WO1993011121A1

WO1993011121A1 - Derive de benzoxazinone

Info

Publication number: WO1993011121A1
Application number: PCT/JP1992/001550
Authority: WO
Inventors: Koji Kobayashi; Shunichi Manabe; Yoshihiro Watanabe; Kazuhide Hayakawa; Itsuo Uchida
Original assignee: Japan Tobacco Inc.
Priority date: 1991-11-28
Filing date: 1992-11-27
Publication date: 1993-06-10
Also published as: CA2101428A1; KR930703275A; JPH05148249A; KR960008242B1; EP0569598A4; EP0569598A1

Description

明細書

ベンゾ才キサジノン誘導体

[技術分野〕

本発明は抗炎症作用又は好中球浸潤抑制作用若しくはセリンブロテアーゼ阻害作用を有するペンゾォキサジノン誘導体に関するものであり、医薬の分野で利用される。

〔背景技術）

炎症の基本的病態を特徴付ける免疫細胞、特に好中球の血液中から組織への浸潤は、それに引き続く血液成分の漏出による浮腫の形成、さらには組織の破壊を伴った炎症症状の進行に深く関与している。このような炎症症状の進行において、免疫異常が関わっていると思われる疾患には、慢性関節リゥマチ、慢性気道感染症に基づく気管支炎、成人呼吸窮迫症候群、及び I I型喘息として分類される細気管支閉塞型喘息などの呼吸器系の疾患、さらには腸疾患の一つであるクーロン病や皮膚病の一つである乾癬などの非特異性炎症疾患等が挙げられる。

好中球の浸潤と浮腫形成、組織破壊を伴う炎症症状の誘起との因果関係については、好中球の産生する各種炎症性サイトカイン、ケミカルメデイエ一夕一類の他に、高等動物の肺、軟骨、血管壁、皮膚等の生体内結合組織の間質を構成する線維蛋白質であるエラスチン及びコラーゲンを分解し、さらには細胞障害作用を有しているブロテアーゼ、なかでもエラスクーゼが重要な役割を果していると考えられている。したがつて、エラスターゼによる組織破壊及びに劣化並びに細胞障害に起因する上記疾患、さらには藤炎、腎炎、動脈硬化等の多臓器の疾患及び敗血症等の各種疾患の予防及び治療剤には、エラス夕ーゼ阻害剤が有効であると考えられている。

既に、エラス夕ーゼ阻害剤等のセリンブ口テアーゼ阻害剤としては、ペプチド性、非ペプチド性のいくつかの化合物が報告されており、非ペプチド性阻害剤としては、例えば、ジヤーナル '才ブ 'ザ 'パイオケミストリー（Journal of the Biochemistry) 2 5 7卷、 5 0 8 5〜5 0 9 1頁（1 9 8 2年）、ジャーナル 'ォブ ·ザ ·メディシナルケミスト U— (Journal of the Medicinal Chemistry 3 0卷、 1 0 1 7〜 1 0 2 3頁（ 1 9 8 7年）、同 3 1卷、 1 0 5 2

〜 1 0 6 1頁（ 1 9 8 8年）、同 3 3卷、 46 4〜 4 79頁 ( 1 9 9 0年）、特開平 1一 30 8 2 27号公報、再公表公報 8 8 / 9 7 9 0号公報、 EP 0 3 3 7 5 4 9号公報等が知られている。

しかし、炎症局所においてはブロテアーゼと共に内在性のブロテアーゼ阻害物質も多量に存在している。すなわち、炎症の発症及び進行を予防、威は抑制するためには、プロテア —ゼ阻害活性のみでは不十分であると考えられる。例えば谩性閲節リュウマチにおける口ウワー（Lower) らの仮説〔ジャ一ナル ·■ォブ ♦ リューマ f ル (Journal of Rheumatol) 1 4卷、 49頁（ 1 9 8 7年）〕のように、活性化された好中球がひとたび軟骨等に浸潤すれば、プロテアーゼ阻害剤の作用を受けることなしに軟骨等の組織破壊を惹起すると考えられている。したがって、好中球機能に対して抑制的に作用する抗炎症剤としては、好中球の炎症部位への定着、遊走による浸潤を阻止し、更に浸潤した好中球のエラス夕一ゼによる組織破壊をも阻害する薬剤が望まれており、このような薬剤の開発は重要な研究課題となっている。

[発明の開示〕

本発明者らは、広く炎症発症の各過程に作用し、組織破壊を抑制する作用を有する薬剤の開発という上記目的を達成するために鋭意研究を重ねた結果、セリンブ口テアーゼの中でも特にエラス夕ーゼに対して優れた阻害作用を有し、かつ細菌由来の化学誘引物質に対するヒ卜末棺血好中球の走化性を抑制し、更に動物炎症モデルにおいて、好中球浸潤抑制活性をも合わせもつ一艘式 [ 1〕で示されるベンゾ才キサジノン誘導体を見い出し、本発明を完成するに到った。

即ち、本発明の第 1の目的は、下記一般式〔 I〕

[式中、 Rは水素原子又は低級アルキル基であり

R ¹は水素原子又は低級アルキル基であり

R ²は水素原子又は低級アルキル基であり

R ³は水素原子又は低級アルキル基であり

Αはハロゲン原子で置換されてもよいフエニル基、へテ口環又はァダマンチル基であり；

Bは水素原子、ハロゲン原子で置換されてもよいフエ二ル基又はへテロ環であり；

uは

/ 又はであり；

Vは一 0—、一 C H ₂—、 =N—、一 NH—、 - C H 又は単結合であり；

Xは— 0—、 = C H—、一 C H ₂—又は単結合であり； Yは一 C H ₂—、一 NH—、 — 0 —又は単結合であり Zは一 C 0—又は一 C H ₂—であり；

は二重結合又は一重結合であり；

1は 0乃至 3の整数である〕

で示されるベンゾ才キサジノン誘導体又は薬学的に許容されるそれらの酸付加塩を提供することである。

本発明の第 2の目的は上記ペンゾ才キサジノン誘導体

C I ] を有効成分として含有する抗炎症剤及び好中球浸澗抑制剤並びにセリンブロテァ一ゼ阻害剤を提供することである。なお、この明細害の記載において言及される用語の定義及び具体例は、以下に説明する通りである。

「低級アルキル基 J とは、直鎮又は分技鎖状の炭素数 1乃至 5個のアルキル基を意味し、例えば、メチル基、ェチル基、プロピル基、イソブロピル基、ブチル基、イソブチル基、 s e c 一ブチル基、 t e r t —ブチル基、. ペンチル基、イソべンチル基等が挙げらる。

「ハロゲン原子」とは、フッ素，塩素、臭素、ヨウ素等を意味する。

「ハロゲン原子で置換されてもよいフエニル基 J とは、 1 乃至 3侗の上記のハロゲン原子で罱換されてもよいフエニル基であり、複数のハロゲン原子で置換される場合は、それらのハロゲン原子は同一であっても、異なっていてもよい。具体的には、 4 —フルオロフェニル、 3—フルオロフェニル、 2—フル才ロフエニル、 4 —クロ口フエニル、 3—クロコフェニル、 2 —クロ口フエニル、 4 一ブロモフエニル、 3—ブロモフエニル、 2 —ブロモフエニル、 4 —ョードフエニル、 3 —ョードフエニル、 2 —ョードフエニル、 2 , 4—ジフルオロフェニル、 2 , 4—ジクロロフヱニル、 2 , 4—ジブ口モフエニル、 2 , 4—ジョードフエニル、 2， 4 , 6 — トリフル才ロフエ二ル、 2 , 4 , 6 — トリクロ口フエニル、 2 , 4 , 6 _ トリブロ乇フエニル、 2， 4 , 6 — トリョードフエ二ル等を挙げることができる。

