MXPA97004113A - Procedimiento para la obtencion de un rodenticidabiologico - Google Patents

Abstract

La presente invención se relaciona con el campo de los biocidas con un procedimiento para la obtención a escala industrial de una substancia rodenticida de origen microbiológico;el procedimiento propuesto en la presente invención se basa en la estandarización de la obtención del substrato que se emplea, asícomo el procedimiento de fermentación una cepa de Salmonella enteritidis, la cual se utiliza como substancia biocida en la lucha contra los roedores;adicionalmente se emplea un compuesto anticuagualante que potencializa el efecto letal de dicho microorganismo.

Description

PROCEDIMIENTO PQRfí Lfl OBTENCIÓN DE UN RODENTICIDñ BIOLÓGICO CñriPO TÉCNICO La presente invención se relaciona con ol rarnpo ¡Je los biocidas y en particular con un procedimiento para la obtención a escala industrial de una substancia rodent i ci da de origen imcrobiolog co, la cual os util dr «¿1 co trol de rocadores dañinos, asi corno con la substancia obtenida a par-t ir de dicho procedimi nto.

TÉCNICO ANTERIOR Los roedores dañinos causan grandes perdidas econ micas en todas partes del mundo. No solamente destruyen las cosechas, los alimentos y las reservas industriales, sino que también son portadores de enfermedades infecciosas. Por consiguiente la lucha contra estos animales resulta en un considerable beneficio económico, así corno os de importancia en la profilaxis de las enfermedades que ellos transini en. Existen diferentes métodos para el control de los roedores pero los más usuales son los métodos mecánicos, químicos, biológicos y dentro de es* os últimos se incluyen los rrucrobiológicos.

Los métodos basados en -trampas, cebos, etc., se u+iluan con éxito n reas pequeñas; sin embargo, resultan poco eficaces en reas de mayores dimensiones. Los métodos químicos se basan en el empleo de cebos que contienen diferentes tipos de venenos. Algunos de estos productos tienen una acción aguda (ej. fosfuro de zinc, inonotluoracetato de sodio 1080), y causan la muerte inme iatamente después de la ingestión; sin embargo, son muy tóxicos para las especies no blanco, debido a las elevadas concen raciones de venónos no selectivos que son necesarias empl ar. Dentro de los métodos químicos se emplean lae substancias ant cuagul nt es. La primera generación de estas substancias apareció en la década de los 50, y ent e las más empleadas se encuentran la 3-of-acetomlbenc?l~4-h?drox? curnapna (warfarina), el cournatetralil, la clorofacetona y la defacmona. Empleando estos compuestos, la muerte de los roedores sobreviene entre los 5 y 7 días después de la ingesti n, por lo que no existe rechazo o reacción al cebo. Sin embargo, para un control mas efectivo, es necesario mantener grandes cantidades de cebo en el área de tratamiento, ya que estas substancias ejercen su acción solo después de múltiples dosis y el roedor debe ingerir el cebo durante varios días para llegar a la dosis letal . fi mediados de la decada de loe 60 comenzó a aparecer el problema de la resistencia a los anticuagulantes tradicionales. Esto trajo como resultado el desarrollo de la segunda generación de ant i cuagulantes tales corno el brornodialone y el bro odifacoume (Klerat). De forma general, los métodos químicos tienen la desventaja de que, después de su uso repetido, los roedores no ingieren el cebo instintivamente, lo cual disminuye la efectividad del producto. Por otra parte, estos productos son peligrosos para el hombre, los animales domésticos y la fauna ut i i . Loe métodos biológicos se basan en el empleo de enemigos naturales de los roedores para el control de su población. Por lo general, se basan en la contaminación artificial de los roedores con microbios que producen enfermedades infecciosas en los mismos, causándoles epizootias letales. En estos métodos un organismo específico se utiliza para cada especie de animal. Para la obtención de cepas onopatogénicae contra los múridos, se han empleado diferentes medios de cultivo entre los que se encuentran caldo de peptona de carne , levadura de pan y cerveza, leche, chícharo, sangre, sueros hidrolíticos (hidrolizado de harina de carne e hidrolizado de caldo de levadura), los cuales se usan para el crecimiento de la semilla del microbio que después se emplea en la producción del cultivo principal para obtener preparaciones de granos. El preparado bacteriano obtenido sobre granos de cereal es un cultivo bacteriano de cepas que causan tifus en los roedores, Jas cuales son crecícías sobre diferentes cereales entre los quo se encuentran trigo, cebada, arroz, avena o centeno. Esta -fermentación sobre medio solido permiten un mayor rendimiento sobre el crecimiento del microorganismo que aquel que se lograba empleando medios de cultivo líquidos.

