WO1990010067A1 - Pth-varianten kodierende dna-sequenzen, pth-varianten, expressionsvektor, bakterieller wirt, verwendung und therapeutische zusammensetzung - Google Patents

Pth-varianten kodierende dna-sequenzen, pth-varianten, expressionsvektor, bakterieller wirt, verwendung und therapeutische zusammensetzung Download PDF

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Abstract

Die Erfindung betrifft PTH-Varianten kodierende DNA-Sequenzen, PTH-Varianten, Expressionsvektoren, bakterielle Wirte, Verwendungen und therapeutische Zusammensetzungen.

Description

PTH-Varianten kodierende DNA-Sequenzen, PTH-Varianten,
Expressionsvektor, bakterieller Wirt, Verwendung und therapeutische Zusammensetzung
Parathormon (PTH) reguliert den Calciumspiegel des Blutplasmas, indem es u. a. auf- und abbauende Wirkungen auf das Skelett entfaltet, aber auch die Calciumrückresorption durch die Niere verstärkt. Es gibt Anhaltspunkte dafür, daß der knochenaufbauende Effekt des PTH zur klinischen Behandlung von Osteoporose ausgenutzt werden kann; vgl. J. Bone Minera l Res., 1 (1987) 377-382.
Es gibt zudem Hinweise, daß die multiplen Funktionen des PTH von verschiedenen Regionen des Hormonmoleküls ausgeübt werden. So wurde beispielsweise gefunden, daß die N-terminalen 34 Aminosäuren die Bindung des Hormons an seinen Nierenzellen-Rezeptor mit nachfolgender Stimulierung der Adenylatoyclase vermitteln (vgl. Adv. Prot. Chem., 32 (1982) 323-395), daß jedoch ein mitogener Effekt von der mitt-regionalen Sequenz 28-48 ausgeht (vgl. DE-A-37 25 319.0), der nicht über die Adenylatcyclase, sondern möglicherweise über Proteinkinase C vermittelt wird. Es erscheint somit reizvoll, durch gezielte Variation der Aminosäuresequenz des PTH oder von PTH-Fragmenten einzelne Hormoneffekte zu modulieren und so eventuell die katabole Wirkung des Hormons zu reduzieren oder seine anabole Wirkung zu verstärken.
Zum Stand der Technik sei auch verwiesen auf US-PSen
4 086 196 und 4 423 037 sowie John et al. in Adv. Prot.
Chem., 32 (1982) 323.
Dazu wird erfindungsgemäß eine DNA-Sequenz vorgesehen, die eine Variante von PTH(1-84) kodiert, bei der
- im Bereich der Positionen 1 bis 27 eine oder zwei Aminosäuren gegen eine andere Aminosäure ausgetauscht sind, wobei - ggf. N-terminal (Position +1) um eine bis zwei Aminosäuren verlängert ist und ggf. zusätzlich C-terminal (Position +84) um eine oder mehrere Aminosäuren verkürzt ist oder
- ggf. C-terminal (Position +84) um eine oder mehrere
Aminosäuren verkürzt ist, wobei die Gesamtheit der von der DNA-Sequenz kodierten Aminosäuren nicht in einer Reihenfolge angeordnet ist, die in bPTH, pPTH, rPTH, cPTH oder hPTH auftritt.
Gemäß einer weiteren Ausführungsform wird eine DNA-Sequenz vorgesehen, die eine Variante von PTH(1-84) kodiert, bei der
- im Bereich der Positionen 28 bis 31 eine oder zwei
Aminosäuren gegen eine andere Aminosäure ausgetauscht sind, wobei
- ggf. N-terminal (Position +1) um eine bis zwei Aminosäuren verlängert ist und ggf. zusätzlich C-terminal (Position +84) um eine oder mehrere Aminosäuren verkürzt ist oder
- ggf. N-terminal (Position +1) und/oder C-terminal (Position +84) um eine oder mehrere Aminosäuren verkürzt ist, wobei die Gesamtheit der von der DNA-Sequenz kodierten Aminosäuren nicht in einer Reihenfolge angeordnet ist, die in bPTH, pPTH, rPTH, cPTH oder hPTH auftritt.
Gemäß einer weiteren Ausführungsform wird eine DNA-Sequenz vorgesehen, die eine Variante von PTH(1-84) kodiert, bei der
- im Bereich der Positionen 32 bis 34 eine oder zwei
Aminosäuren gegen eine andere Aminosäure ausgetauscht sind, wobei an der Position 34 Tyrosin ausgenommen ist und ferner
- ggf. N-terminal (Position +1 ) um eine bis zwei Aminosäuren verlängert ist und ggf. zusätzlich C-terminal (Position +84) um eine oder mehrere Aminosäuren verkürzt ist oder
