WO1996025944A1 - Remedes contre la polyarthrite rhumatoide et les affections articulaires inflammatoires - Google Patents

Remedes contre la polyarthrite rhumatoide et les affections articulaires inflammatoires Download PDF

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WO1996025944A1
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degeneration
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Yukio Kato
Masahiro Iwamoto
Tatsuya Koike
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Yukio Kato
Masahiro Iwamoto
Tatsuya Koike
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis

Definitions

  • the present invention relates to a drug that exerts a preventive or therapeutic effect on diseases associated with destruction and degeneration of articular cartilage tissue such as osteoarthritis.
  • Osteoarthritis is the collapse of the bone surface of the joints, resulting in the growth of new bones at the margins of the joints, deformation of the joints, loss of compatibility, and further spread to the inflammation of the synovium of the joints. It goes. These include secondary osteoarthritis, which has a primary disease that causes cartilage degeneration such as trauma or infection, and primary osteoarthritis, where the primary disease cannot be identified. Osteoarthritis is mainly caused by degeneration of the bones of the joints. The main causes are considered to be endogenous degeneration of articular cartilage and mechanical load applied to the joints. Many. There are two main pathologies of osteoarthritis.
  • Cartilage in joint tissue is classified as permanent cartilage and is strictly distinguished from growth bone, which plays an important role in skeletal growth.
  • growth chondrocytes present in epiphyseal plates, etc. proliferate and differentiate and then calcify and replace bone, thereby completing their physiological significance, whereas articular osteocytes usually do not undergo calcification .
  • This is thought to be due to the fact that calcification is strongly suppressed in joint osteocytes environmentally, and that joint ⁇ bone retains elasticity by not calcifying, and the role of cushion against load and the role of joints This is because it guarantees easy mobility.
  • Calcifying cartilage has high alkaline phosphatase activity (Robins on R., Bi
  • An object of the present invention is to provide a preventive agent for a disease associated with destruction and degeneration of articular cartilage tissue such as osteoarthritis, and a therapeutic agent for a causative treatment and aggressive treatment. Disclosure of the invention
  • the present invention relates to an agent for preventing or treating a disease associated with destruction and degeneration of articular cartilage tissue, comprising a PTH-related peptide (PTHrP) or a substance derived from PTHrP as an active ingredient.
  • PTHrP PTH-related peptide
  • the parathyroid hormone-related peptide (PTHrP) in the present invention includes natural PTHrP, PTHrP prepared by genetic engineering, and PTHrP chemically synthesized.
  • Human PTH rp consisting of two amino acids, PTH rp of pigs and the like, and preferably human PTHrP.
  • Ma The PTH rP-derived substance refers to a peptide obtained by substituting, deleting, or adding a partial amino acid of the PTH rP partial peptide, PTH rP itself, or a partial peptide thereof, to achieve the same activity.
  • Means a peptide having Examples of the partial peptides of PTH r P include 1 to 34 PTH rP, 1 to 84 PTHrP, 3 to 141 PT Hrp, 7 to 141 PTHrp, 35 to 141 PTHrp, 85 to 141 PTHrp, and 107 to 141.
  • Human 34 PTHrP Human 1-84PTHrP.
  • 34PTHrP refers to a partial peptide of PTHrP consisting of 34 amino acids from the N-terminal to the 34th amino acid of PTHrP.
  • the number of amino acid residues to be substituted, deleted or added is not particularly limited as long as the activity of the present invention is maintained.
  • the disease associated with destruction and degeneration of articular cartilage tissue includes, for example, osteoarthritis and rheumatoid arthritis, and preferably osteoarthritis.
  • type X collagen and alkaline phosphatase are known to be important expression substances in calcification of ⁇ bone or ⁇ subosseous bone. Suppressing the production of Izeze is effective in improving osteoarthritis. In addition, in osteoarthritis, a decrease in the synthesizing function of articular chondrocytes and the degradation of bone tissue due to matrix degradation are observed.Therefore, as a therapeutic agent for osteoarthritis, proteoglitin, a bone matrix, is used. Agents that promote synthesis rather than inhibit synthesis are preferred. Needless to say, a drug that does not have an unfavorable effect on osteocyte proliferation / differentiation, such as inhibiting chondrocyte proliferation, is preferred.
  • the effects of PTH rP on proliferation, the expression of type X collagen, an important marker of cartilage tissue degeneration, the production of alkaline phosphatase, and subsequent calcification, and the expression of type II collagen, a cartilage matrix, are as follows: Culture of bone marrow cultured from young heron in a centrifuge tube (Ka to Y. eta 1., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85, 9552-9556, 1988, Iwamoto M. eta 1., Develop. Bio 1.136, 500-506, 1989), and a planar culture system of proliferating chondrocytes (Shi momura Y. et al., Calcif. Tissue). Re s
  • the effect of PTH r P on the osteoclast matrix can be confirmed by using the synthesis of proteoglycan, which is the osteoma matrix, as an index.
  • PTH rP acts during substrate synthesis of cultured osteocytes, and the uptake of 35 S-sulfate into the substrate can be confirmed as an index.
  • FIG. 1 is an electrophoretogram showing the presence of the PTH rP receptor present in chondrocytes.
  • FIG. 2 shows the activity of PTH r P to promote the synthesis of proteogliin, a major component of the bone matrix.