DIVULGACIÓN DE LA INVENCIÓN Fs objeto de la presente invención proporcionar un procedimiento para l a elaboración de un rodentic da rni robiológico altamente efectivo, para ser usado en la lucha contra los roedores dañinos. Este procedimiento permite obtener un elevado título de la bacteria patógena empleada, por lo que se garantiza la elevada efectividad del producto terminado asi corno la disminución del tiempo necesario para su elaboración. Otro objeto de esta solicitud lo constituye la composición rodenticida obtenida por este procedimiento, la cual presenta elevada patogénicidad y virulencia contra los múridos, causándoles epozootias letales. La presente invención consiste en obtener un preparado con actividad biocida, ßl cual está constituido por tres componentes fundamentales: 1. - Cepa de Salmonella enteptidis 2.- Solución potenciadora 3.- Substrato para la fermentación constituido por arroz con c scara.

Estos tres elementos que constituyen el preparado se integran en el mismo mediante dos operaciones con fluyentes: a. Preparación del substrato base de arroz estéril conteniendo la substancia potenciadora y con pH ajustado. b. Obtención del inoculo de Salrnonella enteritidis y su siembra en a. De forma general el procedimiento comienza con la selección y lavado del arroz que va ser empleado corno substrato <.n un primer paso <,e lleva a <. abo la separación de las impurezas contenidas en el arroz seleccionado. El arroz con un contenido de humedad de un 13%, primeramente es lavado con agua caliente a 80°C durante un periodo aproximadamente de 20 minutos, y el agua de los lavados es drenada. Posteriormente dicho substrato es sometido a ?n procedimiento de esterilización a 1?1°0 y una presión de 1,2 barias y un periodo de tiempo entre 35 y 45 minutos. A continuación el substrato es enfriado y secado hasta q?e alcance un contenido de humedad entre los 20 y 30% y una temperatura de 37°C y entonces mezclado con una solución mixta que contiene hidróxido de sodio al 0.9% y sal sódica de warfapna (3-ot-acetonilbencii-4-hidrox? curnapna) al 0.1%, la cual es empleada corno potencidora de la acción letal del preparado, la cual se adiciona con agitación durante 15 minutos. En este momento se realiza un ajuste del pH de la mezcla el cual debe estar entre 7.4 y 8. A continuación se produce la inoculación del substrato asi obtenido con una cepa de salinonella onteptidas subespecio entérica subgrupo 1 , grupo D, la cual se encuentra depositada en colecciones disponibles relativas a estos microorganismos. Este inoculo se realiza de forma tal, que la concentraci n final del microorganismo en la mezcla que inicialrnente ee 108 Unidades Formadoras de Colonias ÍUFC) por rnl, y después de un breve periodo fermentativo de 4 horas en estado solido, queda a razón de 10^ Unidades UFC por rnl. Par'a l . obtenci n del inoculo «Jel paso ant rior, se parte de un precultivo del microorganismo, el cual es transferido a un fermentador de 100 L conteniendo caldo nutriente en una proporción de 1 a 15% del volumen a fermentar y ajustando las condiciones de fermentación a una temperatura de 37°C, un pH entre 7.4 y 7.6, agitación entre 400 y 600 r.p.m. y aereacion entre 0.1 y 1.0 v.v. . El tiempo de fermentación varía entre 3 y 5 horas y al final se obtiene un inoculo con título entre 1 y 2 x 101° unidades forrna«1oras de colonias (UFC) . Finalmente se obtiene ?n lote de un producto rodenticida listo para envasar, embalar y almacenar, lo cual se realiza a una temperatura entre 5 y 9°C, manteniéndose en estas condiciones la estabilidad del producto obtenido durante un periodo prolongado. El producto anteriormente mencionado resulta en una composición rodenticida que contiene granos de cereal los cuales son empleados como cebo (entre los cuales puede encontrarse trigo, arroz, centeno, avena, mijo, etc). contiene ademas una substancia empleada corno potenciadora constituida por una solución mixta de hidroxido de sodio con 3-or-acetonil benci 1 -4-h? droxicurnapna y ?n inoculo de una cepa de Salmonella enteritidis subespecie ent rica s?bgr?po 1 grupo D con un título final entre 10* y 109 u.F.C. El material asi obtenido posteriormente es empacado y almacenado. Las pruebas biológicas del producto terminado arrojan un 100% de mortalidad, con un promedio de días-muertes de 4 a 12 días para la familia de los múridos, mostrando así un significativo incremento de sus propiedadee biológicas en cuanto a efectividad, lo cual está dando fundamentalmente por la virulencia y patogé icidad del producto resultante. Dicho producto presenta como características principales su elevada efectividad, asi co o se estabilidad durante un año cuando es congelado, durante 6 meses si se almacena entre 5 y 15°C, y durante 30 días si se mantiene a temperatura ambiente. Como la invención se refiere a ?n procedimiento escalable a nivel industrial para la obtención de una composición roden cida, en el cual se han «jefinido operaciones y parámetros adecuados para obtener lotes «jel producto con una calidad y estabilidad apropiadas, el mismo puede ser mecanizado empleando instalaciones conocidas a partir del estado del arte que permitan la optimización de dicho escalado a nivel i ndust n l .

