WO1999043736A1

WO1999043736A1 - Polymeres transporteurs migrant dans des organes cibles et polymeres contenant des medicaments

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Publication number: WO1999043736A1
Application number: PCT/JP1999/000872
Authority: WO
Inventors: Mitsuru Hashida; Ken Akamatsu
Original assignee: Ono Pharmaceutical Co., Ltd.
Priority date: 1998-02-27
Filing date: 1999-02-25
Publication date: 1999-09-02
Also published as: US20030104989A1; US6500916B1; KR20010041358A; EP1065233A1

Description

明細書標的臓器移行性担体ポリマ一および薬物含有ポリマー技術分野

本発明は、標的臓器 (細胞)移行性の担体 (キヤリァ一）として有用な糖修飾ポリマー、それを利用した薬物含有ポリマー、およびそれらの製造方法に関する。背景技術

従来より、特定の臓器に薬物を到達させて薬効を発揮させ、他の臓器への作用を軽減させるために、低分子薬物に高分子化合物を担体として結合させて標的臓器移行性を図る工夫が行なわれてきた。

例えば、高分子 Vol. 46， No. 11, 843-848 (1997)では、ガラクトースの特異的な受容体が肝実質細胞にあることを利用して薬物を、ガラクトースと夕ンパクまたは合成高分子を組み合わせた化合物で修飾して肝臓移行性を図ることが記載されている。

また、特開平 7-228688号において、一般式

(式中、 X aは重合度 2 0〜5 4 0であり、 R^aは水素、低級アルキルまたはベンジル基を表わす。）で示されるポリ一 L一グルタミン酸の構成べプチド結合の一部または全部を一般式

で表わされる基で置換したポリ一 L一グルタミン酸誘導体が、薬物の肝臓移行性のための担体として有用であることが記載されている。薬物は、上記一般式中のグルタミン酸中の力ルポキシル基と直接、アミド結合、エステル結合、あるいはイオン結合等で結合している。薬物の具体例としてビタミン K 5が挙げられている。

さらに、 International. J. Pharmaceutics, 155, 65-74 (1997)には、一般式

で示される PGE!含有— L—グルタミン酸誘導体のポリマー（以下、ポリマ一 P Aと表記する。）が、 PGE!の肝臓移行性を図るための高分子化プロドラッグとして記載されている。薬物（PGE ) と L_グルタミン酸とは、エチレンジァミン（― NH— CH₂CH₂_NH— ) をスぺ一サ一としてアミド結合を介して結合している。

上記ポリマー P Aを製造する際、 PGE!とスぺ一サーであるエチレンジァミンとの縮合によるアミド化反応（カルポジイミド（CD I) 等を用いて、 PGE!を活性型エステルにして、エチレンジァミンと反応させる。）を行なうが、その時、アルカリ条件下での反応になり、アルカリ条件下では不安定な薬物（例えば、 PGE!) は分解してしまい、ポリ一 L—グルタミン酸への導入率が上がらないという問題点がある。同文献では、ポリマ一 1分子 (L—グルタミン酸の重合度 = 101) 当たりの薬物（PGE の導入量は 1.6個である。

本発明者は、スぺーサ一としてエチレンジァミン（_NH— CH₂CH₂— NH-) の代わりに、ヒドラジン（― NH— NH— ) を用いて薬物（例えば、 PGEi) と L一グルタミン酸を結合させることで、上記の問題点を解決した。すなわち、薬物（PGEi) を導入する反応は弱酸性条件下で行なわれるのでアルカリ条件下で不安定な薬物でも安定に導入されることを見出した。これにより、薬物（例えば、 PGE のポリ— L一グルタミン酸への導入率を改善し、より優れた薬効を示す薬物含有ポリマーの製造に成功した。さらに、この場合、どのような化合物でも安定的に導入されることがわかった。例えば、本発明ポリマー 1分子（L一グルタミン酸の重合度 =97) 当たりの薬物（PGE の導入量は 5個であり、導入率は文献に比べて約 3倍である。

さらに、投与後の肝臓への薬物の集積度は、ヒドラジンを用いた本発明ポリマーの方がエチレンジアミンを用いたポリマーに比べて高く、薬効 (PGE!が有する肝細胞保護作用）面でも優れていた。

また、このヒドラジンと薬物（PGE との反応は、室温で単に撹拌するだけの簡単な操作で済むという利点がある。発明の開示

本発明は、

(1) 一般式（A)