「ヘテロ環」とは、 1侗又は複数個のヘテロ原子を含む 4 乃至 7員環を表わし、具体的にはピロール、フラン、チ才フェン、ピラゾ一ル、イソキサゾール、イミダゾール、才キサゾ一ル、チアゾ一ル、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、ァゼチジン、ピロリジン、テ卜ラヒドロフラン、ピぺリジン、ピぺラジン、モルホリン、ホモピぺリジン等が挙げられ、へテロ環のどの位置で結合してもよい。本発明によれば、一殺式〖 I〕で示されるベンゾ才キサジノン誘導体は、例えば下記フロー 1から 3の方法により製造することができるが、目的化合物〔 I〕の製造は下記製造方法にのみに限定されるものではない。

尚、下記反応式において、 A、； B 、 υ、 V、 X、 γ、 τ 、 R ¹ 、 R ²、 R ³、及び 1は前記と同じ意味を表し、 L ¹は水素原子又はぺブチド合成で通常甩いられるカルボキシル保護基、例えば、ェチル基、ベンジル基等を意味し、 L ²はべブチド合成で通常用いられるァミノ保護基、例えば、ペンジルォキシガルボニル基、 t e r t 一ブトキシカルボ二ル基を意味する。

下記フロー 1乃至 3で示した反応（a )乃至（d )及び（g ) の各工程の反応は、いずれも基本的にはぺブチド結合生成反応であり、ペプチド合成において通常使用される公知の方法を適宜選択して用いることができる（舸えば、「ペプチド合成の基礎と実験」泉屋信夫等著、丸善（株）出版）。また、反応（e ) は公知の脱水荊を用いた閉環反応を、反応（ ί ) 及び（1ι ) は公知の還元的アルキル化反応を、反応（ i ) は公知のアルキル化反応を用いてそれぞれ実施される。

フロー 1 . 1

Zが—CO—の場合

R¹ R²

Aゝ

.U— V— X— (CH2)i-Y— C -OH (A) L²-N— C-COOH (F)

I

ノ II

フロー 2.

Zが一 CH₂—の場合 ^の Yは—NH—' 一 O—でない)

フロ一 3.

Zが一 CO—で Yが一 CH 2—又は単結合の場合— (O) ハ

、ロ )

N又は O)

以下、上記フロー 1から 3の各工程を、順を追って詳述する。

フロー 1. に従い、 Zがー CO—の場合を説明する。

反応（a) において、化合物（A) 又は（Α' ) を、必要に応じカルボキシル基を保護したアミノ酸誘導体（Β) と縮合させて化合物（C) を得る。この反応における好ましい縮合方法には、化合物（Α)に対しては、例えば次のような（ 1 ) 又は（2) の方法を挙げることができる。

( 1 ) 化合物（Α) とイソブチルクロ口ホルメートなどの炭酸モノアルキルエステルを、不活性有機溶媒中において、トリェチルァミン、あるいは Ν—メチルモルホリンなどの三級アミンの存在下に反応させて混合酸無水物を調製する。次いで、この混合酸無水物を単離することなくアミノ酸誘導体 (Β) と縮合させ（C) を得る。

(2) 化合物（ Α) と Ν—ヒドロキシスクシンィミドを、不活性有機溶媒中、水溶性カルボジィミド塩酸塩（ 1一ェチルー 3— （ 3—ジメチルアミノブ口ピル）カルボジイミド塩酸塩）、 Ν, N' —ジシクロへキシルカルポジイミドなどの脱水縮合剤の存在下で反応させて Ν ーヒドロキシスクシンィミドエステルとする。その後、このエステルと化合物（Β) とを、水一アセトンなどのような混合溶媒中において炭羧ナトリゥムなどの塩基の存在下で反応させ、化合物（C) を得る。

—方、化合物（Α' ) を用いる場合には、化合物（Α' ) を 1 , 4一ジ才キサン、あるいはテトラヒドロフランなどの適当な溶媒中で、トリエチルアミンなどの三級アミンの存在下、一 2 0 °Cから室温において、ホスゲン、トリクロロメチルクロ口ホルメート、カルボエルジイミダゾールなどと反応し、次いで化合物（B )と反応させることにより化合物（C ) を得ることができる。

なお、化合物（B ) の L ¹がカルボキシル保護基である場合には、化合物（B ) を不活性有機溶媒中で好適なアディティブ（例えば 1 —ヒドロキシベンゾトリアゾール）の存在又は非存在下に、 N, N' ージシクロへキシルカルポジイミドなどを用いて、化合物（A) と縮合反応することによつても化合物（C ) を合成することができる。

反応（¾ ) において、まず、 L ¹ がカルボキシル保護基である場合は、常法により化合物（C ) のカルボキシル保護基 L ¹ を除去して遊離カルボキシル基とする。次いで、この遊離カルボキシル基を有する化合物とァミノ化合物（D) とを、反応 ( a ) と同様に縮合して化合物（E) を得る。

なお、化合物（E) は反応 ( c ) 及び（ d) を経由しても合成することができる。即ち、反応 ( c ) に示すように、遊離アミノ基を持つ化合物（D) と遊離カルボキシル基を有するアミノ酸誘導体（F) とから反応 ( a ) と同様の縮合反応により化合物（G) を合成する。次に、反応 ( d) に従って、まず、化合物（G) のァミノ保護基 L ²を常法により除去し、遊離アミノ基を有する化合物を調製する。この後、化合物 (A) のカルボキシル基を反応 ( a ) と同様にして活性化し、前記の遊離ァミノ基を有する化合物と縮合することにより化合物（£) を得ることができる。また、反応（d) において、化合物（A， ) を用いる場合にも、反応（a) において記したと同様にしてホスゲン、トリクロロメチルクロ口ホルメ一ト、カルボ二ルジィミダブールなどを用いることにより目的とする化合物（E) を得ることができる。

反応 (e ) において、上記の如くして得られた化合物（£) を、不活性有機溶媒中において水溶性カルポジイミド塩酸塩、又は N, N' —ジシクロへキシルカルポジイミドなどの縮合剤の存在下に脱水縮合反応によって環化し、目的化合物である一殺式〔 I ' 】を得ることができる。

上記の方法では、ベンゾ才キサジノン環への閉環反応を最終ステップ反応 (e) の段階で行ったが、予め化合物（G) を反応（e) と同様の条件下で閉環反応に付し、ペンソ才キサジノン体 (N) とした後に、反応 (d) で述べた方法により化合物（A) 又は（Α' ) と反応させることによって最終目的化合物〔）を得てもよい。

以下にフロー 2. に従い、 Ζがー CH₂—の場合について説明する。

反応 (f ) においては、アルデヒド（H) とアミノ酸誘導体（B)とを用いて還元的アルキル化反応を行い、化合物（ J ) を得る。この反応における好ましい還元的アルキル化反応としては、舸えば次のような方法を挙げることができる。化合物（H) と化合物（B) とを、水、メタノール、 1 , 4ージォキサン等の単独又は混合溶媒に溶かし、弱酸性条件下、好ましくは p H 5乃至 7において、一 30 °C乃至室温、好ましくは 0°C乃至室温において反応させィミンとする。次に、生じたイミンを白金触媒の存在下で接触還元を行なうか、あるいは水素化ホウ素ナトリゥム、水素化シァノホウ素ナ卜リゥム等の還元剤を用いて還元を行うことにより化合物（J ) を得ることができる。

次いで前述の反応（b) と全く同様にして、 L ¹ がカルボキシル保護基である場合には、化合物（J ) のカルボキシル保護基 L ¹ を公知の方法により除去し、更にアミノ化合物 (D) と縮合させることにより化合物（K) を得ることができる。

更に、化合物（K) は反応 (g) 及び（h) を経由しても合成することができる。即ち、反応 (g) に示すように遊離カルボキシル基を有するアミノ酸誘導体（F) とァミノ化合物（L) とを前述の反応（ a) と同様にして縮合反応させ、化合物（M) を得る。更に反応 ( h ) に従って、公知の方法により化合物（M) のァミノ保護基 L ²を除去して遊離アミノ基を有する化合物を調製する。次に、これを前記の反応 ( f ) の場合と全く同様にしてアルデヒド（H) と還元的ァルキル化反応に付す。ここで、得られた化合物の L ¹がカルボキシル保護基である場合には、カルボキシル保護基 L ¹ を公知の方法を用いて除去することにより、化合物（K) が得られる。

