WO1999009177A2 - Papillomviren, mittel zu deren nachweis sowie zur therapie von durch sie verursachten erkrankungen - Google Patents

Papillomviren, mittel zu deren nachweis sowie zur therapie von durch sie verursachten erkrankungen Download PDF

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Ethel-Michelle De Villiers Zur Hausen
Harald Zur Hausen
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Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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    • C12N2710/20022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
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    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/01—DNA viruses
    • G01N2333/025—Papovaviridae, e.g. papillomavirus, polyomavirus, SV40, BK virus, JC virus

Definitions

  • Papillomaviruses means for their detection and for the therapy of diseases caused by them
  • the invention relates to a DNA which codes for a peptide of a papillomavirus main capsid protein or a papillomavirus genome. Furthermore, the invention relates to proteins encoded by the papilloma virus genome and antibodies directed against them, and to their use in diagnosis, therapy and vaccination.
  • HP viruses Human papilloma viruses
  • benign e.g. Warts, genital condylomas, and malignancies, e.g. Carcinomas of the skin and uterus, epithelial neoplasms (cf.zzy Hausen, H., Biochimica et Biophysica Acta (BBA) 1 288, (1 996), pages 55-78).
  • HP viruses are also being considered for the development of malignant tumors in the oropharyngeal area (cf.zzy Hausen, H., Curr. Top. Microbiol. Immunol. 78, (1 977), pages 1-30).
  • Papilloma viruses have an icosahedral capsid without a shell, in which a circular, double-stranded DNA molecule of approximately 7900 bp is present.
  • the capsid comprises a major capsid protein (L1) and a minor capsid protein (L2). Both proteins, coexpressed or L1 expressed alone, lead to the formation of virus-like particles in vitro (cf. Kirnbauer, R. et al., Journal of Virology, (1 993), pages 6929-6936).
  • Papilloma viruses cannot be propagated in monolayer cell culture. Their characterization is therefore extremely difficult, and the detection of papilloma viruses already creates considerable problems. This is particularly true for papilloma viruses in skin carcinomas.
  • the object of the present invention is therefore to provide an agent with which papilloma viruses, in particular in carcinomas of the skin, can be detected.
  • a means should also be provided to treat these papillomaviruses therapeutically.
  • the invention thus relates to a DNA coding for a peptide of a papillomavirus main capsid protein (L1), the peptide representing the amino acid sequence of FIGS. 1, 2, 3, 4, 5, 6 or 7 or one of these amino acid sequences different from one or more amino acids
  • Another object of the invention is a DNA coding for a peptide of a papillomavirus main capsid protein, the DNA being the base sequence of FIG. 1, 2, 3, 4, 5, 6 or 7 or one of which comprises a base sequence different from one or more base pairs
  • FIG. 2 shows the base sequence and the amino acid sequence derived therefrom of a DNA coding for a peptide from L1 of a papilloma virus. This DNA was deposited as plasmid DL347 at DSMZ under DSM 1 1 605 on June 1, 1 997.
  • FIG. 3 shows the base sequence and the amino acid sequence derived therefrom of a DNA coding for a peptide of L1 of a papilloma virus. This DNA was obtained as plasmid DL369 at DSMZ under DSM 1 1 606 on June 1, 1 997 deposited.
  • FIG. 4 shows the base sequence and the amino acid sequence derived therefrom of a DNA coding for a peptide from L1 of a papilloma virus. This DNA was deposited as plasmid GA1-3 with the DSMZ under DSM 1 1 607 on June 1, 1 997.
  • FIG. 5 shows the base sequence and the amino acid sequence derived therefrom of a DNA coding for a peptide of L1 of a papilloma virus. This DNA was deposited as plasmid GA3-1 at DSMZ under DSM 1 1 608 on June 1, 1 997.
  • FIG. 6 shows the base sequence and the amino acid sequence derived therefrom of a DNA coding for a peptide of L1 of a papilloma virus. This DNA was deposited as plasmid GA6-2 at DSMZ under DSM 1 1 609 on June 1, 1 997.
  • FIG. 7 shows the base sequence and the amino acid sequence derived therefrom of a DNA coding for a peptide from L1 of a papilloma virus. This DNA was deposited as plasmid GA9-4 with the DSMZ under DSM 1 1 61 0 on 1 June 2, 997.
  • the above DNA was compared to the DNA of known papilloma viruses. Sequence homology studies were carried out. A homology that is less than 90% shows a DNA according to the invention as a new HP virus.
  • the DNAs according to the invention have the following sequence homologies with known papilloma viruses:
  • the above DNA can be present in a vector or expression vector.
  • examples of such are known to the person skilled in the art.
  • these are e.g. pGEMEX, pUC derivatives, pGEM-T and pGEX-2T.
  • yeast z. B. pY1 00 and Ycpad l to name while for expression in animal cells e.g. pKCR, pEF-BOS, cDM8 and pCEV4 must be specified.
  • suitable cells in order to express the above DNA present in an expression vector.
  • suitable cells include the E.coii strains HB1 01, DH 1, x 1 776, JM 1 01, JM 1 09 and XLI-Blue, the yeast strain Saccharomyces cerevisiae and the animal cells L, NH-3T3, FM3A, CHO, COS, Vero, and Heia.
  • the person skilled in the art knows how the above DNA has to be inserted into an expression vector. He is also aware that the above DNA can be inserted in connection with a DNA coding for another protein or peptide, so that the above DNA can be expressed in the form of a fusion protein.
  • papilloma virus genome comprising the above DNA.
  • the term "papilloma virus genome” also includes an incomplete genome, i.e. Fragments of a papilloma virus genome comprising the above DNA. This can e.g. a DNA coding for L1 or a part thereof.
  • a common method can be used to provide the above papillomavirus genome.
  • a method comprising the following method steps is favorable: (a) isolation of the total DNA from a biopsy of epithelial neoplasm,
  • epithelial neoplasm encompasses any neoplasms of epithelial tissue in humans and animals. Examples of such neoplasms are warts, condylomas in the genital area and carcinomas of the skin. The latter are preferably used in the present case to isolate the above papillomavirus genome.
  • vector includes any vector suitable for cloning chromosomal or extrachromosomal DNA.
  • vectors include cosmids, such as pWE 15 and Super Cos1, and phages, such as ⁇ -phages, e.g. ⁇ ZAP Expressvector, ⁇ ZAPII Vector and ⁇ gt10 Vector.
  • i-phages are preferably used.
  • the above vectors are known and are available from Stratagene.
  • Papilioma virus genomes according to the invention can be integrated in chromosomal DNA or extrachromosomal. Methods are known to the person skilled in the art to clarify this. He also knows how to find the optimal restriction enzymes for cloning the papilloma virus genome. He's going to Orient genomes of known papilloma viruses. In particular, the person skilled in the art will observe the aforementioned HP viruses accordingly.
