WO1990013636A1 - Verfahren zur gewinnung von invertase aus hefe - Google Patents

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Kay BÜNTEMEYER
Karl Heinz Kroner
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    • Y10S435/814—Enzyme separation or purification

Definitions

  • Invertase is contained intracellularly in various yeasts.
  • yeast cells In order to obtain the enzyme that is used on a technical scale in the food industry, the yeast cells have to be digested. This is followed by a separation of the cell debris and unwanted proteins.
  • Invertase is characterized by an above-average resistance to heat and low pH values.
  • a process for the extraction of invertase has already been proposed, in which a heat treatment is carried out at a pH of 5.0, but which results in a purification factor of only 2. It is therefore not surprising that invertase extraction, which is carried out in practice, does not use this method, which was proposed in 1967 (1). Rather, the classic invertase workup provides for two acetone precipitation steps; see. for example Ulimann's encyclopedia of industrial chemistry (2).
  • the disrupted cell suspension is subjected to an acid treatment at a pH value of 4.0 or less without heat treatment.
  • Brewer's yeast, baker's yeast or yeast or microorganisms derived from them are suitable as yeasts
  • the yeast was suspended in a 1/10 molar dipotassium hydrogen phosphate buffer.
  • the suspension had a pH of approximately 7.25.
  • the mixture was then digested in a high-pressure homogenizer (Gaulin M 3) until approximately 75 g of protein / kg of wet cell mass was released. The digestion was carried out through three homogenizer passages at 550 bar. Immediately after leaving the homogenizer, the homogenate was cooled to about 15 ° C. in a continuous heat exchanger.
  • the digested cell suspension was adjusted to pH 4 in a stirred container with phosphoric acid or with acetic acid.
  • the titrated suspension was stirred for about half an hour with a stirrer output of about 4 kW / m 3 .
  • the heat treatment was carried out in a continuous heat denaturation system, in a static tubular mixer heat exchanger, which ensured rapid and uniform heating at low temperature peaks.
  • the residence time distribution resulted in an average treatment time of 10 minutes with a minimum duration of 9 minutes and a maximum duration of 11 minutes for 70% of the product.
  • the temperature of the product at the outlet from the heater was approximately 51 ° C (0.5 ° C control deviation).
  • the product cooled to an initial temperature of 44 ° C, which was reached after 10 minutes. This was followed by cooling to about 15 ° C. in a second heat exchanger.
  • a 0.05 molar acetate buffer solution was titrated to pH 4 with 2.5 normal potassium hydroxide solution.
  • the heat-treated suspension was diluted with this buffer to a content of 10% cell moisture.
  • the diluted suspension was worked up with the aid of a plate separator (1500 m 2 equivalent clarification area; Westphalia SA-1).
  • the separator was desludged discontinuously, 17.6% by volume of the suspension being separated off as sediment. There was a similar loss of enzyme.
  • the throughput was 36 l / h.
  • the separator residue was subjected to ultrafiltration to concentrate it.
  • an ultrafiltration module made of polysulphone material with an area of 0.8 m 2 was used. Since invertase has a molecular weight of 270,000 daltons, adequate retention is achieved with an ultrafiltration membrane with a pore size of 100,000 daltons. With a transmembrane pressure difference of 1 bar and a retentate flow of 370 l / h, an average filtrate flow of 60 l / hm 2 to 75 l / hm 2 was achieved. The permeate had an invertase activity of about 3 U / ml, which was a 4% product loss. The product could be concentrated by a factor of 14.75 with the chosen test fiber construction, about 50 l of separator supernatant being worked up.

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Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung von Invertase aus Hefe, bei dem man bevorzugt eine aufgeschlossene Hefesuspension in stark saurem Milieu einer Hitzebehandlung unterwirft.

