UA72460C2

UA72460C2 - A process for the preparation of polymer- bound cyclic peptides

Info

Publication number: UA72460C2
Application number: UA2000116453A
Authority: UA
Original assignee: Aventic Pharmaceuticals Inc
Priority date: 1998-04-15
Filing date: 1999-04-15
Publication date: 2005-03-15
Also published as: HUP0101629A2; US6569993B1; EP1093458A1; CN1323313A; CN1163504C; CZ20003798A3; NO20005165L; JP2002511483A; AU3567999A; AU744812B2; BG104903A; BR9909634A; EP1093458A4; CN1552737A; AP1117A; WO1999052933A1; AP2000001972A0; NO20005165D0; CA2325572A1; SK15352000A3

Description

Даний винахід стосується способу одержання, заснованому на синтезі фрагментів, полімер-зв'язаних циклічних пептидних аналогів паратироїдних гормонів і аналогів родинних паратироїдним гормонам білків, що містять, принаймні, один місток між бічними ланцюгами двох несуміжних амінокислотних залишків. Зокрема, винахід стосується способу твердофазного синтезу таких циклічних пептидних аналогів і корисних для синтезу пептидних фрагментів.

Передумови створення винаходу

Підгрупи циклічних пептидів присутні в широкому ряді пептидів, що мають корисну біологічну активність, включаючи аналоги паратироїдного гормону й аналоги білків, родинних паратироїдному гормону, аналоги вазоактивного пептиду, аналоги холецистокініну, пептиди, похідні від фактора некрозу пухлини (ТМЕ), аналоги кальцитоніну, аналоги хоматостатину, модулятори клітинної адгезії, аналоги фактора вигляділення гормону росту (СВЕ), антагоністи брадикініну, аналоги спонукання активації тирозину (ТАМ Мітісв) і агоністи аміліну.

Особливий інтерес представляють циклічні пептидні аналоги паратироїдного гормону (ПРТН) і аналоги білків, родинних паратироїдному гормону (ПРТНГР).

Людський паратироїдний гормон (ПРТН) являє собою білок, що складається з 84 амінокислот, що є основним регулятором гомеостазу кальцію. Білок, родинний паратироїдному гормону (ПРТНГР), являє собою білок, що складається з від 139 до 171 амінокислот з М-кінцевою гомологією до ПРТН. М-кінцеві ферменти

НПРТН їі ПРТНІР, особливо ті, що складаються з амінокислот 1-34, зберігають повну біологічну активність батьківського гормону.

НРТН (1-34) має наступну амінокислотну послідовність:

Бег-МаІ-Зег-Сіи-Пе-с4Іп-Ї еи-Меї-Нів-Авп-І еи-С1у-І увз-Нів-І еи-Авп-Зег-Меї-С1и-Агоа-Ма1І-сти- Тер-І еи-Ага-І ув-

І ув-І еи-С1Іп-Азр-Ма!І-Нів-Азп-Рне.

НРТНГР (1-34) має наступну амінокислотну послідовність:

АІа-МаІ-Зег-С1пи-Нів-с1Іп-І еи-І ен-Ніз-Авр-їЇ уз-С1у-І уз-Зег-Пе-с1Іп-Авр-І еи-Аго-Агд-Ага-Рпе-РНе-їЇ ец-Нів-Нів-

Ї ен-Не-АІа-С1и-Пе-Нів-Тпг-Апа.

Біологічна активність ПРТН виражається в активації двох систем вторинного месенджера: аденілциклази (АС), зв'язаної з (з-білком, і активності протеїнкінази з (РКС), зв'язаної і не зв'язаної з С-білком. Показано, що

М-кінцеві фрагменти ПРТН (1-34)ОН і пРТН (1-31)МН»о є анаболіками, що стосується остеогенезу людей і пацюків з видаленими хірургічним шляхом яєчниками, відповідно. Показано, що збільшення росту кісток зв'язано зі стимуляцією активності аденілциклази. Аналоги цих М-кінцевих фрагментів мають істотний терапевтичний потенціал у лікуванні фізіологічних станів, пов'язаних з регулюванням кальцію в кістковій клітині, включаючи гіпокальциномію, остеопороз, порушення остеогенезу; і порушень, пов'язаних з остеопорозом і порушенням остеогенезу, таких як гіперпаратиреоз, гіпопаратиреоз і синдром Кушинга; глюкокортиокоїдного і викликаного імуносупресанхами порушеная хістеогенезу; і лікуванні перелому кісток і повторного перелому кісток.

Також встановлено, що видалення до шести амінокислотних залишків від М-кінцевої групи ПРТН (1-34) істотно зменшує здатність отриманих у результаті аналогів стимулювати аденілциклазу при наявності невеликого впливу на зв'язування рецептора. Таким чином, аналоги ПРТН (1-34), зменшені на шість амінокислотних залишків за М-кінцевою групою, інгібують активність РТН і корисні в лікуванні порушень, що характеризуються надлишком РТН, таких як гіперпаратиреоз і зв'язаний гіперпаратиреозом гіперкальціємічний криз, злоякісний розвиток гіперкальцемії, ниркова недостатність і гіпертонія.

Нециклічні аналоги НРТН від (1-27) до (1-34) описані в патенті США Ме4086196. Нециклічні аналоги НРТН (1-34) і ЯРТНГІР (1-34) описані в патенті США Ме5589452. (Міе8, Міє!8, Туя або Рнезя| ПРТН (1-34) описані в патенті США Ме4656250. (МІ, Міе!ї, ТумЯ ПРТН (1-34) і їх М-усічені похідні описані і патентах США

МоМо4771124 і 4423037. Інші нециклічні аналоги РТН (1-34) описані в патентах США Ме5723577 і 5434246,

МО097/02834, ЕРА 561 412-А1, ЕРА 747 817-А2. МО94/02510, М/09603437 і М/09511988-А1. Аналоги від ПРТН (1-28) МНг до ПРТН (1-31) МН», і від (СГеш27| ПРТН (1-28) МН» до (Геш27) ЯИРТН (1-33) МН» описані в патенті США

Ме5556940. Нециклічні антагоністи рецептора РТН, включаючи М-кінцеві усічені аналоги РТН, описані в патентах США МеоМе5446130, 5229489,477 1124 і 4423037.

Циклічні і біциклічні аналоги ПРТН і ПРТНІР описані. Цикло (І ув26-Аврао) |Сец27| ПРТН (1-34) МНе» і цикло (Гувг27-Авріб) ПРТН (1-34) МН»е описані в патенті США Ме5556940. Цикло (І уз26-Аврео) |Геи27| ПРТН (1-31) МН», цикло (І увг2-Аврге) | ец27) ПРТН (1-91) МНа» і цикло (І уз27-Аврі0) ПРТН (1-34) МН» описані у Вагбієг, еї аї, У. Меа.

Спет. 1997, 40, 1373. Моноциклічні і біциклічні похідні НРТН (1-34) або ПРТНГІР (1-34) описані в патентах.

МО096/40193, ОЕ19508672-А1 і А. Вівеїю, еї а!., іп Віоспетівігу 1997, 36, 3293. Цикло (Гувз"З-Авр'") ЯРТНГІР (7- 34) МН», сильний антагоніст рецептора РТН, описаний М. СпПогеу, еї аї., Віоспетівігу, 1991, 30, 5698. Також у

Каптега й інш. описаний ряд аналогів ПРТНІР, що містять аміди, Реріїде Спетізігу 1993; ОКада, Х., єд.;

Ргоївїп Незеагсі Рошипааїйоп, ОзакКа. 1994. 321-324. М/О98/51324 описує циклічні пептидні сполуки формули

Хендай А ша тАжА еАюААуйи ви АнАнА

І і їх фармацевтично прийняти солі і проліки, де Х вибирають із групи, що складається з

(8). ее ніш ви мані масжи вь (б) КА Ав ев (с) КА АНА Ат, (4) Кей АеААя їв Кави ( Вк вир (г КиАнАуАт» (в) Ки ААУ І

Ф Ка дя і

Ф Ка

У вибивають із групи, що включає (а) «КУ» що); "Ав (в). «Вол (З «Ап Аве іо «Аа Аве (б «Аве и Ва» (8) «КА усу і .

ОА А Ак Ву,

В:а представляє Н, алкіл, аралкіл або -СОВ»2;

Ачь представляє Віа або групу формули

ІФ й Ї : Е, М м що ! й тр н Н !

Р. або. те Ву :

Капредетавляє алкіля, алкевіл, аявіно арил або прак;

В представляє групу формули ди ОК аво Ази МВВ,

КЕ незалежно представляють або нижчий злі;

Ко1 Ка везалежно прелетавляють НІ або азкіл;

Купредевпвляв алюцт

З Ва предетнляє А або алю СОВОЇ :

Віз предетавняє МН або сапокен:

Ки прелетавляє алюїлозбо яралкуко : о сл дорівнше т, о ябо 3; п дорівнює З або 4;

Ао відсутній або представляє пептид, що містить від 1 до 6 амінокислотних залишків;

Аї представляє 5ег, Аа, Сіу або О-Рго, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аг представляє Аа, Ма! або Су, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аз представляє Аа, бег, Сіу або О-Рго, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аг представляє Си, Аа або С1у, або їх еквівалентну амінокислоту;

А5 представляє Не, Ні, Аа або Су, або їх еквівалентну амінокислоту;

Ав представляє Аа, Сііп, Сіу або О-Рго, або їх еквівалентну амінокислоту;

А? представляє Аа, І єеи, Су, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аз представляє І єеи, Міє, Сіу або О-Рго, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аз представляє Ніз, Аа, О-Рго або Су, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аїо представляє Аа, Азп, Авр, Сувз, гомо-Сув, Спи, Су, Г ів, Опт, Зег, Тиг, О-Рго, -МНОН (СНг)пімНг)СО- або -чмНеСН(онагусСо»ні|СО-;

Аз представляє Аа, Су, І еи або І ув, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аї2 представляє Аїа або Су, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аїз представляє Аа, Авп, Авр, Суб, гомо-Сув, Сі, Сіу, ув, От, бег, Тпг, -МНОН (СНг)піМНг)СО- або -

МНОСнН((СНг СО» нІСо-;

Аа представляє Аа, Азп, Авр, Суз, гомо-суз, СІМ, СУ, Нів, Гуз, Оп, Зег, Ти, О-Рго, -МНОН (СНаг)тМНг)СО-

або -ІЧІНСН((СНг)аСО2н|ІСО-;

А:ї5 представляє Аа, С1у, Не, О-Рго або І еи, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аїв представляє Авп, Аа, Су, О-Рго або сп, або їх еквівалентну амінокислоту;

А17 представляє Аа, Авп, Агвр, Суб, гомо-Сув, (сш, СМПу, Г ув, От, 5ег, ТА, О-Рго, -МНОН (СНг)пМНг)СО- або -МНеСН((СНнгу пс сьнІ|СО-;

Аїв представляє Авр, Сув, гомо-сув, СІМ, Нів, Гец, ув, Огп, Міє, Зег, ТАг, -МНОН (СНг)пМНг)СО- або -

МНенН(СНг Со» ні|Со-;

А представляє Агу або Си, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аго представляє Аго або її еквівалентну амінокислоту;

Агі представляє Аго, Авр, Суб, гомо-Сув, (ІШ, Гуз, Оп, бе, ТА, Маї, -МНОН (СНо)тМмНг)СО-або -

МНенН(СНг Со» ні|Со-;

Аг2 представляє Авр, Суб, гомо-Сув, СІ, Нів, Губ, Оп, РПе, бе, ТА, -МНОН (СНг)тМНг)СО-або -

МНенН(СНг Со» ні|Со-;

Агз представляє І єи, Ріє або Ттгр, або їх еквівалентну амінокислоту;

Ага представляє І ем або її еквівалентну амінокислоту;

Аг5 представляє Аго, Авр, Сувз, гомо-Сув, СИМ, Ні, Гув, Огп, Ю-Рго, Зег, Тпг, -МНОН (СНг)птМНг)СО- або -

МНенН(СНг Со» ні|Со-;

Ав представляє Авр, Суз, гомо-Сувз, (СМ, Ніз, Гуз, Огп, Зеї, Ти, -МНОСН (СНг)пМНг)СО- або -

МНенН(СНг Со» ні|Со-;