  • a papilloma virus genome designated DL314-G is described by way of example.
  • the total DNA is isolated from a biopsy of a basal cell carcinoma, cleaved with BamHI and separated electrophoretically in an agarose gel.
  • the agarose gel is then subjected to a blotting process, whereby the DNA is transferred to a nitrocellulose membrane.
  • This is used in a hybridization process in which the DNA from FIG. 1, possibly in combination with a DNA from HP virus 15, is used as the labeled sample. Hybridization with the papilloma virus DNA present in the total DNA is obtained.
  • the above total DNA cleaved with BamHI is cloned in a ⁇ phage.
  • the corresponding clones i.e. the clones containing the papillomavirus DNA are identified by hybridization with the DNA from FIG. 1, possibly in combination with a DNA from the HP virus 15.
  • the insert of these clones is then subjected to further cloning in a plasmid vector, whereby a clone is obtained which contains the papillomavirus genome DL314-G.
  • the genome is confirmed by sequencing.
  • papillomavirus genomes are provided. They are named according to the DNAs used for their preparation, with: DL347-G, DL369-G, GA1 -3-G, GA3-1 -G, GA6-2-G or GA9-4-G.
  • Another object of the invention is a protein encoded by the above papillomavirus genome.
  • a protein is e.g. B. a major capsid protein (L1) or a minor capsid protein (L2).
  • L1 and L2 of the papilloma virus genome DL31 4-G are described as an example.
  • the HP virus 15, which is related to the DNA of FIG. 1, is used for this purpose. From this the complete sequence and the location of individual DNA coding for proteins Known areas.
  • These DNAs are identified on the papillomavirus genome DL31 4-G by parallel restriction cleavages of both genomes and subsequent hybridization with different fragments relating to the L1 or L2 coding DNA. They are confirmed by sequencing.
  • the DNA coding for L1 is designated DL314-G-L1-DNA and the DNA coding for L2 with DL31 4-G-L2-DNA.
  • the DNA coding for L1 or L2 is inserted into an expression vector.
  • E. coli examples of such for E. coli, yeast and animal cells are mentioned above.
  • vector pGEX-2T for expression in E. coli (cf. Kirnbauer, R. et al., Supra).
  • pGEX-2T-DL31 4-G-L1 or pGEX-2T-DL31 4-G-L2 is obtained.
  • these expression vectors express a glutathione S-transferase-L1 or glutathione S-transferase-L2 fusion protein. These proteins are purified in the usual way.
  • the bacculovirus or vaccinia virus system is called for a further expression of the above coding L1 or L2 DNA.
  • Expression vectors that can be used for this are, for example, pEV mod. and pSynwtVI " for the bacculovirus system (cf. Kirnbauer, R. et al., supra).
  • vectors with the vaccinia virus are" early "(p7. 5 k) or” late "(Psynth to call p1 1 K) promoter (cf. Hagensee, M., E.
  • the bacculovirus system is preferred DNA coding for L2 or L2 in pEV mod.
  • pEVmod.-DL31 4-G-L1 or pEVmod.-DL31 4-G-L2 is obtained.
  • a particle comprises an L1 protein
  • an L1 protein in the latter case it contains an L1 protein as well as an L1 protein.
  • a virus-like particle of the latter case is also obtained by standing DL31 4-G-L1 and DL314-G-L2 DNAs are inserted together into the expression vector pSynwtVI " and the pSynwtVI " DL31 4-G-L1 / L2 obtained is used to infect SF-9 insect cells.
  • the above virus-like particles are cleaned in the usual way. They also represent an object of the invention.
  • Another object of the invention is an antibody directed against an above protein or virus-like particle.
  • Such is produced in the usual way. It is described by way of example for the production of an antibody which is directed against a virus-like particle comprising L1 of DL314-G.
  • the virus-like particle BALB / c mice is injected subcutaneously. This injection is repeated every 3 weeks. About 2 weeks after the last injection, the serum containing the antibody is isolated and tested in the usual way.
  • the antibody is a monoclonal antibody.
  • spleen cells are removed from the mice after the fourth injection above and these are fused with myeloma cells in the usual way. The further cloning is also carried out according to known methods.
  • the present invention makes it possible to detect papilloma viruses, in particular in carcinomas of the skin.
  • the DNA according to the invention can be used as such or encompassed by a further DNA.
  • the latter can also be a papilloma virus gome or part of it.
  • the present invention also enables the provision of previously unknown papilloma viruses. These are found particularly in carcinomas of the skin. Furthermore, the invention provides proteins and virus-like particles which are due to these papillomaviruses. Antibodies are also provided which are directed against these proteins or particles.
  • the present invention thus enables diagnostic and therapeutic Take action on papilloma virus diseases. In addition, it provides the opportunity to build a vaccine against papillomavirus infections.
  • the present invention thus represents a breakthrough in the field of papilloma virus research.
  • Example 1 Identification of the papilloma virus genome DL314-G
  • the total DNA is isolated from a biopsy of a basal cell carcinoma. 1 ⁇ g of this DNA are cleaved with the restriction enzyme BamHI and electrophoresed in a 0.5% agarose gel. At the same time, 10 ⁇ g of the above DNA, which has not been cleaved, are also separated.
  • the agarose gel is subjected to a blotting process, whereby the DNA from the agarose gel is transferred to a nitrocellulose membrane. This is used in a hybridization process in which the above DNA from FIG. 1 is used in combination with HP virus 15 DNA as a p 32 -labeled sample. Hybridization with the blotted DNA is obtained.
  • the biopsy DNA obtained from Example 1 is cleaved with the restriction enzyme BamHI.
  • the fragments obtained are used in a ligase reaction in which the BamZAP Express vector, which has been cleaved and dephosphoryiated with BamHI, is also present.
  • the recombinant DNA molecules obtained here are in Bakte ⁇ ophagen packaged and used to infect bacteria.
  • the ZAP Express Vector Kit offered by Stratagene is used for these process steps.
  • the phage plaques obtained are then subjected to a hybridization process in which the p 32 -marked DNA from FIG. 1 used in Example 1 is used in combination with p 32 -marked HP virus 1 5 DNA. A hybridization with corresponding phage plaques is obtained.
  • the BamHI fragments of DL31 4-G are isolated from these and used together with a BamHI-cleaved, dephosphoryted plasmid vector, pBluesc ⁇ pt, in a further ligase reaction.
  • the recombinant DNA obtained -Molecules are used to transform bacteria, E. coli XLI -Blue.
  • a bacterial clone containing the papillomavirus genome DL314-G is identified by restriction cleavage or hybridization with the above DNA samples.
  • the plasmid of this bacterial clone is designated pBlue-DL31 4-G.

