JPH07228688A - 糖修飾ポリ−ω−置換−Ｌ−グルタミン酸誘導体およびその製造方法 - Google Patents
糖修飾ポリ−ω−置換−Ｌ−グルタミン酸誘導体およびその製造方法Info
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- JPH07228688A JPH07228688A JP2156194A JP2156194A JPH07228688A JP H07228688 A JPH07228688 A JP H07228688A JP 2156194 A JP2156194 A JP 2156194A JP 2156194 A JP2156194 A JP 2156194A JP H07228688 A JPH07228688 A JP H07228688A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 ポリ−ω−置換−Ｌ−グルタミン酸のω−位
の置換基をＮ−〔（１−チオガラクトピラノシル−２−
イミノ）−エチル〕−エチレンジアミニル基で置換した
高分子化合物。 【効果】 この高分子化合物は、肝実質細胞を認識でき
る作用があり、ＤＤＳ製剤開発用の担体として応用でき
る。
の置換基をＮ−〔（１−チオガラクトピラノシル−２−
イミノ）−エチル〕−エチレンジアミニル基で置換した
高分子化合物。 【効果】 この高分子化合物は、肝実質細胞を認識でき
る作用があり、ＤＤＳ製剤開発用の担体として応用でき
る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、医用高分子材料、殊に
ミサイル医薬担体として有用な糖修飾ポリ−Ｌ−グルタ
ミン酸誘導体およびその製造方法に関する。
ミサイル医薬担体として有用な糖修飾ポリ−Ｌ−グルタ
ミン酸誘導体およびその製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】血清中の糖タンパクは、その末端に普遍
的にシアル酸−ガラクトース−Ｎ−アセチルグルコサミ
ンという糖構造が存在している。１９６０年代後半に
Ｇ，ＡｓｈｗｅｌｌとＡ．Ｍｏｒｅｌｌは、この三糖構
造が血清タンパクが血液中に安定に存在できるために必
要な構造であることをつきとめた。末端に存在するシア
ル酸を取り除くと、ガラクトースが新しい糖末端とな
る。シアル酸が除かれてガラクトースが露出した糖タン
パクはアシアロ糖タンパクと呼ばれている。アシアロ糖
タンパクは、この状態では血流中に安定に存在できなく
なり、急速に血流中より消失する。消失したアシアロ糖
タンパクのおよそ８０％以上は肝臓に取り込まれること
が判明している。
的にシアル酸−ガラクトース−Ｎ−アセチルグルコサミ
ンという糖構造が存在している。１９６０年代後半に
Ｇ，ＡｓｈｗｅｌｌとＡ．Ｍｏｒｅｌｌは、この三糖構
造が血清タンパクが血液中に安定に存在できるために必
要な構造であることをつきとめた。末端に存在するシア
ル酸を取り除くと、ガラクトースが新しい糖末端とな
る。シアル酸が除かれてガラクトースが露出した糖タン
パクはアシアロ糖タンパクと呼ばれている。アシアロ糖
タンパクは、この状態では血流中に安定に存在できなく
なり、急速に血流中より消失する。消失したアシアロ糖
タンパクのおよそ８０％以上は肝臓に取り込まれること
が判明している。
【０００３】ところで、肝細胞の膜表面上には特異的糖
認識レセプターが存在し、アシアロ糖タンパクはこのア
シアロ糖タンパクレセプターを介して細胞内に取り込ま
れたものである。そこで、このレセプターの性質を利用
し、これまでに標的臓器移行性の薬物担体としてポリグ
ルタミン酸を糖で修飾する具体的な試みがなされている
（特開平５−１７８９８６）。さらに、標的臓器に対す
る認識性を向上させるために、ポリグルタミン酸への糖
修飾のスペーサーが検討された（吉川剛兆ら、日本薬学
会１１１年会講演要旨集４、１２９、１９９１）。しか
しながら、これらは肝臓に対する移行性を向上させるこ
とが出来たものの、選択性に関しては不十分であった。
発明者らは、ポリグルタミン酸と糖修飾の際のスペーサ
ーを精査した結果、ポリグルタミン酸１分子当りのガラ
クトース残基数を低下させることが可能となり、しかも
肝臓に対してより選択性の高い化合物を発明するに到っ
た。また、ガラクトース修飾ポリグルタミン酸の糖修飾
率が増加すると、生分解性が低下することが示唆されて
いることから（権正ら、ＤＤＳ技術研究会第３８回定例
会要旨，１９９３）、本発明化合物はより安全性の高い
ことが期待される。
認識レセプターが存在し、アシアロ糖タンパクはこのア
シアロ糖タンパクレセプターを介して細胞内に取り込ま
れたものである。そこで、このレセプターの性質を利用
し、これまでに標的臓器移行性の薬物担体としてポリグ
ルタミン酸を糖で修飾する具体的な試みがなされている
（特開平５−１７８９８６）。さらに、標的臓器に対す
る認識性を向上させるために、ポリグルタミン酸への糖
修飾のスペーサーが検討された（吉川剛兆ら、日本薬学
