des résultats conects.

Une seconde approche du problème est donnée par [Goodman], pages 36 à 39, dans les termes des radars à ouverture numérique: il est nécessaire de connaître avec une précision inférieure à la longueur d'onde la position de l'émetteur et du récepteur, et ceci est inéalisable dans le domaine de l'optique.

Dans le cas ou l'onde d'éclairage a une direction variable, ces deux approches sont similaires: en effet, une indétermination sur la position de l'émetteur se traduit, entre autres effets, par un décalage de phase de l'onde d'éclairage au point origine de la représentation. On se limitera ici à ces systèmes, c'est-à-dire aux microscopes de [Fercher] , de [Vishnyakov], et aux versions du microscope de [Turpin] qui comportent une onde d'éclairage de direction variable.

Par exemple, dans les microscopes de [Turpin], l'onde d'éclairage est générée par un dispositif mécanique. Ce dispositif ne permet pas de contrôler la phase de l'onde d'éclairage. Lors de deux prises d'image tridimensionnelle successives, une onde d'éclairage donnée, caractérisée par sa direction, n'aura pas à chaque fois la même différence de phase avec l'onde de référence. Il s'ensuit que l'onde détectée sur la surface de réception n'aura pas non plus la même phase, et donc finalement que deux prises d'image tridimensionnelle successives ne mèneront pas au même résultat, ce même en l'abscence de tout bruit. Cet exemple met en relief le problème essentiel qui a jusqu'à présent limité les performances des microscopes du second groupe: la non-maîtrise de la différence de phase entre l'onde d'éclairage et l'onde de référence entraîne une non-reproductibilité des résultats obtenus, et en règle générale des résultats qui ne conespondent pas à ce que l'on attend compte tenu de l'approche théorique de [Wolf].

3.2. Résolution du problème selon l'invention

L'ensemble de la représentation fréquentielle tridimensionnelle d'un objet peut être multiplié par un nombre complexe Ae^ja . On dira alors que la représentation fréquentielle de l'objet est affectée d'un décalage de phase a et d'un coefficient multiplicatif A. Si un objet est caractérisé par sa représentation fréquentielle tridimensionnelle, sa représentation spatiale peut être obtenue par transformation de Fourier inverse de cette représentation fréquentielle. Si la représentation fréquentielle de l'objet est affectée d'un décalage de phase et d'un coefficient multiplicatif .4, sa représentation spatiale sera affectée du même décalage de phase et du même coefficient multiplicatif, ce qui conespond à une modification de la fonction donnant le nombre complexe associé à un point en fonction des paramètres locaux en ce point. -8-

II est également possible de multiplier chaque point de la représentation tridimensionnelle par un nombre complexe Ae^ja dépendant du point Deux points différents de la représentation fréquentielle tndimensionnelle peuvent alors être affectés par un décalage de phase et un coefficient multiplicatif différents En effectuant la transformation de Founer inverse d'une représentation fréquentielle dans laquelle le décalage de phase et/ou le coefficient multiplicatif dépendent du point considéré, on obtient une représentation modifiée de l'objet, dans laquelle le nombre complexe associé à un point dépend non seulement des paramètres locaux au point considéré, mais également des paramètres locaux en un ensemble d'autres points Cette représentation modifiée de l'objet est une représentation spatiale filtrée, le filtre ayant une représentation fréquentielle constituée par les nombres Ae ^ja définis en chaque point. Selon les caracténstiques de ce filtre, on obtiendra des représentations fréquentielles plus ou moins conectes

Dans les microscopes de [Turpin], l'onde d'éclairage est générée par un dispositif mécamque A chaque changement de direction de l'onde d'éclairage, il se produit un déphasage aléatoire de cette onde, et donc un décalage de phase aléatoire de la partie conespondante de la représentation fréquentielle tndimensionnelle Dans le document de [Vishnyakov], et pour les mêmes raisons, la phase de l'onde d'éclairage vane aléatoirement a chaque changement de la direction d'éclairage L'équation (2) de la page 67 du document

[Vishnyakov] devrait être remplacée par i^J(x,y) = Φ(x,y) + xs a + φ ou φ est la phase de l'onde d'éclairage au point ongine de la représentation tridimensionnelle obtenue Lorsque la direction de l'onde d'éclairage vane, la valeur de φ vane La non-détermination de la valeur conecte de φ se traduit par l'ajout d'une constante à chaque projection obtenue, cette constante vanant aléatoirement entre deux projections Ceci rend donc non-exacte l'assimilation du profil de phase obtenu à la projection de l'indice La méthode de [Vishnyakov] équivaut à peu près à la méthode de [Wolf] dans laquelle on aurait assimilé une portion de sphère de l'espace frequentiel, obtenue à partir d'une onde d'éclairage donnée, a un plan La non-détermination de φ équivaut a un décalage de phase aléatoire de l'ensemble de la partie de la représentation fréquentielle bidimensionnelle générée a partir d'une onde d'éclairage donnée Toutefois, d'autres sources d'eneurs s'ajoutent ici a cet effet, en particulier le fait qu'une reconstruction tomographique classique est utilisée

Dans le document de [Fercher], du fait de l'utilisation d'un réseau de diffraction pour générer simultanément les trois ondes d'éclairage, il n'y a pas de déphasage aléatoire des ondes d'éclairage Toutefois, une analyse détaillée du système montre que pour obtenir le même décalage de phase dans les parties de la représentation fréquentielle obtenues à partir de chaque onde d'éclairage, il est nécessaire que l'image virtuelle dans l'objet, du point de focalisation de l'onde de référence, soit confondue avec un point en lequel les ondes d'éclairage ont toutes la même phase Ceci implique un réglage très précis de la position du point d'ongme de l'onde de référence Le document de [Fercher] ne contenant pas de mention d'un tel réglage, il est vraisemblable que celui-ci n'a pas été effectué En tout état de cause, la solution retenue par [Fercher] limite fortement le nombre d'ondes d'éclairage pouvant être utilisé et l'ouverture sous laquelle l'onde issue de l'objet peut être acquise Dans les microscopes existants utilisant des ondes d'éclairage de direction vanable et une onde de référence distincte de l'onde d'éclairage, les parties de la représentation fréquentielle qui sont obtenues a partir d'ondes d'éclairage différentes, sont donc affectées par des décalages de phase différents Par conséquence, -9-

l'inversion de la représentation fréquentielle globale obtenue génère une représentation filtrée qui est en règle générale d'assez mauvaise qualité et qui est de plus non reproductible, en raison du caractère aléatoire du décalage de phase

L'invention consiste à réaliser un microscope dans lequel la direction de l'onde d'éclairage est vanable, mais comportant des moyens pour générer une représentation tndimensionnelle de l'objet dans laquelle la distnbution du décalage de phase affectant chaque point obtenu, en représentation fréquentielle, est concentrée autour d'une valeur constante Idéalement, ce décalage de phase devrait être constant, cependant l'existence de perturbations comme le bruit gaussien, une abenation sphénque résiduelle, ou une faible imprécision dans le contrôle de la différence de phase entre onde de référence et onde d'éclairage, crée un certain étalement de la distnbution autour de la valeur constante

Dans les microscopes existants existants utilisant des ondes d'éclairage de direction vanable et une onde de référence distincte de l'onde d'éclairage, et dans le cas ou un grand nombre d'ondes d'éclairages distinctes sont utilisées comme dans [Turpin], ce décalage de phase tend à être aléatoire et sa distnbution est donc a peu près homogène sur l'intervalle [θ,2τr] Dans le cas ou un nombre limité d'ondes d'éclairage est utilise, comme dans [Fercher], la distnbution du décalage de phase comporte des pics de niveau comparable centrés sur plusieurs valeurs distinctes conespondant aux décalages de phase affectant les sous-representations obtenues à partir de chaque onde d'éclairage

Le fait que le décalage de phase affectant chaque point, en représentation fréquentielle, soit à peu près constant, constitue une nouvelle fonctionnalité du microscope qui permet par exemple l'obtention d'une représentation spatiale de meilleure qualité Toutefois, la génération d'une représentation tndimensionnelle de l'objet observé ne constitue pas nécessairement le but final recherché par l'utilisateur du microscope Par exemple le microscope peut être utilise pour la lecture de mémoires optiques tndimensionnelles Dans ce cas. les données peuvent être codées avant d'être stockées sur la mémoire optique Le microscope permet ensuite d'obtemr une représentation tridimensionnelle de cette mémoire optique à partir de laquelle les données peuvent être décodées La représentation tndimensionnelle de l'objet est alors un intermédiaire de calcul permettant finalement l'obtention de données décodées

3.3. Vocabulaire employé et considérations générales

Un objet tndimensionnel peut être caracténsé optiquement par un certain nombre de paramètres locaux Ces paramètres locaux peuvent par exemple être son indice et son absorptivité en chaque point, ou encore son absorptivité et un de ses indices dans le cas d'un maténau non isotrope On peut définir en chaque point un nombre complexe qui est fonction de certains de ces paramètres locaux, cette fonction étant en général defime de manière umque dans l'ensemble de la représentation spatiale et ne dépendant donc pas du point considéré Une représentation spatiale tndimensionnelle de l'objet pourra alors être expnmée sous la forme d'un tableau a trois dimensions de nombres complexes La dépendance entre le nombre complexe et les paramètres locaux peut être définie de diverses manières Par exemple, ce nombre complexe peut se réduire a un nombre réel caracténsant l'indice, comme dans le microscope de [Noda] La définition qui sera utilisée le plus souvent sera toutefois du type donné par [Wolf], mais avec un « indice complexe » représentant à la fois l'indice et l'absorptivité Par exemple, -10-

la partie réelle du nombre complexe peut être proportionnelle à l'absorptivité et sa partie imaginaire à l'indice. On peut aussi utiliser un nombre complexe obtenu par rotation du précédent dans le plan complexe, conespondant à un décalage de phase. Dans tous les cas, la représentation spatiale tridimensionnelle de l'objet est unique à partir du moment ou la conespondance entre le nombre complexe et les paramètres locaux a été définie et ou le point central de la représentation a été défini.

En effectuant la transformation de Fourier tridimensionnelle de cette représentation spatiale tridimensionnelle on obtient une représentation fréquentielle tridimensionnelle de l'objet.

Le décalage de phase affectant un point de la représentation fréquentielle tridimensionnelle de l'objet est défini à partir du moment ou la représentation de l'objet a été définie de manière unique, c'est-à-dire lorsque la fonction complexe des paramètres locaux et le point d'origine, caractérisant la représentation spatiale, ont été définis.

Lorsque ces paramètres ne sont pas précisés, on peut considérer que le décalage de phase est défini par rapport à la représentation spatiale qui coïncide au mieux avec la représentation tridimensionnelle de l'objet qui a été obtenue. Le terme « représentation tridimensionnelle d'un objet » désignera l'ensemble des données numériques caractérisant la représentation spatiale ou fréquentielle de l'objet, indépendamment de la manière dont ces données sont combinées ou stockées, par exemple dans une mémoire d'ordinateur. Cette représentation pourra par exemple être exprimée: -dans le domaine spatial, sous la forme d'un nombre complexe dépendant des coordonnées spatiales -dans le domaine frequentiel, sous la forme d'un nombre complexe dépendant de la fréquence spatiale

-de toute autre manière à partir du moment ou la « représentation tridimensionnelle de l'objet » permet d'obtenir la représentation spatiale ou fréquentielle de l'objet par un algorithme connu.

Une partie de la représentation fréquentielle tridimensionnelle de l'objet sera appelée sous-représentation fréquentielle de l'objet, et le terme sous-représentation désignera l'ensemble des données conespondantes, indépendamment de la manière dont elles sont combinées ou stockées.

Une onde parvenant sur une surface de réception est entièrement caractérisée par la donnée de son amplitude et de sa phase selon chaque direction de polarisation et en tout point de la surface de réception. On peut également adopter une représentation scalaire de l'onde en se limitant par exemple à une seule direction de polarisation, l'onde étant alors caractérisée par une seule phase et une seule intensité en tout point de la surface de réception. A partir de l'onde mesurée sur une surface de réception, on peut générer une sous-représentation fréquentielle de l'objet observé. Cette sous-représentation est bidimensionnelle en ce qu'elle constitue une portion de sphère dans l'espace des fréquences, comme indiqué par pândliker]. Un intermédiaire de calcul pouna être constitué par une représentation fréquentielle de l'onde, définie par la donnée de la phase et de l'intensité de l'onde sur chaque vecteur d'onde, une représentation scalaire ayant été adoptée. La représentation fréquentielle de l'onde est bidimensionnelle et peut être projetée sur un plan sans perte d'information. Une telle projection donne une image plane que l'on appellera « image plane en fréquence ». Dans un système comme celui de [Turpin] ou celui de [Fercher], une telle image plane en fréquence est obtenue directement sur la surface de réception. Dans d'autres systèmes comme le deuxième mode de réalisation de la -11-

présente invention, une telle image plane en fréquence est obtenue par transformation de Fourier bidimensionnelle de la représentation scalaire obtenue directement sur la surface de réception. Une image plane en fréquence modifiée peut également être obtenue à partir de plusieurs images planes en fréquence différant entre elles par la polarisation de l'onde d'éclairage et la direction d'analyse de l'onde reçue sur la surface de réception. L'image plane en fréquence peut constituer un intermédiaire de calcul permettant d'obtenir la représentation fréquentielle de l'onde puis une sous-représentation conespondante de l'objet.

Le terme « représentation fréquentielle bidimensionnelle » désignera soit une représentation fréquentielle bidimensionnelle soit une partie bidimensionnelle d'une représentation fréquentielle tridimensionnelle. En particulier il pourra désigner indifféremment une image plane en fréquence, une représentation fréquentielle d'une onde, ou une sous-représentation bidimensionnelle de l'objet.

Le terme « lentille » désignera, dans l'ensemble du texte, aussi bien des lentilles simples que des lentilles composées ou des achromats, généralement dimensionnés pour limiter les abenation optiques.

Dans la suite du texte, cinq modes de réalisation sont décrits. On s'y référera comme modes de réalisation 1,2,3,4 et 5.

3.4. Obtention directe de la représentation fréquentielle tridimensionnelle

Pour chaque direction de l'onde d'éclairage, on obtient une sous-représentation fréquentielle de l'objet en appliquant directement les méthodes définies dans [Fercher] et [Turpin]. Dans les systèmes de [Fercher] et [Turpin], le microscope est construit de telle manière que les différentes sous-représentations obtenues sont affectées par des décalages de phase différents. Selon une version de l'invention le microscope est construit de manière à ce que ces décalages de phase soient constants. Cette version de l'invention implique: (i)- que le microscope soit construit de manière à ce que la différence de phase entre une onde d'éclairage et l'onde de référence avec laquelle elle interfère soit reproductible. Cette condition implique une construction appropriée du microscope. Elle est vérifiée, en l'abscence de vibrations, dans les modes de réalisation 3,4 et 5. Les modes de réalisation 1 et 2 sont affectés par les mêmes problèmes que le microscope de [Turpin] : la différence de phase entre onde de référence et onde d'éclairage varie aléatoirement du fait de la conception mécanique de l'ensemble. Les modes de réalisation 1 et 2 ne permettent donc pas le respect de cette première condition. Les modes de réalisation 3 à 5 permettent le respect de cette condition du fait d'une conception différente du système de génération des ondes d'éclairage et de référence. (ii)- que le microscope soit construit de manière à ce que, moyennant un réglage approprié, la différence de phase entre l'onde d'éclairage et l'onde de référence puisse être rendue constante. Le mode de réalisation 3 ne permet pas le respect de cette condition car il n'existe aucun point particulier en lequel toutes les ondes d'éclairage auraient la même phase, ce qui serait nécessaire pour vérifier cette condition car l'onde de référence utilisée est sphérique et constante. Le mode de réalisation 4, assez similaire par ailleurs au mode de réalisation 3, permet le respect de cette condition car, moyennant une commande appropriée du système de déviation du faisceau, on peut générer des ondes d'éclairage dont la phase en un point donné est constante. Le mode de réalisation 5 permet également le respect de cette condition. -12-

(iii)- que la position des éléments optiques soit réglée de manière appropriée pour que la différence de phase entre l'onde d'éclairage et l'onde de référence soit effectivement constante. Ce réglage est décrit en 8.6. pour le mode de réalisation 4 et en 9.20. pour le mode de réalisation 5.

Les conditions (ii) et (iii) impliquent que la différence de phase entre l'onde d'éclairage et l'onde de référence soit constante. On peut définir une onde virtuelle présente dans l'objet et telle que son image, par le dispositif optique modifiant l'onde issue de l'objet entre l'objet et la surface de réception, soit l'onde de référence. La différence de phase entre l'onde d'éclairage et l'onde de référence signifie ici la différence de phase entre l'onde d'éclairage et la composante de cette onde virtuelle sur le vecteur d'onde de l'onde d'éclairage.

3.5. Méthode de recalage en phase

Lorsque le microscope n'est pas construit de manière à ce que le décalage de phase affectant chaque sous- représentation fréquentielle soit constant, les différences entre les décalages de phase affectant chaque sous- représentation doivent être déterminées et éventuellement compensées.

3.5.1. Méthode générale de recalage en phase

On considère une partie de la représentation tridimensionnelle de l'objet:

- constituée par un sous-ensemble A de la représentation tridimensionnelle.

- caractérisée par une fonction «(/) définie sur A et conventionellement nulle hors de A, ou/est le vecteur fréquence spatiale et a f) la valeur de la représentation sur cette fréquence spatiale. - affectée par un bruit gaussien, récait-type du bruit sur une fréquence donnée/ étant σ_a (/) .

On désignera cette sous-représentation par l'expression « sous-représentation RA ». On dira que A est le support de RA.

On considère une seconde partie de la représentation tridimensionnelle de l'objet, constituée par un sous- ensemble B de la représentation tridimensionnelle, caractérisée par une fonction b(f) définie sur B, affectée par un bruit gaussien σ_/, ( ) , désignée par l'expression « sous-représentation RB »

Ces deux parties de la représentation sont décalées en phase l'une par rapport à l'autre et sont supposées avoir une intersection non vide. A partir de ces deux parties, on va générer une sous-représentation RC définie sur un ensemble C - A J B (C est la réunion de A et B) et définie par une fonction c(/) affectée par un bruit gaussien σ_c(f) . On peut procéder en deux temps:

- un rapport complexe entre les deux représentations peut par exemple être obtenu par la formule:

Σ /W) _f σl{f) + σ_b ²{f) ^• = ou les sommes sont sur un ensemble E de vecteurs fréquences inclus dans l'intersection

Σ Hf)\ :^σa( ) ^{+ σ} f) -13-

des deux ensembles A et B, soit E c (-4 o B) , l'ensemble E étant si nécessaire limité à des points pour lesquels le rapport signal sur bruit est suffisamment élevé. La différence de phase entre les deux représentations est l' argument de r. La différence de phase ainsi calculée est une bonne approximation de la différence de phase la plus probable connaissant les valeurs des représentations RA et RB sur l'ensemble E.

- la représentation RB peut être « recalée en phase » par rapport à RA en la multipliant par le rapport r. b(f) <- r.b(f) ou le signe <- désigne raffectation.

- la fonction c peut être obtenue par exemple par la formule: °(f) _₊_ ^b(f)

Les valeurs ainsi affectées à la représentation RC sont les valeurs les plus probables connaissant les représentations RA et RB recalées en phase.

-la fonction σ_c(/) peut être obtenue par exemple par la formule:

1 1 1

- + -

°î(f) *²a(f) <*î(f)

L'ensemble des deux opérations précédentes constitue le regroupement de RA et RB Des explications plus détaillées sur le calcul de ces fonctions sous forme de tableaux sont données au paragraphe 7.17.1. Les formules indiquées ci-dessus pour le recalage de phase effectuent simultanément une normalisation en intensité, qui toutefois n'est pas indispensable.

Cette méthode permet, à partir de deux sous-représentations RA ctRB dont les supports A et B ont une intersection non vide, d'obtenir une sous-représentation RC conespondant à la superposition de RA et RB.

Si la représentation fréquentielle tridimensionnelle de l'objet doit être reconstituée à partir de nombreuses sous-représentations dont les phases ne sont pas connues, la méthode ci-dessus, appliquée itérativement, permet de grouper toutes ces sous-représentations. Par exemple, on peut partir d'une sous-représentation donnée, la grouper avec une seconde sous-représentation. On peut ensuite partir de la sous-représentation générée par ce groupement, et la grouper avec une sous-représentation supplémentaire. En répétant cette opération de groupement jusqu'à ce que toutes les sous-représentations aient été intégrées dans une représentation globale, on obtient finalement la représentation fréquentielle tridimensionnelle de l'objet. Les seules conditions devant être vérifiées pour que cette méthode aboutisse sont:

- qu'aucune sous-représentation ou groupe de sous-représentations n'ait une intersection vide avec l'ensemble des autres sous-représentations.

- que l'objet n'ait pas une représentation fréquentielle trop singulière, qui serait par exemple nulle sur un ensemble de points séparant en deux sa représentation fréquentielle tridimensionnelle.

Ces conditions sont facilement satisfaites pour la plupart des objets biologiques dès lors qu'un nombre élevé de représentations est acquis. Par exemple: -14-

- un mode de réalisation peut être dénvé du système de [Fercher] dans lequel on a remplacé les trois ondes d'éclairage simultanées produites par le réseau de diffraction, par une onde d'éclairage unique de direction vanable Dans ce cas, une sous-représentation est constituée par une représentation fréquentielle bidimensionnelle obtenue pour une onde d'éclairage donnée - un mode de réalisation peut être dénvé du microscope nus en oeuvre dans [Turpin 3] dans lequel on a autonse, en plus de la rotation de l'objet, des vanations de direction de l'onde d'éclairage Dans ce cas, une sous- représentation est constituée par l'ensemble des représentations fréquentielles bidimensionnelles obtenues pour une onde d'éclairage donnée lorsque l'objet est déplacé en rotation

- dans le cas du mode de réalisation 5, paragraphe 9 19 , une sous-représentation est constituée par une représentation fréquentielle bidimensionnelle obtenues pour une onde d'éclairage donnée Un nombre réduit de sous-représentations est d'abord regroupé en une représentation de base ayant une intersection non nulle avec toutes les autres sous-représentation obtenues dans des conditions similaires L'ensemble des représentation est alors recalé en phase par rapport à la représentation de base, puis une représentation globale est générée

- dans les modes de réalisation 3,4,5, quatre sous-représentations intermédiaires sont à chaque fois générées. comme expliqué en 7 17 1 1 Ces quatre représentations sont réunies en une seule par application de cette méthode générale

Selon une version de l'invention, le microscope comporte donc des moyens pour

- déterminer, pour chaque sous-representation RB, un coefficient caracténsant l'écart de phase entre cette sous- représentation et une autre sous-representation, partie de sous-representation ou groupe de sous-representations

RA, ce coefficient étant calculé à partir des valeurs de RA et RB sur un ensemble inclus dans l'intersection des supports de RA et de RB

- cornger la phase de RB de manière à obtemr pour RB la même référence de phase que pour RA

La manière la plus simple de cornger la phase de RB est d'effectuer une multiplication par le coefficient r comme indiqué plus haut Toutefois, cette conection peut également être effectuée par des moyens physiques, auquel cas la phase n'a pas à être corngee pendant la phase de calcul Un exemple d'une telle réalisation est décrit en 7 18 7

L'écart de phase affectant chaque sous-représentation peut être recalculé à chaque acquisition Ceci est nécessaire dans les modes de réalisation 1 et 2, pour lesquels ces écarts ne sont pas reproductibles Dans le cas des modes de réalisation 3.4 et 5, cet écart de phase est reproductible et peut donc être mesuré au cours d'une phase préparatoire à l'acquisition Un exemple d'une telle réalisation est décrit en 7 18 1

Selon une version de l'invention, le microscope comporte des moyens pour - déterminer, pour une sous-représentation RB donnée, la représentation fréquentielle RC résultant du regroupement de RB avec une autre sous-représentations RA -15-

- déterminer un coefficient caractéristique du bruit affectant RC défini sur l'ensemble du support de RC, obtenu à partir d'un coefficient caractéristique du bruit affectant RA et défini sur le support de RA, et à partir d'un coefficient caractéristique du bruit affectant RB et défini sur le support de RB.

Les méthodes utilisées peuvent différer du formalisme exposé plus haut. Par exemple dans le mode de réalisation 1 la quantité est assimilée aux nombre N de représentations fréquentielles atteignant un point

*²c(f) donné.

Les calculs peuvent être groupés: après recalage en phase de chaque sous-représentation, celles-ci peuvent être réunies en une représentation globale, sans calculer chaque sous-représentation intermédiaire. C'est ce qui est fait dans l'ensemble des modes de réalisation pour grouper des sous-représentations bidimensionnelles en sous- représentations tridimensionnelles complètes ou partielles.

Il est possible de calculer des représentations de l'objet sans passer formellement par sa représentation fréquentielle tridimensionnelle. Par exemple en 7.17.3.3. une représentation confocale de l'objet est générée en utilisant pour la représentation fréquentielle finale une valeur en chaque point qui est la somme des valeurs obtenues pour chaque représentation atteignant ce point. La représentation ainsi obtenue n'est pas à proprement parler une représentation fréquentielle de l'objet mais est tout de même porteuse d'informations sur cet objet. Il est également possible de générer des représentations réelles de l'indice ou de l'absorptivité. Ces représentations peuvent être générées de manière simple en passant par l'intermédiaire de la représentation fréquentielle de l'objet, toutefois il est également possible de modifier les algorithmes pour ne pas utiliser formellement cet intermédiaire.

3.5.2. Recalage en phase absolu

La méthode explicitée en 3.5.1. permet d'obtenir une représentation tridimensionnelle de l'objet. Toutefois, la phase globale de cette représentation tridimensionnelle reste arbitraire. Dans la représentation tridimensionnelle spatiale de l'objet, obtenue à partir de la représentation fréquentielle tridimensionnelle par transformation de Fourier inverse, le nombre complexe associé à chaque point caractérise l'absorptivité et l'indice de l'objet au point considéré. Si la phase globale de la représentation tridimensionnelle est choisie de manière appropriée, la partie réelle dudit nombre complexe caractérise l'absorptivité locale de l'objet et la partie imaginaire dudit nombre complexe caractérise l'indice local de l'objet. La phase globale est choisie de manière appropriée lorsque le point origine de la représentation fréquentielle tridimensionnelle a une valeur réelle.

Selon une version de l'invention, et dans les cas ou le point origine de la représentation fréquentielle tridimensionnelle fait partie des points qui ont été acquis, le microscope comporte des moyens pour diviser, par sa valeur au point origine, la représentation fréquentielle tridimensionnelle obtenue par la méthode détaillée en 3.5.1. Ceci permet d'obtenir une représentation spatiale dans laquelle la partie réelle et la partie imaginaire des nombres complexes représentent respectivement l'absorptivité locale et l'indice local. Ceci permet également de normaliser l'ensemble de la représentation. -16-

Lorsque le point ongine de la représentation fréquentielle tndimensionnelle ne fait pas partie des points qui ont été acquis, cette opération est impossible L'opérateur qui visualise une image visualise alors par exemple la partie réelle du nombre complexe, et doit choisir intuitivement la phase globale de la représentation de mamere à obtemr l'image la plus contrastée possible

3.5.3. Recalage en phase par rapport à l'onde d'éclairage

Les algonthmes généraux de recalage en phase définis plus haut présentent le défaut d'être d'une mise en oeuvre relativement complexe Une version simplifiée peut être obtenue lorsque le système d'acquisition permet l'acquisition de la partie non diffractée de l'onde d'éclairage Celle-ci conespond au point ongine de la représentation fréquentielle tndimensionnelle de l'objet Ce point est commun à toutes les représentations fréquentielles bidimensionnelles

Le recalage en phase décnt en 3 5 1 peut alors s'effectuer par rapport à la partie de sous-representation constituée par ce point unique Ce recalage peut être groupé avec le recalage absolu décnt en 3 5 2 L'ensemble des deux recalages revient alors à diviser l'ensemble de la sous-représentation de l'objet obtenue à partir d'une onde d'éclairage donnée, par sa valeur au point ongine Lorsqu'une image plane en fréquence est générée comme intermédiaire de calcul, ceci revient à diviser l'ensemble de l'image plane en fréquence par sa valeur au point conespondant à la partie non diffractée de l'onde d'éclairage Selon une version de l'invention, le recalage en phase des représentations fréquentielles bidimensionnelles est donc effectué en divisant chaque sous- représentation de l'objet par sa valeur au point ongine de la représentation fréquentielle tndimensionnelle de l'objet Cette méthode est utilisée par exemple dans les modes de réalisation 1,2,3 et 4

3.5.4. Recalage en phase par rapport à des valeurs de phase préenregistrées

Une représentation fréquentielle tndimensionnelle de l'objet est obtenue à partir d'une séné de représentations fréquentielles bidimensionnelles conespondant chacune à un faisceau d'éclairage différent Chacune de ces représentations fréquentielles bidimensionnelles peut être recalée en phase par rapport a la sous-representation constituée par le point ongine seul, comme indiqué en 3 5 4 Toutefois, l'intensité élevée du point conespondant sur chaque représentation fréquentielle bidimensionnelle rend difficile l'acquisition simultanée du reste de la représentation Selon une version de l'invention, l'acquisition des images planes en fréquence est effectuée en deux temps - une phase préliminaire, aucours de laquelle sont enregistrées les valeurs obtenues au point image de l'onde d'éclairage, pour chaque onde d'éclairage

- une phase d'acquisition proprement dite, aucours de laquelle le faisceau direct peut être occulté et aucours de laquelle les valeurs des images planes en fréquence sont enregistrées

Une représentation fréquentielle bidimensionnelle peut alors être obtenue pour chaque onde d'éclairage a partir de ces deux enregistrements, la valeur au point image de l'onde d'éclairage étant obtenue à partir du premier enregistrement et la valeur en tout autre point étant obtenue à partir du deuxième enregistrement La méthode déente en 3 5 4 peut alors être appliquée à chaque représentation fréquentielle bidimensionnelle obtenue -17-

Lorsque une séné de représentations fréquentielles bidimensionnelles est réalisée, par exemple pour 'filmer' le mouvement de cellules, la phase préliminaire ne doit pas être répétée II suffit de l'effectuer une fois avant le début des acquisitions

Pour que cette méthode soit fonctionnelle, la différence de phase entre le faisceau d'éclairage et le faisceau de référence, au niveau de la surface de réception, doit être reproductible Les systèmes de génération du faisceau d'éclairage utilisés dans les modes de réalisation 3,4 et 5 vérifient cette condition Cette méthode de recalage en phase est déente par exemple en 7 18 1 et en 9 18 2

3.6. Compensation des vibrations La méthode déente en 3 5 4 suppose la reproductibihté des faisceaux d'éclairage La méthode déente en

3.5 3 , dans le cas ou plusieurs objectifs sont utilises, suppose un décalage de phase constant entre les ondes reçues sur chacun de ces objectifs Toutefois, dans les modes de réalisation 3,4 et 5, les vibrations peuvent rendre ces méthodes inopérantes ou peu robustes Pour que les résultats soient fiables, il est nécessaire de compenser ces vibrations A cette fin, le système peut acquénr pénodiquement une image de référence L'image de référence consiste par exemple en une image obtenue sur la surface de réception pour une onde d'éclairage fixe, qui n'est pas modifiée quand l'onde d'éclairage servant à obtemr les images planes en fréquence 'utiles' vane A chaque acquisition conespond alors une image de référence acquise à un instant proche Une image de référence acquise a un instant initial est choisie comme référence absolue On entend par image 'utile' une image obtenue sur la surface de réception et à partir de laquelle on calculera une représentation fréquentielle bidimensionnelle utilisée pour générer la représentation de l'objet

Le vecteur v parcourant l'ensemble du support d'une image, on note m(γ) une image 'utile'obtenue sur cette surface de réception et .(v) l'image de référence conespondante On note h₀(y) l'image de référence choisie comme référence absolue, obtenue sur la même surface de réception v représente la projection plane de la fréquence et est donc un vecteur à deux dimensions vanant sur l'ensemble de la surface de réception On note σ(v) l'écart-type du bruit gaussien affectant la fonction h(v) en chaque point

_Υ h vgf La vanation de phase d'ongme vibratoire peut par exemple être caracténsée par le coefficient r = — f ^σ» h(v)

qui représente l'écart de phase le plus probable entre les images de référence h(v) et h₀(y)

L'image m(v) peut alors être recalée en phase comme suit m(y) <- r m(v) ou le signe — désigne l'affectation

Lorsque ce recalage préliminaire a été effectué les images ainsi recalées en phase peuvent être utilisées dans les algonthmes défims en 3 5 3 et 3 5 4

Si le système est totalement exempt de vibrations ce recalage préliminaire n'est pas nécessaire -18-

Si les vibrations sont de basse fréquence, l'image de référence peut n'être acquise qu'à une fréquence peu élevée, supérieure toutefois à la fréquence des vibrations du système.

Si les vibrations sont fortes, il est possible d'acquérir une image de référence à chaque image utile.

En présence de vibrations, - ce recalage préliminaire est indispensable à l'application de l'algorithme défini en 3.5.4.

- ce recalage préliminaire n'est pas indispensable à l'application de l'algorithme défini en 3.5.3. dans le cas ou un seul objectif est utilisé. Cependant, dans le cas ou plusieurs objectifs sont utilisés, il permet de fixer la différence de phase entre les images planes en fréquence générées à partir de chaque objectif. Dans ce cas, il est donc également indispensable. Cette technique est utilisée dans les modes de réalisation 3 et 4 et décrite en 7.17. Elle est également utilisée dans le mode de réalisation 5 lorsque le recalage en phase est effectué conformément au paragraphe 9.18.

Une version de l'invention consiste donc à acquérir périodiquement des images de référence conespondant à une direction d'éclairage fixe, et à utiliser ces images pour compenser les écarts de phase d'origine vibratoire affectant les images planes en fréquence.

3.7. Caractérisation du vecteur d'onde de l'onde d'éclairage

Il est nécessaire de contrôler la direction de l'onde d'éclairage, c'est-à-dire son vecteur d'onde f_e , par exemple avec des moyens mécaniques comme par exemple dans [Turpin]. Néanmoins, ces moyens mécaniques doivent être d'une grande précision et sont d'une mise en oeuvre coûteuse. Dans les conditions définies en 3.5.3., c'est-à-dire si le système d'acquisition permet l'acquisition de la partie non diffractée de l'onde d'éclairage, la partie non diffractée de l'onde d'éclairage conespond à un maximum du module sur la représentation fréquentielle de l'onde issue de l'objet. Selon une version de l'invention, le microscope comporte des moyens pour déterminer les coordonnées de ce maximum et pour calculer, à partir de ces coordonnées, le vecteur d'onde f_e de l'onde d'éclairage. Cette méthode est utilisée par exemple dans les modes de réalisation 1 et 2.

Toutefois, la présence de l'objet peut fausser légèrement la valeur du vecteur d'onde ainsi obtenu. Selon une version de l'invention, les vecteurs d'onde f_e de chaque onde d'éclairage sont obtenus dans une phase préliminaire ou l'objet est supprimé ou remplacé par une lame transparente. Les vecteurs d'onde ainsi obtenus ne sont donc pas faussés par la présence de l'objet. Cette méthode suppose que les vecteurs d'onde soient reproductibles d'une acquisition à l'autre. Par contre, elle évite de devoir calculer ces vecteurs d'onde en fonction de paramètres mécaniques. Cette méthode est utilisée dans les modes de réalisation 3,4 et 5.

3.8. Caractéristiques du récepteur

3.8.1. utilisation d'un objectif de microscope Selon une version de l'invention, le récepteur comporte un objectif de microscope de forte ouverture qui transforme les rayons issus de l'objet sous une forte ouverture en rayons paraxiaux pouvant être dirigés vers une surface de réception. Cette configuration permet des performances meilleures que les configurations définies dans [Fercher] (abscence d'objectif) ou [Turpin] (objectif de faible ouverture). Alors que [Vishnyakov] utilise une telle -19-

configuraûon sans pouvoir en tirer parti, du fait de l'utilisation de méthodes tomograpluques mal adaptées, les algonthmes définis dans la présente invention permettent de tirer le meilleur partie de cette configuration

3.8.2. Utilisation d' une surface de réception dans un plan de fréquence II est avantageux d'acquénr directement l'image dans le domaine frequentiel, comme dans [Turpin 3]

Ceci peut être fait par exemple à l'aide du récepteur décnt dans [Lauer 1] qui permet d'améliorer les performances du récepteur de [Turpin 3]

3.8.3. Utilisation d'une surface de réception dans un plan d'espace En dehors de l'objectif de microscope lui-même, le système de réception défini en 3 8 2 présente une partie paraxiale permettant de modifier le signal optique capté par l'objectif, pour obtenir une représentation fréquentielle Le signal issu de l'objectif passe d'abord par le plan ou l'objectif forme normalement l'image de l'échantillon observé Ce plan sera appelé plan d'espace II est ensuite transformé par un système paraxial de sorte que dans le plan ou est placée la surface de réception, une onde plane issue de l'objet ait une image ponctuelle Ce plan, ou est placée la surface de réception, sera appelé plan de fréquence La partie paraxiale du système optique utilisé peut comporter des plans d'espace ou de fréquence intermédiaires La surface de réception peut être placée dans un plan d'espace, dans un plan de fréquence, ou dans un plan intermédiaire Toutefois, pour simplifier les calculs, elle sera toujours placée soit dans un plan d'espace, soit dans un plan de fréquence Pour que l'image reçue soit conecte, les conditions suivantes doivent en outre être respectées - si la surface de réception est dans un plan de fréquence, l'onde de référence doit être centrée virtuellement en un point central de l'objet observé

- si la surface de réception est dans un plan d'espace, l'onde de référence doit être l'image d'une onde virtuelle qui est plane à la traversée de l'objet observé

Dans ces conditions, le signal détecté sur une surface réception placée dans un plan de fréquence est la transformée de Founer optique du signal qui serait détecté dans un plan d'espace Une version de l'invention constituant une alternative au récepteur défini en 3 8 2 est donc d'utiliser une surface de réception positionnée dans un plan d'espace et une onde de référence qui est l'image d'une onde virtuelle plane à la traversée de l'objet observé Une transformée de Founer numénque remplace alors la transformée de Founer optique

Les modes de réalisation numéro 1,3,4 utilisent une réception dans un plan de fréquence et les modes de réalisation numéro 2 et 5 utilisent une réception dans un plan d'espace Une image plane en fréquence peut donc être obtenue soit directement sur une surface de réception placée dans un plan de fréquence, soit par transformation de Founer d'une image reçue sur une surface de réception placée dans un plan d'espace

3.9. Atténuation de faisceau Dans le cas ou le capteur est placé dans un plan d'espace, l'onde d'éclairage directe a comme représentation sur le capteur une valeur de module constant qui se superpose à l'onde diffractée par l'objet Une onde diffractée trop faible par rapport à ce mveau de base constant ne peut pas être détectée conectement Par contre, ce mveau de base est peu élevé car l'intensité du faisceau de référence est répartie sur tout le capteur, ce -20-

qui permet en général l'obtention de bonnes images Dans le cas ou le capteur est placé dans un plan de fréquence, l'onde d'éclairage se concentre en un point et comme précédemment, une onde diffractée trop faible par rapport à ce mveau de base constant ne peut pas être détectée conectement L'onde étant concentrée en un point, ce mveau de base est élevé et cette limitation est gênante Selon une version avantageuse de l'invention, un dispositif d'atténuation contrôlée du faisceau, ayant un ou plusieurs niveaux d'atténuation, est introduit pour résoudre ce problème Le dispositif d'atténuation permet d'obtenir successivement plusieurs enregistrements différant par l'intensité de l'onde d'éclairage Une valeur moins bnutée de l'onde diffractée est alors obtenue en combinant ces enregistrements La valeur définitive de l'onde diffractée est par exemple calculée en chaque point à partir de l'enregistrement pour lequel l'intensité de l'onde reçue au point considéré est la plus élevée, mais pour lequel le capteur reste non-sature au point considère et en ses voisins immédiats pour l'ensemble des figures d'interférences permettant d'obtenir ledit enregistrement

Compte tenu de l'utilisation d'un dispositif d'atténuation du faisceau, la version de l'invention dans laquelle une onde plane a une image ponctuelle permet la détection d'ondes diffractees plus faibles En effet celles-ci ne sont superposées sur le capteur à aucune autre onde et des niveaux très faibles peuvent être détectes lorsque l'intensité du faisceau d'éclairage est élevée

Un tel dispositif est utilisé dans les modes de réalisation 1,3 et 4

3.10. Système de génération du faisceau d'éclairage

Quel que soit le mode de réalisation, il est nécessaire de concevoir une méthode de génération des faisceaux d'éclairage Les méthodes proposées par [Turpin] présentent le défaut de nécessiter des déplacements mécaniques importants et donc de ralentir fortement le système

Un système optique, par exemple celui décnt en 8 1 1 , peut transformer un faisceau parallèle d'extension spatiale donnée et de direction vanable en un faisceau parallèle dont l'extension spatiale a été diminuée et dont les vanations de direction ont été amplifiées D'une manière générale, des vanations de direction faibles appliquées a un faisceau de forte étendue spatiale peuvent être amplifiées par un système optique moyennant une diminution de l'étendue spatiale du faisceau L'étendue spatiale du faisceau d'éclairage nécessaire pour un microscope étant faible, ce pnncipe peut servir à amplifier optiquement des mouvements mécamques faibles

Un faisceau de direction vanable peut être transformé par une lentille en un faisceau de position vanable dans le plan focal image de cette lentille Une vanation de direction du faisceau dans une partie de son trajet optique éqmvaut donc à une vanation de position dans une autre partie de son frajet optique et vice-versa Dans des plans intermédiaires, la vanation est une vanation conjointe de position et de direction II n'y a donc pas heu de différencier un système générant des vanations de position de l'onde d'éclairage d'un système générant des vanations de direction, ces systèmes étant équivalents

Selon une version de l'invention, le système de génération des faisceaux d'éclairage comprend - un deviateur de faisceau générant des vanations d'un faisceau paraxial

- un élément optique de forte ouverture ( par exemple un objectif de microscope ou un condenseur) transformant lesdites vanations du faisceau paraxial incident en vanations de direction importantes du faisceau sortant -21-

II peut également comprendre un système de lentilles dimensionné de manière à ce que le faisceau soit parallèle en sortie dudit élément optique de forte ouverture.

Le déviateur de faisceau peut être par exemple un miroir monté sur un positionneur permettant d'en commander l'orientation. Cette solution est mise en oeuvre dans les modes de réalisation 1 et 2. Cependant, cette solution présente deux défauts:

- le mouvement du miroir engendre des vibrations qui perturbent le système. Après chaque mouvement du miroir il est nécessaire d'attendre l'absorption des vibrations avant de procéder à l'acquisition.

- la différence de phase entre le faisceau de référence et le faisceau d'éclairage n'est pas reproductible, ce qui interdit d'utiliser certains algorithmes comme ceux définis en 3.5.4. Chacun des déviateurs de faisceau décrits en 3.10.1. , 3.10.2 et 3.10.3. permet de résoudre ces deux problèmes.

3.10.1. Déviateur de faisceau basé sur une série de déviateurs binaires

Un système pouvant renvoyer le faisceau dans deux directions peut être construit à l'aide d'un prisme biréfringent qui transmet le faisceau ordinaire et le faisceau extraordinaire dans deux directions différentes. Le faisceau laser utilisé doit alors être polarisé. Un rotateur de polarisation placé en avant du prisme permet d'orienter sa polarisation dans le sens ordinaire ou le sens extraordinaire, ce qui implique un angle de déviation différent par le prisme. Cependant, les rotateurs de polarisation fenoélectriques disponibles, qui ont l'avantage d'être rapides, ne permettent pas une rotation de 90 degrés mais une rotation d'environ 80 degrés. Ceci empêche d'avoir à la fois un faisceau polarisé exactement dans le sens ordinaire, pour une des positions du rotateur de polarisation, et un faisceau polarisé exactement dans le sens extraordinaire pour l'autre position. Il se crée donc, dans une des positions, un faisceau parasite dévié dans une direction non voulue. Afin de supprimer ce faisceau parasite, il est nécessaire d'utiliser en sortie du prisme biréfringent un polariseur sélectionnant uniquement le rayon voulu. Afin que ce polariseur ne supprime pas le rayon dans l'autre position du rotateur, il est nécessaire d'introduire entre ce polariseur et le prisme un second rotateur, utilisé pour ramener le vecteur champ électrique du faisceau dans le sens passant du polariseur, lorsque il n'y est pas directement en sortie du prisme.

Un système pouvant renvoyer un faisceau dans des directions nombreuses peut être constitué en associant en série plusieurs de ces systèmes élémentaires. En en associant deux, qui produisent une déviation de même amplitude mais dans deux directions orthogonales, on forme un doublet. En associant en série N doublets, chaque doublet étant caractérisé par des prismes biréfringents de caractéristiques telles que l'angle de déviation du doublet numéro ;^' soit proportionnel à 2' , on obtient 2^N valeurs de déviation possibles dans chaque direction. Par exemple avec N=8 on a un total de 256 x 256 directions de déviation du faisceau.

Selon une version de l'invention, le système de déviation du faisceau est donc constitué par l'association en série de déviateurs élémentaires, chacun de ces déviateurs élémentaires comportant un prisme biréfringent déviant différemment le rayon ordinaire et le rayon extraordinaire, précédé d'un rotateur de polarisation contrôlé électroniquement et permettant d'orienter le vecteur champ électrique du faisceau selon l'axe ordinaire ou l'axe extraordinaire dudit prisme, et suivi d'un second rotateur et d'un polariseur permettant d'éliminer les faisceaux parasites. -22-

Un tel dispositif est utilisé dans le mode de réalisation 3.

3.10.2. Déviateur de faisceau basé sur des modulateurs spatiaux

Un modulateur spatial est une matrice bidimensionnelle de pixels permettant de moduler la phase ou l'intensité d'une onde dans un plan. La plupart des modulateurs spatiaux sont à base de cristaux liquides. Les écrans LCD courants constituent un exemple de modulateur spatial d'intensité.

Un plan d'espace, sur la trajectoire du faisceau d'éclairage, sera défini comme un plan dans lequel ce faisceau est parallèle et est centré sur l'axe optique. Un plan de fréquence sera défini comme un plan dans lequel ce faisceau a une image ponctuelle. Un faisceau parallèle parvenant dans un plan d'espace a dans ce plan une représentation complexe de la forme exp j27iif_xx + f y\ \ ou (x,y) sont les coordonnées d'un point du plan et ou lf_x , f_y I sont les coordonnées de la projection du vecteur d'onde dans ce plan. Si un dispositif de modulation de phase est placé dans ce plan et si un décalage de phase de la forme θ = 2πig_xx + g_yy + c\ est appliqué à l'aide de ce dispositif, l'onde a, après

traversée dudit dispositif, une représentation complexe exp\j2π\(f_x + g_x)x + if_y +g_y)y + c)\ . Le dispositif de de modulation spatiale a donc modifié la direction de l'onde incidente. Les vecteurs d'onde que peut générer un tel dispositif de modulation spatiale sont compris dans un cône dont l'ouverture dépend des valeurs maximales de g_x et g _y permises par le modulateur. Ce cône sera appelé 'cône de déviation'.

Si un dispositif de modulation d'intensité est utilisé au lieu du dispositif de modulation de phase, il est possible d' appliquer une fonction d'atténuation du type cosJ2.τjg.-x + g_j;^ + c)> . Après traversée du dispositif, l'onde a alors une forme du type exp{/2.τ((Λ _+gχ)_{x +} (f_y +g_y)y + cj} +exp{j2π((f_x -g_x)x + (f_y -g_y)y-ή} qui conespond à la superposition de deux ondes planes dont les vecteurs d'onde sont symétriques par rapport à un axe orienté suivant le vecteur d'onde de l'onde qui sortirait du dispositif en l'abscence de modulation. Une des deux ondes peut être anêtée par un diaphragme, moyennant quoi le dispositif constitue un déviateur de faisceau comparable au précédent.

Des dispositifs de modulation intermédiaires, réalisant une modulation conjointe de phase et d'intensité, peuvent également être utilisés.

Une version de l'invention consiste donc à utiliser comme déviateur de faisceau un modulateur spatial commandé de mamere appropriée. Une version de l'invention consiste à ce que ledit modulateur soit un modulateur de phase , commandé de mamere à générer un décalage de phase d'une forme aussi proche que possible de θ = 2π(g_xx + g_yy) .

Les dispositifs de modulation existants fonctionnent pixel par pixel. Cette discrétisation entraîne la génération de fréquences parasites hors du cône de déviation. Une version de l'invention consiste à supprimer ces -23-

fréquences parasites à l'aide d'un diaphragme placé dans un plan de fréquence sur le trajet de l'onde issue du modulateur de phase.

Les dispositifs de modulation permettant une modulation rapide sont binaires, c'est-à-dire qu'à un pixel donné ne conespondent que deux valeurs possibles de phase ou d'intensité. L'utilisation d'un dispositif de modulation binaire entraîne la présence d'une onde plane parasite, symétrique de l'onde que l'on cherche à obtenir par rapport à un axe constitué par la direction d'un faisceau non dévié. Dans le cas des modulateurs binaires, ceci est vrai même lorsque il s'agit d'un modulateur de phase, alors que dans le cas des modulateurs générant une modulation continue, ce problème peut être évité en utilisant un modulateur de phase. Selon une version de l'invention, le diaphragme filtrant les fréquences parasites est dimensionné de mamere à filtrer non seulement les fréquences situées hors du cône de déviation, mais également une partie des fréquences situées dans le cône de déviation, de manière à arrêter l'onde plane parasite.

Les dispositifs de modulation binaires présentent également l'inconvénient de générer des fréquences parasites inclues dans le cône de déviation et constituant un 'bruit' en fréquence. Selon une version de l'invention, ces fréquences sont anêtées par un modulateur d'intensité placé dans un plan de fréquence sur le trajet du faisceau issu du modulateur de phase, et commandé pour ne laisser passer que la fréquence recherchée.

Un tel dispositif est utilisé dans le mode de réalisation 4.

3.10.3. Déviateur de faisceau constitué par un miroir mobile dont les vibrations sont rendues non gênantes Les déviateurs de faisceau décrits en 3.10.1. et 3.10.2. sont basés sur l'utilisation de dispositifs à cristaux liquides et de polariseurs. Ces dispositifs ne sont pas disponibles dans le domaine des rayonnements ultraviolets. Pour utiliser les rayonnements ultraviolets, il est donc nécessaire d'utiliser d'autres moyens.

Dans les dispositifs précédents, l'ensemble du système était placé sur une table optique. Selon une version de l'invention, le dispositif de déviation de faisceau est constitué par un miroir placé hors de la table optique, la séparation entre le faisceau d'éclairage et le faisceau de référence étant effectuée par un séparateur fixé sur la table optique et positionné après ledit miroir sur la trajectoire du faisceau.

Le miroir étant placé hors de la table optique, il n'engendre pas de vibrations de cette table. La séparation des faisceaux ayant lieu après le miroir, ses vibrations n'engendrent pas non plus de décalages de phase entre faisceau d'éclairage et faisceau de référence. Ceci résout donc le problème des vibrations. Par contre, le fait que la séparation des faisceaux ait lieu après le miroir mobile implique que le faisceau de référence varie en même temps que le faisceau d'éclairage. Cette variation doit être prise en compte dans la conception du système et compensée. Par exemple, si la surface de réception est placée dans un plan d'espace, les variations de direction de l'onde de référence se traduisent par des translations de l'image plane en fréquence. Selon une version de l'invention, cet effet est compensé en effectuant une translation en sens inverse des images planes en fréquence obtenues.

Cette technique est utilisée par exemple dans le mode de réalisation 5. -24-

3.11. Compensation des erreurs dues à la polarisation

La méthode de génération d'images déente par [Wolf] est basée sur une théone scalaire de la diffraction et suppose que l'onde traversant l'objet est diffractée de mamere isotrope dans toutes les directions par chaque λ point de l'objet Ce n'est que moyennant cette hypothèse que la résolution théonque de — peut être obtenue La théone scalaire de la diffraction n'est cependant pas valable pour les angles de diffraction élevés L'intensité diffractée par un point de l'objet dépend de la direction de l'onde diffractée, de la direction de l'onde d'éclairage, de la direction de polansation de l'onde d'éclairage et de la direction de polansation de l'onde diffractée

3.11.1. Compensation par multiplication par un coefficient réel L'onde diffractée par l'objet diffère de l'onde qui serait diffractée si la diffraction était isotrope par un facteur multiplicatif réel dépendant

- de la direction de propagation de l'onde d'éclairage

- de la polansation de l'onde d'éclairage

- de la direction de propagation de l'onde diffractée - de la polansation de l'onde diffractée

Selon une version de l'invention, le microscope comporte des moyens pour déterminer ce facteur multiplicatif et le compenser en multipliant les ondes reçues par l'inverse dudit facteur Une telle version de l'invention est déente en 7 18 8

3.11.2. Compensation dans le cas d'un matériau anisotrope

Si l'objet observé est constitué essentiellement d'un maténau amsotrope, les effets de la diffraction différent de ce qu'ils sont dans un maténau isotrope Le maténau est alors caracténse en chaque point par 6 paramèfres cnstallins plus l'absorptivité

Dans le cas particulier ou l'objet observé est un cnstal uniaxe, l'indice de diffraction du rayon ordinaire a une valeur constante Selon une version de l'invention, une représentation tndimensionnelle dans laquelle les nombres complexes obtenus caracténsent l'absorptivité et l'indice ordinaire peut être calculée Selon cette version de l'invention, cette représentation est calculée à partir d'images planes en fréquence obtenues pour une onde d'éclairage polansée de sorte qu'elle constitue un rayon ordinaire

La direction de polansation ordinaire vanant avec la direction de propagation de l'onde, il est nécessaire de pouvoir modifier la direction de polansation de l'onde d'éclairage Cependant, les phénomènes étant linéaires, il suffit d'enregistrer l'onde reçue en tout point pour deux directions de polansation de l'onde d'éclairage pour pouvoir en déduire l'onde diffractée par par l'objet pour une onde d'éclairage de direction quelconque Selon une version de l'invention, le microscope comprend des moyens pour générer deux directions de polansation de l'onde d'éclairage Selon une version de l'invention, le microscope comprend également des moyens pour analyser l'onde diffractée smvant deux directions de polansation, ce qui permet de distinguer l'onde diffractée ordinaire de l'onde diffractée extraordinaire Selon cette version de l'invention, les images planes en fréquence sont alors obtenues a -25-

partir de quatre images élémentaires conespondant à chaque combinaison des deux directions de polarisation et des deux directions d'analyse.

Une telle version de l'invention est décrite en 7.18.9. Dans la version décrite en 7.18.9. seule la direction d'analyse conespondant au rayon ordinaire est utilisée, cependant il est également possible de prendre en compte la direction d'analyse conespondant au rayon extraordinaire. Deux images planes en fréquence sont alors obtenues pour chaque direction de propagation de l'onde d'éclairage, conespondant l'une à l'indice ordinaire et l'autre à l'indice extraordinaire. La représentation fréquentielle finale est obtenue à partir de cet ensemble d'images en prenant en compte les variations de l'indice extraordinaire en chaque point des images planes en fréquence conespondant à l'indice extraordinaire.

3.11.3. Compensation par combinaison de plusieurs directions de polarisation et d'analyse

Dans le cas du matériau isotrope, la méthode décrite en 3.11.1. a le défaut de faire remonter considérablement le niveau de bruit. Une méthode évitant ce problème est d'acquérir au moins quatre images planes en fréquence conespondant à chaque combinaison de deux polarisations distinctes de l'onde d'éclairage et de deux directions de polarisation distinctes de l'onde diffractée. Un algorithme approprié permet alors, à partir de ces quatre images, de calculer une image unique conespondant à la grandeur scalaire recherchée. Selon une version de l'invention, le microscope comporte donc un moyen pour générer deux polarisations distinctes de l'onde d'éclairage, et un moyen pour analyser l'onde diffractée selon deux directions de polarisation distinctes. Selon une version de l'invention, le microscope comporte des moyens pour calculer, à partir des images planes en fréquence conespondant à chaque combinaison des deux directions de polarisation et des deux directions d'analyse, une image plane en fréquence unique représentant une grandeur scalaire complexe vérifiant la condition de diffraction homogène dans toutes les directions. Ce principe est utilisé dans les modes de réalisation 3,4, et 5. Le principe de calcul de ladite grandeur scalaire est détaillé en 7.12.1.

Dans le cas des longueurs d'ondes du visible, ledit moyen de variation de la polarisation de l'onde d'éclairage peut être constitué d'un rotateur de polarisation à cristaux liquides. Ledit moyen de variation de la direction d'analyse de l'onde diffractée peut être composé d'un rotateur de polarisation associé à un polariseur. Dans le cas de l'ultraviolet, ces dispositifs ne sont pas disponibles.

3.11.4. Variation de la direction de polarisation de l'onde d'éclairage dans le domaine UV Dans le domaine UV, les rotateurs de polarisation peuvent être remplacés par une lame d'onde en quartz tournant autour d'un axe par des moyens mécaniques. Cependant, ces mouvements mécaniques ralentissent considérablement le système. C'est pourquoi on utilise un système ou les seuls mouvements mécaniques sont ceux d'obturateurs et ou le faisceau à obturer a une extension spatiale aussi réduite que possible, de manière à ce que le mouvement de l'obturateur soit aussi faible que possible. Il est alors possible d'utiliser un obturateur rapide ou une obturation par roue tournante crénelée.

Selon une version de l'invention, un tel système comprend: - un séparateur de faisceau séparant le faisceau en un faisceau A et un faisceau B. -26-

- des lentilles placées sur chaque faisceau A et B et focalisant ces faisceaux sur des points de focalisation ou sont placés les obturateurs.

- un dispositif permettant de superposer à nouveau les faisceaux A et B ayant traversé leurs obturateurs respectifs.

- un dispositif placé sur la trajectoire de l'un des faisceaux A ou B. dans la partie de la trajectoire ou les deux faisceaux sont distincts, et modifiant la polarisation de ce faisceau.

Un tel système peut également comprendre des lentilles supplémentaires destinées à reformer des faisceaux parallèles après traversée des obturateurs. Il peut également comprendre un second dispositif de modification de la polarisation. Le dispositif de modification de la polarisation du faisceau peut être une lame d'onde. Les dispositifs de séparation de faisceau et de superposition de faisceau peuvent être des miroirs semi- transparents. Un tel dispositif est utilisé dans le mode de réalisation 5.

3.11.5. Variation de la direction d'analyse dans le domaine UV.

L'onde issue de l'objet peut être décomposée en une onde dont le vecteur champ électrique est parallèle à celui de l'onde de référence et une onde dont le vecteur champ électrique est orthogonal à celui de l'onde de référence. L'intensité reçue sur la surface de réception est la somme de l'intensité de l'onde de champ électrique orthogonal à l'onde de référence et de l'intensité produite par l'interférence de l'onde de référence et de l'onde de champ électrique parallèle à l'onde de référence. La première de ces intensités ne dépend pas de la phase de l'onde de référence et ne modifie donc pas la valeur complexe de l'onde issue de l'objet mesurée par combinaison de figures d'interférences conespondant à des phases différentes de l'onde de référence. C'est donc uniquement l'onde de vecteur champ électrique parallèle à celui de l'onde de référence qui est obtenue sur la surface de réception.

La direction d'analyse d'une onde peut donc être modifiée simplement en modifiant la direction de polarisation de l'onde de référence ou de manière symétrique en modifiant la direction de polarisation de l'onde issue de l'objet. Selon une version de l'invention, la direction d'analyse est modifiée par variation de la direction de polarisation de l'onde de référence ou de l'onde issue de l'objet.

Selon une version de l'invention, la polarisation de l'onde de référence ou de l'onde issue de l'objet est modifiée par un dispositif comportant:

- un séparateur de faisceau séparant le faisceau en deux faisceaux A et B - une lame d'onde LA disposée sur le trajet du faisceau A et une lame d'onde LB disposée sur le frajet du faisceau B, l'angle entre les axes neutres de ces deux lames d'onde étant de 45 degrés.

La direction de polarisation du faisceau ayant traversé de la lame d'onde LA se déduit alors de la direction de polarisation du faisceau ayant traversé la lame d'onde LB par une rotation dont l'angle est l'angle entre les axes neutres des lames d'onde LA et LB. Si cet angle est de 45 degrés, les faisceaux issus des lames LA et LB auront toujours des polarisations orthogonales, quelque soit la direction de polarisation du faisceau incident. Les deux faisceaux A et B peuvent ensuite être réunis par un dispositif de superposition après avoir traversé des obturateurs, comme dans le cas du dispositif décrit en 3.11.4. Ceci présente le désavantage de -27-

nécessiter l'utilisation d'obturateurs en un point de la trajectoire du faisceau ou la direction du faisceau est variable et ou le faisceau ne peut donc pas être focalisé sur un point fixe.

Selon une version de l'invention, les deux faisceaux A et B sont séparément superposés au faisceau issu de l'objet (s'ils constituent l'onde de référence) ou à l'onde de référence (s'ils sont issus de l'objet). Les figures d'interférence conespondant à chaque direction de polarisation sont alors formées sur deux surfaces de réception distinctes.

Que les images planes en fréquences conespondant à chaque polarisation soient obtenues sur des surfaces de réception distinctes ou sur la même surface de réception, il se crée alors un déphasage entre ces images qui doit être compensé. Selon une version de l'invention, les lames d'onde sont positionnées de mamere à ce que les faisceaux de référence et d'éclairage parvenant à une surface de réception aient des directions de polarisation différentes, de préférence à 45 degrés l'une de l'autre. Dans ces conditions, la partie de l'onde issue de l'objet qui comprend des fréquences voisines de l'onde d'éclairage est détectée sur les deux surfaces de réception et peut être utilisée pour calculer ladite différence de phase.

3.12. Système de suppression de l'éclairage direct

L'onde d'éclairage est généralement beaucoup plus intense que l'onde diffractée. Elle peut saturer les capteurs ou réduire considérablement le rapport signal sur bruit du système en rendant nécessaire une acquisition à un niveau élevé. La suppression de la partie non diffractée de l'onde d'éclairage pendant la phase d'acquisition ou pendant une partie de la phase d'acquisition améliore nettement les performances du système. Dans un plan de fréquence, la partie non diffractée de l'onde d'éclairage a une image ponctuelle et peut êfre supprimée en plaçant sur ce point un élément absorbant. Selon une version de l'invention, le système comprend donc un dispositif de suppression delà partie non diffractée de l'onde d'éclairage, placé dans un plan de fréquence, et absorbant le faisceau sur une zone réduite autour du point conespondant à cette onde d'éclairage.

Selon une version de l'invention, ce dispositif est constitué par un modulateur spatial d'intensité commandé pour être passant en tout point sauf sur une zone limitée autour du point d'impact de la partie non diffractée de l'onde d'éclairage. Cette version est mise en oeuvre dans le mode de réalisation 4.

Selon une autre version de l'invention, ce dispositif est constitué d'une vitre mobile en translation dans un plan de fréquence, un point noir absorbant placé sur la vitre ayant pour rôle d'anêter le faisceau direct, la position de la vitre étant commandée pour faire coïncider ce point noir avec le point d'impact de la partie non diffractée de l'onde d'éclairage. Cette version est mise en oeuvre dans le mode de réalisation 5.

3.13. Dispositif d'utilisation des modulateurs spatiaux.

Les modulateurs spatiaux utilisés en 3.10.2. ou en 3.12. peuvent être en particulier des modulateurs binaires rapides fonctionnant par réflexion. Ils sont en général utilisés à l'aide d'un miroir semi-transparent polarisant, qui est un dispositif de forme cubique renvoyant les faisceaux incidents dans deux directions différentes en fonction de leur polarisation. Ce dispositif, de part son épaisseur, engendre une légère abenation qui élargit le point conespondant à une fréquence donnée, ce qui est préjudiciable à la qualité des images obtenues. -28-

Pour éviter l'utilisation de ce dispositif, on peut utiliser des faisceaux parvenant au modulateur sous un angle oblique. Les faisceaux incident et réfléchi sont alors séparés. Cependant, cette méthode déforme la répartition des fréquences générées. Pour éviter cette déformation, ledit angle oblique doit être faible.

Selon une version de l'invention, ce problème est résolu en utilisant un dispositif constitué d'un miroir à deux faces réfléchissantes orthogonales et d'une lentille traversée dans un sens par le faisceau dirigé vers le modulateur et dans l'autre sens par le faisceau réfléchi par le modulateur. Le faisceau incident est réfléchi par une face du miroir, traverse la lentille, est réfléchi par le modulateur, refraverse la lentille en sens inverse et est réfléchi par la seconde face du miroir, reprenant sa direction initiale. Les faisceaux incident et réfléchi peuvent se superposer partiellement sur la lentille mais sont séparés sur le miroir à deux faces. Afin d'obtenir cette séparation sur le miroir, tout en ayant un angle oblique aussi faible que possible, le miroir à deux faces doit être à peu près positionné dans un plan focal de la lentille et le modulateur doit êfre positionné dans l'autre plan focal de la lentille.

3.14. Utilisation d'objectifs traversés dans les deux sens et/ou de plusieurs objectifs L'objet peut êfre éclairé par un coté et l'onde issue de l'objet peut être captée du coté opposé par un objectif, ce qui permet de reconstituer une partie de la représentation fréquentielle de l'objet. Toutefois, d'autres parties de la représentation fréquentielle de l'objet ne peuvent être reconstituées qu'à partir de l'onde se dirigeant vers le coté de l'objet d'où proviennent les ondes d'éclairage. Selon une version de l'invention, un objectif est associé à un système optique permettant d'une part la mesure sur un capteur de l'onde provenant de l'échantillon et ayant traversé l'objectif, et d'autre part la formation d'une onde d'éclairage qui après traversée de l'objectif devient dans l'échantillon une onde d'éclairage plane de direction variable. Cet objectif est alors traversé dans un sens par l'onde d'éclairage se dirigeant vers l'objet, et dans l'autre sens par l'onde diffractée issue de l'objet. Il joue à la fois le rôle d'objectif recevant l'onde issue de l'objet, et le rôle de système à forte ouverture transformant les variations de direction faibles de l'onde issue du déviateur de faisceau, en variations de direction élevées de l'onde dans l'objet. Ceci peut être réalisé par exemple à l'aide d'un miroir semi-transparent placé sur le frajet du faisceau issu de l'objet et superposant le faisceau issu de l'objet et dirigé dans un sens donné au faisceau d'éclairage se dirigeant en sens opposé. Cette version de l'invention est mise en oeuvre dans les modes de réalisation 3,4 et 5 qui comportent plusieurs objectifs. Une version n'utilisant qu'un objectif est décrite en 7.18.10. Les éventuelles limitations portant sur la direction de l'onde d'éclairage, caractérisée par son vecteur fréquence, influent sur les performances du système. Le maximum de précision est obtenu lorsque toutes les directions possibles sont utilisées. De même, il est souhaitable d'enregistrer l'onde diffractée par l'objet dans toutes les directions. Lorsqu'un seul objectif de microscope est utilisé, son ouverture limite les directions dans lesquelles on peut enregistrer l'onde diffractée par l'objet. Selon une version avantageuse de l'invention on utilise plusieurs objectifs focalisés sur l'échantillon, qui permettent d'enregistrer l'onde issue de l'échantillon suivant d'avantage de directions. Les objectifs couvrent alors la quasi-totalité de l' espace autour de l'échantillon, et les ondes d'éclairages doivent nécessairement traverser ces objectifs pour atteindre l'échantillon. Selon une version de l'invention, chaque objectif est associé à un système optique permettant d'une part la mesure sur un capteur de l'onde provenant de l'échantillon et ayant traversé l'objectif, et d'autre part la formation d'une onde d'éclairage -29-

qm après traversée de l'objectif devient dans l'échantillon une onde d'éclairage plane de direction vanable Les ondes d'éclairage peuvent alors être générées dans toutes les directions couvertes par l'ouverture des objectifs, et de même les ondes issues de l'objet peuvent être mesurées dans toutes ces directions Selon une version de l'invention, le système d'acquisition et de calcul prend en compte l'ensemble des ondes mesurées sur l'ensemble des capteurs pour l'ensemble des éclairages utilisés et génère à partir de ces données la représentation fréquentielle tndimensionnelle de l'objet Chaque couple (direction de l'onde d'éclairage-direction de l'onde issue de l'objet) conespond à un point de la représentation fréquentielle de l'objet, et la représentation fréquentielle ainsi générée comprend donc tous les points pouvant être obtenus a partir des ondes d'éclairage et des ondes drffractées respectivement produites et reçues par l'ensemble des objectifs II est possible d'utiliser un nombre élevé d'objectifs afin de recevoir la totalité des ondes issues de l'échantillon, ou afin d'augmenter la distance de travail en utilisant des objectifs de faible ouverture Cependant, la plupart des échantillons observés en pratique sont plans et peuvent de mamere commode êfre placés entre deux lamelles Une version de l'invention constituant le meilleur compromis entre la difficulté de mise en oeuvre et la performance est d'utiliser deux objectifs de microscope de large ouverture positionnes en vis-a-vis, l'échantillon plan étant introduit entre ces deux objectifs Cette solution est utilisée dans les modes de réalisation 3,4, et 5 Dans les modes de réalisation 1 et 2, de performance inféneure mais de réalisation plus aisée, un seul objectif de microscope est utilisé

3.15. Génération de faisceaux inverses Lorsque deux objectifs de microscope ou plus sont utilisés, une image plane en fréquence est générée à partir de l'onde reçue par chaque objectif Chaque point d'une image plane en fréquence conespond a un vecteur d'onde donné de l'onde diffractée II est nécessaire, pour pouvoir calculer la représentation fréquentielle tridimensionnelle de l'objet, de déterminer conectement ces vecteurs d'onde, et ce dans un repère commun aux vecteurs d'ondes reçus par chaque objectif La connaissance du facteur K et du centre optique, définis dans [Lauer 1], permet la détermination des vecteurs d'onde conespondant à chaque point d'une image en fréquence Cependant le repère utilise pour les représentations bidimensionnelles RA ( avant translation de vecteur -f_e ) reconstituées à partir de l'image plane en fréquence obtenue a partir d'un objectif donné est différent de celui utilise pour les représentations RB obtenues a partir de l'objectif en vis-a-vis Pour établir une conespondance entre ces deux repères il est nécessaire de déterminer les coordonnées de certains points à la fois dans le repère utilise pour RA et dans le repère utilise pour RB

Chaque point PA de la représentation RA est l'image d'un vecteur d'onde f_e de l'onde d'éclairage qui parvient à ce point en l'abscence d'objet, et a pour coordonnées celles de ce vecteur d'onde A ce vecteur conespond un vecteur d'onde -f_e de direction opposée dont l'image est un point PB de la représentation RB Les coordonnées du point PB dans le repère utilisé pour RA sont l'opposé des coordonnées du point PA dans ce repère La conespondance entre les deux repères peut donc être établie si les coordonnées du point PB sont également déterminées dans le repère RB Ceci peut êfre fait en générant par des moyens optiques un faisceau de vecteur d'onde opposé au faisceau d'éclairage et en déterminant les coordonnées du point image de ce faiscau dans -30-

le repère utilisé pour RB. Si cette conespondance est établie en un nombre suffisant de points, la relation enfre les repères utilisés pour RB etRA peut êfre facilement déterminée et ces représentations peuvent être modifiées pour utiliser un repère commun.

De mamere similaire, on peut obtenir par des moyens optiques une conespondance directe entre les repères RB tRA. Ceci nécessite le réglage d'un certain nombre d'éléments optiques. Pour effectuer ce réglage, on peut vérifier en continu la conespondance entre les coordonnées du point PB obtenues dans chacun des repères utilisés, et ce pour un certain nombre de points PB (trois points en principe).

Dans les deux cas, il est nécessaire de générer un faisceau de mêmes caractéristiques que le faisceau d'éclairage, mais se propageant en sens inverse. D'une manière générale, étant donné un faisceau utilisé dans le système, le terme « faisceau indicateur inverse » désignera un faisceau de mêmes caractéristiques mais se propageant en sens opposé.

Selon une version de l'invention, le microscope comporte donc, pendant la phase de réglage, des moyens pour générer un faisceau indicateur inverse de l'onde d'éclairage. Ces moyens peuvent éventuellement être supprimés après la phase de réglage conespondant à la détermination, par des moyens de calcul ou par des moyens optiques, des conespondances enfre les repères RB etRA.

Selon une version de l'invention, le microscope comporte également des moyens pour générer, pendant une phase de réglage, un faisceau indicateur inverse de l'onde de référence. Ce faisceau sera également utilisé dans certaines phases de réglage. Par exemple, si la surface de réception est dans un plan de fréquence, l'onde de référence est centrée virtuellement en un point central de l'objet. Le faisceau indicateur inverse de l'onde de référence permet de régler la position des objectifs de manière à ce que ces objectifs soient focalisés sur le même point.

Selon une version de l'invention, lorsque la surface de réception est dans un plan d'espace, un faisceau supplémentaire centré sur ce plan d'espace est également utilisé pendant une phase de réglage, ainsi que son faisceau indicateur inverse. Ce faisceau facilite par exemple le réglage de position des objectifs en l'abscence d'une onde de référence centrée sur un point de l'objet.

Dans les modes de réalisation 3,4, et 5, chaque faisceau utilisé a un faisceau indicateur inverse, et les moyens de génération de ces indicateurs inverses sont décrits comme faisant partie du microscope et ne sont pas supprimés après que les réglages aient été terminés: des obturateurs sont simplement utilisés pour arrêter ces faisceaux. Selon une version de l'invention, le dispositif générant un faisceau indicateur inverse à partir d'un faisceau d'origine comprend:

- un miroir semi-transparent séparant le faisceau d'origine en un faisceau non modifié et un faisceau secondaire.

- une lentille focalisant le faisceau secondaire dans un plan de focalisation.

- un miroir placé au point de focalisation qui renvoie le faisceau inversé vers ladite lentille. Le fait que le miroir soit placé au point de focalisation garantit que le faisceau réfléchi a exactement la direction inverse du faisceau incidentLe faisceau réfléchi retraverse la lentille en sens inverse. La partie de ce faisceau qui est ensuite réfléchie à nouveau par le miroir semi-transparent a les mêmes caractéristiques que le faisceau non modifié mais est dirigée en sens inverse. -31-

3.16. Détermination des écarts de position des objectifs.

A partir des ondes issue de l'objet et traversant un objectif donné, on peut générer une représentation tridimensionnelle de l'objet observé. En représentation spatiale, cette représentation est relative à un point origine donné, que l'on appellera point caractéristique de l'objectif. En général, les points caractéristiques des objectifs utilisés ne coïncident pas. Il s'ensuit que la partie de la représentation fréquentielle générée à partir d'un objectif est translatée par rapport à celle obtenue à partir d'un autre objectif. Cette translation se traduit par une modulation en fréquence, les points dans l'espace frequentiel obtenus à partir d'un objectif donné étant donc affectés d'un décalage de phase variable conespondant à cette modulation. Selon une version de l'invention, le microscope comporte des moyens pour compenser compenser cette translation et générer une représentation de l'objet dans laquelle le décalage de phase affectant chaque point de la représentation est constant. Pour pouvoir superposer les représentations obtenues à partir de chaque objectif, et selon une version de l'invention, le microscope comporte des moyens pour déterminer les coordonnées des points caractéristiques de chaque objectif de microscope, dans un repère commun. Il est alors possible de translater de mamere appropriée chaque représentation avant de les superposer. Cette franslation dans le domaine spatial équivaut à une démodulation dans le domaine frequentiel, qui peut êfre effectuée directement sur les images planes en fréquence.

3.16.1. détermination des coordonnées des points caractéristiques de chaque objectif.

Selon une version de l'invention, ceci peut être obtenu en utilisant un faisceau centré sur un point central de l'objet observé et son faisceau indicateur inverse. Ce faisceau est reçu sur un capteur après avoir fraversé les objectifs, et son indicateur inverse est reçu sur un autre capteur. A partir du faisceau reçu sur un capteur, la représentation fréquentielle bidimensionnelle de ce faisceau peut être obtenue et les coordonnées de son point de focalisation peuvent être déterminées. Le point de focalisation du faisceau est le même que celui de son faisceau indicateur inverse. La différence entre les coordonnées du point de focalisation du faisceau obtenues à partir d'un objectif et celles de son indicateur inverse obtenue à partir d'un autre objectif est égale à la différence entre les coordonnées des points caractéristiques de ces objectifs dans un repère commun.

Cette méthode peut être mise en oeuvre avec un nombre quelconque d'objectifs, à la condition que la configuration soit telle qu'aucun groupe d'objectifs ne soit isolé optiquement, c'est-à-dire qu'un tel groupe d'objectif, s'il ne rassemble pas tous les objectifs utilisés, puisse toujours être atteint par un faisceau issu d'un objectif extérieur au groupe. Par exemple si 6 objectifs sont utilisés, ils ne doivent pas êfre groupés deux par deux: chaque objectif doit recevoir des faisceaux provenant de deux autres objectifs. Cet aspect de l'invention est mis en oeuvre en 7.9.1. et en 9.12.

3.16.2.Détermination des déplacements de chaque objectif II est généralement nécessaire de déplacer les objectifs pour introduire l'objet observé. Cette opération modifie les coordonnées obtenues et rend nécessaire la répétition de l'opération précédente. Cependant, la présence de l'objet perturbe le faisceau qui le traverse et empêche l'obtention d'un résultat précis. Selon une version de l'invention, ce problème est résolu en utilisant des faisceaux parallèles de direction variable. Un -32-

faisceau parallèle a une image plane en fréquence ponctuelle et la valeur obtenue en ce point est peu affectée par les inégularités locales de l'échantillon observé.

La différence entre la phase d'un tel faisceau reçu sur un capteur avant déplacement des objectifs et la phase du même faisceau après déplacement des objectifs dépend du vecteur caractérisant le déplacement du point caractéristique de l'objectif recevant le faisceau par rapport au point caractéristique de l'objectif d'où provient le faisceau. A partir de ces différences de phase établies pour un nombre suffisant de faisceaux il est possible, par un algorithme approprié, de déterminer ce déplacement. Selon cette version de l'invention, la phase d'un ensemble de faisceaux parallèles parvenant à un capteur donné est donc mesurée une première fois en l'abscence de l'objet et une deuxième fois en présence de l'objet. A partir des différences de phase et éventuellement des rapports d'intensité ainsi mesurés, un algorithme approprié peut recalculer le déplacement des points caractéristiques de chaque objectif. Ces différences de phase et d'intensité peuvent être caractérisés, pour chaque faisceau parallèle, par une valeur complexe obtenue comme quotient de la valeur obtenue en présence de l'objet par la valeur obtenue en l'abscence de l'objet en un point conespondant de l'image plane en fréquence. Cette valeur sera appelée le rapport de phase et d'intensité sur un faisceau parallèle donné. Connaissant les coordonnées initiales du point d'origine de chaque représentation et ses déplacements, ses coordonnées courantes peuvent en êfre déduites et l'écart de position peut être compensé. Cette méthode peut être mise en oeuvre avec un nombre quelconque d'objectifs, à la même condition qu'en 3.16.1.

La première mesure en l'abscence de l'objet est réalisée par exemple en 7.9.2. et en 9.13. Dans ces deux cas, la conection liée aux valeurs de position déterminées comme indiqué en 3.16.1. est décrite dans le même paragraphe que cette mesure.

La deuxième mesure en présence de l'objet et le calcul des déplacements sont par exemple effectués en 7.11. et en 9.15. Dans les deux cas les positions absolues sont directement calculées, sans passer par les déplacements, la conection liée aux valeurs de position ayant déjà été effectuée comme indiqué plus haut . Cette détermination est couplée avec le calcul de l'indice moyen de l'objet dont le principe est donné au paragraphe suivant.

3.17. Détermination de l'indice et de l'épaisseur de l'objet 3.17.1. Principe

Lorsque deux objectifs de microscope en vis-à-vis sont utilisés et lorsque l'objet observé forme une couche comprises entre deux lamelles planes, l'indice moyen de l'objet, s'il diffère de l'indice nominal de l'objectif (indice du liquide optique prévu pour être utilisé avec l'objectif), crée une abenation sphérique qui fausse les représentations tridimensionnelles obtenues. Cette abenation sphérique se traduit par des variations de phase et d'intensité des faisceaux mesurés en 3.16.2., ces variations dépendant de l'indice et de l'épaisseur de l'objet. Selon une version de l'invention, un programme utilise les valeurs mesurées en 3.16.2. pour déterminer simultanément les déplacements des objectifs, l'indice et l'épaisseur de l'objet.

Le calcul effectué en 7.11. ou en 9.15. est une réalisation de cet aspect de l'invention. -33-

3.17.2. Algorithme de minimisation

Pour des valeurs données des déplacements et de l'indice et l'épaisseur de l'objet il est possible de calculer les rapports de phase et d' intensité sur chaque faisceau parallèle Selon une version de l'invention, l'algonthme de calcul détermine les valeurs des déplacements et de l'indice et l'épaisseur de l'objet qui minimisent l'écart quadratique moyen entre les valeurs théonques ainsi calculées et les valeurs effectivement mesurées

Cet algonthme doit déterminer un minimum absolu sur un ensemble de cinq paramèfres d'une fonction bruitée, la fonction écart quadratique présentant même en l'abscence de bruit des minima locaux autres que le maximum absolu Ce problème se prête donc assez mal à des méthodes classiques de minimisation Lorsque les valeurs des paramèfres sont connues d'une mamere approximative, l'algonthme peut maximiser dans un premier temps la valeur au point ongine obtenue en compensant les écarts de phase dûs a ces paramètre Une maxinusation d'une fonction étant équivalente à une minimisation de son opposé, on utilisera uniquement le terme maxinusation pour définir l'algonthme, mais on pounait aussi bien parler de minimisation

Selon une version de 1^* invention, l'algonthme comporte des phases itératives aucours desquels il détermine à chaque itération un maximum absolu sur un ensemble de valeurs des paramètres vanant de mamere discrète, la fonction à maximiser ayant été préalablement filtrée pour suppnmer les fréquences qui causeraient un repliement de spectre dans un échantillonnage au pas de vanation des paramètres Selon cette version de l'invention, le pas est réduit à chaque itération et le point central de l'ensemble sur lequel vanent les paramètres aucours d'une itération est le maximum déterminé à l'itération précédente Un tel algonthme permet en général de converger vers la solution malgré les maxima locaux et le nombre élevé de paramètres

Un tel algonthme est décnt en 7 8.2

3.18. Détermination de la position de l'objet. La position exacte de l'objet n'a pas d'influence sur les valeurs mesurées en 3 16 2 et ne peut donc pas être obtenue à partir de ces valeurs Par contre elle peut modifier les représentations tndimensionnelles obtenues l'abenation sphénque affectant une représentation tridimensionnelle donnée dépend de la position de l'objet Dans le cas ou l'mdice de l'objet diffère de l'mdice nominal des objectifs, cette position doit donc être déterminée La position de l'objet par rapport aux objectifs affecte la bonne superposition des représentations bidimensionnelles recalées en phase Si elle n'est pas conectement évaluée et pnse en compte comme facteur de conection, des différences de phase anormales apparaissent entre des couples de représentations bidimensionnelles recalées en phase, sur la partie de l'espace des fréquences qui conespond à l'intersection de ces représentations

Selon une version de l'invention, la mesure de la position de l'objet par rapport aux objectifs comporte une phase d'acquisition, aucours de laquelle une séné d'images planes en fréquence sont acquises, conespondant à une séné de faisceaux d'éclairage d'onentation vanable Connaissant les paramèfres de position, l'indice et l'épaisseur de l'objet, préalablement calculés par l'algonthme de maxinusation décnt en 3 17 , et connaissant la position recherchée, un programme peut déterminer les représentations bidimensionnelles conespondant à chaque -34-

îmage plane en fréquence Selon cette version de l'invention, le programme de détermination de la position de l'objet par rapport aux objectifs est donc un programme de minimisation qui détermine la valeur du paramètre de position qui minimise les écarts de phase anormaux Un tel programme est détaille au paragraphe 17 15

3.19. Utilisation d'objectifs présentant des aberrations.

La conception d'un objectif dépourvu d'abenations est difficile Les abenations augmentant en proportion de la taille des éléments optiques utilisés, il est difficile d'obtenir une distance de travail élevée II est également difficile d'obtemr une ouverture numénque élevée

Dans le présent microscope, la valeur complexe de l'onde reçue sur une surface de réception est emegisfree La représentation fréquentielle d'une partie de l'onde issue de l'objet peut être reconstituée des lors que cette partie de l'onde issue de l'objet parvient à la surface de réception La représentation fréquentielle de l'onde issue de l'objet est obtenue, dans tous les cas, par une relation linéaire à partir de l'onde parvenant à la surface de réception La seule propnéte « indispensable » de l'objectif est donc de capter une partie notable de l'onde issue de l'objet, et de la transformer en un faisceau paraxial parvenant à la surface de réception Un objectif ayant cette seule propnéte peut facilement être conçu et avoir une ouverture numénque et une distance de travail élevés Selon une version de l'invention, un objectif affecté par des abenations supérieures a la limite imposée par la diffraction est utilisé, et le programme de calcul inverse la relation linéaire entre l'onde issue de l'objet et l'onde captée sur la surface de réception de mamere à compenser ces abenations

Selon une version de l'invention, l'objectif de microscope est conçu de mamere a vérifier la propnéte suivante

(1)- L'abenation affectant l'image formée dans le plan image de l'objectif doit rester mfeneure a une fraction du diamètre de la partie observée de cette image

La contrainte (1) permet de s'assurer que pour la majeure partie de l'objet étudié, l'ensemble du faisceau provenant d'un point donne parvienne à la surface de réception En effet, l'étendue spatiale de l'échantillon observe est limitée, selon les systèmes, par un diaphragme ou par la taille du capteur utilise En présence d'abenation sphénque, lorsque la distance enfre un point et la limite de la zone d'observation est inféneure a la distance caracténstique de l'abenation sphénque, alors une partie des rayons issus de ce point ne parvient pas a la surface de réception et l'image de ce point ne peut donc pas être reconstituée avec précision Si la zone concernée reste de petite taille, cet inconvément est peu gênant c'est ce qui est garanti par le respect de la condition (1) Si la zone concernée était trop importante, la précision serait affectée sur l'ensemble de l'image

La contrainte (1) est similaire à la contrainte usuelle concernant l'abenation sphénque, mais est considérablement allégée En effet des résultats de bonne qualité peuvent être obtenus avec une abenation sphénque de l'ordre d'une dizaine de longueurs d'onde, alors qu'en microscopie classique l'abenation sphénque doit êfre d'une fraction de longueur d'onde Toutefois, un objectif n'ayant pas certaines propnetes supplémentaires peut être difficile a utiliser En effet, la relation linéaire liant l'onde reçue sur la surface de réception à la représentation fréquentielle de l'onde issue de l'objet peut être relativement complexe La compensation algonthnuque des abenations peut alors -35-

nécessiter des volumes de calcul élevés Selon une version de l'invention, ce problème est résolu en utilisant un objectif ayant en plus la propnéte suivante

(2)- L'image, dans le plan focal image, d'un faisceau qui est parallèle dans l'objet observé, doit être ponctuelle L'image plane en fréquence utilisée dans l'ensemble des modes de réalisation est équivalente à l'image formée directement dans le plan focal image La contrainte (2) signifie que chaque point d'une image plane en fréquence conespond a une fréquence donnée de l'onde dans l'objet Si la contrainte (2) n'était pas respectée, il serait nécessaire d'utiliser un algonthme généralisé consistant à obtemr la valeur associée à un point donné comme combinaison linéaire des valeurs détectées sur un ensemble de points voisins La contrainte (2) est relativement simple à respecter L'utilisation d'un objectif ne respectant pas la condition (2) ne présenterait qu'un intérêt limité, mais compliquerait considérablement les calculs nécessaires à l'obtention d'une image Un exemple d'utilisation d'un objectif vérifiant les contraintes (1) et (2) est décrit au paragraphe 7 21

Dans le cas d'un objectif respectant umquement les conditions (1) et (2), l'algonthme de reconstitution d'image doit prendre en compte la relation entre les coordonnées d'un point sur l'image plane en fréquence et la fréquence conespondante de l'onde dans l'objet On note B(a) le point image, dans le plan focal image, d'un faisceau parallèle dans l'objet et faisant dans l'objet un angle a avec l'axe optique

Selon une version de l'invention, les algonthmes sont simplifiés en utilisant un objectif vérifiant en plus la contrainte suivante (3)- La distance enfre le point B(a) et le point 5(0) doit être proportionnelle à smα Le respect de la contrainte (3) implique que les coordonnées d'un point sur l'image plane en fréquence sont directement proportionnelles aux composantes suivant deux axes correspondants du vecteur d'onde de l'onde dans l'objet, ce qui simplifie considérablement les calculs Si un objectif respecte les contraintes (1)(2)(3), l'abenation sphénque se traduit umquement par un déphasage de chaque point d'une représentation fréquentielle donnée, déphasage qui peut alors aisément être compensé Un exemple d'utilisation d'un objectif vérifiant les contraintes (1)(2)(3) est décnt en 7 20 La condition (3) est à peu près équivalente à la condition des sinus d'Abbe Dans un objectif vérifiant umquement les contraintes (1)(2)(3), l'image est perturbée à proximité du diaphragme sur une distance équivalente à la distance caracténstique de l'abenation sphénque Cette perturbation est suppnmée par l'utilisation d'un objectif classique dépourvu d'abenation sphénque, qui permet donc à pnon d'obtemr les meilleures images Cependant, l'utilisation d'un objectif vénfiant uniquement (1)(2)(3) permet d'alléger considérablement les contraintes de conception de l'objectif Ceci permet d'obtemr un objectif à distance de travail plus élevée, un objectif moins cher, ou un objectif d'ouverture numénque plus élevée Cette solution technique peut donc dans certains cas être préférable

L'utilisation d'un tel objectif de microscope nécessite la compensation algorithmique des écarts de phase affectant l'image plane en fréquence et qui sont la conséquence de l'abenation sphénque Ceci implique la détermination de la fonction caractensant l'abenation sphénque induite par le microscope Du fait que l'objectif présente une symétrie de révolution, le décalage de phase affectant un point d'une image plane en fréquence dépend umquement de la distance enfre ce point et le centre optique L'abenation sphénque peut donc être caracténsée par une fonction à une dimension représentant le décalage de phase en fonction de cette distance -36-

Selon une version de l'invention, cette fonction peut êfre obtenue par le programme de calcul optique utilisé pour la conception de l'objectif En effet, ce programme permet d'effectuer des tracés de rayons et peut être facilement amélioré pour permettre également les calculs de chemin optique. Les déphasages étant proportionnels aux écarts de chemin optique affectant des rayons issus d'un même point, ils peuvent êfre déduits de ce type de considérations géométnques

Selon une autre version de l'invention, cette fonction peut être mesurée par des moyens optiques Selon cette version de l'invention

- on utilise deux objectifs de microscope identiques en vis-à-vis

- on utilise une onde d'éclairage centrée sur un point du plan ou un premier objectif forme normalement l'image de l'échantillon observé

- on détecte l'onde reçue dans le plan ou le second objectif forme l'image de l'échantillon observe

En l'abscence d'abenation sphénque, la phase de l'onde détectée doit être constante En présence d'abenation sphénque, l'écart de phase dû à l'abenation est le double de l'écart dû à un seul objectif de microscope Ceci permet d'obtenir la fonction recherchée

3.20. Compensation de l'aberration sphérique et des écarts de position.

L'abenation sphénque due à l'indice de l'objet, l'abenation sphénque due aux propnétés de l'objectif, et les eneurs de positionnement des objectifs, se traduisent tous par des déphasages appliqués à l'image plane en fréquence Ces déphasages doivent être corngés pour obtenir une image de bonne qualité Selon une version de l'invention, cette conection est effectuée en multipliant chaque image plane en fréquence par une fonction de conection tenant compte des divers paramètres déterminés plus haut Le calcul d'une telle fonction est exposé en 7 16 et l'opération de multiplication est effectuée par exemple dans l'étape 2 de l'algonthme décnt en 7 17 Dans le cas ou un objectif présentant de l'abenation sphénque est utilisée, le calcul décnt en 7 16 doit être modifié comme indique en 7 20

3.21. Echantillonnage régulier

Lorsque deux objectifs de microscope sont utilisés, le pas d'échantillonnage sur l'image plane en fréquence générée a partir d'une des surfaces de réception peut être pns comme base du pas d'échantillonnage de la représentation tridimensionnelle de l'objet suivant deux axes conespondants Si aucune précaution n'est pnse - Les points images des ondes d'éclairage sur cette image plane en fréquence ne conespondent pas a des valeurs entières des coordonnées en pixels

- Dans le cas ou deux objectifs sont utilisés, le pas d'échantillonnage et les axes sur l'image plane en fréquence générée a partir d'une surface de réception associée à l'objectif en vis-à-vis ne conespondent pas au pas d'échantillonnage et aux axes de la représentation tridimensionnelle de l'objet II s'ensuit que l'échantillonnage de la représentation tndimensionnelle de l'objet n'est pas régulier Selon une version de l'invention, cet échantillonnage est rendu régulier suivant deux axes conespondant aux axes des représentations planes en fréquence La qualité de la représentation tndimensionnelle de l'objet est alors nettement améliorée -37-

L'image plane en fréquence peut en particulier être modifiée, du fait des imperfections du système optique, par rotation ou par homothétie. Pour obtenir un échantillonnage régulier, il est nécessaire d'annuler ou de compenser ces imperfections.