  • FIG. 3 is a graph showing the effect of PTH r P on chondrocyte proliferation.
  • FIG. 4 shows the dose response of PTH r P to chondrocyte proliferation.
  • FIG. 5 is a graph showing the increase in ALP activity of osteoclasts over time and the inhibitory effect of PTH rP on it.
  • FIG. 6 is a graph showing the dose-dependent ALP activity inhibitory effect of PTH rP.
  • FIG. 7 is a diagram showing the calcification ability of chondrocytes over time and the inhibitory effect of PTH rP on it.
  • FIG. 8 is a graph showing the dose-dependent calcification inhibitory effect of PTHrP.
  • FIG. 9 is an electrophoresis photograph showing the effect of PTH rP on mRNA expression of type II and type X collagen.
  • a drug expected to have localization and delayed action for example, encapsulation in a microcapsule or inclusion in a gel sheet. Shapes are also possible.
  • a liquid preparation it is preferable to add an appropriate protein or an appropriate anti-adhesion agent.
  • the method of administering the drug of the present invention includes, for example, subcutaneous administration, oral administration, transdermal administration, rectal administration, topical administration, and the like, with local administration being preferred. In particular, local injection into a joint cavity or a lesion by injection is preferred.
  • the dosage of PTH r P of the present invention, the adaptive diseases varies depending on such conditions, example, an organization level 10 20 10 5 M, preferably from 10 15 10 7 M.
  • the PTH rP used in the examples was human 34 PTH r P purchased from Beptide Institute.
  • the proliferating osteocytes were transferred to the costal cartilage bone of a 4-week old heron Sep. 19, 1979, 187-187, 1975) by Shimomura et al. (Shi momu ra Y. eta 1., C a 1 cif. T issue Res. 19).
  • Culture of osteoclasts in the centrifugal canal was performed by the method of Iwamoto et al. (Iwamo to M. eta 1., Dev. Biol. 136, 500—507, 1989) and the method of Kato et al. etal., Endocrinology 127, 114-118, 1990).
  • the isolated chondrocytes were suspended in Eagle's minimum essential medium (MEM) containing 10% fetal bovine serum (FBS) and 50 g / m1 ascorbic acid at a concentration of 8 ⁇ 104 cells / m1. Each 1 ml was seeded into a 15 ml plastic centrifuge tube (Koingen). After centrifugation (1,500 rpm) for 5 minutes, the cells were cultured in a carbon dioxide incubator set at 37 ° C. The medium was replaced every two days after the sixth day of culture. Confirmation of the PTH rP receptor in chondrocytes was performed by SDS gel electrophoresis.
  • MEM Eagle's minimum essential medium
  • FBS fetal bovine serum
  • chondrocytes on the 14th day of culture were homogenized and then incubated with 125 I-labeled PTHrP for 5 hours.
  • the PTH rP bound to the receptor was cross-linked with DSS, solubilized with SDS buffer, and electrophoresed by SDS gel electrophoresis. After electrophoresis, autoradiography was performed by a conventional method.
  • a sample in which an excess amount of PTH rP was added to inhibit the binding of 125 I-PTH rP to the receptor was electrophoresed by SDS gel electrophoresis in the same procedure and subjected to autoradiography.
  • Figure 1 shows the results.
  • the binding between 125 I-PTH rP and the receptor migrated around a molecular weight of about 76 kDa (Fig. 1, left), and the binding was completely blocked by the addition of excess PTH rP (Fig. 1 ⁇ right) This suggests that a PTH rP receptor is present in chondrocytes, and that PTH rP can exert the following various effects via the receptor.
  • the proliferating chondrocytes were isolated in the same manner as in Example 1 by the method of Shimomura et al. (Shi momu ra Y. eta 1., Ca 1 cif. s. 19, 179-187, 1975).
  • the isolated chondrocytes contained 10% fetal calf serum and 50 ⁇ g / m1 ascorbic acid.
  • the suspension was suspended in Mu Eagle's minimum essential medium (MEM), and 5,000 cells were seeded on 96-well culture plates. After the cells became confluent, PTH rP was added, and after 1 hour, 1 Ci of 35 S-sulfuric acid was added per well and cultured for 17 hours.
  • MEM Mu Eagle's minimum essential medium
  • the amount of bone matrix produced in the culture supernatant was determined by the method of Kato et al. (Kato OY. Eta 1., Endo cri no loy, 122. 1991-1997, 1988). That is, the amount of 35 S-sulfuric acid incorporated into proteoglycan was measured.
  • FIG. 2 The result is shown in figure 2.
  • the figure shows the concentration-response curve with 10- 6 M concentration of PTH r P from 10- 1 ().
  • Bone cells were cultured in a centrifuge tube as in Example 1. Were cultured PTHr P 10- 7 by adding 28 days of culture 8 ⁇ . After the culture, the cells were appropriately solubilized and the amount of DNA over time was measured. It was also measured the amount of DNA culture day 21 with the addition of PTH r P from 10- 1 () to 10 7 M.
  • Fig. 3 shows changes in the amount of DNA in osteocytes over time
  • Fig. 4 shows the dose response of PTH rP to the amount of DNA.
  • the amount of DNA in the control group increased over time, indicating that osteoclasts had proliferated well in the centrifuge tube.