会１１１年会講演要旨集４、１２９、１９９１）。しか
しながら、これらは肝臓に対する移行性を向上させるこ
とが出来たものの、選択性に関しては不十分であった。
発明者らは、ポリグルタミン酸と糖修飾の際のスペーサ
ーを精査した結果、ポリグルタミン酸１分子当りのガラ
クトース残基数を低下させることが可能となり、しかも
肝臓に対してより選択性の高い化合物を発明するに到っ
た。また、ガラクトース修飾ポリグルタミン酸の糖修飾
率が増加すると、生分解性が低下することが示唆されて
いることから（権正ら、ＤＤＳ技術研究会第３８回定例
会要旨，１９９３）、本発明化合物はより安全性の高い
ことが期待される。
【０００４】
【課題を解決するための手段】すなわち、本発明は、一
般式
般式
【０００５】
【化３】
【０００６】（式中、Ｘは重合度２０〜５４０であるこ
とを、Ｒは水素原子、低級アルキル基又はベンジル基を
各々意味する。）で示されるポリペプチドにおいて、そ
の構成ペプチドの一部または全部を
とを、Ｒは水素原子、低級アルキル基又はベンジル基を
各々意味する。）で示されるポリペプチドにおいて、そ
の構成ペプチドの一部または全部を
【０００７】
【化４】
【０００８】で表わされるω−Ｎ−〔（１−チオガラク
トピラノシル−２−イミノ）−エチル〕−エチレンジア
ミニル−Ｌ−グルタミン酸残基で置換した糖修飾ポリ−
ω−アルキル（又はベンジル）−Ｌ−グルタミン酸誘導
体に関する。本発明のポリペプチドを更に説明すると以
下の通りである。 構成単位：ω−アルキル（又はベンジル）−Ｌ−グルタ
ミン酸残基
トピラノシル−２−イミノ）−エチル〕−エチレンジア
ミニル−Ｌ−グルタミン酸残基で置換した糖修飾ポリ−
ω−アルキル（又はベンジル）−Ｌ−グルタミン酸誘導
体に関する。本発明のポリペプチドを更に説明すると以
下の通りである。 構成単位：ω−アルキル（又はベンジル）−Ｌ−グルタ
ミン酸残基
【０００９】
【化５】
【００１０】（式中、Ｒ1 は低級アルキル基又はベンジ
ル基を示す。） Ｌ−グルタミン酸残基
ル基を示す。） Ｌ−グルタミン酸残基
【００１１】
【化６】
【００１２】ω−Ｎ−〔（１−チオガラクトピラノシル
−２−イミノ）−エチル〕−エチレンジアミニル−Ｌ−
グルタミン酸残基
−２−イミノ）−エチル〕−エチレンジアミニル−Ｌ−
グルタミン酸残基
【００１３】
【化７】
【００１４】配列状態：線状 分子量 ：８，０００〜７０，０００ 重合度 ：２０〜５４０ 構成単位の比率： ω−アルキル（又はベンジル）−Ｌ−グルタミン酸残基 ０〜１０％ Ｌ−グルタミン酸残基 ５５〜９５％ ω−Ｎ−〔（１−チオガラクトピラノシル−２−イミノ）−エチル〕 −エチレンジアミニル−Ｌ−グルタミン酸残基 ５〜３５％ Ｒの低級アルキル基としては、炭素数が１乃至６個の直
鎖又は分岐状の炭素鎖を意味し、具体的にはメチル基，
エチル基，プロピル基，イソプロピル基，ブチル基，イ
ソブチル基，ｓｅｃ−ブチル基，ｔｅｒｔ−ブチル基，
ペンチル基，イソペンチル基，ネオペンチル基，ｔｅｒ
ｔ−ペンチル基，ヘキシル基，イソヘキシル基等が挙げ
られる。本発明化合物の製造方法を更に説明すると、た
とえば次式で示される方法により合成できる。
鎖又は分岐状の炭素鎖を意味し、具体的にはメチル基，
エチル基，プロピル基，イソプロピル基，ブチル基，イ
ソブチル基，ｓｅｃ−ブチル基，ｔｅｒｔ−ブチル基，
ペンチル基，イソペンチル基，ネオペンチル基，ｔｅｒ
ｔ−ペンチル基，ヘキシル基，イソヘキシル基等が挙げ
られる。本発明化合物の製造方法を更に説明すると、た
とえば次式で示される方法により合成できる。
【００１５】
【化８】
【００１６】
【化９】
【００１７】（式中、Ｘは前記の通りで、Ｒ1 は低級ア
ルキル基又はベンジル基を意味する。また、Ｙ，Ｚはと
もにＸ以下であってＹ≧Ｚを満たす整数である。） この方法は、ポリ−ω−アルキル（又はベンジル）−Ｌ
−グルタミン酸（II）の側鎖アルキルエステル（又はベ
ンジルエステル）を加水分解して側鎖カルボキシル基が
遊離した重合体(III) 又は(III′）を得（第１工程）、
次いでこの重合体(III）又は(III′）の側鎖カルボキシ
ル基に第２工程により合成したＮ−（２−アミノエチ
ル）アミジノメチルチオガラクトピラノシド（VI）を導
入して本発明化合物（Ｉ）又は（Ｉ′）を得る（第３工
程）ことにより行う。
ルキル基又はベンジル基を意味する。また、Ｙ，Ｚはと
もにＸ以下であってＹ≧Ｚを満たす整数である。） この方法は、ポリ−ω−アルキル（又はベンジル）−Ｌ
−グルタミン酸（II）の側鎖アルキルエステル（又はベ
ンジルエステル）を加水分解して側鎖カルボキシル基が
遊離した重合体(III) 又は(III′）を得（第１工程）、
次いでこの重合体(III）又は(III′）の側鎖カルボキシ
ル基に第２工程により合成したＮ−（２−アミノエチ
ル）アミジノメチルチオガラクトピラノシド（VI）を導
入して本発明化合物（Ｉ）又は（Ｉ′）を得る（第３工
程）ことにより行う。
【００１８】第１工程の加水分解は、ポリ−ω−アルキ
