UA81226C2 - Peptide-based multimeric targeted contrast agents - Google Patents

Peptide-based multimeric targeted contrast agents Download PDF

Info

Publication number
UA81226C2
UA81226C2 UA2004010709A UA2004010709A UA81226C2 UA 81226 C2 UA81226 C2 UA 81226C2 UA 2004010709 A UA2004010709 A UA 2004010709A UA 2004010709 A UA2004010709 A UA 2004010709A UA 81226 C2 UA81226 C2 UA 81226C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
group
peptide
linker
component
sya
Prior art date
Application number
UA2004010709A
Other languages
English (en)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed filed Critical
Priority to UAA200601920A priority Critical patent/UA84432C2/uk
Publication of UA81226C2 publication Critical patent/UA81226C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
    • A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
    • A61K49/0039—Coumarin dyes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
    • A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
    • A61K49/0041—Xanthene dyes, used in vivo, e.g. administered to a mice, e.g. rhodamines, rose Bengal
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
    • A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
    • A61K49/0041—Xanthene dyes, used in vivo, e.g. administered to a mice, e.g. rhodamines, rose Bengal
    • A61K49/0043—Fluorescein, used in vivo
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
    • A61K49/0056—Peptides, proteins, polyamino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/08—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
    • A61K49/085—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier conjugated systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/08—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
    • A61K49/10—Organic compounds
    • A61K49/12—Macromolecular compounds
    • A61K49/122—Macromolecular compounds dimers of complexes or complex-forming compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/08—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
    • A61K49/10—Organic compounds
    • A61K49/12—Macromolecular compounds
    • A61K49/124—Macromolecular compounds dendrimers, dendrons, hyperbranched compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/08—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
    • A61K49/10—Organic compounds
    • A61K49/14—Peptides, e.g. proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/088—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins conjugates with carriers being peptides, polyamino acids or proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/107—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides
    • C07K1/1072—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides by covalent attachment of residues or functional groups
    • C07K1/1077—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides by covalent attachment of residues or functional groups by covalent attachment of residues other than amino acids or peptide residues, e.g. sugars, polyols, fatty acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Magnetic Resonance Imaging Apparatus (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Description