Par ailleurs, dans le mode de réalisation 4, il doit exister des conespondances point à point entre les différents SLM utilisés et les CCD. La réalisation de ces conespondances nécessite le même type de réglages.

Selon une version de l'invention, le microscope comporte donc un ou plusieurs dispositifs optiques permettant un réglage en rotation des images générées dans les plans de fréquence, et/ou un ou plusieurs dispositifs permettant le réglage en grandissement des images générées dans les plans de fréquence.

3.21.1. Réglage de l'échelle de la représentation (homothétie)

Ce réglage est en fait un réglage de grandissement. Selon une version de l'invention, le grandissement d'une image est ajusté à l'aide d'un système optique de distance focale variable. Un tel système peut par exemple être composé de deux lentilles, une variation de la distance entre lesdites lentilles se traduisant par une variation de la distance focale de l'ensemble. Un tel dispositif est utilisé dans les modes de réalisation 4 et 5 et est décrit en 8.1.4.1.

3.21.2. Réglage en rotation d'une image

Selon une version de l'invention, ce réglage est effectué à l'aide d'un dispositif constitué d'un premier groupe de miroirs fixes et d'un second groupe de miroirs, vérifiant les conditions suivantes: - le premier groupe de miroirs symétrise le vecteur d'onde du faisceau incident par rapport à un axe donné.

- le second groupe de miroirs symétrise le vecteur d'onde du faisceau incident par rapport à un second axe.

- le second groupe de miroirs est mobile en rotation autour d'un axe orthogonal au plan de ces deux axes.

L'ensemble des deux groupes de miroirs a alors l'effet de faire effectuer une rotation au faisceau représenté dans un plan de fréquence, l'angle de rotation étant le double de l'angle entre les deux axes de symétrie. Un tel dispositif est utilisé dans les modes de réalisation 4 et 5 et est décrit en 8.1.4.2.

3.22. Système de décalage de phase

Le système de décalage de phase utilisé peut être un miroir piézoélectrique, ce qui constitue la solution la plus usuelle. Cependant, utilisé à vitesse élevée, un tel miroir génère des vibrations. Selon une version avantageuse de l'invention, on utilise comme système de décalage de phase une lame biréfringente induisant un décalage de phase de 120 degrés entre ses deux axes neutres, précédée d'un rotateur de polarisation permettant d'orienter le vecteur champ électrique du faisceau suivant l'un ou l'autre desdits axes neutres, et suivie d'un second rotateur de polarisation permettant de ramener la direction de polarisation du faisceau en sortie du dispositif à sa direction en entrée du dispositif. Ce système ne permettant qu'un décalage de 120 degrés, il est nécessaire d'en associer deux en série pour obtenir un décalage de -120, 0, ou +120 degrés. -38-

3.23. Méthode de traitement des données dans le cas d'une mémoire vive limitée

Les calculs de représentation fréquentielle tndimensionnelle mettent en oeuvre des quantités importantes de données Ces données étant normalement accédées dans un ordre aléatoire, elles ne peuvent pas être stockées pendant les calculs sur un support à accès séquentiel comme un disque dur et doivent être stockées sur un support à accès aléatoire comme une mémoire interne d'ordinateur (RAM)

Selon une version avantageuse de l'invention, adaptée au cas ou le système ne dispose pas de suffisamment de mémoire vive pour pouvoir stocker l'ensemble des données, l'algonthme de calcul est modifie de mamere à traiter les données bloc par bloc, un bloc conespondant à une quantité importante de données qui peuvent alors êfre stockées séquentiellement sur un support à accès séquentiel et chargées en mémoire centrale umquement pendant le temps de traitement dudit bloc A cette fin

- L'algonthme modifié effectue dans un espace tndimensionnel des traitements plan honzontal par plan honzontal, chaque plan honzontal étant stocké sur le support à accès séquentiel en un seul bloc

- Afin de pouvoir effectuer également des traitements suivant la dimension verticale, l'algonthme intègre des phases d'échange d'axes qui permettent de ramener provisoirement l'axe vertical dans un plan honzontal - La procédure d'échange d'axes opère bloc par bloc, les blocs ayant généralement des dimensions égales ou proches selon les deux axes à échanger et ayant pour taille en octets la taille maximale qui puisse être stockée en mémoire centrale du système (mémoire RAM a accès aléatoire)

Cette méthode est mise en oeuvre dans le mode de réalisation 1 et déente au paragraphe 5 21

3.24. Images générées par le microscope.

Les représentations tndimensionnelles générées par le présent microscope peuvent êfre stockées et transmises sous forme d'un tableau à trois dimensions de nombres complexes Selon une version de l^'invention il est possible de générer à partir de ce tableau des coupes ou des projections bidimensionnelles représentant soit l'indice soit l'absorbtivité dans l'objet Dans le cas d'une projection, on génère une projection de l'image tndimensionnelle sur un plan de projection et suivant une direction de projection orthogonale au plan de projection Chaque point du plan de projection est obtenu à partir de l'ensemble des valeurs de la représentation tndimensionnelle spatiale qui se trouvent sur une droite passant par ce point et dingée selon la direction de projection

Selon une version de l'invention, la valeur associée à chaque point du plan de projection est obtenue en extrayant la valeur maximale de la partie réelle ou imaginaire ou du module des points de la représentation spatiale tndimensionnelle situes sur la droite conespondante

Selon une version de l'invention, la valeur associée à chaque point du plan de projection est obtenue en intégrant la valeur complexe des points de la représentation spatiale tndimensionnelle situes sur la droite conespondante II est alors possible de visualiser soit la partie réelle soit la partie imaginaire de la projection ainsi réalisée Selon cette version de l'invention, la projection peut être obtenue plus rapidement de la mamere suivante en deux étapes étape 1 extraction, en représentation fréquentielle, d'un plan passant par l'ongme et orthogonal à la direction de projection -39-

etape 2 transformation de Founer inverse de ce plan

Le tableau bidimensionnel ainsi obtenu constitue une projection suivant la direction ayant servi à extraire le plan de fréquence

3.25. Système de positionnement des éléments optiques.

Les modes de réalisation décnts nécessitent l'utilisation de nombreux positionneurs de bonne précision Ces positionneurs sont des éléments coûteux peu adaptés a une fabπcation en séné et susceptibles de se dérégler avec le temps

Selon une version de l'invention, ce problème est réglé en utilisant lors de la fabncation du microscope des positionneurs amovibles, chaque élément étant positionné puis fixé par un liant, par exemple une colle, et le positionneur étant retiré après solidification définitive du liant

3.26. Système de protection contre les chocs, les vibrations et la poussière.

Les microscopes décnts sont constitués d'un ensemble d'éléments fixés à une table optique Lors d'un éventuel transport, des chocs même légers peuvent entraîner un dérèglement du système Lors d'une utilisation prolongée, la poussière peut se déposer sur les différents éléments optiques

Selon une version de l'invention, la plus grande partie du dispositif optique est inclus dans une boîte hermétiquement fermée qui est elle-même incluse dans une boîte plus grande, la liaison entre les deux boîtes se faisant par l'intermédiaire d'amortisseurs disposés sur chaque coté de ladite boîte hermétiquement fermée Ce système protège le microscope des chocs et de la poussière tout en permettant une bonne suspension de la table optique

4.Description sommaire des dessins: Les Fig 1 à 24 se rapportent à un premier mode de réalisation La Fig 1 est un schéma d'ensemble de l'optique du microscope Les Fig 2 et 3 représentent le détail du positionneur angulaire (110) déjà représente sur la Fig 1 La Fig 4 est un schéma d'ensemble du support mécanique vertical et antivibratoire du microscope La Fig 5 représente le détail d'un tendeur de la Fig 4 La Fig 6 représente un exemple de dimensionnement de la partie optique Les Fig 7 à 9 et 15 et 16 sont des représentations graphiques servant de support à l'explication du pnncipe de fonctionnement du microscope La Fig 10 représente l'algonthme d'un programme permettant de régler les tensions de commande du piézoélectnque (122) La Fig 11 représente l'algonthme détaillé d'une procédure de pnse d^'images utilisée dans le programme précédent La Fig 12 représente l'algonthme d'un programme permettant de régler l'atténuateur d'intensité constitué du polanseur (105) et du rotateur de polansation (104) et d'obtemr ses caracténstiques La Fig 13 représente l'algonthme détaillé d'une procédure 'bas mveau' de pnse d'images utilisée dans le programme précédent et dans les programmes d'acquisition d'image 2D ou 3D La Fig 14 représente l'algonthme d'un programme de focalisation permettant d'obtenir une image 2D et de focaliser l'objectif de microscope (113) La fig 17 sert de support aux explications concernant le réglage du condenseur La Fig 18 représente l'algonthme du programme d'acquisition d'image tndimensionnelle La Fig 19 représente l'algonthme d'un programme de calcul générant a partir des résultats de 1 acquisition une -40-

représentaùon tndimensionnelle de l'objet La Fig 20 représente schematiquement une opération effectuée par la première partie de ce programme La Fig 21 représente le détail de l'algonthme de cette première partie La Fig 22 représente schematiquement une opération effectuée par la deuxième partie de ce programme La Fig 23 représente l'algonthme d'une troisième partie de ce programme La Fig 24 représente l'algonthme d'une dernière partie de ce programme

Les Fig 25 et 26 se rapportent à un second mode de réalisation La Fig 25 est un schéma d'ensemble de la partie optique du microscope La Fig 26 représente l'algonthme de la procédure 'bas mveau' d'acquisition d'images utilisée

La Fig 71 illustre un appareil spécifique utilisé dans les opérations de réglage pour les modes de réalisation 3 à 5

Les Fig 27 à 59 se rapportent à un troisième mode de réalisation Les Fig 27 et 28 constituent un schéma d'ensemble de la partie optique du microscope La Fig 29 schématise le frajet optique des rayons enfre l'objectif et le capteur La Fig 30 représente le dispositif d'atténuation de faisceau utilisé La Fig 31 est un schéma de pnncipe illustrant son fonctionnement dans le cas ou il y a effectivement atténuation La Fig 32 est un schéma de pnncipe illustrant son fonctionnement dans le cas ou il n'y a pas d'atténuation La Fig 33 représente le dispositif de décalage de phase utilisé La Fig 34 est un schéma de pnncipe illustrant son fonctionnement La Fig 35 reprend la Fig 34 en indiquant les déphasages des différents vecteurs La Fig 36 reprend la Fig 34 en indiquant le module des différents vecteurs La Fig 37 représente une umté élémentaire du dispositif de déviation de faisceau utilisé La Fig 38 représente le dispositif de déviation du faisceau et de commutation, forme par association de ces umtes élémentaires Les Fig 39 et 40 sont des schémas de pnncipe permettant de comprendre le fonctionnement d'une umté élémentaire La Fig 39 conespond a une direction de déviation et la Fig 40 à l'autre direction de déviation possible La Fig 41 illustre le calcul de la déviation du faisceau par un pnsme Les Fig 42 à 44 illustrent des étapes d'une procédure de marquage des rotateurs de phase La Fig 42 illustre la première étape et les Fig 43 et 44 illustrent une deuxième étape, dans deux cas différents La Fig 45 illustre le calcul de la différence de marche prodmte sur un faisceau parallèle par un objet d'indice et d'épaisseur donnes La Fig 46 illustre le calcul de la différence de marche produite sur un faisceau parallèle par un déplacement du point d'ongme de l'onde de référence, par rapport auquel le frajet optique est calculé Les Fig 47 à 50 et la Fig 60 illustrent un algonthme de calcul des valeurs d'indice et d'épaisseur de l'échantillon ainsi que du déplacement du point d'ongme de l'onde de référence La Fig 47 conespond au niveau le plus élevé de cet algonthme et la Fig 50 au mveau le plus bas La Fig 51 représente dans un espace tndimensionnel différents vecteurs utilises pour évaluer l'effet sur l'onde diffractée de la polansation du faisceau d'éclairage La Fig 52 représente dans le plan d'un capteur des vecteurs déduits des précédents La Fig 53 représente un algonthme permettant d'obtenir des indices de commande du déviateur de faisceau à partir des coordonnées du point d'impact direct recherché pour le faisceau d'éclairage La Fig 54 illustre le calcul de la différence de marche d'une onde issue d'un point de l'objet par rapport a une onde de référence La Fig 55 illustre le calcul de la différence de marche entre une onde issue d'un point de l'objet et les ondes de référence utilisées sur les deux capteurs du système La Fig 56 illustre la trajectoire, sur un des capteurs du point d'impact direct de l'onde d'éclairage, pendant une procédure de pnse d'image La Fig 57 représente un algonthme déterminant la position de l'objet par rapport aux objectifs La Fig 58 illustre la mamere dont la -41-

représentation fréquentielle tridimensionnelle de l'objet est obtenue par superposition de représentations bidimensionnelles. La Fig. 59 représente en coupe la représentation fréquentielle tridimensionnelle de l'objet. Les Fig.61 à 70 et 72 se rapportent à un quatrième mode de réalisation de l'invention, constituant le mode de réalisation préféré. Les Fig.61,62,63 constituent un schéma d'ensemble de la partie optique du microscope. Les Fig.64 et 65 illustrent le fonctionnement du déviateur de faisceau utilisé dans ce mode de réalisation. La Fig.66 illustre le fonctionnement d'un système de suppression de l'onde d'éclairage directe. Les Fig.67 et 68 illustrent le principe utilisé pour contrôler la trajectoire du faisceau. Les Fig. 69 et 70 illustrent un système utilisé pour effectuer une rotation contrôlée d'un faisceau. La Fig.72 illustre l'image devant être obtenue dans une des opérations de réglage. Les Fig.73 à 82 se rapportent à un cinquième mode de réalisation. Les Fig. 73 et 74 constituent un schéma d'ensemble de la partie optique du système. Les Fig. 75 et 76 illustrent des images obtenues lors d'une étape intermédiaire de calcul. La Fig.77 illustre un algorithme utilisé pour déterminer la séquence de commande d'un miroir déviant le faisceau et pour déterminer la séquence de commande d'une vitre anêtant l'onde d'éclairage directe. Les Fig. 78 et 79 représentent des images obtenues lors d'une étape de réglage. La Fig.80 illusfre le principe utilisé pour faire varier la polarisation de l'onde d'éclairage et la direction d'analyse. La Fig. 81 représente les points conespondant à diverses ondes d'éclairage utilisées dans un algorithme de recalage en phase. La Fig.82 représente un diaphragme utilisé dans ce mode de réalisation.

Les Fig.83 à 85 se rapportent à un dispositif pour positionner et fixer de manière définitive des éléments optiques. La Fig. 83 et la Fig.84 représentent des pièces de ce dispositif et la Fig.85 représente l'ensemble de ce dispositif.

Les Fig. 86 à 88 se rapportent à un dispositif pour protéger le microscope des chocs et de la poussière. La Fig. 86 représente un schéma de principe du dispositif. Les Fig.87 et 88 représentent une configuration spécifique adaptée au cas du modes de réalisation 4.

Les Fig.89, 90 et 91 se rapportent à l'utilisation d'objectifs non stigmatiques. La Fig.89 représente un exemple de réalisation d'un tel objectif. La Fig.90 sert de support à l'énoncé des confraintes devant être vérifiées par cet objectif. La Fig.91 montre une image plane en fréquence obtenue à l'aide de cet objectif.

S.Description d'un premier mode de réalisation:

Ce mode de réalisation est le plus simple et il est peu coûteux.

5.1. caractéristiques matérielles:

Un faisceau laser de longueur d'onde 633 nm polarisé dans le sens orthogonal à la figure est émis par le laser hélium-néon (100) et traverse le filtre (101) constitué de zéro, un ou plusieurs filtres empilés, en vene teinté Schott. Il est ensuite séparé en un faisceau d'éclairage Fe et un faisceau de référence Fr par le miroir semi- fransparent (102). Le faisceau d'éclairage traverse ensuite un filtre (103) du même type que (101), puis un rotateur de polarisation (104) à base de cristaux liquides fenoélectriques et commercialisé par la société Displaytech Inc., 2602 Clover Basin Dr., Longmont, CO 80503, Etats-Unis. Il traverse ensuite un polariseur (105). Le faisceau traverse ensuite un achromat (106) puis un diaphragme (107) et un achromat (108). Il est réfléchi par un miroir -42-

(109) fixé sur un positionneur angulaire (110) commandé par deux moteurs pas a pas II traverse ensuite un achromat (124) puis un condenseur (111) et atteint l'objet (112) Le condenseur est par exemple un condenseur aplanetique/achromaùque Nikon d'ouverture 1,4, prévu pour une source de lumière située à l'infini L'objet (112) est un échantillon placé enfre lame et lamelle, dont l'absorptivité et les vanations d'indice sont relativement faibles, et dont on veut obtemr une image tndimensionnelle L'achromat (124) est place aussi près que possible de la lentille la plus basse du condenseur (111), éventuellement dans le corps du condenseur Le point focal objet de l'achromat (124) est confondu avec le centre de rotation du miroir (109) Les lentilles (106) et (108) doivent êfre telles que le faisceau laser focalise dans le plan focal objet de l'ensemble constitue du condenseur (111) et de l'achromat (124), et ait une ouverture suffisante à son arnvée dans ce plan focal Le faisceau est donc à nouveau parallèle lorsqu'il atteint l'objet (112) Le plan de l'objet doit être honzontal pour que l'huile optique nécessaire pour utiliser l'objectif et le condenseur a immersion ne coule pas L'axe optique est donc vertical et les éléments de la Fig 1 sont fixes sur une plaque verticale (300) représentée sur la Fig 4

Le positionneur angulaire (110) est détaille sur les Fig 2 et 3 La Fig 2 représente une plaque sur laquelle le miroir (109) est collé, en vue de dessous La Fig 3 représente l'ensemble du dispositif vu de cote La plaque (200) est posée sur des plots de contact mobiles (205) et (212) dont les points de contact avec la plaque sont en (203) et (204), et sur un plot de contact fixe dont le point de contact est en (201), la plaque (200) étant légèrement creusée en ce point Elle est maintenue par un ressort (210) fixe à la plaque en (202) et à un plot fixe (211) Le plot de contact mobile (205) se déplace verticalement en franslation et est intègre a un actuateur un axe de type classique il est bloque en rotation par un flexible (207) et est entraîne en translation par la rotation de la tige (206) sortant du moteur pas à pas (208) qui est par exemple un moteur pas a pas 400 pas/tour L'entraînement se fait par exemple par l'intermédiaire d'un pas de vis Le plot de contact (212) est de même entraîné par la rotation du moteur (213) Le point de contact fixe (201) doit être dans l'axe optique de l'objectif (113) et le centre du miroir doit être sur ce point de contact Les moteurs (208) et (213) sont fixes sur une plaque (209) elle-même fixée sur la plaque support (300) Le centre de rotation du miroir, qui doit êfre positionne sur l'axe optique, est un point de la surface réfléchissante du miroir, situe sur une droite orthogonale au plan du miroir et passant par le centre de (201)

L'onde issue de l'objet (112) traverse l'objectif de microscope (113) Cet objectif est un objectif plan (qui donne une image plane d'un plan), a grande ouverture (par exemple 1,25), a immersion, et formant une image aggrandie de l'objet à une distance fime Dans le plan ou l'objectif forme normalement l'image de l'objet a observer, on interpose un diaphragme

(114) permettant un filtrage spatial de l'image En arnère de ce plan on positionne un achromat (115) dont le plan focal objet doit être confondu avec le plan focal image de l'objectif (113) Un second achromat (117) dont le plan focal image est dans le plan d'un capteur CCD (118) forme dans le plan de ce CCD l'image du plan focal image de l'objectif (113) Le CCD (118) est intégré a une caméra (119) sortant un signal video analogique et une horloge pixel

Le faisceau de référence traverse d'abord un filtre (120) de même type que (101) puis est réfléchi par un miroir (121) monté sur l'extrémité mobile d'un translateur piézoélectnque (122) Il traverse ensuite une lentille (123) qui focalise le faisceau en un point Le faisceau divergent issu de ce point est réfléchi partiellement par le -43-

miroir semi-réfléchissant (116), ce qui le superpose au faisceau issu de l'objet et permet d'enregistrer leurs interférences sur le CCD (118) Le point de focalisation du faisceau issu de la lentille (123) doit avoir son image virtuelle après réflexion sur le miroir semi-transparent (116) au centre de l'image du diaphragme (114) par l 'achromat (115) Le translateur piézoélectrique (122) permet de moduler la phase du faisceau de référence Les positionneurs manuels utilisés dans le système ne sont pas représentés sur la figure L'objectif de microscope (113) est monté sur un dispositif de focalisation. Le laser (100) est monté sur un positionneur deux axes permettant d'en régler la direction La partie fixe de la pile piezoélectnque (122) est montée sur un positionneur deux axes permettant une rotation par rapport à un axe orthogonal au plan de la figure et passant par le centre du miroir (121), et par rapport à un second axe situé dans le plan du miroir (121), orthogonal au premier axe et passant par le centre du miroir (121) Le condenseur est monte sur un positionneur trois axes en translation La caméra (119) est montée sur un positionneur trois axes en translation La position angulaire des miroirs semi- transparents (102) et (116) peut être ajustée manuellement La lentille (106) peut être translatée suivant son axe L'objet (112) est fixe sur un positionneur à deux dimensions permettant de le déplacer dans un plan honzontal Le diaphragme (114) peut être déplacé dans un plan honzontal L'ensemble est fixe sur la plaque support (300), du coté de la plaque opposé au point de vue de la Fig 4

Cette plaque est fixée à deux plaques tnangulaires (301) et (302) elles-mêmes fixées à une base canée (303) La plaque (300) est également fixée directement à la base canée (303) Les plaques (300)(301)(302)(303) sont en alliage d'aluminium ngide AU4G, par exemple d'épaisseur 20 mm La fixation des plaques peut se faire par des vis et des trous taraudés, et doit être faite en un nombre de points suffisant pour assurer une ngidité parfaite de l'ensemble Ceci permet de maintenir le système à la verticale en assurant une ngidité suffisante L'ensemble est posé sur un support antivibratoire constitué d'une plaque en gramt (304) d'épaisseur 30 mm posée sur une chambre à air de camionette gonflée à faible pression (305) qui amortit les vibrations et qui est elle-même posée sur une table ngide en bois (306) Un cadre ngide en bois (311) est fixé en hauteur par l'intermédiaire de montants (307) (308)(309)(310) à la table (306) L'ensemble de la construction en bois est renforcé de manière a être parfaitement ngide Le haut de la plaque (300) est relié par des tendeurs (312)(313)(314)(315) aux coins du cadre ngide Chaque tendeur, détaillé sur la Fιg.5, est constitué d'un ensemble de bracelets élastiques (316) tendus enfre deux anneaux (318)(317). ces anneaux étant eux-mêmes fixés à la plaque (300) et au cadre (311) par des cordelettes (320)(319), l'ensemble étant mis sous tension La chambre a air (305) permet d'avoir pour l'ensemble suspendu en AU4G de faibles fréquences de résonnance pour les mouvements de translation, de l'ordre de 2 Hz Les tendeurs (312) à (315) permettent de limiter le balancement de l'ensemble La fréquence de balancement peut être évaluée simplement en impπmant un léger mouvement de balancier à l'ensemble et en mesurant le temps nécessaire pour avoir, par exemple, dix balancements La fréquence de balancement se règle en modifiant le nombre de bracelets élastiques utilisés pour chaque tendeur Plus il est élevé, plus la fréquence de balancement augmente II doit être régie pour que la fréquence de balancement soit du même ordre que la fréquence de résonnance pour les mouvements de translation, soit environ 2Hz

Le montage des divers éléments sur la plaque (300), et en particulier des miroirs et miroirs semi- transparents, doit êfre effectué de mamere à assurer une ngidité maximale de l'ensemble Toutes les précautions usuelles doivent êfre pnses de mamere à limiter les vibrations -44-

Les précisions suivantes concernent un exemple particulier de dimensionnement pratique du dispositif Les distances citées sont représentées sur la Fig 6 Les dimensions données sont approximatives et certaines d'entre elles doivent êfre corngées dans une phase de réglage La lentille (106) est un achromat de distance focale 10 mm La lentille (108) est un achromat de diamètre 24 mm et de distance focale 120 mm La distance D7 entre (106) et (108) est de 250 mm La distance D6 entre la lentille (108) et le centre du miroir (109) est d'environ 100 mm La distance D5 entre le centre de rotation du miroir (109) et l'achromat (124) est de 120 mm L'achromat (124) est placé à environ 5 mm de la lentille la plus basse du condenseur, dans le corps du condenseur Le condenseur est un condenseur fond clair achromatique/aplanétique à immersion d'ouverture 1,4, par exemple le modèle Nikon L'objectif de microscope est un objectif planachromatique xlOO d'ouverture 1,25, à distance fime, formant l'image à 160 mm du col de l'objectif, de distance focale environ 1,8 mm, par exemple le modèle Zeiss La distance D4 enfre le col de l'objectif et le diaphragme (114) est de 160 mm La distance D3 enfre le diaphragme (114) et l'achromat (115) est de 20 mm L'achromat (115) a une distance focale de 200 mm et un diamètre de 30 mm et sa face la plus bombée est onentée vers le miroir semi-transparent (116) L'achromat (117) a les mêmes caracténstiques et sa face la plus bombée est également onentée vers le miroir (116) La distance D2 enfre les deux achromats est de 85 mm, permettant d'insérer un miroir semi-transparent (116) de dimensions suffisantes La distance entre l'achromat (117) et le CCD (118) est de 200 mm La lentille (123) a un diamètre de 4mm et une distance focale de 6mm La distance D9 enfre cette lentille et l'axe optique est d'environ 70 mm La distance D8 entre l'achromat (115) et le centre du miroir semi-transparent (116), situé sur l'axe optique, est d'environ 45 mm Le laser (100) est un laser hélium-neon de longueur d'onde dans le vide λ =633 nm polansé dans le sens orthogonal à la figure, de puissance environ 0,5 mW, de diamètre de faisceau 0,5 mm Le capteur CCD est un capteur à pixels canes , la surface du pixel étant d'environ 8,5 x 8,5 micromètres, et la surface utile en pixels étant de dimension au moins égale à 512x512 pixels La caméra sort un signal video COR et une horloge pixel, et son temps d'exposition est égal à la moitié de la durée d'un champ, soit l/50e de seconde pour une caméra COR non entrelacée dont les champs durent l/25e de seconde Ceci permet d'avoir un délai entre la fin d'un champ et le début de la penode d'exposition suivante, délai qui peut être utilise pour modifier les conditions d'éclairage sans que la transition influe sur l'image Le positionneur piézoélectnque (122) est une 'pile' piézoélectnque précontrainte en forme de cylindre dont le corps est fixe et l'extrémité se déplace de 15 micromètres pour une tension appliquée de 100 Volts

Le système de calcul est par exemple un ordinateur type 'PC, doté de cartes d'acquisition et de commande appropnées et éventuellement de moyens de calcul supplémentaires, fonctionnant par exemple sous le système d'exploitation Windows 95 La carte d'acquisition du signal vidéo, fonctionnant en temps réel, échantillonne le signal sur 8 bits et acquiert des images de taille hptx x vpix ou hpix et vpix sont supéneurs à 512 et multiples de 4 Les pixels sont échantillonnes suivant l'horloge pixel, donc conespondent exactement aux pixels du CCD Le positionneur piézoélectnque est piloté directement par une carte de conversion digitale/analogique sortant un signal compns par exemple entre zéro et t/_max , avec par exemple U_ma =10 volts

Une résistance est interposée entre la sortie de la carte de conversion et les bornes de l'actionneur piézoélectnque de mamere à limiter le courant Sa valeur est réglée de sorte que le temps de montée de la tension aux bornes de l'actionneur (122) soit d'environ 1 ms Le rotateur de polansation (104) est équivalent a une lame demi-onde dont -45-

l'axe peut tourner et a deux positions d'équilibre séparées par un angle de 45 degrés S'il est positionné de ma ere à ce que le faisceau polansé soit parallèle à cet axe dans une des positions d'équilibre, il fera tourner le faisceau de 90 degrés dans l'autre position Le rotateur de polansation est piloté par application d'une tension bipolaire, -5V conespondant à une position d'équilibre et +5V à l'autre Chaque borne du rotateur de polansation est rehée à une sortie 0/5V d'une carte de sortie numénque, et ses deux positions sont commandées en appliquant dans un cas 0V à une sortie et 5V à l'autre, et en inversant pour l'autre position Les moteurs pas à pas (208) et (212) sont également pilotés depuis l'ordinateur, via une carte de commande et une électronique appropnées L'ordinateur est doté d'une mémoire interne suffisante (au moins 32 Mo) et d'un disque dur de taille suffisante (au moins 4 Go)

5.2.Conventions diverses

Les conventions suivantes seront utilisées dans la suite de cette descnption, y compns dans les autres modes de réalisation

-La lettre y représente tantôt un indice, tantôt le nombre complexe imaginaire pur de module 1 Dans le cas ou il peut y avoir ambiguïté le nombre complexe j sera noté J

- le signe = symbolise suivant les cas l'opération d'affectation ou l'égalité -l'expression a+=b signifie a=a+b

-a multiplié par b est écnt ab, a b ou a*b

-le module d'un nombre complexe z est noté \z\ et son conjugué est noté z - l'expression a%b signifiera « a modulo b »

- si a est un entier booléen, â est son complémentaire, soit 0 = 1 et 1 = 0

- La transformée de Founer discrète, dans sa forme la plus usuelle, transforme un Dirac situé à l' ongine en une constante et fransforme une constante en un point situé à l'ongine La transformée de Founer discrète utilisée dans l'ensemble de ce brevet transforme une constante en un Dirac situé au milieu du tableau transforme et transforme un Dirac situé en ce point en une constante Ceci signifie que le 'zéro' en fréquence ou en position est placé au milieu du tableau et non à l'ongine du tableau Cette transformée modifiée s'obtient à partir de la forme usuelle en effectuant avant et après la transformation une permutation d'indices Un tableau E de dimension fdim est transformé comme suit

1-preπuère permutation E[ι]=E[{ι+fdιml2)%fdιm\ 2- fransformation de Founer usuelle du tableau E

3- permutation inverse E[ι]=E[(ι+fdιm/2)%fdιm] ou le signe % désigne le modulo

-La transformée de Founer bidimensionnelle d'un tableau de lignes et colonnes est obtenue en effectuant la transformation de Founer monodimensionnelle défime ci-dessus sur chaque ligne du tableau, ce qui génère un tableau intermédiaire, puis en effectuant cette transformation sur chaque colonne du tableau intermédiaire pour obtemr le tableau transformé

-De même, la transformée de Founer fridimensionnelle consiste à effectuer successivement selon chaque axe des transformées monodimensionnelles étendues à l'ensemble du tableau -46-

5.3.Principes de fonctionnement

La valeur de l'onde lumineuse issue de l'objet sous un éclairage donné en un point du capteur CCD est obtenue à partir de l'enregistrement de trois figures d'interférences reçues sur le capteur, la phase de l'onde de référence étant décalée de 120 degrés enfre chacune de ces figures.

Si s est la vibration lumineuse issue de l'objet et r est la vibration lumineuse constituant l'onde de référence lors du premier enregistrement, les vibrations lumineuses totales parvenant au capteur lors des trois

2π 2π enregistrement successifs sont: SQ = s + r , s_x = s + re ³ , s₂ = s + re ³ . Les intensités enregistrées successivement sont donc: ι | 2 i i ι \ 2 | i | μ2 ( — — \ l ⁼ \^s\ ⁺ \^r\ + (sr + sr)

2π 2π

-j-

= s + r + sr ³ + sre ³

V J f 2π 2π

J- - - e ³ ++ s _ sre - -jJ-

+ r\ + sr re J

On peut inverser ces formules et on obtient: 1 -. l |2 I | 2 I |2 \ . 1 /ι , 2 , , 2

^S _M \r\ ⁼ 6|rT| \^{2 ~} ι - \^s2\ / ⁺-^/ 2v73T[rî| ki ^{_ 5}2 La valeur ci-dessus est la vibration lumineuse provenant de l'objet seul, la référence de phase étant conventionnellement égale à zéro pour une vibration en phase avec l'onde de référence. Ce calcul permet donc de reconstituer la valeur complexe de l'onde à partir des enregistrements d'intensité.

Par construction, chaque point du capteur CCD conespond à une fréquence pure f_c de l'onde provenant de l'échantillon. On appelle centre optique du capteur le point du capteur illuminé par un rayon entrant dans l'objectif avec une direction strictement parallèle à l'axe de symétrie de ce dernier et on note C_x,C_y ses coordonnées en pixels. L'objectif vérifiant la condition des sinus, la déviation en sortie d'objectif d'un rayon originaire d'un point cenfral de l'objet est proportionnelle au sinus de son angle d'enfrée dans l'objectif , qui vaut

\f + f ² sin = . ou fχ,f_v,f_z) sont les coordonnées du vecteur fréquence spatiale du faisceau en

entrée de l'objectif, de norme — ou λ est la longueur d'onde dans le milieu observé, et de direction la direction du

A faisceau. Le reste du système optique étant paraxial, la déviation du point d'arrivée du rayon sur le capteur par rapport au centre optique du capteur est également proportionnelle à cette grandeur, et donc les coordonnées

(' ~ C_X - C_y\ de ce point par rapport au centre optique sont proportionnelles à if_x,f_y) . Dans le cas ou le capteur -47-

a des pixels carrés, le vecteur fréquence en entrée de l'objectif du rayon qui illumine le point du capteur de

coordonnées (/, ) vaut donc f_c(ι,j) = — ' - C_x,j - C_y,AK² -(ι -C_x) -[j - C_y]

ou K est une constante à déterminer On appellera 'fréquence caracténstique' du point ce vecteur fréquence

Connaissant la fréquence caracténstique de chaque point du capteur et la vibration lumineuse issue de l'objet et reçue en ce point, on obtient donc, pour un éclairage donné de l'échantillon, la représentation fréquentielle de l'onde issue de cet échantillon

Lorsqu'un échantillon suffisamment fin, peu absorbant et de faibles vanations d'indice est fraversé par un faisceau laser parallèle, chaque point de l'échantillon est soumis à une vibration lumineuse Ae ^•* ^{™ e r} ou f_e est le vecteur fréquence spatiale du faisceau d'éclairage et r le rayon-vecteur au point considéré de l'objet, l'ongine étant pnse au point d'ongme virtuel de l'onde de référence L'absorbtivité et les vanations d'indice de l'échantillon se traduisent par l'appantion d'une onde secondaire qui se superpose à l'onde d'éclairage Un petit volume dV crée une onde secondaire Ae-J ^{πj e r}u(r)dV ou u(r) est un coefficient complexe dont la partie réelle est liée à l'absorptivité locale de l'échantillon et la partie imaginaire a son indice L'image tridimensionnelle de l'échantillon que ce microscope génère est l'ensemble des valeurs u(r) en chaque point de l'échantillon Lorsque un point de l'échantillon, de rayon-vecteur r , émet localement une vibration lumineuse s r) , la vibration lumineuse reçue sur le capteur en un point de fréquence caracténstique f_c vaut alors s(f)e^~} ^ ^r Un petit volume dVàe l'objet, de rayon-vecteur r, éclairé par une onde plane de fréquence f_e , crée donc au point

du capteur de fréquence caracténstique f_c une vibration A e^J ^^{Je Jc} ' u{r)d V qui se superpose à la vibration pnncφale Intégrée sur l'ensemble de l'objet, la vibration reçue en un point du capteur vaut donc s{P) = \ \ \ Ae ^ ^e ^^c> u(r)dV Cette vibration est donc un élément de la transformée de Founer de la fonction u(r) , conespondant à la fréquence de Founer f_t = f_e - f_c Le pnncipe de ce microscope est d'enregistrer cette vibration pour un ensemble de fréquences f_e et f_c , puis de reconstituer la représentation fréquentielle de u(r) et finalement u(r) en inversant la transformée de Founer

Les échantillons étudiés sont peu absorbants et ont de faibles vanations de l'indice de réfraction Par conséquence l'onde d'éclairage reste très intense et illumine un point du CCD, que l'on appellera point d'impact de l'onde d'éclairage, et qui est le point du CCD ou la vibration lumineuse reçue est la plus élevée Si ce point a pour coordonnées (imaxjmax) alors la fréquence de l'onde d'éclairage est imax - C_x , jmax - C_y, K² - {imax - C_x) - ijmax - C_y 1

^{J e} Kλ

La figure 7 montre l'ensemble (500) des fréquences caracténstiques conespondant aux points du capteur II s'agit d'une portion de sphère de rayon — , limitée par l'ouverture de l'objectif, centrée sur l'axe optique (501)

Â du système Un exemple de vecteur fréquence d'éclairage (502) est superposé à cet ensemble Enfin, -48-

l'ensemble(503) des fréquences f_t = f_c - f_e conespondantes en est déduit Lorsque l'on fait vaner les fréquences d'éclairage (502) selon un arc de cercle (504) comme indiqué sur la figure 8, chaque position du vecteur fréquence d'éclairage conespond à un ensemble de fréquences f_t formant une portion de sphère La Fig 9 montre en coupe un ensemble de tels arcs de sphère (505) (506) et autres, engendrés lorsque le vecteur fréquence d'éclairage se déplace sur l'arc de cercle (504) Lorsque le déplacement du vecteur fréquence d'éclairage sur l'arc de cercle (504) devient continu, un volume est engendré dont la vue en coupe est représentée sur la Fig 15 En vue de dessus, l'arc de cercle (504) est représenté par le segment (1102) de la Fig 16 Lorsque l'extrémité du vecteur fréquence d'éclairage parcourt plusieurs arcs de cercle de mamere à générer une trajectoire représentée en vue de dessus par la Fig 16, le volume engendré est à peu près celui qui serait engendré par rotation de la surface (1100) autour de l'axe vertical (1101) On obtient donc une représentation fréquentielle tndimensionnelle (et non plus bidimensionnelle comme dans le cas ou un seul enregistrement est utilisé) A partir de cette représentation tndimensionnelle dans l'espace des fréquences, on peut générer la fonction u(r) par transformation de Founer inverse

Pour obtemr la représentation fréquentielle de u(r) à partir de l'ensemble des représentations fréquentielles bidimensionnelles on calculera en chaque point la valeur moyenne des représentations fréquentielles bidimensionnelles atteignant ce point

Le calcul de la représentation fréquentielle de u(r) puis finalement de u(r) peut par exemple être effectue en 6 étapes étape 1 pour chaque onde d'éclairage, on détermine la représentation fréquentielle bidimensionnelle de l'onde reçue, qui est une portion de sphère d'un espace tridimensionnel A partir d'un point du capteur CCD de coordonnées (ι,j) on obtient un point de la représentation de l'onde issue de l'objet, ce point ayant la fréquence f_c(ι, j) = - — \ ι - C_x,j - C_y, K ~(ι - C_x) -lj - C et ayant

comme valeur complexe la valeur complexe obtenue au point considéré du capteur CCD par la formule

^ 1 / -,! |2 I |2 I |2 \ 1 /, ,2 | ,

\r\ 6r / 2V3 η étape 2 pour chaque onde d'éclairage, on détermine la fréquence f_e de l'onde d'éclairage en déterminant les coordonnées (imaxjmax) du point d'intensité maximale sur le capteur CCD et en appliquant la formule

fe = imax -C_x,jmax- C_y, K² -(ιmax- C_x -[jmax- C_y\

Kλ étape 3 pour chaque onde d'éclairage, on translate la représentation obtenue à l'issue de l'étape 1, d'un vecteur -f_e ou f_e est la fréquence de l'onde d'éclairage, obtenue à l'issue de l'étape 2 étape 4 pour chaque onde d'éclairage, on divise la représentation fréquentielle bidimensionnelle obtenue à l'issue de l'étape 3 par sa valeur au point de coordonnées (0,0) Cette étape constitue l'opération de recalage en phase déente en 3 5 3 et est indispensable pour que les représentations fréquentielles bidimensionnelles se superposent de mamere cohérente -49-

étape 5 on superpose l'ensemble des représentations fréquentielles bidimensionnelles obtenues à l'issue de l'étape 4, obtenant la représentation fréquentielle de u(r) La valeur affectée à un point non atteint est 0 et la valeur affectée à un point atteint est la moyenne des valeurs en ce point de chaque représentation fréquentielle bidimensionnelle atteignant ce point étape 6 on effectue une transformation de Founer tndimensionnelle inverse de la représentation fréquentielle, obtenant finalement la fonction u(r) en représentation spatiale

En pratique, les étapes seront effectuées dans un ordre différent et sous une forme modifiée, afin d'optimiser le temps de calcul et de limiter la place mémoire requise La méthode effectivement utilisée comporte deux phases, équivalentes aux 6 étapes précédentes phase d'acquisition pour chaque onde d'éclairage, détermine l'image plane en fréquence obtenue sur le capteur r 1 / | ,2 | ,2 I ,2 \ 1 /, ,2 ,

CCD en appliquant en chaque point la formule s— = 6₇w-₇r2\^|s^J ₀\ — \s_} \ — \s₂ \ j + J^j — 7=7 1 \ Hs_x \ — \s.

On détermine également les coordonnées (imaxjmax) du point d'intensité maximale sur le capteur CCD et on divise l'ensemble de l'image plane en fréquence obtenue sur le capteur CCD par sa valeur au point de coordonnées (imaxjmax) phase de calcul tridimensionnel A partir de chaque onde d'éclairage caracténsée par les valeurs (imaxjmax), et a partir de chaque point de coordonnées (ij) du capteur, on obtient un point de la représentation fréquentielle tridimensionnelle de fréquence

/. = - C_x,j - C_y,Jκ* -(ι - C_xf -(j - C_yf

Kλ

ιmax- C_x,jmax- C_y, K ~(ιmax-C_x) -ljmax-C_yY

Kλ

Lorsqu'un point n'est pas atteint on y affecte la valeur nulle Lorsqu'il est atteint plusieurs fois on y affecte la moyenne des valeurs obtenues à chaque fois Lorsque cette opération a été effectuée pour toutes les ondes d'éclairage et tous les points du capteur, la transformation de Founer tπdimensiom-elle inverse peut être effectuée

Cette méthode pose un problème pratique qui est que le point éclairé directement par le faisceau traversant l'échantillon est illuminé de mamere beaucoup plus intense que les points conespondant à l'onde diffractée La représentation tridimensionnelle générée lors d'une pnse d'image contient essentiellement des fréquences proches de celle du faisceau d'éclairage, les aufres fréquences étant noyées dans le bnut Pour remédier à cet inconvénient, on utilise un dispositif d'atténuation contrôlée du faisceau La partie de la représentation fréquentielle conespondant aux fréquences sur lesquelles l'intensité est élevée est obtenue avec une forte atténuation et celle conespondant aux autres fréquences est obtenue avec une faible atténuation Les valeurs obtenues sous forte atténuation sont ensuite multipliées par un coefficient complexe caracténstique du décalage de phase et du rapport d'amplitude de l'onde d'éclairage entre les deux positions du dispositif d'atténuation -50-

confrôlée Ce dispositif d'atténuation contrôlée est constitué du rotateur de polansation (104) et du polanseur (105)

La représentation tridimensionnelle obtenue à partir d'images de taille hpix x vpix conespond à des tailles de fichiers importantes Afin de limiter la taille des fichiers et le temps de calcul, la taille des images sera divisée par deux par moyennage lors de la procédure d'acquisition de la représentation tndimensionnelle Ceci éqmvaut à grouper les pixels 4 par 4, un groupe de 4 pixels sur l'image onginale étant équivalent a un pixel effectif utilise pour le calcul La taille de l'objet observable est bien sûr réduite en conséquence Les valeurs de C_x , C_y tK sont divisées par 2 pour tenir compte du nouveau système de coordonnées Cette limitation de la taille d'image observée est bien entendu facultative

L'utilisation du microscope proprement dite comporte

- une phase de focalisation sur l'échantillon déente au paragraphe 5 17

- un ajustement de position du condenseur, qui est décnt au paragraphe 5 18

- un réglage des filtres deent au paragraphe 5 19 - laphase d'acquisition des représentations fréquentielles bidimensionnelles normalisées deente ci-dessus et détaillée au paragraphe 5 20

- la phase de calcul tridimensionnel déente ci-dessus et détaillée au paragraphe 5 21

- une phase de visualisation déente au paragraphe 5 22

Avant de pouvoir utiliser ce microscope, divers réglages doivent être effectués - Les réglages des positionneurs manuels, décnts aux paragraphes 5 6, 5 7, 5 8, 5 9, permettent de régler conectement la trajectoire du faisceau, de s'assurer que l'image d'une onde plane sur la caméra soit effectivement ponctuelle, et que le condenseur forme bien a sa sortie un faisceau parallèle En particulier, le réglage deent au paragraphe 5 8 permet un premier ajustement de la position du condenseur

- Le réglage deent au paragraphe 5 10 permet l'obtention du nombre de pas par pixel, utile à la commande du miroir de déviation du faisceau (109)

- Le mveau de l'onde de référence est ajusté comme indique au paragraphe 5 11

- Le réglage décnt au paragraphe 5 12 permet l'obtention de tensions de commande appropnées de l'actuateur piézoélectnque

- Le réglage décnt au paragraphe 5 13 permet le réglage de l'atténuateur de faisceau et l'obtention des constantes d'atténuation et de déphasage le caracténsant

- Le réglage décnt au paragraphe 5 14 permet l'obtention de la constante K

- L'ouverture des diaphragmes et la position du miroir semi-transparent (116) doivent être régies de manière a obtemr une image centrée sans repliement de spectre Ce réglage est décnt en partie au paragraphe 5 14 et est complété au paragraphe 5 15 - L'onde de référence doit être enregistrée, ce qui est décnt au paragraphe 5 16 -51-

5.4.Manipulation des filtres

Les opérations de réglage nécessitent des manipulations permanentes des filtres pour ajuster l'intensité reçue sur le capteur. Ces manipulations ne sont pas systématiquement rappelées dans la suite du texte.

Le filtre en (120) détermine l'intensité de l'onde de référence. Sa valeur est déterminée dans une étape particulière du réglage. Par la suite, lorsqu'une onde de référence est nécessaire, le filtre ainsi déterminé est inséré. Lorsque l'onde de référence doit êfre supprimée, on insère un élément opaque en (120).

Le filtre en (103) détermine l'intensité de l'onde d'éclairage. Sa valeur dépend des opérations de réglage en cours. Pour la plupart des opérations, le filtre est ajusté de mamere à ce que l'intensité reçue sur le capteur (118) soit élevée, sans atteindre la saturation. Pour certaines opérations le capteur est saturé. Pour d'autres l'onde d'éclairage doit être supprimée, ce qui se fait par insertion d'un élément opaque.

Le filtre en (101) est utilisé uniquement pour les opérations de réglage nécessitant un suivi visuel du faisceau, repéré par sa tache de diffusion sur un morceau de papier blanc. Le filtre est alors réglé pour que la tache de diffusion soit visible sans être dangereuse pour l'oeil.

Dans les cas ou seule l'onde d'éclairage est présente, on appellera intensité relative de l'image reçue sur le capteur CCD le rapport de l'intensité reçue sur le capteur à l'intensité en sortie du filtre (103). Dans une opération ou on cherche à maximiser l'intensité relative reçue sur le capteur, on est amené à changer de filtre régulièrement pour maintenir l'intensité à un niveau mesurable par le capteur.

5.5.Programmes d'usage courant Certains programmes simples sont utilisés fréquemment pendant le réglage, sans que cela soit rappelé:

- déplacement du miroir (109): ce miroir étant motorisé, un programme est nécessaire pour en modifier la position. Ce programme demande à l'utilisateur un nombre de pas et un numéro d'axe conespondant soit au moteur (213) soit au moteur (208), puis fait effectuer le nombre de pas demandé à ce moteur.

-Visualisation de l'image reçue sur le capteur: un programme permet l'affichage direct sur l'écran de l'ordinateur de l'image reçue sur le capteur (118).

-Visualisation de l'image et caractéristiques du maximum: ce programme effectue l'affichage direct sur l'écran de l'ordinateur de l'image reçue sur le capteur (118). Il affiche en plus la valeur maximale détectée par le capteur, les coordonnées du point conespondant, et le rapport entre l'intensité de ce point et la somme des intensités de ses 8 voisins. Ce programme est utilisé pour vérifier l'apparence d'une image, pour vérifier la non- saturation du capteur (valeur maximale inférieure à 255), pour connaître les coordonnées et la valeur du maximum, pour apprécier le caractère ponctuel de ce maximum par observation directe de l'image et par utilisation des valeurs affichées: l'intensité (relative) du maximum doit être aussi élevée que possible, ainsi que le rapport de son intensité à celle de ses voisins.

5.6. réglage de la position du laser (100) et du miroir (121)

Dans un premier temps l'onde d'éclairage est supprimée et la position du laser (100) est réglée de façon à viser effectivement le centre du miroir (121), ce qui se vérifie en suivant le trajet du faisceau à l'aide d'un morceau de papier permettant de le visualiser. La position du miroir (121) est ensuite ajustée de mamere à ce que -52-

le faisceau de référence traverse effectivement la lentille (123) et parvienne à la caméra. Le faisceau de référence doit êfre centré sur le capteur (118).

5.7. réglage en translation de la position de la caméra et réglage du miroir (102) La position de la caméra est réglée en translation en envoyant directement un faisceau parallèle sur l' objectif de microscope. A cet effet, les éléments (106)(108)(111)(105)(104) sont provisoirement enlevés, l'onde de référence est supprimée, l'objectif de microscope est positionné en position à peu près focalisée sur l'objet. L'objet (112) utilisé est une lame transparente et de l'huile optique est interposée entre (112) et (113). La position angulaire de (102) est alors ajustée pour que le faisceau parvienne directement au centre du miroir (109). La position du miroir (109) est réglée de sorte que le faisceau parallèle entre directement dans l'objectif (113) et est affinée de manière à maximiser l'intensité relative du signal reçu sur le capteur CCD. La position du capteur CCD est alors réglée en translation dans la direction de l'axe optique de manière à ce que l'image produite soit parfaitement ponctuelle, puis est réglée en translation dans les directions orthogonales à l'axe optique de sorte que ce point soit au centre de la zone utile du capteur. Il est enfin réajusté en translation dans le sens de l'axe optique.

5.8. réglage de la position du condenseur (111) et obtention de la position du centre optique

Les éléments (106)(108)(111) sont remis en place. De l'huile pour microscope est interposée entre (111) et (112) et enfre (112) et (113). Un morceau de carton blanc est posé sur le miroir (109) pour diffuser la lumière. Le diaphragme (107) est ouvert au maximum et l'ouverture du diaphragme (114) est d'environ 6 mm. L'objectif de microscope est mis en position à peu près focalisée. La position du condenseur (111) est alors réglée de mamere à obtenir sur le CCD un disque clair légèrement granuleux de rayon aussi élevé que possible et d'intensité à peu près constante sur l'ensemble du disque. Sur la Fig. 17, la zone utile du CCD (1200) est représentée, et le disque clair (1201) se détache sur ce fond noir. Un programme spécifique est alors utilisé pour déterminer les coordonnées C_x , C_y du centre optique et le rayon R du disque. Ce programme détermine: - les droites (1206) et (1205) constituant les limites droite et gauche du disque (1201).

- la droite (1207) définie comme le milieu des droites (1206) et (1205).

- les droites (1202) et (1203) constituant les limites basse et haute du disque (1201).

- la droite (1204) définie comme le milieu des droites (1202) et (1203).

- le centre optique, intersection des droites (1204) et (1207) - le rayon R du disque, égal à la moitié de la distance enfre les droites (1205) et (1206).

5.9. réglage de la position de la lentille (106)

Le morceau de carton blanc posé sur le miroir (109) est supprimé. La position du miroir est modifiée de manière à amener le point éclairé sur le bord du disque précédemment obtenu. La position de la lentille (106) est alors ajustée selon son axe de manière à avoir sur le capteur CCD l'image la plus ponctuelle possible. -53-

5.10.Détermination du nombre de pas par pixel.

Le morceau de papier occultant le miroir est alors enlevé. Le moteur est déplacé suivant un axe d'un nombre de pas connu. La position en pixels du point d'intensité maximale est notée avant et après le déplacement, et le nombre de pixels parcourus en est déduit. On calcule alors le rapport pas_ pa _ pixel = — . On nombre de pixels effectue de même sur l'autre axe et on retient le plus petit rapport obtenu.

5.11. réglage du niveau de l'onde de référence

Si on considère une onde de référence et une onde d'éclairage ayant même intensité maximale à leur arrivée sur le capteur, s'additionnant en amplitude lorsqu'elles sont en phase, la condition de non-saturation du captem est que l'amplitude commune des deux ondes soit la moitié de l'amplitude saturant le capteur, ou de mamere équivalente que l'intensité commune des deux ondes soit le quart de l'intensité saturant le capteur. Pour régler le niveau de l'onde de référence à cette valeur, l'onde d 'éclairage est supprimée et la valeur du filtre (120) est ajustée pour obtenir une image dont le niveau maximal est d'environ le quart du niveau maximal autorisé par la carte d'acquisition, soit dans le cas d'un échantillonnage sur 8 bits du signal vidéo, un niveau d'environ 64. Avant la prise d'images, le mveau maximal de l'onde d'éclairage devra être réglé de la même façon.

5.12. réglage des tensions de commande de l'actuateur piézoélectrique

Cette calibration de l'actuateur piézoélectrique peut se faire à l'extérieur du système par une méthode interférométrique connue. Trois positions de l'actuateur sont utilisées. Le déplacement du miroir entre chaque λ position doit êfre de —-= . Les tensions de commande conespondant à chaque position doivent être déterminées.

3V2 l'actuateur ayant un cycle régulier pour éviter les effets d'hystérésis.

Cependant, il est également possible d'effectuer ce réglage pendant que l'actuateur est en place. Ceci permet de compenser l'imprécision sur l'orientation du miroir et d'avoir une procédure simple de calibrage n'utilisant pas de matériel spécifique. Ceci est fait en utilisant un programme qui fait varier les tensions de commande et qui est décrit par ralgorithme de la figure 10. Avant de lancer le programme, la position du miroir (109) doit être réglée de mamere à ce que le point produit sur le capteur CCD en utilisant pour objet une lame complètement transparente soit au centre du capteur. Pour utiliser ce programme, l'objet utilisé doit être fortement diffusant. On pourra par exemple utilisé un morceau de papier blanc trempé dans de la gélatine puis placé entre lame et lamelle. Le papier doit être suffisamment épais pour anêter le faisceau direct et suffisamment fin pour laisser passer un faisceau diffusé. Le diaphragme (107) est ouvert au maximum et le diaphragme (114) est réglé pour une ouverture d'environ 0,8 mm.

L'onde de référence interfère alors sur le capteur CCD avec le disque clair produit par l'onde issue de l'objet.

L'intensité de l'onde d'éclairage doit êfre réglée pour que le capteur soit en limite de saturation.

Si la tension maximale appliquée à l'actuateur est Umax, les tensions conespondant aux décalages de

2π 2π phase de ,0, — seront respectivement Umax/2-diffJbas, Umax/2, Umax/2+ diff haut, ou diff iaut et diff bas sont choisis pour produire les décalages de phase indiqués. Afin d'éviter tout effet d'hystérésis, à chaque -54-

acqmsiùon la tension est îmtialisée à 0, les différentes images sont acquises dans l'ordre croissant des tensions appliquées à l'actuateur et une tension finale Umax est finalement appliquée, de sorte que le même cycle est toujoms utilisé Ce cycle devra également êfre utilisé en phase normale de fonctionnement Les images pnses avec les décalages de phase indiqués plus haut permettent de calculer une représentation fréquentielle en appliquant à chaque pixel P la formule

2π) 2π)

S(P) = 2I(P,0) -I\ P, -I - J ⁺ J L P.

2 <"-τ dans laquelle l'onde de référence a été remplacée par une constante et l'expression l(P,a) désigne l'intensité enregistrée au point P pour un décalage de phase α

Le réglage des tensions de commande de l'actuateur consiste à évaluer dtff haut et dtff bas Le pnncipe est d'obtemr deux représentations fréquentielles décalées entre elles de — La deuxième image peut êfre recalée π -3- en phase en la multipliant par e ^J et 1 écart moyen entre la première image et cette image recalée peut être calcule Cet écart est minimal lorsque les tensions diffjiaut et dtff bas sont conectement réglées Les décalages

2 71 71 2τz 71 de phase permettant l'acquisition de la 2eme image élémentaire en fréquence sont donc + — , — , — + — et conespondent respectivement, en première approximation, aux tensions Umax/2-dιff_bas+dιff_bas/2, Umax/2+(dιff_bas+dιff_haut)/2, Umax/2+ diff haut +dιff_haut/2 Le programme de réglage calcule l'écart moyen pour des sénés de valeurs de diff haut et dtff bas et choisit celles qui conespondent a un écart moyen minimal Son algonthme est détaillé sur la figure 10 Les étapes essentielles de cet algonthme sont (600) acquisition des images La procédure d'acquisition est précisée sur la Fig 11 Par 'les images' on entend ici 6 figures d'interférences reçues consécutivement par le capteur CCD Cette procédure effectue toujours le même cycle commençant par la tension 0 et finissant par la tension Umax Le temps d'attente après l'application d'une tension nulle au piézoélectnque permet a celui-ci de se stabiliser Le temps d'attente avant le lancement de l'acquisition évite d'acquénr une trame qui aurait été exposée avant l'application des conditions d'exposition voulues La fin de l'exposition d'une image est signalée sur les cartes d'acquisition par le début du transfert de l'image conespondante L'utilisation d'un temps d'exposition inféneur au temps de transfert de l'image permet à l'image de ne pas être affectée par les états transitoires La mise du processus en pnonté maximale évite la perturbation de l'acquisition par d'autres tâches système sous un système d'exploitation multitâches Les 6 images sont acquises successivement et en temps réel (pas d'image perdue) par la carte d'acquisition afin de minimiser le temps pendant lequel des vibrations peuvent affecter le résultat Chaque image a pour dimension honzontale hpix et pour dimension verticale vpix Pendant l'acquisition, les images sont transférées automatiquement par la carte d'acquisition dans le tableau qui leur est reserve en mémoire centrale de l'ordinateur A l'issue de la procédure d'acquisition, on dispose d'un tableau I[a,b,ιj], l'mdice a correspondant a la différence de phase, l'indice b conespondant à l'image (décalée ou non décalée en phase) les indices z et y étant les coordonnées en pixels et vanant respectivement de 0 à hptx-l et de 0 a vpιx-l -55-

(601) calcul des deux représentations fréquentielles Celles -ci sont stockées dans des tableaux de complexes S0[ιj] et SJ[ιj], en appliquant les formules

Sθ[ι,j] = i(2/[0,0,/,y] - l[l,0,ι,j] - l[2,0,ι,j]) + J^=(/[l,0,/ ] - /[2,0,z ,;])

S ] = ~{2l[0,l,ι,j] - I[l,l,,,j] - I[2,l,ι,j]) + J^(l[l,l,ι,j ] - l[2,l,ι,j]) π (602) Le programme modifie le tableau SI en multipliant chacun de ses éléments par e ³

(603) le programme calcule la valeur maximale mod_ max = max ISOf/ , j]\ du module sur S0

O≤i≤hpix-V '

0≤j≤vpιx-l

(604). Le programme calcule l'écart moyen enfre les deux tableaux de la mamere suivante

Le programme înitiahse écart et nombre valeurs à 0 et parcourt l'ensemble des points ij en testant la condition (605) \Sθ[ι, j J > 0,5 mod_ max Chaque fois que cette condition est réalisé, il effectue les opérations suivantes (606) ecart+ = \S0[ι,j} - S][ι, j]\ nombre _valeurs+ = 1

Lorsque le programme a terminé de parcounr les indices (ij) il divise écart par nombre valeurs (607), ce qui lui donne l'écart moyen Cet écart n'intègre donc que des valeurs pour lesquelles l'onde d'éclairage est suffisamment forte, afin d'éviter un résultat trop bruité. Il est stocké dans un tableau

(608): le programme passe à la valeur suivante du couple (dιff_haut,dιff_bas) et réitère les opérations jusqu'à ce que la séné d'écarts ait été calculée

(609) le programme applique un filtre passe-bas au tableau obtenu pour limiter le bnut dû aux vibrations du système Le filtre passe-bas utilisé est représenté dans le domaine frequentiel par une 'marche d'escalier' passant d'une valeur de 1 en basse fréquences à une valeur de 0 en hautes fréquences, et sa bande passante est déterminée empinquement pour avoir une bonne limitation du bruit sans trop déformer la combe

(610) le tableau est représenté graphiquement pour en vérifier l'allure

(611) la valeur du couple (dtff_bas,dιffjιaut) conespondant au minima est affichée Les sénés de valeurs du co\ιple(dιff_bas,dιff_haut) sont déterminées comme s t Dans un premier temps le programme fait vaner les valeurs de dtff haut et diff bas en les laissant égales

,, _Λ Umax , Umax , , enfre elles. Par exemple elles peuvent vaner entre 0 et par pas de — — si on utilise 12 bits de

4 4096 conversion II en résulte un tableau de 1024 éléments (les écarts calculés pour chaque valeur de

(dιffjιaut,dιff_bas) ) que le programme filtre pour éliminer le bruit (609) et qu'il représente graphiquement

(610). La valeur d'mdice du tableau conespondant à l'écart minimal conespond alors à la valeur conecte du couple (dιff_bas,dιff_hauf) et ce couple est affiché (611)

Dans un deuxième temps, le programme est relancé en fixant diff bas à la valeur précédemment obtenue et en faisant vaner umquement dtff haut Un nouveau minima est ainsi obtenu, qui conespond à une valeur plus précise de dtff haut -56-

Dans un troisième temps, le programme est relancé en fixant diffjiaut à la valeur précédemment obtenue et en faisant vaner umquement diff bas, obtenant une valeur plus précise de diff bas

L'opérateur peut réitérer ces étapes en faisant vaner séparément et alternativement diff bas et dtff haut, mais le maximum de précision s ces valeurs est obtenu assez rapidement

5.13. réglage du polariseur (105) et du rotateur de polarisation (104)

L'étape suivante consiste à régler la position du rotateur de polansation (104) et du polanseur (105) Ce dispositif est destiné à réaliser une atténuation contrôlée du faisceau d'éclairage par commande du rotateur de phase, et on appellera l'ensemble 'commutateur optique' Il a une position fermée conespondant à une intensité faible le fraversant et une position ouverte conespondant à une intensité plus élevée

L'objet utilisé est le même que dans l'étape précédente, le réglage du miroir (109) et des diaphragmes est également le même L'onde de référence est d'abord suppnmée Dans un premier temps, le polanseur est nus en place et réglé pour maximiser l'intensité le fraversant et reçue sur le capteur (118) Dans un deuxième temps, le rotateur de polansation est mis en place Une tension conespondant à un état arbitrairement défini comme ferme lui est appliquée et il est positionné en rotation pour mimmiser l'intensité traversant l'ensemble du commutateur Dans un troisième temps, l'onde de référence est rétablie et on utilise un programme calculant le rapport des intensités et la différence de phase enfre les deux positions du rotateur de polansation, rapport qui sera nécessaire pendant les phases d'acquisition d'image pour combiner les ondes conespondant aux états ouvert et fermé du commutateur L'algonthme de ce programme est sur la figure 12 Les étapes sont les suivantes (800) Le programme acquiert d'abord les images en utilisant la procédure acquiert images déente

Fig 13 Par 'les images' on entend ici 6 figures d'interférences reçues consécutivement par le capteur CCD Cette procédure effectue toujours le même cycle commençant par la tension 0 et finissant par la tension Umax Le temps d'attente après l'application d'une tension nulle au piézoélectnque permet à celm-ci de se stabiliser Le temps d'attente avant le lancement de l'acquisition évite d'acquénr une trame qui aurait été exposée avant l'application des conditions d'exposition voulues La fin de l'exposition d'une image est signalée s les cartes d'acquisition par le début du transfert de l'image conespondante L'utilisation d'un temps d'exposition inféneur au temps de transfert de l'image permet à l'image de ne pas être affectée par les états transitoires La mise du processus en pnonté maximale évite la perturbation de l'acquisition par d'autres tâches système sous un système d'exploitation multitâches Les 6 images sont acquises successivement et en temps réel (pas d'image perdue) par la carte d'acquisition afin de mimmiser le temps pendant lequel des vibrations peuvent affecter le résultat Chaque image a pour dimension honzontale hpix et pour dimension verticale vpix Pendant l'acquisition, les images sont transférées automatiquement par la carte d'acquisition dans le tableau qui leur est reserve en mémoire centrale de l'ordinateur

(801) le programme calcule les deux représentations fréquentielles S0 et SI qui différent par l'état du commutateur S0 conespond au commutateur ouvert et SI au commutateur ferme

S0[,,j] = ~(2l[0,0,ι,j] - l[l, ,ι,j] - I[2,0,ι,j]) + J^j=(l[l,0,ι,j] - l[2,0,ι,j]) -57-

Sl[ι,j] = i(2/[0,l,/,y] - I[l,l,ι,j] - l[2,l,ι,j]) + j ^=(l[l,l,,,j] - /[2,1,/ ,;])

(802) Le programme calcule la valeur maximale mod_ max = max \Sθ\ι , j 1 atteinte par le module

O≤â≤hpix-V '

0≤j≤vpιx-l des éléments du tableau S0

(803) le programme calcule le rapport moyen enfre les deux représentations fréquentielles II înitiahse rapport et nombre valeurs à 0 puis parcourt l'ensemble des indices (ij) en testant la condition (804)

)S0[.,;| > 0,5 mod max

Lorsque la condition est vérifiée, il effectue (805) rapports ^j-j

nombre _valeurs+= 1 Lorsque l'ensemble des indices ij a ete parcouru, le programme divise rapport par nombre valeurs (806) ce qui donne le rapport recherché

(807) le programme calcul la moyenne rapport jnoy des valeurs de rapport obtenues depuis son lancement

(808) le programme affiche les parties réelles et imaginaires ainsi que le module de rapport et rapport moy

(809) Le programme réitère continûment cette procédure pour permettre le réglage en continu Le programme se termine sm instruction de l'opérateur

La position angulaire du rotateur de polansation doit être réglée pour que le module de rapport soit a peu près égal à 30 Le programme est alors anêté et relancé, et au bout d'un nombre d'itération suffisant la valeur moyenne complexe rapport moy est notée et servira de base dans la suite des opérations

5.14. obtention de la constante K et réglage du diaphragme (114) et du miroir (116)

K est la valeur maximale en pixels conespondant à la fréquence spatiale maximale de l'onde — ou λ_v

/-_vest la longuem d'onde dans le milieu observé, supposé êfre d'indice égal à l'mdice nominal n_v de l'objectif L'indice nominal de l'objectif est l'mdice pour lequel il a été conçu et pour lequel il ne crée pas d'abenation sphénque C'est aussi l'indice de l'huile optique devant être utilisée avec l'objectif

Il y a Λ. pixels entre les fréquences 0 et — Le pas en fréquence suivant un axe est donc Les

A, Kλ_v fréquences vanent au total de à —— par pas de λ„ Kλ„

Si N est le nombre total de pixels suivant chaque axe pns en compte pour la transformée de Founer, N valeurs de fréquences sont pnses en comptes, allant de à

2Kλ„ 2Kλ, -58-

Après fransformation on obtient N valeurs de position avec un pas en position égal à la moitié de l'mverse de la fréquence maximale avant fransformation

1 Kλ_v

Le pas en position est donc

N N

2Kλ_v Si on considère deux points entre lesquels la distance en pixels est D_pa et la distance réelle est D_ree/ , on

a donc D , = D d'où K = — La longueur d'onde à considérer ici est la longueur d'onde dans

N ^λv £>_pιx λ le maténau, supposé êfre d'indice égal à l'indice nominal n_v de l'objectif soit λ_v = — On a finalement n„

N

K = D réel λ D pix

Pour obtemr la constante K, on réalise l'image d'un micromètre objectif pour lequel les distances réelles sont connues, puis on applique la formule ci-dessus Ceci est réalisé en utilisant un programme de focalisation qui sera réutilisé ulténeurement à chaque fois qu'une focalisation sur un échantillon est nécessaire avant la pnse d'image tndimensionnelle L'algonthme de ce programme se trouve sur la figure 14 Ses étapes pnncipales sont

(1000) Le programme acquiert une image par la procédure acquiert images de la Fig 13 On obtient donc un tableau d'entiers (type unsigned char pour 8 bits) /[ >,c,;,y] ou l'indice/? vanant de 0 à 2 conespond à l'état de phase, l'indice c vanant de 0 à 1 conespond à l'état du commutateur (0=ouvert, l=fermé) et les indices / et] vanant de 0 à hpιx-l et de 0 à vptx-l conespondent aux coordonnées du pixel

(1001) Un tableau de booléens //[/, y] est généré il est înitiahsé à 0, puis pour chaque pixel, la valeur maximale atteinte par /[/?,0,.,y] sur les trois images conespondant à la position ouverte du commutateur est calculée Si cette valeur est égale à 255 (valeur la plus élevée du numenseur), les images conespondant à la position fermée du commutateur doivent être utilisées dans le calcul de la fréquence associée au pixel et a ses 8 voisins immédiats, et le tableau H[ι,j] est mis à 1 pour ces 9 pixels

(1002) la représentation fréquentielle S[ιj] de nombres complexes est générée pour chaque pixel, la valeur est générée selon les équations suivantes

S[ι,j] = ^(2l[θ,H[ι,j],ι,j]- l[\,H[ι,j],ι, )- l[2,H[ι,j],ι,j])

₊J^(l[\,H[ι ],,,j] - l[2,H[ι,j ι,j]) (l + {rapport_moy ~ l)H[ι,j])

Si H[t,j] vaut 1, la valeur complexe ainsi obtenue est donc multipliée par le nombre complexe rapport jnoy obtenu lors de l'opération de cahbration du commutateur pour donner la valeur finale de l'élément de tableau S[ιj], afin de temr compte du décalage de phase et de l'absorption induits par le commutateur

(1003) Le programme limite le tableau S à des dimensions de 512x 12 Le programme effectue ensuite optionnellement l'une ou l'autre, ou aucune, des deux opérations suivantes -59-

- un moyennage sur une largeur de 2, qui ramène le tableau S à un tableau S' de dimensions 256x256 avec S' [i , y ] = S[2ι ,2} ] + S[2ι + 1,2 ] + S[2ι ,2y + 1] + S[2ι + l,2y + 1] Ce moyennage, couplé à une réduction de l'ouverture du diaphragme (114), permet de diminuer le diamètre de la zone observée et de réduire le temps de calcul II est équivalent à un filtrage passe-bas suivi d'un sous-échantillonnage - une limitation de l 'ensemble des fréquences observées à un cane de 256x256 pixels avec

S'[ι,_j] = S[128 +.,128 + y] Ceci permet de diminuer le temps de calcul au pnx d'une réduction de la résolution

Toutefois dans le cas présent le programme n'effectue aucune de ces deux opérations

(1004) Le programme effectue alors la transformée de Founer inverse du tableau ainsi obtenu

(1005) Il affiche le résultat sur l'écran, en extrayant le module, la partie réelle ou la partie imaginaire Dans le cas présent il affichera le module Quelle que soit la vanable affichée, le tableau de nombre réels conespondant est d'abord normalisé, soit par rapport à la valeur moyenne, soit par rapport à la valeur maximale Le programme écnt également sur disque le fichier de réels conespondant Lorsque la partie réelle ou la partie imaginaire sont représentées, il est essentiel que le point d'impact du faisceau direct soit bien en (256,256) sur l' image de taille 512 x 512, faute de quoi une modulation devient visible Lorsque le module est représenté, le point d'impact exact du faisceau direct n'influence pas notablement le résultat

(1006) Le programme recommence alors l'acquisition d'une nouvelle image, opérant donc en continu II s'arrête sur instruction de l'opérateur

Pour obtemr l'image du micromètre, l'objectif est d'abord mis en position à peu près focalisée, le micromètre ayant été introduit comme objet Dans un premier temps l'onde de référence est suppnmée, les diaphragmes sont ouverts au maximum, et le programme de visualisation directe en temps réel de l'image reçue sur le capteur est lancé, les filtres en (103) et le rotateur de polansation étant réglés pour laisser passer suffisamment d'intensité pour saturer assez largement le capteur au point d'impact direct du faisceau L'objet est alors déplacé à dans le plan honzontal à l'aide du positionneur conespondant jusqu'à ce que l'image constituée de nombreux points intenses alignés, caracténstique du micromètre, apparaisse Le micromètre est alors conectement positionné sous l'objectif

Les diaphragmes en (107) et (114) sont alors réglés pour une ouverture d'environ 8 mm Les filtres en (103) sont alors réglés pour que le maximum d'intensité s le CCD soit à un niveau d'environ le quart de la valeur maximale du digitaliseur, soit 256/4=64 L'onde de référence est réintrodmte Le programme de focalisation est alors lancé Le diaphragme (114) doit êfre ajusté de mamere à être clairement visible sur l'image affichée, tout en étant aussi ouvert que possible Si l'image n'est pas bien cenfrée, on peut améliorer le centrage soit en modifiant l'onentation du miroir (116), auquel cas il peut êfre nécessaire de réajuster l'onentation du miroir (121), soit en modifiant la position du diaphragme (114) Le diaphragme en (107) doit être ajusté pour que la zone observée apparaisse uniformément éclairée Le programme de focalisation est alors arrêté, l'onde de référence est suppnmée et l'intensité du faisceau est réajustée comme précédemment L'onde de référence est alors réintrodmte et le programme de focalisation relancé

L'objectif de microscope est alors déplacé par le dispositif de focalisation de manière à obtemr une bonne image du micromètre Pour faciliter la focalisation, on a intérêt à visualiser une partie du micromètre ou des traits de différentes longueurs sont présents Ceci limite les 'fausses focalisations' dues à des phénomènes -60-

d' interférences en avant du micromètre Entre deux déplacements il est nécessaire de lâcher le dispositif de focalisation manuel pour obtemr une image non perturbée par les vibrations Lorsque une bonne image a été obtenue, le programme est anêté et l'image obtenue est utilisée pour obtemr la distance en nombre de pixels entre deux traits, la distance métrique entre ces traits étant connue Si la distance entre deux graduations séparées par D_reeι micromètres est sur l'image ainsi obtenue de D_pιx pixels, si l'indice nominal de l'objectif est n_v (en général, n_v =1,5) et si la longueur d'onde du laser dans le vide est A (A =0,633 micromètres) et si le nombre de n N points de la transformée de Founer est N (N=512) alors on a K = - D_reel , ou bien entendu D_reel et λ

Λ ^Dpιx sont dans la même umté

5.15. réglage des diaphragmes

L'image fridimensionnelle que l'on calculera a un coté de taille 256 pixels, ce qui permet de limiter les tailles de fichiers et les temps de calcul Le réglage du diaphragme consiste a réutiliser le programme de focalisation, cette fois avec l'option de moyennage intermédiaire, et régler le diaphragme (114) de mamere a ce que son image soit clairement visible tout en étant aussi grande que possible Le diaphragme (107) est alors règle pom qu'il soit légèrement plus ouvert que le minimum permettant un éclairage régulier de la partie observée de l'échantillon

5.16. enregistrement de l'onde de référence

La connaissance de l'onde de référence est indispensable au calcul précis des valeurs complexes de l'onde parvenant au capteur Celle-ci doit donc êfre emegisfrée indépendamment de la valeur constante de bruit moyen qm caracténse chaque pixel A cet effet un programme spécifique est utilisé Dans un premier temps, les ondes d'éclairage et de référence sont suppnmées et le programme enregistre l'image de 'noir optique' qui en résulte sur le capteur CCD II moyenne l'intensité obtenue s 100 images pour avoir un noir optique débrmté Dans un deuxième temps l'onde de référence est rétablie et l'onde d'éclairage reste suppnmée Le programme enregistre l'image résultante, la moyenne sur 100 images pour débrmter Puis le programme calcule la différence entre l'image de l'onde de référence seule et l'image de noir optique, et enregistre l'image résultante dans un tableau Iref[ιj] ou 1 vane de 0 à hpix-l ety vane de 0 à vpix-l

5.17. Focalisation sur l'objet étudié Cette étape doit être réitérée pour chaque échantillon dont on souhaite obtenir une image L'onde d'éclairage est rétablie L'échantillon a étudier est nus en place Le miroir (109) est régie pour que le point d'impact direct du faisceau d'éclairage soit au centre du capteur Les filtres en (103) sont régies pour qu'en l'abscence d'onde de référence l'intensit maximale reçue s le capteur CCD soit d'environ 64 L'onde de référence est alors rétablie Le programme de focalisation est lance avec l'option de moyennage intermédiaire, et la position de l'objectif est ajustée à l'aide du dispositif de focalisation pour obtenir une image nette de la zone d'intérêt de l'échantillon -61-

5.18. Ajustement de la position du condenseur et réglage du diaphragme (107)

Après la phase de focalisation la position du condenseur doit être ajustée pour que l'image, dans l'échantillon, de la partie illuminée du miroir, soit confondue avec la partie observée de l'échantillon. L'onde de référence est supprimée, le dispositif d'atténuation du faisceau d'éclairage est mis en position ouverte, les filtres se trouvant s le frajet du faisceau d'éclairage sont supprimés, et un morceau de papier blanc mouillé est plaqué sur la surface du miroir (109) de manière à constituer une surface diffusante de faible épaisseur que l'on peut considérée comme confondue avec la surface du miroir. Un programme spécifique de visualisation de l'image reçue sur le CCD est utilisé. Ce programme moyenne l'image, par exemple sur 8 acquisitions successives, et représente à l'écran la racine de la valeur obtenue en chaque point, de manière à rendre l'image d'avantage visible même en l'abscence d'une forte luminosité. Le diaphragme (107) est d'abord largement ouvert, et la position du condenseur est ajustée pour obtenir un disque clair homogène de rayon élevé. Il est ensuite refermé progressivement jusqu'à la limite de visibilité de l'image, la position du condenseur étant elle-même réajustée au fur et à mesure. L'ouverture finale du diaphragme (107) doit êfre nettement inférieure à celle déterminée en 5.15. Les filtres sont alors réintroduits, l'onde de référence est également réintroduite, et le programme de focalisation est lancé. On doit voir l'image du diaphragme (114) avec une tache lumineuse centrale conespondant à l'image défocalisée (donc floue) du diaphragme (107). La position du condenseur peut alors être ajustée dans un plan orthogonal à l'axe optique de mamere à ce que la tache lumineuse centrale soit cenfrée.

Le diaphragme (107) est alors réglé de mamere à être légèrement plus ouvert que le minimum permettant un éclairage régulier de la zone observée.

5.19. Réglage des filtres

Les filtres en (103) sont réglés pour qu'en l'abscence d'onde de référence et en position ouverte de l'atténuateur de faisceau l'intensité maximale mesurée sur le capteur CCD soit d'environ 64. Il peut également êfre utile, juste avant l'acquisition, de régler à nouveau la position du rotateur de polarisation (104) et du polariseur (101). Ce réglage peut être effectué en utilisant le même programme qu'en 5.13, mais en laissant en place l'échantillon observé et sans modifier le réglage des diaphragmes et des filtres. Ce réglage permet de compenser la dérive temporelle des caractéristiques du rotateur de polarisation.

