WO1998032455A1

WO1998032455A1 - Extrait d'aiguilles de pin et son utilisation

Info

Publication number: WO1998032455A1
Application number: PCT/CN1997/000006
Authority: WO
Inventors: Ling Ji
Original assignee: Ling Ji
Priority date: 1997-01-27
Filing date: 1997-01-27
Publication date: 1998-07-30
Also published as: KR20010049156A; DE69734163T2; KR100529793B1; JP2001508777A; US6329000B1; EP1013278A1; AU1588497A; DE69734163D1; AU734851B2; EP1013278A4; HK1025246A1; CA2279261A1; EP1013278B1

Description

松针提取物及其应用技术领域

本发明是关于松针提取物及其医药应用，尤其是在治疗高血压和在治疗冠心病心病的应用，以及含松针提取物的药物组合物和其医药用途。

背景技术

松针又名松叶，拉丁名 Folium Pini。特别是松针为松科 (Pinaceae)松属 (Pinus)植物的叶，其植物来源为油松 (Pinus abuleaformis carr), 马尾松 (Pinus massoniana Lams)、云南松 (Pinus Yunanensis Franch)等。在中国松科植物约有 20种 10变种，引种栽培的有 16种 2变种.

在中国，许多年来认为松针可以作为某些药物的配料，例如《中药大辞典》中收栽了治疗跌打损伤，浮肿、湿疮疥癣, 预防流感、流脑，治疗慢性支气管炎和失眠症等古今验方，其中松针被用作组分之一。

尽管松针作为药物的配料已有悠久的历史，但未见报道松针单独具有治疗高血压、冠心病、心绞痛、心律失常、脑梗塞、高脂血症、高粘血症、高聚血症、动^ 5更化症、老年痴呆症、突发性耳聋等病症的作用，也未见将松针或其提取物与其它物质组合，用于治疗上述病症.

经过多年的研究，本发明人发现松针提取物可用于治疗高血压、心绞痛、心肌炎、心律失常、脑梗塞、高脂血症、糖尿病、高粘血症、高聚血症、动脉硬化症、老年痴呆症、突发性耳聋等病症，收到了满意的效果。发现了松针的一些可靠的新用途，发明概述

因此，本发明的目的之一是提供一种松针提取物，用于治疗多种疾病，例如冠心病、心绞痛、心肌炎、心律失常、高血压病、高脂血症、高粘血症、高聚血症、糖尿病、脑梗塞、脑动脉硬化症、动脉硬化症、老年痴呆症和突发性耳聋等等；

本发明的另一个目的是提供一种治疗疾病的药物组合物。

本发明的另一个目的是提供一种治疗多种病症的方法。

本发明的另一个目的是关于松针提取物在治疗疾病中的应用.

本发明的其它目的，将在对本发明的描述中体现。

根据本发明，一种杠提取物，固态时呈浅棕色至深棕色，紫外-可见光光讲中在 242nm附近有最大吸收峰。

一种松针提取物，用于治疗心肌炎、冠心病、心绞痛、心律失常、高血压、高脂血症、高粘血症、高聚血症、脑梗塞、老年痴呆症、糖尿病、脑动脉硬化症、动眛硬化症和突发性耳聋症等等. 附图简要说明

图 1为本发明松针提取物的薄层层析效果。

图 2为本发明松针提取物的紫外 -可见光吸收图。

图 3a表示在内皮存在时，松针提取物的血管扩张作用与剂量浓度的依赖性关系。图 3b表示在内皮存在时，对照组开搏通的血管扩张作用与剂量浓度的关系。图 3c表示去 (¾皮后杠 †提取物的血管扩张作用与剂量浓度的关系，

图 3d表示去内皮后对照组开搏通的血管扩张作用与剂量浓度的关系。

图 4表示在内皮存在时，松针提取物和葛根提取物对血管扩张的综合作用。发明详述

根据本发明，一种松针提取物，固态时呈浅椋色至深棕色，可溶于水，紫外-可见光光谙中在 242±lnm处有最大吸收峰。

本发明人发现松针提取物对多种病症均有疗效。这些疾病包括，例如，心肌炎、冠心病、心绞痛、心律失常、高脂血症、高粘血症、高聚血症、脑梗塞、糖尿病、脑动脉硬化症、老年痴呆症、动脉硬化症和突发性耳聋症等等。松针提取物尤其是对高血压、高脂血症、高粘血症、高聚血症有疗效，

本发明的松针提取物可以用常规的方法从松针中提取。常规的方法有，例如，水提法、水提醇沉法、醇（如乙醇）提法，等等，优选水提法。松针的来源可以是采自各种松树的松针，如落叶松、油松、马尾松、雪松、萚松、红松、云南松和黑松等等，优选来自油松、马尾松和云南松的松叶。

固态松针提取物为浅棕色至深棉色，颜色的深浅取决于所采用的干燥方法，溶于极性溶剂如水、乙醇等. 用紫外 -可见光借鉴别时，发现松针提取物在 242nm附近有最大吸收峰；用薄层层析方法鉴别时，其 R_f值分别为 0.93和 0.78 ,

一种药物组合物，包括治疗有效量的松针提取物和药物上可接受的载体或赋形剂. 该药物上可接受的栽体或赋形剂为常规使用的栽体或赋形剂。

一种治疗疾病的方法，包括给病人服用治疗有效量的本发明的松针提取物，这些疾病包括高血压、糖尿病、冠心病、心绞痛、心律失常、心肌炎、高脂血症、高粘血症、高聚血症、脑梗塞、老年痴呆症、动脉硬化症和突发性耳聋症等等。

本发明的松针提取物也可以与其它药物配伍，治疗上述疾病或其它疾病。例如，可以与补钙剂配合服用，起到降血压、降血脂、降血糖、降低血液粘度和血小板聚集率和调节钙代谢等的综合作用。