Abstract

Die Erfindung betrifft eine DNA, die für ein Peptid eines Papillomvirus-Hauptcapsid-Proteins bzw. ein Papillomvirus-Genom codiert. Des weiteren betrifft die Erfindung durch das Papillomvirus-Genom codierte Proteine und gegen sie gerichtete Antikörper sowie deren Verwendung in Diagnose, Therapie und Vakzinierung.

Description

Papillomviren, Mittel zu deren Nachweis sowie zur Therapie von durch sie verursachten Erkrankungen
Die Erfindung betrifft eine DNA, die für ein Peptid eines Papillomvirus-Hauptcap- sid-Proteins bzw. ein Papillomvirus-Genom codiert. Desweiteren betrifft die Erfindung durch das Papillomvirus-Genom codierte Proteine und gegen sie gerichtete Antikörper sowie deren Verwendung in Diagnose, Therapie und Vakzinierung.
Es ist bekannt, daß Papillomviren das Epithelgewebe von Mensch und Tier infizieren. Human-Papillomviren (nachstehend mit HP-Viren bezeichnet) finden sich in benignen, z.B. Warzen, Kondylome im Genitalbereich, und malignen, z.B. Karzinome der Haut und der Gebärmutter, epithelialen Neoplasmen (vgl. zur Hausen, H., Biochimica et Biophysica Acta (BBA) 1 288, ( 1 996), Seiten 55-78) . Auch werden HP-Viren für die Entwicklung maligner Tumoren im Oropharyn- gealbereich in Betracht gezogen (vgl. zur Hausen, H . , Curr. Top. Microbiol. Immunol. 78, ( 1 977), Seiten 1 -30) .
Papillomviren weisen ein ikosaedrisches Capsid ohne Hülle auf, in dem ein zirkuläres, doppelsträngiges DNA-Molekül von etwa 7900 bp vorliegt. Das Capsid umfaßt ein Hauptcapsid-Protein (L1 ) und ein Nebencapsid-Protein (L2) . Beide Proteine, coexprimiert oder L1 alleine exprimiert, führen in vitro zur Ausbildung von Virus-ähnlichen Partikeln (vgl. Kirnbauer, R. et al., Journal of Virolo- gy, ( 1 993), Seiten 6929-6936) .
Papillomviren lassen sich nicht in Monolayer-Zellkultur vermehren. Ihre Charakterisierung ist daher äußerst schwierig, wobei bereits der Nachweis von Papillomviren erhebliche Probleme schafft. Dies trifft insbesondere für Papillomviren in Karzinomen der Haut zu. Der vorliegenden Erfindung liegt somit die Aufgabe zugrunde, ein Mittel bereitzustellen, mit dem Papillomviren, insbesondere in Karzinomen der Haut, nachgewiesen werden können. Ferner sollte ein Mittel bereitgestellt werden, um gegen diese Papillomviren therapeutisch vorgehen zu können.
Erfindungsgemaß wird dies durch die Bereitstellung der Gegenstande in den Patentansprüchen erreicht.
Gegenstand der Erfindung ist somit eine für ein Peptid eines Papillomvirus- Hauptcapsid-Proteins (L1 ) codierende DNA, wobei das Peptid die Aminosauresequenz von Fig. 1 , Fig. 2, Fig. 3, Fig 4, Fig 5, Fig 6 oder Fig 7 oder eine davon durch ein oder mehrere Aminosäuren unterschiedliche Aminosauresequenz umfaßt
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist eine für ein Peptid eines Papillomvirus- Hauptcapsid-Proteins codierende DNA, wobei die DNA die Basensequenz von Fig. 1 , Fig. 2, Fig. 3, Fig. 4, Fig 5, Fig 6 oder Fig 7 oder eine davon durch ein oder mehrere Basenpaare unterschiedliche Basensequenz umfaßt
Fig 1 zeigt die Basensequenz und die davon abgeleitete Aminosauresequenz einer für ein Peptid von L1 eines Papillomvirus codierenden DNA. Diese DNA wurde als Plasmid DL31 4 bei der DSMZ (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen) unter DSM 1 1 604 am 1 2. Juni 1 997 hinterlegt.
Fig. 2 zeigt die Basensequenz und die davon abgeleitete Aminosauresequenz einer für ein Peptid von L1 eines Papillomvirus codierenden DNA. Diese DNA wurde als Plasmid DL347 bei der DSMZ unter DSM 1 1 605 am 1 2. Juni 1 997 hinterlegt.
Fig. 3 zeigt die Basensequenz und die davon abgeleitete Aminosauresequenz einer für ein Peptid von L1 eines Papillomvirus codierenden DNA. Diese DNA wurde als Plasmid DL369 bei der DSMZ unter DSM 1 1 606 am 1 2. Juni 1 997 hinterlegt.
Fig. 4 zeigt die Basensequenz und die davon abgeleitete Aminosäuresequenz einer für ein Peptid von L1 eines Papillomvirus codierenden DNA. Diese DNA wurde als Plasmid GA1 -3 bei der DSMZ unter DSM 1 1 607 am 1 2. Juni 1 997 hinterlegt.
Fig. 5 zeigt die Basensequenz und die davon abgeleitete Aminosäuresequenz einer für ein Peptid von L1 eines Papillomvirus codierenden DNA. Diese DNA wurde als Plasmid GA3- 1 bei der DSMZ unter DSM 1 1 608 am 1 2. Juni 1 997 hinterlegt.