5.20. étape d'acquisition Cette étape permet d'acquérir les représentations fréquentielles bidimensionnelles à partir desquelles sera calculée la représentation tridimensionnelle. Le point d'impact direct du faisceau d'éclairage est déplacé suivant une série de rayons partant du centre optique et de longueur Rb légèrement inférieur à R, par exemple Rb = R -6 , le centre optique et le rayon R ayant été déterminés dans l'étape 5.8. On note nbangles le nombre total de rayons qui seront parcourus, par exemple nbangles=9. nbim est le nombre de représentations fréquentielles bidimensionnelles à acquérir et a pour valeur nbim = — bangles . A chaque étape, le programme calcule et enregistre dans un fichier fich acquis une représentation fréquentielle qui sera utilisée dans la phase de calcul tridimensionnel. La taille de l'image acquise depuis la caméra est hpix x vpix, mais cette taille est divisée -62-

par deux pour obtemr des représentations fréquentielles de dimension hel x vel, selon le pnncipe de moyennage intermédiaire déjà utilisé dans le programme de focalisation

Le programme d'acquisition est détaillée par l'algonthme de la Fig 18 dont les étapes sont les suivantes

(1300) Les données de base de l'acquisition sont enregistrées dans le fichier fich acquis nbim nombre de représentations fréquentielles bidimensionnelles hel≈hpix 12 nombre final de points dans le sens honzontal vel=vpιxl2 nombre final de points dans le sens vertical

(1301) temps d'attente permettant l'absorption des vibrations créées par le mouvement du positionneur (110) Un temps d'attente de 2s environ peut convemr (1302) Le programme acquiert les images par la procédure acquiert images de la Fig 13 On obtient donc un tableau d'entiers (type unsigned char pour 8 bits) /[ ,c,;,y] ou l'indice p vanant de 0 à 2 conespond a l'état de phase, l'indice c vanant de 0 à 1 conespond à l'état du commutateur (0=ouvert, l=fermé) et les indices ; ety vanant respectivement de 0 à hpιx-1 et de 0 à vpιx-\ conespondent aux coordonnées du pixel

(1303) Un tableau de booléens H[ι,j] est généré il est înitiahsé à 0, puis pour chaque pixel, la valeur maximale atteinte sur les trois images conespondant à la position ouverte du commutateur est calculée Si cette valeur est égale à 255 (valeur la plus élevée du numenseur), les images conespondant à la position fermée du commutateur doivent être utilisées dans le calcul de la fréquence associée au pixel et à ses 8 voisins immédiats, et le tableau H est nus à 1 pour ces 9 pixels

(1304) calcul de rapportjnoy Le calcul de rapport moy, déjà effectué lors de l'opération de calibration du commutateur, doit êfre refait à chaque image de manière a compenser les dénves temporelles Le programme détermine d'abord

Vmax = max , (2/rθ,0,;,y]-/[l,0,», l- /[2,0,», l) + J . --=(/[l,0,.,yl -- /[2.0,_i,yî) ^ ^{L J l J L} " 2 3->_e/[.,y] ^{W ' " J L '} "^ ou El est l^'ensemble des couples (ij) vérifiant H\ι,j] = 0 Le programme calcule ensuite l .(/2_/-r[0„,0„, 1]- / -r[.l,0 „,_^, -], - / ,r[-2,0„,_^,y]) + y -₇=(/[l,0,_i,y] - 7[2,0, ]) rapport _moy = — ^"

^y Σ V )eE2 -(2/[0,l,_î,y] - /[l,U,y] - /[2,l,,,y]) ₊ y -_7f(/[l,l,_i,y] _ /[2,l,_!,y])

E2 est l'ensemble des couples (tj) vénfiant H\ι,j] = 0 et

(2/[0,0,.,y]-/[l,0,/,y]-/[2,0,.,y]) + 7 (/[l,0,.,y]-/[2,0,/,y]) > coef • Vmax

6yjlref[ι,j] 2 l31ref[ι,j] avec par exemple coef=0,5 Le coefficient coef peut être ajuste pour que E2 contienne suffisamment de points N2 est le nombre d'éléments de E2 (1305) la représentation fréquentielle S[ιj] de nombres complexes est générée pour chaque pixel, la valeur est générée selon les équations suivantes -63-

S[.,j] = _τ^≈(2/[0, [z,yμ,y]-/[l,^,y],₎,y]-/[2,^,yμ,y])

+J [l[l,H[ι,j},ι, ]- l[2,H[,,j],ι,j]) (1 + {rapport _moy - l -rY^ ])

2 lref[ι,j]

Si H[ι,j] vaut 1, la valeur complexe ainsi obtenue est donc multipliée par le nombre complexe rapport moy obtenu lors de l'opération de cahbration du commutateur pour donner la valeur finale de l'élément de tableau S[t_j], afin de temr compte du décalage de phase et de l'absorption induites par le commutateur

(1306)-Le point de module maximal du tableau S est déterminé Ses coordonnées (z jnax, y max) sont enregistrées

(1307) La position 'objectif est calculée, l'angle valant kpas

Rb ^' 2k 2π ι_ obj = G_x +\ k%\ •cos E

Rb nbangles,

2k 2π y_ ₀3y = G_x +μ%( ^j j -sιn| _

V v 2 ) ) \ Rb nbangles) ou ιj>bj etj obj sont les coordonnées de la position objectif en pixels, et ou le signe % désigne le modulo, et ou E(x) désigne la partie entière de x

Le déplacement des moteurs est calculé pas_ι=(ι_obj-ι_max) pas_par_pιxel P^asJ =(j_obj-j_max) pas_par_pιxel ou pas >ar_pιxel est le nombre de pas des moteurs par pixel de déplacement, déterminé expénmentalement pendant les réglages

(1308)- Un des moteurs permet de déplacer le point d'impact direct du faisceau dans la direction de l^'axe z II doit effectuer un nombre de pas pas i dans la direction conespondant a un indice î croissant pour la position du point d'impact direct du faisceau d'éclairage (pour pas iO, il doit effecmer un nombre de pas -pas i dans la direction opposée) L'autre moteur permet de déplacer le point d'impact direct du faisceau dans la direction de l'axey De même, il doit effectuer un nombre de pas, pas j

(1309)- Un tableau de fréquences moyennées est généré Chaque dimension du tableau initial S est divisée par deux pour donner un tableau M avec M_k[,,j] = ∑S[2ι + p,2j + q]

O≤p≤l O≤q≤l

(1310)-Le point de module maximal du tableau M_/, est déterminé, ses coordonnées ιmax , jmax_k et la valeur en ce point max_ moy = M_k [ιmax_k , jmax_k ] sont emegistrées

(1311) -Les éléments du tableau M sont normalises en les divisant par maxjnoy

M , ,_k r\ι,j i\ = ^Mk [ - —', ^j] — max_moy -64-

(1312)- ιmax_k, jmax et la représentation fréquentielle M sont e egistrés dans le fichier fich acquis

(1313)- L'algonthme se teπmne quand l'angle vaut 2π Le moteur revient alors à sa position initiale et le fichier d'acquisition fich acquis est fermé

5.21. calcul tridimensionnel

La procédure d'acquisition a généré des représentations fréquentielles bidimensionnelles M , ou l'indice k représente le numéro d'ordre de chaque représentation Ces représentations ayant été moyennées sur une largeur de 2, les valeurs de C_x ,C_y etK doivent être divisées par 2 pour conespondre au nouveau système de coordonnées Ce sont ces valeurs divisées qui sont utilisées dans la suite L'ensemble des représentations bidimensionnelles peut être considéré une représentation à trois dimensions (ι ,k) dans lequel l'indice k représente l'indice image et les indices z ety représentent les coordonnées cartésiennes de chaque représentation Dans la k - ibras représentation fréquentielle bidimensionnelle la relation entre les coordonnées et la fréquence caractéristique est

Kλf_c z-C_x,y-C^^²-(/-C_x)²-(y-Cj²

La relation entre les coordonnées et la fréquence d'éclairage est

Kλf_e =\ιmax_k -C_x,jmax_k -C_y,^K² -{ιmax_k -C_x)² - jmax_k -C^

La relation entre les coordonnées et la fréquence totale est donc

Kλf_t = ι-ιmax_k,j-jmax_k,^K² -{ι-C_xf -(j-C_y) -^K² -{ιmax_k -C_xf -[jmax_k -C^

La procédure de calcul tndimensionnel consiste en pnncipe à générer dans un premier temps une représentation tridimensionnelle sous forme d'un tableau F de dimensions fdim xfdim xfdim avec fdιm=512, p s à en effecmer la transformée de Founer pour obtemr un tableau U de mêmes dimensions conespondant à la représentation u(r), et dans lequel les indices conespondent donc au rayon-vecteur La représentation F est un tableau dont les indices représentent les coordonnées de Kλf_t , le zéro étant ramené par franslation au point de coordonnées (fdιm/2fdιm/2fdιm/2) On obtient donc, à partir de chaque point de coordonnées i d'une représentation bidimensionnelle M , un point de la représentation tridimensionnelle par

F[m,nj,nk] = M_k[ι,j] avec fdim ni =ι —ιmax_k + -

2 fdim nj = y — jmax_k +

ήk = ^K² -{,-C_x)² -(j-C_yf - K² -(ιmax_k-C_x)² -(jmax_k-C_yf ₊ -65-

Lorsque un point du tableau F, de coordonnées (m,nj,nk), est obtenu successivement à partir de plusieurs représentations bidimensionnelles distinctes, la valeur de F retenue en ce point est la moyenne des valeurs obtenues à partir de chacune de ces représentations bidimensionnelles Lorsque ce point n'est jamais obtenu, on y affecte une valeur nulle Lorsque le tableau F a été généré, le tableau U peut êfre obtenu par transformée de Founer tridimensionnelle inverse

Cette méthode peut êfre appliquée directement si le programme dispose d'une mémoire vive suffisante Le programme dont l'algonthme est décnt Fig 19 permet cependant d'effectuer les calculs sur un système dont la mémoire vive est limitée, les fichiers étant stockés sur un support à accès séquentiel (disque dm) Pour des raisons pratiques, une partie de la transformation de Founer sera effectuée au fur et à mesure de la génération du tableau F, qui ne sera donc jamais véntablement généré

Le programme opère en cinq étapes Chaque étape utilise un fichier d'entrée stocké sur le disque dur de l'ordinateur et génère un fichier de sortie également stocke sur le disque dur, dont le nom est en italique sur la figure Le programme pounait théonquement effectuer de mamere plus directe les opérations nécessaires à la génération de l'image tndimensionnelle, mais la taille des fichiers impliqués est trop élevée pour qu'ils puissent êfre entièrement contenus dans la mémoire d'un ordinateur II est donc nécessaire de gérer leur stockage sur disque La lecture/écnture d'éléments de fichiers sur disque se faisant plus rapidement si les éléments sont stockes de mamere contigue, le programme doit être conçu pour ne lire et écnre sur le disque que des blocs d'une taille suffisante C'est ce que permet l'algonthme décnt, alors qu'une méthode directe nécessiterait des lectures/écntures à des addresses non contigues et ne serait pas praticable en raison du temps perdu en accès disque Les étapes de l'algonthme sont les suivantes

(1400)-centrage des représentations fréquentielles bidimensionnelles

Cette procédure consiste à translater les représentations bidimensionnelles pour passer d'une représentation dans le système de coordonnées (ιj,k) à une représentation dans le système (nι, j,k) avec nι=ι- ιmax+fdιml2,nj=j-jmax+fdιml2, les dimensions suivant m et nj du tableau ainsi génère étant àefdim xfdim L'algonthme de cette partie est représenté figure 21 Les étapes sont les suivantes

(1600) les valeurs de hel,vel,nbtm sont lues dans le fichier fich acquis

(1601) la représentation fréquentielle M_k conespondant à l'indice k est transférée en mémoire centrale avec les valeurs conespondantes ιmax_k et jmax (1602) Une représentation fréquentielle translatée T_k de dimensions fdim xfdim est générée avec

T_k [«z, nj ] = M_k [ni - fdim 12 + ιmax_k , nj - fdim 12 + jmax_k ] lorsque O ≤ zzz - fdιml 2 + ιmax_k ≤ hel - l et O ≤ nj - fdιml 2 + jmax_k ≤ hel - l T_k [«/,«/] = 0 dans les aufres cas

La Fig (20) montre une image d' ongine avec son point de coordonnées ( ιmax_k , jmax_k ) et un dessin arbitraire autour de ce point, et la nouvelle image translatée

(1603) Les valeurs de ιmax_k , jmax_k , et la représentation T_k sont enregistrées dans le fichier fich centre dans l'ordre suivant -66-

ιmax_k , jmax_k , T_k [0,0], T_k [1,0], .... T_k [fdtm - 1,0] , ιmax_k , jmax_k , T_k [0,1], T_k [l,l], T_k [fdtm - 1,1] ,

ιmax_k , jmax_k , T_k [0, fdιm]T_k [l, fdim], T_k [fdim - 1, fdim - 1] , Notons que ιmax_k et jmax sont répétés à chaque ligne de T_k dans le fichier fich centré. Ceci permet que ces données, indispensables au changement d'indice k - nk , restent disponible après l'opération d'échange des axes.

(1604): le processus est recommencé tant que k est inférieur à nbim. (1401)-Echange des axes 'plan' et 'ligne' Le changement d'indices z → m et y -» nj ayant été effectué, il reste à faire le changement d'indice k → nk

Pour effectuer ce changement d'indice en un temps raisonnable il est nécessaire de pouvoir charger en mémoire cenfrale, rapidement, un plan (nι,k). Pour que cette opération soit possible, il faut préalablement échanger les axes k t nj. C'est ce que fait cet algonthme

Le fichier fich centré précédemment créé est relu, l'ordre des données est modifié et un fichier fich echl est écrit dans lequel les données sont dans l'ordre suivant. ιmax₀ , jmax₀ , T₀ [0,0], T₀ [l,θ], .... T₀ [fώm - 1,0], ιmax_x ,jmax_x , T_x[θ,0\, T [l,θ], .. .. T_x [fdim - 1,0],

ιmax„_bιm__x , jmax_nbιm__x , T_nbιm__x [0,0], T_nbιm__x [l,θ], ... . T_nbιm_ [fώm - 1,0], ιmax₀ ,jmax₀, T₀[θ,l_y 7O[l,l], T₀ [fdim - 1,1], ιmax_x , jmax_x , T_x [θ,l], 7} [1,1], .. T_x [fdtm ~ 1,1],

ιmax_nbιm__x . jmax_nbιm__x , T„_bιm__x [θ,l], r„_è,_m_, [l,l], T_nbιm__x [fώm - 1,1],

ιmax₀ , jmax₀ , T_Q [0, fdtm - 1], T₀ [l, fdim - 1], T₀ [fdim - 1, fdim - 1], ιmax_x , y max_x , T [0, fdim - 1], T [l, fdim - 1], . . . T fdιm - \, fdιm- l],

ιmax„_bιm_ , jmax_nbltn__x , T_nbιm__x [0, fdim - 1], T„_bιm__x [l, fώm - 1], T_nbιm__x [fάm - 1, fdim - 1] C'est-à-dire que les axes nj et k sont échangés. Cette opération d'échange des axes est effectuée bloc par bloc La Fig. (22) représente symboliquement (1700) le contenu d'un fichier tndimensionnel conespondant à des indices t ,k, rangé en mémoire plan honzontal par plan honzontal et chaque plan étant rangé ligne par ligne, une ligne étant dans le sens de la profondeur sur le dessin. Les axes ιj,k et l'origine O du repère sont précisés sur le dessin Le contenu du fichier obtenu par inversion des axesy et k est représenté en (1702). Le transfert des données d'un fichier à l'autre se fait bloc par bloc, le bloc (1701) étant copié en mémoire centrale puis fransféré en (1703) La -67-

lecture et l'écriture des blocs se fait plan horizontal par plan horizontal, un plan horizontal dans le fichier lu ne conespondant pas à un plan horizontal dans le fichier écrit. La taille du bloc est la taille maximum qui puisse tenir dans la mémoire interne disponible de l'ordinateur. L'opération est répétée pour tous les blocs, les blocs situés 'au bord' n'ayant pas en général la même dimension que les autres. Cette manière d'opérer permet d'effectuer l'échange des axes avec un ordinateur dont la mémoire interne a une taille inférieure à celle des fichiers utilisés. La procédure en language C (Microsoft C/C++ sous Windows 95) qui permet cette opération est la suivante:

void echange_axes(FELE* read_file,FILE* write_file,int ktot,int jtot,int itoLint memory limit ) { int knum,jnum,bknum,bjnum,keff,jeff,kj,bk,bj; char* buff;

knum=(int)sqrt(((double)memory_limit)/((double)itot)); jnum=knum; buff=(char*)malloc(itot*knum*jnum); bknum=ktot/knum; if (knum*bknum ! =ktot) bknum+= 1 ; bjnum=jtot/jnum; if (jnum*bjnum!=jtot) bjnum+= 1 ;

for (bk=0;bk<=bknum-l;bk++) for (bj=0;bj<=bjnum-l;bj++)

{ if (bk==(bknum-l)) keff=ktot-knum*(bknum-l); else keff=knum; if ( 3J==(bjnum-l))jeff=jtot-jnum*(bjnum-l); elsejeff=jnum;

for (k=0;k<=keff-l;k++) for (j=0;j<=jeff-l;j++) { fseek(read_file, k*lmum+k)*jtot*itot+(bj*jnum+j)*itot,SEEK_SET); fread(buff+k*jeff*itot+j*itot, 1, itot, read_file); }

for (j=0;j<=jeff-l;j++) for (k=0;k<=keff-l;k++)

{ fseek(write_fιle, .j*jnum+j)*ktot*itot+(bk*knum+k)*itot,SEEK_SET); -68-

fwτιte(buff+k*jeff*ιtot+j*ιtot, 1, itot, wnte file), } } free(buff), }

Les paramètres à passer lors de l'appel de la procédure sont read file pointeur sur le fichier fich centré wnte_file pointeur sur le fichier fich echï ktot nombre total d'images nbim jtot nombre total de lignes dans une représentation fréquentielle fdim itot taille en octets d'une ligne /#z/w*sιzeof(complexe)+2*sιzeof(ιnt), ou sιzeof(complexe) désigne la taille en octets d'un nombre complexe ( T [ij] par exemple) et sιzeof(ιnt) la taille en octets d'un nombre entier (imax _k par exemple) memory_lιmιt taille maximale en octets de la mémoire à accès aléatoire (RAM) dont dispose la procédme pour stocker les blocs

Les fichiers doivent être ouverts en mode 'comnuted' c'est-à-dire que les opérations de lecture/écnture sont effectuées directement depuis ou vers le disque dur, sans buffensation intermédiaire en mémoire centrale (1402)- phase de calcul Cette phase de calcul a pour objet de remplacer l'mdice 'image' k par l'indice nk donne par la formule nk = ^ + κ² -{ι - C_x)² -(j - C_y)² - ^K² -{,max_k - C_x)² -(jmax_k - C_y ou z,y sont les coordonnées dans le repère d'ongme (avant centrage) Dans le repère centré on a donc

_\ 2 nk = K —{nι -fdιm/2 +ιmax_k - C_x\ -{nj - fdtm/ 2 + jmax_k - C_y \

-^K² -(ιmax_k -C_x)² -(jmax_k - C_y +-

2 Lorsque les mêmes indices (ιj,k) sont obtenus plusieurs fois par remplacement de l'indice image, la valeur retenue pour l'élément conespondant de la représentation fréquentielle tndimensionnelle est la moyenne des valeurs pour lesquelles les indices (ιj,k) sont obtenus

Un point de la représentation fréquentielle tndimensionnelle, de coordonnées (nι,nj,nk) , ne peut être obtenu par ce changement de coordonnées qu'à partir d'un plan (nι,k) donné et conespondant a son indice nj Les plans (nι,k) peuvent donc être traités indépendamment les uns des autres Lorsque dans un plan (nι,k) on a remplacé l'indice k par l'indice nk, il est donc possible d'effectuer directement la transformée de Founer bidimensionnelle inverse de ce plan avant de passer au plan suivant C'est ce que fait cette partie du programme dont l'algonthme est détaillé sur la Fig 23 Ses étapes pnncipales sont

(1800) les éléments suivants sont lus dans le fichier fich echï et transfères en mémoire interne ιmax₀,jmax₀, T₀[θ,nj],T₀[l,nj], T₀[fdιm- l,nj], -69-

ιmax_x , jmax_x , T_x [0, nj], T_x [l, nj], .... T_x [fdtm - 1, nj],

ιmax_nbιm__x , jmax_nbltn__x , T_nbm__x [0, nj], T„_bm_ [\,nj], .... T_nbιm__x [fdtm - \,nj]

(1801) les tableaux D_n] et Poids, de dimensions fdtm xfdim, sont initialisés à 0

(1802) La condition suivante est testée:

2 f , ²

{ni - fdιm/2 +ιmax_k - C_x) + nj - fdιm/2 + jmax_k - C_y \ < \ K —

ou o est l'ouverture du microscope, et n l'indice de l'huile optique et de la lamelle utilisés, soit à peu près

— = — — . Si la condition est vraie, le point conespond à un vecteur fréquence ne sortant pas de l'ouverture de n 1,51 l'objectif et est donc dans la zone observable (1803) La valeur nk est calculée par la formule. nk = ^K² -{ni - fdιm/2 +ιmax_k - C_x) -Inj - fdtm / ^' 2 + jmax_k - C_y Y

—J>K -(ιmax_k - C_x) - (jmax_k - C_y \ +fdιm l 2

(1804) La valeur conespondante de fréquence est additionnée au tableau D_nj . L'élément conespondant du tableaux des poids, qui sera utilisé pour calculer la valeur moyenne, est incrémenté. D_nj [ni , nk]+ = T_k [ni , nj] Poιds[nι,nk]+ = 1

(1805)Lorsque l'ensemble des indices nι,nk a ainsi été parcouru, le programme parcourt l'ensemble des indices ni et nk en testant la condition Poιds[nι,nk] ≠ 0 et à chaque fois que cette condition est réalisée il effectue

D [nι,nk] D_nJ [m,nk] =

Poιds[nι,nk\ (1806)le programme effectue une transformée de Founer bidimensionnelle inverse du tableau D_nj

(1807) il stocke le tableau transformé dans le fichier de sortie fich cale dans l'ordre suivant D_nj [0,0], D_nJ [1,0], D_nj [fάm - 1,0],

D_n] [0,1], D_nj [1,1], . ...D_nj [fώm - l,l] ,

D_n] [0, fώm - 1], D_HJ [l, fdtm - 1], .. . D_nj [fώm - 1, fώm - 1]

(1403)-2eme échange des axes: Il reste à ce niveau à effectuer une transformée de Founer inverse à une dimension suivant l'axe nj Afin de pouvoir effectuer cette transformation en un temps raisonnable, il est nécessaire d'échanger préalablement les axes nj et nk. Le programme pouna ensuite charger en mémoire centrale des plans (nι,nj) complets pour les traiter -70-

Dans le fichier fich cale les données sont rangées dans l'ordre suivant D₀ [0,0], D_Q [1,0], D₀[fdιm- 1,0],

D₀ [0,1], D₀ [1,1], D_Q[fώm- 1,1],

D₀ [0, fώm - 1], D₀ [l, fώm - 1], D₀ [fώm - 1, /-Λ/?z - 1], D_x [0,0], [1,0], D[fώm- 1,0], D_x [0,1], [1,1], D_x[fώm- 1,1],

D_x [0, /ûfz/w - 1], D_x [1, fώm - 1], D, [/ώw - 1, fώm - 1],

D_β,_m-ι [0,0], Z^--_! [1,0], -D^^--_! [fώm - 1,0], ^β/_Λ«-_l [0,1], ^βya_m-i [1,1], ^β _ΛB_! [/ώ,τz - 1,1],

D_fώm_[θ, fώm -ï],D_fώm__x[l, fdtm -ï], D_{fώm x}[fdιm-l,fώm-l]

Ce fichier est relu, et un fichier fιch_ech2 est génère, dans lequel les données sont reeentes dans l'ordre suivant A>[0,0],A)[1,0], D₀[fdιm- 1,0], [0,0], [1,0], D_x[fώm- 1,0],

D_fώm_ [0,0],D_fώm__x[l,0], D_βm__x[fώm -1,0], A,[0,1],A)[1,1], D₀[fώm- 1,1], [0,1], [1,1], D_x[fώm- 1,1],

Df_ώm-i [0,1], D_fdm__x [1,1], D_βιm__x [ fdim - 11],

D₀ [0, fώm - 1], , [1, /-*» - 1], ^₀ [fdtm - 1, /ώ - 1], A [0, fdim - 1], A [1, fdim - 1], D_x [fώm - 1, fώm - 1],

û_ώm-ifO, ^^-!],^^--^!, ^^-!], D_βm__x[fdιm-l,fdιm-l]

Cet échange des axes «y et nk est effectue par blocs comme le précèdent échange d'axes La même procédme est utilisée, les paramètres a passer étant readfile pointeur s le fichier fich ealc -71-

wnte file pointeur s le fichier fιch_ech2 ktot fdim jtot fdim itot taille en octets d'une ligne y-ήzw*sιzeof(complexe) ou sizeoftcomplexe) désigne la taille en octets d'un nombre complexe memory lirmt comme précédemment, la taille en octets de la mémoire disponible

(1404)-Deπuère transformation de Founer Cette procédme consiste à effectuer la fransformation de Founer inverse suivant l'axe nj II s'agit d'un traitement itératif s l'indice nk L'algonthme de cette partie de programme se trouve Fig 24 Ses étapes essentielles sont les suivantes

(1900) le programme charge en mémoire interne les valeurs [0, nk], D₀[l, nk], D₀[fdιm - 1, nk],

A [0^, n*], [i. "fc], ^D\ [f^dιm - 1, «fc],

D_fώm__x[0,nk], D_fώm__x[l,nk], D_fdm__x[fώm-l,nk]

(1901) Le programme génère le tableau E_{nk m} a une dimension

Enk,m [n]\ ^{τ:l D} A^m^^k\

Il effectue la transformée de Founer inverse de ce tableau, générant le tableau E_{nk m}

(1902) il enregistre les résultats dans le fichier fich_rep, dans l'ordre suivant ^£nfc,θ[⁰]_' -£«£,- [°]> ^E _nk β_ltn_ [0],

^Enkfi [l], ^E k\ [ ], ^Enk,fώm-\ [l],

^E _nk,o [f^dl™ - ], ^E _nk,\ [fdtm - 1], E_{nk dm}__x [fdim - 1]

Le fichier ainsi généré contient alors la représentation tndimensionnelle de l'objet au format U[nι,nj,nk] ou l'élément complexe U[nι,nj,nk] est rangé dans le fichier fich j-ep à l'addresse (nk*fdιm*fdιm+nj *fdtm+nι) comptée a partir du début du fichier, l'addressage se faisant par éléments de type 'nombre complexe'

5.22. visualisation

Le tableau U ayant été généré, on peut en visualiser le contenu La visualisation la plus simple consiste à en extraire une coupe, un des indices étant fixe a une valeur constante Sur cette coupe, on peut visualiser la partie réelle, la partie imaginaire ou le module Par exemple pour extraire une coupe en partie imaginaire à nk constant, le programme génère d'abord le tableau [7z,n ] = Re{u[m,nj,nk^\ ou nk a une vale fixée, et ou Re( ) désigne la partie réelle de x II détermine ensuite les valeurs minimales et maximales du tableau soit V_mm = min (F[HZ, «y]) , V_mm = mιn( [«z,« j) Il génère -72-

alors un tableau de pixels à afficher s l'écran (bitmap), le niveau de gns d'un pixel donne de coordonnées V[m,nj]-V_mm ni , nj étant val[nι ,«_/] = ^•

V max -V min

Un autre mode de visualisation consiste a en extraire des projections L'image visualisée dépend fortement du type de projection utilisée Par exemple pour une projection de la partie réelle selon l' axe nk, par intégration, on représentera le tableau V avec

V[nι,nj] = ^" Re(u[nι,nj,nk^) , ou Re(;c) désigne la partie réelle de x, la somme sur nk étant pnse entre deux k plans 'limite' selon ce que l'on veut représenter, et le tableau V étant représenté comme précédemment

Pour une projection de la partie réelle selon l' axe nk, par extraction du maximum en valem absolue, on représentera le tableau avec

V[nι,nj] - maxl Re(jl/[wz,wy,»fc] )

Dans ces deux cas on peut représenter le tableau Va l'écran selon la méthode déjà utilisée pour la

V[nι,nj]-V_mm représentation d'une coupe, soit vαl[nι,nj] = — ou V_mm et V_maκ sont respectivement les valeurs max mm minimales et maximales de V Bien que l'exemple pns ait été des coupes à nk fixé et des projections selon nk, ces coupes et projections peuvent être effectuées selon n'importe quelle direction, y compns des directions obliques

Une partie importante de la représentation fréquentielle n'étant pas acquise, il s'ensuit certains défauts des images obtenues en représentation spatiale, qui dépendent du type d'image représentées En gênerai, les défauts seront moins importants po une vue de dessus Dans le cas particulier de la projection par intégration, l'image produite restera de bonne qualité jusqu'à un angle limite de la direction de projection par rapport à la ouv verticale la direction de projection doit faire avec la verticale un angle suffisamment inférieur a Arc sin

V «_v

Dans le cas de la projection par extraction du maximum, des défauts seront présents quelque soit l'angle d'observation Par contre, la projection par extraction du maximum est moins sensible au bruit gaussien que la projection par intégration Dans le cas de la projection par intégration, une méthode rapide peut être obtenue pour réaliser la projection Cette méthode nécessite le stockage en mémoire de la représentation fréquentielle de l'objet Celle-ci peut par exemple avoir été obtenue comme indiqué en 5 21 mais en n'effectuant pas les transformations de Founer prévues en (1806) et en (1901) La méthode rapide comporte deux étapes étape 1 extraction, en représentation fréquentielle, d'un plan passant par l'ongine et orthogonal à la direction de projection étape 2 fransformation de Founer inverse de ce plan

Le tableau bidimensionnel ainsi obtenu constitue une projection smvant la direction ayant servi à extraire le plan de fréquence -73-

II est possible de générer une vue stéréoscopique en extrayant deux projections suivant des directions appropnées et en utilisant par exemple la méthode anaglyphe pour les visualiser Dans ce cas, l'utilisation de la méthode rapide permet, si l'ordinateur dispose d'une mémoire suffisante pour le stockage de la représentation tridimensionnelle, de modifier en « temps réel » l'angle d'observation d'une image précalculée sous forme de représentation fréquentielle

6.Description d'un second mode de réalisation.

Ce mode de réalisation est une vanante simple du premier et est représenté Fig 25

6.1. Principe Dans le premier mode de réalisation, le capteur (118) est dans le plan focal image de l'ensemble optique constitué de l'objectif (113) et des lentilles (115) et (117) L'onde d'éclairage plane a donc une image ponctuelle dans ce plan, et une onde de référence sphénque cenfrée virtuellement sur l'objet doit êfre utilisée po obtenir sur le capteur (118) un éclairage homogène Dans ce second mode de réalisation, le capteur (2018) est placé directement dans le plan image de l'objectif Une onde d'éclairage plane n'a donc plus une image ponctuelle L'onde de référence doit être l'image par l'objectif d'une onde plane virtuelle traversant l'objet

Une image en nombres complexes est obtenue sur le CCD (2018) à partir de trois images différant par la phase de l'onde de référence, en utilisant comme dans le premier mode de réalisation la formule ! i ι² i ι² i \A ! l\ ι² i ι²\

La transformée de Founer bidimensionnelle de cette image donne une image en nombres complexes eqmvalente à celle qui, dans le premier mode de réalisation, était obtenue directement dans le plan du capteur CCD Cette image remplace donc l'image directement obtenue sur le capteur dans le premier mode de réalisation Pom le reste, ce mode de réalisation utilise les mêmes pnncφes que le premier

6.2. Description matérielle. Le système est représenté Fig 25 Les éléments de cette figure, identiques a ceux de la Fig 1, sont numérotés en remplaçant le premier chiffre 1 des éléments de la Fig 1 par le chiffre 20 Par exemple (116) devient

(2016) Ce système est semblable à celui utilisé dans le premier mode de réalisation, a ceci près que

-le dispositif d'atténuation contrôlée du faisceau, constitué des éléments (104) et (105) est suppnmé

-le CCD (2018) est placé dans le plan ou se trouvait précédemment le diaphragme (114) Par conséquence les éléments (114) (117) (115) sont suppnmés

- L'image virtuelle, après réflexion sur le miroir semi-transparent (2016), du point de focalisation du faisceau issu de la lentille (2023), doit être située sur l'axe optique et dans le plan focal image de l'objectif (2013) Les éléments

(2023)(2022)(2021)(2016) sont donc déplacés de ma ere à satisfaire cette condition

-Sur le capte CCD (2018) , la taille de cellule de base (distance entre les points centraux de deux pixels voisins) λ g doit être inféneure à , ou ouv désigne l'ouverture numénque de l'objectif , λ la longueur d'onde dans le

2 ouv vide du laser utilisé, g le grandissement Par exemple, pour un objectif xlOO d'ouverture 1,25 on trouve 25 -74-

πucrometres On peut utiliser un objectif modifié pour avoir un grandissement x50, de mamere a obtenir 12 micromètres, ce qui permet d'utiliser une caméra cornante de pas 10 micromètres de mamere plus optimale qu'avec un objectif xlOO

-La lentille (2023) est montée s un positionneur permettant une translation smvant l'axe du faisceau entrant dans cette lentille

6. 3.réglages: vue d'ensemble

Dans le mode de réalisation précédent, l'image reçue s le capte était dans le domaine frequentiel Une image dans le domaine spatial pouvait si nécessaire êfre obtenue à partir de celle-ci par transformée de Founer bidimensionnelle inverse, ce qui était réalisé par le programme de focalisation décnt Fig 14 Dans ce second mode de réalisation, l'image reçue sur le capteur est dans le domaine spatial et une image dans le domaine frequentiel peut être obtenue par transformée de Founer

A chaque fois que l'image bidimensionnelle en fréquence reçue directement sur le capteur CCD (118) était utilisée, il faut maintenant utiliser la transformée de Founer bidimensionnelle de l'image reçue sur le capteur CCD (2018), qui constitue une image en fréquences qui peut par exemple avoir une dimension de 256x256 pixels canes Inversement, le programme de focalisation doit être remplacé par un programme de visualisation directe de l'image reçue sur le capteur CCD

Le dispositif d'atténuation du faisceau étant suppnmé, une seule image doit être utilisée au heu de deux dans les étapes ou ce dispositif était utilisé La caméra (2019) est fixe Le réglage de position de cette caméra selon l'axe optique est remplace par un réglage de position de la lentille (2023) suivant l'axe du faisceau entrant dans cette lentille Le réglage de position de la caméra dans le plan orthogonal à l'axe optique est remplace par un réglage angulaire du miroir (2016)

Pour le reste, le mode opératoire est semblable au système précédent Les étapes de réglage et les programmes utilises sont détaillées ci-après

6.4. Programme d'usage courant:

En plus des programmes décnts en 5 5 on utilise un programme de visualisation de l'image en fréquence Ce programme remplace en général le programme de visualisation directe utilisé dans le premier mode de réalisation, qm permettait d'observer une image dans le domaine frequentiel Pom utiliser ce programme, une onde de référence doit être utilisée, alors que dans le programme de visualisation directe utilise dans le premier mode de réalisation, elle n'était pas nécessaire Lorsque ce programme est utilisé, il faut éviter les vibrations et donc lâcher au moins provisoirement le dispositif de focalisation s'il est utilisé, ou attendre l'absorption des vibrations avant chaque image lorsque les moteurs pas a pas sont utilises

Ce programme est semblable au programme de focalisation décnt en 5 14 et dont l'algonthme se trouve Fig 14 II est modifie comme smt

L'étape (1000) d'acquisition d'image, détaillée Fig 13, est modifiée comme indiqué Fig 26, afin de tenir compte de l'abscence du dispositif d'atténuation de faisceau L'étape (1001) est suppnmée -75-

L'étape (1002) est modifiée pom tenir compte de l'abscence du tableau H Pour chaque pixel, la valeur est générée selon les équations suivantes

^" 1 . -r„ -, -r. -, -r, ι\ ~ 1 '^] = y^2/[⁰.'^]-ψ'^]-^^y]) ⁺^(Ψυ]-^^y])

Lors de l'étape (1002) le programme limite le tableau S à des dimensions de hpix x hpix mais n'effectue pas de moyennage

L'étape (1004) est remplacée par une transformée de Founer directe

Lors de l'étape (1005), le programme affiche l'intensité, conespondant au cane du module des éléments du tableau S transformé, ainsi que la valeur maximale de cette intensité, les coordonnées du point conespondant et le rapport enfre l'intensité de ce point et la somme des intensités de ses hmt voisins Ce programme permet d'apprécier la ponctualité et l'aspect général d'une image en fréquence Par contre, pour apprécier la non-saturation (qui doit êfre vérifiée dans presque toutes les étapes, ce qui ne sera plus rappelé) on continue d'utiliser les programmes décnts en 5 5 , la non-saturation devant être vérifiée directement sur le capteur CCD (2018)

6.5. réglage de la position du laser (2000) et du miroir (2021)

Cette étape est semblable à l'étape déente en 5 6

6.6. réglage des tensions de commande de l'actuateur piézoélectrique

Le procédé est identique à celui décnt en 5 12 , à ceci près qu'il n'y a pas de réglage du diaphragme (114) suppnmé et que la position de (2009) est réglée de mamere à maximiser l'intensité reçue s le capteur Le fait que l'image reçue directement par le capteur soit dans le domaine spatial n'affecte pas le résultat

6.7. réglage du niveau de l'onde de référence.

Cette étape est identique à celle déente en 5 11, le mveau de l'onde de référence étant mesure sur l'image directe

6.8. réglage de la position de (2023) (2002) (2016):

Ce réglage est semblable à celui décrit en 5 7 Le programme de visualisation directe est remplace par le programme de visualisation de l'image en fréquence décnt en 6 4 , pour lequel la présence de l'onde de référence est nécessaire Le réglage de position de la caméra selon l'axe optique est remplacé par un réglage de position de la lentille (2023) suivant l'axe du faisceau entrant dans cette lentille Le réglage de position de la caméra dans le plan orthogonal à l'axe optique est remplace par un réglage angulaire du miroir (2016)

6.9. réglage de la position du condenseur (2011). Ce réglage est semblable a celui décnt en 5 8 mais c'est l'image en fréquence qui doit être observée en présence de l'onde de référence, et non l'image directe en l'abscence d'onde de référence -76-

6.10. réglage de la position de la lentille (2006).

Il est semblable à celui décnt en 5 9 mais c'est l'image en fréquence qui permet d'apprécier la ponctualité

6.11. détermination du nombre de pas par pixel.

Cette étape est semblable à celle déente en 5 10, mais le pixel d'intensité maximale est observe s l'image en fréquence

6.12. obtention de la constante K. Cette étape est effectuée sur le même pnncipe que celle deente en 5 14 mais elle est modifiée pour temr compte de l'inversion entre image directe et image en fréquence

Pom obtemr l'image du micromètre, l'objectif est d'abord mis en position à peu près focalisée, le micromètre ayant été introduit comme objet Le programme de visualisation directe de l'image reçue sur le CCD est lancé, en l'abscence d'onde de référence Le diaphragme en (2007) doit être ajusté pour que la zone observée apparaisse uniformément éclaire Le micromètre est déplace sous l'objectif jusqu'à ce qu'on obtienne une image de celm-ci

L'objectif de microscope est alors déplacé par le dispositif de focalisation de manière a obtenir une image conectement focalisée Pour faciliter la focalisation, on a intérêt à visualiser une partie du micromètre ou des traits de différentes longueurs sont présents Ceci limite les 'fausses focalisations' dues à des phénomènes d'interférences en avant du micromètre

Lorsque une bonne image a été obtenue, le programme est anête et l'image obtenue est utilisée pour obtemr la distance en nombre de pixels entre deux traits, de la même manière qu'en 5 14 Si la distance entre deux graduations séparées par D_reeι micromètres est sur l'image ainsi obtenue de D_pιx pixels, si l'indice nominal des objectifs est n_v (en général, «. est proche de 1,5) et si la longueur d'onde du laser dans le vide est (λ =0,633 micromètres) et si le nombre de points de la fransformee de Founer qm sera utilisée pour 1 acquisition n N d'image est N (N=256) alors on a K = — D_ree! , ou D_reel et λ sont dans la même umté λ ^D _pιx

6.13. réglage du diaphragme:

Cette étape est semblable a celle déente en 5 15 mais le programme de focalisation est remplace par une visualisation directe de l'image reçue sur le capteur en l'abscence d'onde de référence

6.14. enregistrement de l'onde de référence:

Cette étape est semblable a celle déente en 5 16 L'onde de référence seule est enregistrée s l'image directe -77-

6.15. focalisation sur l'objet étudié.

Cette étape est simplifiée, le programme spécifique de focalisation étant remplacé par un programme de visualisation directe de l'image reçue sur le capteur CCD en l'abscence d'onde de référence

6.16. ajustement de la position du condenseur et réglage des diaphragmes

Cette étape est semblable à celle déente en 5 18 mais

- l'image en fréquence est maintenant obtenue en présence de l'onde de référence par fransformation de Founer de l'image reçue directement s le capte CCD, et non directement comme en 5 18

- au contraire, l'image de l'objet dans le domaine spatial est maintenant obtenue directement et non par fransformation de Founer de l'image reçue sur le capteur CCD

6.17. réglage des filtres.

Les filtres sont réglés pour que l'image formée sur le CCD par l'onde d'éclairage seule ait une intensité maximale de 64

6.18. acquisition de l'image.

Cette étape est semblable a celle décrite en 5 20 mais les modifications suivantes doivent être pnse en compte

-étape (1302) est remplacée par l 'acquisition d'images déente Fιg.26 -étape (1303) suppnmée -étape (1304) modifiée la représentation S[ιj] de nombres complexes est générée en affectant à chaque point la valeur suivante

S[,,j] - (2/[0,z,y] - /[l,z,y]- /[2,z,y]) +y _r(/[l,z,y] - /[2,z,y])

6_yjlref[,,j] 2j3Iref[ι,j puis en effectuant la transformée de Founer du tableau S

6.19. étape de calcul:

Cette étape est identique à celle déente en 5 21

6.20. visualisation: cette étape est identique à celle déente en 5 22

7. Description d'un troisième mode de réalisation.

Ce mode de réalisation est plus complexe et plus coûteux que les précédents mais il permet des performances supéneures en termes de définition et de rapidité

7.1. Principe.

Ce mode d'acquisition permet une amélioration des performances du mode 1 de la manière suivante -78-

- augmentation de la vitesse d'acquisition d'images

Dans le premier mode de réalisation, cette vitesse est limitée par le mouvement mécanique des moteurs pas à pas et la nécessité d'attendre jusqu'à absorption des vibrations indmtes après chaque mouvement Le mode de réalisation présent permet d'accélérer cette pnse d'images en remplaçant ce système mécanique par un système optique de déflection du faisceau, basé sur des cnstaux liqmdes et n'induisant pas de déplacements mecamques dans le système

- amélioration de la précision

Dans le premier mode de réalisation, la précision est limitée par l'impossibilité d'adopter toutes les directions possibles pour le faisceau d'éclairage et par la non pnse en compte de l'onde réfléchie Le mode de réalisation présent utilise un système à deux objectifs L'éclairage se fait alors par l'intermédiaire d'un objectif, ce qm permet au vecteur fréquence de l'onde d'éclairage de vaner sur l'ensemble des deux portions de sphère limitées par l'ouverture de chaque objectif De plus, l'onde réfléchie retraverse l'objectif d'éclairage et peut être pnse en compte

Dans le premier mode de réalisation, les vanations d'intensité de l'onde diffractée en fonction de la direction de polansation de l'onde d'éclairage ne sont pas pns en compte, ce qui entraîne des eneurs dans la mesure des fréquences élevées Dans le mode de réalisation présent, des rotateurs de polansation permettent de faire vaner la direction de polarisation de l'onde d'éclairage et la direction d'analyse de l'onde diffractée Un algonthme prend en compte l'ensemble des mesures ainsi obtenues pour obtenir des représentations fréquentielles dans lesquelles la dépendance de l'onde diffractée par rapport à la polansation de l'onde d'éclairage a été suppnmée

-compensation de l'abenation sphénque

Dans les modes de réalisation précédents l'indice moyen dans l'échantillon observé doit êfre proche de l'indice nominal de l' objectif Dans le cas contraire, la différence entre l'indice moyen de l'échantillon et l'indice nominal de l'objectif se traduit par une abenation sphénque qui limite fortement l'épaisseur de l'échantillon observable Dans ce nouveau mode de réalisation, la configuration matenelle et les algonthmes employés permettent de compenser les différences de phase induites par l'indice moyen de l'échantillon et d'annuler cette abenation sphénque

Le paragraphe 7 2 décnt maténellement le microscope utilise Ce microscope fait l'objet d'un ensemble de réglages préliminaires effectués en l'abscence de l'échantillon observé et qui n'ont normalement pas à êfre répétés lorsque l'échantillon observé est modifié

- Le réglage de position des différents éléments du système est effectué comme décnt au paragraphe 7 4

- Le module de l'onde de référence est déterminé comme décrit au paragraphe 7 4

- Les paramètres K_p , équivalents au paramètre K utilisé dans le premier mode de réalisation, sont déterminés de la mamere décπte au paragraphe 7 6

- Les caracténstiques des faisceaux d'éclairage utilisés sont déterminées comme décnt au paragraphe 7 9

- Les tableaux d'indices de commande sont déterminés comme décnt au paragraphe 7 13 -79-

Apres introduction de l'échantillon, le microscope fait l'objet d'un second ensemble de réglages

- La position des objectifs est réglée comme deent au paragraphe 7 10

- Les coordonnées relatives x,y,z des points d'ongme des faisceaux de référence associés à chaque objectif, ainsi que l'indice moyen n₀ de l'échantillon et son épaisseur L, sont détermnunes comme décnt au paragraphe 7 11 Cette détermination suppose l'utilisation d'un algonthme spécifique décnt au paragraphe 7 8 , utilisant des équations établies au paragraphe 7 7 Une version simplifiée de cet algonthme est également utilisée au paragraphe 7 9

- La valeur w ₀ caracténsant la position de l'échantillon est calculée comme décnt au paragraphe 7 15 La détermination de cette valeur fait appel à une procédure d'acquisition d'images décπte au paragraphe 7 12 et a des équations établies au paragraphe 7 14 Simultanément, un premier réglage de la position de l'échantillon est effectue comme indiqué au paragraphe 7 15 3

- La fonction de compensation des abenations, sous la forme de tableaux D_p , est obtenue comme deent au paragraphe 7 16

Lorsque ces réglages préliminaires ont été effectues, la procédme d'obtention de représentations fridimensionnelles peut êfre lancée Cette procédure est deente en 7 17 Elle fait appel à la procédure d'acquisition d'images déente en 7 12 et utilise le tableau D_p détermine en 7 16 En répétant indéfiniment cette procédme, on peut obtemr une succession de représentations tridimensionnelles caracténsant l'évolution temporelle de l'échantillon observé II est nécessaire de régler de position de l'échantillon pour que la représentation obtenue soit celle d'une zone d'intérêt de l'échantillon Ce réglage est effectué comme indique en 7 17 3 et peut impliquer une répétition des étapes préliminaires de calcul de w₀et D^decntes respectivement en 7 15 2 et en 7 16

Diverses vanantes des algoπthmes et des réglages effectues sont déentes en 7 18 Beaucoup de réglages peuvent être suppnmés si les conditions y sont favorables, par exemple si l'indice et l'épaisseur de l'échantillon sont connus à l'avance

Un mode de conception des objectifs de microscope, spécifiquement adapté a ce microscope, est deent au paragraphe 7 19

7.2. description matérielle.

7.2.1. vue d'ensemble

Les Fig 27 et 28 constituent une vue d'ensemble du système La plus grande partie du système, représentée sur la Fig 27, se trouve dans un plan honzontal et est supportée par une table optique Cependant, les deux objectifs de microscope utilisés doivent être positionnes sur un axe vertical (2263) pour pouvoir utiliser un échantillon (2218) positionné honzontalement L'axe (2263) est à l'intersection de deux plans verticaux définis en outre par leurs axes honzontaux (2261) et (2262) Ces axes honzontaux peuvent faire entre eux un angle de 0 -80-

degrés, 90 degrés ou 180 degrés La figure 28 représente en partie une coupe selon le plan vertical défim par (2261) et en partie une coupe selon le plan vertical défini par (2262)

Le faisceau issu d'un laser (2200) polansé dans le sens vertical va être dérive en quatre faisceaux alimentant les chaînes optiques droite et gauche associés aux deux objectifs du microscope Ces quatre faisceaux sont désignés sur le schéma et dans le texte par les sigles suivants

- FRD faisceau de référence droit

- FRG faisceau de référence gauche

- FED faisceau d'éclairage droit

- FEG faisceau d'éclairage gauche Chacun de ces faisceaux sera divisé par la smte en un faisceau pnncipal, que l'on notera comme le faisceau d'ongme, et un faisceau indicateur inverse Les faisceaux indicateurs inverse seront notés FRDI,FRGI,FEDI,FEGI

Le faisceau est issu du laser (2200) et a son vecteur champ électnque dinge selon un axe orthogonal au plan de la figure II traverse un élargisseur de faisceau (2201) puis est sépare en un faisceau d'éclairage et un faisceau de référence par un miroir semi-transparent (2202) Le faisceau d'éclairage traverse un diaphragme (2248), un filtre (2203) puis un dispositif d'atténuation de faisceau (2204), un dispositif de décalage de phase (2205), un dispositif de déviation du faisceau (2206) qm permet de faire vaner la direction de ce faisceau parallèle II est ensmte dévié par un miroir semi-transparent (2207) qui sépare un faisceau d'éclairage droit et un faisceau d'éclairage gauche, destinés à éclairer l'échantillon dans deux sens opposés Le faisceau d'éclairage droit FED est dévié par un miroir (2208), traverse un dispositif de déviation de faisceau et de commutation (2209), un rotateur de phase (2210), et est séparé par un miroir semi-transparent (2211) en un faisceau d'éclairage pnncipal et un faisceau indicateur inverse Le faisceau d'éclairage pnncipal traverse ensuite un achromat (2212), un diaphragme (2213), est réfléchi sur un miroir (2214) le renvoyant vers le haut, puis sur des miroirs (2215) et (2216), et traverse l'objectif (2217) pour aller éclairer l'échantillon (2218) Apres traversée de l'échantillon, il traverse l'objectif (2219), est réfléchi par les miroirs (2220) (2221) (2222), puis traverse le diaphragme (2223), l'achromat (2224), le miroir semi-transparent (2225), le rotateur de phase (2226), l'achromat (2227), le miroir semi-transparent (2228) et le polanseur (2253) et est reçu par le capte CCD (2229)

Les deux objectifs (2217) et (2219) doivent avoir leur axe optique (2263) vertical pom que l'huile optique nécessaire pour les utiliser ne coule pas Les miroirs (2214) (2215) (2216) (2220) (2221) (2222) ont pour utilité de dévier le faisceau pour que celui-ci puisse traverser les objectifs dans un sens vertical La Fig 28 représente une coupe selon les axes (2262) et (2263), articulée autour de l'axe optique (2263)

La Fig 29 est une représentation du trajet optique des rayons lumineux entre l'objectif (2219) désigné par 'OM' et le capteur CCD (2229) designé par 'CCD' Les miroirs, miroirs semi-transparents et rotateur de phase ont été omis s la figure mais influent sur la position des divers éléments Les rayons se propagent le long d'un axe optique représenté 'droιt',quι en réalité cesse d'être rectiligne enfre les plans P2 et PI. zone ou il est défléchi par des miroirs (2220) (2221) (2222) pour aborder l'objectif dans un plan vertical La partie gauche de la figure représente le trajet optique de rayons qui sont parallèles dans l'échantillon étudie, et la partie droite en vis-a-vis le trajet optique de rayons issus d'un point dans la zone observée L'achromat (2224) est désigne par 'Ll', le -81-

diaphragme (2223) par 'D', l'achromat (2227) par 'L2' f est la distance focale de Ll, f₂ est la distance focale de L2 PI est le plan dans lequel focalisent des rayons entrant parallèles dans l'objectif (plan focal image) Ce plan doit coïncider avec le plan focal objet de l'achromat (Ll) pour qu'un rayon parallèle en entrée de l'objectif soit également parallèle entre les achromats Ll et L2 P2 est le plan dans lequel se forme l'image de l'échantillon observé C'est dans ce plan que doit êfre positionné le diaphragme (D) P3 est l'image virtuelle du plan P2 par l'achromat Ll P3 doit coïncider avec le plan focal objet de L2 de manière à ce qu'un rayon issu d'un point central de l'objet observé, formant une image ponctuelle dans P2, parvienne au CCD sous la forme d'un rayon parallèle P6 est le plan focal image de L2 C'est dans ce plan que doit être place le CCD, de mamere à ce qu'un rayon parallèle en entrée de l'objectif forme une image ponctuelle sur le CCD Le trajet optique des rayons entre l'objectif (2217) et le capteur (2239) est symétrique du précédent

Le faisceau de référence séparé par le miroir (2202) est réfléchi par (2233), traverse un filtre (2234), et un miroir semi-transparent (2235) le transformant en une partie gauche et une partie droite La partie gauche est réfléchie par les miroirs (2254) (2236) , traverse le filtre complémentaire (2255), le dispositif de décalage de phase (2251) et le diaphragme (2250) puis atteint le miroir semi-transparent (2228) qui la sépare en un faisceau pnncipal et un faisceau indicateur inverse Le faisceau pnncipal est dingé vers le CCD (2229)

Le faisceau d'éclairage et le faisceau de référence ont tous deux des faisceaux indicateurs inverse ayant mêmes caracténstiques que le faisceau pnncipal mais se dingeant dans le sens opposé L'indicateur inverse FRGI du faisceau de référence FRG, issu du miroir semi -transparent (2228), traverse l'achromat (2281) et est focalise s un miroir (2282) qm le réfléchit II retraverse alors l'achromat (2281) qui le rend a nouveau parallèle puis il est a nouveau réfléchi par le miroir semi-transparent (2228) Il a alors la même direction (mais en sens opposé) que le faisceau de référence dingé vers le capteur CCD (2229) De même, l'indicateur inverse FRDI du faisceau d'éclairage FRD, issu du miroir semi-transparent (2211), est focalise par l'achromat (2231) sur le miroir (2232) Celui-ci le réfléchit, et après une nouvelle réflection s le miroir seπu-transparent (2211) il a la direction opposée à celle du faisceau d'éclairage pnncipal dingé vers l'objectif (2217) L'ensemble du dispositif est symétrique sur le plan optique par rapport à l'objet observé II existe donc un faisceau d'éclairage gauche ayant un rôle symétnque par rapport au faisceau d'éclairage droit, et un faisceau de référence droit ayant un rôle symétnque de celui du faisceau de référence gauche

Le faisceau d'éclairage gauche FEG, issu du miroir semi-transparent (2207), est réfléchi sur les miroirs (2280) et (2283) pms traverse le dispositif de déviation et de commutation (2240) équivalent à (2209) Il traverse ensmte le rotateur de polansation (2241) puis est séparé par le miroir semi-transparent (2225) en un faisceau pnncipal qui se dinge vers l'objectif de microscope (2219), et un faisceau indicateur inverse FEGI qui traverse l'achromat (2242), est focalise sur le miroir (2243) et finalement réfléchi à nouveau sur (2225)

Le faisceau de référence droit FRD, issu du miroir semi-transparent (2235), est réfléchi par le miroir (2244) et traverse le filtre complémentaire (2256) Le miroir semi-transparent (2245) le sépare en un faisceau pnncipal qm traverse le polanseur (2252) et atteint le CCD (2239), et un faisceau indicateur inverse FRDI qui traverse l'achromat (2246) et est focalisé sur le miroir (2247), puis retourne vers le miroir semi-transparent (2245) qm le réfléchit en direction de l'objectif (2217) -82-

Les polanseurs (2252) et (2253) sont des plaques peu épaisses constituées d'une feuille dichroique maintenue enfre deux vitres de vene

Les zones (2274) (2275) (2276) (2277), délimitées par des pointillés sur le dessin, correspondent à des parties du système entièrement immergées dans de l'huile optique Une telle zone constitue donc un récipient étanche contenant les éléments optiques visibles sur le dessin L'entrée et la sortie du faisceau dans ce récipient se font par des fenêtres traitées antiréfléchissant sur leur face externe. Ceci permet de limiter les défauts liés à la taille des venes utilisés dans les différents dispositifs y étant inclus

Les CCD (2239) et (2229) sont intégrés à des caméras (2284) et (2230) elles-mêmes fixées à des positionneurs trois axes permettant d'en ajuster la position suivant l'axe (2264) et suivant les deux axes orthogonaux à (2264), ainsi qu'en rotation autour de l'axe (2264) Les achromats (2227) (2224) (2212) (2237) (2246) (2231) (2242) (2281) sont fixés à des positionneurs un axe permettant un réglage fin de la position dans le sens de l'axe (2264) Les miroirs (2282) (2243) (2232) (2247) sont fixés à des positionneurs permettant un ajustement de leur onentation Les diaphragmes (2213) et (2223) sont réglables et fixés à des positionneurs deux axes permettant d'en régler la position dans le plan orthogonal à (2264) Les miroirs semi-transparents (2225) (2228) (2211) (2245) sont fixés à des positionneurs permettant d'en régler l'onentation Les miroirs (2214) et (2222) sont fixés a des positionneurs permettant d'en régler l'onentation L'objectif de microscope (2219) est fixe à un positionneur 2 axes permettant de le déplacer dans un plan orthogonal à l'axe (2263) L'objectif (2217) est fixé à un dispositif de focalisation permettant de le déplacer smvant l'axe (2263) L'ensemble du système est fabnqué avec la plus grande précision possible dans le positionnement des divers éléments Les miroirs (2247) (2232) (2243) (2282) sont éqmpés d'obturateurs manuels (2257) (2258) (2259) (2260) permettant de suppnmer les faisceaux réfléchis par ces miroirs Les faisceaux FRD et FRG peuvent être suppnmes en utilisant des filtres complètement opaques

L'échantillon (2218) est constitué de deux lamelles d'épaisseur stantard (150 μm) entre lesquelles se trouve en fine couche (50 a 100 μm) la substance à observer Cet échantillon est fixé a une lame plus épaisse de mamere à ce que celle-ci n'empêche pas l'accès de l'échantillon par les objectifs L'ensemble est fixé a un positionneur 3 axes en franslation

Les objectifs utilisés peuvent par exemple être des objectifs planapochromatiques d'ouverture numénque OMV= 1,4 et de grandissement g= 100 formant l'image à 160mm du col de l'objectif II est également possible d'utiliser d'autres types d'objectifs, décnts aux paragraphes 7 19 à 7 21 Les achromats (2212) (2237) (2224) (2227) (2246) (2231) (2242) (2281) peuvent avoir par exemple la même distance focale / = /, = f₂ = 200mm

Les capteurs CCD utilisés doivent avoir des pixels canes et une zone utile canee dont le coté a pour longueur D = 2f₂ , le nombre de pixels étant N _pιx x N _pιx avec par exemple N _pιx =256 Les dispositifs de

contrôle du faisceau (2204) (2205) (2206) (2209) (2240) (2251) (2210) (2241) (2226) (2238) sont tous pilotes par des rotateurs de phase commandés par des tensions bipolaires La commande de ces dispositifs doit être synchronisée avec l'acquisition des images par la caméra La caméra peut être une caméra rapide de type analyseur de mouvement, dotée d'une mémoire suffisante, disponible par exemple chez Kodak Le système de -83-

calcul est un ordinateur doté d'une mémoire suffisante pom stocker les tableaux tridimensionnels nécessaires. Des machines ayant par exemple 8Go de mémoire sont disponibles chez Digital Equipment.

Les filtres en (2203) (2234) (2255) (2256) permettent de régler l'intensité des différents faisceaux. Comme dans le premier mode de réalisation, leurs valeurs doivent être fréquemment ajustés pendant les différents réglages et pendant l'utilisation du microscope. Ces ajustements se font de manière similaire à ce qui était fait dans le premier mode de réalisation et ne seront pas rappelés. Ils ont également pour rôle de limiter l'intensité des faisceaux qui se dirigent en sens opposé à la normale et tendent à retourner vers le laser (2200), pendant certaines opérations de réglage.

7.2.2.Dispositif d'atténuation de faisceau:

Le dispositif d'atténuation est représenté Fig.30. Il est constitué d'un rotateur de phase (2501) désigné 'RI' s la figure, d'un polariseur Glan-Thomson (2502) désigné 'POLI', d'un second rotateur (2503) désigné 'R2', et d'un second polariseur (2504) désigné 'POL2'. Le faisceau entrant dans le dispositif est polarisé verticalement. L'angle de l'axe neutre de (2501) avec la verticale est r9pour une tension bipolaire appliquée aux bornes du dispositif de -5V et est tourné d'un angle a par application d'une tension de +5V, avec a = 22 degrés environ. L'axe neutre du rotateur (2503) est caractérisé par les mêmes angles, mais par rapport à l'horizontale et non à la verticale. Le polariseur (2502) sélectionne le sens de polarisation horizontal. Le polariseur (2504) sélectionne le sens de polarisation vertical.

La Fig.31 illustre le fonctionnement de la partie du dispositif constituée de (2501) et (2502) pour une tension appliquée de -5V. Elle représente en trait gras le vecteur champ électrique (2505) du faisceau en entrée du dispositif, dans un repère constitué de l'axe de polarisation vertical (2506) et de l'axe de polarisation horizontal (2507). Le passage par le rotateur RI (2501) fait tourner ce vecteur d'un angle 2t9et il est donc transformé en (2508). Le passage par le polariseur POLI (2502) constitue une projection sur l'axe horizontal. En sortie de ce polariseur, le vecteur champ électrique (2509) du faisceau est donc horizontal et son amplitude a été multipliée par un facteur sin(20) .

La figure 32 illustre le fonctionnement de la partie du dispositif constituée de (2501) et (2502) pour une tension appliquée de +5V. L'axe neutre de RI ayant été tourné d'un angle a, le vecteur champ électrique est tourné d'un angle total 2(α + θ) et l'amplitude du champ électrique en sortie est multipliée par sin(26' + 2a) . sin(20) Le facteur d'atténuation entre les positions 'ouverte' (+5V) et 'fermée' (-5V) est donc de o, = — r-^ — —- .

¹ sin(2c. +26>) expression qui s'inverse en:

( sin(2α) θ = — Arc tan

2 1_ co s(2a) a,

Par exemple pour a = — et = 22° on trouve θ = 1,30° -84-

La seconde partie du dispositif , constituée de (2503) et (2504), fonctionne exactement comme la première, a ceci près qu'elle prend en entrée un faisceau polansé honzontalement et délivre en sortie un faisceau polanse verticalement Le facteur d'atténuation a₂ de cette seconde partie est donc donné par la même formule que o, et on réglera les deux parties du dispositif de façon à avoir dans chaque partie la même atténuation (ou à peu près) Du fait de dispantes de réglage enfre les deux parties du dispositif, a₂ et α, ne sont cependant pas ngoureusement égaux en pratique

La commande d'atténuation se fait selon la table ci-dessous, ou , désigne la tension bipolaire appliquée à (2501) et V₂ celle appliquée à (2503)

VI V2 atténuation

-5V -5V «1 «2

-5V +5V O]

+5V -5V a₂

+5V +5V 1

7.2.3.Dispositif de décalage de phase:

Ce dispositif est constitué de deux unités identiques placées l'une à la suite de l'autre Une umte est constituée comme indiquée Fig 33

Le faisceau polansé verticalement en entrée du dispositif traverse d'abord un rotateur de phase (2601) désigne par 'RI ' puis une lame biréfringente umaxe (2602) désignée par 'LP', puis un second rotateur de phase (2603) désigné par 'R2' et un polanseur (2604) désigné par 'POL' Les deux positions de l'axe neutre de chaque rotateur sont disposées de mamere symétrique par rapport à un axe vertical Les positions des deux rotateurs conespondant a une même tension de commande sont du même coté de l'axe vertical pour une tension de -5V elles sont représentées en traits pointillés, pour une tension de +5V elles sont représentées en traits pleins De même, les deux axes de la lame biréfringente sont disposés symétriquement par rapport a cet axe vertical (le troisième axe étant dans le sens de propagation du faisceau) La Fig 34 montre l'état du vecteur champ electnque du faisceau à chaque étape de la traversée du dispositif, pour une tension de -5V appliquée à chaque rotateur

La Fig 35 reprend la Fig 34 en précisant les valeurs des angles entre les différents vecteurs et les déphasages entre ces vecteurs et le vecteur en entrée du dispositif La Fig 36 reprend la Fig 34 en précisant les valeurs des angles entre les différents vecteurs et l'atténuation sur chaque vecteur Le vecteur champ electnque (2605) en entrée du dispositif est vertical Après traversée du rotateur RI

(2601) il est symétrise par rapport à l'axe neutre (2606) de ce rotatem, ce q donne le vecteur (2607) Apres traversée de la lame biréfringente, le vecteur (2607), représenté en pointillés, est décomposé en deux composantes (2608) et (2609) correspondant à chaque axe neutre de la lame La composante (2609) est affectée d^'un décalage de phase — et est réduite en amplitude d'un facteur cos a \ La composante (2608) est affectée d'un -85-

décalage de phase - — et est réduite en amplitude d'un facte sin a \ . Après traversée du rotateur (2603) l'ensemble est symétrise par rapport à l'axe neufre (2612) de ce rotatem. (2608) est transformé en (2611), (2609) est transformé en (2610). Après traversée du polariseur (2604), ces deux composantes sont projetées sur un axe vertical. La composante (2610) est multipliée par un factem cosl — -a \ et a donc été affectée globalement par un

factem cos² α \ . La composante (2611) est multipliée par un facteur sin) α et a donc été affectée

globalement par un facteur sin -2 1 — ^π α \ . Les deux sont ensuite ajoutées pour donner une composante unique

_^ 4 (2615) de valeur: v = cos ωt -— cos² ( α — +cos ωt+— sin² \ α

ou ω est la pulsation de l'onde, t est le temps. On vérifie v = cos(wt)cos — r-sii^wtj sin — sin(2c.) soit en représentation complexe: φ Ψ ι \ c = cos — y sin— -s\n\2α)

Si #est l'argument de c alors on a: cos — φ cos θ ² sin²(2α) + cos² — (l-sin²(2α))

. φ . , ,. sin— sιn 2α) sin θ =

Jl + sin² - -l+sin²(2«))

Ces formules s'inversent en:

. φ sine? sin— =

² sin² 6> + cos² 6>sin²(2c.) φ cos^sin(2«)

COS — = - ------=---=___----___-----------=--=--r

² -Jsin² θ + cos² θ sin² (2 )

On cherche a créer un décalage de phase de θ = 60° dans une position des rotateurs et θ = -60° dans la position symétrique, ce qui conespond à un décalage de phase total de 120 degrés. L'équation ci-dessus permet de déterminer la valeur du décalage de phase total φ créé par la lame entre ses deux axes neutres.

Avec θ = 60° et α = 40° degrés on obtient: φ =120,7566 degrés. Il faut donc utiliser une lame uniaxe créant pour la longueur d'onde considérée une différence de phase de 120,75 degrés entre ses deux axes. -86-

Les deux axes de la lame n'ont pas un rôle symétnque Si Aφ, est le décalage de phase à la traversée de la lame pom un rayon polansé suivant l'axe 1, il n'existe qu'un seul choix des axes 1 et 2 tel que Aφ_λ - Aφ₂ ≡ +120 degrés La lame uniaxe doit êfre onentée de mamere à ce que le rotateur (2601) fasse tourner la polansation du rayon incident vers l'axe 2 quant il est soumis à une tension bipolaire de -5V

Le dispositif de décalage de phase étant constitué de deux unités de ce type, soit V la tension appliquée au z-ième rotateur duy-ième dispositif (z ety vanant de 1 à 2) La commande du système de décalage de phase se fait selon le tableau smvant f .1 Vu v , <^/22 décalage

-5V -5V -5V -5V 0 °

5V 5V -5V -5V +120°

-5V -5V 5V 5V +120°

5V 5V 5V 5V -120°

les autres combinaisons étant inusitées

7.2.4. Déviateur de faisceau

Le déviateur de faisceau est représenté sur les Fig 37 et 38 Son unité de base est un bloc élémentaire de vanation constitué des éléments (2801) à (2804)

Un bloc élémentaire de vanation est constitué d'un premier rotateur (2801) noté 'RI' suivi d'un pnsme biréfringent (2802) noté 'PD' (pnsme de déviation) puis d'un second rotateur (2803) noté 'R2' et d'un polariseur de Glan-Thomson (2804) noté 'POL' Le rotateur (2801) a son axe neutre dans le sens vertical pour une tension appliquée de -5V Pour la même tension appliquée, le rotateur (2803) a son axe neutre dans le sens horizontal Le pnsme (2802) est constitué d'un maténau biréfringent, calcite ou quartz La direction de polansation du rayon extraordinaire (premier axe neutre) est par exemple dans le sens vertical, et la direction de polansation du rayon ordinaire (second axe neutre) est dans le sens honzontal Un rayon incident sur ce pnsme est donc divise en un rayon ordinaire polansé dans le sens vertical et un rayon extraordinaire polansé dans le sens honzontal Le rayon ordinaire et le rayon extraordinaire ont une inclinaison différente en sortie du pnsme (angle de leur direction de propagation avec celle du faisceau entrant)

Les Fig 39 et 40 illustrent le fonctionnement de ce bloc élémentaire de vanation La Fig 39 conespond a une déviation dans un sens et la Fig 40 à une déviation dans l'autre sens Les flèches en gras représentent les vecteurs champ electnque des faisceaux considérés

Dans le cas de la Fig 39, les tensions appliquées aux deux rotateurs sont respectivement -5V pour (2801) et +5V pour (2803) Le vecteur champ electnque du faisceau entrant est vertical (2901) Après traversée du premier rotateur dont l'axe neutre (2902) est vertical, il reste vertical (2903) Après traversée du pnsme de déviation il est constitué du seul rayon extraordinaire (2904) Après traversée du second rotateur il est symétrise par rapport à l'axe (2906) de ce rotateur, qm fait lui-même un angle de 40 degrés avec l'honzontale (on a suppose pom le dessin que =40° mais le résultat ne dépend pas de l'exactitude de cette valeur) Il est donc transforme en -87-

un vecteur ( 2905) faisant un angle de 10 degrés avec l'horizontale. Le polariseur projette ce vecteur sur l'horizontale pour obtenir le vectem (2907) dont la déviation conespond au seul rayon extraordinaire.

Dans le cas de la Fig. 40, les tensions appliquées aux deux rotateurs sont respectivement +5V pour (2801) et -5V pour (2803). Le vectem champ du faisceau entrant est vertical (2911). Après traversée du premier rotateur il est symétrise par rapport à l'axe (2912) de ce rotatem, qui fait lui-même un angle de 40° avec la verticale. Il est donc transformé en un vectem (2913) faisant un angle de 10 degrés avec l'horizontale. Après traversée du prisme de déviation, le faisceau est décomposé en un faisceau extraordinaire de vecteur champ (2914) et un faisceau ordinaire de vecteur champ (2915). Après traversée du second rotatem, d'axe horizontal, le vecteur champ du faisceau extraordinaire est symétrise par rapport à l'horizontale et devient (2916). Le polariseur sélectionne alors la seule composante horizontale et le vecteur sortant (2917) conespond donc au seul rayon ordinaire.

Un bloc élémentaire complet est représenté par le rectangle (2805), la direction du champ du faisceau entrant étant représentée par la flèche (2806). Le bloc (2807) est identique mais tourné de 90 degrés par rapport à un axe horizontal de sorte que la direction du champ du faisceau entrant est horizontale (2808). L'ensemble des deux blocs dorme un doublet élémentaire (2809) permettant une déviation élémentaire du faisceau dans les directions horizontale et verticale. Comme indiqué sur la Fig.38, l'ensemble du déviateur est constitué de huit doublets élémentaires successifs. Cependant, afin de disposer d'un système de commutation efficace, le dernier doublet (numéroté 0) est placé sur la partie du faisceau ou les faisceau d'éclairage gauche et droit ont déjà été séparés. Deux doublets identiques (D0) et (DOb) sont donc utilisés, un sur chaque branche du faisceau. Lorsque une tension de -5V est appliquée à ses deux rotateurs, un bloc élémentaire agit comme un commutateur fermé. Le dernier doublet peut donc commuter efficacement le faisceau, une tension de -5V devant être appliquée à tous ses rotateurs pour avoir un commutateur fermé.

Le bloc (2209) sur la Fig.27 représente donc le doublet DOb. Le bloc (2240) représente le doublet D0. Le bloc (2206) représente les doublets Dl à D7.

Le type de cristal dans lequel est fabriqué le prisme et l'angle enfre ses deux faces déterminent l'angle de variation de l'inclinaison du faisceau entre les deux positions d'un doublet élémentaire. On adopte les notations suivantes: n_l : indice du liquide d'immersion utilisé pour le dispositif de déviation de faisceau. o : ouverture de l'objectif A : ouverture du faisceau en entrée du dispositif de déviation, à peu près égale à sa valeur au niveau du diaphragme ou se forme l'image. A est défini comme le sinus du demi-angle au sommet du cône formé par les rayons provenant de l'objectif g : grandissement de l'objectif. d : distance entre les plans P2 et P4 de la Fig.29. /, : distance focale de la lentille Ll sur la Fig.29. La relation d'Abbe et la résolution des équations optiques donne:

A l- ⁿιg f\ -88-

La Fig.41 montre le principe du calcul de la déviation par le prisme des rayons ordinaires. Le rayon (2922) pénètre dans le prisme (2921) et en ressort en (2923). θ_d est l'angle au sommet du prisme de déviation. θ _e est l'angle du faisceau extraordinaire sortant avec la face extérieure du prisme. θ₀ est l'angle du faisceau ordinaire sortant avec la face extérieure du prisme. n_e est l'indice extraordinaire du prisme de déviation. n₀ est l'indice ordinaire du prisme de déviation. n n

On a: sïnθ₀ = — -sin#_d et de même pour le rayon extraordinaire: sine¹,, = — sin<9_rf d'où: n, n,

sin#_ - sinέ? -sin6>

'; soit au premier ordre en {θ_e - θ₀ )

{θ_e - θ₀) eosθ_d = -sinr?

Le i-ième doublet doit créer une variation de l'inclinaison d'amplitude: θ_e - θ₀ = —

2'

Le demi-angle au sommet du i-ième prisme vaut donc:

θ _ή = Arctan 2^!' n_e -n₀ ) soit avec la valem de A précédemment obtenue:

1 1 r t θ_d = Arctanj

_\2' g n_e -n₀ f j >J

Dans cette équation il faut prendre en compte les valeurs suivantes: quartz: n_e - n₀ = 0,009 calcite: n_e - n₀ = -0,172

Pom chaque prisme:

-inverser les axes ordinaire et extraordinaire permet d'inverser le sens dans lequel sont déviés les rayons lorsque on passe d'un couple de tensions (-5V.5V) à un couple de tension (5V,-5V) appliqué aux rotateurs du bloc élémentaire concerné. Ce sens étant inversé entre le quartz et la calcite pour un même choix des axes ordinaire et extraordinaire, ces axes doivent êfre inversés dans un prisme en calcite par rapport à leur position dans un prisme en quartz.

-Inverser l'orientation du prisme (sommet orienté vers le bas au lieu du haut) permet également d'inverser le sens dans lequel sont déviés les rayons lorsque on passe d'un couple de tensions (-5V,5V) à un couple de tension (5V.- 5V) appliqué aux rotateurs du bloc élémentaire concerné. Mais en même temps cette opération inverse le sens de -89-

déviation des rayons lorsqu'un couple de tensions fixe est appliqué Afin d'avoir une déviation 'fixe' minimale des rayons le pnsme à plus forte déviation de chaque séné, calcite ou quartz, doit êfre inversé par rapport aux aufres Afin de maintenir la déviation dans le sens souhaité, ses axes ordinaire et extraordinaire doivent être inversés

Pom chaque pnsme on choisit la matière, quartz ou calcite, qui permet d'obtemr le plus facilement cet angle au sommet On choisit ensmte l'onentation du pnsme pour qu'à tension fixe appliquée aux rotateurs, les vanations de direction indmts se compensent au mieux enfre les pnsmes On choisit la position des axes ordinaire et extraordinaire pour que les rayons soient toujoms déviés dans le même sens lorsqu'on passe d'un couple de tensions (-5V,5V) à un couple de tension (5V,-5V) appliqué aux rotateurs du bloc élémentaire concerné Pour chaque doublet, il faut préciser pour les deux pnsmes inclus dans le doublet, qui ont les mêmes caractenstiques l' angle au sommet, l' onentation du sommet (normale ou inversée par rapport à la Fig 37 sur laquelle il est onente vers le haut), la position des axes ordinaires ou extraordinaires (normale ou inversée par rapport à la figure 37 sur laquelle l'axe extraordinaire est vertical) Par exemple pour un objectif o= 1,25 g=100 et avec /, =200 mm, _ï=20 mm on obtient le tableau suivant ou les angles sont en degrés indice du θ_d (calcite) θ_d (quartz) choix onentation du position des axes pnsme sommet ordinaire et extraordinaire

0 3 742 51 340 calcite inversée normale

1 1 873 32 005 calcite normale inversée

2 0 937 17 354 calcite normale inversée

3 0 468 8 881 quartz inversée inversée

4 0 234 4 467 quartz normale normale

5 0 117 2 237 quartz normale normale

6 0 058 1 119 quartz normale normale

7 0 029 0 559 quartz normale normale

Une déviation du faisceau est une vanation de sa direction Mais a grande distance du doublet créant la déviation elle se traduit également par un décalage spatial de la zone éclairée Afin que ce phénomène ne soit pas pénalisant, les distances entre les éléments du déviateur doivent être réduites au minimum et ces éléments doivent avoir une section suffisante pour que, quelle que soit l'onentation choisie, le faisceau 'remplisse complètement' la zone délimitée par le diaphragme Par exemple cette section peut êfre de 12 mm, les polanseurs de Glan-Thomson étant alors de dimension 12 x 30 mm Toutes les parties du déviateur qui ne transmettent pas directement le faisceau doivent êfre aussi absorbantes que possible, afin de limiter le bruit

Afin de suppnmer les déviations constantes par les pnsmes de déviation, l'indice du liquide optique dans lequel un pnsme est immergé doit être égal à la valeur moyenne des indices ordinaire et extraordinaire du pnsme soit

_T. . , 1658 + 1486 , „„ Pom la calcite n, = = 1572 -90-

1544 + 1553

Pom le quartz n, 15485

La partie du déviateur de faisceau dont les pnsmes sont en calcite doit donc être immergée dans un liquide d'indice 1 572, et la partie dont les pnsmes sont en quartz doit donc être immergée dans un liquide d'indice 1 5485. La cuve contenant le déviateur et le liquide optique doit donc être séparée en deux parties, une fenêfre en vene permettant le passage du faisceau entre ces deux parties qui contiennent des liqmdes optiques d'indices différents

La commande du dispositif se fait par commande des 36 rotateurs Dans chaque doublet les rotateurs de phase sont numérotés de 0 à 3, le numéro 0 étant le rotateur le plus 'à gauche ' sur la Fig 28 Si z est l'mdice du doublet, vanant de 0 à 7 ety est l'mdice du rotateur dans un doublet, vanant de 0 à 3, alors on affecte au rotateur l'indice global fc = ; + 1 + y * 9 , sauf pour le doublet numéroté 0b pour lequel on a fc = y * 9 On utilise un mot de commande 36 bits dans lequel le bit numéro fc conespond au rotateur d'indice global fc Pour chaque bit, une valeur de 0 conespond à une tension appliquée de -5V et une valeur de 1 conespond à une tension de +5V

Un éclairage est caracténsée par le capteur sur lequel parvient le faisceau d'éclairage direct et par des coordonnées symboliques sur ce capteur Le capteur sera indicé par l'entier/? et les coordonnées symboliques seront z,y ou z ety vanent entre 0 et 255 Les coordonnées symboliques ne conespondent pas nécessairement à des coordonnées en pixels sm le capteur Lorsque on souhaite obtenir un éclairage caracténsé par les indices p,ιj, le mot de commande est donné par le tableau ci-dessus

capteur coormot de commande COM\p,ι ] données

(2239) (v) { _\ ,ι_s , _] ,ï_s ,0_] ,j_s ,0_] ,jg) p=0

(2229) (V) ((z%2)₁ ,0, ,(z /2)₇,(z%2)_] ,0₁ ,(z /2)₇ ,(y%2)₁ ,0, ,{J / 2)₁ , {J%2) _] ,0_X J '^) p=l

Dans ce tableau a%b signifie a modulo b a/2 représente le prodmt de la division entière de a par 2, c'est-à-dire a décalé vers la droite (a,b,c ) représente a concaténé avec b puis avec c ete a, représente a expnmé s z bits

Si a est un nombre entier, son expression en binaire est une suite de 0 et de 1 En transformant les 0 en 1 et vice- versa on obtient son complémentaire que l'on note a Cette notation sera maintenue par la smte

Lorsque on souhaite suppnmer les deux faisceaux d'éclairage, le mot de commande à utiliser est 0

7.3.Réglage de l'ensemble. -91-

7.3.1.Première mise en place du système

Le système, à l'exeption des éléments (2204)(2205)(2206)(2209)(2240) (2210) (2241) (2238)(2226), est mis en place géométriquement avec une précision maximale. Le trajet du faisceau est contrôlé par utilisation d'un morceau de papier diffusant interposé sur sa trajectoire. La position des miroirs, miroirs semi-transparents, ainsi que de (2200) et (2201) est ajustée en contrôlant ainsi la trajectoire du faisceau.

7.3.2.Mise en place des systèmes de contrôle des faisceaux.

Pour la mise en place des systèmes de contrôle des faisceaux il est nécessaire de disposer d'un photomètre de précision suffisante, qui sera utilisé pour mesurer des atténuations ou détecter des extinctions de faisceau. Ces systèmes sont composés d'éléments optiques (prismes, rotateurs,polariseurs,lames biréfringentes) qui doivent être positionnés avec précision par rapport à l'axe optique et être montés sur des positionneurs permettant un réglage fin en rotation autour de cet axe.

7.3.2.1.Marquage des rotateurs L'ensemble du système de modification du faisceau d'éclairage est basé sur l'utilisation de rotateurs de phase. Il est essentiel que l'axe de chaque rotateur tourne dans le sens prévu à l'application d'une tension opposée à celle utilisée lors de sa mise en place. La position du rotateur doit être définie à sa mise en place et le réglage ne se fait que sur quelques degrés. Pour préciser la position des axes du rotateur avant mise en place on procède à un test enfre polarise s croisés, en deux étapes. Etape 1, décrite par la Fig.42. le rotateur (3001) est mis en place entre le polariseur d'entrée de direction de polarisation (3002) et le polariseur de sortie de direction de polarisation (3003). Une tension de +5V est appliquée. Le rotateur est réglé en rotation de mamere à annuler le rayon sortant. La position conespondante, conespondant au polariseur d'entrée, est marquée d'un point rouge (3004).

Etape 2: une tension -5V est appliquée. Le polariseur de sortie est réglé pom annuler le rayon. On marque un point vert correspondant au milieu des deux positions de polarisems, du coté ou l'angle est le plus faible. Les Fig.43 et 44 décrivent cette étape dans les deux cas possibles définis par la nouvelle position du polariseur de sortie, respectivement (3005) et (3006). Dans le cas de la Fig.43 le point vert est marqué en (3007) et dans le cas de la Fig.44 il est marqué en (3008).

Le point rouge marque alors la position de l'axe pour une tension de +5V et le point vert marque sa position pour une tension de -5V. Ces points permettent ensuite de prépositionner conectement les éléments lors de la procédure de réglage.