(式中、重合度 dは 20〜500であり、 Rは水素原子、 C l〜6アルキルまたはベンジル基を表わす。ただし、複数存在する Rは同じでも異なっていてもよい。）で示されるポリ一 L一グルタミン酸の構成ペプチド結合の一部または全部が一般式

■NH-CH-CO- -NH-CH-CO— CH₂

CH₂ (B) および (C) CO NH NH₂ G N=

(式中、、 N：Hm は NH または

G G

(基中、 Gはヒドラジンに結合できるように修飾した糖類CC CNGNMIIIIを表わし、

) 22

mは Iが単結合のときは 1であり、 Iが二重結合のときは 0である。）で示される基（基中、（1) 一般式（B) および（C) で示される基は必須の置換基であり、かつ一般式（C) で示される基の置換個数が 2以上の場合、すべて同一の基であるものとする。）で置換されたポリマー（以下、ポリマ — P 1と表記する。）、

(2) 一般式（A)

(式中、すべての記号は請求の範囲 1と同じ意味を表わす。）で示されるポリー L一グルタミン酸の構成べプチド結合の一部または全部を一般式

(式中、 "^Hmは請求の範囲 1と同じ意味を表わし，

G

I

NHn は NH または N

II D D D

(基中、 Dは薬物を表わし、 nは：が単結合のときは 1であり、；が二重結合のときは 0である。）で示される基（基中、（1 ) 一般式（C ) および（D) で示される基は必須の置換基であり、かつ（2 ) —般式（C) または（D) で示される基の置換個数が 2以上の場合、すべて同じ基であり、かつ（3 ) —般式（B) で示される基の置換個数は 0でもよいものとする。）で置換されたポリマ一（以下、ポリマ一 P 2と表記する。）、および

( 3 ) それらの製造方法に関する。

発明の詳細な説明

ポリマー P 1は、標的臓器（細胞）移行性を有する担体用ポリマ一であり、ポリマー P 2はそれを利用した標的臓器（細胞）移行性を有する薬物含有ポリマーである。

本発明ポリマーの標的臓器（細胞）移行性は、グルタミン酸に結合している糖類（Gで表わされる。）に依存する。臓器（細胞）には各種の糖類に対する受容体が存在することが知られており、さらに今後の研究で判明する受容体も含めて、標的臓器（細胞）に応じて結合する糖類（G) を選択して標的臓器（細胞）移行性を図ることができる。

例えば、単糖類の場合、ガラクト一ス受容体、マンノース受容体およびフコース受容体がそれぞれ、肝実質細胞、肝非実質細胞（内皮細胞およびクッパ一（Kupfier) 細胞）およびクッパー（Kupffer) 細胞に存在しているので、ガラク 1 ス、マンノース、フコース体（本発明ポリマ一 P l、 P 2における ^Hm が後記する式（G¹) 、 (G²) 、 (G³) に相当する。）を結合 G

させて肝臓（肝臓の各細胞）移行性を図ることができる。また二糖類、三糖類、四糖類等のオリゴ糖類、多糖類の場合は、標的臓器（細胞）移行性は、最末端の糖の種類に依存する。例えば、二糖類のラクトース（本発明ポリマ

— P l、 P 2におけるが後記する式（G^4a) 、 (G ^a) に相当す

G

る。）は最末端がガラクトースであるので、主に肝実質細胞に移行する。目的とする糖類としては、天然品が利用できるか、または人工的に合成することができる。

本発明ポリマー P l、 P 2における一般式中の各記号、重合度等について以下に詳細に説明する。

ポリマー P l、 P 2における一般式（A) 中、 dは本発明ポリマーの構成単位である L—グルタミン酸の重合度を示し、 20〜500の整数である。好ましくは、 40〜300の整数、より好ましくは、 50〜 150の整数である。

ポリマー P 1における、一般式（B) で示される基の置換個数（後述する y ²に相当する。）は、 5〜250個であり、好ましくは、 5〜50個である。

また一般式（C) で示される基の置換個数（後述する z ²に相当する。）は、 10〜： L 00個であり、好ましくは、 20〜60個である。ポリマー P 2における、一般式（B) で示される基の置換個数（後述する y に相当する。）は、 0〜250個であり、好ましくは、 0〜50個である。

また、一般式（C) で示される基の置換個数（後述する z ³に相当する。）は、 10〜100個であり、好ましくは、 20〜60個である。また一般式（D) で示される基の置換個数（後述する w³に相当する。）は、 1

〜20個であり、好ましくは、 1〜： L 0個である。

ポリマ一 P 1の平均分子量は、 5, 000〜150, 000である。例えば、単糖類 I

( t ^Hm が後記する式（G¹) 、 (G²) 、 (G³) に相当する。）または G ラクトース体のような二糖類（ ^Hm が後記する式（_G4a) 、 (_G ^5a) に