本发明的松针提取物还可以与其它組份组合，用于治疗上述疾病。这些组份可以是，例如，葛根、钩藤、珍珠层粉、龙骨、珍珠粉、牡蛎、银杏叶、丹参、红花、川芎、赤柏叶、瓜蒌等等。

根据本发明，一种配方包括松针和葛根，其中松针与葛根的比例为 ³： 1 ~ 5： 2 , 优选 3 : 1 - 4： 1。松针和葛根的配方可以用于治疗上述疾病，根据本发明，所述配方还包括珍珠层粉，其中松针与珍珠层粉的比例为： 20 : 1 ~ 2： 1。优选松叶：葛根：珍珠层粉为 18： 6： 9 . 在配方中加入珍珠层粉，可以增加钙代谢的调节作用，

葛根为豆科植物野葛 Pueraria Lobata(Wmd.)Ohwi的根。珍珠层粉为蚌科动物褶纹冠蛑 Cristaria plicata( Leach), 或背壳无齿蛑 Anadonta woodiana(Lea.)等的壳内层部分加工而成的粉末。葛 ■、珍珠层粉均来源广泛，市场上可以得到。

根据本发明，一种药物组合物，包括有效量的松针和葛根的提取物和药物上可接受的栽体或赋形剂.

一种治疗疾病的方法，包括给病人 ^ ^用治疗有效量的所述配方的提取物，用于治疗上述疾病。

松针和葛根的提取物可以由松针与葛根一起提取得到，也可以将松针和葛根分别提取后将各提取物混合后得到。

本发明的药物组合物可以胃肠用药、局部用药等，可以制成各种不同剂型。如片剂、口^ -液、粉剂、丸剂、胶嚢剂、注射剂（包括静脉输液剂）、外用洗剂、膏剂、酊剂、散剂、冲剂等，

本发明松针提取物的给药剂量，口服时，成人为 1 ~ 3g/次，优选 1 ~ 2g/次每日三次，儿童（ 5岁以上- 14岁以下）为 0.5~lg/次，每日三次。作为举例，下面我们详细描述用水提法制备本发明的松针提取物。

取原料松针. 松针可以整体加工，也可以切段或磨粉后再进行处理' 优选把松针切段后再处理。向松针中加入过量的氷，至少要 4倍以上，最好为 ⁸ - 9倍（重量）。然后加热进行煮提，煮提的时间为 1 ~ 2小时，优逸 1.5小时，煮提后，进行过滤' 并将滤液浓缩，得到深棕色的浓缩液。

过滤后得到的滤出物可以再次加水进行第二次煮提. 加水量至少为 3倍以上' 最好为 6 ~ 7倍，煮提的时间为 0.5~1.5小时，优选 1小时。第二次煮提后, 经过滤得到的滤液可以合并入前次得到的滤液一起浓缩，

如果需要，浓缩液可以进一步干燥，得到浅至深棕色粉状物. 干燥可以采取多种方法，如喷雾干燥，真空干燥和冷冻干燥等等。一般操作温度高的干燥方法会使得到的椋色粉状物的颜色偏深，松针提取物的鉴别试验

1、薄层层析（ TLC ) 的鉴别

称取干燥的松针提取物粉 5g , 加入乙醚浸泡（时时振摇） 2次，每次 1小时，

30ml , 滤过，滤液合并，回收乙醚至干，加少量乙醚溶解，转入 lml容量瓶中，加乙醚至刻度，摇匀，作为供试品溶液，照薄层色谘法《中国药典》（ 199⁵版附录 VIB ) 试验，吸取上述供试品溶液 10~20ul , 点于以羧甲基纤维素纳粘合剂的硅胶 G薄层板上，以石油醚：乙酸乙酯（ 4 : 1 )为展开剂，展开 12cm , 取出，晾干，喷以 20 % 硫酸乙醇溶液，置 105 'C加热至斑点颜色出现。在供试品色谱中，具有相同紫红色的两个主斑点（ Rf值分别为 0.93和 0.78 ) (见附图 1 )。

2、紫外线光讲的鉴别

取松针提取物粉过 60 目筛，于 50 ~ 55 'C干燥 3小时，移置硅胶干燥器内保存备用。

称取经上述预处理的松针提取物粉 2g (精确到 O.Olg ) , 置 50ml具塞三角烧瓶中，加石油醚超声提取 3次，每次 15ml , 30分钟，滤过，残渣挥干溶剂，再加氯仿超声提取 3次，每次 15ml , 30分钟，滤过，滤液合并，回收氯仿至干，加少量氯仿溶解，转入 10ml容量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀，作为供试品液。

采用紫外分光光度仪（曰本岛津 UV - 260型），

狭缝宽度： lnm 波长增量： 2nm

波长范围： 200-500nm

吸收度范围： 0 ~ 1

将供试品液经适当稀释后，使最大吸收波长处的吸收度为 0.6〜0.8 ' 照分光光度法《中国药典》（ 1995版附录 VA )在波长 200 ~ ⁵00nm范围内测定其紫外-可见光谙 (见附图 2 ) , 表明在波长 242±lnm处有最大吸收峰。一、松针提取物的降压作用

松针提取物（煎剂，浓缩或水提醇沉后喷雾干燥粉剂）对原发性高血压、肾性高血压病人及自发性高血压大鼠 (SHRsp)。二肾一夹肾性高血压大鼠有显著的降压作用，此降压作用呈剂量依赖性。

(一'）松针提取物的急性降压试验'

( 1 )材料和方法：

实验动物：健康雄性 Wistar大鼠 30只，其中 20只按 Goldblatt法经手术形成一肾一夹肾性高血压；自发性高血压大鼠 (SP)30只，雄性，

药品：松针提取物粉，复方罗布麻片.