  • the addition of PTHrP had no effect on the amount of DNA in osteoblasts. This indicates that PTHrP is not a drug that has any adverse effect on bone cell proliferation.
  • the chondrocytes were cultured in a centrifuge tube as in Example 1.
  • the PTHr p on day culture 8 ⁇ was added to a 10- 7 M, were cultured to Me up to 28 days.
  • a group from which PTH rP was removed was set as the culture 21 and compared with the PTH rP added group.
  • PTH r P from 10- 1G to 10- 7 M was added to confirm the dose-response for alkaline phosphatase activity (AL P activity).
  • ALP activity dose-response for alkaline phosphatase activity
  • FIG. 5 shows the effect of PTH rP on ALP activity over time
  • FIG. 6 shows the dose response of PTH rP to ALP activity on day 21 after addition of PTH rP.
  • the addition of PTH rP suppressed the ALP activity of osteoclasts, and it was clarified that the effect continued during PTH rP action (Fig. 5 ⁇ PTH rP added group).
  • the effect was reversible, and ALP activity was restored to the level of the control group by removing PTH rP from the culture medium at the time of culture 21 (Fig. 5: PTH rP removal group).
  • This effect was concentration-dependent, inhibited by beginning to the A LP activity at a concentration of at least 10- 9 M, inhibited almost completely AL P activity at 10- 8 M (FIG. 6).
  • PTH r P also suppressed subsequent calcification. That, 10- 7 PTH r P of M inhibits 45 C a uptake into ⁇ cells ( Figure 7 ⁇ PTH r P added group), the effect is canceled immediately by removing the PTH r P (Fig. 7 ⁇ PTH rP removal group). Calcification suppressing action of PTH r P is dose-dependent and was completely inhibited calcification of chondrocytes at a concentration of at least 10- 8 M (FIG. 8). These results indicate that PTH rP is effective as a therapeutic agent for osteoarthritis.
  • Isolation of proliferating chondrocytes was carried out in the same manner as in Example 1 by the method of Shimomura et al. (Shi momu ra Y. eta 1., Ca 1 cif. e s. 19, 179–187, 1975).
  • the isolated chondrocytes were suspended in Eagle's minimum essential medium (MEM) containing 10% fetal calf serum and 50 ag / l ascorbic acid and placed in a 3.5 cm Petri dish coated with type I collagen. Individually sown. After 30 days of culture, the last 6 The PTH r P of 1 O-8 and 10- 7 M was allowed to act on the day.
  • MEM Eagle's minimum essential medium
  • RNA was prepared from the cultured cells by the CsTFA method (Small and Sasse, Anal. Biochem., 203, 352-356, 1992), separated by electrophoresis, and then applied to a membrane. Transferred. The transferred membrane was hybridized with a type X collagen and type II collagen 32 P level cDNA probe.
  • Fig. 9 shows the results.
  • the left figure shows the expression of type II collagen mRNA
  • the right figure shows the expression of type X collagen mRNA.
  • PTH r P 10 and 10- 7 M whereas has failed adversely any effect on expression of type II collagen was strongly inhibited the expression of type X collagen mRNA in a dose-dependent manner.