G

相当する。）であるポリマ一 P 1の平均分子量は、 5, 000〜100, 000であり、好ましくは、 10, 000〜30, 000である。ポリマ一 P l、 P 2における一般式（A) 中、 Rが表わす C l〜6アルキルには、メチル、ェチル、プロピル、プチル、ペンチル、へキシル基およびその異性体が含まれる。

各々の Rとしては、 i) 水素および上記した C 1〜6アルキル基の組合わせ（すべてのアルキル基は同一である。）、 ii) 水素およびベンジルの組合わせ、または iii) 水素のみの場合が好ましく、より好ましくは、 iii) 水素のみの場合である。

ポリマー P l、 P 2における一般式（C) 中、 Gで表わされる糖類は先述したように、臓器（細胞）に存在する公知の受容体または今後の研究で判明する受容体に応じて選択できる。 Gで表わされるヒドラジンに結合できるように修飾した糖類とは、例えば、 2—イミノエチル— 1—チォサッカライド体、基中に開裂した糖を含む糖類等が挙げられる。

上記、 Gで表わされる 2—イミノエチル— 1—チォサッカライド体として、 N^Hm で表記すると、例えば、

G

、

および

で示される基が挙げられる。

また、上記 Gで表わされる基中に開裂した糖を含む糖類として、 I

^^Hm で表記すると、例えば

G

および

(式中、 Qは 1〜 1 0個の糖を有する糖鎖を表わす。）で示される糖類が挙げられる。

さらに上記式中、 Qが表わす 1〜 1 0の糖類としては、例えば一般式

(式中、 p、 q、 rは、それぞれ 0または 1〜9の整数を表わす。）で示される糖類が挙げられ、好ましくは、ガラクトース、マンノース、フコース (上記一般式で P、 Q、 rがそれぞれ 0である。）であり、より好ましくは、ガラク ] スである。

\

NHm として、好ましくは

G

a) および

で示される基であり、より好ましくは、上記式（G¹) 、 (G^4a) 、 (G^5a) で示される基である。

ポリマー P 2において、グルタミン酸と Dで表わされる薬物とは、薬物の構造に応じて、 L一ダルタミン酸に導入されたヒドラジノ基 (-NH-NH₂) を介して、 L一グルタミン酸とそれぞれ、ヒドラゾン結合、アミド結合等の各種の結合を介して結合している。

Dとして表わされる薬物はいずれの薬物でもよいが、アル力リ条件下で不安定な物質が好ましい。このようなアルカリ条件としては、 pH8〜l lが好ましい。もちろん、アルカリ条件下で不安定な薬物以外の薬物にも適応できるのは言うまでもない。

具体的な薬物としては、 PG類（例えば PGE類、 PGF類、 PGD類）、 PG I類、ナフチルォキシ酢酸誘導体、ビシクロアルカン酸誘導体、グァニジノ安息香酸誘導体、ロダニン酢酸誘導体、桂皮酸誘導体、バルプロ酸誘導体、ビタミン類、抗アレルギー剤、抗生物質、抗ガン剤等が挙げられる。

PG類としては PGEい PGE₂、 PGF i _a、 PGF _{2 a}、 P GDj, PGD₂等の天然の PGおよびそれらの誘導体が含まれる。

例えば、天然の PGE^ PGE₂はそれぞれ、下記構造式

(PGEi) (PGE₂) で示される化合物であり、また、 PGD^ PGD;?は、それぞれ下記構造式

で示される化合物である。

PG類の具体的な化合物としては、下記一般式

またはを表わし、 R^eは水素原子または C 1〜12アルキル、ベンジル等の力ルポキシル基の各種の置換基を表わし、

Aは C 2〜10アルキレン基であり、（1) 基中の任意の炭素原子はカルポニル基で置き換わってもよく、および Zまたは（2) 1個またはそれ以上の二重結合を有してもよく、

Bはフエニル、フエノキシまたはシクロアルキル基（基中の各環は、 C 1 〜 6アルキル、 C2〜6アルケニル、 C2〜6アルキニル、 C l〜6アルコキシ、ハロゲン等の各種の置換基を有してもよい。）で置換されてもよい C ；!〜 10アルキル、 C 2〜 10アルケニルまたは C 2〜 10アルキニル基を表わし、