7.3.2.2.Misc en place de l'atténuateur de faisceau

On met d'abord en place le polariseur (2502) et on effectue un réglage fin en rotation de mamere à avoir extinction du faisceau sortant. On met ensuite en place le rotateur (2501) et on effectue un réglage fin de sa position en rotation de mamere à avoir l'atténuation a\ recherchée lors du passage de la position ouverte (tension de +5V appliquée à (2501)) à la position fermée (tension appliquée de -5V). -92-

On commute alors (2501) en position ouverte ( tension de +5V ) et on met en place le polanseur (2504) que l'on ajuste en rotation de mamere à avoir extinction du faisceau sortant On met alors en place le rotateur

(2503) et on effectue un réglage fin de sa position en rotation de mamere à avoir l'atténuation a² recherchée lors du passage de la position ouverte (tension de +5V appliquée à (2503)) à la position fermée (tension appliquée de - 5 V) Par exemple on peut utiliser a = a₂ = — ce qm donne comme atténuations mesurables par le photomètre

16 a „_x2 = a „₂2 = 1

^{1 2} 256

On mesme alors les valeurs exactes obtenues des coefficients a_x et a₂ Les coefficients α, et a₂ ainsi obtenus seront utilisés par la smte

7.3.2.3. Mise en place des dispositifs de décalage de phase

Ces dispositifs (2205) et (2251) sont mis en place avec la meilleure précision possible compte tenu des marquages effectués précédemment

7.3.2.4. Mise en place du dispositif de déviation du faisceau et de commutation. Chaque bloc élémentaire est mis en place successivement en partant du bloc le plus proche du dispositif de décalage de phase L'atténuateur de faisceau doit être en position ouverte Un bloc élémentaire est mis en place dans l'ordre suivant

-Mise en place du polanseur POL (2804) Réglage fin en rotation pour annuler le rayon sortant

-mise en place du rotateur R2 (2803) Réglage fin en rotation pour maintenir le rayon sortant a une valeur nulle, une tension de -5V étant appliquée à R2

-mise en place du rotateur Rl(2801) Réglage fin en rotation pour maintenir le rayon sortant a une valeur nulle, une tension de -5V étant appliquée à R2 et RI

-mise en place du pnsme de déviation PD (2802) Réglage fin en rotation pour maintenir le rayon sortant à une valem nulle, une tension de -5V étant appliquée à RI et R2 Les blocs D0 et DOb sont mis en place de la même manière que les aufres

7.3.2.5.Mise en place des rotateurs de phase (2210) (2241) (2238)(2226). Ces rotateurs doivent avoir leur axe neutre vertical pour une tension appliquée de -5 V (point vert vers le haut) L'axe de (2210) doit tourner vers la droite de la Fig 27 lorsqu'une tension de +5V est appliquée (point rouge a droite) L'axe de (2241) doit tourner vers la gauche de la Fig 27 lorsqu'une tension de +5V est appliquée (point rouge a gauche) L'axe de (2238) et de (2226) doit tourner vers le haut de la Fig 27 lorsqu'une tension de +5 V est appliquée (point rouge en haut)

7.3.2.6. Mise en place des polariseurs: Les polanseurs (2252) et (2253) sont mis en place avec leur axe passant onenté suivant la verticale -93-

7.3.3. Réglage de géométrie

Dans un deuxième temps on effectue un réglage de geométne visant à positionner conectement les caméras, les lentilles achromatiques et certains miroirs Certains de ces réglages utilisent un capteur CCD auxilliaire, dont le pas (distance entre les centres de deux pixels voisins) doit êfre aussi réduit que possible A partir de l'image reçue soit s un des captems du système, soit sur le capteur auxilliaire, on utilise un algonthme permettant l'appréciation de la ponctualité de l'image et la localisation du maximum L'image reçue sur un capteur est obtenue en faisant interférer sur ce capteur une onde de référence et l'onde dont la ponctualité doit être évaluée

7.3.3.1. Obtention d'une image bidimensionnelle et appréciation de la ponctualité:

On a vu dans le premier mode de réalisation comment une image bidimensionnelle en nombres complexes peut être générée a partir de trois images différant entre elles par la différence de phase entre l'onde d'éclairage et l'onde de référence Cette image dans le domaine frequentiel peut être transposée dans le domaine spatiale par transformée de Founer Dans les phases de réglage qui suivent, on sera amené a apprécier le caractère ponctuel et le cenfrage de telles images, dans le domaine spatial ou frequentiel Ces images seront soit reçue s un des capteurs CCD du dispositif, soit reçues sur un capteur auxilhaire Les décalages de phase seront réalises soit à l'aide de (2205) soit à l'aide de (2251) Dans certains cas, l'onde d'éclairage jouera le rôle d'onde de référence et vice-versa Dans tous les cas, le système réalise donc trois images successives avec des décalages successifs, indicés par l'entier d, de +120 (d=0), 0 (d=l), -120 (d=2) degrés Ceci donne un tableau de pixels l[d, i, y] ou l'mdice d vanant de 0 à 2 indice le déphasage L'image en nombre complexes en est dédmte par

S[,,j ] = [~{2l[0,,,j] - /[!,.,,] - 7[2,z,y]) +7-^{l[ ,j] ~ l[2,ι,j])

Si on cherche à évaluer la ponctualité dans le domaine spatial, une transformation de Founer inverse est appliquée a cette image

Dans les deux cas (qu'il y ait eu ou non fransformation de Founer), a partir de cette image de dimensions N_pιx x N_ptx conespondant au nombre de pixels utiles du capteur concerné (par exemple 256), on évalue la ponctualité par un programme comportant les étapes suivantes

Etape 1 le programme calcule le maximum max du module de S[ι,j] et détermine ses coordonnées

(imaxljmaxl)

Etape 2 la partie du tableau S[t,j] située autom de (imaxljmaxl) est extraite On crée ainsi un tableau Sa[ι, y] de dimensions N_a x N_a avec par exemple N_α=16

&[z,y] = S f- imaxl, y + jmaxl

Etape 3 une transformée de Founer directe est effectuée sur le tableau Sa

Etape 4 le tableau Sa est complété par des zéros et on obtient un tableau Sb de dimensions N_b x N_b

Sb[ι,j] = Sa Xh -V- N_h l - + ΛU

2 2 , J - + — -

^' 2 2 _. -94-

N„ N NU N quand N - l ≥ i ^b- + ^ ≥ et N_a - l ≥ j ^ + -^ > 0

^{4 a} 2 2 " 2 2 et S/ [z,y] = 0 sinon

Etape 5 la transformation de Founer inverse du tableau Sb est effectuée On obtient ainsi une version suréchantillonnée de la partie du tableau S initial située autour du point de module maximal Etape 6 ιmaxjmax,max sont calculés par les formules L'. tmax2 = '•J

ι J

ΣM^jfj jmax2 = — —

• J max = S/3[z#zαx2, jmax2

N_a ( N₀ imax = imaxl - ιmax2 b

N_b { 2

N . N_b jmax = jmaxl H — jmax2

Les valeurs réelles max maxjmax ainsi obtenues caracténsent respectivement la valem et la position du maximum La ponctualité est d'autant meilleure que la valeur max est plus élevée Le programme visualise en outre le module du tableau S et le module du tableau Sb pour avoir une appréciation visuelle de la ponctualité

7.3.3.2. appareils utilisés

Un diffuseur est utilisé, par exemple un morceau de papier qm permet de suivre visuellement la trajectoire du faisceau

Un CCD auxiliaire est utilisé pom un suivi du faisceau plus précis qu'avec le diffuseur Son pas doit être aussi faible que possible Un fréquencemètre est également utilisé Ce terme désignera l'appareil décnt par la Fig 71, qui est destiné à la mesure des fréquences spatiales d'un faisceau paraxial II est constitué d'un miroir (5000) qui réfléchit un faisceau parallèle enfrant vers une lentille (5001), laquelle focalise ce faisceau vers un CCD (5002) monte sur une caméra (5003) Un polanseur optionnel (5004) peut être inséré entre le miroir et la lentille L'utilisation du miroir (5000) permet au fréquencemètre d'avoir un encombrement minimal dans le plan honzontal qui est celui des Fig 61 et 62 L'axe optique de la lentille et du CCD est toujours vertical lors des opérations de mesure

Compte tenu des choix de dimensionnement effectués, l'angle maximal sous lequel les faisceaux entrent dans le fréquencemètre est — Si la largeur totale du CCD (5002) est /, alors la distance focale de (5001) est g -95-

calculée pom que les rayons arnvant sous des angles compns enfre — et — puissent être pns en compte Elle g g l vaut donc. / = - — Une valeur légèrement inféneure peut êfre adoptée pour garder une marge de sécunté o 2

Avant utilisation du fréquencemètre, la distance enfre la lentille (5001) et le CCD (5002) doit être réglée pom que l'image d'un faisceau parallèle soit aussi ponctuelle que possible, ce qui se fait simplement en envoyant vers le fréquencemètre un faisceau dont le parallélisme a été préalablement vérifié par une méthode înterferométnque et en ajustant en conséquence la distance entre la lentille et le CCD

La ponctualité de l'image obtenue sur le CCD (5002) permet de vénfier le parallélisme d'un faisceau enfrant La position relative de plusieurs points s ce CCD caracténse l'angle enfre les faisceaux conespondants

En l'abscence d'autres précision dans la descnption d'un réglage, le polanseur (5004) n'est pas utilise

7.3.3.3. Cycle de réglage Les réglages visent à s'assmer que

(1) les faisceaux suivent la trajectoire prévue Ceci peut en général se vénfier à l'aide d'un simple diffuseur Ces vérifications de trajectoire du faisceau ne sont pas déentes mais doivent être effectuées préalablement aux autres réglages Par exemple l'onentation du miroir (2247) doit être réglée pour que le faisceau réfléchi se superpose effectivement au faisceau incident, occupant la même zone de l'espace que celui-ci au niveau du miroir semi- transparent (2245)

(2) les faisceaux d'éclairage et leurs indicateurs inverses ont une image ponctuelle sur les capteurs CCD

(3) les faisceaux de référence ont une image ponctuelle dans le plan des diaphragmes (2213) et (2223) (4) un faisceau enfrant parallèle dans l'objectif (2217) et dingé suivant l'axe optique a une image ponctuelle et centrée sur le captem (2239)

(5) lorsque un mot de commande COM[l,z,/] est utilisé, les coordonnées du point illumines par le faisceau FED se déduisent de celles du point illuminé par FEDI par une homothétie de rapport proche de 1

Les réglages à effectuer découlent de ces conditions. La descnption des étapes de réglage est donnée à titre indicatif et constitue un exemple d'ordonnancement des étapes de réglage

Pendant l'ensemble du réglage à l'exception de l'étape 14, le mot de commande utilise pour le déviateur de faisceau est COM[ 1,128, 128] , CO [0,128,128] ou 0 selon que l'on génère le faisceau d'éclairage droit FED, le faisceau d'éclairage gauche FEG ou aucun des deux Les obturateurs (2257) (2258) (2259) (2260) et des obturateurs non représentés sur la trajectoire des faisceaux FRG et FRD permettent de choisir les faisceaux utilisés

Pendant certaines phases de réglage, on mesure sur un capteur un faisceau donné à l'aide d'un second faisceau servant de référence Le programme décnt en 7 3 3 1 est alors utilise pour évaluer la ponctualité du faisceau mesuré Les vanations de phase enfre le faisceau servant de référence et le faisceau à mesurer sont obtenues à l'aide de (2205) ou (2251) Lorsqu'aucun faisceau n'est utilisé comme référence, par exemple si le -96-

CCD est celui du fréquencemètre, l'image utilisée est celle directement reçue sur le CCD Une image ponctuelle

N ptx N pix est considérée comme centrée s un capteur de taille N x N _pιx si ses coordonnées sont

étape 1 réglage en translation de la lentille (2231) Le fréquencemefre est positionné enfre le miroir semi-transparent (2211) et le rotateur de polansation (2238) La lentille (2231) est réglée pour que l'image du faisceau FEDI sur le CCD du fréquencemètre soit ponctuelle

étape 2 réglage en translation de la lentille (2246)

Le fréquencemètre est positionné enfre le miroir semi-transparent (2245) et la lentille (2237) La lentille (2246) est réglée pour que l'image du faisceau FRDI sur le CCD du fréquencemètre soit ponctuelle

étape 3 réglage en translation de la lentille (2242)

Le fréquencemefre est positionne entre le miroir semi-transparent (2225) et le rotateur de polansation (2226) La lentille (2242) est réglée pour que l'image du faisceau FEGI sur le CCD du fréquencemètre soit ponctuelle

étape 4 réglage en franslation de la lentille (2281)

Le fréquencemètre est positionné entre le miroir semi-transparent (2228) et la lentille (2227) La lentille (2281) est réglée pour que l'image du faisceau FRGI sur le CCD du fréquencemètre soit ponctuelle

étape 5 réglage en franslation de la lentille (2212)

Un faisceau d'éclairage provisoire FEP est introduit Celui-ci est denve directement de la sortie de l'élargisseur de faisceau (2201) à l'aide d'un miroir semi-transparent et est redinge par un jeu de miroirs vers l'objectif (2217) dans lequel il pénètre par le cote ou se trouve normalement l'échantillon, et en étant dirige selon l'axe optique de l'objectif L'objectif (2217) doit être a peu près en position focalisée, c'est-a-dire dans la position ou il sera lors de l'utilisation normale du microscope L'objectif (2219) doit être provisoirement suppnme pour pouvoir introduire FEP

Le fréquencemètre est positionné entre la lentille (2212) et le miroir semi-transparent (2211) La lentille (2212) est réglée pour que l'image du faisceau FEP sur le CCD du fréquencemètre soit ponctuelle

étape 6 réglage en translation de la lentille (2237) et réglage de l'onentation du miroir semi-transparent (2245) Un CCD auxiliaire est placé à l'emplacement du diaphragme (2213) La lentille (2237) est réglée pour que l'image du faisceau FRDI sur ce CCD auxiliaire soit ponctuelle Le miroir semi-transparent (2245) est règle pour que l'image du faisceau FRDI sur ce CCD auxiliaire soit centrée

étape 7 réglage du CCD (2239) en franslation

La position du CCD (2239) est ajustée pom que l'image du faisceau FEP obtenue par la procédure decnte en 7 3 3 1 a partir du CCD (2239) soit ponctuelle et centrée -97-

étape 8: réglage du miroir semi-transparent (2211)

La position de ce miroir est ajustée pour que l'image du faisceau FEDI obtenue par la procédme décrite en 7.3.3.1. à partir du CCD (2239) soit ponctuelle et centrée.

étape 9: réglage de position des objectifs.

Le faisceau FEP est supprimé et l'objectif (2219) est remis en place. Un CCD auxiliaire est placé à l'emplacement du diaphragme (2223). L'échantillon est par exemple une lame transparente, de l'huile optique étant utilisée de chaque coté de la lame. La position des objectifs est réglée pour que l'image du faisceau FRDI sur ce CCD auxiliaire soit ponctuelle et centrée.

étape 10: réglage en franslation de la lentille (2224)

Le fréquencemètre est positionné entre la lentille (2224) et le miroir semi-transparent (2225). La lentille (2224) est réglée pom que l'image du faisceau FED sur le CCD du fréquencemètre soit ponctuelle.

étape 11: réglage en franslation de la lentille (2227) et réglage de l'orientation du miroir semi-transparent (2228):

Un CCD auxiliaire est placé à l'emplacement de (2223). La lentille (2227) est réglée pour que l'image du faisceau FRGI s ce CCD auxiliaire soit ponctuelle. Le miroir semi-transparent (2228) est réglé pour que l'image du faisceau FRGI s ce CCD auxiliaire soit cenfrée.

étape 12: réglage du CCD (2229) en franslation.

La position du CCD (2229) est ajustée pour que l'image du faisceau FED obtenue par la procédure décrite en 7.3.3.1. à partir du CCD (2229) soit ponctuelle et centrée.

étape 13: réglage du miroir semi-transparent (2225)

La position de ce miroir est ajustée pour que l'image du faisceau FEGI obtenue par la procédure décrite en 7.3.3.1. à partir du CCD (2229) soit ponctuelle et cenfrée.

étape 14: réglage des CCD (2229) et (2239) en rotation et translation Cette étape consiste à régler en rotation la position de (2229) et (2239) de sorte que le s systèmes d'axes soient confondus. A cette fin, les mots de commande COM[l, 128,128] , COM[1,250,128] , COM[l, 128,250] sont utilisés alternativement. Les deux capteurs sont réglés en franslation dans un plan orthogonal à l'axe (2264) et en rotation autour de ce même axe. Sur chaque capteur on définit un système de coordonnées (z^',y) ou les indices pixels z ety vont de 0 à N _pιx - 1 avec N _pιx =256, et qui repère la zone utile du capteur qui sera utilisée par la suite. Le point origine du système de coordonnées, de coordonnées (0,0), peut êfre un quelconque des quatre coins de la zone utile du capte . En même temps qu'on effectue le réglage, on choisit le point origine du système de coordonnées. Les critères de réglage et de choix du point origine sont les mêmes pour les deux capteurs et sont les suivants: -98-

- quand COM[l, 128,128] est utilisé, le point d'impact du faisceau d'éclairage, c'est-à-dire du faisceau d'éclairage direct sm (2229) ou de son indicateur inverse s (2239), doit êfre au point de coordonnées (128,128) -quand COM[1,250,128] est utilisé, le point d'impact du faisceau d'éclairage doit êfre en un point de coordonnées (x,128) ou x est positif -quand COM[l, 128,6] est utilisé, le point d'impact du faisceau d'éclairage doit êfre en un point de coordonnées (128,x) ou x est positif

Les systèmes de coordonnées ainsi déterminés sont définis par leur point ongine O_p et leurs vecteurs de base unitaires î_p , y _p , c ' est-à-dire par les repères \ O_p ,ι_p ,j A ou est l' indice du capteur (p=0 pour (2239) et p=l pom (2229)) Ces systèmes de coordonnées seront systématiquement utilises par la suite

7.4. Détermination du module de l'onde de référence.

Comme dans le premier mode de réalisation, les filtres (2255) et (2256) sont réglés pour que le mveau de l'onde de référence soit d'environ le quart du mveau maximal autonsé par le digitaliseur, soit un niveau de 256/4=64 dans le cas d'un échantillonnage sur 8 bits du signal vidéo, et ce sur les deux captems

Cette onde de référence est ensuite déterminée comme dans le premier mode de réalisation, mais du fait que deux captems sont présents on obtient un tableau Iref[p,ι,j] ou z,y sont les indices pixels comme dans le premier mode de réalisation, et oup est l'indice capteur soιt/?=0 pour (2239) etp=l pom (2229) lref[0,ι, j] est l'intensité reçue sur le capteur (2239) lorsque seul le faisceau FRD est présent et Iref[\,ι,j] est l'intensité reçue sm le capteur (2229) lorsque seul le faisceau FRG est présent

7.5. Prise d'image bidimensionnelle simple.

On a vu dans le premier mode de réalisation comment une représentation fréquentielle bidimensionnelle en nombres complexes peut être générée à partir de trois images différant enfre elles par la différence de phase entre l'onde d'éclairage et l'onde de référence Dans les phases de réglage qui suivent on sera amené à générer ce type de représentation fréquentielle Pour générer une telle représentation, le système réalise trois images successives avec des décalages successifs de

+120, 0,-120 degrés appliqués à l'onde d'éclairage L'ordre des déphasages est inversé par rapport à celui utilisé dans le premier mode de réalisation car ils sont appliqués à l'onde d'éclairage et non à l'onde de référence Ceci donne un tableau de pixels /[cf, p,;,y] ou l'indice d vanant de 0 à 2 indice le déphasage et ou l'indice p désigne le capteur La représentation fréquentielle en est déduite par 1

S[p,ι ] = {2l[0,p,₁,j] - l[l,p,ι,j] - l[2,p,ι,j])

6 jlref[p,ι,j]

^T^ ^ ^ - ^^ -99-

On obtient, à chaque acquisition, une image pour chaque captem, et le tableau .?[ ?,/, ] comporte donc un sous- tableau pour chaque captem, l'indice p désignant le capteur Toutefois dans la phase de réglage on n'utilisera en général qu'une seule de ces deux images

7.6.Qbtention des paramètres K_γ et réglage des diaphragmes.

Ces paramètres conespondent au paramètre K du premier mode de réalisation, mais du fait des dissymétnes de réalisation le paramètre n'est pas forcément le même pour chaque capteur On définit donc deux paramèfres K₀ et K_x conespondant aux deux capteurs Ces paramèfres sont obtenus comme dans le premier mode de réalisation, par pnse d'image simple en utilisant un micromètre objectif Le micromètre objectif utilisé doit cependant êfre conçu pour cet usage les marques doivent être faites sur une lamelle fine, une lame épaisse ne pouvant êfre utilisée avec ce microscope

Dans un premier temps les objectifs doivent être conectement focalisés A cette fin, les faisceaux parallèles FED et FEG sont suppnmés Seules les ondes de référence FRD et FRG sont présentes Les miroirs (2282) et (2247) sont utilisés pour obtenir des ondes centrées à double sens de propagation Les miroirs (2243) et (2232) sont obturés Le décaleur de phase (2251) est utilisé pour modifier la phase des ondes Le micromètre est déplacé pour que les marques soient hors du champ des objectifs L'onde mesurée d'un coté des objectifs est l'équivalent de l'onde de référence utilisée de l'autre coté Le programme décnt en 7 3 3 1 avec fransformation de Founer permettant de passer du domaine frequentiel au domaine spatial, est utilisé pour évaluer la ponctualité de l'image La position des objectifs est ajustée pour obtenir un point centré au milieu de l'image Dans un deuxième temps, l'échantillon doit être conectement positionné Les miroirs (2282) (2247)

(2243) (2232) sont obtmés Seul le faisceau FEG est utilisé, avec un mot de commande du déviateur de faisceau CO [0,128,128] La position de l'échantillon dans le plan honzontal est modifiée jusqu'à ce que l'on obtienne une modification caracténstique de l'onde reçue sur les capteurs en l'abscence d'onde de référence, comme dans le premier mode de réalisation L^'onde de référence FRD est alors réintrodmte et un programme de focalisation semblable à celui utilisé dans le premier mode de réalisation, et utilisant l'image obtenue sur le captem (2239) , est lancé Ce programme diffère cependant de celui utilisé dans le premier mode de réalisation en ce que les modifications de phase et d'amplitude de l'onde d'éclairage sont maintenant commandées par les dispositifs (2204) et (2205) et en ce que la valem rapport moy caracténstique de l'atténuation est réelle et est celle qui a été mesurée en 7 3 2 2 entre deux positions de l'atténuateur de faisceau qui sont seules utilisées ici

La position du diaphragme (2213) est alors ajustée dans un plan perpendiculaire à (2264) de mamere a ce que son image soit conectement cenfrée Son ouverture est ajustée de mamere à être aussi élevée que possible, le diaphragme devant toutefois rester entièrement visible sur l'image obtenue La position du micromètre est alors ajustée dans le sens vertical de mamere à en obtenir une image nette Sur cette image , on mesure alors la distance [D_pu:) entre deux graduations séparées par une distance réelle D_reel

Les faisceau FEG et FRD sont alors suppnmés Le faisceau FED est introduit avec le mot de commande du déviatem de faisceau COM[l, 128,128] Le faisceau de référence FRG est également introduit On relance le -100-

programme de focalisation, qm cette fois utilise l'image reçue sur le capteur (2229) La position du diaphragme (2223) est alors ajustée dans un plan perpendiculaire à (2264) de manière à ce que son image soit conectement centrée Son ouverture est ajustée de mamere à êfre aussi élevée que possible, le diaphragme devant toutefois rester entièrement visible sur l'image obtenue Sm l'image obtenue, on mesure la distance W_pιx J enfre les mêmes graduations que précédemment

On a alors K„ = — -, — ^r— D_reel ou

' ^À )_P D_pιx) est la distance en pixels mesmée sur l'image issue du capteur indice/?, avecp=0 pour (2239) etp=l pour

(2229)

D_reel est la même pour chaque mesme N_pιx est le nombre de pixels de la zone utile de capteur et de la transformée de Founer utilisée dans le programme de focalisation soit par exemple N _pιx =256

Les ouvertures de diaphragmes obtenues à l'issue de cette procédure seront maintenues par la suite

7.7.Différence de marche induite sur un faisceau parallèle. L'échantillon observé n'a pas nécessairement pour indice moyen l'indice nominal des objectifs Cette différence d'indice peut entraîner une abbenation sphénque importante II est nécessaire, pour cornger cette abbenation, de prendre en compte l'mdice moyen n₀ dans l'échantillon et l'épaisseur L de l'échantillon compris enfre deux lamelles à l'indice nominal

La reconstitution ulténeure d'une image tndimensionnelle nécessite également la connaissance de la position relative des points d'ongme virtuels des faisceaux de référence utilisés de chaque coté du système On définit cette position relative par x,y,z qui sont les coordonnées du point d'ongme du faisceau de référence utilise dans la partie gauche par rapport au point d'ongme du faisceau utilisé dans la partie droite

Les paramèfres x,y,z,L, n₀ entraînent des déphasages d'une onde parallèle traversant l'échantillon Le calcul de ces déphasages est expose ci-après

-correspondance entre la direction d'un faisceau parallèle dans l'objet et les coordonnées du point correspondant sur le capteur: î ety sont les coordonnées d'un pixel par rapport au centre optique, exprimées en pixels, sur le capteur/?, dans le repère défim à l'étape 14 du cycle de réglage décnt en 7 3 3 2 Un vecteur unitaire parallèle au vecteur fréquence dans l'objet a pour coordonnées, dans un repère orthonormé â_p ,b_p , c_p ou c_p est parallèle à (2263) et ou â_p ,b_p se dédmsent simplement des vecteurs ι_p , y _p définis en 7 3 3 3

u = K_p K_P ' K_p V -^<2 - ² et il fait avec l'axe (2263) un angle de -101-

sinα = ι _*μ r 1 1

+J

Si le faisceau issu de l'objectif n'était pas dévié par les miroirs (2214) (2215) (2216) ou (2222) (2221) (2220) les vectems S _ , b _p seraient égaux aux vecteurs ι_p , y _p Bien que ce ne soit pas réellement le cas, les vecteurs de base d_p ,b_p , c_p seront notés dans la smte de l'exposé ι_p ,]_p , k_p , sans différencier les vectems 5_p , b_p des vecteurs conespondants T_p , j_p définis en 7 3 3 3 sur les capteurs

-différence de marche induite par la présence de l'objet:

La Fig 45 montre le pnncipe de calcul de cette différence de marche On a

Δ = l₀n₀ - l_vn_v ou n_v désigne l'indice nominal des objectifs, c'est-à-dire l'indice pour lequel ils ont ete conçus et qui doit êfre celui de l'huile optique employée

Δ = Ln₀ cos β- Ln_v cosα

( n

A = L\ -sinα -n_v ï- sin² a n₀ soit z-. +y²

A = L > ² + J ² n„Jl- - /!., 1- n₀ J κ_r K_r

-Différence de marche induite par un déplacement du point éclairé:

La grandem accessible à la mesme est la différence de marche entre le faisceau inverse issu de FRG et le faisceau de référence FRD Si ces deux faisceaux sont confondus et si le milieu séparant les objectifs a pour indice l'indice nominal des objectifs, la différence de marche est nulle Cependant, si le point d' ongine virtuel du faisceau de référence FRD a pour coordonnées (x,y,z) par rapport au point d'ongme virtuel du faisceau de référence FRG, maténalisé par le point de focalisation de son faisceau inverse, alors cette différence de marche est calculée comme smt

On utilise le vecteur v=(x,y,z) et le vectem u défim plus haut La Fig 46 montre le pnncipe geometnque de calcul La différence de marche induite est

1

Δ = u v -

V Kp Kp K I K„² -ι ² {^χ,y>ή

= x —+y — + z K_Ώ ² -Z ² - y

K„ K„ K„ ' ^p

différence de marche totale: c'est la somme de la différence de marche due à la présence de l'objet et de celle due à la non-coïncidence des points somce -102-

( .. λ _χj_ _{+ y}J_{^ + z} _ l_K 2 __i2 _ _J2

+ L V ^Λ-p p A-p n ^ ^• - -^ κ_τ

En l'abscence de diaphragme, l'onde mesurée sur l'onde mesmée au point du capteur de coordonnées (z,y) vaut donc: jlπ- - 2π ι +

≈ exp ι +

-+y + L n„.U - l -

K, κ„ H κ„

"oJ K„

7.8. Programme de maximisation.

7.8.1. Principe.

Dans le cas 'idéal' ou l'échantillon est simplement une lame d'épaisseur L et d'indice n₀ , on peut utiliser une méthode simple pom déterminer les valeurs de x,y,z,L, n₀ . Pom ce réglage les faisceaux d'éclairage FED et

FEG sont supprimés et les faisceaux de référence FRD et FRG sont introduits en utilisant les miroirs (2282) et (2247) pom renvoyer des faisceaux symétriques vers les objectifs. Le faisceau FRG réfléchi par (2282) et se dirigeant vers l'objectif (2219) est centré sur un point cenfral du diaphragme (2224). Il est focalisé par l'objectif (2219) en un point de l'objet (2218). Il traverse ensuite l'objectif (2217) et parvient au CCD (2239) sur lequel il se superpose au faisceau de référence FRD réfléchi par le miroir semi-fransparent (2245) en direction du CCD

(2239). Le décaleur de phase (2251) est utilisé pour générer un décalage de phase enfre les deux faisceaux, ce qui permet de mesurer en valeur complexe le faisceau issu de FRG et reçu sur (2239), en utilisant la procédure de prise d'image simple décrite en 7.5. L'onde ainsi reçue est stockée dans un tableau F_rec de dimensions

Np,x X N_plx .

En pratique la méthode d'acquisition différera souvent du cas idéal mais permettra toujours l'acquisition d'un tableau F_rec de dimensions N _p,_x x N _pιx équivalent à celui qui serait obtenu dans le cas idéal.

Du fait des décalages de phase induits par l'échantillon, la valem de l'onde en un point en l'abscence de diaphragme, et dans un repère centré sur le centre optique, est donnée par la formule établie en 7.7.: j 2π- ~ 2π .2 , .2 exp< x — ' +y — J + z\ 1\ ' ⁺ iJr- + L n„ \ - ±£_ κ₀ ^y κ₀ V K ² Kc²

La présence du diaphragme a en outre un effet de filtrage qui peut également être simulé.

Le programme utilisé a pour objectif de calculer x,y,z,L, n₀ en minimisant la différence entre l'onde ainsi simulée et l'onde réellement reçue.

Cette différence peut être caractérisée par l'écart-type σ{x,y,z, L,n₀ ) enfre l'onde simulée et l'onde reçue. L'onde reçue étant emegisfrée dans un tableau F_rec de dimensions N _pιx x Λ^ , cet écart-type peut être calculé de la mamere suivante, en 6 étapes, pour une valeur donnée du quintuplet [x,y,z, L,n₀) : -103-

étape 1-la représentation fréquentielle suivante, de dimensions N_c x N_c avec par exemple N_c =4096, est calculée:

1 2 2

- 2π c^λ + je¹ .₍₁ _ _| ZÏ_-l -£--±i£-- 2 ιc^L + }c^L

'. - exp : — < + y — 3^e + z.\l - + L

N_r N, N_r avec R_r - K₀ et ou ic et je sont les indices centrés soit: ic = ι , je = j -

N pix étape 2-la transformée de Fourier inverse de F_c est calculée. étape 3- F_c étant maintenant en représentation spatiale, la présence du diaphragme constitue une simple limitation dans ce domaine. Le programme calcule donc le tableau F_d de dimensions N _pιx x N_pιx en l'initialisant à 0 pms en effectuant:

N, -V, N pix N z — - - + - - , J - +-

pom tous les couples (z^',y) tels que

' pix ' N ' pix ^' N p, ix

/ --

2 J 2 J étape 4- le programme effectue une transformation de Fourier du tableau F_d ^Frec[i ]^Fd[i ] étape 5- Le programme calcule la valeur rapport = (i )^<

- ou E est un ensemble défini de manière

ΣH' } à éviter les valeurs trop atténuées, qui permet de recaler en phase et en intensité le tableau F_d avant de le comparer à F_rec . étape 6- Le programme calcule alors l'écart-type σ²{x,y,z, L,n₀ ) = \F_rec[i,j]-rapport.F_d [i,j

Le programme de calcul de x,y,z,L, n₀ détermine la valeur de x,y,z,L, n₀ qui permet de minimiser l'écart-type ainsi calculé. Tout programme de mimmisation de la grandeur σ² {x, y, z, L, n₀ ) peut être utilisé de manière équivalente. L'algorithme décrit en 7.8.2. constitue un exemple d'un tel programme mais peut être remplacé par tout programme de minimisation équivalent. Pour simplifier les calculs et faciliter la convergence, la minin-isation de σ² ( x, y, z, L, n₀ ) est remplacée dans l'algorithme décrit en 7.8.2. par la maxinusation d'une grandeur caractéristique qui varie selon une variable mode qui augmente au fur et à mesure que l'algorithme converge vers la solution. 3 valems de mode sont utilisées - ~-π— Δ mode-1: l'image réellement reçue est corrigée en phase par multiplication par e ^λ . Une transformée de Fourier inverse permet d'obtemr une représentation spatiale. La grandeur choisie est le maximum du module sur l'ensemble de la représentation spatiale. -104-

mode=2 identique au cas mode=l, mais la partie centrale de la représentation spatiale est suréchantillonnee et la grandem choisie est la valeur du module au barycentre des points de la représentation spatiale mode=3 l'onde devant être reçue sm le capteur pour les valeurs considérées de x,y,z,L, n₀ est calculée en tenant compte du filtrage par le diaphragme La grandeur choisie est l'opposé de l'écart-type entre l'onde ainsi simulée et l'onde réellement reçue soit -σ² [x, y, z, L, n₀ )

7.8.2. Algorithme.

L'algonthme de ce programme est décnt par les Fig 47 à 50 et la Fig 60

La Fig 47 décnt le mveau le plus élevé du programme Ce mveau consiste en une double boucle de vanation de l'indice n₀ Le programme calcule nopixels valeurs de maxb, plus grande valeur atteinte par la grandeur caracténstique pour l'indice n₀ , entre nomin et nomax Ceci conespond a la boucle interne (3201) Le programme détermine la nouvelle valeur de nocentre, qui doit conespondre à la valeur maximale de maxb II commence alors une nouvelle itération du type (3201) ou les valeurs de n₀ sont centrées autour de la nouvelle valeur de nocentre et ou la largeur nolarg=nomax-nomιn de l'intervalle de recherche a été divisée par 2 Ceci constitue la boucle externe (3202) qui est réitérée jusqu'à ce que la largeur de l'intervalle de recherche conesponde à la précision recherchée sur l'mdice n₀ Cette méthode évite d'avoir à tester trop de valeurs de n₀ pom parvenir à un résultat de précision donnée

Le programme doit disposer en entrée des valeurs suivantes - valems minimales et maximales de chaque valeur recherchée compte tenu des informations disponibles nominjni, nomax jni (indice n₀ ), Lmιn,Lmax (largeur L), zmιn,zmax (profondeur z) Le programme n'a pas besoin d'une valeur maximale et minimale des coordonnées x ety

- paramètres de fonctionnement, par exemple nopixels≈ 5 et pιxels=50

- image obtenue par exemple de la mamere décrite en 7 8 1 , sous la forme d'un tableau de nombres complexes _rec[z,y] de dimensions N_pvc x N_pιx

Les étapes pnncipales du programme sont

- (3203) la valeur cornante de n₀ est calculée

- (3204) cette procédme calcule la valeur maximale maxb atteinte par la grandeur caracténstique pour l'indice n₀ cornant, ainsi que les valeurs conespondantes de x,y,z,L Elle est détaillée Fig 48 - (3205) Lorsque la valeur maxb conespondant à l'itération cornante est supéneure à maxjio, les valeurs cornantes de x,y,z,L, (calculées par la procédure (3204)), et n₀ sont stockées et constituent l'approximation cornante du résultat recherché

- (3206) La largeur est comparée à une certaine limite pour déterminer la condition de convergence On peut par λ exemple avoir lιm = 005— nopixels -105-

- (3207) Le programme se termine Les valems x_f ,y_f ,z_f ,L_f , nocentre conespondent à la meilleure approximation des valems réelles de x,y,z,L, n₀ Elles sont affichées et enregistrées pour êfre réutilisées ulténemement

Pour chaque indice n₀ la procédure (3204) calcule une valeur maximale de la grandeur caracténstique et les valems associées de x,y,z,L Toutefois un changement de vanables est effectué et les vanables réellement utilisées dans la procédme sont x,y,u, v avec u = cL + z v = L -cz c = ^-l

ou n_v est l'indice nominal des objectifs

La procédure consiste à faire vaner M et v et pour chaque couple (u,v) à calculer x,y, et la valeur max de la grandem caracténstique

Le couple (u,v) vane dans un premier temps sur un ensemble discret de points de taille uptxels x vpixels M et v vanant respectivement sur des intervalles de largeur ularg et vlarg centrés autour des points ucentre _ιnι et vcentre mi Le programme détermine la valeur nouvelle de (ucentre, vcentre) qui conespond au couple (u,v) pour lequel la valeur max est la plus élevée II détermine également des valeurs xbar etybar qui conespondent à l'écart enfre les valems de x,y utilisées pour le calcul et la valem de x,y affinée à l'issue du calcul Ces opérations constitue la procédme (3305) détaillée Fig 49

Lorsque une nouvelle valeur de (ucentre, vcentre) a été obtenue, le programme diminue la largeur ularg et vlarg des intervalles de recherche, ainsi que leurs cenfres ucentre jm, vcentre jm et les valeurs de x ety, puis calcule la valeur Adtf Si la valeur obtenue est inféneure a une limite fixée comme cntere de convergence, le programme calcule z et Z- par inversion du changement de vanables, ce qui termine la procédure (3204) Sinon, il modifie éventuellement le choix de grandeur caracténstique (modification de mode), pms répète la procédme (3305) Ceci constitue la boucle (3301). L'ensemble de ces opérations constitue la procédme (3204) déente Fig 48

La Fig 48 décnt la procédure (3204) Ses étapes essentielles sont

- (3302) les intervalles de vanation de M et v sont déterminés

- (3303) Cette procédme a pour objet de déterminer uptxels et vpixels d'une manière optimale Son algonthme est décnt par la Fig 60 - (3304) L'écart de (phase/2π) causé par la traversée de la lame et le déplacement suivant z du point d'impact a un faisceau de direction parallèle à z est dif = — ({n₀ -n_v)L + n_vzj On considère que l'algorithme a converge λ quant cette grandeur est connue avec une précision suffisante L'incertitude sur cette grandeur vaut

Δdιf = - -[[n₀c-n_vc + n_v)Au +{-n₀ +n_v +n_vc)Av] λ. l + c -106-

ularg vlarg ou Au = et Δv = - upixels vpixels

Le programme modifie mode et détermine la fin de convergence en fonction la valeur obtenue de Adif On peut par exemple avoir lιml=2, lιm2≈0 25,lιm3-0 01

- (3305) cette procédme calcule la grandeur caracténstique pour un ensemble de couples (u,v) et détermine le couple ucentre, vcentre conespondant à la plus grande valeur caracténstique, la valeur maxb de cette grandeur caracténstique, et les valems xbar,ybar qm représentent l'écart entre la nouvelle approximation de x,y et les valems cornantes de x,y Elle est détaillée Fig 49 -(3306) modification de x,y,ularg,vlarg,ucentre_ιnι,vcentre ιnι le programme effectue les modifications suivantes x=x+xbar y=y+ybar si upixels < 4 alors ucentre _ιnι, ularg ne sont pas modifiés si upixels ≥ 5 alors ucentre _ιnι=ucentre et ularg ≈ - ularg upixels si vpixels < 4 alors vcentre _ιm, vlarg ne sont pas modifiés

4 si vpixels ≥ 5 alors vcentre _ιnι=vcentre et vlarg = vlarg vpixels

La Fig 49 décnt la procédme (3305) Ses étapes essentielles sont

- (3401) cette procédure calcule la grandeur caracténstique max pour les valeurs courantes de u,v, n₀ En mode 1 et 2 elle calcule également xbar etybar qui représentent l'écart entre la nouvelle approximation de x,y et la valeur en entrée de la procédme

- (3402) dans le cas du mode 3, la procédure (3401) n'a pas calcule xbar etybar Elle est relancée en mode 2 pour effecmer ce calcul

La Fig 50 deent la procédme (3401) Ses étapes essentielles sont - (3501) calcul de la représentation fréquentielle corngee A partir du tableau F_rec[ι, y] le programme calcule une représentation corngée en utilisant

1 = 1 + c 2 ⁿ° -\ -ⁿA ^{lcl +}{^cl -i 1 - c

+ =-«» l-i^ - l n₀ J o 1+c² K o

¹ { n_v \\ 2 ιc 2 + jc 2

•M- -H 1 + c

1 - 2 « l---± l-l

1 + c² n₀ K 1 + c K o

, , , " pix * * pix ou ic et je sont les indices centres soit ιc = ι — , jc = y -

2 " - 2 On vérifie alors, a une constante près indépendante de z ety -107-

Δ_ 1C 1C x — +y — -a[ι,j]u+b[ι,j]v λ V K Λ-(0) K_QJ

Le programme génère la représentation fréquentielle comgée de la mamere suivante

N ptx N pix

F_c0r[' ] = F_rec[ι,j] r(a[ι,j]Au) r{b[ι,j]Av) exp -j2π\ κ_n - + v- -a[ι,j]u + b[ι,j]v

K_n

vlarg ou γ{x) = 0 quand \x\ ≥ — et γ{x) = 1 quand |x| < — , et Au = — , Δv =

2 2 upixels vpixels a[ι,j] et b[ιj] représentent respectivement les fréquences smvant M et v de la fonction comgée obtenue On vénfie que ces fréquences ont toutes deux un signe constant La multiplication par les fonctions γ permet d'annuler les éléments pour lesquels ces fréquences sont trop élevées et d'éviter ainsi les repliements de spectre qui empêcheraient la convergence de l'algonthme

- (3502) une fransformation de Founer inverse du tableau F_cor est effectuée -(3503) /no* est la valeur maximale du module sur le tableau -^-[z, y]

On note imax etjmax les coordonnées du pixel en lequel le maximum est atteint On a alors

Knλ N pix xbar - imax- n "v N' pix

Knλ N pix y bar = jmax-

"v^pix \

-(3504) la partie cenfrale du tableau _co-[z,y] est extraite On crée ainsi un tableau F_a[ι, y] de dimensions N_axN_a avec par exemple N_a =16

N, N p_tix

Fa[',j] = F« 1 - + -

2 2 2

- (3505) une transformée de Founer directe est effectuée sur le tableau F_a

-(3506) le tableau F_a est complété par des zéros et on obtient un tableau F_b de dimensions N_bxN_b avec par exemple N_b=512

F_b[ι,j] = F_a ,_^ ^₊N₂

,J-

N N N, N quand N.-l≥z ^+-^->0 et N_a -l≥y ^b- + —?->0

2 2 2 2 et _ft[z,y] = 0 sinon

-(3507) la fransformation de Founer inverse du tableau F_b est effectuée

- (3508) xbar,ybar,max sont calculés par les formules -108-

ΣKM< ιmax = ΣH_' f

',3

Σ • JHuΫJ jmax-

Σ Ï

• max = \F_b [imax, jmaxï

K₀λ N. xbar = imax Ni n_vN_pιx N_b 2

Kpλ N_a N> ybar = jmax-- n_vN_pιx N_b

- (3509):la représentation fréquentielle suivante, de dimensions N_c x N_c avec par exemple N_c =4096, est calculée:

2 2

-2π + y )ε ιc^λ + je¹ 2 2

IC +JC ⁱc +J^C

Fc\'>3 =exp - + z.ï- + L «„.!- —

¹oJ

N_c N, avec R, K₀ et ou ic et je sont , les i •nd -.i•ces cenfre .s soi •t: ιc = ι • N_c , je- y - ^{c ~} N ^JV pix - (3510): la transformée de Fourier inverse de F_c est calculée.

- (3511): F_c étant maintenant en représentation spatiale, la présence du diaphragme constitue une simple limitation dans ce domaine. Le programme calcule donc le tableau F_d de dimensions N _pιx x N _pιx en l'initialisant à 0 puis en effectuant:

N pix N_c . N pix Λ0

FAi ] = F_e pom tous les couples (z,y) tels que ^f N p„i,xA² f N p,x ^² ' N" pix ²

(3512): le programme effectue une fransformation de Fourier du tableau F_d

∑^Fr ⁱ ψ ^

(3513): Le programme calcule la valeur rapport = i' )^

Σ A'

ou E est l'ensemble des couples (z, y) vérifiant: F_rec[i,j]F_d[i,j]≥Coef - max _re<.[α,_.] _rf[α,_.J avec par pix

0<b≤N_pιχ-l exemple Coef = 0,5. La justification de cette formule peut être trouvée en 7.17.1.2. -109-

(3514) Le programme calcule alors la grandeur caracténstique max max = - _; \F_rec [1 , ] - rapport F_d[ι,j

La Fig 60 décnt la procédme (3303) Cette procédme vise à déterminer upixels et vpixels suivant les pnncipes explicités ci-après On peut expnmer la grandem — calculée en 7 7 , à une constante près, sous la forme λ

— Δ = — »v x ' + y — J -a{s)u +b{s)v λ λ K_ϋ K_QS avec „ v 1- c

ΠJΛII- S² -

*> -χ 1-

1 + c¹ n 1 + c¹

1 + c

*>-î s² - l »_v(VT-

1 + c n_aJ l + c^Â

> ² + ! ² ^{S =} ^— , z ety étant des indices centrés

X 0 La méthode de génération de la grandeur caracténstique, dans les cas mode=l ou mode=2, consiste à multiplier la

-)2π— représentation fréquentielle F_rec par le facteur de conection de phase e ^λ puis à effectuer une transformée de Founer La représentation ainsi obtenue est dans le dommne spatial La grandeur caracténstique est à peu près la valem de cette représentation au point ongine Elle est donc obtenue comme somme d'éléments de la forme

-]2π— e ^λ Cette grandem caracténstique peut être considérée comme une fonction fonc(u,v) de M et v Si on fixe la valem de v, elle devient simplement fonction de u Si on limite la représentation F_rec a un disque de rayon (en pixels) K_Qs₀ cette fonction de M a comme fréquence maximale a s₀ ) a s₀) est donc la fréquence maximale de fonc suivant u De même, b{s₀ ) est la fréquence maximale defonc smvant v upixels et vpixels doivent êfre déterminés de mamere à ce que pour une valeur donnée de s₀ aussi élevée que possible, les pas d'échantillonnage smvant M et v soient suffisamment précis pour éviter le repliement de spectre Cette condition s'écnt ularg _| , s, vlarg 1

^«MS upixels-K ' * ' vpixels 2

Par ailleurs le nombre total de pixels est limité à une valeur pixels, ce qui s'écnt upixels vpixels = pixels

En combinant ces équations on obtient l'équation El -110-

pixels i*o)^b{^so)\ 4. ularg. vlarg Deux cas se présentent alors: ouv ouv pixels premier cas:

\ n_v J \ n_v J 4. ularg. vlarg

L'équation El a une solution s₀ que le programme peut déterminer par dichotomie. Les valeurs de upixels et vpixels sont alors déterminées par: upixels = 2\a{s_σ ) lularg vpixels = 2\b{s₀ ) \vlarg

, [ ouv pixels

Deuxième cas: n_v ) » , 4. ularg. vlarg L'équation El n'a pas de solution. Les valems de upixels et vpixels sont alors déterminées pom êfre ouv proportionnelles à celles obtenues pour la valeur s₀ = soit:

ouv upixels = a\ ularg n_v J

vpixels = a \vlarg n_v

Par ailleurs la condition upixels. vpixels = pixels doit toujoms êfre vérifiée. La résolution de ces équations donne: ₂ pixels a ouv^Λ

V «_υ J b{ ularg. vlarg n_v J et on obtient donc finalement: ouv ularg

\ n_v J upixels - - jpixels ouv vlarg

ouv

Ivlarg vpixels = -Apixels ouv ularg

«v

Dans les deux cas, les valeurs ainsi déterminées sont des nombres réels qui peuvent être infériems à 1 ou supériems à pixels. Une dernière étape consiste donc à les fraduire en nombres entiers dans l'intervalle [1, pixels] -111-

L'algonthme résultant, qm permet de déterminer upixels et vpixels, est représenté sur la Fig 60 Les étapes suivantes doivent êfre détaillées i v , < pixels

(4201) s„ est la solution de F équation \a(s₀ )b(s₀ ) = Le programme résout cette équation par

¹ ' " 4 ularg vlarg

, , _n ouv dichotomie enfre 0 et

"v

(4202) le programme prend pour upixels et vpixels le nombre entier le plus proche de la valeur réelle obtenue, pms il limite ces valeurs de la mamere suivante

- si upιxels<l le programme effectue upιxels=l

- si vpιxels<l le programme effectue vpιxels=l - si upιxels>pιxels le programme effectue upιxels=pιxels -si vpιxels>pιxels le programme effectue vpιxels=pιxels

7.9. Obtention des caractéristiques des faisceaux parallèles.

Chaque faisceau parallèle généré par le système de contrôle du faisceau d'éclairage a une phase indépendante Cette procédure a pour objet de déterminer les phases et les coordonnées de ces faisceaux parallèles Elle se décompose en deux parties

7.9.1. Réglage des objectifs et obtention de la position relative des points de focalisation.

L'objectif de la présente étape est de déterminer la position relative des points d'ongme des faisceaux de référence FRD et FRG Cet objectif peut être atteint en réglant la position des objectifs de mamere a ce que l'image produite par le faisceau FRGI sur le capteur (2239) soit parfaitement ponctuelle

Dans ce but, seuls sont utilisés les faisceaux FRGI et FRD Le miroir (2282) est utilise pom obtenir une onde centrée a double sens de propagation Les miroirs (2243) (2232) (2247) sont obturés Le décaleur de phase (2251) est utilise pour modifier la phase de cette onde L'espace enfre les deux objectifs est occupé par de l'huile optique à l'indice nominal des objectifs L'onde mesurée du coté droit des objectifs s le captem (2239) indicé par p=0 est l'équivalent de l'onde de référence utilisée de l'autre coté Sa ponctualité est évaluée par la procédure déente en 7 3 3 1 , avec utilisation d'une transformée de Founer dans ladite procédme La position des objectifs est ajustée pom obtenir un point centré au milieu de l'image

Si ce réglage de position des objectifs est effectue avec le plus grand soin et avec des positionneurs suffisamment précis, de précision sub-πucrométnque, par exemples des dispositifs de focalisation de microscope d'une qualité suffisante, ou des positionneurs avec contrôle piézoélectnque, alors les points d'ongme des images obtenues de chaque coté du microscope sont confondus

Toutefois ceci nécessite un positionnement extrêmement précis des objectifs La procédure de réglage déente en 7 3 3 2 permet cependant d'obtemr cette qualité de réglage en utilisant des positionneurs de précision moyenne pour les objectifs En effet, les réglages fins sont effectués, dans cette procédure, par déplacement des caméras et non des objectifs Si la procédme de réglage déente en 7 3 3 2 est effectuée avec soin, les points -112-

d'ongine des représentations fréquentielles finalement obtenues sont confondus Leurs coordonnées relatives sont donc (x,y,z)=(0,0,0) Il est alors préférable de ne pas modifier les positions obtenues pour les objectifs

Cependant, les réglages obtenus par la procédme 7 3 3 2 ou par un nouveau réglage de position des objectifs sont en général imparfaits II est possible d'utiliser (x, ,z)=(0,0,0) mais une meilleure superposition des images provenant de chaque captem sera obtenue si un algonthme adapté est utilise pour calculer une valeur plus précise de ces paramètres

L'onde mesurée sur le captem (2239), obtenue selon la procédme déente en 7 5 avec/?=0, est alors emegisfrée en un tableau _rec[z,y] Les coordonnées x,y,z du point d'ongme de l'onde de référence issue de FRD par rapport au point d'ongme de l'onde de référence issue de FRG sont alors déterminées à partir de _rec[z,y] en utilisant le programme décnt en 7 8 Toutefois, afin de temr compte de l'abscence d'échantillon, la procédme

(3303) est remplacée par les deux affectations suivantes upιxels=pιxels vpιxels=l

Par ailleurs les vanables utilisées sont nomax_ιnι= nomιn_ιnι= n_v , n_v étant l'indice nominal des objectifs

Lmιn=Lmax=0 nopιxels=l pιxels=20 zmin = -20/1 et zmax = 20 A (par exemple)

7.9.2. Obtention des valeurs complexes et des coordonnées des faisceaux d'éclairage. Cette procédme a pour objectif de déterminer, pour chaque faisceau parallèle défim par les indices p,ιj du mot de commande COM\p,ιj] du déviateur de faisceau

- les coordonnées du point d'impact direct du faisceau d'éclairage sur le capteur/? Ces coordonnées seront stockées dans les tableaux Ia[p, 0,ιj] , Ja\p,0,ιj]

- les coordonnées du point d'impact direct du faisceau d'éclairage sur le capteur p Ces coordonnées seront stockées dans les tableaux Ia[p, l,ιj] , Ja\p, l,z,y]

- la valeur complexe du faisceau d'éclairage conespondant, sa phase étant mesurée au point d'ongme de l'onde de référence utilisée sur le capteur p Cette convention de mesme de la phase assure en effet que la valeur complexe ainsi obtenue soit indépendante de la position des objectifs, à un facteur global de phase près affectant l'ensemble des faisceaux caracténses par le même indice/? Cette valeur complexe sera stockée dans un tableau Ra[p,ιj] Comme la mesme directe des faisceaux donne des coordonnées relatives au point d'ong e de l'onde de référence utilisée sur le captem p, cette valeur doit être corngee en fonction des valems de position déterminées en 7 9 1 Pendant cette procédure, les faisceaux de référence FRD et FRG sont utilises, ainsi qu'un faisceau d'éclairage défim par un mot de commande vanable COM\p,ιj] du déviateur de faisceau Les miroirs (2243) et (2232) sont utilisés pour créer un faisceau indicateur inverse du faisceau d'éclairage qui va frapper le capteur opposé au captem normalement éclairé par ce faisceau Les miroirs (2247) et (2282) sont obturés La procédure -113-

décnte en 7 5 est utilisée pour obtemr sur chaque capteur des images bidimensionnelles en nombres complexes Les décalages de phase sont effectués à l'aide de l'élément (2205)

Un programme permet d'obtemr ces paramètres sous forme des tableaux la\p,q,ιj] , Ja\p,q,ι,j], Ra\p,ιj] Far une méthode de suréchantillonnage il détermine Iα[p,q,ι,j] , Jα\p,q,ι,j\ avec une précision inféneure au pixel Ces tableaux sont donc des tableaux de nombres réels

Le système de coordonnées utilisé sur le captem/? est celui déterminé dans l'étape 14 du cycle de réglage

7 3 3 2 , défim par les vectems directeurs lι_p , j_p I Cette convention de repérage sera maintenue par la smte

Le programme est constitué de trois boucles parcourues successivement Boucle 1 il s'agit d'une boucle s l'indice ?, qm prend successivement les valems 0 et 1

N pix N pix Pom chacun de ces indices le programme utilise le mot de commande COM P,- U détermine alors

2 2 les coordonnées entières ιmαxO_p , jmαxO_p du maximum de l'image résultante sur le captem/? Boucle 2 II s'agit d'une boucle sur l'ensemble des tnplets p₀ ,ι₀ ,j₀ Pom chacun de ces tnplets, le programme génère les valems Iα[p₀ , q, z₀ , ₀ ] Jα[p_Q , q, z₀ , y₀ ] Rα[p₀ , ι_Q , y₀ ] A chaque itération, conespondant à un tnplet donné p₀ , z₀ , y ₀ le programme effectue les 8 étapes suivantes

N pix N pix Etape 1 le mot de commande COM Po >- est utilisé et les images résultantes sur chaque capteur sont

2 2 emegisfrée dans deux tableaux de nombres complexes M0_q [z, y ] ou q=0 pom l'image obtenue sur le capteur p_Q et q=l pom l'image obtenue sur le capteur opposé

Etape 2 le mot de commande COM[p₀ ,ι₀ ,j_Q] est utilisé et les images résultantes sont enregistrées dans les tableaux - i^ fz.y] Etape 3 Le programme détenmne les coordonnées ιmax_q , jmax_q du point de module maximum du tableau i_g [z,y] pour chaque valeur de q

Etape 4 Le programme extrait une image de taille N_a x N_a , avec par exemple N_a =16, autour du point de coordonnées ιmax_q jmax_q

N_n N„

M2_q[ι,j] = Ml_q ι — ~ + ιmax_q , j — -2- + jmax_q

N N quand N_pιx - l ≥ ι ~ ++ ιιmmaaxx_qa ≥ > 00 eett NN_pDιx -- 1l ≥≥ yy — ^ --+jmax_Q ≥ 0

2 ^{q p} 2 et 2₉[z,/] = 0 sinon

Etape 5 le programme effectue une transformée de Founer directe des tableaux M2 -114-

Etape 6: le programme complète les tableaux M2_q par des zéros, générant les tableaux M3_q de dimensions N_b x N_b avec par exemple N_b =512. Le tableau M3_q est initialisé à zéro puis le programme effectue pom tous les indices /,/ allant chacun de 0 à N_a -1 et pom les deux indices q:

M3„ Λ^₊N*_. = M2_q[ι,j]

2 2 2 2 Etape 7: le programme effectue la transformée de Fourier inverse du tableau M3

Etape 8: le programme calcule les coordonnées et la valeur complexe au barycenfre du tableau M3

,|2 3, <[ι,J ιmax3_q = ,3

∑\M3_q[ι,jfj jmax3_Q =^• 3

∑| 3_?[z,y]|^:

', la[p₀,q,ι₀,j₀] = ιmax_q + ^- ιmax3_q — ^-

2

N_n N_b Ja[p_ϋ,q,io,Jo] = jmax_q+-— - \jmax3

N_h

M3₀[ιmax3₀,jmax3₀]

Ra[p₀,ι₀,Jo] = r

M0₀[ιmaxO_p(ι,jmaxO_pιι]

12

.lπ la[p₀,0,ι₀,j₀] Ja[p₀,0,ι₀,j₀] la[p₀,0 3., Pofr>o>Jo exp -J i-+y i- + z 1 ^ 'θ'Jθ + Jα

K„ -^-, K

V Po J) ou x, ,z sont les coordonnées calculées en 7.9.1.

Boucle 3: Le programme effectue une dernière opération consistant à annuler les valeurs de Ra et à affecter des valeurs élevées à Ja et la à chaque fois que le point d'impact direct du faisceau est hors de la zone limitée par l'ouverture de l'objectif, ce qui se traduit par une disparition de ce point A cette fin le programme parcourt à

Ra[Pθ,ⁱQ,Jc nouveau les indices /?₀ , z₀ , y₀ , en testant à chaque fois la condition < - . Lorsque cette condition

Ra[p₀ ,127,127] est satisfaite, le programme effectue Ra[_Po,ι₀,_Jo] = 0

Ia[p₀,0,ι₀,_Jo] = -1000

Ja[p₀,0,ι₀,_Jo] = -1000 -115-

7.10. Réglage de position des objectifs.

L'échantillon à étudier est mis en place Pendant cette étape, seuls sont utilisés les faisceaux FRGI et FRD Le miroir (2282) est utilisé pour obtenir une onde cenfrée à double sens de propagation Les miroirs (2243) (2232) (2247) sont obturés Le décaleur de phase (2251) est utilisé pour modifier la phase de cette onde De l'huile optique à l'indice nominal des objectifs est utilisée L'onde mes ée du coté droit des objectifs s le captem (2239) indicé par/?=0 est l'équivalent de l'onde de référence utilisée de l'autre coté Un programme génère deux images par la procédme déente en 7 3 3 1 une image spatiale obtenue avec transformation de Founer, et une image fréquentielle obtenue sans transformation de Founer Le programme extrait sur chacune de ces images l'intensité (cane du module des nombres complexes constituant l'image obtenue en 7 3 3 1 ) Le programme affiche les images résultantes

L'image spatiale doit être cenfrée

Sur l'image en fréquence, on doit observer un disque clair Le réglage doit être effectué pour que l'intensité soit la plus élevée possible pour les fréquences élevées (points éloignés du centre) Le disque observe doit rester relativement homogène Si un anneau sombre apparaît entre le bord exténeur et la zone centrale, l'échantillon est trop épais et la totalité des fréquences ne pouna pas être pnse en compte Le réglage doit alors êfre effectué de manière à avoir un disque relativement homogène, de rayon aussi élevé que possible Le disque n'atteint pas sa taille maximum et les fréquences élevées ne peuvent pas êfre pnses en compte La résolution de l'image, pnncipalement en profondeur, est diminuée La seule solution à ce problème consiste à utiliser un objectif spécialement conçu, décnt au paragraphe 7 19

Cette méthode de réglage des objectifs est adaptée au cas ou l'indice de l'échantillon diffère notablement de l'indice nominal des objectifs Dans le cas contraire, et en particulier si on veut utiliser une fonction D„ définie en 7 16 égale à 1, le réglage doit êfre effectué à partir de l'image spatiale seule et de manière à ce que cette image soit ponctuelle et cenfrée

7.11. Détermination dex,v,z,L, n_n .

Il est nécessaire de connaître ces paramètres pour pouvoir compenser l'abenation sphénque et les effets de la non-coïncidence des points d' ongine des ondes de référence Ces paramètres peuvent être déterminés en n'effectuant pas l'étape 7 10 et en laissant donc les objectifs dans la position ou ils étaient à l'issue de l'étape déente en 7 9 1 Les valeurs x,y,z sont alors celles qui ont été déterminées en 7 9 1 Les valeurs de L et n₀ peuvent avoir été mesurées préalablement par un moyen exténeur au microscope proprement dit Cependant cette méthode présente le désavantage de ne pas permettre un mouvement des objectifs lors de la mise en place de l'échantillon, et de nécessiter l'utilisation d'un système de mesure externe coûteux II est donc préférable de déterminer a nouveau l'ensemble de ces paramètres Cette deuxième méthode permet le déplacement des objectifs lors de la mise en place de l'échantillon et l'étape 7 10 peut donc être effectuée

Pour appliquer cette deuxième méthode, on pounait en pnncipe utiliser la procédure théonque decnte en 7 8 1 et utilisant une seule pnse d'image, mais les vanations locales des caractenstiques de l'échantillon au voisinage du point de focalisation fausseraient le résultat C'est pourquoi on utilise une sene de pnses d'images et -116-

on mesme s chaque image la vanation de phase et d'intensité au point d'impact direct du faisceau d'éclairage A partir de cette séné de valems, on peut générer un tableau équivalent au tableau F_rec utilisé en 7 8 mais dans lequel on s'est affranchi des vanations locales

7.11.1. Acquisition

Les miroirs (2282) (2247) (2243) (2232) sont obturés de mamere à suppnmer tous les faisceaux indicateurs inverses, qui ne seront plus utilisés par la suite La procédure déente en 7 9 2 est recommencée, avec les modifications suivantes

- L'échantillon est maintenant présent - La boucle 1, qm consiste à déterminer ιmaxO_p , jmaxO_p , est suppnmée Les valeurs précédemment obtenues de imaxO_p , jmaxO_p sont réutilisées

- Dans la boucle 2, les indices /?₀ et q sont fixés à 0 Les étapes 1 à 8 ne sont donc effectuées que pour l'ensemble des indices z₀ , y₀ ( ?₀ étant fixé à 0) Dans chacune de ces étapes, seuls les éléments conespondant a l'indice q=0 sont acqms ou calculés - L'étape 8 de la boucle 2 est modifiée comme suit

Ia[p₀,q,ι₀,j₀] , Ja[p_j,q,ι_ϋ ,j₀\ -> R^a\Po>^lo>j ^ne sont pas recalculés et leurs valeurs précédemment obtenues sont maintenues la quantité 7.è[/?₀ ,z₀,y₀] est calculée comme smt

-si Ra[p₀,ι_Q,j₀] = 0 alors Rb[p_o,ι_o,j₀] = 0

M3₀[ιmax3₀ ,jmax3₀] \ - sinon Rb[p₀,ι₀,j_Q\ = —ή — ± — = y

M ₀[ιmax0₀,jmax0₀] Ra[p₀,ι₀,j₀]

Cette quantité conespond à la vanation du faisceau d'éclairage due à la présence de l'échantillon et au déplacement des objectifs, sur le captem 0, pour l'éclairage caractensé par les indices z₀ , ₀ , par rapport a une position des objectifs ou le point d'ongme des ondes de référence utilisées sur chaque objectif seraient confondus

- La boucle 3 est suppnmée

7.11.2.génération de l'image en fréquence.

Un second programme est alors lancé Celui-ci a pour objectif de générer, à partir des mesures précédentes, un tableau F_rec utilisable dans l'algonthme décrit en 7 8 Comme les coordonnées Ia[p₀ ,q,ι₀ ,j₀]

Ja[p₀ , q, z₀ , y ₀ ] des points échantillonnés par le tableau Rb ne conespondent pas à des pixels entiers, une méthode de sméchantillonnage et de filtrage est nécessaire pour générer le tableau F_rec Cette méthode est imparfaite car le pas (par exemple /α[/?, -7,z,y]-/α[/?,<7,z + l,y]) séparant deux échantillons adjacents du tableau Rb peut vaner

Néanmoins, pour une réalisation de qualité, cette vanation est faible et la méthode de suréchantillonnage-filtrage donne de bons résultats Celle-ci comporte les étapes successives suivantes -117-

Etape 1: génération d'une représentation fréquentielle suréchantillonnée, de dimensions N_c x N_c avec par exemple N_c =4096. Le tableau Fs est initialisé à 0 puis le programme parcourt l'ensemble des indices z,y en testant la condition Λo[θ,z^',y] ≠ 0 . Lorsque la condition est vraie, il effectue:

N

Fs\ E la[0,0,i,j] - \, E\ Ja[0,0,i,j] = Rb[0,i,j]

N pix / N pix J ou E(x) désigne le nombre entier le plus proche de x.

Etape 2: une transformée de Fourier inverse est appliquée au tableau Fs

Etape 3: la partie cenfrale du tableau, de dimensions N _pιx x N_pιx , est extraite et la présence du diaphragme simulée.

N pix N_c . N pix N, _reA'> ^{= FS}\ 2 pom tous les couples (z^',y) tels que

N ^{i γ} pix ^v N pix N p, ix z - - J - V 2^~ ou ouv est l'ouverture des objectifs.

Etape 4: la transformée de Fourier du tableau F_rec obtenu est effectuée.

7.11.3.calcul des paramètres.

Le tableau F_mc obtenu à l'issue de l'étape 4 constitue l'image en fréquence, équivalente à celle dont l'acquisition est décrite en 7.8.1., mais acquise d'une manière moins sensible aux variations locales de l'indice. Il est possible de simuler cette image en fréquence à partir d'un quintuplet (x,y,z,L, n₀ ) et de calculer une grandeur caractéristique max. C'est ce que fait la partie de programme décrite sm la Fig.50 et comprenant les étapes (3509) à (3514), qui calcule finalement une grandeur caractéristique max que l'on notera max(x,y,z,L, n₀ ). La détermination de la valeur du quintuplet (x,y,z,L, n₀ ) consiste à utiliser un programme de maxinusation qui fait varier (x,y,z,L, n₀ ) de mamere à déterminer le point conespondant à la valeur la plus élevée de max(x,y,z,L, n₀ ). En principe, tout algorithme de maximisation convient. Cependant, le nombre de variables et la complexité des calculs sont tels qu'il est nécessaire d'utiliser un algorithme spécifique et optimisé. Le programme décrit en 7.8. est donc utilisé pour calculer les paramètres à partir du tableau F_rec qui constitue l'image en fréquence.

7.12. Prise d'image bidimensionnelle.

7.12.1.Principe: On a vu dans le premier mode de réalisation comment on peut réaliser une représentation fréquentielle bidimensionnelle à partir de plusieurs images élémentaires différant enfre elles par la différence de phase enfre le faisceau d'éclairage et le faisceau de référence, ainsi que par le niveau d'atténuation du faisceau d'éclairage. Dans -118-

ce mode on ajoute des rotateurs de phase (2210) (2238) (2241) (2226) qui permettent de faire vaner la direction de polansation de l'onde et la direction d'analyse En effet, la diffraction de l'onde d'éclairage n'est pas homogène dans toutes les directions Pour une direction donnée, l'onde diffractée dépend fortement de la polansation du faisceau incident On rappelle que si a et b sont deux vecteurs, alors a ΛZ? est le prodmt vectonel de a et b a b est le produit scalaire de a et b ||α| est la norme de a

On appelle f_c fréquence caracténstique d'un point f_e fréquence d'éclairage f₀ fréquence associée au centre optique du capteur

La Fig 51 montre l'anangement de ces fréquences β_c est l'angle entre le vecteur f_c t f_e et le vecteur f_c Λ/₀ β_e est l'angle enfre le vecteur f_e / f_c et le vecteur f_e \f₀ a_c est l'angle entre le vecteur z et le vecteur f_c /\f₀ (on omet l'indice/? pour les vecteurs ι ,j,k ) a_e est l'angle enfre le vecteur z et le vecteur f_e Λ /₀ θ est l'angle entre le vecteur f_e et le vecteur f_c

Si le vectem champ electnque du faisceau d'éclairage est parallèle, dans l'objet, au vecteur f_c r\f_e alors le faisceau diffracté par l'objet dans la direction f_c n'est pas atténué S'il est orthogonal a ce vecteur, le faisceau diffracté est atténué d'un factem cos-?

Le vecteur champ electnque d'un faisceau, lorsqu'il parvient au capteur, est dans le plan du capteur, qui est un plan orthogonal à f₀ Le mode de passage du vecteur champ electnque dans l'objet au vecteur champ electnque sur le capteur est une rotation autour du vectem f_c Λ/₀ pour l'onde de fréquence f_c Cette rotation conserve l'angle β_c On note {f_c Λ f_e ) le vecteur ainsi obtenu à partir du vecteur f_c Λ f_e Dans le cas de l'onde de fréquence f_e polansée parallèlement à f_e / f_c la rotation se fait autour de f_e Λ/₀ et on note le vecteur résultant [f_e Λ _C) On note

-. _ {fc ^Λfe)_rc

^{Xc ~} |Λ ^Λ/.|

(/_β Λ/_c ) ^e | .| φ_c = a_c +β_c φ_e = a_e +β_e -119-

Dans le plan du captem, on a donc la configuration indiquée Fig 52, ou les points 0,E,C sont respectivement le cenfre optique (fréquence f₀ ), le point d'impact direct de l'onde d'éclairage (fréquence f_e ), et le point ou est mesmée l'onde diffractée (fréquence f_c )

Lorsque le vectem champ électrique du faisceau d'éclairage (au point E) est A₀ι + A y le vecteur champ electnque résultant au point C est (C_0QA₀ + C₀₁-4j)z + C ₀A₀ +C_π-4₁)y

Lors des mesmes, on utilisera

- une onde d'éclairage dingée selon 7 Pour cette onde d'éclairage, on mesurera des composantes diffractees polansées selon les axes onentés par z ety , obtenant les facteurs C₀₀ et C₁₀

- une onde d'éclairage dingée selon y Pour cette onde d'éclairage, on mesurera des composantes diffractees polansées selon les axes onentés par z ety , obtenant les facteurs C₀₁ et C

Les facteurs C_ki sont donc les grandeurs mesurées

On néglige ici le fait que les directions de polansation et d'analyse obtenues ne sont pas ngoureusement orthogonales

Si le vecteur champ electnque du faisceau d'éclairage au point E est parallèle au vecteur x_e et le vecteur champ electnque du faisceau reçu au point C est parallèle au vecteur x_c , il n'y a pas d'atténuation Ce cas conespond à un vectem champ electnque au point E de valeur Ax_e = A(ι COS φ _e + y sin φ _e et donc un vecteur champ électrique résultant au point C A[{C₀ cosφ_e + C₀ smφ_e)ι +{C_xo cosφ_e +C_π sιn ?_g)y] La projection de ce vecteur sur l'axe onenté par -x_c a pour valeur -- π C₀₀ cosç?_e +C₀₁ sιnçz>g) cosç?_c +(C₁₀ cos ?_e + C_n sιnç?g)sιnç? La valeur que l'on cherche a intégrer dans les calculs est le rapport de la valeur algébnque du faisceau diffracté a celle du faisceau incident en l'abscence d'atténuation due à l'angle θ , qm conespond donc au cas ci-dessus et vaut

M = -cosç?g cosç?_cC₀₀ -sιn#?_g ∞sφ_cC_0X -cosç?_e smφ_cC_X(j - sιnç?_e s φ_cC

Afin de calculer cette valeur il est nécessaire de calculer préalablement les fonctions cos φ_e , cosç?_c , sυxφ _e , smç?_c Ceci se fait en utilisant d'une part les relations tngonométnques cos ?_c = cosα_c cos/?^> _c -sιnα_c sin f_g sιnç?_c = cosα_c sin ?,- +sιnα_c cos ?_c

∞sφ_e = cosα_e cosy^_g -sιn«_g sιn ?_g sin^jg = cosαg sin^_g +sιnα_g cos f_g et d'autre part les relations suivantes COSyff_g = fc fe fc ^Λ fo

|| _C Λ/_e | |/_C Λ/₀ ||

sιn ?_c = fc ^Λfo fc ^Λ fe fc

\\f_c f₀\\ \\f_c f_e\\) \\f -120-

fe^Afc fe^Λfo cosySg = ll _βΛ/_cl |/_βΛ/_β

sm/î_g = fe^Λfo ^•Λ fe^Λfc l ll _βΛ/₀|^"|| _eΛ/_c||j^"| _β

/_C J₀ cosα_c =z

Wfc ol sιn«_c =J. fc Λ ₀

Wfc ₀«

Λ ₀ cosα. z . fe

II ΛI

sιn«g =y -._| fe^Λfo

^"|| _{β 0}|l

Si on utilise les valems normalisées des vecteurs fréquence: f_o=k f_e =X_eî + y_eJ^+z _ek avec x² +y² +z² =1 f_c=^x +y_cJ ^{+ z} _ck avec ^ +y² +z² =1 on obtient.

∞S<Pc = ô (.Vc^vz -V c + *_C _c ² _ce ^ ''

Sinp_c = (^~X_c c^Vyz +Xc^2Vxz +yc^Vxy)

M Mœ COSÇ3_g -{ylVyz-X_eye^Vxz + Xe^Vxy)

M²M_ce

Sinç?g = [-X_ey_eVyz + Se^r. + .Ve

avec

^Vyz^≈y<?e-Zcye xz ^vxy =-^χ _ceysee+ 'y /cc^χΛ.e

M²=x²+y_c ² M²=x²+y_e ²

M = V² +V² +V²

Toutefois, lorsque les dénominatems sont nuls, les expressions ci-dessus doivent être remplacées par des valeurs limites -121-

7.12.2. Algorithme:

Une représentation fréquentielle bidimensionnelle est un tableau M_{k p q}\i, y] de nombres complexes, de dimensions N x N . fc est l'indice de l'image dans sa série, p est l'indice du capteur sur lequel parvient le faisceau d'éclairage direct (0 ou 1) et f? a les valems suivantes: q=0: image reçue sur le capteur ou parvient l'éclairage direct q=l: image reçue sur l'autre captem.

Outre l'image elle-même, ce programme génère également les tableaux: B_{k p q} [z^',y] : indicateur de bruit H _{p q}[i, j] : image de référence, conespondant à une représentation fréquentielle bidimensionnelle obtenue pour une direction fixe du faisceau. Cette image de référence a pom objet de pouvoir ultérieurement compenser les modifications de frajet optique dues aux vibrations des miroirs inclus dans le système. Si ces vibrations sont faibles, l'image de référence peut n'être acquise que périodiquement. L'image de référence peut aussi être une image simplifiée, les critères de précision étant inférieurs à ceux de l'image « utile » M_{k p q}[i,j] . Pom simplifier la présentation, on suppose qu'une image de référence H_k,p,q[' ] de mêmes caractéristiques que l'image utile (excepté la direction du faisceau d'éclairage) est acquise pour chaque image utile M_{k p q}[i , y] .

BH_{k p q}[i,j] .indicateur de bruit de l'image de référence.

Une série de représentations fréquentielles bidimensionnelles est obtenue par calcul à partir d'une série d'images élémentaires conespondant à des figures d'interférences formées sur les captems CCD. Le programme d'acquisition des représentations fréquentielles bidimensionnelles se décompose donc en une phase d'acquisition d'images élémentaires et une phase de calcul. Ces deux phases peuvent être séparées, ou bien chaque image peut faire l'objet d'un calcul au fur et à mesure de l'acquisition. On se place ici dans le cas ou les deux phases sont séparées.

7.12.2.1. acquisition des images élémentaires.

La série d'images élémentaires peut êfre acquise en une seule fois par la caméra rapide, sans que des calculs quelconques soient effectués, les commandes des éléments de modification du faisceau devant êfre synchronisées avec l'acquisition d'images. Il s'agit d'une itération sur l'entier fc et l'entier ?. La succession d'éclairages parallèles devant être utilisée doit être précisée par les tableaux Ic\k, p], Jc[k, p] déterminant les indices 'symboliques' permettant de calculer pour chaque couple (k,p) le mot de commande du déviateur de faisceau C0M[p, lc\k, p], Jc[k, /?]] . Pendant cette procédure les faisceaux FRG et FRD sont présents en permanence, chaque image élémentaire étant formée sur un captem par l'interférence de l'onde de référence et de l'onde diffractée par l'échantillon, lui-même éclairé par des ondes d'éclairage de caractéristiques variables. Les miroirs (2282) (2243) (2232) (2247) sont obturés. Pom chaque couple (fc,/?), la prise d'images se décompose en deux phases: -122-

phase 1: elle consiste en l'acquisition de 36 couples d'images élémentaires, un couple d'images comprenant une image provenant de chaque capteur, et les 36 couples différant entre eux par l'état de tous les systèmes de contrôle du faisceau excepté le déviateur de faisceau qui garde un état constant pom un couple (fc,/?) donné. Ces 36 couples d'images élémentaires seront utilisés par la suite pour générer une représentation fréquentielle bidimensionnelle utile M_{k p q}[i,j] . On note une de ces images élémentaires 0[fc, /?][c, d,/-, , r₂ ][<?,/, y] . Avant chaque prise d'image élémentaire les rotatems de phase permettant le contrôle du faisceau d'éclairage (atténuation, décalage de phase,déviation et polarisation) doivent être commandés de manière appropriée.

L'indice c est déterminé par le tableau suivant, ou att[c] constitue un tableau contenant l'atténuation conespondant à l'indice, et ou les valeurs α, etα₂ sont celles explicitées en 7.2.2. , mesmées en 7.3.2.2., et ou l'atténuateur de faisceau est commandé comme explicité en 7.2.2. indice c atténuation att[c]

0 1

1 «1

2 α, a₂

Les indices d, r_λ , r sont déterminés par les tableaux suivants. indice d décalage de phase (degrés)

0 +120

1 0

2 -120

indice r₂ tension appliquée aux rotatems (2210) et (2241)

0 5V

1 -5V

indice r, tension appliquée aux rotateurs (2238) et (2226)

0 5V

1 -5V

Un couple d'images élémentaires (conespondant aux deux valems de l'indice q) est obtenu pour chaque combinaison des indices c,d,r_λ ,r₂ et pour chaque direction d'éclairage définie par les indices (fc,/?). Pour chaque direction d'éclairage (fc,/?), on obtient donc 36 couples d'images élémentaires notés Mθ[k, ?][c,e?,r, ,r₂ ][<?, , ] . -123-

Le filtre (2203) doit êfre réglé de mamere à ce que le captem ne soit jamais saturé, mais se rapproche autant que possible de la limite de saturation De mamere équivalente, il peut être réglé en l'abscence d'onde de référence pour que l'intensité maximale de l'onde parvenant au capteur en l'abscence d'atténuation du faisceau soit du quart du mveau maximal autonsé par la digitalisation du signal video, soit 64 pom un digitaliseur 8 bits

-phase 2 Elle consiste en l'acquisition de 36 images élémentaires de plus, qui seront utilisées pour générer l'image de référence Cette phase est identique à la phase 1 mais

- on notera MR0[k, /?][c, d, , , r₂ ][_7, z, y ] une image élémentaire obtenue

- le mot de commande utilise pour obtemr MR [k , p^c,d ,r ,r₂\q,ι , y] est COM]p,ld[p,ι_r,j_r], Jd[p,ι_r ,j_r ou ι_r ,j_r sont les coordonnées d'un point constant situé sur le cote du capteur, par exemple le point (3905) sur la

Fig 56 représentant un captem et sur laquelle le contour (3902) représente la limite conespondant à l'ouverture de l'objectif, qui ne peut pas êfre dépassée par les faisceaux d'éclairage Ce mot de commande ne dépend donc pas de fc Les coordonnées ι_r,j_r peuvent être choisies de manière relativement arbitraire Toutefois le choix d'un point (3905) fortement excentre permet que des points conespondant a des vecteurs fréquence totale ( /, suivant les notations utilisées en 5 3 ) de norme comparable puissent être obtenus a partir de chaque capteur Pour des échantillons ne présentant pas de structures régulières spécifiques, de tels points conespondent à des valems complexes comparables sur les deux captems, ce qui améliore la fiabilité des résultats

7.12.2.2. Calcul des représentations fréquentielles bidimensionnelles. Après la phase d'acquisition, un programme spécifique doit être utilise pour générer a partir de ces images élémentaires des images en nombres complexes et les indicateurs de bruit associes Pour générer M_{k p} 'Α ^et -^_{t ? <}_ ['_'./] I^e P^r°g^{r me} parcourt les indices (fc,/?) en effectuant pour chaque couple (k,p) les 3 étapes smvantes étape 1 génération du tableau indicateur d'atténuation ce tableau est un tableau d'entiers Ml[q,ι, y] généré de la manière suivante il est îmtialisé à 0, puis le programme parcourt l'ensemble des indices q,ιj deux fois

- premier parcoms le programme calcule max_ pix - max( θ[fc, /?][θ, d, r , r₂ q, i, y]) Si pom une valeur

donnée de q,ιj max_pιx est égal à la valeur maximale du digitahseur, alors le programme met à 1 ce pixels et ses voisins immédiats Ml[q,ι +ιadd,j + jadd] = 1 pour tadd ety add vanant de -1 à 1, et a condition de ne pas sortir des limites du tableau

-second parcours le programme calcule max_pιx = max M [k, pγ ,d ,r ,r₂^q,ι, j^j Si pour une valeur donnée d,r ,r₂ de q,ι,j maxjpix est égal à la valeur maximale du digitaliseur, alors le programme met à 2 ce pixels et ses voisins immédiats -124-

Ml[q,ι +ιadd,_j + _jadd] = 2 pour tadd etjadd vanant de -1 à 1, et à condition de ne pas sortir des limites du tableau

A l'issue de cette étape le tableau l[g,z,y] contient l'indice conespondant à l'atténuation devant être utilisée pour atténuer l'image

étape 2 génération des images complexes correspondant a chaque position des rotatems

M2\r_x,r q,ι,j\= — p : :pf , :(2M0[k,p\Ml[q,ι,j],0 ,r₂\q,ι,j]

^{L 1 ZJL J} att[Ml[q,ι,j]][6 ref[pq + pq,ι,j]

-Mθ[k,p][M q,ι,_j],l,r_x,r₂\q,ι,j]-Mθ[k,p][M)[q,ι,j],2,r_x,r₂][q,ι,j])

+y , ,_r_ _ _l( 0[/c, l[_g,ι,j]j,ιι,^Tg,ι,j]-M⁽⁾[/V,/>][- l[q,ι,j]-2,r₁^T_g,»,j]) 2 lref[pq + pq,ι,j] étape 3 combinaison des images obtenues pour les diverses positions des rotateurs

L'objet de cette étape 3 est de calculer M_ktP>q [z, y] en fonction de 2[ZJ ./^[g,/ ,y] Ceci peut être réalise simplement sans utiliser les vanations de polansation en effectuant _fc>^[z,y] = 2[l,l][c_?,z,y]

le bruit étant alors donne par B_k „ z,y] = — ? -. ^

' ^l αrt[ l[j,z,y]J La grandeur M_k„„ [i, y ] ainsi générée conespond à celle qui était utilisée dans le premier mode de réalisation Néanmoins, cette méthode induit des imprécisions sur les fréquences élevées et il est préférable d'utiliser le pnncipe décnt en 7121 , ouM2[r_{1 2}][ç,z,j] conespond à la grandeur mesurée, qui était notée _rΛ en 7121 D'autres vanantes de cette méthode seront déentes en 718 L'étape 3 est donc ici réalisée comme suit Pour chaque valeur des indices q, ij le programme calcule po = pq+pq

N ^{1 v} pix N ' ^v pix y_c = - -, z_c = j^.-x^χc_c --:y_c

-K po ^K po

N pix N pix la[q,p,Ic[k,p],Jc[k,p^- Ja[q,p,Ic[k,p], c[fc,/?]] -

— , y_e = —^— — — — > ^ze=^- e-y²

^Vyz =ycZe-Zcye " xz — X ^ze ^~τ^~zc^xe

* xy ^xcye ^~^yc^xe -125-

Mi

M² = x² +y²

M,., 4 v y„z + ' v ' xz + ' v ' x²y

Les valems de sιn ?_c cosç?_c sιnp_e cos(*?g sont déterminées selon les tableaux d'affectation suivants

M_ce 0 autre

M_c 0 autre cosç?_c 1 y_e

2 I vC²!⁷ yz ^ vcs vc V' xz i ' ^Λ vc V' xy J 1

M_e lvl _g A4 _ce sιn^?_c 0 χ_e ₂ l 1 ^xcy T V yz 1 ^x v²F xz I ' y i. V xy 1]

M_e M²M_ce ' ^y>

M_ce 0 autre

M_e 0 autre

COSÇJ_g -1 y_c | ,.2[/ _v .. r ι _v V \

, ,2 _> , V^e' Υ⁷- ^Λe/e' xz ' ^Λe' xy 1

M_c M_e M_ce ^ ' sin^_g 0 ^xc 1 v v V i Y^V l l-⁷ 1 M_c . .2 , . 1 «^ J* ^Ê ≈ ' ->V w 1 M_e M_gg ^;

pms les coefficients sont calculés coef[k, p, q,ι,j][0,0] = - cos φ_e COS φ_c coe/[fc,/?,-7,z,y][0,l] = -sιnç?gCosç?_c coe/[fc, /?,-7,z, y][l,0] = - cos ç _g sιn^_e coβ/[fc, ?,_7,z, y][l,l] = -sιnç9g smç?_c

Ces coefficients ne dépendent pas du résultat des pnses d'images et dans le cas ou on répète toujours la même séné ils peuvent être stockés dans un tableau plutôt que recalculés à chaque fois C'est pomquoi on les a ici expnmé sous cette forme Le programme utilise ensuite ces valeurs pour combiner les images obtenues avec les différentes positions des rotatems de la mamere suivante

^Mk,_P,q ['Α = ∑ ^M\^r _\ > ^r ₂ q '. j]coef[k, p, q, i, j][r_x ,r₂ ]

M2[r₁,/₂][-7,z,y] conespond à la grandeur mesurée, qui était notée C_{r r} en 7 12 1 ^k_,p,_q [ A ∞nespond à la grandeur qui était notée M en 7 12 1 Par ailleurs le programme calcule une amplitude de bnut -126-

B*.PΛ>-J] = _att[Ml[q,ι,_j]] Ce q termine l'étape 3

Lorsque le programme a calculé M_{k p q} ι, ] et B_{k p q}[ι,j] il calcule également H_{k p q}[ι,j] et BH_{k p q}[ι,j] Ce second calcul est effectué de la même mamere que le précédent, en trois étapes, mais M0[k,p][c,d,r_x,r₂][q,ι,j] , M_k^_q[ι,j] et _3_fe ^_<-[z,y] sont remplacés respectivement par MR0[k,p\c,d,r ,r₂\q,ι,j] , H_{k p q}[ι,j] et BH_{k p q}[ι,j] et dans l'étape 3 les affectations de x_e et y_e sont

" pix ^ pix r -, -* r -, remplacées par x_e = — , y_e =

La procédure ci-dessus est celle qui permet le maximum de précision Toutefois, en raison du nombre élevé d'images élémentaires requises, il peut être nécessaire d'utiliser une procédure plus rapide II est possible de ne pas utiliser les quatre images générées par la combinaison des indices r , r₂ ,comme dans le premier mode de réalisation dans lequel une seule image est générée II est également possible de ne pas utiliser l'atténuation de faisceau La méthode la plus rapide consiste donc à n'utiliser que trois images élémentaires différant entre elles par leur phase L'image de référence peut également être acquise seulement une fois sur dix (par exemple) de mamere à limiter la perte de temps liée à son acquisition, et a condition que les vibrations ne soient pas trop importantes L'image de référence peut êfre simplifiée de la même manière que l'image utile, mais cette simplification aura en général moins de conséquences sur la qualité des résultats II peut donc être utile de la simplifier d'avantage que l'image utile

7.13. Calcul des indices de commande.

Le tableau d'indices de commande est le tableau Id qui permet d'associer à des coordonnées en pixels

(z, y) et à un capteur/? des indices de commande virtuels {Id[p,ι,j], Jd[p,ι,j^j tels que le mot de commande COM{p, ld[p,ι,j],Jd[p,ι,j^j génère un éclairage éclairant un point aussi proche que possible du point de coordonnées (z,y) sur le capteur/? Ce tableau est généré par l'algonthme de la Fig 53 Dans cette algonthme, E(x) désigne l'entier le plus proche de x Avant de lancer cet algonthme, le tableau D doit être initialisé a une valem élevée, par exemple 100000 A l'issue de ce programme le tableau D contient pour chaque point la distance enfre ce point et le point le plus proche obtenu pour le point d'impact direct d'une onde d'éclairage La double boucle de l'algonthme, (z₀ ,y₀) et sur [i_\ ,J_\) permet de défimr des valeurs Id[p,ι,j], Jd[p,ι,j] y compns pour des points qui ne conespondent pas exactement au point d'impact du faisceau direct -127-

Une trajectoire du point d'impact direct peut êfre définie par les tableaux [ o[k], Vo[fc]) définissant en fonction de l'indice fc les coordonnées du point d'impact direct souhaité Par exemple si la trajectoire est un cercle fc fc de rayon R pixels on peut avoir Io[k] = R cos— , Jo[k] = R s — pour fc allant de 0 à 27tR

Les tableaux définissant les indices de commande en fonction de fc et/? sont obtenus à partir de Io[k] et Jo[k] par

7c[/c, /?] = /-f[ ?Jo[fc],Jo[fc]] et Jc[k,p] = Jd[p,Io[k],Jo[k]]

7.14. Différence de marche induite sur les ondes issues de l'objet.

La Fig 54 illustre le calcul de la différence de marche d'une onde issue d'un point O de l'objet par rapport à l'onde de référence issue virtuellement d'un poιnt-4 d'un milieu d'indice n_v (indice nominal des objectifs) On a

A = n₀l_Q -n_vl_v

Δ = n₀d₀ cosβ -n_vd_v cos avec n₀ smβ- n_v sine. d'où finalement

- n₀d₀ •sma -n_vd_v l- sin² v«0

La Fig 55 illustre le calcul de la différence de marche enfre une onde issue d'un point O de l'objet et l'onde de référence issue virtuellement du point A_p ou p est l'indice du capteur considéré Les coordonnées de

A_p par rapport a un repère centré en O et de vecteurs directems ι_p,j_p ,k_p sont x_p ,y_p ,z_p et ïa distance enfre O et le bord de l'objet du coté du capteur/? est w_p Les vecteurs l_p , y _p , k_p sont définis comme indiqué en 7 7 On vénfie que conformément à l'onentation des axes sur la Fig 55, les vecteurs de base des repères utilisés dans chaque demi-espace repéré par l'indice capteur/? vénfient z₀ = -ι , y₀ = -y_j , k₀ = -k_x Lorsque x_p = y_p = 0 on peut appliquer la formule précédente f