- ggf. N-terminal (Position +1) und/oder C-terminal (Position +84) um eine oder mehrere Aminosäuren verkürzt ist, wobei die Gesamtheit der von der DNA-Sequenz kodierten Aminosäuren nicht in einer Reihenfolge angeordnet ist, die in bPTH, pPTH, rPTH, cPTH oder hPTH auftritt. Gemäß einer weiteren Ausführungsform wird eine DNA-Sequenz vorgesehen, die eine Variante von PTH(1-84) kodiert, bei der
- im Bereich der Positionen 30 bis 34 eine oder zwei
Aminosäuren gegen eine andere Aminosäure ausgetauscht sind, wobei
- ggf. N-terminal (Position +1) um eins bis zwei Aminosäuren verlängert ist und ggf. zusätzlich C-terminal (Position +84) um eine oder mehrere Aminosäuren verkürzt ist oder
- ggf. N-terminal (Position +1) und/oder C-terminal (Position +84) um eine oder mehrere Aminosäuren verkürzt ist, wobei die Gesamtheit der von der DNA-Sequenz kodierten Aminosäuren nicht in einer Reihenfolge angeordnet ist, die in bPTH, pPTH, rPTH, cPTH oder hPTH auftritt.
Gemäß einer weiteren Ausführungsform wird eine DNA-Sequenz vorgesehen, die eine Variante von PTH(1-84) kodiert, bei der
(a) der Bereich der Positionen 28 bis 34 und insbesondere 30 bis 34 unverändert ist oder
(b) im Bereich der Positionen 28 bis 34 und insbesondere 30 bis 34 eine oder zwei Aminosäuren gegen eine andere Aminosäure ausgetauscht sind und
zusätzlich zu (a) oder (b) außerhalb des Bereichs der
Positionen 28 bis 34 bzw. 30 bis 34 eine oder zwei Aminosäuren gegen eine andere Aminosäure ausgetauscht sind und
- ggf. N-terminal (Position +1) um eine bis zwei Aminosäuren verlängert ist und ggf. zusätzlich C-terminal (Position +84) um eine oder mehrere Aminosäuren verkürzt ist oder
- ggf. N-terminal (Position +1) und/oder C-terminal (Position +84) um eine oder mehrere Aminsäuren verkürzt ist, wobei
die Gesamtheit der von der DNA-Sequenz kodierten Aminosäuren nicht in einer Reihenfolge angeordnet ist, die in bPTH, pPTH, rPTH, cPTH oder hPTH auftritt.
Vorzugsweise kodiert die DNA-Sequenz eine PTH-Variante, deren N-Terminus um Prolin verlängert ist. Bevorzugt sind außerdem hPTH-, bPTH-, pPTH-, rPTH- oder cPTH-Varianten. Für die Numerierung der DNA-Sequenzen gilt, daß 1 das erste Nukleotid des ersten PTH-Kodons bezeichnet, so daß die der folgenden Tabelle 1 zu entnehmenden Zahlen jeweils die Position des ersten gezeigten Nukleotids in Bezug zum ersten Nukleotid des ersten PTH-Kodons bezeichnen.
Gemäß einer weiteren Ausführungsform betrifft die Erfindung außerdem PTH-Varianten, die von einer der vorstehend beschriebenen DNA-Sequenzen kodiert werden, und insbesondere Varianten des PTH vom Menschen (h), vom Rind (b), vom
Schwein (p), von der Ratte (r) und vom Huhn (c).
Die erfindungsgemäßen PTH-Varianten lassen sich formal in folgende vier Gruppen einteilen.
Gruppe 1: konservative Aminosäureaustausche in den Positionen 27 und 29, die die Stimulierung sowohl der Adenylatcyclase als auch der DNA-Synthese erhalten ("funktionelle PTH-Äquivalente"); Beispiele: Q29N; K27R.
Gruppe 2: nicht-konservative Aminosäureaustausche (Variationen unter Ladungsumkehrung oder -löschung, Veränderung von Wasserstoffbrücken, Umkehrung der Hydrophobizität) in den Bereichen 29 bis 31 bzw. 33 bis 34 sowie Austausche in Position 32, die zu einer signifikanten Reduktion der Stimulierung der DNA-Synthese und zu einem weitgehenden Erhalt des Effekts auf die Adenylatcyclase führen; Beispiele: Q29A, H32L, H32K, H32R.
Gruppe 3: nicht-konservative Aminosäureaustausche (wie vorstehend definiert) im Bereich 1 bis 27, die zu einer signifikanten Reduktion der Adenylatcyclase-Stimulation führen und die DNA-Synthese zum Teil steigern oder unbeeinflußt lassen. Beispiele für DNA-Synthesesteigerung: E4R, E4R/R20E, K13P, K27L; Beispiel für unbeeinflußte DNA-Synthese: R20E. Gruppe 4: nicht-konservative Aminosäureaustausche im Bereich 1 bis 27, die die Stimulierung der Adenylatcyclase erhalten, die der DNA-Synthese jedoch reduzieren; Beispiel: L11K.