ル（又はベンジル）−Ｌ−グルタミン酸を適当な有機溶
媒中、塩基で処理することにより容易に行うことができ
る。有機溶媒としては、たとえばクロロホルム、ジクロ
ルメタン等のハロゲン化炭化水素（ヘリックス溶媒）が
好適であるが、ジクロル酢酸、トリフルオロ酢酸などの
ランダムコイル溶媒を用いることもできる。
ル（又はベンジル）−Ｌ−グルタミン酸を適当な有機溶
媒中、塩基で処理することにより容易に行うことができ
る。有機溶媒としては、たとえばクロロホルム、ジクロ
ルメタン等のハロゲン化炭化水素（ヘリックス溶媒）が
好適であるが、ジクロル酢酸、トリフルオロ酢酸などの
ランダムコイル溶媒を用いることもできる。
【００１９】塩基としては、水酸化ナトリウム、水酸化
カリウム等が適当である。これらの塩基は通常メタノー
ル、イソプロピルアルコール等のアルコール水溶液とし
て反応液中に添加される。反応は、室温附近で、１０〜
２００分間行う。これらの反応条件、殊に反応時間を適
宜選ぶことにより、加水分解の割合を任意に調節するこ
とができる。なお、本工程の原料化合物として使用する
ポリ−ω−置換−Ｌ−グルタミン酸（II）は、重合度が
およそ２０〜５４０のものが用いられるが、これに限定
されるものではない。また、原料化合物として、市販の
ポリ−Ｌ−グルタミン酸を使用する場合には、本工程を
省略することができる。
カリウム等が適当である。これらの塩基は通常メタノー
ル、イソプロピルアルコール等のアルコール水溶液とし
て反応液中に添加される。反応は、室温附近で、１０〜
２００分間行う。これらの反応条件、殊に反応時間を適
宜選ぶことにより、加水分解の割合を任意に調節するこ
とができる。なお、本工程の原料化合物として使用する
ポリ−ω−置換−Ｌ−グルタミン酸（II）は、重合度が
およそ２０〜５４０のものが用いられるが、これに限定
されるものではない。また、原料化合物として、市販の
ポリ−Ｌ−グルタミン酸を使用する場合には、本工程を
省略することができる。
【００２０】第２工程は、２−イミノ−２−メトキシエ
チル−１−チオガラクトピラノシド（IV）とエチレンジ
アミン（Ｖ）をホウ酸緩衝液中に１：１のモル比で添加
し、２４時間反応させることにより、Ｎ−（２−アミノ
エチル）アミジノメチルチオガラクトピラノシド（VI）
を得る工程である。
チル−１−チオガラクトピラノシド（IV）とエチレンジ
アミン（Ｖ）をホウ酸緩衝液中に１：１のモル比で添加
し、２４時間反応させることにより、Ｎ−（２−アミノ
エチル）アミジノメチルチオガラクトピラノシド（VI）
を得る工程である。
【００２１】第３工程は、Ｎ−（２−アミノエチル）ア
ミジノメチルチオガラクトピラノシド（VI）と第１工程
で得た部分加水分解物(III）又は、ポリ−Ｌ−グルタミ
ン酸(III′) とを縮合剤を用いてカップリングさせる工
程である。縮合剤としては、たとえばＮ，Ｎ′−ジシク
ロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１−エチル−３
−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドハイ
ドロクロライド（ＥＤＣ）等が挙げられる。生成した目
的化合物（Ｉ）又は（Ｉ′）は、たとえばセルロース透
析膜を用いる透析により精製することができる。なお、
本発明化合物に薬物等を結合させる場合には、式（Ｉ）
又は（Ｉ′）中のグルタミン酸残基のカルボキシル基に
化学的又は物理的（例えばアミド結合、エステル結合、
イオン結合等）に結合させることができる。
ミジノメチルチオガラクトピラノシド（VI）と第１工程
で得た部分加水分解物(III）又は、ポリ−Ｌ−グルタミ
ン酸(III′) とを縮合剤を用いてカップリングさせる工
程である。縮合剤としては、たとえばＮ，Ｎ′−ジシク
ロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１−エチル−３
−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドハイ
ドロクロライド（ＥＤＣ）等が挙げられる。生成した目
的化合物（Ｉ）又は（Ｉ′）は、たとえばセルロース透
析膜を用いる透析により精製することができる。なお、
本発明化合物に薬物等を結合させる場合には、式（Ｉ）
又は（Ｉ′）中のグルタミン酸残基のカルボキシル基に
化学的又は物理的（例えばアミド結合、エステル結合、
イオン結合等）に結合させることができる。
【００２２】（物質の特性）本発明化合物（Ｉ）又は
（Ｉ′）の分子量の測定は、各種の方法により可能であ
るが、例えば標準物質としてＯｖａｌｂｕｍｉｎ（分子
量４３，０００），ＢＳＡ（Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ
Ａｌｂｕｍｉｎ）（分子量６７，０００）を用いたゲ
ルパーミエイションクロマトグラフィー法（ＨＰＬＣ）
（カラム：島津製作所（株） Ｓｈｉｍ−ｐａｃｋ Ｄ
ｉｏｌ−３００，溶出液：等張リン酸緩衝液（ｐＨ７．