Description

Verfahren zur Gewinnung von Invertase aus Hefe
Invertase ist in verschiedenen Hefen intrazellulär enthalten. Um das Enzym, welches in der Lebensmittelindustrie im technischen Maßstab eingesetzt wird, zu gewinnen, müssen die Hefezellen aufgeschlossen werden. Daran schließt sich eine Abtrennung der Zelltrümmer und unerwünschter Proteine an.
Invertase zeichnet sich durch eine überdurchschnittliche Beständigkeit gegenüber Hitze und niedrigen pH-Werten aus. Davon ausgehend ist bereits ein Verfahren zur Invertase-Gewinnung vorgeschlagen worden, bei dem bei einem pH von 5,0 eine Hitzebehandlung durchgeführt wird, die jedoch einen Aufreinigungsfaktor von nur 2 ergibt. Es verwundert daher nicht, daß sich die in der Praxis betriebene Invertase-Gewinnung nicht dieses bereits 1967 vorgeschlagenen Verfahrens bedient (1). Vielmehr sieht die klassische Invertase-Aufarbeitung zwei Acetonfällungsschritte vor; vgl. beispielsweise Ulimanns Enzyklopädie der technischen Chemie (2).
Ähnlich verläuft auch ein in einem japanischen Patent (3) vorgeschlagenes Verfahren:
Hier wird nach 30-stündiger Zell-Lyse und Säurebehandlung bei pH 4,5 filtriert, dann eine Aceton-Fällung durchgeführt und
schließlich extrahiert. Diesem Verfahren sehr ähnlich ist auch ein von anderen Autoren vorgeschlagenes Verfahren (4). Die Erfinder haben nun den nach Meinung der Fachwelt nicht weiterführenden und daher aufgegebenen Stand der Technik wieder aufgegriffen und dabei festgestellt, daß man überraschend hohe Aufreinigungsfaktoren erzielen und zusätzlich leichter durch Zentrifugation klären kann, wenn man besondere Maßnahmen beachtet. Erfindungsgemäß wird nun ein Verfahren zur Gewinnung von Invertase aus Hefe vorgeschlagen, bei dem man die Hefezellen aufschließt, die aufgeschlossene Zellsuspension im stark sauren Milieu einer Hitzebehandlung unterwirft und die denaturierten unerwünschten Proteine mit den Zelltrümmern bevorzugt durch Zentrifugation abtrennt und danach gegebenenfalls die Invertase isoliert, wobei dieses Verfahren dadurch gekennzeichnet ist, daß man
- die aufgeschlossene Zellsuspension bei einem pH-Wert kleiner 4,5
- einer Hitzebehandlung bei einer Temperatur im Bereich von 40 bis 60 °C unterwirft, oder daß man
- die aufgeschlossene Zellsuspension einer Säurebehandlung bei einem pH-Wert kleiner/gleich 4,0 ohne Hitzebehandlung unterwirft.
Vorzugsweise arbeitet man bei einem pH im Bereich von 3,0 bis 4,2 und bei einer Temperatur im Bereich von 45 bis 50 °C bei de Hitzebehandlung, mit besonderer Bevorzugung des pH-Bereichs 3,8 bis 4,2 und einer Temperatur von 48 bis 50 °C.
Als Hefen bieten sich Bierhefe, Bäckerhefe oder davon abgeleitete Hefen oder Mikroorganismen an, die die genetische
Information zur Bildung von Bierhefe- oder Bäckerhefe-Invertase enthalten.
Mit dem erfindungsgemäßen Verfahren können z.B. bei nachfolgender Zentrifugation nahezu partikelfreie Überstände erzeugt werden. Ein weiterer Vorteil ist darin zu sehen, daß nahezu chemikalienfrei gearbeitet werden kann. Die Behandlung kann mit lebensmittelgerechten Säuren erfolgen, beispielsweise Phosphor säure oder Essigsäure. Unerwünschte Begleitenzyme können nahezu vollständig desaktiviert werden.
Nachstehend wird die Erfindung beispielhaft näher erläutert.
Ausgangsmaterial
Als Rohmaterial wurde frische, kommerziell erhältliche Bäckerhefe (DHW, Northeim) verwendet, die in 25-kg-Beuteln bezogen wurde. Das Material enthielt in inhomogener Verteilung geringe Mengen an Kieselgur, die von der Zellernte stammten.
Zellaufschluß