Опис винаходу
Цей опис заявляє пріоритет від 0.5. Ргомізіопа! Арріїсайо Зегіа! Мо.60/308,721 від 30.07.2001.
Винахід стосується контрастних агентів для діагностичної томографії, більш конкретно - пептиднаправлених, мультимерних контрастних агентів, коли пептид функціонує як мішень або точка прикріплення для одного чи більше хелатів як на аміно-так і на карбоксильному кінці пептиду.
Діагностичні томографічні способи, такі як ядерно-резонансна томографія (ЯМР), рентгенографія, ядерно-радіофармацевтична томографія, ультрафіолет-інфрачервона томографія, ультразвук, застосовуються в 70 медичній діагностиці протягом багатьох років. Крім того, використовувані контрастні засоби покращували або підвищували дозволяючу здатність зображення чи зберігали специфічну діагностичну інформацію.
Фактично, контрастні засоби повинні інтерферувати з довжиною хвилі електромагнітного випромінювання, що використовуються в гомографічних способах, змінюючи фізичні властивості тканини, що призводить до одержання зміненого сигналу, чи, як у випадку з радіофармацевтичними препаратами, самі забезпечувати 12 джерело випромінювання. ЯМР та оптичні способи є унікальними серед гомографічних способів, так як вони виробляють комплекс сигналів, чутливих до хімічного середовища. В той час, як сигнал від рентгенівських променів або радіонуклідних променів зберігається однаковим незалежно від того, що самі ці агенти знаходяться в плазмі у вільному стані, приєднаними до протеїнів або інших мішеней, або захопленими в кістковій тканині, відомі контрастні агенти для ЯМР або оптичної томографії виявляють різні сигнальні характеристики в різних фізіологічних середовищах. Важливим є те, що контрастні агенти досить чутливі і присутні в досить високій концентрації для того, щоб можна було зареєструвати сигнальні зміни.
Комплекси між гадолінієм або іншими фармацевтичними іонами та органічними лігандами широко використовувались для підвищення та покращення контрастності ЯМР. Гадолінієві комплекси підвищують контрастність шляхом підвищення швидкості ядерно-магнітної релаксації протонів, які знаходяться в молекулах с 29 води, що є доступними для контрастних агентів протягом ЯМР (Сагамап, Р., еї аІ,, К. В. Спет.Кеу. 99, 2293 Ге) (1999)). Швидкість релаксації протонів в цих молекулах води зростає відносно протонів в інших молекулах води, які недоступні для контрастних агентів. Ця зміна швидкості релаксації призводить до удосконалення контрастності зображень. Крім того, це підвищення релаксивності в межах специфічної популяції протонів молекули води може мати наслідком здатність збирати більше відеоданих за певний проміжок часу. Це, в свою о чергу, призводить до покращення сигналу відносно шумової потужності. Га
Томографію також можна виконувати, використовуючи світло, в цьому випадку оптичні барвники повинні забезпечувати сигнал. Наприклад, світло в діапазоні 600-1300нм (видимої ближньої інфрачервоної частини сч спектра) відносно легко проходить через біологічні тканини і може бути використане для гомографічних цілей. «--
Світло, що пройшло або розсіялось, відобразилось або перевипромінилось (флюоресценція) виявляється і 3о генерує зображення. Зміни оптичної густини, коефіцієнта відображення або флуоресцентних характеристик со барвника, включаючи збільшення або зменшення кількості піків поглинання або зміну довжини хвиль, можуть відбуватися при зв'язуванні з біологічними мішенями, таким чином забезпечуючи додаткову контрастність тканин. В деяких випадках, наприклад діагностика захворювань локалізованих близько до поверхні тіла, « ультрафіолет і видиме світло також можуть застосовуватись. З 70 Й надалі зберігається потреба в контрастних агентах, що можуть забезпечити достатню концентрацію с формуючого зображення компонента в мішені, покращуючи чутливість томографічного способу, а також
Із» контрастних агентів, що мають достатній період напіввиведення іп мімо.
Винахід базується на пептидах і пептиднаправлених мультимерних агентах для МР, оптичної і радіонуклідної томографії, коли пептид функціонує як мішень або точка прикріплення для одного чи більше хелатів на обох аміно- і карбоксильному кінцях безпосередньо або, необов'язково, через проміжний місток. Несподівано, бо контраст агенти винаходу зберігають зв'язувальну спорідненість до біологічних мішеней, таких як фібрин, і - високу релакситивність. Агенти винаходу мають достатній період напіввиведення, який настає після застосування іп мімо за умови, що будуть здійснені ефективні томографічні аналізи. о Одним із аспектів даного винаходу є очищені пептиди, що містять амінокислотну послідовність: ма 70 ря-у-Х 7-1 (ЗЕО ІЮ МО 1), в якій
Р" є проліном або його неприродним похідним; ши У" є тирозином або його неприродним похідним;
Хі" є б або 0, або їх неприродним похідним;
Ї" є лейцином або його неприродним похідним і де один з Р", М", Хі 1" є неприродним похідним 29 відповідної амінокислоти. Хі" може бути С або 0 і 1" може бути лейцином. В одному з варіантів здійснення
ГФ) винаходу Р" є проліном або 4-гідроксипроліном і У" є тирозином або неприродним похідним тирозину, заміщеним в положенні З компонентом вибраним з групи, що складається з Р, СІ, Вг, ! та МО». Сполуки винаходу можуть о включати такі пептиди, що приєднані до тромболітичного агента.
Іншим аспектом винаходу є очищені пептиди, що включають амінокислотну послідовність: 60 Хі1-Хо-б-Ря-У-Х 3-1 -6-Ху-Хв-Хв (ЗЕО І МО 2), в якій
Р" є проліном або його неприродним похідним;
У" є тирозином або його неприродним похідним;
Хі вибраний з групи, що складається з МУ, М, Е, 5, Вір, Нх, Орг, Су, би, Ад, Нге, 3-Раї, 4-Раї, бораМег, пТуг, ЯМУ, аг, (3/4) та Ж(37У), де (3/4) є фенілаланіном заміщеним в одному з положень З або 4 компонентом бо вибраним з групи, що складається з СН з, СЕз, МНо, СНОМН»о, СМ, Р, СІ, Вг, І, Еб та ОМе і де ХУ(3У є тирозином заміщеним в положенні З компонентом вибраним з групи, що складається з Е, СІ, Вг, І та МО»;
Х» вибрано з групи, що складається з Е, Н, аЕ, 5, Н(Ва1), 2-Раї, Орг та Ерф
Х»з вибрано з групи, що складається з С та;
Ху вибрано з групи, що складається з Н, Е, У та МУ;
Хь вибрано з групи, що складається з І, Її, М, М, Вра, Ваї, Нтєе, Міе, Тіє, МмаІї, Рпд, Спа, Та, Рца, Ти, 4-Раї та Р(3/4У), де (3/4) є фенілаланіном заміщеним в одному з положень З або 4 компонентом вибраним з групи, що складається з СЕ», Еї, іРг, ОМе;
Хе вибрано з групи, що складається з М, С), І, І та М або Хе відсутній, і де 70 один з Х., Хо, Хв, Р" та У" є неприродним похідним амінокислоти. Наприклад, Р" може бути проліном або 4-гідроксипроліном і У" може бути тирозином або неприродним похідним тирозину, заміщеним в положенні З компонентом вибраним з групи, що складається з Е, СІ, Вг, І та МО». Очищені пептиди можуть бути здатними до утворення дисульфідного зв'язку в умовах відсутності відновлення і можуть мати специфічну зв'язувальну спорідненість до фібрину. В одному з втілень, пептиди містять дисульфідний зв'язок. Сполуки винаходу можуть /5 Включати такі пептиди, що приєднані до тромболітичного агента.
Винахід також надає очищені пептиди, що мають амінокислотну послідовність вибрану з групи, що складається з МУ-йЕ-С-Р. (4-ОН) -У (3-С1)У3. -5-І -С-МУ-І-9 (5ЕБЕО 10 МО:с4), У-аЕ-С-Р. (4-ОН) -У. (3-С1)-5-І1 -0-М-І-0 (ЗЕБЕО ІЮ МО:5), М-аЕ-С-Р (4-ОН) -У (3 СІ)-6-І -С-МУ-І-З (ЗЕБО ІО МО:6), МУ-аєг-С-Р (4-ОН) -М. (3-С1)-5-І -С0-У-1-5) (ЗЕБЕО ІЮ МО:7), М/-Я4Е-С-Р. (4-ОН) -У. (3-С1)-0-І -С-МУ-І-О (5БО 10 МО:8), М-аг-С-Р (4-ОН) -М (3 СІ)-0-І -0-М-І-0) 2о (ЗЕО ІО МмО:9), У-ав-С-Р. (4-ОН) -У (3-СІ)-0-1-С-МУ-І-О (ЗО 10 МО:10), М/-ав-с-Р. (4-0ОН)-Х (3-С1)-0-1--6-У-1-0) (ЗЕБЕО 10 МО:11), є (4-ОМе) -Н-С-Р (40Н) -М (3-СІ)-0-І-С-Н-І-Ї (5БО 10 МО : 12), М-Н-С-Р (4-0ОН) -ї (3-СІ)-6-І-С-МУ-І-О0 (5ЕБЕО 10 МО:13), МуУ-ає-С-Р-М (3-С1)-5-І-С-МУ-І-О (ЗЕБЕО 10 МО:14), Му-аг-с-г (40Н)-Х-0-1І -С-МУ-І-О (5ЕО 10 МО:15) та Б-Н-С-Р-(4-0Н)-У (3-С1)-0-І-С-Н-І-Ї. (ЗЕО ІЮ МО:16). Очищені пептиди можуть бути здатними до утворення дисульфідного зв'язку в умовах відсутності відновлення і в одному з втілень сч об пептиди містять дисульфідний зв'язок. Пептиди можуть мати специфічну зв'язувальну спорідненість до фібрину.
Сполуки винаходу можуть включати такі пептиди, що приєднані до тромболітичного агента. і)
В одному з втілень, Р" є проліном; У" є тирозином ; Хі вибрано з групи, що складається з МУ, У, Е, 5, Вір,
Нх, Орг, Су, би, Ай, Нгте, 3-Раї, 4-Раї, бораМег, пТуг, амУ, анг, є (3/4У та мМ (3У), де Е(3/4У) є фенілаланіном заміщеним в одному з положень З або 4 компонентом вибраним з групи, що складається з СН з, СЕз, МН», Ге зо СНоМН», СМ, Е, СІ, Вг, І, Ех та ОМе, і де УЗ "7 є тирозином заміщеним в положенні З компонентом вибраним з групи, що складається з Е, СІ, Вг, І та МО»; Хо вибрано з групи, що складається з ЗЕ, Н (В21), 2-Раї, Орг, та ТИ; Хз с вибрано з групи, що складається з о та 0; Ху, вибрано з групи, що складається з Н, Е, МУ, та МУ ; Хв вибрано з с групи, що складається з І, Її, М, М, Вра, Ваї, Нте, Міе, Тіе, пмаІЇ, Рпд, Спа, Та, Еца, ТИ, 4-РаїЇ та Е (3/4У, де Е(3/4)е фенілаланіном заміщеним в одному з положень З або 4 компонентом вибраним з групи, що її"
Зв складається з СЕ», Ей, іРг, та ОМе, де один з Х., Хо або Х5 неприродним похідним амінокислоти; та Хе вибрано з со групи, що складається з М, С), І, Ї та М або Х 5 відсутній. Такі пептиди можуть бути здатними до утворення дисульфідного зв'язку в умовах відсутності відновлення і в одному з втілень пептиди містять дисульфідний зв'язок. Пептиди можуть мати специфічну зв'язувальну спорідненість до фібрину.
В іншому прикладі здійснення винахід надає очищені пептиди, що включають амінокислотну послідовність: «
С-рР'-М"-Х.-І" (ЗЕБЕО ІО МО), в якій Х є б або О, Р" є проліном або його неприродним похідним пт) с 4-гідроксипроліном; і М" є тирозином або неприродним похідним тирозину, заміщеним в положенні З . компонентом вибраним з групи, що складається з Е, СІ, Вг, | та МО 5; за умови, що один з Р" або У" є и? неприродним похідним відповідної амінокислоти. Очищені пептиди можуть бути здатними до утворення дисульфідного зв'язку в умовах відсутності відновлення і можуть мати специфічну зв'язувальну спорідненість до фібрину. В одному з втілень, пептиди містять дисульфідний зв'язок. Сполуки винаходу можуть включати такі о пептиди, що приєднані до тромболітичного агента.
Винахід також надає очищені пептиди, що включають амінокислотну послідовність: С-Ю-У-У-(5-Т1-С-Х.о (ЗЕ - ІО. МО:17), де Хо вибрано з групи, що складається з підецил)с, п (4-РАИВиШ)О, Меї, Вра, Вір, Ме-Вір, (47), ко Е(3-Ме), Р(З4-дифторо), Ат, Ніе, М (3,5-дийодо), РЯ, 1Маї, а1МаІї, та Меї, де Е (47) є фенілаланіном 5р заміщеним в положенні 4 компонентом вибраним з групи, що складається з ЕЇ, СЕ», І та ІРк. Очищені пептиди о можуть включати амінокислотну послідовність С-0-У-у-05-Т-0-Х40-Х44 (ЗЕО ІЮО. МО:18), в якій Х 44 вибрано з
Ф групи, що складається з О, ар, ро, Іпр, Мір, Ме-О, аС, Сор та Стр. Наприклад, пептид може мати наступну амінокислотну послідовність: І-Р-С-0-У-у-5-7-С-підецил)с-4О0 (ЗЕО ІОМО:19), Г-Р-С-0-у-у-5-Т-С-пі(децил)С-О (ЗЕБЕО І МО:20), ІГ-Р-С-0-уУ-у-5-1-С-ВірО (5ЕБО 10 МО:21), ІГ-Р-С-0-У-уУ-5-1-С-Вір-40 (ЗЕБО ІЮ МО:22), вв І-Р-С-О-У-У-6-ТС-Меі-пр о (ЗЕО 10 0 МО:23), І-Р-С-О-У-У-6--С-Ме!-Стр (5ЗЕО 10 МО:24) або
Г-РєР-С-0-У-ж-5-1-С-МеВір-Ю (5ЗЕБЕО 10 МО:25). Очищені пептиди можуть бути здатними до утворення (Ф) дисульфідного зв'язку в умовах відсутності відновлення і в одному з втілень пептиди містять дисульфідний ка зв'язок. Пептиди можуть мати специфічну зв'язувальну спорідненість до фібрину. Сполуки винаходу можуть включати такі пептиди, що приєднані до тромболітичного агента. во В іншому аспекті, винахід надає спосіб одержання агентів для магнітно-резонансної томографії. Спосіб включає реагування пептиду, що має М-кінцеву функціональну аміногрупу, з лінксерним компонентом до утворення модифікованого пептиду, що має як С-кінцеву функціональну аміногрупу так і М-кінцеву функціональну аміногрупу; ковалентне приєднання лінкерного компоненту до С-кінцевої функціональної аміногрупи та М-кінцевої функціональної аміногрупи призводить до утворення попередника агента для 65 МР-томографії; і перетворення попередника агента для МР-томографії в агент для МР-томографії. Лінкерний компонент може бути вибраний з групи, що складається з:
70 Ії й ше ї
С ні Мн на. М ль, не / ад4 Ху ій де п є цілим числом від 1 до 4; т є цілим числом, вибраним з 1 до 12; і К є аліратичною або ароматичною групою. Лінкерний компонент може бути вибраний з групи, що складається з: сч ла і й в
Ід з НА "див их "ям М з сч о с
Хе : й "ям зв вк Лй | МЕ: со т » «
ІМ в - с | п ; вою чор "» , де т є цілим числом від І| до 4; п є цілим числом від 0 до 4; | є залишковою групою; і К' та К" незалежно со вибирають з групи, що складається з водню та з хімічної захисної групи. Лінксерний компонент також може бути - вибраний з групи, що складається з: ко з 50 4) (Ф) ко бо б5 я т ів в шк у Г
І. г. з ту в-ва се, кг аг іі пор аній й ії че р тв 2 , де ГО є залишковою групою; і КЕ! та КЕ? незалежно вибирають з групи, що складається з водню та хімічної захисної групи. Ї може бути вибраний з групи, що складається з -ОН, складного естеру, галогеніду та сч ов ангідриду. Складний естер може бути вибраний з групи, що складається з пентафторфенолу (Рір),
М-гідроксисукциніміду (МН), натрієвої солі М-гідроксисульфосукциніміду (МН), 2-тіоксотіазолідінлілу та і) гідроксибензотріазолу (ОВТ). Галогенід може бути вибраний з групи, що складається з РЕ, СІ, Вг та І. Хімічна захисна група може бути вибрана з Вос, Етос, СВІ, І-бутилу, бензилу та алілу.
Перетворення попередника агента для МР-томографії в агент для МР-томографії може включати реагування Ге зо попередника томографічного агента з попередником хелатного компонента до утворення ковалентного зв'язку між попередником хелатного компонента та лінкерним компонентом попередника агента для МР-томографії, с попередник халатного компонента містить велику кількість попередників карбоксильних залишків, попередники су карбоксильних залишків здатні до перетворення в карбоксильні залишки; перетворення великої кількості попередників карбоксильних залишків зв'язаних попередників хелатних компонентів у велику кількість -- з5 карбоксильних залишків, карбоксильні залишки здатні до комплексоутворення з парамагнітним іоном металу; со закомплексовування парамагнітного іону металу великою кількістю карбоксильних залишків призводить до утворення агента для магнітно-резонансної томографії. Попередник хелатного компонента може бути вибраний з групи, що складається з: « - . и? (ее) - іме) іме) 4) іме) 60 б5 ра «м
Х о х о) ро о є о; ді о 1 7 з їжа і М з "у х їх во ( ве ій з з о з см с й-яе | їх Ясй ях о) і. 4 . 2 ГЕ 4 (Се) с с п я кт я - г) » 7 . а
У
- с я . "» . ї де У є синтетичним компонентом, здатним утворювати ковалентний зв'язок з приєднаним лінкерним со компонентом, і де кожен Х, незалежно, є О- або попередником О- так що при конверсії в О- Х є здатним утворювати карбоксильний залишок з сусіднім карбонілом, та К' є незарядженою хімічною частинкою, - аліфатичною, алкільною групою або циклоалкільною групою, або їх незарядженою незаміщеною модифікацією. ко Синтетичний компонент може бути вибраний з групи, що складається з карбоксильної кислоти, складного естеру, 5р галогенангідриду, ангідриду, алкілгалогеніду, ізоціанату та ізотіоціанату і де попередник О- вибраний з о групи, що складається з -ОН, -ОМе, ОЕЇ, ОЇВи, О-бензилу та О-алілу. Попередник хелатного компонента може
Ф бути вибраний з групи, що складається з:
Ф) іме) 60 б5
«ую «ух к М й оз : " ще ; з де Гб є залишковою групою вибраною з -ОН, складного естеру, галогеніду та ангідриду і де кожен К, незалежно, є О- або попередником О-, вибраним з групи, що складається з ОН, -О-Ме, О-ЕЇ, О-ІВи, О-бензилу та
О-алілу, так що К, при перетворенні в О-, є здатним утворювати карбоксильний залишок з сусіднім карбонілом. с
Попередник хелатного компонента також може бути вибраний з групи, що складається з: о
А (Се) се се и - (ее)
Е ди ТЕ: ду шщ с пс . ї і в а : 5 с ' -- 5 (ее) ; - ко з 50 4) (Ф) ко бо б5 та. ди г п | і них 7 ДА Я ; Е стер дв дня і М й нет се аг
Ся й (І
Е ля я Гр Дені і-й Е ; З Со зе у й ї й ; св уран, -
Ся З 1. . ; де п є цілим числом від 1 до 4; К вибрано з групи, що складається з негативного заряду та попередника сч 29 негативного заряду, здатного трансформуватись в негативний заряд; та Х є залишками хімічних сполук, Ге) вибраними з групи, що складається з -СІ, -Вг, І, -М8О, -Т80, та -ТО. Попередник негативного заряду вибрано з групи, що складається з -Н, -Ме, -ЕЇ, -ІВи, бензилу та алілу.
Попередник хелатного компонента може бути вибираним з групи, що складається з: со се се ч-- (ее) - с . а (ее) - ко з 50 4) ко бо б5 тей гай с с щі 6) (Се) с с «- г) з « - с де й К вибрано з групи, що складається з негативного заряду та попередника негативного заряду, здатного "» трансформуватись в негативний заряд та Х є залишками хімічних сполук, вибраними з групи, що складається з -СІ, -Вг, І, -М2О, -Т8О та -ТО. Попередник негативного заряду вибрано з групи, що складається з -Н, -Ме, -Еї, -ІВи, бензилу та алілу. о В одному з втілень, лінкерний компонент може бути ковалентно кон'югованим з попередником хелатного компонента, ковалентний кон'югат містить велику кількість попередників карбоксильних залишків, попередник - Я я у карбоксильних залишків здатний трансформуватись в карбоксильні залишки. Перетворення попередника агента ка для магнітно-резонансної томографії МРТ в агент для МР томографії може включати трансформацію великої
Кількості попередників карбоксильних залишків ковалентного кон'югату в карбоксильні залишки, карбоксильні о залишки здатні до комплексоутворення з парамагнітним іоном металу; закомплексовування парамагнітного іону
Ф металу великою кількістю карбоксильних залишків призводить до утворення агента для магнітно-резонансної томографії. Парамагнітний іон металу може бути вибраним з групи, що складаєтся з: а(ПИ), Ре(І), Мпи(ІІ та
ІО, СИ), сСщі), ОУ(О, ТБ ота М), Но), ЕКО), РП), Ещі) ота ЕЩІ). са) є особливо придатним парамагнітним іоном. о Ковалентний кон'югат може бути вибраний з групи, що складається з іме) 60 б5 ная? ! в С м
До
Й нн г мае в'я у» в'я у певен с о ке о а о й кн | мА « ) С т с з в'я ме? д 55
; в С ни В мая км у й се о (Се) сч се зв М М со - с . » в'я мая п . - (ее) шк 1 де п є цілим числом від 1 до 4; б є залишковою групою, вибраною з -ОН, складного естеру, галогеніду та іме) ангідриду; та 2", 2, 83, в та У, незалежно, є вибраними з групи, що складається з ацетатного компонента,
ГІ 20 -Ме, -ЕГ або --Ви захищеного ацетатного компонента, ацетамідного компонента та ацетоксикомпонента.
Ф Ковалентний коньгат також може бути вибраний з групи, що складається з: (Ф) ко бо б5 х де!
А В, іно г о (х я Ї о
Ці а де І С є залишковою групою, вибраною з -ОН, складного естеру, галогеніду та ангідриду; і вв в тав С є, незалежно, вибраними з групи, що складається з ацетатного компонента, -Ме, -ЕЇ або --Ви захищеного о ацетатного компонента, ацетамідного компонента та ацетокси компонента.
Ковалентний кон'югат може бути вибраний з групи, що складається з: зушоп 1: о сч си, і гудшнии сч (сн,нсо -
На). (ее) « - с з (ее) - з н ко 4) » ,-- - сою з во (сно (сн, (снів -С0,СНУХ а в5 та бБутпоп 2: (снузСОє СОС(СНз)в /--СОС(СНа)» (СН3ІІСОС у; ( /,/" о -М М х-с0С(СН)» 0 то о МН
М
У
МН с пк І
Я-М м Я-с0с(СН і (снІузсос М с (снзу)вСос СОж(СНІІ -- ССС - г)
Ковалентний кон'югат також може бути вибраний з групи, що складається з: « ші с (7 яю со м - іме) юю Ів
Ф іо й що о в іме) 60 » де К є -ІВи групою, І С є залишковою групою, вибраною з -ОН, складного естеру, галогеніду та ангідриду.
Способи винаходу, крім того, перед ковалентним приєднанням лінкерного компонента до С- та М-кінцевої б5 функціональної аміногрупи, можуть включати взаємодію лінкерної субодиниці з М-кінцевою функціональною аміногрупою пептиду, результатом якої є перетворена М-кінцева функціональна аміногрупа пептиду. Лінкерна субодиниця може бути вибрана з групи, що складається з: й о вай и
Ї Х і
Кс М нив нк ПУ /0 п
Ваве ну о во дю А 15 . . он з апа вл Ів 7 де Вазе (основа) вибрано з групи, що складається з аденозину, гуанозину, тиміну та цитозину; 0 є залишковою групою, вибраною з -ОН, складного естеру, галогеніду та ангідриду; та К є аліфатичним або ароматичним компонентом. Лінкерна субодиниця також може бути вибрана з групи, що складається з: о о р о в-ї нм сч ) нм с
М п " о ном Ув НМ. ок є ів Ж 0 й о сч с ин -
В це В Кк о г) ном ув п в в о іс НМ. « о ші с з и , "» де п незалежно є цілим числом від 0 до 3; К є аліратичною або ароматичною групою; та б є залишковою групою, вибраною з -ОН, складного естеру, галогеніду та ангідриду. Лінкерна субодиниця також може бути вибрана з групи, що складається з: (ее)
Кк о, - ви і (о зу му 0 з п п 42) к їв що є. М Те! н. Ух з о у апа наб в о бо Кк з де п незалежно є 1 або 2 ; К є аліфатичною або ароматичною групою; та І б є залишковою групою вибраною з -ОН, складного естеру, галогеніду та ангідриду. 65 В іншому аспекті, винахід надає спосіб одержання агента для МР томографії. Спосіб включає ковалентне зв'язування задишка амінокислоти з лінкерною субодиницею до утворення С-термінального кінця пептиду, де залишок лінкерної субодиниці є ковалентно приєднаним до полімеру; синтезування пептиду на полімері від ковалентнозв'язаного С-термінального кінця до М-термінального залишку пептиду, М-термінальний залишок містить М-термінальну функціональну аміногрупу; відщеплення пептиду від полімеру до утворення пептиду, що має С-термінальну функціональну аміногрупу; ковалентне приєднання лінкерного компонента до С-термінальної та М-термінальної функціональних аміногруп пептиду з утворенням попередника агента для МР томографії та перетворення попередника агента для МР томографії в агент для МР томографії. Крім того, перед віддепленням пептиду від полімеру спосіб може включати ковалентне приєднання залишку лінкерної субодиниці до
М-термінальної функціональної аміногрупи з утворенням зміненої М-термінальної функціональної аміногрупи. 7/0 Лінкерний компонент може бути ковалентно кон'югованим з попередником хелатного компонента, ковалентний кон'югат містить велику кількість попередників карбоксильних груп, попередники карбоксильних груп здатні трансформуватись в карбоксильні залишки.
Перетворення попередника агента для МР томографії в агент для МР томографії може включати реагування попередника агента для МР-томографіїм'/йй з попередником хелатного компонента до утворення ковалентного /5 Зв'язку між попередником хелатного компонентата та лінкерним компонентом попередника агента для
МР-томографії, попередник хелатного компонента містить велику кількість попередників карбоксильних груп, попередники карбоксильних груп здатні до трансформування в карбоксильні залишки; трансформування великої кількості попередників карбоксильних груп зв'язаного попередника хелатного компонента у велику кількість карбоксильних залишків, карбоксильні залишки здатні до комплексоутворення з парамагнітними іонами металів; го та закомплексовування парамагнітних іонів металів великою кількістю карбоксильних залишків з утворенням агентів для МР томографії.
Перетворення попередника агента для МР томографії в агент для МР томографії може також включати трансформування великої кількості попередників карбоксильних груп ковалентних кон'югатів в карбоксильні залишки, карбоксильні залишки здатні до комплексоутворення з парамагнітними іонами металів; та с г Закомплексовування парамагнітних іонів металів великою кількістю карбоксильних залишків, результатом якого є агент для магнітно-резонансної томографії. Парамагнітні іони металів можуть бути вибрані з групи, що і) складається 3: (а(І), Рекс), Ми( та 1), СИ), Сщ(і), СОУ), ТБ(Ш ота М), Но), ЕС),
РІ), ЕщІ) та Елі). а) є найбільш корисним парамагнітним іоном металу.
В іншому аспекті, винахід надає спосіб одержання агента для магнітно-резонансної томографії, що включає Ге зо реагування пептиду, який має С-термінальну функціональну карбоксильну групу, із залишком лінкерної субодиниці до утворення модифікованого пептиду, що має обидві і С-термінальну функціональну карбоксильну с групу, і М-термінальну функціональну карбоксильну групу; ковалентне приєднання лінкерного компонента до с обох, як М-термінальної, так і С-термінальної функціональних карбоксильних груп модифікованого пептиду з утворенням попередника агента для МР томографії. Лінкерні субодиниці можуть бути вибрані з групи, що --
Зв5 складається з: со ів що « прочее шви се ме с "де ;з» , де
Го є залишковою групою вибраною з -ОН, складного естеру, галогеніду та ангідриду; та К є аліфатичною або со 15 ароматичною групою. Лінкерна субодиниця також може бути вибрана з групи, що складається з: - м» щь ЗИ З іч й ко т пд н мох, яйця тре 42) /Я у
Ф) е я юю сит со,
І вок оо «ня щи, пою со, 65" де т є цілим числом від 1 до 4; п є цілим числом від 0 до 4; К, незалежно, є вибраним з групи, що складається з -Н, -Ме, -ЕЇ, -В2 та -ІВи і КЕ! та ВК, незалежно, є вибраними з групи, що складається з водню або хімічної захисної групи.
Лінкерний компонент може бути вибраний з групи, що складається з: й в ще пекнфнн . уч " КЕ "р2 нон: 70 щ: нн, 2 де В! та В2, незалежно, є вибраними з групи, що складається з водню або хімічної захисної групи, захисна хімічна група вибрана з групи, що складається з: Вос, Етос, СВ, І-бутилу, бензилу та алілу. /5 Перетворення попередника агента для МР томографії в агент для МР томографії також може включати реагування попередника агента для МР томографії з попередником хелатного компонента з метою утворення ковалентного зв'язку між лінксерним компонентом попередника агента для МР томографії та попередником хелатного компонента, попередник хелатного компонента містить велику кількість попередників карбоксильних груп, попередники карбоксильних груп здатні трансформуватися в карбоксильні залишки; трансформування 2 великої кількості попередників карбоксильних груп зв'язаного попередника хелатного компонента у велику кількість карбоксильних залишків, карбоксильні залишки здатні до комплексоутворення з парамагнітними іонами металів та закомплексовування парамагнітних іонів металів великою кількістю карбоксильних залишків з утворенням агента для магнітно-резонансної томографії. Лінкерний компонент може бути ковалентно кон'югованим з попередником хелатного компонента, ковалентний кон'югат містить велику кількість попередників сч в карбоксильних груп, здатних трансформуватися в карбоксильні залишки
Перетворення попередника агента для МР томографії в агент для МР томографії також може включати Ге) перетворення великої кількості попередників карбоксильних груп ковалентного кон'югату в карбоксильні залишки, карбоксильні залишки здатні до комплексоутворення з парамагнітними іонами металів; та закомплексовування парамагнітних іонів металів великою кількістю карбоксильних залишків з утворенням агента со зо для магнітно-резонансної томографії.
Ковалентний кон'югат може бути вибраний з групи, що складається з: с с н ід | чек г) - . н и? 4 а в (ее) - ю п'ю іме) 4) зв вм іме) о вм та б5
Н й ін т о АХ о; в'яз ат мине
Я Н Н
"М )
І см о де п є цілим числом від 1 до 4 та В", В, КЗ, 27 та ЕР, незалежно, є вибраними з групи, що складається з ацетатного залишку, -Ме, -Еї або --Ви захищеного ацетатного залишку, ацетамідного залишку та ацетоксизалишку.
Ковалентний кон'югат може бути: Ге сч у, с (сньсх шли - мч ХМ отсісн» со « ші с з : (ее) з Й о о з 50 42)
Ф) ю уттоооісно» бо с у; ( бо Перетворення попередника агента для МР томографійо в агент для МР томографії також може включати реагування попередника агента для томографії з хелатним компонентом, де хелатний компонент містить парамагнітний іон металу, з утворенням ковалентного зв'язку між хелатним компонентом та лінкерним залишком попередника агента для МР томографії що призводить до утворення агента для магнітно-резонансної томографії. Придатні парамагнітні іони металів описані вище.
Згідно ще одного аспекта, винахід стосується контрастного агента, який включає хелатний комплекс металу на -СОЖ та МНК кінцях біополімеру (пептиду), де К є, незалежно, вибраним з групи, що складається з водню, алкілу, аліфатичної та залишкової групи. Контрастний агент може включати два хелатних комплекса металу на -СОК та МНК кінцях біополімеру. Біополімер може мати специфічну зв'язувальну спорідненість до фібрину. 7/0 ЛПептид може бути здатним до утворення дисульфідного зв'язку в умовах відсутності відновлення і, в одному з втілень, містити дисульфідний зв'язок. Контрастний агент може мати формулу: (Спеініоуж--- 75 пн вннньниє РУЦоненннн тин -енн,
В п де СВеїаїе означає хелатний комплекс металу; ІпКег означає лінкерний компонент; І іпКег-зирипії означає субодиничний лінкерний залишок; т, незалежно, є цілим числом від 1 до 10; р, незалежно, є цілим числом від 0 до 5; в, незалежно, є 0 або 1; В! є амінокислотним бічним ланцюгом або його похідною; та К є, незалежно, воднем або аліфатичною групою. Контрастний агент також може мати одну із структур 4-55.
Згідно з іншим аспектом, винахід стосується способу зміни стабільності пептиду, який має М-термінальну функціональну аміногрупу. Спосіб включає реагування пептиду із залишком лінкерної субодиниці, що призводить до утворення пептиду, який має С-термінальну функціональну аміногрупу; ковалентне приєднання лінкерного с компонента до пептидних С-термінальної функціональної аміногрупи та М-термінальної функціональної о аміногрупи з утворенням модифікованого пептиду. Крім того, спосіб може включати реагування модифікованого пептиду з кеппіруючим компонентом з утворенням ковалентного зв'язку між кеппіруючим компонентом та лінкерним компонентом модифікованого пептиду. Спосіб також може включати реагування модифікованого пептиду з попередником хелатного компонента з утворенням ковалентного зв'язку між попередником хелатного « компонента та лінкерним компонентом модифікованого пептиду, попередник хелатного компонента містить сч велику кількість попередників карбоксильних груп, попередники карбоксильних груп здатні трансформуватись в карбоксильні залишки. Після трансформування великої кількості попередників карбоксильних груп зв'язаного с попередника хелатного компонента у велику кількість карбоксильних залишків, останні здатні до реакції «- комплексоутворення з парамагнітними іонами металів; парамагнітні іони металів можуть бути закомплексованими великою кількістю карбоксильних залишків. Далі спосіб може включати визначення г) стабільності модифікованого пептиду або визначення стабільності немодифікованого пептиду і порівняння стабільності вказаного модифікованого пептиду зі стабільністю немодифікованого пептиду. Стабільність модифікованого пептиду може бути кращою в порівнянні із стабільністю немодифікованого пептиду (є. 9., в 10,20 « або 30 разів краще ніж стабільність немодифікованого пептиду). Стабільність можна визначити, використовуючи аналіз гомогенату печінки щурів. т с Згідно іншого аспекта, винахід надає модифікований пептид, який має структуру: 2» м др пн пониннняк ТД пеню лину ре ревсигаог (о) 1 ргеслизогн -3з п т іме) з 20 , де СпПеїайїе ргесигзог означає попередник хелатного компонента; ГіпКег означає лінкерний компонент; 4) ІпКкег-зирипії означає субодиничний лінкерний залишок; т, незалежно, є цілим числом від 71 до 10; р, незалежно, є цілим числом від 0 до 5; 5, незалежно, є 0 або 1; В! є амінокислотним бічним ланцюгом або його похідною; та КЕ? є вибраним з групи, що складається з водню або аліфатичної групою. Згідно ще іншого аспекта, 22 винахід надає модифікований пептид, який має структуру:
Ф) юю во (Покедр 7 (Прлког-зиог), Ккоггвимай)-(акег)р
В п й 65" де:
ШиКег означає лінкерний компонент; І іпКег-зирипії означає лінкерний субодиничний компонент; р, незалежно, є цілим числом від 0 до 5; з, незалежно, є 0 або 1; із іпдерепдепйу 0 ог 1; ВЕ! є амінокислотним бічним ланцюгом або його похідною та К2 є вибраним з групи, що складається з водню або аліфатичної групи.
Спосіб одержання агента для магнітно-резонансної томографії також характеризується тим, що включає реагування пептиду, який має М-термінальну функціональну аміногрупу, з субодиницею лінкерного компонента до утворення модифікованого пептиду, що має функціональні аміногрупи на обох своїх кінцях - М- та С-кінцях, або реагування пептиду, який має С-термінальну функціональну карбоксильну групу, з субодиницею лінкерного компонента до утворення модифікованого пептиду, що має функціональні карбоксильні групи на обох, як М- так і 70. С- кінцях; та перетворення модифікованого пептиду в агент для магнітно-резонансної томографії. Конвертування модифікованого пептиду в агент для МР томографії може включати ковалентне приєднання хелатного компонента до модифікованого пептиду, де хелатний компонент містить парамагнітний іон металу, з утворенням агента для магнітно-резонансної томографії. Перетворення модифікованого пептиду в агент для МР томографії також може включати ковалентне зчіплювання лінкерного компонента з хелатним компонентом до утворення 75 ковалентного кон'югату, де хелатний компонент містить парамагнітний іон металу та реагування ковалентного кон'югату з модифікованим пептидом до утворення агента для магнітно-резонансної томографії. Придатні парамагнітні іони описані вище
Згідно іншого аспекта, винахід надає спосіб одержання агента для магнітно-резонансної томографії, який включає ковалентне приєднання амінокислотного залишку до субодиниці лінкерного компонента з утворенням С-термінального кінця пептиду, де субодиниця лінкерного компонента ковалентно приєднана до полімеру; синтезування пептиду на полімері від ковалентнозв'язаного С-термінального кінця до М-термінального кінця пептиду, (пе М-термінальний залишок містить М-термінальну функціональну аміногрупу; відщеплення пептиду від полімеру з утворенням С-термінальної функціональної аміногрупи модифікованого пептиду; конвертування модифікованого пептиду в агент для магнітно-резонансної томографії. Конвертування модифікованого пептидув «М агент для МР томографії може включати ковалентне приєднання хелатного компонента до модифікованого о пептиду, де хелатний компонент містить парамагнітний іон металу, з утворенням агента для магнітно-резонансної томографії. Перетворення модифікованого пептиду в агент для МР томографії також може включати ковалентне зчіплювання лінкерного компонента з хелатним компонентом до утворення ковалентного кон'югату, де хелатний компонент містить парамагнітний іон металу та реагування ковалентного кон'югату з (Се) модифікованим пептидом до утворення агента для магнітно-резонансної томографії. Придатні парамагнітні іони описані вище. см
Якщо не зазначено інше, всі використані тут технічні та наукові терміни мають такі значення, що є Ге загальнозрозумілими для спеціаліста компетентного в галузі техніки, до якої належить винахід. Не дивлячись на те, що описані тут методи та матеріали подібні або еквівалентні тим, що можуть застосовуватись на практиці -- або тестуванні дійсного винаходу, придатні методи та матеріали описані нижче. Всі публікації, заявки на (ее) патент, патенти та посилання, що тут наведені, включені як посилання. В протилежному випадку, дійсний опис винаходу, включаючи визначення, контролюватиметься. І на додачу, матеріали, методи та приклади ілюструють, але не обмежують винахід. «
Інші можливості та переваги винаходу стануть очевидними з наступного детального опису та з формули винаходу. - с Фіг.1 надає хімічні структури неприродних амінокислот. а Фіг.2 описує релакситивність Са при 2ОМНа, 352 С в Тріс-сольовому буфері (ТВ5) або 1Омг/мл фібрину в ТВ5. -» Фіг.3 демонструє накопичення контрастного агента в тромбі.
Фіг.АА є зображенням тромба. Фіг.48 є зображенням тромба з венозною кров'ю.
Визначення (ее) Загальноприйняті хімічні скорочення, що детально не розкриті в цьому описі, можна знайти в |Пе Атегісап - Спетіса! Босіеєїгу 5ї(уіїе Сціде Зесопіа Ейайоп ; Атегісап Спетіса! Зосіеїу, УМазпіпдіоп, ОС (1997), "2001