４），溶出速度：１ｍｌ／ｍｉｎ）によって分子量を求
めることができる。
（Ｉ′）の分子量の測定は、各種の方法により可能であ
るが、例えば標準物質としてＯｖａｌｂｕｍｉｎ（分子
量４３，０００），ＢＳＡ（Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ
Ａｌｂｕｍｉｎ）（分子量６７，０００）を用いたゲ
ルパーミエイションクロマトグラフィー法（ＨＰＬＣ）
（カラム：島津製作所（株） Ｓｈｉｍ−ｐａｃｋ Ｄ
ｉｏｌ−３００，溶出液：等張リン酸緩衝液（ｐＨ７．
４），溶出速度：１ｍｌ／ｍｉｎ）によって分子量を求
めることができる。
【００２３】
【発明の効果】本発明化合物は、後記実験例に示すよう
に、標的臓器に対する移行性が確認されたことから、生
体認識高分子として医療分野に応用することができる。
本発明化合物は天然類似高分子であるポリアミノ酸であ
るから、生分解性であり、スペーサーを介してガラクト
ース残基を修飾していることから、低修飾率にて標的臓
器への移行性が達成される。また、糖修飾率の低いポリ
アミノ酸ほど生分解性が高いことは既に明らかになって
おり、本発明化合物は安全性の高い化合物であることが
期待される。したがって、本発明化合物は、ミサイルド
ラッグ等に用いる医薬担体用高分子として好適である。
に、標的臓器に対する移行性が確認されたことから、生
体認識高分子として医療分野に応用することができる。
本発明化合物は天然類似高分子であるポリアミノ酸であ
るから、生分解性であり、スペーサーを介してガラクト
ース残基を修飾していることから、低修飾率にて標的臓
器への移行性が達成される。また、糖修飾率の低いポリ
アミノ酸ほど生分解性が高いことは既に明らかになって
おり、本発明化合物は安全性の高い化合物であることが
期待される。したがって、本発明化合物は、ミサイルド
ラッグ等に用いる医薬担体用高分子として好適である。
【００２４】
【実施例】つぎに、実施例を挙げて本発明化合物および
その製造方法を更に説明する。ここでＰＬＧＡはポリ−
Ｌ−グルタミン酸を、Ｇａｌ−ＰＬＧＡはガラクトース
修飾ポリ−Ｌ−グルタミン酸を各々意味する。 実施例１ （１）２−イミノ−２−メトキシエチル−１−チオグリ
コシド−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＥＹラボラトリ
ーズ）２００ｍｇとエチレンジアミン（和光純薬）５０
μｌを５ｍｌのホウ酸緩衝液（ｐＨ９．５，５０ｍＭ）
に約１：１のモル比となるように添加し、２４時間反応
させた。１ＮのＨＣｌにてｐＨ５に調整し、２−イミノ
−２−メトキシエチル−１−チオグリコシド−β−Ｄ−
ガラクトピラノシド１００ｍｇに対し、ポリ−Ｌ−グル
タミン酸（Ｓｉｇｍａ）（分子量１５，０００〜５０，
０００）６０ｍｇ、１−エチル−３−（３−ジメチルア
ミノプロピル）−カルボジイミド ハイドロクロライド
（和光純薬）６０ｍｇ添加後、１晩攪拌した。蒸留水に
対し透析後凍結乾燥した。
その製造方法を更に説明する。ここでＰＬＧＡはポリ−
Ｌ−グルタミン酸を、Ｇａｌ−ＰＬＧＡはガラクトース
修飾ポリ−Ｌ−グルタミン酸を各々意味する。 実施例１ （１）２−イミノ−２−メトキシエチル−１−チオグリ
コシド−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＥＹラボラトリ
ーズ）２００ｍｇとエチレンジアミン（和光純薬）５０
μｌを５ｍｌのホウ酸緩衝液（ｐＨ９．５，５０ｍＭ）
に約１：１のモル比となるように添加し、２４時間反応
させた。１ＮのＨＣｌにてｐＨ５に調整し、２−イミノ
−２−メトキシエチル−１−チオグリコシド−β−Ｄ−
ガラクトピラノシド１００ｍｇに対し、ポリ−Ｌ−グル
タミン酸（Ｓｉｇｍａ）（分子量１５，０００〜５０，
０００）６０ｍｇ、１−エチル−３−（３−ジメチルア
ミノプロピル）−カルボジイミド ハイドロクロライド
（和光純薬）６０ｍｇ添加後、１晩攪拌した。蒸留水に
対し透析後凍結乾燥した。
【００２５】（２）２−イミノ−２−メトキシエチル−
１−チオグリコシド−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（Ｅ
Ｙラボラトリーズ）２０ｍｇと（１）で得たＧａｌ−Ｐ
ＬＧＡ ２０ｍｇを５ｍｌのホウ酸緩衝液（ｐＨ９．
５，５０ｍＭ）に約５０：１のモル比となるように添加
し、２４時間反応させ、蒸留水に対し透析後、凍結乾燥
した。 分子量（ＨＰＬＣ） ２５，６００
１−チオグリコシド−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（Ｅ
Ｙラボラトリーズ）２０ｍｇと（１）で得たＧａｌ−Ｐ
ＬＧＡ ２０ｍｇを５ｍｌのホウ酸緩衝液（ｐＨ９．
５，５０ｍＭ）に約５０：１のモル比となるように添加
し、２４時間反応させ、蒸留水に対し透析後、凍結乾燥
した。 分子量（ＨＰＬＣ） ２５，６００
【００２６】（３）糖導入率測定 ７２％硫酸１ｍｌ当りアントロン（Ｓｉｇｍａ）０．５
