WO1997012522A1 - Procedimiento para la obtencion de un rodenticida biologico - Google Patents

Procedimiento para la obtencion de un rodenticida biologico Download PDF

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WO1997012522A1
WO1997012522A1 PCT/CU1996/000001 CU9600001W WO9712522A1 WO 1997012522 A1 WO1997012522 A1 WO 1997012522A1 CU 9600001 W CU9600001 W CU 9600001W WO 9712522 A1 WO9712522 A1 WO 9712522A1
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bait
composition
fermentation
salmonella enteritidis
inoculum
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PCT/CU1996/000001
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Arsenio Justino Aleman Agusti
Emilio Fustes Milian
José Antonio FRAGA CASTRO
Reynaldo Espino Llerena
Juan Gualberto Bornote Romero
Osvaldo Montes De Oca Sigler
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Laboratorios Biologicos Farmaceuticos (Labiofam)
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
    • A01N25/002—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests containing a foodstuff as carrier or diluent, i.e. baits
    • A01N25/004—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests containing a foodstuff as carrier or diluent, i.e. baits rodenticidal
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/42—Salmonella

Definitions

  • the present invention relates to the field of Biocides and in particular to a process for obtaining on an industrial scale a rodenticide substance of microbiological origin, which is useful for the control of harmful rodents, as well as with the substance obtained from of said procedure.
  • a rodenticide substance of microbiological origin which is useful for the control of harmful rodents, as well as with the substance obtained from of said procedure.
  • Prior Art Harmful rodents cause large economic losses throughout the world. Not only do they destroy crops, food and industrial reserves, but they are also carriers of infectious diseases.
  • Chemical methods are based on the use of baits that contain different types of poisons. Some of these products have an acute action (eg zinc phosphide, 1080 sodium monofluoroacetate), and cause death immediately after ingestion, however they are very toxic to non-white species, due to the high concentrations of non-toxic poisons. selective that are necessary to use.
  • an acute action eg zinc phosphide, 1080 sodium monofluoroacetate
  • the bacterial preparation obtained on cereal grains is a bacterial culture of strains that cause typhus in rodents, which are grown on different cereals including wheat, barley, rice, oats or rye. This fermentation on solid medium allows greater performance in the growth of the microorganism than that which was achieved using liquid culture media.
  • This procedure allows to obtain a high titer of the pathogenic bacteria used, so that the high effectiveness of the finished product is guaranteed as well as the reduction of the time necessary for its preparation.
  • Another object of this application is the rodenticide composition obtained by this procedure, which presents high pathogenicity and virulence against murides, causing lethal epozooties.
  • the present invention consists in obtaining a preparation with biocidal activity, which is constituted by three fundamental components: 1. Salmonella enteritidis strain.
  • Substrate for fermentation consisting of husk rice. These three elements that constitute the preparation are integrated into it through two confluent operations: a. Preparation of the sterile rice base substrate containing the enhancer substance and with adjusted pH. b. Obtaining Salmonella enteritidis inoculum and planting in a
  • the process begins with the selection and washing of the rice that will be used as a substrate.
  • a first step the separation of the impurities contained in the selected rice is carried out.
  • Rice with a moisture content of 13% is first washed with hot water at 80 ° C for a period of approximately 20 minutes, and the wash water is drained.
  • said substrate is subjected to a sterilization process at 121 ° C and a pressure of 1.2 bar and for a period of time between 35 and 45 minutes.
  • the substrate is then cooled and dried until it reaches a moisture content between 20 and 30% and a temperature of 37 ° C and then mixed with a mixed solution containing 0.9% sodium hydroxide and warfarin (3- ⁇ -acetonylbenzyl-4-hydroxy coumarin) sodium salt at 0.1%, which is used as an enhancer of the lethal action of the preparation, which is added with agitation for 15 minutes.
  • a mixed solution containing 0.9% sodium hydroxide and warfarin (3- ⁇ -acetonylbenzyl-4-hydroxy coumarin) sodium salt at 0.1%, which is used as an enhancer of the lethal action of the preparation, which is added with agitation for 15 minutes.
  • a mixed solution containing 0.9% sodium hydroxide and warfarin (3- ⁇ -acetonylbenzyl-4-hydroxy coumarin) sodium salt at 0.1%, which is used as an enhancer of the lethal action of the preparation, which is added with agitation for 15 minutes.