А» представляє І єи або І ух, або їх еквівалентну амінокислоту;

Ага представляє або Не або І еи, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аго представляє Аа, Авр, Суб, гомо-Сув, СМ, (іп, губ, Огп, бе, ТА, -МНОН (СНг)тпіМНг2)СО- або -

МНенН(СНг Со» ні|Со-;

Азо представляє Авр, Суб, гомо-Сув, (з, (У, Гуз, Оп, Зег, Ти, -МНОН (СНг)тпіМНг)СО- або -

МНенН(СНг Со» ні|Со-;

Азі представляє Не, І еєи або Маї, або їх еквівалентну амінокислоту;

Азг представляє Нів, або її еквівалентну амінокислоту;

Азз представляє Авп або ТнНг, або їх еквівалентну амінокислоту і

Аза представляє Аа або РнНеє, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аз відсутній або представляє Пептид, що містить від 1 до 4 амінокислот і бічні ланцюги, принаймні, однієї з наступних пар залишків амінокислоти Анно і Аза, Аїз і Аї7, Аза і Азв, Ач7 і

Аг1, Азв І Аг» Алі і Агв, Азв | Аго та Азгв І Азо зв'язні за допомогою амідного, складноефірного, дисульфідного або лантіонінового зв'язку з утворенням містка, і бічний ланцюг кожного з наступних залишків амінокислоти: Ано,

Аїз, Аза, Аї17, Аїв, Агі, Аг2, Агв5, Ав, Аго і Азо вносить вклад, якнайбільше, в утворення одиничного містка за умови, що якщо бічні ланцюги наступних пар залишків амінокислоти: Аїтз і Аї7 або Ав і Азо зв'язані за допомогою амідного, дисульфідного або лантіонінового зв'язку з утворенням містка, то бічні ланцюги, принаймні, однієї з наступних пар залишків амінокислоти: Ао і Ача4, Ана і Азв, А17 І Аг, Аїв і Аг», Агі і Агв і Агв і Аго також зв'язані за допомогою амідного, складноефірного, дисульфідного або лантіонінового зв'язку.

Переважна підгрупа пептидних сполук формули | включає пептидні сполуки, у яких Х вибирають із групи, що включає (8) Кеди Аа А Авт (000 вен АКАсАиА ик, (8) 0 КЕуАгсАсАСАЄАКАєА, (Ф Вес Ан «в) Ел еАкАнАкЙуя (в КА Аве, їв) КеАтАкАт, (т Ка (5 Кит і

СВ Ки;

Х вибирають із групи, що включає (8) «Ку «ву «в Ке (5) Аж, (ді "«КусАжА в, 2) "Ав АКисАу Ан Ку й Ф «Кавун Ку В ( «Аж АжА Айва і 1 «Аж Ащ Аж А КІ кА мА

Віа представляє Н, алкіл, аралкіл або -СОНВ2;

Ачь представляє Віа або групу формули

«ЛК МАЙ й Кв або й Ко в, ;

Аг представляє алкіл, алкеніл, алкініл, арил або аралкіл;

Аз представляє групу формули Аз5-ОВаА або Аз5-МАВаА 5;

Ви і А5о незалежно представляють Н або нижчий алкіл;

Ав і Во незалежно представляють Н або алкіл;

А? представляє алкіл;

Аг представляє Н, або алкіл СОВ»;

Віо представляє Н або галоген:

Вії представляє або алкіл аралкіл;

Ао відсутній або представляє пептид, що містить від 1 до б амінокислотних залишків;

Аз представляє Аа, 5ег, Сіу або О-Рго, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аг представляє Си, Аа або Слу, або їх еквівалентну амінокислоту;

А5 представляє іє, Ні, АІа або Су, або їх еквівалентну амінокислоту;

Ав представляє Аа, сп, Сіу або О-Рго, або їх еквівалентну амінокислоту;

А; представляє Ла, І єи, Су, або їх еквівалентну амінокислоту;

Ав представляє І єи, Міє, Сіу або О-Рго, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аз представляє Ніз, Аа, Су або О-Рго, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аїо представляє Аа, Авзп, Су, І уз, А5р або О-Рго, або їх еквівалентну амінокислоту;

А представляє Аа, Сму, І еи або І уз, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аї2 представляє Аа або су, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аїз представляє Аа, Су або І уз, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аа представляє Аа, Су, Нів, Зег, Авр, І уз або О-Рго, або їх еквівалентну амінокислоту;

А:ї5 представляє Аа, Су, Не, О-Рго або І еи, або їх еквівалентну амінокислоту;

А17 представляє Аа, Азр, Су, Зег, Гуз або О-Рго, або їх еквівалентну амінокислоту;

Ав представляє І уз або її еквівалентну амінокислоту;

А представляє Аго або Си, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аг1і представляє Ага, ГГ уз, Азр або Маї, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аг2 представляє Авр, І уз, От або Си, або їх еквівалентну амінокислоту;

Агз представляє І єи, Ріє або Тгр, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аг5 представляє Аго, Нів, Агр, І уз або Сім, або їх еквівалентну амінокислоту;

Агзв представляє І уз або Ні, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аг27 представляє І єи або І уз, або їх еквівалентну амінокислоту;

Ага представляє Не або І єси, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аго представляє Аа, Азр, Сім, або Сіп, або їх еквівалентну амінокислоту;

Азо представляє Авр, І уз або Си, або їх еквівалентну амінокислоту;

Азі представляє Не, І еи або Маї, або їх еквівалентну амінокислоту;

Азз представляє Авп або ТНг, або їх еквівалентну амінокислоту і

Аза представляє Аа або Рнеє, або їх еквівалентну амінокислоту; і

Аз відсутній або представляє пептид, що містить від 1 до 4 амінокислот.

У УУО98/51324 описано, що вищевказані пептидні сполуки мають корисні властивості, зокрема, фармацевтичні властивості. Вони особливо корисні при лікуванні хворобливих станів, здатних модулюватися сполуками, що зв'язуються з рецепторами паратироїдного гормону із супутньою стимуляцією активності аденілциклази або без стимуляції. Даний винахід стосується поліпшеного способу синтезу цих пептидних сполук.

Твердофазний синтез циклічних пептидів звичайно включає послідовне приєднання амінокислот до пептидного синтетичного полімеру з одержанням полімер-зв'язаного пептиду, що має всю або частину амінокислотної послідовності бажаного циклічного пептиду. З залишків бічного ланцюга амінокислоти, що повинна циклізуватися, потім видаляють захисні групи і проводять реакцію циклізації. Якщо циклізацію проводять до завершення отриманої повної амінокислотної послідовності, то приєднують амінокислоти, що залишилися, і потім отриманий пептид відщеплюють від полімеру й очищають.

Однак, лінійний підхід до одержання пептидів і до циклічних пептидів у загальному є часто неефективним і тому не може бути рентабельним при одержанні великих кількостей пептиду. У випадках, коли пептид синтезують лінійним способом, легкість його очищення знижується, оскільки число амінокислотних залишків у пептиді збільшується. Крім того, проблеми, пов'язані з одержанням містка в бічному ланцюзі, включаючи низький вихід, побічні реакції і видалення домішок, переносяться на повний пептид при одержанні містка (ів) у бічному ланцюзі циклічних пептидів ближче до закінчення синтезу. Отже, включення циклічної одиниці в довгий Пептид збільшує труднощі, властиві синтезу лінійних пептидів. Комерційно здійсненний синтез циклічних аналогів ПРТН, таких, як описано в УУО98/51324 і зазначеного вище, вимагає синтетичного способу, що переборював би ускладнюючі фактори, що пов'язані як із збільшенням довжини, так і введенням циклічних компонентів, і який дозволив би одержати комерційно корисні кількості, з погляду на виробництво, ліків. Даний винахід стосується більш ефективного одержання циклічних аналогів ПРТН і ПРТНІР способом з використанням фрагментів, сполучених і не сполучених містковим зв'язком.

Цей винахід стосується способу одержання аналогів циклічних ПРТН і ПРТНІР формули:

Зк ", в якій

У, СГ ї М представляють лінійні пептидні фрагменти;

Кі відсутній або представляє циклічний пептидний фрагмент і

Ко представляє циклічний пептидний фрагмент; який включає "8 (1) одержання послідовним приєднанням придатним чином заміщених амінокислотних залишків до полімеру з одержанням: м) ш де В представляє синтетичний полімер, відповідний пептиду, і М представляє поліпептидний фрагмент; (2) окреме одержання фрагмента захищеного за М-кінцем циклічного пептиду формули ІМ звичайним пептидним синтезом вим. СОН

Кк, ту у якій Р представляє придатну захисну групу для аміногрупи, (3) сполучення ПІІ з ІМ з одержанням пептиду формули МУ ки)

М, (4) якщо К»е відсутній, тоді (а) фрагменти у і Ї поліпептиду одержують у вигляді окремого поліпептиду формули МІ

Із

РнМ и тео не і поліпептид МІ сполучають з пептидом М з одержанням пептиду формули МІЇ

Рими кв)

УНП або необов'язково (Б) захищені індивідуальні амінокислотні елементи поліпептидів У і Її приєднують послідовно до пептидного фрагмента формули У, або необов'язково (с) будь-який або обоє .) і Ї одержують роздільно у вигляді поліпептидних фрагментів і сполучають для нарощування пептиду, починаючи з фрагмента формули УМ; (5) якщо циклічний пептид Кі присутній, тоді (а) поліпептидний фрагмент формули МІ

РНК. уибОН , 1

У у якій

Р. представляє придатну захисну групу для аміногрупи, одержують окремо звичайними способами пептидного синтезу; (рю) пептидний фрагмент формули ІХ

РНК. «Сон їх одержують і сполучають з пептидним фрагментом М з одержанням пептидного фрагмента формули Х

РНМ-- М шо х і (с) циклічний пептидний фрагмент МІІЇ сполучають з пептидним фрагментом формули Х з одержанням пептидного фрагмента формули ХІ

РНМ. ким (В) ке ХІІ (4) одержують пептидний фрагмент формули ХІЇ

РНК. сон

ХІІ і фрагмент ХІЇ сполучають із фрагментом Хі і (б) відщеплення полімеру і видалення захисної групи.

У способі, викладеному в даному описі, фрагменти циклічного пептиду одержують окремо для сполучення з полімером або полімер-зв'язаним пептидом. Окреме одержання фрагмента циклічного пептиду дозволяє здійснити синтез полімер-зв'язаних циклічних, пептидів, що приводить до збільшеного виходу і продуктивності циклічного пептиду на виході. Труднощі, зв'язані з одержанням з'єднаного містковим зв'язком фрагмента, обмежуються меншою підодиницею пептиду, яка може бути очищена перед реакцією сполучення з твердофазним синтетичним полімером. Практичне здійснення цієї методики, що стосується деяких кращих аналогів ПРТН і ПРТНІР вимагає синтезу нових пептидних Фрагментів і нової послідовності проведення способу.

Використовувані в даному описі наступні терміни, якщо не обговорено особливо, мають наступні значення.

Визначення термінів "Алкіл" означає аліфатичну вуглеводневу групу, що може бути лінійною або розгалуженою, що має від приблизно 1 до приблизно 20 атомів вуглецю в ланцюзі. Розгалужена означає, що одна або більша кількість нижчих алкільних груп приєднані до лінійного алкільного ланцюга. "Нижчий алкіл" означає приблизно від 1 до 4 атомів вуглецю в ланцюзі, що може бути лінійним або розгалуженим. Алкільні групи включають метил, етил, н- і ізо-пропіл, н-, втор-, ізо- і трет-бутил і аналогічні групи. "Алкеніл" означає аліфатичну вуглеводневу групу, що містить вуглець-вуглецевий подвійний зв'язок, що може бути лінійним або розгалуженим, що має від приблизно 2 до приблизно 20 атомів вуглецю в ланцюзі. "Нижчий алкеніл" означає приблизно від 2 до 4 атомів вуглецю в ланцюзі, що може бути лінійним або розгалуженим. Ілюстративні алкенільні групи включають етеніл, пропеніл, н-бутеніл, ізо-бутеніл, З3-метилбут-2- еніл, н-пентеніл, гептеніл, октеніл, циклогексилбутеніл і деценіл. "Алкініл" означає аліфатичну вуглеводневу групу, що містить вуглець-вуглецевий потрійний зв'язок, що може бути лінійним або розгалуженим, що має від приблизно 2 до приблизно 20 атомів вуглецю в ланцюзі. "Нижчий алкініл" означає від приблизно 2 до 4 атомів вуглецю в ланцюзі, який може бути-прямим або розгалуженим. Ілюстративні алкінільні групи включають-етиніл, пропініл, н-бутиніл, З-метилбут-2-иніл, н- пентиніл, гептеніл, октеніл і дециніл. "Алкілен" означає двовалентну групу, похідну від насиченого вуглеводню з лінійним або розгалуженим ланцюгом при видаленні двох атомів водню, наприклад, метилен, 1,2-етилен, 1,1-етилен, 1,3-пропілен, 2,2- диметилпропілен і аналогічні групи. "Фенілалкіл" означає фенільну групу, приєднану до основної частини молекули через алкіленову групу.