≡ はエチレン、トランス一ビニレンまたはェチニレンを表わす。）で示される化合物が挙げられる。

好ましくは、？0£類または？00類（上記一般式で、

である化合物）であり、より好ましくは PGE類（上記一般式で、

である化合物）である。

このような化合物としては、

PGEい PGE₂、 17， 20—ジメチル一トランス一 Δ²— PGEい 6— ケト— 17， 20—ジメチル—トランス—

メチルエステル、 16, 16ージメチル—トランス— Δ²— PGE!メチルエステル等が挙げられる。

?0£類ぉょび？00類は、それぞれ 9位および 1 1位がヒドラゾン結合を介して L—グルタミン酸と結合する。例えば、 PGE の場合は、

で示される構造式のように L—グルタミン酸と結合する。

また、 PGF類は基中の力ルポキシル基と導入されたヒドラジンのァミンとのアミド結合を介して L一グルタミン酸と結合する。

PG I類としては、天然の PG I ₂およびその誘導体が挙げられ、例えば、特開昭 54-130543号、同 55- 64541号（対応英国特許第 2017699号）に記載された化合物が挙げられる。 PG I類も同様にアミド結合を介して L一ダルタミン酸と結合する。

ナフチルォキシ酢酸誘導体としては、例えば特開平 6-87811号（対応米国特許第 5480998号）記載された化合物が挙げられ、例えば式

で示される [5— [2- [1一フエニル— （3—ピリジル）メチリデンアミノォキシ] ェチル] 一 7， 8—ジヒドロナフ夕レン— 1—ィルォキシ] 酢酸が含まれる。

このようなナフチルォキシ酢酸化合物は、以下の構造式

に示すようにヒドラジンの末端のァミノ基とのアミド結合を介して L—ダル夕ミン酸と結合する。

ビシクロアルカン酸誘導体としては、例えば、特願平 9- 140959号に記載された化合物が挙げられる。

グァニジノ安息香酸誘導体としては、例えば、特開昭 51-138642号（対応米国特許第 4021472号）に記載された化合物が挙げられる。

ロダニン酢酸誘導体としては、例えば、特開昭 57- 40478号（対応米国特許第 4464382号）に記載された化合物が挙げられる。

桂皮酸誘導体としては、例えば、 1 ) 特開昭 55-313号（対応米国特許第 4226878号）、 2 ) 特開昭 57-131769号（対応米国特許第 4607046号）、 3 ) 国際出願番号 PCT/JP97/04593に記載された化合物が挙げられる。

バルプロ酸誘導体としては、例えば、特開平 7-316092号（ヨーロッパ公開 0632008A1) に記載された化合物が挙げられる。

〔本発明ポリマーの製造方法〕

本発明ポリマーは、後記する実施例に記載された方法、公知の方法または以下に説明する（1 ) 〜（3 ) の反応によって製造できる。 (1) ポリ— L—グルタミン酸へのヒドラジンの導入、

(2) 糖類（Gに相当する。）の導入、

(3) 薬物（Dに相当する。）の導入。

(1) の反応では、一般式（A)

COOR

(式中、すべての記号は前記と同じ意味を表わす。）で示されるポリ一 L - グルタミン酸と式 NH₂— NH2 で示されるヒドラジンとをジメチルホリ 1 ムアミド（DMF) 等の有機溶媒中または無溶媒で、室温（10〜25°C) で反応させて、一般式（II)

NH

NH₂

(式中、 d¹, x¹および y¹は、それぞれ COOR¹ (式中、 R¹は C l〜67 ルキルまたはベンジル基を表わす。）、 C〇OH、 1^11₂が結合した1^—グル夕ミン酸のモル数（重合度）を表わす。ただし、（1) d ¹ X¹および y¹の総和は dと同じ値であり、（2) d¹は 0でもよく、（3) COOR¹

(式中、 R¹は前記と同じ意味を表わす。）、 C〇〇H、 NH₂が結合した個々の L_グルタミン酸の配列順序は任意である。）で示されるポリマ一を製造できる (J. Appl. Biochem. , 2:25 (1980)に記載の方法を参照。 ) 。 (2) の反応においては、例えば、

(a) —般式 (II)

NH- CO (Π)

NH

NH₂

(式中、すべての記号は前記と同じ意味を表わす。）で示されるポリマーと

2—ィミノ— 2—メトキシェチルー 1ーチォサッカライドを弱塩基条件下 (例えば、ホウ酸緩衝液（pH9〜10) 中）で反応させるか、または (b) 一般式（II) で示されるポリマーと各種のサッカライドを反応させ、さらに場合により、還元反応に付すことにより糖類（G) を一般式（II) で表わされるポリマー中のヒドラジンと結合できる。