なお、化合物（L) の L ¹ がカルボキシル保護基である場合には、化合物（L) と化合物（F) とを不活性有機溶媒中で N, N' —ジシクロへキシルカルボジイミドなどを縮合剤として用い、好適なアディティブ（例えば 1ーヒドロキシべンゾトリアゾール、又は N—ヒドロキシー 5—ノルボルネン一 2, 3—ジカルボン酸イミド等）の添加又は非添加の条件下で縮合することにより化合物（M) を合成することもできる。

上記のごとくして得られた化合物（K)を前述の反応（e) と全く同様にして脱水縮合反応に付することにより一般式 C I " } で示される本発明の目的化合物を得ることができる。

以下にフロー 3. に従い、 Zが一 C 0—で Yが一 C H ₂— 又は単結合の場合を説明する。

フロー 1で得られる化合物（G) のァミノ保護基 L ²を公知の方法により除まし、得られた遊離アミノ基を有する化合物を、前述の反応 (a) で述べた方法を用いて、化合物（0) と縮合することにより化合物（P) を得る。次に化合物（P) を前述の反応 (e) と同様にして脱水閉環することにより化合物（Q) を得る。次いで反応（i )に示すように化合物（Q) と化合物（R) を不活性有機溶媒中、水素化ナトリウムなどの塩基の存在下、一 20て乃至室温において反応することにより式〔I ' ' '〕で示される本発明の目的化合物を得ることができる。

各反応において使用される不活性有機溶媒には、例えば、 N, N—ジメチルホルムアミド，テトラヒドロフラン、 1， 4一ジォキサン、 1 , 2—ジメトキシェタン、塩化メチレン、あるいは酢酸ェチルなどがあり、これらを適宜選択して使用することができる。

反応終了後、目的化合物を反応混合物中から単離、精製するには、通常当該分野において公知の手段、例えば溶媒抽出、カラムクロマトグラフィー、再結晶化等の方法を適宜選択して用いればよい。

また、出発原料として使用される式（A) 、 ( A* ) 、（B )、 (D) 、 (F) 、 (H) 、 (L) 、（0) 及び（R) は、レ3 ずれもそれ自体公知物質として入手可能か. 又は公知の前駆物質より既知の方法を用いて容易に誘導、合成することができる。

上述の方法により製造される本発明の一般式〔 I〕で示されるべンゾ才キサジノン誘導体は、薬理学的に許容される塩類を生することができる。これらの塩類としては、例えば、塩酸、硫酸、燐酸、臭化水素酸などの無機酸との酸付加塩、酒石酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸、スルホン酸などの有機酸との酸付加塩等が挙げられる。これらの化合物はいずれも抗炎症剤又は好中球浸潤抑制剤若しくはセリンブロテァーゼ阻害剤として有用である。

また、本発明の一般式 [ 1〕で示されるベンゾ才キサジノン誘導体においては、不斉炭素原子が存在し得る。この場合、これらの不斉炭素原子に基づく鏡像異性体およびジァステレ才マーのような立体異性体が存在する。また、シス体及びトランス体のような幾何異性体も存在し得る。従って、本発明の範囲には、これらすベての異性体及びそれらの混合物が包 2 01550

—16— 含される。

本発明の一艘式〔 I〕で示されるベンゾ才キサジノン誘導体又はその塩類は、医薬製剤の有効成分として用いることができる。このペンゾ才キサジノン誘導体又はその塩類を含有する医薬製荊は、例えば、免疫異常による炎症性疾患である慢性閬節リウマチ：慢性気道感染症に基づく気管支炎、成人呼吸窮迫症候群、及び I I型喘息として分類される細気管支閉塞型喘息等の呼吸器系の疾患；腸疾患の一つであるクーロン病ゃ皮膚病の一つである乾癣等の非特異性炎症性疾患；ェラスターゼによる組縝破壊並びに劣化及び細胞障害に起因する膝炎、腎炎、動脈硬化及び敗血症等の疾患の予防及び治療荊として有用である。

本発明のー殷式 [ 1〕で示されるベンゾ才キサジノン誘導体又はその塩類を有効成分として含有する医薬製剤は、経口あるいは非経口などの適当な投与方法により投与することが可能である。また、本剤の適応症の特性から経気道的な投与も可能である。

例えば、経口投与形態としては、绽剤、カブセル剤、顆粒剤、散荊、液剤などが挙げられ、また、非経口投与形態としては、注射剤、座剤、軟育剤、液剤などが挙げられる。これらの製剤化に際しては、賦形剤、結合剤、崩壊剤あるいはその他添加剤を当該分野における常法にしたがい、適宜選択して使用することができる。特に、経気道的な投与形態とする場合には、例えば界面活性剤、噴射荊を適宜選択して使用し、エアロゾルなどの噴射手段により投与することができる。このようにして得られた一般式〔 I 〕で示されるベンソ才キサジノン誘導体又はその塩類を有効成分とする医薬製剤を患者に投与する場合には、通常、成人 1 日当り一般式〔 I 〕で示されるベンゾ才キサジノン誘導体 1乃至 1 0 0 m _gの投与量が設定される。しかしながら、その投与量は、患者の年齢、性別、体重及び症状の程度、更には投与方法に応じて適宜增減されるものであり、これに限定されるものではない。以下に、実施例及び試験例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本発明の要旨を越えない限り、これらによって限定されるものではない。実施例 1

2 - [ 1 ( S ) - [ ( 2 , 2—ジフエニルエトキシカルポニル）ァミノ】一 2—メチルプロピル〗一 5—メチル一 4 H 一 3 , 1 —べンゾ才キサジン一 4一才ン（化合物 1 ) の合成 ( 1 ) 2— [(N_ペンジル才キシカルボ二ルー L—パリル）ァミノ] 一 6 —メチル安息香酸

2—アミノー 6—メチル安息香酸（ 3. 1 5 g ) と炭酸ナトリウムし 2. 4 5 g ) の水溶液（ 1 8 m l )にアセトン（ 1 8 m l ) 及び N—べンジル才キシカルボ二ルー L—パリン N—ヒドロキシスクシンイミドエステル（8. 0 2 g ) を加え、室溫で 5時間撹拌した。 1 N塩酸で酸性にした後、酢酸ェチルで抽出した。有機層を 1 N塩酸、飽和食塩水で順次洗浄し無水硫酸ナトリウムで乾燥後、濂縮した。残渣をシリ力ゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：塩化メチレン— エーテル）により精製し、標題化合物（3. 7 1 g ) を得た。

(2) 6—メチル— 2— （L一パリルァミノ）安息香酸

2— [ (N—べンジル才キシカルボ二ルー L—バリル）ァミノ] — 6—メチル安息香酸（ 1.2 1 g)をメタノール（9 9 m l ) , 水（ 1 m l ) に溶解し、 1 0 %P d—C (200 m g) を加え、水素雰囲気下、室温で 3時間撹拌した。 P d 一 Cを瀘去後、據液を濃縮し、標題化合物（8 3 O mg) を得た。

(3) 2— { [N— （2, 2—ジフエニルエトキシカルボ二ル）一 L一バリル] アミノ} 一 6—メチル安息香酸トリクロロメチルクロ口ホルメート（0. 24m l ) のトルエン溶液（5 m l ) に、水冷下、トリェチルァミン（2 8 ^ 1 ) と 2, 2—ジフエ二ルェ夕ノール（ 0. 4 g ) を加え、 1 0分間撹掙した。さらに 5乃至 1 0 で 1時間、次いで室温で 1時間撹拌した後、トルエンを滅圧下に留ました。得られた残渣のテトラヒドロフラン溶液（6 m 1 ) を、 6— メチルー 2— (L—バリルァミノ）安息香酸（ 2 26 _{m g}) と N—メチルモルホリン（2 1 2 ί£ 1 ) の Ν, Ν—ジメチルホルムアミド溶液（ 1 5 m l ) に滴下し、室温で 20時間撹拌した。反応液を 1 N塩酸中に注ぎ、群酸ェチルで抽出した。有機層を塩酸、飽和食塩水で順次洗浄し無水硫酸マグネシゥムで乾燥後、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：群酸ェチルーへキサン一酢酸）により精製し、標題化合物（ 4 2 m g ) を得た。