Fig. 6 zeigt die Basensequenz und die davon abgeleitete Aminosäuresequenz einer für ein Peptid von L1 eines Papillomvirus codierenden DNA. Diese DNA wurde als Plasmid GA6-2 bei der DSMZ unter DSM 1 1 609 am 1 2. Juni 1 997 hinterlegt.
Fig. 7 zeigt die Basensequenz und die davon abgeleitete Aminosäuresequenz einer für ein Peptid von L1 eines Papillomvirus codierenden DNA. Diese DNA wurde als Plasmid GA9-4 bei der DSMZ unter DSM 1 1 61 0 am 1 2. Juni 1 997 hinterlegt.
Vorstehende DNA wurde mit der DNA bekannter Papillomviren verglichen. Es wurden Sequenzhomologie-Studien durchgeführt. Eine Homologie, die weniger als 90 % beträgt, weist eine erfindungsgemäße DNA als neues HP-Virus aus. Die erfindungsgemäßen DNAs weisen zu bekannten Papillomviren folgende Sequenzhomologien auf:
DNA von Fig. 1 78 % zu HP-Virus 1 5 DNA von Fig. 2 80 % zu HP-Virus 5b DNA von Fig. 3 76 % zu HP-Virus 1 5 DNA von Fig. 4 80 % zu HP-Virus 24 DNA von Fig. 5 79 % zu HP-Virus 8 DNA von Fig. 6 81 % zu HP- Virus 1 2 DNA von Fig. 7 84 % zu HP- Virus 1 5
Erfindungsgemäß kann vorstehende DNA in einem Vektor bzw. Expressionsvektor vorliegen. Beispiele solcher sind dem Fachmann bekannt. Im Falle eines Expressionsvektors für E. coli sind dies z.B. pGEMEX, pUC-Derivate, pGEM-T und pGEX-2T. Für die Expression in Hefe sind z. B. pY1 00 und Ycpad l zu nennen, während für die Expression in tierischen Zellen z.B. pKCR, pEF-BOS, cDM8 und pCEV4, anzugeben sind.
Der Fachmann kennt geeignete Zellen, um vorstehende, in einem Expressionsvektor vorliegende DNA zu exprimieren. Beispiele solcher Zellen umfassen die E.coii-Stämme HB1 01 , DH 1 , x 1 776, JM 1 01 , JM 1 09 und XLI -Blue, den Hefe- Stamm Saccharomyces cerevisiae und die tierischen Zellen L, NH-3T3, FM3A, CHO, COS, Vero, und Heia.
Der Fachmann weiß, in welcher Weise vorstehende DNA in einen Expressionsvektor inseriert werden muß. Ihm ist auch bekannt, daß vorstehende DNA in Verbindung mit einer für ein anderes Protein bzw. Peptid codierenden DNA inseriert werden kann, so daß vorstehende DNA in Form eines Fusionsproteins exprimiert werden kann.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Papillomvirus-Genom, das vorstehende DNA umfaßt. Der Ausdruck "Papillomvirus-Genom" umfaßt auch ein unvollständiges Genom, d.h. Fragmente eines Papillomvirus-Genoms, die vorstehende DNA umfassen. Dies kann z.B. eine für L1 codierende DNA oder ein Teil davon sein.
Zur Bereitstellung vorstehenden Papillomvirus-Genoms kann ein übliches Verfahren verwendet werden. Günstig ist ein Verfahren, das folgende Verfahrensschritte umfaßt: (a) Isolierung der Gesamt-DNA aus einer Biopsie epithelialen Neoplasmas,
(b) Hybridisierung der Gesamt-DNA von (a) mit vorstehender DNA, wodurch ein in der Gesamt-DNA von (a) enthaltenes Papillomvirus-Genom nachgewiesen wird, und
(c) Klonierung der das Papillomvirus-Genom enthaltenden Gesamt-DNA von (a) in einem Vektor, und gegebenenfalls Subklonierung des erhaltenen Klons, wobei sämtliche Verfahrensschritte üblicher DNA-Rekombinationstechnik entstammen.
Hinsichtlich der Isolierung, Hybridisierung und Klonierung von Zeil-DNA wird ergänzend auf Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, zweite Ausgabe, Cold Spring Harbor Laboratory ( 1 989) verwiesen.
Der Ausdruck "epitheliales Neoplasma" umfaßt jegliche Neoplasmen des Epithelgewebes bei Mensch und Tier. Beispiele solcher Neoplasmen sind Warzen, Kondylome im Genitalbereich und Karzinome der Haut. Letztere werden vorliegend bevorzugt verwendet, um vorstehendes Papillomvirus-Genom zu isolieren.
Der Ausdruck "Vektor" umfaßt jegliche zur Klonierung von chromosomaler bzw. extrachromosomaler DNA geeignete Vektoren. Beispiele solcher Vektoren sind Cosmide, wie pWE 1 5 und Super Cos1 , und Phagen, wie Λ-Phagen, z.B. ΛZAP Expressvector, ΛZAPII Vector und Λgt10 Vektor. Vorliegend werden i-Phagen bevorzugt verwendet. Vorstehende Vektoren sind bekannt und bei der Firma Stratagene erhältlich.
Erfindungsgemäße Papiliomvirus-Genome können integriert in chromosomaler DNA oder extrachromosomal vorliegen. Dem Fachmann sind Verfahren bekannt, dies abzuklären. Auch weiß er um Verfahren, die zur Klonierung der Papillomvi- rus-Genome optimalen Restriktionsenzyme herauszufinden. Er wird sich an Genomen bekannter Papillomviren orientieren. Insbesondere wird der Fachmann die vorstehend genannten HP-Viren entsprechend beachten.