ｍｇを溶解させ、試液とした。（１），（２）で合成し
たＧａｌ−ＰＬＧＡ水溶液０．６ｍｌと試液３ｍｌを十
分攪拌し、１００℃にて１２分間加熱した。室温まで温
度を下げた後、６２８ｎｍの吸光度を測定した。 結果（１） ３．７モル ガラクトース／モル ＰＬＧ
Ａ（ガラクトース修飾残基率 １．９％） （２） １８．２モル ガラクトース／モル ＰＬＧＡ
（ガラクトース修飾残基率 ９．１％）
ｍｇを溶解させ、試液とした。（１），（２）で合成し
たＧａｌ−ＰＬＧＡ水溶液０．６ｍｌと試液３ｍｌを十
分攪拌し、１００℃にて１２分間加熱した。室温まで温
度を下げた後、６２８ｎｍの吸光度を測定した。 結果（１） ３．７モル ガラクトース／モル ＰＬＧ
Ａ（ガラクトース修飾残基率 １．９％） （２） １８．２モル ガラクトース／モル ＰＬＧＡ
（ガラクトース修飾残基率 ９．１％）
【００２７】実験例 糖修飾率の異なるガラクトース修飾ポリ−Ｌ−グルタミ
ン酸誘導体（Ｇａｌ−ＰＬＧＡ）、また、ビタミンＫ5
をモデル薬物として修飾した本発明化合物および比較物
質を用い、各高分子のマウスの肝臓への移行性を検討し
た。 １．試料 実施例１の（１），（２）で合成したガラクトース修飾
残基約２％および９％のＧａｌ−ＰＬＧＡを検体試料と
し、糖含量の違いによる肝臓移行性の差を検討した。ま
た、薬物で修飾した場合の移行性を検討するために、ビ
タミンＫ5 で修飾したガラクトース修飾残基約９％のＧ
ａｌ−ＶＫ5 −ＰＬＧＡを試料として用いた。また、比
較物質として無修飾のＰＬＧＡおよびＶＫ5 −ＰＬＧＡ
を用いた。 ２．ビタミンＫ5 修飾体の合成 ビタミンＫ5 のＰＬＧＡ及びＧａｌ−ＰＬＧＡ修飾体は
ビタミンＫ5 のアミノ基部分とＰＬＧＡ又はＧａｌ−Ｐ
ＬＧＡのグルタミン酸残基のカルボキシル基部分で常法
のアミド結合させることにより得ることができる。
ン酸誘導体（Ｇａｌ−ＰＬＧＡ）、また、ビタミンＫ5
をモデル薬物として修飾した本発明化合物および比較物
質を用い、各高分子のマウスの肝臓への移行性を検討し
た。 １．試料 実施例１の（１），（２）で合成したガラクトース修飾
残基約２％および９％のＧａｌ−ＰＬＧＡを検体試料と
し、糖含量の違いによる肝臓移行性の差を検討した。ま
た、薬物で修飾した場合の移行性を検討するために、ビ
タミンＫ5 で修飾したガラクトース修飾残基約９％のＧ
ａｌ−ＶＫ5 −ＰＬＧＡを試料として用いた。また、比
較物質として無修飾のＰＬＧＡおよびＶＫ5 −ＰＬＧＡ
を用いた。 ２．ビタミンＫ5 修飾体の合成 ビタミンＫ5 のＰＬＧＡ及びＧａｌ−ＰＬＧＡ修飾体は
ビタミンＫ5 のアミノ基部分とＰＬＧＡ又はＧａｌ−Ｐ
ＬＧＡのグルタミン酸残基のカルボキシル基部分で常法
のアミド結合させることにより得ることができる。
【００２８】ｐＨ５に調整した蒸留水にビタミンＫ
5 （ナカライテスク）１５ｍｇ，Ｇａｌ−ＰＬＧＡ ２
５ｍｇもしくは比較物質としてポリ−Ｌ−グルタミン酸
（ＰＬＧＡ）１００ｍｇ、１−エチル−３−（３−ジメ
チルアミノプロピル）−カルボジイミド ハイドロクロ
ライド２５ｍｇもしくは１００ｍｇ添加後、１晩攪拌し
た。蒸留水にて透析後、凍結乾燥した。ビタミンＫ5 の
修飾率は、３００ｎｍの吸光度を測定することにより算
出した。これらの試料の物理化学的特性を表１に示す。
5 （ナカライテスク）１５ｍｇ，Ｇａｌ−ＰＬＧＡ ２
５ｍｇもしくは比較物質としてポリ−Ｌ−グルタミン酸
（ＰＬＧＡ）１００ｍｇ、１−エチル−３−（３−ジメ
チルアミノプロピル）−カルボジイミド ハイドロクロ
ライド２５ｍｇもしくは１００ｍｇ添加後、１晩攪拌し
た。蒸留水にて透析後、凍結乾燥した。ビタミンＫ5 の
修飾率は、３００ｎｍの吸光度を測定することにより算
出した。これらの試料の物理化学的特性を表１に示す。
【００２９】
【表１】
【００３０】３．体内動態実験 実験に先立ち検体の 111Ｉｎ標識化を行った。検体とす
る高分子をＤＴＰＡアンヒドライド（ジエチレントリア
ミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ″，Ｎ″−五酢酸無水物）と結
合後、 111ＩｎＣｌ3 を１Ｍ酢酸ナトリウム中でキレー
トさせ、ゲル濾過により、 111Ｉｎ標識体を得た。これ
を生理食塩水にて投与液に調製した。ｄｄＹ系雄性マウ
ス（５週令）に 111Ｉｎで標識した被験高分子１ｍｇ／
ｋｇを尾静脈より投与し、経時的に肝臓および血液を採
取し、肝臓はそのまま秤量し、血液は約３０００ｒｐｍ
で２分間遠心分離して血漿とし、その放射活性を測定し
た（Ａｗｅｌｌ−ｔｙｐｅ ＮａＩ Ｓｃｉｎｔｉｌｌ
ａｔｉｏｎ Ｃｏｕｎｔｅｒ，ＡＲＣ−５００，Ａｌｏ
ｋａ Ｃｏ．，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）。その結果を
図に示した。
る高分子をＤＴＰＡアンヒドライド（ジエチレントリア
ミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ″，Ｎ″−五酢酸無水物）と結