(4 ) 2— { 1 ( S ) 一 [ ( 2 , 2 —ジフエ二ルエトキシカルポ二ル）ァミノ〗一 2—メチルプロピル } 一 5—メチル一 4 H— 3 , 1 —べンゾ才キサジン一 4一才ン 2 - { [N - ( 2， 2—ジフエニルエトキシカルボ-ル） — Lーパリル] アミノ} — 6—メチル安息香酸（ 4 2 m g ) の N， N—ジメチルホルムアミド溶液（ 2 m l ) に、水冷下、水溶性カルポジィミド塩酸塩（ 2 0 m g ) を加え、室温で 1 5時間撹拌した。反応混合物を減圧下に澳縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：塩化メチレン—エーテル）により精製し、標題化合物（ 3 3 m _g ) を得た。実施例 2

2— [ 1 ( S ) — 【 [ (ジフエニルメトキシ）ァセチル] ァミノ] 一 2—メチルプロピル] 一 5—メチルー 4 H— 3， 1 一べンゾ才キサジン一 4一才ン（化合物 2 ) の合成

( 1 ) (ジフエニルメトキシ）酢酸ェチルエステルジフエエルメタノール（ 3. 6 8 g ) とブロモ酢酸ェチルエステル（ 3 m l ) の N， N—ジメチルホルムアミド溶液（ 3 0 m l ) に、永冷下、水素化ナトリウム（ 6 0 % dispersion in oil, 9 6 0 m g ) を加え、 2時間撹拌した。反応混合物を永冷した塩化アン乇ニゥム溶液中に注ぎ、エーテルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシゥムで乾燥し濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：塩化メチレン一エーテル）により精製し、標題化合物（4. 6 2 g ) を得た。

( 2 ) (ジブ工ニルメトキシ）群酸

(ジフエニルメトキシ） S酸ェチルエステル（4. 6 2 g ) のエタノール溶液（8 0 m l ) に、永冷下、 1 N水酸化ナトリウム（2 2. 5 m l ) を 2 0分間かけて滴下し、室温で 8時間撹拌した。反応混合物を減圧下に港縮後、残渣を水に溶かしエーテルで洗浄した。水層を、永冷下、 5 %塩酸を用いて酸性とした後、エーテルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後濃縮し、標題化合物（3. 6 0 g ) を得た。

(3 ) 2— [ [N— [ (ジフエニルメトキシ〉ァセチル] 一 L—パリル] ァミノ〗一 6—メチル安息香酸

(ジフエニルメトキシ）群酸（4 0 7 m g ) のテトラヒド口フラン溶液 U 5 m 1 ) に、一 7 8てで、 N—メチルモルホリン ( 0 . 1 9 m l )とイソブチルクロ口ホルメ一ト（ 0.

2 2 m l ) を加えた。 1. 5時間撹拌した後、実施例 1の（2 ) で調製した 6—メチルー 2— （L一パリルァミノ）安息香酸

( 3 0 O m g ) と N—メチル乇ルホリン（0. 1 7 m 1 ) の N, N—ジメチルホルムアミド溶液（ 1 8 m 1 ) を滴下し 3 0分間撐拌した。室温で 1 7時間撹拌後、反応混合物を永冷した塩酸中に注ぎ、酢酸ェチルで抽出した。有機層を 1 N塩酸、飽和食塩水で順次洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：酢酸ェチルーへキサン—酢酸）により精製し、標題化合物（ 2 8 2 m _g ) を得た。

( 4 ) 2— 【 1 ( S ) — [ [ (ジフエニルメトキシ）ァセチル〗ァミノ] — 2—メチルブロピル】一 5—メチルー 4 H— 3 , 1 —ベンゾ才キサジン一 4一才ン

2 - [ [N - [ (ジフエニルメトキシ）ァセチル] 一 L— バリル] ァミノ] — 6—メチル安息香酸（ 5 0 0 m g ) を実施例 1の（ 4 ) の場合と同様にして脱水閉環させることにより、標題化合物（ 3 4 0 m g〉を得た。実施例 3

5—メチル一 2— [ 2—メチル一 1 ( S ) — [ [ [ (土） — — ( 2—ピリジル）ペンジルォキシ】ァセチル〗ァミノ】ブロピル】一 4 H— 3 , 1 一ペンゾ才キサジン— 4 一才ン（化合物 3 ) の合成

( 1 ) (土）一ひ一（ 2—ピリジル）ベンジルアルコール 2—ベンゾィルピリジン（ 5. 5 0 g ) のエタノール溶液

( 2 0 0 m l ) に氷冷下、水素化ホウ素ナトリウム（ 2. 2 7 g ) を加え、 2. 5時間撹拌した。反応混合物を濃縮して得られた残渣に水を加え、次いで塩化アンモニゥム、食塩を加えた後、エーテルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシゥムで乾燥後港縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離液：塩化メチレン一エーテル）により精製し、標題化合物（ 5. 5 0 g ) を得た。 ( 2) [ (土）一な一（ 2—ピリジル）ベンジルォキシ] 酢酸 t e r t —ブチルエステル

(±) — d— ( 2—ピリジル）ベンジルアルコール（ 1 . 2 4 g) とブロモ群酸 t e r t—ブチルエステル（0. 9 7 m l ) の Ν, Ν—ジメチルホルムアミド溶液（ 1 5 m l ) に、米冷下、水素化ナトリウム（6 0 % dispersion in oil, 2 9 4 m g ) を加え、 1. 5時間撹拌した。反応混合物を 5 %クェン酸中に注ぎ、エーテルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し瀵縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：塩化メチレン一エーテル）により精製し、標題化合物（2. 0 5 g) を得た。

( 3 ) [ (土〉一 a— ( 2—ピリジル）ペンジル才キシ I酢酸塩酸塩

[ (土）一 α— （2—ピリジル）ベンジルォキシ] 酢酸 t e r t—ブチルエステル（2. 0 5 g) の塩化メチレン溶液（1 0 m l ) に、米冷下、トリフルォロ酢酸（ 1 0 m l ) を加え、室温で 1 4時間撹拌した。反応混合物を減圧下に乾固し、残渣に 4 N塩酸一 1， 4ージ才キサン（1 0 m l ) を加え、 0. 5時間放箧した。混合物を減圧下に乾面し、標題化合物（ 1. 9 1 g ) を得た。

(4 ) 2— ί 1 ( S ) - [(t e r t一ブトキシカルボニル）ァミノ ] 一 2—メチルブロピル） — 5—メチルー 4 H — 3 , 1 —ベンゾ才キサジン一 4—オン

N - ( t e r t 一ブトキシカルボニル）一 L一パリン N ーヒドロキシスクシンイミドエステルから、実施例 1の ( 1 ) の場合と同様にして調製した 2 _ { 〖N— ( t e r t —ブトキシカルボニル）一 Lーバリル] アミノ} 一 6—メチル安息香酸（ 1 . S 9 g ) の N, N—ジメチルホルムアミド溶液（ 3 0 m l ) に、永冷下、水溶性カルボジィミド塩酸塩 ( 1 . 3 4 g ) を加えた。室温で 1 δ時間撹拌後、反応混合物を減圧下に濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ一（溶離液：塩化メチレン—エーテル）により精製し、標題化合物（ 1 . 5 2 g > を得た。

( 5 ) 5 —メチルー 2 — 【 2—メチル _ 1 ( S ) — [[[(土） — a — ( 2—ピリジル）ベンジル才キシ] ァセチル】ァミノ ] プロピル】一 4 H— 3 , 1 一ペンゾ才キサジンー 4一才ン

2 - { 1 ( S ) 一 [ ( t e r t —ブトキシカルボニル）ァミノ] — 2—メチルプロピル } 一 5 —メチルー 4 H— 3 , 1 一べンゾ才キサジン一 4一才ン（ 3 3 2 m g ) に、水冷下、 3 5 %トリフル才ロ酢酸一塩化メチレン溶液（ 1 4 m l ) を加え、 1 . 5時間撐拌した。反応混合物を減圧下に乾固し、 2 - [ 1 ( S ) 一アミノー 2 —メチルプロピル] 一 5—メチルー 4 H— 3 , 1 —べンゾ才キサジン一 4一才ントリフル才ロ酢酸塩を得た。一方、 [ (土） — a — ( 2—ピリジル）ベンジル才キシ〗酢酸（3 4 9 m g ) のテトラヒドロフラン溶液（ I 0 m 1 ) に、一 7 8てで、 N—メチルモルホリン（ 0.