反応（a) における原料である 2 _イミノ _ 2—メトキシェチルー 1—チォサッカライドとしては、例えば、式

で示される 2 _イミノー 2—メトキシェチル— 1—チォガラクトシド、 2— イミノー 2—メ卜キシェチル一 1—チォマンノシドまたは 2—イミノー 2― メトキシェチル— 1ーチオフコシドが挙げられる。

2—イミノー 2—メトキシェチルー 1ーチォサッカライドは公知であるか、またはシァノメチルー 1—チォサッカライドをメタノール中でナトリウムメトキシドとを室温（ 1 0〜 2 5 °C ) で反応させることで製造できるG NG NMMM

( HB Hi mochemi s try Vol. 15, No. 18, 3956-3962 (1976)記載の方法を参照。 ) 。反応（b ) における原料の糖類としては、例えば次式

(式中、 Qは前記と同じ意味を表わす。）で示されるものが挙げられる。反応させる糖中のグルコース還元末端のアルデヒドと一般式（I I) で示されるポリマ一中のヒドラジンとの反応でまず、

slHm が式

(式中、 Qは前記と同じ意味を表わす。）である本発明ポリマーが製造できる。この反応は、弱酸性条件下（例えば、クェン酸緩衝液（p H 4〜6 ) 中）で室温（1 0〜2 5 °C) で行なわれる。

さらに場合により、還元反応に付すことで、

slHm が式

(式中、 Qは前記と同じ意味を表わす。）である本発明ポリマーが製造できる。

この還元反応は還元アミノ化と呼ばれる反応であり、弱塩基条件下（例えば、ホウ酸緩衝液（pH8〜9) 中）、水素化ホウ素ナトリウム、シァノ水素化ホウ素ナトリウム等の還元剤を用いて 30〜50°Cで行なわれる。同様にして一般の糖類もヒドラジンに結合させることができる。

上記反応（a) 、 (b) 以外にも公知の反応を用いて、糖類（G) を一般式（II) で表わされるポリマー中のヒドラジンに結合させることができる。上記の一連の反応により、一般式（1-1)

[-NH- O -、

('"I )

(式中、 d²、 x²、 y²および z²は、それぞれ COOR¹ (式中、 R¹は前記と同じ意味を表わす。）、 CO〇H、 NH₂、 G (糖類）が結合した L—グルタミン酸のモル数（重合度）を表わす。ただし、（1) d²、 x²、 y²および z ²の総和は dと同じ値であり、（2) d ²は 0でもよく、（3) COOR¹ (式中、 R¹前記と同じ意味を表わす。）、 CO〇H、 NH₂、 G

(糖類）が結合した個々の L一グルタミン酸の配列順序は任意である。）で示される本発明ポリマー（先述したポリマ一 P 1に相当する。）を製造できる。

(3) の反応は、薬物の構造に応じて各種の反応が行なわれる。

1) ケト基（一 CO—）を有する薬物の場合、一般式（1-1) で示されるポリマー中のヒドラジンとの脱水縮合反応によりヒドラゾン結合を形成して結合できる。この反応は、弱酸性条件下（例えば、クェン酸緩衝液（PH4 〜6) 中）、室温（10〜25°C) で行なわれる。

2) カルボキシル基（一 COOH) を有する薬物の場合、一般式（1-1) で示されるポリマ一中のヒドラジンの末端のァミノ基とのアミド化反応でァミド結合を形成して結合できる。この反応は公知の反応で、例えば、

(A) 酸八ライドを用いる方法、

(B) 混合酸無水物を用いる方法、

(C) 縮合剤（EDC、 DCC等）を用いる方法

等が挙げられる。

3) 上記以外にも、公知の方法を用いて、各種の結合を形成して薬物をポリー L一グルタミン酸に導入できる。

さらに場合により、反応（3) で製造したポリマーに、反応（2) で導入した糖類と同じ糖類を再度、反応させることで基中のヒドラジンの NH₂を糖類でキヤッビングできる。

これら一連の反応により、一般式（1-2)

(1-2)

(式中、 d³、 x³、 y³、 z³および w³は、それぞれ COOR¹ (式中、 R¹は前記と同じ意味を表わす。）、 C〇〇H、 NH₂、 G (糖類）、 D (薬物）が結合した L一グルタミン酸のモル数（重合度）を表わす。ただし、（1) d³、 x³、 y³、 z³および w³の総和は dと同じ値であり、（2) d³および y³は独立して 0でもよく、（3) COOR¹ (式中、 R¹は前記と同じ意味を表わす。）、 C〇〇H、 NH₂、 G (糖類）、 D (薬物）が結合した個々の L一グルタミン酸の配列順序は任意である。）で示される本発明薬物含有ポリマー（先述したポリマー P 2に相当する。 ) を製造できる。