Сцідеїйпез Табо Аційасов" 9). Абод. Спет. 66 (1), 24А (2001), "А Зпабої (ціде о АбБбгеміайопе та Тпеїг Ове іп ко Рерііде Зсіепсе" .). Рерііде. Зсі. 5, 465-471 (1999)). 7 50 Для цілей цієї заявки, термін "хімічна захисна група" або "захисна група" означає будь-який хімічний компонент тимчасово ковалентно зв'язаний з молекулою протягом однієї або більше хімічних операцій в 4; послідовності реакцій, з метою попередження небажаних реакцій. Загальна стратегія захисних груп описана в
ГРгоїесііпд Групи іп Абодапіс Зупіпевзів, Тпіга Ед. "Бу Р. МУців та Т. Сгеепе, О 1999 Ддойпп УМіеу « бопв, Іпс.|.
Для цілей цієї заявки, термін "залишкова група" означає будь-який хімічний компонент, що витіснений нуклеофілом в реакції нуклеофільного заміщення або в послідовності реакцій приєднання-видалення. Молекула, о що містить залишкову групу, може бути ізольована або утворена на місці (іп з) як тимчасова проміжна ланка в хімічній реакції. ко Для цілей цієї заявки, термін "аліфатичний" означає будь-яку ациклічну або циклічну, насичену або ненасичену, розгалужену або нерозгалужену сполуку вуглецю, за виключенням ароматичних сполук. бо Термін "алкіл" означає насичену аліфатичну групу, включаючи аліфатичні групи з нерозгалуженим ланцюгом (метил, етил, пропіл, бутил, пентил, гексил, гептил, октил, нонил, децил), алкільні групи з розгалуженим ланцюгом (ізопропіл, трет-бутил, ізобутил тощо), циклоалкільні (аліциклічні) групи (циклопропіл, циклопентил, циклогексил, циклопентил, циклооктил, алкілзаміщені циклоалкільні групи та циклоалкілзаміщені алкільні групи.
Термін алкіл також означає алкільні групи, які додатково можуть включати атоми кисню, азоту, сірки або 65 фосфору, що замінили один або більше атомів вуглецю у вуглеводневому ланцюгу. В деяких з втілень, алкіл з прямим або розгалуженим ланцюгом містить 6 або менше вуглецевих атомів в своєму головному ланцюзі (С4-С3 для прямого ланцюга, С 3-Св для розгалуженого ланцюга), і більш переважно - 4 або менше. Більше того, переважні циклоалкіли мають 3-8 атомів вуглецю в структурі своїх кілець, і більш переважно мають 5 або 6 вуглецевих атомів в кільці. Термін С4-Се означає алкільні групи, що містять від 1 до б атомів вуглецю.
Крім того, термін "алкіл" означає як "незаміщені алкіли" так і "заміщені алкіли", останні відносяться до алкільних компонентів, в яких заміщено водень при одному або більше вуглецевих атомах головного вуглеводневого ланцюга. Такі заміщення можуть означати, наприклад, алкеніл, алкиніл, галоген, гідроксил, алкілкарбонілокси, арилкарбонілокси, алкоксикарбонілокси, арилоксикарбонілокси, карбоксилат, алкілкарбоніл, арилкарбоніл, аіКохусагропу!ї, амінокарбоніл, алкіламінокарбоніл, диалкіламінокарбоніл, алкілтіокарбоніл, /о алкоксил, фосфат, фосфонато, фосфінато, ціано, аміно (включаючи алкіламіно, дилкіламіно, ариламіно, диариламіно, та алкілариламіно), ациламіно (включаючи алкілкарбоніламіно, арилкарбоніламіно, карбамоїл та уреїдо), амідино, іміно, сульфгідрил, алкілтіо, арилтіо, тіокарбоксилат, сульфати, алкілсульфініл, сульфонато, сульфамоїл, сульфонамідо, нітро, трифторметил, ціано, азидо, гетероцикліл, алкіларил або ароматичний або гетероароматичний залишок. Циклоалкіли вподальшому можуть бути заміщені замісниками, 7/5 розкритими вище. "Арилалкільний" компонент є алкілом, що заміщений арилом (фенілметил (бензил) ). Термін "алкіл" також означає бічний ланцюг природних або неприродних амінокислот. Термін "п-алкіл" означає прямий ланцюг (тобто нерозгалужений) незаміщеної алкільної групи.
Термін "алкеніл" означає аліфатичні групи, що можуть або не можуть бути заміщеними, як розкрито вище для алкілу, які містять принаймні один подвійний зв'язок та принаймні два вуглецевих атома. Наприклад, термін го алкеніл" включає нерозгалужені алкенільні групи (тобто, етіленіл, пропеніл, бутеніл, пентеніл, гексеніл, гептеніл, октеніл, ноненіл, ноненіл тощо), розгалужені алкенільні групи, циклоалкенільні (аліциклічні) групи (циклопропеніл, циклопентеніл, циклогексеніл, циклогептеніл, циклооктеніл), алкіл або алкенілзаміщені циклоалкенільні групи, та циклоалкіл або циклоалкенілзаміщені алкенільні групи. Термін алкеніл також означає алкенільні групи, які можуть включати атоми кисню, азоту, сірки або фосфору, що замінили один або більше сч ов атомів вуглецю у головному вуглеводневому ланцюгу. В деяких з втілень, алкеніл з прямим або розгалуженим ланцюгом містить б або менше вуглецевих атомів в своєму головному ланцюзі (тобто Со-Св для і) нерозгалуженого ланцюга, С3-Св для розгалуженого ланцюга). Більше того, циклоалкенільні групи мають 3-8 атомів вуглецю в структурі своїх кілець, і більш переважно мають 5 або б вуглецевих атомів в кільці. Термін
Со-Св означає алкенільні групи, що містять від 2 до б атомів вуглецю Ге зо Крім того, термін "алкеніл" означає як "незаміщені алкеніли" так і "заміщені алкеніли, останні відносяться до алкенільних компонентів, в яких заміщено водень при одному або більше вуглецевих атомах с головного вуглеводневого ланцюга. Такі заміщення можуть означати, наприклад, алкільні групи, алкинільні с групи, галогени, гідроксил, алкілкарбонілокси, арилкарбонілокси, алкоксикарбонілокси, арилоксикарбонілокси, карбоксилат, алкілкарбоніл, арилкарбоніл, алкоксикарбоніл, амінокарбоніл, алкіламінокарбоніл, (7 диалкіламінокарбоніл, алкілтіокарбоніл, алкоксил, фосфат, фосфонато, фосфінато, ціано, аміно (включаючи со алкіламіно, диалкіламіно, ариламіно, диариламіно, та алкілариламіно), ациламіно (включаючи алкілкарбоніламіно, арилкарбоніламіно, карбамоїл та уреїдо), амідино, іміно, сульфгідрил, алкілтіо, арилтіо, тіокарбоксилат, сульфати, алкілсульфиніл, сульфонато, сульфамоїл, сульфонамідо, нітро, трифторметил, ціано, азидо, гетероцикліл, алкіларил або ароматичний або гетероароматичний компонент. «
Термін "алкиніл" означає ненасичені аліфатичні групи, аналогічні за довжиною та можливими заміщеннями з с алкілам розкритим вище, але які містять принаймні один потрійний зв'язок та два атоми вуглецю. Наприклад, термін "алкиніл" означає нерозгалужені алкинільні групи (тобто, етиніл, пропініл, бутиніл, пентиніл, ;» гексиніл, гептиніл. октиніл, нониніл, дециніл тощо), розгалужені алкинільні групи та циклоалкіл- або циклоалкенілзаміщені алкинільні групи. Термін "алкиніл" також означає алкинільні групи, які можуть включати атоми кисню, азоту, сірки або фосфору, що замінили один або більше атомів вуглецю у головному о вуглеводневому ланцюгу. В деяких з втілень, алкиніл з прямим або розгалуженим ланцюгом містить 6 або менше вуглецевих атомів в своєму головному вуглеводневому ланцюзі (тобто Со-Св для нерозгалуженого ланцюга, - С3-Св для розгалуженого ланцюга). Термін Со-Св означає алкинільні групи, що містять від 2 до 6 атомів вуглецю. ко В основному, термін "арил" означає групи, в тому числі 5- та б-ч-ленні поодинокі ароматичні групи, що 5р Можуть містити від нуля до чотирьох гетероатомів, наприклад, бензол, феніл, пірол, фуран, тіофен, тіазол, де ізотіазол, імідазол, триазол, тетразол, піразол, оксазол, ізооксазол, піридин, піразин, піридазин та
Ф піримідин, та їм подібні. До того ж, термін "арил" означає мультициклічні арильні групи, тобто, трициклічні, біциклічні, такі як нафталін, бензоксазол, бензодиоксазол, бензотіазол, бензоімідазол, бензотіофен, метилендіоксифеніл, хінолін, ізохінолін, нафтирідин, індол, бензофуран, пурин, бензофуран, деазапурин або дв індолізин. Ті арильні групи, що мають гетероатоми в структурі кільця можуть також розглядатись як "арилгетероцикли", "гетероцикли", "гетероарили" або "гетероароматичні групи". В одній або більше позицій (Ф, кільця арильна група може бути заміщена придатними замісниками. ка Для цілей даної заявки, "ОТРА" відноситься до хімічної сполуки, що містить субструктуру скомбіновану з диетилентриаміну, де кожен з двох первинних амінів ковалентно приєднаний до двох ацетильних груп та бор Вторинні аміни мають одну ацетильну групу ковалентно приєднану згідно з наступною формулою: б5 а чаш й ос у ВЕ д де Х є гетероатомом електронодонорної групи, здатної координувати катіон металу, переважно О-, ОН,
МН», ОРОЗ2- або МНЕ, або ОБ, де Е є будь-якою аліфатичною групою. Де кожен Х є трет-бутоксигрупою (ІВи), структура може бути такою як "ОТРЕ" ("Е"-естер)
Для цілей даної заявки, "ПОТА" відноситься до хімічної сполуки, що містить субструктуру, яка є комбінацією 1,4,7-тетраазациклододекану, де кожен амін має одну ацетильну групу ковалентно приєднану згідно з наступною формулою: с о (Се) сч с «- | г) 7 ші с де Х є таким, як визначено вище. ц Для цілей даної заявки, "МОТА" відноситься до хімічної сполуки, що містить субструктуру, яка є "» комбінацією 1,4,7-триазациклононану, де кожен амін має одну ацетильну групу ковалентно приєднану згідно з наступною формулою:
Б
(ее) з ра іме) з 50 го"т 42) о Кк іме) ї х 5 о де Х є таким, як визначено вище.
Для цілей даної заявки, "ПОЗА" відноситься до хімічної сполуки, що містить субструктуру, яка є комбінацією 1,4,7-тетраазациклододекану, де всі три з чотирьох амінів мають по одній ковалентно приєднаній ацетильній групі та інший амін має нейтральнозаряженого замісника згідно з наступною формулою:
Б ст 7 де Х є таким, як визначено вище та ЕК" є незарядженим хімічним залишком, переважно воднем, будь-якою с аліфатичною, алкільною групою або циклоалкільною групою та їх незаряженими похідними. Переважний хелат о "НР"-СОЗА має В", що є -СНСНОН)СН.
В кожній з чотирьох наведених вище структур, вуглецеві атоми вказаних алкенів можуть бути віднесені до "раскропе" вуглеців, тобто атомів вуглецю головного ланцюга. Визначення "ВБОТРА" може бути використане для зазначення локалізації хімічного зв'язку в ОТРА молекулі ("ББ" для "рбаск ропе"). Використаний тут символ |се) рБ(СО)ТРА-Са означає залишок С-О, приєднаний до атома вуглецю головного етиленового ланцюга ОТРА. сч
Терміни "халатний ліганд" та "халатний компонент" можуть бути використані для зазначення будь-якого полідентатного ліганда, здатного координувати іон металу. Вони включають молекули ОТРА (та ОТРЕ), СОТА, с розА або МОТА, або будь-які інші придатні поліадентатні халатні ліганди, які будуть визначені тут в «- подальшому, які або координують іон металу, або здатні здійснити це або безпосередньо або після видалення захисної групи, або є реактивом, з придатною захисною групою або без неї, що використовуються для синтезу 00 контрастних агентів та складаються з атомів, які, по-суті, всі, в кінці кінців, будуть оточувати іон металу в фінальному комплексі. Термін "халат" відноситься до реальних комплексів метал-ліганд і зрозуміло, що поліадентатний ліганд, в кінці кінців, буде координувати придатний для медичних цілей іон металу. «
Термін "специфічна зв'язувальна спорідненість", що тут використовується, відноситься до функціональної здатності контрастного агента бути поміщеним в, утримуваним в або зв'язаним з конкретним біологічним т с компонентом в значно більшій мірі ніж з іншими компонентами. Контрастні агенти, що мають таку властивість, - ч це вищезгадані "направлені" до "мішені" компоненти. Контрастні агенти, в яких відсутні такі властивості, є » вищезгаданими "неспецифічними" або "ненаправленими" агентами. Специфічна зв'язувальна спорідненість певних груп до мішені виражається в одиницях рівноважної константи дисоціації "Ка".
Термін "релаксивність", що тут використано, відноситься до зростання однієї з двох -або 1/11, або 1/12 (ее) (тМ) кількісних МКІ-концентрацій парамагнітного іона або контрастного агента, де Т1 є лонгітудинальним або - спін-решітковим часом релаксації та Т2 є трансверсним або спін-спіновим часом релаксації протонів води або інших барвників, або спектроскопічних ядер, включаючи протони, що знаходяться в молекулах відмінних від іме) води. Вказані кількісні характеристики можуть відрізнятись, якщо контрастний агент містить різні парамагнітні ко 20 Іони. Релаксивність виражається в тМ "87- одиницях.
Термін "відкритий координаційний сайт", використаний тут, відноситься до сайту металічного іона, що в щи основному занатий молекулами води або розчинника.
Використаний тут термін "очищений" відноситься до пептидів, які відділенівід тої чи іншої природної молекули, з якою вони були асоційовані, або до хімічно синтезованих пептидів, відділених від будь-яких інших 29 органічних молекул присутніх в хімічному синтезі. Типово, пептиди розглядаються як "очищені", коли вони на
ГФ) 7095 (тобто 7095, 8095, 9095, 9595 та 99905), за вагою сухого залишку, звільнені від будь-яких інших протеїнів або органічних молекул. о Використаний тут термін "пептид" відноситься до амінокислотного ланцюга, довжиною від 2 до 75 амінокислот (3-50 амінокислот). 6о Використаний тут термін "біополімер" відноситься до природних субстанцій, які природним шляхом утворились в біологічних системах. Конкретні біополімери можуть утворюватись з використанням певного набору конструктивних субодиниць та з субодиниць, що зазвичай функціонують як зв'язуючі елементи. Як природні, так і неприродні пептиди звичайно утворюються із набору амінокислот Через амідний зв'язок між лінкерними субодиницями. бо Для цілей дійсного винаходу термін "мультимер" визначений як контрастний агент або його субодиниця, що містить принаймні два ковалентно зв'язані хелата або їх синтетичні попередники.
Використаний тут термін "природна" або "природним шляхом утворена" амінокислота відноситься до однієї з двадцяти виявлених в природі амінокислот. Природні амінокислоти, модифіковані шляхом введення мітки (тобто, радіоактивної мітки, оптичної мітки або барвників) з метою їх виявлення, розглядаються як природні амінокислоти. Натуральні амінокислоти виражаються через стандартний одно- або трибуквенний код.
Термін "неприродні амінокислоти" або "неприродні" відноситься до похідних природних амінокислот, включаючи О форми та р і у амінокислотні похідні. Відомо, що деякі амінокислоти, наприклад гідроксипролін, класифіковані тут як неприродні амінокислоти, можуть утворюватись в природі в середині певного організму або 70 окремого протеїну.
Термін "стабільність", який тут використано, відноситься до сполук, які мають достатню для виробництва стабільність і яка підтримує цілісність сполуки впродовж періоду часу, достатнього для використання або з метою зберігання для деталізованих тут цілей. Типово, такі сполуки стабільні при температурі 402 С або нижчій, за відсутності вологи або інших хімічно-реактивних умов, принаймні протягом тижня. Комбінування передбачених 75 цим винаходом замісників та перемінних є лише такими, що призводять до утворення стабільних сполук.
Для названих тут цілей, терміни "зв'язування з мішенню" та "зв'язування" відносяться до нековалентних взаємодій контрастного агента з мішенню. Ці ковалентні взаємодії незалежать одна від одної і можуть бути, між іншим, гідрофобними, гідрофільними, диполь-дипольними, пі-запакованими, водневими, електростатичними асоціатами або взаємодіями, що базуються на І ем/із кислотах.
Термін "компонент для кеппінгу" відносяться до хелатів, органічних барвників, контрастних агентів, тромболітичних або стабілізуючих компонентів. Придатними стабілізуючими компонентами є біологічно інертні компоненти, тобто такі, що не є біологічно активними.
Контраст агенти
Взагалі, даний винахід стосується контрастних агентів для магнітно-резонансної, оптичної та Га радіонуклідної томографії, що містять полімер (пептид), в якого обидві - і М-термінальна, і С-термінальна амінокислоти кон'юговані безпосередньо або через лінкерну субодиницю чи лінкер з одним із хелатів і) парамагнітного (для магнітно-резонансноГ томографії) або радіоактивного (для радіонуклідної томографії) іону металу або оптичним барвником (для оптичної томографії). Як далі тут проілюстровано, лінкер або лінкерна субодиниця можуть бути розгалуженими і це дозволяє мультиплетним хелатам або барвникам приєднуватисьдо («о
Кожного з пептидних кінців (мультимер). Сполуки цього винаходу можуть мати один або більше асиметричних вуглецевих атомів і таким чином можуть зустрічатись у вигляді рацематів та рацемічних сумішей, одиничних с енантіомерів, діастереоїзомерних сумішей та індивідуальних діастереомерів. Усі подібні ізомерні форми цих с сполук спеціально включені в дійсний винахід. Кожний стереогенічний вуглець може мати К або З конфігурацію, якщо спеціально не означено інше. Також специфічні сполуки, проілюстровані в цьому описі, можуть бути - з5 зображеними на конкретних стереохімічних конфігураціях, сполуки, що мають протилежну до довільного ее) хірального центру стереохімію, або їх суміш, також передбачені. Зрозумілим є те, що сполуки даного винаходу можуть приймати різні конформаційні або іонні форми в розчинах, фармацевтичних композиціяз та іп мімо.
Описані тут специфічні переважні сполуки також мають конкретну конформацію та іонну форму, розкрите ніяким « чином не обмежує винахід.
Нові пептидвмісні мультимери дійсного винаходу забезпечують декілька переваг як націлені контрастні - с агенти. ц 1. Сполуки можуть доставляти один або більше компонентів для кеппінга (тобто, хелатів, органічних "» барвників або тромболітиків) до мішені, використовуючи націлювання окремого пептиду, для того щоб покращити в тканині контраст, слід відмітити, частково внаслідок значної концентрації навколо мішені
Компонента, що забезпечує зображення. (оо) 2. Магнітно-резонансні томографічні МКІ агенти цього винаходу також демонструють високу релаксивність -3з при зв'язуванні з мішенню завдяки рецепторіндукованому магнетичному підсилюючому ефекту (КІМЕ), об'єднаному зі здатністю пептиду лімітувати локальне переміщення індивідуальних хелатів, коли відбувається ко зв'язування з мішенню. 3. Сполуки мають високу спорідненність до однієї або більше мішеней. о 4. З тих пір, як сполуки відносно легко синтезуються згідно з описаними тут методами та лише один пептид 4) потрібний на молекулу, більша кількість металічних іонів або органічних барвників може бути доставлена до мішені більш економно. 5. Сполуки винаходу можуть мати вищу іп мімо стабільність (довший період напіврозпаду тощо) від ослабленої метаболізмом ензимів (зниженого розщеплення пептидазами).
Ці позитивні можливості пептидвмісних мультимерів згідно з дійсним винаходом роблять їх корисними і) націленими контрастними агентами. ко Хімічна структура МК! та радіонуклідних контрастних агентів, розглянутих винаходом, може бути проілюстрована за допомогою наступної формули: 60 б5
(Спеінів)--- на. п з 70 де кожен з т, незалежно, є 1ст«10, хелат означає хелатний комплекс металу, р, незалежно, є цілим числом від нуля до п'яти; 5, незалежно, є одиницею або нулем; К 1 є бічним ланцюгом будь-якої амінокислоти, включаючи бічні ланцюги ненатуральних амінокислот; Б? є будь-якою аліфатичною групою або воднем та п є цілим числом від З до 50 включно. Почергово, ЕК" та К? можуть бути об'єднані разом до утворення кільцевої структури (в тому числі проліну та його заміщених версій). Лінкери, якщо вони присутні, можуть бути різними. 715 Найкращі для МКІ іони металів включають такі, атомний номер яких є 21-29, 39-47, або 57-83, та, найбільш переважно, парамагнітну форму іонів металів з атомними номерами 21-29, 42, 44, або 57-83. Особливо кращими парамагнітними іонами металів є вибрані з групи, що складається з сСа(І), Рейс), Ми(П та 1), Ст,
Сщі), СУ), ТБ та ІМ), Носій), Ек), РІЧ), ЕщІЇ) та Еп(І). СІ) є особливо корисним.
Відмітимо, що використовуваний тут термін "за" призначений виражати іонну форму металу гадолінію, така іонна форма може бути записана як ОСХіп), ЗОЗ, дадо і тп., без різниці, яка з іонних форм розглядається.
Для радіонуклідних гомографічних агентів радіонукліди Оу, Затв, 1, Ав, 67(За, 51сг, тар, 67 су, 167тТт, 9ви, 188Ке, 1 у, 199 у, 203рЬ та 1и1сСе є особливо корисними.
Металічні комплекси з корисними властивостями також описані. |Дивись Мити еї аї., У. Спет. бос. Спет. с
Сотт. 1993, 1116-1118). Для оптичної томографії, при якій використовуються хелати, лантаноїдні хелати, такі Ге) як Г ас), сСеції)), РІ, Мас, РІ), ЗІ), ЕЩІ), ат, ТІ, СУЦІ, Носій),
ЕІ), тт), МБ) та І (І) є придатними. ЕЩ(ІЇ) та Т(ІІЇ) є особливо корисними.
Хелати металів суттєво не дисоціюють протягом часу, за який томографічний агент проходить через тіло, включаючи час на зв'язування з тканинокьмішенню. Суттєве вивільнення вільних іонів металів в результаті може о бути токсичним, що є недопустимим. Га
В одному з втілень, що стосується вищевказаної структури контрастного агента, т є 2, п, 85, В та В? є сч такими, як визначено вище та "І іпКег тоієїу" містить: «- г) -К шу - с .
І» ню-- З о "Спеїіаіе" переважно є ВБІСО)ОТРА-а. з В іншому втіленні, що стосується вищевказаної структури контрастного агента, т є 2, п, 5, Б та Б? є такими, як визначено вище та (Пе "ІпКег тоїейу" містить: іме) з 50 нт З
Ф х
Ф) й і 60 "Спеїіаіє" може бути ББ(СО)ОТРА-СЯ.
З метою ілюстрації, один контрастний агент, охоплений дійсним винаходом, присутній нижче з різноманітними анотованими субодиницями : б5
Ствівіовз- -С3 16 інн ярої н попи н ної н 2) н тТегровло Рерйав Плід виїхи й
Шіеє Слоівіов с
МРС ди (8) 7 , де К-бічному амінокислотному ланцюгу, такому як пептид, що має спорідненність до біологічної мішені, та ісе) тхіон металу (парамагнітний для магнітно-резонанснох томографії, радіоактивний для радіонуклідної томографії с та флюоресцентний, люмінесцентний або абсорбційний для оптичної томографії).
Хімічна структура оптичного контрастного агента, охопленого винаходом, може бути проілюстрована с формулою: - то со (Орбісаі Оувіж-(окейу (Орів ; усю п , « де 1«хт«10, р, незалежно, є цілим числом від нуля до п'яти, п є від З до 50 включно, 27 є бічним ланцюгом - с будь-якої амінокислоти, включаючи бічні ланцюги ненатуральних амінокислот; Б 2 є будь-якою аліфатичною "» групою або воднем. Почергово, ВК! та К? можуть бути об'єднані разом до утворення кільцевої структури (в тому " числі проліну та його похідних). М- та С-термінальні амінокислоти пептиду можуть бути кон'юговані з оптичним барвником безпосередньо або через оптичний лінкер (р-0 або 1). Лінкерні компоненти можуть бути різними.
Оптичні барвники можуть бути органічними барвниками або придатними хелатами металів. Органічні бо барвники для оптичної томографії уже описані і включають, наприклад, флюоресцентний порфирин та - флюоресцентні фталоціаніни див. 5. Раїепі Мо.5,641, 878), конкретні матеріали див. МО 96/23524), та поліметинові барвники див. МУО 97/13490). Загальнозастосовними оптичними барвниками є флюоресцеїн, іме) родамін |див. Кої|їїта Н, еї аЇ., Апаі. Спет. 73,1967-1973 (2001)), тетраметилродамін |див. Апаї. Віоспет.
Ге 50 223,39 (1994)), та техаський червоний |див. Ргос. Май. Асай. Зсі. ОБА 85,3546 (1988)). Флюоресцеїн та люмінесцентні лантаноїдні хелати особливо корисні.
І) Мішені та мішеньзв ''язуючі пептиди
Пептидні залишки контрастах агентів дійсного винаходу можуть демонструвати специфічне зв'язування з біологічною мішенню та функціонувати як точка приєднання для одного або більше хелатів до кожного з своїх кінців. В основному, біологічні мішені присутні в низькій (тобто, мікромолярній або нижчій) концентрації та
ГФ! малопридатними для формування зображення за допомогою МК. контрастних агентів, що є гадолінієвими комплексами. Пептидвмісни мультимерні МК контрастні агенти згідно з винаходом, між іншим, забезпечують о значно вищу концентрацію агента в мішенях, так само, як вища релаксивність робить можливою томографію цих мішеней. Подібним чином пептидвмісні мультимерні радіонуклідні контрастні агенти винаходу можуть 60 доставляти більше радіонуклідів до мішеней для того, щоб в подальшому покращити відтворення зображення.
Доки не визначений конкретний механізм, думаємо, що визначення об'єктів відбувається завдяки збільшення концентрації гомографічних агентів в місці візуалізації та підвищення релаксивності МКІ контрастних агентів в зв'язаному стані Через КІМЕ ефект, а також лімітуванням локальних переміщеннь індивідуальних хелатів жорстким зв'язком з пептидами. 65 Мішенями для контрастних агентів можуть бути будь-які компоненти організму, клітини, органів або тканин та їхніх компонентів відповідно. Переважними мішенями являються такі, що є діагностично та терапевтично суттєвими, тобто такі, що асоціюються з хворобливими станами. Особливо переважними мішенями є такі, що асоційовані з рідинами організму, зокрема асоційовані з кров'ю, плазмою, лімфою та рідинами центральної нервової системи. Решта переважних мішеней є протеїнами та рецепторами, кожен з яких присутній у високій концентрації або має велику кількість точок зв'язування з центральним лігандом. Серед таких включених мішеней-протеїнів є ензими та глікопротеїни.
Людський сиворотковий альбумін (НА) та фібрин є придатними мішенями для МК контрастних агентів. Для томографії кровоносної системи, сиворотковий альбумін є переважною мішенню. Поскільки Н5ЗА присутній у високій концентрації в плазмі (приблизно 0.бтМ) та зв'язує широкий масив молекул з достатньо високою 7/0 бпорідненістю, то він є переважною мішенню серед протеїнів плазми для кровоносносудинних контрастних агентів. НБА є особливо переважною мішенню для кардіоваскулярної томографії; |див. ). 5. Раїепі Арріїсайоп
Мо. 08/875, 365, йеа Ошу 24, 1997, та МО 96/235261.
Для виявлення тромбів, фібрин є переважною мішенню тому що він присутній у всіх згустках та може бути виявлений без поміх з боку нормального тромболітичного процесу. Додаткові деталі стосовно 7/5 Мішень-приєднаних компонентів, що включають фібрин-зв'язані пептиди, наведені в (РСТ Раїепі Арріїсайоп УУХО 01/091881.
Решта протеїнових мішеней включає, але не обмежується, альфа глікопротеїнову кислоту, фібриноген, солаген, плателет СРІЇБЛІа рецептор, хемотаксичний пептидний рецептор, соматостатиновий рецептор, рецептор вазоактивних інтестінальних пептидів (МІР), рецептор вивільнення бомбезин/гастрінового пептиду та інтегриновий рецептор.
Придатні для використання пептиди винаходу описані вище і включають такі, що здатні специфічно зв'язуватись з мішенню. Включають такі пептиди, як КОЮО-вмісні пептиди націлені на плателет ОРІИБЛІІа рецептор при виявленні тромбів, хемотаксичні пептиди націлені на білі кров'яні клітини при виявленні інфекції/запалення, Осігеойде та Р-829 пептид націлені на сомастатинові рецептори при виявленні сч об новоутворень, вазоактивні інтестінальні пептиди (МІР) націлені на МІР рецептор при виявленні новоутворень, бомбезинові аналоги націлені на рецептор вивільнення бомбезин/гастрінового пептиду при виявленні і) новоутворень та КОО-вмісніпептиди націлені на інтегрін сурЗ (вітронектиновий рецептор) при виявленні новоутворень.
В принципі, будь-які пептиди із спорідненістю до біологічної мішені можуть бути використані в контрастних «о зо агентах даного винаходу. Пептиди можуть бути лінійними або циклічними. Звичайно, нерозчинні ліпофільні пептиди вважаються непридатними для фармакологічного застосування, але такі пептиди можуть бути сч придатними згідно з винаходом тому що додавання хелатів гідрофільних металів до двох кінців пептиду може Га підвищувати розчинність. Для зручності синтезу і з огляду на економію коштів найзручніше, щоб пептиди мали від З до 50 амінокислот (тобто від З до З0, від З до 20, від З до 15, від 5 до 30, від 5 до 20, від 5 до 15, -
Від 10 до 12 амінокислот завдовжки). Ге)
В направлених пептидах згідно з винаходом може бути використана велика різноманітність амінокислот.
Придатні амінокислоти включають природні і неприродні амінокислоти. Амінокислоти з великою кількістю захисних груп призначені для безпосереднього використання в твердофазовому синтезі пептидів є комерційно доступними. Недодачу до двадцяти найбільш загальних кислот, що зустрічаються в природі, наступні неприродні « амінокислоти або амінокислотні похідні можуть бути складовими націлінех пептидних груп винаходу с (загальнприйнятні абревіатури подані в круглих дужках, див. Фіг.1: р-аланін (-Аіа), у-аміномасляна кислота ц (САВА), 2-аміномасляна кислота (2-Ави), о.р-дегідро-2-аміномасляна кислота (0 А-АВи), "» 1-аміноциклопропан-1-карбонова кислота (АСРС), аміноізомасляна кислота (АБ), 2-амінотіазолін-4-карбонова кислота, 5-аміновалеріанова кислота (5-Ама), б-аміногексанова кислота (бАйх), 8-амінооктанова кислота (8-Аос), 11-аміноундеканова кислота (11-Ацп), 12-амінододеканова кислота (12-Адо), 2-амінобензойна кислота (ее) (2-АБзг), З-амінобензойна кислота (3-АБзг), 4-амінобензойна кислота (4-Аб?г), - 4-аміно-3-гідрокси-б6-метилгептанова кислота (біайіпе, За), амінооксиацетилова кислота (Аса), 2-амінотетралін-2-карбонова кислота (Айе), 4-аміно-5-циклогексил-З-гідроксипентанова кислота (АСНРА), ко пара-амінофенілаланін (4МН2-Рпе), біфенілаланін (Вір), пара-бромфенілаланін (4-ВІ-Рпе), або юю 50 орто-хлорфенілаланім (2-СІ-Рпе), мета-хлорфенілаланін (3-СІ-Рпе), пара-хлорфенілаланін /(4-СІ-РНе), мета-хлортирозин (3-Сд-Тук), пара- бензоїпфенілаланін (Вра), трет-бутилгліцин (Тіє), циклогексилаланін (Спа), 4) циклогексилгліцин (Спо), 2,3-диамінопропіонова кислота (Орг), 2,4-диаміномасляна кислота (ОБи), 3,4-дихлорфенілаланін (3,4-Сі2-Рпе), 3,4-дифторфетлаланін (3,4-Б2-Рпе), 3,5-дийодотирозин (3, 5-12-Тую, орто-фторфенілаланін (2-Е-Рпе), мета-фторфенілаланін (3-Е-Рпе), пара-фторфенілаланін /(4-Е-РНе), мета-фторотирозин (3-Е-Туг), гомосерин (Нвге), гомофенілаланін (Ніє), гомотирозин (Ніуг), 5-гідрокситриптофан (5-ОН-Тгр), гідроксипролін (Нур), пара-йодофенілаланін (4-ІРпе), З-йодотирозин (3-І-Туг), індолін-2-карбонова о кислота (Ідс), ізоніпекотинова кислота (Іпр), мета-метилтирозин (3-Ме-Туг), 1-нафтилаланін (1-Ма!), 2 іме) нафтилаланін (2-Маї!), пара-нітрофенілаланін (4-МО2-РНпе), З-нітротирозин (3-МО2-Туг), норлейцин (Міе), норвалін (Мма), орнітин (Огп), орто-фосфотирозин (Н2РОЗ-Туг), октагідроіндол-2-карбонова кислота (Оіс), 60 пеніциламін (Реп), пентафторфенілаланін (Е5-Рпе), фенілгліцин (Ро), опіпеколінова кислота (Рір), пропаргілгліцин (Рга), піроглутамінова кислота (роїІш), саркозин (Заг), тетрагідроізохінолін-3-карбонова кислота (Тіс) та тіазолідин-4-карбонова кислота (Тіоргоїїпе, ТИ). Стереохімія амінокислот може бути виражена додаванням до вищевказаних назв або абревіатур позначень "ОО" або "а" або "І" або "1" відповідно.
Недодачу, о/М-алкільовані амінокислотай можуть бути застосовані, так само як і амінокислоти, що мають 65 амінвмісний бічний ланцюг (такі як І уз та Огп), в якому амін ацетильований або заміщений на аліл.
Пептиди винаходу можуть мати основну формулу Р"-Ж7-Х.7-І" (5ЕО ІЮ МО 1), в якій
Р" є проліном або його неприродним похідним;
У" є тирозином або його неприродним похідним;
Ху." є гліцином або аспарагіновою кислотою, або неприродним похідним гліцину та аспарагінової кислоти;
Ї" є лейцином або його неприродним похідним. Типово, де один з перерахованих Р", У", Хі" є неприродним похідним відповідної амінокислоти. Х/" може бути гліцином або аспарагіновою кислотою, І" може бути лейцином і один з перерахованих Р" або У" може бути неприродним похідним, таким як гідроксипроліном або тирозином, заміщеним в положенні З Е, СІ, Вг, І та МО».
Сполуки винаходу також можуть мати основну формулу 70 Х1-Хо-С-Р"-Ж7-Х 3-І -6-Х/-Хв-Хе (ЗЕО ІЮ МО 2), в якій
Р" є проліном або його неприродним похідним;
У" є тирозином або його неприродним похідним;
Х, є МУ, М, Е, 5, Вір, Нх, Орг, Су, би, Ай, Нге, 3-Раї, 4-Раї, Оораме2, пТуг, аму, анг, (3/4 та Х(3У), де
Е(3/4У) є фенілаланіном заміщеним в одному з положень З або 4 компонентом, вибраним з групи, що складається 75. 3 СН», СЕз, МНо, СНЬОМН», СМ, Е, СІ, Вг, І, ЕС та Оте. М(3") може бути тирозином, заміщеним в положенні З компонентом, таким як РЕ, СІ, Вг, І та МО»;
Хо може бута Е, Н, аЕ, 5, Н(Ваї), 2-Раї, Орг та ТИ;
Хз може бути О та 0;
Ху може бути Н, Е, М та МУ;
Хь може бути !, ЇЇ, М, М, Вра, ВаїЇ, Нте, Міе, Тіе, Ммаї, Рпд, Спа, Та, Ра, ТИ, 4-РаІ та Р(3/4У), де
Е(3/47) є фенілаланіном, заміщеним в одному з положень З або 4 компонентом, таким як СЕз, Еї, іРг, ОМе;
Хе може бути М, СО), І, Ї та М або Хе відсутній. Типово, один з наведених Х., Хо, Хв, Р" та У" є неприродним похідним амінокислоти. Наприклад, Р" може бути проліном та У" може бути неприродним похідним тирозину, заміщеним в положенні З компонентом, таким як Е, СІ, Вг, | та МО». Альтернативно Р" може бути неприродним сч ов похідним проліну, таким як 4-гідроксипролін та У" може бути тирозином. Такі пепти можуть утворювати дисульфідний зв'язок за відсутності умов для відновлення. (8)
Інші приклади пептидів, що можуть зв'язувати фібрин, відповідають основній формулі
С-Р'А-У"-Х.-І-С (ЗЕБЕО Ю МО:3), в якій Х. є гліцином або аспарагіновою кислотою, Р" є проліном або його неприродним похідним 4-гідроксипроліном; У" є тирозином або його неприродним похідним, заміщеним в Ге зо положенні З компонентом, таким як Е, СІ, Вг, | та МО». Типово, що один з названих Р" або У" є неприродними похідними відповідних амінокислот. Наприклад, пептид може мати наступну послідовність: М/-аЕ-С-Р. (4-ОН) -ї с (3-СІ) -6-1-6-МУ-І-0 (ЗЕО 10 МО:4), У-аЕ-С-Р. (4-ОН) -У (3-С0-5-І-6-У-І-9 (ЗЕО ІЮ МО:5), У-аЕ-С-Р (4-0Н) М с (3СІ)--І -С-МУ-І-О (5ЕО 10 МО:6), МУ-дЕ-С-Р. (4-ОН) -У (3-СІ)-0-І -С-У-І-О (ЗЕО ІЮО МО:7), МУ-ДЕ-С-Р. (4-ОН) -У (3-СО-0-І-С-МУ-І-О (ЗЕ 10 МО:8), У-ав-С-Р (4-ОН) -У (3С1)-0-І-С-м-І-О (ЗЕО ІЮО МО:9), У-ЯЕ-С-Р (4-0) М 0-7 (3-С1)-0-І -С-МУ-І-З (5ЕО 10 МО:10), МУ-аЕє-С-Р. (4-0ОН)-У. (3-С1)-0-І -С-М-І-3 (ЗЕО 10 МО:11), Е (4-ОМе) -Н-С-Р со (4ОН) -мМ (3-С1)-0-І -С-Н-І-Ї. (ЗЕО ІЮ МО:12), М-Н-С-Р (4-ОН) -М (3-С1І)-(05-І -С-МУ-І-З3 (5ЕО 1Ю МО:13), М/-ДЕ-С-Р-У (3-С1)-6-І-С-МУ-І-О0 (ЗЕ 10 МО:14), МуУ-дЕ-С-Р. (40Н)-У-05-І-С-МУ-І-О (ЗЕБЕО 10 МО:15) та Б-Н-С-Р-(4-0Н)-ї (3-СІ)-0-І -С-Н-І-Ї (5ЕО ІО МО:16). Такі пепти можуть утворювати дисульфідний зв'язок за відсутності умов для відновлення. «
Згідно зі стандартними методами синтезу, такими, як розкрито в (МО 01/09188 або у УМО 01/087121, пептиди, з с що мають послідовність, передбачену в Таблиці 1, були синтезовані (структура підтверджена . масспектрометрично), циклізовані та оцінені за спорідненостю до ОС(Е) фрагменту фібрину. Кожен пептид має и?» ка«коум ("-" вказує на зрізаний). Таблиця 1. (ее) - ко з 50 4) (Ф) ко бо б5
Таблиця кам) хв х, х с Ран Ух ш: ьсх хх Ж
ЩЕ - (Ж - --4-А 5 - 5 ----.-3 -- ле. 0 н Со Нур УЛ ВО ТС НО вір Й
ОМ В І! Со був чав в сно ває
ЧЕ н со нур ха) ро б оно га оме
ФІ ЕЕ и бо Був У) БО В ССНОо вбОоМе) -10 К(Е5) н со ввю/р/ююв ХО) в С НО 1 дО є НН с о Був чаю сні І. «1 Е с о Нв хОсрс ус ж і о щолот ш- 6 Бр ас Во мі а -02 ЕЕ н с хх хаосу сні ї «02 (26 Ме) н сі ню хо в с Мо і1 - Е С Бр5д; хаос ве сНнО1 о «па п БЕ с Бю УС вс Ж о - У Е «с Нур УБСВО с У І 5 «02 ж Е с Тв У0СВО Тс ЕЕ 1 о тн вро с? ву жав о Т.Є ші а «2 н со Ну ХВ оп Є НІ 1. що Е с БУ б 16 мі а 507 н Со був У ОО С ОН с пузі -2 ЕЕ н Со обрв ха Зо с но Р «02 н сі Ню хбВ рос оно вОоме) 02 Н со Нув хо бої Є аварі -02 5 пЕ с Був хара Тс Ж 1 о «3 Ж Е бо щроУуасс с хі о ах Е со вв о тасуб вс ж і о «03 ЕЕ їв обо тр жна Вес ж і о «3 Е Нн пов У п о гсн 1 І. «03 Е н С о нпую ча) ою Тс НОСІ І. -1 н с, нт У по ро Вра с
А В н сб не Уубсьс пс ні 1. - я) н ЄВУ проБсоноі г. о -ла н Е с. Ну о асо ТС НО о - БА ОМег) н с НБУ рОБПСсНог І. «04 ЕЕ н со Ну ХО) о 1. Є Вра «ВА лі н с ув У) пос ної -05 н со Мур УСОВЕ ІТ Є НІ ь -5 еЕ со авр убаа сом 1 о (Се) щ-5 н сов асп ам С НО, ь -5 ЕЕ н со їв у вп вснНні і. с 0.5 Ні ІН с Нурь У в ьсн і і, «05 Вір н соя У пхлсні М се «ка ж Е с Б У б ьсмі о -05 БАОМе) СЯ со бЧ5урр У) Во МС Но - 5 ЕЕ н Со Нур УЛ) мо. С Ра с - . а (ее) - ко ко 4) ко бо б5 кас(м) хв. Хі хі С РОВІ у» х сх, хх Хе 5000 НЕ). «01 ЕЕ Н со Нур Уб-) 0 її. С Но Вір Щ 501 В Нн с о Нур ж рос оно ВА) «1 ЕЕ Нн с Ну хбЮ о с оно каоМме то «01 ЕЕ чн со Ббу/юр У0-В ро. с сно кОо-оМе «041 Е(Е5) н с Нур У0-5 р с ні «01 ЕЕ Нн с вВрюрд 350 рР ЬСсСН і ї. «У Е С Б/5д УС) о 1, С Ж і о -02 т РЕ С о Нур х3-с) 0 11 М І о 502 Е н с Р УЗСВОЮ ДС НІ ї. -2 ХОбМе н Сі р У) р о Дені -02 Ж Е с Ну УбсЬОо сні о 02 0-Е 0-Е Со НУ о УО-С) Об І.С М Іі о хо? Х Е со Ную У0СсдДО Тс ХУ і о 02 У Е сС о Ну хХОС)О СЕ І о код Н рР-Е с! Ну УСС с Ж і а сч -02 н с Ну т В СНІ І, о «02 Ж В с Р У о см і о 502 Е н С о нюЬр хо ЮО Бс Ноопмаі «02 ЕЕ н с о Ну ХВО Р с Но Рі со зо «02 ЕЕ Н С: Бюро жХб-О ВО Тс но во-Ме) «02 н Со вну У) 0 0 1, «РАІ с «02 5 БЕ С Нур ХО) а С М 1 о сч «3 Ж Е С Ну УЗСВОо І, с ХУ 1 о - зв -3 Ух Е С ну ас) с с мі о со «03 ЕЕ п-Е Со Ну Ус) с М І о «03 Е Н сов хх р сн і І, «03 Е Нн Є ню УЮ 0 С НОІ1 І, « ю «3 ЕЕ н с, Нт х р о Бен Вра - с «0А ЕЕ н с БНдррд 5с)с с Ні І. з» -0А щ(Вя) Н с Р х р сні ї, " «А Н Е с. Бу УЗСсС)О Іс Ні о) 18 «04 КАОМе) н с Бур У р ІТсн і І, со -4 ЕЕ Із Со Ну У 0 1. С Вра 1 «04 ла Нн с Н/рд х8- п ЬСсС НІ шк -5.5 ДЕ н с Жю/юрї У0С)УвЕ БсС Ні і. о «0.5 ЕЕ Е с Бур УВСсВ о С м І о во 70 «0.5 Е н с: Ну У(3сО2МаЬ с Ні І,