3 m l ) とイソブチルクロ口ホルメート（0. 1 7 m l ) を順次加え、 40分撹拌した。これにトリェチルァミン ( 0.

1 7 m l ) を加えた後、上記で調製した 2— [ 1 (S ) —ァミノー 2—メチルブロピル] 一 5—メチル一 4 H— 3, 1— ペンゾォキサジン一 4—オントリフル才ロ酢酸塩のテトラヒドロフラン溶液（ 1 0 m l ) を滴下し、 0 · 5時間撹拌した。室温で 1 4時間撹拌した後、反応混合物を滅圧下に濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶雜液：塩化メチレン一エーテル）により精製し、標題化合物（1 8 3 m g) を得た。実施例 4

2— [ 1 ( S ) — [ [ [ (ジ一 2—ピリジル）メトキシ] ァセチル] ァミノ] — 2—メチルブロピル】一 5—メチルー 4 H— 3, 1 一べンゾ才キサジン一 4一オン（化合物 4) の合成

( 1 ) (ジー 2—ピリジル）メタノール

ジー 2—ピリジルケトン（4.0 0 g)を実施例 3の（ 1 ) と同様にして水素化ホウ素ナトリウムで還元し、標題化合物 (3. 9 2 g) を得た。

(2) [ (ジ一 2—ピリジル）メトキシ] 酢酸 t e r t— ブチルエステル (土） — a — ( 2—ピリジル）ベンジルアルコールの代わりに（ジー 2—ピリジル）メタノール（ 2. 0 5 g ) を用い、実施例 3の（ 2 ) と同様の反応を行うことにより、標題化合物（ 1 . 8 4 g ) を得た。

( 3 ) [ (ジ— 2—ピリジル）メ卜キシ】酢黢塩酸塩

[ (土）一 α— （ 2—ピリジル）ベンジル才キシ] 酢酸 t e r t—プチルエステルの代わりに [ (ジー 2—ピリジル）メトキシ】酢酸 t e r t —プチルエステル U . 8 0 g ) を用い、実施例 3の（ 3 ) と同様の反応を行うことにより、標題化合物（し 9 0 s ) を得た。

(4 ) 2— [ 1 ( S ) — [ [ [ (ジ一 2—ピリジル）メトキシ】ァセチル] ァミノ〗一 2 —メチルプロピル] 一 5 —メチル一 4 H— 3 , 1 —べンゾ才キサジン一 4一才ン

実施例 3の（ 5 ) と同様にして、 2— { 1 ( S ) - [ ( t e r t—ブトキシカルボニル）ァミノ] 一 2—メチルブロピル} — 5—メチルー 4 H— 3 , 1 — べンゾ才キサジン一 4— オン（ 34 0 m g ) より調製した、 2— [ 1 ( S ) —ァミノ一 2—メチレブ口ピル] ー 5—メチル一 4 H— 3 , 1 —ベンゾ才キサジン一 4一オントリフル才ロ酢酸塩及び〖（ジ一 2—ピリジル）メトキシ〗酢酸塩酸塩（ 3 4 0 m g ) を塩化メチレン溶液（ 1 0 m 1 ) に溶解した。これに氷冷下で、 N—メチルモルホリン（0. 3 4 m l ) 、 1 ーヒドロキシべンゾトリアソール（ 1 5 1 m _g ) 及び水溶性カルボジィミド塩酸塩（2 1 2 m g ) を加え、 3時間撹拌した。室温で 1 5 時間撹拌した後、反応混合物を滅圧下に溏縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：塩化メチレン一エーテル）により精製し、標題化合物（ 1 3 6 m _g ) を得た。実施例 5

2 - { 1 ( S ) - [ (ペンジル才キシァセチル) ァミノ] — 2—メチルブロピル！一 5—メチル一 4 H— 3 , 1 —ベンゾ才キサジン一 4—オン（化合物 5 ) の合成

( 1 ) ベンジル才キシ酢酸ェチルエステル

水素化ナトリウム（6 0 % dispersion in oil, 1 . 3 3 g ) を N, N—ジメチルホルムアミド（4 5 m l ) に懸濁させ、ベンジルアルコール（3 . 1 0 m l ) を加えた。室温で 0. 5時間撹样後、プロモ辞駿ェチルエステル（3. 7 0 m l ) を滴下し、 1時間撹拌した。反応混合物を氷水中に注ぎ、群酸ェチルで抽出した。有機層を 1 N塩酸、飽和重そう水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、濃縮し、標題化合物（5. 2 0 g ) を得た。

( 2 ) ベンジル才キシ酢酸

ベンジル才キシ酢酸ェチルエステル（5. 2 0 g ) を実施例 2の ( 2 ) の場合と同様にして、加水分解することにより、標題化合物（ 3. 6 5 g ) を得た。 ( 3 ) 2— ί [Ν— (ベンジル才キシァセチル） — L一バリル〗ァミノ）一 6—メチル安息香酸

ベンジルォキシ酢酸（8 3 8 m g ) を N, N—ジメチルホルムアミド（ 0. 0 4 m l ) と塩化メチレン（ 2 0 m l ) に溶かし、塩化才キサリル（0. 5 6 m l ) を加えた。 1時間撹拌した後、反応混合物を減圧下に濃縮した。実施例 1の ( 2 ) で調製した 6—メチルー 2— （L一バリルァミノ）安息香酸（ 1. 0 0 g ) と炭酸水素ナトリウム（ 6 0 8 m g ) の 1， 4—ジ才キサン一水（ 1 ：し 8 0 m l ) 溶液に上記残渣の 1 , 4—ジ才キサン溶液（ 5 m l ) を滴下した。室温で 2時間撹拌後、反応混合を 1 N塩酸一飽和食塩水中へ注ぎ、塩酸酸性とし、酢酸ェチルで抽出した。有機層を 1 N塩酸、飽和重そう水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、瑭縮し、標題化合物の粗成物（ 1 . 7 4 g ) を得た。

(4 ) 2 - ί 1 ( S ) - [ (ベンジル才キシァセチル）アミノ】一 2 _メチルプロピル）一 5—メチル一 4 Η— 3 , 1 一べンゾ才キサジン一 4—オン

2— ί [Ν - (ベンジル才キシァセチル） — L一バリル] アミノ} — 6 —メチル安息香酸（ 1 . 7 4 g ) を実施例 1の (4 ) の場合と同様にして、脱水閉環し、標題化合物（ 6 0 4 m g ) を得た。実施例 6 2 - [ l (S ) - [ [ ( lーァダマンチル）メトキシカルボニル〗ァミノ] 一 2—メチルプロピル〗一 5—メチルー 4 H— 3, 1—べンゾォキサジン一 4一オン（化合物 6) の合成

( 1 ) 2— [ [N— 〖（ 1ーァダマンチル）メトキシカルボニル] 一： L一パリル I ァミノ〗 —6—メチル安息香酸

卜リクロロメチルクロ口ホルメート（60 ^ 1 ) のテトラヒドロフラン溶液（4m l ) に、永冷下、 1—ァダマン夕ンメタノール（ I 66 mg) とトリェチルァミン（0. 1 m l ) のテトラヒドロフラン溶液（4m l ) を滴下し、室溫で 0. 5時間撹拌した。反応混合物を 0てに冷却後、 6—メチル— 2— （L一バリルァミノ）安息香酸（ 249 m g) と N—メチル乇ルホリン（0. 25 m l ) の N, N—ジメチルホルムアミド溶液（ 1 7 m 1 ) を滴下し、 1 5分間撹拌した。室温で 20時間撹拌後、反応混合物を氷冷した 5 %塩酸中に注ぎ、酢漦ェチルで抽出した。有機層を 1 N塩醭と飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶雞液：酢酸ェチルーへキサン一酢酸）により精製し、標題化合物（8 5 mg) を得た。