Schließlich betrifft die Erfindung Hybridpeptide, die eine erfindungsgemäße PTH-Variante umfassen, Expressionsvektoren zur Expression der erfindungsgemäßen Proteine, bakterielle Wirte, wie E. coli, für die Expressionsvektoren, die Verwendung der DNA-Sequenzen zur Herstellung der erfindungsgemäßen Peptide sowie therapeutische Zusammensetzungen, die diese Peptide enthalten. Relevanter Stand der Technik sind DE-A-37 25 319.0 und DE-A-37 25 320.4.
Nachstehend wird die Erfindung durch ein Beispiel und zwei Tabellen näher erläutert.
Beispiel
Es wurde von dem Expressionsplasmid pEX-pPTH der DE-A-37 25 319.0 ausgegangen. Ein 123 Basenpaare langes BamHI/SstI-Fragment dieses Plasmids wurde in den Phagenvektor Ml3mpl8 umkloniert. Damit wurden mit Hilfe synthetischer Oligonukleotide nach der Gapped-Duplex-Methode (Methods Enzymol., 100 (1983) 468-500) die in Tabelle 1 aufgelisteten Mutanten hergestel lt.
Nach Rückklonieren der mutierten PTH-Teilgene in den Expressionsvektor wurden die entsprechenden Varianten Cro-ß-Galaktosidase-hPTH-Fusionsproteine exprimiert, gereinigt und gespalten; die auf diese Weise freigesetzten PTH-Varianten wurden gemäß der DE-A-37 25 319.0 und DE-A-37 25 320.4 gereinigt. Die Reinigung über Carboxymethylcellulose wurde batchweise durchgeführt. Eine nachfolgende Reinigung über Umkehrphasen-HPLC ergab homogenes Material.
Die so erhaltenen PTH-Varianten wurden auf ihre Fähigkeit getestet, in einem In-Vitro-Test nach Mohr und Hesch (Biochem. J., 188 (1980) 649-656) die Adenylatcyclase in isolierten Membranen von Nebennierenrinden des Schweins zu stimulieren.
Ferner wurden sie auf ihre Fähigkeit untersucht, gemäß der DE-A-37 25 319.0 und DE-A-37 25 320.4 die DNA-Synthese embryonaler Hühner-Chondrocyten zu steigern.
Die erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle 2 zusammengefaßt.
Materialien pEX Genofit Heidelberg
M13mp18 GIBCO BRL
hPTH-Gen P 33 12 928.2
bPTH-Gen PNAS, 78 (1981) 7365 pPTH-Gen Nucleic Acids Res., 15
(1987) 6740
rPTH-Gen Nucleic Acids Res., 15
(1987) 6740
cPTH-Gen J. Bone Mineral. Res., 3
(Suppl. 1) (1988) Poster No. 309
Die genannten PTH-Gene können mit Peptid-Synthesemaschinen hergestellt werden.
Tab. 1: Mutationen im hPTH-Gen und resultierende PTH-VariantenBenennung DNA- Sequenz AS-Austausch
E4R AGT AGA ATT Glu(4) -> Arg(4)
28
L11K AAC AAG GGA Leu(ll) -> Lys(11)
31
G12A CTC GCG AAA Gly(12) -> Ala(12)
G12P CTC GCG AAA -> Pro(12)
34
K13P GGC CCA CAT Lys(13) -> Pro(13)
K13S GGC TCC CAT -> Ser(13)
K13L GGC CTG CAT -> Leu(13)
G12N,K13S AAT TCG CAT Gly(12) ,Lys(13) -> Asn(12), Ser(13)
55
R20E GAG GAA GTA Arg(20) -> Glu(20)
7 55
E4R,R20E AGT AGA ATT..GAG GAA GTA Glu(4),Arg(20) -> Arg(4), Glu(20)
76
K27L AAG CTT CTG Lys(27) -> Leu(27)
K27R AAG CGT CTG " -> Arg(27)
82
Q29A CTG GCA GAT Gln(29) -> Ala(29)
Q29N CTG AAC GAT " -> Asn(29)
91
H32L GTA CTC AAT His(32) -> Leu(32)
H32R GTG CGC AAT " -> Arg(32)
H32K GTG AAG AAT " -> Lys(32)
H32S GTT TCG AAT " -> Ser(32)
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Die Numerierung an den DNA-Sequenzen gibt die Position des ersten gezeigten Nukleotids in Bezug zu dem ersten Nukleotid des ersten PTH- Kodons (= 1) an. Die unterstrichenen Basen sind gegenüber dem rekombinanten Wildtyp verändert. Die Positionsnummern der ausgetauschten
Aminosäuren beziehen sich auf die erste Aminosäure des humanen Parathormons (Ser(1)). Tab. 2: Relative Aktivität der PTH-Varianten auf renale
Adenylatcyclase und DNA-Synthese in Chondrocyten
PTH-Variante Adenylatcyclase DNA- -Synthese
(%) (%)
rec-hPTH 100 100
Q29N 99 95
K27R 90 81
Q29A 104 8
H32L 93 11
H32R 87 36
H32K 85 22
L11K 89 21
E4R 47 88
K27L 35 70
E4R,R20E 20 58
K13P 6 88
R20E 0 0 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Alle PTH-Varianten sind, wie der Wildtyp, N-terminal um einen Prolinrest verlängert. Die Aktivitäten beziehen sich ausnahmslos auf dieses rekombinante hPTH und geben die Fähigkeit der betreffenden Variante zur Stimulation entweder der Cyclase oder der DNA-Synthese über das Grundniveau an.