Δ = "cA ι 1 - sine Y -n_vd_vyjl- sin² α

V z-o J avec ₀ = ^w _P d_v = ^w _P ^{~ z}p

2 ' ' , ² sin α = - —+- _;

ou z,y sont des coordonnées en pixels pnses a partir du centre optique du capteur -128-

Si on tient compte également de , y il faut ajouter à cette différence de marche la quantité

K, -⁺y, K p J et on obtient finalement pour la différence de marche totale

2 . 2 2 2

+ J ' +J

Δ„ = n₀w 1 - "v -^Jj¹- • +«, «o^ K ^ ' " K_p *' ;⁺>^> κ_{r J} En particulier on peut positionner le point O de mamere à avoir

(χ_p ,y_p ,z_p) - --. £

2 ' 2 ' 2 ou x,y,z sont les coordonnées déterminées en 7 11 On a alors

A_p = n₀w_p

Pour obtemr une représentation fréquentielle de l'objet, les représentations fréquentielles bidimensionnelles devront être corngées pour compenser cette différence de marche Dans cette expression, seules les valeurs de w_p n'ont pas encore été déterminées

7.15. Calcul dew_p .

7.15.1. Principe: Pom cornger les représentations fréquentielles bidimensionnelles du facteur de phase détermine en 7 14 , il est nécessaire de déterminer préalablement les valeurs w_p , c'est-à-dire en fait la seule valeur w₀ puisque w_x s'en déduit par w_x = L - w₀

Si l'indice moyen de l'objet est proche de l'indice nominal des objectifs, l'effet de w _p sur la valeur

A_p est négligeable et on peut par exemple adopter la valeur w = — et positionner l'échantillon entre les deux objectifs visuellement, en ajustant cette position ulténemement pour obtemr une image de la zone d'intérêt de cet échantillon

Il est également possible d'ajouter une couche réfléchissante sur le coté d'une des lamelles qui est en contact avec l'objet, par exemple celle qui se trouve du coté de l'objectif (2217), sur une zone de dimensions rédmte Lorsque le faisceau FRD et son indicateur inverse sont utilises seuls et lorsque la partie réfléchissante est positionnée de mamere a réfléchir le faisceau indicateur inverse de FRD, alors la figure d'interférences formée s le capteur (2239) doit êfre une constante La position de l'échantillon doit alors être ajustée pour obtenir

2 effectivement une telle constante Lorsque cet ajustement a été opère, on a w₀ = — Si un positionneur suffisamment précis est utilisé, la position de l'échantillon peut alors être modifiée dans le sens de l'axe optique -129-

pom obtemr vv₀ = — La position de l'échantillon doit enfin être modifiée dans le sens orthogonal à l'axe optique de mamere à ce que la zone réfléchissante de la lamelle se trouve hors du champ d'observation

Cependant les deux méthodes précédentes imposent des contraintes pratiques qui peuvent être gênantes Une solution permettant d'éviter cette difficulté est d'effectuer la détermination de w_p à partir de mesures effectuées sur l'échantillon dans sa position définitive

Une représentation fréquentielle Fα peut être obtenue à partir de l'ensemble des représentations fréquentielles bidimensionnelles issues du capteur 0 (2239) lorsque le point d'impact direct de l'onde d'éclairage est s ce même capteur, et parcourt sur ce capteur, par exemple, la trajectoire représentée en pointillés Fig 56 Cette représentation est obtenue de mamere très semblable à la méthode utilisée dans le premier mode de réalisation, avec cependant les différences suivantes

- La représentation fréquentielle bidimensionnelle doit être multipliée par le facteur de conection e ^λ pour annuler le déphasage prodmt par l'abenation sphénque n

- la valeur du coefficient K pns en compte doit être multipliée par un facteur — pour prendre en compte l'mdice

«V moyen dans l'échantillon -Afin de limiter les phénomènes de repliement de la fonction de conection, la représentation fréquentielle est surέchanùllonnée

- Lorsqu'un point de l'espace des fréquences est obtenu plusieurs fois, la valeur retenue est une des valems obtenues et non la moyenne des valeurs obtenues

En pnncipe, la représentation fréquentielle ainsi obtenue ne dépend pas du choix de la valeur retenue quand un point de l'espace des fréquences est obtenu plusieurs fois Toutefois, ceci n'est vrai que si le facteur de conection a une valeur conecte

-J2_*

Dans ces conditions, et compte tenu de l'expression de la fonction de conection e ^λ , la valeur de la représentation fréquentielle bidimensionnelle Fα ainsi obtenue, en un point de l'espace des fréquences de coordonnées nι,nj,nk, peut s'écnre sous la forme Fα[nι,nj,nk] = Fs[nι, nj, nk] exp{- j2πG[nι , nj, nk]w₀)

Lorsqu'un point de l'espace des fréquences est obtenu plusieurs fois, les valeurs Fs[nι,nj,nk] et G[nι,nj,nk] obtenues sont à chaque fois différentes Pour chaque point, on définit Gmιn[m ,nj ,nk] et Gmαx[nι,nj,nk] , valeurs minimale et maximale obtenues pour G en ce point Fsmιn[nι,nj,nk] et Fsmαx[nι ,nj ,nk] sont alors les valeurs obtenues pour Fs[nι,nj,nk] lorsque G[z.z,wy,/.fc] vaut respectivement Gmιn[nι,nj,nk] et Gmαx[nι,nj,nk]

On obtient alors les deux représentations fréquentielles Fαmιn[nι,nj, nk] = Fsmιn[nι,nj,nk]exp{-j2τιGmιn[nι, nj,nk]w_QJ -130-

Famax[nι ,nj ,nk] = Fsmax[nι,nj,nk]exp{-j2τtGmax[nι,nj,nk]w₀j

Lorsque la valem de w ₀ est conecte, ces deux représentations sont égales Le calcul de w₀ consiste a mimmiser l'ecart-type entre les deux représentations fréquentielles Famin et Famax L'écart-type à mimmiser est en pnncipe écart = 2__, \Famax[nι , nj , nk] - Famιn[nι , nj , «fc] ntjyfik

Toutefois, le bruit n'étant pas constant sur l'ensemble de la représentation fréquentielle, chaque élément de cette somme doit être pondéré par l'inverse du bruit au point considère et on obtient

Σ Famax[nι,nj ,nk] - Famm[nι, nj,nk] ni/ij/ik - Btot\ Lnι,nj ^J,nk J\

ou BtoΛni, nj,nk] est une amplitude de bruit définie en chaque point En développant l'expression de cet écart-type on obtient une expression simplifiée qui facilite le calcul de minimisation

7.15. 2. Algorithme:

Le calcul dew_p se fait à l'aide d'un programme dont l'algonthme est décnt Fig 57 Ce programme doit disposer au départ des informations suivantes

- valems établies en 7 11 x,y,z,L, n₀

- paramètre de fonctionnement wpixels, par exemple wpιxels=5

Les étapes essentielles de ce programme sont les suivantes

- (4001) acquisition des images Une sene d'images est obtenue en faisant parcounr au point d'impact direct du faisceau d'éclairage la trajectoire représentée en pointillés sur la Fig 56, ou (3901) représente la limite de la zone utile du capteur, (3902) représente la limite conespondant à l'ouverture maximale des objectifs, (3903) représente une partie circulaire de la trajectoire et (3904) représente une partie rectiligne de la trajectoire Comme indique en 7 13 on génère les tableaux Io[k] Jo[k] selon cette trajectoire et le programme calcule les indices de commande conespondants Ic[k, p] Jc[k, p] Le programme effectue alors l'acquisition de la sene d'images selon la procédure indiquée en 7 12 La procédure d'acquisition génère les tableaux M_{k p q} [/, y] Toutefois, seuls les tableaux conespondant à des indices q,p nuls seront utilisés ici, soit M_{fe 0 0}[z,y]

- (4002) calcul de Fsmm, Gmin, Fsmax, Gmax, Btot

Etape 1 Chaque tableau M_{k 0 0}[ι, y] obtenu lors de la phase d'acquisition est d'abord suréchantillonne de la mamere suivante, en 3 étapes

Etape 1 1 le programme effectue la transformée de Founer bidimensionnelle inverse du tableau M_{k Q 0} -131-

Etape 1 2 le programme complète ce tableau par des zéros pour obtemr un tableau Ms_k de dimensions N_d x N_d (par exemple N_d =512) Ms_k est îmtialisé à 0 puis le programme parcourt les indices ij du tableau M_k o o en effectuant

N„ N pix

Msi + z -- = M 2 k,

2 , ,0 M Etape 1 3 une transformée de Founer directe du tableau Ms_k est effectuée, ce qui termine la phase de sméchantillonnage

Etape 2 Les éléments de chaque tableau Ms_k sont rapportés a la valeur obtenue au point d'impact direct de l'onde d'éclairage , , _r i Ms_k [l, j] Ms_k\ι,j\ = - ^l — *

Ms_k [ιmax_k , jmax_k J ou on note

N_r, ιmax_k = E\ 7α[0,0,/c[fc,0],Jc[fc,0]] Npix

( N, jmax_k = E — ?-Ja[ ,0,Ic[k,0],Jc[k,0]] zV ou E(x) désigne l'entier le plus proche de x

Etape 3 Lorsque le programme a ainsi généré l'ensemble des tableaux surechantillonnes Ms_k il calcule une amplitude de bruit suréchantillonnee sous forme d'un ensemble de tableaux de réels positifs Bs_k de dimensions N _d x N _d A cette fin il parcourt les indices z,/,fc ou z ety vanent entre 0 et N _d -1 en effectuant

N,

^Bs = , „ ra , „ (^Bkβ,θ[>l ,J\]) avec r = ι/r-2≤ι_l<j/r+2 ' N_pa jlr-2≤j_l<jlr+2 Dans cette équation, lorsque le couple ι , y _x est en dehors des limites du tableau B_{k 0β} le coefficient B_{k 0} o _\ , J ι ] est suppose égal à 0

Etape 4 Le programme initialisé à 0 les tableaux Fsmin, Fsmax, il initialisé respectivement à 10²⁰ et -10²⁰ les tableaux Gmtn et Gmax, et il initialisé à 10 20 les tableaux Bmιn,Bmax Ces tableaux ont chacun pour dimensions 2 N_d x 2 N_d x 2 N_d

Le programme parcourt ensuite les indices z,y,fc ou z ety vanent de 0 à N _d -1 en effectuant pour chaque tnplet (z,y,fc) les étapes suivantes, numérotées de 4 1 à 4 3 étape 4 1 calcul des indices de la représentation fréquentielle fridimensionnelle Le programme effectue les opérations suivantes -132-

ni =ι -ιmax + N_d nj=J-jmax_k+N_d

N- N„ N, N_r nk≈lr-e-K, r-" K„ jmαx_k + N,

N, avec r = ^•

N ^{1 γ} pix

Les valeurs nι,nj,nk conespondent à des coordonnées dans un espace tridimensionnel de fréquences comme dans le premier mode de réalisation. Leur calcul menant à des valeurs non entières, on leur affecte l'entier le plus proche de la valem obtenue. La valeur de K doit être corrigée pom temr compte de l'indice de l'échantillon et on utilise donc — À^' ₀. Le coefficient r permet la pnse en compte du suréchantillonnage. n„

étape 4.2 : calcul des valeurs de G et Fs au point courant'

2

\²>c²+jc² ιc^l+jc 2 / _n \ | 2 une 2 + jmc 2 I imc 2 + jmc 2

Gval - «o l- -n„.1- "o, l-

"o r l r K² W ^~ F^{2 n}Υ κ^~

~2π Il z ιc²+jc² y ]C ₂ i c +jmc _x imc y jmc ^ _{+ +}i 112 Λ-n 2rK_a 2rK_n 2 V KI 2 rf.. 2 rK„

Fsval = Ms_k\ι,]]e

N, N, N_Λ N_n avec ιc = ι ,J ⁼J , ttnc - ιmax_k , jmc = jmax_k — —

Dans les équations ci-dessus, tcjc,ιmcjmc conespondent à des coordonnées ramenées au centre optique et a la même valeur que dans l'étape précédente

étape 4.3 ^• modification éventuelle des valeurs de Gmιn,Fsmιn,Gmax,Fsmax

Le programme teste la valeur de Gval Si Gval < Gmιn[nι,nj,nk] le programme effectue Gmιn[nι ,nj,nk] = Gval

Fsmιn[m ,nj ,nk] = Fsval

Bmιn[nι,nj,nk] = fa^z,/]

Si Gval≥Gmax[nι,nj,nk] le programme effectue

Gmax[nι ,nj,nk] = Gval Fsmax[nι , nj,nk] = Fsval

Bmax[nt ,nj,nk] = Bs_k [z , y ] -133-

Etape 5 Le programme génère une amplitude globale de bnut A cet effet il parcourt les indices nι,nj,nk en effectuant pom chacun de ces tnplets l'opération

Btot[nι,nj,nk] = \Bmax[nι,nj,nk + \Bmtn[nι,nj,nk

(4003) La fonction calculée est en pnncipe égale à

F --,smιn r\nι,n_j,nk , je - z 2πGmιn\ inι,'n ^•"ι,nk] 1w„ ^» - b „smax r\nι,nj,nk i _l\e^{- J}/ 2πGmax\ lm ,'m -" ,nk] Jv écart = j

Btot[m,nj,nk]

{nι,ιy,nk)eEs ou Es est l'ensemble des points en lesquels les valems de Gmin et Gmax diffèrent, soit

Es = \m ,nj ,nk\Gmax m ,nj ,nk] ≠ Gmιn[«z,M/,n/V]>

Soit en développant l'expression

Fsmιn[nι,nj,nk Fsmax[m,nj,nk] écart =

Btot[nι,nj,nk] Btoήm ,nj ,nk

(m ,nj ,nk)eEs

Fsmιn[nι,nj ,nk]Fsmax[nι,nj ,nk] -j2π{Gmιn[m,nj,nk\-Gmax[m,nj,nk ) >_tl

Re

{nι,nj,nk)^Es \Btot nι,nj ,nk

La première partie de l'expression ne dépend pas de w₀ Mimmiser l'écart-type revient donc a maximiser la fonction suivante ou Re() désigne la partie réelle

Fsmm[m,nj,nk Fsmax[nι,nj,nk\ -j2π{Gmw[m,nj,nk]-Gm x[m,nj,nk JM

Re

(nι,ry,nk)eEs \Btot[m,ry,nk Toutefois cette fonction présente des fréquences élevées causant des repliements de spectre qui perturbent la convergence de l'algonthme Ceux-ci sont suppnmés en utilisant la fonction

Fsmιmm,nj,nk]Fsmax\m,n ,nk\ i ~ / _r , _r -•, \ f(w,Aw) = ^ Re ^l * ^ls '^•expl-y 2π Gmιn\nι,nj,nk - Gmax\nι,nj ,nk] W_Q I

(nι,nj,nk) Es ^ \Blol[nι,nj,nk

A{Gmιn[nι,n ,nk] - Gmax nι,nj,nk ])ΔW)

ou (x) = 0 quand |x| > — et γ{x) = 1 quand |x| < —

(4004) l'algonthme itère la boucle sur wlarg jusqu'à ce qu'une précision suffisante soit atteinte Par exemple on peut avoir lim = — wpixels

(4005) La valeur Wy affichée conespond à w₀ On a w_x - L -W_j- et w₀ = w_f La valeur rapport affichée conespond à -134-

' wpixelsj rapport = -

Fsmin[ni,nj,nk + \Fsmax[ni ,nj ,nk

(ni ,nj Σ ,nk) Es \Btot[ni,nj,nk]\

La valeur rapport affichée caractérise la qualité du recoupement obtenu entre les images calculées à partir des représentations fréquentielles Famin et Famax. Plus elle est proche de 1 meilleur ce recoupement est. Lorsque l'échantillon est hors de la zone d'observation cette valeur se rapproche de 0.

7.15.3. Focalisation

Le réglage de focalisation consiste à positionner conectement l'échantillon dans la zone d'observation des objectifs. Lors de ce réglage, les valeurs de rapport et w_f doivent êfre recalculées en permanence. La position de l'échantillon doit être ajustée selon l'axe (2263) de mamere à obtenir une valeur suffisamment élevée de rapport, puis elle peut êfre ajustée plus finement de manière à obtenir par exemple w _f = — .

Ce réglage permet en général une première focalisation. Toutefois, si par exemple l'indice n₀ est proche de n_v , cette focalisation est très imprécise.

Dans tous les cas, ce réglage doit ultériemement être complété par une focalisation plus précise sur la zone d'intérêt, comme indiqué en 7.17.3.

7.16. Obtention de la fonction de compensation des aberrations.

-]2π—

La fonction e ^λ permettant en principe de corriger les déphasages introduits par l'objet et conespondant à l'abenation sphérique comporte des fréquences élevées qui sont filtrées par le diaphragme. Elle ne peut donc pas être utilisée directement et il est nécessaire de la filtrer pour obtenir sous forme d^'un tableau de dimensions N _pa x N_pιx une fonction de correction utilisable.

La fonction de compensation des abenations, qui sera utilisée dans la phase d'imagerie, est obtenue de la mamere suivante: Etape 1: génération des tableaux Ds_p de dimensions N _e x N _e avec par exemple N _e =4096: f 2

~ 2π T- ic +jc² ι -c^l +j -c2^l ' x ^1C y J^{c Λ}

^Ds_p[ι,j] = exp\ "0 - n w „ — . 1- + n,

"'ⁱH +

_' ² r^{2 κ}p² v 2 rK_p 2 rK_{p J}

N_e N_e N avec ιc = ι , ic = _/ , r = —

2 2 N pix

-)2π- le tableau Ds_p conespond à la fonction e ^λ échantillonnée avec un pas suffisamment fin pour éviter le repliement de spectre.

Etape 2: fransformation de Fourier inverse des tableaux Ds_p -135-

Etape 3: extraction de la partie cenfrale du tableau, de dimensions N_pιx x N_pιx avec simulation du diaphragme. Le programme effectue:

N P>* . N_c . pu

D_p[i ] - Ds_f N-

2 2 2 pom tous les couples (z^',y) tels que

N pix N_p,χY (N ' p_r ix V

⁺ \ J J ou ouv est l'ouverture des objectifs.

Etape 4: transformation de Fourier du tableau D_p .

On obtient alors sous la forme du tableau D_p la fonction de conection utilisable.

7.17. Réalisation d'images tridimensionnelles.

7.17.1. principe

7.17.1.1. Superposition des représentations fréquentielles.

On a vu que pour un faisceau d'éclairage donné (indice fc,/?) on obtient deux images bidimensionnelles conespondant aux deux capteurs et repérées par l'indice q. Lorsqu'on fait parcourir au point d'impact direct la trajectoire de la Fig. 56 sur le capteur numéro 0, on peut générer à partir des images bidimensionnelles obtenues sur les deux capteurs une représentation fréquentielle. La Fig.58 montre comment un ensemble de représentations fréquentielles bidimensionnelles engendre une représentation tridimensionnelle. Une représentation bidimensionnelle est composée d'une portion de sphère (4101) obtenue sur le capteur numéro 0 et d'une portion de sphère (4102) obtenue sur le capteur numéro 1. Lorsque le point d'impact direct se déplace sur une frajectoire transverse (3904) le mouvement de ces portions de sphères engendre un volume. Sur la figure 58, on a représenté un ensemble de telles portions de sphères, obtenues pour diverses positions du point d'impact direct sur une trajectoire transverse. Lorsque le point d'impact direct se déplace sur le cercle (3903) le volume (4104) délimité par (4105) est engendré en plus. Lorsque le point d'impact direct est sur le capteur numéro 1, un volume symétrique est généré. On distingue quatre représentations fréquentielles tridimensionnelles partielles que l'on notera F_{p q} ou le couple (p,q) désigne un couple (capteur recevant l'onde d'éclairage directe, capteur dont les représentations bidimensionnelles permettant de générer F_p^q sont issues) avec /?=0 pour le capteur (2239), /?=1 pour (2229), q=0 quand il désigne le même capteur que/? et q- quand il désigne le capteur opposé. La représentation tridimensionnelle finale est obtenue par superposition de ces représentations tridimensionnelles partielles. La représentation fréquentielle complète obtenue est représentée en coupe sur la Fig.59 Elle est composée:

- d'une partie (4111) obtenue par le capteur 0 ou 1 recevant le point d'impact direct du faisceau, et conespondant aux représentations F_{0 0} et F ₀ qui occupent la même partie de l'espace des fréquences. -136-

-d'une partie (4113) obtenue par le captem 1 lorsque le point d'impact direct du faisceau est sur le capteur 0, et conespondant donc à la représentation F_o .

- d'une partie (4112) obtenue par le capteur 0 lorsque le point d'impact direct du faisceau est sur le capteur 1, et conespondant donc à la représentation Fy . Pour obtenir exactement ce volume il faut en principe parcourir toutes les valeurs de fréquence possibles, c'est-à-dire N_pιx x N_pιx valems s chaque captem, moins les valeurs se trouvant hors de la zone limitée par l'ouverture de l'objectif. Néanmoins en utilisant la frajectoire réduite de la Fig. 56 on obtient un volume peu différent de celui dessiné.

La frajectoire de la Fig.56 constitue toutefois un simple exemple et divers types de trajectoire pounont être utilisées en pratique. On donne ci-dessous quelques exemples:

- Un cercle comme dans le premier mode de réalisation.

- La frajectoire de la Fig.56, qui permet l'obtention d'images de meilleure définition.

- La frajectoire de la Fig.56 rendue moins dense. On peut par exemple utiliser un pixel sur deux le long de cette frajectoire. Ceci a pour effet de limiter l'épaisseur des échantillons pouvant être observés dans de bonnes conditions.

- Une trajectoire complète, c'est-à-dire définie par les tableaux Io[k] et Jo[k] tels que le point de coordonnées

(-to[fc], Jo[k^\ parcoure l'ensemble du disque limité par l'ouverture de l'objectif. Ceci signifie que chaque pixel compris dans le disque limité par le cercle (3902) de la Fig.56 doit êfre atteint une et une seule fois. Cette frajectoire n'apporte qu'une faible amélioration de la définition par rapport à celle de la Fig.56 et augmente considérablement le temps d'acquisition. Par contre, les conditions normales d'utilisation de ce microscope nécessitent que le faisceau diffracté reste de faible intensité par rapport au faisceau d'éclairage. L'utilisation d'une frajectoire complète rend le système plus robuste quand on ne respecte pas ces conditions d'utilisation.

7.17.1.2. Référence de phase et d'intensité Afin de pouvoir combiner les représentations fréquentielles bidimensionnelles pour obtemr les représentations fréquentielles tridimensionnelles partielles, il est nécessaire de leur établir une référence commune de phase et d'intensité.

- les valeurs complexes des ondes reçues sur le capteur éclairé directement peuvent êfre rapportées à la valeur de l'onde d'éclairage en son point d'impact direct, comme dans le premier mode de réalisation ou dans le calcul de w_p .

- Une méthode plus élaborée est nécessaire pour les ondes reçues sur le capteur opposé. Les éclairages de référence sont utilisés pour établir un rapport caractéristique de la variation de phase s chaque capteur et ce rapport est pris en compte pour annuler ces variations avant de se rapporter à la valeur de l'onde d'éclairage en son point d'impact direct. Ceci permet de rendre cohérentes entre elles toutes les représentations bidimensionnelles conespondant à un couple p,q donné, indépendamment des vibrations affectant le système, et donc d'établir pour chaque couple/?, q une représentation fréquentielle tridimensionnelle. -137-

Cependant, ceci ne permet pas d'établir la relation de phase entre chacune de ces représentations fréquentielles tndimensionnelles, qu'il est nécessaire de connaître pour les combiner en une représentation fréquentielle umque La relation de phase entre, par exemple, les représentations fréquentielles tndimensionnelles F₀ o et F_Q , qui conespondent respectivement aux parties (4111) et (4113) de la représentation tndimensionnelle de l'ensemble, peut êfre établie lorsque ces deux parties ont une zone commune (4114) Il suffit de choisir la différence de phase qui fait coïncider au mieux ces deux représentations sur leur zone commune

Pour qu'il y ait une zone commune il est nécessaire que l'ouverture de l'objectif soit suffisante La condition

3 d'existence de cette zone commune se détermine géométriquement et est n₀ < — τ--roz.v ou ouv est l'ouverture de

2_\2 l'objectif Par exemple pour une ouverture de 1 4 on obtient un indice maximal de l'échantillon de n_Q =1,48 Lorsque les deux représentations F₀ o et F_o ne se recoupent pas, il est à pnon impossible de déterminer leur relation de phase en effet toute relation de phase conespond à une représentation fréquentielle possible Une représentation de l'objet en absorptivité et indice peut toutefois être obtenue a partir de F_{0 0} seule, ou une représentation de l'objet ne différenciant pas l'indice et l'abso tivité peut être obtenue a partir de F_o seule en extrayant le module de la représentation spatiale obtenue en utilisant seulement F_o

7.17.1.2. Décalage de phase entre deux tableaux h mités.

On considère deux tableaux à une dimension A [i] et B[ι] ou z vane de 0 à N-l Les éléments de .4 (resp B) sont affectés chacun par un bruit gaussien indépendant dont l'écart-type est contenu dans un tableau GA[ι] (resp GB[ι]) Ces tableaux .4 et B étant supposes égaux a un rapport constant de phase et d'intensité près et au bruit près, on cherche à déterminer ce rapport de phase et d'intensité, que l'on notera x, et qui vaudrait en

B[t] l'abscence de bruit x_{(sam bruιt)} = -^

La valeur recherchée pour x est celle qui maximise la quantité P{x\A,B , représentant la probabilité d'une valem de x connaissant les tableaux A et B Maximiser cette quantité revient a maximiser P{B\A, x) Pour une valeur donnée de x, et dans le cas ou les valeurs de B[ι] et_4[z] sont suffisamment au-dessus du mveau de bnut, la loi donnant B[ι] à partir de A [i] est la composée de deux lois gaussiennes d'ecart-types respectifs |x| GA [i]

et G-5[z] C'est donc une loi gaussienne d'écart-type |x| (G-4[z]j +(Gβ[z]) On a donc

P(-9|-4,x) = j jexp ' ^{l J l Jl}

[ M²(G ^<]) ⁺M^<])

Dans les cas qui nous intéresseront par la suite |x| est toujours proche de 1 On a donc μ.[z]-* [z

F(i5| .,x) ≈ J^ exp l H']) H^GW -138-

Maxiπuser cette quantité revient à mimmiser la quantité \B[,]-xA[ιf

Σ (βA[,f ₊(Gi(,J'

qui vaut, après division par le facteur 141^' indépendant de x

(GA[ι]Y +(GB[,]) f

(GA[ι])² +(GB[ι <? (GA[,f +(GB[ι]Y Σ 4M']

M'I H^GW ^•+M

Σ 141 141 ∑- I4f

(G-4[z])² ₊(G z])² (GA[ιf +(GB[ι]Y (GA[,]Y +(GB[,])

On vénfie que cette quantité est égale à

M'] \4f 4M

(GA[,])² +(GB[ι]Y (GA[ι])² +(GB[,]Y (GA[,])² +(GB[,]Y

+-

∑- 141^' Σ \4Ï

(GA[,]Y +(GB[ι]) (GA[ι])² +(GB[ι]Y Σ 'ir

(GA[ι])² +(GB[,]Y La solution minimisant cette quantité est donc 414]

141^' (GA[ιf +(GB[,]Y Cette formule simple n'est cependant valable que si les valeurs de B[ι] et A [t] sont suffisamment au-dessus du mveau de bruit Une mamere d'éviter les valems ne respectant pas cette conditions est de limiter les sommations de la mamere suivante

^ 414]

, F(G-4[z])² +(GB[ι]Y

X - y \4Î

_; F(G-4[z])² +(G5[z])²

avec E = |4^"M']| ≥ Coef • max 4M^;

(G-4[z])² +(GB[ι])^' J (GA[j]Y +(GB[j]Y -139-

c'est-à-dire que les sommations sont limitées à l'ensemble E des valeurs de z telles que 4 _': -soit

(GA[ι]Y +(GB[,]Y supéneur au prodmt de sa valeur maximale par un coefficient Coef qui peut par exemple être égal à 0,5

On fera fréquemment usage de cette méthode par la suite, généralisée à 2 ou 3 dimensions, pour déterminer l'écart de phase entre deux représentations fréquentielles se recoupant partiellement

7.17.1.3. Combinaison d'une série d'éléments bruités.

On considère un tableaux à une dimension A [i] ou z vane de 0 à V-1 Les éléments de A sont affectés chacun par un bruit gaussien indépendant dont l'écart-type est contenu dans un tableau GA[ι] En l'abscence de bnut les éléments de A sont tous égaux à une valeur x que l'on veut déterminer x est la grandeur qui maximise P(x|-4) Maximiser cette quantité revient à maximiser F(-4|x) Or on a

|x- z]f

^F(-⁴|x) = π-

[ H']) j

Maximiser cette quantité revient à minimiser la quantité suivante y l'f

_' N_'B² Qui vaut, après division par la quantité ^ indépendante de x

_' (^G4.)

A[ι]

Σ I4I^:

∑- 4]

(GA[ι]Y r (GA[,]) Σ (GA[,]Y

^•+

^ (GA[ι]Y ? (G ])² ? (G-4[z])² On vénfie que cette quantité est égale à

Σ 4]

(GA[,]Y Σ J4t ^ 4]

^ (GA[ι]Y x-- M'])²

Σ ^ 1

(.GA[ι]Y Σ M'])

^ H'])²

La solution x qui la minimise est donc

_∑_4

1 (GA[,]Y x = -

' M'J^a

Le bruit sur x est alors donné par l'addition en valeur quadratique des bruits sur chaque A[ι] -140-

4f

(GA[ι]Y σl = -

' (GA[ι])

On vénfie que ceci équivaut à

— *l ^≈τ t —(GA— ^l[ιf

On fera également usage de ce résultat, pour déterminer une représentation fréquentielle à partir de plusieurs représentations partielles se recoupant en certains points

7.17.2 algorithme.

Une séné d'images est d'abord acquise comme indiqué en 7 12 , le point d'impact direct du faisceau d'éclairage parcourant sur chaque capteur une trajectoire définie comme indique en 7 17 1 1 Pour simplifier l'exposé, on sépare ici la phase d'acquisition et la phase de calcul Cependant, les représentations fréquentielles fridimensionnelles F_{p q} peuvent également être générées au fur et à mesure de l'acquisition Par exemple, si une trajectoire complète est utilisée, la séparation des phases d'acquisition et de calcul nécessite une mémoire très importante et il est donc préférable d'effectuer le calcul au fur et a mesme de l'acquisition La phase d'acquisition génère les tableaux suivants M_{k p q} [î, y] , conespondant à la pnse de vue pnncipale

B_{k p,q} ['Α ^mcucateur de bruit

Hk,_P,q ['Α P^nse ^^{e vue} ^^e référence pour la fc-ième acquisition,

BH_{k p q} [ι,j] indicateur de bruit de l'image de référence fc indiciant la pnse de vue, /? le capteur éclairé par le faisceau direct, q indiquant <7=0 captem éclairé par le faisceau direct q=l captem opposé

La séné d'indices de commande utilisée étant définie par les tableaux le et Je, le programme génère aussi la séné des coordonnées des points d'impact direct et inversé des faisceaux d'éclairage ιmax_{k p q} = Ia[p, q, lc[k, p], Jc\k, /?]] jmax_{k p q} = Ja[p, q, Ic[k, p], Jc[k, p]]

A partir de cet ensemble de données un programme génère une représentation tridimensionnelle spatiale de l'objet étudié Ce programme comporte les étapes smvantes

Etape 1 Cette étape consiste à calculer le rapport caracténstique du décalage de phase et d'amplitude dû aux vibrations et aux fluctuations d'intensité du laser, entre une pnse de vue de référence d'mdice fc=0 et la pnse de -141-

vue de référence cornante d'indice fc Ce décalage est caracténsé par les vanations de la fonction H_{k p q} [ι,j] qui en l'abscence de vibrations devrait êfre constante Pour tous les tnplets (k,p,q) le programme calcule donc, selon la méthode vue en 7 17 2 , le rapport

^H0,p.q[^l>A^Hk.pΛ¹>J

R k,p,q

(^H \BH k p k,ρ c _*M + \BH, o p.q ['-A avec

Hθ p,q[^!>A^Hk.pA'>J ^H0._P ^a'^b]^Hk p q[

-k,p q ('>-/) • > Coef • max

0<α≤W-„ -l

B _{k pΛ} [ι,j\ +\BH_0tM [ι,j]\ O≤i≤N-,, -1 \BH_k__{p q}[a,b\ +1.9-7, ϋ.p et par exemple Coef =0,5

Etape 2 cette étape consiste à effectuer l'opération consistant à

- normaliser chaque représentation bidimensionnelle pour compenser les vanations de décalages de phase et d'amplitude dûs aux vibrations, caracténsés par la quantité R_k,p,q

- compenser l'abenation sphénque et le mauvais positionnement relatif des objectifs, caracténsés par

^Dpq+pq[l,j]

- se ramener à la valeur de l'onde d'éclairage en son point d'impact direct

Le programme parcourt donc les indices k,p,q,ιj en effectuant

M ^k,_P,q ['. A^Dpq+pq ['' A^Rk,p,q k, ,p,q M= M_{k p 0} [ιmax_{k p 0} , jmax_k^pfi θ_p [ιmax_{k p 0} , jmax_{k p Q} R_k^₀

^Dpq+pq['_'A^Rk,p q

^B ,p >>A = ^Bk,p >>A

^Mk.p,o [""oxk.p o , ^jm∞k _P o }^D _P ['^maxk._P o . J™∞k _P o }^Rk,_P.o

L'utilisation du tableau D_p , qui est le résultat des étapes 7 11, 7 15 et 7 16 , permet d'améliorer nettement les résultats lorsque l'indice moyen de l'objet diffère de l'indice nominal des objectifs Toutefois, il est également possible de ne pas effectuer les étapes 7 11, 7 15 et 7 16.. Le réglage de position des objectifs deent en 7 10 doit alors êfre effectué de mamere à obtenir une image spatiale cenfrée et ponctuelle Le tableau D doit alors être mis à 1

L'utilisation des valems R_k,P,q permet de compenser d'éventuelles vibrations de la table optique

Toutefois, si la table optique est parfaitement stable, cette compensation n'est pas nécessaire Les valeurs R_k „ „ doivent alors être mises à 1 -142-

Etape 3 Cette étape consiste à calculer pour chaque couple (p,q) une représentation fréquentielle tridimensionnelle F_pq , assortie d'un tableau IB_{p q} de réels, contenant l'inverse du cane de l'écart-type du bruit gaussien affectant chaque élément du tableau F_{p q} Ces tableaux sont de dimensions 2 N _ptx x 2 N_pιx x 2 N _ptx

Chaque point d'une représentation fréquentielle bidimensionnelle conespond a un point de la représentation fréquentielle tridimensionnelle F_pq , dont les coordonnées doivent êfre déterminées Lorsqu'un point est obtenu plusieurs fois, la valeur la plus probable est déterminée

Le programme initialisé les tableaux F_p , IB_pqà zéro pms parcourt l'ensemble des indices/?, q, k,ιj en effectuant pour chaque quintuplet (p,q,k,ιj) les opérations suivantes, numérotées de 1 à 3 opération 1 : calcul des indices de la représentation fréquentielle tndimensionnelle Le programme effectue nι=a_p(ι-ιmax_kpq) + N_pιx nj=a_p j- jmax_kpΛ ) + N_pυc

"k = κ„,² - a_p ²\ι ψ-\ -a_p ²\j-~- -\ - JK_m ² -a_p ²\ ιmax_{k pq} ψ-\ - a_ρ\jma _{k p q} - ~^-\ +N_pa

Une distance d'un pixel, mesurée sur le capteur/?, conespond a un écart de fréquence réel proportionnel a Les pixels ne représentent donc pas les mêmes écarts de fréquence sur les deux capteurs On se ramène à

K_P une umté commune et proportionnelle aux écarts de fréquence en multipliant les distances obtenues sur le capteur

K„+K p par le coefficient a_p = -

2K_p

Ko+K,

La valeur de K devient alors commune aux deux capteurs et vaut — Elle doit être corngee pour

tenir compte de l'indice de l'échantillon et on obtient donc K_m = — ° '

opération 2 modification des indices de la représentation fréquentielle fridimensionnelle dans le cas q=l Si q=l, la fréquence conespondant aux coordonnées ιmax_{k pq} , jmax_k n'est pas la fréquence nulle En effet on a en ce point, en reprenant les notations utilisées en 53 f_c= -f_e et donc f_t = f_c- f_e= -2f_e La fréquence obtenue par la méthode précédente doit donc êfre translatée d'un vecteur -2f_e ce qui se tradmt par les opérations supplémentaires suivantes, effectuées seulement dans le cas q=l

777+ = 2a_pιmax_kp , 77+ = 2a_pjmax_kp

N p_mix_rY N p,ix nk+ = 2 K_m ²-a_p ² ιmax_kp] — -a, jmax_{k p]} —

Le calcul des indices nι,nj,nk menant a des valeurs non entières, on leur affecte l'entier le plus proche de la valeur calculée -143-

opération 3 modification des éléments de tableaux

Les indices modifiés ayant été générés, le programme modifie les éléments de tableaux lB_pΛ[nι,nj,nk]+ = — -

\^Bk,pA'>A\

F_p,q r[m,n_j,nk , 1]+ = - ^Mk ^p q [-' I]_

\^Bk,pA'>A\

Etape 4 II reste une opération à effectuer pom obtemr la valeur la plus probable sur chaque fréquence Le programme parcourt donc les indices p,q,nι,nj,nk en effectuant, à chaque fois que IB _{p q}[m ,nj ,nk] ≠ 0 , l'opération

F_p,q \nι,nj,nk] F_{p q}[nι,nj,nk] =

IB p„._ηg[[m ,nj,nk]

Etape 5 Les repères dans lesquels ont été évalués les indices ij et donc nι,nj,nk sont inversés enfre les deux captems II est donc nécessaire d'effectuer un changement de repère des représentations conespondant au capteur indicé 1 pour les expnmer dans le même repère que les représentations conespondant au capteur indicé 0 Le programme effectue donc le changement de vanables ZÎZ -» 2N_pιx -ni , nj → 2N_p]X -nj , nk → 2-V _pa -nk dans les tableaux conespondant au capteur indicé 1 afin d'expnmer l'ensemble des fréquences dans le même repère Les tableaux conespondant à une représentation fréquentielle issue du capteur 1 ont un indice p égal à 1 ou 0 et un indice q égal à p

Pour effecmer ces changements de vanable le programme parcourt l'ensemble des indices p,nι,nj,nk en effectuant

F_{p p} [nι,nj,nk] = F_{p p} \2N_pιx -nι,2N_pυc ~nj,2N_pιx -nk\

IB_{p p} [m,nj,nk] = lB_pJ2N_pιx -nι,2N _pιx -nj,2N_pιx -nk\

Etape 6 Le programme calcule le rapport caracténstique du décalage de phase et d'amplitude enfre l'onde reçue s le captem éclairé directement et celle reçue sur le capteur non éclairé II parcourt donc les indices /?=0, p=l en effectuant, conformément au pnncipe vu en 7 17 1 2 -144-

F_pAⁿ^ⁿ nk]F_pχ nι,nj,nk

{nι,nj,nk) e£

IB_p0[nι,nj,nk] IB_p [nι,nj,nk]

M_P=-

F, Λfi^nj ^

(nι,nj Σ,nk)eE_f r + -

IB_p0[nι,nj,nk] IB_p [nι,nj,nk] Dans cette expression les sommes sont restreintes à un ensemble E_p constitué des tnplets {nι,nj,nk\ vérifiant IB_{p 0} [ZÎZ , 77/ , nk]lB_pX [m , nj , zzfc] ≠ 0 et

F_pfi [m , 77/ , nk]F_p] [τ7z , Tzy , nfc] F_pβ[a,b,c]F_pl[a,b,c

^≥Coef-o<_a -i r + - lB_p0[nι,nj,nk] /B _l[τ77,77/,77fc] 0<è<27 -l IB_p0[a,b,c] IB_p [a,b,c] 0≤c≤2N^-l avec par exemple Coef = 0,5

Etape 7 Le programme modifie les représentations tndimensionnelles obtenues a partir de capteurs non éclairés directement II parcourt les indices/?, nι,nj,nk en effectuant F_pΛ [nι,nj,nk] = F_pλ [τ7z,77y,77fc] Rb_p

Etape 8 Le programme calcule la représentation fréquentielle finale, contenue dans un tableau F de dimensions 2N _pιx x2N_pιx x 2N _pιx II initialisé à 0 ce tableau puis parcourt les indices nι,nj,nk en testant la condition

∑IB_pq[m,nj,nk\≠ϋ

PI

Lorsque la condition est réalisée il effectue F_pq[nι,nj,nk]lB_pq[nι,nj,nk] F[nι,nj,nk]= —

2^IB_pq[nι,nj,nk] p.q Etape 9 Le programme effectue une transformation de Founer tndimensionnelle inverse de la représentation fréquentielle ainsi obtenue pour obtemr une représentation spatiale

Etape 10 Comme dans le premier mode de réalisation, le programme peut alors visualiser la représentation ainsi obtenue sous forme de coupes ou de projections éventuellement stéréoscopiques

7.17.4. Focalisation

L'algonthme décnt en 7172 permet l'obtention de représentations tndimensionnelles de l'échantillon Le réglage de focalisation consiste à régler la position de l'objet de mamere à ce que ces représentations soient celles d'une zone d'intérêt de l'échantillon Ceci peut être réalisé par l'opérateur qui déplace l'échantillon tout en -145-

observant par exemple une projection plane ou une coupe de cette représentation tndimensionnelle, et déplace l'objet pour obtemr une image de la zone d'intérêt Si un déplacement de l'échantillon dans la direction de l'axe optique est effectué, celui-ci modifie les valems de w_p , et la procédme déente en 7 15 2 doit être réitérée pour obtemr une valeur conecte de w „

7.18. Variantes.

Les algonthmes utilisés dans le présent mode de réalisation admettent de nombreuses vanantes dont certaines sont exposées ci-après

7.18.1. Utilisation des valeurs préenregistrées du faisceau d'éclairage direct Cette vanante consiste à modifier l'étape 2 de l'algonthme deent en 7 17 2 de mamere à utiliser les valems préenregistrées de l'éclairage direct On a en effet, à un facteur de phase près qui est constant sur l'ensemble des valeurs de fc,/?, ιmax_{k p 0} , jmax_{k p 0} _{( 1} Ra[p c[k, p], Jc[k, p]]Rb[p,Ic[k, p], Jc[k, p]] ^M _k,_P,o [^ιmaX_k,_p,o , Jmax_{k pfi} ] = — ^l- -J — ^l- i

R k,p,0

Cette valem peut êfre introduite dans la formule utilisée à l'étape 2, qui est donc remplacée par

^Mk,p q[^l>A^Dpq₊pq[ j]Rk,p,q M_{ktP q}[,,j] =

Ra[p c[k,p],Jc[k,p]]Rb[p,Ic[k,p],Jc[k,p] D_p[ιmax_{k p 0},jrnax_{k p 0}]

7.18.2. Utilisation des valeurs précalculées du faisceau d'éclairage direct

Rb[p, Ic[k, p], Jc[k, /?]] est en pnncipe égal à la fonction obtenue en 7 7

^j2 * 2π i j e ^*J ^Λ = exp ² x + y-ⁱ— + z K_n >² + J ι² + J²

- ι ² - J ² + L

K_p K_p K_p »oJ K„ K„

cette fonction étant toutefois filtrée par le diaphragme II est donc possible de remplacer Rb[p, lc[k, p], Jc]k, /?]] par RB_phmax_{k p 0},jmax_{k p 0}] ou la fonction -^.[z,;] est obtenue de la mamere suivante (cette méthode d'obtention est similaire a celle utilisée pour D_p [i, y] en 7 16 ) Etape 1 génération des tableaux RB_p de dimensions N_e x N _e avec par exemple N _e =4096 r

*2π

RB_p[ι,j] = exp x ^lC + y-³ J—^C + z — ' \Kτ 2 • J^c + L v K_p K_p K_{p nn} ⁿ ^ K„ -nA-^¹ κ„

N_e N_e N_e avec ιc = ι - — , /c = / , r =

2 2 N

Etape 2 fransformation de Founer inverse des tableaux RB_p

Etape 3 extraction de la partie centrale du tableau, de dimensions N _pκ x N _pιx avec simulation du diaphragme

Le programme effectue -146-

N pix N_c ^NP« , N_c

∞Λ'-JY- RB, ⁺Ύ^>J- 2 2 pom tous les couples (z,y) tels que f M Λ ² ^{J V} pix N pix _{≤ 1} ^

J - -

2^~, 2

Etape 4 transformation de Founer du tableau RB_p

On obtient alors sous la forme du tableau RB_p la fonction équivalente au tableau Rb L'étape 2 de l'algonthme décnt en 7 17.2 est alors remplacée par

^Mk p ^l>A^DPq + pA^l>A^Rk. ,PP 1

Ra[p, Ic[k, p], Jc[k, p]]RB_p \ιmax_{k pβ} , jmax_{k p 0} D_p \ιmax_{k p 0} , jmax_{k p 0} ]

Ce remplacement est équivalent à un « lissage » de la fonction définie par le tableau Rb et peut dans certains cas améliorer les résultats, en particulier si l'onde diffractée est forte, sortant des conditions d'utilisation normales de ce microscope Dans ce cas on combinera cette formule avec l'utilisation d'une trajectoire complète comme définie en 7 17 1 1

7.18.3. Obtention de représentations confocales

Un microscope confocal permet l'obtention de représentations spatiales tndimensionnelles, que l'on appellera représentations confocales Le présent microscope permet l'obtention d'une représentation confocale strictement eqmvalente à celle qui seraient obtenue à l'aide d'un microscope confocal

En effet, l'onde d'éclairage utilisée par un microscope confocal est la somme des ondes planes utilisées dans le cas ou on utilise pour l'acquisition une trajectoire complète, chaque onde plane devant se voir affecter une phase dépendant du point éclairé L'onde équivalente à l'onde reçue par un microscope confocal de même ouverture que le présent microscope, lorsque le point central est éclairé, peut donc être générée en sommant les représentations bidimensionnelles d'ondes diffractees obtenues pour l'ensemble des ondes d'éclairage formant une trajectoire complète

On peut montrer que la représentation confocale de l'objet est la transformée de Founer inverse d'une représentation fréquentielle tndimensionnelle obtenue en sommant les représentations fréquentielles bidimensionnelles partielles obtenues à partir de chaque onde d'éclairage, l'ensemble des ondes d'éclairage parcourant une trajectoire complète

En outre, un microscope confocal n'acquiert des images que sur un seul objectif et n'éclaire l'échantillon que par un seul coté De plus il génère une valeur qui est l'intensité de l'onde ayant traversé l'objet et non sa valem complexe La représentation confocale en intensité s'obtient donc à partir des ondes reçues par un seul objectif, et en extrayant le cane du module de la représentation confocale précédemment obtenue Enfin, le microscope confocal ne cornge pas l'abenation sphénque due à l'indice de l'objet -147-

Une représentation confocale peut donc êfre obtenue par le présent microscope, en utilisant pour l'acquisition une trajectoire complète comme définie en 7 17 1 1 et en modifiant la procédme déente au paragraphe 17.2 de la manière suivante (1) L'étape 2 est modifiée de la mamere suivante _M r ₁ ^Mk,p ^l>A^DPÏ+ 'Λ^Rk.p q ^{k p q '} Ra[p, lc[k, p], Jc[k, p]]RB_p ιmax_{k p 0} , jmax_{k p 0} ]θ_p \ιmax_{k p 0} , jmax_{k p 0} ] ou les tableaux D_p peuvent être mis à 1 si on ne souhaite pas cornger l'abenation sphénque et ou RB_p est défini comme en 7 17 3.2

(2)- l'opération 3 de l'étape 3 est remplacée par F_{p q}[nι,nj,nk]+ = M_{k P} A'_>A

(3)- les étapes 4,5,6,7 ne sont pas effectuées (4)- l'étape 8 est remplacée par F[nι,nj,nk] = F_{po qo}[nι,nj,nk] ou le choix des indices (po,qo) dépend du type de représentation confocale que l'on cherche à générer

- si (po,qo) = (0,0) ou (po,qo) = (1,0) on génère une représentation conespondant à celle qui serait obtenue par un microscope confocal par réflexion

- si (po,qo) = (0,1) ou (po,qo) = (1,1) on génère une représentation correspondant à celle qui serait obtenue par un microscope confocal par transmission

(5)- le cane du module de la représentation spatiale obtenue à l'issue de l'étape 9 conespond alors à la représentation confocale en intensité

Le fait de remplacer le calcul de la valeur la plus probable de la représentation fréquentielle en chaque point a pour conséquences une surévaluation des basses fréquences par rapport aux hautes fréquences, ce qm éqmvaut à un filtrage des fréquences élevées et donc à une perte de définition

Il est également possible d'obtemr une représentation confocale a partir de la représentation fréquentielle tridimensionnelle obtenue conformément au paragraphe 17 non modifie en effet, la représentation fridimensionnelle de l'objet constitue l'information la plus complète possible qui puisse être obtenue avec des objectifs d'ouverture donnée et peut être utilisée pour simuler tout type d'image qui pounait êfre générée à partir de tout type de microscope utilisant le même objectif et la même longueur d'onde

Cependant, l'utilisation d'une trajectoire complète rend le système plus robuste, conformément à ce qui a été dit en 7 17 1 1 Si une représentation confocale est obtenue en utilisant une trajectoire comme celle de la Fig 56, elle sera perturbée dans le cas ou une partie importante de l'onde d'éclairage est diffractée, et ce de mamere plus importante que la représentation confocale obtenue à l'aide d'un microscope confocal ou par utilisation d'une trajectoire complète Elle ne peut donc pas être considérée comme ngoureusement équivalente a celle générée par un microscope confocal -148-

7.18.4. Réalisation d'images tridimensionnelles avec contrôle de l'onde de référence.

Dans les méthodes déentes précédemment, le dispositif de décalage de phase (2205) est commande pour générer des déphasages θ_d de l'onde d'éclairage dépendants de l'indice d conformément au tableau indiqué en

7 122 1 Pour réaliser la présente vanante, ce dispositif de décalage de phase discret doit être remplacé par un dispositif permettant un décalage de phase continu Un tel dispositif peut être un dispositif à cnstaux liqmdes placé enfre deux polansems, commercialisé par exemple par la société Newport Moyennant une modification de la trajectoire du faisceau, ce dispositif peut également être un miroir piézoélectrique comme dans le premier mode de réalisation La présente vanante consiste, lors de l'acquisition d'image prévue en 7 17 2 et effectuée comme indique en 7 12 2 1 , à commander le dispositif de décalage de phase de manière à remplacer le décalage de phase θ_d par Ra[p,Ic[k, p], Jc\k, p]]Rb[p,Ic[k, p],Jc[k, p]]) un décalage de phase ®_d = θ - Arg ou Arg désigne l'argument

R k,pβ d'un nombre complexe Ceci permet d'annuler la phase de l'onde d'éclairage en son point d'impact direct et rend non nécessaire la compensation de cette phase Pendant la phase de calcul déente en 7 17 2 , dans l'étape 2. la formule utilisée peut alors être remplacée par r , ^Mk,_P,A^l>A^DPÏÏ+pA'_'A^Rk,P,q

^Mk,p,q \¹> J\ - f ï

D_p [ιmax_{k p 0} , jmax_{k pβ} ]R_k,pβ

Ce mode revient à contrôler le déphasage des faisceaux d'éclairage par le dispositif de décalage de phase au heu de le compenser par calcul après l'acquisition

7.18.5. Obtention de représentations fréquentielles sans calcul de l'onde reçue sur la surface de réception.

Si la table optique est de qualité suffisante pom suppnmer les vibrations, la formule utilisée en 7 18 4 devient

_M r, ,τ _ ^Mk p >>A^DP +p ^lΛ

^Mk,p,q [ j - -—r 7

D_p[ιmax_{k p 0} ,jmax_{k p 0}] Pour simplifier les explications, on peut supposer que l'atténuateur de faisceau et les rotateurs de polansation ne sont pas utilisés On vénfie alors que chaque représentation fréquentielle F_p obtenue dans la procédme déente en 7 17 peut s'expnmer sous la forme

F_{p q}[m,nj,nk] = -h.F_p _ ₀[m,nj,nk] - F_{p q x}[m,nj,nk] - F_p .₂[m,nj ,nk])

+7 —j= (F_Mλ [nι,nj, nk] - F_{p q 2} [nι,nj, Tîfc])

ou F_{p q d}[nι,nj,nk] est obtenu comme F_pΛ dans la procédme 7 17 non modifiée, mais en remplaçant

M_{k p q} [i, y] par la valeur réelle M0[fc,/?][θ, d,O,θ][g,z, y] obtenue dans la procédme déente en 7 12 pour une -149-

valeur conespondante de l'indice d indiçant le décalage de phase. Il est donc possible de calculer pom chaque indice d une représentation fréquentielle séparée F_{p q d} , ces représentations étant ensuite superposées pour obtenir la représentation fréquentielle F _q , au lieu d'effectuer directement dans la procédure 7.12. la superposition des valems conespondant à chaque indice d. II est également possible d'effectuer la superposition des tableaux conespondant à chaque indice d après passage dans le domaine spatial par fransformation de Fourier inverse.

Enfin, il est possible de ne pas utiliser les mêmes points d'impact de l'onde d'éclairage en fonction du décalage de phase appliqué. Dans ce cas, à chaque décalage de phase conespond une frajectoire distincte et les tableaux Io[k],Jo[k] doivent êfre remplacés par des tableaux Io[k,d],Jo[k,d\. On peut alors calculer comme précédement des tableaux F_{p q d} séparés avant de les superposer pour obtenir les tableaux F .

Ce mode de calcul n'est pas particulièrement avantageux mais montre qu'il n'est pas indispensable de calculer dans une phase intermédiaire les représentations bidimensionnelles complexes, ni même d'effectuer une acquisition des données conespondant à ces représentations bidimensionnelles complexes.

7.18.6. Réalisation d'images avec une seule valeur du décalage de phase.

La présente variante consiste à modifier la procédure décrite en 7.12. de manière à n'acquérir que la partie réelle du nombre complexe normalement acquis de la mamere décrite en 7.12. Cette partie réelle peut être acquise en une seule étape, ce qui permet d'utiliser une seule valeur de l'indice d caractérisant le décalage de phase. Du fait que seule la partie réelle est acquise, la représentation fréquentielle obtenue, en supposant que le tableau de compensation de l'abenation sphérique D_p est mis à 1, est la partie réelle de la représentation complexe. La représentation spatiale obtenue par transformation de Fourier inverse est alors la superposition de l'image normale avec une image conjuguée symétrique par rapport au point d'origine de l'onde de référence. Pour que l'image normale ne soit pas superposée à sa symétrique, le point d'origine de l'onde de référence doit être placé sur le coté du diaphragme, légèrement hors de l'ouverture du diaphragme, et non au centre de celui-ci. L'ouverture du diaphragme doit être réduite de moitié de manière à éviter le repliement de spectre induit par ce déplacement du point d'origine de l'onde de référence. L'image obtenue finalement comporte alors l'image normale et l'image symétrique, non superposées et donc utilisables. Toutefois, pour que la partie réelle puisse être acquise en une seule étape, il est nécessaire que l'intensité de l'onde de référence soit suffisamment supérieure à l'intensité de l'onde diffractée, de mamere à ne pas induire d'eneurs du second ordre. La qualité de l'image finalement obtenue dépend donc de l'intensité de l'onde de référence. Une intensité trop faible induit des distortions du second ordre et une intensité trop forte augmente le bruit gaussien.

Afin de respecter au mieux la condition d'intensité suffisante de l'onde de référence, l'intensité de l'onde de référence seule doit être ajustée non au quart de la valeur maximale du digitaliseur comme indiqué en 7.4. mais par exemple à 80% de cette valeur. Pour que la partie réelle soit effectivement acquise à chaque prise d'image, le décalage de phase unique utilisé doit permettre l'obtention directe d'une référence de phase constante. Ce décalage sera donc, de mamere similaire à ce qui a été fait en 7.18.4. : -150-

Θ ₀ = -Aι^Ra[p, Ic[k, p], Jc[k, p]]Rb[p, Ic[k, p], Jc[k, /?]])

Malgré l'application de ce décalage de phase, la référence de phase peut ne pas êfre constante en présence de vibrations de la table optique Ceci détruirait l'image et il est donc nécessaire d'utiliser une table optique de très bonne qualité de mamere à suppnmer ces vibrations L'indice d ne prend donc plus qu'une seule valem au heu de trois et l'étape 2 de la procédme decnte en

7 12 2 2 est remplacée par r _ir _Λ M0[k,p][Ml[q,ι,j],0,r ,r₂ ][q,ι,j] -Iref[pq + pq,ι,j]

M2[r , r₂ \q, ι,j] = ^ , _ att[M q, i , y ]] ref[pq + pq , i , j ]

Comme en 7 18 4 , mais en tenant compte de l'abscence de vibrations, l'étape 2 de la procédure déente en 7 17 2 est remplacée par

D_p[ιmax_{k p 0} ,jmax_{k p 0} ]

Cette vanante peut être d'avantage simplifiée en n'utilisant qu'une seule position des rotateurs de phase et qu'une seule position de l'atténuateur de faisceau, moyennant quoi les 36 couples d'images élémentaires acquis en 7 12 2 1 peuvent se réduire a un seul, au pnx d'une forte diminution de la qualité de l'image Dans ce cas de « simplification extrême », les indices c, d,r_λ ,r₂ ne prennent plus qu'une seule valeur et l'ensemble de la procédure déente en 7 12 2 se réduit a

M0[k, p][0,0,0,0][q,ι,j] - lref[pq + pq,ι,j]

^MK.PΛ¹>A = — ^J _href _n[p-q + pq -,ι, j] '

7.18.7. Méthode simplifiée d'obtention des images tridimensionnelles.

On peut se limiter, pour générer l'image tndimensionnelle de l'objet, a la représentation F_{0 0} defime en 7 17 Ceci revient, dans la procédure déente en 7 17 2 , à adopter des tableaux IB_{p q} nuls pour tout couple

(p,q) ≠ (0,0) La présente méthode est la méthode définie en 7 18 4 mais simplifiée de cette mamere, et adaptée au cas ou l'indice moyen de l'échantillon est proche de l'indice nominal des objectifs, et ou la table peut être considérée comme parfaitement stable

Dans ces conditions, on a R_k o_.o = l et Z⁾ ₀[',_ ] = 1

^Mk,p,q [^l> ^j pq+pq [^l>A^Rk,P,q La formule M_{k^p q} [t , y ] =

D_p \ιmax_{k pfi} , jmax_{k pfi} R_k,_p, qm était employée en 7 18 4 se simplifie donc et on obtient M_k ,₀,o [z, y] = M_{k Q} fi [ι,j] c'est-à-dire que le tableau M_{k 0 0} n'est pas modifié avant d'êfre utilise pour générer la représentation tndimensionnelle de l'objet

Dans ce cas particulier, aucune compensation algonthπuque du déphasage du faisceau de référence n'est nécessaire, parce que le dispositif utilisé permet la génération de faisceaux d'éclairage ayant un déphasage constant par rapport à l'onde de référence -151-

Dans ce cas particulier, on peut également éviter les étapes 7 10, 7 11, 7 15, 7 16 La position des objectifs peut êfre réglée comme en 7 9 1, de mamere à avoir une image ponctuelle et centrée La commande du dispositif de décalage de phase est alors définie par

@_d = θ_d -Aι^Ra[p,Ic[k,p],Jclk,p]]) c'est-à-dire qu'elle ne dépend pas de mesmes effectuées préalablement sur l'objet lui-même Si un objectif de microscope ayant pom indice nominal celm du vide est employé, les mesmes préalables peuvent êfre effectuées en l'abscence de tout objet (en considérant comme un objet la lame transparente)

7.18.8. Réalisation d'une image avec une seule position des polariseurs. La présente vanante consiste à ne pas utiliser la possibilité de vanation des indices et r₂ Si des images selon la présente vanante sont seules générées, les rotateurs de polansation (2210) (2241) (2238) (2226) peuvent êfre suppnmés La présente vanante implique une modification de l'étape 3 de la boucle sur k,p déente en 7 12 2 2 , ainsi qu' une modification de l'étape 8 de l'algonthme décnt en 7 17 2

7.18.8.1. Modification de l'étape 3 de la boucle sur k.p décrite en 7.12.2.2.

Lorque les rotateurs de polansation ne sont pas utilisés, la direction du vecteur champ electnque du faisceau d'éclairage et la direction d'analyse du faisceau reçu sont onentées suivant le vecteur y de la Fig 52

On note y_e et y_c les vecteurs dédmts respectivement des vectems x_e et x_c par rotation de — dans le plan de la Fig 52 On a j = x_e sιn(z?_Ê + y_e cos<z?_e

Lors de la diffraction vers le point C

- la composante suivant x_e est transmise sans atténuation, devenant la composante sur le vecteur -x_c

- la composante suivant y_e est transmise, devenant la composante sur le vecteur -y_c , mais est atténuée d'un factem cos# ou θ est l'angle enfre le vecteur f_e et le vecteur f_c Pom un vecteur champ electnque y de l'onde d'éclairage, le vectem champ electnque de l'onde reçue au point C est donc proportionnel à 7 = -x_c sιnç?_e -y_c cosp_e cos<9 On peut prendre en compte les relations x_c = ι cosφ_c +j smφ_c ,y_c = -ι sιnç,_c +y cos ?_c La composante de F smvant j est alors proportionnelle a Br = - cosç,_c cosç?_e cos#-sιn ?_c smç?_e Ceci constitue un facteur d'atténuation qui affecte le faisceau diffracté mesuré au point C smvant une direction d'analyse onentée suivant y lorsque le faisceau d'éclairage est dmge sur le point E et a son vecteur champ electnque onenté suivant y Si la diffusion pouvait être considérée comme isotrope, ce coefficient serait constant Pour compenser l'effet de l'arnsotropie il suffit donc de diviser les valeurs mesmées par ce coefficient Br de mamere a se ramener a un coefficient constant caracténsant la diffusion isotrope La division par Br fait remonter le bruit affectant les points ou Br est faible, ce qui doit également êfre pns en compte -152-

Le factem cos# vaut cos# = „ f ,, f „ ^c „ Ceci se fradmt, en utilisant les valems normalisées des vecteurs

\\fe\\ \\fc\\ fréquence, par cos# = x_cx_e +y_cy_e + z_c ^ze

L'étape 3 de la procédme 7 12 12 est donc modifiée da la mamere suivante

- le programme calcule, en plus des valeurs déjà calculées en 7 12 , cos# = x_cx_e +y_cy_e + z_cz_e - le programme calcule le facteur comp[k, p, q] de compensation de l'atténuation

si - cosç?_c cosç?_e cos#- sιnç?_c sιnç?_e < /77walors comp[k, p,q] = — , ou /7777 est une valeur très faible, lim par exemple lim = 10^~10 sinon, comp[k, p, q] =

^J - cos ?_c cosp_e costf- sin^ sιn#?_e

Comme les valems coef[k, p,q,ι,j^r_λ ,r₂] utilisées en 7 12 , les valeurs comp[k, p,q] constituent un tableau qui peut être précalcule

- le programme calcule finalement

^M _{k p}A'Α ⁼ M2[l,l][q,ι, j]comp[k,p, q] _r , _ σ_acq comp[k, p,q]

_Λ/6 att[Ml[q,ι,j] iref[pq + pq,ι, j] ou σ_acq est l'écart-type du bnut des captems Les captems sont en général conçus pour que σ_acq soit de l'ordre

de 1 On a σ_acq = 10 ²⁰ 2^N ou SNR_dB est le rapport signal sur bruit en décibels et N est le nombre de bits d'échantillonnage du signal

7.18.8.2. Modification de l'étape 8 de l'algorithme décrit en 7.17.2.

La multiplication par comp[k, p, q] peut faire remonter considérablement le mveau de bruit, ce qui peut fausser l'image obtenue Pour éviter ce problème on modifie l'étape 8 de la procédme decnte en 7 17 de mamere a annuler les composantes de la représentation fréquentielle qui sont infeneures en module au bnut multiplie par une constante const donnée

L'annulation de certains éléments de la représentation fréquentielle est elle-même géneratnce de bnut Pour obtenir une représentation fréquentielle de qualité comparable à celle obtenue suivant la procédure normale un échantillonnage plus précis ou un niveau d'atténuation supplémentaire peuvent être nécessaires L'étape 8 de la procédure déente en 7 17 est modifiée de la manière suivante

étape 8 modifiée Le programme calcule la représentation fréquentielle finale, contenue dans un tableau F de dimensions 2N_ptx x2N_pιx x 2N_pκ II initialisé à 0 ce tableau puis parcourt les indices nt,nj,nk en testant la condition -153-

∑IB_M[m,nj,nk] ≠ 0

P I

Lorsque la condition est réalisée il effectue

∑ F_p<g[nι,nj,nk]lB_{p q} [nι,nj,nk]

F[77Z,7jy,77fc] =

∑^IBpΛ^m'ⁿJ_' ^nk]

P PΛΛ const

U teste alors la condition F[nι,nj,nk] ≤ l∑^IBpΛ^m>"J>^nk]

V VA Lorsque cette condition est réalisée il effectue F[nι,nj , nk] - 0 const est une constante choisie pour qu'en l'abscence de signal (bruit seul) la condition soit toujours vérifiée On peut par exemple utiliser const=4

Une multiplication par une constante du mveau global de bruit modifie les résultats de cette étape 8 modifiée C'est pourquoi en 7 18 8 1 on détermine un mveau de bruit absolu, alors qu'en 7 12 le niveau de bruit était défim à une constante près

7.18.9. Obtention d'une image d'un cristal biréfringent uniaxe.

On considère un cnstal uniaxe d'indice ordinaire ₀ taillé de mamere à former une lame d'épaisseur rédmte, le plan de la lame étant orthogonal à l'axe optique du cnstal Cette lame constitue l'échantillon observe et est placée enfre les deux objectifs, de l'hmle optique étant utilisée entre les objectifs et l'échantillon, l'objectif étant conçu pour utiliser des lamelles d'indice égal à celui de l'huile optique L'axe optique du cnstal est donc confondu avec l'axe optique des objectifs

Cette lame est supposée ne pas êfre « parfaite » Elle peut être affectée par exemple de défauts de cnstallisation ponctuels La présente procédure a pour objectif d'obtemr une image tndimensionnelle de ces défauts de cnstallisation II peut également s'agir d'une mémoire optique dont les vanations locales d'indice caracténsent les bits enregistrés La présente procédme permet l'obtention d'une image tndimensionnelle caracténstique des vanations de de l'indice ordinaire n₀ de l'échantillon

L'indice ordinaire moyen TÎ₀ est supposé connu, ainsi que l'épaisseur de la lame L'échantillon est introduit sans déplacement des objectifs, de sorte que x,y,z soient également connus II est également possible d'obtemr n₀ ,L, x,y,z par une version modifiée de la procédure déente en 7 11 Une telle version modifiée, apphcable dans le cas du mode de réalisation 4, sera déente en 8 4 3 2

L'obtention de l'image de l'mdice ordinaire suppose une modification de l'étape 8 de la procédure 7 17 , qm est celle déjà déente en 7 18 8 2 Elle suppose également une modification de l'étape 3 de la boucle sur fc,/? déente en 7 12 2 2 , déente ci-après en reprenant les notations utilisées en 7 12 -154-

7.18.9.1. Principe

On not .e u - = - fe ^ fo . u - - fc fo

Λ/₀ | ' ° || _C Λ /₀ | z _e et iï_c sont donc délïms d'après les vecteurs de la Fig 51 Ils sont tous deux dans le plan de la Fig 52 (non représentés) û_e est onenté selon la direction de polansation ordinaire de l'onde d'éclairage parvenant en E û_c est onenté selon la direction de polansation ordinaire de l'onde diffractée parvenant au point C

K

On note v_e et v_c les vecteurs dédmts respectivement des vecteurs iï_e et _c par rotation de — dans le plan de la Fig.52

On note y_e et y_c les vecteurs déduits respectivement des vectems x_e et x_c par rotation de — dans le plan de la Fig 52

On note ε l'angle enfre le vecteur z et le vecteur â obtenu à partir dey par une symétne dont l'axe est la position de l'axe neufre des rotatems de polansation lorsque cet axe neutre n'est pas parallèle à y On a typiquement ε ≈ 10 degrés

Lorsque le vecteur champ electnque du faisceau d'éclairage (au point E) est A₀Ï + -4, y le vecteur champ electnque mesuré au point C est {C₀₀A₀ +C₀₁- , )z +{C_l0A₀ +C₁₁-4_] )y Lorsque un vecteur champ electnque û_e = ι cosa_e +j sma_e est utilisé pour l'onde d'éclairage, le vecteur champ electnque mesuré au point C est donc w_m = (C₀₀ cosα_e +C₀₁ smα_e)z +(C₁₀ cos«_e +C_n sιnα_e)y

On peut utiliser z = z7_ccosα_c -v_csma_c y = _c sma_c + v_c cosa_c d'où w_m = (C₀₀ cosα_e cosα_c + C₀₁ sιn«_e cosα_c + C₁₀ cosα_e sιnα_c + Q j sιn«_e sιn«_c)z7_e

+(-C₀₀ coscϋg sιnα_c - C_o sma_e sma_c +C₁₀ cos«_e cosα_c +C _X sma_e cos«_c)v_c La valeur mesurée au point C smvant la direction du vecteur û_c est donc -5τ?z = C₀₀ cosα_e cos«_c + C₀₁ sιnα_e cosα_c +C₁₀ cosα_e sιnc. _c +C sιna_e sma_c

On note Q_r - la valeur mesurée au point C pour la combinaison ,r₂ des indices de commande des rotatems de polansation. Lorsque le vecteur champ electnque du faisceau d'éclairage (au point F) est A₀ +A ] le vecteur champ électrique mesuré au point C est (_2₀₀-4o +Ô₀- _J 5 +(-2.o^o ⁺ôn^ι)7 avec 5 = 7 cosf + y suif -155-

La relation définissant 3 s'inverse en î = a y tan ε

COS£

Lorsque le vectem champ électrique du faisceau d'éclairage est

A_Q7 + A ≈5A₀ +y(--₀tan£+-4,)

COS£ le vecteur reçu au point C est donc ôooA) + -2oι(-Λ tan^j + ^j) 3+ < ,o + Q\\{^~A₀ tan^j + -,) Yj

COSf V V COSf soit

(βoo +δoι(- suur+ , cos^))

+ Q₀₀A₀ tan£- + ρ_ol(--4₀ smεtmε + A] sιn,r) + ρ₁₀-4₀ + -2π(- tan^+y-,) y

COSf

Cette expression est l'équivalent de (C₀₀-4₀ +C₀₁-4,)z +{C_XOA₀ + C_uA_x)j , avec ^coo =Qoo-Qoi^smε ^co\ =-2oι ∞^sε

C₁₀ =Q₀₀twε-Q_0] sιn,.tan£ + ρ_ιo Q_u t ε

COSf

C_u = Q_0Xsmε+Q_u L'expression de Bm se fransforme donc comme smt

-3?τz = (<2₀₀ -Q_0λ sιn_.)cosα_e cosα_c +Q_0λ cos-.sιnα_e cosα_c +{Q_Q sιn-. + <2_n)sιnc._ sιnα_c

+ Q₀₀ tan-.-<2₀₁ smεtanε+Q_]0 Q_u tan£ cosα_e sιnα_c v cos ε J soit

-5τ77 = (cosα_e cos _c +cosa_e sιnc._c tan£-)g₀₀ +(-sm£cosc. _e cosa_c +cosfsm _e cosα_c +sιn£-sιnc.- sιn _c - sin £^• tan cos α. smα_c)g₀₁

+ cosα_sιn«_c g₁₀

VCOSfî J

+(sιnα_e suiα. -tanf cos«_ su\a_c)Q_u Cette valem Bm est la valeur mesurée au point C selon la direction du vecteur û_c lorsque le vectem champ électrique de l'onde d'éclairage est onenté selon w- Du fait de la défimtion des vectems w- et _c , Bm est la valem du rayon diffracté ordinaire pour un faisceau d'éclairage ordinaire La mesure de STTZ est indirecte au sens ou ce sont les valeurs Q qui sont mesurées, la valeur de -3τz en étant déduite

On peut expnmer le vecteur _e sous la forme û_e =x_ecosβ_e-y_esmβ_e -156-

Lors de la diffraction vers le point C, sm le même principe qu'en 7.18.8. L:

- la composante suivant y_e est transmise, devenant la composante sur le vecteur -y_c , mais est atténuée d'un factem cos θ ou θ est l'angle enfre le vecteur f_e et le vecteur f_c . Le vecteur reçu au point C est donc: w_r = -x_c cos ?_e +y_c sin J_g cos# On peut utiliser: x_c = û_c ∞sβ_c +v_c sm.β_c y_c = -κ_c sin/?_c +v_c cosy?_c On en tire donc: w_r = (-cos ?,- cos/?_e - sin ?_c sin/?,, cos#)w_c +(- sin/?_c cos/?,, +cos/?_c sin^_e cos#)v_c

La valeur reçue au point C suivant la direction du vecteur iï_c est donc: Br = - cosβ_c cosyff_g - sin_/9_c sin/?_e cos#

Cette valeur Br est le coefficient d'atténuation qui affecte le faisceau diffracté ordinaire reçu au point C lorsque le faisceau d'éclairage est ordinaire. Dans un modèle de diffusion isotrope, le coefficient Br serait constant. De même qu'en 7.18.8. L, cette atténuation peut être compensée en divisant la valeur mesurée Bm par le coefficient Br.

7.18.9.2. Algorithme L'étape 3 de la boucle sur k,p décrite en 7.12.12. est donc modifiée de la mamere suivante:

- le programme calcule les quantités suivantes, en plus de celles calculées en 7.12.12.: cosθ = x_cx_e +y_cy_e +z_cz_e

^Sln^ ⁼ M , y_cM x ,_ce ^VW ^{y C0S}^ = M , ^, _cM , _,_ce [^\ycVyi - ^xcV^χz) '

1 1 sιnα_r = x_r cosa_r = y_c

M_c ^c M_c ^c

s\nβ_e = „-.„ n ^l

M_eM_ce *» M_eM_ce

1 1 sin eu _e = ∞sα_e = —y_e

M ^e M_e

Pom l'ensemble de ces valems, on utilise des valeurs limites appropriées lorsque les dénominateurs sont nuls: si M_c = 0 on utilise a_c = - _e et β_c = β_e = 0 si M_e = 0 on utilise a_e = -a_c et β_c = β_e = 0 si M_ce = 0 on utilise β_c ~ β_e ⁼ ^ si M_c = 0 etM_e = 0 etM_ce = 0 on utilise a_c = a_e = β_c - β_e = 0

- le programme calcule le facteur comp[k,p,q] de compensation de l'atténuation : -157-

si - cos β_c cos/?_e - sιn ?_c sιn/?_e cos# < lim alors comp[k, p, q] = — , ou lim est une valeur très faible,

/77W par exemple lim = 10^~10 sinon, comp[k, p, q] -

-cos ?_c cos/?_e -sιn ?_c sιn ?_e cos# Le programme calcule les valeurs coe/[fc,/.,-7,z,y][0,0] = (cos«- cosα_c +cosα_e sιnα_c tan£-)com/?[fc,/>,#] coe/[fc, ?,g,z,/][θ,l] = (-sιn-. cosα_e cosα_c + cos£-sιnα_e cosα_c +sιn£^,sιnα_e sιnα_c - sm ε tan ε cos a _e sin a _c )comp[k ,p,q]

coef[k,p,q,ι,j][l,θ] = \ cos a - sin a_c \comp[k, p,q]

coe/[fc,/?,9,7,y][l,l] = (smα . sιnα_c - tan£cosα_e sιnα_c)co777/?[&,/?,g] Comme en 7 12 les valeurs coef[k, p, q,ι, y][ ,r₂] et comp[k, p, q] constituent des tableaux qm peuvent êfre précalculés

- le programme calcule finalement

^M _k,P,q [ι,A = ∑ M2[r_x,r₂\q,ι,j]coef[k,p,q,ι,j\r_x,r₂]

σ comp[k,p,q] _P ^q[>^>J\ - ^ _att[_{M q},,,_jyiref[pq + pq,ι,_j] ou σ_acq est l'écart-type du bruit des capteurs défim comme en 7 18 8 1 M2[τ*_!, -₂ ][#,z, y] conespond à la valeur mesurée qm était notée Q_r ^ en 7 18 9 1

le calcul de M_{k p q}[ι,j] équivaut au calcul du rapport défim en 7 18 9 1

7.18.10. Etude d'échantillons par réflexion uniquement

Lorsque les deux représentations F_{0 0} et F₀ ne se recoupent pas, il est à pnon impossible de déterminer leur relation de phase en effet toute relation de phase conespond à une représentation fréquentielle possible Une solution possible est alors d'obtemr la représentation de l'objet a partir de F_{o x} seule Cependant, la seule donnée de F₀ ne permet pas de différencier de mamere fiable l'indice et Fabsorptivité En effet, une représentation différenciant valablement l'indice et l'absorptivité doit occuper une zone de l'espace des fréquences symétnque par rapport à l'ongine Une représentation de bonne qualité, comparable à celle obtenue en nucroscopie confocale par réflexion mais de précision plus élevée, peut être obtenue en exfrayant le module de la représentation spatiale obtenue en utilisant seulement F₀ -158-

Cette méthode peut également êfre appliquée à l'étude de la zone superficielle d'échantillons épais à travers lesquels le faisceau se transmet mal. Dans ce cas, l'approximation comme quoi l'éclairage est à peu près constant dans la zone observée de l' échantillon n'est respectée que dans la zone superficielle adjacente aux objectifs de microscope, et lorsque le faisceau d'éclairage et l'onde issue de l'objet sont transmis par le même objectif. La seule partie fiable de la représentation fréquentielle obtenue est donc FQ _X si la face supérieure de l'objet est observée, ou F, , si la face inférieure de l'objet est observée. De même que précédemment, on peut extraire le module de la représentation spatiale obtenue en utilisant seulement F₀ j ou F, , .

De manière similaire, cette méthode peut êfre utilisée pour l'étude de surface d'objets fortement opaques.

Il est également possible de construire selon ce principe une version dégradée du microscope, n'ayant qu'un seul objectif et fonctionnant donc uniquement par réflexion. La phase de réglage doit alors être adaptée pom ne pas nécessiter de second objectif. Il est également possible d'utiliser un système complet pendant la phase de réglage et de ne supprimer qu'ensuite le second objectif.

7.19. Utilisation d'objectifs de microscope d'indice nominal adapté Dans l'ensemble des modes de réalisation il est possible d'utiliser des objectifs de microscope standard.

Ces objectifs ont un indice nominal TJ_V proche de celui du vene. Ils sont prévus pour fonctionner avec un liquide d'immersion et une lamelle couvre-objet d'indice n_v . Ces objectifs donneront de bons résultats si l'échantillon observé a un indice moyen proche de 7 _v ou est peu épais. Si l'échantillon observé est constitué essentiellement d'eau, d'indice 1,33 , et si l'ouverture de l'objectif est de 1,4 , alors l'épaisseur totale de l'échantillon doit êfre suffisamment inférieure à la largeur totale de l'image générée. Si elle est trop élevée, la représentation tridimensionnelle obtenue peut êfre faussée. En effet, l'abenation sphérique causée par l'épaisseur de l'échantillon peut alors devenir telle que l'onde provenant d'un objectif ne puisse être reçue par l' objectif en vis-à-vis que pour une faible partie des fréquences utilisées.

Un objectif de microscope est conçu pour utiliser un liquide optique d'indice donné, l'indice du liquide optique ayant ici été appelé « indice nominal » de l'objectif. Il est conçu également pour utiliser une lame couvre- objet d'indice et d'épaisseur donnés, l'indice de la lame n'étant pas nécessairement égal à l'indice nominal de l'objectif. Si on suppose l'indice moyen de l'objet égal à l'indice nominal de l'objectif, l'objectif permet une compensation de l'abenation sphérique due à la lame couvre-objet, qui est indépendante de la position de l'objet. Si par contre l'indice nominal de l'objectif diffère de l'indice moyen de l'objet, les variations de position de l'objet entraînent une variation de l'épaisseur des couches conespondant respectivement à l'objet et au liquide optique. L'abenation sphérique induite dépend donc de la position de l'objet et ne peut donc pas êfre compensée par l'objectif, une compensation valable pour une position de l'objet ne l'étant plus pour une autre position. Ce problème est sans effet sur l'obtention d'images bidimensionnelles, qui est usuelle avec les microscopes classiques, et dans laquelle l'indice de l'échantillon n'intervient pas. Par contre, il est gênant pour l'observation d'images en trois dimensions d'un échantillon épais.

Une solution à ce problème consiste à utiliser un objectif dont l'indice nominal est proche de l'indice moyen de l'échantillon observé. -159-

Si l'échantillon observé est constitué essentiellement d'eau, le liquide optique peut êfre de l'eau ou un liquide d'indice stabilisé proche de celui de l'eau L'objectif peut être conçu par des méthodes usuelles de calcul optique, en prenant en compte l'indice du liquide optique et la nécessité de compenser l'abenation due à la lame Cette conception peut être facilitée par l'utilisation d'une lamelle couvre-objet en Teflon (polymère fabnqué par la société DuPont), dont l'indice est proche de celm de l'eau et qui induit donc une faible abenation

Si l'échantillon observé est un cnstal biréfringent d'indice élevé comme dans le cas des mémoires optiques, l'indice nominal de l'objectif devra êfre proche de celm du cnstal, ce qm implique l'emploi d'un liquide optique d'indice élevé, la lame couvre-objet devant être d'indice proche de celui du cnstal observé ou pouvant éventuellement êfre suppnmée Des objectifs à immersion dans l'eau sont par exemple fabnqués par la société Zeiss

7.20. Utilisation d' objectifs de microscope affectés par l'aberration sphérique.

La Fig 90 représente le plan (6105) dont l'image est formée par l'objectif de microscope en (6107) et le plan focal image (6106) de l'objectif On note B{a) le point image, dans le plan focal image de l'objectif, d'un faisceau faisant dans l'objet un angle a avec l'axe optique

La présente vanante consiste à utiliser des objectifs conçus de mamere a vénfier uniquement les contraintes smvantes

(1)- L'abenation sphénque affectant l'image formée dans le plan image de l'objectif doit rester inféneure à une fraction du diamètre de cette image (2)- L'image, dans le plan focal image, d'un faisceau qui est parallèle dans l'objet observé, doit être ponctuelle

(3)- La distance entre le point B{a) et le point B{ ) doit être proportionnelle à sine.

Un objectif respectant umquement ces contraintes est d'une conception plus aisée qu'un objectif classique Cette simplification des contraintes imposées à l^'objectif permet d'augmenter la distance de travail, ce qm permet de placer l'objet entre des lames épaisses Elle peut également permettre d'augmenter l'ouverture des objectifs, facilitant ainsi le respect de la condition de recoupement des représentations fréquentielles partielles Un objectif de ce type peut être constitué par exemple par un condenseur aplanétique/achromatique Nikon d'ouverture 1,4 associé à un achromat permettant d'en régler le grandissement La Fig 89 montre le pnncipe d'une telle association Le condenseur Nikon est prévu pour une lumière incidente parallèle Le faisceau issu d'un point (6104) de l'objet observé est donc parallèle à la sortie du condenseur (6102) Un achromat (6101) est utilisé pour le faire converger à nouveau vers un point (6103) Si la distance focale du condensem est f_c et si la distance

/ focale de l'achromat est f_a alors le grandissement de l'ensemble est — et la distance enfre l'achromat et le plan

J e image, ou doit être placé le diaphragme, est f_a

Les conditions (2) et (3) doivent s'interpréter comme signifiant que les écarts à la ponctualité ou les eneurs de position du point dans le plan focal image sont d'une amplitude inféneure au diamètre de la tache de diffraction conespondante, qui est d'environ avec

" pi -160-

- N _pιx le nombre de pixels d'échantillonnage des images planes en fréquence utilisées

- D le diamètre de l'image formée dans le plan focal image de l'objectif

Un objectif respectant les contraintes (1) à (3) peut êfre conçu à l'aide d'un programme de calcul optique Dans ce cas, le programme détermine les frajets optiques II peut en particulier déterminer la longueur du chemin optique du rayon enfre le point A et le point B ) Cette longueur sera notée chem{ sin a) chem{sma) Le déphasage, dans le plan focal image, du faisceau conespondant, est alors 2π - -

Ce décalage de phase peut êfre compensé en multipliant le point de coordonnées {ι,j) de l'image plane en fréquence par

Ce qm peut être réalisé en prenant en compte ce déphasage dans la fonction de compensation des abenations obtenue en 7 16 Si la grandeur chem{ sin a) ne peut pas êfre connue par un calcul optique, elle peut également êfre déterminée par un processus de mesme

Dans les explications qui suivent, la grandeur c/zeττz(sιnc.) sera toujours utilisée sous forme fonctionnelle

Toutefois il est clair qu'elle peut en pratique se présenter sous forme de tableaux, des méthodes de sméchantillonnage / sous-échantillonnage pouvant être utilisées pour l'obtenir sous forme de tableaux de différentes dimensions ou ayant des pas d'échantillonnage différents Les objectifs (2217) et (2219) doivent dans tous les cas êfre identiques entre eux

L'utilisation d'objectifs vérifiant umquement les conditions (1)(2)(3) implique certaines modifications de la méthode utilisée

7.20.1. Modification de la méthode de calcul des coefficients K_p décrite en 7.6. Du fait qu'il existe une abenation sphérique importante, il n'est pas possible de focaliser l'image sur le micromètre comme indiqué en 7 6 La procédure de focalisation et la formule de calcul de K_p a partir de l'image du micromètre sont donc suppnmées et les coefficient K_p sont calculés directement a partir de l'image en fréquence

L'objet est un micromètre éclaire par une onde plane et caracténse par la distance D_reeι enfre deux graduations successives L'onde issue de l'objet est d'intensité maximale pour des angles par rapport à l'axe -161-

nλ optique vérifiant sinα = — — ou 77 est un entier Les fréquences spatiales conespondantes ont donc comme

^Dreel n 1 composante smvant l'axe honzontal . Par ailleurs le pas en fréquence sm l'image-S]/?,/,./] est

^Dreel ^Kp^λv

Pour mesmer le coefficient K₀ on utilise comme objet le micromètre objectif et on utilise les faisceaux

FEG et FRD A partir du capteur (2239) une image S[ , 1, y ] est obtenue par la procédme déente en 7 5 Cette image est constituée d'un point central constitué par l'onde d'éclairage directe et d'une séné de points alignés conespondant aux différentes fréquences pour lesquelles l'onde issue de l'objet est maximale Ces points alignés sont mieux visibles si on laisse le captem saturer pom la fréquence centrale Sur cette image, on mesure la distance en pixels D_fr entre deux points séparés par N_fr intervalles

D_β. N _β. D_reeιDf_r On a, compte tenu des considérations précédentes = soit avec K₀ = La

K₀λ_v D_reeι λ_vN _r longueur d'onde a considérer ici est la longueur d'onde dans le matériau, supposé êfre d'indice égal à l'indice λ nominal Z _V de l'objectif soit λ_v = — On a donc finalement

"v

-_. n_v D_redD_fr ^υ λ N_fr

K est mesuré par un processus symétrique à partir du capteur (2229)

7.20.2. Modification de la procédure d'obtention des coordonnées relatives des objectifs, décrite en

7.9.1.