  • PTHrP specifically suppresses the expression of type X collagen, which is strongly involved in calcification.In other words, although PTHrP strongly suppresses bone calcification, it inhibits the production of type II collagen, a matrix component. It means no adverse effects.
  • the drug containing PTH rP of the present invention as an active ingredient is useful for the prevention of diseases associated with rupture and degeneration of articular cartilage tissue such as osteoarthritis, and for the therapeutic and aggressive treatment.

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Description

変形性関節症および炎症性関節疾患治療剤 技術分野
本発明は、 変形性関節症などの関節軟骨組織の破壊および変性を伴つた疾患に 対して予防、 あるいは治療効果を発揮する薬剤に関する。 背景技術
変形性関節症とは関節钦骨表面の崩壊と、 これに伴う関節辺縁の新たな钦骨の 増殖、 関節の変形、 適合性の破綻をきたし、 さらに関節滑膜の炎症へと波及して いくものである。 これには外傷や感染などの軟骨変性をきたす原疾患を有する二 次性関節症と、 原疾患を特定できない一次性関節症がある。 変形性関節症は関節 钦骨の変性を主病変とし、 その主な原因としては、 関節軟骨の内因的変性と関節 にかかる力学的負荷が考えられるが、 その発生機序には不明な点が多い。 変形性 関節症には主に二つの病態が存在する。 一つは軟骨下骨の石灰化亢進による関節 裂隙の狭小化および骨組織の破壊をみるもの （Bo 1 1 e t A. J. , A r t h r i t i s Rhe um. 12, 152— 163, 1969) 、 もう一つは滑 膜性の炎症により軟骨組織の破壊あるいは変性を引き起こす場合 （Hu s k i s s on R. C. e t a 1. , Ann. Rhe um. D i s. 38， 423 - 428, 1979， Camp i on G. V. e t a 1. , S em i n a r s i n Ar t h r i t i s and Rhe uma t i sm 17, 2 ύ 2— 2 45, 1988) である。
炎症性の変形性関節症では、 滑膜組織などから産生された I L— 1などの物質 による钦骨組織の基質成分 （プロテオグリカン） の減少が観察される （Ty 1 e r J. A. , B i o c h em. J. 225, 493— 507, 1985) ばか りではなく、 軟骨細胞によるプロテオグリカン産生も抑制される （Ra t c l i f f e A. B i o c h em. J. 238, 571 - 580. 1986) 。 従つ て、 軟骨基質が減少して （Pe t t i ph e r E. R. e t a 1. , P r o c. Na t l. Ac a d. S c i. USA 83， 8749-8753, 198 6) 、 関節钦骨層が次第に遺失するものと考えられる。
関節組織中の軟骨は永久軟骨に分類され、 骨格成長に重要な役割を果たす成長 钦骨とは厳密に区別される。 すなわち、 骨端板などに存在する成長軟骨細胞は増 殖、 分化した後石灰化し骨と置き換わることでその生理的意義が完遂するのに対 し、 関節钦骨細胞では通常、 石灰化は起こらない。 これは、 関節钦骨細胞では環 境的に石灰化は強く抑制されているものと考えられ、 関節钦骨は石灰化しないこ とで弾性を保持し、 荷重に対するクッションの役割と関節部での易可動性を保証 しているからである。 しかし、 変形性関節症では、 関節軟骨表面の弾性が低下し ていることが知られている （My e r s E. R. e t a 1. , Tr an s. Or t hop. Re s. USA 231. 1986 ) 。 これは軟骨組織における コラーゲン繊維の断裂化によるものとされている （S t o c kwe 1 1 R. A . e t a l. ， J. Ana t. 136. 425— 439, 1982) 。 関節軟 骨における石灰化抑制の機序は明かではないが、 関節软骨細胞を単離し培養する と石灰化が起こるようになる。 おそらく関節钦骨の石灰化を強く抑制しているも のは钦骨細胞を取り巻いている基質中にある可能性が高い。 （Iwamo t o M. e t a 1. , J. B i o l. Ch em. 266， 461— 467, 199 l、 Pa c i f i c i M e t a l. . Exp. Ce l l Re s. 192 , 266-270, 1991) 。
石灰化する钦骨細胞と関節軟骨細胞の相違点は他にもみられる。 石灰化する軟 骨は高いアルカリホスファターゼ活性を有する （Rob i n s on R. ， B i
0 c h em. J . 17. 286— 293, 1923, A 1 i S. Y. . i n "C a r t i l a ge" (B. K. Ha l l, e d) Vo l. 1, pp. 34
3- 378. Ac a d em i c P r e s s, New Yo r k) のに対し、 関 節钦骨組織ではその 1/100の活性を示すにすぎない （I wamo t o M. e t a l. , J. B i o l. Ch em. 266, 461-467, 1991) 。 また、 軟骨基質に含まれる X型のコラーゲンは石灰化軟骨組織中に存在してい る （Cap a s s o 0. e t a l. , Exp. C e l l Re s. 142,
197 - 206. 1982) 力 関節钦骨にはその発現が少ない。 これらのマー カーは钦骨細胞の石灰化と関連していることが示唆されている。 （Ka t o Y . e t a l. , P r o c. Na t l. Ac ad. S c i. USA 85, 95
52-9556, 1988， Kwa n A. P. L. e t a 1. , J. C e l
1 B i o l. 109, 1849-1856. 1989 ) 。 一方、 変形性関節症 において、 関節軟骨細胞のアルカリホスファターゼ活性は正常関節軟骨細胞に比 較して高く （Mokond j imob e E. e t a l. , 39, 759-7