正常对照組给予松针提取物粉 l.⁶g/kg/次；

空白对照组 (SP)给予蒸铺水 2ml/100g体重 /次；

阳性对照组给予复方罗布麻片 1.08g/kg/次；

小剂量组给予松针提取物粉 0.83g/kg/次；

大剂量组给予松针提取物粉 3.3g/kg/次。

将动物麻醉后分离右颈总动脉，结扎远端，近端插入肝素化导管，与五导生理仪相连，监测血压及心率，打开腹腔，由十二指肠给药，观察用药前及用药后 30分' 1 小时， 2小时， 3小时血压及心率变化。

( 2 ) 结果：（见表 1 )

*P<0.05 **P<0.01

松 4†提取物对①正常组血压仅在 30 分时有轻度下降， 1 小时后恢复原水平 (P>0.05), ②空白组血压无明显变化 (P>0.05); ③阳性对照组用药后 30 分血压开始下降， 2小时达高峰, 下降率最高为 8.1±1.22%，与用药前比有统计意义 (PO.05), ④小剂量組于用药后 30分血压下降， 2小时达高峰，下降率最高为 M.3±2.32% (肾性）和 15.6±2.17%(SP), 较用药前有非常显著差异 (P<0.001), ⑤大剂量组 2小时血压下降最显著，为 18.6±2.07% (腎性〕和 17.6±1.98%(SP), 与本组治疗前和其余各组治疗后 2小时血压相比，差别非常显著 (P<0.001)。

小结：松针提取物的急性降压试验表明，松针提取物对正常大鼠血压无明显影响，但可显著降低 SP和肾性高血压大鼠的动脉血压， 30分开始出现作用， 2小时达高峰，作用持续 3小时以上，且剂量依赖性，降压作用强于复方罗布麻。

(二）松针提取物的长期降压试验

1、材料和方法

健康 Wistar大鼠 10只，自发性高血压大鼠（ SP ) 50只，雄性，药品（同急性降压试验），

方法： Wistar大鼠①正常对照组，给予松针提取物粉 1.6g kg/日， SP大鼠每 10 只为一只组， ②空白对照组，每曰给予蒸馏水 2ml/100g体重 /日， ③复方罗布麻组， 1.08g/kg/日， ④小剂量組：粉 0.83g kg/日， ⑤中剂量组：松针提取物粉 1.6g/kg/ 日， ⑥大剂量组：松针提取物粉 3.3g/kg/日，一日一次灌胃，每次灌胃容积为 2ml/100g 体重， 3周为一疗程，用药前后测定大鼠血压和一般情况，停药后测定体外血压和颈动脉血压，并进行直线回归相关性检验，实验结果以均数土标准差（ SD )表示，组间进行检验，

2、结果：（见表 2 )

表 2 松针提取物对 SP大鼠的长期降压作用

*P<0.05 ***P<0.001 经松针提取物粉治疗后比较，大鼠一般情况正常，空白对照组体重增长较少（平均 2g ) ，而松针提取物大、中、小剂量組平均增 6.7g , 松针提取物对正常对照组血压无何影响（P>0.05)，小剂量组治疗后血压下降率为 30.7±0.93%，中剂量组为 38.82+3.68%, 大剂量组为 48.22±1.16%, 与治前比有非常显著差别 (P<0.001)，与空白组及罗布麻组比较有显著差异（ P<0.001 ) 治后 MAP 与体外血压呈显著正相关 (r=0.903 , t=8.899 , Ρ<0.001)。

结论：松针提取物对自发性高血压大鼠（ SP )有良好的降压作用，呈剂量依赖性，而对正常血压无影响，其降压作用强于复方罗布麻片（ Ρ<0.001 ) 。经松†提取物治疗的 SP大鼠活动、食欲正常，体重增加较多。

( 三）松针提取物的临床降压试验

1、方法：

选择住院病人 106例，门诊病人 38例，经详细询问病史，查体及实验室检查， P T

- 9 - 按 1987年 WHO高血压专家委员会诊断标准，确诊原发性高血压（ EH ) 12⁴例，其中 I期 EH38例， II期 71例， III期 15例，肾性高血压 20例，受检前停用降压剂，利尿剂及血管扩张剂一周以上，分为治疗组和对照組。

治疗組口服松针提取物的口服液 15ml/次，每日 3 次，一个月为一疗程；对照组复方罗布麻片 2片 /次，每日 3次，一个月为一疗程，服药前后分别测 3次非同日清晨血压，取平均值为治前和治后血压. （该口服液每 15ml含松针提取物 1.6g ) 降压疗效评定标准：

( 1 )显效： ①舒张压下降 lOmmHg以上，并达到正常范围； ②舒张压虽未降至正常，但已下降 20mmHg或以上，具备其中一项。 ( 2 ) 有效： ①舒张压下降不及 lOmmHg , 但已达到正常范围； ②舒张压较治疗前下降 10 ~ 1 mmHg , 但未达到正常范围； ③收缩压较前下降 30mmHg以上，具备其中一项，（ 3 )无效：未达到以上标准者。

2、结果：（见表 3 )