Lorsque la procédure déente en 7 9 1 est appliquée, l'image obtenue sur le CCD (2239) est affectée d'un décalage de phase double de celui qui affecterait l'onde provenant d'un point de l'échantillon En effet, le faisceau FRGI traverse deux objectifs au lieu d'un Ce décalage, qui serait inexistant si les objectifs étaient dépourvus d'abenation sphénque. doit êfre compensé pom obtemr une fonction F_rec à partir de laquelle on pmsse appliquer le programme décnt en 7 8

Avant de déterminer les coordonnées x,y,z à l'aide du programme décnt en 7 8 , le tableau F_rec obtenu doit donc êfre modifié de la façon suivante

N ' p„i,x ² ( N ^{J V} pix ^ _reA^l'A ^{= F}re ^A^QX^ J --

J)

7.20.3. Modification de la procédure de calcul de w_p décrite en 7.15.2.

Afin de pouvoir calculer w_p , il est indispensable de compenser, pour chaque image plane en fréquence les décalages de phase dûs aux abenations sphénques des objectifs de microscope

Dans le bloc (4002) de la Fig 57, une étape supplémentaire 1 4 doit être rajoutée après l'étape 1 3 -162-

Etape 1 4 le programme parcourt les indices 7,y en effectuant

N pix N, N_n

Ms_k [ι,j] = Ms_k[ι, j] exp\ chem λ K_nN, + J

0"d J)

7.20.4. Modification du calcul de la fonction de compensation des aberrations décrit en 7.16.

La compensation de l'abenation sphénque des objectifs se fait par une modification conespondante de la fonction D_p de compensation des abenations

Après l'étape 1 de la procédure déente en 7 16 il est nécessaire d'ajouter une étape supplémentaire étape 1 bis le programme parcourt l'ensemble des indices z,y en effectuant l'opération

2π , N pix N- N,

Ds_p[ι,j] = DS_p[ι, j]exp\ chem I - - λ ⁺\ J

K_pN_e

J)

7.20.5. Mesure de la fonction chem

Si la fonction chem n'est pas connue par utilisation d'un programme de calcul optique, elle peut êfre mesmée par le microscope Cette mesure doit être effectuée immédiatement après la mesure des coefficients K „

Pour réaliser cette mesme on utilise les faisceaux FRGI et FRD On utilise d'abord la procédure decnte en 7 3 3 1 pom calculer l'image dans le domaine spatial et évaluer sa ponctualité et la position de son centre La position des objectifs est alors réglée pour avoir l'image la plus ponctuelle possible et pour que cette image soit parfaitement centrée On détermine alors l'image reçue sur le capteur (2239) à l'aide de la procédure déente en 7 5 Comme en 7 20 2 , l'image est affectée d'un décalage de phase double de celm qui affecterait l'image d'un point de l'objet et on a donc à peu près

_pι_X N ^{J ï} pix ^ S[0,z, y] = exp z -- 1 - -

A partir du tableau S mesuré il est possible de reconstituer la fonction chem Une manière simple d'obtemr cette fonction, pour un ensemble de points d'échantillonnage indicés par l'entier p ≤ K , par l'équation

N pix

0,7 +- ,0 chem -LA v^o 2 2π ∑^Ar N

;=1 pix

0,7 - 1 + -

pour 1 < p < K et chem(0)=0, ou Arg désigne l'argument et prend des valeurs enfre -π et π

Les valeurs de chem sont ici obtenues uniquement à partir des mesmes effectuées sur une droite honzontale II est possible d'utiliser des méthodes plus élaborées pour diminuer par filtrage l'effet des perturbations locales, en prenant en compte l'ensemble des points et non seulement ceux situes sur une telle droite -163-

La fonction chem ainsi obtenue peut êfre présentée sous forme d'un tableau et suréchantillonnée ou sous- échantillonnée comme il a été dit plus haut.

7.21. Utilisation d'objectifs présentant de l'aberration sphérique et de la distortion en fréquence. La présente variante consiste à utiliser des objectifs vérifiant uniquement les propriétés (1) et (2) vues en

7.20 soit:

(1)- L'abenation sphérique affectant l'image formée dans le plan image de l'objectif doit rester inférieure à une fraction du diamètre de cette image.

(2)- L'image, dans le plan focal image, d'un faisceau qui est parallèle dans l'objet observé, doit êfre ponctuelle. Un tel objectif peut être constitué de la même mamere que le précédent, mais il peut alors être utilisé dans des conditions plus larges, par exemple avec un nombre de pixels N_pυc plus élevé. Il peut également être constitué de mamere plus simple que le précédent.

Le fait que l'on se soit affranchi de la propriété (3) permet de faciliter encore la construction de l'objectif. Par contre, la compensation des abenations induites par le non-respect de la propriété (3) entraîne une complexité supplémentaire des algorithmes. Le non-respect de la propriété (3) se traduit par le fait que le coefficient de proportionnalité enfre les coordonnées en pixels et les composantes horizontales de la fréquence spatiale n'est pas constant. Les coordonnées z ety en pixels des points obtenus sur le capteur CCD doivent être multipliées par un coefficient A{r) dépendant de la distance en pixels r enfre le point considéré et le centre optique. La méthode utilisée diffère donc de celle décrite en 7.20. par les points suivants: - une procédure spécifique est utilisée pour déterminer A{r) .

- l'image plane en fréquence qui était obtenue directement à partir des intensités reçues en chaque point du captem CCD doit être modifiée avant de pouvoir êfre utilisée, ce dans chaque étape de la procédme ou elle est utilisée.

7.21.1. calcul de A(r) .

Pour déterminer le coefficient A{r) on utilise comme objet un micromètre objectif. Le point d'impact direct du faisceau d'éclairage doit impérativement êfre confondu avec le centre optique. Comme représenté s la Fig.91 l'image obtenue sur le capteur CCD en l'abscence d'onde de référence est constituée d'un point central P₀ confondu avec le cenfre optique et d'une série de points alignés d'intensité inférieure à P₀. On note P„ ceux de ces points qui sont sur une demi-droite donnée originaire de P₀ , la valem maximale de l'indice 77 étant notée N.

On note D_n la distance en pixels entre le point P„ et le cenfre optique. On a alors:

— — = ( A₊ι - i ) • Cette équation donne les valeurs de A en un nombre limités de points et une

2 J D_N méthode de suréchantillonnage doit être utilisée pour obtenir la valeur de A en un nombre suffisant de points. -164-

7.21.2. Modification des images planes en fréquence obtenues.

On note S_brut [i, y ] le tableau représentant une image plane en fréquence obtenue par exemple comme indiqué en 7 5 S_bmt [ι,j] doit être modifié pour générer un tableau S_fin [ι,j] qui conespondra véntablement à l'image plane en fréquence Cette modification peut être effectuée comme smt

- génération d'un tableau SI, de dimensions N_surxN_sur avec par exemple N_sur = 2048 Ce tableau est initialisé a

0 pms le programme effectue, pour z ety allant de 0 à N _pιx - 1

N, N_r

SI A ,A

V ^N _pιx j N - ^Sbr«A>A pix J

- Transformation de Founer inverse du tableau SI menant à un tableau S2

-Extraction de la partie cenfrale du tableau S2, pour obtenir un tableau S3 de dimensions N _pιx x N _pjx Le programme effectue, pour z ety allant de 0 à N _pιx - 1 _rvc N " sur , P _ΏV

S3[ι,j] = S2\ P^m , 'x_C N ' " sur i — + -^^ ,J — + -

- fransformation de Fourier du tableau S3 Le tableau ainsi obtenu est le tableau S _j„[z,y] qm constitue l'image plane en fréquence devant êfre utilisée dans l'ensemble des opérations

Toutes les images planes en fréquences brutes obtenues dans chaque étape de la procédure de réglage et de calcul d'image tndimensionnelle doivent être modifiées de cette manière avant d'être intégrées dans les calculs

8. Quatrième mode de réalisation (mode préféré)

Ce mode de réalisation est considéré comme le meilleur mode de réalisation car dans le domaine du visible c'est celui qui permet les meilleures performances en termes de rapidité et de qualité d'image

8.1. Principes

Le quatnème mode de réalisation diffère du troisième

- par l'utilisation d'un dispositif de déviation du faisceau différent

- par l'introduction d'un dispositif supplémentaire permettant de suppnmer l'onde directe parvenant sur les CCD pom éviter ou limiter l'effet de saturation

- par le fait que l'échantillonnage est 'régulier', c'est-à-dire que l'image ponctuelle d'un faisceau d'éclairage sur le CCD coïncide avec le cenfre d'un pixel du CCD

Les dispositifs de déviation du faisceau et de suppression de l'onde directe sont bases sur l'emploi d'un modulatem spatial (SLM spatial light modulator) commercialisé par la société Displaytech Celm-ci est constitue d'une matrice de 256x256 éléments fonctionnant chacun comme un rotateur de polarisation indépendant II fonctionne en réflection, c'est-à-dire que la lumière incidente sur le SLM est réfléchie avec une polansation modifiée, ladite modification de polansation étant différente en chaque point de la matnce II existe en deux versions l'une destinée à la modulation d'amplitude, dans laquelle pour une des tensions de commande, l'axe neufre du cnstal liquide fenoélectnque (FLC fenoelectnc hqmd crystal) est onenté dans la direction définie par -165-

un des axes de la matrice, et une autre destinée à la modulation de phase, dans laquelle les deux positions possibles de l'axe neufre du FLC sont symétriques par rapport à un des axes de la matrice.

La réalisation d'un échantillonnage régulier et la bonne maîtrise de la trajectoire du faisceau supposent également une utilisation appropriée des lentilles.

8.1.1. Maîtrise de la trajectoire du faisceau.

Lorsque un faisceau plan mais non dirigé selon l'axe optique s'éloigne de son point d'origine, il s'éloigne de l'axe optique et peut devenir inexploitable. La fig.67 illustre une méthode permettant de maîtriser la position d'un tel faisceau par rapport à l'axe optique. Un faisceau parallèle (4800) issu d'un plan (4801) doit êfre utilisé dans un plan (4804) éloigné de (4801). S'il se propage en ligne droite, il s'éloigne de l'axe optique et devient inexploitable (4805).

Les lentilles (4802) et (4803) ont même distance focale/ Le plan (4801) est le plan focal objet de (4802). (4804) est le plan focal image de (4803). Le plan focal objet de (4803) est confondu avec le plan focal image de (4802) et représenté par les pointillés (4806). Dans le plan (4801) le faisceau (4800) est parallèle et centré sur l'axe optique, c'est-à-dire que son intersection avec ce plan forme un disque centré sur l'axe optique. Un tel plan sera appelé « plan d'espace » et noté par la lettre F.

Dans le plan (4806) le faisceau est ponctuel, c'est-à-dire que son intersection avec le plan est pratiquement réduite à un point. Un tel plan sera appelé « plan de fréquences » et noté par la lettre F. Dans le plan (4804) le faisceau est à nouveau centré et parallèle. Ce plan est donc un nouveau plan d'espace. Il est l'image du plan (4801) par le système optique constitué des lentilles (4802) et (4803).

Le dispositif permet de reformer dans le plan (4804) un faisceau équivalent à celui présent dans le plan (4801), mais symétrise par rapport à l'axe optique.

En modifiant la distance focale de la deuxième lentille comme sur la Fig.68, on peut modifier l'angle du faisceau par rapport à l'axe optique et sa section. La distance focale de la première lentille est f , celle de la deuxième lentille est f , la distance entre les deux lentilles est /, +f₂ . L'angle du faisceau par rapport à l'axe

optique est multiplié par — f\ et la section du faisceau est multipliée par — fi . fi f\

8.1.2. Dispositif de déviation de faisceau Une direction en sortie du dispositif de déviation équivaut à une fréquence spatiale donnée et on utilisera dans la suite les termes 'fréquence' ou 'angle' pour définir une déviaion.

Le dispositif de déviation de faisceau utilise un SLM de phase dont toute la surface est éclairée par un faisceau plan. Lorsque un profil de phase (4601) en crénaux comme celui indiqué Fig. 64 est appliqué sur une λ telle surface, l'intensité diffractée à longue distance est maximale pour les angles a et -a ou a est tel que h = — λ soit d sinα = — . Ces deux angles définissent deux faisceaux diffractés symétriques (4602) et (4603) issus du -166-

SLM Le nombre de pixels du SLM utilisé étant de N_s et le pas (distance enfre deux pixels) de /?_ , sinα vane de

O a par pas de soit au total — - valeurs possibles en excluant le zéro Ce pnncipe est appliqué pour

2Λ N_sPs 2 générer un faisceau de direction donnée Cependant ce dispositif simple n'est pas suffisant pom les raisons suivantes - On cherche a générer une seule fréquence et il faut donc ensuite suppnmer un des deux faisceaux générés, par exemple (4602)

- Le faisceau issu de ce système de modulation simple est bruité, en ce sens qu'en plus de la fréquence conespondant au maximum d'éclairement de nombreuses fréquences parasites sont présentes

Pom suppnmer les fréquences parasites et le faisceau symétnque, on utilise un système dont le schéma de pnncipe est utilisé Fig 65 Sur ce schéma, on a représenté les SLM comme s'ils fonctionnaient par transmission, et on n'a pas représenté les polanseurs associés à ces SLM Un faisceau plan (4611) incident sur un SLM de phase (4612) fonctionnant comme indiqué ci-dessus est diffracté dans deux directions représentées en traits pleins et en pointillés (4612) est dans le plan focal objet d'une lentille (4613) Dans le plan focal image de (4613), un faisceau d'angle donné en sortie de (4612) donne une image ponctuelle Le plan focal objet de la lentille (4612) est un plan d'espace, et le plan focal image de (4612) est un plan de fréquence Dans le plan de fréquence, on place

- un diaphragme (4615) dont la fonctionnalité est d'anêter le faisceau symétnque (en pointillé)

- un SLM (4614) dont la fonctionnalité est de suppnmer les fréquences parasites Lorsque le SLM (4612) est commandé pour générer une fréquence donnée, cette fréquence conespond à un point du SLM (4614) Ce point est commandé pour laisser passer le faisceau, et les autres points du SLM (4614) sont commandes pour anêter le faisceau Les fréquences parasites sont donc suppnmees

Une seconde lentille (4616) fransforme ensuite à nouveau le point obtenu dans le plan de fréquence en une direction conespondante en sortie du dispositif

8.1.3. Dispositif de suppression de l'onde directe. L'onde ayant traversé l'objectif et parvenant au CCD présente des fréquences de forte intensité autour du point d'impact direct du faisceau Dans le mode de réalisation précédent, ceci entraînait une saturation du CCD lorsqu'une faible atténuation de faisceau était utilisée

Pour suppnmer ou atténuer cet effet de saturation on utilise un dispositif dont le pnncipe est indique sur la Fig 66, sm laquelle le SLM est représenté comme s'il fonctionnait en transmission, et sur laquelle le polanseur associé au SLM n'est pas représenté

L'onde issue de l'objet et ayant traversé l'objectif est filtrée dans un plan image par le diaphragme (4700) Une lentille (4703) permet de former dans son plan focal image, qui constitue un plan de fréquence, une image en fréquence de cette onde Dans le mode de réalisation précédent, on plaçait directement un CCD dans ce plan de fréquence Dans le mode de réalisation présent, on y place un SLM (4704) Le faisceau direct (4702), non dévié par l'échantillon, est représenté en traits pointillés Son image sur le SLM est ponctuelle En obscurcissant le pixel conespondant, et éventuellement quelques pixels proches, on suppnme ce point d'éclairage intense Les -167-

autres pixels du SLM sont laissés en position passante, ce qm permet à un rayon (4701) de fréquence autre de traverser le SLM

Toutefois, le SLM n'est pas un système 'parfait' en ce sens que dans la zone ou il est laissé fransparent, il constitue en fait une 'grille', chaque pixel étant passant mais un certain espace obscurci étant laissé entre deux pixels Cette gnlle diffracté les rayons la traversant, générant des rayons d ffractés indésirables qui se superposent au faisceau utile On a représenté en pointillé (4710) une direction possible de ce faisceau en sortie du SLM (4704) Une lentille (4705) permet à partir du faisceau ayant traversé (4704) de reformer un plan d'espace identique à celui dans lequel est placé (4700) Dans ce plan d'espace les rayons indésirables diffracté par (4704) se trouvent hors de l'image du diaphragme (4700) Un diaphragme (4706) placé dans un plan d'espace et dont rouveiture coïncide avec l'image de l'ouverture du diaphragme (4700) permet donc de suppnmer ces rayons drffractés

Une dernière lentille (4708) permet de reformer un plan fréquence dans lequel est placé le CCD (4709)

8.1.4. Obtention d'un échantillonnage régulier. Dans le troisième mode de réalisation, les valeurs de nι,nj,nk obtenues à l'issue de l'opération 1 de l'étape

3 de la procédure d'imagene déente en 7 17 2 ne sont pas entières Des entiers étant nécessaires dans la suite de l' algonthme, on prend pour chacune de ces valeurs l'entier le plus proche Néanmoins, ceci constitue une approximation qui peut se traduire par des perturbations sur l'image tndimensionnelle générée Dans le présent mode de réalisation, le système optique est prévu pour que lesdites valeurs de 777 et nj soient pratiquement entières, c'est-à-dire pom qu'il y ait échantillonnage régulier suivant les axes 777 et nj L'échantillonnage smvant «fc reste non régulier, néanmoins cette méthode réduit fortement les perturbations

Une onde d'éclairage donnée prodmte par le système de déviation du faisceau produit d'une part un faisceau direct allant frapper un des capteurs et d'autre part un faisceau indicateur inverse allant frapper l'autre captem Réciproquement, un pixel donné d'un capteur peut être atteint par un faisceau direct prodmt par une onde d'éclairage ou par un faisceau indicateur inverse prodmt par une autre onde d'éclairage

Pour qu'il y ait échantillonnage régulier, chaque onde d'éclairage utilisée doit produire un faisceau direct et un faisceau inverse parvenant chacun au centre d'un pixel conespondant du CCD conespondant, les coordonnées du pixel atteint par le faisceau direct sur un CCD étant les mêmes que celles du pixel atteint par le faisceau indicateur inverse sur l'autre CCD A chaque pixel du CCD qui se trouve dans la zone délimitée par l'ouverture des objectifs doivent conespondre deux faisceaux d'éclairage pour lesquels le pixel est atteint respectivement par le faisceau direct et le faisceau indicateur inverse

La représentation fréquentielle obtenue sur le CCD peut être fransformee de diverses manières du fait des imprécisions dans les caractenstiques du système

- par translation Cette translation peut être compensée par des déplacements conespondants de miroirs - par homothétie Une vanation de la distance focale de la lentille formant l'image sur le CCD se traduit par une homothétie sm cette image

- par rotation La partie du système comprenant les deu objectifs, consistant en l'ensemble (4460) de la Fig 62, détaillé Fig 63, si elle n'est pas parfaitement construite, entraîne une rotation de l'image produite sur le CCD -168-

Une homothétie appliquée à l'image produite sur le CCD invalide la conespondance exacte entre un pixel du CCD, q est fixe, et les points d'impact du faisceau direct ou inversé, qui sont modifiés par l'homothétie Pom éviter une telle homothétie, il est nécessaire de maîtriser avec précision la distance focale de la lentille formant l'image Un système appropné permet le réglage de cette distance focale La rotation prodmte par (4460) est appliquée seulement au faisceau direct Elle peut être compensée par une rotation conespondante du CCD Mais cette opération décale les pixels du CCD par rapport aux points d'impact du faisceau inverse II est donc nécessaire d'effectuer une rotation conespondante du faisceau indicateur inverse pour annuler cet écart Un système appropné permet cette rotation

8.1.4.1. Réglage de la distance focale.

Pour obtemr un élément optique dont la distance focale soit ajustée avec précision autour d'une valeur cenfrale f_c , on associe deux lentilles de distance focale /séparées par une distance d r \ f 1 La distance focale de l'ensemble est alors J fe. = — ₂

1-

2f.

Si on veut régler f_c sur une largeur de +-1%, soit τ-=0,01, alors il faut avoir — = r avec à peu près f_c = — La

*•] 2 valem de d adoptée est donc d = 4f_cr

La valeur de/est alors f = f_c + yjf_c{f_c -d)

Une ensemble de focale f_c réglable à +-r est donc constitué de deux lentilles de focale /séparées par une distance avec d = Af_cr f = f +ylfc{fc -d)

La distance focale de l'ensemble est ajustée en faisant vaner la distance d

De tels doublets sont utilisés en divers points du dispositif pour des raisons similaires

8.1.4.2. Réglage en rotation.

Pom régler en rotation un faisceau d'éclairage on utilise un dispositif décnt par la Fig 69, insère s la trajectoire du faisceau d'éclairage dans une zone ou ce faisceau est parallèle et donc défini par son vecteur d'onde Ce dispositif est constitué d'un ensemble de miroirs (4901) à (4906) Les miroirs (4901) (4902) sont fixes Les miroirs (4903) (4904) (4905) (4906) sont solidaires entre eux et l'ensemble (4910) constitué par ces miroirs est mobile en rotation autour d'un axe (4909) Les flèches représentées dans le plan de la figme représentent les vectems d'onde du faisceau en chaque point du dispositif

La fransformation d'un vecteur d'onde par un miroir comporte une symétnsation vectonelle par rapport a un axe orthogonal au plan du miroir et une inversion du sens du vecteur Le nombre de miroirs étant pair les -169-

mversions s'annulent et on s'intéresse ici à la partie symétnsation Le couple de miroirs (4901) (4902) effectue deux symétnsaùons successives d'axes orthogonaux enfre eux, ce qui équivaut à une symétne umque d'axe (4907) De la même mamere, le couple de miroirs (4903)(4904) effectue une symétne d'axe (4908) Les miroirs (4905) (4906) effectuent deux symétries vectorielles de même axe, qm s'annulent l'une l'autre L'opération effectuée par l'ensemble du dispositif est donc la composée d'une symétne vectonelle d'axe (4907) et d'une symétne vectonelle d'axe (4908) La Fig 70 représente, en vue suivant A, les axes (4907) et (4908) Lorsque aucune rotation de (4910) n'a été effectuée, ces axes sont confondus et la composée des deux symetnes est l'identité Le vectem d'onde du faisceau n'est pas modifié par le dispositif

Lorsque une rotation d'angle a est appliquée à l'ensemble (4910), les deux axes sont décalés d'un angle a comme indiqué sur la Fig 70 La composition des deux symetnes est alors une rotation vectonelle d'angle 2a

Le système permet donc d'appliquer à une onde d'éclairage une rotation vectonelle compensant celle due à l'ensemble (4460)

8.2. Description physique. Un schéma d'ensemble du système est constitué par les Fig 61,62,63 Sur ces figures, les éléments directement équivalents à des éléments conespondants des figures 27 et 28 sont numérotés en prenant le numéro de l'élément conespondant sm les figures 27 et 28 et en remplaçant les deux premiers chiffres par 43 Par exemple 2204 donne 4304 Les éléments n'ayant pas d'équivalents directs sur les figures 27 et 28 ont des numéros commençant par 44 Le plan des Fig 61 et 62 est un plan honzontal, les figures constituant une vue de dessus Les éléments du système sont fixés s une table optique convenablement isolée des vibrations La Fig 63 représente en plusieurs vues la partie du microscope contenant les objectifs, qui constitue une structure tndimensionnelle

Un laser (4300) polansé dans le sens vertical génère un faisceau dont le vecteur champ electnque est donc dmgé selon un axe orthogonal au plan de la figure Ce faisceau traverse un elargisseur de faisceau (4301) Le faisceau issu de l'élargisseur est ensuite divisé en faisceau de référence et faisceau d'éclairage par un miroir semi-fransparent (4302)

Le faisceau d'éclairage traverse un diaphragme (4348), un filtre (4303) permettant d'en ajuster l'intensité, puis un dispositif de décalage de phase (4304) et un dispositif d'atténuation de faisceau (4305)

Il traverse ensmte une lentille (4401) Cette lentille focalise le faisceau dans un plan ou est place un trou (4402) (« pinhole » en anglais) suffisamment large pour ne pas perturber le faisceau, qui a pour fonction d'anêter en partie les faisceaux réfléchis revenant en sens inverse sur le laser Le faisceau est ensuite réfléchi sur un des cotés d'un double miroir (4403) Les deux cotés réfléchissants de (4403) forment un angle droit Le faisceau traverse ensuite une lentille (4404) dont le plan focal objet coïncide avec le plan focal image de (4401), puis se dinge vers un SLM de phase (4405) Le SLM de phase (4405) est placé au foyer image de (4404) Le faisceau réfléchi par (4405) refraverse (4404) et est réfléchi par la deuxième face du double miroir (4403) Le faisceau traverse alors un diaphragme (4406) placé au foyer image de (4404) pour le faisceau réfléchi par (4405), que l'on appellera second foyer image de (4404) Il traverse ensuite une lentille (4407) dont le foyer objet coïncide avec le foyer image de (4404) Le faisceau traverse ensuite un polanseur (4408) Il est ensmte réfléchi sur un miroir -170-

(4409) placé un peu dernère le plan focal image de (4407) Il traverse ensuite un doublet de lentilles (4411)(4410) du type décnt en 8 1 4 1 Le plan focal objet de ce doublet coïncide avec le plan focal image de (4407) Le SLM d'amplitude (4412) est placé dans le plan focal image de ce doublet Le faisceau ayant traverse ce doublet se dinge vers (4412) qm le réfléchit II refraverse alors le doublet, puis traverse un polanseur (4413) et un diaphragme (4414) placé dans le second plan focal image du doublet (4410)(4411) Il traverse alors un doublet formé de (4415) et (4416) Le plan focal objet du doublet (4415)(4416) coïncide avec le plan focal image du doublet (4410)(4411) Il est alors dingé vers le SLM d'amplitude (4417) qm le réfléchit II refraverse alors le doublet (4415)(4416) Il est réfléchi par un miroir (4418), traverse un diaphragme (4419) placé au second foyer image du doublet (4415)(4416), pms traverse un polanseur (4420) et une lentille (4421) dont le plan focal objet coïncide avec le second plan focal image du doublet (4415)(4416) Il parvient alors à un miroir semi-réfléchissant (4307) q le sépare en un faisceau d'éclairage droit FED et un faisceau d'éclairage gauche FEG

Le faisceau FEG est alors réfléchi par un miroir (4432) et traverse un doublet de lentilles (4433)(4434) qm peut, en fonction des conditions d'encombrement, se trouver avant ou après le miroir (4432) Le plan focal objet du doublet (4433)(4434) coïncide avec le plan focal image de (4421) Le faisceau est ensmte réfléchi par un miroir (4435) puis par un ensemble (4436) équivalent à l'ensemble (4910) de la Fig 69, mobile autour d'un axe (4450) et constitué des miroirs (4446)(4447)(4448)(4449) Le faisceau traverse ensuite un extincteur de faisceau (4437) Cet extincteur de faisceau est construit comme l'atténuateur de faisceau décnt en 7 2 2 mais avec un angle θ nul Le faisceau traverse ensuite un rotateur de polansation (4341) puis est sépare par le miroir semi- fransparent (4325) en un faisceau d'éclairage pnncipal dingé vers (4324), que l'on notera encore FEG, et un faisceau indicateur inverse dingé vers (4342), que l'on notera FEGI Le doublet (4433)(4434) a donc deux plans focaux image, l'un dans la direction du faisceau pnncipal et l'autre dans la direction du faisceau indicateur inverse

La lentille (4324) est placée en avant du plan focal image du doublet (4433)(4434) de sorte que le plan focal image de ce doublet dans la direction du faisceau pnncipal reste virtuel La lentille (4324) forme une image de ce plan focal, et cette image doit êfre dans le plan du diaphragme (4323)

Le plan focal image de ce doublet dans la direction du faisceau FEGI coïncide avec le plan focal objet d'une lentille (4342) Le faisceau FEGI traverse cette lentille qui le focalise sur un miroir (4343) pouvant optionellement êfre obture par un obturateur (4359) Le faisceau réfléchi par ce miroir refraverse la lentille (4342) pms est à nouveau réfléchi par (4325) Le faisceau FEGI traverse alors un rotateur de polansation (4326) puis un polanseur (4438) Il est alors réfléchi par une face du double miroir (4439) Il traverse alors le doublet

(4440)(4441) et se dinge vers le SLM d'amplitude (4442) Le plan focal objet du doublet (4440)(4441) doit êfre confondu avec un plan focal image du doublet (4433)(4434) Le SLM d'amplitude (4442) est place dans le plan focal image du doublet (4440)(4441) Le faisceau réfléchi par le SLM (4442) retraverse le doublet (4440)(4441), est réfléchi par la seconde face de (4439), et se dinge vers un diaphragme (4443) place dans le second plan focal image du doublet (4440)(4441) Le faisceau traverse (4443) puis un doublet (4444)(4445), un polanseur (4353), et parvient au CCD (4329) monté sur la caméra (4330) Le plan focal objet de (4444)(4445) coïncide avec le second plan focal image du doublet (4440)(4441) Le CCD (4329) est placé dans le plan focal image de (4444)(4445) -171-

Le faisceau FEG traverse la lentille (4324) et le diaphragme (4323). Il est alors successivement réfléchi par les miroirs (4322)(4451)(4452)(4453). Il traverse l'objectif (4319) puis l'échantillon (4318), puis l'objectif (4317). Il est alors successivement réfléchi par les miroirs (4454)(4455)(4456)(4314) et parvient au diaphragme (4313). Le diaphragme (4323) doit êfre placé dans le plan ou l'objectif (4319) forme normalement l'image de l'échantillon, soit à 160 mm du col de l'objectif pour un objectif standard. Le diaphragme (4313) doit être placé dans le plan ou l'objectif (4317) forme normalement l'image de l'échantillon.

Le faisceau FEG traverse alors la lentille (4312) qui est placée de telle mamere que, dans le cas ou une lame transparente est utilisée (abscence de perturbations par l'objet), et en sortie de cette lentille, le faisceau soit parallèle. Le faisceau traverse alors le rotatem de polarisation (4338), le polariseur (4423), est réfléchi sur une face de (4424), traverse le doublet (4425)(4426), est réfléchi sur le SLM d'amplitude (4427), retraverse le doublet (4425)(4426), est réfléchi s la deuxième face de (4424), traverse le diaphragme (4428), le doublet (4429)(4430), le polariseur (4352), et parvient au CCD (4339) monté s la caméra (4384). L'image du diaphragme (4313) par la lentille (4312) est confondue avec le plan focal objet du doublet (4425)(4426). Le SLM (4427) est dans le plan focal image du doublet (4425)(4426). Le diaphragme (4428) est dans le second plan focal image du doublet (4425)(4426). Le plan focal objet du doublet (4430)(4429) coïncide avec le second plan focal image du doublet (4425)(4426).Le CCD (4339) est placé dans le plan focal image du doublet (4430)(4429).

Le faisceau d'éclairage droit FED traverse une lentille (4431) et est réfléchi par un miroir (4308). En fonction des conditions d'encombrement la position de la lentille et du miroir peut êfre inversée. Le faisceau FED traverse ensuite l'extincteur de faisceau (4422) identique à (4437), puis le rotateur de polarisation (4310). Il est séparé par un miroir semi-fransparent (4311) en un faisceau d'éclairage principal que l'on notera encore FED et un faisceau indicateur inverse que l'on notera FEDI.

Le faisceau FEDI traverse ensuite la lentille (4331), est réfléchi par le miroir (4332), retraverse (4331), est réfléchi en direction de (4338) par le miroir semi-transparent (4311). (4332) peut optionellement être obturé par l'obturateur (4358). (4332) est dans un plan focal de (4331), et l'autre plan focal de (4331) coïncide avec l'image de (4313) par (4312). Le faisceau FEDI suit ensuite entre (4311) et (4339) un parcours symétrique de celui suivi par le faisceau FEGI entre (4325) et (4329).

Le faisceau d'éclairage principal FED suit enfre (4311) et (4329) un parcours symétrique de celui suivi par le faisceau d'éclairage principal FEG enfre (4325) et (4339).

Le faisceau de référence, séparé du faisceau d'éclairage par le miroir partiellement transparent (4302), est séparé en faisceau de référence droit FRD et faisceau de référence gauche FRG par le miroir semi-transparent (4335).

Le faisceau de référence droit FRD est ensuite réfléchi par le miroir (4344), puis traverse le filtre (4356) et le diaphragme (4349). Il est ensuite séparé par le miroir semi-transparent (4345) en un faisceau de référence dirigé vers le CCD (4339), que l'on notera encore FRD, et un faisceau indicateur inverse que l'on notera FRDI. Le faisceau FRDI traverse la lentille (4346), est focalisé sur le miroir (4347) qui le réfléchit, retraverse la lentille (4346) et est partiellement réfléchi en direction de (4430). L'obturateur (4357) permet optionellement de supprimer ce faisceau indicateur inverse. -172-

Le faisceau de référence gauche FRG est réfléchi par les miroirs (4354)(4336) pms traverse un filtre (4355), un dispositif de décalage de phase (4351), un diaphragme (4350) Il est alors séparé par le miroir semi- fransparent (4328) et un faisceau de référence dingé vers (4329), que l'on notera encore FRG, et un faisceau indicateur inverse que l'on notera FRGI Le faisceau FRGI traverse la lentille (4381), est focalisé sur le miroir (4382) qui le réfléchit, refraverse en sens inverse (4381), et est partiellement réfléchi par (4328) L'obturateur (4360) permet optionellement de suppnmer ce faisceau indicateur inverse

Pom aider à la compréhension du schéma le faisceau d'éclairage a été représenté en traits pleins II passe alternativement par des plans de fréquence et des plans d'espace, au sens défim en 8 1 1 Dans un plan de fréquence, le faisceau est concentré en un point Dans un plan d'espace, il est parallèle et 'centré', au sens il éclaire une zone circulaire symétrique par rapport à l'axe optique, ne dépendant pas de son onentation La lettre (E) adjointe au numéro d'un élément signifie que cet élément est dans un plan d'espace En l'abscence d'élément optique, la lettre (E) seule peut également désigner un plan d'espace De même la lettre (F) désigne un plan de fréquence On a mis une letfre (E) sur le diaphragme (4313), bien que ce diaphragme ne soit pas exactement un plan d'espace c'est l'image de ce diaphragme par la lentille (4312) qui est un plan d'espace virtuel et qui doit être compns comme désigné par la letfre E De même, le diaphragme (4323) ne correspond pas exactement a un plan d'espace

Inversement, le faisceau de référence a été représenté en traits pointillés Le faisceau de référence est concentre en un point dans les plans d'espace II est parallèle et centré dans les plans de fréquence

Les plans d'espace et de fréquence alternent sur la trajectoire du faisceau Un plan d'espace et un plan de fréquence successifs sont toujours séparés par une lentille ou un doublet Le succession suit la logique exposée en 8 1 Un plan d'espace et un plan de fréquence séparés par une lentille (ou un doublet) occupent toujours deux plans focaux de cette lentille (ou de ce doublet)

Le dispositif de déviation du faisceau dont le pnncipe a été décnt en 8 1 2 est mis en oeuvre par des éléments conespondant à ceux de la Fig 65 Les SLM (4612) et (4614) sont respectivement maténahsés par les SLM (4405) et (4412) Le diaphragme (4615) est maténalisé par (4406) Le dispositif a été adapte pour tenir compte du fait que les SLM fonctionnent en réflexion, pour inclure les polanseurs, et pour positionner le diaphragme (4406) dans un plan différent du SLM (4412) Le SLM (4417) a été rajouté pour effectuer un filtrage supplémentaire de l'onde d'éclairage, améliorant ainsi la suppression des fréquences parasites

Le dispositif de suppression de l'onde directe décnt en 8 1.3 est mis en oeuvre par des éléments conespondant à ceux de la Fig 66 Le SLM (4704) conespond au SLM (4427) Les diaphragmes (4700) et (4706) conespondent respectivement à (4313) et (4428) Le CCD (4709) conespond à (4339) La lentille (4703) conespond au doublet (4425)(4426) La lentille (4705) conespond au même doublet traverse en sens inverse La lentille (4708) conespond au doublet (4430)(4429) Des conespondances symétriques sont valables pour la partie symétnque du microscope Les doublets utilisés permettent une application du pnncipe décnt en 8 1 4 1 Ils sont constitues de deux lentilles qui peuvent être déplacées conjointement, une des lentilles pouvant également être déplacée par rapport a l'autre

Le système constitue par (4436) réalise le pnncipe décnt en 8 1 4 2 -173-

S chaque polansem, l'axe passant est indiqué par un trait, représentant un axe dans le plan de la figure, ou un rond, représentant un axe dans un plan orthogonal au plan de la figme

Sm chaque SLM, un repère est représenté qui constitue celui dans lequel les coordonnées des pixels sont évaluées S chaque SLM d'amplitude, on a représenté en plus la position de l'axe neufre qui conespond a une extinction du faisceau, avec la même convention que pom l'axe passant des polanseurs L'aufre position possible de l'axe neutre est obtenue à partir de la position d'extinction par une rotation d'environ 40 degrés dans un sens ou un aufre Sur le SLM de phase (4405) les deux positions de l'axe neufre sont symétnques par rapport a un axe vertical

Sur les rotatems de polansation, on a indiqué un repère Une position de l'axe neufre, conespondant a une tension appliquée de -5V, est l'axe honzontal du repère Dans l'autre position, l'axe neufre est approximativement dingé suivant un vecteur de coordonnées égales sur les deux axes

Les polanseurs (4408)(4413)(4420) peuvent être des pnsmes de Glan-Thomson, qui présentent l'avantage d'une faible absorption Us entraînent toutefois une abenation sphénque trop importante pour êfre utilisés sur le chemin de l'onde issue de l'objet Les polanseurs (4423) (4352) (4438) (4353) sont de préférence des polansems dichroiques constitués d'un film dichroique maintenu entre deux plaques de vene suffisamment fines

Les objectifs utilisés peuvent êfre des objectifs classiques ou des objectifs tels que décnts dans les paragraphes 7 19 à 7 21 Le « mode de réalisation préféré » consiste à utiliser des objectifs du type décnt en 7 20 qm permettent d'améliorer la distance de travail et/ou l'ouverture L'ensemble des lentilles utilisées dans le système sont des achromats ou des lentilles composées, minimisant l'abenation sphénque

La plupart des éléments sont montés sur des positionneurs permettant un réglage précis de leur position Les caractenstiques de ces positionneurs seront indiquées en 8 5 en même temps que la procédme de réglage L'échantillon, dont les caractenstiques de positionnement ne sont pas explicitées en 8 5 , est monté sur un positionneur trois axes en franslation

8.3. Dimensionnement

Il est nécessaire de préciser la distance focale de chaque lentille et l'ouverture de chaque diaphragme pour dimensionner le système Pour les doublets on précisera la distance focale du doublet

/ désigne la distance focale de la lentille (ou du doublet) numéro ;. les lentilles étant numérotées comme smt indice i numéro de la lentille sur le schéma, ou , entre parenthèses, des deux lentilles constituant un doublet

1 4401

2 4404

3 4407

4 (4410,4411)

-174-

5 (4415,4416)

6 4421

7 4431 ou (4433,4434)

8 (4425,4426) ou (4440,4441)

9 (4430,4429) ou (4444,4445)

10 4312 ou 4324

11 4331 ou 4342

12 4346 ou 4381

/, désigne la largeur du diaphragme numéro i, les diaphragmes étant numérotés comme suit indice z numéro du diaphragme sur le schéma

0 4349 ou 4350

1 4348

2 4406

3 4414

4 4419

5 4313 ou 4323

6 4428 ou 4443

En outre on adopte les notations suivantes p_c distance entre les centres de deux pixels adjacents, sur les capteurs CCD

/?- distance entre les cenfres de deux pixels adjacents, sur le SLM de phase

Pf distance enfre les centres de deux pixels adjacents, sur les SLM d'amplitude

N_pιx nombre de pixels sur un capteur CCD ou sur un SLM d'amplitude (ces nombres sont égaux)

JV_ nombre de pixels sur le SLM de phase Idéalement on devrait avoir N_s = 2N_pιx mais les SLM ne sont pas dispombles en n'importe quelle taille et on peut aussi se contenter de N_s = N _pιx moyennant une atténuation supplémentaire du faisceau d'éclairage o ouverture numénque d'un objectif de microscope g grandissement d'un objectif de microscope f₀ distance focale d'un objectif de microscope d₀ distance entre la lentille (4312) et le diaphragme (4313)

La largeur du faisceau de référence doit êfre au minimum de l₀ = p_cN pix

La largeur d'illumination s (4405) est p_sN_s = ^l . d'où on tire ^- = -^Ps "

A /, -175-

Po éviter une perte de puissance inutile il est préférable d'avoir /„ = /, et donc — fi P_SN_S f PcNpix

La largem du diaphragme (4406), qui laisse passer la moitié des fréquences provenant du SLM (4405) sous un λ angle θ._max est : l₂ = f₂ sin _max soit avec la valeur de sinα_max qui résulte de 8.1.2. , l₂ = /₂

ÏPs

La partie utile du SLM (4412) doit être l'image du diaphragme (4406) ce qui implique: — -l₂ = p_f N _pιx

A partir des deux équations précédentes on obtient: — / h₂ = — -PfN_pιx λ

À

L'onde issue de (4412) présente un angle maximal sin ?_max = . Le diaphragme (4414) doit laisser passer la

2p_f

A totalité de ces ondes et vérifie donc : /₃ = 2 sin ?_max/₄ soit /₃ = — /₄ .

Pf La largem du diaphragme (4419) est égale à celle du diaphragme (4413) soit l_Λ - /₃ f_η Sa largem est transformée en la largeur du diaphragme objet (4312) par: l₅ = — ₃ fβ La largem du diaphragme objet (4312) vaut: l₅ = —— N pix

2 o

Des équations précédentes on tire: /₄ — LL = — — yN. fe 2 o f f La taille d'image sur le SLM (4427) doit êfre la même que sur le SLM (4417) d'où: ^- ^. = j fs fi

La taille d'image sur la caméra est liée à celle sur le SLM (4427) par: p_cN ^' P vi¹ _x* =- —— f PP ^r/J_fNN_pP_vιa ¹ _x* ssooiitt:: — f =₌ -£ -,^£

J% i Pf

Les SLM (4412 et (4417) étant de mêmes caractéristiques, on a: /₄ = /₅ La lentille (4312) doit avoir son plan focal objet confondu avec le plan focal image de l' objectif de microscope, et se trouve à une distance d₀ de l'image de l'objectif. On vérifie que ceci implique:

/ιo = Sfo +d₀

La distance focale de (4331) ou de (4346) doit être suffisante pour éviter l'abenation sphérique.

Tout ensemble de valems satisfaisant aux équations ci-dessus peut en principe convenir. Une solution particulièrement simple consiste à poser:

_ P_fN_pιx g 2 o et à imposer: ⁼ 4 ~ fs ~ f 6 ⁼ fl ⁼ i ⁼ /l 1 ⁼ /l2 ⁼ / On obtient alors facilement les aufres distances focales: -176-

h --^g °i4/?-~f

, _ cNpιχ _f

P_SN_S h -^f

Pf fo = gfo +d₀ et les ouvertures de diaphragmes:

/₀ = ₅ = ₃ = 4 = ~ ^

2 o - f- ^λ

ÏPs l₀ = /, = p_cN_pu

La largeur du faisceau en sortie de l'élargisseur de faisceau (4301) doit être légèrement supérieure à /₀ , la limitation étant effectuée plus loin par les diaphragmes.

8.4.Mode de fonctionnement

Le mode de fonctionnement est essentiellement le même que dans le troisième mode de réalisation. Il est donc décrit par les paragraphes 7.4. à 7.17. et par les variantes exposées en 7.18. Dans le cas ou des objectifs tels que décrits en 7.20 ou 7.21 sont utilisés, les modifications décrites dans ces paragraphes doivent être appliquées. Le « mode préféré » doit êfre compris comme utilisant les algorithmes décrit par les paragraphes 7.4. à 7.17. sans le variantes exposées en 7.8. Toutefois, certaines des solutions décrites par les variantes présentent des avantages propres et le qualificatif de « mode préféré » ne doit pas être compris de manière frop absolue. Un certain nombres de différences doivent cependant être prises en compte par rapport aux algorithmes décrits dans le 3 e mode de réalisation:

8.4.1. Commande du déviateur de faisceau

L'état du SLM (4405) est donné par un tableau de commande A[k,l] dans lequel fc et / varient de 0 à N_s - \ , l'élément -4 [fc,/] conespondant au pixel de coordonnées fc,/ et ayant la valeur 0 pour un pixel de phase négative et la valem 1 pour un pixel de phase positive. L'état des SLM (4412) et (4417) est donné par un tableau de commande B[k,l] dans lequel fc et / varient de 0 à N _pυc - 1 , l'élément B[k,l] conespondant au pixel de coordonnées k,l et ayant la valeur 0 pour un pixel éteint et la valeur 1 pour un pixel allumé.

Pour obtenir une fréquence caractérisée par les indices (z^',y): - on allume le pixel de coordonnées z^',y sur les SLM (4412) et (4417) c'est-à-dire qu'on utilise un tableau B_η avec ,_j [fcJ] = 0 en tout point sauf en ij ou on a B_y [i, j] = 1 -177-

- on applique au SLM (4405) un tableau A approprié, soit : -4-, [fc, /] = E -(fc(z +l) + /(y + l)) %2

V L ^NPix ou E désigne la partie entière et %2 signifie modulo 2.

Le 'mot de commande' utilisé dans le troisième mode de réalisation est donc ici constitué par la concaténation des tableaux de commande des SLM (4405)(4412)(4417) et des bits de commande des rotatems de phase de (4422) et (4437). Comme précédemment le captem éclairé directement est désigné par l'indice/? avec p-0 pour (4339) et/?=l pour (4329). Pour la commande des rotateurs de phase inclus dans les extincteurs de faisceau (4422) et (4437) un bit de commande nul conespond à une tension appliquée de 5V (position ouverte) et un bit de commande à 1 conespond à une tension appliquée de -5 V (position fermée).

tableau de commande du SLM (4405) (f 1 1

A,_j [k,r\ = E "rpi-W^{/ +1)+}^⁺¹⁾) ) ^0o2 J tableau de commande du SLM (4412) B_υ [ι,j] = l

B_υ [k,l] = 0 si {k,l) ≠ (ι,j) mot de commande tableau de commande du SLM (4417) B_η [ι,j] = l CCMlpjj]

B_y [k, l] = 0 si {k,l) ≠ {ι,j) bits de commande des rotateurs de (4422) P^~,P bits de commande des rotateurs de (4437) P.P

Le mot de commande ainsi constitué se substitue dans l'ensemble des procédures 7.4. à 7.17. à celui qui était constitué comme indiqué en 7.2.4.

8.4.2. Utilisation du système de suppression de l'onde directe.

Les SLM (4427) et (4442) sont respectivement associés aux capteurs (4339) et (4329) et indicés par les mêmes indices /?=0 et ?=l. Dans la procédure décrite en 7.12.2.1., phase 1, lors de l'acquisition d'un couple d'images élémentaires, il est nécessaire de commander également ces SLM. La valeur d'un élément C[fc,/] du tableau de commande utilisé pour un tel SLM dépend de l'indice du SLM, des indices c et/? de l'image en cours d'acquisition, et des indices i ety conespondant au point du capteur éclairé directement par le faisceau d'éclairage soit ι=Ia[q,p,Ic[k,p],Jc[k,p]],j=Ja[q,p,Ic]k,p],Jc]k,p]]. Il est donné par le tableau suivant, ou r désigne un 'rayon d'extinction' que l'on peut par exemple prendre égal à 2.

indice c 2 autre (atténuation non maximale) indice du SLM P P indices fc,/ (fc -z +(/-y)² > r² {k -i)² +{l - j) < r² valeur de l'élément du tableau C[k,l] 1 1 1 0

-178-

8.4.3. Utilisation de l'échantillonnage régulier. 8.4.3.1. Modification de la procédure 7.9.2. les coordonnées des faisceaux d'éclairage sont connues à l'avance et sont

Ia[q, p,ι,j] = ip +(N_pa -ι - l)p

Ja[q,p,ιj]=j

Il suffit donc de déterminer le tableau Fα[/?,z,y]

On utilise les tableaux Io etJo caracténsant une trajectoire parcourant l'ensemble des points accessibles, c'est-à-dire que (-O[fc], Jo[k doit parcounr l'ensemble des valeurs telles que

N ^f N_plxY

Io[k] — + Jo[k] — ≤ R- _uv ou R_ouv est le rayon du disque limité par l'ouverture de l'objectif sur

V un captem, et conespond par exemple au rayon de la zone illuminée sur (4339) lorsque le faisceau FRGI est utilisé seul Cette trajectoire sera nommée par la suite « trajectoire complète »

Un programme effectue l'acquisition définie par ces tableaux, selon la procédure déente en 7 12 L'indice n₀ n'étant pas connu, il est pns égal à TÎ_V dans la procédure 7 12 Toutefois, lors de cette acquisition, il suffit d'enregistrer les valeurs M_{k >p q} [lo[k], Jo[k et H_{k p q}[ι_r ,j_r]

Le programme îmtialise à 0 le tableau Ra puis il parcourt la séné des indices fc, ? en effectuant pour chaque couple fc,/? _f , ^ r _r . _r .. ^M _{k p θ}\lθ[k],Jθ[k]] ~ 2π

Ra[_P,Io[k], Jo[k]\ = y ^J { ^ exp . *] , °[*] lo[k] + Jo[k] ⁿ k n,0 ]'r > Jr ] λ ^Λ K K K

J) ou ι_r , j_r sont les coordonnées du maximum de l'image de référence, comme défîmes en 7.12 et ou x,y,z sont les coordonnées déterminées en 7 9 1

8.4.3.2. Modification de la procédure 7.11.

Le programme effectue la série d'acquisitions définie par les tableaux Io etJo définissant une trajectoire complète, déjà utilisés en 8 4 3 1 , selon la procédure déente en 7 12 II génère ainsi les sénés d'images M_{k p q}[ι, y] et H_{k p q}[ι,j] Toutefois, lors de cette acquisition, il suffit d'enregistrer les valeurs

ifc,p,<_? [^/θ-^fe]' ^θM] ^{et H}k,p,q['r r]

Le programme parcourt alors la série des indices fc Pour chaque valeur fc il effectue r _r . _r .-, M_{k 0 0}[lo[k], Jo[k]] F_reAlo[k],Jo[k ]≈ y ^{J J}J - 1

Ra[θ,Io[k],Jo[k^

Le programme décnt en 7 8 est alors utilisé pour calculer les paramètres x,y,z,L, n₀ à partir du tableau F_rec ainsi constitue -179-

La procédure 7.11. ainsi reformulée peut être utilisée directement pour calculer x,y,z,L, n₀ dans le cas du cristal uniaxe décrit en 7.18.9., évitant ainsi d'avoir à effectuer des mesures préliminaires et rendant possible le mouvement des objectifs. Dans ce cas, le mode d'acquisition de la série d'images permettant le calcul de x,y,z,L, n₀ conespond à la procédme décrite en 7.12 et modifiée comme indiqué en 7.18.9.

8.4.3.3. Modification de la procédure 7.13.

En 7.13, on obtient directement sans utiliser le programme de la fig. 53:

Id[p, z, y] = ip + (N_pιx - i - 1)/? Jd[p,ij]=j Ic[k, p] = pIo[k] + (N_pιx -Io[k]- l)p

Jc[k,p] = Jo[k]

8.4.3.4. modification de la procédure 7.6.

Les valeurs des coefficients K_x , K₂ déterminés en 7.6. vérifient: K_λ ≈ K₂

8.5. Réglage:

La position de chaque élément du système doit êfre réglée avec précision avant toute utilisation.

8.5.1. appareils utilisés

Les appareils déjà décrits en 7.3.3.2. sont utilisés.

8.5.2. Types d'images utilisés

Pendant le réglage on peut utiliser divers types d'images: - images obtenues sur un CCD auxiliaire: un CCD auxiliaire placé par exemple dans un plan d'espace peut permetfre de déterminer le cenfre d'un faisceau d'éclairage dans ce plan, ou la ponctualité dans ce plan d'un faisceau de référence.

- images obtenues sur un des CCD du microscope: ces images peuvent être obtenues et analysées comme indiqué en 7.3.3.1. en présence d'un faisceau de référence. On peut également observer directement les images reçues en l'abscence de faisceau de référence.

- images obtenues sur le CCD du fréquencemètre: observées directement, elles permettent de vérifier la planéité d'une onde ou l'angle séparant deux ondes planes.

- images de la surface d'un SLM: en plaçant le fréquencemètre derrière la lentille qui fransforme en onde plane l'onde provenant d'un point donné du SLM, on forme sur le CCD du fréquencemètre une image de la surface du SLM, qui peut être utilisée par exemple pour vérifier que le SLM est éclairé conectement. Pour visualiser des figures formées en commandant le SLM, un polariseur doit en outre être présent entre le SLM et le -180-

CCD du fréquencemètre S'il n'est pas déjà présent dans le système, on peut utiliser le polanseur du fréquencemètre

- images pixel par pixel de la surface d'un SLM une telle image est constituée d'un tableau à deux dimensions contenant l'éclairement de chaque pixel Pour l'obtemr, on place le fréquencemètre comme précédemment, en présence d'un polanseur On met l'ensemble du SLM en position absorbante (image 'noire') Puis on allume un à un chaque pixel, en enregistrant à chaque fois l'intensité du point conespondant sur le fréquencemètre Les intensités ainsi mesurés pour chaque pixel du SLM sont stockées dans un tableau, qui constitue l'image pixel par pixel du SLM Ce type d'image peut être utilisé par exemple pour vénfier la conespondance point par point entre les divers SLM, nécessaire pour obtenir un éclairage conect et un échantillonnage régulier

8.5.3. Critères de réglage.

Les réglages visent à s'assurer que (1) les faisceaux suivent la trajectoire prévue Ceci peut en général se vénfier à l'aide d'un simple diffuseur (2) les faisceaux d'éclairage sont parallèles dans les plans d'espace Ceci se vénfie à l'aide du fréquencemètre

(3) les faisceaux de référence sont ponctuels dans les plans d'espace et les faisceaux d'éclairage sont ponctuels dans les plans de fréquence Ceci se vénfie par exemple à l'aide d'un CCD auxiliaire

(4) les polanseurs sont bien réglés Les extinctions du faisceau peuvent par exemple êfre observées s le fréquencemètre (5) un faisceau enfrant parallèle dans l'objectif (4317) et dingé suivant l'axe optique a une image poncmelle et centrée s le capteur (4339) (6) lorsque le mot de commande A, . est utilisé pour le SLM (4405) et lorsque le mot de commande B, . est utilise pour les SLM (4412) et (4417), les conditions suivantes sont respectées

(i) le point de coordonnées z,y doit être effectivement illumine sur les SLM (4412) et (4417) (îi) lorsque les faisceaux FEG et FEGI sont utilisés, les points illuminés sur les SLM (4427) et (4442) et sur les capteurs (4339) et (4329) doivent avoir pour coordonnées (z,y)

(ni) lorsque les faisceaux FED et FEDI sont utilisés, les points illumines sur les SLM (4427) et (4442) et sur les captems (4339) et (4329) doivent avoir pour coordonnées N_pιx -l-z,y

Cette condition (6) peut se vénfier à l'aide d'images obtenues sur les capteurs ou à l'aide d'images pixel par pixel obtenues s les CCD

Les réglages à effectuer découlent de ces conditions La descnption des étapes de réglage est donnée a titre indicatif et constitue un exemple d'ordonnancement des étapes de réglage

8.5.4. Etapes de réglage Dans la descnption des étapes de réglage, il sera fait fréquemment référence à l'axe optique Du fait des nombreuses réflexions, l'axe optique ne peut être défim que localement C'est donc a cet axe optique défini localement qu'il sera fait référence -181-

Préalablement à tout réglage fin, l'ensemble du système est mis en place avec toute la précision possible par des méthodes géométriques, à l'exception des éléments (4304) (4305) (4422) (4437) (4351) qui seront mis en place en coms de réglage.

Pendant tout le réglage, la position de l'axe neufre des rotateurs de polarisation (4310) (4338) (4341) (4326) est maintenue dans le plan de la figure 62. Un point sera dit centré s un des capteurs (4339) ou (4329) si

( N_pix N pix ses coordonnées sont

2 2 J

Lors de la première étape de réglage d'un élément donné, le type de positionneur sur lequel cet élément est monté est indiqué.

Etape 1. Réglage d'orientation de l'ensemble laser (4300)-élargisseur de faisceau (4301)

Cet ensemble est monté sur un positionneur angulaire permettant d'ajuster la direction du faisceau. Un diffuseur est utilisé pour vérifier la frajectoire du faisceau. La position de l'ensemble (4300,4301) est ajustée pour que le faisceau suive la trajectoire prévue.

Etape 2. Mise en place du dispositif de décalage de phase (4304).

Ce dispositif de décalage de phase est identique à celui décrit en 7.2.3. et mis en place comme indiqué en

7.3.2.3.

Etape 3. Mise en place du dispositif d'atténuation de faisceau (4305). Ce dispositif d'atténuation de faisceau est identique à celui décrit en 7.2.2. et est mis en place comme indiqué en 7.3.2.2.

Etape 4.: Réglage en franslation 2 axes du 'trou' (4402)

Ce trou est monté sur un positionneur deux dimensions permettant un déplacement dans le plan orthogonal à l'axe optique.

Il est réglé de mamere à maximiser l'intensité du faisceau ayant fraversé le 'trou'.

Etape 5. Réglage de l'orientation du miroir à deux faces (4403)

Ce miroir est monté sur un positionneur angulaire permettant d'en ajuster l'orientation. Un diffuseur est utilisé pour vérifier la frajectoire du faisceau et la position du miroir est réglée de sorte que le faisceau incident sur le SLM (4405) occupe toute la surface utile de ce SLM.

Etape 6. réglage de l'orientation du SLM (4405)

Ce SLM est monté sur un positionneur angulaire permettant d'en ajuster l'orientation, couplé avec un positionneur deux axes en translation permettant un ajustement de sa position dans un plan orthogonal à l'axe optique. -182-

Le SLM est mis en position totalement réfléchissante. Un diffuseur est utilisé pour vérifier que l'onde réfléchie sur le SLM parvienne au point prévu sur le miroir (4403) et se dirige dans la direction prévue.

Etape 1. Réglage fin de l'orientation du miroir à deux faces (4403), réglage en franslation du SLM (4405), réglage de l'ouverture du diaphragme (4348), et réglage en translation de la lentille (4404).

La lentille (4404) est montée sur un positionneur un axe en translation permettant un ajustement en franslation dans le sens de son axe optique.

Cette étape a pom objectif:

- de régler la position de la lentille (4404) de mamere à ce que le SLM (4405) soit dans un plan d'espace. - de régler l'orientation du miroir à deux faces (4403) et la position en translation de (4405) de mamere à ce que le faisceau parvenant à (4405) soit centré.

- de régler l'ouverture de (4348) de manière à ce que le faisceau incident sur (4405) soit aussi large que possible, sans toutefois déborder de la surface active du SLM.

Il est possible, s un SLM, de commander indépendamment la zone active et une zone périphérique appelée 'apron'. L'ensemble de la zone active est ici commandé pom effectuer une rotation de polarisation dans un sens donné, et l'apron est commandé pour effectuer une rotation de polarisation dans le sens opposé. La zone active est ensuite modifiée pour qu'une croix centrée au milieu de la zone active soit mise dans le même état que l'apron.

Le fréquencemètre est positionné derrière (4406), qui est largement ouvert. L'ouverture du diaphragme (4348) est légèrement supérieure (de 20% par exemple) à son ouverture nominale calculée en 8.4.

Le fréquencemètre est d'abord positionné en l'abscence de son polariseur pour que se forme sur son CCD une image de la zone éclairée de (4405).

Le polariseur du fréquencemètre est alors introduit et réglé en rotation de manière à faire apparaître sur l'image un contraste maximal entre la zone périphérique ('apron') et la zone centrale active du SLM.

La position de (4403) est alors ajustée de manière à ce que l'ensemble de la zone active et de la frontière avec l'apron soit visible sur l'image. On doit voir une zone active canée illuminée entourée d'une zone sombre (l'apron) etbanée d'une croix centrée.

La position de (4404) est réglée de manière à avoir le meilleur contraste possible. Le diaphragme (4348) est alors réduit en ouverture. On doit voir sur l'image une disque illuminé de diamètre réduit, interceptant la croix sombre. La position de (4403) et celle de (4405) en translation sont ajustées pom que le cenfre du disque et le centre de la croix coïncident.

La position de (4404) est à nouveau réglée de manière à avoir le meilleur contraste possible. L'ouverture du diaphragme (4348) est alors aggrandie au maximum sans toutefois que le disque illuminé n'atteigne la zone de l'apron.

Etape 8. Réglage en translation de la lentille (4407)

Cette lentille est montée sur un positionneur en franslation un axe dans le sens de l'axe optique. -183-

Ce réglage a pom objectif de s'assurer qu'un faisceau parallèle issu du laser et entièrement réfléchi par (4405) est à nouveau parallèle après passage de (4407).

Le fréquencemètre est positionné derrière (4407). (4406) est largement ouvert. Le tableau de commande de (4405) est entièrement mis à 0. La position de (4407) est ajustée pour avoir une image aussi ponctuelle que possible sur le fréquencemètre.

Etape 9. Réglage en rotation du polariseur (4408).

Le polariseur (4408) est fixé à un positionneur permettant un réglage en rotation autour de l'axe optique. Lorsque le mot de commande -4₀₀ est utilisé, le SLM (4405) réfléchit le faisceau dans une direction D0. Lorsque A_N __{x 0} est utilisé, la direction du faisceau est modifié et la composante sur la fréquence conespondant à la direction D0 doit être annulée. Le polariseur (4408) est réglé de manière à produire effectivement une annulation de cette composante.

Le fréquencemètre est positionné derrière (4408). Le diaphragme (4406) est largement ouvert. Le tableau -4₀₀ est d'abord appliqué à (4405). Le point P illuminé sur le CCD du fréquencemètre est repéré. Le tableau A_N __{1 Q} est alors utilisé et la position de (4408) est ajustée pour annuler l'intensité reçue au point P.

Etape 10. Réglage en franslation 2 axes et ouverture du diaphragme (4406)

Le diaphragme (4406) a une ouverture réglable et est réglable en franslation suivant deux axes orthogonaux à l'axe optique. Sa position et son ouverture doivent êfre réglées pour qu'il laisse passer les fréquences utiles et anête les fréquences symétriques, son rôle étant celui du diaphragme (4615) décrit en 8.1.2.

Le fréquencemètre est utilisé et positionné derrière (4408). Les axes du CCD du fréquencemètre doivent être orientés comme indiqué par le repère (4470). Un programme spécifique est utilisé. Ce programme applique successivement au SLM (4405) les tableaux :

^• 2 2 2 *" 2

Le programme somme les intensités obtenues dans chaque cas par le capteur CCD et affiche l'image conespondante. Il superpose sur cette image des symboles indiquant le maximum obtenu dans chacun de ces cas. Il itère indéfiniment cette procédure pour que cette image soit mise à jour en permanence pendant le réglage du diaphragme. Le diaphragme doit êfre réglé en position et ouverture pour que le point obtenu pour les indices (0,0) ne soit pas visible (obturé par le diaphragme) et pour que que les quatre autres points soient visibles (en limite de diaphragme), aux positions indiquées par la Fig. 72 ou (5010) représente la limite du diaphragme.

Etape 11. Réglage de l'orientation du miroir (4409) Le miroir (4409) est fixé sur un positionneur permettant d'en ajuster l'orientation. -184-

On applique à (4405) le tableau A _{N N} . Un diffuseur est utilisé pour contrôler la frajectoire du

2 ^' 2 faisceau. La position angulaire de (4409) est ajustée pour que le faisceau parvienne au cenfre de (4412).

Etape 12. Réglage de l'orientation du SLM (4412) Le SLM (4412) est fixé à un positionneur trois axes en rotation permettant d'en ajuster l'orientation (axes dans le plan du capteur) et la position en rotation (axe orthogonal au plan du capteur), couplé avec un positionneur deux axes en franslation permettant un déplacement dans un plan orthogonal à l'axe optique. Le tableau A_{N N} reste appliqué à (4405). Le tableau de commande de (4412) est mis à 1. Un

2 ^' 2 diffuseur est utilisé pom contrôler la frajectoire du faisceau. (4412) est ajusté pour que l'onde se réfléchisse vers (4414) et soit centrée au milieu de ce diaphragme.

Etape 13. Réglage en rotation du polariseur (4413)

Le tableau de commande de (4412) est mis à 1. Le fréquencemètre est positionné derrière (4413) de mamere à ce que soit formée sur son CCD l'image de (4412). Le tableau de commande de (4412) est alors mis à 0. (4413) est alors réglé en rotation de manière à annuler l'intensité reçue sur le CCD du fréquencemètre.

Etape 14. Réglage fin de l'orientation du miroir (4409), réglage de la position et de la focale du doublet (4410) (4411), et réglage en rotation et translation du SLM (4412).

La lentille (4410) est montée sur un positionneur un axe dans le sens de l'axe optique. Ce positionneur et la lentille (4411) sont eux-mêmes montés sur un second positionneur un axe dans le sens de l'axe optique. Il est donc possible soit de déplacer conjointement l'ensemble (4410)(4411) soit de déplacer (4410) seule pour faire varier la distance entre les deux lentilles du doublet (4410)(4411).

Le SLM (4405) permet de contrôler la direction dans laquelle est diffractée l'onde issue de ce SLM. A une direction du faisceau en sortie du SLM (4405) conespond un point dans un plan de fréquence et en particulier un point dans le plan du SLM (4412).

La position de (4410)(4411) doit être réglée de manière à ce que l'image du faisceau provenant du SLM (4405) soit effectivement ponctuelle dans le plan de fréquence ou se trouve (4412). La position de (4409) et (4412) doit être réglée pour que la fréquence générée lorsque le tableau de commande A_{N N} est appliqué à (4405)

^r N ^{1 γ} pix N ^{l v} pix ^ conesponde à un point de coordonnées sur le SLM (4412). La position de (4410)(4411)(4412) doit

en outre être réglée pour qu'il y ait une conespondance point à point enfre les fréquences générées par les tableaux A_h] appliqués à (4405) et les pixels de (4412), c'est-à-dire pour que lorsque le tableau de commande -4, est appliqué à (4405) le pixel de coordonnées (z^',y) soit illuminé sur le SLM (4412), quels que soient les entiers i ety.

La série des opérations ol à o3 est répétée un nombre suffisant de fois, de mamere à converger vers la position correcte de chaque élément. -185-

ol Réglage de la position conjointe de (4410) et (4411) pour obtemr une image en fréquence ponctuelle

Le fréquencemètre est positionné dernère (4414) Le diaphragme (4414) est largement ouvert Le tableau A _{N N} est appliqué à (4405) et le tableau de commande appliqué a (4412) est à 1 La position conjointe de

2 ' 2 l'ensemble (4410) (4411) est ajustée pour avoir sur le capteur CCD du fréquencemètre une image aussi ponctuelle que possible

o2 Réglage angulaire de (4409) et réglage en franslation de (4412) pour obtenir une image en fréquence centrée A_{N N} reste appliqué à (4405) (4409) et (4412) sont alors réglés pour que la fréquence cenfrale

2 2 générée soit au milieu du SLM (4412) Ce réglage se fait avec le fréquencemètre et un programme de localisation du maximum, que l'on appellera programme PA

Le programme PA allume tour a tour chaque pixel du SLM (4412) et mesure l'intensité correspondante s le fréquencemètre Le pixel générant la plus forte intensité conespond au maximum La procédure de base du programme PA, que l'on appellera PB, parcourt l'ensemble des coordonnées (z,y) des pixels s le SLM (4412), z ety vanant de 0 à N_pιx - 1 Pour chaque couple (z,y) cette procédure effectue les étapes suivantes

- elle applique le tableau de commande B_tJ défini comme en 8 4 1 au SLM (4412)

- elle acquiert alors une image sur le CCD du fréquencemètre - elle détermine la valeur maximale de l'intensité mesurée sur l'ensemble des points de cette image

- elle enregistre cette valeur dans un tableau M en M[z,y]

Lorsque elle a ainsi parcouru l'ensemble des indices z,y la procédure détermine le point d'intensité maximale du tableau M et ses indices z₀ , y₀ qm conespondent au maximum Elle affiche sur l'écran l'image bidimensionnelle conespondant au tableau M, éventuellement aggrandie autour du maximum, ainsi que les valems de z₀,y₀ et la valeur M[z₀,y₀]

Le programme PA consiste à itérer indéfiniment la procédure PB de manière a pouvoir effectuer le réglage conespondant

( N _a N _aΛ La position de (4409) doit être ajustée pour avoir (ι_Q,J₀) = — — , — — et pour maximiser M[ι_Q, y₀ ] L L J

o3 Réglage de focale du doublet (4410)(4411) et réglage de (4412) en rotation

Le fréquencemètre, réglé comme précédemment, est utilisé Un programme d'affichage des caractenstiques du système est utilisé, que l'on appellera programme PC

Le programme PC utilise successivement quatre tableaux de commande -186-

A _w A », A _N A _N appliqués à (4405). Ces tableaux de commande sont numérotés c,-j- - -,c -^-,N -\-c W„-l--, dans cet ordre, c est une constante, par exemple c=20, introduite pour éviter que les points illuminés sortent de la zone active du SLM en cas de mauvais réglage initial.

Pom le 77-ième mot de commande, le programme utilise la procédme PB déjà décrite et stocke les coordonnées du maximum obtenu en-Y[w] et Y[n]. Lorsque cette opération a été effectuée pour les quatre mots de commande, le programme a donc obtenu les tableaux X et Y à quafre éléments, conespondant aux coordonnées en pixels des maximums successifs. Lorsque le système est bien réglé, on doit avoir:

-V pix N pix ( N,

(^jτ[i], rιi]) = {X[2], Y[2]) = , c {X[3], Y[3]) ₂ -_> N_pιx - l-e

N pix (-Y[4],F[4]) _: N- Λ- c,-

Le réglage a donc pour objectif d'obtenir effectivement ces égalités. Le réglage de la focale du doublet (4410)(4411) permet d'ajuster l'échelle et le réglage en rotation de (4412) permet d'ajuster la position en rotation.

Le programme calcule le rapport des distances effectives aux distances qui devraient être obtenues avec un réglage conect: r = ^•

N, - l-2c {^^{Xll] ~ Xl}^^{2 +}(^rW^{~ y}^)² + /( ^rt2] - [3])² +{Y[2]- Y[3])² Si/est la distance focale de chaque lentille et si d est la distance entre ces lentilles avant réglage, la

f distance focale effective de l'ensemble de deux lentilles avant réglage est: f_x = —

If)

de même la distance focale de l'ensemble après réglage est: f₂ = f

1 - 2fJ Le grandissement étant proportionnel à la distance focale, celle-ci doit être ajustée de sorte que:

A r ce qui mène, en développant les calculs, à: d₂ -rf, = 2 (1-^1- -

Dans cette équation/et d_] sont mal connus mais on peut utiliser la distance focale 'de conception' du doublet

(4410)(4411) . Cette distance est celle pour laquelle le doublet a été prévue. On la notera /. et elle vaut à peu près

/

— . On obtient alors: -187-

d₂ -d_λ = Af_c(l-r)

Le programme PC affiche:

- la valem d₂ - d_x , qui permet de corriger en conséquence la distance enfre lentilles, -les droites reliant respectivement les points 1 et 4 et les points 2 et 3

X[l] -X[4]

- V écart — — — , qui donne à peu près l'angle en radians dont il faut cornger la position en rotation.

N _pιχ ~2c

X[l] -X[\] -le rapport —H r , ui doit être égal à +1 . A²]- ^γ[³]

X[l] -X ] Le SLM (4412) est réglé en rotation de mamere à annuler l'écart affiché — — — , et la distance

N_pi_x -lc enfre les lentilles du doublet (4410)(4411 ) est modifiée conformément à la valeur affichée de d₂ -d_λ .

Etape 15. Réglage du diaphragme (4414) en franslation.

Le diaphragme (4414) est monté sur un positionneur 2 axes en translation permettant de le déplacer dans un plan orthogonal à l'axe optique.

L'ouverture de (4414) est connue. Il doit êfre réglé en franslation. Un CCD auxiliaire est placé juste derrière (4414). Le tableau de commande B_{N N} est utilisé pour le SLM (4405), c'est-à-dire que seul un point

2 ' 2 cenfral de ce SLM est « allumé », le faisceau réfléchi direct étant anêté par (4406). Le tableau de commande du SLM (4412) est mis à 1 (position passante). L'image du point allumé de (4405) se forme alors dans le plan du diaphragme (4414). (4414) est alors réglé en translation de mamere à ce que son centre coïncide avec l'image du point allumé de (4405).

Etape 16. Réglage en franslation 2 axes du SLM (4417)

Ce SLM est monté sur un positionneur deux axes en franslation dans le plan du SLM, couplé avec un positionneur trois axes en rotation permettant d'en ajuster l'orientation (axes dans le plan du capteur) et la position en rotation (axe dans un plan orthogonal au capteur).

Les tableaux de commande A _{N N} et B _{N N} sont utilisés respectivement pour les SLM (4405) et

2 ' 2 2 ' 2 (4412). Un diffuseur est utilisé pour suivre le faisceau arrivant sur (4417) et (4417) est réglé en franslation pour que le faisceau parvienne en son cenfre.

Etape 17. Réglage de l'orientation du SLM (4417).

Les mêmes tableaux de commande que précédemment sont utilisés pour les SLM (4405)(4412). Le tableau de commande du SLM (4417) est mis à 1. (4417) est réglé pour que le faisceau réfléchi parvienne au point prévu sur (4419), ce qui est vérifié à l'aide d'un diffuseur. -188-

Etape 18. Réglage de l'orientation du miroir (4418)

Le miroir (4418) est monté sur un positionneur angulaire permettant d'en ajuster l'orientation.

(4418) est réglé de mamere à renvoyer effectivement le faisceau dans la direction prévue, ce qui est vérifié avec un diffuseur.

Etape 19. Réglage en franslation du diaphragme (4419)

Le diaphragme (4419) est monté sur un positionneur deux axes en translation permettant un déplacement dans un plan orthogonal à l'axe optique.

L'ouverture de (4419) est connue. Il doit êfre réglé en franslation. Le tableau de commande B _{N N}

2 ^' 2 est utilisé pour le SLM (4405), c'est-à-dire que seul un point central de ce SLM est « allumé », le faisceau réfléchi direct étant arrêté par (4406). Les tableaux de commande des SLM (4412) et (4417) sont mis à 1 (position passante). L'image du point allumé de (4405) se forme alors dans le plan du diaphragme (4419). (4419) est alors réglé en translation de manière à ce que son centre coïncide avec l'image du point allumé de (4405).

Etape 20. Réglage en rotation du polariseur (4420)

Le polariseur (4420) est monté sur un positionneur permettant son réglage en rotation par rapport à l'axe optique.

Les tableaux de commande A _{N N} et B_{N N} sont appliqués respectivement à (4405) et (4412). Le

2 ' 2 2 ' 2 tableau de commande de (4417) est mis à 1. Le fréquencemètre est placé juste derrière (4420). L'image sur son CCD est à peu près ponctuelle. Le tableau de commande de (4417) est alors mis à 0. La position de (4420) est ajustée pour annuler l'intensité reçue sur le fréquencemètre.

Etape 21. Réglage en translation 2 axes et en rotation du SLM (4417), réglage de la position et de la focale du doublet (4415) (4416). Les lentilles (4415)(4416) sont montées sur un positionneur en translation permettant soit leur déplacement simultané dans le sens de l'axe optique soit le déplacement de (4415) seule.

La position de (4415)(4416) doit êfre réglée de mamere à ce que l'image du faisceau provenant du SLM (4412) lorsque les tableaux de commande A _{N N} et B _{N N} sont appliqués respectivement à (4405) et

2 ' 2 2 ^' 2

(4412) soit effectivement ponctuelle dans le plan de fréquence ou se trouve (4417). La position de (4417) doit être N réglée pour que dans ces conditions le point illuminé sur le SLM (4417) ait pour coordonnées p^,χ N pι^χ _La

position de (4415)(4416)(4417) doit en oufre êfre réglée pour qu'il y ait une conespondance point à point entre les pixels de (4412) et ceux de (4417), c'est-à-dire pour que lorsque les tableaux de commande A, _; et B_{t ]} sont appliqués respectivement à (4405) et (4412) le point éclairé sur (4417) soit le pixel de coordonnées (z,y) , quels que soient les entiers z ety. -189-

Le fréquencemètre est positionné derrière (4420). La série des opérations ol 1 à ol3 est répétée un nombre suffisant de fois.

011. Réglage de la position conjointe de (4415) et (4416) pour obtenir une image en fréquence ponctuelle. Les tableaux de commande A_{N N} et B_{N N} sont appliqués respectivement aux SLM (4405) et

2 ' 2 2 ' 2

(4412). Le tableau de commande appliqué à (4417) est mis à 1. La position de l'ensemble (4415) (4416) est ajustée pom avoir s le capteur CCD du fréquencemètre une image aussi ponctuelle que possible.

012. Réglage en franslation de (4417) pour obtenir une image en fréquence cenfrée. A_{N N} et B_{N N} restent appliqués respectivement aux SLM (4405) et (4412). (4417) est alors

réglé pour que la fréquence cenfrale générée soit au milieu du SLM (4417). Ce réglage se fait avec le fréquencemètre et le programme PA de localisation du maximum défim plus haut. Toutefois, dans ce programme de localisation du maximum, le SLM (4412) est ici remplacé par le SLM (4417).

ol3. Réglage de (4415) pour obtenir le bon grandissement en fréquence et réglage en rotation de (4417). Le programme PC est utilisé. Toutefois, dans ce programme:

- le SLM (4412) est remplacé par le SLM (4417)

- lorsque un mot de commande A, _ . est appliqué au SLM (4405), le mot de commande -3 conespondant est appliqué au SLM (4412). La conection de distance inter-lentilles obtenue est appliquée à la distance enfre (4415) et (4416) et le réglage en rotation est effectué sur (4417) en rotation par rapport à un axe orthogonal au plan du capteur.

Etape 22. Réglage de l'orientation du miroir semi-fransparent (4307)

Le miroir semi-fransparent (4307) est monté sur un positionneur angulaire permettant d'en ajuster l'orientation.

Les SLM (4405)(4412)(4417) sont commandés pour générer une fréquence cenfrale: le tableau de commande de (4405) est A _{M M} et le tableau de commande de (5512) et (4417) est B_{N N} . La position de

2 ^' 2 ~~2~^' 2

(4407) est ajustée à l'aide d'un diffuseur de manière à renvoyer le faisceau dans la direction prévue.

Etape 23. Réglage de l'orientation du miroir (4308)

Le miroir (4308) est monté sur un positionneur angulaire permettant d'en ajuster l'orientation. La commande des SLM est inchangée. La position de (4308) est ajustée à l'aide d'un diffuseur de manière à renvoyer le faisceau dans la direction prévue.

Etape 24. Mise en place de l'extincteur de faisceau (4422) -190-

La commande des SLM est inchangée. Cet extincteur de faisceau est mis en place selon la procédure indiquée en 7.3.2.2.

Etape 25. Réglage en translation de la lentille (4431) La commande des SLM est inchangée. Le fréquencemètre est positionné derrière (4431). La position de

(4431) est ajustée pour obtenir une image ponctuelle.

Etape 26. Réglage de l'orientation du miroir (4332)

Ce miroir est monté sur un positionneur deux axes permettant d'en ajuster l'orientation. La commande des SLM est inchangée. Enfre (4311) et (4331), deux faisceaux se propageant en sens opposé sont superposés. Un diffuseur introduit sur le coté du faisceau sera illuminé des deux cotés. Les parties illuminées de chaque coté du diffuseur doivent être les mêmes: les deux faisceaux sont alors exactement superposés. Un mauvais réglage de (4332) a pour conséquence un décalage enfre la position de ces deux faisceaux. (4332) est réglé pour qu'entre (4311) et (4331) les faisceaux se propageant dans les deux sens soient exactement superposés.

Etape 27. Réglage en translation de la lentille (4331)

La lentille (4331) est montée sur un positionneur un axe en translation permettant un déplacement dans le sens de l'axe optique. Le fréquencemètre est positionné entre (4311) et (4338). La commande des SLM (4405)(4412)(4417) est définie par les tableaux A _{N N} et B_{N N} . La position de (4332) est réglée de mamere à ce que FEDI ait une

2 ^' 2 ^~1T' 2 image aussi ponctuelle que possible sur le fréquencemètre.

Etape 28. Réglage de l'orientation du miroir semi-transparent (4311). Ce miroir semi-fransparent est monté sur un positionneur deux axes en rotation (les deux axes étant dans le plan du miroir semi-fransparent) permettant d'en ajuster l'orientation.

Le réglage des SLM n'est pas modifié. Un diffuseur est utilisé pour contrôler la frajectoire du faisceau. (4311) est réglé de mamere à ce que que le faisceau FEDI suive la frajectoire prévue.

Etape 29. Réglage de l'orientation du miroir à deux faces (4424)

Le miroir double (4424) est monté sur un positionneur deux axes en rotation, les deux axes étant dans le plan de la face non réfléchissante.

(4424) est réglé de mamere à ce que FEDI parvienne au cenfre de (4427), ce qui est vérifié à l'aide d'un diffuseur.

Etape 30. Réglage de l'orientation du SLM (4427). -191-

Ce SLM est monté s un positionneur deux axes en franslation dans le plan du SLM, couplé avec un positionneur trois axes en rotation permettant d'en ajuster l'orientation (axes dans le plan du capteur) et la position en rotation (axe dans un plan orthogonal au capteur).

Les tableaux de commande des SLM (4405) (4412) (4417) ne sont pas modifiés. Le tableau de commande du SLM (4427) est mis à 1.

Le frajet du faisceau étant contrôlé à l'aide d'un diffuseur, la position angulaire de (4427) est réglée de mamere à ce que le faisceau FEDI vise le point prévu sur (4424).

Etape 31. Réglage fin de l'orientation du miroir à deux faces (4424), réglage en rotation et franslation de (4427) et réglage de la focale et de la position du doublet (4425)(4426).

La position de (4425)(4426) doit être réglée de manière à ce que l'image du faisceau FEDI, lorsque les tableaux de commande A _{N N} et B_{N N} sont appliqués respectivement au SLM (4405) et aux SLM (4412)

^~2^~'^~ιr ^~2^~'^~Ύ^~ et (4417), soit effectivement ponctuelle dans le plan de fréquence ou se trouve (4427). La position de (4424) et (4427) doit être réglée pour que dans ces conditions le point illuminé sur le SLM (4427) ait pour coordonnées N pix N_pι_X

. La position de (4425)(4426)(4427) doit en oufre être réglée pour qu'il y ait une conespondance

point à point entre les pixels de (4417) et ceux de (4427), c'est-à-dire pour que, lorsque les tableaux de commande A_{t J} et B _j sont appliqués respectivement au SLM (4405) et aux SLM (4412) et (4417), le point éclairé sm (4427) soit le pixel de coordonnées (z^',y) , quels que soient les entiers z ety.

Le fréquencemètre est positionné enfre (4424) et (4428). Son polariseur est mis en place. Le faisceau FEDI est utilisé. Le tableau de commande de (4427) est mis à 0 et le polariseur du fréquencemètre est réglé pour annuler l'intensité reçue sur le CCD du fréquencemètre. La série des opérations o21 à o23 est alors répétée un nombre suffisant de fois, pour converger vers un réglage conect.

o21. Réglage de la position conjointe de (4425) et (4426) pour obtenir une image en fréquence ponctuelle. Le tableau de commande A _{N N} est appliqué au SLM (4405) et le tableau de

commande B_{N N} est appliqué aux SLM (4412) et (4417). Le tableau de commande appliqué à (4427) est mis

2 ' 2 à 1. La position de l'ensemble (4425) (4426) est ajustée pour avoir sur le capteur CCD du fréquencemètre une image aussi ponctuelle que possible.

o22. Réglage de l'orientation de (4424) et réglage en franslation de (4427) pour obtenir une image en fréquence cenfrée.

(4424) et (4427) sont réglés pour que la fréquence cenfrale générée soit au milieu du SLM. Ce réglage se fait avec le fréquencemètre et le programme PA de localisation du maximum défini plus haut. Toutefois, dans ce programme de localisation du maximum, le SLM (4412) est ici remplacé par le SLM (4427). -192-

o23. Réglage de (4425) pom obtenir le bon grandissement en fréquence et réglage en rotation de (4427). Le programme PC est utilisé. Toutefois, dans ce programme: - le SLM (4412) est remplacé par le SLM (4427) - lorsque un mot de commande -4, . est appliqué au SLM (4405), le mot de commande B_t conespondant est appliqué en plus aux SLM (4412) et (4417).

La conection de distance inter-lentilles obtenue est appliquée à la distance entre (4425) et (4426) et le réglage en rotation est effectué sur (4427).

Etape 32. Réglage en franslation 2 axes du diaphragme (4428)

(4428) est monté sur un positionneur deux axes en translation permettant des déplacements dans un plan orthogonal à l'axe optique.

L'ouverture de (4428) est connue. Il doit être réglé en translation.

FEDI est utilisé. (4428) est provisoirement supprimé. Un CCD auxiliaire est placé juste derrière (4428). Le tableau de commande A _{N N} est appliqué au SLM (4405) et le tableau de commande B_{N N} est appliqué

2 ^' 2 ^~Y^~ '^~2^~ aux SLM (4412) et (4417). Le tableau de commande de (4427) est à 1. Le centre de la zone éclairée est repéré sm le CCD auxiliaire. (4428) est alors mis en place de mamere à ce que son centre coïncide avec le centre de la zone éclairée.

Etape 33. Réglage en rotation du polariseur (4352)

Ce polariseur est monté sur un positionneur un axe en rotation permettant d'en ajuster la position en rotation autour de son axe optique.

FEDI est utilisé. Le tableau de commande de (4427) est mis à 0. Les tableaux de commande des SLM (4405)(4412)(4417) ne sont pas modifiés. La position en rotation de (4352) est ajustée pour annuler l'intensité reçue s le CCD (4339).

Etape 34.Réglage de l'orientation du miroir (4344)

Ce miroir est monté sur un positionneur permettant un ajustement de son orientation. Le diaphragme (4349) est largement ouvert. Un diffuseur est utilisé pour vérifier que le faisceau FRD parvient au CCD (4339) et est centré sur ce CCD.