Алкіленова група має переважно від приблизно 1 до приблизно 7 атомів вуглецю. Характерні фенілалкільні групи включають бензил, 2-фенілетил, 2-проділфеніл і аналогічні групи. "Захисна група для аміногрупи" означає групу, що легко видаляється, що, як відомо в даній області техніки, під час проведення синтетичних операцій захищає аміногрупу від небажаних реакцій і є групою, що селективно, видаляється . Використання М-захисних груп для захисту від небажаних реакцій під час синтетичних операцій відоме в даній області техніки, і відомі багато таких захисних груп, див., наприклад, Т.Н.

Стеєпе апа Р.С.М. Умицїв. Ргоїесіїме СтоиМрз іп Огдапіс Зупіпевзів, 2па еайіоп. дхопп УМієу 5 бопв5. Мем Хогк (1991), включену в даний опис як посилання. Переважні М-захисні групи являють собою ацильні, включаючи формільну, ацетильну, хлорацетильну, трихлорацетильну, о-нітрофенілацетильну, о-нітрофеноксиацетильну, трифторацетильну, ацетоацетильну, 4-хлорбутирильну, ізобутирильну, о-нітроцинамоїльну, піколіноїльну, ацилізотіоцианатну, амінокапроїльну, бензоїльну й аналогічні групи, ацилоксигрупи, включаючи метоксикарбонільну, 9-флуоренілметоксикарбонільну, 2,2,2-трифторетоксикарбонільну, 2- триметилсилілетоксикарбонільну, вінілоксикарбонільну, алілоксикарбонільну, трет-бутилоксикарбонільну (ВОС), 1,1-диметилпропінілоксикарбонільну, бензилоксикарбонільну (СВ), п-нітрофенілсульфінільну, п- нітробензилоксикарбонільну, 2,4-дихлорбензилоксикарбонільну, алілоксикарбонільну (АїПос) і аналогічні групи. "Амінокислота" означає амінокислоту, обрану з групи, що складається з природних і неприродних амінокислот, як визначено в даному описі. Амінокислоти можуть бути нейтральними, позитивно і негативно зарядженими в залежності від заступників у бічному ланцюзі. "Нейтральна амінокислота" означає амінокислоту, що містить незаряджені заступники в бічному ланцюзі. Ілюстративні нейтральні амінокислоти включають аланін, валін, лейцин, ізолейцин, пролін, фенілаланін, триптофан, метіонін, гліцин, серин, треонін і цистеїн. "Позитивна амінокислота" означає амінокислоту, у якій бічні заступники є позитивно зарядженими при фізіологічному значенні рН. Ілюстративні позитивні амінокислоти включають лізин, аргінін і гіститид. "Негативна амінокислота" означає амінокислоту, у якій заступники в бічному ланцюзі несуть загальний негативний заряд при фізіологічному значенні рН. Ілюстративні негативні амінокислоти включають аспарагінову кислоту і глутамінову кислоту. Переважні амінокислоти являють собою с-амінокислоти. Найбільш переважні амінокислоти являють собою с-амінокислоти, що мають І. стереохімію о-вуглецевого атома. "Залишок амінокислоти" означає індивідуальні амінокислотні одиниці, включені в пептид або пептидний фрагмент. "Природна амінокислота" означає ос-амінокислоту, обрану з групи, що складається з аланіну, валіну, лейцину, ізолейцину, проліну, фенілаланіну, триптофану, метіоніну, гліцину, серину, треоніну, цистеїну, тирозину, аспарагіну, глутаміну, лізину, аргініну, гістидину, аспарагінової кислоти і глутамінової кислоти. "Неприродна амінокислота" означає амінокислоту, для якої не існує кодону нуклеїнової кислоти. Приклади неприродних амінокислот включають, наприклад, О-ізомери природних с-амінокислот, як позначено вище; Аїр (аміномасляну кислоту), БАЇБ (З-аміноїзомасляну кислоту), Мма (норвалін), р-Аіа, Аай (2-аміноадипінову кислоту), БАай (З-аміноадипінову кислоту), Аби (2-аміномасляну кислоту), Сава (у-аміномасляну кислоту), Аср (б-аміномасляну кислоту), Юри (2,4-диаміномасляну кислоту), с-амінопімелінову кислоту, ТМ5БА (триметилсиліл-Аіа), айе (ало-ізолейцин), Ме (альфа-амінокапронову кислоту, норлейцин), трет-і еи, Сії (цитрулін), Оп, Орт (2,2'-диамінопімелінову кислоту), Орг (2,3-диамінопропіонову кислоту), є або в-Маї, Спа (циклогексил-Аїа), гідроксипролін, Заг (саркозин) і аналогічні амінокислоти; циклічні амінокислоти; Ме- алкіловані амінокислоти, такі як Меспу (Ме-метилгліцин), ЕС(СІу (Ме-еталгліцин) і Егазп (Ме-етиласпарагін), і амінокислоти, у яких о-вуглецевий атом несе два заступники бічного ланцюга.

"Еквівалентна амінокислота" означає амінокислоту, що може бути заміщена іншою амінокислотою в пептидах даного винаходу без будь-якої істотної втрати функції. При здійсненні таких замін заміщення подібних амінокислот вводять на основі відносної подібності заступникам у бічному ланцюзі, наприклад, розміру, заряду, гідрофільності, розчинності в НегО і гідрофобності, як викладено в даному описі.

Як детально описано в патенті США Ме4554101, включеному в даний опис як посилання, для амінокислотних залишків визначено наступні значення гідрофільності: Агу (-3.0); Гуз (43.0); Авр (3.0); си (43.0); бег (403); Авп (40.2); Сіп (40.2); су (0); Рго (-0.5); Тиг (-0.4); Ада (-0.5); Нів (-0,5); Сув. (-1.0); Меї (-1.3);

Ма! (-1.5); Геци (-1.8); Пе (-1.8); Туг (-2.3); Рпе (-2.5); і Тгр (-3.4).

Зрозуміло, що амінокислотний залишок може бути заміщений на інший, що має подібне значення гідрофільності (наприклад, у межах розходження плюс мінус або 2,0) з одержанням усе ще біологічно еквівалентного поліпептиду.

Аналогічним чином заступники можуть бути введені на основі подібності індексу розчинності в Нео.

Кожному залишку амінокислоти привласнений гідропатичний індекс на основі його гідрофобності і характеристик заряду. Ці значення гідропатичних індексів складають Іе (14.5); Ма! (44.2); Г еи (-3.8); Рпе (--2.8);

Сув (12.5); Меї (--1.9); Аа (4-1.8); су (-0.43У; ТАг (-0.7); Зег (-0.8); Тгр (-0.9)3; Туг (-1.3); Рго (-1.6); Нів (-3.2); Сім (- 3.5); Сп (-3.5); Авр (-3.5); Авп (-3.5); І ув(-3.9); і Аго(-4:5).

При введенні заступників, заснованому на гідропатичному індексі переважні величини в межах розходження плюс або мінус 2,0. "Пептид" і "поліпептид" означає полімер, у якому мономерами є амінокислотні залишки, сполучені разом через амідні зв'язки. Переважні пептиди даного винаходу являють собою пептиди, що включають с- амінокислоти. Найбільш переважні пептиди даного винаходу включають со-амінокислоти, що мають 1 стереохімію на о-вуглецевому атомі. "Циклічний пептид", як визначено в даному описі, означає пептид, що містить один або більшу кількість циклічних пептидних фрагментів. "Пептидний фрагмент" означає пептидну підодиницю батьківського пептиду. Пептидний фрагмент може являти собою лінійну, розгалужену або циклічну підодиницю цільового пептиду. "Лінійний Пептид" означає пептид або поліпептид, у якому амінокислоти зв'язані один з одним через амідний зв'язок між М-кінцем однієї амінокислоти і С-кінцем іншої. "Розгалужений пептид" означає пептид або поліпептид, в середині якого одна або декілька амінокислот, що входять до складу індивідуальних, які несуть бічний ланцюг, що містить залишок карбоксильної кислоти абоаміногрупу, приєднані до іншого заступника пептиду через ці групи бічного ланцюга. "Циклічний пептидний фрагмент", як визначено в даному описі, означає пептидний фрагмент, у якому заступник на одному амінокислотному залишку зв'язаний із заступником на іншому амінокислотному залишку в пептидному фрагменті. Зв'язування переважне між бічними ланцюгами двох амінокислотних залишків у пептидному фрагменті, переважно, за допомогою складноефірної, амідної, дисульфідної або лантіонінового зв'язку. Зв'язок між двома бічними амінокислотними ланцюгами позначений в даному описі, як .

Складноефірний, амідний, дисульфідний або лантіоніновий зв'язок, що зв'язує два амінокислотних залишки циклічного пептиду, утвориться між функціональними групами бічного ланцюга. У такий спосіб амідний зв'язок утвориться між карбоксильною групою бічного ланцюга кислого амінокислотного залишку й аміногрупою бічного ланцюга основного амінокислотного залишку; ефірні зв'язки утворяться між карбоксильною групою бічного ланцюга кислого амінокислотного залишку і гідроксильною групою бічного ланцюга амінокислотного залишку, що містить гідроксильну групу; дисульфідний зв'язок утвориться з амінокислотних залишків, що містять сульфгідрильні групи в бічному ланцюзі і лантіонінові містки утворяться при десульфуризації відповідного дисульфіду.

Число атомів у містку, що утвориться в результаті амідного, складноефірного, дисульфідного або лантіонінового зв'язку, що утворяться як описано вище, змінюється в залежності - від довжини бічного ланцюга і типу зв'язку (тобто, амідного, - складноефірного, дисульфідного або лантіонінового зв'язку). Місток, переважно, включає від 2 до 12 атомів, більш переважно, від 6 до 10 атомів. Найбільш переважне число атомів, що містяться в містку, дорівнює 7, причому цей місток, переважно, включає амідний зв'язок між функціональними групами бічного ланцюга залишків І уз і Авр. "Полімер" означає твердий носій, модифікований реакційноздатною групою так, що твердий носій здатний сполучатися з карбокси- або М-кінцевою групою амінокислоти, або пептиду циклічного пептидного фрагмента, як визначено в даному описі. Характерні полімери включають полімер Мегттійеій (хлорметилований полістирол), полімер гідроксиметилу, полімер хлориду 2-хлортритилу, полімер трифенілхлорметану, полімер кислоти Віпк (полімер 4-бензилокси-2',4"-диметоксибензгідролу), полімер трифенілкарбінолу, полімер РАЇ. (полімер 4-гідроксиметилфенілацетамідометилу), полімер У/апд (полімер п-бензилоксибензилового спирту), полімер МВНА (полімер п-метилбензгідриламіну), полімер ВНА (полімер бензилгідриламіну), полімер аміду

Віпк (полімер 4- (2'4"-диметоксифеніл-Етос-амінометил)феноксимономеру і полімер РАГ (полімер 5- (4-Етос- амінометил-3,5-диметоксифенокси)валеріанової кислоти - МВНА). Перевалені полімери являють собою полімер хлортритилу, полімер кислоти Віпк і полімер аміду Віпк. "Твердий носій" означає субстрат, який є інертним стосовно реагентів і умов реакції, даного винаходу, а також, власне кажучи, нерозчинним у використовуваному середовищі. Характерні тверді носії включають неорганічні субстрати, такі як кізельгур, силікагель і скло з регульованими порами; органічні полімери, включаючи полістирол, включаючи 1-295 сополімер стиролу і дивінілбензолу (у формі гелю) і 20-4095 сополімер стиролу і дивінілбензолу (у макропористому вигляді), поліпропілен, поліетиленгліколь, поліакриламід, целюлозу й аналогічні полімери і складні композиції з неорганічних матеріалів і полімерів такі як поліакриламід, закріплений всередині матриці частинок кізельгуру. Див. У).М. біємаїгй апа 9.0. Моипад. Боїїй

РНіазе Рерійае Зупіпевзів, 2па. Еа., Рієгсе Спетісаї! Со. (Спісадо, І, 1984).