62, 1991) 、 ヒ 卜の関節軟骨組織を用いた研究でもその活性は変形性関節 症の組織が高い活性を示した （E i nho r n T. A. e t a 1. , J . 0 r t h o p. Re s. 3, 160— 169, 1985) 。 同様に、 X型コラーゲ ンの発現も変形性関節症の患者から得られた钦骨組織で高いことが示されている (Hoy 1 a nd J. A. e t a 1. , Bon e Mi ne r. 15, 15 1— 164， 1991) 。 以上の知見より、 変形性関節症における钦骨組織、 あ るいは钦骨下骨の石灰化は関節軟骨細胞の形質の変化、 すなわちアル力リホスフ ァターゼ産生および X型コラーゲンの発現によるものと推定される。
現在、 変形性関節症の治療では、 保存的な療法、 抗炎症剤やヒアルロン酸の投 与、 あるいは外科的な処置など、 対症療法的あるいは消極的な治療法のみが行わ れており、 原因療法と言えるような治療法はまだない。
本発明は、 変形性関節症など関節軟骨組織の破壊および変性を伴う疾患の予防 剤および原因療法的かつ積極的な治療剤を提供しょうとするものである。 発明の開示
すなわち本発明は PTH関連ペプチド （PTHrP) または PTH r P由来物 質を有効成分として含有する、 関節軟骨組織の破壊および変性を伴う疾患の予防 または治療剤に関するものである。
本発明における副甲状腺ホルモン関連ペプチド （PTHr P) とは、 天然型の PTH r P, 遺伝子工学的手法で作成された PTH r P、 化学的に合成された P TH r Pを包含し、 たとえば 141個のアミノ酸より成るヒ ト PTH r pゃゥシ 、 ブタなどの PTH r pなどがあげられ、 好ましくはヒ ト PTHr Pを示す。 ま た PTH r P由来物質とは、 前記の PTH r Pの部分べプチドゃ、 PTH r Pそ のものあるいはその部分ペプチドの構成アミノ酸の一部を置換、 削除、 付加した ぺプチドで同様の活性を有するぺプチドを意味する。 PTH r Pの部分べプチド としては、 たとえば 1一 34 PTH r P、 1一 84PTHrP、 3— 141 PT Hr p、 7 - 141 PTHr p、 35— 141 PTHr p、 85 - 141 PTH r p、 107— 141 PTH r p、 107 - 140 P T H r p、 1一 87PTH r p、 3- 87 PTH r p. 7-87 PTH r p. 1 - 111 PTH r p. 3 - 111 PTH r p. 7-l l l PTHr pなどがあげられ、 好ましくはヒ ト 1一 34 PTH r P. ヒ ト 1— 84 P TH r Pなどがあげられる。 ここで 1一 34 P THr Pとは PTHr Pの N末端から 34番めのァミノ酸までの 34個のァミノ 酸からなる PTH r Pの部分ペプチドを示す。 置換、 削除、 付加するアミノ酸残 基の数は、 本発明の活性を保持していれば特に制限はない。 関節軟骨組織の破壊 および変性を伴う疾患とは、 例えば変形性関節症や関節リウマチなどがあげられ 、 好ましくは変形性関節症があげられる。
前述したように、 X型コラーゲン、 アルカリホスファタ一ゼは钦骨、 あるいは 钦骨下骨の石灰化において重要な発現物質であることが知られており、 この X型 コラーゲンの発現やアル力リホスファタ一ゼの産生を抑制することは、 変形性関 節症の改善に有効である。 さらに変形性関節症においては関節軟骨細胞の基質合 成機能の低下、 基質分解による钦骨組織の変形が認められることから、 変形性関 節症の治療剤としては钦骨基質であるプロテオグリ力ンの合成を阻害することな くむしろ合成を促進する薬剤が好ましい。 また、 軟骨細胞の増殖を阻害するなど 、 钦骨細胞の増殖 ·分化に好ましくない作用を有さない薬剤が好ましいのは言う までもない。
本発明における P T H r Pの関節軟骨組織の破壊および変性を伴う疾患に対す る有効性は次のようにして確認できる。
すなわち、 PTH r Pの増殖に対する作用、 軟骨組織変性の重要なマーカーで ある X型コラーゲンの発現、 アルカリホスファターゼ産生、 それに引き続く石灰 化に対する作用、 および軟骨基質である II型コラーゲンの発現に対する作用は、 若齢ゥサギの增殖钦骨細胞を遠心管内で培養する実験 （Ka t o Y. e t a 1. , P r o c. Na t l. Ac a d. S c i. USA 85， 9552— 95 56, 1988, I w a m o t o M. e t a 1. , De v e l op. B i o 1. 136, 500— 506， 1989 ) 、 および増殖軟骨細胞の平面培養系 （ Sh i momu r a Y. e t a l. , Ca l c i f . T i s s ue Re s
. 19, 179— 187， 1975) により確認できる。 特に、 遠心管内で钦骨 細胞を立体的に培養すると、 軟骨細胞は増殖 ·分化し、 おおよそ 20曰で石灰化 する （Ka t o Y. e t a l. , P r o c. Na t l. S c i. Ac ad.
USA 85. 9552— 9556, 1988) 。 しかも、 同様な培養系で関節 軟骨細胞を培養すると、 高いアルカリホスファターゼ活性の発現と共に石灰化を 行うようになる （Pa c i f i c i M. e t a l. , Exp. C e l l R e s. 192, 266-270, 1991 ) 。 このことは、 これらの培養系が変 形性関節症における関節钦骨細胞の異常な形質発現に対する薬剤の効果の検討に 有用な実験系であることを示している。
また PTH r Pの钦骨細胞の基質に対する作用は、 钦骨基質であるプロテオグ リカンの合成を指標にして確認できる。 この実験系としては、 培養钦骨細胞の基 質合成時に PTH r Pを作用させ、 35S—硫酸の基質への取り込みを指標として 確認できる。
以上の PTH r Pの作用を説明するためには、 軟骨細胞中に PTH r Pの受容 体があることが確認される必要がある。 実際、 PTHの軟骨細胞に対する作用の 発現には、 钦骨細胞中に PTHの受容体の存在が重要であることが示されている (Le e K. , e t a 1. , Endo c r i no l o gy, 134， 441 - 450, 1994) . 図面の簡単な説明
図 1は軟骨細胞中に存在する PTH r Pの受容体の存在を示す電気泳動写真で める。
図 2は PTH r Pの钦骨基質の主成分であるプロテオグリ力ンの合成促進活性 を示す図である。
図 3は PTH r Pの軟骨細胞の増殖に対する作用を示す図である。
図 4は軟骨細胞の増殖に対する PTH r Pの用量反応性を示す図である。 図 5は钦骨細胞の経時的な A L P活性の増加とそれに対する PTH r Pの抑制 効果を示す図である。
図 6は PTH r Pの用量依存的な ALP活性抑制効果を示す図である。
図 7は軟骨細胞の経時的な石灰化能とそれに対する PTH r Pの抑制効果を示 す図である。
図 8は PTH r Pの用量依存的な石灰化抑制効果を示す図である。
図 9は PTH r Pの II型および X型コラーゲンの mRN A発現に対する効果を 示す電気泳動写真である。 発明を実施するための最良の形態