Etape 35.Réglage de la position et de l'ouverture du diaphragme (4349)

Ce diaphragme est monté sur un positionneur deux axes en translation permettant un déplacement dans le plan de l'axe optique, et a une ouverture réglable. Sa position est réglée en présence de FRD pour que l'image du diaphragme soit cenfrée sur le CCD et son ouverture est réglée pour que cette image couvre la totalité du CCD. -193-

Etape 36. Réglage de la focale et de la position du doublet (4430)(4429) et réglage en franslation et rotation du capteur (4339)

Les lentilles (4430) (4429) sont montées sur un positionneur en franslation permettant d'une part de déplacer solidairement les deux lentilles, d'autre part de déplacer (4429) par rapport à (4430). Le CCD (4339), solidaire de la caméra (4384) est monté sur un positionneur trois axe en rotation permettant d'une part une rotation autour de l'axe optique, d'autre part un réglage de l'orientation du captem, couplé avec un positionneur trois axes en translation.

Les positionneurs des lentilles (4430) (4429) et de la caméra (4384) sont eux-mêmes montés sur un positionneur permettant un déplacement de l'ensemble dans la direction de l'axe optique. La position de (4430)(4429) doit être réglée de mamere à ce que l'image du faisceau FEDI, lorsque les tableaux de commande A _{N N} et B_{N N} sont appliqués respectivement au SLM (4405) et aux SLM (4412)

2 ' 2 2 ' 2 et (4417) et lorsque le tableau de commande de (4427) est mis à 1, soit effectivement ponctuelle dans le plan de fréquence ou se trouve (4339). La position de (4339) doit être réglée pour que dans ces conditions le point ^f N ¹ * pix N ' " pix ^Λ illuminé sur le CCD (4339) ait pour coordonnées . La position de (4339)(4429)(4430) doit en

outre êfre réglée pour qu'il y ait une conespondance point à point enfre les pixels de (4417) et ceux de (4339), c'est-à-dire pom que, lorsque les tableaux de commande A_{l }} et B _J sont appliqués respectivement au SLM

(4405) et aux SLM (4412) et (4417) et lorsque le tableau de commande de (4427) est à 1, le point éclairé sur (4339) soit le pixel de coordonnées (/,/^') , quels que soient les entiers z ety.

Les faisceaux FEDI et FRD sont utilisés. Le tableau C appliqué à (4427) est mis à 1.

La série des opérations o31 à o33 est répétée un nombre suffisant de fois.

031. Réglage de la position conjointe de (4429) et (4430) pour obtenir une image en fréquence ponctuelle.

Le tableau de commande A _{N N} est appliqué au SLM (4405) et le tableau de

2 ~ ^' 2 commande B_{N N} est appliqué aux SLM (4412) et (4417). La ponctualité de l'image générée sur le CCD

2 ^' 2

(4339) est évaluée selon la procédme décrite en 7.3.3.1. La position de l'ensemble (4429) (4430) est ajustée pour avoir une image aussi ponctuelle que possible.

032. Réglage en franslation de (4339) pour obtemr une image en fréquence centrée. La position en translation de (4339) est ajustée pour que les coordonnées de l'image ponctuelle, calculées

N_pιx N p x selon la procédure indiquée en 7.3.3.1., soient

o33. Réglage de (4429) pour obtenir le bon grandissement en fréquence et réglage en rotation de (4339). -194-

Le programme PC est utilisé. Toutefois, dans ce programme:

- lorsque un mot de commande A _] est appliqué au SLM (4405), le mot de commande -5, . conespondant est appliqué en plus aux SLM (4412) et (4417).

- les tableaux X[i] et Y[ï] ne sont pas obtenues par la procédure PB. Ils conespondent aux coordonnées du maximum déterminées par la procédure décrite en 7.3.3. L, sans action spécifique sur un SLM.

La conection de distance inter-lentilles obtenue est appliquée à la distance enfre (4429) et (4430). Le réglage en rotation est effectué sur (4339)(4384), en rotation autour de l'axe optique.

X[l]- X[4] L'orientation du CCD est réglée pour avoir — - ^ - = +1

Etape 37. Réglage de la position en translation de l'ensemble constitué du CCD (4339) et du doublet (4430)(4429).

Le faisceau FRDI est utilisé. Un CCD auxiliaire est mis en place à l'emplacement du diaphragme (4313). La position dudit ensemble est ajustée pom que l'image de FRDI sur le CCD auxiliaire soit ponctuelle.

Etape 38. Réglage de l'orientation du miroir (4347)

Ce miroir est monté sur un positionneur deux axes permettant d'en ajuster l'orientation. La commande des SLM est inchangée. Entre (4345) et (4346), deux faisceaux se propageant en sens opposé sont superposés. Un diffuseur introduit sur le coté du faisceau sera illuminé des deux cotés. Les parties illuminées de chaque coté du diffuseur doivent être les mêmes: les deux faisceaux sont alors exactement superposés. (4347) est réglé pour qu'entre (4345) et (4346) les faisceaux se propageant dans les deux sens soient exactement superposés.

Etape 39.Réglage en translation de la lentille (4346)

La lentille (4346) est montée sur un positionneur un axe en franslation permettant d'en ajuster la position dans le sens de l'axe optique.

FRDI est utilisé. Le fréquencemètre est positionné sur la frajectoire de FRDI entre (4345) et (4430). La position de la lentille (4346) est ajustée pour que l'image sur le CCD du fréquencemètre soit ponctuelle.

Etape 40. Réglage de l'orientation du miroir semi-transparent (4345) Le miroir semi-fransparent (4345) est monté sur un positionneur deux axes permettant d'en ajuster l'orientation.

Un capteur auxiliaire est provisoirement mis en place derrière (4313). Le miroir semi-fransparent (4313) est réglé pour que l'image sur ce capteur provisoire soit centrée par rapport au diaphragme (4313).

Etape 41. réglage de position des objectifs (4317) et (4319) en franslation.

L'objectif (4319) est monté sur un dispositif de focalisation. L'objectif (4317) est monté sur un positionneur deux axes en franslation permettant un déplacement dans un plan orthogonal à l'axe optique. -195-

Le faisceau FRDI est utilisé. Un captem CCD provisoire est positionné juste derrière (4323) sur la trajectoire de FRDI. La position des objectifs est réglée pour obtemr une image ponctuelle cenfrée.

Etape 42. Introduction d'un faisceau d'éclairage plan provisoire. Ce faisceau, que l'on appellera 'FEP', est dérivé du laser par un miroir semi-fransparent placé entre

(4304) et (4305) et il est amené par un jeu de miroirs vers l'entrée de l'objectif de microscope (4317), du coté de l'échantillon. L'objectif (4319) doit être provisoirement supprimé à cet effet. A l'entrée dans l'objectif, ce faisceau est dirigé suivant l'axe optique de l'objectif.

Etape 43. réglage de l'orientation du miroir (4314) et réglage en franslation de la lentille(4312).

Le miroir (4314) est monté sur un positionneur angulaire permettant d'en ajuster l'orientation. La lentille (4312) est montée sur un positionneur un axe en franslation dans le sens de l'axe optique.

FEP et FRD sont utilisés. Une image est obtenue à partir du capteur (4339). La ponctualité et les coordonnées du point image de FEP sont évaluées par la procédure décrite en 7.3.3.1. La lentille (4312) est réglée pour que l'image soit ponctuelle.

Le miroir (4314) est réglé pour que l'image soit cenfrée.

Etape 44. réglage de position des objectifs.

Le faisceau FEP est supprimé et l'objectif (4317) est remis en place. Le faisceau FRDI est utilisé. Un captem CCD provisoire est mis en place derrière (4323) s la frajectoire de FRDI. Les objectifs sont réglés pour que l'image soit ponctuelle et centrée par rapport au diaphagme (4323).

Etape 45. Réglage en franslation de la lentille (4324).

FED est utilisé. Il traverse successivement les objectifs (4317) et (4319), puis la lentille (4324) et parvient au fréquencemètre, qui est positionné derrière (4324). La position de (4324) est réglée de manière à obtenir une image aussi ponctuelle que possible sur le CCD du fréquencemètre.

Etape 46. Réglage de l'orientation des miroirs (4432) (4435), premier réglage en rotation de (4436) et premier réglage de l'orientation du miroir semi-fransparent (4325) Les SLM (4405)(4412)(4417) sont commandés de mamere à générer une fréquence centrale. Le faisceau

FEG est utilisé. (4325) est en position normale. Le frajet du faisceau est contrôlé avec un diffuseur. Chaque miroir est ajusté de mamere à avoir la trajectoire prévue. Le faisceau doit en particulier occuper toute l'ouverture de (4323).

Etape 47. Mise en place de l'extincteur de faisceau (4437)

Cet extincteur de faisceau est mis en place comme indiqué en 7.3.2.2.

Etape 48. Réglage de la position et de la focale du doublet (4433)(4434), réglage en rotation de l'ensemble (4436). et réglage de l'orientation du miroir semi-fransparent (4325). -196-

La lentille (4434) est montée sur un positionneur en translation suivant l'axe optique. Ce positionneur et la lentille (4433) sont eux-mêmes montés sur second un positionneur en translation un axe suivant l'axe optique.

La position de (4433)(4434) doit êfre réglée de mamere à ce que l'image du faisceau FEG, lorsque les tableaux de commande A ^J _N pu ^J _N ^v pu et B ^J _N pu ^J _N pu sont appliqués respectivement au SLM (4405) et aux SLM (4412)

2 ' 2 2 ' 2 et (4417) et lorsque le tableau de commande de (4427) est mis à 1, soit effectivement ponctuelle dans le plan de fréquence ou se trouve (4339). La position de (4325) doit êfre réglée pom que dans ces conditions le point ^f N ¹ * pix N ^{J γ} pix illuminé sur le CCD (4339) ait pom coordonnées . La position de (4433)(4434)(4436)(4325) doit

. 2 2 y en oufre êfre réglée pour qu'il y ait une conespondance point à point entre les pixels de (4417) et ceux de (4339), c'est-à-dire pour que, lorsque les tableaux de commande A, _; et B _] sont appliqués respectivement au SLM (4405) et aux SLM (4412) et (4417) et lorsque le tableau de commande de (4427) est à 1, le point éclairé sur (4339) soit le pixel de coordonnées (z,y) , quels que soient les entiers z ety.

Les faisceau FRD et FEG sont utilisés. Le tableau de commande appliqué à (4427) est mis à 1. Ce réglage est effectué en effectuant un nombre suffisant de fois les étapes o41 à o43

o41. Réglage de la position conjointe de (4433) et (4434) pour obtenir une image en fréquence ponctuelle.

Le tableau de commande A _{N w} est appliqué au SLM (4405) et le tableau de commande B _{M M} est

2 ' 2 2 ' 2 appliqué aux SLM (4412) et (4417). La ponctualité de l'image générée sur le CCD (4339) est évaluée selon la procédure décrite en 7.3.3.1. La position de l'ensemble (4433) (4434) est ajustée pour avoir une image aussi ponctuelle que possible.

o42. Réglage angulaire de (4325) pour obtenir une image en fréquence cenfrée.

La position angulaire de (4325) est ajustée pour que les coordonnées de l'image ponctuelle, calculées

N_pιx N p x selon la procédure indiquée en 7.3.3.1., soient

o43. Réglage de (4433) pour obtenir le bon grandissement en fréquence et réglage en rotation de (4436). Le programme PC est utilisé. Toutefois, dans ce programme:

- lorsque un mot de commande -4, . est appliqué au SLM (4405), le mot de commande -5, conespondant est appliqué aux SLM (4412) et (4417).

- les valems X[i] et Y[i] ne sont pas obtenues par la procédure PB. Ils correspondent aux coordonnées du maximum déterminées par la procédure décrite en 7.3.3.1., sans action spécifique sur un SLM.

La conection de distance inter-lentilles obtenue est appliquée à la distance enfre (4433) et (4434) et le réglage en rotation est effectué s (4436). -197-

Etape 49. Réglage du reste de la partie 'gauche' du microscope

Chaque élément encore non réglé conespond à un élément symétrique dans la partie droite du microscope. Le réglage des éléments encore non réglés est 'symétrique' du réglage des éléments conespondants de la partie droite du microscope. Il est effectué de manière symétrique, le faisceau FEGI remplaçant le faisceau FEDI. Toutefois il doit êfre tenu compte du fait suivant: ^r N ¹ " pix N * * pix

- un point centré en sur le capteur (4339) peut être obtenu avec des tableaux de commande

A_{N N} et B_{N N} des SLM (4405),(4412),(4417) et avec le faisceau FEG. Il peut êfre également obtenu avec

les tableaux de commande A _{N N} B_{N N} et avec le faisceau FEDI. -ι,- 2

N ^{1 v} pix N ^{λ γ} pix un point centré en sur le captem (4329) peut êfre obtenu avec des tableaux de commande

2 2 A_N p _πix _N " p _uix et B_N " p _aix . _N "p _aix des SLM (4405),(4412),(4417) et avec le faisceau FED. Il peut êfre également obtenu

2 ' 2 2 ' 2 avec les tableaux de commande A ¹ « ^v, pu ^J _M ^v pu B '_N ^v pix ⁱ _M ^V pu et avec le faisceau FEGI.

2 ^' 2 2 ^' 2

Les mots de commande des SLM ne sont donc pas parfaitement équivalents pendant les deux réglages. Le réglage de la partie gauche du microscope comprend en particulier des étapes équivalentes aux étapes 31 et 36. Dans ces étapes, les tableaux de commande A _{N N} et B_{N N^} doivent être remplacés par A _{N N} et B_{N N}

2 ' 2 2

Etape 50. Mise en place de (4351)

7.3.2.3.

A l'issue de cet ensemble de réglages le système est prêt à être employé.

8.6. Variante du mode d'utilisation.

On peut se limiter, pour générer l'image tridimensionnelle de l'objet, à la représentation F_{0 0} définie en

7.17. Ceci revient, dans la procédure décrite en 7.17.2., à adopter des tableaux !B_{p q} nuls pour tout couple (/?,<?) ≠ (0,0) .

On suppose également ici que l'objet a un indice moyen proche de l'indice nominal de l'objet observé et que la table optique est totalement exempte de vibrations.

Les étapes 7.9, 7.10, 7.11, 7.13, 7.15, 7.16 peuvent alors être supprimées. La présente méthode diffère en outre de la précédente par la méthode utilisée pour régler la position des objectifs avant utilisation, par les tableaux de commande appliqués au déviateur de faisceau pendant la prise d'image, et par l'algorithme de superposition des images. -198-

8.6.1. Réglage des objectifs.

Ce réglage peut être effectué en présence de l'objet. Il peut également êfre effectué avec une lame transparente à condition de ne pas déplacer les objectif quand on introduit l'objet. Si des objectifs prévus pour fonctionner sans liquide d'immersion ni lame couvre-objet sont prévus (indice nominal égal à 1) et si l'échantillon est peu épais ou d'indice moyen proche de 1, il peut également êfre effectué en l'abscence d'objet.Pendant ce réglage on utilise les faisceaux FEG et FRD et on effectue les opérations suivantes:

- on met à 0 le tableau de commande du SLM (4405)

- on met à 1 les tableaux de commande des autres SLM. - on règle le polariseur (4408) en rotation de mamere à annuler le faisceau FEG reçu sur (4339).

- on applique au SLM (4405) le tableau de commande B_{N N} qui est nul en tout point sauf au point de

2 ' 2 f N N coordonnées — — , — — .

V 2 2 J

- on évalue la ponctualité de l'image reçue sur le capteur (4339) en utilisant la procédme décrite en 7.3.3.1. avec transformation de Fourier. - on règle la position des objectifs pour que l'image soit parfaitement ponctuelle et cenfrée.

- on ramène alors le polariseur (4408) a sa position initiale.

8.6.2. commande du déviateur de faisceau

Le tableau de commande A_tJ utilisé en 8.4.1. pour le SLM (4405) est remplacé

( { \ N \Λ pix par: A_v [k,l] = E + %2

N pix V J J J

8.6.3.algorithme de calcul de la représentation tridimensionnelle

Les étapes 1 et 2 de l'algorithme décrit en 7.17.2. peuvent être supprimées. En effet, le réglage supplémentaire effectué, le tableau de commande du déviateur de faisceau utilisé, et l'abscence de vibrations permettent d'éviter tout décalage de phase du faisceau d'éclairage. En particulier, si la variante décrite en 7.18.5. est utilisée, le dispositif de décalage de phase (4304) n'est pas utilisé, le déphasage Θ _d étant constant et pouvant êfre choisi comme nul.

9. Cinquième mode de réalisation Ce mode de réalisation ne permet pas une acquisition d'images aussi rapide que le mode précédent et n'est pas, pour cette raison, le mode préféré de réalisation dans le cas général. Néanmoins, dans le domaine particulier des rayonnements UV, il constitue le mode de réalisation préféré. En effet, dans ce domaine, les modes de réalisation 3 et 4 ne sont pas réalisables du fait de la non-disponibilité des cristaux liquides et des polarisems. -199-

Compte tenu du fait qu'il peut fonctionner avec des rayonnements UV de courte longueur d'onde, ce mode de réalisation est également celui qui permet d'obtenir la meilleure défimtion sur l'image générée.

9.1. Principes. Ce cinquième mode de réalisation se rapproche du deuxième mode de réalisation en ce que l'image est captée dans un plan d'espace et en ce que les variations de direction du faisceau se font à l'aide d'un miroir mobile. Il se rapproche du troisième mode de réalisation en ce que deux objectifs de microscope sont utilisés, et en ce que la plupart des algorithmes sont des formes modifiées de ceux utilisés dans le troisième mode de réalisation. Il diffère de l'ensemble des modes de réalisation précédents en ce que l'onde de référence n'est pas fixe mais est modifiée en même temps que l'onde d'éclairage. Il est décrit par les Fig.73 et 74.

L'objectif de ce cinquième mode de réalisation est d'améliorer la résolution par utilisation d'un laser ultraviolet. Il n'existe pas de cristaux liquides fenoélectriques travaillant en ultraviolet, et par conséquence il est nécessaire d'adopter des solutions à base de composants optiques plus traditionnels. En particulier, le dispositif de déviation du faisceau est un miroir mobile (5113). Toutefois, l'utilisation d'un miroir mobile dans un système proche du premier ou du deuxième mode de réalisation engendre des vibrations. Après chaque mouvement du miroir, il est nécessaire d'attendre la stabilisation du système avant de procéder à l'acquisition. Afin de s'affranchir des vibrations causées par le miroir mobile, il est nécessaire de positionner celui-ci en dehors de la table optique et de séparer les faisceaux d'éclairage et de référence sur la table optique, après passage du miroir. Il s'ensuit que les mouvements du miroir se traduisent par un mouvement simultané des faisceaux de référence et d'éclairage.

Afin de profiter pleinement de la résolution possible en ultraviolet, il est nécessaire de pouvoir effectuer, comme dans le troisième et le quatrième mode de réalisation, des changements d'orientation du vectem champ électrique du faisceau d'éclairage. Ces changements se font en séparant l'onde, par un miroir semi-transparent (5102), en deux chemins, une lame de phase (5111) modifiant la polarisation étant insérée sur un des chemins et des obtmatems (5104) et (5109) permettant de choisir le chemin utilisé. Les deux ondes sont ensuite à nouveau superposées par un miroir (5112). Les obturateurs sont placés en un point ou l'onde lumineuse n'occupe qu'une faible extension spatiale et peuvent donc êfre ouverts ou fermés rapidement.

Pom la même raison il est nécessaire de disposer de plusieurs directions d'analyse. De chaque coté du microscope, deux captems CCD sont utilisés, un pour chaque direction d'analyse. Dans la mesme ou il est difficile d'avoir de bons polarisems dans le domaine UV, la direction d'analyse sera modifiée umquement par une modification du sens de polarisation de l'onde de référence, par exemple au moyen de lames d'onde (5238) (5239) qui modifient différemment cette polarisation avant chaque capteur.

L'onde de référence est mobile et peut en particulier traverser l'objet avec un angle proche de l'ouverture maximale de l'objectif. Il s'ensuit que la fréquence spatiale reçue sur le capteur peut être deux fois plus élevée qu'avec un système ou l'onde de référence est centrée par rapport à l'axe optique comme dans le deuxième mode de réalisation. A taille d'image égale, un capteur de dimensions en pixels deux fois supérieures est donc nécessaire, par rapport aux aufres modes de réalisation. -200-

Pour supprimer l'onde d'éclairage directe, on utilise une vitre (5165) ou (5191) sur laquelle est fixé un point noir, placée dans un plan de fréquences. En déplaçant ce point noir, on modifie la fréquence supprimée. Par contre, cette méthode ne permet pas d'obtemr la valeur de l'onde au point d'impact direct de l'onde d'éclairage, s laquelle sont basées les reconstructions tridimensionnelles pratiquées dans les autres modes de réalisation. Par aillems, le miroir mobile se prête mal à des changements rapides de l'onde d'éclairage enfre des fréquences très différentes. Or ces changements étaient nécessaires dans le troisième mode de réalisation pour obtenir les images de référence qui permettaient de recaler en phase les représentations bidimensionnelles obtenues sur le capteur opposé au point d'impact direct de l'onde d'éclairage. C'est pourquoi une méthode de recalage en phase ne nécessitant ni image de référence ni acquisition du point conespondant à l'éclairage direct doit être prévue dans ce mode de réalisation.

Le paragraphe 9.2. décrit matériellement le microscope utilisé et le paragraphe 9.3. donne les principes de dimensionnement applicables. Le microscope étant d'une conception matérielle différant notablement du mode de réalisation 3, son réglage et son utilisation diffèrent également fortement du réglage et de l'utilisation du microscope selon le mode de réalisation 3.

Le microscope fait l'objet d'un ensemble de réglages effectués en l'abscence de l'échantillon:

- Le réglage de position des différents éléments est effectué comme décrit au paragraphe 9.5. Ce réglage fait appel à une procédme d'acquisition d'images décrite au paragraphe 9.4. - Les tableaux permettant la commande du miroir de déviation du faisceau sont déterminés comme décrit au paragraphe 9.6.

- Les tableaux permettant la commande des vitres (5165) et (5191), utilisées pour supprimer le faisceau d'éclairage direct, sont déterminés comme décrit au paragraphe 9.7.

- La constante K , équivalente à celle utilisée dans le premier mode de réalisation, est déterminée comme décrit en 9.8.

- La position des capteurs CCD doit faire l'objet d'un réglage fin décrit au paragraphe 9.10.

- Le tableau caractérisant la réponse fréquentielle des capteurs est déterminé comme décrit au paragraphe 9.11.

- Les coordonnées relatives des points centraux des images obtenues de chaque coté du microscope sont déterminées comme décrit au paragraphe 9.12.

- Les phases de chaque faisceau d'éclairage sont déterminées comme décrit au paragraphe 9.13.

Après mise en place de l'échantillon le microscope fait l'objet d'un ensemble de réglages supplémentaires: - La position des objectifs est réglée comme décrit au paragraphe 9.14.

- Les coordonnées relatives x,y,z des points d'origine des faisceaux de référence associés à chaque objectif, ainsi que l'indice moyen n₀ de l'échantillon et son épaisseur L, sont déterminés comme décrit au paragraphe 9.15. -201-

- La valem w₀ caracténsant la position de l'échantillon est calculée comme décnt au paragraphe 9 16 La procédme déente au paragraphe 9 16 est essentiellement semblable à celle déente au paragraphe 7 15 et comporte en particulier un premier réglage de focalisation

- La fonction de compensation des abenations D_p est obtenue comme décnt au paragraphe 9 17

Lorsque ces réglages ont été effectués, la procédure d'obtention d'images tridimensionnelles est lancée Une version de cette procédure, analogue à celle déente pour le troisième mode de réalisation, est déente en 9 18 Une version spécifiquement adaptée de cette procédure est déente en 9 19 Dans tous les cas, les représentations fréquentielles bidimensionnelles sont acqmses en utilisant une procédme déente au paragraphe 9 9 , qui est également utilisée dans certaines étapes de réglage

Bien que cela ne soit pas rappelé, un réglage de focalisation analogue à celui décrit en 7 17 3 est effectue, ce qm peut impliquer un recalcul de w₀ et D_p

Une version très simplifiée du fonctionnement de ce microscope est déente en 9 20 Moyennant des modifications algonthnuques similaires a celles déentes en 7 20 et 7 21, ce mode de réalisation peut êfre adapté à l'utilisation d'objectifs présentant des abenations

9.2. Description matérielle.

Un schéma d'ensemble du système est constitué par les figures 73,74,63 Le plan des Fig 73 et 74 est honzontal L'ensemble (5176), entomé en pointillés sur la Fig 74, est identique à l'ensemble conespondant dans le quatnème mode de réalisation et est représenté par la Fig 63

Un laser polansé dans le sens vertical (5100) produit un faisceau dont le vecteur champ electnque est donc dingé selon un axe orthogonal au plan de la figme Ce faisceau traverse ensuite un élargisseur de faisceau (5101)

Le faisceau est ensuite séparé en deux par un miroir semi-transparent (5102) Un des faisceaux issus de (5102) traverse une lentille (5103) puis un obturateur (5104) placé dans le plan focal de cette lentille II traverse alors une seconde lentille (5105) dont le plan focal objet coïncide avec le plan focal image de (5103), pms est réfléchi par un miroir (5106) et un miroir semi-fransparent (5112) La partie du faisceau qui n'est pas réfléchie par (5112) va frapper une surface absorbante (5253) Le second faisceau issu de (5102) est réfléchi par un miroir (5107), traverse une lentille (5108) pms un obturateur (5109) placé dans le plan focal de cette lentille II traverse alors une seconde lentille (5110) dont le plan focal objet coïncide avec le plan focal image de (5108) Il traverse alors une lame d'onde (5111) pms traverse le miroir (5112) En sortie du miroir (5112) les deux faisceaux issus du miroir semi-fransparent (5102) sont à nouveau superposes Les distances focales des lentilles (5103) (5105) (5108) (5110) sont égales La lame d'onde (5111) introduit une différence de chemin optique d'une demi -longueur d'onde enfre ses deux axes neutres Elle est positionnée de mamere à transformer le faisceau enfrant polansé dans le sens vertical en un faisceau polansé dans le sens honzontal La faible extension spatiale du faisceau fraversant les obturateurs (5104) (5109) permet l'utilisation d'obturateurs mecamques rapides, un faible déplacement étant suffisant pom obturer le faisceau -202-

Le faisceau issu de (5112) se dirige vers le miroir (5113) qui le réfléchit. Ce miroir est monté sur un positionneur deux axes (5114) semblable à celui représenté s les figures 2 et 3, qui permet de commander son orientation. Il est placé au foyer image des lentilles (5110) et (5105). Le faisceau issu de (5113) traverse ensuite la lentille (5250) dont le foyer objet est sur (5113), puis la lentille (5251) dont le foyer objet coïncide avec le foyer image de (5250). Il est ensuite réfléchi par un miroir partiellement transparent (5115) qui produit un faisceau de référence dirigé vers (5117). Le miroir semi-transparent (5117) sépare ensuite le faisceau de référence en un faisceau de référence droit FRD et un faisceau de référence gauche FRG. Le faisceau ayant fraversé (5115) traverse ensuite un miroir partiellement fransparent (5116) qui en sépare un faisceau spécifique FS. Le faisceau ayant traversé (5116) est ensuite séparé par un miroir semi-fransparent (5118) en un faisceau d'éclairage droit FED et un faisceau d'éclairage gauche FEG.

Le faisceau FRD traverse d'abord une lentille (5120) dont le foyer objet coïncide avec le foyer image de (5251), pms une seconde lentille (5121) dont le foyer objet coïncide avec le foyer image de (5120). Il est ensuite réfléchi par un miroir (5122) placé au foyer image de (5121) et monté sur une 'pile' piézoélectrique (5123) produisant des déplacements de l'ordre de la longueur d'onde, qui constitue le dispositif de décalage de phase, sur le même principe que l'élément (122) de la Fig.1. Il traverse alors un filtre (5124) permettant d'en ajuster l'intensité, puis une lentille (5125) dont le foyer objet est sm le miroir (5122). Il traverse ensuite un doublet de lentilles (5127)(5126) fonctionnant suivant le principe explicité en 8.1.4.1. , le foyer objet du doublet (5127)(5126) étant confondu avec le foyer image de (5125). Il est ensuite séparé en deux faisceaux par un miroir partiellement fransparent (5234). Un de ces faisceaux est ensuite réfléchi par le miroir (5235), traverse une lame d'onde (5239), puis est réfléchi en partie vers le CCD (5174) par le miroir partiellement fransparent (5236), la partie non réfléchie étant arrêtée par une surface absorbante (5237). L'aufre faisceau traverse une lame d'onde (5238), puis est réfléchi en partie vers le CCD (5171) par le miroir partiellement transparent (5232), la partie non réfléchie étant anêtée par une surface absorbante (5233). Les CCD (5174) et (5171) sont respectivement montés sm les caméras (5175) et (5172). Ils sont chacun dans un plan focal image du doublet (5126)(5127). Le faisceau FRG est réfléchi par un miroir (5252). Il traverse une lentille (5145) dont le foyer objet coïncide avec le foyer image de (5251), puis une seconde lentille (5146) dont le foyer objet coïncide avec le foyer image de (5145). Il est ensuite réfléchi par un miroir (5147) placé au foyer image de (5146) et monté sur une 'pile' piézoélectrique (5148) qui constitue le dispositif de décalage de phase. Il traverse alors un filtre (5149) permettant d'en ajuster l'intensité, puis une lentille (5150) dont le foyer objet est sur le miroir (5147). Il traverse ensuite un doublet de lentilles (5151)(5152) fonctionnant suivant le principe explicité en 8.1.4.1. , le foyer objet du doublet (5151)(5152) étant confondu avec le foyer image de (5150). Il traverse ensuite un dispositif d'ajustement en rotation du type décrit en 8.1.4.2. , constitué des miroirs (5219) (5220) et de l'ensemble (5221) constitué des miroirs (5214) (5215) (5216) (5217), et mobile en rotation autour d'un axe passant par le centre des miroirs (5220)(5214)(5217). Il est ensuite séparé en deux faisceaux par un miroir partiellement transparent (5244). Un de ces faisceaux est ensuite réfléchi par le miroir (5245), traverse une lame d'onde (5249), puis est réfléchi en partie vers le CCD (5198) par le miroir partiellement transparent (5246), la partie non réfléchie étant arrêtée par une surface absorbante (5247). L'autre faisceau traverse une lame d'onde (5248), puis est réfléchi en partie vers le CCD (5201) par le miroir partiellement fransparent (5242), la partie non réfléchie étant anêtée par -203-

une surface absorbante (5243). Les CCD (5198) et (5201) sont respectivement montés sur les caméras (5199) et (5202). Us sont chacun dans un plan focal image du doublet (5151)(5152).

Le faisceau FED est réfléchi par un miroir (5141), traverse un filtre (5142) permettant d'en ajuster l'intensité, une lentille (5143) dont le foyer objet coïncide avec le foyer image de (5251), un obtmateur (5144), et une lentille (5154) dont le plan focal objet coïncide avec le plan focal image de (5143) et dont le plan focal image coïncide avec l'image du diaphragme (5158) par la lentille (5157). Il est réfléchi par des miroirs (5153) et (5155), puis il est séparé en deux faisceaux par un miroir partiellement transparent (5156). L'un des faisceaux, dirigé vers (5157), est le faisceau principal et sera noté FED. L'autre faisceau, dirigé vers (5159), constitue l'indicateur inverse de FED et sera noté FEDI. Le faisceau FED traverse la lentille (5157), le diaphragme (5158), le dispositif (5176) représenté Fig. 63, traverse le diaphragme (5184) et la lentille (5183). Un plan focal de la lentille (5157) coïncide avec le plan focal image de l'objectif de microscope (4317) [dans le sens conventionnel d'utilisation de l'objectif, ici opposé au sens des rayons]. Un plan focal de la lentille (5183) coïncide avec le plan focal image de l'objectif de microscope (4319). Les diaphragmes (5158) et (5184) sont placés dans les plans ou les objectifs forment normalement les images de l'échantillon. Le faisceau issu de (5183) traverse le miroir semi-fransparent (5182). Il traverse la lentille (5188) dont le plan focal objet coïncide avec l'image du diaphragme (5184) par la lentille (5183). Il traverse ensuite une vitre (5191) de faible épaisseur, sur laquelle se trouve un point noir absorbant de quelques dizaines de micromètres de diamètre. Cette vitre est positionnée dans le plan focal image de la lentille (5188) et a pom fonction d'anêter le faisceau d'éclairage direct. Un diaphragme (5190) placé à peu près dans le même plan permet d'améliorer le filtrage des fréquences spatiales effectué par l'objectif de microscope. Le faisceau traverse ensuite un doublet (5192)(5193) dont le plan focal objet coïncide avec la vitre (5191). Il est ensuite séparé en deux faisceaux par un miroir semi-transparent (5240). Un des faisceaux issus de (5240) parvient au CCD (5198) après avoir fraversé le miroir partiellement transparent (5246). L'autre faisceau est réfléchi par le miroir (5241) et parvient au CCD (5201) après avoir fraversé le miroir partiellement fransparent (5242). Les CCD (5198) et (5201) sont chacun dans un plan focal image du doublet (5192)(5193).

Le faisceau FEDI traverse la lentille (5159) dont un plan focal coïncide avec le plan focal image de la lentille (5154). Il parvient au miroir (5160), optionellement obturé par l'obturateur (5161), qui le réfléchit. Il refraverse alors la lentille (5159) et est réfléchi par le miroir semi-fransparent (5156) vers la lentille (5162). Il traverse la lentille (5162) dont le plan focal objet coïncide avec l'image du diaphragme (5158) par la lentille (5157). Il traverse ensuite le miroir partiellement fransparent (5163). Il traverse ensuite une vitre (5165) de faible épaisseur, sur laquelle se trouve un point noir absorbant de quelques dizaines de micromètres de diamètre. Cette vitre est positionnée dans le plan focal image de la lentille (5162) et a pom fonction d'anêter le faisceau d'éclairage direct. Un diaphragme optionnel (5164) placé à peu près dans le même plan permet d'améliorer le filtrage des fréquences spatiales effectué par l'objectif de microscope. Le faisceau traverse ensuite une lentille (5166) dont le plan focal objet coïncide avec le plan focal image de (5162). Il est ensmte séparé en deux faisceaux par un miroir semi-fransparent (5230). Un des faisceaux issus de (5230) parvient au CCD (5174) après avoir traversé le miroir partiellement fransparent (5236). L'autre faisceau est réfléchi par le miroir (5231) et parvient au -204-

CCD (5171) après avoir traversé le miroir partiellement transparent (5232). Les CCD (5174) et (5171) sont chacun dans un plan focal image de la lentille (5166).

Le faisceau FEG est réfléchi par les miroirs (5119) (5204), traverse un filtre (5205) permettant d'en ajuster l'intensité, une lentille (5206) dont le foyer objet coïncide avec le foyer image de (5251), un obturateur (5207), un doublet (5179)(5178) dont le plan focal objet coïncide avec le plan focal image de (5206) et dont le plan focal image coïncide avec l'image du diaphragme (5184) par la lentille (5183). Il traverse ensuite un dispositif d'ajustement en rotation du type décrit en 8.1.4.2., constitué des miroirs (5177) (5180) et de l'ensemble (5181) constitué des miroirs (5210) (5211) (5212) (5213), et mobile en rotation autour d'un axe passant par le cenfre des miroirs (5180) (5210) (5213). Il est ensuite séparé en deux faisceaux par un miroir partiellement fransparent (5182). L'un des faisceaux, dirigé vers (5183), est le faisceau principal et sera noté FEG. L'aufre faisceau, dirigé vers (5185), constitue l'indicateur inverse de FEG et sera noté FEGI.

Le faisceau FEGI traverse la lentille (5185) dont un plan focal coïncide avec le plan focal image du doublet (5178) (5179). Il parvient au miroir (5187), optionellement obturé par l'obturateur (5186), qui le réfléchit. Il refraverse alors la lentille (5185) et est réfléchi par le miroir semi-transparent (5182) vers la lentille (5188). Le faisceau FS traverse d'abord un filtre (5128) puis une lentille (5129) et est réfléchi par un miroir

(5130). Il traverse alors un obturateur (5254) puis une lentille (5140) dont le foyer objet est confondu avec le foyer image de (5129). Il est ensuite séparé par un miroir semi-fransparent (5163) en un faisceau principal FS dirigé vers (5162) et un faisceau indicateur inverse dirigé vers (5189), qui sera noté FSI. Le faisceau FSI traverse une lentille (5189), est réfléchi sur un miroir placé au foyer objet de (5189) et pouvant êfre obturé par un obturateur (5209), refraverse la lentille (5189) et est à nouveau réfléchi par le miroir semi-fransparent (5163) en direction de (5164).

Chaque lentille utilisée est un achromat ou une lentille composée minimisant les abenations optiques.

Les principes de contrôle du faisceau indiqués en 8.1.1. et 8.1.4. restent valables et on a indiqué de la même manière que pour le quatrième mode de réalisation les plans d'espace (E) et de fréquence (F). L'onde de référence est ici parallèle, comme l'onde d'éclairage et comme dans le deuxième mode de réalisation. C'est pomquoi elle est ponctuelle dans les plans de fréquence et parallèle dans les plans d'espace comme l'onde d'éclairage. Le faisceau spécial FS est par contre ponctuel dans les plans d'espace et parallèle dans les plans de fréquence, comme l'était l'onde de référence dans le quatrième mode de réalisation.

Beaucoup d'éléments sont montés sm des positionneurs permettant d'en ajuster la position dans une phase de réglage.

Les ensembles (5181) et (5221) sont montés s des positionneurs en rotation, conformément à leur mode de fonctionnement explicité en 8.1.4.2.

Les aufres miroirs, miroirs partiellement transparents et miroirs piézoélectriques sont montés sur des positionnems angulaires permettant d'en ajuster l'orientation. Les lentilles qui seront réglées en 9.5. sont montées sur des positionneurs une dimension permettant un déplacement dans le sens de l'axe optique.

Chaque doublet est constitué de deux lentilles. Il transforme un plan de fréquences situé d'un coté du doublet en un plan d'espace situé de l'autre coté du doublet. La lentille située du coté du plan d'espace est montée -205-

sur un positionneur permettant une franslation dans le sens de l'axe optique Ce positionneur est lm-même monte sur un second positionneur permettant également une translation dans le sens de l'axe optique La seconde lentille est montée directement sur ce second positionneur

L'objectif (4317) est monté s un positionneur à deux dimensions permettant un positionnement dans un plan orthogonal à l'axe optique L'objectif (4319) est monté sur un dispositif de focalisation L'échantillon (4318) est monté sur un positionneur trois axes en translation

Les CCD sont montés sur des positionneurs un axe en rotation et trois axes en franslation, permettant une rotation auto de l'axe optique et trois degrés de liberté en translation

Le trait en pointillés (5203) sépare deux zones Les éléments situes a gauche de ce trait sont montes sur une table directement liée au sol, sans amortissement Les éléments situes a droite de ce trait ou sur la Fig 74 sont montés s une table optique convenablement isolée des vibrations Les deux tables sont au même niveau Les vitres (5165) et (5191), les diaphragmes (5164) et (5190), et les obtmatems (5144) (5207) sont les seules exceptions à cette règle Chacune des vitres (5165) et (5191) est montée sur un positionneur deux axes en franslation motonse permettant un déplacement dans un plan orthogonal à l'axe optique, lui-même monte sur un positionneur manuel permettant une franslation dans le sens de l'axe optique, lui-même directement lie au sol Le système de positionnement deux axes en translation doit être précis et ne pas entraîner de déplacements parasites en rotation de la vitre En effet, de tels déplacements entraîneraient des vanations de phase pouvant dans certains cas porter préjudice à la qualité des images prodmtes

Chacun des obturateurs (5144) (5207) est hé directement au sol Chacun des diaphragmes (5164) (5190) est lie au sol par l'intermédiaire d'un positionneur 3 axes en franslation et 1 axe en rotation autour de l'axe optique

Afin de pouvoir lier au sol vitres et obturateurs, une construction mécanique ngide est employée pour obtemr un support stable situe au-dessus de la table optique, lie au sol et non a la table optique, et auquel on peut fixer les obturateurs ainsi que les vitres, par l'intermédiaire de leurs positionneurs Les diaphragmes (5164) et (5190) sont constitués comme indiqué Fig 82 Le diaphragme (5710) a une ouverture circulaire (5711), une pièce (5712) permettant d'occulter une portion de surface supplémentaire dans cette ouverture

Sur chaque caméra on a indiqué le repère qui est utilisé pour expnmer les coordonnées des pixels du CCD conespondant Sur chaque lame d'onde, on a indique un repère Le vectem directeur de ce repère dans le plan de la figme est note 7 et le vecteur directem de ce repère dans le plan orthogonal a celui de la figure est note y La lame d'onde (5111) a un axe neutre dingé selon z + y Les autres lames d'onde ont des axes neutres

dinges selon 7 cos — + 7 sin — 8 8

Dans le cas ou ce microscope fonctionne dans le domaine des ultraviolets

- L'ensemble des composants non polansants traverses par la lumière, c'est-à-dire les lentilles, y compns celles des objectifs, les vitres, et les substrats de miroirs semi-transparents, peuvent êfre réalisés en un silice Des objectifs en silice ou en quartz existent chez divers fabncants

- Les miroirs et miroirs semi-transparents doivent être prévus spécialement pour l'UV -206-

- Les lames d'onde sont par exemple en quarz.

- Le laser est par exemple un laser à excimère. En mode puisé, les puises doivent être synchronisés avec l'acquisition d'images, par exemple à 1 image par puise.

9.3. Dimensionnement.

On note: /, : distance focale de la lentille (5162) ou de la lentille (5188) f₂ : distance focale de la lentille (5166) ou du doublet (5192,5193)

/₃ : distance focale de la lentille (5157) ou de la lentille (5183) p_c distance entre les cenfres de deux pixels adjacents, sur les capteurs CCD

2 N _pιx : dimension latérale en pixels d'un capteur CCD. o: ouverture numérique d'un objectif de microscope g: grandissement d'un objectif de microscope f₀ : distance focale d'un objectif de microscope. d₀ : distance enfre la lentille (5157) et le diaphragme (5158).

/, : largeur du diaphragme (5164) ou (5190)

La lentille (5157) doit avoir son plan focal objet confondu avec le plan focal image de l'objectif de microscope, et se trouve à une distance d₀ de l'image de l'objectif. On vérifie que ceci implique: f = gf₀ +d₀ f

L'ouverture du faisceau à l'arrivée sur le CCD est: a = — - —

Λ s

La période d'échantillonnage nécessaire sur le CCD doit être supérieure à p_c et vaut par application du critère de

„ . λ 1

Nyqmst:

2 2a

On obtient donc: _{Pe ≤} Ù, 4 /, o d_'o_ù: _< - JL

Λ ⁴Pc °

Le rapport — doit donc êfre égal ou légèrement inférieur à , chacune des valems /, et /, étant par

Λ *Pc o ailleurs suffisante pour éviter l'abenation sphérique.

La largem /, du diaphragme (5164) doit filtrer uniquement les fréquences supérieures à l'ouverture nominale de l' objectif. On doit donc avoir ] = 2/ — . g -207-

Le diamètre du faisceau incident sur le miroir (5113) doit être tel que les vanations de direction nécessaires puissent effectivement être réalisées de mamere reproductible à l'aide du système de positionnement de ce miroir On note p_a le pas angulaire de déplacement du miroir, c'est-à-dire la plus petite vanation de l'angle d'onentation de ce miroir qm pmsse êfre effectuée, de mamere reproductible, par le système de positionnement de ce miroir On note D_dιaph le diamètre d'ouverture du diaphragme (5158) et D_mr le diamètre du faisceau incident

s le miroir (5113) On vénfie alors que la présente condition s'expnme par p « — ou le signe gN_pa D„ mir

-. - , 1 o L⁾ _{d h}

« signifie « très infeneur », soit par exemple p_a < -

W gN_pa D_mr

En dehors des cntères précédents une assez grande liberté existe pour le choix des distances focales des autres lentilles Les cntères de dimensionnement appliqués sur la trajectoire des faisceaux FEG,FED,FRG,FRD sont les suivants

(1) La succession des plans d'espace et de fréquence doit être telle que précisé sur le schéma Cette succession de plans d'espace et de fréquence constitue la méthode utilisée pour maîtnser la trajectoire et l'ouverture du faisceau comme précise en 8 1 1

(2) Les faisceaux d'éclairage et de référence, en l'abscence de diaphragme utilisé entre le miroir (5113) et les capteurs CCD, doivent avoir le même diamètre à lem arnvée sur les capteurs De mamere équivalente, ils doivent avoir la même ouverture, l'ouverture étant ici l'angle entre les faisceaux parallèles parvenant sur les CCD pour deux positions différentes du miroir (5113)

(3) Les distances focales des lentilles doivent êfre suffisantes pour éviter l'abenation sphénque

(4) Les distances focales des différentes lentilles sont adaptées de manière a respecter les contraintes d'encombrement

Par exemple, si le diamètre du faisceau est £>, au niveau de (5122) et doit êfre D₂ a son arnvee sur le captem CCD, et si la distance enfre (5122) et (5174), en suivant la trajectoire prévue pour le faisceau, est L, alors si f_α et f_b sont respectivement les distances focales de la lentille (5125) et du doublet (5126)(5127), et compte

D- f_h tenu des pnncipes exposés en 8 1 1 , le cntère (1) se traduit par — = — et le cntere (4) se traduit par fα

L D, L D₂ 2f_α +2f_b = L , d'où on tire f_α = ! — et f_b = —

^{J α Jb J α} 2 D + D₂ ^{J b} 2 D +D₂

L'ensemble du système sera réglé de mamere à ce que lorsque le faisceau FEG pénètre dans l'objectif (4317) en étant dingé selon l'axe optique, sa direction à l'ainvée sur (5174) ou (5171) soit confondue avec celle de l'onde de référence Lorsque le miroir (5113) sera déplacé à partir de cette position cenfrale, la direction du faisceau de référence sera modifiée dans un sens et la direction du faisceau d'éclairage sera modifiée en sens opposé, c'est-à-dire que dans un plan de fréquence les points conespondants aux faisceaux FEG et FRD resteront symétnques par rapport au point conespondant au faisceau d'éclairage lorsque il entre dans l'objectif smvant la direction de l'axe optique Le maintien de cette symétne est rendu possible par -208-

- la configuration générale de l'appareil. En effet, en reprenant le schéma de la Fig.67, lorsque le faisceau passe d'un plan d'espace (4801) à un second plan d'espace (4804), sa direction est inversée. Dans la configuration adoptée, la différence entre le nombre de plans d'espace fraversés par le faisceau d'éclairage et le nombre de plans d'espace fraversés par le faisceau de référence est un nombre impair, et le faisceau d'éclairage est donc inversé par rapport au faisceau de référence.

- le respect de la condition (3), qui signifie que le déplacement du faisceau de référence et le déplacement du faisceau d'éclairage sont de même amplitude.

Cette symétrie de déplacement permet de simplifier les algorithmes et la procédure de réglage.

Les critères de dimensionnement appliqués sm la frajectoire du faisceau FS sont les suivants:

- le faisceau FS doit être parallèle à son arrivée sur (5163)

- sa largeur à son arrivée sur (5163) doit être égale à celle d'un faisceau qui serait ponctuel dans le plan (5158) et dont l'ouverture serait limitée par l'ouverture de l'objectif. Cette largeur, à l'arrivée du faisceau sur o

(5163), vaut environ / g

9.4. Obtention d'une représentation fréquentielle bidimensionnelle simple et détermination du maximum

On entend ici par représentation fréquentielle bidimensionnelle simple une représentation pour laquelle il n'a pas été tenu compte des polarisations, qui peut êfre obtenue sans connaître les valeurs de K et du point d'impact direct de l'onde d'éclairage, à partir d'un seul capteur. Les étapes de réalisation d'une telle représentation, pour une onde d'éclairage donnée, sont les suivantes:

Etape 1- acquisition:

(5104) est ouvert et (5109) est fermé, de sorte que la polarisation de l'onde d'éclairage est fixe. d est défini comme suit, le décalage de phase étant effectué avec les actionneurs piézoélectriques (5123)

(5148) préalablement calibrés:

indice décalage de phase (degrés)

0 +120

1 0

2 -120

L'image est obtenue à partir d'un quelconque des capteurs CCD. Lorsque elle est obtenue à l'aide de (5171) ou (5201) les lames de phase (5238) et (5248) doivent être supprimées. On obtient ainsi le tableaux MF d][i,j] ou i ety varient de 0 à 2N _pιx - 1 . -209-

Etape 2- Calcul des représentation spatiales bidimensionnelles Le programme effectue

MG[z,y] = ^(2MF[0][z,y]-MF[l][z,y]-MF[2][z,y]) + 7^(MF[l][z,y]- MF[2][z,y])

Etape 3- transformation de Founer

La transformée de Founer du tableau MG suivant les indices z ety est effectuée Ceci génère la représentation fréquentielle MH[ι, y] ou p prend les valeurs 0 ou 1 et ou z ety vanent de 0 à 2N - 1 Dans certains cas, cette transformation de Founer peut ne pas être effectuée on obtient alors une représentation spatiale au heu d'une représentation fréquentielle

Lorsque l'image est à peu près poncmelle et que les coordonnées et la valeur du maximum doivent êfre connus, le programme de calcul du maximum procède comme indiqué en 7 3 3 1 , à ceci près que le tableau S a maintenant pour dimensions 2N_pιx x 2N_pjx et est le tableau ME calculé comme ci-dessus II obtient ainsi les coordonnées imaxjmax du maximum sur le capteur concerné L'image est considérée comme cenfrée si {imax, jmax) = ( N _pιx , N _pιx I et elle est considérée comme parfaitement ponctuelle lorsque la valeur du maximum obtenue est la plus élevée possible

9.5. Réglage des positionneurs manuels 9.5.1. Critères de réglage: On désigne par FEP un faisceau d'éclairage plan enfrant dans l'objectif (4317) en étant dingé selon l'axe optique et parvenant aux capteurs (5174) (5171) Les réglages visent à s'assmer que

(1) les faisceaux suivent la trajectoire prévue

(2) les faisceaux d' eclmrage et de référence sont ponctuels dans les plans de fréquence et parallèles dans les plans d'espace

(3) les faisceaux FS et FSI sont ponctuels dans les plans d'espace

(4) les faisceaux FS et FSI ont des images ponctuelles et centrées sur les capteurs (5171) (5174) (5201) (5198)

(5) un faisceau parallèle FEP enfrant dans un objectif de microscope (4317) et dingé selon l'axe optique ait une image ponctuelle et cenfrée sur les représentation fréquentielles bidimensionnelles obtenues par la procédure 9 4 a partir des images reçue sur les capteurs (5174) ou (5171)

(6) Lorsque l'image du faisceau FEG sur les représentation fréquentielles bidimensionnelles obtenues par la procédme 9 4 à partir des images reçue sur les capteurs (5174) ou (5171) est ponctuelle et cenfrée, alors l'image du faisceau FEGI sur les représentation fréquentielles bidimensionnelles obtenues par la procédure 9 4 a partir des images reçue s les captems (5198) ou (5201) est ponctuelle et cenfrée (7) Quelle que soit la position du miroir (5113 ) -210-

- les points conespondants aux faisceaux FRD,FEDI,FEG,FEP sur les représentation fréquentielles bidimensionnelles obtenues par la procédme 9 4 à partir des images reçue sur les captems (5174) ou (5171) sont disposés comme indiqué sur la Fig 78

- les points conespondants aux faisceaux FRG,FEGI,FED sur les représentation fréquentielles bidimensionnelles obtenues par la procédme 9 4 à partir des images reçue sur les capteurs (5198) ou (5201) sont disposés comme indiqué s la Fig 79

Pom expliciter d'avantage cette condition on notera de la même manière un faisceau et le point conespondant sur un des capteurs et on note (A,B) le vecteur reliant les points A et B Cette condition signifie que (i) FRD et FEDI sont sur une même droite verticale

(îi) FEDI et FEG sont sur une même droite honzontale

(iii) FEP est le milieu de FRD et FEG

(îv) (FRG,FEGI)=(FRD,FEDI)

(v) (FEGI,FED)=(FEG,FEDI)

Les réglages découlent naturellement du respect des conditions (1) à (7) La suite d'étapes de réglage détaillée ci-après constitue un example d'ordonnancement de ces réglages

9.5.2. Etapes de réglage. Dans certaines phases de réglage on utilisera un faisceau parallèle provisoire noté FEP Ce faisceau est dénvé directement du laser (5100) à l'aide d'un miroir semi-transparent et dingé vers l'entrée de l'objectif (4317). auquel il parvient en étant dingé selon l'axe optique, et qu'il traverse avant de se dinger vers les capteurs (5171) et (5174)

La mise en place de FEP nécessite la suppression provisoire de l'objectif (4319) Les parties du système dites « liées au sol » sont en réalité liées a un support plan ordinairement pose sur le sol ou sur une table sans précaution particulière, la table optique étant elle-même posée, par l'intermédiaire d'amortisseurs, sur ce support plan Pendant l'ensemble des réglages décnts dans le présent paragraphe, la table optique sera solidarisée du support plan, c'est-à-dire fixée sans amortissement et sans liberté de mouvement au support plan, dans une position aussi proche que possible de la position de la table optique lorsqu'elle est « libre » sur ses amortisseurs Le support plan lui-même sera fixé sur une seconde table optique Ce dispositif permet de générer des figures d'interférence utilisant le faisceau FEP, ce qui serait impossible du fait des vibrations si ledit support plan était fixé directement au sol comme dans la phase de fonctionnement normal du microscope

L'utilisation des faisceaux FEG,FED,FEGI,FEDI,FS,FSI se commande par les obturateurs (5144) (5207) (5218) (5209) (5161) (5186) (5254) Des obturateurs non représentes permettent également de suppnmer les faisceaux FRD et FRG

S une image de dimensions 2N_pιx x 2N _pιx un point sera dit centre si ses coordonnées sont

( yN* pix ' N^ * pix ) J

Les étapes suivantes constituent un exemple d'ordonnancement des réglages -211-

Etape 1: Préréglage

Un préréglage est effectué pendant lequel le miroir est positionné en une position centrale et la frajectoire du faisceau est contrôlée avec un diffuseur. Pendant ce préréglage, la position de l'ensemble des éléments est réglée de mamere à ce que le faisceau suive approximativement la trajectoire prévue. Par exemple, à la sortie de (5112) on vérifie la bonne superposition spatiale des faisceaux. Enfre (5156) et (5159) on vérifie que le faisceau réfléchi a la même extension spatiale que le faisceau arrivant.

Pendant l'ensemble du réglage qui suit, ce préréglage pourra êfre constamment vérifié ou affiné, toujoms à l'aide du diffuseur, sans que cela soit rappelé. Si on travaille dans le domaine de l'UV, il est dangereux de visualiser directement la lumière. On remplace alors le diffuseur par un CCD auxiliaire, et on observe sur un écran la zone illuminée sur ce CCD au lieu de l'observer directement.

Etape 2: Réglage en franslation de la lentille (5105)

Le fréquencemètre est positionné derrière la lentille (5105) et la position de celle-ci est réglée pour avoir une image poncmelle sur le fréquencemètre.

Etape 3: Réglage en franslation de la lentille (5110)

Le fréquencemètre est positionné derrière la lentille (5110) et la position de celle-ci est réglée pour avoir une image ponctuelle sur le fréquencemètre.

Etape 4: Réglage de l'orientation du miroir semi-transparent (5112).

Le fréquencemètre est utilisé et positionné derrière (5112). Les obturateurs (5104) et (5106) étant ouverts et fermés alternativement, l'image intégrée produite sur le capteur du fréquencemètre consiste en deux points issus de chacun des faisceaux superposés. La position angulaire de (5112) est ajustée de manière à superposer ces deux points.

Etape 5: réglage en translation de la lentille (5251)

Le fréquencemètre est positionné derrière la lentille (5251) et la position de celle-ci est réglée pour avoir une image ponctuelle sur le fréquencemètre.

Etape 6: réglage en translation de la lentille (5121)

Etape 7-Réglage en franslation du doublet (5127) (5126)

Le fréquencemètre est placé derrière (5127) sur la trajectoire du faisceau et le doublet est déplacé de mamere à ce que l'image sur le CCD du fréquencemètre soit ponctuelle. -212-

Etape 8-Réglage en franslation de la lentille (5146).

Ce réglage est effectué à l'aide du fréquencemètre, placé derrière (5146). L'image sur le CCD du fréquencemètre doit être aussi ponctuelle que possible.

Etape 9-Réglage en franslation du doublet (5151) (5152):

Le fréquencemètre est placé derrière (5152) sur la trajectoire du faisceau et le réglage est effectué de mamere à ce que l'image s le CCD du fréquencemètre soit ponctuelle.

Etape 10-Réglage en translation de la lentille (5140) Le réglage est effectué à l'aide du fréquencemètre placé derrière (5140). L'image sur le CCD du fréquencemètre doit êfre ponctuelle.

Etape 11 -Réglage en franslation de la lentille (5154)

Le fréquencemètre est placé derrière (5154). L'image sur le CCD du fréquencemètre doit être ponctuelle.

Etape 12-Réglage en translation du doublet (5178) (5179)

Le fréquencemètre est placé par exemple derrière (5213). L'image sur le CCD du fréquencemètre doit êfre ponctuelle.

Etape 13 -Réglage en translation de la lentille (5159)

Le fréquencemètre est placé entre (5156) et (5162). La position de (5159) est réglée pour que l'image de FEDI sur le CCD du fréquencemètre soit ponctuelle.

Etape 14-Infroduction d'un faisceau d'éclairage provisoire parallèle FEP. Ce faisceau a les caractéristiques explicitées au début du présent paragraphe.

Etape 15-Réglage en franslation de la lentille (5157)

Le fréquencemètre est placé entre (5156) et (5162). La position de (5157) est réglée pour que l'image de FEP sm le capteur CCD du fréquencemètre soit ponctuelle.

Etape 16-Réglage de l'orientation du miroir semi-transparent (5156)

La position de (5156) est réglée de mamere à ce que FEP et FEDI aient des images ponctuelles confondues sur le fréquencemètre.

Etape 17-Réglage en translation de la lentille (5162) .

Un CCD est provisoirement mis en place à l'emplacement de (5158). FS est utilisé. (5162) est réglé pour que l'image de FS sm ce CCD provisoire soit ponctuelle. -213-

Etape 18: Réglage de l'orientation du miroir partiellement fransparent (5163)

Le CCD reste utilisé avec le faisceau FS. (5163) est réglé pour que l'image de FS sm ce CCD provisoire soit cenfrée par rapport à l'emplacement du diaphragme.

Etape 19-Réglage en franslation de la lentille (5189)

Le fréquencemètre est positionné enfre (5163) et (5164). (5189) est réglé de mamere à obtenir une image ponctuelle de FSI sur le fréquencemètre.

Etape 20-Réglage en translation de la lentille (5166) FEDI est utilisé. Le fréquencemètre est positionné sur la frajectoire du faisceau derrière (5166) et la position de (5166) est ajustée de mamere à ce que l'image de FEDI sur le fréquencemètre soit ponctuelle.

Etape 21 -Réglage en franslation 3 axes des capteurs (5174) et (5171).

On utilise FSI et FRD. Un programme calcule la représentation fréquentielle bidimensionnelle reçue sur chaque CCD (5174) ou (5171) suivant la procédure décrite en 9.4., mais en n'effecmant pas l'étape 3 de transformation de Fourier. La position des CCD est ajustée pour obtenir à partir de chaque CCD une image ponctuelle centrée.

Etape 22-Réglage de l'orientation du miroir partiellement fransparent (5236) On utilise FRD et FEDI. Un programme calcule la représentation fréquentielle bidimensionnelle reçue sm le CCD (5174) suivant la procédure décrite en 9.4.

La position de (5236) est réglée de mamere à ce que la représentation fréquentielle bidimensionnelle obtenue sur chaque CCD soit cenfrée.

Etape 23-Réglage de l'orientation du miroir partiellement fransparent (5232)

On utilise FRD et FEDI. Un programme calcule la représentation fréquentielle bidimensionnelle reçue sm le CCD (5171) suivant la procédure décrite en 9.4.

La position de (5232) est réglée de mamere à ce que la représentation fréquentielle bidimensionnelle obtenue sm chaque CCD soit cenfrée.

Etape 24-Réglage de la distance focale du doublet (5126) (5127) et réglage en rotation auto de l'axe optique des captems (5174) (5171).

Les faisceaux FRD, FEP sont utilisés. Un programme calcule la représentation fréquentielle bidimensionnelle reçue sur chaque CCD (5174) ou (5171) suivant la procédme décrite en 9.4. La position initiale du miroir (5113), dans laquelle ont été effectués les réglages précédents, est la position cenfrée. Elle doit êfre emegisfrée. On l'appellera position C. -214-

Le miroir (5113) est déplacé de mamere telle que, sur la représentation fréquentielle bidimensionnelle obtenue s chaque CCD (5174) ou (5171) le point conespondant à FEP soit excentré au maximum Cette position du miroir est emegisfrée et sera réutilisée par la smte On l'appellera position E

Le faisceau FEDI est introduit Les positions des différents éléments sont ajustées pour que sur chacune des deux représentations obtenues

-les coordonnées des points associés à FRD (point central) et FEDI soient conectes par rapport a celles du point associé à FEP, c'est-à-dire symétnques par rapport à l'axe honzontal passant par le point associé à FEP, comme indiqué s la Fig 78 ou (5501) représente le contour de la zone bidimensionnelle obtenue à l'issue de la procédure déente en 9 4 et ou (5502) représente la limite définie par l'ouverture de l'objectif

- les images de FEP et FEDI restent ponctuelles Plus précisément

- la focale de l'ensemble (5126) (5127) est réglée pour que la distance entre le point associé à FEP et le point associé à FRD soit égale à la distance entre le point associé à FEP et le point associe à FEDI Comme les changements de position des lentilles du doublet peuvent entraîner une defocalisation, les positions des lentilles du doublet sont également ajustées pom que l'image de FEP et FEDI reste ponctuelle

- la position en rotation des capteurs est réglée pour que la droite passant par les points associés respectivement à FRD et FEDI soit verticale

Du fait de la non-coïncidence de l'axe de rotation des CCD avec le point cenfral de ces capteurs, ce réglage en rotation peut entraîner une perte du réglage en translation des CCD C'est pourquoi, à l'issue de cette opération, le miroir est ramené en position C et l'étape 21 est à nouveau effectuée Les étapes 21 et 24 peuvent être ainsi répétées en séquence un certain nombre de fois de mamere à converger vers un réglage conect des capteurs en translation et en rotation

Etape 25-Réglage en translation de la position des objectifs (4319) et (4317)

Le miroir (5113) est ramené à sa position d'ongme (position C), le faisceau FEP est suppnme, les objectifs sont remis en place Un CCD provisoire est positionné à l'emplacement de (5184) Le faisceau FS est seul utilisé Une lame transparente est utilisée comme objet La position des objectifs est ajustée pour obtemr une image ponctuelle et centrée

Etape 26-Réglage en translation de la lentille (5183)

Le faisceau FED est utilisé Le fréquencemètre est positionné dernere (5183) sur la trajectoire de FED (5183) est réglé pom que FED ait une image ponctuelle sur le fréquencemètre

Etape 27-Réglage en franslation du doublet (5178) (5179) et réglage de l'onentation du miroir semi-fransparent (5182)

Les faisceaux FEG et FRD sont utilisés Une représentation fréquentielle bidimensionnelle est obtenue a partir des CCD (5174) ou (5171) par la procédure 9 4 -215-

La position conjointe du doublet (5178) (5179) est réglée de mamere à ce que la représentation obtenue soit ponctuelle. Le miroir semi-transparent (5182) est réglé pour que cette image soit cenfrée.

Etape 28-Réglage de focale du doublet (5178)(5179), réglage en rotation de l'ensemble (5181), et réglage de l'orientation du miroir semi-fransparent (5182).

Les faisceaux FRD, FEG sont utilisés. Une représentation fréquentielle bidimensionnelle est obtenue à partir des CCD (5174) ou (5171) par la procédme 9.4. Les opérations ol et o2 ci-dessus doivent être répétées dans cet ordre un certain nombre de fois pour converger vers un réglage conect.

ol: Le miroir (5113) est mis en position C et le miroir semi-transparent (5182) est réglé pour que le point de la représentation fréquentielle conespondant à FEG soit centré.

o2:Le miroir (5113) est mis en position E (excentrée).

Les différents éléments sont réglés pour que le point conespondant à FEG obtenu s l'image soit conectement positionné par rapport aux aufres. Le point conespondant à FEP est connu par le réglage effecmé à l'étape 24. Le point conespondant à FEG doit être symétrique du point correspondant à FRD par rapport au point conespondant à FEP comme indiqué sur la Fig. 78.

Plus précisément:

- la focale du doublet (5178)(5179) est réglée pour que la distance enfre les points conespondant à FRD et FEP soit égale à la distance entre les points conespondant à FEP et FEG. Comme les changements de position des lentilles du doublet peuvent entraîner une défocalisation, les positions des lentilles du doublet sont également ajustées pom que l'image de FEG reste ponctuelle.

- la position en rotation de l'ensemble (5181) est réglée pour que les points FRD, FEP et FEG soient alignés.

Etape 29-Réglage en translation de la lentille (5185)

Le miroir (5113) est ramené en position C. Le fréquencemètre est positionné entre (5182) et (5188). La position de (5185) est réglée pour que l'image de FEGI sm le fréquencemètre soit ponctuelle.

Etape 30-Réglage en translation de la lentille (5188)

Le faisceau FS est utilisé. Le fréquencemètre est positionné derrière (5188). La position de (5188) est réglée pom que FS ait une image ponctuelle sur le CCD du fréquencemètre.

Etape 31-Réglage en franslation du doublet (5192)(5193) FEGI est utilisé. Le fréquencemètre est positionné derrière (5193). La position conjointe de (5192)(5193) est réglée pour que FEGI ait une image ponctuelle sur le CCD du fréquencemètre.

Etape 32-Réglage en translation 3 axes des capteurs (5198) et (5201). -216-

On utilise FS et FRG. Un programme calcule la représentation fréquentielle bidimensionnelle reçue sur chaque CCD (5198) ou (5201) suivant la procédme 9.4. mais en n'effectuant pas l'étape 3 de fransformation de Fourier. La position des CCD est ajustée pour obtenir à partir de chaque CCD une image ponctuelle centrée.

Etape 33-Réglage de l'orientation du miroir partiellement fransparent (5246)

On utilise FRG et FEGI. Un programme calcule la représentation fréquentielle bidimensionnelle reçue s le CCD (5198) suivant la procédme 9.3.1.

La position de (5246) est réglée de mamere à ce que la représentation fréquentielle bidimensionnelle obtenue soit centrée.

Etape 34-Réglage de l'orientation du miroir partiellement transparent (5242)

On utilise FRG et FEGI. Un programme calcule la représentation fréquentielle bidimensionnelle reçue sm le CCD (5201) smvant la procédme 9.3.1.

La position de (5242) est réglée de mamere à ce que la représentation fréquentielle bidimensionnelle obtenue soit cenfrée.

Etape 35 -Réglage

- de la focale du doublet (5151) (5152)

- de la focale du doublet (5192)(5193) - de l'ensemble (5212) en rotation

- des CCD (5198) et (5201) en rotation autom de l'axe optique

Les faisceaux FRG, FED, FEGI sont utilisés. Le miroir (5113) est remis en position E (excentrée). Un programme calcule la représentation fréquentielle bidimensionnelle reçue sur les CCD (5198) (5201) suivant la procédure 9.3.1.

Les positions de l'ensemble des éléments sont ajustées de mamere à ce que:

-les coordonnées des points associés à FRG, FED, FEGI soient conectes, soit avec les notations utilisées en 9.5.1. : (FRG,FEGI)=(FRD,FEDI) et (FEGI,FED)=(FEG,FEDI) ou les positions des points FRD,FEG,FEDI sont celles qui ont été obtenues lors des étapes 24 et 28, l'ensemble de ces points étant représentés sur les Fig.78 et 79.

- les images de FEP et FEG restent ponctuelles

Plus précisément:

La focale du doublet (5192)(5193) est ajustée pour que la distance entre les points conespondant à FEGI et à FED soit conecte . Comme les changements de position des lentilles du doublet peuvent entraîner une défocalisation, les positions des lentilles du doublet sont également ajustées pour que l'image de FED et FEGI reste ponctuelle. -217-

La position en rotation des CCD (5198) et (5201) est réglée pour que le segment FEGI-FED soit horizontal.

La focale du doublet (5151) (5152) et la position de l'ensemble (5151) (5152) sont réglés pom que la distance enfre FRG et FEGI soit conecte et pom que la droite liant ces points soit verticale. Comme les changements de position des lentilles du doublet peuvent entraîner une défocalisation, les positions des lentilles du doublet sont également ajustées pour que l'image de FEGI reste ponctuelle.

A l'issue de ce réglage le miroir (5113) est ramené en position C.

Les étapes 32 à 35 peuvent être recommencées dans cet ordre un certain nombre de fois pour converger vers les positions conectes. En effet l'étape 35 est entraîne un dérèglement de la position centrale des CCD et de l'orientation des faisceaux de référence utilisés en position C.

Etape 36: réglage de la position de la vitre (5165) dans le sens de l'axe optique.

Les faisceaux FSI et FRD sont utilisés. Une image en fréquence est obtenue par la procédure 9.4.1. à partir des capteurs (5171) (5174). Sm cette image en fréquence, le point noir de la vitre est visible en sombre sur fond clair. La position de la vitre est réglée pour que le point noir se détache du fond avec le meilleur contraste possible.

Etape 37: réglage de la position de la vitre (5191) dans le sens de l'axe optique. Les faisceaux FS et FRG sont utilisés. Une image en fréquence est obtenue par la procédure 9.4. à partir des captems (5201) (5198). Sur cette image en fréquence, le point noir de la vitre est visible en sombre sur fond clair. La position de la vitre est réglée pom que le point noir se détache du fond avec le meilleur contraste possible.

Etape 38: réglage en rotation autour de l'axe optique et translation 2 axes des diaphragmes (5164) et (5190) Préalablement à ce réglage le miroir (5113) est ramené en position cenfrale.

Ces diaphragmes ont la forme indiquée Fig.82. Ils sont réglables en translation sur 3 axes et en rotation autom de l'axe optique. Les faisceaux FS,FSI,FRG,FRGI sont utilisés pour leur réglage. Une image en fréquence est obtenue par la procédure 9.4. à partir de chacun des capteurs (5174) (5198). Us sont réglés en translation pour avoir une image centrée sur chaque capteur et aussi nette que possible sans toutefois gêner le mouvement de la vitre mobile (5165) ou (5191) qui lem est associée. Ils sont réglés en rotation pour que les coordonnées du point occulté par la pièce mobile (5712) soient les mêmes sur l'image obtenue à partir de chaque capteur. Ces coordonnées seront par la suite notées (z₀ , j₀ ) . A l'issue de ce réglage le programme détermine également le rayon R_ouv de l'image obtenue sur chaque capteur, qui caractérise la zone accessible par les faisceaux non anêtés par l'ouverture de l'objectif. Il est préférable de sous-estimer légèrement R_om . -218-

A la suite de cette procédure de réglage, les objectifs sont positionnés de sorte que FS ait une image ponctuelle et cenfrée sur chaque capteur. Ce réglage ne sera pas modifié jusqu'à introduction de l'échantillon.

9.6. Commande du déviateur de faisceau. A chaque position du miroir conespond un maximum (point FE sur la Fig.75) de l'image en fréquence obtenue par la procédure 9.4. Le point FR conespondant à l'onde de référence est au cenfre de l'image. Le point FO conespondant au centre optique est le milieu de FR et FE. Les coordonnées du point FE dans un repère centré s FO sont l'équivalent des coordonnées du point d'impact direct de l'onde de référence par rapport au centre optique dans le troisième mode de réalisation. L'indice/? caractérisera le coté droit ou gauche du microscope avec/?=0 pour les capteurs (5171)(5174) et p=l pour les captems (5198)(5201).

Le système de positionnement du miroir de déviation de faisceau est constitué de deux actionneurs ne présentant pas d'hystérésis. Par exemple on peut utiliser un positionnement par moteurs pas à pas comme décrit dans le premier mode de réalisation. Si l'ensemble est réalisé avec suffisamment de soin, un tel système peut présenter une hystérésis frès faible. La position du miroir est alors caractérisée par le nombre de pas effecmé par chaque moteur depuis un point cenfral. On peut aussi utiliser des positionneurs piézoélectriques équipés d'une boucle de rétroaction permettant un contrôle précis de leur allongement, auquel cas le nombre de pas de chaque motem est remplacé par l'allongement de chaque actionneur. Il est également possible d'utiliser des positionneurs piézoélectriques sans boucle de rétroaction, toutefois ceux-ci présentent une forte hystérésis qui impose de déterminer les tensions utilisées sur une trajectoire donnée, une détermination point à point des valeurs de position du miroir, comme effectuée ci-dessous, n'étant pas possible.

La commande des moteurs est définie par deux tableaux tabl et tab2 ou tabl\p,i,j] ( resp. tab2[p,i,j]) est le nombre de pas que doit effectuer l'actionneur 1 (resp.2) pour que le point FE ait les coordonnées (z,y) sur l'image obtenue par la procédure 9.4. à partir d'un capteur indicé par/?, dans un repère dans lequel FO a pour

N pix N pix coordonnées Les actionneurs sont numérotés de sorte que l'actionneur 1 détermine un

mouvement selon l'axe z et l'actionneur 2 détermine un mouvement selon l'axey.

La détermination des tableaux tabl et tab2 se fait en l'abscence d'objet (lame transparente), par un programme spécifique. Le programme détermine alors, pour chaque point 'objectif, les nombres de pas conespondants de chaque motem depuis un point origine. La Fig. 77 représente un exemple d'algorithme d'un tel programme. Les étapes principales sont:

(5407) : modification de la commande des obturateurs. Lorsque p=0 le faisceau utilisé doit être FEG et lorsque /?=1 le faisceau utilisé doit êfre FED.

(5401): zTTzα etjmax conespondent aux coordonnées du maximum obtenu par la procédure 9.4. à partir du capteur recevant le point d'impact direct de l'onde d'éclairage. On a alors:

Z777ÛX x = -219-

jmax

(5402) la valem ΛTTZ utilisée dépend de la précision des actionneurs On peut par exemple avoir lιm=0,25

(5403) le déplacement des motems vaut, de mamere similaire à ce qm était fait en 5 20 pasl=(ι-x) pas_par_pιxel/2 pas2= (j -y) pas_parjjixel/2

La valeur de position cornante est modifiée posl + =pasl pos2+=pas2 pas_par_pιxel est le rapport (nombre de pas de déplacement du moteur)/(nombre de pixels de déplacement de FE sm l'image obtenue en 9 4 ) Il doit avoir été préalablement déterminé, de mamere similaire à ce qui est fait dans le premier mode de réalisation, mais avec les images maintenant calculées selon la procédure 9 4 et non pas obtenues directement sm le CCD

(5404) le déplacement des motems est effectue, pour un nombre de pas pasi, pas2 de chaque moteur

(5405) les valeurs cornantes des coordonnées en pas moteurs sont enregistrées dans un tableau tabl]p,ιj]=posl tab2[p,ιj]=pos2

N 2 pix N, \

Toutefois, dans le cas ι - - + J ^' > R _m les valeurs affectées sont par exemple des valems

négatives signalant une enem, comme tα/?7|/?,z,/]=-10000, tab2]p,ιj]= -10000

(5406) les moteurs sont déplacés de -posl, -pos2 de mamere a retourner au point d'ongme, qui doit rester constant pour éviter de fausser la trajectoire

Pom obtemr une onde d'éclairage sur le capteur/?, au point de coordonnées ij, on déplacera les deux moteurs jusqu'à leurs positions caracténsées respectivement par tabl[p,ι ] et tab2]p,ιj], et on actionnera les obtmatems (5144) et (5207) selon le tableau smvant

indice /? position de (5144) position de (5207)

0 ferme ouvert

1 ouvert ferme

9.7. Commande des vitres (5165) et (5191)

Chacune de ces vitres est par exemple montée sur un positionneur deux axes en franslation commande par des motems pas à pas et permettant de déplacer la vitre dans un plan orthogonal a l'axe optique Pour chaque position de l'onde d'éclmrage, caracténsée par des indices p,ιj, il est nécessaire de positionner la vitre de mamere à annuler l'éclairage direct Ceci est fait en commandant les moteurs pas à pas pour déplacer la vitre jusqu'à une position caracténsée en nombre de pas de chaque motem par les coordonnées tabvl p,ιj], tabv2\p,ι ] -220-

Préalablement à cette utilisation des vitres, un programme est utilisé pour déterminer les tableaux tabvl[p,ιj], tabv2\p,ι,j] Un exemple d'un tel programme est décnt par la Fig 77

Pour utiliser le programme de la Fig 77 les faisceaux FS,FSI,FRD et FRG sont nécessaires et l'objet utilisé est une lame transparente Le filtre (5128) utilisé sm le chemin du faisceau FS est réglé pour que les captems soient saturés s quelques pixels autour des points d'impact des faisceaux FS et FSI

Les étapes pnncipales de ce programme sont (5107) La position du miroir (5113) est commandée par les tableaux tabl[p,0,0], tab2[p,0,0] (5401) Une image est obtenue par la procédme déente en 9 4 avec fransformation de Founer à partir d'un captem situé du coté caracténse par l'indice/? Le module des éléments de cette image est extrait pour obtenir une image en nombre réels sur laquelle le point occulté par le 'point noir' de la vitre apparaît en clmr sur fond noir L'image ainsi obtenue constitue le tableau S de dimensions 2N_pιxx 2N_pιx a partir duquel on calcule les coordonnées imαx etjmax du maximum, par la procédure déente en 7 3 3 1 On a alors x = ιmαx y = jmαx (5402) la valeur lim utilisée dépend de la précision du positionneur On peut par exemple avoir lιm=0,25

(5403) le déplacement des moteurs vaut, de mamere similaire à ce qm était fait en 5 20 pαsl=(ι-x) pαs_pαr_pιxel/2 pαs2=(j-y) pαs_pαrj>ιxel/2

La valem de position courante est modifiée posl + =pαsl pos2+=pαs2 pαs_pαr_pιxel est le rapport (nombre de pas de déplacement du moteur)/(nombre de pixels de déplacement du point de coordonnées imaxjmax sur l'image obtenue en 9 4 ) Il doit avoir été préalablement déterminé, par exemple en déplaçant la vitre selon une des directions et en mesurant le nombre de pixels de déplacement du point de coordonnées (imaxjmax)

(5404) le déplacement des moteurs est effectué, pour un nombre de pas pαsl, pαs2 de chaque moteur

(5405) les valeurs courantes des coordonnées en pas moteurs sont enregistrées dans un tableau tαbvl\p,ι,j]=posl tαbv2]p,ι,j]=pos2

N p„,ixΛ ² f N \ ² pix Toutefois, dans le cas l — - > R_o ² _m les valeurs affectées sont par exemple des valeurs

négatives signalant une eneur, comme ta/?/[/>,7,y]=-10000, tαb2]p,ιj]≈ -10000

(5406) les motems sont déplacés de -posl, -pos2 de manière a retourner au point d'ongme, qm doit rester constant pour éviter de fausser la trajectoire

9.8. Obtention de la constante K.

Le micromètre est introduit comme échantillon Une image est obtenue en présence des faisceaux FED et FRG par la procédure decnte en 9 4 dans laquelle on n'effectue pas l'étape 3 de transformation de Founer Le -221-

module des valeurs complexes de cette image est utilisé pom obtemr une image réelle de l'intensité. La position de l'échantillon est ajustée pour que cette image soit conectement focalisée. La distance en pixels D_pix enfre deux graduations séparées par une distance réelle D_reel est mesurée. La valeur de la constante K est alors n 2zV_Λ

K -- -D. λ D réel * pu

9.9. Obtention d'une représentation fréquentielle bidimensionnelle complète.

Dans le troisième mode de réalisation, une représentation fréquentielle bidimensionnelle était obtenue par la procédure décrite en 7.12. Dans le présent mode de réalisation le mode d'obtention de cette représentation doit être modifié.

9.9.1. Principe 9.9.1.1. Acquisition.

Lors de l'acquisition, l'indice r désignera l'interrupteur ouvert, selon le tableau suivant: indice r obturateur (5109) obturateur (5104)

0 ouvert fermé

1 fermé ouvert

L'indice/? désignera le coté droit (p=0) ou gauche (/?=1) du microscope ou parvient l'onde d'éclairage directe et par conséquence la position des obturateurs (5144) et (5207), selon le tableau suivant: indice p obturateur (5207) obturateur (5144)

0 ouvert fermé

1 fermé ouvert

L'indice q désignera le coté du microscope dont proviennent les données acquises, avec q=0 pour des données provenant du coté ou parvient l'onde d'éclairage directe et q=l pour des données provenant du coté opposé.

On pose s = p +pq . s désigne donc le coté du microscope d'où proviennent les données acquises, avec 5=0 pour le coté droit et 5=1 pour le coté gauche.

On indice par (s,t) les capteurs, de la mamere suivante. indice s 0 1 indice / 0 1 0 1 capteur (5174) (5171) (5198) (5201)

les données MA[fc, ?][-7^*,7*,t][<7,z^'/J proviennent du capteur indicé par {pq + pq, t) -222-

Po chaque quintuplet (k,p,q,r,t) on obtient, à partir d' un capteur conespondant, et à partir de trois acquisitions conespondant à des phases différentes de l'onde de référence, une image sous forme d'un tableau bidimensionnel de nombres complexes de dimensions 2 N _pa x 2 N_pιx .

9.9.1.2. Passage en fréquences

L'image ainsi obtenue est en représentation spatiale. On effectue une transformation de Fourier pour obtenir une image en représentation fréquentielle. La représentation ainsi obtenue est cenfrée autom d'un point FR conespondant au faisceau de référence. Elle doit êfre translatée et limitée pour obtenir une représentation de dimensions N _pιx x N _pιx cenfrée autour du point FO conespondant au centre optique. Les Fig.75 et 76 représentent les représentations obtenues respectivement, pour un indice/? donné, sur les captems indicés par q=0 et par q=l. Sur ces figures, le point noté FR est le point central, de coordonnées

( N_p]X , N_pιx) , conespondant à la fréquence de l'onde de référence. Le point noté FE conespond à la fréquence de l'onde d'éclairage (<7=0) ou de son onde inverse (q=l). Le point noté FO conespond au cenfre optique du système, c'est-à-dire à la fréquence d'une onde traversant l'objet observé dans le sends de l'axe optique. Les contours (5301) et (5303) délimitent la représentation.

Dans le cas q=0, FR et FE sont symétriques par rapport à FO. Dans le cas q=l, FR et FE sont symétriques par rapport à une droite horizontale passant par FO.

La représentation fréquentielle limitée et cenfrée est obtenue à partir de ces figures en extrayant la zone de dimensions N _pιx x N _pιx centrée autour du point FO, limitée par (5302) ou (5304) sur les figures.

9.9.1.3. Combinaison des différentes polarisations.

On note D_{p s r t} la valeur complexe mesurée en un point C d'une représentation fréquentielle obtenue à l'issue de la procédme décrite en 9.9.1.2., à partir du capteur indicé par s,r et t quand la direction de l^'onde d'éclairage est caractérisée par p. On note w . _{r t} le vecteur champ électrique de l'onde de référence sur le capteur caractérisé par les indices s, r et t.

Sur la figure 80, les différentes combinaisons des indices s,r,t sont représentées sous forme d'un tableau Dans chaque case du tableau:

-l'axe neufre de la lame de phase située devant le capteur concerné est représenté en pointillés. - le vectem champ électrique de l'onde de référence avant passage de la lame de phase, dirigé selon 7 ou y , est représenté en traits pleins. - le vectem champ électrique w_{s r t} de l'onde de référence après passage de la lame de phase et réflexion sur le miroir semi-transparent qui le superpose au faisceau venant de l'objet, dirigé selon +z7 ou +v , est également représenté en traits pleins. Si 5=0, ce vecteur se déduit du vectem champ électrique de l'onde avant passage de la lame par une symétrie dont l'axe est l'axe neufre de la lame. Si 5=1, une symétrie additionnelle d'axe vertical doit êfre effectuée. -223-

Les valeurs de w_{s r t} se dédmsent de cette figme Une formule rassemblant l'ensemble des valeurs

obtenues est, à une constante près- w_{j r f} = (-1)^ ^ 'ι +(-l) y

La phase de l'onde de référence diffère enfre les captems (5171) et (5174). On note « - le rapport caracténstique du décalage de phase et d'intensité enfre les capteurs indicés respectivement par (s, t=0) et (s, t=l) L'onde détectée sur un captem donné constitue une projection de l'onde parvenant à ce capteur sur un axe onenté comme le vecteur champ électrique de l'onde de référence Le vecteur unitaire onentant cet axe sera noté comme le vecteur champ électrique de l'onde de référence Pour les mesures on utilise-

- une onde d'éclairage dingée selon (-1)^7 ou/? est l'indice du capteur vers lequel est dingée l'onde d'éclairage direct Le factem (-l)^p est dû au fait que la composante honzontale de l'onde d'éclmrage, symétnsee par les miroirs qm la dingent dans deux sens opposés en fonction de l'indice/?, est inversée quand la direction de l'onde d'éclairage est elle-même inversée Pour cette onde d'éclairage, on mesurera les composantes de l'onde diffractée polansées selon les axes onentés par w^oetw^o _,ι , obtenant respectivement les facteurs D_{p s 0 0}et D_{p s 0 X}

- une onde d'éclairage dingée selon y Pour cette onde d'éclairage, on mesmera les composantes de l'onde diffractée polansées selon les axes onentés par w _{s 0} et w _s , obtenant respectivement les facteurs D_{p s Xβ} et

Dp,s,l,l

Lorsque le vecteur champ électrique du faisceau d'éclmrage (au point F) est -4₀ (-1) ^p 7 + A_x y le vecteur champ electnque résultant au point C, sur le coté s du microscope, est donc ^'V A_r D_{p s r t} {t +ta _s )w _{s r t} r,t

Lorsque le vecteur champ electnque au point E est A₀ι + A_xj le vecteur champ electnque résultant au point C, sur le coté 5 du microscope, est donc

∑ (- Dp,s,rÀt +ta_s) _s,_r,t r,t

Soιt ∑(-l)^((-l)^W_{r +} (-l)^; ( _{+ to}^_{r p}^ r,t

Ce qui conespond à l'expression

C_p,s,o_,o oi +C_{p s} fiA_ϋj +C_{p s Q} A_xι +C_{p s X X}A j avec

< = ∑(- ^F{(- ^t+' ⁾dH- d]{t+ta_{s p^t}

soit

Cp,s,0,0 = (-1) (-1) [D_p,s,0, ⁺ sL>p,s, ,\_j

Cp,s,lβ ⁼ (^~l) [-O_p,s, ,o ^+a sD_p^s,oA -224-

Cp,s,0,l ⁼(^-1) \-Dp,s,l,0 ^+asDp,s,ll) Cp,s,l,l ⁼Dp,s,l,0 ⁺ sL>p,s,l,l

La même expression qu'en 7.12 peut êfre utilisée à partir de ces valems de C_psdr pour obtenir la grandeur recherchée M_PtS , les indices p,s qui étaient inutile en 7.12. étant rajoutés: M_ps = -cosç._e cosφ_cC_psfifi -sinç?_e cosφ_cC_psflX -cosç?_e sinç?_cC_p-₁₀ -sinç?_e sinφ_cC_psXX soit M_ps =∑E_psrtD_ps^_t r,t avec:

^Ep,s,0ft ={-^l)^P({-^] ∞^s<Pe ∞^s<Pc +∞sφ_e sinç^?