Ф «0.5 ЕЕ НС Ну У Р Бен і І. -5 НЕ н с ну х р сні І, «0.5 Вір Нн с НУ У р Бен і І. 29 «05 Ж Е с й сьтьстм 1 о
Ф) -9.5 К(А-ОМме) ж с Ну х03 р с ні о -05 Е г снуд УА) 0 0 1. С оті бо б5 и -
КканМ) І ув. х, х, Сб ВАН) т» Х, 1. Сх, х, Х.
ЮНІ) ' х1 БАОМг) Нн с Ну ччВЮ Сн І 1, 5-01 0 (8-ОМе) | є! б тур хОсСВБ СОН «ві вКаоме НН с ню ха юс оно Вра 70 «А ЕЕ н І зї55/3; х0) р осно не «01 ЕЕ н со ур ЗВ 0 0 ЬсС Нова 501 УЗ) н со ну їх ОВ СН і «1 У п-В с врюю УОСсВОо с жі о т Пептиди також можуть мати основну формулу С-0-У-У-5-Т-0-Х40 (ЗЕО ІЮО МО:17), де Хо є п(ідецил)б, п(4-РиВшю, Меї, Вра, Вір, Ме-Вір, Р(47, Р(3-Ме), Р(З,4-дифторо), Ат, Ніє, М (3,5-дийодо), РЯ, 1Маї, аїМаії, та Меї, де Е (47) є фенілаланіном, заміщеним в положенні 4 компонентом, вибраним з групи, що складається з ЕЇї, СЕз,1 та іРг. В одному з втілень пептид може включати додаткові залишки Хо, Р" та/або Х.4, що забезпечується основною формулою С-0-У-У-(05-Т-С-Х410-Х44 (ЗЕО ІЮ МО:18) або Х./-Р"-С-0-М-М-(05-Т-0-Х 10-Х 11 й й ж й т (ЗЕБЕО ІО : 26), де Хі. є будь-якою природною або неприродною амінокислотою, Р" є проліном або його неприродним похідним та Х.; є О, а0, ВО, Іпр, Мір, Ме-О, Сор або Стр. Наприклад, пептид може мати наступну амінокислотну послідовність: І-Р-С-0-У-у-5-Т-С-пі(децил)є-4О (ЗЕО ІЮ МО:19), Г-Р-С-0-у-у-5-Т-С-пі(децил)С-О (ЗЕБЕО І МО:20), ІГ-Р-С-0-уУ-у-5-1-С-ВірО (5ЕБО 10 МО:21), ІГ-Р-С-0-У-уУ-5-1-С-Вір-40 (ЗЕБО ІЮ МО:22), сч ря І-РєР-С-0-уУ-Ж4-5-ТСО-МеіІ-Іпр (ЗЕБЕО 10 0 МО:23), І-Р-С-0-Ж-У-5-1-С-Ме!-Стр (5ЕБЕО 10 МО:24) або
Г-Р-С-0-м-уУ-65-Т-С-МеВір-О (ЗЕО ІЮ МО:25). о
Пептиди, що мають формулу ЗЕО ІО МО:26 були синтезовані (структура підтверджена масспектрометрично) згідно зі стандартними методиками, такими як наведено в (МУО 01/09188 або іп УУО 01/087121, та оцінені за спорідненостю до ОД(Е) фрагменту фібрину. Кожен пептид має Ка«10уМ ("-" вказує на зрізаний). с '
Таблиця 2, сч с «-
Х х х г)
Ї, пОесу В; і ші с Її Ме. Тр . » - : І. Вір із; 5 Ї, Вів а (ее) ч а Ї, Ме-Вю р ю 1, Меї, Стр « т І. Вір 18; 42)
І, і, р
Са Ві В;
Ф) іме)
Здатність пептидів зв'язувати таку мішень як Н5БА або фібрин може бути проаналізована знаними бо Методиками. Наприклад, спорідненість пептиду до фібрину може бути проаналізована, використовуючи ЮОС(Е) фрагмент фібрину, який містить субодиниці в 55КО (фрагментЕ) та 190КО (фрагмент 00). Фрагмент ОО може бути оброблений біотином та імобілізований за допомогою авідину на твердому субстраті (птийі-меї! ріа(е).
Пептиди можуть бути інкубовані з імобілізованим ОД(Е) фрагментом в придатному буфері та утворення зв'язку може бути виявлене, використовуючи знану методологію. |ІДив., наприклад, УУО 01/091881. 65 М- та С-термінальні лінкерні субодиниці та лінкер
Якщо присутні, лінкерні субодиниці та лінкери використовуються для ковалентного приєднання кеппінгових компонентів таких, як хелати, тромболітики та інші групи до обох кінців пептиду. Залишки лінкерних субодиниць можуть (ї) конвертувати функціональність або С-термінальної карбоксильної функціональної групи в амінофункціональну групу, або М-термінальний амін в карбоксильну функціональну групу; або (ії) зберігати спейсерний компонент або групу між пептидними кінцями і лінкером, якщо він присутній, або кеппінговою групою.
В одному з втілень, пептид може реагувати з лінкерною субодиницею до утворення модифікованого пептиду, що має С-термінальну функціональну аміногрупу та М-термінальну функціональну аміногрупу. В іншому втіленні, пептид може реагувати з лінксерною субодиницею до утворення модифікованого пептиду, що М-термінальну функціональну карбоксильну групу та С-термінальну функціональну карбоксильну групу. Ще в іншому втіленні, пептид може бути синтезований з С-термінальної лінкерної субодиниці, що є приєднаною до полімеру, внаслідок відщеплення пептиду від полімеру продукується пептид, що має С-термінальну функціональну аміногрупу. Згідно з ще одним втіленням, лінкерні субодиниці можуть бути використані як спейсерні групи та не змінювати функціональність термінальних груп. Лінкерні субодиниці можуть мати мультиплетні функціональні групи для приєднання лінкерних компонентів або компонентів для кеппінгу. Можуть бути використані різноманітні типи реакцій, включаючи ацилювання, відновлювальне амінування, реакції нуклеофільного заміщення, утворення сечовини, утворення тіосечовини та хемоселективне зшивання хімічно кон'югованих лінкерних субодиниць та пептидів, лінкерів та/"або компонентів для кеппінгу. Однією з переваг застосування лінкерних субодиниць є утворення однойменних функціональних груп пептиду, таким чином полегшуючи подальший синтез.
Лінкерні компоненти можуть бути використані для ковалентного приєднання одного або більше компонентів 2о для кеппінгу до пептидних кінців. Лінкер може бути розгалуженим або нерозгалуженим та може містити багаточисельні функціональні групи для приєднання попередника хелату або хелату. Хімічна будова лінкера може впливати на фізичні та фармакологічні властивості контрастного агента, такі як спорідненість, стабільність час напів-виведення з крові, релаксивність та зв'язування з протеїнами плазми. Лінкери можуть бути заміщені алкільними, арильними, алкенільними або алкільними групами. Лінкери, якщо вони присутні на сч ов Кожному кінці, зазвичай є відносно невеликими та жорстко закріпленими за МК! контрастними агентами.
Наприклад, лінкер може мати молекулярну вагу меншу ніж приблизно 350 (тобто, меншу ніж приблизно ароці і) 200).
Приклад С-термінального залишку лінкерної субодиниці і С- та М-термінального лінкеру проілюстрований наступною структурою: «о е с с «- ііпкег Шпкег зибипй со 1 «
С і - ч еКит '
І» ;
С-термінальний карбоксил пептиду може бути конвертований в амінофункціональну групу з лінкерною субодиницею (диаміновий Зупіоп) до утворення пептиду, що має амінофункціональну групу на кожному своєму (о) кінці, до якого може бути приєднаний лінкерний компонент, що залишився. Прикладами модифікованих пептидів - з С-термінальною функціональною аміногрупою є: іме) іме) 4) іме) 60 б5 м о 2 мн, й т пай вжи т
Виакає зибипйз .
Й пи н. РЕК М п нн. нн с " п: й пульш ві й и аль я
М--Рерійіє Мн, о н сч " сч де п-1 до 4.
Багато діамінів С-термінальних лінкерних субодиниць можуть бути легко отримані з твердої фази полімеру: -- е со
РО-РЕВТТН 8 « ря (Я чик зані - с
У Мн, (ее)
Наступні полімери (К) є комерційно доступними з Мома Віоспет: - іме) з 50 42)
Ф) іме) 60 б5 с чі н:-
ВК
70 ж п-2,3,4,5,6,7, 8, 9, 0, 12 с о
Н. (Се) ра сч
НН. с н «- | , г)
МН. ще « н ші с ск з
НН о 7 На ит ми іме) со вколоти 42)
В деяких випадках, наступні лінкерні субоднниці можуть бути застосовані як спейсерні групи з
М-термінальою функціональною аміногрупою:
Ф) іме) 60 б5
ЕХ є ц Ів ни ів 0 в , ви Хв " ' на од , о І
Ів вай ів ниви М. лР-ів в
І; . о , в би апа вн ів 7 75 де "Вазе" є пуриновими або піримідининовими основами ("Ад'"-аденозин, "Си"-гуанозин, "Тп"-тіамін, "Су"-цитозин) та "ГО" є залишковою групою такою, як ОН, складний ефір, галогенід або ангідрид.
Крім того, сМ-алкільована амінокислоти може бути застосована так само як і амінокислоти, що мають аміновмісні бічні ланцюги (такі як уз та Огп), в яких амін адцильований або алкільований як в наступних прикладах: о о А . о п-4й нм я ) ни Іо н п п сч
Нам нм. ов 16 Ів й й (о) о На о о (Се) сч рий в-х нм се) см "М ) -
Нм п нм ів » іє НМ. ок о щі нм -- о ; « 20 де п незалежно є цілим числом від 0 до 3; К є аліратичною або ароматичною групою; та б є залишковою -о с групою вибраною з -ОН, складного естеру, галогеніду та ангідриду.
Ще більше лінкерних субодиниць включають наступне: ;» ів Кк о й со п чу ів Мне - о п п іме) з 50 42) шо й ди му я ів А п 0 М ай нан лою
І о г Кк з о 1 де п незалежно є 1 або 2 ; К є аліфатичною або ароматичною групою; та І б є залишковою групою вибраною 60 з -ОН, складного естеру, галогеніду та ангідриду.
Приклади лінкерних компонентів, які застосовуються при стратегії конструювання амідних зв'язків в таких молекулах, що мають дві термінальні аміногрупи, включають наступні: б5 о о іс
Я: оче п пу а в В ра В ие и о о о то І в ж вк мая
Мине "ве т п о
Мо п » де т є цілим числом від 1 до 4; п є цілим числом від 0 до 4; б є залишковою групою; і К' та К" незалежно вибирають з групи, що складається з водню та з хімічної захисної групи. сч
Лінкерний компонент також може мати розгалужені точки для приєднання ніж двох хелатів. Наприклад, коли дотримуватись стратегії конструювання амідних зв'язків, лінкер, який включає карбоніл із залишковою групою І б і) (наприклад, карбонова кислота або складний ефір), та три або більше захищених амінів можуть реагувати з пептидним аміном з утворенням молекули, яка матиме три або більше термінальних аміни. Наступні карбоншвмісні лінкерні реагенти можуть бути придатними для введення трьох або більше функціональних Ге зо аміногруп: с с 1 1 в т" а в в - - р вк ?; . г) мед Я в - с . що о со ' зве в т в в ре р! ' а "я в т, іме) ко 20 де Гб є залишковою групою (тобто, -ОН, складним естером, таким як пентафторфенол (Рір),
М-гідроксисукцинімід (МН), натрієва соль М-гідроксисульфосуциніміду (МН5З5), 2-тіоксотіазолідін-ліл та с гідроксибензотріазол (НВТ); і ЕК та КБ? незалежно вибирають з водню та хімічної захисної групи (тобто, Вос,
Етос, СВІ, і-бутил, бензил та аліл).
В інших втіленнях, функціональні аміногрупи при М-термінальному кінці пептиду можуть бути конвертовані в 99 М-термінальну функціональну карбоксильну групу шляхом реагування з ангідридом циклічної кислоти (лінкерний
ГФ) субодиничний компонент)таким чином утворюючи модифікований пептид з М-термінальною функціональною юю карбоксильною групою: 60 б5
Га че к ц іептіпаі сепюокуєве /
Приклади інших лінкерних субодиниць, що можуть бути використані при конвертуванні М-термінального аміну в функціональну карбоксильну групу включають: .
Вр десСсоОн - І с ї (8)
МН-Рербде-СО
Блкег вибили з о сч с ча їй
НО ІнН-Реріаа СО, кі ч, . о м « - с з и ' и? де К будь-якою аліфатичною або ароматичною групою.
Згодом, обидва термінальні карбоксилати у вищенаведених прикладах можуть одночасно прореагувати з бо аміногрупою лінкерного компонента, як продемонстровано нижче з утворенням попередника агента для - магнітно-резонансної томографії. В цьому прикладі попередник агента для магнітно-резонансної томографії є пептидною молекулою, яка є похідним, утвореним внаслідок приєднання лінкерів до обох кінців через амідний де зв'язок: з 50 4) іме) 60 б5 но, Ме ; «2 в Ям о МНо-Реріде-СОЬнН 1-2
МВ і 1 в'кем, 1-2»; мк м мн -ї , р МнН-Реріа я А 1 м'я
Специфічними прикладами додаткових лінкерних компонентів, використовуваних для одержання попередника МР томографічних агентів, що закінчуються двома карбоксилами, є: с у не ) (8) т І я нк" а я, А ЕЕ М (Се) с й у ) 7 т п «-
СО ни Кк со г) обГ нау ак з с де кожне т є цілим числом від 1 до 4 включно; п, незалежно, є цілим числом від 0 до 4 включно (п-1 до 2) :з» та К є воднем або придатною хімічною захисною групою такою, як метил, етил, бензил або трет-бутил. В цих прикладах, при тнаступному приєднанні лінкерних субодиниць, захисні групи можуть бути видалені і хелатний або попередник хелатного компонента можуть бути приєднані шляхом стандартних методик, наприклад о утворенням амідних зв'язків.
Якщо дотримуватись стратегії конструювання амідних зв'язків в таких пептидних молекулах, що закінчуються - двома карбоксильними групами, то наступні лінкерні реагенти можуть бути придатними для введення трьох або
ГФ більше функціональних аміногруп: де) з йй че Саву ; й т ) » є у він вит » че Мн, й ; іме) ' де В! та В2, незалежно, є воднем або хімічною захисною групою такою, як О5, Вос, Етос, СВІ, трет-бутил, бо бензил та аліл.
Лінкерні стратегії, які включають утворення амідних зв'язків, використовуються тому, що вони типово є такими, що сполучаються з захисними групами на пептиді. Як зазначено вище, пептиди, лінкери та лінкерні субодиниці можуть бути ковалентно приєднаними один до одного шляхом утворення інших типів зв'язків (нуклеофільне заміщення, відновоюване амінування та утворення тіосечовини, наприклад). 65 Лінкери також можуть впливати на властивості контрастних агентів такі, як спорідненість, фармокінетичні властивості, стабільність іп мімо та релаксивність.
Альтернативно, ковалентний кон'югат, що містить обидва і лінкерний компонент, і хелатний компонент або попередник хелатного компонента можуть реагувати безпосередньо з пептидом з придатною термінальною функціональністю. Одим з прикладів такого ковалентного кон'югату, здатного реагувати з термінальною функціональною карбоксигрупою, є:
Є інінін нині пінні У лих
Нікег | мая? 0 Спеівіе ресизог
Е І
І з
Я ; С ї к м , ,
І ь
Сівіке МІ! ; ргеситог ; ;
НУ ? МА ри нави ооо й б ,
НЕ -і ЯЕанисюянняня? з Ко; ' , ! і з з -й
Й Н
;
Н є » ( і з ще н р лін ма пр чую мчав чи я як й се » о де п-! до 4, та БК", БК, КЗ, Кк"? та КУ, незалежно, є ацетатною групою, ацетамідною групою, або ацетоксигрупою.
Інший приклад такого ковалентного кон'югату має наступну структуру: «со
Пліс см с
Спеівів ресіту - ти с т, аййвіннннннних Ствіче угеситої о ; і « ! м М. хз ' ' | ТЕ І з ; І! і с ; в Р ! . | ! ' ! що ' і | Ї
Н . ' І. ік! ненні чинни (ее) , - 1 юю де В", В, ВУ, 27 та ВУ, незалежно, є ацетатною групою, ацетамідною групою або ацетоксигрупою.
Приклад ковалентного кон'югату, використовуваного для конвертації модифікованого пептиду з їмо) функціональними карбоксильними групами на обох кінцях в попередник томографічного агента має наступну
Ф структуру: іме) 60 б5 в чаш н
Но о с о уп тож(снь» Те)
Й сч
ХМ со Й сен СОХ(СН»)з (СН. - г)
Приклади ковалентних кон'югатів, здатних до реагування з функціональними аміногрупами модифікованого пептиду, є: « рони ие З с І я Стеіме ргесивог . Наког і , :» : ь
Є ' ! 4 ча и я | , що Спеівіе ' ресизог ? - | а ЖИ СМ ке сатищр- др ри Зробив ше В ре шльщь
Н щі: я з б...
Ф ' і
І г.
КЕ Н і .
Н ' , є ! ' (Ф) ік ; др чи ши ША ре ие б іль де шко те парах ко » 60 де ГО є залишковою групою, п-1 до 4, та В", К2, ВЗ, К7 ії 5, незалежно, є ацетатною групою, ацетамідною групою або ацетоксигрупою, та б5
Спеідіе ресивог Шикег в лк . пнпнннванняк. зву анти Стеїаве ресжтзог й КІ і в ' р, ' .' і вен. М ра яв! 70 , ІН 1; І , І Н ІЗ
І і ! зі , : ь , І и ' І ' і ! ! ; пай ' І ' ня пау я ттня тва 2... з де ГО є залишковою групою та 2", 2, 23, В і 25, незалежно, є ацетатною групою, ацетамідною групою або ацетоксигрупою.
Особливо корисним є ковалентний кон'югат для синтезу мультимерного контрастного агента, що має наступну структуру, в подальшому "Зупіоп Я": сн, Сн. улплтовосно с с, о свСсн.ь (Се) сч се ч-- (ее) н « - с й з)» со снозсо їй (снзьссьс: (Ссподь о сояюнх , о Іншим втіленням ковалентного кон'югату корисного для синтезу мультимеру є такий, що має наступну ко 50 структуру, в подальшому "Зупіоп 82": 4) (Ф) ко бо б5
(сн, ( т се що о (сньсоє Ф (сн (Снідз А-с0, (СН). сч се
В наступному прикладі агена для магнітно-резонансної томографії згідно з винаходом, який включає пептид, --
Ззб5 як наведено вище, вплив М-термінального лінкера на релаксивність цього агента для магнітно-резонансної со томографії проілюстровано: - с . а (ее) - ко з 50 4) ко бо б5
Цлкег пкег-вийипії 706 Р бнінінннінні Інні іні пінні ін нні піні нні пінні нний пінні в іній піні пий пінні ні піні піні нні ні ті піні інн . ГІ і , ' . ; Н ! 5 ; н н н н н !
Х ваш
Ох ЕК ї Н ' Х н н н я! ; ' дл
РЕННЯ , , І геріке ПНпісег-виіюпі мн зв і, о ма Ме шок сч сч
Сюйщі Й ч- г)
Шлкег
В цьому прикладі "спеїіаге відноситься до ББ-ЮОТРА-са (І). «
Вищевказаний "ІіпКег-вибітії був різним і має наступні показники (релаксивність іонів («зЗа(І) була т 8-1. З с визначенії при 2ОМНа та 3592С в таких одиницях «пт М 87: :з» Ей АЙНй їн г Іо Ко іУй Ко ТУ ваний РВ5 Ейхів РІЕХЕ) (10 зраз і со : біпсітше 15 117 18.7 шк їй кіз40 вм : ую іме) з 50
Біпкіше 16 126 293.5
Ф Кі«зА нм о
Ф) іме) я 60 У бапейцяе 32 (лесі боті) 12.5
Кі 24.7 М 65 де "Рібгіп Айіпйу" - спорідненність до фібрину, "М-Їегтіпа! І іпКег-зирипії - М-термінальна лінкерна субодиниця та "Кеїахіміу" - реяаксивність.
Як показано вище, структури 15 та 16 є подібними до структурно 32 за виключенням різних М-термінальних лінкерних субодиниць. Експерементальні результати демонструють, що лінкер може впливати на релаксивність, так само як і на інші характеристики контрастних агентів винаходу.
Хелатні компоненти та реактиви
Хелатні компоненти є хелатними лігандами, зкомплексованими з іонами металів. Ці хелатні компоненти містять синтетичні залишки, що здатні утворювати точки прикріплення для лінкера, лінкерних субодиниць та/або модифікованих пептидів. Один або більше хелатних компонентів можуть бути ковалентно кон'югованими з функціональною групою на кожному термінальному кінці модифікованого пептиду. В одному з втілень хелати 7/0 приєднані до лінкерної субодиниці. В іншому втіленні хелати приєднані до лінкерного компонента. В інших випадках, хелати можуть бути кон'югованими з лінкерним компонентом до утворення ковалентного кон'югату перед приєднанням ковалентного кон'югату до модифікованого пептиду.
Попередники хелатних компонентів є хелатними лігандами, які не утворюють комплексів з іонами металів.
Хелатні ліганди можуть мати захисні групи або можуть бути попередниками хелатних лігандів. Попередники /5 Хелатних компонентів мають синтетичні залишки, що здатні утворювати точки прикріплення для лінкера, лінкерних субодиниць та/або модифікованих пептидів. Попередники хелатних компонентів можуть бути конвертовані в хелатні компоненти шляхом реакції комплексоутворення з іонами металів. Один або більше попередників хелатних компонентів можуть бути ковалентно кон'югованими з функціональною групою на кожному термінальному кінці модифікованого пептиду. В одному з втілень попередник хелату приєднаний до Лінкерної субодиниці. В іншому втіленні попередники хелатів приєднані до лінкерного компонента. В інших випадках, попередники хелатів можуть бути кон'югованими з лінкерним компонентом до утворення ковалентного кон'югату перед приєднанням ковалентного кон'югату до модифікованого пептиду.
Попередники хелатних компонентів та хелатні компоненти згідно з винаходом можуть мати будь-яку з наступних структур: с 7 рі (8) о ос обо ос о о т зо х хузо о Хо х , х , с с «- я г) у М готи Х а є ги гу й їх р.й о 00007 сх х о З не) с 5 ка У ь й . и? й ) І и Ї щі : щі . со ж. м - вт в к ке з ї . з іме) й дати ва ВШ, В -ю- дл бло, к зай
ІФ) 7 к І Ка іме) во Хор тру б5 ж де Х гетероатомом електрон-донарної групи, здатним координувати металічний катіон, такий як О-, ОН,
МН», ОРОЗ2, МНК або ОК, де К є будь-якою аліфатичною групою; ее незаряженою хімічною частинкою, вибраною з водню, будь-якої аліфатичної, алкільної групи або циклоалкільної групи або його незаряженою незаміщеною модифікацією (спиртом) та М є синтетичним компонентом (здатним утворювати точки для прикріплення або бути точками прикріплення функціональних груп модифікованих пептидів, лінкерів та/або лінкерних компонентів безпосередньо або через проміжний карбоніл, метилен, метилен-кисень, тіокарбоніл).
Компоненти з (хелатні компоненти) або без (попередники хелатних компонентів) зкоординованих іонів металів можуть бути використані. 70 В контрастних агентах винаходу можуть бути використані різноманітні хелатні ліганди. Такі хелатні ліганди включають, але не обмежуються, похідними ОТРА, СОТА, МОТА та РОЗА. Для магаїтно-резонансної томографії придатними є такі хелати металів діетилентриамінпентаацетат гадолінію (ОТРА"Соа), тетраамін-1,4,7,10-тетраазациклододекан-М,М',М",М'"-тетраацетат гадолінію (ПОТАСа) та 1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7-триацетат (РОЗАСа). Найбільш придатними для використання є хелати, що 75 включають ВБ(СО)ОТРА-Са Інші метали можуть бути замісниками для СІ) в прикладній магнітно-резонансній томографії.
Приклади функціонуючих хелатів, які можуть бути синтезовані з метою одержання мультимерних хелатів, включають рМС5-82-ОТРА ІМапіп, М., еї а). Віосопіддає Спет. б, 6616-23, 1995 та са (4-МОС5-феніл)-аміно-карбонілметил-ПОЗА |КатаспТагап, К. еї аїЇ., Іпмезі. Кай. 1998,33 (11), 779-797). Коли
Відбувається приєднання до мішені для забезпечення оптимальних релаксивних властивостей часто бажаноно мінімізувати переміщення хелату, а відтак, мінімальна кількість ковалентних зв'яків, що з'єднують мішень і хелатний ліганд, є бажаною. Нижче наведений приклад реагента, який містить хелатний ліганд з карбонільною групою в головному ланцюзі для приєднання до функціональної аміногрупи або лінкерної субодиниці, або лінкера, де "С" є залишковою групою (тобто, складний естер) та К являє собою групу, яка може бути легко Га розчепленою з утворенням О- (-ОЇВи, тобто карбоксилатного естеру), таким чином утворюючи карбоксил із о зусідньою карбонільною групою: карбонільна група приєднується до (Се) зо головного ланцюга хелатного ліганда сч с «- г) пі о я то) Ес! « ( Х ка І щ - - с . з кос р со ве сок шк я іме) г) 50.
Як було встановлено, карбоніл, який безпосередньо приєднується до хелатного ліганда, - це хімічний мотив, 4) на якому базується клас високорелаксивних МР контрастних агентів.
Даний винахід також стосується інтермедіатів, які використовуються при синтезі контрастних агентів для магнітно-резонансної томографії, згідно з наступною формулою: с м ее в т В бо є і та де ВК", Кк, КЗ, вл! та КО можуть бути будь-яким захищеним або незахищеним ацетиловим лігандом, придатним для утворення хелату парамагнітного металу, з утворенням підходящої константи, включаючи бо наступне:
тр ше де Р є будь-якою захисною групою, включаючи бензильну та трет-бутильну групи. І (з є "залишковою групою" і являє собою -ОН та ї Тестерні форми, що включають МН5 естери, пентафторфенол та інші складні естери.
В особливо корисному втіленні, І З є - ОН та В", 2, КЗ, В? та 5 є СН2СО2оО!ВИи, в подальшому "Зупіоп 83", та має наступну структуру: й (НУСзСО», "С,СсСН,) (с) сосну сч - (о)
Альтернативно, наступний реагент може бути використаний при синтезі контрастних агентів винаходу: (Се)
Ше с с
С(СН,»)» «- г) (нУсзсСоС 7 "сосен; ю (НеС)» СО,сС(снІ» з с з (міде Зуп. Сотт. 30,3755 (2000)).
Даний винахід також надає способи одержання сполук. Зокрема нова реакція окислення дозволяє легко приготувати Зупісп ЯЗ, який є переважним втіленням хелатного ліганду. Синтез Зупіопу ЯЗ може бути о досягнений двома різними синтетичними шляхами, обидва починаються з гідрокеиметилдіетилентриаміну. Один шлях включає два послідовні етапи синтезу (алкілювання, що настає після окислення) та інший включає - шести-етапний процес (захист, окислення, естерефікація, зняття захисту, алкілювання та (пе оїпег іпуоЇмез а з зіх-віер ргосезв (ргоїесіоп, охідайоп, евіегійсайоп, аДергоїесіоп, алкілайоп та гідрогеноліз). Обидва забезпечують синтез Зупіопу ЯЗ високої хімічної та оптичної чистоти (депоїузіз). Воїй ргодисе Зупіпоп «пит;З іп іме) підп спетісаї! та оріїса! рипу (дивись Приклади нижче).
Ф ІЮ.5. Райепі Мо. 5,637, 759| розкриває синтез Зупіопу Я1 із 2,3-диамінопропіонової кислоти та аза-лізину відповідно до протоколу селективного гідролізу з тіофеноксидом натрію.
Синтез контраста агентів
Синтез пептидвмісних контрастних агентів може бути проведений наступними етапами. Перший, націлений на мішень пептид може бути синтезований з або без С-термінальної лінкерної субодиниці, зазвичай (Ф. використовуючи твердофазовий пептидний синтез. Для описаних тут циклічних пептидів, захищений лінійний г пептид може бути зациклізований в розчині або на полімері. Незахищений пептид також може бути зациклізований в розчині або на полімері. С-термінальна лінкерна субодиниця може бути легко одержана в во твердофазовому синтезі полімеру та М-термінальний лінкер або М-термінальна лінкерна субодиниця можуть бути зчепленими з пептидом протягом твердофазового синтезу. Зазвичай, впродовж циклізації лінкерні та хелатні попередники були зчепленими з пептидом. Захисні групи видалялись, надаючи попередник ліганда, після чого утворювались хелати. Радіонуклідні сполуки цього винаходу були одержані з попередника ліганда, використовуючи комерційно доступні радіонукліди (наприклад, У97Тс із Мусотей Атегейат Возіоп саї. 65 йВХ-290195, "п із МЕМ Же Зсієпсе Ргодисів саї ЯМЕ2304 або 753034 з МЕМ І Же Зсієпсе Ргодисів саї.
ЯМЕ2142), шляхом реагування у водному середовищі, зазвичай при рН 4-6 протягом 1 години. У випадку оптичних контрастних агентів, органічні барвники можуть бути замісниками для попередника хелату.
Структура контраста агентів ї - З і І і Ї Е Її 1 Ї й
Я я - 1 Я ; а ' б ' о і 15 . синтез аналогічний 32 5 с о (Се) сч с «- г) ші с з (ее) - іме) з 50 42)
Ф) іме) бо б5 бо І ще той Ф о "Ч. і А АХ | оба; (З і оКНоХНо нон » нн о и он
1 ко о, | о ттРАСВ 7 ві ох о до б 8 "а й Ї / -8-- щ се і (Се) зо й Щі й я іє У Држеста с « - с ;» Прах уче 15 н н н їй вот ка МнсоствАсУ о сон му 4) у од й зилеАСоНИ - пов сннвнй МНСОгТРАСІЇ бо ан 6 65 -До-
бо І ще той Ф о "Ч. і А АХ | оба; (З і оКНоХНо нон » нн о и он
1 ко о, | о ттРАСВ 7 ві ох о до б 8 "а й Ї / -8-- щ се і (Се) зо й Щі й я іє У Држеста с « - с ;» Прах уче 15 н н н їй вот ка МнсоствАсУ о сон му 4) у од й зилеАСоНИ - пов сннвнй МНСОгТРАСІЇ бо ан 7 65 -БО-
бо І ще той Ф о "Ч. і А АХ | оба; (З і оКНоХНо нон » нн о и он
1 ко о, | о ттРАСВ 7 ві ох о до б 8 "а й Ї / -8-- щ се і (Се) зо й Щі й я іє У Држеста с « - с ;» Прах уче 15 н н н їй вот ка МнсоствАсУ о сон му 4) у од й зилеАСоНИ - пов сннвнй МНСОгТРАСІЇ бо ан 8 65 -5Б1-
бо І ще той Ф о "Ч. і А АХ | оба; (З і оКНоХНо нон » нн о и он
1 ко о, | о ттРАСВ 7 ві ох о до б 8 "а й Ї / -8-- щ се і (Се) зо й Щі й я іє У Држеста с « - с ;» Прах уче 15 н н н їй вот ка МнсоствАсУ о сон му 4) у од й зилеАСоНИ - пов сннвнй МНСОгТРАСІЇ бо ан 9 65 бо І ще той Ф о "Ч. і А АХ | оба; (З і о«хНоХНо оно » нн о и он 15 1 ко о, | о ттРАСВ 7 ві ох о до б 8 "а й Ї / -8-- щ се 25 і (Се) зо й Щі й я іє У Држеста с « 40 - с ;» Прах уче 15 н н н їй вот ка МнсоствАсУ о сон му 4) 55 у од й зилеАСоНИ - пов сннвнй МНСОгТРАСІЇ бо ан
65 ен фі ДИ кса н ще 7 Н сагРАСОМ ві в У ой о пот 70 т ох і 1; АЖ а КАХ АХ КХ Ок вилтсомї ; охнохно но; но я ЧИСОТЛРАСЯ х сн о - умі От
ПРА
(Се) й т Х ся іш по/ но сч сн ч- он со « с 40 ! Й г -
І» юр оби КІ ча о ще снлямсооій Тих ія з Ку ій й; г г а в: ий со -4 --д щ норов ко му 4) й й й і я й юю у ах а а 24 вк во 11 б5 -БА-
ен фі ДИ кса н ще 7 Н сагРАСОМ ві в У ой о пот 70 т ох і 1; АЖ а КАХ АХ КХ Ок вилтсомї ; охнохно но; но я ЧИСОТЛРАСЯ х сн о - умі От
ПРА
(Се) й т Х ся іш по/ но сч сн ч- он со « с 40 ! Й г -
І» юр оби КІ ча о ще снлямсооій Тих ія з Ку ій й; г г а в: ий со -4 --д щ норов ко му 4) й й й і я й юю у ах а а 24 вк во 12 б5 -5Б-
ен фі ДИ кса н ще 7 Н сагРАСОМ ві в У ой о пот 70 т ох і 1; АЖ а КАХ АХ КХ Ок вилтсомї ; охнохно но; но я ЧИСОТЛРАСЯ х сн о - умі От
ПРА
(Се) й т Х ся іш по/ но сч сн ч- он со « с 40 ! Й г -
І» юр оби КІ ча о ще снлямсооій Тих ія з Ку ій й; г г а в: ий со -4 --д щ норов ко му 4) й й й і я й юю у ах а а 24 вк во 13 б5 -Бв-
ен фі ДИ кса н ще 7 Н сагРАСОМ ві в У ой о пот 70 т ох і 1; АЖ а КАХ АХ КХ Ок вилтсомї ; охнохно но; но я ЧИСОТЛРАСЯ х сн о - умі От
ПРА
(Се) й т Х ся іш по/ но сч сн ч- он со « с 40 ! Й г -
І» юр оби КІ ча о ще снлямсооій Тих ія з Ку ій й; г г а в: ий со -4 --д щ норов ко му 4) й й й і я й юю у ах а а 24 вк во 14 б5 ен фі ДИ кса н ще 7 Н сагРАСОМ ві в У ой о пот 70 т ох і 1; АЖ а КАХ АХ КХ Ок вилтсомї ; охнохно но; но я ЧИСОТЛРАСЯ х сн о - умі От
ПРА
(Се) й т Х ся іш по/ но сч сн ч- он со « с 40 ! Й г -
І» юр оби КІ ча о ще снлямсооій Тих ія з Ку ій й; г г а в: ий со -4 --д щ норов ко му 4) й й й і я й юю у ах а а 24 вк во 15 б5 ч н Ії (і ний в й «4 " у в І ше ша. саслексом и с ок
Я Ко 4 ста
Дж М вче ще : ! я | нк / р ї с нос вила й --щЩ8И-- ок ря. се о 20 ОБСТА ц ! ЧІ ре | ге у, са чи. ий «в ' сч ааттАСОЮН ; о що де У на з н ; 7 й ов 7 « у 7 с сн со й о 5/4 вина «их и Я ч є, "У, хндєнь нення я ноодлРаса - скиутрьсоми шо -ю-З2З- он юю он 7 50 4) о с Ху саван «А. ол о її й с о , согутРАТИ бо 16 б5 ч н Ії (і ний в й «4 " у в І ше ша. саслексом и с ок
Я Ко 4 ста
Дж М вче ще : ! я | нк / р ї с нос вила й --щЩ8И-- ок ря. се о 20 ОБСТА ц ! ЧІ ре | ге у, са чи. ий «в ' сч ааттАСОЮН ; о що де У на з н ; 7 й ов 7 « у 7 с сн со й о 5/4 вина «их и Я ч є, "У, хндєнь нення я ноодлРаса - скиутрьсоми шо -ю-З2З- он юю он 7 50 4) о с Ху саван «А. ол о її й с о , согутРАТИ бо 17 б5 ч н Ії (і ний в й «4 " у в І ше ша. саслексом и с ок
Я Ко 4 ста
Дж М вче ще : ! я | нк / р ї с нос вила й --щЩ8И-- ок ря. се о 20 ОБСТА ц ! ЧІ ре | ге у, са чи. ий «в ' сч ааттАСОЮН ; о що де У на з н ; 7 й ов 7 « у 7 с сн со й о 5/4 вина «их и Я ч є, "У, хндєнь нення я ноодлРаса - скиутрьсоми шо -ю-З2З- он юю он 7 50 4) о с Ху саван «А. ол о її й с о , согутРАТИ бо 18 б5 ч н Ії (і ний в й «4 " у в І ше ша. саслексом и с ок
Я Ко 4 ста
Дж М вче ще : ! я | нк / р ї с нос вила й --щЩ8И-- ок ря. се о 20 ОБСТА ц ! ЧІ ре | ге у, са чи. ий «в ' сч ааттАСОЮН ; о що де У на з н ; 7 й ов 7 « у 7 с сн со й о 5/4 вина «их и Я ч є, "У, хндєнь нення я ноодлРаса - скиутрьсоми шо -ю-З2З- он юю он 7 50 4) о с Ху саван «А. ол о її й с о , согутРАТИ бо 19 б5 ч н Ії (і ний в й «4 " у в І ше ша. саслексом и с ок
Я Ко 4 ста
Дж М вче ще : ! я | нк / р ї с нос вила й --щЩ8И-- ок ря. се о 20 ОБСТА ц ! ЧІ ре | ге у, са чи. ий «в ' сч ааттАСОЮН ; о що де У на з н ; 7 й ов 7 « у 7 с сн со й о 5/4 вина «их и Я ч є, "У, хндєнь нення я ноодлРаса - скиутрьсоми шо -ю-З2З- он юю он 7 50 4) о с Ху саван «А. ол о її й с о , согутРАТИ бо 20 б5 н
Н ГРА сне ува й ос ту й оно о-7х о мн-СОГЯтТАСЯ б сарлеа-соми , да т (з (з з но о
Гу м ки ТК МНАСОДТРАЧОЯ н сарттьоьнн і он ч 9 с "В й, дов (о) ваОТРСОКИ х х сі н З і ? нм о-7и о нн-СОГТРАНОВ (Се) свінутАСНН с с - г) н в ї зле » осв у Кн о 5 с 40 їх ї к І АНО сн. - . ФфОЛТРАСОЧИ
І» (ее) з І з ОНТРАСОМІ Ми - ее. , зе ї І. - з Ух м он м о-7хно кнСОгСТРАСа
Фо сапРАОСНН щі 21 (Ф) ко бо б5 н
Н ГРА сне ува й ос ту й оно о-7х о мн-СОГЯтТАСЯ ю сеглвАСВНИ , да
Ь (з о з но о
Гу шашка. є МНАСОДТРАЧОЯ о сеоттаОовНА і и М с ц о)
В я мк
ВЕОТАСОКН нх, х х сі н х і ? нм о-7и о нн-СОГТРАНОВ (Се)
ТРАСИ с с - (2,0) н в а - СОЧЛТРА-СВ « с 40 К и о, но сн. "з аглРАФОЧН (ог) з ЦІ
М ртАОІ їмо) й ОООТРАСОМН ох, пня « то: ван з Ух м он м о-7хно кнСОгСТРАСа в еапРАСОНН 29 (Ф, ко бо б5 н
Н ГРА сне ува й ос ту й оно о-7х о мн-СОГЯтТАСЯ ю сеглвАСВНИ , да
Ь (з о з но о
Гу шашка. є МНАСОДТРАЧОЯ о сеоттаОовНА і и М с ц о)
В я мк
ВЕОТАСОКН нх, х х сі н х і ? нм о-7и о нн-СОГТРАНОВ (Се)
ТРАСИ с с - (2,0) н в а - СОЧЛТРА-СВ « с 40 К и о, но сн. "з аглРАФОЧН (ог) з ЦІ
М ртАОІ їмо) й ОООТРАСОМН ох, пня « то: ван з Ух м он м о-7хно кнСОгСТРАСа в еапРАСОНН 28 (Ф, ко бо б5 н
Н ГРА сне ува й ос ту й оно о-7х о мн-СОГЯтТАСЯ ю сеглвАСВНИ , да
Ь (з о з но о
Гу шашка. є МНАСОДТРАЧОЯ о сеоттаОовНА і и М с ц о)
В я мк
ВЕОТАСОКН нх, х х сі н х і ? нм о-7и о нн-СОГТРАНОВ (Се)
ТРАСИ с с - (2,0) н в а - СОЧЛТРА-СВ « с 40 К и о, но сн. "з аглРАФОЧН (ог) з ЦІ
М ртАОІ їмо) й ОООТРАСОМН ох, пня « то: ван з Ух м он м о-7хно кнСОгСТРАСа в еапРАСОНН щі 24 (Ф, ко бо б5 н
Н ГРА сне ува й ос ту й оно о-7х о мн-СОГЯтТАСЯ ю сеглвАСВНИ , да
Ь (з о з но о
Гу шашка. є МНАСОДТРАЧОЯ о сеоттаОовНА і и М с ц о)
В я мк
ВЕОТАСОКН нх, х х сі н х і ? нм о-7и о нн-СОГТРАНОВ (Се)
ТРАСИ с с - (2,0) н в а - СОЧЛТРА-СВ « с 40 К и о, но сн. "з аглРАФОЧН (ог) з ЦІ
М ртАОІ їмо) й ОООТРАСОМН ох, пня « то: ван з Ух м он м о-7хно кнСОгСТРАСа в еапРАСОНН де (Ф, ко бо б5 а пі н с с вно лу
СОТ, ин, НА оч Мо у ні ще і нНСОптРА СІ 10 ваТРАЧЮСТЬН 12 а | м іє й сор днсг
ОТО лм, вчи - | за А т о К | жан о де НесОпртТРА є
СОТЛРА-СОЮЧИ се | щ ' (заотРАНЮЬНН, зи чі А . лов о и лін й нь и вно нов нь Най Но й з і Фк ЕЕ, 2 а иИЛПРАСО м ва й и Н ор- о са «я й, сі се -
Н со о пише ен СОНЛРА са
Га! з ДЕ й 7 Не аиУРАСНА я о Ні ох зв « н он нога З с ;» що со со Я, В СК св шк САГРАА-СЄЧИ ц «9 у; о уза ща | і й но 7 в іме) й но й Но о По / Н АВ о й ' де сартРАЄСНИ об " ннсОют, ко 4) о я о пада м, ШИ і ве ко
І бу, В о ту о Шу «ДЕ т. з но; но иа: СА НО о 60 авотРАСОВН об 5 М СОПТРА сх 26 65 а пі н с с вно лу
СОТ, ин, НА оч Мо у ні ще і нНСОптРА СІ 10 ваТРАЧЮСТЬН 12 а | м іє й сор днсг
ОТО лм, вчи - | за А т о К | жан о де НесОпртТРА є
СОТЛРА-СОЮЧИ се | щ ' (заотРАНЮЬНН, зи чі А . лов о и лін й нь и вно нов нь Най Но й з і Фк ЕЕ, 2 а иИЛПРАСО м ва й и Н ор- о са «я й, сі се -
Н со о пише ен СОНЛРА са
Га! з ДЕ й 7 Не аиУРАСНА я о Ні ох зв « н он нога З с ;» що со со Я, В СК св шк САГРАА-СЄЧИ ц «9 у; о уза ща | і й но 7 в іме) й но й Но о По / Н АВ о й ' де сартРАЄСНИ об " ннсОют, ко 4) о я о пада м, ШИ і ве ко
І бу, В о ту о Шу «ДЕ т. з но; но иа: СА НО о 60 авотРАСОВН об 5 М СОПТРА сх 27 65 а пі н с с вно лу
СОТ, ин, НА оч Мо у ні ще і нНСОптРА СІ 10 ваТРАЧЮСТЬН 12 а | м іє й сор днсг
ОТО лм, вчи - | за А т о К | жан о де НесОпртТРА є
СОТЛРА-СОЮЧИ се | щ ' (заотРАНЮЬНН, зи чі А . лов о и лін й нь и вно нов нь Най Но й з і Фк ЕЕ, 2 а иИЛПРАСО м ва й и Н ор- о са «я й, сі се -
Н со о пише ен СОНЛРА са
Га! з ДЕ й 7 Не аиУРАСНА я о Ні ох зв « н он нога З с ;» що со со Я, В СК св шк САГРАА-СЄЧИ ц «9 у; о уза ща | і й но 7 в іме) й но й Но о По / Н АВ о й ' де сартРАЄСНИ об " ннсОют, ко 4) о я о пада м, ШИ і ве ко
І бу, В о ту о Шу «ДЕ т. з но; но иа: СА НО о 60 авотРАСОВН об 5 М СОПТРА сх 28 65 а пі н с с вно лу
СОТ, ин, НА оч Мо у ні ще і нНСОптРА СІ 10 ваТРАЧЮСТЬН 12 а | м іє й сор днсг
ОТО лм, вчи - | за А т о К | жан о де НесОпртТРА є
СОТЛРА-СОЮЧИ се | щ ' (заотРАНЮЬНН, зи чі А . лов о и лін й нь и вно нов нь Най Но й з і Фк ЕЕ, 2 а иИЛПРАСО м ва й и Н ор- о са «я й, сі се -
Н со о пише ен СОНЛРА са
Га! з ДЕ й 7 Не аиУРАСНА я о Ні ох зв « н он нога З с ;» що со со Я, В СК св шк САГРАА-СЄЧИ ц «9 у; о уза ща | і й но 7 в іме) й но й Но о По / Н АВ о й ' де сартРАЄСНИ об " ннсОют, ко 4) о я о пада м, ШИ і ве ко
І бу, В о ту о Шу «ДЕ т. з но; но иа: СА НО о 60 авотРАСОВН об 5 М СОПТРА сх 29 65 а пі н с с вно лу
СОТ, ин, НА оч Мо у ні ще і нНСОптРА СІ 10 ваТРАЧЮСТЬН 12 а | м іє й сор днсг
ОТО лм, вчи - | за А т о К | жан о де НесОпртТРА є
СОТЛРА-СОЮЧИ се | щ ' (заотРАНЮЬНН, зи чі А . лов о и лін й нь и вно нов нь Най Но й з і Фк ЕЕ, 2 а иИЛПРАСО м ва й и Н ор- о са «я й, сі се -
Н со о пише ен СОНЛРА са
Га! з ДЕ й 7 Не аиУРАСНА я о Ні ох зв « н он нога З с ;» що со со Я, В СК св шк САГРАА-СЄЧИ ц «9 у; о уза ща | і й но 7 в іме) й но й Но о По / Н АВ о й ' де сартРАЄСНИ об " ннсОют, ко 4) о я о пада м, ШИ і ве ко
І бу, В о ту о Шу «ДЕ т. з но; но иа: СА НО о 60 авотРАСОВН об 5 М СОПТРА сх
Зо 65 а сі н саотьсомі А Я А Я НА Кн в ні оно о ба ннсОоптРАЄІ 70 оадтРАЮЮН 12 а | в. іє й сут д-сг
СІСТРАСОНН, с і. цл, | за А 7 м ши втлРАСОКА се ; о я : са тРАСОМА, чина ві А ; дО о шов 0: Ат МО но нок
У А Я, у м
ОИЛРАСО іх не У и кннсодтрА, са (Се) й сч се -
Н со о пише ен согувА са о ог й 7 АНно аилРАСН я о м ох зв « 20 н он Многая ш-в с з : й со Фе ча СК св ко) и" но й ноя но ау БАК в. де во сатРА СОН об 4) о я о СТРА МН Я ти пі Я нУ н 7 шо по Кон вну р. АНО й во ааотРОСЬН. об 5 б5 з на й свотржсови об, ЗИ в-АН нсостРА й ! л нодотся 00 труд ваш шк М 33 с в. . ; й Й гі й - птн налік о Що о
К і ве : о Яд» - й « « пом са Кс: і ; вчені не ю 7 «у ну ва ні а ' уд і Є тв.
з на й свотржсови об, ЗИ в-АН нсостРА й ! л нодотся 00 труд ваш шк М 33 с в. . ; й Й гі й - птн налік о Що о
К і ве : о Яд» - й « « пом са Кс: і ; вчені не ю 7 «у ну ва ні а ' уд і Є тв.
з на й свотржсови об, ЗИ в-АН нсостРА й ! л нодотся 00 труд ваш шк М 33 с в. . ; й Й гі й - птн налік о Що о
К і ве : о Яд» - й « « пом са Кс: і ; вчені не ю 7 «у ну ва ні а ' уд і Є т з на й свотржсови об, ЗИ в-АН нсостРА й ! л нодотся 00 труд ваш шк М 33 с в. . ; й Й гі й - птн налік о Що о
К і ве : о Яд» - й « « пом са Кс: і ; вчені не ю 7 «у ну ва ні а ' уд і Є тв.
А я з Й , То ши ни як чів
Зб І Й вх
Пр; а бо ! кра пас кн З т в ДЖ ой «а сок (Се) т Е-я ; ; ю 37 « с 40 І о Й З ;» ей о ою Я з ее пк о Й с Бе ЗВ о 55 іме) з
А я з Й , То ши ни як чів
Зб І Й вх
Пр; а бо ! кра пас кн З т в ДЖ ой «а сок (Се) т Е-я ; ; ю 37 « с 40 І о Й З ;» ей о ою Я з ее пк о Й с Бе ЗВ о 55 іме) з