Beispielhaft wird die Bereitstellung eines mit DL314-G bezeichneten Papillomvirus-Genoms beschrieben. Hierzu wird die Gesamt-DNA aus einer Biopsie eines Basalzellkarzinoms isoliert, mit BamHI gespalten und in einem Agarosegel elek- trophoretisch aufgetrennt. Das Agarosegel wird danach einem Blotting-Verfahren unterzogen, wodurch die DNA auf eine Nitrozellulosemembran übertragen wird. Diese wird in ein Hybridisierungsverfahren eingesetzt, in dem die DNA von Fig. 1 , ggfs. in Kombination mit einer DNA von HP-Virus 1 5 als markierte Probe verwendet wird. Es wird eine Hybridisierung mit der in der Gesamt-DNA vorliegenden Papillomvirus-DNA erhalten.
Im weiteren wird vorstehende mit BamHI gespaltene Gesamt-DNA in einem λ- Phagen kloniert. Die entsprechenden Klone, d.h. die die Papillomvirus-DNA enthaltenden Klone, werden durch Hybridisierung mit der DNA von Fig. 1 , ggfs. in Kombination mit einer DNA des HP-Virus 1 5 identifiziert. Das Insert dieser Klone wird dann einer weiteren Klonierung in einem Plasmid-Vektor unterzogen, wodurch ein Klon erhalten wird, der das Papillomvirus-Genom DL314-G enthält. Das Genom wird durch Sequenzierung bestätigt.
In analoger Weise werden weitere Papillomvirus-Genome bereitgestellt. Sie werden entsprechend der zu ihrer Bereitstellung verwendeten DNAs bezeichnet, mit: DL347-G, DL369-G, GA1 -3-G, GA3-1 -G, GA6-2-G bzw. GA9-4-G.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Protein, das durch vorstehendes Papillomvirus-Genom codiert wird. Ein solches Protein ist z. B. ein Hauptcapsid- Protein (L1 ) oder ein Nebencapsidprotein (L2) . Die Herstellung eines vorstehenden Proteins erfolgt in üblicher Weise. Beispielhaft wird die Herstellung von L1 bzw. L2 des Papillomvirus-Genoms DL31 4-G beschrieben. Hierzu wird das zu der DNA von Fig. 1 verwandte HP-Virus 1 5 herangezogen. Von diesem ist die vollständige Sequenz und die Lage einzelner für Proteine codierender DNA- Bereiche bekannt. Durch parallele Restriktionsspaltungen beider Genome und anschließender Hybridisierung mit verschiedenen, die L1 bzw. L2 codierende DNA betreffenden Fragmenten werden diese DNAs auf dem Papillomvirus- Genom DL31 4-G identifiziert. Sie werden durch Sequenzierung bestätigt. Die für L1 codierende DNA wird mit DL314-G-L1 -DNA und die für L2 codierende DNA mit DL31 4-G-L2-DNA bezeichnet.
Im weiteren wird die für L1 bzw. L2 codierende DNA in einen Expressionsvektor inseriert. Beispiele eines solchen für E. coli, Hefe und tierische Zellen sind vorstehend genannt. Insbesondere wird für die Expression in E. coli auf den Vektor pGEX-2T verwiesen (vgl. Kirnbauer, R. et al. , supra) . Nach Insertion der DL31 4-G-L1 - bzw. DL314-G-L2-DNA wird pGEX-2T-DL31 4-G-L1 bzw. pGEX-2T- DL31 4-G-L2 erhalten. Diese Expressionsvektoren exprimieren nach Transformation von E. coli ein Glutathion S-Transferase-L1 - bzw. Glutathion S-Transferase- L2-Fusionsprotein. Die Reinigung dieser Proteine erfolgt in üblicher Weise.
Für eine weitere Expression vorstehender L1 bzw. L2 codierender DNA wird das Bacculovirus- bzw. Vacciniavirus-System genannt. Hierfür verwendbare Expressionsvektoren sind z.B. pEV mod . und pSynwtVI" für das Bacculovirus- System (vgl. Kirnbauer, R. et al., supra) . Für das Vacciniavirus-System sind insbesondere Vektoren mit dem Vacciniavirus " early " (p7 . 5 k) - bzw . "late" (Psynth, p1 1 K)-Promotor zu nennen (vgl. Hagensee, M., E. et al. , Journal of Virology ( 1 993), Seiten 31 5-322). Vorliegend wird das Bacculovirus-System bevorzugt. Nach Insertion vorstehender L1 bzw. L2 codierender DNA in pEV mod. wird pEVmod.-DL31 4-G-L1 bzw. pEVmod.-DL31 4-G-L2 erhalten.
Der erstere Expressionsvektor alleine bzw. beide Expressionsvektoren zusammen führen nach Infektion von SF-9 Insektenzellen zur Ausbildung von Virus-ähnlichen Partikeln. Im ersteren Fall umfaßt ein solches Partikel ein L1 -Protein, während es im letzteren Fall neben einem L1 - auch ein L2-Protein enthält.