^Ep,s,ϋ,l =(-^lY^as[{-^lY ∞^s<Pe ^C0S<Pc ^~∞S<Pe ^slΩ<Pcj

^E _P,s,ι,o ={-^lY sinç?_e cosç?_c -sin#?_e sinç?_c

^E _P,sχ_\ =α -(-l)'sinç?_ecos^_c-sin9?_esinç?_cj

Auparavant il est nécessaire de déterminer le coefficient a _s . Autour du point d'impact de l'onde d'éclairage une valeur comparable est obtenue sur chaque captem pour un indice r donné. On peut donc adopter

/ , ³ _p,_s,r,0 L> ,s,r,l pour ce coefficient la valeur a _s = ^-^ '-—— ou les sommes sont sur les indices r et sur un nombre de ∑\^D _P,s,r,l\ points réduit autour du point d'impact direct de l'onde d'éclairage.

9.9.2. Acquisition

Comme dans le troisième mode de réalisation, le point d'impact direct de l'onde d'éclairage parcourt une frajectoire indicée par fc et caractérisée par les tableaux Io [fc] , Jo [fc] .

Comme en 7.12.2.1., l'acquisition des images élémentaires est une itération s les entiers/? etfc désignant respectivement le capteur auquel parvient le faisceau d'éclairage direct et le numéro d'ordre de l'image élémentaire dans la série des images conespondant à un indice p donné.

Il n'y a pas ici d'atténuation de faisceau. Pour chaque couple (fc,/?) vérifiant ^{f N}A^l ix lo[k] — ^f N p

Jo[k] ≤ R² _m le programme commande le déplacement du miroir par les tableaux

to/j-'[/?Jo[fc],/o[fc]] , tα/32[/?,F?[fc],./o[fc]] et les obturateurs (5144) et (5207) comme indiquée en 9.6. Il déplace la vitre située du coté opposé au point d'impact direct de l'onde d'éclairage de manière à ce que son point noir soit hors du champ de fréquences utilisée.

Il commande le déplacement de la vifre située du coté ou se trouve le point d'impact direct de l'onde d'éclairage de la mamere indiquée en 9.7., par les tableaux tαèv7[/?,7o[fc], o[fc]] , tabv2[pJo[k],Jo[k]]. -225-

Toutefois, suivant une vanante que l'on appellera la vanante 2, il n'utilise pas cette vitre et la déplace donc pom que son point noir soit hors du champ de fréquences utilisé

Pour augmenter la vitesse, il est nécessaire de limiter au maximum le nombre de changements de l'indice /?, qm impliquent une mampulation des obtmate s (5144) et (5207) qui sont plus lents par exemple que (5104) et (5109) Le programme effectue donc une première itération sur fc, à/?=0, suivie d'une seconde itération sur k, à p≈l

A chaque valeur de (k,p) le programme effectue l'acquisition de 12 couples d'images élémentaires Un couple d'images élémentaires est comme en 7.12 2 1 un tableau indicé

-d'une part par l'indice q avec q-0 si l'image est détectée du même coté que le point d'impact direct de l'onde de référence, et q=l si elle est détectée du coté opposé

-d'autre part par les indices i ety caracténsant la position du pixel sur le capteur concerné

Les indices p,q,r,t sont définis comme indiqué en 9 9 1 1 L'indice d détermine le déphasage de l'onde de référence et est défim par le tableau suivant

indice d décalage de phase Θ_d (degrés)

0 -120

1 0

2 +120

L'acquisition d'une séné d'images conespondant aux indices k,p,q,d,r,t génère ainsi la séné des couples d'images élémentaires MA[k,p][d,r,t][q,ιj]

Le programme effectue en plus l'acquisition d'une séné d'images conespondant à l'image de référence Il déplace les motems jusqu'aux positions posl[p,ι_r ,j_r] pos2[p,ι_r,j_r ] ou (z- ,y_r) sont normalement, les coordonnées (z₀ , y ₀ ) du point fixe occulté par les diaphragmes, déterminées dans l'étape 38 de la procédure de réglage 9 5 Toutefois, si la vanante 2 est utilisée, [ι_r , j_r ) sont les coordonnées d'un aufre point fixe, fortement excentré mais non occulté Le programme effectue alors l'acquisition d'une séné de 6 couples d'images élémentaires, obtenant un tableau MA2[k,p][d,r,t][q,ιj]

Toutefois, selon une vanante, que l'on appellera la vanante 1, le programme n'effectue pas l'acquisition de cette image de référence

9.9.3. Calculs.

Le calcul de la représentation fréquentielle bidimensionnelle, de l'image de référence, et des tableaux caractenstiques du bnut sur ces deux images est effectué par les étapes 1 à 8 suivantes -226-

Etape 1- Calcul des représentation spatiales bidimensionnelles Le programme effectue sur l'ensemble des données obtenues

MB[k, p][r,t][q,ι,j] = ^(2m[k, p][Q,r, t][q,ι, j] - [k, p][l,r,t][q,ι,j] - MA[k, p]^

~ 1

+7— (MA[k, p\\,r,t\q,ι,j] - λ£4[k,p][2,r,t][q,ι,j])

Etape 2- Passage en représentation fréquentielle

Les indices z ety vanent de 0 à 2 N_pιx -1. Le programme effectue la transformée de Founer suivant ces deux indices de chacune des représentations spatiales précédemment obtenues Ceci mène aux représentations transformées

Mqk, p][r, t][q, z, y]

Etape 3 compensation de la réponse fréquentielle des capteurs

Cette compensation n'est pas indispensable mais elle améliore sensiblement la précision du microscope Le programme calcule le tableau MD

MD[k, p][r,t][q,ι,j] = Rl[t,j]Mqk, p][r,t][q,ι,j]

Le tableau RI représente la réponse fréquentielle inversée des captems II est déterminé en 9 11 Toutefois, selon une vanante que l'on appellera vanante 3, utilisée pour certains réglages, le tableau RI est mis a 1

Etape 4-Translation et limitation de la représentation fréquentielle bidimensionnelle

La position du point FO indiqué en 9 9 1 2 est stockée sous la forme des tableaux Io[k] Jo[k] Les considérations indiquées en 9 9 1 2 se fradmsent alors par les opérations suivantes, effectuées par le programme ME[k, p][r, t][0, i, j] = MD[k, p][r, t][θ, i + Io[k], y + Jo[k]]

ME[k, p][r, t][l, ι,j] = MD[k, p][r, t][l, i - Io[k] + N_pιx , j + Jo[k]] ou ety vanent maintenant de 0 à N _pιx -1

Etape 5 Calcul des coefficients a_s

Un coefficient a _s est déterminé pour chaque tnplet (k,p,q) Il est stocké dans un tableau de complexes alpha[k, p, q] Le programme parcourt l'ensemble des tnplet (k,p,q) Pour chaque tnplet - il îmtialise à 0 les nombres nom et denom

- il parcourt l'ensemble des tnplets τ-,z,y en testant la condition

(z -F?[fc])² +(y - Jo[fc])² ≤ lim² avec par exemple /zττz=20 -227-

Lorsque la condition est vraie il effectue

770 W+ = ME[k,p][r,0][q,ι,j]ME[k,p][r,l][q,ι,j]

denom+ = JMF[fc, pfτ-, , ', ->]|

- Lorsque la boucle sur r,z,y est terminée il effectue nom alpha[k,p,q] denom

Etape 6- Combinaison des valeurs conespondant aux indices r et t

Cette étape a pour objet de calculer M_{k pA} [z, y ] en fonction de ME[k, p][r, t][g, z, y] Ceci peut être réalisé frès simplement en effectuant l'opération suivante M_{k p q}[ι,j] = MF[fc,/?][l,l][-/,7,y] , la valeur affectée au bnut étant alors constante et l'étape 5 étant rendue inutile Si cette méthode doit êfre utilisée, il est cependant préférable de suppnmer les lames de phase (5111) (5238) (5239) (5248) (5249)

Dans tous les cas, cette méthode, semblable à celle utilisée dans le second mode de réalisation, induit des imperfections dans les fréquences élevées II est donc préférable d'utiliser la méthode dont le pnncipe a ete indiqué en 9 9 1 3 , la quantité ME[k, /?][τ-, t][q, i, y] étant la valeur mesurée notée D_{p s r t} en 9 9 1 3 L'étape 6 est alors effectuée comme smt

Pour chaque valem des indices k,p,q,ιj le programme calcule

N ^{J V} pix ^J N^V pix

J

X - ² V 2 , " „c _ v /¹, ^χ 2 yc 2

^ K ^ K

"v "v

N

Tn\lA '^X

X ₌ — " ^J 2 y_e , z_e = ^l x_e 2 y_e 2

^K ^K ⁿv "v ^vyz = yc^ze -^z _cy_e

' xz ^{~ ~}Xc^ze ^{~ι~ z}c^xe ^vxy = -χ_cy_e +y_cχ_e

M² = x² +y² M² = x² +y²

M

^lvlce - ΔV^v y²z + ^τV* x²z + ^V^y x²y

Les valems de sιnp_c cosp_c sιnp_e cosp_e sont déterminées selon les tableaux d'affectation suivants I Â I ° I âufr^ I -228-

M_c 0 autre cos^_c 1 y_e l wvc²F yz ^ vCJ rΌ F" xz l ' ^Λ vc F'xy] 1

M_e M_c ^ΔM_ce ' sιaφ_c 0 Xe

, ₂ 11 ^X v_cy F yz ι ^x vc²F^γ xz ι * y xy) 1 M_e M²M_ce V ''

0 autre

^Mce

M_e 0 autre

C0SÇ9_e -1 y_c ye'yz ^Xeye'x ^~*^~xe"xy 1

M_c M²M_œ ^ ^ sιnç?_e 0 χ_c

, ( ^xey_eVz+^xeVχz+ eVχy)

M_c

pms les coefficients sont calculés coe/[fc,/?,t7,z,y][0.0] = (-l)^;' (-l)''^{9 pq} cosç?_e cos ?_c +cos9_e sm >_c

coe/[fc,/?,-/,z,y][0,l] = -7//?7α[fc,/?,-7](-l)^/'l(-l)^;'^9+/'⁹ cos ?_ecosç?_c -cos^?_e sinp

coe/[fc, p, q, i, y ][ 1,0] ={-l)^pq+pg sιnç._e cosç?_c -sιnç?_e smç?_c

coe/[fc,/?,-7,z,y][l,l] = -α//?zα[fc,/?,ύ] -(-l)^/'^9+;'^g sιnç?_e cosçσ_c -sιnç?_e sιnç?_c

Ces coefficients ne dépendent pas du résultat des pnses d'images et dans le cas ou on répète toujours la même séné ils peuvent être stockés dans un tableau plutôt que recalculés à chaque fois Le programme utilise ensmte ces valeurs pom combiner les images obtenues avec les différentes positions des rotateurs de la mamere suivante

M_k,M[ι,j] = ∑ME[k,p\r,t\q,ι,j]coef[k,p,q,ι,j\r,t] r,t coef[k, p,q,ι,j\r,t] conespond à la quantité notée E_psrt en 9913 avec s = p^~q + pq ME[k, p][r, t][#, i, y] conespond à la quantité notée D_psrt en 9913 -^_/t_,p,? [', J ] conespond à la quantité notée M _ps en 9913

Etape 7 L'amplitude de bnut est calculée comme smt ^Bk,_P,o [',j] vaut

-lorsque Rl[ι + lo[k],j + Jo[k]] ≠O B_kp()[ι,j] = \_ιRl[ι + Io[k],j + Jo[k] - sinon B_{k 0}[ι,j] = MAX ouM-4-Yest une valeur élevée, par exemple 10¹⁰ -229-

^Bk _P \ [>>A ^vaut

- lorsque Rl[ι - Io[k] + N _pιx , j +Jo[k]] ≠ 0 B_{k pΛ}[ι,j] = \Rl[ι - Io[k] + N _pιx , y + Jo[k]j

- sinon B_{k p} _, [z,y] = MAX

Etape S-Calcul de l'image de référence

L'image de référence est calculée, exactement de la même mamere que l'image pnncipale, mais en utilisant le tableau MA2 au heu du tableau MA et en remplaçant les valeurs Io[k],Jo[k] par [ι_r , j_r ) On notera

H_k [ι,j] le tableau ainsi généré et BH_{k p q} [z, y] l'amplitude de bruit conespondante Toutefois, dans le cas de la vanante 1, cette image de référence n'est pas calculée

9.10. Réglage fin de la position des capteurs.

Cette opération a pour but d'assurer un réglage précis l'un par rapport à l'autre des deux capteurs conespondant au même coté du microscope, en particulier dans la direction de l'axe optique En l'abscence d'un tel réglage, le point d'ongme des représentations fréquentielles générées a partir de chaque capteur peut différer légèrement, ce qui compromet par la suite la bonne superposition des portions des représentations fréquentielles issues de chaque côté du nucroscope Le fait de ne pas effectuer ce réglage n'empêche pas la génération de représentations tndimensionnelles de l'échantillon mais limite la précision de ces représentations

Un déplacement en translation d'un capteur entraîne une modulation dans le domaine frequentiel et donc un déphasage des valeurs des ondes planes obtenues à partir de ce capteur Le réglage consiste à vénfier que les ondes planes reçues sur chaque capteur pour diverses directions du faisceau d'éclairage sont en phase

On indice les capteurs par les indices s, t avec la même convention qu'en 9 9 1 3 Le programme initialisé à 0 les tableaux MF_S , de dimensions N _pιx x N _pιx II effectue une boucle sur les indices s, i ety Pour

N pix \ ² ( N ¹ pix chaque tnplet s, ij vérifiant < Rl_m îl effectue les opérations suivantes v ^ J

- il actionne les obturateurs de mamere à utiliser le faisceau FEG pour 5=0 et le faisceau FED pour 5=1 - il déplace le miroir au point conesponant à tab l[s, ι,j] , tab2[s, ι,j]

- il génère à partir de chaque capteur indicé par s une image bidimensionnelle suivant la méthode decnte en 9 4 , obtenant donc deux images MH_S , [fc, /] ou les indices et t ont été ajoutés pour caracténser le capteur, avec la même convention qu'en 9 9

- Il déplace le miroir vers un point fixe de coordonnées (z _r , j_r ) - il génère à partir de chaque capteur indicé par 5 une image bidimensionnelle suivant la méthode déente en 9 4 . obtenant deux images MHR_{s t}[k,l]

MH_s,[2ι,2j]

Il effectue pour le couple d'entiers (z,y) MF_{s t} [i, ] =

MHR_{s t} [2ι,2j] -230-

Apres avoir terminé cette boucle s 5,7,y , le programme calcule les écarts suivants σ_t = ∑ \λ*F_{s 0}[ι,j]- MF,_Λ [ι,jf

¹ J

La position en franslation du captem (5171) doit êfre ajustée de mamere à mimmiser σ₀ et la position du capteur (5201) doit êfre ajustée de mamere à mimmiser σ, Le programme doit donc boucler sur le calcul de ces écarts jusqu'à ce que le réglage soit terminé σ - représente l'écart quadratique moyen dû aux eneurs de phase enfre les fréquences reçues s les deux capteurs se trouvant d'un même coté du microscope

9.11. Détermination de la réponse fréquentielle des capteurs

Les capteurs effectuent un filtrage des fréquences spatiales qui leur parviennent Ce filtrage est dans le meilleur des cas équivalent à un moyennage sur la surface du pixel, toutefois en général il est plus important du fait des défauts des CCD et des caméras Dans les modes de réalisation basés sur une réception dans un plan de fréquence, ce filtrage induit simplement un assombnssement de la partie de l'image générée qui est éloignée du centre Dans ce mode de réalisation, ce filtrage est effectue dans le plan d'espace et pose des problèmes plus importants II est préférable d'utiliser des caméras de bonne qualité et de compenser ce filtrage Ce filtrage en plan d'espace équivaut à une multiplication en fréquence par un tableau RF dont l'inverse RI est utilisé dans la procédme 9 9 pour effectuer la compensation Pour limiter le bruit sur la réponse fréquentielle, celle-ci est acquise à l'aide d'ondes planes plutôt qu'à partir d'une seule onde sphénque

9.11.1. Acquisition On utilise des tableaux Io et Jo caracténsant une trajectoire parcourant l'ensemble des points accessibles, c'est-à-dire que (lo[k], Jo[fc]) doit parcounr l'ensemble des points tels que

N pix N pix

Io[k]- Jo[k] < R² _UV ou R_ouv est le rayon limité par l'ouverture des objectifs, qui a ete

obtenu à l'étape 37 de la procédure de réglage 9 5 Cette trajectoire sera nommée par la suite « trajectoire complète » Un programme effectue l'acquisition définie par ces tableaux, selon la procédure déente en 9 9 avec les vanantes 2 et 3, c'est-à-dire sans utiliser les vitres (5165)(5191) et avec un point de coordonnées (z_r ,y_) non occulté II génère ainsi les sénés d'images M_k ^_>e[z,y] et H_{k p q}[',j] L'indice TÎ₀ n'étant pas connu, il est pris égal à τ7_v dans la procédure 9 9 Toutefois, lors de cette acquisition, il suffit d'enregistrer les valeurs

^.M I *]' "⁷⁰!*]] ^{et H}k,p,q['r ,^jA

9.11.2. calcul

Le programme initialisé à 0 le tableau RF1 de dimensions N _pvc x N _pιx II parcourt alors la séné des indices fc Pour chaque indice fc il effectue -231-

kβfi[H^{k Jc}i^k'Α M_{k l 0}[lo[k],Jo[k]]

FF7[/o[fc],Jo[fc]] = M

Hk O. 'r'J ] Hk l A'r_'J ] ou z- ,j_r sont les coordonnées du maximum de l'image de référence, comme défîmes en 9 9

U effectue alors la transformée de Founer bidimensionnelle inverse du tableau 7ÎF7, obtenant un tableau RF2 II complète ce tableau par des zéros en îmtiahsant à 0 le tableau RF3 de dimensions 2N _pιx x2N_pιx puis en effectuant pour z ety vanant de 0 à N _pιx - 1

N pix N pix

RF3 ι +- ,J +- = RF2[ι,j]

2 " 2

Il effectue alors la transformée de Founer bidimensionnelle inverse du tableau RF3, obtenant le tableau RF conespondant à la réponse fréquentielle des capteurs

Le programme calcule alors la réponse fréquentielle inversée des capteurs de la mamere suivante -sι (, - N_pιxY +(j - N_pιxY ≤ 4R_o ² _uv alors Rl[ι,j] = *

-sinon 7î7[z,y] = 0

Le tableau 7?7 ainsi déterminé est en particulier utilisé en 9 9

9.12. Détermination des coordonnées relatives des points d'origine des images obtenues de chaque coté du microscope.

Les images en fréquence obtenues de chaque coté du microscope par la procédure 9 9 sont équivalentes aux images en fréquence qui étaient obtenues dans les modes de réalisation précédents Elles sont, de la même mamere, relatives à un point d'ongme, qui ne dépend plus du point ongine de l'onde de référence, mais de la position du capteur Pour pouvoir superposer ces représentations il est nécessaire de connaître la position relative des points d'ongme des représentations obtenues de chaque coté du microscope

Ceci est réalisé en utilisant les ondes sphenques FS et FSI L'onde sphénque FS ou FSI reçue de chaque cote du microscope doit en pnncipe êfre ponctuelle et centrée sur chaque surface de réception La position des objectifs peut donc êfre réglée en présence des faisceaux FS, FSI,FRG,FRD pour que l'image, obtenue sur chaque capteur par la procédme 9 4 utilisée sans fransformation de Fourier, soit parfaitement ponctuelle et centrée Si ce réglage de position des objectifs est effectue avec le plus grand soin et avec des positionneurs suffisamment précis, de précision sub-nucrométnque, par exemple des dispositifs de focalisation de microscope d'une qualité suffisante, ou des positionneurs avec contrôle piézoélectnque, alors les points d'ongme des images obtenues de chaque cote du nucroscope sont confondus

La procédure de réglage décrite en 9 5 permet cependant d'obtenir cette qualité de réglage en utilisant des positionneurs de précision moyenne pour les objectifs En effet, les réglages fins sont effectués, dans cette procédme, par déplacement des caméras et non des objectifs Si la procédure de réglage decnte en 9 5 est effectuée avec soin, les points d'ongme des représentations fréquentielles finalement obtenues sont confondus Leurs coordonnées relatives sont donc (x,y,z)=(0,0,0) -232-

Cependant, les réglages obtenus par la procédure 9 5 ou par un nouveau réglage de position des objectifs sont en général imparfaits En particulier ils peuvent êfre influences par des imperfections locales des capteurs II est possible d'utiliser (x,y,z)=(0,0,0) mais une meilleure superposition des images provenant de chaque capteur sera obtenue si un algonthme adapté est utilisé pour calculer une valem plus précise de ces paramètres Une détermination précise des positions relatives des points d'ongme peut être obtenue par une méthode similaire a celle utilisée en 7 9 1 Cependant

-L'image du faisceau FS ou FSI dans le plan de réception est ponctuelle et non repartie sur l'ensemble de la surface de réception comme en 7 9 1 Les conséquences sont que l'image obtenue est sensible a des défauts locaux des capteurs et qu'elle est fortement bruitée - Le point de focalisation de FS ou FSI ne conespond pas au point caracténstique (avec la terminologie utilisée en 3 16 ) de l'un des objectifs, alors qu'en 7 9 1 le point de focalisation du faisceau de référence conespondait au point caracténstique d'un objectif conespondant

La méthode utilisée est donc modifiée pour pallier, dans la mesure du possible, a ces inconvénients Les faisceaux utilisés sont FS,FSI,FRD,FRG et l'objet utilisé est une lame transparente La méthode utilisée se décompose en deux phases

Phase d'acquisition Elle consiste en une itération sur les indices fc,/ parcomant l'ensemble EO des points vérifiant

N, Λ ² f N \ 2 pix

< rayon ² avec par exemple rayon = 0 SR_ouv Le tableau M6 de dimensions

J ^y- J

N_pιx x N_pυc est initialisé à 0 puis le programme effectue, pour chaque couple (fc, ) de l'ensemble EO , les étapes 1 à 7 suivantes étape 1 positionnement du miroir de déviation du faisceau au point détermine par tabl[θ, fc, /] , tab2[θ, k,l] étape 2 Une image est acquise de chaque coté du microscope selon la procédure déente en 9 4 sans effecmer la fransformee de Founer On notera ces images M0-[z,y] au heu de MH[ι,j] , l'indice 5 caracténsant le capteur avec 5=0 pour (5174) et 5=1 pour (5198) étape 3 le programme détermine les coordonnées ιmax_s , jmax_s de la valeur maximale de chaque tableau M0-[z,y] Il calcule alors les tableaux M7_[z,y] avec

- si {ι -ιmax_sY +(y - yττ7αx;-)² ≤ R²„ M7-[z,y] = M0-[z,y]

- sinon M7-[z,y] = 0 ou R_mv est déterminé pour que le disque de rayon R_mv centre sur ιmax_s , yττzox- contienne tous les points dont les valeurs hors bruit sont supéneures au mveau de bruit, tout en étant aussi réduit que possible En pratique, R_mv peut être déterminé empinquement et valoir une dizaine de pixels étape 4 le programme effectue la transformée de Fourier bidimensionnelle de chaque tableau M7_s[z, y] , obtenant les tableaux M2-[z,y] étape 4 le programme applique le filtre 7?7 aux tableaux ainsi obtenus

M3_S[I,J] = M2_S [I, J]RI[I, J] -233-

étape 5 Le programme calcule le tableau M4 de dimensions N _pp_ιi_xx x ' N _pp_ιi_xx de la mamere suivante

N \ 2

^{J γ} pix ( N pix M3₀[z + fc,y + /]

- SI 7 - < R₀ ² _UV alors M4[ι,j -

M3_x[, -k + N_pιx,j +l]

-sinon, M [z,y] = 0

Le tableau M4 représente le décalage de phase enfre les deux captems dû à la non-coïncidence des points d'ongme, partiellement débrmté étape 6 le programme effectue la transformée de Founer inverse du tableau M4, obtenant un tableau M5 étape 7 le programme modifie le tableau M6 de la mamere suivante _r i M4[ι,j]

M6[ι,_j ]+ = L-L±I

^{1 J} j.O

Phase de calcul Le programme calcule le tableau M7 qm est la franformee de Founer du tableau M6 Le programme calcule les coordonnées x,y,z obtenues par la procédure déente en 7 8 à partir du tableau M7, qui remplace le tableau noté F_rec en 7 8 Toutefois, pom cette étape, la procédure déente en 7 8 doit être modifiée comme indiquée en 7 9 1 pour temr compte du fait que l'indice de l'objet est connu Elle doit également êfre modifiée d'une seconde mamere pour tenir compte du fait que le mode d'acqmsiùon est différent et que l'écart- type σ doit être calculé dans le domaine spatial et non dans le domaine frequentiel comme en 7 8 1 Cette seconde modification consiste a remplacer les étapes (3512) a (3514) de la Fig 50 par les étapes suivantes, qui sont effectuées en représentation spatiale et ou c'est donc le tableau M6 (et non M7) qui est utilise étape 1 le programme détermine les coordonnées (imaxjmax) du point conespondant à la valeur maximale de

_{1 |} M6[z777αx,/77zαx]

\M6\ι, j II calcule alors rapport = γ ^

^{1 L Ji} F_d [ιmax, jmax] étape 2 le programme calcule la grandeur caracténstique max max = - ^ |M5[7, y] -ra ?/?oτ-t F_d [ι,j]\ (ι,j)eDιsque p ou la somme est sur l'ensemble des couples (7,y) inclus dans le disque de centre (imaxjmax) et de rayon —^≡-

9.13.Détermination des phases des faisceaux Cette procédure est similaire à la procédure 7 9 2 La position des objectifs est celle qui a ete utilisée en

9 12 pom obtemr les coordonnées x,y,z et ne doit pas êfre modifiée au cours de la présente procédure On utilise les tableaux Io et Jo déjà utilises en 9 11 et caracténsant une trajectoire complète Un programme effectue l'acquisition définie par ces tableaux, selon la procédure déente en 9 9 avec les vanantes 2 et 3, c'est-à-dire sans utiliser les vitres (5165)(5191), avec un point de coordonnées (z_ , y_r ) non occulté, et sans compensation du filtrage des capteurs II génère ainsi les sénés d'images M_{k p q} [1, y] et -234-

H_{k p} [ι,j] L'indice Z7₀ n'étant pas connu, il est pns égal à _v dans la procédure 9 9 Lors de cette acquisition, il suffit d'enregistrer les valeurs M_{k p q} [ [k], Jo[fc]l et H_{k p q}[ι_r ,j_r]

Le programme initialisé à 0 le tableau Ra puis il parcourt la séné des indices fc,/? en effectuant pour chaque couple fc, ?

M^₀[7_O[fc],/c^?[fc]] ~ 2π

Fα[/^?Jo[fc],Jo[fc]] ^: exp ] , #] , _! HA^{2 +J}A^k]

^Hk,pA'r > J ] K K K

J) ou z- , j_r sont les coordonnées du maximum de l'image de référence, comme définies en 9 9 et ou x,y,z sont les coordonnées déterminées en 9 12

9.14. Réglage de position des objectifs en présence de l'échantillon.

L'échantillon à observer est mis en place Les faisceaux FS et FRG sont utilisés Le faisceau FRG utilise est dans le sens de l'axe optique, donc le miroir de déviation est en poition centrale, définie par

N_pιx N pix Np,χ N pix tabl 0. tab2 A partir de l'onde reçue sur le capteur (5198) on génère deux

images par la procédme déente en 9 4 une image spatiale obtenue sans effecmer l'étape 3 et une image fréquentielle obtenue en effectuant l'étape 3 Le module des valeurs complexes est extrait sur chaque image La position des objectifs est ajustée sur le même pnncipe qu'en 7 10 L'image spatiale doit être cenfrée

Sur l'image en fréquence, on doit observer un disque clair Le réglage doit êfre effecmé pour que l'intensité soit la plus élevée possible pour les fréquences élevées (points éloignés du centre) Le disque observe doit rester relativement homogène Si un anneau sombre apparaît entre le bord exténeur et la zone centrale, l'échantillon est trop épais et la totalité des fréquences ne pouna pas être pnse en compte Le réglage doit alors être effectué de mamere a avoir un disque relativement homogène, de rayon aussi élevé que possible Le disque n'atteint pas sa taille maximum et les fréquences élevées ne peuvent pas être pnses en compte La résolution de l'image, pnncipalement en profondeur, est diminuée La seule solution à ce problème consiste à utiliser un objectif spécialement conçu, décnt au paragraphe 7 19

9.15. Détermination Ae x,v,z,L,n_n

Cette étape est similaire a celle decnte dans la procédure 7 11 De même que dans la procédure décrite en 7 11 , cette étape peut être évitée en effectuant une mesure préalable des grandeurs L et n₀ et en introduisant l'échantillon sans déplacer les objectifs, et donc sans effectuer l'étape 9 14 , de mamere à ne pas modifier les valems de x,y,z obtenues en 9 12

Le programme effectue la série d'acquisitions défime par les tableaux Io et Jo définissant une trajectoire complète, déjà utilisés en 9 11 2, selon la procédure déente en 9 9 utilisée avec les vanantes 2 et 3 II génère ainsi -235-

les séries d'images M_kpq [i,j] et H_kpq [i,j] . Toutefois, lors de cette acquisition, il suffit d'emegistrer les valems M_k^_q [lo[k Jo[k]] et H_{ky pΛ} [i_r ,;-].

Le programme parcourt alors la série des indices fc. Pour chaque valeur fc il effectue:

Fre A

^Hk,O,0[>r>Jr Ra[θ,Io[k],Jo[k]] Le programme décrit en 7.8. est alors utilisé pour calculer les paramètres x,y,z,L, n₀ à partir du tableau

F_rec ainsi constitué.

9.16. Calcul de w _r et réglage de focalisation.

Cette étape est effectuée de la mamere décrite en 7.15. Elle peut toutefois êfre évitée si l'indice de

L l'échantillon est proche de l'indice nominal des objectifs, auquel cas on peut choisir par exemple w „ = -

^F L

-les tableaux M_k [i,j] obtenus par la procédure 9.9. utilisée sans variante se substituent à ceux précédemment obtenus par la procédure 7.12.

- du fait que l'échantillonnage est régulier, on utilise K₀ = K_x = K

les valeurs imαx_k , jmαx_k sont maintenant données par: imαx_k ^Nd Io[k], jmαx_k =^L-Jo[k].

N ' _P1X -V ' _P-ιx - L'étape 2 de la procédure (4002) de la Fig.57 nécessite l'acquisition de la valeur de l'onde au point

{imαx_k,jmαx_k ) . Les vitres étant utilisées pour anêter l'onde d'éclairage directe, cette valeur n'est pas disponible.

Cette étape est donc remplacée par les étapes 2.1 et 2.2. suivantes: étape 2.1. Pour chaque valem de fc, le programme calcule: ^ffo,o.o['. ]^k.o.o['.y]

Σ (i,j)eE_k o.oM)² + o,oM)²

R fc,o,o ^_

-^ 1^,0,0 [i,j

(z,y)e£_t ,o,o[',-'])²+ o,o[', ])² avec:

o,o,o['> ^']Hfc,o,o['>./] Fo,o,o[^fl>ⁱ o,o[^fl»ⁱI

(U) > Coef • max

0≤a≤N_pix-l\ o.o )^{2 +} ΛOM)^' (B _o[a,b]) +(B_kA0[a,b]) 0≤b≤N_pιχ-l et avec par exemple Coef = 0,5 étape 2.2. Pour chaque valeur de fc,z,y le programme effecmé:

Ms_k[i,j]R_kA0

Ms_k[i,j]-

Ra[ , Io[k], Jo[k _r l [k], Jo[k]] -236-

ou F_rec est le tableau déterminé en 9 15

9.17. Obtention de la fonction de compensation des aberrations.

Cette étape est effectuée comme décnt en 7 16 avec K₀ = K = K

9.18. Réalisation d'images tridimensionnelles par la méthode décrite dans le troisième mode de réalisation.

9.18.1. sans suppression de l'onde directe Cette étape est effectuée comme décnt en 7 17 2 -les tableaux M_{k P} 'Α ^k _M[',i] ^Bk p 'Α ^ .p 'Α ^0Dtenus P^ar la procédure 9 9 utilisée avec la vanante 2 se substituent à ceux précédemment obtenus par la procédme 7 12

- du fait que l'échantillonnage est régulier, on utilise K₀ = K = K , a₀ = o, = 1

- les valeurs tmax_{k p q} ,jmax_kyPΛ sont maintenant données par ιmax_k ^_q = lo[k] , jmax_k „ „ = Jo[k]

9.18.2. avec suppression de l'onde directe.

Le pnncipe est le même que ci-dessus mais la procédure 9 9 est utilisée sans vanante En outre, l'étape 2 de l'algonthme décnt en 7 17 2 nécessite l'acquisition de la valeur de l'onde au point I ιmax_k „ ₀ , jmax_k „_β 1 Les vitres étant utilisées pour arrêter l'onde d'éclairage directe, cette valeur n'est pas disponible Cette étape est donc remplacée par l'étape 2 suivante, équivalente a celle indiquée en 7 18 1 étape 2 Pour chaque valeur de k,p,q,ιj le programme effectue

_M r π ^Mk,pA'Α^DPÏÏ+pA'>A^Rk,P,q ^k, _P ^,q L ^{• •/} J _{Λα Jo}^ _Jo[_k ]_Frec [_Io^ J₀[k]]D_p [l_θ[k], J_θ[k]]

9.19. Réalisation d'images tridimensionnelles suivant une méthode rapide avec suppression de l'éclairage direct. L'utilisation de la méthode déente précédemment présente le défaut de nécessiter l'acquisition d'images de référence A chaque acquisition d'image de référence, il est nécessaire d'effectuer un déplacement important du miroir (5113) Il est possible d'utiliser une image de référence pour recaler en phase plusieurs images utiles successives, et donc de ne pas acquénr une image de référence à chaque acquisition d'image élémentaire Néanmoins, si le système n'est pas parfaitement stable s une échelle de temps comparable au temps d'acquisition d'une représentation fréquentielle tridimensionnelle complète les acquisitions d^'images de référence doivent êfre nombreuses Du fait du déplacement important du miroir qu'elles nécessitent, ces acquisitions constituent une perte de temps importante Pour éviter l'acquisition d'images de référence, les étapes 1 et 2 du paragraphe 7 17 2 , qm ont pour objectif d' effecmer le recalage en phase des représentations fréquentielles bidimensionnelles, peuvent être remplacées par la méthode déente ci-dessous Cette méthode peut également être utilisée avec les aufres modes de réalisation mais ne présente alors qu'un intérêt limite -237-

Cette méthode comporte une phase préliminaire, qm est effectuée avant tout calcul nécessitant le recalage en phase (soit avant la phase d'imagene proprement dite), puis une modification des étapes utilisées en phase d'imagene L'acquisition d'une image devant êfre traitée par cette méthode peut se faire selon la procédme 9 9 utilisée avec la vanante 1, c'est-à-dire sans acquisition d'image de référence et avec utilisation de la vitre pour annuler l'éclairage direct

9.19.1. Phase préliminaire.

La phase préliminaire consiste à déterminer, à partir d'un nombre limité de représentations fréquentielles bidimensionnelles indicées par l'indice /, les tableaux Kn_{p q} [nι,nj,l] Fh_{p q}[nι,nj,l] Dans ces tableaux

p indice le coté (gauche ou droit) vers lequel parvient l'onde d'éclairage direct q indice le coté d'où provient la représentation fréquentielle (opposé ou non à celui ou parvient l'onde d'éclairage directe)

/ indice la position du point conespondant à l'onde d'éclairage directe, sur l'image générée par la méthode décrite en 9 9 , à partir du coté indicé par <?=0

Les indices (/,/?) caracténsent donc une onde d'éclairage et les indices (l,p,q) caracténsent une représentation fréquentielle bidimensionnelle conespondant a cette onde d'éclairage et au capteur indicé par q Les indices 777,77/ sont les coordonnées sur deux axes de cette représentation fréquentielle, après centrage par rapport au point d'impact direct de l'onde d'éclairage

Le tableau Kn_p [nι,nj,l] contient la troisième coordonnée nk de la représentation fréquentielle considérée, pour chaque couple «z, nj

Le tableau Fh_p [nι,nj,l] contient la valeur de cette représentation au point de coordonnées nι,nj,nk après recalage en phase par rapport à la représentation défime par /=0 Le tableau Bh_{p q}[nι,nj,l] contient le bruit sur les éléments conespondants de Fh _{p q} [nι ,nj , l]

Ces tableaux caracténsent donc les valems de la représentation fréquentielle tndimensionnelle de l'objet en un certmn nombre de points Le tableau Kn_p caracténse les points en lesquels des valems sont dispombles, et le tableau Fh_pΑ caracténse ces valeurs elles-mêmes Les positions de l'onde d'éclairage direct conespondant aux indices / sont choisies de telle sorte que toute représentation fréquentielle bidimensionnelle, après recentrage, ait une intersection non vide avec la partie de la représentation fréquentielle tndimensionnelle de l'objet constituée par la superposition des représentations conespondant aux différents indices /, et caracténsée par les tableaux Kn_{p q} et Fh_{p q}

La phase préliminaire se décompose en trois étapes -238-

Etape 1: La Fig.81 représente les points conespondant à l'onde d'éclairage directe, sur l'image générée par la procédme 9.9. à partir des capteurs ou parvient cette onde d'éclairage directe, pour plusieurs valeurs de /. On note IL[[],JL[[] les coordonnées du point indicé par /, avec par exemple:

/ IL[I\ JL[I

0 N ^{l x} pix N ^l pix

2 2

1 N_pιx - 1- - marge Np_« 2

2 N_pa Npix - - - marge 2

3 marge N -* " pix

2

4 N_pιx marge 2

ou marge= 10 par exemple.

Les points indicés par / doivent faire partie de la trajectoire définie par les tableaux lo et Jo. Le programme détermine alors, pour chaque valeur de /, la valeur de fc telle que IL[l] = lo[k] et JL[l] = Jo[k] . Il range cette valeur dans le tableau TK en TK l .

Etape 2: La seconde étape consiste à déterminer les tableaux Kn_p et Fh_{p q}

Le programme initialisé d'abord ces tableaux, par exemple à une valeur de -10000.

Le programme parcourt ensuite l'ensemble des quintuplets (l,p,q,i,j). Il calcule pour chacun d'entre eux k= TK[[ nι = i -ιmax_{k p q} +N_pιx nj = j -jmax_{k p q} +N_pιx

N pix N pix N nk - K - » - -K\ - \ imax_{k p q} - pix N pix

J^maxk,p.q + N pi

Il prend pour chacun de ces nombres l'entier le plus proche puis il effectue: Kn_{p q}[ni,nj,l] = nk

Fh_pA [ni , nj, l] = M_k^_q [i , j]D_pq+pq [i , j] Bh_pΛ [ni,nj, l] = B_k<M [i, jp_pq+pq [i,j]\

Etape 3: cette étape consiste en une modification du tableau Fh_{p q} . Le programme parcourt l'ensemble des (l,p,q). Pom chaque valeur de ce triplet, le programme effecmé les opérations 1 à 3 suivantes: -239-

opération 1 le programme initialisé à 0 les nombres nom et denom opération 2 le programme parcourt l'ensemble des valems de (nι,nj) en testant la condition

I |2

ΛΛ^_gJ ./yJJ-iÇw^_çJ/ï/jTy.O] ≤lim avec par exemple /zτw=l Lorsque cette condition est réalisée il effectue

Fh_pq [m , nj ,θ]Fh_pq [m ,nj,l] nom_pqd + -- (Bh_ptq[nι,nj,0]Y +(Bh_M[nι,nj,l]Y

I r il²

\Fhp,q[r",nj,l]\ denom ,+

(Bh_Ptq[nι,nj,0]Y+(Bh_pq[nι,nj,l]Y opération 3 le programme effectue

^Fh^ '^nJ^ ⁼ dΕm^^Fh^'^nJ^

9.19.2. Phase d'imagerie La phase d'imagene diffère de celle utilisée en 7172 par la méthode de recalage de phase Le recalage en phase est ici effectué par rapport à la partie de la représentation fréquentielle de l'objet caracténsée par les tableaux calculés dans la phase préliminaire, et non par rapport au point image de l'onde d'éclairage, à des valeurs préenregisfrées de l'onde d'éclairage ou à des images de référence

Les étapes 1,2,3 suivantes remplacent les étapes 1 et 2 définies en 7172

Etape 1 le programme effectue, pour toutes les valems de k,p,q,ιj

^_k,_p,_q[hj] = M_k^_q[l,j]D_pq+pq[l,j]

^Bk.pA^l>A ^{= B}k,pΛ^l>A\^DP<,₊pA^lΛ\

Etape 2 Cette étape consiste à établir le coefficient complexe caracténsant, pour chaque représentation bidimensionnelle, le décalage de phase et d'intensité enfre cette représentation bidimensionnelle et la portion de représentation tridimensionnelle caracténsée par les tableaux Kn_pq t Fh_{p q} Ce coefficient complexe, pour la ^n0mk v Q représentation caracténsée par les indices k,p,q, s'expnme sous la forme - - Il est obtenu en effectuant denom_{k p q} une boucle sur l'ensemble des indices (k,p,q,ι ,l) Pour chaque (k,p,q,ιj,l) -le programme calcule nι=ι-ιmax_kpq+N_pιx nj=J-jma^χ _k,p,q+ _pιx

n„

^Λ- ^κ) -ι-- "f,_Vj \ c'- ^«,-) IΌ^! f "")' { ^N^² II;^A -i— ^>-»-f. -ι*-^>-»-f. ^+w-

-Il teste la condition -240-

I \K _{p q} r [m ,nj,l i]- nkl\² ≤ lim avec par exemple /zττ7= 1

-Si la condition est vraie, le programme effectue alors les opérations

^nθmk,p,q + = ^Mk._PΛ¹'^{j h}pΛ^m'ⁿJf] (^Bk,_P '>A)² + ^,ττyJ])²

\^M ,p,q\^l>^jf denom_{k p q} + =

(^Bk.p ^ι>A) ⁺(^BhpΛ >^»

Etape 3 cette étape constitue le recalage en phase proprement dit Le programme effecmé

770777 k p q

M k.p.q M= K I M k, ,p,q ^den°^mk,p,q M

9.20. Réalisation d'images tridimensionnelles suivant une méthode simplifiée. On peut se limiter, pour générer l'image tridimensionnelle de l'objet, à la représentation F_{0 0} définie en

7 17 Ceci revient, dans la procédme déente en 7 17 2 , à adopter des tableaux IB_{p q} nuls pour tout couple

(/>, 9) ≠ (0,0)

On suppose également ici que l'objet a un indice moyen proche de l'indice nominal de l'objet observé et que la table optique est totalement exempte de vibrations Les étapes 9 11 à 9 17 peuvent alors être suppnmées La présente méthode diffère en outre de la précédente par la méthode utilisée pour régler la position des objectifs avant utilisation et par l'algonthme de superposition des images

9.20.1. Réglage des objectifs et du miroir (5113). Ce réglage peut êfre effectué avec une lame transparente à condition de ne pas déplacer les objectif après réglage, quand on introduit l'objet Si des objectifs prévus pour fonctionner sans hqmde d'immersion m lame couvre-objet sont prévus (indice nominal égal à 1) et si l'échantillon est peu épais ou d'indice moyen proche de 1, il peut également être effecmé en l'abscence d'objet Pendant cette étape on utilise les faisceaux FEG et FRD

Il est nécessaire que le miroir (5113) soit amovible et puisse être remplacé par une plaque absorbante en tout point sauf en un point cenfral ou est placé un réflecteur de faible dimension La dimension de ce réflecteur doit êfre d'environ ou D est le diamètre du faisceau incident sur le miroir (5113) Cette plaque doit être

*^•" pix provisoirement placée sur le miroir de manière à ce que le réflecteur occupe à peu près le centre du faisceau incident sur le miroir Le positionneur du miroir doit êfre lui-même fixe sur un positionneur trois axes en translation Ce réglage doit être effectué immédiatement après la séné de réglages déente en 9 5 et les objectifs ne doivent plus être déplacés ensuite II comporte les étapes suivantes -241-

étape 1 : on remplace le miroir par la plaque absorbante étape 2: en utilisant umquement le faisceau FRD, on déplace le miroir en franslation de mamere à ce que l'image produite sur le CCD (4339) soit ponctuelle et cenfrée. étape 3: en utilisant uniquement le faisceau FEG, on déplace les objectifs de mamere à ce que l'image prodmte sur le CCD (4339) soit ponctuelle et centrée. étape 4: on peut alors remettre en place le miroir.

9.20.2. algorithme de calcul de la représentation tridimensionnelle

Les étapes 1 et 2 de l'algorithme décrit en 7.17.2. peuvent êfre supprimées. En effet, le réglage supplémentaire effectué et l'abscence de vibrations permettent d'éviter tout décalage de phase du faisceau d'éclairage.

9.21. Utilisation d'objectifs présentant des aberrations.

Comme dans le troisième mode de réalisation, des objectifs du type décrit en 7.20 ou 7.21 peuvent être utilisés. Les modifications conespondantes des algorithmes sont similaires à celles décrites en 7.20 et 7.21. Il est bien entendu nécessaire de les adapter au mode d'obtention de l' image plane en fréquence, qui diffère notablement du troisième mode de réalisation.

10. Dispositif de positionnement des éléments optiques. Les modes de réalisation décrits, et en particulier le mode de réalisation 4, nécessitent l'utilisation de nombreux positionneurs de bonne précision. Ces positionneurs sont des éléments coûteux peu adaptés à une fabrication en série et susceptibles de se dérégler avec le temps. Ces positionneurs, à l'exception des positionneurs des objectifs et de l'échantillon, ne doivent en principe être réglés qu'une fois, lors de la phase initiale de réglage. Une solution à ce problème est d'utiliser lors de la fabrication du microscope des positionneurs amovibles. Après positionnement, chaque élément peut êfre fixé avec une colle appropriée. Par exemple, dans le mode de réalisation 4, on peut fixer les SLM à l'aide du dispositif des Fig.83 à 85. La partie du dispositif de fixation qui est intégrée au microscope comporte trois ensembles mobiles:

ensemble 1: il est constitué des éléments suivants, solidarisés enfre eux: - une plaque de fixation (5801) détaillée Fig.83 et présentant une surface poreuse à encoller (5802).

- le SLM (5804) fixé sur la partie non encollée (5803) de cette plaque.

- une plaque (5808) en matériau magnétisable, par exemple du fer, fixée à l'arrière de la plaque (5801)

ensemble 2: il est constitué des éléments suivants, solidarisés enfre eux: - une plaque (5805) détaillée Fig. 84 présentant une surface poreuse à encoller (5806) et un évidement

(5807) en son cenfre

- une plaque (5809) présentant une surface à encoller (5817)

- une plaque (5810) en matériau magnétisable, par exemple du fer , fixée à la plaque (5809). -242-

ensemble 3 il est constitué d'une plaque (5811) présentant une surface poreuse à encoller (5816)

La partie amovible du dispositif de fixation comporte les ensembles suivants

ensemble 4 il est composé d'un bras (5815) comportant une partie magnétisable (5814) et hé a un positionneur POS1 non représenté La partie (5814) comporte un enroulement de fil electnque autour d'un noyau en fer, non représentés En alimentant cet enroulement on sohdanse (5814) et (5810) et en intenompant l'alimentation on désohdanse ces éléments

ensemble 5 il est composé d'un bras (5813) comportant une partie magnétisable (5812) et hé à un positionneur POS2 non représenté La partie (5812) comporte un enroulement de fil électrique autour d'un noyau en fer, non représentés En alimentant cet enroulement on sohdanse (5808) et (5812) et en intenompant l'alimentation on désohdanse ces éléments

La partie fixe du positionneur POS1 et l'élément 3 sont solidaires de la table optique La partie « fixe » du positionneur POS2 est solidaire de la partie mobile du positionneur POS1 Le positionneur POS1 permet un déplacement un axe dans le sens de l'axe z et une rotation autour de l'axe y Le positionneur POS2 permet une translation smvant chacun des vectems y et fc et une rotation autour de l'axe z II permet également, mais avec une frès faible marge de réglage, une rotation autour de l'axe k

Pour effectuer le positionnement du système, on encolle préalablement les surfaces à encoller désignées plus haut On alimente les aimants des parties (5812) et (5814) de mamere a sohdanser les parties amovibles et les parties non amovibles On effectue le réglage normalement avec les positionneurs POS1 et POS2 On laisse le système en place suffisamment longtemps pom que la colle sèche On cesse alors d'alimenter les aimants de mamere à désohdanser les parties amovibles des parties non amovibles Le réglage est alors définitif et la partie amovible peut être retirée

La colle utilisée doit avoir un temps de pnse suffisamment long pom ne pas gêner le réglage et doit avoir un refrmt mimmal lors du séchage II est également possible de prévoir des onfices dédiés dans les plaques (5811) et (5805) pour injecter la colle après positionnement Cet exemple est donne pour le positionnement des SLM mais est adaptable simplement à l'ensemble des éléments devant être positionnes dans le système En fonction du nombre de degrés de liberté requis et du type d'élément a positionner, la forme des plateformes mobiles doit être adaptée Le pnncipe consistant a utiliser des positionneurs amovibles et à effectuer une fixation définitive par collage reste toutefois valable -243-

11. Support adapté au transport et au maintien des réglages effectués

Les microscopes décnts dans les modes de réalisation 3 à 5 sont constitués d'un ensemble d'éléments fixes a une table optique Lors d'un éventuel transport, des chocs même légers peuvent entraîner un dérèglement du système Lors d'une utilisation prolongée, la poussière peut se déposer sur les différents éléments optiques Afin de pallier à ces inconvéments, le nucroscope décnt peut êfre protégé par un système dont le pnncipe est représenté sur la figure 86 La table optique, qui peut être par exemple en granité, constitue la partie inféneure d'une boîte hermétiquement fermée (5901) Le fait que la boîte (5901) soit hermétiquement fermée protège l'ensemble contre la poussière La boîte (5901) est incluse dans une boîte plus grande (5902), sans qu'il y ait contact direct entre les deux boîtes Les deux boîtes sont séparées par des amortisseurs qui peuvent être des ballons en caoutchouc (5903) gonflés de manière appropnee, et qui sont disposés sur les 6 cotés de la boîte (5901) Ce système permet d'amortir les chocs et d'éviter une perte des réglages lors d'un transport, tout en garantissant une bonne suspension de la table optique lors de l'utilisation

Toutefois, il est nécessaire que la partie du système constituée par les deux objectifs et leurs positionneurs reste accessible Ceci entraîne certaines adaptations de la forme des boîtes, visibles sur la Fig 87, adaptées ici a l'exemple constitué par les modes de réalisation 4 et 5 La paroi avant de la boîte (5901) constitue un plan vertical passant s la Fig 63 entre les miroirs (4451) et (4452) La boîte (5901) présente une excroissance (5903) permettant la fixation des miroirs (4454)(4455)(4456) et de l'objectif (4317) en-dessous du plan de la table optique proprement dite La boîte (5902) représentée en pointillés présente une échancrure (5904) ménageant un accès aux objectifs et à l'échantillon Afin que les miroirs (4453) et (4454) ainsi que les entrées des objectifs restent inaccessibles, et afin d'éviter toute entrée de poussière, la forme de la boîte (5902) doit également être adaptée localement Cette adaptation est détaillée s la Fig 88 La boîte présente deux excroissances (5905) et (5906) contenant respectivement les miroirs (4453) et (4454), et présente deux ouvertures liées à l'entrée des objectifs (en fait, aux montures de ces objectifs ) par des manchons en caoutchouc (6001) (6002) Les positionneurs des objectifs et de l'échantillon, non représentes, sont exténeurs a la boîte (5902)

Sur la Fig 87, les amortisseurs (5903) n'ont pas été représentés, mais ils sont présents dans toute la zone compnse entre les deux boîtes

Un capot de fermeture permettant une protection de la partie accessible (objectifs et échantillon, ainsi que le s positionneurs) doit également être prévu Dans le cas du mode de réalisation 5, la boîte externe (5901) doit comporter un compartiment supplémentaire pour contemr les éléments qui ne sont pas sur la table optique

12.Variantes:

D'autres modes de réalisation sont bien entendu possibles et la descnption ci-dessus n est pas limitative II est en particulier possible d'utiliser d'avantage d'objectifs, ou d'effectuer d'autres combinaisons des types de réceptem et de déviateur de faisceau, ou de modifier les algorithmes de recalage en phase -244-

13. Possibilités d'application industrielle:

13.1. Références

[Thomas] 4-D imaging software observe livtng cells , Charles Thomas & John White, Scientific Computing

World p 31, décembre 1996 [Holton] Under a Microscope Confocal Microscopy Casts New Light on the Dynamics ofLife , W Conard

Holton, Photomcs Spectra p 78, fevner 1995

[Pike] Phase measuring scanning optical microscope, J G Walker & E R Pike, brevet WO 91/07682

[Bertero] Analytic inversion formula for confocal scanning microscopy, B Bertero, C De Mol, E R Pike, Journal ofthe Optical Society of Amenca vol 4 no 9, septembre 1987 [Ueki] Three-dimensional optical memory wtth a photorefractive crystal, Y Kawata, H Ueki, Y Hashimoto,

S Kawata, Applied Optics vol 34 no 20 p 4105, 10 juillet 1995

[Juskaitis] Dtfferential phase-contrast microscope with a split detectorfor the readout system ofa multilayered optical memory, Y Kawata, R Juskaitis, T Tanaka, T Wilson & S Kawata, Applied Optics vol 35 no 14 p 2466

10 mai 1996 [Parthenopoulos] Three-dimensional optical storage memory, D A Parthenopoulos & P M Rentzepis, Science

245, p 843, 1989

[Stnckler] Three dimensional optical data storage in refracttve média by two-photon excitation, J H Stnckler &

W W Webb, Optics Letters 16, p 1780, 1991

[McMichael] Compact holographie storage demonstrator wtth rapid access, I McMichael, W Chnstian, D Pletcher, T Y Chang & J H Hong, Applied Optics vol 35 no 14 p 2375, 10 mai 1996

[Bashaw] Cross-talk considérations for angular and phase-encoded multiplexing in volume holography,

M C Bashaw, J F Heanue, A Aharoni, J F Walkup & L Hessehnk, Journal of the Optical Society of Amenca B vol 11 no 9 p 1820 septembre 1994

[Barbarstatis] Shift multiplexing with sphencal référence waves, G Barbarstatis M Levene,D Psaltis, Applied Optics vol 35 no 14 p 2403 10 mai 1996

13.2. Discussion

Les microscopes courants forment par un procède optique une image bidimensionnelle conespondant a une coupe aggrandie de l'objet observe Cette image peut le cas échéant être emegisfrée par une caméra video afin de pouvoir êfre restituée ulténemement

Il est possible de générer une image tridimensionnelle en utilisant un de ces microscopes et en faisant vaner le réglage de focalisation A chaque réglage conespond un plan de coupe différent, et une image en trois dimensions peut êfre reconstituée a partir de ces plans de coupe Certains microscopes munis d'un dispositif de focalisation motonse et d'un logiciel appropné effectuent cette opération automatiquement De tels microscopes sont décnts par exemple dans [Thomas] Le défaut majem de ces microscopes est que l'image d'un plan de coupe est fortement perturbée par le contenu des aufres plans

Il existe également des microscopes confocaux, dans lesquels l'éclairage est focalise sur un point et l'image tridimensionnelle est générée en balayant tous les points de l'objet De tels microscopes sont décnts par -245-

exemple dans [Holton]. Ces microscopes permettent de résoudre le problème des systèmes décrits dans [Thomas], à savoir que la valeur détectée en un point donné est peu perturbée par la valeur des points proches.

Les microscopes confocaux présentent le défaut de ne pouvoir détecter que l'intensité de l'onde reçue et non sa phase. Comme beaucoup d'objets couramment observés se caractérisent essentiellement par des variations d'indice entraînant des variations de phase de l'onde transmise, ce défaut entraîne une gêne importante pour les utilisateurs qui doivent colorer les échantillons observés. C'est pomquoi des efforts ont été faits pour réaliser des microscopes confocaux sensibles à la phase de l'onde transmise [Pike]. Pom diverses raisons, ces microscopes restent peu efficaces.

L'image générée par les microscopes confocaux n'a pas la définition théorique la meilleure qui puisse en principe être obtenue à partir de l'onde reçue par l'objectif utilisé. Ceci est lié, comme indiqué en 7.18.3., au fait que la méthode de microscopie confocale filtre fortement les hautes fréquences. C'est pomquoi des efforts ont été faits pour améliorer la résolution de ces microscopes confocaux [Bertero].

Le présent microscope remédie aux défauts des microscopes précédents en termes de résolution et en termes de détection de phase. Il peut être avantageusement employé en remplacement de ces microscopes, dans l'ensemble de leurs applications.

Un domaine d'application nouveau des microscopes est la lecture de mémoires optiques tridimensionnelles. Un premier type de mémoires optiques est celui ou les données sont enregistrées point par point dans un matériau tridimensionnel sous forme de variations des propriétés locales de ce matériau ([Ueki], [Parthenopoulos], [Strickler] ). Ces données doivent donc être lues par un microscope capable de lire des données tridimensionnelles sans que les données enregistrées dans plusieurs couches successives de matériau se perturbent les unes les aufres. La perturbation de l'image d'un point par les rayons diffractés par les points voisins se traduit donc ici par une interférence intersymboles. En général les auteurs ont utilisé des couches peu nombreuses à forte distance les unes des autres, ce qui limite ces interférences. Cependant, si une quantité de données plus importante devait êfre emegisfrée dans un volume donné, les méthodes classiques de microscopie se révéleraient insuffisantes. En particulier dans le cas de [Strickler] et [Ueki] les données sont enregistrées sous forme de variations d'indice et le nucroscope confocal est particulièrement mal adapté à leur lecture. C'est pourquoi des efforts ont été faits pour améliorer le système de lecture de données [Juskaitis].

Le présent microscope constitue la solution de lecture permettant une intégration maximale de ce type de mémoires. En effet l'image qu'il permet d'obtenir prend en compte l'indice et diminue frès fortement l'interférence intersymboles. Dans le cas idéal ou l'ensemble du faisceau issu de l'échantillon serait détectée, ce qui peut êfre réalisé en augmentant le nombre ou l'ouverture des objetifs, l'interférence intersymboles est entièrement supprimée.

Un autre type de mémoires optiques est constitué par les mémoires holographiques. Par exemple, dans le document [McMichael], les données sont lues en illuminant l'objet constitué par la mémoire optique avec un faisceau parallèle de direction variable et en détectant l'onde issue de l'échantillon pom chaque direction du -246-

faisceau d'éclairage. Une direction du faisceau d'éclairage conespond à une page de données et chaque point de la représentation fréquentielle bidimensionnelle de l'onde issue de l'objet pour une onde d'éclairage donnée conespond à un bit stocké dans la mémoire optique. Chaque point de la représentation bidimensionnelle de l'onde issue de l'objet conespondant par ailleurs à un point de la représentation tridimensionnelle de l'objet lui-même, un bit stocké dans la mémoire optique conespond donc à un point de la représentation fréquentielle tridimensionnelle de cette mémoire optique. Une analyse de ce type de mémoires en termes de représentations fréquentielles peut êfre trouvée dans [Bashaw]

Le présent microscope peut donc avantageusement êfre utilisé pour lire de telles mémoires optiques, les bits stockés en mémoire conespondant directement à des points de la représentation fréquentielle tridimensionnelle obtenue par le présent microscope à partir de l'objet constitué par la mémoire optique. Le système d'écriture de la mémoire optique doit toutefois êfre prévu pour ne pas utiliser les points de la représentation fréquentielle tridimensionnelle qui ne sont pas obtenus par le présent microscope, sauf à augmenter le nombre d'objectifs utilisés pour éviter la non-détection de certaines fréquences.

D'autres types de mémoires optiques holographiques existent [Barbarstatis] . D'une manière générale, le présent microscope permet l'obtention d'une représentation de l'objet observé qui serait « parfaite » dans le cas idéal ou les objectifs utilisés couvriraient l'ensemble de l'espace autom de l'objet. Dans le cas ou la représentation obtenue est parfaite, les données stockées en mémoire et détectées sous la forme d'une représentation fréquentielle tridimensionnelle de l'objet peuvent êfre ensuite restituée sous n'importe quelle forme: il est possible de simuler, en utilisant la représentation connue de l'objet constitué par la mémoire optique, l'onde qui serait obtenue à partir de n'importe quel éclairage ou par n'importe quelle aufre méthode de lecture (à la longueur d'onde utilisée par le microscope). Tous les type de mémoire optique peuvent donc être lus par le présent microscope, moyennant dans le cas général des opérations supplémentaires permettant la reconstitution des données à partir de la représentation fréquentielle de l'objet constitué par la mémoire optique. Dans le cas ou la représentation n'est pas parfaite, des précautions adéquates doivent être prises pour prendre en compte les « zones d'ombre » de la représentation fréquentielle de l'objet.

Claims

-247-

REVENDICATIONS .

1-Microscope comportant:

- un ou plusiems réceptems (118) permettant chacun l'emegisfrement numérique de figures d'interférences, chacune desdites figures d'interférences étant formée s une surface de réception, par une onde issue de l'objet observé (112) éclairé par une onde d'éclairage plane, et par une onde de référence n'ayant pas traversé l'objet observé,

- un dispositif (109)(111)(124) permettant la génération de plusieurs desdites ondes d'éclairage planes, éclairant successivement l'objet observé, et différant entre elles par leur direction exprimée dans un repère lié auxdits réceptems, caractérisé par le fait qu'il comprend des moyens pour générer, à partir de plusieurs desdits enregistrements numériques de figures d'interférences, obtenus lorsque l'objet est éclairé successivement par plusieurs desdites ondes d'éclairages différant enfre elles par lem direction, une représentation tridimensionnelle de l'objet observé telle qu'en représentation fréquentielle la distribution du décalage de phase affectant chaque point de ladite représentation soit concentrée autour d'une valeur constante.

2- Microscope selon la revendication 1, caractérisé par le fait qu'il comporte des moyens pour générer lesdites ondes planes et lesdites ondes de référence de sorte que la différence de phase enfre une onde plane et l'onde de référence avec laquelle elle interfère soit reproductible.

3- Microscope selon la revendication 2, caractérisé par le fait qu il comporte des moyens pour générer lesdites ondes planes et lesdites ondes de référence de sorte que la différence de phase entre une onde plane et l'onde de référence avec laquelle elle interfère soit indépendante de l'onde plane considérée.

4- Microscope selon une des revendications 1 à 3, caractérisé par le fait qu'il comporte des moyens pour déterminer la différence entre les décalages de phase affectant deux sous-représentations de l'objet observé obtenues à partir d'ondes d'éclairage de direction différente.

5-Microscope selon la revendication 4, caractérisé par le fait que lesdits moyens pom déterminer ladite différence entre les décalages de phase affectant deux sous-représentations de l'objet observé comportent des moyens pour déterminer l'écart de phase, en représentation fréquentielle, entre les restrictions desdites sous-représentations à un ensemble constitué par l'intersection desdites sous-représentations.

6-Microscope selon la revendication 5, caractérisé par le fait que ledit ensemble inclus dans l'intersection desdites sous-représentations fréquentielles, défini dans la revendication 5, est constitué par le point origine fixe de la représentation fréquentielle tridimensionnelle de l'objet.

7-Microscope selon la revendication 6, caractérisé par le fait qu'il comporte des moyens pour: -248-

REVENDICATIONS

- mesmer, dans une phase préliminaire, et pour chaque onde d'éclairage utilisée, la partie non diffractée de l'onde issue de l'objet, qui constitue la valeur au point ongine de la sous-représentation fréquentielle bidimensionnelle associée à cet éclairage,

- mesurer, lors de l'acquisition, et pour pour chaque onde d'éclmrage utilisée, la partie diffractée de l'onde issue de l'objet, à partir de laquelle est calculée la partie de la sous-représentation fréquentielle bidimensionnelle conespondant aux points aufres que le point ongine

8- Microscope selon la revendication 5, caracténse par le fait que ledit ensemble inclus dans l'intersection desdites sous-representations fréquentielles, défini dans la revendication 5, comporte des points aufres que ledit point ongine fixe de la représentation tndimensionnelle de l'objet, défim dans la revendication 6

9-Mιcroscope selon une des revendications 4 à 8, caracténse par le fait qu'il comporte des moyens pour

- obtemr, à partir de chaque onde d'éclairage utilisée, une sous-représentation de l'objet,

- déterminer, en représentation fréquentielle, et à une constante près, le décalage de phase affectant chacune desdites sous-représentations de l'objet,

- multiplier chacune desdites sous-représentations par un nombre complexe dont la phase est, a une constante près, l'opposé du décalage de phase affectant la sous-représentation considérée

10-Mιcroscope selon une des revendications 4 à 8, caracténse par le fait qu'il comporte des moyens pom - obtemr, à partir de chaque onde d'éclairage utilisée, une sous-représentation de l'objet,

- modifier la différence de phase entre chaque onde d'éclairage utilisée et l'onde de référence interférant avec cette onde d'éclairage, de mamere à ajouter à cette différence de phase une valem égale, a une constante près, au décalage de phase affectant la sous-représentation de l'objet obtenue initialement a partir de ladite onde d'éclairage

11- Microscope suivant une des revendications 1 à 10, caracténse par les faits suivants

- il comporte des moyens pour enregistrer sur chaque réceptem une onde de référence issue de l'objet, l'onde éclairant l'objet ayant une direction de référence lors de cet enregistrement,

-il comporte des moyens pour emegistrer pénodiquement et sur chaque récepteur l'onde issue de l'objet, l'onde éclairant l'objet ayant la direction de référence lors de ces enregistrements,

- il comporte des moyens pour déterminer, pom chaque réceptem et pour chacun desdits enregistrements pénodiques, la différence de phase courante enfre l'onde ainsi emegisfrée et l'onde de référence, -249-

REVENDICATIONS

- il comporte des moyens pom décaler chaque sous-représentation de l'objet d'une phase conespondant à ladite différence de phase cornante obtenue à partir d'un desdits emegisfrements périodiques effectué à un instant proche de l'instant d'acquisition de la ou des ondes ayant permis le calcul de ladite sous-représentation.

12-Microscope selon une des revendications 1 à 11, caractérisé par le fait qu'il comporte des moyens pom diviser l'ensemble de la représentation tridimensionnelle de l'objet par sa valeur au point origine.

13 -Microscope selon une des revendications 1 à 12, caractérisé par le fait que lesdits moyens pom générer ladite représentation tridimensionnelle de l'objet comportent des moyens pour déterminer, en chaque point de ladite représentation tridimensionnelle en représentation fréquentielle:

- les valems en ce point de chaque sous-représentation atteignant ce point.

- l'écart-type du bruit affectant chacune desdites valems, ou une approximation de cet écart-type, ou une grandeur liée à cet écart-type ou à son approximation.

- la valeur la plus probable de la représentation tridimensionnelle en ce point compte tenu de la valeur de chaque sous-représentation en ce point et du bruit affectant chaque sous-représentation en ce point, ou une approximation de cette valem.

14- Microscope smvant une des revendications 1 à 13, caractérisé par les faits suivants: -il comporte des moyens pour générer, à partir de chaque onde d'éclairage utilisée, une représentation fréquentielle d'une partie de l'onde issue de l'objet incluant la partie non diffractée de cette onde,

-il comporte des moyens pom déterminer le point de module maximal de ladite représentation fréquentielle, ce point conespondant à la partie non diffractée de l'onde issue de l'objet.

15-Microscope suivant la revendication 14, caractérisé par le fait que ledit point de module maximal est déterminé, pour chaque onde d'éclairage utilisée, lors d'une phase préliminaire et en utilisant un objet fransparent.

16-Microscope selon une des revendications 1 à 15, caractérisé par le fait qu'il comporte au moins un objectif (113) qui collecte l'onde issue de l'objet sous une ouverture élevée et la fransforme en onde paraxiale, cette onde paraxiale parvenant ensuite à une desdites surfaces de réception.

17-Microscope selon la revendication 16, caractérisé par les faits suivants:

- Ledit objectif est affecté par des abenations telles que l'image d'un objet ponctuel par ledit objectif est de diamètre supérieur au diamètre de la tache de diffraction qui serait obtenue si l'objectif était limité par la diffraction, mais inférieur à une fraction du diamètre total de l'image observée, -250-

REVENDICATIONS

- Le microscope comporte des moyens pour inverser la relation linéaire entre l'onde issue de l'objet et l'onde captée sur la surface de réception.

18-Microscope selon la revendication 17, caractérisé par le fait que l'image, dans le plan focal image dudit objectif, d'un faisceau qui est parallèle dans l'objet et dont le diamètre dans l'objet est celui de la zone observée, est un point dont la largeur est déterminée par la diffraction et non par les abenations optiques.

19-Microscope selon la revendication 18, caractérisé par le fait que la distance enfre l'axe optique et ledit point image d'un faisceau qui est parallèle dans de l'objet, est proportionnelle au sinus de l'angle enfre l'axe optique et la direction dudit faisceau parallèle dans 1 ' objet.

20-Microscope suivant une des revendications 16 à 19, caractérisé par les fait suivants:

- une surface de réception (2018) associée audit objectif est placée dans un plan ou ledit objectif forme une image d'un plan de l'échantillon observé, - il comporte des moyens (2009)(2011)(2024) pour générer une onde de référence parvenant à ladite surface de réception, cette onde de référence étant l'image d'une onde virtuelle plane dans l'objet observé,

- il comporte des moyens pom effectuer la transformée de Fourier bidimensionnelle de l'onde détectée sur ladite surface de réception.

21 -Microscope suivant une des revendications 1 à 20, caractérisé par le fait qu'il comporte un dispositif d'atténuation contrôlée de ladite onde plane éclairant l'objet.

22- Microscope selon une des revendications 1 à 21, caractérisé en ce qu'il comporte un système de décalage de phase formé d'une lame biréfringente (2602) induisant un décalage de phase de 120 degrés entre ses deux axes neutres, précédée d'un rotatem de polarisation (2601) permettant d'orienter la polarisation du faisceau suivant l'un ou l'aufre desdits axes neufres, et suivie d'un second rotatem de polarisation (2603) permettant de ramener la direction de polarisation du faisceau en sortie du dispositif à une orientation fixe.

23 -Microscope suivant une des revendications 1 à 22, caractérisé par le fait que ledit dispositif de génération d'une onde plane éclairant l'objet observé comporte:

- un déviateur de faisceau (109) générant des variations de direction faibles d'un faisceau paraxial,

-un système optique de forte ouverture (111) transformant lesdites variations de direction faibles du faisceau paraxial incident en variations de direction importantes du faisceau sortant.

24-Microscope selon la revendication 23, caractérisé par le fait que ledit déviateur de faisceau comporte un ensemble (2809) de Ndev déviateurs élémentaires (2805) traversés successivement par le faisceau, chacun desdits -251-

REVENDICATIONS

déviatems élémentaires pouvant dévier le faisceau dans Ndir directions distinctes, et l'ensemble desdits déviateurs pouvant dévier le faisceau dans Ndιr^Ndev directions distinctes, avec Ndir > 2 et Ndev ≥ 2

25-Mιcroscope selon la revendication 24, caracténse par le fait que chacun desdits déviateurs élémentaires comporte un pnsme biréfringent (2802) déviant différemment le rayon ordinaire et le rayon extraordinaire, précédé d'un rotatem de polansation (2801) contrôlé électroniquement et permettant d'onenter le vectem polansation du faisceau selon l'axe ordinaire ou l'axe extraordinaire dudit pnsme

26-Mιcroscope selon la revendication 25, caracténse par le fait que chacun desdits déviateurs élémentaires comporte un second rotateur de polansation (2803) et un polanseur (2804), disposés de mamere à suppnmer les rayons parasites engendrés lorsque l'angle de rotation de la polansation par un rotateur diffère de 90 degrés

27- Microscope selon une la revendication 23, caracténse par le fait que ledit déviateur de faisceau comporte un premier modulatem spatial (4405), placé dans un plan d'espace, commandé de mamere à générer, à partir d'un faisceau incident de direction donnée, un faisceau sortant dont la direction peut être commandée en modifiant l'état du modulatem,

28-Mιcroscope selon la revendication 27, caracténse par le fait que ledit modulateur spatial est un modulateur binaire

29-Mιcroscope selon une des revendications 27 ou 28, caracténse par le fait qu'il comporte un diaphragme (4406), placé dans un plan de fréquence, et permettant la suppression des faisceaux parasites générés par ledit premier modulateur spatial

30-Mιcroscope selon une des revendications 27 à 29, caracténse par les faits suivants -il comporte un second modulateur spatial (4412),

- ledit second modulateur spatial permet une modulation d'intensité,

- ledit second modulateur spatial est placé dans un plan de fréquence, et permet la suppression des faisceaux parasites générés par ledit premier modulateur spatial

31- Microscope selon la revendication 23, caracténse par le fait que ledit système de génération d'une onde plane éclairant l'objet observé comporte un séparateur de faisceau (5115) place entre ledit déviateur de faisceau ( 113) et ledit système optique de forte ouverture (4317), qui divise le faisceau issu dudit déviateur de faisceau en

- une onde d'éclairage dingée vers ledit système optique de forte ouverture, - une onde de référence qui est ensuite dingée vers une ou plusieurs surfaces de réception et qm ne traverse pas l'objet observé -252-

REVENDICATIONS

32-Microscope selon la revendication 31, caractérisé par le fait que ledit déviateur de faisceau est un miroir mobile (5113) d'orientation variable.

33-Microscope selon une des revendications 1 à 32, caractérisé par le fait qu'il comporte un moyen pom multiplier chaque point d'une sous-représentation fréquentielle par un coefficient réel compensant les différences d'atténuation dues à l'anisofropie de diffusion du rayonnement.

34- Microscope selon une des revendications 1 à 33, caractérisé par le fait qu'il comporte un moyen (2241) pour générer deux polarisations distinctes de chaque faisceau d'éclairage

35-Microscope selon une des revendications 1 à 34, caractérisé par le fait qu'il comporte des moyens (2238)(2252) pom analyser l'onde issue de l'objet selon deux directions de polarisation distinctes.

36-Microscope selon une des revendications 34 ou 35, caractérisé par le fait qu'il comporte un moyen pour générer une sous-représentation unique de l'objet à partir des ondes mesurées sur la ou les surfaces de réception pom chacune desdites direction de polarisation du faisceau d'éclairage et/ou chacune desdites directions d'analyse

37-Microscope selon une des revendications 34 à 36, caractérisé par le fait que ledit dispositif pour générer deux directions de polarisation distinctes de l'onde d'éclairage comporte:

- un séparateur de faisceau (5102) séparant le faisceau en un faisceau -F- et un faisceau FB.

- des lentilles ( 103)(5108) placées s chaque faisceau FA et FB et focalisant ces faisceaux sm des points de focalisation ou sont placés des obturateurs (5104)(5109),

- un dispositif (5112) permettant de superposer à nouveau les faisceaux F4 et FB ayant fraversé leurs obturateurs respectifs,

- un dispositif (5111) placé sur la trajectoire de l'un des faisceaux FA ou FB, dans la partie de la trajectoire ou les deux faisceaux sont distincts, et modifiant la polarisation de ce faisceau.

38-Microscope selon une des revendications 35 à 37, caractérisé par le fait que ledit dispositif pom analyser l'onde issue de l'objet selon deux directions de polarisation distinctes comporte un dispositif permettant la modification de la direction de polarisation de l'onde issue de l'objet ou de l'onde de référence.

39-Microscope selon la revendication 38, caractérisé par le fait que ledit dispositif permettant la modification de la direction de polarisation de l'onde issue de l'objet ou de l'onde de référence comporte: - un séparateur de faisceau (5234) séparant ladite onde en deux faisceaux A et B -253-

REVENDICATIONS

- une lame d'onde LA (5238) disposée sur le frajet dudit faisceau A et une lame d'onde LB (5239) disposée sm le frajet dudit faisceau B, l'angle entre les axes neutres de ces deux lames d'onde étant d'environ 45 degrés.

40-Microscope selon la revendication 38,caractérisé par par le fait qu'il comporte: - un séparateur de faisceau (5230) séparant en deux faisceaux C et D celle des ondes d'éclairage ou de référence qui n'est pas affectée par ledit dispositif de modification de la direction de polarisation.

- un moyen (5232) pom superposer ledit faisceau A audit faisceau C, et un moyen (5236) pom superposer ledit faisceau B audit faisceau D,

- une première surface de réception (5171) recevant le faisceau résultant de la superposition desdits faisceaux A et C

- une seconde surface de réception (5174) recevant le faisceau résultant de la superposition desdits faisceaux B et D

41-Microscope selon une des revendications 39 ou 40, caractérisé par le fait que lesdites lames d'onde sont positionnées de mamere à ce que, sur la ou les surfaces de réception auxquelles parviennent les faisceaux A et B, l'angle enfre la direction de polarisation de l'onde de référence et la direction de polarisation de la partie non diffractée de l'onde d'éclairage soit d'environ 45 degrés.

42- Microscope selon une des revendications 1 à 41, caractérisé par le fait qu'il comporte un moyen de suppression de la partie non diffractée de l'onde d'éclairage, constitué par un dispositif (4427) placé dans un plan ou la partie non diffractée de l'onde d'éclairage a une image ponctuelle et permettant d'absorber cette onde sur une zone réduite autour du point d'impact de la partie non diffractée de l'onde d'éclairage.

43 -Microscope selon la revendication 42, caractérisé par le fait que ledit moyen de suppression de la partie non diffractée de l'onde d'éclairage est constitué par un modulateur spatial binaire d'intensité (4427).

44-Microscope selon la revendication 43, caractérisé par le fait que ledit moyen de suppression de la partie non diffractée de l'onde d'éclairage est constitué par une vifre (5165) comportant un point absorbant.

45-Microscope selon une des revendications 16 à 44, caractérisé par le fait que au moins un objectif (2217) peut êfre fraversé, simultanément, dans un sens par une onde d'éclairage se dirigeant vers l'objet, et dans l'autre sens par l'onde issue de l'objet, et constitue en même temps ledit système optique de forte ouverture défini dans la revendication 23, et ledit objectif défini dans la revendication 16. -254-

REVENDICATIONS

46-Mιcroscope selon la revendication 45, caracténse par le fait qu'il comprend un miroir semi-fransparent (2211) placé sur le frajet de l'onde issue de l'objet, enfre l'objectif et la surface de réception, et permettant de superposer spatialement le faisceau d'éclairage et le faisceau issu de l'objet

47-Mιcroscope selon une des revendications 45 ou 46, caracténse par le fait qu'il comprend des moyens pour générer, à partir d'un faisceau d'ongme, un faisceau indicateur inverse ayant mêmes caractenstiques mais se propageant en sens opposé

48-Mιcroscope selon la revendication 47, caracténse par le fait que lesdits moyens pour générer un faisceau indicateur inverse comprennent

- un miroir semi-fransparent (2211) séparant le faisceau d'ongme en un faisceau non modifie et un faisceau secondaire

- une lentille (2231) focalisant le faisceau secondaire dans un plan de focalisation

- un miroir (2232), place au point de focalisation du faisceau secondaire, qui renvoie le faisceau inverse vers ladite lentille

49-Mιcroscope selon une des revendications 45 à 48, caracténse par le fait qu'il comporte plusieurs objectifs (2217)(2219) focalises sur la même partie de l'échantillon

50-Mιcroscope selon la revendication 49, caracténse par le fait que chacun desdits objectifs vénfie les conditions de la revendication 45

51-Mιcroscope selon la revendication 50, caracténse par le fait qu'il comporte des moyens pour générer, a partir de l'ensemble des ondes mesmées sur chaque capteur et pour chaque onde d'éclairage, une représentation tndimensionnelle umque de l'objet observé comprenant tous les points pouvant être obtenus à partir des ondes d'éclairage et des ondes diffractees respectivement produites et reçues par l'ensemble des objectifs

52-Mιcroscope selon une des revendications 49 à 51, caracténse par le fait qu'il comporte des moyens pour -générer un premier faisceau traversant un premier objectif en direction de l'objet observé, éclairant l'objet observé, et centré sur un point central de l'objet observé,

- générer un second faisceau qui est le faisceau indicateur inverse du premier,

- détecter l'onde reçue sur l'ensemble des surfaces de réception auxquelles parvient le premier faisceau,

53-Mιcroscope selon la revendication 52, caracténse par le fait qu'il comporte des moyens pour calculer, a partir des ondes mesmées sur lesdites surfaces de réception, la position relative des points caractenstiques de chaque objectif -255-

REVENDICATIONS

54-Microscope selon une des revendications 16 à 53, caractérisé par le fait qu'il comporte des moyens pour:

- mesurer une première fois la valeur complexe de chaque faisceau parallèle utilisé à son arrivée sur le captem auquel il parvient, la position des points caractéristiques de chaque objectif étant connue. - mesmer une deuxième fois, après déplacement des objectifs, la valeur complexe de chaque faisceau parallèle utilisé à son arrivée sur le capteur auquel il parvient,

- calculer, à partir de ces deux séries de mesures, le déplacement des points caractéristiques de chaque objectif.

55-Microscope selon une des revendications 16 à 54, caractérisé par le fait qu'il comporte exactement deux objectifs identiques en vis-à-vis (2217)(2219), et par le fait qu'un échantillon sensiblement plan (2218) peut être introduit enfre ces deux objectifs.

56-Microscope selon la revendication 55, caractérisé par le fait qu'il comporte des moyens pour:

- mesurer une première fois la valeur complexe de chaque faisceau parallèle utilisé à son arrivée sur le capteur auquel il parvient, en l'abscence de l'objet observé et pour une position connue des points caractéristiques de chaque objectif,

- mesmer une deuxième fois, en présence de l'objet observé et ou après déplacement des objectifs, la valem complexe de chaque faisceau parallèle utilisé à son arrivée sur le capteur auquel il parvient,

- calculer, à partir de ces deux séries de mesmes, l'indice et l'épaisseur de l'objet observé et/ou le déplacement des points caractéristiques de chaque objectif.

57-Microscope selon une des revendications 16 à 56, caractérisé par le fait qu'il comporte des moyens pour:

- acquérir une série d'images planes en fréquence obtenues chacune pour un éclairage différent, l'indice et l'épaisseur de l'objet observé ainsi que la position des points caractéristiques de chaque objectif étant connus. - calculer, à partir de cette série d'images planes en fréquence, la position de l'objet observé.

58-Microscope selon une des revendications 16 à 57, caractérisé par le fait qu'il comporte des moyens pour:

- mesmer l'onde issue de l'objet et ayant traversé l'objectif pour un éclairage donné,

- générer une représentation fréquentielle de cette onde, - multiplier ladite représentation fréquentielle par une fonction complexe définie en chaque point de ladite représentation fréquentielle et permettant la compensation des écarts de phase et d'intensité dûs à un ou plusieurs des phénomènes suivants:

- l'aberration sphérique due à l'indice, l'épaisseur et la position de l'objet observé,

- la non-coïncidence des points caractéristiques de chaque objectif - les abenations de l'objectif. -256-

REVENDICATIONS

59-Microscope selon une des revendications 16 à 58, caractérisé par les faits suivants:

- il comporte des moyens pour générer, à partir de l'onde reçue s une surface de réception associée à un objectif donné, une représentation fréquentielle bidimensionnelle échantillonnée de cette onde,

- la partie non diffractée de chaque onde d'éclairage utilisée a sur cette représentation fréquentielle une image centrée sm un point d'échantillonnage.

60-Microscope selon la revendication 59, caractérisé par le fait qu'il comporte un ou plusiems dispositifs optiques de distance focale variable (4430)(4429) permettant d'ajuster le pas en fréquence conespondant à un pixel d'une image plane en fréquence et/ou le pas des changements de fréquence d'éclairage opérés à l'aide du dispositif de génération de l'onde d'éclairage.

61-Microscope selon une des revendications 59 ou 60, caractérisé par le fait qu'il comporte un moyen pour ajuster en rotation par rapport à l'axe optique les valeurs des vectems d'onde produits par le dispositif de déviation du faisceau.

62-Microscope selon la revendication 61, caractérisé par le fait que ledit moyen pour ajuster en rotation par rapport à l'axe optique les valeurs des vecteurs d'onde produits par le dispositif de déviation du faisceau comporte un dispositif constitué d'un premier groupe de miroirs fixes (4901)(4902) et d'un second groupe de miroirs (4910), vérifiant les conditions suivantes: - le premier groupe de miroirs symétrise le vecteur d'onde du faisceau incident par rapport à un axe donné,

- le second groupe de miroirs symétrise le vecteur d'onde du faisceau incident par rapport à un second axe,

- le second groupe de miroirs est mobile en rotation autom d'un axe (4909) orthogonal au plan de ces deux axes.

63-Microscope selon une des revendications 1 à 62, caractérisé par le fait que les données tridimensionnelles sont stockées sur un support à accès séquentiel pendant le traitement et que le calcul de la représentation tridimensionnelle comporte des phases d'échange d'axes ramenant provisoirement l'axe vertical dans un plan horizontal.

64-Microscope selon une des revendications 1 à 63, caractérisé par le fait qu'il comporte des moyens pour: - extraire de la représentation fréquentielle tridimensionnelle de l'objet un plan passant par l'origine et orthogonal à un axe de projection donné.

- effectuer la transformation de Fourier bidimensionnelle inverse de ce plan, obtenant ainsi une projection suivant la direction recherchée. -257-

REVENDICATIONS

65-Microscope selon une des revendications 1 à 63, caractérisé par le fait qu'il comporte des moyens pom extraire la valem maximale du module de la représentation spatiale tridimensionnelle selon une direction de projection donnée, et pom générer une image bidimensionnelle à partir d'une série de telles valeurs maximales.

66-Microscope selon une des revendications 1 à 65, caractérisé par le fait que la plus grande partie du dispositif optique est incluse dans une boîte hermétiquement fermée (5901), elle-même incluse dans une seconde boîte (5902) plus grande, la liaison enfre ces deux boîtes se faisant par l'intermédiaire d'un ensemble d'amortisseurs (5903).

67-Images générées par un microscope selon une des revendications 1 à 66

68-Méthode de fabrication d'un microscope selon une des revendications 1 à 66, caractérisée par le fait que des positionnems amovibles (5813)(5815) sont utilisés lors du réglage du microscope et par le fait que chaque élément du microscope est fixé à l'aide d'un liant, le positionneur étant retiré après solidification définitive du liant.