本発明の薬剤の剤形としてはべプチドの通常の製剤方法により製造される注射 剤の他に、 例えばマイクロカプセルへの封入あるいはゲル状のシートに含ませる など局所化および遅効性を期待した剤形も可能である。 液剤の場合には、 適当な 蛋白質を添加したり、 あるいは適当な付着防止剤を添加することが好ましい。 本発明の薬剤の投与方法は、 たとえば皮下投与、 経口投与、 経皮投与、 直腸内 投与、 局所投与などがあげられるが、 局所投与が好ましい。 特に注射による関節 腔内あるいは病変部への局所注入が好ましい。
本発明の PTH r Pの投与量は、 適応疾患、 症状などにより異なるが、 たとえ ば、 組織レベルで 10— 20から 10-5Mであり、 好ましくは 10—15から 10— 7M である。
[実施例]
以下に本発明の実施例を示す。 実施例で用いた PTH r Pはべプチド研究所よ り購入したヒ ト 1一 34 PTH r Pである。
[実施例 1 ]
以下の実施例において増殖钦骨細胞は、 生後 4週齢のゥサギの肋軟骨一骨移行 部より下村らの方法 （S h i momu r a Y. e t a 1. , C a 1 c i f . T i s s u e R e s. 19， 1 79- 187, 1975 ) により分離した。 遠 心管内での钦骨細胞の培養は岩本らの方法 （ I wamo t o M. e t a 1. , D e v. B i o l . 136, 500— 507, 1989 ) および加藤らの方法 (K a t o Y. e t a l . , E n d o c r i n o l o g y 127, 1 1 4 - 1 18, 1990) により行った。 すなわち、 分離した軟骨細胞を 10%の牛 胎児血清 （F B S) および 50 g/m 1のァスコルビン酸を含むイーグルの最 小必須培地 （MEM) に 8 X 104個/ m 1 となるよう懸濁し、 1 m 1ずつ 15 m 1のプラスチック製遠心管 （コ一二ング社製） に播種した。 5分間遠心 （1. 500 r pm) した後、 37°Cに設定した炭酸ガスインキュベータ中で培養した 。 培地の交換は培養 6日め以降、 2日毎に行った。 軟骨細胞中の PTH r P受容 体の確認は、 SDSゲル電気泳動法にて行った。 すなわち、 培養 14日目の軟骨 細胞をホモジナイズした後、 125 Iでラベルした PTH r Pで 5時間ィンキュベ 一トした。 受容体と結合した PTH r Pは DS Sにて架橋した後、 SDS緩衝液 で可溶化して SDSゲル電気泳動法にて泳動した。 泳動後、 常法によりオートラ ジオグラフィーを行った。 対照として過剰量の PTH r Pを添加して125 I化 P TH r Pと受容体との結合を阻害したものを同様の手順で SD Sゲル電気泳動法 にて泳動し、 オートラジオグラフィーを行った。
図 1に結果示す。 125 I化PTH r Pと受容体との結合は、 分子量約 76 kD aの付近に泳動され （図 1 ·左） 、 その結合は過剰量の PTH r Pの添加により 完全に阻止された （図 1 ·右） 。 このことは、 軟骨細胞中に PTH r Pの受容体 が存在し、 PTH r Pはその受容体を介して以下に示す様々な効果を発現できる ことを示唆している。
[実施例 2]
増殖軟骨細胞の分離は実施例 1と同様、 生後 4週齢のゥサギの肋軟骨一骨移行 部より下村らの方法 （S h i momu r a Y. e t a 1. , C a 1 c i f . T i s s u e R e s. 19， 1 79— 187, 1 975 ) により行った。 分離 した軟骨細胞は 10%の牛胎児血清および 50 β g/m 1のァスコルビン酸を含 むイーグルの最小必須培地 （MEM) に懸濁し、 5, 000個づっ 96穴の培養 プレー卜に播種した。 細胞がコンフルェン卜になつてから PTH r Pを添加して 1曰後に 1穴あたり 1 C iの35 S—硫酸を添加して 17時間培養した。 培養液 上清中に産生された钦骨基質の量は加藤らの方法 （Ka t 0 Y. e t a 1. , Endo c r i no l o y, 122. 1991— 1997, 1988) によ り行った。 すなわち、 プロテオグリカン中に取り込まれた35 S—硫酸の量を測定 した。
結果を図 2に示す。 図は PTH r Pの濃度を 10—1()から 10—6Mとした濃度 反応曲線を示している。 PTH r Pは用量依存的にプロテオグリカン中への35 S 一硫酸の取り込みを促進し、 10-6Mでは対照の約 3倍の基質合成能を示した。 このことは、 PTH r Pがプロテオグリカンの産生を促進し、 钦骨細胞の正常な 分化を促進することを示している。
[実施例 3 ]
钦骨細胞の培養は実施例 1と同様、 遠心管内で行った。 培養 8曰めに PTHr Pを 10— 7添加して 28日間培養した。 培養後、 適宜細胞を可溶化して経時的な DNA量を測定した。 また、 PTH r Pを 10—1()から 10— 7Mまで添加して培 養 21日目の DNA量を測定した。
钦骨細胞の経時的な DNA量の変化を図 3に、 また PTH r Pの DNA量に対 する用量反応性を図 4に示した。 対照群の D N A量は経時的に増加して钦骨細胞 が遠心管内で良好に増殖していたことを表していた。 PTHrPを添加しても钦 骨細胞の DN A量には全く影響されなかった。 このことは、 PTHrPが钦骨細 胞の増殖に対してなんら悪影響を与える薬剤ではないことを示している。
[実施例 4]
軟骨細胞の培養は実施例 1と同様、 遠心管内で行った。 培養 8曰めに PTHr pを 10—7Mになるように添加し、 最高 28日めまで培養した。 培養 21曰目に PTH r Pを除去した群を設定し、 PTH r P添加群と比較した。 また、 PTH r Pを 10-1Gから 10-7Mまで添加して、 アルカリホスファターゼ活性 （AL P活性） に対する用量反応性を確認した。 ALP活性の測定は、 钦骨塊を 0. 2 %トリ トン X— 100中にてホモジナイズした後、 12， O O O x gにて 15分 間遠心し、 その上清を B e s s e yらの方法 （B e s s e y O. A. e t a 1. , J. B i o l . C h em. 164， 321 -329, 1946) により測 定した。 また、 石灰化の検討は適当な時期に45 C aを 0. 5 C iずつ添加し、 钦骨細胞への 24時間後の取り込みを測定すること、 および培養 28曰目の C a 量を測定することにより行った。
図 5には PTH r Pの AL P活性に対する経時的な作用を、 図 6には PTH r Pを添加して 21日目の AL P活性に対する PTH r Pの用量反応性を示してい る。 PTH r Pを添加すると、 钦骨細胞の A L P活性が抑制され、 その効果は P TH r P作用させている間継続することが明らかとなった （図 5 · PTH r P添 加群） 。 また、 その効果は可逆的であり、 培養 21曰目に PTH r Pを培養液か ら抜くことで AL P活性は対照群レベルまで回復した （図 5 · PTH r P除去群 ：) 。 この効果は濃度依存的であり、 10—9M以上の濃度で A LP活性を抑制し始 め、 10—8Mでほぼ完全に AL P活性を抑制した （図 6) 。