EJEMPLOS DE REALIZACIÓN: EJEMPLO 1 OBTENCIÓN DEL INOCULO fí un medio litro enriquecido se le añade una microgota de un cultivo liofilizado de una cepa de Salmonella enteptidis subespecie entérica subgrupo 1 grupo D, el cual se cuba durante 4 horas a 37°C en una zaranda a 180 r.m.p .A partir de esta incubación se obtiene un precultivo con un título de 1010 U.F.C., el cual posteriormente es transferido a un fermentador conteniendo el medio líquido de caldo nutriente cuya composición es: Peptona bacteriológica -5,0 g/L Extracto nutritivo -1,0 g/L Extracto de Levadura -2,0 g/L Elna -5,0 g/L EJEMPLO 2 MECANIZACIÓN DEL PROCEDIMIENTO DE PREPARACIÓN DE LA COMPOSICIÓN RODENTICIDA El arroz que se utiliza corno cebo y substrato para el crecimiento del microorganismo patógeno p?e«je suministrarse a granel o limpio y contenido en sacos. Una vez separadas las impurezas del arroz, éste se aslada hacia los tanques del almacenamiento de arroz limpio, cada uno con una capacidad de 17 Tin. Si el arroz se suministra limpio y en sacos, estos se trasladan mediante carre llas hacia el elevador de car-ga que los llevan directamente hacia las tolvas receptoras a donde llegará también en el caso de almacenamiento a granel procedentes de los silos mediante los elevador-es y transporta«Jores sin fin. Las tolvas dosi ficadoras con capacidad de 650 Kg de arroz controlan y garantizan el peso de la masa del arroz necesario para el procedimiento ca«Ja 1 y 5 horas alternativamente por lote. El arroz con un contenido de 13% de humedad se descarga de las tolvas dosificadoras a un recipiente donde ocurrirá todo el procedimiento de los diferentes componentes que conforman la co piosición rodenticida. Seguidamente se inyecta agua desrnineralizada y calienta a 80°C hasta cubrir todo el volumen del arroz por un tiempo de 35 minutos; simultáneamente con la inyección de agua caliente se acciona el mecanismo de mezclado. La acción de este mecanismo permite el lavado del arroz durante 20 minutos. Posteriormente se drena el agua del lavado. Se aplica un vacío nuevamente por 5 minutos y se inyectan 225 L de agua caliente a 80°C. Durante este tiempo el mecanismo del mezclador se mantiene en operación.