Claims

Patentansprüche
1. DNA-Sequenz, die eine Variante von PTH(1-84) kodiert, bei der
- im Bereich der Positionen 1 bis 27 eine oder zwei Aminosäure gegen eine andere Aminosäure ausgetauscht sind, wobei
- ggf. N-terminal (Position +1) um eine bis zwei Aminosäuren verlängert ist und ggf. zusätzlich C-terminal (Position +84) um eine oder mehrere Aminosäuren verkürzt ist oder
- ggf. C-terminal (Position +84) um eine oder mehrere Aminosäuren verkürzt ist, wobei
- die Gesamtheit der von der DNA-Sequenz kodierten Aminosäuren nicht in einer Reihenfolge angeordnet ist, die in bPTH, pPTH, rPTH, cPTH oder hPTH auftritt.
2. DNA-Sequenz, die eine Variante von PTH(1-84) kodiert, bei der
- im Bereich der Positionen 28 bis 31 eine oder zwei Aminosäuren gegen eine andere Aminosäure ausgetauscht sind, wobei
- ggf. N-terminal (Position +1) um eine bis zwei Aminosäuren verlängert ist und ggf. zusätzlich C-terminal (Position +84) um eine oder mehrere Aminosäuren verkürzt ist oder
- ggf. N-terminal (Position +1) und/oder C-terminal (Position +84) um eine oder mehrere Aminosäuren verkürzt ist, wobei
- die Gesamtheit der von der DNA-Sequenz kodierten Aminosäuren nicht in einer Reihenfolge angeordnet ist, die in bPTH , pPTH, rPTH, cPTH oder hPTH auftritt.
3. DNA-Sequenz, die eine Variante von PTH(1-84) kodiert, bei der
- im Bereich der Positionen 32 bis 34 eine oder zwei Aminosäuren gegen eine andere Aminosäure ausgetauscht sind, wobei an der Position 34 Tyrosin ausgenommen ist und ferner
- ggf. N-terminal (Position +1) um eine bis zwei Aminosäuren verlängert ist und ggf. zusätzlich C-terminal (Position +84) um eine oder mehrere Aminosäuren verkürzt ist oder
- ggf. N-terminal (Position +1) und/oder C-terminal (Position +84) um eine oder mehrere Aminosäuren verkürzt ist, wobei
- die Gesamtheit der von der DNA-Sequenz kodierten Aminosäuren nicht in einer Reihenfolge angeordnet ist, die in bPTH, pPTH, rPTH, cPTH oder hPTH auftritt.
4. DNA-Sequenz, die eine Variante von PTH(1-84) kodiert, bei der
- im Bereich der Positionen 30 bis 34 eine oder zwei Aminosäuren gegen eine andere Aminosäure ausgetauscht sind, wobei
- ggf. N-terminal (Position +1) um eins bis zwei Aminosäuren verlängert ist und ggf. zusätzlich C-terminal (Position +84) um eine oder mehrere Aminosäuren verkürzt ist oder
- ggf. N-terminal (Position +1) und/oder C-terminal (Position +84) um eine oder mehrere Aminosäuren verkürzt ist, wobei
- die Gesamtheit der von der DNA-Sequenz kodierten Aminosäuren nicht in einer Reihenfolge angeordnet ist, die in bPTH, pPTH, rPTH, cPTH oder hPTH auftritt.
5. DNA-Sequenz, die eine Variante von PTH(1-84) kodiert, bei der
(a) der Bereich der Positionen 28 bis 34 und insbesondere 30 bis 34 unverändert ist oder
(b) im Bereich der Positionen 28 bis 34 und insbesondere 30 bis 34 eine oder zwei Aminosäuren gegen eine andere Aminosäure ausgetauscht sind und