表 3 松针提取物对高血压病人的疗效

*Ρ<0·05 **Ρ<0.01 ***Ρ<0.001 两组年龄及治疗前血压无何差异（ Ρ>0.05 ) , 治疗后与本组治疗前血压相比，以治疗组血压下降最显著（ PO.001 ) , 对照组有轻度下降 (Ρ<0.05), 组间较有显著性差异（ Ρ<0.001 )；治疗组显效率及有效率均比对照組显著（ Ρ<0.001或<0.05 ) 试验中还观察到，治疗组的患者经治疗后头晕、头痛、胸闷、心悸失眠和五心烦热等症状明显减轻或消失，显效率达 52.41~75.22%, 明显高于对照组 (P<0.001); 未见不良反应，血、尿、便常规及肝肾功能未见异常改变； 20例肾性高血压患者肾功能有不同程度改善，尿素氮、血肌酑下降，同位素肾图示 ' 脏排泄功能较前改善結论：松针提取物对原发性高血压和肾性高,血压有显著的治疗作用，其降压和緩解临床症状，改善肾功能作用明显优于对照组（复方罗布麻）。二、松针提取物的降脂试验

1、材料及方法

实验动物：北京大耳白兔 60只，均为雄性，体重 1.5-2Kg ,

药品、试剂：胆固醇由北京化学试剂公司生产，丙基石巟氧嘧啶片，西德产品，每片 50mg , 猪油为自制；本发明的松针提取物粉，（简称松针粉），烟酸肌醇脂片，北京第二制药厂产品，每片 0.2 , 总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白试剂盒均为北京中生生物工程技术公司产品。

方法：将大耳白兔正常飼养 10天后，随机分为 5组，每组 10只，清晨空腹由耳缘静脉取血查血脂，同日开始给予高脂饮食；胆固醇 2g/Kg/日，猪油 0.5g Kg/日，丙基氧嘧啶 12.5mg Kg/日，第 4組预防组在高脂餐的同时，给予松针粉 0.75g/Kg/日，高脂餐 15天后再次空腹取血，称重，停用高脂餐，给予正常饲料饲养，（ 1 ) 空白对照组，每日濯胃蒸馏水 10ml , ( 2 )阳性对照组，给予烟酸肌醇脂 OJg/Kg/日，（ 3 ) 小剂量组，给予松针粉 0.25g/Kg/日，（ 4 )预防组，继续按原剂量给予松针粉，共给药 30天，（ 5 ) 大剂量组给药剂量为 1.5g/Kg/日，均溶于 10ml蒸饱水中，灌胃法给药，一日一次。给药第 15日清晨空腹取血复查血脂，总胆固醇采用 CHOD - PAP法，甘油三酯为 GPO - PAP法，高密度脂蛋白为璘钨酸-镁（ PTA - Mg2+ ) 沉淀法，低密度脂蛋白乙烯硫酸（ PVS )一步沉淀法，仪器为日立 7150型自动生化分析仪。

2、结果（见表 4)

松针提取物对高脂血症动物血脂的影响（X±SD)

表 4续松针提取物对高脂血症动物血脂的影响（X ± SD)

* P<0.05 **P<0.01 ***P<0.001

由表中可见，服高脂餐前各组血脂各项指标均无统计学差异（ P>0.05 )服高脂餐后（ 4 )预防组总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白均明显低于其它 4个组，并有显著的统计学意义 (PO.001); 治疗后各组的总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白均有下降，（ 2 ) 、（ 3 ) 、（ 4 ) 、（ 5 ) 组与（ 1 ) 空白对照组比较有显著的统计学差异，其中以（ 4 )预防组下降最显著 (P<0.001), 各组的下降率与空白组（ 1 ) 比较亦有明显差别，（ 3 )、（ 4 ) 、 ( 5 )组优于（ 2 )组，甘油三酯下降率（ 2 )组与

( 1 )组无差异，与（ 3 )、（ 4 )、 ( 5 )组有差异，以（ 5 )组最显著 (P<0.001); 低密度脂蛋白下降率以（ 3 )、（ 5 )组为最显著 (P<0.001);治疗后高密度脂蛋白（ 1 )、

( 2 )组下降，其它各组均增高，（ 4 )、 ( 5 )组更显著（ P<0.01 ) , 升高率以（ 5 ) 組最高（ P<0.01 ) 。

结论：

松针提取物对高脂餐所致动物高脂血症，可降低血清总胆固醇、甘油三酯及低密度脂蛋白，升高高密度脂蛋白，预防组疗效最佳，大剂量组次之，证明松针提取物对高脂血症有治疗和预防作用. 三、松针提取物调节甲状旁腺功能试验

1、材料及方法

实验动物：健康雄性 Wistar大鼠 5只，体重 320 - 360g , 自发性高血压（ SP ) 大鼠 10只，雄性， 170 - 270g ,

实验试剂：松针提取物粉，甲状旁腺激素（ PTH )、降钙（ CT )放射免疫药盒为曰本荣岩公司产品.

方法：将动物为（ 1 ) 正常对照组、（ 2 ) SP空白对照组、（ 3 ) SP治疗组，每 5只为一组。 Wistar大鼠为（ 1 ) 正常对照组给予松针粉 1.5g/Kg/日；将 SP大鼠随机分为 5组，每 5只为一组；（ 2 )空白对照组，每日以蒸水 2ml/100g体重，一日一次灌胃；（ 3 ) 复方罗布麻组， 1.08g/Kg/日，（ 4 ) 小剂量组、松针粉 0.8g/Kg/ 日，（ 5 ) 中剂量组、松针粉 1.5g/Kg日，（ 6 ) 大剂量组、十粉 3.0g/Kg/日，一日一次灌胃，每次灌胃容积为 2ml/100g体重，三周为一疗程。于用药前后麻醉后眼球静脉取血，冷冻离心（ - 4 'C )分离血清，以放射免疫法测定血清 PTH、 CT .

2、结果：松针提取物对大鼠 PTH、 CT的影响

由表 5中可见，治疗前（ 1 )正常对照组与（ 2 ) , ( 3 ) 两组 PTH、 CT值有显著差异，治疗后（ 3 a PTH有明显下降， CT有显著上升，但（ 1 )组仍与（ 2 )、 ( 3 )组间有差异 (P<0.05); 治疗后（ 3 PTH下降值和 CT上升值与（ 1 )、（ 2 ) 组有明显差异 (PO.05和<0.001).