(2) 2— [ I (S) - [ [ ( 1ーァダマンチル）メトキシカルボニル] ァミノ〗一 2—メチルブロピル〗一 5— メチル一 4 H— 3, 1—ベンゾ才キサジン一 4一才ン 2— [ [N— [(1ーァダマンチル）メトキシカルボニル] 一 Lーバリル] ァミノ] — 6—メチル安息香酸（ 7 5 m _g ) を実施例 1の（ 4 ) の場合と同様にして脱水閉環し、標題化合物（ 7 0 m g ) を得た。

実施例 7

2 - ί 1 ( S ) - [ ( Ν , Ν—ジフエニルグリシル）アミノ〗一 2—メチルブロピル } 一 5—メチル一 4 Η— 3 , 1 - ベンゾ才キサジン一 4一才ン（化合物 7 ) の合成

( 1 ) Ν, Ν—ジフエエルグリシン

ジフエ二ルァミン（ 2. 9 9 ) とブロ乇酢酸 t e r t 一ブチルエステル（ 2. 6 m l ) の N, N—ジメチルホルムアミド溶液（ 3 0 m 1 ) に、永冷下、水素化ナトリウム（6 0 % dispersion in oil , 0. 7 7 g ) を加え、 1時間撹拌した。室温で 1 時間撹拌後、 6 0 °Cで 1 8時間撹拌した。反応混合物を水冷した 1 0 %クェン酸中に注ぎ酢酸ェチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後無水硫酸マグネシゥムで乾燥し滅圧下に濃縮した。残渣の塩化メチレン溶液（ 2 0 m l ) に、氷冷下、トリフル才ロ酢酸（ 2 0 m l ) を加え室温で 1 5時間撹拌した。反応混合物を水冷した 1 N水酸化ナトリウム中に注ぎ、アルカリ性条件下、エーテルで洗浄した後、水層を塩酸酸性とし酢酸ェチルで抽出した。鲊酸ェチル層を飽和食塩水で洗浄後無水硫酸マグネシウムで乾燥し濂縮した。残渣をシルカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：酢酸ェチルーへキサン一酢酸）により精製し標題化合物

( 5 1 2 m g ) を得た。 ( 2 ) 2 - { 1 (S ) 一 [ (N， N—ジフエニルグリシル）ァミノ】一 2—メチルブロピル } 一 5—メチル一 4 H - 3 , 1—ベンゾ才キサジン一 4一オン

N, N—ジフエニルグリシン（2 6 5 m g) と N—メチルモルホリン（ 0. 1 3 m l ) のテトラヒドロフラン溶液（ 1 0 m l ) に一 2 0 で、イソブチルクロ口ホルメート（0. 1 5 m l ) を滴下し、 0. 5時間撐拌した。トリェチルアミン（0. 1 6 m l ) を加えた後、 2— U ( S ) - [ ( t e r t—ブトキシカルボニル）アミノ I— 2—メチルプロピル } — 5—メチルー 4 H— 3 , 1 —ベンゾ才キサジン一 4一オン (3 4 2 m g ) より調製した 2— [ 1 (S ) —ァミノ一 2— メチルブロピル〗一 5—メチル一 4 H— 3 , 1—ベンゾォキサジン一 4—オントリフルォロ酢酸塩のテトラヒドロフラン溶液（1 0 m 1 ) を滴下し 0. 5時間撐拌した。室温で 2 時間撹拌後、析出した塩を吸引據去し、液を港縮した。残渣をシリ力ゲルカラムクロマトグラフィ一（溶離液：塩化メチレン一エーテル）により精製し標題化合物（ 1 7 5 m _g) を得た。実施例 8

2— U ( S ) — [ (4, 4ージフエ二ルブチリル）アミノ】一 2—メチルブロピル } 一 5—メチル一 4 H— 3, 1— ベンゾ才キサジン一 4一才ン（化合物 8 ) の合成

( 1 ) , 4ージフエユルク口トン酸メチルエステル

(カルボメトキシメチレン）トリフエニルホスホラン（ 1 0. 2 2 g ) をテトラヒドロフラン（ 5 0 m l ) に懸濁させ室温でジフエニルァセトアルデヒド（ 5. 0 g ) のテトラヒドロフラン溶液（ 3 0 m l ) を滴下し 5日間撹拌した。さらに 3. 5時間加熱還流した後、反応混合物を濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：塩化メチレン一へキサン）により精製し標題化合物（6. 5 6 g ) を得た。

( 2 ) 4 , 4—ジフエニル酪酸

4 , 4ージフエニルクロトン酸メチルエステル（ 2.

0 0 g ) のエタノール溶液（ 8 0 m 1 )に 1 0 % P d— C ( 2

0 0 m g ) を加え、水素雰囲気下室温で 4 0時間撹拌した。触媒を吸引璩去した後、瀘液を溏縮した。残渣をエタノール

(θ 0 m 1 ) に溶かし、永冷下、 1 N水酸化ナトリウム（ 1

0. 5 m l ) を滴下し 4日間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、得られた残渣を水に溶かしエーテルで洗浄した。水層を水冷下塩酸酸性にして析出した結晶を璩取し、これをエーテル一へキサンより再結晶することにより標題化合物

( 1. 5 3 g ) を得た。

( 3 ) 2— ί 1 (S ) 一 ί ( 4 , 4 ージフエ二ルブチリル）ァミノ〗一 2—メチルブロピル } 一 5—メチルー 4 Η 一 3 , 1 一べンゾ才キサジン一 4一才ン

2— 〖 1 ( S ) — [ ( t e r t —ブトキシカルボニル）ァミノ】一 2—メチルブロピル } — 5 —メチルー 4 H— 3 , 1 一べンゾ才キサジン一 4一オン（3 3 3 m g ) より調製した 2— [ 1 (S ) ーァミノ一 2—メチルプロピル〗一 5—メチルー 4 H— 3， 1一べンゾォキサジン一 4一オントリフル才ロ薛酸塩と 4 , 4—ジフエニル酪酸（2 4 1 m g) の塩化メチレン溶液（ 1 5 m l ) に、氷冷下、 N—メチルモルホリン（ 0. 1 3 m l )と 1 —ヒド口キシベンゾトリアゾール（ 1 8 4 m g) を加えた。 5分間撹拌した後、水溶性カルボジィミド塩酸塩（2 3 O m g) を加え室温で 2日間撹拌した。反応混合物を濂縮乾固し、得られた残渣をシリ力ゲルカラムク口マトグラフィー（溶離液：塩化メチレン一エーテル）により精製し標題化合物（3 3 m _g) を得た。実施例 9

5—メチルー 2— [ 2—メチル一 1 (S ) — [ [ [ [ [フェニル（2—ピリジル）メチレン I ァミノ] 才キシ〗ァセチル] ァミノ] ブロピル〗一 4 H— 3 , 1 —ベンゾ才キサジン — 4一オン（化合物 9 ) の合成

( 1 ) [ [ [フエニル（2—ピリジル）メチレン〗ァミノ】ォキシ〗酢酸ェチルエステル

フエニル 2—ピリジルケトキシム（し 0 0 g ) 、ブ口モ齚酸ェチルエステル（0. 6 4m l ) と水素化ナトリウム（6 0 % dispersion in oil, 2 2 2 m g ) を用い、実施例 2の（1 ) の場合と同様にして標題化合物（7 2 2 m g ) を得た。 ( 2 ) [ [ [フエニル（ 2—ピリジル）メチレン】ァミノ] 才キシ] 酢酸

[ [ [フエニル（ 2—ピリジル）メチレン] ァミノ] 才キシ〗酢酸ェチルエステル（ 7 0 0 m g ) のエタノール溶液（ 5 0 m 1 > に、水冷下、 1 N水酸化ナトリウム（3 m 1 ) を加え室温で 1 6時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、得られた残渣を水に溶かしエーテルで洗浄した。水層を塩酸酸性にして析出した結晶を濾取し標題化合物（ 5 6 6 m g ) を得た。