zusätzlich zu (a) oder (b) außerhalb des Bereichs der Positionen 28 bis 34 bzw. 30 bis 34 eine oder zwei Aminosäuren gegen eine andere Aminosäure ausgetauscht sind und - ggf. N-terminal (Position +1) um eine bis zwei Aminosäuren verlängert ist und ggf. zusätzlich C-terminal (Position +84) um eine oder mehrere Aminosäuren verkürzt ist oder
- ggf. N-terminal (Position +1) und/oder C-terminal (Position +84) um eine oder mehrere Aminsäuren verkürzt ist, wobei
- die Gesamtheit der von der DNA-Sequenz kodierten Aminosäuren nicht in einer Reihenfolge angeordnet ist, die in bPTH, pPTH, rPTH, cPTH oder hPTH auftritt.
6. DNA-Sequenz nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß sie eine PTH-Variante kodiert, die N-terminal um Prolin verlängert ist.
7. DNA-Sequenz nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß sie eine hPTH-Variante, bPTH-Variante, pPTH-Variante, rPTH-Variante oder cPTH-Variante kodiert.
8. Peptid, dadurch gekennzeichnet, daß es durch eine DNA-Sequenz gemäß einem der vorhergehenden Ansprüche kodiert wird.
9. Peptid, dadurch gekennzeichnet, daß es als Hybridpeptid die Aminosäuresequenz eines Peptids gemäß Anspruch 8 umfaßt.
10. Expressionsvektoren mit den DNA-Sequenzen gemäß einem der vorhergehenden Ansprüche zur Expression eines Peptids gemäß Anspruch 8 oder 9 in einem bakteriellen Wirt wie Escherichia coli.
11. Bakterieller Wirt, insbesondere Escherichia coli, mit einem Expressionsvektor gemäß Anspruch 10.
12. Verwendung einer DNA-Sequenz gemäß einem der vorhergehenden Ansprüche, gegebenenfalls in Form eines Expressionsvektors gemäß Anspruch 10 oder eines bakteriellen Wirts wie Escherichia coli gemäß Anspruch 11 zur Herstellung eines Peptids gemäß Anspruch 8 oder 9.
13. Therapeutische Zusammensetzung, bestehend aus oder mit einem Gehalt an einem Peptid gemäß Anspruch 9 oder einem Peptid gemäß Anspruch 9, wobei Tyrosin an der Position 34 nicht ausgenommen ist, ggf. neben übl ichen Trägern und Hilfsmitteln.
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Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2269176A (en) * 1992-07-15 1994-02-02 Sandoz Ltd Parathyroid hormone variants
US5382658A (en) * 1992-04-03 1995-01-17 Allelix Biopharmaceuticals Inc. Stability-enhanced variants of parathyroid hormone
US5599792A (en) * 1992-06-19 1997-02-04 Allelix Biopharmaceuticals Inc. Bone-stimulating, non-vasoactive parathyroid hormone variants
US5814603A (en) * 1992-06-12 1998-09-29 Affymax Technologies N.V. Compounds with PTH activity
EP0847278A4 (de) * 1995-07-13 1999-01-13 Biomeasure Inc Analoga des parathyroid-hormons
US5955574A (en) * 1995-07-13 1999-09-21 Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques, S.A. Analogs of parathyroid hormone
US5969095A (en) * 1995-07-13 1999-10-19 Biomeasure, Inc. Analogs of parathyroid hormone
US6544949B1 (en) 1995-07-13 2003-04-08 Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques, S.A.S. Analogs of parathyroid hormone
US7410948B2 (en) 1995-07-13 2008-08-12 Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques, Sas Analogs of parathyroid hormone