本明細書中の各反応において、反応生成物は通常の精製手段、例えば透析、常圧下または減圧下における蒸留、シリカゲルまたはゲイ酸マグネシウムを用いた高速液体クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、あるいは力ラムクロマトグラフィーまたは洗浄、再結晶等の方法により精製することができる。精製は各反応ごとに行なってもよいし、いくつかの反応終了後、行なってもよい。

〔出発物質および試薬〕

本発明で用いる出発物質および試薬は、それ自体公知であるかまたは公知の方法により製造することができる。産業上の利用の可能性

ポリマ一 P 1として表記される本発明ポリマ一は、後記実験例に示すように標的臓器に対する移行性が確認された。また、同ポリマ一は、天然類似高分子であるポリアミノ酸であるので生分解性であり、安全性の高いポリマーであることが期待される。従って、同ポリマーは担体として有用である。また、ポリマー P 2として表記される本発明薬物含有ポリマーも、後記実験例に示すように標的臓器に対する移行性が確認され、優れた薬効を示す。発明を実施するための最良の形態

以下の実験例、実施例に記載されている略号の意味は以下の通りである。 P L G A：ポリ一 L—グルタミン酸、

H Z ：ヒドラジン、 ED：エチレンジァミン、

[^dH] PGEi- ：ヒドラジンまたはエチレンジァミンに結合した PGEi のうち、一部が³ Hでラベルされた PGEi、

Ga l : 1 _チォガラクトビラノシル—2—イミノ一ェチル、

-HZ-L a c (還元型）：式

で示される基、

DMF ：ジメチルホルムアミド、

Me OH：メタノール、

Me ON a ：ナトリウムメトキシド.

E t OH：エタノール。実験例 1 ：本発明担体ポリマー（ポリマー P 1) の体内動態

PLGA-HZ-Ga 1 (実施例 3で製造した。）および PLGA— HZ -L a c (実施例 5で製造した。）を¹¹¹ I nで標識し、それぞれ、 lmg gの投与量でマウス尾静脈内に投与してその体内分布特性を調べた。それぞれの結果を表 1および表 2に示す（表中の各数値は、それぞれ投与後の各時点での血漿 lmlあたりの残存％、臓器への到達％、および尿中回収％ (平均土偏差）を示す。）。表 1 ： PLGA— HZ_Ga 1の体内動態

表 2 ： PLGA-HZ-L a c (還元型）の体内動態

PLGA-HZ-Ga 1は投与後 10分で投与量の約 60 %が肝臓に集積した。投与後 60分でも、肝臓で同程度の集積度を示した。

PLGA— HZ— L a cは投与後 10分で投与量の約 60%が肝臓に集積した。投与後 60分でも、肝臓で同程度の集積度を示した。

以上のことから本発明担体ポリマ一は肝臓に高い集積度を示し、かつそれが長時間持続することが判明した。実験例 2 ：本発明薬物含有ポリマー（ポリマー P 2) の体内動態

[³H] PGEj-HZ-PLGA -HZ-Ga 1 (実施例 4で製造した。重合度 = 97) および [³H] PGEi— ED— PLGA— ED— Ga l (比較例： International . J. Pharmaceutics, 155, 65-74 (1997)に記載されたポリマ一。重合度 = 10 1) を実験例 1と同様にして薬物動態を調べた。結果を、表 3 (本発明）および表 4 (比較例）に示す（各数値は、それぞれ投与後の各時点での血漿 lm 1あたりの残存％、臓器への到達％、および尿中回収％ (平均土偏差）を示す。）。表 3 ： [°H] PGE!— HZ— PLGA— HZ— Ga 1の体内動態

表 4 ： H] PGEi— ED— PLGA— ED— G a 1の体内動態

表 3から分かるように、投与後 5分で投与量の約 70%が肝臓に集積し、 1時間後には約 85%に達し、 24時間後でも肝臓で、 70%の集積度を示した。

一方、比較例（表 4) では、投与後 5分で投与量の約 40%が肝臓に集積し、 1時間後で、肝臓で 45%の集積度を示した。

従って、本発明薬物含有ポリマーを用いれば肝臓に、より高濃度で持続的に薬物を送達させることができることが判明した。実験例 3 ：四塩化炭素誘発肝障害に対する本発明薬物（PGE 含有ポリマ一（ポリマー P 2) の治療効果