Крім того, "твердий носій" включає твердий носій, як описано вище, що прикріплений до другого інертного носія, такого, як шпильки, описані в Тесппісаї Мапиа!ї, Мийіріптм 5РОС, Спігоп Тесппоіодієз (1995) і в посиланнях до неї, які включають опис знімної заснованої на поліетилені або поліпропілені головної фракції, щепленої до метакрилату з аміновими функціональними групами, і інертної підкладки.

Крім того, "твердий носій" включає полімерні тверді носії, такі як поліетиленгліколеві тверді носії, описані в

Уапаа еї аї, Ргос. Макі. Асад. 5сі. ОБА, 92, 6419-6423 (1995) і 5. Вгеппег, ММО95/16918, що розчинні в багатьох розчинниках, але можуть випадати в осад при додаванні осаджуючого розчинника.

У назві природних і неприродних амінокислот і їх залишків, використовуваних у даному описі, виконують правила, запропоновані ІШРАС комісією з номенклатури органічної хімії і комісією ІШРАС-ІШВ за номенклатурою біохімії як викладено в "Мотепсіайте ої о-Атіпо Асідйв' (Весоттепадайопе, 1974) "Віоспетівігу. 14 (2), (1975). У випадку, коли назви і скорочення амінокислот і їх залишків, використовуваних в описі і формулі винаходу, відрізняються від відомих назв і скорочень, вони будуть зрозуміло розшифровані.

Характерний пептид, отриманий у відповідності зі способом цього винаходу, позначають, наприклад, як цикло ((Гув'З-Авр2) |АІа!, Мед, Г увів, Авр?, І ец27| ПРТН (1-31) МН», де в круглих дужках після "цикло" поміщені назви амінокислотних залишків, сполучених хімічним зв'язком, і в квадратні дужки поміщені заміщені амінокислоти з природної послідовності. ПРТН позначає людський РТН, і ПРТНІР позначає білок, родинний людському паратироїдному гормону. Числа в другій круглій дужці відносяться до номера амінокислотних залишків у пептиді, починаючи з М-кінцевої групи (тобто, перші 31 амінокислоти в ПРТН).

Переважні варіанти здійснення винаходу

Як показано на схемі 1, одержання полімер-зв'язаного циклічного пептиду включає сполучення циклічних і нециклічних пептидних фрагментів з полімером, з полімер-звязаною амінокислотою, або з полімер-зв'язаним пептидом.

Схема 1

Стандартний спосіб сполучення Номини нан і н СЕМИ ринко 9 РН. риСОН т шко РИМ й о

З) представляє полімер, відповідний пептидного синтезу.

Т представляє НеМ і амінокислоту або циклічний або нециклічний пептид.

Е ї О представляють кожна або незалежно М-кінцеву захищену амінокислоту або фрагмент М-кінцевого захисного циклічного або нециклічного пептиду.

Сполучення, переважно, здійснюють між карбоксильною кінцевою групою пептидного фрагмента і полімером, полімер-звязаною амінокислотою абополімер-зв'язаним пептидом. Коли пептидний фрагмент сполучають з полімер-зв'язаними амінокислотою або пептидом, сполучення проводять, переважно, через амідний зв'язок між карбоксильною кінцевою групою циклічного пептидного фрагмента і М-кінцевою групою полімер-зв'язаних амінокислоти або пептиду.

Для того, щоб реакція сполучення протікала, карбоксильна група фрагмента пептиду повинна бути активована. При практичному здійсненні винаходу можуть бути використані багато методів активації, і вони включають, наприклад, попереднє утворення симетричних ангідридів (РБА), попереднє утворення змішаних ангідридів (РМА), хлорангідридів кислот, активних складних ефірів і активацію іп зйи карбонової кислоти, як описано в Рієїй5 апа Мобіє, 1990. "Боїїа рназе рерііде зупіпевів шйігіпуд 9-ПоогепуІтеїШйохусагропіїЇ атіпо асіав".

ІП. 9. Рері. Ргоїєїп Нев. 35; 161-214.

Характерні активуючі агенти, включають ізопропілхлорформіат, диізопропілкарбодиіїмід (01), ІС, змішаний з 1-гідро-ксибензотриазолом (НОВТ), 1- (З-диметилумінопропіл)-3-етилкарбодиіїмід (ЕС), хлорангідрид біс (2-оксо-3-оксазолідиніл/уфосфонової кислоти (ВОР-С1), гексафторфосфат бензотриазол-1- ілокси-трис (диметиламіно)фосфонію (ВОР), гексафторфосфат бензотриазол-1-ілокси-трис- піролідинофосфонію (РУВОР), гексафторфосфат бром-трис-піролідинофосфонію (РУВРАОР), гексафторфосфат О- (7-азабензотриазол-1-ил)-М, М, М', М'-тетраметилуронію (НАТ), тетрафторборат 2- (1Н- бензотриазол-1-ил)-1, 1, 3, З-тетраметилуронію (ТВТИ), гексафторфосфат 2- (1нН-бензотриазолі-і-ил)-ї, 1, З, 3- тетраметилуронію (НВТІ), тетрафторборат 2-|І2-оксо-1- (2Н)-піридил|-1, 1, З, З-біспентаметиленуронію (ТОРРІрІ), М, М'-дициклогексилкарбодиіїмід (ОСС), ОСС, змішаний з НОВТ, і аналогічні сполуки. Придатні розчинники для реакції сполучення включають дихлорметан, ОМ, ОМ5О, толуол, ТНЕ і аналогічні розчинники.

Час реакції сполучення складає від приблизно 1 до приблизно 48 годин у залежності від полімеру і похідної карбонової кислоти, які будуть сполучатися, що активує агента, розчинник і температуру. Сполучення проводять при від приблизно -107С до приблизно 50"С, переважно, при температурі навколишнього середовища.

Щоб запобігти будь-якому впливу на хід реакції сполучення, М-кінцеву групу частини циклічного пептиду захищають кислотною або основною чуттєвою групою. Такі захисні групи повинні бути стабільними в умовах утворення амідного зв'язку й у той же час бути легковидаленими без руйнування зростаючого пепидного або ланцюга рацемізації кожного з хіральних центрів, що містяться в ній. Придатні захисні групи являють собою 9- флуоренілметилоксикарбонільну (Етос), трет-бутілоксикарбонільну (Вос), бензилоксикарбонільну (Сбрз), біфенілізопропілоксикарбонільну; трет-амілоксикарбонільну, ізо-борнілоксикарбонільну, (сх, о)диметил-3, 5- диметоксибензилоксикарбонільну, о-нітрофенілсульфенільну, 2-ціано-трет-бутилоксикарбонільну й аналогічні групи. Переважна 9-флуоренілметилокскарбонільна (Етос) захисна група.

Аналогічно може бути необхідно захистити будь-які реакційноздатні функціональні групи бічного ланцюга в циклічному пептидному фрагменті. Особливо переважними захисними групами для бічного ланцюга є: для аміногруп бічного ланцюга, як у лізині й аргініні, 2, 2, 5, 7, в-пентаметилхроман-б-сульфонільна (рітс), нітро-, п- толуолсульфонільна, 4-метокси-бензолсульфонільна, Сб, Вос, АїПос /(алілоксикарбонільна) (« адамантілоксикарбонільна; для тирозину бензильна, о-бромбензілоксикарбонільна, 2,6-дихлорбензильна,

ізопропільна, трет-бутильна (І1-Ви), циклогексильна, циклопентильна й ацетильна (Ас); для серину трет- бутильна, бензильна і тетрагідропіранільна; для гістидину тритильна, бензильна, Сб, п-толуолсульфонільна і 2, 4-динітрофенільна; для триптофану формільна і Вос; для аспарагіну і глутаміну Ті (тритильна), для аспарагінової кислоти і глутамінової кислоти О-1-ви і О-алільна і О-бензильна група.

Сполучення фрагментів з або полімером полімер-зв'язаним пептидом переважно здійснюють при приблизно кімнатній температурі при використанні приблизно 2 молярних еквівалентів (стосовно полімеру) фрагмента циклічного пептиду, захищеного групою Етос, активованого приблизно еквімолярною кількістю гексзфторацетату бензотриазолілокси-трисІпіролідино|фосфонію (РУВОР) і гідроксибензотриазолгідрату в присутності приблизно 4 еквівалентів диізопропілетиламіну в диметилформаміді протягом приблизно 16-48 годин.

Варто оцінювати закінчення реакції сполучення. Фахівці в даній області техніки, звичайно, знайомі з відомими методами контролю проходження реакціями, такими як методи з використанням нінгідрину (Каїзег тест), пікринової кислоти, 2, 4, б-тринітробензолсульфонової кислоти (ТМВ), флуорескаміну і хлоранілу, що засновані на реакції реагенту з вільними аміногрупами з одержанням хромофорної сполуки. Якщо використовують імінокислоти (наприклад. Ріо і Нур), поточний контроль із застосуванням ізатину є переважним методом. Рієїа5 апа Мобіє, зирга. Кількісна оцінка закінчення реакції може проводитися в ході реакції, наприклад, як описано Заїїзригу і іншими. (Міжнародна публікація МеУуУО91/03485).

При використанні захисних груп Етос, Каїзег і ТМВ тести переважні. У Каїзег тесті зразок полімер- зв'язаного пептиду, може бути проаналізований нінгідрином, комерційно доступним від Рієегсе Спетісаї, за способом, описаним бЗаїгіп еї аї., (1981, Апаї. Віоспет. 117:147-157). Точно так зразок полімер-зв'язаного пептиду може бути проаналізований з використанням тринітробензолсульфонової кислоти (ТМВ), комерційно доступної від Ріка, як описано ТакКаїдавні (1984, Спет І ей. 11127).

Якщо реакція сполучення не завершена, що визначено одним або іншим із зазначених аналізів, її можна примусово завершити декількома способами, відомими фахівцям у даній області техніки, включаючи (а) повторне сполучення з використанням від одного- до п'ятикратного надлишку захищеної амінокислоти, (Б) повторне сполучення при використанні інших або додаткових розчинників (наприклад, трифторетану), або (с) додавання хаотропних солей, наприклад, МаСіОє або І іВг (Кіїз апа біємжай, 1990. "Реріїдев: Спетівігу,

Бігисішге апа Віоіоду, " Римієг апа Маїггпаї, еаз., Е2СОМ Рибі, р. 904-906).

Переважний фрагмент полімер-зв'язаного циклічного Пептиду має формулу ЇЇ

РАНА Ат Ат Аж Ат Ат В--С-- 0-0 ї у якій представляє полімер;

Р представляє захисну групу для аміногрупи; 2 жук,

А відсутній або представляє групу формули

АКАД,

В представляє групу формули иа Ат,

С представляє групу формули і тА АД Ад ЗТАЮ ААУ

НААН АДАС або О представляє яма, у якій представляє лактамовий, складноефірний, дисульфідний або лантіоніновий місток; Аїз, Аї7, Ав і Аг? представляють залишки амінокислоти, Ат представляє Ніз (ТИ) або бег (ВО); Аї5 і Агв представляють незалежно або Пе І єи; Зег (ІВІ) або ГІ еи; Аїє представляє Азвп (Тії) або Сп (ТИ); Ато представляє Ага (Рітпс) або Спи (ОїВи); Аго представляє Ага (Ріпс); Агі представляє Ага (Ріпс) або Маї; Агз представляє Рпе або Тр (Вос); Агєе представляє І еи; Аз» представляє Агд (Рітс) або Нів (ТИ); Ав і Азо представляють залишки амінокислоти, у якої бічні ланцюги Агвє і Азо необов'язково зв'язані за допомогою амідного, або лантіонінового зв'язку; А27 представляє І єи або І уз (Вос); Аго представляє Аа або Сп (Ти); Азі представляє або Пе Маї; Азо представляє Ніз (Ти); Азз представляє Авп (Ті) або Тнг (ІВи) і Аза представляє Аа або Рне.