Ein Virus-ähnliches Partikel letzteren Falls wird auch erhalten, indem die vor- stehenden DL31 4-G-L1 - und DL314-G-L2-DNAs gemeinsam in den Expressionsvektor pSynwtVI" inseriert werden und das erhaltene pSynwtVI"DL31 4-G-L1 /L2 zur Infektion von SF-9 Insektenzellen verwendet wird. Die Reinigung vorstehender Virus-ähnlicher Partikel erfolgt in üblicher Weise. Sie stellen auch einen Gegenstand der Erfindung dar.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein gegen ein vorstehendes Protein bzw. Virus-ähnliches Partikel gerichteter Antikörper. Die Herstellung eines solchen erfolgt in üblicher Weise. Beispielhaft wird es für die Herstellung eines Antikörpers beschrieben, der gegen ein L1 von DL314-G umfassendes Virusähnliches Partikel gerichtet ist. Hierzu wird das Virus-ähnliche Partikel BALB/c- Mäusen subcutan injiziert. Diese Injektion wird im Abstand von jeweils 3 Wochen wiederholt. Etwa 2 Wochen nach der letzten Injektion wird das den Antikörper enthaltende Serum isoliert und in üblicher Weise getestet.
In bevorzugter Ausführungsform ist der Antikörper ein monoklonaier Antikörper. Zu seiner Herstellung werden nach vorstehender vierten Injektion den Mäusen Milzzellen entnommen und diese in üblicher Weise mit Myelomzellen fusioniert. Die weitere Klonierung erfolgt ebenso nach bekannten Verfahren.
Mit der vorliegenden Erfindung wird es ermöglicht, Papillomviren, insbesondere in Karzinomen der Haut, nachzuweisen. Hierzu kann die erfindungsgemäße DNA als solche oder von einer weiteren DNA umfaßt eingesetzt werden. Letztere kann auch ein Papillomvirus-Gom oder ein Teil davon sein.
Die vorliegende Erfindung ermöglicht ferner die Bereitstellung von bisher nicht gekannten Papillomviren. Diese finden sich insbesondere in Karzinomen der Haut. Desweiteren liefert die Erfindung Proteine und Virus-ähnliche Partikel, die auf diese Papillomviren zurückgehen. Darüberhinaus werden Antikörper bereitgestellt, die gegen diese Proteine bzw. Partikel gerichtet sind.
Die vorliegende Erfindung ermöglicht es also, diagnostische und therapeutische Maßnahmen bei Papillomvirus-Erkrankungen zu ergreifen. Darüberhinaus liefert sie die Möglichkeit, eine Vakzine gegen Papillomvirus-Infektionen aufzubauen. Die vorliegende Erfindung stellt somit einen Durchbruch auf dem Gebiet der Papillomvirus-Forschung dar.
Die Erfindung wird durch die Beispiele erläutert.
Beispiel 1 : Identifizierung des Papillomvirus-Genoms DL314-G
Aus einer Biopsie eines Basalzellkarzinoms wird die Gesamt-DNA isoliert. 1 Oμg dieser DNA werden mit dem Restriktionsenzym BamHI gespalten und in einem 0,5 % Agarosegel elektrophoretisch aufgetrennt. Gleichzeitig werden auch 1 0μg vorstehender DNA aufgetrennt, die nicht gespalten worden ist. Das Agarosegel wird einem Blotting-Verfahren unterzogen, wodurch die DNA aus dem Agarosegel auf eine Nitrozellulosemembran übertragen wird. Diese wird in ein Hybridisierungsverfahren eingesetzt, in dem die vorstehende DNA von Fig. 1 in Kombination mit HP-Virus- 1 5 DNA als p32-markierte Probe verwendet wird. Es wird eine Hybridisierung mit der geblotteten DNA erhalten.
Vorstehende Verfahren sind dem Fachmann auf dem Gebiet der DNA-Rekombinationstechnik bekannt. Ergänzend wird auf Sam- brook et al., supra verwiesen.
Beispiel 2: Klonierung des Papillomvirus-Genoms DL314-G
Die aus Beispiel 1 erhaltene Biopsie-DNA wird mit dem Restriktionsenzym BamHI gespalten. Die erhaltenen Fragmente werden in eine Ligasereaktion eingesetzt, in der ebenfalls der mit BamHI gespaltene und dephosphoryiierte Vektor ΛZAP Express vorliegt. Die hierbei erhaltenen rekombinanten DNA-Moleküle werden in Bakteπophagen verpackt und diese zur Infektion von Bakterien verwendet. Für diese Verfahrensschritte wird der von der Firma Stratagene angebotene ZAP Express Vektor Kit verwendet. Die erhaltenen Phagenplaques werden dann einem Hybπdisierungsver- fahren unterzogen, in dem die in Beispiel 1 verwendete p32-markιer- te DNA von Fig. 1 in Kombination mit p32-markιerter HP-Vιrus-1 5- DNA verwendet wird. Es wird eine Hybridisierung mit entsprechenden Phagenplaques erhalten Aus diesen werden die BamHI-Frag- mente von DL31 4-G isoliert und zusammen mit einem BamHI-ge- spaltenen, dephosphory erten Plasmid-Vektor, pBluescπpt, in eine weitere Ligasereaktion eingesetzt Die erhaltenen rekombinanten DNA-Molekule werden zur Transformation von Bakterien, E. coli XLI -Blue, verwendet. Durch Restriktionsspaltungen bzw Hybπ disierung mit vorstehenden DNA Proben wird ein das Papillomvirus- Genom DL314-G enthaltender Bakteπenklon identifiziert. Das Plasmid dieses Bakteπenklons wird mit pBlue-DL31 4-G bezeichnet.