А я з Й , То ши ни як чів
Зб І Й вх
Пр; а бо ! кра пас кн З т в ДЖ ой «а сок (Се) т Е-я ; ; ю 37 « с 40 І о Й З ;» ей о ою Я з ее пк о Й с Бе ЗВ о 55 іме) з
ЗВ с -6, і то - о. чок я. з п дл о є м то ; м со он оАн Ма не ле х Я зо Й з о с й в, Сх й
Й НН ноу н ; нн САн о і зо чеки й о с уд я й
У о « с 40 40 7
І» А. я сн. : потоне ш са
ГФ 50 Й
Ф с ще я о 55 а о ,
ЗВ с -6, і то - о. чок я. з п дл о є м то ; м со он оАн Ма не ле х Я зо Й з о с й в, Сх й
Й НН ноу н ; нн САн о і зо чеки й о с уд я й
У о « с 40 40 7
І» А. я сн. : потоне ш са
ГФ 50 Й
Ф с ще я о 55 а о ,
ЗВ с -6, і то - о. чок я. з п дл о є м то ; м со он оАн Ма не ле х Я зо Й з о с й в, Сх й
Й НН ноу н ; нн САн о і зо чеки й о с уд я й
У о « с 40 40 7
І» А. я сн. : потоне ш са
ГФ 50 Й
Ф с ще я о 55 а о ,
А- Х ша ев я в 42 о Де оВщ з о Ге)
У Ге аз сч з ву я, й з , он річ й оцю. : с и? Й и , - ве ен я Вр БЕ уд; божої» й вес зо. я ко
А- Х ша ев я в 42 о Де оВщ з о Ге)
У Ге аз сч з ву я, й з , он річ й оцю. : с и? Й и , - ве ен я Вр БЕ уд; божої» й вес зо. я ко
А- Х ша ев я в 42 о Де оВщ з о Ге)
У Ге аз сч з ву я, й з , он річ й оцю. : с и? Й и , - ве ен я Вр БЕ уд; божої» й вес зо. я ко
А- Х ша ев я в 42 о Де оВщ з о Ге)
У Ге аз сч з ву я, й з , он річ й оцю. : с и? Й и , - ве ен я Вр БЕ уд; божої» й вес зо. я ко ще Фо вен в вва
Аж Кс 46 ? ч це ; «А во (тив 4 вн вен пен ех 4 і сч
Й «ее о у» (Се) зо с с 47 й с й ер: пд
ЕЕ п Кс ля д-в ; А З с
Я я сЕ. (ее) » ко во 4) (Ф. ко 60 б5 ще Фо вен в вва
Аж Кс 46 ? ч це ; «А во (тив 4 вн вен пен ех 4 і сч
Й «ее о у» (Се) зо с с 47 й с й ер: пд
ЕЕ п Кс ля д-в ; А З с
Я я сЕ. (ее) » ко во 4) (Ф. ко 60 б5 ще Фо вен в вва
Аж Кс 46 ? ч це ; «А во (тив 4 вн вен пен ех 4 і сч
Й «ее о у» (Се) зо с с 47 й с й ер: пд
ЕЕ п Кс ля д-в ; А З с
Я я сЕ. (ее) » ко во 4) (Ф. ко 60 б5 щ- ху 9 С 5 б «Тв кв о АТ" озон г водних в у н ач со с
Бо с й 7 со во о сі в. Ці Чо « пан Не с рони р ни / в АН нн :» с шч 7
СК. ско в о соту т й ко о з 50
Ф
(Ф) т бо б5 щ- ху 9 С 5 б «Тв кв о АТ" озон г водних в у н ач со с
Бо с й 7 со во о сі в. Ці Чо « пан Не с рони р ни / в АН нн :» с шч 7
СК. ско в о соту т й ко о з 50
Ф
(Ф) т бо б5 щ- ху 9 С 5 б «Тв кв о АТ" озон г водних в у н ач со с
Бо с й 7 со во о сі в. Ці Чо « пан Не с рони р ни / в АН нн :» с шч 7
СК. ско в о соту т й ко о з 50
Ф
(Ф) т бо б5
«Де З с ники доз ли вмів же бо чдреулю Хв» ой Е «чер
У
Й о . с
Бз й о ; : я 000 і, у д.
ЕН; ко "Я І й " га
З5 : - 53 сб я; шрдя У І ВА КТК о -й й ге Ес щи сл Й с у вх о 25 іме)
«Де З с ники доз ли вмів же бо чдреулю Хв» ой Е «чер
У
Й о . с
Бз й о ; : я 000 і, у д.
ЕН; ко "Я І й " га
З5 : - 53 сб я; шрдя У І ВА КТК о -й й ге Ес щи сл Й с у вх о 25 іме)
«Де З с ники доз ли вмів же бо чдреулю Хв» ой Е «чер
У
Й о . с
Бз й о ; : я 000 і, у д.
ЕН; ко "Я І й " га
З5 : - 53 сб я; шрдя У І ВА КТК о -й й ге Ес щи сл Й с у вх о 25 іме)
н дл" із , зя н н м си од де ; н , У, я Ти 5 шен; ри КД -икКН н що |: о - ве - т ої ус о ре тм си о 55 сей ! в вот ; се очі ; я Зже: н ні лю зв " йони о и Де ря Б. ХЕ х У с
М : з. о -в Ар щі чі Ві. го о х Ф сч с 54 «- дк о со ес н дл" , зя н н м ой ві за вчу . - ге; ї7 2 « ар и є нов-к н 8 с о п - ве Хо ро
І» с ше ві тм оауу о о (ее) - іме) в йй о ; се одн и Зже: БУ "Кл ю
КІ я т 55 и о в пн н "КАН х в (Ф; в н - -
По) КИ сало тк бу 60 Й
Властивості контраста агентів
Що стосується деградації ендогенними ензимами, то сполуки цього винаходу є більш стійкими ніж вихідні де Пептиди (тобто, пептиди без будь-яких приєднаних хелатів), пептиди з одним або більше приєднаними до М-кінця хелатами або пептиди з одним або більше приєднаними до С-кінця хелатами.
Оцінюючи стабільність іп мімо, сполуки, що підлягають тестуванню, інкубують з гомогенатами печінки щурів.
Через вибраний інтервал, реагенти можуть бути охолодженні та піддані центрифугуванню, супернатант може бути проаналізований щодо кількісного вмісту сполук із застосуванням рідинної хроматографії/мас-спектрометрії.
Сполуки винаходу також можуть зв'язувати такі мішені, як людський сиворотковий альбумін або фібрин.
Наприклад, в крайньому разі 1095 (тобто, в крайньому разі 5095, 8090, 9095, 9295, 9495, або 96905) контрастного агента може зв'язуватись з придатною мішенню при фізіологічно релевантній концентрації в ліках і мішені.
Ступінь зв'язування контрастного агента з мішенню, такою як Н5А або фібрин, може бути визначений різноманітними придатними рівноважними методами. Наприклад, зв'язування з Н5А може бути виміряне за 7/0 допомогою ультрафільтрації. Для вимірювання зв'язування з фібрином, фібриновий згусток може бути утворений в лунці планшета для мікротитрування та введений в контакт з націленою на мішень групою. Після інкубаційного періоду, достатнього для встановлення рівноваги, супернатант видаляється аспірацією (нерозчинний фібрин залишається зв'язаним у вигляді охолодженого згустка на дні лунки). Вимірюється концентрація незв'язоної націленої на мішень групи. В обох методиках концентрація зв'язаного контрастного агента визначається як 7/5 різниця між вихідною загальною концентрацією націленої групи та концентрацією незв'язаної націленої групи після реакції. Зв'язана фракція є концентрацією зв'язаної націленої групи поділеною на загальну концентрацію націленої групи.
Сполуки винаходу демонструють високу релаксивність як наслідок зв'язування мішені (фібрину), яке може приводити до більш кращої дозволяючої здатності забраження. Зростання релаксивності при зв'язуванні зазвичай становить 1,5-ю14 або більше (тобто, в крайньому разі 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 або 10 юй підвищення релаксивності). Націлені контраст агенти мають 7-8 тюїд, 9-10 тод або навіть більше ніж 10 їй підвищення релаксивності є особливо корисним. Зазвичай, релаксивність вимірюють, застосовуючи ЯМР спектрометрію.
Переважною релаксивністю магнітно-резонансних гомографічних контрастних агентів в 2ОМН?І та при 372С. є, принаймні, 10тМ''57 на парамагнітний іон металу (тобто, принаймні 15, 20, 25, 30, 35, 40 або бОтМ'85' на с парамагнітний іон металу). Сонтрасні агенти, що мають релаксивність більшу ніж бОтМ' 87 в 20МН2 та при о 372 є найбільш корисними.
Як тут описано, націлені контраст агенти можуть демонструвати підвищене поглинання згустком. Особливість поглинання фібрин-направлених агентів може бути визначена порівнянням поглинання агента кров'яними згустками та поглинання кров'ю. Дивись Приклад 11 для більшої деталізації. Специфічність фібрин-направлених со контрастних агентів також може бути продемонстрована, використовуючи магнітно-резонансну томографію та с спостереження за підсиленням сигналу від згустка.
Використання пептидів та контрастних агентів винаходу. с
Пептиди винаходу можуть бути використанні для удосконалення терапії при лікуванні тромболітичних «- захворювань. Наявна тромболітична терапія лімітована, включаючи суттєвий ризик кровотечі, порушення
Зо регенерації кровотоку, тромбозну реоклюзію після припинення терапії та затримку між ініціалізацією терапії та со лізисом згустка. Покращений терапевтичний індекс може досягатись кон'югацією фібрин-направленого пептиду відповідно до винаходу з тромболітичними агентами (тобто, такими тромболітичними протеїнами як плазмогенні активатори людини або бактерій). Такі кон'югати можуть активізувати плазмоген локально або підвищини « ендогенний рівень ІРА. Наприклад, фібрин-направлений пептид може кон'югувати з людським плазміногенним активатором, включаючи рекомбінантні тканини типу плазмогенного активатора(іРА), проурокіназою та в) с урокіназою (обома - і простою, і дволанцюговою формами), похідними бактеріальних плазміногенних "» активаторів, включаючи стрептокіназу, та тваринного плазміногенного активатора, включаючи плазміногенний " активатор вампіра (летючої миші) Крім того, фібрин-направлені пептиди можуть бути кон'юговані з фібринолітиками такими, як фібролаза мідноголової змії, яка демонструє пряму фібринолітичну активність. Такі ензими і протеши можуть бути одержані комерційним шляхом, екстраговані з природних джерел або одержані со рекомбінацією. - Композиції винаходу можуть бути зчепленими або вплавленими відомими способами, використовуючи ті ж самі типи лінкерів, які уже були обговорені вище стосовно конструювання контрастних агентів для ко магнітно-резонанстої терапії МКІ. Приєднання до протеїну може досягатись завдяки стандартним хімічним
ГІ 20 методам, включаючи утворення амідних, естерних, дисульфідних та тіоетерних зв'язків. Наприклад, фібринзв'язуючий пептид може бути ковалентно приєднанним до протеїну або безпосередньо, або через лінкер, м, утворюючи амідний зв'язок між фібринзв'язуючим пептидом або лінкером та залишками лізину на поверхні протеїну. Ці поверхневі лізинові залишки є найбільш віддаленими від ферментного каталітичного сайту. А тому, прив'язані компоненти не інтерферують з каталітичною активністю ферменту. Мультиплетний ліганд може бути 22 досягнений завдяки одному кроку. Відношення фібриннаправленого пептиду до тромболітичного або
Ф! фібринолітичного агента може бути проконтрольоване шляхом встановлення стехіометрії хімічного складу, що зшивається. Мультиплетне зшивання є особливо корисним у випадку помірно сильного фібринзв'язуючого о ліганда, тому що висока зв'язувальна спорідненність може бути реалізована через так званий "аміайу" ефекти.
Зокрема зчеплюючий агент або складний ефір можуть бути використані для досягнення утворення амідного 60 зв'язку між лізином та фібринзв'язуючим компонентом або лінкером. Нижченаведена схема демонструє приклад гібридної молекули, утвореної хімічним зшиванням урокінази та мультиплетних фібринзв'язаних пептидів за допомогою лінкерних компонентів. Кількість поверхневих лізинових залишків та кількість фібринзв'язаних пептидів є ілюстративною. Альтернативно, фібриннаправлений пептид може бути інкорпорований в гібридну молекулу, використовуючи ДНК технології. б5 ни Тики
Вагу кон вів і він й Ше сс ик, на
В одному з втілень, пептида винаходу можуть бути приєднаними до тромболітичного агента з узагальненим лінкером ферментного клівейдж-сайту, тобто ферментний клівейдж-сайт нормально розчеплюється ферментами в коагуляційному каскаді, такими як фактор Ха, тромбін або клівейдж-сайтами плазміну тощо. Тромболітичний агент залишається неактивним до тих пір, поки не буде відщеплений від зв'язуючих згустки композицій винаходу в місцізнаходження згустку, ризик виникнення небажаних кровотеч у віддалених від згустку місцях буде с мінімізований. Більше того, тромболітичні компоненти можуть бути приєднаними до пептид-направлених о мультимерних контрастних агентів так, що згусток може бути ідентифікованим, візуалізованим і розчиненим.
Контраст агенти, одержані згідно з наведеними тут описами, можуть бути використані в деяких способах як конвенційні МКІ-контрастні агенти та бути корисними для діагностування глибоких венозних тромбозів, легеневих емболій, коронарних тромбозів, тромбозів сонної артерії та внутрішньочерепних тромбозів, атральних «(О та вентрикулярних тромбів, тромбів дуги аорти, високого ризику атеросклеротичних пошкоджень тканин. Коли сч томографують тромби, певні магнітно-резонансні метода та імпульсні послідовності можуть бути переважними для покращення контрасту тромбів порівняно з кров'ю та тканинами. Ці метода включають, але не лімітують, с "Біаск бБіоо4 апдіодгарпу зедцепсев", такі як "Таві взріп еспо зедцепсев" та "Пом/-зройей дгадіепі еспо «- зедцепсев". Ці методи також включають "Пом/ іпдерепдепі" способи, які підвищують різницю в контрастності внаслідок відмінностей між Т1 контрастно удосконалених тромбів і Т1 крові та тканин, такі як (ге) інверсійно-реверсійно приготовані послідовності та сатураційно-реверсійно приготовані послідовності, які збільшують контраст між тромбами та фоновими тканинами. Метода приготування для Т2 процедур можуть також знадобитися. | на завершення, препарати для процедур, що змінюють намагніченність, можуть також « удосконалювати контраст з агентами винаходу.
Композиції винаходу, включаючи пептиди, кон'юговані з тромболітиками пептиди та пептид-направлені - с мультимерні контрастні агенти, можуть бути оформлені як фармацевтичні композиції згідно з рутинними ч процедурами. Як тут використано, композиції винаходу можуть включати їх фармацевтично придатні похідні. -» "Фармацевтично придатні" означає, що сполуки або композиції можуть бути застосовані до тварин без недопустимих несприятливих ефектів. "Фармацевтично прийнятні похідні" означає будь-які фармацевтично прийнятні солі, естери, солі естерів або інші похідні сполук цього винаходу, які при застосуванні реціпієнтом (ее) є здатними забезпечувати (прямо або опосередковано) сполуки цього винаходу або їх активні метаболіти та їх - активні залишки. Інші похідні є такими, що підвищують біосаккумулювання сполук цього винаходу, коли такі сполуки вводяться ссавцям (тобто, дозволяють орально введеним сполукам бути швидше абсорбованими в ко кровоносну систему), або які підвищують доставку основної сполуки до біологічного компартменту (тобто, до 7 50 нервової або лімфатичної системи), таким чином підвищуючи експонування відносно початкових видів.
Фармацевтично прийнятні солі сполук дійсного винаходу включають протилежні іони, отримані з фармацевтично 4; прийнятних неорганічних та органічних кислот та базуються на відомих з рівня техніки.
Фармацевтичні композиції винаходу можуть бути введені будь-яким іншим шляхом, включаючи обидва - і оральне, і парентеральне введення. Парентеральне введення включає, але не обмежує, підшкірне, внутрішньовенне, внутрішньоартеріальне, внутрішньотканинне, внутрішньопорожнинне та інтрасекальне о введення. Коли введення є внутрішньовенним, фармацевтична композиція може даватись як болюс, двома або більше розділеними в часі дозами, або як постійна чи нелінійно протікаюча інфузія. Таким чином, композиції іме) винаходу можуть бути оформлені для будь-якого шляху введення.
Зазвичай, композиції для внутрішньовенного застосування є розчиненими в стерильному ізотонічному 60 водному буфері. Якщо необхідно, композиції також можуть включати солюбілізуючий агент та місцевий анестетик, такий як лідокаїн, для полегшення болю в місці ін'єкції. Як правило, інгредієнти будуть доставлятись або розділено, тобто у вигляді набору, або змішаними разом у вигляді єдиної дозованої форми, наприклад, як сухий ліофілізований порошок або вільний від води концентрат. Композиції можуть зберігатися в герметично запакованих контейнерах, таких як ампули або пакетики із зазначенням кількості активного агента в 65 одиницях активності. Коли композиція вводиться інфузією, вона може бути перекачаною в інфузійну місткість зі стерильною водою класу "вода для інфузії", фізіологічним розчином або іншими придатними для цого рідинами.
Коли композицію вводять ін'єкцією, ампули зі стерильною водою для ін'єкцій або фізіологічним розчином можуть бути передбачені, внаслідок чого інгредієнти можуть бути змішаними перед введенням. Фармацевтичні композиції цього винаходу містять сполуки даного винаходу та їх фармацевтично прийнятні солі з будь-якими фармацевтично прийнятними інгредієнтами, ексціпієнтами, носіями, адьювантами або розчинниками.
Контрастні агенти переважно вводяться пацієнтам у формі призначеної для іньєкцій композиції. Метод введення контрастного агента переважно є парентеральним, тобто внутрішньовенним, внутрішньоартеріальним, внутрішньотканинним, внутрішньопорожнинним та інтрасекальним. Фармацевтичні композиції винаходу можуть бути введені ссавцям, включаючи людину, в спосіб, подібний для інших діагностичних або терапевтичних 70 агентів. Дози, які вводяться, та спосіб введення залежатимуть від різноманітних факторів, включаючи вік, вагу, стать, стан пацієнта та генетичні фактори, та можуть, в кінці кінців, бути уточненими медичним персоналом в подальших експериментальних дослідженнях перед застосуванням томографії, як тут описано. В основному, дози, необхідні для діагностичної чутливості або терапевтичного ефекту, будуть в межах від приблизно 0,001 до 50,00Оуг/кг, переважно між 0,01 та 25,Оцг/кг маси тіла. Оптимальною буде доза, визначена 7/5 емпірично, як в подальшому тут розкрито.
Що стосується лікування тромболітичних станів, то кількість матеріалу для введення буде залежати від серйозності тромбоемболічних станів, місцезнаходження та розміру згустка. Точна доза для застосування та метод введення в цих обставинах можуть бути визначенні лікарем шляхом контролю за перебігом терапії. В основному, дози комбінації композиція/кон'югат тромболітичного агента будуть витікати виключно з доз, гор звичайно застосовуваних для тромболітичних агентів, не дивлячись на те, що покращення спорідненості до зв'язування з фібрином/згустоком додаванням композицій, розкритих тут, може дозволяти зменшення стандартних тромболітичних доз. Конкретні тромболітики задумані для використання в цій терапії (з прикладами доз та способів введення) є наступними: стрептокіназа 1-3 мегаодиниць через кожні ЗОхв. протягом Згод.; с аністреплаза ЗО одиниць; 2-5 хвилинною ін'єкцією;
ІРА (дикого типу) 50-15Омг; інфузією протягом бгод.; о дволанцюгова урокіназа (40-10Омг); інфузією протягом бгод.; одноланцюгова урокіназа (зсиРА) 3-12 мегаодиниць (30-10Омг; інфузією протягом 5год.; гідрид-плазміногенні активатори та похідні 20-10Омг.; ін'єкцією або інфузією; Ге) мутеїни плазміногенних активаторів 10-10Омг; іньєкцією або інфузією.
Винахід далі буде проілюстрований наступними прикладами, які ні в якій мірі не обмежують винахід, с заявлений в формулі. Га
Приклади
Синтези, характеристики та використання окремих високорелаксивних контрастних агентів композицій --
Зз5 винаходу далі будуть проілюстровані наступними прикладами. Специфічні параметри, включені в наступні о приклади, призначені проілюструвати здійснення винаходу та ні в якій мірі не обмежують винахід.
Обізнані в цій галузі спеціалісти розпізнають або зможуть встановити, використовуючи не більше як рутинні експерименти, багато специфічних втілень та методів, еквівалентних тим, що тут розкриті. Такі експерименти призначені окреслити обсяг формули винаходу. «
Приклад 1 - синтез пептидвмісних агентів для магнітно-резонансої томографії: шщ с Пептид з лінкерним субодиничним компонентам, приєднаним до С-кінців (Р-І(лінксерний субодиничний й компоненті). Незахищений пептид був одержаний, використовуючи стандартну Етос стратегію та «» диамінотритиловий полімер. Пептид був зациклізований, використовуючи трифторапетат талію, на полімері або в розчині. Після чого був відділений від полімеру, незахищений пептид був очищений за допомогою препаративної НРІ С (С-18 колонка, НОД/СНЗУСМ/ТРА). о Лінкерний компонент: До розчину Вос-Ор(Вос)-ОН.ОСНА (Текв.) та пентафторфенолу (1.2екв.) в дихлорометані було додано Ро-карбодиімід (1.2-1.Бекв.). Суміш перемішували протягом 3-5 годин при кімнатній - температурі. За одержаними результатами І С-аналізу констатували завершення реакції, полімер видаляють ко фільтрацією та розчинник випаровують при зниженому тиску до утворення неочищеного лінкерного компонента «(Вос-Ор((Вос)-ОРЖЩМ-о-Вос-М-р-Вос-І -диамінопропіонової кислоти пентафторфенілового естеру, 356-128) у о вигляді білої піни. 4) Попередник агента для магнітно-резонансної томографи: До розчину Р-лінкерного субодиничного компонента (Текв.) та лінкерного компонента «Вос-Орг((Вос)-Орі) (2.2екв.-) в ОМЕ було додано ОІРЕА (4-бекв.). Суміш струшували протягом ночі при кімнатній температурі. За одержаними результатами І С-аналізу констатували завершення реакції, розчинник видаляють при зниженому тиску. Неочищений продукт потім зтрушують в суміші з
ТЕА, водою та анізолом (9095/5905/595) при кімнатній температурі протягом З годин. Додають діетиловий етер до о утворення білого преципітату, який очищують препаративною НРІ С (С-18 колонка, НО г/СНЗСМ/ТЕА), наслідком ко чого є попередник агента для МК томографії у вигляді білої твердої речовини.
Попередник хепатного компонента: ООТАГА-Орії. До розчину ООТАГА-ОН (Текв.) та пентафторфенолу бо (1.2екв.) в дихлорметані було додано Ро-карбодиімід (1.2-1.5екв.). Суміш перемішували протягом 3-5год. при кімнатній температурі. За одержаними результатами ІС-аналізу констатували завершення реакції, полімер видаляли фільтрацією та розчинник випаровували при зниженому тиску до утворення неочищеного попередника хелатного компонента у вигляді білої піни.
Агент для магнітно-резонансної томографи. До розчину попередника агента для МК томографії (Текв.) та 65 попередника хелатного компонента (4.О0екв.) в ОМЕ було додано ОІРЕА (4.Оекв.). Суміш перемішували протягом ночі при кімнатній температурі. За одержаними результатами ІС-аналізу констатували завершення реакції,
розчинник видаляють при зниженому тиску. Неочищений продукт перемішували в суміші з ТРА, фенолом, метилсульфоновою кислотою, анізолом та дихлорметаном (90905/2,5905/2,590/2,590/2,590) протягом 15хв. при кімнатній температурі. Додавали диетиловий етер та утворювався білий преципітат, який збирали як Ннеочищений продукт.
Неочищений продукт реагував з СасізхН2О в деіонізованій воді до утворення неочищеного агента для МК томографії, який очищали, використовуючи препаративну НРІС (С-18 колонка, етанол/бОммол. АсОМН /).
Відповідні фракції об'єднували та етанол видаляли при зниженому тиску, після цього об'єднані фракції обробляли ацетатом натрію для сольового обміну. Після ліофілізації надмір солі було видалено, 70 використовуючи зворотнофазову хроматографію з УМУа(егг Зер-РакесС-18, картріджі з водою та етанолзода (50:50) елюентами. Відповідні фракції об'єднували, етанол видаляли при зниженому тиску та розчин ліофілізували, таким чином утворювався бажаний пептидний агент для МК томографії у вигляді твердої білої речовини.
Подібні методи використовують для синтезу інших агентів для магнітно-резонансної томографії.
Приклад 2 - методе для синтезу попередника хелатного компонента (Зупіоп 23) но в - мА - нЙ- - я - неен, чи юнУнсї Ва НВО щі ь а ве сч
М
Ам кн о рон» . з: ке Вас, в, сьсоью Ки с с с о я (нЯсьсоО» те (сн)» а: ве Во, е Во сч «с (неьсСОх хАСНз 5 к- Н, Кк Вр с «- | е (2,0) » ї в « ю бьсьст,и соссн,ь 2 с ІЗ ін ' у соксісньх і йо» и? всьсоют" | оюісну, ' с со (несьсо, 1 СОМ - Гідроксиметилдіетилентриамін визначеного стереохімічно тригідрохлориду (25,15г) (оптично чистий вихідний г) матеріал: Зуп. Сотт. 29 (14), 23772391 (1999), рацемічний вихідний матеріал: СоїЇ. Слеспи. Спет. Сотт. 34, 630-634 (1969)) були розчинені в суміші деіонізована вода/1,4-діоксан та рН розчину було встановлено між 8 та їмо) 9 водним розчином гідрохлориду натрію. Дитретбутилдикарбонат (3,бекв.) був розчинений в диоксані та доданий
Ф при температурі між 102 та 2020. Реакційну суміш перемішували протягом 12-20 годин при кімнатній температурі.
Реакційну суміш потім розводили водою та екстрагували з етилацетатом. Органічний екстракт послідовно екстрагували з водою, 5Б а) ВосоО, МаОН-діоксан в) Ммаосі, Маосі», ТЕМРО, фосфатний буфер, АСМ (Ф. с) Вивг, Св»СО», ОМЕ ко а) ТРА, СНЬСІ»; 2М НС, ЕБО е) Ебутилбромацетат, ОІРЕА, ОМЕ во У Но, Ра/С, ЕЮАс
Метод А для синтезу (Зупіоп ЯЗ)
Крок а - захист амінів насиченим розчином хлориду натрію. Органічний екстракт висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували під вакуумом до утворення масла, яке очищали хроматографією на силікагелі сумішшю етилацетатггексан. Остаточний вихід очищеного продукту був 30,11г. "Н ММЕ. (ЗО0МН2): 5,18 65 (4, 9-7,9Н2, 1Н), 4.76 (ре, 1Н), 3,8-3,0 (т, 10ОН), 1,47-1,42 (28, 27Н). М5 (т/2): 456,4 |Ме-Ма!".
Крок Б - окислення гідроксильної групи
(базується на процедурі окислення, розкритій в 7йао еї аї. 9. Огг. Спет. 64, 25642566 (1999), маосі, маось,
А, ТЕМРО, во
Де
Восн КО чннвос рповрлафевийсь о Восн МНВос асеїюпйте 70 ВОС-захищений триамін (29,94г) був розчинений в ацетонітрилі. Фосфатний буфер, що містить 21,6г
МаньоРОо, 21,6г МагНРО, та достатню для отримання об'єму 500мл кількість деіонізованої води було додано (З0О0мл) перед 2,6,б-тетраметилпіперидиніл-1-оксі (ТЕМРО) (0.07екв.). Суміш енергічно перемішували та підігріли до 359. Хлорид натрію (2.О0екв.) був розчинений в деїіонізованій воді(1ООмг/мл). Розчин хлориду натрію та хлорного вапна (0.02екв. приблизно 0.259565 водний гідрохлорит натрію) були додані, коли 75 підтримувалась постійна температура. Після додавання окислювача, реакційну суміш перемішували протягом 24 годин. Додатковий ТЕМРО (0.07екв.) було додано та реакційна суміш перемішувалась протягом 24 годин.
Реагенти охолодили до кімнатної температури. Додали воду та довели рН-8 2,0М водним Маон. Охолоджений водний розчин сульфату натрію було додано (З0Омл) при дотримуванні постійного рН. Розчин екстрагували з невеликим об'ємом метилтретбутилового етеру та відставили вбік. Водний шар підкислили до рН 3-4 2,0М водним НОСІЇ та екстрагували з двома невеликими об'ємами метилтретбутилового етеру. Органічний екстракт об'єднали з тим, що був відставлений, та зконцентрували під вакуумом. Продукт без очищення був використаний в Кроці с нижче. "Н ММЕ (ЗО0МН2): 5,8 (, 1), 5,3 (т, 1Н), 4,4 (М, 1Н), 3,6-3,2 (т, 6Н), 1,47-1,43 (28, 27Н).
М5 (т/2): 470.2 |МіМа)
Крок с - захист карбоксильної кислоти бензилом с (8)
Вийг, С8»СО»,
У.Утлабт І«о) сч с
Вихідний матеріал - карбонова кислота (178г) був розчинений в обезвоженому ОМЕ. Карбонат цезію (2.Оекв.) ж було додано та розчин перемішували протягом 30 хвилин. Бензилбромід (1.1екв.) було додано по краплині при со кімнатній температурі Реакційна суміш перемішувалась в інертній атмосфері протягом 18 годин. Реакційна суміш була розведена водою та двічі екстрагована етилацетатом. Органічні фракції об'єднували та послідовно відмивали насиченими розчинами бікарбонату натрію та хлориду натрію. Органічні фракції концентрували до масляноподібного стану (270г) та потім очищали хроматографією на силікагелі, використовуючи « 0 етилацетат:гексан. "Но ММ (З00МН2): 7.3 (8, 5Н), 5,6 та 5,15 (205, 1Н), 5,1 (в, 2Н), 4,5 (рв, 1Н), 4,0-41 - с (т, 1Н), 3,5-3,2 (т, 6Н), 1,45 та 1,4 (25, 27Н). М5 (т/2): 560.3 МаМа/|". й Крок а та е - зняття захисту з амінів та алкилювання и? в
Со АМ ай. НСС ни и - н, іме) з 50
Ф і: ; си ІРЕА,
Ф) ю в-руурон, 60
ВОС-захищений триамін (250г) збовтали в розчині 1:11 ацетонітрил"4Н водний НС! та перемішували приблизно 2,0 годин. Ацетонітрил видаляли під вакуумом та розчин, що залишився, ліофілізували. Отриманий таким чином залишок одразу ж розчиняли в ОМЕ та диізопропіламіні (в достатній для підняття значення рН до 8 кількості). Третбутилбромацетат було додано (12,О0екв.). Після закінчення додавання, реакційна суміш була бо підігріта до 502 С та перемішувалась протягом 18 годин. При завершенні реакції об'єм реакційної суміші був подвоєнний додаванням води, після чого був проекстрагований двічі з етилацетатом. Органічні фракції були об'єднані та послідовно промиті водою, насиченими розчинами бікарбонату натрію та хлориду натрію. Органічні фракції концентрували до масляноподібного стану (270г) та потім очищали хроматографією на силікагелі, використовуючи етилацетатгттексан. Загальний вихід очищеного продукту становив 190г. М5 (т/2): 809.5
ІМе-Ма/.
Крок а - зняття захисту з карбоксилу запьртию сніопіпііааіілтьт дня й ве СН.
Реактор з нержавіючої сталі був заповнений бензиловим естером (157г), 10906 палладієм у вуглеці (19,8Гг), етилацетатом та був гідрогенізований при 45рзі протягом 12 годин. Фільтрація через целіт та концентрування під вакуумом дали масляноподібний продукт. Він був розчинений в етилацетаті/гексані та очищений сч хроматографією на силікагелі, забезпечуючи ОТРА карбонової кислоти пентатретбутиловий естер (вихід: 8295). (СУ)
М (т/2): 719,5 |МНІ. Коли цей продукт використовують в синтезах контрастних агентів, застосовуючи інші хірільні елементи, не спостерігаються діастереомери, а тому роблять висновок, що цей матеріал по-суті є оптично чистим по обмеженню виявлення "Н ММЕ. Ге зо Метод В для синтезу Зупіоп ЯЗ с у: охаайт ї у: сі нн
Фе во іо ій со, о, г) 1
Спиртовий |див. Змп. Сотт. 29 (14), 2377-2391 (1999) для синтезів з гідроксиметидіетилентриаміну) « 20 вихідний матеріал (105,0г), ацетонітрил (1,0л), фосфатний буфер (1,0л., приготований розчиненням 100мг з с МаноРОо, та 10мг Ма»НРО,, в 1,Омл води та потім доведений до рН-4.5 НеРО,)) та ТЕМРО (7,0г) були об'єднані та нагріті до приблизно 452 та 509С. Розчин, який складається з хлориту натрію (29,8г розчиненого в 298мл :з» води) та огідрохлориту натрію (744ул), було додано до розчину, поки температура підтримувалась в межах 452-502. Реакційна суміш перемішувалась енергійно протягом 4-10 годин. Реакційна суміш охолоджувалась до
Кімнатної температури, після чого розділились дві фракції. Органічна фракція була ізольована та об'єднана з (ее) насиченим водним розчином хлориду натрію та перемішувалась протягом 15 хвилин. Органічна фракція була з ізольована та зконцентрована під вакуумом, даючи маслоподібну речовину (171г), яка була очищена хроматографією на колонці, використовуючи гексанізопропанол з 0,195 триетиламіном, таким чином ко забезпечуючи 81г незбагаченого продукту у вигляді масла. МЗ (т/2): 719.5 |МН|". Оптична чистота продукту, юю 50 отриманого за цим методом, не відрізняється від вищенаведеного.
Приклад З - полімери для твердофазового синтезу модифікованих пептидів з С-термінальними 4) функціональними аміногрупами.
Пептиди можуть бути приготовані твердофазовим синтезом. При твердофазовому синтезі лінкери та полімери вибирають залежно від типу пептидів, які будуть синтезовані (тобто, необхідні функціональні групи на
С-кінцях, захищені або незахищені пептиди), та від способу синтезу, який буде застосований (тобто, Етос або
ВОС хімія, ручний чи автоматизований синтез, "сопііпиоивз ПЙом/" чи "раїсп" реактор). Наприклад, при синтезі о пептидів з функціональними карбоксильними групами на С-кінцях захищені амінокислоти приєднуються до різних іме) полімерів, таких як НМРВ полімери, 2-хлоротритилхлоридний полімер та БОЗКІМ полімер. З іншого боку, при синтезі пептидів з аміногрупами на С-кінцях діаміни можуть бути приєднані до тритилового полімеру. 60 Полістерольні (РБ5) полімери можуть бути використані для "раїсй" синтезів, тоді як поліетиленглікольмодифіковані полімери (РЕС) є придатними для "сопіїіпиоив Пом/" та "раїсп" синтезів. Багато трифенілметильних РОЗ полімерів, включаючи 1,3-біс--(амінометил)-бензолтритил РО полімер, є комерційно доступними. Якщо потрібний тритил РЗ полімер недоступний, то можуть бути використані аналогічні описаним для РЕС полімерів процедури для приєднання диаміну до тритил РЗ полімеру. 65 Синтез 1,3-різ-(амінометил)-бензолтритил полімеру обговорений в прикладі. Решта диамінів може бути приєднана до тритилового полімеру аналогічним способом.
Приготування 1,3-різ-(амінометил)-бегоолтритил РЕС полімеру.
І
РВ-РЕВТ З
Ас ення
СІ
По-перше, тритилспиртовий полімер (25, МомазЗуп ТОТ полімер, МомаВіоспет) було поміщено у воронку та послідовно промито ОМЕ, СНоСіо, та толуолом. Після повного видалення розчинника, матеріал перенесли до колби, обладнаної дефлегмаційним холодильником. Додали толуол (250мл) та ацетилхлорид (25мл), пульпу т нагріли до 702С та перемішували протягом 1,0 години. Додаткову порцію ацетилхлориду (25мл) було додано та пульпу перемішували протягом 2,0 годин при 7020. Пульпу фільтрували та полімер послідовно відмивали толуолом та СНьЬСі». о
Нн
РБ-РЕО ши о (8) пон іні проніс ль рах с щ Мн, сч . - й . с
По-друге, свіжоприготовлений тритилхлорид-полімер та ТНЕ (250мл) поміщали в колбу. До пульпи було додано 1,3-різ-(амінометил)-бензол (1О0екв., виходячи із заміщеного полімеру 0,2З3ммол/г) та суміш перемішували «7 протягом 18.0 годин при кімнатній температурі. Пульпу відфільтрували та полімер послідовно промивали водою, ! ! | г)
ОМЕ, СНьЬСіІ», метанолом та СНЬСІ». Полімер висушували під вакуумом (кімнатна температура, 1-б0мм На) до постійної ваги (25,4г). Заміщуюча стехіометрія була проведена, використовуючи кількісну нінгідринову процедуру.
Приклад 4 - синтез совалентних кон'югатів (Зупіоп Я1, 22, 44 та Я5) « 20 Метод синтезу Зупіоп 41 -в с з (ее) - іме) з 50 42)
Ф) іме) 60 б5 сво, Впвг н опо ль ль льон и ; ос, ос М вос то атіпо-ріоріопіс асюй І
Й пк лна й 2. Но. РУС "
Ів й ур тогвь иО. сч о ви, 2 (Се) о, Ви сч н с «- н СО, Ви г)
У ту ші с в ОХ Ви
І» Ів Ви (ее) 2,3-різ-трет-бутоксикарбоніламінопропіонової кислоти бензиловий амін -3з Розчин карбонату цезію (6,5г) та воду було додано до 2,3-різ-третбутоксикарбоніламінопропіонової кислоти (3,04г) в ацетонітрилі (25мл). Суміш перемішували протягом 40 хвилин при кімнатній температурі. Розчинник ко видаляли під вакуумом. ОМЕ (50мл) було додано до залишку розчину. Розчин бензилброміду (1.4З3мл) та ОМЕ (5.Омл) було додано протягом 15 хвилин при кімнатній температурі. Суміш перемішували протягом 18 годин та о потім суміш розводили етилацетатом (10Омл) і водою (5Омл) та перемішували протягом 15 хвилин. Фракції 4) розділяли та органічну фракцію висушували над сульфатом натрію. Суміш фільтрували та фільтрат концентрували під вакуумом до одержання маслянистої речовини (3,бг). Маслянисту речовину очищали хроматографією на колонці з етилацетат/гексаном, одержуючи масло (1,8г). МОЗ (т/7): М Ма)" -417. "Н ММ (ЗООМНЗ): 1,4 (в, 9Н), 2,4 (т, 2Н), 4,4 (т, 1Н), 4,8 (т, 1Н), 6,5 (т, 1Н), 7,3 (т, 5Н). о Тригідрохлорід 2,3-диамінопропіонової кислоти
Розчин бензилового естеру 2,3-різ-трет-бутоксикарбоніламінопротонової кислоти (1,8г), 4М водного НОСІ іме) (40мл), та ацетонітрил (5Омл) перемішували протягом 18 годин при кімнатній температурі. Розчинник видаляли під вакуумом та суміш розводили етилацетатом (10Омл) та водою (5Омл), перемішували протягом 15 хвилин. 60 Фракції розділили та водну фракцію випарували до сухого залишку (1,23г піна/сироп). "Н ММЕ (З00МН?2): 3,2-3,5 (т, 2Н), 4,2-4,35 (т, 1Н), 5,13-5,25 (ад, 2Н, 9У-11,8, З3,1Н2).
Бензиловий ефір 2,3-біз-карбокси-ОТРА-пропіонової кислоти
Розчин гідрохлориду 2,3-диаміно-пропіонової кислоти (6,65г), ВБІСО)ЮОТРЕ (40,0г, "Зупіоп 3"), НОВІ (8,5Гг),
ІС (9,Омл), диізопропілетиламіну (15,О0мл), СНЬСІ» (400мл) та ОМЕ (200мл) перемішували протягом 48 годин. 65 Суміш розводили метиленхлоридом (500мл) та водою (25О0мл), та потім перемішували протягом 15 хвилин.
Фракції були розділені та органічна фракція була промита насиченим карбонатом натрію (250мл), насиченим хлоридом натрію (25О0мл) та висушена над сульфатом натрію. Суміш фільтрували та фільтрат концентрували під вакуумом до одержанна масла. Масло очищали хроматографією на силікагелі, використовуючи етилацетат та гексан до одержання 28,0г матеріалу. М5 (т/2): (М-217-798; М'-1),-1595. 2,3-різ-карбокси-ОТРА-пропіонова кислота
Гідрогенізація бензилового ефіру 2,3-різ-карбокси-ОТРА-пропіонової кислоти (17,0г) виконувалась в етилацетат/триетиламіні (10:3), використовуючи 1095 палладій в вуглеці (6б,0г) як каталізатор, протягом 24 годин при 5БОрзі. Резервуар продувався азотом та суміш фільтрували через Сеїй Є, концентрували при зниженому тиску, одержуючи 16,0г маслянистої речовини. М5 (т/2): (М-217-753; М--1)7- 1504. 70 Методи для синтезу Зупіоп 52 "а ріс, НОВЕ
Н Іл нн,
СТРЕ-СОН оррюснь (несвСОоь 2 Ки со . сч з 00 сьсою Сосна» ОН у сожіснь» о (нсьсо,с ДІ т с(СНУ» (Се) зо (нУС)зСОсС" (Ннасьстьс сч с «-
Я : и г) вісн.СО,сСН.РЬ РЕ и н., РОС | ч ші с . 5 С(СНаь (несзСОт т (ее) що о о й (всьсо,ть я ) ос» р есьоонь
Ф (всьсос А исьсоьс ті уж союень (нсьсоЄ (Бсьсос о ММ ю -Вів(2-(Біз-трет-бутоксикарбонілметил-аміно)-3-12-(різ-трет-бутоксикарбонілметил-аміно)-етил/|-Ї-бутоксикарбон ілметил)-аміно)-пропіонамід|-діетилентриамін 60 До розчину діетилентриаміну (3,1бмл), ацетонітрилу (70Омл) та диізопропілетиламіну (10,4мл) було додано передреагований (ЗОхв) ВББССО)ЗОТРЕ (42,0г, "Зупіоп 3"), НОВІ (7,9г), ЕОС (11,2г) та диізопропілетиламін (1Омл) в ацетонітрилі при кімнатній температурі. Реагенти перемішували протягом 16,0 годин та потім концентрували при зниженому тиску. Масло об'єднували з етилацетатом, екстрагували з водою водою та насиченим водним розчином хлориду натрію, а потім концентрували. Масло очищали хроматографією на колонці з силікагелем, бо використовуючи гексан/ізопропанол/гтриетиламін, забезпечуючи 22,5г продукту. М5 (т/7): (МАНІ -1503.
ММЗ