Інший фрагмент переважного полімер-зв'язаного циклічного пептиду має формулу ІЇ, у якій - представляє лактамовий місток, і бічні ланцюги Агє і Азо необов'язково зв'язані за допомогою амідного зв'язку. ІншИЙ фрагмент переважного полімер-зв'язаного пептиду, зв'язаний з полімером, має формулу ЇЇ, у якій представляє лактамовий місток; Аїз і Аїіз передставляют І уз; Аї7 і Аг2 представляють Авр,

Агв представляє І уз (Вос) і Азо представляє Азр (ОїВи); або бічні ланцюги Агв і Азо необов'язково зв'язані за допомогою амідного зв'язку.

Інший фрагмент переважного полімер-зв'язаного пептиду має формулу ПЇ ш г 1 -

Етос--Ат Ар А А А А А Ат АН А А АТ

ЦІ й т у якій ! представляє лактамовий місток; Аїів представляє ГІ ув; Ато представляє С1іи (ОЇВиИ); Аго представляє Агу (Ріта); Агі представляє Маї; Аг22 представляє Азр; Агз представляє Тгр (Вос); Аг4 представляє

Геи; А» представляє Ага (Рітс); Аг представляє І уз (Вос); Аг7 представляє І еи; Агв представляє Гей; Аго представляє ап (Ти); Азо представляє Авр (ОЇВиИ) і Азі представляє Маї.

Полімер-зв'язаний пептид, отриманий, як описано вище, може бути далі подовжений, наприклад, або сполученням декількома додатковими циклічними пептидними фрагментами, сполученням з одним або декількома пепгидними фрагментами послідовним приєднанням індивідуальних амінокислот або будь-якою комбінацією зазначених вище способів.

Отриманий циклічний пептид потім відщеплюють від полімеру й очищають. Захисні групи можуть бути вилучені до, або після, або одночасно з відщепленням від полімеру. Пептид з цілюом вилученими захисними групами може бути очищений одним способом або комбінацією способів, що включають кислотно-основну екстракцію, перекристалізацію, ліофілізацію, послідовність хроматографічних стадій, з використанням будь- яких або всіх наступних типів: іонний обмін на слабоосновному полімері в ацетатній формі; гідрофобна адсорбційна хроматографія на полістиролі, зшитим дивінілбензолом, у кільцях яких немає заступників, (наприклад, АМВЕВІІТЕФ ХАБ); силікагелева адсорбційна хроматографія; іонообмінна хроматографія на карбоксиметилцелюлозі; розподільна хроматографія, наприклад, на 5ЕРНАЮОЕХФ (3-25, 1Н-20 або протипотокова розподільна хроматографія; високоефективна рідинна хроматографія (НРІ С), зокрема НРІС зі зверненою фазою з використанням колонки з октил- або октадецилсиліл/кремнезем зв'язаною фазою.

Одержання пептидного фрагмента

Фрагмент одержують синтезом пептидної основи, що включає сполуку амінокислот, що складають фрагмент, у належному порядку. Пептидна основа фрагмента може бути синтезована кожним із способів, що відомі фахівцям у даній області техніки. Огляд багатьох методик твердофазного синтезу пептидів може бути знайдений у 9У.М. 5іемжматй апа 9.0. Моипд, 5оїїй. Рпазе Реріїде Зупіпезів, М.Н. Егеетап Со. (Зап Егапсівсо), 1963 і У. Меїієеппоїег. Ногтопаї Ргоїєїп5 апа Реріідев, мої. 2, р. 46, Асадетіс Ргевв (Мем ХоїКк), 1973. Класичний синтез у розчині описаний у С. 5спгодег апа К. Гирке, Те Рерійадев, мої. 1, Асадетіс Ргев5 (Мем Хогк), 1965.

Як відомо фахівцям у даній області, спосіб пептидного синтезу на твердих носіях звичайно включає побудову пептиду, починаючи з карбоксильного, або С-кінцевого кінця, у якому С-кінцеву амінокислоту з її захищеною со-аміногрупою приєднують до твердофазного полімеру. М-захисну групу потім відщеплюють і наступну також М-захищену амінокислоту сполучають через пептидний зв'язок з х-аміногрупою амінокислоти, приєднаної до твердого носія, як описано вище, цикл видалення захисної групи в попередній амінокислоті і сполучення додатковою амінокислотою повторюють доти, поки синтез пептиду не буде довершений. Будь-які реакційноздатні бічні ланцюги амінокислот захищають хімічними групами, що стійкі в умовах реакції сполучення і видалення Ме-захисної групи і можуть бути вилучені наприкінці синтезу. Якщо пептидний фрагмент одержують, використовуючи твердофазні способи, фрагмент одержують для використання в реакції сполучення з іншими фрагментами, відщеплюючи його від полімеру.

Циклічний фрагмент одержують аналогічним способом. Однак, одержання основи пептиду супроводжується (1) селективним видаленням захисної групи у фукціональних груп у бічному ланцюзі, що будуть утворювати цикл, (2) циклізацією і (3) необов'язковим видаленням будь-яких захисних груп, що залишилися.

Використання амінокислот із захисною групою Етос представляє усього лише один з стратегічних напрямків пептидного синтезу. Стратегічний напрямок із застосуванням Вос (трет-бутилоксикарбонільної захисної групи для аміногрупи) може також використовуватися для одержання пептиду, зв'язаного з твердим носієм (наприклад, Сеузеп евї аї, 1987, 9. Іттипої. Меїпоадз 102:259-274.)

Амінокислоти, що використовуються для синтезу пептиду, можуть бути стандартними Вос-(с-Ме- аміногрупою, захищеною Ме-трет-бутоксикарбонільною групою) амінокислотами, описаними Ме!ті-Пеїй (1963, ..

Ат. Спет. бос. 85:2149-2154), або амінокислотами з лабільними основними групами, захищеними 9- флуоренілметоксикарбонільними групами (Етос) для Ме-аміногруп, вперше описаними в Сагріпо апа Нап (1972, у. Огд. Спет. 37:3403-3409). Амінокислоти і з захисними групами Етос, і з захисними групами Вос для

Ме-аміногруп комерційно доступні від Ріка, Васпет, Адмапсей Спетіесн., бідта, Сатрігідде Везєагсп

Віоспетіса!ї, Васпет або Репіпешіа І абз, або від інших хімічних фірм, відомих тим, хто працює в даній області техніки. Крім того, спосіб винаходу може використовуватися з іншим їм захисними групами, що відомі фахівцям у даній області техніки. Твердофазний пептидний синтез може бути здійснений відомими для фахівців у даній області техніки способами, опис яких надано, наприклад, у бієжмай апа Моцйпд, 1984. Боїїа

Ріазе бупіпезі5, Зесопа Еайіоп, «"Рієгсе Спетіса! Со., Боскоога, ІІ; Рівїд5 апа Мобіє, 1990, Іпі. 9. Рері, Ргоїеєїп

Вез. 35:161-214, або при використанні автоматизованих синтезаторів, яких як комерційно доступні від АВ.

Хоча пептидний синтез від С-кінцевої групи до М-кінцевої групи є стандартним, фахівцям у даній області техніки відомо, що пептидний фрагмент також можна синтезувати від М-кінцевої групи до С-кінцевої групи.

Одержання-лактамового містка

Фрагмента циклічного пептиду з лактамовим містковим зв'язком одержують утворенням амідного зв'язку між карбоксильною групою бічного ланцюга кислого амінокислотного залишку й аміногрупою бічного ланцюга основного амінокислотного залишку в присутності агента, що активує, як описано вище. Кращими кислими амінокислотними залишками є Агр, Сіи, -МНСНІі(СНг)з СО2НІСО- ії -МНОН Конго» НІ|СО-, причому Авр є найбільш переважним. Переважні основні амінокислотні залишки включають Ніз, їу5, От, -МНОН (СнгМнНг)СО- І-ЧМНСН ((СНег) 2МНІСО-, причому Гуз є найбільш переважним.

У випадках, коли попередник пептиду для одержання фрагмента циклічного пептиду містить більш одного кислого або основного амінокислотного залишку, захисні групи для додаткових кислих або основних амінокислот у фрагменті циклічного пептиду вибирають так, щоб вони могли бути селективно вилучені в амінокислотах, які повинні бути циклізовані. Переважно, захисні групи в залишках необхідних кислих і основних амінокислот видаляють одночасно. Крім того, на додаток до вимоги стабільності до реагентів, що використовується для видалення захисних груп в обраних основних і кислих амінокислотних залишках, захисні групи на амінокислотних залишках, що залишилися, вибирають так, щоб вони були стабільні у використовуваних умовах циклізації.

Термін "ортогональність" при використанні, що стосується захисних груп бічного ланцюга стосується ситуації, як викладено в даному описі, у якій є два або більш класи захисних груп у молекулі, причому кожен клас найбільше оптимально видаляють за певних умов, у той час як групи, що залишилися стабільні в умовах, використовуваних для видалення захисних груп іншого класу. У такий спосіб можна видаляти всі захисні групи одного класу, залишаючи всі інші неушкодженими.

Переважною захисною групою з необхідною ортогональністю для кислого амінокислотного залишку, що буде циклізуватися є алільна; для основного амінокислотного залишку, що буде циклізуватися, - алілоксикарбонільна (аїІос); для будь-яких додаткових кислих амінокислотних залишків - третбутильна (ІВи) і для будь-яких додаткових основних амінокислотних залишків -третбутилоксикарбонільна група (Вос).

Після синтезу пептидної основи фрагмента циклічного пептиду з використанням твердофазного способу або способу у фазі розчину алільну й алілоксикарбонільну захисну групу видаляють одночасно обробкою паладієм, переважно, тетракис (трифенілфосфин) паладієм (0) у присутності М-метиланіліну. Потім утворять лактамовий місток, як викладено в даному описі для утворення амідного зв'язку.

Переважні фрагменти циклічного пептиду для використання в одержанні полімер-зв'язаних циклічних пептидів цього винаходу мають форму ХУ, ХМІ або ХМІЇ

РА АтАтТААУОН

ХУ ши

РА АТАХАХТАХ ОН

ХМ

ГТ

РА АтАД АЮ АЦОН

ХУП у яких представляє лактамовий, дисульфідний або лантіоніновий місток; Р представляє захисну групу аміногрупи:

Аїз, Ач7, Аїв, Аг2, Агв і Азо представляють залишки амінокислоти; Аа представляє Ніз (Ті) або 5ег (ІВи); А15 представляє 5ег (ІВи) або Ге; Аїє представляє Авп (Тії) або Сп (ТИ); Ато представляє Аг (Рітс) або Сі (ОїВи); Аго представляє Аго (Ріпс); Агі представляє Ага (Ріпс) або Маї; Аг? представляє І! еи або І уз (Воеє); Агв представляє Не або І еи і Аго представляє Аа або Сзііп (ТИ). Більш переважні фрагменти циклічного Пептиду мають формулу ІМ, М або МІ в якій . представляє лактамовий місток:

Р представляє Етос;

Аїз, Азв і Аг представляють І ув; Ач7, Аг» і Азо представляють Азр; Аа представляє Ніз (Ті) або Зег (ІВи);

Аї5 представляє 5ег (ІВи) або І еи; Аїіє представляє Авп (Ті) або Сіп (Ти); Ато представляє Аго (Ріпс) або Сій (ОїВи); Аго представляє Аго (Ріпс); Агі представляє Ага (Ріпс) або Маї; Аг? представляє І! еи або І уз (Воеє); Агв представляє Іе або І еи і Аго представляє Аа або сп (ТІ).

Ще більш переважний фрагмент циклічного пептиду при використання для одержання полімер-зв'язаного циклічного пептиду даного винаходу представляє Етос-цикло (І уз-Авр) ГГ уз-С1и (ОЇВи) -Ага (Рітпс) -МаІ-Азр-ОН

Циклічні пептидні аналоги паратироїдного гормону й аналоги білків, родинних паратироїдному гормону, що придатні для одержання способом даного винаходу описані в: 1. Сопадоп і іншими, заявка на патент США Моб60/046472 (зареєстрована 14 травня 1997); 2. МЛїїск і іншими, патент США Ме85556940 (17 вересня, 1997); 3. Спогем і іншими, патент США Ме5717062 (10 лютого, 1998); 4. МісКкегу і іншими, М/096/40775 (виданий 19 грудня, 1996).