Die Hefe wurde in einem 1/10-molaren Dikaliumhydrogenphosphatpuffer suspendiert. Die Suspension hatte einen pH-Wert von ungefähr 7,25. Danach wurde in einem Hochdruckhomogenisator (Gaulin M 3) bis zur Freisetzung von etwa 75 g Protein/kg Zeilfeuchtmasse aufgeschlossen. Der Aufschluß erfolgte jeweils durch drei Homogenisatorpassagen mit 550 bar. Das Homogenisat wurde direkt nach Verlassen des Homogenisators in einem kontinuierlichen Wärmeaustauscher auf etwa 15 °C gekühlt.
Säurebehandlung
Die aufgeschlossene Zellsuspension wurde in einem Rührbehälter mit Phosphorsäure oder mit Essigsäure durch Titrieren jeweils auf einen pH-Wert von 4 eingestellt. Die titrierte Suspension wurde etwa eine halbe Stunde lang bei einer Rührerleistung von etwa 4 kW/m3 gerührt.
Wärmebehandlung
Die Wärmebehandlung wurde in einer kontinuierlichen Hitzedenaturierungsanlage durchgeführt, und zwar in einem statischen Rohrmischerwärmeaustauscher, der für eine schnelle und gleichmäßige Erwärmung bei geringen Temperaturspitzen sorgte. Durch die Verweilzeitverteilung ergab sich eine mittlere Behandlungsdauer von 10 Minuten mit einer Mindestdauer von 9 Minuten und einer Höchstdauer von 11 Minuten für 70 % des Produktes.
Dabei betrug die Temperatur des Produkts am Ausgang des Erhitzers etwa 51 °C (0,5 °C Regelabweichung). In der Haltestrecke kühlte sich das Produkt auf eine Ausgangstemperatur von 44 °C ab, die nach 10 Minuten erreicht wurde. Danach erfolgte in einem zweiten Wärmeaustauscher eine Abkühlung auf etwa 15 °C.
Verdünnung
Eine 0,05-molare Acetatpufferlösung wurde mit 2,5-normaler Kalilauge auf einen pH-Wert von 4 titriert. Mit diesem Puffer wurde die wärmebehandelte Suspension auf einen Gehalt von 10 % Zellfeuchtmasse verdünnt.
Zentrifugation
Die verdünnte Suspension wurde mit Hilfe eines Tellerseparators aufgearbeitet (1500 m2 äquivalente Klärfläche; Westphalia SA-1). Der Separator wurde diskontinuierlich entschlammt, wobei 17,6 Vol.-% der Suspension als Sediment abgetrennt wurden. Dabei ergab sich ein Enzymverlust in ähnlicher Höhe. Der Durchsatz betrug 36 l/h.
Ultrafiltration
Zum Aufkonzentrieren wurde der Separatorrückstand einer Ultrafiltration unterworfen. Dazu wurde ein Ultrafiltrationsmodul aus Polysulphon-Material einer Fläche von 0,8 m2 benutzt. Da Invertase ein Molekulargewicht von 270 000 Dalton besitzt, wird mit einer Ultrafiltrationsmembran einer Porengröße von 100 000 Dalton ein hinreichender Rückhalt erzielt. Bei einer transmembranen Druckdifferenz von 1 bar und einem Retentatfluß von 370 l/h wurde ein durchschnittlicher Filtratstrom von 60 l/h m2 bis 75 l/h m2 erreicht. Das Permeat besaß eine Invertaseaktivität von etwa 3 U/ml, was einem Produktverlust von 4 % gleichkam. Das Produkt konnte mit dem gewählten Versuefasaufbau um einen Faktor von 14,75 aufkonzentriert werden, wobei etwa 50 1 Separatorüberstand aufgearbeitet wurden.
Weitere Einzelheiten sind der folgenden Tabelle 1 zu entnehmen.
Die nachfolgenden Abb. 1 bis 7 und Tabelle 2 belegen und
erläutern die Erfindung weitergehend.
Figure imgf000008_0001
Figure imgf000009_0001
Literatur
1) N.P. Neumann und J.O. Lampen,
Biochemistry 6 (1967), 468 - 475
2) H. Vetter et al. "Enzyme", in:
Ullmanns Enzyklopädie der technischen Chemie,
Bd. 10, S. 475 - 561.
Verlag Chemie, Weinheim, 1975
3) S. Takai et al., Japan. Patent, JP 45/9824 [70/9824], 9. April 1970
4) E. Matulaityte und V. Avizienis,
Matr. Biokhim. Konf. Pribalt. Resp. B. SSR,
5th, Volume 2, 14 - 15, Editor I.K. Sibul,
Akad. Nauk. Est. SSR: Tallin, UDSSR