-Вів(2-(рБіз-трет-бутоксикарбонілметил-аміно)-3-12-(різ-трет-бутоксикарбонілметил-аміно)-етиліІ-(трет-бутоксика рбонілметил)-аміно)пропіонамід1-М 2-(бензилоксикарбонілметнл)-діетилентриамін
Бензил-2-бромацетат (2,54г) було додано до розчину попередніх аміносполук (13,5г), ацетонітрилу (200мл) та карбонату натрію (1,18г). Суміш нагріли до 602 С та перемішували протягом 15 годин. Реакційна суміш була охолоджена до кімнатної температури та зконцентрована при зниженому тиску. Етилацетат та вода були додані, фракції були розділені. Органічна фракція була відмита насиченом розчином хлориду натрію, потім зконцентрована при зниженому тиску, в результаті чого утворилось 14,5г масла. М5 (т/2): ІМ) -1651.
М7,МЗ -Вів(2-(Біз-трет-бутоксикарбонілметил-аміно)-3-12-(різ-їеп-бутоксикарбонілметил-аміно)-етилі-(егі-бутоксика рбонілметил)-аміно)пропіонамід1|-М 2-(карбоновакислота)-диетилентриамін
Вищевказаний бензиловий естер (14г) був гідрогенізований в етилацетат/триетиламіні (49:1) при 5БОрві протягом 16,0 годин в присутності 1095 палладію у вуглеці (3,5г). Одержану сіміш фільтрували через СеїйеФ та то концентрували у вакуумі, забезпечуючи 12,08г масла. М5 (т/2): (МАНІ 1561.
Синтези бЗупіоп 4
Бос-ом у в -- - -- Вон 0 ннвоє --щ У
ЇЇ -
Восн Нас с
ТЕА й НСОМТРЕ і)
Ї віник нині щі
Соорітю (Се) сч с
ИСОЮТРЕ СОЮтРЕ МИСОЮТРЕ НеКСОДЛРЕ м нтаьс (2,0) пр « - с М7,МЗ-Вів-Бутоксикарбонілднетилентриамін й До розчину диетилентриаміну (2,12г, 20,бммол) та триетиламіну (З30,Ог, 41,3ммол) в ТНЕ (100мл) було додано "» Вос-ОМ (10,65г, 43,3ммол) при кімнатній температурі. Суміш перемішували протягом ночі. До суміші було додано 7ООмл етеру та потім екстрагували з фосфатним буфером (рН-З,100ммол). Водний розчин довели до рН-11 та екстрагували з дихлорметаном. Органічну фракцію відділили та висушили над ангідридом сульфату натрію. Солі
Ге | відфільтрували та розчинник видалили при зниженому тиску, що дало 5, 55г вказаної сполуки у вигляді -з безбарвного масла. М5 (т/7) : (МАНІ -304.1.
М',МЗ-Вів-Бутоксикарбоніл-М 2-(Бензилокснкарбонілетил)-Діетилентриамін іме) До розчину вищевказаної сполуки (1,0г, З3,ЗОммол) в метанолі (40мл) було додано бензилакрилат (1,07тг, 7 50 6,59ммол) при кімнатній температурі. Суміш рефлюксували протягом З днів. Розчинник видаляли при зниженому тиску, що дало жовтозабарвлену рідину, яка містить потрібну сполуку та бензилакрилат. М5 (т/2): (МАНІ 466.1. щи М2-(Бензилоксикарбонілетил)-Діетилентриамін
До суміші вищевказаної сполуки та бензилакрилату (1,0г) в дихлорметані (25мл) було додано ТЕА (13,вмл) при кімнатній температурі. Суміш перемішували протягом З годин при кімнатній температурі та потім до суміші 29 було додано ІМ НСІ та воду. Водну фракцію відібрали та ліофілізували, що дало потрібну сполук (420мг) у
ГФ) вигляді клейкоподібної твердої речовини. М5 (т/21: (МАНІ -266.2. т ММЗ -Вів(2-(Віз-Тепі-Бутоксикарбонілметил-Аміно)-3-12-(Віа-Теп-Бутоксикарбонілметил-Аміно)-Етил|-(Теп-Бутоксика 60 рбонілметил)-Аміно)ПропіонамідІ-М 2-(Бензилоксикарбонілетил)-Діетилентриамін
До розчину вищевказаної сполуки, "Зупіпйоп 3", НОВІ та диізопропенілетиламіну в СНЬСІ»о та ОМЕ додають
ІС. Суміш перемішували протягом 48 годин при кімнатній температурі. Суміші розводили дихлорметаном та водою та потім перемішували протягом 15 хвилин. Фракції розділяли та органічну фракцію промивали насиченим карбонатом натрію, насиченим хлоридом натрію та висушували над сульфатом натрію. Суміш 65 фільтрували та фільтрат концентрували у вакуумі до одержання масла. Масло очищали хроматографією на силікагелі, використовуючи етилацетат та гексан, до одержання потрібної сполуки.
М,МЗ-Вів(2-(Вів- Теп-Бутоксикарбонілметил-Аміно)- 3-Ц2-(Вів-Теп-Бутоксикарбонілметил-Аміно)-ЕтиліІ-(Теп-Бутоксикарбонілметил)-Аміно)Пропіонамід|-М 2 -(пропіоновакислота)-Диетилентриамін
Резервуар для гідрогенізації наповнюють вищевказаною сполукою, 1090 паллідію у вуглеці, етилацетатом та триетиленаміном. Резервуар продувають азотом, потім воднем. Суміш перемішують протягом 24 годин в атмосфері азоту (5Орзі) Резервуар продувають азотом та суміш фільтрують через СеМйеяй та фільтрат сконцентрують при зниженому тиску до одержання продукту у вигляді масла.
Синтези "Зупійоп 25" 18 В В -- 1.4Мм НО, е акхапе 18Вос,0, 2. ЦО
МНВп 2 нуРає мн. мн, 3. Влвк, 4. НОЇ | і р їх й с
Г о
С вись, Мн ни урохва
БОТРЕ-ССЬН х
Ме, вію ГОМ, СОдвю /о ; бод, виодівчос о 4 Сом й, о СОВИ у сч «- кі со на 7 у дух не уовви « 2 вс г (Ви 2 - юю Го сови . з вЩюС ос Сови СОлВи
Метил-3-(Бензиламіно)-2-((Бензиламіно)Метил)-Пропіонат (ее) Метил-2-(бромметил)-акрилат (1,00г 5,бммол, 1Оекв.), розчинений в ацетонітрилі (2Омл), по краплині було з додано (при перемішуванні та при кімнатній температурі) до розчину бензиламіну (1,83мл, 16,8ммол, 1.Ббекв.) в ангідриді ацетонітрилу (1Омл). Після 16 годин, етер (100мл) було додано та тверда біла речовина ко (бензиламінгідробромід) була відфільтрована. Фільтрат зконцентрували при зниженому тиску, що дало 1,90г неочищеного масла. Масло розчиняли в етилацетаті (150мл) та відмивали з НоО та Масі соляним розчином. о Органічну фазу висушували (М950)), та випаровували при зниженому тиску. Одержане прозоре масло 4) очищували флеш-хроматографією (гександіол:"етилацетат), що дало 1,38г (7995) продукту. "Н ММ (З0ОМНа,
СОСІ 3): 8 1,68 (85, 2Н), 2,79-2,90 (т, 5Н), 3,68 (8, ЗН), 3,75 (в, ЗН), 7,21-7,32 (т, 10ОН).
Метил-3-(Аміно)-2--Амінометил)-Пропіонат
Метил-3-(бензиламіно)-2-((бензиламіно)метил)-пропіонат (2,27г, 7,Зммол, 71,Оекв), розчиняли в о метиленхлориді (2Омл) та 4,0мл 4М розчин НСЇ в діоксані було додано. Розчин перемішували при кімнатній температурі протягом 20 хвилин та розчинники потім випаровували при зниженому тиску, що дало білий іме) порошок, який розчиняли в ХОмл Меон. Каталізатор (1095 палладій у вуглеці, 75Омг) було додано при 09 в атмосфері аргону та суміш перемішували при 45рвзі Но протягом 18 годин, потім фільтрували через Сеїе. 60 Продукт (1,47г) був ізольований МеонН та випаруваний при зниженому тиску. "Н ММЕ (З00МН, Оаб):6 3,25-3,43 (т, 5Н), 3,82 (8, ЗН).
Метил-3-«ВОС-Аміно)-2--ВОС-Амінометил)-Пропіонат
Диамін (1,449) прореагував з дитретбутилдикарбонатом (3,22г, 14,вммол, 1,05екв.) в діоксан/"водному Ма»гСОз розчині при 09С протягом 71 години та потім при кімнатній температурі протягом 18 годин. Суміш потім бо підкислювали (рН-4) 0,5М КН5О, та діоксан випаровували при зниженому тиску. Водну порцію екстрагували з етилацетатом, висушували над М950О, та концентрували при зниженому тиску до одержання неочищеного масла, яке очищували флеш-хроматографією (гександіол"етилацетат) що дало 1,86бг (8095) запланованого продукту. ММК (ЗОО0МН:, СОСІя) : 5 1,41 (в, 18Н), 2,66-2,78 (т, 1Н), 3,10-3,27 (т, 2Н), 3,50-3,62 (т, 2Н), 3,68 (8, ЗН), 5,17-5,27 (01, 2Н). 3-«ВОС-Аміно)-2--"ВОС-Амінометил)-Пропіонова кислота
Метиловий естер (1,50г) розчиняли в 15мл 2:1 суміші ТНЕ/НьО. ПОНХН.О (0,95г) було додано при 09 Суміш перемішували при температурі між 09С та кімнатною температурою протягом 44 годин. ТНЕ випаровували при зниженому тиску та водний розчин екстрагували з ЕЮАс. Водну фазу підкисляли (рН-3) 0,5М водним розчином 70 КНБЗО, та екстрагували з ЕІЮАс. Об'єднані органічні фракції промивали ЗОмл НоьО та висушували (Ма5о)).
Розчинники випаровували при зниженому тиску, що дало 1,32г (92965) продукту. "Н ММЕ (ЗО00МН2, СОСІв8): 5. 1,40 (5, 18Н), 2,66 (в, 1Н), 3,27-3, 47 (т, АН), 5,42 (8, 1Н).
Бензил-3--«ВОС-Аміно)-2-(ВОС-Амінометил)-Пропіонат
Кислота (1,01г) прореагувала при кімнатній температурі з бензилбромідом (0,45мл) в ОМЕ ангідриді, що 79 містить Св»СО» (2,07г). ОМЕ випаровували при зниженому тиску та залишок був розділений між НО та ЕЮАс.
Органічна фракція була відмита сольовим розчином та висушена (Мо5О /). Розчинник випаровували при зниженому тиску та залишок очищували флеш-хроматографією на силікагелі (Гександіол/ЕЮАс 95:5 до 9:11 до 85:15). Вихід продукту становив 1,16бг (9096). "ЯН ММ (З00МН:, СОСІв): 5 1,42 (в, 18Н), 2,79 (аціпб, 1Н, 5,6Н2), 3,1-3,3 (т, 2Н), 3,5-3,65 (т, 2Н), 5,13 (8, 2Н), 5,15-5,28 (т, 1Н), 7,30-7,40 (т, 5Н). М5: 431.15 (М'-1).
Бензил-3-Аміно-2-Амінометил-Пропіонатдигідрохлорид
Бензил-3--«ВОС-аміно)-2-(ВОС-амінометил)-пропіонат (1,15г) розчиняли в бмл 4М розчині НСІ в діоксані.
Суміш перемішували при 09С протягом б годин та диоксан випаровували при зниженому тиску. Залишок титрували з етером та одержували фільтрат, який є неочищеною сіллю диаміндигідрохлориду (0,81г). "Н ММ сч ря (З00МНа:, Меоб): 5 3,1-3,3 (т, БНАСНОООЮ), 3,55 (в, в діоксані), 5,19 (в, 2Н), 5,15-5,28 (т, 1Н), 7,20-7 40 (т, 5Н) М5: 209.00 (М'-1) о
Бешил-3-«"М-вБ(СО)ОТРЕ Карбоксамід)-2--"МЕБ(СОЮТРЕ Карбоксамід)Метил-Пропіонат
Кислоту (2,00г, 2,8ммол, 1,5екв.) розчиняли в 5мл ангідриді дихлорметану. Диамін (0,26г), НОАЇ (0,32г) та диіїзопропілетиламін (0,65мл) прореагували при 09С з НАТИ (0,88г) протягом 2 годин. Полімер Тріс-аміну со зо (О,5г), полімер ізоціанату (0,5г) та НАТИи (0,42г) були додані та реакційну суміш перемішували протягом 16бгод. при кімнатній температурі. Полімери відфільтровували та фільтрат випаровували. Залишок розподіляли між с
НгО та ЕОАс. Органічна фракція була відмита Но, насиченим МанСО»з та сольовим розчином (2Омл) та її с висушували (М950)). Розчинник випаровували при зниженому тиску. Отримане масло очищували флеш-хроматографією на силікагелі (Гександіол/"Ацетон/ЕвМ) та одержували 1,13г продукту. М5: 1607.95(М1) -- зв та 1629.95 (М'нМа). со 3-(М-44(СО)ОТРЕ Карбоксамі)-2-"М-Б(СОЮТРЕ Карбоксамід)Метилпропіонова кислота
Бензиловий естер (0,90г, О0,5бммол) розчиняли в ЗОмл ЕТОАс та до нього ЕЄЇз3М (мл) було додано. 1095 палладію у вуглеці (0,50г) було додано та суміш перемішували протягом 15 годин при 45рзі водню. Каталізатор відфільтровували та розчинники випаровували, що дало 0,82г. Ме: 759.55 (М2Н/2). «
Приклад 5 - синтези фібринзв'язуючих агентів для магнітно-резонансної томографії -о с зга ;»
Оїашипо Му говіп (3 (ее) - іме) Рернаю вупітезів з 50 42)
Ф) з о о о і й от ее ов, 60 мак ння б5
В й їм
З а я ожнокно о в Но - Білаті) (дет Мн;
ОВи
Сусігайог те» в ;
ГУ
Ва о і ная. Х. ще . н " (У х ох ої но н о 7 Но н -нн, я Дон п сви о) (9,
Ожріию сн (Се)
Змійка йо с 8 й,
Ед ак,
Зо Он ощ ої с с і со і ни з Ми тва пови БІ НВЕНО БУМ о -тр- « сво - с ;» 1) пусвовувів со 23850, МОН - ра з о ва 7 с вн н н н с т Шо
Е ЕІ з т
НІ чіночноа ної нНно;н сВотРАСОМН сот х - СЯ - ши » ан сн сн о Конструювання пептиду: 3,39г 13-різ-амінометил)-бензолтрифенилметилу МоухазЗуп ТОТ полімер (виміряні ко заміщення-0,59ммол) поміщали в стандартну пептидну колонку і загружали в пептидний синтезатор. Синтез проводили, застосувуючи стандартну Етос стратегію. Кеппіювання проводили після приєднання першої бо амінокислоти, використовуючи ацетатний ангідрид, 695 диізопропілетиламін в ЮМЕРЕ. Після того, як синтез повністю завершиться, полімер видаляли з колонки та поміщали в реакційний резервуар. Полімер був промитий один раз СНоСІ» та відфільтрований. Полімер потім був оброблений 195 трифтороцтовою кислотою в СНоСіо та поміщений в механізм для зтрушування на 10 хвилин. Суміш відфільтровували через реакційний резервуар та фільтрат охолоджували. рН об'єднаних фільтратів доводили до приблизно 8 триетиленаміном, та розчин 65 Концентрували під вакуумом до маслоподібного стану. Після преципітації у воді білу тверду речовину відфільтровували та промивали водою і диетиловим ефіром. Осад висушували всмоктуючою фільтрацією,
переносили в ОМЕ та розводили ацетонітрилом. Розчин охолоджували на льодяній бані та обробляли 1,5г трифторацетатом талію протягом 2,0 годин. рН розчину доводили триетиленаміном до рН-8 та потім концентрували під вакуумом. Воду було додано до масла та одержаний преципітат збирали всмоктуючою фільтрацією. Осад відмивали водою та одержували 2,/7г диетилового етеру неочищеного модифікованого пептиду, що має С-термінальну функціональну аміногрупу. Приклад синтезу
НоМ-Іец-Рго-Сув-Авр-Туг- Туг-СІу-Тиг-Сув-Вір-Азр-СО-МНОНоСВНАСНОМН. (ЗЕБЕО ІО МО:21) був підтверджений отриманими даними т/7 1792.8 |М-Ма|". Модифікований пептид очищували препаративною НРІС. Фракції з близьким ступенем чистоти (98-10095) об'єднували та ліофілізували без нейтралізації. 70 Модифікований пептид (32г) та ковалентний кон'югат (вищевказаний Зупійоп 22) (3,95г) розчиняли в дихлорметані. Диізопрошлетиламін було додано крапля за краплею при показнику рН-9, диізопропілкарбодиімід (2екв.) та НОВІ (2екв.) одночасно були додані до суміші. Після двохвилинного перемішування, диізопропілетиламін було додано крапля за краплею при значенні рН-9. Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом двох годин. Додатковий попередньо активований Зупіпоп 22 (диізопропілкарбодиімід, 75 диізопрошлетиламін, та НОВОЮ було додано однією порцією. Розчинники видаляли у вакуумі та залишок розчиняли в етилацетаті, який послідовно промивали 0,1М соляною кислотою, насиченим бікарбонатом натрію та насиченим водним розчином хлориду натрію. Органічну фазу висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували при зниженому тиску до одержання світло-жовтої піноподібної речовини (7,8Гг).
Піну розчиняли в дихлорметані та очищували флеш-хроматографією (дихлорметан:метанольний елюент), 2о забезпечуючи 5,5г білого осаду. Білий осад перемішували в суміші з ТЕА, водою та триетилсиланом (9096/590/5906, ЗОмл) при кімнатній температурі. Суміш нагрівали до 409 та перемішували протягом 2 годин.
Розчин концентрували до об'єму приблизно між З та бБмл, потім охолоджували до кімнатної температури.
Діетиловий етер було додано та утворився білий преципітат. Суміш дозволено перемішувати протягом 10 хвилин, осад було зібрано фільтрацією та відмито диетиловим ефіром. Осад висушували під вакуумом, с забезпечуючи 4,Ог білого осаду. Осад розчиняли в суміші вода:ацетонітрил (20мл, 4:1 відношення) та очищували о препаративною хроматографією до жовто-білого осаду попередника МК томографічного агента (1,6Гг).
Попередник МК томографічного агента (1г) прореагував з одним еквівалентом сасізхбНою в дистильованій деіонізовані воді при рН, доведеній до значення б додаванням 1М МаонН. Комплекс гадолінію очищували зворотнофазовою хроматографією (У/агеге Зер-Раке с-18), використовуючи дистильовану деіонізовану воду та ( 50:50 (у-м) метанол:водний елюент. Відповідні фракції об'єднували та метанол видаляли при зниженому тиску і сч при 502С, та ліофілізували, що дало 811мг МК томографічного агента.
Альтернативно наведеним тут 32 синтезам пептид може бути зациклізований на полімері, якпроілюстровано --СМ в наступній схемі: «- г)
А, - с . и? со Реріде вупіловів - іме) му 0 .
Ф (й -1х п а т ГІ т є ' 7 - о і С я : ; ь ко що. с "ЩІ є й І з й я. й шк у м До - - во 1 . 7 ї я б5
ХО т са і З ; - не жи 3 /йн х | "кі нії н?т?інї її око но но) но) 70
Слішайст ї піна
А. ж
О і у і, (2 підт сек сч
Ов с я ій о (Се) сч
Ссмода 5 159 БАЛОМ с «- г) аж, «
СЛ, ;
Га Ф т З с м Її и | д У Я 13 я. - о. я є в" Ч. І . ' Кк " - она: о о Й о н мн, ї У ред: (ее) ча - Приклад 6 - МК томографічніо агенти, одержані аналогічним чином: ко Кожен з наступних МК гомографічних агентів був синтезований аналогічно до методу, наведеного вище. 5р Пептид, приготований з використанням стандартної ЕРтос стратегії та зациклізований, використовуючи о трифторацетат талію, очищували НРІС та вводили в реакцію з Зупійоп 22, диізопропілетиламіном,
Ф диізопропілкарбодиімідом (2екв.) та НОВІ (2екв.) в дихлорметані. Розчинники видаляли під вакуумом та залишок розчиняли в етилацетаті, який був відмитий послідовно 0,1М соляною кислотою, насиченим бікарбонатом натрію, та насиченим водним розчином хлориду натрію. Органічну фазу висушували над сульфатом натрію, Ффільтрували та концентрували при зниженому тиску до одержання піноподібного продукту, який за необхідності очищували флеш-хроматографією або НРІ С. Одержаний білий осад перемішували в суміші з ТРА, водою, та іФ) триетилсиланом (9095/590/595, ЗО мл) при кімнатній температурі протягом 2-6 годин. Діетиловий етер було ко додано та білий преципітат утворився, його очищували препаративною НРІС (СН ЗзСМ/НоО/АсОМНА) до утворення жовто-білого осаду попередника МЕ томографічного агента. во Попередник МК томографічного агента прореагував з одним еквівалентом сасізхбНоО в деїонізованій воді (рН б, Маон). Комплекс гадолінію очищували зворотнофазовою хроматографією (УУаїегз бер-Раке с-18), використовуючи дистильовану деіїонізовану воду та 50:50 (м:м) метанол/водний елюент. Відповідні фракції б'єднували та метанол видаляли при зниженому тиску та при 50 2С, ліофілізували, що дало бажаний МАК томографічний агент. Таблиця З надає дані масс-спектрометричного аналізу, які підтверджують кожну зі сполук. б5
Таблиця З
Сотрошпа |МоїІесшіаг Мені мМ5 (МезнуЗУЗ сявя | ов. 4016,884 1256,49467 |1255,66 4025,96 1259,52 | 1259,9 в 4108,014 1286,87133 |1284,53 4307,336 1353,312 |1369,34 в 4076,064 1276,22133 |1298,А8 в | 4233,208 1328,60267 |1327,94 70 4221,199 1324,59967 |1324,57 4142146 1298,24867 |1321,13
Приклад 7- синтези фібринзв'язуючих оптичних контрастних агентів:
Кожен з наступних оптичних контрастних агентів синтезований аналогічно до методів, описаних вище. Схема 75 Х показує основний приклад, в якому два ідентичні оптичні агенти додаються до відповідного пептиду. 5-Карбокситетраметилродамінвмісна сполука (ЗА)
Пептид 1 (177мг, О,1Оммол) та 5-карбокситетраметилродамінсукцинімідний естер А (111мг, 0,21ммол) розчиняли в дихлорметані (20мл) та ОМЕ (20Омл). Диізопропілетиламін додавали крапля по краплі при рн-9.
Суміш перемішували протягом ночі та потім розчинники видаляли при зниженому тиску. Залишок очищували флеш-хроматографією з силікагелевою колонкоюо (елюенти: дихлорметан/метанол) з одержанням сполуки 2А.
До сполуки 2А додавалиа розчин ТЕА, НоО та триетилсилан (відношення: 90/5/5,5мл). Суміш перемішують протягом З годин при кімнатній температурі, та потім розчин реакційної суміші зливають з 5Омл етеру до утворення преципітату неочищеного продукту. Після цього розчинники відціляють центрифугуванням, неочищений продукт збирають тп потім очищають, використовуючи зворотнофазову НРІС, отримуючи таким су чином сполуку ЗА. о (Се) с с - г) - . и? (ее) - іме) іме) 4) іме) 60 б5
Мне н н н г) н м ДАЛО ТЯ - о Но гли
Ов 1 о ве ва и н в нн н не. Х "Же
Ек М М М "М - в н чно н я н 4 н щ с 2 (8) (Се) ог сч с чн н и "й нХ ня ри - з у ви у н Х ї ние со - очхноОочноОо но;їн 7 нн й З « ші с ;» «Ко -ш (ее) - 0 ' іме) іме) в с
Фо А 5-Карбоксифлуоресцеїнвмісна сполука (38)
Згідно з подібною процедурою, описаною для синтезу ЗА, ЗВ синтезований з використанням пептиду 1 (177мг, О,1Оммол) та 5-карбоксифлюоросцеїнсукцинімідного естеру В (99,4мг, 0,21ммол).
ГФ) Техаз Кеде-Х-вмісна сполука (3) з Згідно з подібною процедурою, описаною для синтезу ЗА, ЗС синтезований з використанням пептиду 1 (177мг, О,1Оммол) та Техаз Кеде-Х-сукцитмідилового естеру С (172мг, 0,21ммол). во Приклад 8 - оцінка зв'язування контрастного агента з мішенню:
Згідно з дійсним винаходом ступінь зв'язування контрастного агента з мішенню, такою яу Н5А або фібрин, може бути визначений різноманітними методами для кількісного визначеннясап зв'язування. Наприклад, зв'язування з НОЗА може бути оцінене ультрафільтрацією. В основному при визначенні зв'язування, використовуючи ультрафільтрацію, контрастний агент змішується з 4,595 вага/об'єм НЗА в рН 7,4 буфері. Зразок б поміщають в комерційно доступний апарат для центрифугування, оснащений фільтром із отворами на молекулярну вагу ЗОКкОа (МійПіроге ОНгаїее МС ом Віпаійпд Кедепегаївй Сеїїшовзе З0КОа тої. У. сої сагаіюд МоОРСЗІ ТКОО), що є достатньою для проходження націленої групи, але не дляо Н5А. Невелику порцію (5-1095) зразка фільтрували центрифугуванням при 2000 хд протягом 20 хвилин через критичний фільтр та концентрацію незв'язаних націлених груп в зразку визначали в фільтраті.
Для оцінки зв'язування з фібрином фібриновий згусток може бути утворений в лунці плати для мікротитрування та контактувати з націленою групою. Після інкубаційного часу, достатнього для досягнення рівноваги, супернатант видаляють аспірацією (нерозчинні залишки зв'язаного фібрину у вигляді студенистого згустка залишається на дні лунки). Концентрацію незв'язаних націлених груп потім визначають в супернатанті.
В обох методиках концентрацію зв'язаного контрастного агента визначають за різницею між загальною 7/0 Концентрацією контрастних груп, що були введені у взаємодію з мішенню, та концентрацією груп, що не прореагували. Зв'язана частка є концентрацією зв'язаних груп розділеною на загальну концентрацію націлених груп.
Спорідненість контрастного агента до розчинного фібрин-ЮОС(Е) фрагменту визначається, як встановлено вище, та наведена в Таблиці 4. Структури наведених в таблиці сполук також детально обговорювались раніше в 7/5 цьому описі. Ці дані є результатом складних визначень і частота виникнення помилок є не більшою за 20905 для таких біологічних методів. о 618 сч щі е зо ій ся вв - вм зв вв со « ши шия зо - с їз» 5 18 що - з мо
Ф ни о о) во
Приклад 9 - стабільність сонтрасних агентів
Стабільність визначають, використовуючи гомогенізати печінки щурів, які містять обидва - і інтрі-, і бе екстрацелюлярні екзими та репрезентує надзвичайно жорстке середовище утворення зв'язків пептидом.
Свіжоприготовлені гомогенізати печінки щура (бЗ30ул) поміщали в склану пробірку та інкубували при 372С на водяній бані протягом 4 хвилин. До гомогенізату печінки щура при 37 2 С було додано7Оці 1тМ розчину тестованої сполуки. Через проміжки часу 0, 5, 15, ЗО та 60 хвилин 100ул аліквоти реакційної суміші відбиралась та змішувалась з 100ул метанолу в мікроцентрифужній пробірці до гасіння реакції. Погашена реакційна суміш була відцентрифугована протягом З хвилин при 10,00О0грт з утворенням пелет осадженого протешу.
Супернатант аналізували /С-М5 для кількісного визначення тестованої сполуки, що не прореагувала, порівнюючи площу його піка зі стандартом. Період напіврозпаду (Т1/2) визначали за діаграмою (1Т1/2-Іп2/вІоре).
Показники стабільності були визначені для наведених нижче сполук. Сполука 5, яка містить хелати на обох
С- та М-кінцях пептиду, продемонструвала вражаюче підвищення показника Паїгійе, набутого внаслідок 70 резистентності до гідролізу екзопептидазами. Спільномірне підвищення Паїгіїе не досягається, якщо відбулася модифікація одного кінця пептиду хелатами, навіть коли інший кінець пептиду був кеппійований неприродним органічним компонентом, як це мало місце в Сполуці З (міститься дифенільна група на М-кінці). мннуй я чайн. - Шашки ї А 7 тя с
Структура 1: НаїгІйе-«2хв., вільний М-кінець та амідований С-кінець сч (8) (Се) 3о м о. / охощнНоа но сч дн он с «-
Структура 2: НаігІїе-10Охв., М-кінець кон'югований з хелатом та амідований С-кінець. со сені и « нин, ші с я чно НО о ; ' Ба о ік з пиши сн обтноя и?
Структура 3: айійе-Охв., С-кінець кон'югований з хХелатом та М-кінець ацетильований со пара-(феніл)бензойною кислотою. - є ННУТРАЧІВ ю ОТРА"СЯ му 0 вач о ! ї й н н н НЯ Нн М 42) ш- Ж Е ІЗ ЕЕ х ох С о; но;
Ф
- Яру он он
ГФ) Структура 5: НаїгІїГе-б5хв., обидва М- та С- кінці кон'юговані з хелатами.
Несподівано, вищенаведені дані демонструють, що Паїіїе пептидів значно зростає після додавання о гадолінієвих халатів до обох С- та М- кінців.
Приклад 10 - Релаксивність контрастних агентів 6о МК контраст агенти даного винаходу ої (Пе ргезепі іплепіоп були оцінені за релаксивністю, використовуючи
Вгикег ММ5-120 Хвіврес ММК спектрометр, функціонуючий при 0,47 Тезіа (2ОМН? Н-1 гіромагнітній частоті) та при 372С, або Копід-Вгомл релаксометр (20МНІ, Н-1 гіромагнітній частоті), функціонуючий при 3520. Т1 протонів води було визначено інверсійним вловлюванням послідовності імпульсів, використовуючи програмне забезпечення. Релаксивність була визначена вимірюванням Т1 складних розчинів мішеней (наприклад, гомо бо дисперсні гелі свіжополімерезованого фібриногену, ЛОмг/мл), що містили нуль, 20, 30 та 40ЦМ са) відповідно. Зразки інкубували при 372С протягом, принаймні, 15 хвилин, зберігаючи температурну рівновагу перед тим як Т1-вимірювання буде здійснене. Вміст (За(П) в зразках визначали ІСР масс-спектрометрією (індуктивно спареною масс-спектрометрією) Релаксивність (через (за(П) іон) була визначена через побудову графіка залежності швидкості релаксації (1/Т1), вираженої в 857, від концентрації
СІ), вираженої в мМ. Кут нахилу прямої відповідав величині релаксивності. Релаксивність сполук при відсутності мішені також була визначена аналогічним способом.
Сполуки винаходу демонстрували зростання релаксивності при зв'язуванні з фібрином (Фіг.2) порівняно з релаксивністю при відсутності біологічної мішені. 70 Приклад 11 - Поглинання контрастних агентів згустком.
Поглинання контрастного агента тромбами (згустками крові) визначали в наступний спосіб. Гвінейська свиня (Нашеу таїе) вагою б00г була анестезована. Надріз був зроблений в області перитонеальної порожнини та нижня порожниста вена (ТМУС) була ізольована, судина вийшла протягом 10 хвилин. Участок ІМС в 1см затиснули та людський тромбін (5Оцл, 4 одиниці) ввели ін'єкцією в судину, активізуючи утворення тромбів. Нижній 75 затискач відкрили та закрили, дозволивши порції крові протекти в систему. Після двох-трьох хвилин кліпси видалили. Тромби визрівали в свині протягом ЗО хвилин. В цей момент контрастний агент, сполука 32 в дозі г2имолі/кг, помічений радіоактивною міткою - 7Орсі 17Ід, був введений ін'єкцією через яремну вену.
Безпосередньо після ін'єкції агента - сполука 32, неспецифічний контроль, що містив са (ОТРА) в дозі 2 умол/кг, в суміші з 7ОцСі 997 ТоОТРА був введений ін'єкцією через яремну вену. Через 30 хвилин була взята кров, тварину забивали, тромби видаляли. Зразки крові зважували та підраховували, використовуючи РасКага Собга І гамма-лічильник. Тромби також зважували та підраховували. Імпульси, виникаючі від "Тс, були виявлені між 128-165КеМ, в той час як імпульси, що виникають від радіоактивного розпаду 1114, виявляються в межах 390-500КкеМ. В контрольних експериментах - тільки з Тс або "п - радіоактивність, виникаючу від "Тс при су визначенні "п не брали до уваги і навпаки. Дані радіоактивного розпаду були перетворені в 95 вихідної дози на грам тканини, 95 ІО/д та середнє трьох експериментів представлене графічно. Введення радіоактивних міток з о
ТА було виконано наперед: радіореактиви з придатною кількістю "І пСіІз (Мем Епдіапа Мисіеаг) було додано до фібрин націлених контрастного агента. рН була доведена до 4 додаванням 1М НСЇ. Зразок нагрівали до 459
С протягом 1 години. рН доводили до нейтрального додаванням 1М Маон. Мічена сполука-агент 32 була більше (Се) ніж на 9595 чиста, що було підтверджено у-реєструючою НРІ С. сч
Фібрин специфічні агенти показали помітне зростання поглинання згустком. Фіг.3 показує, що агент, сполука 32, акумулюється в тромбах. Це є специфічне поглинання згустком в порівняні з 99пТсОТРА та вища с концентрація агента в тромбах ніж в оточуючій крові. «--
Специфічність поглинання згустком також може бути продемонстрована, використовуючи магвітно-резонансну томографію. Процедура візуалізації тромбів агентами іп мімо є наступною: Гвінейська свиня со (Напшеу таїе) вагою бО0г була анестезована. Надріз був зроблений в області гортані та одна з яремних вен ізольована. Участо ярмної вени довжиною см був ізольований за допомогою васкулярного затискача.
Свіжозабрату кров тварини (5Оул) змішували з людським тромбіном (5Оцл, 4 одиниці) та вводили ін'єкцією в « защемлений сегмент вени. Через хвилину після ін'єкції затискачі видаляли, тромби визрівали через 30 хвилин. З 70 дгент- сполука 32, вводили ін'єкцією в дозі 6 цмол/кг та область гортані гвінейської свині відобразилась 1.5 с Т, використовуючи "зроїйей дгадіепі" метод ТК-З6, ТЕ-5, кут повороту-30. Тромби світліші у порівнянні з кров'ю. "з Приклад 12 - одержання МК зображення тромбів за допомого націлених контрастних агентів в присутності та без венозної крові:
Самки новозеландського білого кролика вагою 2,5кг були анестезовані коктейлем з кетаміну (5Омг/кг), ацеопромазину (2,5мг/кг) та ромпону (Б5мг/кг) та анестезія підтримувалась пентабарбіталом натрію (приб.
Ме ЗБмг/кгв разі необхідності). Катетер (24г) поміщали у вушну вену та у вушну артерію. Яремна вена та сонна - артерія були ізольовані, маз ріасей іпіо (Ше еаг меіп апа (Ше еаг агпегу. Те |дшаг меїп апа сагоїід агегу уеге ізоїаїей. Стенози в сонній артерії були утворені за допомогою 18г голки у верхній частині судини та о потім зшиваючи їх накладенням 3-0 швів. Після чого голку видаляють. Ділянка артерії довжиною 5мм потім ко 20 сегментується від стенозів за допомогою мікроваскулярних затискачів. Артерію потім двічі натискують вздовж
Бмм секції. Проксимальний васкулярний затискач ослаблюють, дозволяючи крові текти в секцію протягом трьох с секунд. Затискач знову затискують та актерію ще раз двічі натискують вздовж 5мм секції. Через 4 хвилини затискачі видаляють. 5мм сегмент яремної вени ізолюється за допомогою мікроваскулярних затискачів. Тромби утворюються завдяки введенню 100ул 3,7 одиниць тромбіну, 0,06М Сасі? в кровоносну систему кроля. Через 4 хвилини затискачі видаляють.
ГФ) Тромби визрівають протягом 50 хвилин. 1,0мл розчину націленого на тромб агента (Структура ЇЇ, 5мММ, г г2имол/кг) був введений через вушну вену. Через 10 хвилин тварину поміщали до Сепега! ЕІесігіс Зідпа ГхСМі 1.5 (езіа сканера та перший набір даних МК! був отриманий, використовуючи ЗО КЕ зройеай агадіепі еспо во зедцепсе (5РОК: ТК-ЗОтв, ТЕ-3. тв, кутнахилу-40 градусів, поле зору-8см, виявлена пропускна здатність-31,25КН). Безпосередньо за цим скануванням (на 8 хвилин пізніше) слідує другий набір даних МК отриманих, використовуючи ідентичні параметри з додаванням 40мм просторового індексу на нижню лінію та вище розміщеними більш насиченими лініями, що генерують зображення венозної крові.
Фіг.А4 показує максимальну інтенсивність проекції (МІР) першого набору даних. Кровоносні судини частково в5 удосконалені протягом часу "Піднг ефекту. Фіг4В показує МІР другого набору даних, де сигнал від "Ііп-Яом/іпд" (тої, що тече) крові подавлений (венозна кров), використовуючи нижче та вище насичені лінії. На
Фіг.АА та 4В ідентифікація стаціонарної мішені (тромбу) через використання мішень-направлених контрастних агентів є безумовно полегшеною.
Приклад 13 - сннтез оптичних контрастних агентів:
Моуабуп ТОК полімер (0,20мМол/г, 100мг, 20умол) відмивали з ММР/етер/ММР. Пептид був змонтований згідно зі стандартним твердо фазовим методом, викорисовуючи РУВОР/НОВИПІЕА активацію. Після приєднання кінцевих амінокислотних залишків приєднаний до полімеру пептид обробляли розчином піперидину в ОМЕ (2090 за об'ємом, 2,0мл) протягомг 10 хвилин для того, щоб видалити Етос захисні групи. Полімер ретельно промивали ММР/етер/»МР та обробляли розчином флюорасцеїн-б5ізотіоціанатом (23,4мг, 60 дмолі) та 70 диїзопропілетиламіном (11,бмг, 15,7цл, ЗОцмол) в ОМЕ (1,5мл) протягом 12 годин. Полімер ретельно промивали (ММР/етер/ММР) та обробляли розчином Т1 (ТЕА)» (18,7мг, 34,5цмол) в ОМЕ (1,5мл) при 42С протягом трьох годин. Полімер промивали після цієї обробки та знову обробляли коктейлем ТЕАЛ//ІЗ/вода (95/2,5/2,5 та 2,Омл) протягом двох годин. Неочищений пептид був осаджений додаванням етеру до відділеного коктелю та очищений препаративною НРІ С, використовуючи Мудас С-18 колонку. Структури А-М були отримані в цей спосіб та їх 75 спорідненість до ОД(Е) фрагментів фібрину була встановлена (Таблиця 5).
Момбут ТОЯ пік, приват агат с рихадне са Нолідуа о (Се) 1 "« Минідмзіта, сч с «- 2.ЛІСТЕАНІОМЕ, З Ге)
З ТАЛА аг, Ве ще, 2 « ші с ' " й с ? ее заз шегдоВ у, а (с 3 чут ю 8 ма 70 о щі Структури
Ф) іме) 60 б5 в ЛК. ГУ я ; ж 70 ДА ГА, "ак М, А А КЛ я 0) с судив дм
Кан ? а ко -- щі з0 с
Ге хв, їх " кА оу о її
СТ с со 45 в Ї »
І ХА ' » | в. о 55 ре во С д о ї ; Її, я ї, Її. І їх : Її |: і о, З З є ю о р меш в ЛК. ГУ я ; ж 70 ДА ГА, "ак М, А А КЛ я 0) с судив дм
Кан ? а ко -- щі з0 с
Ге хв, їх " кА оу о її
СТ с со 45 в Ї »
І ХА ' » | в. о 55 ре во С д о ї ; Її, я ї, Її. І їх : Її |: і о, З З є ю о р меш в ЛК. ГУ я ; ж 70 ДА ГА, "ак М, А А КЛ я 0) с судив дм
Кан ? а ко -- щі з0 с
Ге хв, їх " кА оу о її
СТ с со 45 в Ї »
І ХА ' » | в. о 55 ре во С д о ї ; Її, я ї, Її. І їх : Її |: і о, З З є ю о р меш
М
9 " ГУ н м п н я н н н к ГИ ве и 70
М в к ГУ І чу и Її ч н н н п і нак. н м н н в м
ТЯ н ЧИ " ЇЯ н н ; сч н (о) (се) » к МУ усе є
ГІ н і Ге нн, т к в -НАГО ша с с й чи (ее) « з | т с ч "и Е и г. н Ми є» н п н Н н я (ее) шк ко мо 4) (Ф) ко 6о 65
М
9 " ГУ н м п н я н н н к ГИ ве и 70
М в к ГУ І чу и Її ч н н н п і нак. н м н н в м
ТЯ н ЧИ " ЇЯ н н ; сч н (о) (се) » к МУ усе є
ГІ н і Ге нн, т к в -НАГО ша с с й чи (ее) « з | т с ч "и Е и г. н Ми є» н п н Н н я (ее) шк ко мо 4) (Ф) ко 6о 65
М
9 " ГУ н м п н я н н н к ГИ ве и 70
М в к ГУ І чу и Її ч н н н п і нак. н м н н в м
ТЯ н ЧИ " ЇЯ н н ; сч н (о) (се) » к МУ усе є
ГІ н і Ге нн, т к в -НАГО ша с с й чи (ее) « з | т с ч "и Е и г. н Ми є» н п н Н н я (ее) шк ко мо 4) (Ф) ко 6о 65
М
9 " ГУ н м п н я н н н к ГИ ве и 70
М в к ГУ І чу и Її ч н н н п і нак. н м н н в м
ТЯ н ЧИ " ЇЯ н н ; сч н (о) (се) » к МУ усе є
ГІ н і Ге нн, т к в -НАГО ша с с й чи (ее) « з | т с ч "и Е и г. н Ми є» н п н Н н я (ее) шк ко мо 4) (Ф) ко 6о 65
М
9 " ГУ н м п н я н н н к ГИ ве и 70
М в к ГУ І чу и Її ч н н н п і нак. н м н н в м
ТЯ н ЧИ " ЇЯ н н ; сч н (о) (се) » к МУ усе є
ГІ н і Ге нн, т к в -НАГО ша с с й чи (ее) « з | т с ч "и Е и г. н Ми є» н п н Н н я (ее) шк ко мо 4) (Ф) ко 6о 65
Таблиця 5. Спорілненість оптичних контрасних агентів до фібрину по кам) ч
ММ уює х 55 хх ох ХХ Б ХаХаи Хо Хо
ОП оо Би Ах МЕ Не Нв хоп І сні 1 0055 пи 0 МЕ Се У о І с тІ 0
Кк ом твди Ж ЕЕ НН СР о ій с ніх еЕ 029 ЕБЕнмж лЛіх 0 Об ЕЕ М с Нур 3) 0 І. С НІ
С 0097 Ех Ак а КЕ НОСо00онур хо в сні т5 В 0099 ме АБ в и С ОН УВО с Ні п 0119 Бий Ж ЕН нн. то ЕЕ сні
ОО ом ври Кк о ВЕ НИ ну ЗО Ь о їі сні
Її 0.177 Бюжє Кк й О0ЕН с ЯНур т) пр, С, і
А 0436 Ецння екА КЕ НОС оНуб 0) о ги с ні
Е 0212 шк К ЕН ОСоНув т о 00 с ні
М-термінальні пептиди маркіровані оптичними зондами можуть модулювати зв'язувальну спорідненість оптичних контрастних агентів. Для прикладу порівняєм флюоресцеїн-, 4-метоксикумарін- та с тетраметилродамін-похідні пептиду (ОММЕСРУСІ СУМОЮ (ЗЕО ІЮ МО:27); ка-зум), відповідні константи наведені о в Таблиці 6:
Ф зо 5 шою ов, сч с . . «-
Приклад 14 - фібриннаправлена урокіназа:
Фібриннаправлену урокіназу готують відповідно до наступної процедури. Фібринзв'язуючий пептид з Сіу-СІу 0 дипептидним лінкером готують згідно з твердофазовою процедурою. М-кінець заблоковують ацетильною групою та С-кінецеву карбоксильну групу конвертують в активний сукцинамідний естер. Пряме хімічне зшивання досягається змішуванням урокінази та активованого пептиду у відповідних пропорціях у водному буфері та « легким зтрушуванням протягом 30 хвилин. ші с з (ее) - іме) з 50 42)
Ф) іме) 60 б5
1 г щи Н ші т 7 ; й На йь ї- Но 5 "Й ч Но звдасжієвива. во зя й й ш ' й а- о ч | о
Р 7 ши 1 " "- кі » т
Базу, зоб піль ' "у "у. чи: в. ей чи: й й ! ой ни и кн "Ш Ше
Шин щі Ман ПЛ на Ь й
Н с 1 (о)
Фібриннаправлена урокіназа може бути очищена НРІ С. Зв'язування з фібрином може бути оцінене Сполука «(О 1 зв'язує фібрин, але не зв'язує фібриноген. сч
Модель кролячої яремної вени |СоПеп еї аї. (9. Сіїп. Іпмеві. 1983,71, 368-376)| використовується для оцінки тромболізису. Сполуку 2 (2мг/кг) вводять інфузією болюсу (містить 2095 від загальної дози) протягом 1 с хвилини, разом з гепариновим болюсом (300 одиниць/кг) протягом 1 хвилини. Залишок дози безперервно «- інфузують протягом наступних, гепарин (60 одиниць/кг/год) безперервно вводять протягом наступних 180 хвилин. Через З годин, тварину забивають, згустки аналізують. Сполука 1 є більш сильним лізуючим згусток. 00 агентом ніж в8зсИиРА. Через З години, з мг/кг сполуки 1, це є менше ніж потреба у фібриногені та о2-антиплазміні, відносно еквівалентних доз зсиРА.
Зрозумілим є те, що в той час як винахід було описано у відповідності з наведеним тут детальним описом, « цей вищенаведений опис призначений проілюструвати, але ні в якій мірі не обмежувати обсяг винаходу, який визначений в формулі, що додається. Інші аспекти, переваги та модифікації знаходяться в межах, визначених З с обсягом наступної формули винаходу.