10% (v/v) の四塩化炭素のごま油溶液を 1 Om 1 gの投与量でマウス腹腔内に投与し、その直後に薬物（生理食塩水（コントロール用）、フリー PGEi (比較）、本発明薬物（PGEi) 含有ポリマ一 PGEi— HZ-PLGA-HZ-L a c (還元型）（実施例 6で合成した。 ) ) を所定の投与量で尾静脈内投与した。投与後 18時間絶食（25° (：、水は自由摂取）した後、下大動脈から採血し、血漿中の GPT活性（I U/L) を測定した。結果を表 5に示す。表 5

表 5から分かるように、生理食塩水（コントロール群）と比べて、本発明薬物（PGE!) 含有ポリマーは、四塩化炭素誘発肝障害において血漿中の GPT値の上昇を有意に抑制した。また相当する量のフリーの PGE!投与群に比べても、 GPT値の上昇抑制率は 3倍に向上したことがわかる。

〔参考例および実施例〕

以下、参考例および実施例によって本発明を詳述するが、本発明はこれらに限定されるものではない。重合度の欄において、 d^l、 x yt (t==l、 2、 3) 、 z^u (u = 2、 3) 、 w³として表示している数値は、ポリマ一 1 分子当たり、 COOR¹ (式中、 R¹は C l〜6アルキル、ベンジルを表わす。）、 CO〇H、 NH₂、 G (ガラクト一ス体またはラクト一ス体）、 D (PGEi) が結合している L -ダル夕ミン酸の数を表わす。参考例 1 ： PLGA— HZ (重合度： 0^=0、 x¹⁼ 29 y¹=50) の合成

Ύ—ベンジルーポリー L一グルタミン酸（分子量： 17, 300、重合度 = 7 9) (200mg) に、ヒドラジン · 1水和物（ 1 0m l ) を DMF (3m l) に溶解し、撹拌しながら、静かに滴下し、室温で 3時間反応させた。反応液を透析チューブ（3.5k d以下カット）で透析した（途中でチューブ内液がゲル状になるので濃塩酸を適量添加して均一状態にもどした。）。透析チューブ内液を限外ろ過し（l O kd以下カット）、濃縮後、凍結乾燥して下記物性値を有する標題化合物を得た。

N M R解析でグルタミン酸の保護基であるべンジル基が完全に除去されていることを確認した。またヒドラジン残基を] 3 _ナフトキノン一 4一スルフオン酸法により定量した。

分子量： 10, 900；

重合度：（！¹:。、 x^!=29, y¹=50。実施例 1 ： PLGA_HZ_Ga 1 (重合度： cT=0、 x²=29、 y² =

8、 z²=42) の合成

(1) シァノメチル 1ーチォガラクトシド（150mg) に Me ON a Me OH (3ml) を加え、 24時間撹拌した後 M e〇Hを減圧留去した。

(2) PLGA-HZ (参考例 1で合成した。）（50mg) を 2 N塩酸 (lml) に溶解し、 2 N水酸化ナトリウムで中和し、 50mMホウ酸緩衝液（pH9.5) (3m l) を加えた。得られた溶液を、上記（1) で得た残査に加え、室温で 5時間撹拌した。反応液を透析し、濃縮後、凍結乾燥して下記物性値を有する標題化合物を得た。また、 Ga 1残基を硫酸一アントロン法により定量した。

分子量： 20, 900；

重合度： d²=0、 x²=29、 y²=8、 z²=42。実施例 2 : [³H] PGEl-HZ-P LGA-HZ -Ga 1 (重合度： d³=0、 x³=29、 y³=7、 z³=42、 w³= 1) の合成

(1) PLGA-HZ-Ga 1 (実施例 1で合成した。）（22.5mg) を 0· 1Μ酢酸緩衝液（ρΗ5.0) (lml) に溶解した。

(2) 冷却した PGEi (2.5mg) に、 E t OH (0°C、 lm l) を加えて溶解させ、さらに [³H] P 溶液（E t〇H ：水 = 7 ： 3 ； 0.5 n C i Zm 1 ) (0. lm 1 ) を加えた。

(3) 上記（1) で得た溶液を室温で撹拌しながら上記（2) で得た溶液を滴下し、 0.1M酢酸緩衝液（pH5.0) (0.5m l) を加えて、溶液を透明にして、 4°Cで 24時間撹拌した。反応液中の不純物を除去し、透析した。透析液を限外ろ過（10 kd以下カット）して濃縮後、凍結乾燥して下記物性値を有する標題化合物を得た。