Claims

Patentansprüche
1. Verfahren zur Gewinnung von Invertase aus Hefe, bei dem man die Hefezellen aufschließt, die aufgeschlossene Zellsuspension im sauren Milieu ggf. einer Hitzebehandlung unterwirft und die denaturierten unerwünschten Proteine mit den Zelltrümmern abtrennt und danach gegebenenfalls die Invertase isoliert, dadurch gekennzeichnet, daß man
- die aufgeschlossene Zellsuspension bei einem pH kleiner 4,5
- einer Hitzebehandlung bei einer Temperatur im Bereich von 40 bis 60 °C unterwirft, oder daß man
- die aufgeschlossene Zellsuspension einer Säurebehandlung bei einem pH-Wert kleiner/gleich 4,0 ohne Hitzebehandlung
unterwirft.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man die aufgeschlossene Zellsuspension bei einem pH im Bereich von 3,0 bis 4,2 der Hitzebehandlung unterwirft.
3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man die aufgeschlossene Zellsuspension bei einem pH im Bereich von 3,8 bis 4,2 einer Hitzebehandlung unterwirft.
4. Verfahren nach Anspruch 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß man die aufgeschlossene Zellsuspension einer Hitzebehandlung im Bereich von 45 bis 50 °C und insbesondere 48 bis 50 °C
unterwirft.
5. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß man Bierhefe oder Bäckerhefe oder eine davon abgeleitete Hefe oder einen Mikroorganismus verwendet, der die genetische Information zur Bildung von Bäckerhefe- oder
Bierhefe-Invertase enthält.
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9255261B2 (en) 2014-02-07 2016-02-09 Qol Medical Llc Ultrapure hypoallergenic solutions of sacrosidase

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE640455C (de) * 1935-03-31 1937-01-05 I G Farbenindustrie Akt Ges Verfahren zur Herstellung gereinigter Invertaseloesungen
US2164936A (en) * 1937-03-12 1939-07-04 Standard Brands Inc Process for the separation of invertase
US3427223A (en) * 1964-06-10 1969-02-11 Exxon Research Engineering Co Coagulating microbial cells to enhance their separation
DE3400603A1 (de) * 1984-01-10 1985-07-18 Mitsui Toatsu Chemicals, Inc., Tokio/Tokyo Verfahren zur abtrennung von l-tryptophan

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1689607A (en) * 1925-11-06 1928-10-30 John J Naugle Invertase preparation and method of preparing and utilizing the same
US1855592A (en) * 1926-02-03 1932-04-26 Wallerstein Co Inc Invertase preparation and method of making the same
US1855591A (en) * 1926-02-03 1932-04-26 Wallerstein Co Inc Invertase preparation and method of making the same
US1990505A (en) * 1929-08-30 1935-02-12 Wallerstein Co Inc Method of making an invertase preparation
US1919675A (en) * 1929-08-30 1933-07-25 Wallerstein Co Inc Invertase preparation and method of making the same
US1919676A (en) * 1931-09-30 1933-07-25 Wallerstein Co Inc Method of making invertase preparations
DE2228112A1 (de) * 1972-06-09 1973-12-20 Bayer Ag Verwendung der hefestaemme saccharomyces carlsbergensis hansen cbs 268.72, cbs 269.72 und cbs 270.72 zur herstellung von invertase
IT1099546B (it) * 1978-10-27 1985-09-18 Euteco Spa Procedimento per la preparazione di acido citrico
US4925796A (en) * 1986-03-07 1990-05-15 Massachusetts Institute Of Technology Method for enhancing glycoprotein stability
CS271100B1 (en) * 1986-11-20 1990-08-14 Oleg Kirjuschkin Biotechnical method of invertase production

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE640455C (de) * 1935-03-31 1937-01-05 I G Farbenindustrie Akt Ges Verfahren zur Herstellung gereinigter Invertaseloesungen
US2164936A (en) * 1937-03-12 1939-07-04 Standard Brands Inc Process for the separation of invertase
US3427223A (en) * 1964-06-10 1969-02-11 Exxon Research Engineering Co Coagulating microbial cells to enhance their separation
DE3400603A1 (de) * 1984-01-10 1985-07-18 Mitsui Toatsu Chemicals, Inc., Tokio/Tokyo Verfahren zur abtrennung von l-tryptophan

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Ann. N.Y. Adac. Sci, Band 413, 1983 H. SCHUTTE et al.: "Recent Developments in Separation and Purification of Biomolecules" seiten 270-282 *
Process Biochemstry, Band 24, Nr. 6, Dezember 1989 K. BUNTEMEYER et al.: "Process for Large-Scale Recovery of Intracellular Yeast Invertase Based on Heat- and pH-Shift Treatment" seiten 211-216 *

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DE3915616C1 (de) 1990-06-21
US5256556A (en) 1993-10-26
EP0447497A1 (de) 1991-09-25

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