Simul áneamente se inyecta vapor con presión regulada a 1.2 barias y temperatura de 121°C, direc mente a la cámara de dicho recipiente. Cuando en el ínter lor del recipiente se alcanzan estos par metros, se produce ?n procedimiento «Je es erilización «Jurante un espacio entre 45 minutos. Posteriormente el arroz se enfria y seca hasta alcanzarse condiciones de humedad entre 27 y 28% y temperatura de °0. A continuaci n en el recipiente se inyecta una solución mixta que contiene Hidroxido de Sodio al 0.9% y Sal Sódica de Uarfapna al 0.1%. Una vez i yectados los 282 L de dicha solución mixta, esta operación se mantiene por espacio de 60 minutos. El procedimiento de enfriamiento «je la masa de arroz empleando solución mixta se continua hasta alcanzar una temperatura de 37°C. Posteriormente se procede a realizar un ajuste de pH de la mezcla hasta un valor entre 7.4 y 8. A continuación se procede a la inyección 141 L del inoculo diluido el cual es mezclado con la masa de arroz previamente tratada con la solución mixta, hasta la hornogemzación de la mezcla final a final de cuyo paso se muestra el producto para análisis de calidad. Posteriormente el producto contenido en el recipiente se lleva a la tolva de la máquina llenadora. El ciclo completo anterior-mente descrito debe cumplirse en un periodo de 6 horas permitiendo la obtención de 1125 Kg de la composición rodenticida.

Claims (6)

IL NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Proce«J?m?ento para la obtención de una composición rodenticida rnicrobiologí ca que emplea como cebo granos de cereales y corno principios activos un rni croor-ganí smo inonopatogenico y un an ic?agulante caracteri ado porque un iiioculo de elevada concent i ación es obtenido por f rrnontací ones en medio liquido nutritivo de la cepa Salmonella enterit idis subespecie entérica subgrupo 1 grupo D, el cual posteriormente es empleado par-a inocular el cebo previamente mezclado con una solución mixta constituida por hidróxido de sodio y sal sódica de warfapna (3-of-acetom 1 benc?l-4-hidrox?curnapna) la cual actúa corno substancia potenciadora en dicha composición.

2.- Procedimiento de conformidad con la reivi ndicación 1, caracterizado ademas porque el inoculo de alta concentración se obtiene por fermentación a 37°C, a un pH entre 7.4 y 7.6, con agitación entre 400 y 600 r.p.rn. y aereación entre 0.1 y 1.0 v.v.rn y durante 3 y 5 horas «Je la cepa de Salmonella enteritidis subespecie este rica subgrupo l grupo D, empleando para ello un medio líquido nutritivo.

3.- Procedimiento de conformidad con la reivindicación 1, caracter zado ademas porque el arroz previamente selec-clonado y lavado con agua caliente y con un contenido de humedad de ?n 13% es sometido a un procedimiento de esterilización a 12°C y una presión de 1,2 bar entre 35 y 45 minutos y luego de enfriado y secado hasta lograrse un contenido de humedad entre 20 y 30% y una temperatura de 37°C es mezclado con una solución mixta que contiene hidroxido de sodio al 0.9% y sal sódica de war fariña ( 3-or-aceton? Ibencil -4-hidrox?c?rnai'ina) al 0.1% la cual se adiciona con agitación durante 15 minutos.

4.- Procedimiento «le conformidad con la reivindicación 3, caracterizado además porque ia mezcla postenorrnent e enfriada y secada nuevamente hasta alcanzar entre 20 y 25% de humedad y temperatura cercana a 37°C s? pH es ajustado entre 7 y 8.

5.- Procedi iento de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado además porque la inoculación del substr-ato se realiza «je forma tal que la concentración final del microorganismo en la mezcla que inicialmente es 108 UFC/rnL luego de un breve periodo fermentativo de 4 horas en estado sólido, queda a razón de 109 Un?«a«Jes UFC por inL ..

6.- Composición rodenticida obtenida a partir del procedimiento de las reivindicaciones anteriores caracterizada porque comprende aproximadamente un 62.5% de ?n cereal con un contenido de humedad entre 50 y 56% el cual es empleado como cebo, alr-ededor «je un 12,5% de un inoculo de Salrnonella ententidis subespecie este rica subgrupo 1 grupo D diluido hasta obtenerse entre 109 u.F.C. en la composición final y aproximadamente un 25% de la solución mixta conteniendo una sal sódica de warfarina como agente potenciador.