Claims (8)

  1. ;» Формула винаходу (о) 1. Контрастний агент, який містить хелатний комплекс металу на -СОЖ та МНК кінцях пептиду, де К означає - водень.
  2. 2. Контрастний агент за п. 1, який відрізняється тим, що містить два хелатних комплекси металу на-СОК та іме) МНЕ кінцях пептиду. з 20
  3. 3. Контрастний агент за п. 1, який відрізняється тим, що пептид має специфічну зв'язувальну спорідненість до фібрину. 42)
  4. 4. Контрастний агент за п. 1, який відрізняється тим, що пептид є здатним до утворення дисульфідного зв'язку при відсутності умов для відновлення.
  5. 5. Контрастний агент за п. 4, який відрізняється тим, що пептид містить дисульфідний зв'язок.
  6. 6. Контрастний агент за п. 1, який відрізняється тим, що має: іме) о
    1 . і? 2 а в з о (Спеіаіе)т--(Нокег)р--(Макег-зирипід» МА (Шлкег-вивипіз----- (М іпікег)в------ (Спейаве)т в! п де Спеїав(е означає хелатний комплекс металу; 65 ШпкКег означає лінкерний компонент; ШпкКег-зирипії означає субодиничний лінкерний компонент;
    т, незалежно, є цілим числом від 1 до 10; р, незалежно, є цілим числом від 0 до 5; в, незалежно, є 0 або 1; ВЕ! є амінокислотним бічним ланцюгом або його похідною та В2, незалежно, є воднем.
  7. 7. Контрастний агент за п. 6, який відрізняється тим, що контрастний агент має структуру, вибрану з групи, що складається з: 4 схе опа сом, п асо тлемос , ук, про и Ватасм заст т-н -х ше г Ї що пен чи но іх З нг ал, тя х ба ВИ ВИ -й вер В . Май, се 5 ОПОРА МН-ООДТРА-СЯ о сн он се н«Х й АХ Н Н ддх М (о) 7 ох НохНо о 4 о 7 - ши РІ за он Ге) сч се 6 «- СВДТРАСОЇ ГРАЄ о о он ОТРАСЯ бр, он ДИ М ХА іє "аа у І Е Е г Е о , ох око Ге) р 8 Є « о ї / он ші с он :» і 4 (ее) сад СОМ, п Мсгеоє - ту лей дн р сви М укзкооться сартя см т т-К ше г пен чи но іх З нг з ал, тя х ши си ние Н З я но ій «об ииарию я Ф й Мак се 8 (Ф) МНСОГРАСа о й Мних о сн он т (в) но н н Н Н бо «ЛОДЛ ил У т МАСОЮТАнсЯ СаФТРАСОКН - Ов удо ой 9/7" і; Он он 65,
    ОІОТРАСОМН А, о дов он сн ва пад дян СЗОТРАСОМН / охХНнНоХхНо Ной | 07 Н МНСОДТРА СЯ Ода 70 он
    СЕОТРАСОКН, м, о он Мч ІЙ ноостРАса в и аоТРАСОМ - охо хо по МНСОЮТРА-І Он 11 се
    (о) СЯРАСОМН их, и 8. пух ГЛРА-СІ за тт о й зо ШУ зе охНно ку о МНСОТРАСІ сч с с 12 (ее) садтРАСО- НСОПТРАсЯ « ви он сн учет - с ваОТРА. г» ОА КА ие 7 оАХНохнНо ги 8и о Ї і іх! (ее) сн йо 13 ко 20 І 4) ОА, о си трас п Х Н М Н Н н реч о ФоотРАСОЇ ; й ОХ о о В, о 7 вал МНоООТРАСІ : ТК, он во, 65
    В, соді фа о ет сн умо и урлио вИлРАСОВ ву ої Ноїно ноу Но н МНеогтРАЄ 70 а т
    15 Ши В ще її ЦІ З н й н У СОДТРАСЯ садтРАСОМН й о ве х -89 гу мі Ї і, он 518 о рої що ОФІЛРАСО- 5 й ве м ьо А : КИ, рат МнеоотРАСОЗ сч вартРА-СОМН ви х о ; 4 о є о «- он г) 17 ч З с :з» СаОТРАСОМІ о НСООТРАСЯ Є а їй СОФТРАСОМН - --8- й се н Н«ОО-СТРАЄЙ юю он з 50 , 4) 18 є (Ф) вето Ну гУЇ в, ко й он ІТРА-ОУ В ( АКТ, пед СЮТРАСОМН - х ї ре ге он МНСООТРА са б5 і евотьсомн о Де В, їв очи нооотнся їх шо ес що Ху ії х яка АВ га ол ФО ОТРА-СОЧІН М онов о . МН-СОЮТРА-СЯ 70 н щі В К НСОСТРА-СЯ свотеьсомн, повин Ся Я в ге й он с Но о-7хно МН-СООТРА. са 20 СаОтРА-СО-МН с 7 вух НСООТРА-СВ о н СаОТРАСОМН у уО В з Не що М че - дея ся МН-СОДТРА-сЯ (се; щ СФОТРАСОМН і Ще І тов ДН пази сч с ' - 22 г) у, й НСОТРА-ОЯ В но ун о ва « СООТРАСОМН сх, вус Яви що с Й 7 м Ї Вон боки МН-СОДТРА-сЯ З ;» СООТРА-СОМН 45, 5 23 шк ю СІ у Б вилов пис пчатув о ге й ТЕ в рай т н 0-х МН-СО-ОТРА-Са СаОТРА-СО-ІН о ! іме) бо 65
    І Н їі У, М НСООТРА-СЯ ОЯОТРАСОМН л. рили рик о С й й її но фон Я о-7х о КН-СОДТРА-са СО ОТРА-СО-МН
    25 . то І Н В М ох НСО-ДТРАСЯ М СаОТРАСОМН А, - унія о 3-Й що зд й І що фон «чо ба М соотРА са СООТРА-СО-ЧН 26 їй ! н о В з вух НСООГРА-СЯ ФБОТРАСОМН м - пи ка М.А, о ШО (се; 7 й І в) фон х / Но бо МА-соптРА-са с СаДТРА-СОН с чи 21 Фо у СООТРАСОМН ол, (9) В М СОГЛРА-СЙ ДЯ ех: дво З 20 нб но 0- о о/ н Сдно не с СФОТР Ії Он 5 о МН-СОДТРА-СсЯ з 28 (ее) Н фев ет їх) й Н о СОГТРА-СЯ му Й Чу Но г оц, Б лнНо "ва саотАСОМН 5 Ф М он МН-СОЮТРА-СЯ н вв о 29 іме) МН МН н, нн и вий сет Су но о; нн АНО З нооотся сагтРАСОМН он 5 б
    МН н МН н, В 4 вух НСОТРА-СЯ СООТРАСОМН, их, Ге) ча ц а все» а Н об А о ( и Но МНАСОДТРА-СсЯ СсОартТРА-СОМН он
    31 Мн Мн М ї Зух МНСОЛРА-СЯ СООТРАФСО-МН у но Н ноєн Ми зд дн кад А ех я що о о/ н дно МНСОДТРА. сартРА-СО-МН 5 он
    32 в МСОтРАСаЙ Ге! 29 саОтРАСОМІ о о он он Мн "фі АХ Н н ух.
    Н МНСОТРАСЗ СЗТЛРАСОКН - ох "оно о ги Ге) Її он он с , с де са є парамагнітним металічним іоном са (1) та са (І) є координованим з ОТРА компонентом, хімічної сполуки, що містить субструктуру, скомбіновану з діетилентриаміну, де кожен з двох первинних амінів - Ковалентно приєднаний до двох ацетильних груп та вторинні аміни мають одну ацетильну групу, ковалентно о приєднану згідно з наступною формулою: - с о . :» М М (ее) ц о іме) с о; Х о
    Ге! де Х є гетероатомом електронодонорної групи, здатної координувати катіон металу, переважно ОС", ОН, МН», ОРОЗ- або МНК, або ОК, де К є будь-якою аліфатичною групою, де та де ОТРА компонент є ковалентно взаємозв'язаним із залишком, що містить С(-О) групу на етиленовому або ацетатному вуглеці ОТРА компонента. 60
  8. 8. Контрастний агент за п. 6, який відрізняється тим, що має структуру, вибрану з групи, що складається з: б5
    А Ш - Кесаті о ою чо о: (о. ді Ка аз її МН» всім 70 но но о Н зв -- о ль о о ва - ду зей СА вд мно са І ів) он 5 и Мн о, сус - з де не о 34 сч о о Ав ко я прух чі ; с ешх А й М оо ! вати ее зов йо - шах що ща м нан нд ФМ ій я оно М (се) Ох у о со же М А ш-в с о- у ;» " Ме 35 ю А ко -6, 179 о ма 70 соті й Мн но й н одіте- ве йо й ї м й з 4) о- о- бо Ж н ня і мл но но Ко о г "у уд ян ї С оо» я в о оо ща юю М т о є з ій о Є ки а (о во о в 65
    /, й Й о ще с о но сі он ото н а; же гу З й їй р ле ак но но о( нон д-ви ут 70 й ва 50 ос вміл ух Н СВ у бе ЇЯ й р ня но 8 н о орі о - он МН а й не: ке» ЗИ и; о х у 37 о мо оЛево о мс ок, й й де те (с; С о ни но й о ЦІ зб тато пранні: У, Ху он й Мія ля іх. о, у о н Чо " » - - й щ і тар Со « у щ с їз» 38 со 45 о а -вді А о я оте юю Мей р м С ба о и і» Ф о в М; де 5 / " Ат ге; о «о - й о он "же в кр ЧО, зи"
    Ф. о. оо ю 5 ви о) 60 б5 о и о окр, в 2 о в й Мнь ( со 'де І Вот ота Ко
    А. Ї я но 5 САНОТО мно а Бей он і С кл но Мн оо о у пуер» М ве о в 40 с (о) о св, мс о о » ко у « рисі « но Но о н зо -д- Її о с Й Ж й ви ноя -Д- о МН ре й а ні о ОН 5 й Г» в) о нз ; пуер» «
    о. - с о ;» ,; со 41 ю А ко -0 щі о А му о Де на а он Со кл о 4 5 і і М са" 42) С ни о Но но о їе о М МО, ге) пани и на о 59 о7 о" о он й мн. З о че оса о С ки /но мо ї о- Го во 6 9, Контрастний агент за п. 6, який відрізняється тим, що має структуру, вибрану з групи, що складається з б5
UA2004010709A 2001-07-30 2002-07-30 Peptide-based multimeric targeted contrast agents UA81226C2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UAA200601920A UA84432C2 (uk) 2001-07-30 2002-07-30 Очищені пептиди та сполуки, які їх містять