  • an adjustment of the pH of the mixture is made,
  • Inoculation of the substrate thus obtained is then obtained with a strain of Salmonella enteritidis enteric subspecies subgroup 1, group D, which is deposited in available collections relating to these microorganisms.
  • This inoculum is carried out in such a way that the final concentration of the microorganism in the mixture that is initially 10 8 Colony Forming Units (CFU) per mL, and after a brief fermentation period of 4 hours in solid state, is at the rate of 10 9 CFU Units per mL.
  • a preculture of the microorganism is started, which is transferred to a 100 L fermenter containing nutrient broth in a proportion of 1 to 1.5% of the volume to be fermented and adjusting the fermentation conditions at a temperature of 37 ° C, a pH between 7.4 and 7.6, stirring between 400 and 600 rpm and aeration between 0.1 and 1.0 vvm
  • the fermentation time varies between 3 and 5 hours and in the end an inoculum is obtained with titre between 1 and 2 x 10 10 colony forming units (UFC).
  • the aforementioned product results in a rodenticidal composition that contains cereal grains which are used as bait (among which wheat, rice, rye, oatmeal, rnillo, etc), also contains a substance used as an enhancer consisting of a solution mixed sodium hydroxide with 3- ⁇ -acetonylbenzyl-4- hydroxycoumarin and an inoculum of a strain of Salmonella enteritidis enteric subspecies subgroup 1 group D with a final titer between 10 6 and 10 9 CFU
  • the material thus obtained is subsequently packed and stored.
  • the biological tests of the finished product showed 100% mortality, with an average of 4-to-12 day-deaths for the family of murids, thus showing a significant increase in its biological properties in terms of effectiveness, which is given mainly due to the virulence and pathogenicity of the resulting product.
  • This product has as its main characteristics its high effectiveness, as well as its stability for one year when it is frozen, for 6 months if stored between 5 and 15 ° C, and for 30 days if it is kept at room temperature.
  • the invention relates to an industrially scalable process for obtaining a rodenticidal composition, in which operations and parameters suitable for obtaining batches of the product with an appropriate quality and stability have been defined, it can be machined using known facilities. from the state of the art that allow the optimization of said scaling at the industrial level.
  • EXAMPLE 2 MECHANIZATION OF THE RODENTICLDA COMPOSITION PREPARATION PROCESS. Rice that is used as bait and substrate for the growth of the pathogenic microorganism can be supplied in bulk or clean and contained in sacks.
  • the rice If the rice is supplied clean and in bags, they are transported by wheelbarrows to the loading elevator that take them directly to the receiving hoppers where they will also arrive in the case of bulk feeding from the silos by means of endless elevators and conveyors.
  • the dosing hoppers with a capacity of 650 kg of rice control and guarantee the weight of the rice dough needed for the process every 1 and 5 hours alternately per batch.
  • Rice with a 13% moisture content is discharged from the dosing hoppers to a container where all the processing of the different components that make up the rodenticide composition will occur.
  • Demineralized water is then injected and heated at 80 ° C to cover the entire volume of the rice for a time of 35 minutes. Simultaneously with the hot water injection, a mixing mechanism is activated.
  • a vacuum is applied again for 5 minutes and 225 L of hot water are injected at 80 ° C. During this time the mixer mechanism remains in operation. Simultaneously steam is injected with pressure regulated at 1.2 bar and temperature of 121 ° C, directly into the chamber of said container. When these parameters are reached inside the container, a sterilization process occurs during a space between 45 minutes.
  • the rice is cooled and dried until humidity conditions are reached between 27 and 28% and a temperature of 37 ° C.
  • a mixed solution containing 0.9% Sodium Hydroxide and 0.1% Warfarin Sodium Salt is then injected into the vessel. Once injected the 282 L of said mixed solution, this operation is maintained by 60 minute space. The cooling process of the rice dough using mixed solution is continued until a temperature of 37 ° C is reached. Subsequently, a pH adjustment of the mixture is carried out to a value between 7.4 and 8. Next, 141 L of the diluted inoculum is injected which is mixed with the rice mass previously treated with the mixed solution, until homogenization of the final mixture at the end of which step the product is sampled for quality analysis.
  • the product contained in the container is taken to the hopper of the filling machine.
  • the complete cycle described above must be completed within a period of 6 hours allowing the obtaining of 1125 kg of the rodenticide composition.