合後、 111ＩｎＣｌ3 を１Ｍ酢酸ナトリウム中でキレー
トさせ、ゲル濾過により、 111Ｉｎ標識体を得た。これ
を生理食塩水にて投与液に調製した。ｄｄＹ系雄性マウ
ス（５週令）に 111Ｉｎで標識した被験高分子１ｍｇ／
ｋｇを尾静脈より投与し、経時的に肝臓および血液を採
取し、肝臓はそのまま秤量し、血液は約３０００ｒｐｍ
で２分間遠心分離して血漿とし、その放射活性を測定し
た（Ａｗｅｌｌ−ｔｙｐｅ ＮａＩ Ｓｃｉｎｔｉｌｌ
ａｔｉｏｎ Ｃｏｕｎｔｅｒ，ＡＲＣ−５００，Ａｌｏ
ｋａ Ｃｏ．，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）。その結果を
図に示した。
【００３１】４．実験結果および考察 ＰＬＧＡに対して、ガラクトースおよびモデル薬物とし
てビタミンＫ5 を修飾した結果を表１に示した。ＰＬＧ
Ａへのガラクトース修飾はスペーサーであるエチレンジ
アミンを介し、ＰＬＧＡ １分子当り約１８分子結合で
きた。この値はＰＬＧＡ重量当り約１２％、グルタミン
酸残基数当り約９％となる。ガラクトース修飾前後の分
子量は、それぞれ２５，２００、２５，６００であり、
ほとんど変化がなかった。ビタミンＫ5 のＰＬＧＡおよ
びＧａｌ−ＰＬＧＡに対する修飾率は、どちらも同程度
の修飾率であった。
てビタミンＫ5 を修飾した結果を表１に示した。ＰＬＧ
Ａへのガラクトース修飾はスペーサーであるエチレンジ
アミンを介し、ＰＬＧＡ １分子当り約１８分子結合で
きた。この値はＰＬＧＡ重量当り約１２％、グルタミン
酸残基数当り約９％となる。ガラクトース修飾前後の分
子量は、それぞれ２５，２００、２５，６００であり、
ほとんど変化がなかった。ビタミンＫ5 のＰＬＧＡおよ
びＧａｌ−ＰＬＧＡに対する修飾率は、どちらも同程度
の修飾率であった。
【００３２】111Ｉｎ標識した高分子を尾静脈投与後の
血漿中濃度、肝臓移行性の時間推移を図１〜５に示し
た。いずれの高分子も血中から速やかに消失するもの
の、肝臓移行性は各高分子によって異なり、ガラクトー
ス修飾残基９％のＧａｌ−ＰＬＧＡおよびＧａｌ−ＶＫ
5 −ＰＬＧＡは投与後５分以内に６０％以上が肝臓に移
行した。（図４、５）。カラクトース修飾していない高
分子およびガラクトース修飾残基約２％のＧａｌ−ＰＬ
ＧＡは非常に低い肝臓移行性であった（図１、２、
３）。これらのことから、ガラクトース修飾率を高める
ことにより肝臓への移行性が向上することが明らかとな
った。さらに、ビタミンＫ5 も肝臓へ送達可能であるこ
とが確認された。
血漿中濃度、肝臓移行性の時間推移を図１〜５に示し
た。いずれの高分子も血中から速やかに消失するもの
の、肝臓移行性は各高分子によって異なり、ガラクトー
ス修飾残基９％のＧａｌ−ＰＬＧＡおよびＧａｌ−ＶＫ
5 −ＰＬＧＡは投与後５分以内に６０％以上が肝臓に移
行した。（図４、５）。カラクトース修飾していない高
分子およびガラクトース修飾残基約２％のＧａｌ−ＰＬ
ＧＡは非常に低い肝臓移行性であった（図１、２、
３）。これらのことから、ガラクトース修飾率を高める
ことにより肝臓への移行性が向上することが明らかとな
った。さらに、ビタミンＫ5 も肝臓へ送達可能であるこ
とが確認された。
【００３３】111Ｉｎ標識した高分子を尾静脈投与後の
クリアランスを表２、図５に示した。肝臓クリアランス
と腎臓クリアランス＋尿中クリアランスの比において、
ガラクトース修飾していない高分子は１以下の低い値を
示し、肝臓への選択性はなかった。しかし、ガラクトー
ス修飾残基約９％のＧａｌ−ＰＬＧＡおよびＧａｌ−Ｖ
Ｋ5 −ＰＬＧＡの肝臓クリアランスと腎臓クリアランス
＋尿クリアランスの比は７〜１０の高い値を示したこと
から、肝臓に対する選択性が非常に向上することが明ら
かとなった。
クリアランスを表２、図５に示した。肝臓クリアランス
と腎臓クリアランス＋尿中クリアランスの比において、
ガラクトース修飾していない高分子は１以下の低い値を
示し、肝臓への選択性はなかった。しかし、ガラクトー
ス修飾残基約９％のＧａｌ−ＰＬＧＡおよびＧａｌ−Ｖ
Ｋ5 −ＰＬＧＡの肝臓クリアランスと腎臓クリアランス
＋尿クリアランスの比は７〜１０の高い値を示したこと
から、肝臓に対する選択性が非常に向上することが明ら
かとなった。
【００３４】以上より、エチレンジアミンをスペーサー
としてＰＬＧＡにガラクトースを修飾することにより、
肝臓への移行性が高まると同時に、肝臓への選択性も向
上することが明らかとなった。また、この機能はモデル
薬物であるビタミンＫ5 を修飾しても同様であったこと
から、Ｇａｌ−ＰＬＧＡは肝臓標的性の担体として有用
であることが確認された。
としてＰＬＧＡにガラクトースを修飾することにより、
肝臓への移行性が高まると同時に、肝臓への選択性も向
上することが明らかとなった。また、この機能はモデル
薬物であるビタミンＫ5 を修飾しても同様であったこと
から、Ｇａｌ−ＰＬＧＡは肝臓標的性の担体として有用
であることが確認された。
【００３５】
【表２】