分子量： 21， 200；

重合度： d³=0、 x³=29、 y³=7、 z³=42、 w³= 1。実施例 3 : P L G A— H Z— G a 1 (重合度： d²= 0、 x²= 2 9、 y²=37、 z²=31) の合成

ァ—ベンジル—ポリ—L_グルタミン酸（重合度 =97) を用いて参考例 1→実施例 1と同様の操作を行ない、下記物性値を有する標題化合物を得た。分子量： 20, 800；

重合度： d =0、 x²=29、 y²=37、 z²=31。実施例 4 ： P GEi - HZ— PLGA— HZ— G a 1および [³H] P GEj -HZ-PLGA-HZ-Ga 1 (重合度： d³=0、 x³=2 9、 y³= 3 2、 z³= 3 1、 w³= 5) の合成

PLGA— HZ— Ga l (実施例 3で合成した。）（2 0mg) を 0.01M 酢酸緩衝液（pH5.0) (5m l ) に溶解し、 PGEi (4mg) の E t OH (0.5m l ) 溶液を撹拌しながら滴下し、室温で一晩撹拌した。反応液を生理食塩水で透析して、下記物性値を有する標題化合物（P GEi— HZ— PLGA— HZ— Ga l ) を得た。また、 [³H] PGEi ( 1 0 C i ) を上記 PGEiの E t〇H溶液に添加することにより同様の方法で同じ下記物性値を有する標題化合物（ [³H] PGE!標識体）を合成した。いずれの化合物も溶液状態で保存した。

分子量： 23, 000；

重合度： d³=0、 x³=2 9, y。=3 2、 z ³= 3 1、 w³= 5。実施例 5 : PLGA— HZ— L a c (還元型 Z重合度： d ²= 0、 x²= 3 5、 y²=40、 z²=2 2) の合成

ァ一べンジルーポリー L—グルタミン酸（重合度 = 9 7) を用いて参考例 1と同様の操作により合成した PLGA— HZ (分子量： 13， 300、重合度： d^!= 0, ^J= 3 5, y^l= Q 2) (5 Omg) を 5 N水酸化ナトリウムに溶解した後、 5 N塩酸で p H 7前後に調整した。 0. 1Mホウ酸緩衝液 (pH8.5) を加えて、 pHが 8〜 9であることを確認して、ラクト一ス (1 43mg) およびシァノ水素化ホウ素ナトリウム（5 Omg) を加え 3 7 °Cで一昼夜反応させた。反応液を透析により精製し、凍結乾燥させて下記物性値を有する標題化合物を得た。

分子量： 20, 800；

重合度： d²=0、 x²=3 5、 y²=40 z²=2 2。実施例 6 ： PGEi— HZ— PLGA - HZ— L a c (還元型重合度： d³=0、 x³=35、 y³=36、 z³=22、 w³=4) の合成

PLGA-HZ-L a c (還元型実施例 5で合成した。）を用いて実施例 2と同様の操作により下記物性値を有する標題化合物を得た。

分子量： 22, 800；

重合度： d³=0、 x³=35、 y³=36、 z³=22、 w³=4。

Claims

請求の範囲

1. 一般式（A)

(式中、重合度 dは 20〜500であり、 Rは水素原子、 C l〜6アルキルまたはベンジル基を表わす。ただし、複数存在する Rは同じでも異なっていてもよい。）で示されるポリ _L_グルタミン酸の構成ペプチド結合の一部または全部が一般式

(C)

(式中、

(基中、 Gはヒドラジンに結合できるように修飾した糖類を表わし、 mは Iが単結合のときは 1であり、 i|が二重結合のときは 0である。）で示される基（基中、（1) 一般式（B) および（C) で示される基は必須の置換基であり、かつ一般式（C) で示される基の置換個数が 2以上の場合、すべて同一の基であるものとする。）で置換されたポリマ一。

2. —般式（A)

(式中、すべての記号は請求の範囲 1と同じ意味を表わす。）で示されるポリー L一ダル夕ミン酸の構成べプチド結合の一部または全部を一般式

-NH-

(式中、 "^Hmは請求の範囲 1と同じ意味を表わし、

G

または

(基中、 Dは薬物を表わし、 nは：が単結合のときは 1であり、；| が二重結合のときは 0である。）で示される基（基中、（1) 一般式（C) および（D) で示される基は必須の置換基であり、かつ（2) —般式（C) または（D) で示される基の置換個数が 2以上の場合、すべて同じ基であり、かつ（3) —般式（B) で示される基の置換個数は 0でもよいものとする。）で置換されたポリマー。

.

H

m

力

ゝ、、

または