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Abstract

La presente invención se relaciona con el campo de los Biocidas y en particular con un proceso para la obtención a escala industrial de una sustancia rodenticida de origen microbiológico. El proceso propuesto en la presente invención se basa en la estandarización de la obtención del substrato que se emplea, así como del proceso de su fermentación empleando una cepa de Salmonella enteritidis, la cual se utiliza como sustancia biocida en la lucha contra los roedores. Adicionalmente se emplea un compuesto anticuagulante que potencializa el efecto letal de dicho microorganismo.

Description

PROCEDIMIENTO PARA LA OBTENCIÓN DE UN RODENTICIDA
BIOLÓGICO.
Sector Técnico
La presente invención se relaciona con el campo de los Biocidas y en particular con un proceso para la obtención a escala industrial de una sustancia rodenticida de origen microbiológico, la cual es útil para el control de roedores dañinos, así como con la sustancia obtenida a partir de dicho procedimiento . Técnica Anterior Los roedores dañinos causan grandes pérdidas económicas en todas partes del mundo. No solamente destruyen las cosechas, los alimentos y las reservas industriales, sino que también son portadores de enfermedades infecciosas.
Por consiguiente la lucha contra estos animales resulta en un considerable beneficio económico, así como es de importancia en la profilaxis de las enfermedades que ellos transmiten.
Existen diferentes métodos para el control de los roedores pero los más usuales son los métodos mecánicos, químicos, biológicos y dentro de estos últimos se incluyen los microbiológicos.
Los métodos mecánicos basados en trampas, cebos, etc., se utilizan con éxito en áreas pequeñas, sin embargo, resultan poco eficaces en áreas de mayores dimensiones.
Los métodos químicos se basan en el empleo de cebos que contienen diferentes tipos de venenos. Algunos de estos productos tienen una acción aguda (Ej. Fosfuro de zinc, monofluoracetato de sodio 1080), y causan la muerte inmediatamente después de la ingestión, sin embargo son muy tóxicos para las especies no blanco, debido a las elevadas concentraciones de venenos no selectivos que son necesarias emplear.
Dentro de los métodos químicos se emplean las sustancias anticuagulantes.
La primera generación de estas sustancias apareció en la década del 50, y entre las más empleadas se encuentran la 3-α-acetorιilbencü-4-hidroxicumarina
(warfarina), el coumatetralyl, la clorofacetona y la defacinona. Empleando estos compuestos la muerte de los roedores sobreviene entre los 5 y 7 días después de la ingestión, por lo que no existe rechazo o reacción al cebo. Sin embargo, para un control más efectivo, es necesario mantener grandes cantidades de cebo en el área de tratamiento, ya que estas sustancias ejercen su acción sólo después de múltiples dosis y el roedor debe ingerir el cebo durante varios días para llegar a la dosis letal.
A mediados de la década de los 60 comenzó a aparecer el problema de la resistencia a los anticuagulantes tradicionales. Esto trajo como resultado el desarrollo de la segunda generación de anticuagulantes tales como el bromodialone y el bromodifacoume (klerat).
De forma general, los métodos químicos tienen la desventaja de que después de su uso repetido los roedores no ingieren el cebo instintivamente, lo cual disminuye la efectividad del producto. Por otra parte, estos productos son peligrosos para el hombre, los animales domésticos y la fauna útil. Los métodos biológicos se basan en el empleo de enemigos naturales de los roedores para el control de su población. Por lo general se basan en la contaminación artificial de los roedores con microbios que producen enfermedades infecciosas en los mismos, casusándoles epizootias letales. En estos métodos un organismo específico se utiliza para cada especie animal. Para la obtención de cepas monopatogénicas contra los múridos, se han empleado diferentes medios de cultivo entre los que se encuentran caldo de peptona de carne, levadura de pan y cerveza, leche, chícharo, sangre, sueros hidrolíticos (hidrolizado de harina de carne e hidrolizado de caldo de levadura), los cuales se usan para el crecimiento de la semilla del microbio que después se empleará en la producción del cultivo principal para obtener preparaciones de granos.