【図１】111Ｉｎ標識ＰＬＧＡのマウス尾静注後の血漿
１ｍｌにおける投与量に対する血漿中濃度の割合、およ
び投与量に対する肝臓蓄積量の割合を、時間の推移とと
もに示すグラフである。
１ｍｌにおける投与量に対する血漿中濃度の割合、およ
び投与量に対する肝臓蓄積量の割合を、時間の推移とと
もに示すグラフである。
【図２】ビタミンＫ5 で修飾された 111Ｉｎ標識ＶＫ5
−ＰＬＧＡのマウス尾静注後の血漿１ｍｌにおける投与
量に対する血漿中濃度の割合および投与量に対する肝臓
蓄積量の割合を時間の推移とともに示すグラフである。
−ＰＬＧＡのマウス尾静注後の血漿１ｍｌにおける投与
量に対する血漿中濃度の割合および投与量に対する肝臓
蓄積量の割合を時間の推移とともに示すグラフである。
【図３】ガラクトース修飾残基約２％の 111Ｉｎ標識Ｇ
ａｌ−ＰＬＧＡのマウス尾静注後の、血漿１ｍｌにおけ
る、投与量に対する血漿中濃度の割合、および投与量に
対する肝臓蓄積量の割合を時間の推移とともに示すグラ
フである。
ａｌ−ＰＬＧＡのマウス尾静注後の、血漿１ｍｌにおけ
る、投与量に対する血漿中濃度の割合、および投与量に
対する肝臓蓄積量の割合を時間の推移とともに示すグラ
フである。
【図４】ガラクトース修飾残基約９％の 111Ｉｎ標識Ｇ
ａｌ−ＰＬＧＡのマウス尾静注後の、血漿１ｍｌにおけ
る、投与量に対する血漿中濃度の割合、および投与量に
対する肝臓蓄積量の割合を時間の推移とともに示すグラ
フである。
ａｌ−ＰＬＧＡのマウス尾静注後の、血漿１ｍｌにおけ
る、投与量に対する血漿中濃度の割合、および投与量に
対する肝臓蓄積量の割合を時間の推移とともに示すグラ
フである。
【図５】ガラクトース修飾残基約９％の 111Ｉｎ標識Ｇ
ａｌ−ＰＬＧＡに更にビタミンＫ5 で修飾した 111Ｉｎ
標識Ｇａｌ−ＶＫ5 −ＰＬＧＡのマウス尾静注後の、血
漿１ｍｌにおける、投与量に対する血漿中濃度の割合、
および投与量に対する肝臓蓄積量の割合を、時間の推移
とともに示すグラフである。
ａｌ−ＰＬＧＡに更にビタミンＫ5 で修飾した 111Ｉｎ
標識Ｇａｌ−ＶＫ5 −ＰＬＧＡのマウス尾静注後の、血
漿１ｍｌにおける、投与量に対する血漿中濃度の割合、
および投与量に対する肝臓蓄積量の割合を、時間の推移
とともに示すグラフである。
【図６】ＰＬＧＡ、ガラクトース修飾残基約９％Ｇａｌ
−ＰＬＧＡ、ＶＫ5 −ＰＬＧＡ、ガラクトース修飾残基
約９％Ｇａｌ−ＶＫ5 −ＰＬＧＡそれぞれについて、ク
リアランス比（＝肝クリアランス／（腎クリアランス＋
尿クリアランス））を求め、比較したグラフである。
−ＰＬＧＡ、ＶＫ5 −ＰＬＧＡ、ガラクトース修飾残基
約９％Ｇａｌ−ＶＫ5 −ＰＬＧＡそれぞれについて、ク
リアランス比（＝肝クリアランス／（腎クリアランス＋
尿クリアランス））を求め、比較したグラフである。
Claims (5)
- 【請求項１】 一般式 【化１】 （式中、Ｘは重合度２０〜５４０であることを、Ｒは水
素原子、低級アルキル基又はベンジル基を各々意味す
る）で示されるポリ−ω−アルキル（又はベンジル）−
Ｌ−グルタミン酸の構成ペプチド結合の一部または全部
を、一般式 【化２】 で表されるω−Ｎ−〔（１−チオガラクトピラノシル−
２−イミノ）−エチル〕−エチレンジアミニル−Ｌ−グ
ルタミン酸残基で置換したポリ−ω−アルキル（又はベ
ンジル）−Ｌ−グルタミン酸誘導体。 - 【請求項２】 各構成単位の比率が、 ω−アルキル（又はベンジル）−Ｌ−グルタミン酸残基 ０〜１０％ Ｌ−グルタミン酸残基 ５５〜９５％ ω−Ｎ−〔（１−チオガラクトピラノシル−２−イミノ）−エチル〕− エチレンジアミニル−Ｌ−グルタミン酸残基 ５〜３５％ であり、分子量８，０００〜７０，０００であることを
特徴とする請求項１記載の誘導体。 - 【請求項３】 下記の構成単位の比率が、 ω−Ｎ−〔（１−チオガラクトピラノシル−２−イミノ）−エチル〕−エチレン ジアミニル−Ｌ−グルタミン酸残基 ９±１％ であり、平均分子量２５，０００±１０，０００である
ことを特徴とする請求項１または２記載の誘導体。 - 【請求項４】 Ｎ−（２−アミノエチル）アミジノメチ
ルチオガラクトピラノシドとポリ−Ｌ−グルタミン酸を
反応させることを特徴とする請求項１記載の誘導体の製
造方法。 - 【請求項５】 ２−イミノ−２−メトキシエチル−１−
チオガラクトピラノシドとエチレンジアミンを反応させ
て得られるＮ−（２−アミノエチル）アミジノメチルチ
オガラクトピラノシドに、更にポリ−Ｌ−グルタミン酸
を反応させることを特徴とする請求項１記載の誘導体の
製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2156194A JPH07228688A (ja) | 1994-02-18 | 1994-02-18 | 糖修飾ポリ−ω−置換−Ｌ−グルタミン酸誘導体およびその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2156194A JPH07228688A (ja) | 1994-02-18 | 1994-02-18 | 糖修飾ポリ−ω−置換−Ｌ−グルタミン酸誘導体およびその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07228688A true JPH07228688A (ja) | 1995-08-29 |