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US30872101P 2001-07-30 2001-07-30
PCT/US2002/024261 WO2003011115A2 (en) 2001-07-30 2002-07-30 Peptide-based multimeric targeted contrast agents

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA81226C2 true UA81226C2 (en) 2007-12-25

Family

ID=23195121

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UA2004010709A UA81226C2 (en) 2001-07-30 2002-07-30 Peptide-based multimeric targeted contrast agents
UAA200601920A UA84432C2 (uk) 2001-07-30 2002-07-30 Очищені пептиди та сполуки, які їх містять

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA200601920A UA84432C2 (uk) 2001-07-30 2002-07-30 Очищені пептиди та сполуки, які їх містять

Country Status (23)

Country Link
US (5) US6991775B2 (uk)
EP (1) EP1420681B1 (uk)
JP (2) JP4298501B2 (uk)
KR (2) KR20040020074A (uk)
CN (1) CN1599577A (uk)
AR (1) AR036196A1 (uk)
AU (1) AU2002318931B2 (uk)
BR (1) BR0211623A (uk)
CA (1) CA2455638C (uk)
CO (1) CO5560528A2 (uk)
EA (1) EA006239B1 (uk)
EC (1) ECSP044996A (uk)
HU (1) HUP0402029A3 (uk)
IL (1) IL160001A0 (uk)
MX (1) MXPA04000967A (uk)
NO (1) NO20040402L (uk)
NZ (1) NZ531338A (uk)
PL (1) PL368807A1 (uk)
TW (2) TWI240632B (uk)
UA (2) UA81226C2 (uk)
WO (1) WO2003011115A2 (uk)
YU (1) YU9404A (uk)
ZA (1) ZA200401606B (uk)

Families Citing this family (67)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI240632B (en) * 2001-07-30 2005-10-01 Epix Medical Inc Purified peptides for peptide-based multimeric targeted contrast agents
JP2005529839A (ja) * 2001-10-16 2005-10-06 エピックス メディカル， インコーポレイテッド 脈管内病変の検出および処置
AR047692A1 (es) * 2003-07-10 2006-02-08 Epix Medical Inc Imagenes de blancos estacionarios
DE102004038134B4 (de) 2004-08-05 2013-07-25 Johann Wolfgang Goethe-Universität Frankfurt am Main Multivalente Chelatoren zum Modifizieren und Organisieren von Zielmolekülen, Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ihre Verwendung
JP2008508333A (ja) * 2004-08-05 2008-03-21 ヨハン ウォルフガング ゲーテ−ウニベルジテート フランクフルト アム マイン 標的分子の改変および組織化のための多価キレーター
US20060275217A1 (en) * 2005-05-06 2006-12-07 Caravan Peter D Chemical exchange saturation transfer contrast agents
JP4559922B2 (ja) * 2005-06-21 2010-10-13 株式会社東芝 蛍光性錯体及びそれを用いた照明装置
EP3378496A1 (en) * 2005-07-13 2018-09-26 Georgia State University Research Foundation, Inc. Contrast agents and methods for preparing contrast agents
US9339559B2 (en) * 2005-09-09 2016-05-17 Georgia State University Research Foundation, Inc. Targeted contrast agents and methods for targeting contrast agents
KR100703593B1 (ko) * 2005-08-08 2007-04-06 경북대학교 산학협력단 Ｄｔｐａ-비스（피콜린아미드）리간드，이를 포함하는가돌리늄 착물 및 이들의 제조 방법
CA3086749A1 (en) * 2005-09-09 2007-03-15 Georgia State University Research Foundation, Inc. Targeted contrast agents and methods for targeting contrast agents
WO2007042504A2 (fr) 2005-10-07 2007-04-19 Guerbet Composes comprenant une partie de reconnaissance d'une cible biologique, couplee a une partie de signal capable de complexer le gallium
US8986650B2 (en) 2005-10-07 2015-03-24 Guerbet Complex folate-NOTA-Ga68
WO2007044867A2 (en) * 2005-10-11 2007-04-19 Huntington Medical Research Institutes Imaging agents and methods of use thereof
WO2007051207A2 (en) 2005-10-28 2007-05-03 Invitrogen Corporation Kinase and ubiquination assays
FI20055653A (fi) 2005-12-08 2007-06-09 Wallac Oy Leimausreagenssi
WO2007073792A1 (de) * 2005-12-19 2007-07-05 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Verfahren zur herstellung von 4,4-diphenylcyclohexanol
US20070293656A1 (en) * 2005-12-29 2007-12-20 Epix Pharmaceuticals, Inc. Collagen binding peptides
EP2054514A4 (en) 2006-08-04 2009-11-04 Univ Georgia State Res Found ENZYME SENSORS, METHODS OF PREPARATION AND USE OF SUCH SENSORS, AND METHODS OF DETECTING PROTEASE ACTIVITY
WO2008076365A2 (en) * 2006-12-14 2008-06-26 Georgia State University Research Foundation, Inc. Analyte sensors, methods for preparing and using such sensors, and methods of detecting analyte activity
US9814672B2 (en) * 2007-03-09 2017-11-14 Susan T. Laing Echogenic vehicle for clinical delivery of plasminogen activator and other fibrin-binding therapeutics to thrombi
FR2914304B1 (fr) 2007-03-28 2012-11-16 Guerbet Sa Composes pour le diagnostic de maladies liees a l'expression de vcam.
FR2914303A1 (fr) 2007-03-28 2008-10-03 Guerbet Sa Composes pour le diagnostic de l'apoptose.
CN101970015B (zh) 2008-01-08 2014-05-07 兰休斯医疗成像公司 作为显像剂的n-烷氧基酰胺共轭物
US20090208421A1 (en) 2008-02-19 2009-08-20 Dominique Meyer Process for preparing a pharmaceutical formulation of contrast agents
US20090236541A1 (en) * 2008-03-24 2009-09-24 General Electric Company System and Methods for Optical Imaging
US20110097742A1 (en) * 2008-04-02 2011-04-28 Jenny Jie Yang Contrast agents, methods for preparing contrast agents, and methods of imaging
CN102171244B (zh) * 2008-08-07 2015-05-13 益普生制药股份有限公司 糖依赖性胰岛素释放肽的类似物
US9072703B2 (en) * 2008-08-07 2015-07-07 Ipsen Pharma S.A.S. Glucose-dependent insulinotropic polypeptide analogues
EA020091B1 (ru) * 2008-08-07 2014-08-29 Ипсен Фарма С.А.С. Аналоги глюкозозависимого инсулинотропного полипептида (gip), модифицированные по n-концу
AU2009280012B2 (en) * 2008-08-07 2012-12-06 Ipsen Pharma S.A.S. Truncated analogues of glucose-dependent insulinotropic polypeptide
US8889635B2 (en) 2008-09-30 2014-11-18 The Regents Of The University Of Michigan Dendrimer conjugates
WO2010054321A2 (en) 2008-11-07 2010-05-14 The Regents Of The University Of Michigan Methods of treating autoimmune disorders and/or inflammatory disorders
US8864821B2 (en) * 2008-11-26 2014-10-21 Visen Medical, Inc. Methods and compositions for identifying subjects at risk of developing stent thrombosis
FR2942227B1 (fr) 2009-02-13 2011-04-15 Guerbet Sa Utilisation de tampons pour la complexation de radionucleides
CA2754390A1 (en) 2009-03-19 2010-09-23 Wyeth Llc Methods for the preparation of [2-(8,9-dioxo-2,6-diazabicyclo[5.2.0]non-1(7)-en-2-yl)ethyl]phosphonic acid and precursors thereof
WO2010121133A2 (en) 2009-04-17 2010-10-21 The General Hospital Corporation Multimodal imaging of fibrin
CN102781909B (zh) 2009-07-08 2015-06-17 兰休斯医疗成像公司 作为显像剂的n-烷氧基酰胺共轭物
US20120107248A1 (en) * 2009-07-08 2012-05-03 Mayo Foundation For Medical Education And Research Imaging gastrointestinal volumes and motility
AU2010318637A1 (en) 2009-10-13 2012-05-31 The Regents Of The University Of Michigan Dendrimer compositions and methods of synthesis
US8912323B2 (en) 2009-10-30 2014-12-16 The Regents Of The University Of Michigan Multifunctional small molecules
US9944722B2 (en) * 2010-06-01 2018-04-17 Ge Healthcare Bioprocess R&D Ab Chelator and use thereof
FR2968562B1 (fr) 2010-12-14 2013-01-11 Guerbet Sa Composes pour le diagnostic de maladies liees a l'expression de muc5ac
FR2968999B1 (fr) 2010-12-20 2013-01-04 Guerbet Sa Nanoemulsion de chelate pour irm
US9011816B2 (en) * 2011-03-25 2015-04-21 Case Western Reserve University Fibronectin targeting contrast agent
FR2980364B1 (fr) 2011-09-26 2018-08-31 Guerbet Nanoemulsions et leur utilisation comme agents de contraste
US9402911B2 (en) 2011-12-08 2016-08-02 The Regents Of The University Of Michigan Multifunctional small molecules
FR3001154B1 (fr) 2013-01-23 2015-06-26 Guerbet Sa Magneto-emulsion vectorisee
US9849201B2 (en) 2013-05-03 2017-12-26 Washington University Homing agents
US10231993B2 (en) 2013-06-27 2019-03-19 University Of Washington Through Its Center For Commercialization Biocompatible polymeric system for targeted treatment of thrombotic and hemostatic disorders
WO2015017815A1 (en) 2013-08-01 2015-02-05 Rochester Institute Of Technology Modular imaging agents containing amino acids and peptides
WO2015038968A1 (en) 2013-09-13 2015-03-19 The General Hospital Corporation Activatable fibrin-binding probes
GB201322456D0 (en) 2013-12-18 2014-02-05 Ge Healthcare Ltd Radiotracer compositions and methods
WO2015196208A2 (en) 2014-06-20 2015-12-23 The General Hospital Corporation Collagen targeted imaging probes
AU2016258123A1 (en) * 2015-05-06 2018-01-04 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. Radiotherapeutic and companion imaging agents to target MC1R
EP3101012A1 (en) 2015-06-04 2016-12-07 Bayer Pharma Aktiengesellschaft New gadolinium chelate compounds for use in magnetic resonance imaging
US10301358B2 (en) 2015-06-29 2019-05-28 Collagen Medical, LLC Collagen imaging compositions
CA2995210A1 (en) 2015-08-13 2017-02-16 The General Hospital Corporation Manganese-based chelate conjugates for molecular mr imaging
ES2814555T3 (es) 2016-11-28 2021-03-29 Bayer Pharma AG Compuestos de quelato de gadolinio con alta relaxividad para usar en la obtención de imágenes por resonancia magnética
CN106946926A (zh) * 2017-02-27 2017-07-14 西北大学 一种具有多齿氨羧类二聚体螯合剂及其制备方法、应用和分离介质
AU2018261890A1 (en) 2017-05-05 2019-11-28 Centre For Probe Development And Commercialization IGF-1R monoclonal antibodies and uses thereof
BR112019023246B1 (pt) 2017-05-05 2023-11-14 Centre For Probe Development And Commercialization Compostos compreendendo uma fração quelante, métodos para produção dos mesmos e usos dos mesmos
US10093741B1 (en) 2017-05-05 2018-10-09 Fusion Pharmaceuticals Inc. IGF-1R monoclonal antibodies and uses thereof
RU2681318C1 (ru) * 2017-11-24 2019-03-06 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) Способ получения иммуносупрессорного пептида Abu-TGIRIS-Abu, меченного ионом Gd3+
WO2020007822A1 (en) 2018-07-02 2020-01-09 Conservatoire National Des Arts Et Metiers (Cnam) Bismuth metallic (0) nanoparticles, process of manufacturing and uses thereof
AU2019382881A1 (en) 2018-11-23 2021-05-20 Bayer Aktiengesellschaft Formulation of contrast media and process of preparation thereof
CN111233714B (zh) * 2020-03-18 2022-04-08 滨海吉尔多肽有限公司 一种maps多肽的制备方法

Family Cites Families (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4622420A (en) * 1980-03-18 1986-11-11 The Regents Of The University Of California Chelating agents and method
US4957939A (en) * 1981-07-24 1990-09-18 Schering Aktiengesellschaft Sterile pharmaceutical compositions of gadolinium chelates useful enhancing NMR imaging
US4659839A (en) * 1984-10-10 1987-04-21 Mallinckrodt, Inc. Coupling agents for radiolabeled antibody fragments
US4897255A (en) * 1985-01-14 1990-01-30 Neorx Corporation Metal radionuclide labeled proteins for diagnosis and therapy
US4880008A (en) * 1985-05-08 1989-11-14 The General Hospital Corporation Vivo enhancement of NMR relaxivity
US4678667A (en) * 1985-07-02 1987-07-07 501 Regents of the University of California Macrocyclic bifunctional chelating agents
US4831175A (en) * 1986-09-05 1989-05-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Backbone polysubstituted chelates for forming a metal chelate-protein conjugate
US5099069A (en) * 1986-09-05 1992-03-24 Gansow Otto A Backbone polysubstituted chelates for forming a metal chelate-protein conjugate
US5246692A (en) * 1986-09-05 1993-09-21 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Health And Human Services Backbone polysubstituted chelates for forming a metal chelate-protein conjugate
US5001230A (en) 1988-02-18 1991-03-19 Schering Corporation T cell activation markers
US5223409A (en) * 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
GB9111199D0 (en) 1991-05-23 1991-07-17 Sandoz Ltd Improvements in or relating to organic compounds
US5364613A (en) * 1989-04-07 1994-11-15 Sieving Paul F Polychelants containing macrocyclic chelant moieties
US5641878A (en) 1991-05-15 1997-06-24 Diatron Corporation Porphyrin, azaporphyrin, and related fluorescent dyes free of aggregation and serum binding
US5009069A (en) * 1990-08-24 1991-04-23 Molini Alberto E Method of recovering energy from ocean water
CA2104860A1 (en) * 1991-03-08 1992-09-09 Thomas T. Andersen Endothelin antagonists
JPH07504902A (ja) 1992-03-13 1995-06-01 ダイアタイド・インコーポレイテッド 炎症造影用のテクネチウム−９９ｍ標識ペプチド
US5637759A (en) * 1992-07-30 1997-06-10 The Regents Of The University Of California Metal-ligating amino acid derivatives for MRI and for peptide synthesis
DE69526203T2 (de) 1994-01-12 2002-11-28 Amersham Plc Little Chalfont Biologische zielgerichtete mittel
US6001809A (en) * 1994-07-11 1999-12-14 Elan Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of leukocyte adhesion
DE69530392D1 (de) 1994-07-11 2003-05-22 Athena Neurosciences Inc Inhibitoren der leukozytenadhäsion
TW319763B (uk) 1995-02-01 1997-11-11 Epix Medical Inc
GB9502065D0 (en) 1995-02-02 1995-03-22 Nycomed Imaging As Contrast media
AU5752696A (en) 1995-05-18 1996-11-29 Regents Of The University Of Michigan, The Dna binding antibodies
US5891418A (en) * 1995-06-07 1999-04-06 Rhomed Incorporated Peptide-metal ion pharmaceutical constructs and applications
DE19539409C2 (de) 1995-10-11 1999-02-18 Diagnostikforschung Inst Kontrastmittel für die Nahinfrarot-Diagnostik
ES2525677T3 (es) 1995-10-17 2014-12-29 Ab Enzymes Oy Celulasas, genes que las codifican y usos de las mismas
ES2236634T3 (es) 1997-04-07 2005-07-16 Genentech, Inc. Anticuerpos anti-vegf.
IT1291623B1 (it) * 1997-04-18 1999-01-11 Bracco Spa Procedimento per la coniugazione di chelanti con molecole contenenti gruppi amminici
US6342598B1 (en) * 1998-11-26 2002-01-29 Bracco International B.V. Amphipatic polycarboxylic chelates and complexes with paramagnetic metals as MRI contrast agents
US6207858B1 (en) * 1999-03-03 2001-03-27 Idec Pharmaceuticals Corporation Regioselective synthesis of DTPA derivatives
CZ2002343A3 (cs) 1999-07-29 2002-08-14 Epix Medical, Inc. Cílená multimerní zobrazovací činidla s multilokální vazebnou schopností
TWI290146B (en) 1999-07-29 2007-11-21 Dyax Corp Binding moieties for fibrin
WO2001025410A2 (en) 1999-10-01 2001-04-12 Angstrom Pharmaceuticals, Inc. DIAGNOSTIC PROBES AND THERAPEUTICS TARGETING uPA AND uPAR
AU2119101A (en) 1999-10-22 2001-05-08 Insight Neuroimaging Systems, Llc Ligand chelated paramagnetic mri contrast agents
AU2001231090A1 (en) * 2000-01-22 2001-07-31 Epix Medical, Inc. Magnetic resonance imaging using contrast agents bioactivated by enzymatic cleavage
US6656448B1 (en) * 2000-02-15 2003-12-02 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Matrix metalloproteinase inhibitors
US6517814B2 (en) * 2001-01-09 2003-02-11 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Macrocyclic chelants useful for metallopharmaceuticals
TWI240632B (en) * 2001-07-30 2005-10-01 Epix Medical Inc Purified peptides for peptide-based multimeric targeted contrast agents

Also Published As

Publication number Publication date
US20060039861A1 (en) 2006-02-23
CA2455638A1 (en) 2003-02-13
IL160001A0 (en) 2004-06-20
PL368807A1 (en) 2005-04-04
YU9404A (sh) 2006-08-17
WO2003011115A3 (en) 2003-05-22
US20070185311A1 (en) 2007-08-09
WO2003011115A2 (en) 2003-02-13
EP1420681A2 (en) 2004-05-26
US20030216320A1 (en) 2003-11-20
JP4298501B2 (ja) 2009-07-22
AR036196A1 (es) 2004-08-18
HUP0402029A2 (hu) 2005-01-28
CA2455638C (en) 2013-01-22
US20050074411A1 (en) 2005-04-07
ECSP044996A (es) 2004-06-28
TWI240632B (en) 2005-10-01
NO20040402L (no) 2004-03-25
HUP0402029A3 (en) 2010-01-28
EA006239B1 (ru) 2005-10-27
US7927581B2 (en) 2011-04-19
US6991775B2 (en) 2006-01-31
KR20040020074A (ko) 2004-03-06
AU2002318931B2 (en) 2008-01-17
ZA200401606B (en) 2005-05-03
JP2004536875A (ja) 2004-12-09
TW200512006A (en) 2005-04-01
MXPA04000967A (es) 2005-02-17
JP2005314438A (ja) 2005-11-10
CN1599577A (zh) 2005-03-23
EA200400241A1 (ru) 2004-06-24
US7238341B2 (en) 2007-07-03
BR0211623A (pt) 2004-07-13
KR20080100856A (ko) 2008-11-19
NZ531338A (en) 2005-08-26
US20030180222A1 (en) 2003-09-25
CO5560528A2 (es) 2005-09-30
EP1420681A4 (en) 2009-08-05
TWI284539B (en) 2007-08-01
UA84432C2 (uk) 2008-10-27
EP1420681B1 (en) 2013-12-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA81226C2 (en) Peptide-based multimeric targeted contrast agents
Chen et al. MicroPET imaging of breast cancer αv-integrin expression with 64Cu-labeled dimeric RGD peptides
KR100932827B1 (ko) 펩티드계 화합물
AU2002318931A1 (en) Peptide-based multimeric targeted contrast agents
DE60206272T2 (de) Chelatorkonjugate mit verbesserten eigenschaften
EP2076557A1 (en) Polylysine dendrimer contrast agent
CA2625207A1 (en) Compounds comprising short aminoalcohol chains and metal complexes for medical imaging
US6534038B2 (en) Ternary ligand complexes useful as radiopharmaceuticals
EP2182974A2 (en) Cyclic azapeptides as integrin markers
KR20070029200A (ko) 펩티드계 화합물
KR20000070544A (ko) 중합체
JP6952320B2 (ja) 新規ｎｋ３受容体アゴニスト
WO2001052898A9 (en) Methods for incorporating metal chelators at carboxyl-terminal site of peptides
AU2008201709A1 (en) Peptide-based Multimeric Targeted Contrast Agents
JP2001504801A (ja) 血栓サイトに局在化可能な放射性医薬組成物
RU2184122C2 (ru) Гликоконъюгаты 20(s)-камптотецина