El preparado bacteriano obtenido sobre granos de cereal es un cultivo bacteriano de cepas que causan tifus en los roedores, las cuales son crecidas sobre diferentes cereales entre los que se encuentran trigo, cebada, arroz, avena o centeno. Esta fermentación sobre medio sólido permiten un mayor rendirniento en el crecimiento del microorganismo que aquel que se lograba empleando medios de cultivo líquidos.
Divulgación de la Invención
Es objeto de la presente invención proporcionar un procedimiento para la elaboración de un rodenticida microbiológico altamente efectivo, para ser usado en la lucha contra los roedores dañinos. Este procedimiento permite obtener un elevado título de la bacteria patógena empleada, por lo que se garantiza la elevada efectividad del producto terminado así como la disminución del tiempo necesario para su elaboración. Otro objeto de esta solicitud lo constituye la composición rodenticida obtenida por este procedimiento, la cual presenta elevada patogenicidad y virulencia contra los múridos, causándoles epozootias letales.
La presente invención consiste en obtener un preparado con actividad biocida, el cual está constituido por tres componentes fundamentales: 1. Cepa de Salmonella enteritidis.
2. Solución potenciadora
3. Substrato para la fermentación constituido por arroz con cascara. Estos tres elemento que constituyen el preparado se integran en el mismo mediante dos operaciones confluyentes: a. Preparación del substrato base de arroz estéril conteniendo la sustancia potenciadora y con pH ajustado. b. Obtención del inoculo de Salmonella enteritidis y su siembra en a
De forma general el proceso comienza con la selección y lavado del arroz que va a ser empleado como substrato. En un primer paso se lleva a cabo la separación de las impurezas contenidas en el arroz seleccionado. El arroz con un contenido de humedad de un 13%, primeramente es lavado con agua caliente a 80°C durante un período aproximadamente de 20 minutos, y el agua de los lavados es drenada. Posteriormente dicho substrato es sometido a un proceso de esterilización a 121°C y una presión de 1,2 bar y por un período de tiempo entre 35 y 45 minutos. A continuación el substrato es enfriado y secado hasta que alcance un contenido de humedad entre 20 y 30% y una temperatura de 37°C y entonces mezclado con una solución mixta que contiene hidróxido de sodio al 0,9% y sal sódica de warfarina (3-α-acetonilbencil-4-hidroxi cumarina) al 0,1% , la cual es empleada como potenciadora de la acción letal del preparado, la cual se adiciona con agitación durante 15 rninutos. En este momento se realiza un ajuste del pH de la mezcla el cual debe estar entre 7,4 y 8.
A continuación se produce la inoculación del substrato así obtenido con una cepa de Salmonella enteritidis subespecie entérica subgrupo 1, grupo D, la cual se encuentra depositada en colecciones disponibles relativas a estos microorganismos. Este inoculo se realiza de forma tal, que la concentración final del microorganismo en la mezcla que inicialmente es 108 Unidades Formadoras de Colonias (UFC) por mL, y después de un breve período fermentativo de 4 horas en estado sólido, queda a razón de 109 Unidades UFC por mL. Para la obtención del inoculo del paso anterior, se parte de un precultivo del microorganismo, el cual es transferido a un fermentador de 100 L conteniendo caldo nutriente en una proporción de 1 a 1,5 % del volumen a fermentar y ajustando las condiciones de fermentación a una temperatura de 37°C, un pH entre 7.4 y 7.6, agitación entre 400 y 600 r.p.m. y aereación entre 0.1 y 1.0 v.v.m. El tiempo de fermentación varía entre 3 y 5 horas y al final se obtiene un inoculo con título entre 1 y 2 x 1010 unidades formadoras de colonias (U.F.C.).
Finalmente se obtiene un lote de un producto rodenticida listo para envasar, embalar y almacenar, la cual se realiza a una temperatura entre 5 y 9°C, manteniéndose en estas condiciones la estabilidad del producto obtenido durante un período de tiempo prolongado.
El producto anteriormente mencionado resulta en una composición rodenticida que contiene granos de cereal los cuales son empleados como cebo (entre los cuales pueden encontrarse trigo, arroz, centeno, avena, rnillo, etc), contiene además una sustancia empleada como potenciadora constituida por una solución mixta de hidróxido de sodio con 3-α-acetonilbencil-4- hidroxicumarina y un inoculo de una cepa de Salmonella enteritidis subespecie entérica subgrupo 1 grupo D con un título final entre 106 y 109 U.F.C.
El material así obtenido posteriormente es empacado y almacenado.