( 3 ) 5—メチル一 2— [ 2—メチルー 1 ( S ) — [【[[[フェニル（ 2—ピリジル）メチレン〗ァミノ] 才キシ] ァセチル] ァミノ〗ブロピル】一 4 H— 3 , 1 —ペンゾ才キサジン一 4一オン

[ [ [フエニル（ 2—ピリジル）メチレン】ァミノ] 才キシ] 酢酸（ 2 5 6 m g ) を実施例 3の（ 5 ) の場合と同様にして 2— 【 1 ( S ) —アミノー 2—メチルプロピル] — 5— メチルー 4 H— 3 , 1 —べンゾォキサジン一 4一オントリフル才ロ群酸塩と縮合させることにより標題化合物（ 2 8 6 m g ) を得た。

本明細害中で、上述した実施例に係わる化合物の具体的な構造式及び物理化学的性状を表 1に示した。表 1

表 1 (続き）

性状

白色粉末

化合物 5 iHNMR (CDC1₃、 d値） MS (m/z)

FAB-MS:

0.98(3H,d,J=6.8Hz), 1.04(3H，d,J=6.8Hz)， 381(MH⁺) 2.38(lH，m)， 2.80(3H,s), 4.03(lH,d,J=15.3 Hz), 4.13(lH,dJ=15.3Hz),4.64(lH,dJ=H.8Hz),

4.71(lH,d，J= 11.8Hz),

4.90(m，dc =9.2，5.5Hz)，7.3〜7.4(8H，m)，

7.63(lH,t,J=7.8Hz). 構造式性状

無色ァモルファス

化合物 6 ^XHNMR (CDC1₃、 d MS (m/z)

0.98(3 d，J=6.8Hz)， 1.05(3H,dJ=6.8Hz), EI-MS: 1.4〜2.0(15H,m), 2.31(lH,m)^.79(3H,s), 424(M⁺) 3.71(2H,br.s)， 4 9(lH,br.dd), 5.40(lH,br.d)， 381, 154， 7.30(lH，d，J=7.7Hz), 7.43(lH,d,J=7.7BIz), 149

7.64(1Η,α=7.7Ηζ). 表 1 (続き

構造式性状

無色ァモルファス

化合物 7

^!HNMR (CDC1₃、 5値） MS (m/z)

0.72(3H,d,J=6.9Hz), 0.91 (3H,d,J= 6.9Hz), FAB-MS: 2J0(lH，m)， 2.78(3H，s)， 4.34(lH,d,J=18.2 Hz), 442(MH⁺) 4.52(lH,d，J=18.2Hz)，4.90(lH，dd，J=93,4.8Hz)， 7.0〜7.3(13H,m)， 7.61(lH，t，J=7.8Hz). 構造式性状

無色ァモルファス

化合物 8

!HNMR (CDC1₃、（5値） MS (m/z)

0.94(3H,d,J=6.8Hz), 1.01(3H，d，J=6.8Hz), FAB-MS: 2.2〜2.5(5H，m), 2.79(3H，s), 455(MH⁺) 3.99(lH，t,J=7.9Hz),4.87(lH，dd,J=8.8，5.4Hz)，

6.02(lH，cU=8.8Hz)， 7.：！〜 7.3(llH，m),

7.38(lH,d,J= 7.9Hz), 7.62(lH, =7.9Hz). 表 1 (続き）

また本発明は、これらの実施例に限られるものではないことは勿論であり、例えば表 2に示した化合物も本発明に属するものである。表 2 構造式

化合物 1 0

表 2 (続き

構造式化合物 1 1

構造式化合物 1 2

構造式化合物 1 3

構造式化合物 1

表 2 (続き〉化合物 1 5

構造式化合物 1 6

構 la 式化^ ¾ 1 7 構 λΗ 式化合物; 1 8

表 2 (続き）

¾ 造式

化合物 1

次に本発明に係わる前記一般式〔 I〕で示されるベンゾ才キサジノン誘導体のプロテアーゼ阻害活性、好中球走化抑制活性及び力ラゲニン誘導空気のうへの好中球浸潤抑制作用について行った試験結果を示す。

試験例 1

本発明化合物のセリンブロテアーゼ阻害活性

本発明に係わるベンゾ才キサジノン誘導体のヒト好中球ェラス夕ーゼ (Human Leukocyte El astase： H L E ) 、ヒト膿性痰エラス夕ーゼ（Human Sputum E 1 as t ase： H S £ )、ヒ卜好中球カテブシン G (Human Cathepsin G: H C G) 、ゥシ膝臓 a—キ乇卜リブシン (Bovine Pancreatic ひ一

Chymotrypsin： C Y T) 及びゥシ膝臓トリブシン (Bovine Pancreatic Trypsin: T R Υ ) を下記の方法で測定した。

1 ) H L Ε阻害活性の測定

a ) 酵素入手法

ヒト静脈血を遠心分離し、バフィコートを得、これに蒸留水を加えて低張処理することにより赤血球を破砕した。残りの血球成分に 3 3. 4 %コンレイ 4 0 0溶液 Z9 %フィコール溶液（ 1 0 : 2 4 ) を加え密度勾配遠心により好中球を取得した。好中球面分をハンクス緩衝液（Hanks buffer) で 3回洗浄した後、細胞を回収し、使用するまで一 8 0てで凍結保存した。凍結保存してある細胞を 3 7 °Cの温水で解凍し、 9倍量の細胞溶解用緩衝液（Lysis buffer (0. 1 Tris-HCl pH7.5. 1M MgCl₂、 0. 1% Brij 35) ) に慇濁して、永冷しながらポロトロンで細胞を破碎した。 1 0 0 , 0 0 0 X g、 1時間の遠心で沈澱を除き、上澄に 2倍量の卜リス塩酸緩衝液（5 mM T r i s - H C l H 7. 5 , 1 M N a C l 、 1 . 1 % r i j 3 5 ) を加え、粗抽出酵素液とした。次に、アブロチニンァフィ二ティカラムに粗抽出酵素液を吸着させ、 5 0 m 1のグリシン塩酸緩衝液（G 1 y c i n e - H C 1 H 3. 3 、 I M N a C 1 0. 1 % B r i j 3 5 ) で溶出し活性面分を得た。次に、得られた活性面分を、 MO N O Sイオン交換カラムにかけ， 2 Mの塩化ナトリウムのリニアグラジェントで溶出した。得られた活性面分を 2 5 mM T r i s -H C l p H 8. 6 で透析したのち凍結乾燥し、酵素標品とした。 b ) 酵素阻害活性評価法

被検物質を D M S O (蛍光分析用）に溶解し、種々の港度溶液を作成し、各々 2倍量の 0. 2 M T r i s -H C l p H 8. 6を加え、被検物質溶液とした。合成基質（フナコシ L一 1 3 3 5 ) を D M S Oに溶解し、 2倍量の 0. 2 M

T r i s - H C 1 p H 8. 6を加え、基質溶液とした。反応は 9 6穴マイクロブレー卜（ヌンク）を用い、被検物質

1濃度に対して 6反復の反を行った。マイクロブレート 1 ゥエル当り酵素溶液（0.2 Tris-HCl pH8.6) 1 4 0 し被検物質溶液 3 0 ^ 1 、基質溶液 3 0 1 をそれぞれ 3 7 °C で、 1 0分間ブレインキュペートしておく。酵素溶液と被検物質溶液を混合し、 1 0分間インキュベートした後、基質溶液を加え酵素反応を行った。基質の分解は、遊離してくる P N Aの吸光度（ 4 0 5 n m )をマイクロブレートリーダー

(MTP-100:コロナ）で測定し、 6反復の平均値として算出した。被検物質を加えていないときの基質の分解量に対する被検物黄の阻害濃度を I C ₅ 0値として求めた。反応液中の H L E, 合成基質の最終濃度はそれぞれ 5. 6 3 n M、 0. 26 2 5 mMである。