また、 PTH r Pはそれに引き続く石灰化も抑制した。 すなわち、 10—7Mの PTH r Pは钦骨細胞への45 C aの取り込みを抑制し （図 7 · PTH r P添加群 ) 、 その効果は PTH r Pを除去することで速やかに解除されることが明らかと なった （図 7 · PTH r P除去群） 。 PTH r Pの石灰化抑制作用は用量依存的 であり、 10—8M以上の濃度で軟骨細胞の石灰化を完全に抑制した （図 8) 。 こ れらの結果より、 PTH r Pが変形性関節症の治療薬として有効であることを示 すものである。
[実施例 5 ]
増殖軟骨細胞の分離は実施例 1と同様、 生後 4週齢のゥサギの肋钦骨一骨移行 部より下村らの方法 （S h i momu r a Y. e t a 1. , C a 1 c i f . T i s s u e R e s. 1 9, 1 79— 187， 1975) により行った。 分離 した軟骨細胞は 10%の牛胎児血清および 50 a g/ 1のァスコルビン酸を含 むイーグルの最小必須培地 （MEM) に懸濁し、 I型コラーゲンをコートした 3 . 5 cmのシャーレに 5, 000個づっ播種した。 30日間の培養後、 最後の 6 日間に 1 O—8および 10—7Mの PTH r Pを作用させた。 培養細胞より C s TF A法 (Sma l e and Sa s s e, An a l. B i o c h em. ， 203 , 352-356, 1992) にて RNAを調整し、 電気泳動法にて分離、 その 後メンブレンにトランスファーした。 トランスファーしたメンブレンを X型コラ —ゲンおよび II型コラーゲンの32 Pレベル化 c DN Aプローブにてハイプリダイ ズした。
結果を図 9に示す。 図左は II型コラーゲン mRNAの発現、 図右は X型コラー ゲン mRNA発現を示している。 その結果、 10 および 10-7Mの PTH r P は II型コラーゲンの発現に対し何ら影響を及ぼさなかつたのに対し、 X型コラー ゲン mRNAの発現を用量依存的に強く阻害した。 このことは、 PTHr Pが石 灰化に強く関与している X型コラーゲンの発現を特異的に抑制する、 すなわち钦 骨の石灰化を強く抑制するものの、 基質成分である II型コラーゲンの産生に悪影 響を与えないことを意味している。 産業上の利用の可能性
本発明の PTH r Pを有効成分として含有する薬剤は、 変形性関節症など関節 軟骨組織の破壌および変性を伴う疾患の予防および原因療法的かつ積極的な治療 に有用である。

Claims

請 求 の 範 囲
1. 副甲状腺ホルモン関連ペプチド （PTHrP) または PTHrP由来物質 を有効成分として含有することを特徴とする、 関節軟骨組織の破壊および変性を 伴う疾患の予防用または治療用薬剤。
2. 副甲状腺ホルモン関連ペプチド （PTHr P) を有効成分として含有する ことを特徴とする、 関節軟骨組織の破壊および変性を伴う疾患の予防用または治 療用薬剤。
3. 副甲状腺ホルモン関連ペプチド （PTHrP) 由来物質を有効成分として 含有することを特徴とする、 関節軟骨組織の破壊および変性を伴う疾患の予防用 または治療用薬剤。
4. 副甲状腺ホルモン関連べプチドがヒ ト PTH r Pであることを特徴とする 請求の範囲第 2項記載の薬剤。
5. 関節軟骨組織の破壊および変性を伴う疾患が、 変形性関節症であることを 特徴とする請求の範囲第 1〜 3項のいずれか 1項記載の薬剤。
6. 関節軟骨組織の破壊および変性が、 軟骨および钦骨下骨の石灰化を伴うも のであることを特徴とする請求の範囲第 1〜 3項のいずれか 1項記載の薬剤。
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Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SK40599A3 (en) 1996-09-26 2000-06-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Antibody against human parathormone related peptides
CA2289910A1 (en) 1997-05-15 1998-11-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Therapeutic agent for cachexia
PT1100488E (pt) * 1998-07-28 2003-09-30 Synthes Ag Utilizacao de compostos de creatina para tratamento das celulas e tecidos do osso ou cartilagem
TWI255718B (en) 1999-07-02 2006-06-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Ameliorative agent for low vasopressin concentration
CA2401357A1 (en) * 2000-02-28 2001-09-07 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Tissue degradation inhibitor agent
EP1987842A1 (en) 2000-04-28 2008-11-05 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Cell proliferation inhibitor
US20040067231A1 (en) * 2000-08-16 2004-04-08 Hideki Yoshikawa Agents for ameliorating symtoms caused by joint diseases
US7015195B2 (en) * 2002-01-10 2006-03-21 Osteotrophin, Llc Treatment of bone disorders with skeletal anabolic drugs
US7767221B2 (en) 2004-03-05 2010-08-03 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Multi-phased, biodegradable and osteointegrative composite scaffold for biological fixation of musculoskeletal soft tissue to bone