Las pruebas biológicas del producto terminado arrojaron un 100% de mortalidad, con un promedio de días-muertes de 4 a 12 días para la familia de los múridos, mostrando así un significativo incremento de sus propiedades biológicas en cuanto a efectividad, lo cual está dado fundamentalmente por la virulencia y patogenicidad del producto resultante.
Dicho producto presenta como características principales su elevada efectividad, así como su estabilidad durante un año cuando es congelado, durante 6 meses si se almacena entre 5 y 15°C, y durante 30 días si se mantiene a temperatura ambiente.
Como la invención se refire a un proceso escalable a nivel industrial para la obtención de una composición rodenticida, en el cual se han definido operaciones y parámetros adecuados para obtener lotes del producto con una calidad y estabilidad apropiadas, el mismo puede ser mecanizado empleando instalaciones conocidas a partir del estado del arte que permitan la optimización de dicho escalado a nivel industrial.
EJEMPLOS DE REALIZACIÓN: EJEMPLO 1 : OBTENCIÓN DEL INOCULO.
A un medio líquido enriquecido se le añade una microgota de un cultivo liofilizado de de una cepa de Salmonella enteritidis subespecie entérica subgrupo
1 grupo D, el cual se incuba durante 4 horas a 37°C en una zaranda a 180 r.p.m. A partir de esta incubación se obtiene un precultivo con un título de 1010 U.F.C. , el cual posteriormente es transferido a un fermentador conteniendo el medio líquido de caldo nutriente cuya composición es:
Peptona bacteriológica - 5,0 g/L Extracto Nutritivo - 1,0 g/L
Extracto de Levadura - 2,0 g/L Elna - 5,0 g/L
EJEMPLO 2: MECANIZACIÓN DEL PROCESO DE PREPARACIÓN DE LA COMPOSICIÓN RODENTICLDA. El arroz que se utiliza como cebo y substrato para el crecimiento del microorganismo patógeno puede suministrarse a granel o limpio y contenido en sacos.
Una vez separadas las impurezas del arroz, éste se traslada hacia los tanques del almacenamiento de arroz limpio, cada uno con una capacidad de 17 Tm.
Si el arroz se suministra limpio y en sacos, éstos se trasladan mediante carretillas hacia el elevador de carga que los llevan directamente hacia las tolvas receptoras a donde llegará también en el caso de alimentación a granel procedente de los silos mediante los elevadores y transportadores sinfín. Las tolvas dosificadoras con capacidad de 650 Kg de arroz controlan y garantizan el peso de la masa de arroz necesario para el proceso cada 1 y 5 horas alternativamente por lote.
El arroz con un contenido de 13% de humedad se descarga de las tolvas dosificadoras a un recipiente donde ocurrirá todo el procesamiento de los diferentes componentes que conforman la composición rodenticida.
Seguidamente se inyecta agua desmineralizada y calienta a 80°C hasta cubrir todo el volumen del arroz por un tiempo de 35 minutos. Simultáneamente con la inyección de agua caliente se acciona un mecanismo de mezclado.
La acción de este mecanismo permite el lavado del arroz durante 20 minutos. Posteriormente se drena el agua del lavado.
Se aplica un vacío nuevamente por 5 minutos y se inyectan 225 L de agua caliente a 80°C. Durante este tiempo el mecanismo del mezclador se mantiene en operación. Simultáneamente se inyecta vapor con presión regulada a 1,2 bar y temperatura de 121°C, directamente a la cámara de dicho recipiente. Cuando en el interior del recipiente se alcanzan estos parámetros, se produce un proceso de esterilización durante un espacio entre 45 minutos.
Posteriormente el arroz se enfría y seca hasta alcanzarse condiciones de humedad entre 27 y 28% y temperatura de 37°C.
A continuación en el recipiente se inyecta una solución mixta que contiene Hidróxido de Sodio al 0,9% y Sal Sódica de Warfarina al 0,1%. Una vez inyectados los 282 L de dicha solución mixta, esta operación se mantiene por espacio de 60 minutos. El proceso de enfriamiento de la masa de arroz empleando solución mixta se continúa hasta alcanzarse una temperatura de 37°C. Posteriormente se procede a realizar un ajuste de pH de la mezcla hasta un valor entre 7,4 y 8. A continuación se procede a la inyección 141 L del inoculo diluido el cual es mezclado con la masa de arroz previamente tratada con la solución mixta, hasta la homogenización de la mezcla final a final de cuyo paso se muestrea el producto para análisis de calidad.
Posteriormente el producto contenido en el recipiente se lleva a la tolva de la máquina llenadora. El ciclo completo anteriormente descrito debe cumplirse en un período de 6 horas permitiendo la obtención de 1125 Kg de la composición rodenticida.