结论：

松针提取物对自发性高血压大鼠（ SP ) 的甲状旁腺功能有一定影响，经治疗 3 周后， SP大鼠的 PTH明显下降， CT明显升高，虽然与正常对照组存在差异，但其 PTH下降率和 CT上升率与空白对照组比较，存在显著统计学差异。松针提取物，对 SP大鼠的甲状旁腺有一定调节作用，四、松针提取物改善血液流变学效应.

(一)、松针提取物体外血小板聚集抑制试验

1、材料及方法

实验动物：健康北京大耳兔 25只，雄性，体重 1.5-2kg .

试剂及仪器，松针提取物，丹参注射液 (lml含生药 2g)，葛根提取物（lml含生药 2g), 二磷苷二钠 (ADP20ug/200uI), 0.2mol/L磷酸緩冲液 (300mg/ml), 枸椽酸钠液 (3.8%),2%硅油-石油醚液， MG - 176型血小板聚集仪，台式平衡自动记录仪，圓形比色杯 (型号： CHRONO - LOG312 # ),硅化离心管，微量进样器。

方法取禁食 10 - 14h大耳白兔耳缘静脉血 3ml , 置于硅化离心管中，血与枸椽酸钠抗凝剂之比为 9: 1 , 混匀后离心 800i m , 4 分钟取上层液为富血小板血浆 (PRP), 余血再离心 (3000rpm)10分钟，取上清液为贫血小板血浆 (PRP), 在 3⁷。C恒温条件下以 BORN比浊法进行血小板聚集测试，比色杯中血浆容量为 250ml，测试时间为 5 分钟。样本分组：（l)ADP 加碓酸緩冲液组， ADP2umol/L , 磷酸缓冲液为 0.2mol/L； (²)ADP加等容量丹参液；（³)ADP加等容量葛根提取物液；（⁴)ADP加等容量松叶提取物液； (5)ADP加等容量该组合物液。

2、结果 (见表 6)

由表 6可见，以 ADP加磷酸緩冲液为基准，（²)ADP加丹参组，（³)ADP加葛根组， (4)ADP加松叶组和 (5)ADP加组合物血小板聚集率明显下降，后 4組下降率比（1)组有非常显著差异，尤以 (4)、（5)组为著， Γ聚集抑制率达 74.56-80.06%, 5，最大聚集率 (4)、（5)组亦与 (2)、（3)组有明显差异。

3、小结

体外血小板聚集抑制试验表明，组合物、松针提取物与葛根提取物对血小板聚集率有显著的抑制，此作用明显强于等浓度丹参液，对家兔的体外血小板聚集抑制作用 1，时最强。几种药物比较对血小板聚集的抑制作用强度依次为：组合物组>松叶组 >葛根组 >丹参组，试验表明，松针与葛根的组合物和松针提取物对于防治血小板聚集，治疗血瘀症有重要作用。

表 6 体外血小板聚集抑制试验

*P<0.05 **P<0.01 ***P<0.001

(二）松针提取物改善血液流变学的临床试验

1、资料和方法：

患者为 37 ~ 75岁，男性 52例，女性 35例，其中冠心病人 36例，高血压 37例，脑梗塞 9例，高脂血症 45例，糖尿病 12例（部分病人并发 2种或 2种以上疾病）；对照组 44例，冠心病 18例，高血压病 21例，脑梗塞 3例，高脂血症 32例（部分为并发 2种或 2种以上疾病患者），受试前停用潘生丁、丹参、阿斯匹林、钙阴滞剂等对血液流变学有影响的药物一周以上，

治疗组口服^！十口服液 15ml (含松针提取物 1.6g ) , —日三次，一个月为一程；对照组服复方丹参片 3片，一日三次，一个月为一疗程。治疗前后检查血液流变学参数，对结果均数进行显著性检验，组间 t检验.

2、结果：

经治疗后松针组血沉减慢，压积减少，血浆比粘度及全血比粘度（高切、低切）均明显改善，血小板聚集率亦明显降低。见表 7、表 8 . 松针提取物对高粘血症者血液流变学的影响 (X±SD)

*P<0.05 **P<0.01 ***P<0.001

松针提取物对高聚血症患者血小板聚集率的影响 (X±SD)

*P<0.05 ***P<0.001 结论：松针提取物对于高粘、高聚血症的患者及动物均有显著的治疗作用，可降 4氐其血沉、血球压积、血浆和全血比粘度，降低血小板聚集率，这对于活血化瘀，防治血栓性疾病改善机体微循环有重要意义，为该药治疗心肌梗塞，冠心病、心绞痛，脑梗塞、高血压病、动静脉血栓性疾病，突发性耳聋和血瘀症等提供了理论依据，五、松针提取物的扩冠、抗心绞痛及抗心律失常临床试验，

对 42例冠心病人采用松针口服液每次 15ml (含松针提取物 1.6g ) , 3 日治疗，治疗前后检查心电图、血脂、血栓素 B₂(TXB₂)， 6-酮 -PGF^PGL), 对照组口服消心痛 10ml/次，日，一个月为一疗程。

结果：（见表 9、 10、 1 1 )