Claims

Patentansprüche
. DNA, codierend für ein Peptid eines Papillomvirus-Hauptcapsid-Proteins, wobei das Peptid die Aminosäuresequenz von Fig. 1 , Fig. 2, Fig. 3, Fig. 4, Fig. 5, Fig. 6 oder Fig. 7 oder eine davon durch ein oder mehrere Aminosäuren unterschiedliche Aminos uresequenz umfaßt, und wobei die DNA durch folgende Verfahrensschritte erhältlich ist:
(a) Isolierung der Gesamt-DNA aus einer Biopsie epithelialen Neoplas- mas,
(b) Hybridisierung der Gesamt-DNA von (a) mit einer DNA von Fig. 1 , Fig. 2, Fig. 3, Fig. 4, Fig. 5, Fig. 6 oder Fig. 7, wodurch ein in der Gesamt-DNA von (a) enthaltenes Papillomvirus-Genom nachgewiesen wird, und
(c) Klonierung derdas Papillomvirus-Genomenthaltenden Gesamt-DNA von (a) in einem Vektor sowie Sequenzierung des Klons.
2. DNA nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, daß die für das Peptid des Papillomvirus-Hauptcapsid-Proteins codierende DNA die Basensequenz von Fig. 1 , Fig. 2, Fig. 3, Fig. 4, Fig. 5, Fig. 6 oder Fig. 7, oder eine davon durch ein oder mehrere Basenpaare unterschiedliche Basensequenz umfaßt, und wobei die DNA durch folgende Verfahrensschritte erhältlich ist:
(a) Isolierung der Gesamt-DNA aus einer Biopsie epithelialen Neoplas- mas,
(b) Hybridisierung der Gesamt-DNA von (a) mit einer DNA von Fig. 1 , Fig. 2, Fig. 3, Fig. 4, Fig. 5, Fig. 6 oder Fig. 7, wodurch ein in der Gesamt-DNA von (a) enthaltendes Papillomvirus-Genom nachgewiesen wird, und (c) Klonierung der das Papillomvirus-Genom enthaltenden Gesamt-DNA von (a) in einem Vektor sowie Sequenzierung des Klons.
3. DNA nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß die DNA ein Papillomvirus-Genom umfaßt.
4. Protein, codiert durch das Papillomvirus-Genom nach Anspruch 3.
5. Protein nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß das Papillomvirus- Hauptcapsid-Protein als Virus-ähnliches Partikel vorliegt.
6. Protein nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß das Virus-ähnliche Partikel auch ein Papillomvirus-Nebencapsid-Protein enthält.
7. Expressionsvektor, umfassend eine für das Protein nach Anspruch 4 codierende DNA.
8. Transformante, enthaltend den Expressionsvektor nach Anspruch 7.
9. Verfahren zur Herstellung des Proteins nach Anspruch 4, umfassend die Kultivierung der Transformante nach Anspruch 8 unter geeigneten Bedingungen.
1 0. Antikörper, gerichtet gegen das Protein nach einem der Ansprüche 4-6.
1 1 . Verwendung der DNA nach einem der Ansprüche 1 -3 als Reagens zur Diagnose.
1 2. Verwendung des Proteins nach einem der Ansprüche 4-6 als Reagens zur Diagnose, Therapie und/oder Vakzinierung.
1 3. Verwendung nach Anspruch 1 1 oder 1 2, wobei die Diagnose Papillom- virus-Infektionen bzw. -Erkrankungen betrifft.
14. Verwendung nach Anspruch 1 2, wobei die Therapie und/oder Vakzinierung Papillomvirus-Infektionen bzw. -Erkrankungen betrifft.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000035478A1 (en) * 1998-12-11 2000-06-22 The University Of Queensland Treatment of papillomavirus infections

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19735118C1 (de) * 1997-08-13 1998-08-13 Deutsches Krebsforsch Papillomviren, Mittel zu deren Nachweis sowie zur Therapie von durch sie verursachten Erkrankungen
DE19840263C1 (de) * 1998-09-03 2000-05-25 Deutsches Krebsforsch Papillomviren, Mittel zu deren Nachweis sowie zur Therapie von durch sie verursachten Erkrankungen
WO2009151697A2 (en) * 2008-03-14 2009-12-17 The Government Of United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Compositions and processes relating to human bocavirus
AU2011258501B2 (en) 2010-05-25 2016-07-07 Qiagen Gaithersburg, Inc. Fast results hybrid capture assay and associated strategically-truncated probes

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0235004A2 (de) * 1986-01-31 1987-09-02 Institut Pasteur Sonden für Papilloma-Virus und Verfahren zur Diagnose der Papilloma-Virusinfektionen
EP0451550A2 (de) * 1990-03-20 1991-10-16 BEHRINGWERKE Aktiengesellschaft Seroreaktive Epitope von den Proteinen 16 des menschlichen Papillomavirus (HPV)
WO1995030754A1 (de) * 1994-05-04 1995-11-16 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Für ein peptid eines papillomvirus-hauptcapsid-proteins codierende dna und dessen verwendungen
WO1997004099A2 (de) * 1995-07-19 1997-02-06 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Papillomviren, mittel zu deren nachweis sowie zur therapie von durch sie verursachten erkrankungen
WO1998023752A2 (de) * 1996-11-26 1998-06-04 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Papillomviren, mittel zu deren nachweis sowie zur therapie von durch sie verursachten erkrankungen
DE19735118C1 (de) * 1997-08-13 1998-08-13 Deutsches Krebsforsch Papillomviren, Mittel zu deren Nachweis sowie zur Therapie von durch sie verursachten Erkrankungen
WO1998042847A2 (de) * 1997-03-25 1998-10-01 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Papillomvirus-hauptcapsid-proteins und deren verwendung in diagnose, therapie und vakzinierung