Claims

REIVINDICACIONES
i. Procedimiento para la obtención de una composicón rodenticida microbiológica que emplea como cebo granos de cereales y como principios activos un microorganismo monopatogénico y un anticuagulante caracterizado porque un inoculo de elevada concentración es obtenido por fermentación en medio líquido nutritivo de la cepa Salmonella enteritidis subespecie entérica subgrupo 1 grupo D, el cual posteriormente es empleado para inocular el cebo previamente mezclado con una solución mixta constituida por hidróxido de sodio y sal sódica de warfarina (3-α- acetonilbencil-4-hidroxicumarina) la cual actúa como sustancia potenciadora en dicha composición.
2. Procedimiento según la reivindicación 1 caracterizado porque el inoculo de alta concentración se obtiene por fermentación a 37°C, a un pH entre 7.4 y 7.6, con agitación entre 400 y 600 r.p.m. y aereación entre 0.1 y 1,0 v.v.my durante 3 y 5 horas de la cepa de Salmonella enteritidis subespecie estérica subgrupo 1 grupo D, empleando para ello un medio líquido nutritivo.
3. Procedimiento según la reivindicación 1 caracterizado porque el arroz previamente seleccionado y lavado con agua caliente y con un contenido de humedad de un 13% es sometido a un proceso de esterilización a 121°C y una presión de 1,2 bar entre 35 a 45 minutos y luego de enfriado y secado hasta lograrse un contenido de humedad entre 20 y 30% y una temperatura de 37°C es mezclado con una solución mixta que contiene hidróxido de sodio al 0,9% y sal sódica de warfarina (3-α-acetonilbencil-4-hidroxicurnarina) al 0,1%, la cual se adiciona con agitación durante 15 minutos.
4. Procedimiento según la reivindicación 3 caracterizado porque la mezcla posteriormente enfriada y secada nuevamente hasta alcanzar entre 20 y 25% de humedad y temperatura cercana a 37°C su pH es ajustado entre 7 y 8. 97/12522 PC17CU96/00001
5. Procedimiento según la reivindicación 4 caracterizado porque la inoculación del substrato se realiza de forma tal, que la concentración final del microorganismo en la mezcla que inicialmente es 108 UFC/mL luego de un breve período fermentativo de 4 horas en estado sólido, queda a razón de 109 Unidades UFC por mL.
6. Composición rodenticida obtenida a partir del procedimiento de las reivindicaciones anteriores caracterizada porque comprende aproximadamente un 62,5% de un cereal con un contenido de humedad entre 50 y 56% el cual es empleado como cebo, alrededor de un 12,5% de un inoculo de Salmonella enteritidis subespecie estérica subgrupo 1 grupo D diluido hasta obtenerse entre 109 U.F.C. en la composición final y aproximadamente un 25% de la solución mixta conteniendo una sal sódica de warfarina como agente potenciador.
PCT/CU1996/000001 1995-10-04 1996-10-04 Procedimiento para la obtencion de un rodenticida biologico WO1997012522A1 (es)

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