2 ) H S E阻害活性の測定

a ) 酵素入手法

H S Eはシグマ社より購入した。 b ) 酵素阻害活性評価法

H L E阻害活性の測定に記述した測定方法と同様であるが、 P H 7. 0の緩衝液を用いた。反応液中の H S E、合成基黄 (フナコシ L一 1 3 3 5 ) の最終濃度はそれぞれ 1 0 n M、 0. 2 5 mMである。 3) HC G阻害活性の測定

a) 酵素入手法

HC Gはコスモバイ才社より購入した。 b ) 酵素阻害活性評価法

HL £阻害活性の測定に記述した測定方法と同様であるが， p H 7. 5の緩衝液を用いた。反応液中の HCG、合成基質 (フナコシ L一 1 0 1 0 ) の最終濃度はそれぞれ 50 n M, 0. 5 mMである。

4) CYT阻害活性の測定

a) 酵素入手法

CYTはシグマ社より購入した。 ) 酵素阻害活性評価法

H L E阻害活性の測定に記述した測定方法と同様であるが、 p H 8. 0の緩衝液を用いた。反応液中の CYT、合成基質 (フナコシ L一 1 0 1 0 ) の最終濃度はそれぞれ 3. 4 n M、 0. 27 3 mMである。

5) TRY阻害活性の測定

a) 酵素入手法

TRYはシグマ社より購入した。 ) 酵素阻害活性評価法

H L E阻害活性の測定に記述した測定方法と同様であるが. P H 7. 5の緩衝液を用いた。反応液中の T RY、合成基質 (Z-Arg- pNA:フナコシ）の最終濃度はそれぞれ 2 5 n M、 1. 0 mMである。

6 ) 結果

1 ) 〜 5 ) の結果を表 3に示す

表 3

プロテアーゼ阻害活性

表 3から明かなように、本発明に係わる前記一般式〔 I〕で示される化合物には、セリンブ口テアーゼのうち特にヒ卜好中球エラス夕ーゼに対して強い選択的な阻害活性を有することが認められた。試験例 2 本発明化合物のヒト好中球走化抑制活性

ヒト末棺血から好中球面分をパーコール密度勾配遠心（2 3 0 0 r p m、 2 0分）で取得（ 6 0 %パ—コール面分、好中球の純度 9 0 %以上）した。

あらかじめ、ケモタキシスチャンバ一（クラボウ）の各ゥエル内に好中球走化因子である f M L P (ホルミルメチ才二ルロイシルフェニルァラニン）を 1 0一 M含有する 1 3 0 0 ί£ 1の培地を加えておき、これに、 8 X 1 0 a個の上記好中球と各溏度に調整した本発明化合物を含むィン夕ーセル ( 5 m径ポア) を静 gした。 5 %炭酸ガスを含む培姜器内で 3 7 °C 1時間培養したのち、インターセル艚からチャンバ一側のインターセル膜面に遊走した細胞数を以下の方法で計数した。即ち、チャンバ一厠のイン夕一セル膜面を P B Sで

4回洗浄し、メタノールで固定後、へマトキシリン一ェ才ジン液で細胞を染色した。次にインターセルから膜をとりはずしスライドガラスに乗せ、風乾し、カナダバルサムで封入した。これを顕微下 5視野中の細胞数を計数し、平均値を算出し、遊走細胞数とした。本発明化合物を加えなかった実験における遊走細胞数から f M L Pを加えていない対照実験における遊走細胞数を減じた値を 1 ひ 0 とし、本発明化合物による走化性抑制作用を次式により求めた。 (本化合物を舍むときの走化性）

走化性抑制活性 ( ) =100- 100

(本化合物を舍まないときの走化性）

(本化合物と fMLP添加時の遊走細胞数）一（fMLP無添加時の遊走細胞数）

= 100 X 100

(fMLP^加時の遊走細胞数）一（fMLI¾添加時の遊走細胞数）結果を表 4に示す

表 4

好中球走化性抑制活性

表 4から明かなように、本発明に係わる前記一般式〔 I〕で示される化合物には、顕著なヒト好中球走化抑制作用が認められた。試験例 3

本発明化合物の力ラゲニン誘導空気のうへの好中球浸潤抑制作用

S D系雌性ラット（ 5週齢, 1 1 0— 1 30 g) を用い、 1群を 5匹とした。はじめにエーテル麻酔下、空気 8 m l を背部皮下に注入して空気のうを作成した。 24時間後、空気のうに、 1 %力ラゲニン（和光製）を含有する生理食塩水 5 m 1 を注入した。被験薬物（本発明化合物) は、 2 0 0 1 D M S 0 (ジメチルスルホキシド）に溶解し力ラゲニン注入後すみやかに背部空気のう内に投与した。

5時間後にラットを卜殺放血し、空気のう内に £ D T A (エチレンジアミンテトラァセテ一ト： 1 0 m M ) を含む P B S 5 m 1を注入した。空気のう内への浸出物を洗浄 ·回収し、その一定量をコール夕一カウンタ一で測定して浸出細胞数を計数した。薬物を投与しなかった対照群での細胞浸潤数から力ラゲニンを投与しなかった実験の細胞数を滅じた値を 1 0 0とし、被験薬物の力ラゲニン炎症における細胞浸潤に対する抑制作用を次式により求めた。

(本化^!を舍むときの細胞浸潤性）

細胞浸澗抑制活性 (%) =100- • X 100

(本化合物を含まないときの細胞浸澗性）

(本化合物と力ラゲニン投 ¾■·時の浸潤細胞数） - (力ラゲ-ン無添加時の浸；

=100- ■X100

(力ラゲユン投 "^の浸潤細胞数） - (力ラゲユン無添加時の浸涠钿胞数）結果を表 5に示す表 5

力ラゲニン誘導空気のうへの好中球浸潤抑制作用

表 5から明かなように、本発明に係わる前記一般式〔 I〕で示される化合物には、力ラゲニン誘導空気のうへの好中球浸潤抑制作用が認められた。

〔産業上の利用性〕

本発明に係わるベンゾォキサジノン誘導体は新規化合物であり、広く炎症発症の各過程に作用し、組織破壊を抑制する。特にエラス夕ーゼに対して優れた阻害作用を有し、かつ細菌由来の化学誘引物質に対するヒト末棺血好中球の走化性を抑制し、また動物炎症モデルにおいて好中球浸潤抑制活性をも合わせもつ。このことから、本発明物質は抗炎症剤又は好中球浸潤抑制剤若しくはセリンブ口テアーゼ阻害剤として有用であり、医薬品として使用することが可能である。

Claims

請求の範囲

)

〔式中、 Rは水素原子又は低級アルキル基であり； R ¹は水素原子又は低級アルキル基であり；

R ²は水素原子又は低級アルキル基であり；

R ³は水素原子又は低級アルキル基であり；

Aはハロゲン原子で置換'されてもよいフエニル基、へテロ環又はァダマンチル基であり：

Bは水素原子、ハロゲン原子で g換されてもよいフエニル基又はへテロ環であり：

Uは

> ，又は Λ- であり；

Vは一 O—、一 C Hウー、 = 一 NH—、 - C H =又は単結合であり：

Xは一 0—、 = CH—、一 CHクー又は単結合であり； Yは一 CH o—、 —NH—、一 0—又は単結合であり； Zは一 CO—又は一 CH ₂—であり；は二重結合又は一重結合であり；

1 は 0乃至 3の整数である〕

で示されるベンゾ才キサジノン誘導体又は薬学的に許容されるそれらの酸付加塩。

( 2 ) 医薬として適当な担体及び請求項 1記載の化合物を、抗炎症作用を示すのに有効な量含有する抗炎症剤。

( 3 ) 医薬として適当な担体及び請求項 1記載の化合物を、好中球浸潤抑制作用を示すのに有効な量含有する好中球浸潤抑制剤。

( 4 ) 医薬として適当な担体及び請求項 1記載の化合物を、セリンブロテアーゼ阻害作用を示すのに有効な量含有するセリンブロテアーゼ阻害剤。