表 9 松针提取物对冠心病患者心率和 TXB₂、 PGI₂的影响

**P<0.01 ***P<0.001

表 10 松针提取物对冠心病患者血脂的影响

总胆固醇甘油三酯高密度脂蛋白分组 n 治前治后治前治后治前治后治疗组 42 6.96 4.82*** 2.10 1.63 * 1. 16 1.43

±1.06 ±0.92 ±0.82 ±0.66 ±0.30 ±0.32 对照组 25 6.04 5.89 1.98 1.84 1.21

±1.13 ±1.02 ±0.76 ±0.81 ±0.36

*Ρ<0.05 ***Ρ<0.001

+1 ― 寸松针提取物对冠心病患者心电图的影响

在治疗组的 42例冠心病人中， 7例为频发性室性早搏，经松针提取物治疗后 6例早搏明显减少， 1例无变化；为频发性房性早搏， 1例显效；慢性冠状动脉供血不足者 24 例，心电图，缺血性 ST - T改善者 16例；陈旧性心梗合并慢性冠状动脉供血不足 4例， 1例显效，心电图恢复为大致正常， 2例 ST - T改善， 1例无变化； 15例并发糖尿病患者，血糖，尿糖均明显下降，肢体麻木及口干、多尿症状明显改善。

心绞痛控制情况： 42例治疗组患者服药前后每周心绞痛发作总次数由治疗前 395次降至 128次（ PO.001), 所有病例未见治后有症状加重者，总效率达 92.8%; 而对照组心绞痛发作次数由治前 215次降到 108次 (P<0.05), 总有效率为 86.6%,

结论：松针提取物对冠心病患者可显著控制心绞痛发作次数，改善缺血性心电图改变，控制心律失常的发生（室早），并可明显降低血清总胆固醇，轻度降低甘油三酯，升高高密度脂蛋白，降低 TXB₂ , 升高 PGI₂使冠状动脉血流量增加，降低心肌耗氧量和心肌后负荷，起到保护缺血心肌作用. 六、松针提取物抗衰老、增加脑血流作用

以松针口液治疗脑梗塞及老年性痴呆症患者 25例，治疗前后检测脑血流图，血清过氧化脂质及铜 -锌-超氧化歧化酶（简称 SOD, )，用药方法每次 15ml (含松针提取物 1.6g ) ，一日三次，疗程为 3个月。经治疗患者脑血流图明显改善， SOD,下降，过氧化脂质明显减少。（见表 12 ) 松针提取物对老年患者 SODt和过氧化脂的影响

*P<0.05 **p<0.01 ***P<0.001 月药前患者脑血流图表现为血管阻力增加，血流量减少，血液流入速度减慢，血管弹性减慢，血管弹性减退；用药后 25例患者 20例脑血流图有明显改善，表现为血管阻力指数减少，流入速度加快，血流容积增加，波形较前好转。证明松针提取物有增加脑血流作用。七、松针提取物的血管扩张作用：

离体灌流的血管环舒张试明，松针提取物对动脉有扩张作用，此作用为内皮依赖性和剂量依赖性。在内皮存在时，松针提取物的血管扩张作用依剂量浓度加大而逐渐增强，最大舒张率达 86.88±12.03% , 去内皮后仅在最高浓度时有轻度扩张作用， (14.23+2.06%). 证明松针的血管扩张作用是通过内皮细胞的舒缩血管物质实现的。见附图 3a-3d 。

实施例 1

松针口服液的制备

取松针 10公斤，加水 80公斤，加热煎煮 1.5小时，取出药液，药液再加水 60公斤，加热煎煮 1小时，取出药液，合并两次药液，过滤，向滤液中加入乙醇，静置 24小时后，去除沉淀，回收乙醇，将药液浓缩至 10公斤，加蒸饱氷稀释至 20公斤，加入少量甜菊甙和防腐剂尼泊金乙酯，分装入瓶，每支 10ml 。

实施例 2

松针胶囊剂的制备

取松针 10公斤，葛根 3.5公斤，加 5倍量水，煎煮 2小时，滤出药液，药渣再加 4 倍量水，煎煮 1.5小时，滤出药液，合并两次药液，加乙醇静置 24小时，去除沉淀，回收乙醇，浓缩药液成浸膏状，烘干制成干浸膏，粉碎成细粉备用。再取珍珠层粉 5公斤，粉碎，过筛制成细粉，与上述制备的药物细粉混合均匀，用全自动胶囊填充机装胶囊， 0.5克 /粒，塑铝包装。

实施例 3：

制法：

取松叶 1800克和葛根 600克，加水煎煮两次，第一次 8倍量水，煎煮 1.5小时，第二次 6倍量氷，煎煮 1.5小时，滤过，合并滤液，经干燥后得粉状物，下面描述本发明的松针与葛根提取物的组合物（下称组合物）的动物试验及临床试验。

八、組合物的血管扩张作用：

离体灌流的血管环舒张试验证明，组合物对动脉有扩张作用，此作用为内皮依赖性和剂量依赖性。在内皮存在时，组合物血管扩张作用依剂量浓度加大而逐渐增强，最大舒张率达 96 % , 见图 4。九、组合物的降压临床试验

1、资料与方法

观察对象：原发性高血压 44例，年龄均为 66岁以下成年人，平均 53±12.7岁，符合 WHO高血压诊断标准。另随机选择原发性高血压 44例，应用卡托普利治疗，为对照组。年龄为 59以下成年人， '平均 47±7.8岁， 2组性别、病程见表 13 , 进入治疗前，均停用其它抗高血压药物 1周。治疗方法：组合物 1.5g，每日 3次，服药 5天，若血压未降至正常范围，每 5天增加一次剂量 (0.5g)。每 5天递增，最大剂量不超过 3g，每日 3次，总疗程为 20天，对照组卡托普利 25mg , 每日 3次，若血压未降至正常范围，亦每 5天增加 1次剂量 (12.5mg), 每 5天递增，最大剂量不超过 75mg，每日 3次，疗程同样为 20 天。