GB0513777D0 (en) * 2005-07-06 2005-08-10 Univ Bristol Methods for tissue engineering
US20100047309A1 (en) * 2006-12-06 2010-02-25 Lu Helen H Graft collar and scaffold apparatuses for musculoskeletal tissue engineering and related methods
US8753391B2 (en) 2007-02-12 2014-06-17 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Fully synthetic implantable multi-phased scaffold
WO2008156725A2 (en) * 2007-06-12 2008-12-24 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods for inhibiting cartilage mineralization
US8513193B2 (en) 2008-10-13 2013-08-20 University Of Rochester Protecting and repairing cartilage and musculoskeletal soft tissues
US8586533B2 (en) * 2008-12-16 2013-11-19 Kaohsiung Medical University Treatment of early-stage osteoarthritis
US8530420B2 (en) * 2008-12-16 2013-09-10 Kaohsiung Medical University Treatment of arthritis with parathyroid hormone
CA2770340C (en) * 2009-11-18 2019-08-27 Asahi Kasei Pharma Corporation Preventive and/or therapeutic and/or aggravation suppressing agent for human arthritis deformans
WO2014169249A1 (en) 2013-04-12 2014-10-16 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods for host cell homing and dental pulp regeneration
ES2605813B1 (es) * 2015-09-16 2018-01-17 Fundación Instituto De Investigación Sanitaria Fundación Jiménez Díaz Uso de osteostatina en la preparación de un medicamento para el tratamiento de artrosis

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6360904A (ja) * 1986-08-29 1988-03-17 Yoshiaki Matsuo 農作物等植物栽培用生育促進補助水
JPH02207099A (ja) * 1989-02-07 1990-08-16 Tonen Corp ＰＴＨｒＰ関連ペプチド、その製造法及び用途
JPH03505333A (ja) * 1989-03-22 1991-11-21 パング　ピーター　ケー　テイー パラシロイド高血圧性因子
JPH06503330A (ja) * 1990-12-13 1994-04-14 ザ ユニバーシティ オブ メルボルン 骨吸収を阻害する化合物及び組成物

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0362272B1 (en) 1987-05-20 1993-11-18 Genentech, Inc. Method and compositions for making acsf and acsf antagonists
CA2040264A1 (en) 1990-04-12 1991-10-13 Tatsuhiko Kanmera Parathyroid hormone antagonists
IT1255723B (it) 1992-10-09 1995-11-13 Uso di paratormone,suoi frammenti biologicamente attivi e peptidi correlati, per la preparazione di composizioni farmaceutiche utili nella prevenzione e terapia dell'aborto e del parto pretermine ed in generale per il trattamento della gestazione
AU8002994A (en) * 1993-10-27 1995-05-22 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Cure accelerator in chondroplasty
US5747456A (en) * 1994-12-19 1998-05-05 Beth Israel Deaconess Medical Center Continuous low-dose administration of parathyroid hormone or its agonist

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6360904A (ja) * 1986-08-29 1988-03-17 Yoshiaki Matsuo 農作物等植物栽培用生育促進補助水
JPH02207099A (ja) * 1989-02-07 1990-08-16 Tonen Corp ＰＴＨｒＰ関連ペプチド、その製造法及び用途
JPH03505333A (ja) * 1989-03-22 1991-11-21 パング　ピーター　ケー　テイー パラシロイド高血圧性因子
JPH06503330A (ja) * 1990-12-13 1994-04-14 ザ ユニバーシティ オブ メルボルン 骨吸収を阻害する化合物及び組成物

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Publication number Publication date
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ATE363289T1 (de) 2007-06-15
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