Переважний циклічний пептид, придатний для одержання способом цього винаходу, має формулу І

ХА кА А А вн Аа тАААжуА

Аж Ав Ан Ан Ан Ат АжАн Аж ї

І у якій

Х вибирають із групи, що складається з (а) АВ1а-А1-А2-Аз-А4-Ав5-Ав- (р) Ать-А2-Аз-Ад-Ав-Ав-, (с). Ніь-Аз-Ад-Ав-Ав-, (Я) Ать-А4-Ав-Ав-, (е). Вів-Ав-Ав-, (Ї) Ать-Ав- і (д) Ав, - у якій Віа вибирають із групи, що складається з (1) Н, (2) пептиду, що включає від 1 до 6 амінокислот, (3) алкілу, (4) фенілалкілу, (5) -СОН», у якій В2 вибирають з алілалкілу, алкенілу, алкінілу, фенілу, нафтилу і фенілалкілу. Ать вибирають із групи, що складається з (1) Н, (2) алкілу, (3) фенілалкілу і (4) -СОНР;», у якій Рг вибирають з алкілу, алкенілу, алкінілу, фенілу, нафтилу і фенілалкілу, Аї вибирають з бег і Аїа або з еквівалентних їм амінокислотних залишків; А», Аз, Ах і Ає представляють амінокислотні залишки і Аз вибирають з Іе і Ніз або з еквівалентних їм амінокислотних залишків;

А?7, Ав, Ат і Аі2 представляють амінокислотні залишки;

Ав представляє І єи або Міє, або еквівалентні їм амінокислотні залишки;

Аїо представляє Авр або Авп, або еквівалентні їм амінокислотні залишки;

Аїз і Аї7 представляють амінокислотні залишки, у яких бічні ланцюги Аз і Аї7 зв'язані за допомогою амідного зв'язку;

Аа представляє Нів або 5ег, або еквівалентні їм амінокислотні залишки;

Аїз і Агв незалежно представляють Пе або І єи, або еквівалентні їм амінокислотні залишки;

Аїє представляє Авп або сіп, або еквівалентні їм амінокислотні залишки;

Аїв і Аг22 представляють амінокислотні залишки, у яких бічні ланцюги Ав й Аг зв'язані амідним зв'язком;

А представляє Аго або Си, або еквівалентні їм амінокислотні залишки;

Аго представляє Аго або еквівалентні їй амінокислотні залишки;

Агі представляє Ага або Маї, або еквівалентні їм амінокислотні залишки;

Агз представляє Ре або Тгр, або еквівалентні їм амінокислотні залишки;

Ага представляє І еєи або еквівалентні їй амінокислотні залишки;

Аг5 представляє Аго або Ні, або еквівалентні їм амінокислотні залишки;

Агв і Азо представляють амінокислотні залишки, у яких бічні ланцюги Агвє і Азо необов'язково зв'язані за допомогою амідного зв'язку;

Аг27 представляє І єм або І уз, або еквівалентні їм амінокислотні залишки;

Аго представляє Аїа або асіп, або еквівалентні їм амінокислотні залишки;

Азо представляє або Це Маї, або еквівалентні їм амінокислотні залишки;

Х вибирають із групи, що складається з (а) Аз; (Б) Азо-Нз; (с) -Аз2-Азз-Нз; (й) -Аз2-Азз-Аза-Аз, в якій Аз представляє -ОН або -МАА45; в якій Ва і А5 незалежно вибирають з водню і нижчого алкілу, Аз» представляє

Ніз або еквівалентні їй амінокислотні залишки; Азз представляє Авп або ТНг, або еквівалентні їм амінокислотні залишки й Аза представляє Аа або РНе, або еквівалентні їм амінокислотні залишки.

Пептиди формули І мають корисні фармацевтичні властивості. Вони особливо корисні для лікування хворобливих станів, що можуть бути модульовані сполуками, що зв'язуються з рецепторами паратироїдного гормону або з супутньою стимуляцією активності САМРаве, або без неї. Див. Патент США Ме60/046472.

Характерні переважні циклічні пептиди, придатні для одержання способом цього винаходу, включають, але не обмежуються: пив ува ТА Чі щу Ве ВЕ МН ст пекло ув дво ДА Ме ув ер се РЕНІ ЯХН, пиклоі ук А КН ук А вр еи ЗВЕТНИ З УХН, циклі мк Али Аа Ме ув Ар ке ДРТНОЗ МН, непо Акв А М ув ери ен РУ НОЗІ УМН. вило ев А Ме ух вв ев РН З НМ, ци ув ВАН Ле хв Азр де ЕТИКИ ЗМ, щиклог ук Ар АВ ув Ав ев ВІКИ ЖУВ, циклої узи Ар рів ів ук Али ге ЕТНО МИ, цик уз АВ КАМ Ав ет ЕТНО МН. циклом ЗА АВ М А Ве ВРУ З ННЦ,

ПИКА дно я Мі Ав Бай ВЕТНО Я МН» цнкпо дя дер АН М ув Ар Ге ЕТНО-З ПМ,

Цикл ук Ах АНА М ух ре ТК ЕНКІ-З МН,

Викл др А дв Ах аль УНИЗ МЕ, біинкной Ух Ар ув дер АВМ ув Ах ре НЕ РНК З УМН. біфклой ув Аз у А МАВ М ув хр дея ДРТНКЗІН, циклова у АВМ ук бер рев ТИМ, бе циклову Ав ув ар А Ар ви Р ТНИ- ЗИ, бимкпоф ув -Азр уяви КАЇН М ув ар ев ПЕТНИ- МИ, цихло ув яру зр РО ЗЯЖВ, . цикл уки Ааррвя двує де ан Де НИ ЗИМИ, чию ук Аз Кук вро ПЕТ КН,

ЧИКЛО ув акрів Аяр ЧА ЕТНКРО- ОМ, бІЦНКЛОї ук див дв АБИ ДК ув вве РТНІ ЗМ, и бі вки дви: Авт девіс дер ди Ар ден ТР ЕЗАМН,.

Інший переважний циклічний пептид, придатний для одержання способом цього винаходу, має формулу І, у якій амінокислотні залишки представляють залишки с-амінокислоти, що мають і стереохімію на с- вуглецевому атомі.

Інший переважний циклічний пептид, придатний для одержання способом цього винаходу, має формулу І, у якій Х вибирають із групи, що складається з (а) Аіа-А1-А2-Аз-Аа-Ав-Ав-, у якій Ві представляє Н або Ріо, Аї представляє бег або Аа, Аг представляє МаЇ, Аз представляє 95ег, Ал представляє Си, Аз представляє або Не Нівз, Ає представляє (іп, (Б) А1ь-А2-Аз-А4-А5-Ав-, у якій А», Аз, Ач, Ав і

Ав визначені вище, і Ніь представляє Н, (с) НАір-Аз-А4-Ав-Ав-, у якій Ні, Аз, Ам, Ав і Ає визначені вище, (а) Ать-Ал-

Ав-Ав-, у якій Ніь, Аля, Ав і Ає визначені вище, (е) Нтіь-Ав-Ав-, у якій Вів, Ав і Ає визначені вище, (Її) Аіь-Ав-, у якій

ВАіь і Ає визначені вище і (9) Вів, у якій Аїь визначено вище; А? представляє ГІ еи, Аз представляє Г еи або Міє;

А» представляє Нів, Азо представляє Азр або Авп; А11 представляє І еи; Аїі2 представляє Су; Аз, А17, Ав, Аг» і

Азо незалежно обрані з 5ег, ТНг, Г ув, Сувз, гомо-Сув, От, Авр, Сім, -МНОСН (СНгМнНг)СО-, -«ІЧІНСН((СНг)25МНг|СО-, -МНеН (СНг)ззСОНІСО- і «-«МНОН ((СНз)СО2Н|СО-; Аза представляє Нів або 5ег: Аїі5 представляє 5ег або І еи;

Аїв представляє Авп або сп; Ато представляє Агу або Спи; Аго представляє Аго; Агі представляє Агу або Маї;

Агз представляє РПе або Тгр; Ага представляє І єи; Ах представляє Агод або Ніє; Аг представляє Ні або незалежно вибирають із групи, що складається з бег, ТП, Гуз, Суб, гомо-Суб5, Оп, Авр, си, -МНОСН (СнгмнНга)Со-, -МНСНІ((СНг)г.Ь МНг|СО-, -МНОН ((СНг)ззСО»НнІСО- і «ЯМНОН (СНз)аСО»Н|СО-; Аг представляє І єи або І уз; Агв представляє або Іе І еи: Аго представляє Аа або Сп; Азі представляє або Не Маї; і Х вибирають із групи, що складається з (а) -Нз, у якій Вз представляє -ОН або -МА45; у якій Ва і В5 незалежно вибирають з водню й алкілу, що містить від одного до чотирьох атомів вуглецю, (Б) -Аз2-ВНз, У якій Аз визначене вище, і Аз2 представляє Нів, (с) -Аз2-Азз-Нз, У якій Вз і Аз2 визначені вище, і Азз представляє Азп або Тпг, і (а) -Аз2-Азз-Аза, у якій Аза представляє Аа або РНе.

Інший переважний циклічний пептид, придатний для одержання способом цього винаходу, має формулу І, у якій (І) бічні ланцюги Ав і Аг зв'язані за допомогою амідного зв'язку, (ії) бічні ланцюги Аз і Аі7 зв'язані за допомогою амідного зв'язку і бічні ланцюги Ав і Аг2 зв'язані за допомогою амідного зв'язку, (її) бічні ланцюги Ав і Аг2 зв'язані за допомогою амідного зв'язку, і бічні ланцюги Агв і Азо зв'язані за допомогою амідного зв'язку або (їм) бічні ланцюги Аїз і А17 зв'язані за допомогою амідного зв'язку, бічні ланцюги Ав і Аг зв'язані за допомогою амідного зв'язку, і бічні ланцюги Агхв і Азо зв'язані за допомогою амідного зв'язку.

Інший переважний циклічний пептид, придатний для одержання способом цього винаходу, має формулу І, у якій Аїз вибирають з І із і Аа, Аї7 вибирають з 5ег і Авзр, Аїв представляє І ув, Аг2 представляє Агр, Агв- представляє І уз і Азо представляє Азр.

Інший переважний циклічний пептид, придатний для одержання способом цього винаходу, має формулу І, у якій Х представляє Ніа-А1-Аг2-Аз-Аг-Ав-Ав-.

Інший переважний циклічний пептид, придатний для одержання способом цього винаходу, має формулу І, у якій Аї представляє Аа, Аз представляє Міє й А27 представляє І еи.

Інший переважний циклічний пептид, придатний для одержання способом цього винаходу, має формулу у якій Аа представляє Н, і ХУ представляє МН».

Інший переважний циклічний пептид, придатний для одержання способом цього винаходу, має формулу І, у якій Аа представляє Н, і У представляє -Аз2о-Азз-Аза-МН».

Інший переважний циклічний пептид, придатний для одержання способом цього винаходу, має формулу І, у якій Х вибирають із групи, що складається з (а) Агів-Аг2-Аз-Аг-Ав-Ав-, (В) Аіь-Аз-Ад-Ав-Ав-, (с) Вів-Ад-Ав-Ав-, (й) Ать-Ав-Ав-, (є) Ать-Ав- і (І) Вів-:

Інший переважний циклічний пептид, придатний для одержання способом цього винаходу, має формулу І, у якій Ав представляє Міє й Аг7 представляє І! еи.

Інший переважний циклічний пептид, придатний для одержання способом цього винаходу, має формулу І, у якій Х представляє Н і У представляє -Аз2-Азз-Аза-МН».