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6150328A (en) 1986-07-01 2000-11-21 Genetics Institute, Inc. BMP products
EP0612348B1 (de) 1991-11-04 2003-04-23 Genetics Institute, LLC Rekombinante knochenmorphogenetische protein heterodimere, zusammensetzungen und verfahren zur verwendung
US5589452A (en) * 1992-07-14 1996-12-31 Syntex (U.S.A.) Inc. Analogs of parathyroid hormone and parathyroid hormone related peptide: synthesis and use for the treatment of osteoporosis
US6291206B1 (en) 1993-09-17 2001-09-18 Genetics Institute, Inc. BMP receptor proteins
AU689184B2 (en) 1993-12-07 1998-03-26 Genetics Institute, Llc BMP-12, BMP-13 and tendon-inducing compositions thereof
US5700774A (en) * 1996-03-26 1997-12-23 Genetics Institute, Inc. Compositions comprising bone morphogenic proteins and truncated parathyroid hormone related peptide, and methods of inducing cartilage by administration of same
US6727224B1 (en) 1999-02-01 2004-04-27 Genetics Institute, Llc. Methods and compositions for healing and repair of articular cartilage
DK1223990T3 (da) 1999-10-15 2004-11-29 Inst Genetics Llc Formuleringer af hyaluronsyre til tilförsel af osteogene proteiner
US7226587B2 (en) 2001-06-01 2007-06-05 Wyeth Compositions and methods for systemic administration of sequences encoding bone morphogenetic proteins
TWI267378B (en) 2001-06-08 2006-12-01 Wyeth Corp Calcium phosphate delivery vehicles for osteoinductive proteins
PL1675608T3 (pl) 2003-09-12 2007-11-30 Wyeth Corp Stałe fosforanowo wapniowe pałeczki do wstrzyknięć dla dostarczania białek osteogennych
US20060166251A1 (en) * 2005-01-26 2006-07-27 Archambault Joanne M Use of sFRPs as markers of BMP activity
AU2006230434A1 (en) * 2005-03-30 2006-10-05 Wyeth Methods for stimulating hair growth by administering BMPs
BRPI0721943A2 (pt) * 2007-08-09 2014-03-18 Usv Ltd Processo ortogonal para purificação do hormônio da paratireoide humano recombinante (rhpth) (1-34)
US20090227503A1 (en) * 2008-02-07 2009-09-10 University Of Rochester Parathyroid hormone treatment for enhanced allograft and tissue-engineered reconstruction of bone defects

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3886132A (en) * 1972-12-21 1975-05-27 Us Health Human parathyroid hormone
US4423037A (en) * 1982-05-13 1983-12-27 The General Hospital Corporation Inhibitors of peptide hormone action
EP0301484A1 (de) * 1987-07-30 1989-02-01 Gesellschaft für Biotechnologische Forschung mbH (GBF) PTH-Modifikationen und therapeutische Zusammensetzungen, die sie enthalten und daraus bestehen
EP0301485A1 (de) * 1987-07-30 1989-02-01 Gesellschaft für Biotechnologische Forschung mbH (GBF) Expressionsvektoren und Verfahren unter deren Verwendung zur Gewinnung von Cro/beta-Galaktosidase/PTH-Fusionsproteinen und von PTH