Family
ID=12058437
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2156194A Pending JPH07228688A (ja) | 1994-02-18 | 1994-02-18 | 糖修飾ポリ−ω−置換−Ｌ−グルタミン酸誘導体およびその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07228688A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999043736A1 (fr) * | 1998-02-27 | 1999-09-02 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Polymeres transporteurs migrant dans des organes cibles et polymeres contenant des medicaments |
| WO2001088017A1 (fr) * | 2000-05-18 | 2001-11-22 | Hisamitsu Pharmaceutical Co., Inc. | Derives de polypeptides et transporteurs d'acides nucleiques contenant ces derives |
| US6811996B1 (en) | 1998-10-30 | 2004-11-02 | Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. | DDS compounds and method for assaying the same |
| CN106975466A (zh) * | 2017-04-07 | 2017-07-25 | 华南师范大学 | 一种大粒径可循环重金属吸附功能微球及其应用 |
-
1994
- 1994-02-18 JP JP2156194A patent/JPH07228688A/ja active Pending
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999043736A1 (fr) * | 1998-02-27 | 1999-09-02 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Polymeres transporteurs migrant dans des organes cibles et polymeres contenant des medicaments |
| US6500916B1 (en) | 1998-02-27 | 2002-12-31 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Carrier polymers migrating into target organs and drug-containing polymers |
| US6811996B1 (en) | 1998-10-30 | 2004-11-02 | Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. | DDS compounds and method for assaying the same |
| US7041818B2 (en) | 1998-10-30 | 2006-05-09 | Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. | DDS compound and method for measurement thereof |
| WO2001088017A1 (fr) * | 2000-05-18 | 2001-11-22 | Hisamitsu Pharmaceutical Co., Inc. | Derives de polypeptides et transporteurs d'acides nucleiques contenant ces derives |
| CN106975466A (zh) * | 2017-04-07 | 2017-07-25 | 华南师范大学 | 一种大粒径可循环重金属吸附功能微球及其应用 |
| CN106975466B (zh) * | 2017-04-07 | 2019-05-14 | 华南师范大学 | 一种大粒径可循环重金属吸附功能微球及其应用 |
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