治疗高血压：所有病例治疗前均停用其它降压药 1周，每日测量血压 I 次. 以停用其它降压药 1周后连续 5次 (非同日）血压平均值为治疗前血压。

治疗后血压：开始治疗后每日测血压 1次，用药后第 16 - 20天测 5次 (非同日）血压平均值为治疗后血压，每例均在治疗前及治疗结束即检查血、尿常规、肝肾功能、血钾、钠、氯、血脂、血糖、心电图等。

疗效判定标准：显效：治疗后舒张压下降 >1.33kpa ,并降至正常或下降 2.67kpa以上；有效：治疗后舒张压下降虽未达 1.33kpa , 但已降至正常或下降 1.33 - 2.53kpa。如为收缩期高血压，收缩压下降〉4kpa也属有效；无效：治疗后血压下降未达上述标准，

2、结果

疗效分析：治疗前后血压及下降幅度经比较，见表 14。经自身对照 t检验，组合物组与卡托普利组均有非常显著差异 (PO.01), 2组比较无明显差异 (P>0.05)。 2组治疗后降压疗效对比，亦无显著差异，见表 14 .

治疗前后心电图及血生化变化： 2组 88例治疗前有室性早搏 10例，房性早搏 8例，完全性左束支阻滞 4例，完全性右束支阻滞 7例，左心室肥厚 10例， II、 III、 avF、 V₄ - V₆ST - T缺血样变化 16例，治疗后 V₄ - V₆ST― T缺血样变化好转 12例，房性早搏消失 8例，室性早搏消失 7例，血钾、钠、氯、血糖治疗前后变化不明显。

3、结论

组合物可显著降低原发性高血压与腎性高血压，服药后 30分钟出现降压作用， 2小时达高峰，作用持续时间超过 3小时，降压效果成剂量依赖性，停药 20小时仍可使血压维持在正常范围，同时有降脂作用，尤适用于高血压合并高血脂症患者，用药 44例，无任何副作用，总有效率为 77 % (表 15). 表 13 2组一般状况比较

*P<0.01 (自身对照）组间对照 P<0.05

2组治疗后降压疗效对比

P>0.05(组间对照）下面描述本发明的松针和葛根提取物与珍珠层粉組成的配方的临床试验（以下称配方）

十、配方治疗心肌炎的疗效观察

对象及方法 1、治疗组：按心肌炎诊断标准，选择病毒性心肌炎 1 1例，风湿性心肌炎 5例为治疗组（共 16例）其中男性 9例，女性 7例，年龄 6 - 17例（ 1 1.6±2.8岁），心电图为心肌缺血者 10例，心律失常 9例（表现为心动过速 6例，频发性早搏 4例，心动过緩 2 例）。

2、对照组：病毒性心肌炎 8例，风湿性心肌炎 4例，共 12例，其中男性 5例，女性 7例，年龄 4 ~ 16岁（9.1±2.6岁）。心电图心肌缺血 9例，心律失常 7例（心动过速及频发早搏 5例，心动过緩 2例）。'

3、治疗后的空腹采血，查血沉， GOT , CPK , CPK-MB , 心电图，类风湿因子。

4、治疗组给予配方 1.5g , 每日 3次；对照組采用常规疗法：每日静脉点滴 10 %葡萄糖 500ml , 加维生素 C/3g， ATPMOmg , 辅酶 100u , 每日 1次，肌注辅踏 Q101/日， 30 天为一疗程，两组中的风湿性心肌炎均给予抗风湿常规治疗。

评定标准及统计学处理：

显效：血沉， G0T、 CPC、 CPK - MB、心电图及类风湿因子等均恢复至正常范围.

有效：以上指标较治疗明显恢复，但尚未在正常范围（ ECG心率异常，心律仍有频发早搏，或轻度 ST - T改变。）

无效：以上指标虽有恢复，但仍为明显异常，

采用显著性 T检验。

结果：

治疗后两组疗效比较，见表 16 :

表 16

*P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001

、配方治疗高脂血症的疗效分析无糖尿病、肝肾疾病的高脂血症患者选为观察对象。观察期间停用一切影响脂质代谢药物，保持平日生活饮食习惯。

1、临床资料 110例随机分为治疗組 70例和对照组 40例，治疗組 70例中男性 ⁵0 例，女性 12例，年龄 40 - 67岁，平均年龄 55岁，高血清胆固醇 (TC)血症 41例，高甘油三脂 (TG)血症 55例。对照组 40例中男性 28例，女性 12例，年龄 40 - 66岁，平均年龄 54岁，高 TC、 TG血症各 30例。两组性别、年龄、症状基本相似，具有可比性.

2、分组及治疗方法

2.1 治疗组配方 1.5g , 每日 3次，疗程 1个月。

2.2 对照組月见草油软胶嚢，无锡市第六制药厂，每粒 0.5g , 每次 2粒，每日 3 次，疗程 1个月。

2.3 观察方法全部病例在治疗前和治疗结束均分别观察血、尿常规、肝、肾功能，重点观察血脂、心电图等各项指标变化。

3、结果

3.1 对 TC高血症的疗效：治疗组 41例，显效 20例，有效 16例，无效 5例，总有效率 87.8 %；对照组 30例，显效 4例，有效 8例，无效 18例，总有效率 40 %。两组比较有显著性差异（X²=18.16 P<0.01)。两組治疗前后 TC 的差值比较，治疗组 2.46±0.69mmol/L , 对照组 0.84±0.33mmol/L，治疗组降低 TC 的作用显著优于对照组 (t=11.86 P<0.001)。治疗组 TC治疗前后自身比较， t=22.829 Ρ<0.001 , 说明治疗组降 4氐 TC的疗效确切。