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0235004A2 (de) * 1986-01-31 1987-09-02 Institut Pasteur Sonden für Papilloma-Virus und Verfahren zur Diagnose der Papilloma-Virusinfektionen
EP0451550A2 (de) * 1990-03-20 1991-10-16 BEHRINGWERKE Aktiengesellschaft Seroreaktive Epitope von den Proteinen 16 des menschlichen Papillomavirus (HPV)
WO1995030754A1 (de) * 1994-05-04 1995-11-16 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Für ein peptid eines papillomvirus-hauptcapsid-proteins codierende dna und dessen verwendungen
WO1997004099A2 (de) * 1995-07-19 1997-02-06 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Papillomviren, mittel zu deren nachweis sowie zur therapie von durch sie verursachten erkrankungen
WO1998023752A2 (de) * 1996-11-26 1998-06-04 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Papillomviren, mittel zu deren nachweis sowie zur therapie von durch sie verursachten erkrankungen
WO1998042847A2 (de) * 1997-03-25 1998-10-01 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Papillomvirus-hauptcapsid-proteins und deren verwendung in diagnose, therapie und vakzinierung
DE19735118C1 (de) * 1997-08-13 1998-08-13 Deutsches Krebsforsch Papillomviren, Mittel zu deren Nachweis sowie zur Therapie von durch sie verursachten Erkrankungen

Non-Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DELIUS H ET AL: "PRIMER-DIRECTED SEQUENCING OF HUMAN PAPILLOMAVIRUS TYPES" CURRENT TOPICS IN MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY, Bd. 186, 1994, Seiten 13-31, XP000602940 *
E.M. DE VILLIERS ET AL.: "An interlaboratory study to determine the presence of human papillomavirus DNA in esophageal carcinoma from China" EMBL SEQUENCE DATABASE,11. August 1998, XP002105381 Heidelberg, FRG *
G. ASTORI ET AL.: "Human papillomaviruses are commonly found in normal skin of imunocompetent hosts" J. INVEST. DERMATOLOGY, Bd. 110, Nr. 5, Mai 1998, Seiten 752-755, XP002105382 Blackwell Sciences Inc., Oxford, UK *
G. ASTORI ET AL.: "The papilomaviruses found in benign and malignant cutaneous lesions are present in normal skin" EMBL SEQUENCE DATABASE,11. August 1998, XP002094683 Heidelberg, FRG *
KIRNBAUER R ET AL: "EFFICIENT SELF-ASSEMBLY OF HUMAN PAPILLOMAVIRUS TYPE 16 L1 AND L1-L2 INTO VIRUS-LIKE PARTICLES" JOURNAL OF VIROLOGY, Bd. 67, Nr. 12, Dezember 1993, Seiten 6929-6936, XP000613170 *
R. HOPFL ET AL.: "Human papillomavirus DNA in non-melanoma skin cancers of a renal transplant recipient: detection of a new sequence related to epidermodysplasia verruciformis associated types" EMBL SEQUENCE DATABASE,13. Februar 1997, XP002105380 Heidelberg, FRG & J. INVEST. DERMATOLOGY, Bd. 108, Nr. 1, Januar 1997, Seiten 53-56, Blackwell Sciences Inc., Oxford, UK *
R.J. BERKHOUT ET AL.: "Nested PCR approach for detection and typing of epidermodysplasia verruciformis-associated human papillomavirus types in cutaneous cancers from renal transplant recipients" EMBL SEQUENCE DATABASE,10. Juli 1995, XP002105379 Heidelberg, FRG & J. CLIN. MICROBIOL., Bd. 33, Nr. 3, M{rz 1995, Seiten 690-695, XP002083613 ASM, WASHINGTON,DC,US *
S.-Y. CHAN ET AL.: "Phylogenetic analysis of 48 papillomavirus types and 28 subtypes and variants: a showcase of the molecular evolution of DNA viruses" J. VIROLOGY, Bd. 66, Nr. 10, Oktober 1992, Seiten 5714-5725, XP002094682 AM.SOC.MICROBIOL.,WASHINGTON,US *
SHAMANIN V ET AL: "DEVELOPMENT OF A BROAD SPECTRUM PCR ASSAY FOR PAPILLOMAVIRUSES AND ITS APPLICATION IN SCREENING LUNG CANCER BIOPSIES" JOURNAL OF GENERAL VIROLOGY, Bd. 75, Nr. 5, Mai 1994, Seiten 1149-1156, XP000616268 *
V. SHAMANIN ET AL.: "Human papillomavirus infection in nonmelanoma skin cancers from renal transplant recipients and nonimmunosuppressed patients" J. NATL CANCER INST., Bd. 88, Nr. 12, 19. Juni 1996, Seiten 802-811, XP000616318 Bethesda, MD, US *
V. SHAMANIN ET AL.: "Specific types of human papillomavirus found in benign proliferations and carcinomas of the skin in immunosuppressed patients" CANCER RESEARCH, Bd. 54, Nr. 17, 1. September 1994, Seiten 4610-4613, XP002094681 AACR, BALTIMORE, US *
W.E. PIERCALL ET AL.: "Presence of human papilloma virus type 16 DNA sequences in human nonmelanoma skin cancers" J. INVEST. DERMATOLOGY, Bd. 97, Nr. 5, November 1991, Seiten 880-884, XP002094680 elsevier, new york, US *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000035478A1 (en) * 1998-12-11 2000-06-22 The University Of Queensland Treatment of papillomavirus infections
US6867033B1 (en) 1998-12-11 2005-03-15 The University Of Queensland Of St. Lucia Treatment of papillomavirus infections

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EP1003877A2 (de) 2000-05-31
JP2001514895A (ja) 2001-09-18
WO1999009177B1 (de) 1999-09-16
US6488935B1 (en) 2002-12-03

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