Більш переважні циклічні пептиди, придатні для одержання способом цього винаходу, вибирають з пекла Пуха чі ух Дар ау ДР ЕНКЗИМН,

Вико у Ав у А Де ди ув Де РОН Но пекла ух АЗИ АВ в ув хр ЕК БР А МН, ин ух АБЕТКА Кук Ак ев В ТНОЗ ЦІМ, цик ув Ак КА ув Ав ев ЕТНО БУМН, яка в Анри А де ЕТНО - МН,

Яков Али КА М зв де ПЕТ МЕ, викл в ер КА ув Али де ТНК ММА, цнкпо уз Аер АВ Не ув БА ев БРЕСТІ М В,

ВИКО ув Ар КАВА Це дк Аве ВВЕ. МЕ, циклові М ус Ав ев ЛРТНИ-З МН, циклова ДАВ ух вав те ЕТНО ИЧИ, наклад Ар ДА М кв кв і ея АРЕНИ-ЗЧН, пикло ух «Азр ДА Му Аве ей ВАРНИ-Н МВ, дико ув Аевв КН м Ахри г ЗВРТНИ-З КВ, непо ув Авр ув Ар КА Ме хар і ее ТНК, біди уки Акри ух Арв В М уки Ар де ЕТНО-З МН,

Ще більш переважні циклічні пептиди, придатні для одержання способом цього винаходу, вибирають з цикло (ув. Ар Аа Ме ув Ар еи аРТН(-3 МН, б іцикло(ї ув -Авр ув Ар ТАМ ув вра ви БРТН(И-З1УМН. біцикло(ї ув Ар ув. Ар КА, Ме ув", Ар ен ВРТНК-3 МН,

Проте, ще більш переважний циклічний пептид, придатний для одержання способом цього винаходу, представляє цикло (Гуз "-Авр Аа! Ме ув Ар ен ДОРТН(1-31)МН,.

Попередній опис для переважного розуміння ілюструється наступним прикладом, що не призначений для обмеження обсягу винаходу.

Приклад 1

Одержання цикло (І уз"З-Авре2) |АІа", Мет, І ув!8, Авр2?, І еи27|) ИРТН (1-31) МНег

Аїг-Уа1ї-бег-ОТш-Пе-С1о-Їеи-Міе-Ніз-Авп-Гей-О1у-ув-Нів-Гем-Азп

ДИ.

Зег-Гуз «Сім-Аге «УаІ-Авр-Тгр-ЇецеАтр-Т ув ТешнТ еу-ОІп-Азр-УаєМН. 5

Стадія 1

Етос-Тгр (Вос) -І еи-Аго (Ріпс) -Г уз (Вос) -І еи-І еи-С1п (Ти) -Азр (ОїВи) -МаІ-МН-полімер

Амідний полімер Віпк МВНА (з титром 0,5-0,7мекв/--титр Мома Віоспет, І адоПа, СА, О5А), у кількості 5г (0,64ммоль/г, З,2ммоль) піддають набряканню при струшуванні з ббмл диметилформаміду, потім розчинник зливають і полімер промивають двома порціями по боОмл диметилформаміду. Потім видаляють 9- флуоренілметоксикарбонільну групу (ЕМОС) обробкою полімеру боОмл 2095 розчину піперидину в диметилформаміді протягом 20 хвилин, з наступним чотириразовим промиванням полімеру диметилформамідом порціями по бОмл (реакція з ТМВ на МН» дає позитивний результат). Етос-МаІ-ОН (2,17г, б,4ммоль) і 2,43г (6б,4ммоль) юксафторфосфату О-бензотриазол-1-ил-М, М, М', М'-тетраметилуронію (НВТ) у 150мл диметилформаміду обробляють 32мл (12,8ммоль) М-метилфирмаміду при 0"С протягом 10 хвилин, потім суміш додають до полімер-зв'язаного Пептиду і суміш перемішують струшуванням при температурі навколишнього середовища протягом приблизно 1,3 години. Зливають розчинник, потім полімер промивають трьома порціями по 150мл диметилформаміду (реакція з ТМВ5 на МНе дає негативний результат). Полімер промивають двома порціями диетилового ефіру і сушать протягом ночі; збільшення ваги внаслідок сполучення складає 0,88г, означаючи приєднання 2,75ммоль Маї. Синтез продовжують при послідовному видаленні ЕМОС (як описано вище) і сполученні (як описано вище) з 5,бмолями кожного з ЕМОС-Авр (ОїВи), ЕМОС-Сіп (ТІ),

ЕМОС-Г ем, ЕМОС-їЇ єи, ЕМОС-Г уз (ВОС), ЕМОС-Аго (РМСО), ЕМОС-Геи і ЕМОС-Тгір (ВОС) при використанні 5,6 молярних еквівалентів НВТ, 11,2ммоль М-метилморфоліну і ЗХо0мл диметилформаміду при кожнім сполученні.

Підсумкова вага складає 5,8г. Аліквоту відокремлюють для одержання цільового пептиду з 8695 чистотою, зберігаючи ЕМОС, але видаляючи захисні групи в бічних пенях. І С-МС: 1390,6: обчислено 1390,8.

Стадія 2: Етос-ЧНКАО (І уз-Авр) І уз-С1и (Ої7Ви) -Аго (Рітс) -МаІ-Азр-ОН

Етос-ув ато -Аяуетеу--Хаі-Лер - он

Спосіб А: Твердофазний синтез а. Збирання послідовності: синтез продукту Етос-І ув (АїЇос) -Сім (ОїВи) -Агд (Рітс) -МаІ-А5р (Оаліл) - полімер хлортритилу

Здійснюють сполучення Етос-Азр (Оаліл) -ОН з 15г хлортритилу з 190 поперечних зв'язків із завантаженням 1,05мекв/г (загальна кількість 15,75ммоль), використовуючи 7,89г (18,9ммоль) Етос-Авр (Оаліл) -ОН, 82г (39,9ммоль) гексафторацетату бензотриазолілокси-трисІпіролідино|-фосфонію (РУВОР) і 10,2г (78, Зммоль) диізопропілетиламіну в 150мл дихлорметану. Суміш перемішують при струшуванні, потім розчинник зливають і полімер промивають три рази, використовуючи порції по 150мл дихлорметану, метанолу і диізопропілетиламіну в співвідношенні 17:22:11, з наступним триразовим промиванням дихлорметаном порціями по 150мл. Відбирають зразки полімеру для проведення реакції з ТМВ5, результат негативний.

Видаляють М-кінцеву 9-флуоренілметоксикарбонільну групу обробкою полімер-звязаною амінокислотою, захищеною Етос-групою, 150мл 595 розчином піперидину в дихлорметані і диметилформаміді в співвідношенні 1:1 протягом 10 хвилин, з наступною обробкою 150мл 2095 розчину піперидину в диметилформаміді протягом 30 хвилин. Полімер-зв'язану амінокислоту промивають, як описано вище. Етос-

Ма!І-ОнН, Етос-Аго (Ріпс) -ОН (1095 аліквоту, відібрану після цієї стадії), Етос-С1и (ОїВи) -ОН і Етос-їі уз (є-АПос) -ОН кожну сполучають тим же самим способом і при використанні тієї ж самої послідовності операцій, однак при використанні від трьох до п'яти промивань диметилформамідом замість трьох промивань дихлорметаном до проведення тестування з ТМВ5. Ніякі подвійні сполучення не вимагаються. Підсумковий полімер-зв'язаний пептид промивають 150мл тетрагідрофурану і 150мл диетилового ефіру, потім сушать у вакуумі, одержуючи 27,23г. р. Видалення алільної групи й АПос-групи для І ув! і Аврег:

Синтез продукту Етос-І увз-С1и (ОїВи) -Аго (Ріпс) -МаІ-Азр-полімер хлортритил 10г отриманого раніше Етос- (І уз-АПов) -С1и (ОїВи) -Агоа (Ріпс) -МаІ-Авп (Оаліл) - полімер хлортритил піддають набряканню у віброситі в 100мл диметилсульфоксиду, диметилформаміду і дихлорметану в співвідношенні 1:1:0, 2 за обсягом протягом 20 хвилин, потім обережно зливають розчинник. Додають окремий розчин 2,9г тетракистрифенілфосфинпаладія (0) у 240мл диметилсульфоксиду і диметилформаміду в співвідношенні 1:11 за обсягом, після чого випливає додавання бомл дихлорметану і 16,2г (150ммоль) М- метиланіліну, потім суміш перемішують при струшуванні протягом 2 годин. Розчинник зливають і полімер промивають трьома 100мл порціями дихлорметану. Полімер потім піддають набряканню в 100Омл диметилсульфоксиду і диметилформаміду в співвідношенні 1:11 за обсягом, потім обережно зливають розчинник з полімеру і використовують полімер безпосередньо в циклізації І ув"8 -Аврез,

с. Утворення лактамового містка І увз!8 -Аврез:

Синтез послідовності Етос-цикло (І уз-Авр) І уз-С1и (ОїВи) -Ага (Ріпс) -МаІ-Азр-полімер хлортритилу

Зв'язаний з полімером пептид з вищезгаданого прикладу обробляють 5,2г (10ммоль) гексафторацетату бензотриазолілокси-трисІпіролідино|їфосфонію (РУВОР) і 2,6г (20ммоль) диізопропілетиламіну в 100Омл диметилсульфоксиду і диметилформаміду в співвідношенні 1:1 за обсягом і суміш перемішують протягом 4 годин. Розчинник зливають і полімер промивають трьома 100мл порціями диметилформаміду, потім відбирають аліквоту з висушеного полімеру для реакції з ТМВ5 (результат негативний). Полімер промивають 100мл кожного з тетрагідрофурану і диетилового ефіру, потім сушать у вакуумі. а. Відщеплення полімеру і виділення продукту Етос-цикло (І уз-Азр)І уз-С1и (ОїВи) -Аго (Рітс) -МаІ-Азр-ОН

Зв'язаний з полімером пептид з вищезгаданого прикладу утворення лактамового містка Іувз'З-Авр?? обробляють у віброситі з 130мл оцтової кислоти, дихлорметану і 2, 2, 2-трифторетанолу в співвідношенні 1:8:1 протягом 20 хвилин. Видаляють рідину з полімеру й обробляють 500мл метил-трет-бутилового ефіру і 100мл диетилового ефіру і суміш центрифугують. Надосадову рідину видаляють і до залишку додають диетиловий ефір, після чого випливає центрифугування. Надосадову рідину видаляють і залишок сушать протягом ночі, одержуючи 2,77г жовтої твердої речовини (МС: 1172; 4195 від стехіометричного виходу, неочищена). Продукт очищають тонкошаровою хроматографією з дихлорметаном і метанолом як елюентом із співвідношенням від 85:15 до 60:40, одержуючи 1г Етос-цикло (ІГуз-Авр) Гувз-Сіи (ОїВи) -Аг9 (Рітс) -МаІ-Агр-ОН (1595 вихід у розрахунку на полімер) з 85АЗУо чистотою.

Спосіб В: Синтез у розчині а. Збирання послідовності Синтез Вос-Агр (ОАліл) -ОВ2!1

У 3-х горлову колбу ємністю Зл завантажують бензиловий ефір 1, 1-диметилетоксикарбоніл-(І) - аспарагінової кислоти (50,0г, 154,5ммоль), дихлорметан (9бмл), аліловий спирт (9,43г, 162,3ммоль) і 4-М, М- диметиламінопіридин (1Омг) при температурі навколишнього середовища. Реакційну суміш прохолоджують до 8"С і додають розчин дициклогексилкарбодиіміду (32г, 154,5ммоль) у дихлорметані (100мл) протягом 1,5 години при 8-117С. При додаванні розчину дициклогексилкарбодиіміду осаджується дициклогексилмочевина.

Реакційну суміш перемішують протягом 2 годин при 11-12"С, по закінченні чого ВЕРХ показує відсутність вихідної речовини. Дициклогексилмочевину відфільтровують і фільтрат концентрують. Масляний залишок розчиняють у метил-трет-бутиловому ефірі (250мл) і розчин фільтрують для-видалення залишку дициклогексилмочевини, промивають ЗОмл 0,2н соляної кислоти, ЗОмл води, 20мл насиченого водяного розчину гідрокарбонату натрію, ЗОмл води і двома 5О0мл порціями сольового розчину, сушать (сульфатом магнію), фільтрують і концентрують, одержуючи 55,88г ВОС- (І) Авр (Оаліл) -ОВ2І у вигляді олії (Мобчисл 363,4;

М"знайдено 364).