3.2 对高 TG血症的疗效：治疗组 55例，显效 24例，有效 25例，无效 6例，总有效率 89.1 %；对照组 30例，显效 9例，有效 5例，无效 16例，总有效率 46.7 % , 两组比较有显著性差异 (X²=18.04 P<0.01)。两组治疗前后 TG 的差值比较，治疗组 1.57±0.52mmol/L , 对照組 1.01±0.31mmol/L , 治疗组降低 TG 的作用明显优于对照组 (t=5.385 P<0.001)。治疗组 TG治疗前后自身比较， t=22.391 Ρ<0.001 , 说明治疗组降低 TG的疗效确切。

配方在治疗过程中未发现不良反应，治疗前后的血、尿常规，肝肾功能及心电图等进行比较均无明显改变。

4 结论

配方治疗 TC血症、高 TC血症总有效率分别为 87.8 %、 89.1 %。与对照组比较有显著性差异，说明配方对高脂血症的疗效明显优于对照药物，有确切的降低 TC、 TG的作用，与对照药物比较，经统计学处理， P<0.001，说明其降脂作用优于对照药物。替换页 (细则第 26条) 十二、配方治疗心血管病的临床试验

1、对象与方法：

1.1 对象：按 WHO诊断标准选择原发性高血压病、冠心病心绞痛，高脂血症并高粘血症者治疗观察对象，分为三组。

1.1.1 高血压病组： 62例，男 37例，女 25例，年龄 27 - 74岁，平均 52.3±26.5 岁，病史 2.9±3.12年。 I、 II、 III、期各为 18例 (29.0 % )， 40例 (64.5 % )。

1.1.2 心绞痛组： 40例，男 21例，女 19例，年龄 45 - 79岁，平均 59.8±15.2 岁，稳定劳累型和不稳定型心绞痛分别为 26例 (65 % )和14例 (35 % )。

1.1.3 高脂血症高粘血症组： 65例，男 42例，女 18例，年龄 55.3±5.0岁，

1.2 方法：

1.2.1 治疗方法：停用其它降压药，抗心绞痛药或降脂药，服用配方 l~1.5g/次， 3 ^日，疗程 4 ~ 6周，如伴有左室肥厚，可并用怡那林， ·如心绞痛发作，可用硝酸脂类或速效救心丸等，其他常规治疗不变，

2、结果

2.1 高血压病组：治疗前后收缩压 (SBP)、舒张压 (DBP)改变见表 17、表 18。配方降压疗效 (n=62)

替换页 (细则第 26条) 配方对各期高血压的疗效 (n=62)

2.2 心绞痛组：症状疗效心电图疗效与不同类型的心绞痛疗效见表 19 , 表 20 。

2.3 高脂血症并高粘血症组：血脂和血流变学治疗前后改变，见表 21 。表 19 配方治疗心绞痛的症状和心电图疗效 (n=40)

配方对不同类型心绞痛的疗效 (n=40)

显效有效总有效无效

类型例数例数％例数％例数％例数％

稳定劳累型 26 12 46.2 14 53.9 26 100.0

不稳定劳累型 14 8 57.1 4 28.6 12 85.7 2 4.3

合计 40 20 50.0 18 45.0 38 95.0 2 5.0

表 21 配方对血脂血流变学的影响 (n=65)

3、讨论

应用配方治疗高血压病、冠心病、心绞痛、高脂血症并高粘血症者取得了较为满意的临床疗效， SBP、 DBP分别下降 23.4 %、 20.5 % , 总有效率 96.8 %；心绞痛症状和心电图疗效分别为 95 %和 65 %。稳定劳累型和不稳定型心绞痛的有效率分别为 100 %和 85.7 % , CH、 TG , LDL - C分别下降 18.0 %、 27.2 %、 39.2 %，而 HDL - C 却上升了 58.8 % , 红细胞压积，全血和血浆比粘度分别降低 27.1 、 16.6 %和 24.6 % , 各项指标治疗前后对比有明显或非常显著性差异 (P<0.05 或 0.01), 表明配方确有降低血压，降低胆固醇、甘油三脂、低密度脂蛋白胆固醇、红细胞压积、全血和血浆比粘度，升高高密度脂蛋白胆固醇，保护心脏，緩解心绞痛等疗效。

Claims

权利要求书

1、一种松针提取物，在固态时为浅棕色至深棕色，溶于水，在紫外可见光光谱中的 242nm附近有最大吸收值，

2、治疗疾病用的权利要求 1的松针提取物，该疾病包括高血压、冠心病、心绞痛、心律失常、心肌炎、糖尿病、高脂血症、高粘血症、高聚血症、动脉硬化症、脑梗塞、脑动脉硬化症、老年痴呆症和突发性耳聋.

3、权利要求 2的松针提取物，其中该疾病为高血压、高脂血症、高粘血症、高聚血症、动脉硬化症、脑梗塞、脑动脉硬化症、老年痴呆症和突发性耳聋。

4、权利要求 2的松针提取物，其中该疾病为冠心病、心绞痛、心律失常、心肌炎和糖尿病。

5、权利要求 1的松针提取物在治疗高血压、冠心病、心绞痛、心律失常、心肌炎、糖尿病、高脂血症、高粘血症、高聚血症、动脉硬化症、脑梗塞、脑动脉硬化症、老年痴呆症和突发性耳聋疾病中的应用，

6、一种治疗疾病的方法，包括给病人用治疗有效量的松针组合物，

7、一种药物組合物，包括有效量的一种松针提取物和药物学上可接受的载体或赋形剂.

8、权利要求 7的药物组合物，还包括一种葛根提取物，其中松针与葛根的比例为 3： 1 ~ 5： 2。

9、权利要求 7或 8的药物组合物，还包括珍珠层粉，其中松针与珍珠层粉的比例为

20： 1 - 2： 1 .

10、一种治疗疾病的方法，包括给病人服用治疗有效量的权利要求 6的组合物，