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3886132A (en) * 1972-12-21 1975-05-27 Us Health Human parathyroid hormone
US4423037A (en) * 1982-05-13 1983-12-27 The General Hospital Corporation Inhibitors of peptide hormone action
EP0301484A1 (de) * 1987-07-30 1989-02-01 Gesellschaft für Biotechnologische Forschung mbH (GBF) PTH-Modifikationen und therapeutische Zusammensetzungen, die sie enthalten und daraus bestehen
EP0301485A1 (de) * 1987-07-30 1989-02-01 Gesellschaft für Biotechnologische Forschung mbH (GBF) Expressionsvektoren und Verfahren unter deren Verwendung zur Gewinnung von Cro/beta-Galaktosidase/PTH-Fusionsproteinen und von PTH

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Acta Endocrinol., Band 287, Suppl. 117, 1988, E. WINGENDER et al.: "Proten Design of Peptide Hormones: Parathyroid Hormone as an Example", seite 63, siehe die Zusammenfassung *
Biochemistry, Band 29, 13. Februar 1990, American Chemical Society, M. CHOREV et al.: "Modifications of Position 12 in Parathyroid Hormone and Parathyroid Hormone Related Protein: Toward the Design of Highly Potent Antagonists", seiten 1580-1586, siehe den ganze artikel, besonders tabelle II auf seite 1583 *
The New England Journal of Medicine, Band 315, Nr. 16, 16. Oktober 1986, M. ROSENBLATT: "Peptide Hormone Antagonists that are Effective in Vivo", seiten 1004-1013 siehe den ganze artikel *

Cited By (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5382658A (en) * 1992-04-03 1995-01-17 Allelix Biopharmaceuticals Inc. Stability-enhanced variants of parathyroid hormone
US5814603A (en) * 1992-06-12 1998-09-29 Affymax Technologies N.V. Compounds with PTH activity
US5599792A (en) * 1992-06-19 1997-02-04 Allelix Biopharmaceuticals Inc. Bone-stimulating, non-vasoactive parathyroid hormone variants
AT408100B (de) * 1992-07-15 2001-08-27 Novartis Erfind Verwalt Gmbh Pth-analoga
WO1994002510A3 (en) * 1992-07-15 1994-05-26 Sandoz-Erfindungen Verwaltungsgesellschaft M.B.H. Analogs of pth
EP0672057A1 (de) * 1992-07-15 1995-09-20 Novartis AG Analoge des parathormons
GB2269176B (en) * 1992-07-15 1997-01-08 Sandoz Ltd Peptides
DE4393381B4 (de) * 1992-07-15 2008-07-17 Novartis Ag PTH-Verbindungen mit PTH-ähnlicher Aktivität, Verfahren zu deren Herstellung, diese enthaltende pharmazeutische Zusammensetzungen und deren Verwendungen
GB2269176A (en) * 1992-07-15 1994-02-02 Sandoz Ltd Parathyroid hormone variants
US5955574A (en) * 1995-07-13 1999-09-21 Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques, S.A. Analogs of parathyroid hormone
US5969095A (en) * 1995-07-13 1999-10-19 Biomeasure, Inc. Analogs of parathyroid hormone
US6544949B1 (en) 1995-07-13 2003-04-08 Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques, S.A.S. Analogs of parathyroid hormone
EP1405861A3 (de) * 1995-07-13 2004-07-21 Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques S.A.S. Parathyroidhormon Analoge
US6921750B2 (en) 1995-07-13 2005-07-26 Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques, S.A.S. Analogs of parathyroid hormone
EP0847278A4 (de) * 1995-07-13 1999-01-13 Biomeasure Inc Analoga des parathyroid-hormons
US7410948B2 (en) 1995-07-13 2008-08-12 Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques, Sas Analogs of parathyroid hormone
CN100412091C (zh) * 1995-07-13 2008-08-20 提议和科学执行公司 甲状旁腺素类似物
USRE40850E1 (en) 1995-07-13 2009-07-14 Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques, S.A.S. Analogs of parathyroid hormone
US7632811B2 (en) 1995-07-13 2009-12-15 Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques, Sas Analogs of parathyroid hormone

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