Синтез НС1-Авр (Оаліл) -ОВ2І

Розчин ВОС-Агр (Оаліл) -ОВ21І (110,5г, 302,7ммоль) у 5Х0О0мл етилацетату в 3-х горловій колбі ємністю Зл приводною мішалкою охолоджують до 5"С і через реакційну суміш барботують хлористоводневий газ протягом 2,5 годин, протягом цього часу температура реакції досягає приблизно 22"С. ВЕРХ показує відсутність вихідної речовини. Протягом ночі в розчин барботують азот, що приводить до утворення білого осаду, який збирають фільтруванням і промивають 100мл етилацетату. Залишок сушать у вакуумі, одержуючи 84г НОСІ Авр (Оаліл) -ОВ21 білу кристалічну (під мікроскопом) тверду речовину (Мобчисл. 263; М-1 знайдено 264).

Синтез ВОС-Ма!І-Авзр (ОАліл) -ОВ2І

До розчину ВОС-МаІ-ОН (25,4г, 116,7ммоль) у етилацетаті (85мл) додають гідроксибензотриазолгідрат (16,55г, 122,5ммоль) у диметилформаміді (122,3мл). Суміш охолоджують до 5"С і додають розчин дициклогексилкарбодиіміду (25,2г, 122,5ммоль) у етилацетаті (58,7мл) протягом 1 години, протягом цього часу температура підвищується до приблизно 18"С і осаджується дициклогексилмочевина. Припиняють охолодження, перемішують протягом 2 годин суміш і додають розчин НСІ-Н2М-Авр (Оаліл) -ОВ2! (З5г, 116,7ммоль) у 189мл диметилформаміду протягом 25 хвилин. Додають повільно протягом 0,5 години М- метилморфолин (12,8мл) для досягнення реакційною сумішшю рН 7 і перемішують суміш при температурі навколишнього середовища протягом 36 годин. Реакційну суміш фільтрують для видалення дициклогексилмочевини, фільтрат розчиняють метил-трет-бутиловим ефіром, перемішують протягом 2 годин, потім повторно фільтрують. Фільтрат промивають 100мл води, 100мл 0,5М водної лимонної кислоти, 100мл води, 1О00мл насиченого водного розчину гідрокарбонату натрію, 10О0мл сольового розчину, сушать (сульфатом магнію), фільтрують і концентрують, одержуючи 41,3г ВОС-Ма!-Азр (Оаліл)-ОВ! олію (Мобчисл. 462;

М"знайдено 463).

Синтез НСІ-МаІ-Авр (Оаліл) -ОВ2!І

У розчин ВОС-МаІ-Азр(ОАЇІ)-ОВ2! (31,7г, 68,5ммоль) у етилацетаті (З0О0мл) при температурі 2-42С пропускають хлористоводневий газ протягом 2 годин. Припиняють охолодження, і суміш перемішують протягом 48 годин. Сумлінно барботують азот у розчин протягом 1 години. Реакційну суміш концентрують на роторному випарнику, одержуючи 38,3г білої твердої речовини, що перекристалізовують з етилацетату, одержуючи 24,2г НСІ-МаІ-Агр(О»: пт)-ОВ21І (Мобчисл. 362; Мзнайдено 363).

Синтез ЕМОС-Аго (РМС) -МаІ-Авр (ОАліл) -ОВ2І

У 3-х-горлову колбу ємністю Зл, обладнану приводною мішалкою, поміщають 17,25г (2бммоль) ЕМОС-Ага (РМС) і ЗОбОмл ацетонітрилу і суміш перемішують при температурі навколишнього середовища до одержання прозорого розчину. Додають гексафторацетат бензотриазолілокси-трисІпіролідино|-фосфонію (РУВОР), розчин охолоджують до 2"С і додають 2,6г (2б6бммоль) М-метилморфоліну з утворенням білого дьогтю.

Повільно додають нітрилдиметилформамід (52мл) до розчинення дьогтю, і суміш перемішують при температурі 3"С протягом 30 хвилин. Додають розчин НСІ-МаІ-А5р (ОАліл) -ОВ2І (10,4г, 2б6ммоль) у З9мл диметилформаміду протягом 20 хвилин при температурі 2-3"С, з наступним додаванням М-метилморфоліну (7,5мл) для досягнення рН 7. Охолодження припиняють і суміш перемішують протягом 2,5 годин. Потім розбавляють суміш 250мл води і 250мл етилацетату. Шар етилацетату видаляють і промивають водою (2х100О0мл) і сольовим розчином (2х100мл) і концентрують, одержуючи білу тверду речовину, що перекристалізовують з 175мл етилацетату, одержуючи 18,5г ЕМОС-Аго (РМС) -МаІ-Авр (Оаліл) -ОБ71І (з 95А92о чистотою). Фільтрат етилацетат концентрують і в'язкий залишок розтирають з етилацетатом, одержуючи додаткові 3,12г продукту (Мобчисл. 1007; Мзнайдено 1008).

Синтез Агу (РМС) -МаІ-Авр (ОАліл) -ОВ2І

До розчину ЕМОС-Агоа (РМС) -МаІ-Агзр (Оаліл) -ОБ7І (16г, 15,9ммоль) у дихлорметані (267мл) додають піперидин (23г, 27ммоль, 26,7мл) при температурі навколишнього середовища. Реакційну масу розмішують протягом 2,5 годин і потім промивають водою (2хбОмл) і сольовим розчином (2хб0мл), сушать (сульфатом магнію), відфільтровують і концентрують, одержуючи напівтверду речовину. Напівтверду речовину розчиняють у 400мл етилацетату, розчин залишають у спокої на три дні і потім фільтрують. Фільтрат промивають водою (2х60мл), сушать (сульфатом магнію), фільтрують і концентрують, одержуючи 23,5г продукту, забрудненого адуктом з піперидином і бензофульвеном (МС аналіз). Тверду речовину розчиняють у 400мл етилацетату, фільтрують, промивають водою (2хб0мл), сушать (сульфатом магнію) і концентрують, одержуючи тверду речовину, яку сушать протягом ночі у вакуумі, одержуючи 12,55г Ага (РМС) -МаІ-Агр (ОАЇЇ) -

ОВ білу тверду речовину. (Мобчисл. 784; М--1 знайдено 785).

Синтез ЕМОС-С1и (ОїВи) -Ага (РМ) -МаІ-Авр (ОАліл) -ОВ2І

До розчину ЕМОС-Сіи (Ви) (6,737, 15,8ммоль) і гексафторацетату бензотриазолілокси- трисІпіролідино|фосфонію (РУВОР, 8,18г, 15, ммоль) у 105мл ацетонітрилу при температурі 2"С додають М- метилморфолін (1,58г, 15,8ммоль) і реакційну суміш розмішують при температурі 2-4"С протягом 30 хвилин.

Додають розчин І) Аго (РМС) -МаІ-Авр (ОАліл) -ОВ821 (12, 4г, 15,8ммоль) у 7Омл ацетонітрилу при температурі 2"С протягом 20 хвилин. Потім додають М-метилморфолін для досягнення рН 7. Припиняють охолодження і суміш залишають нагріватися до температури навколишнього середовища, потім перемішування продовжують протягом З годин. Реакційну суміш молочного кольору фільтрують (повільно) і білий осад сушать на фільтрі протягом ночі, одержуючи 10,8г ЕМОС-с1ІШи (ОВи) -Агу (РМС) -МаІ-Авр (Аліл) -ОБ72І. Фільтрат концентрують, одержуючи смолу, що розчиняють у ЗОмл ацетонітрилу і залишають у стані спокою на 48 годин, одержуючи додатково 3,45г продукту. Загальний вихід ЕМОС-С1Іи (ОїВи) -Аг9 (РМС) -МаІ-Авр (ОАліл) -ОВ21 складає 14,3г. (Мобчисл. 1192; Мч-1 знайдено 1192, 4).

Синтез Спи (ОїВи) -Ага (РМС) -МаІ-Авр (ОАліл) -ОВ2Ї

До розчину ЕМОС-С1и (Овийї) -Агу (РМС) -МаІ-Азр (ОАЇЇ) -ОБ71І (12,3г, 10,Зммоль) у 105мл дихлорметану додають піперидин (3,5г, 41,3ммоль) при температурі навколишнього середовища. Суміш розмішують 2 години, потім розбавляють гептаном, концентрують до половини обсягу і залишають в стані спокою в морозильнику протягом ночі. Рідину декантують з масляного залишку, який потім розчиняють у дихлорметані.

Розчин промивають 0,5М водним розчином лимонної кислоти, водою і сольовим розчином, сушать (сульфатом магнію), фільтрують і концентрують. Неочищену тверду речовину двічі розтирають з гептаном і фільтрують, одержуючи 9,0г СсІЩОЇїВИи)- (І) Ага (РМС) -МаІ-Авр (ОАліл) -ОВ2! білий порошок. (Мобчисл. 970, 2;

М"знайдено 971 ).

Синтез ЕМОС-Гуз АПос) -С1и (ОїВи) -Агу (РМС) -МаІ-Авр (ОАліл) -ОВ2І

Суспензію ЕМОС-Іуз (АМос) (4,2г, 9Зммоль) і гексафторарацетату бензотриазолілокси- трисІпіролідино|фосфонію (РУВОР, 4,8г, 9,Зммоль) у 6б9мл ацетонітрилу при температурі 5"С обробляють М- метилморфоліном (0,94г, 9,3ммоль), що приводить до утворення розчину, який розмішують при температурі 5"С протягом 30 хвилин. Додають суспензію Спи (ОїВи) -Агу (РМС) -МаІ-Авр (Аліл) -ОБ7! (9г, 9,З3ммоль) у 52мл ацетонітрилу, після чого реакційна суміш стає мутно-білою. Додають М-метилморфолін, поки рН реакційної суміші не стане рівним 7, потім суміш залишають нагріватися до температури навколишнього середовища і перемішують протягом 1,33 години. Суміш фільтрують і залишок у вигляді твердої речовини промивають ацетонітрилом (2х40мл) і сушать протягом ночі у вакуумі з обдуванням азотом, одержуючи 12,8г не зовсім білої твердої речовини у вигляді кірки, яку розтирають з 200мл метил-трет-бутилового ефіру, збирають фільтруванням і сушать у вакуумі, одержуючи 9,7г ЕМОС-Г уз (АїПос) -С1Іи (ОїВи) -Аг9 (РМС) -МаІ-Авр (Оаліл) -

Об. (Мобчисл. 1404, 7: М-1знайдено 1406). р. Видалення групи АПос і алільної групи від І ув"з і Аврег;

Синтез ЕМОС-Ї уз-С1и (ОЇВи) -Ага (РМС) -МаІ-Азр-ОВ2І

У 3-х горлову колбу ємністю 1л, обладнану приводною мішалкою і що продувається азотом, завантажують при температурі навколишнього середовища 167мл дихлорметану і 1,37г (1,18ммоль, 0,2 еквівалента) Ра (РРІз)4. У розчин жовтогарячого кольору барботують азот протягом 2 хвилин, потім додають розчин 8,3г (5,9їммоль, 1,0 еквівалент) ЕМОС-І уз (АПос) -Сіш (ОїВи) -Агу (РМС) -МаІ-Азгр (Оаліл) -ОВ7І у 66,4мл диметилформаміду, після чого випливає додавання 13,3г (124ммоль, 21 еквівалент) метиланіліну. Розчин перемішують при температурі навколишнього середовища протягом 1 години. Суміш розбавляють 700мл метил-трет-бутилового ефіру, що приводить до вигляділення твердої речовини. Суспензію-перемішують протягом 1 години і фільтрують. Залишок у вигляді твердої речовини розтирають з 200мл метил-трет- бутилового ефіру, фільтрують і сушать, одержуючи 5,0г блідо-жовтої твердої речовини. З фільтрату витягають 1,1г другої порції у вигляді блідо-жовтої твердої речовини з повним виходом 6,1г ЕМОС-Ї уз-С1Іи (ОїВи) -Агд (РМС) -МаІ-Азр-ОВ21. (Мобчисл. 1280, 6: М знайдено 1281). с.Утворення лактамового містка між ув і Аврее:

Синтез ЕМОС-цикло (І уз-Авр) Гуз-С1и (ОїВи) -Аго (РМС) -МаІ-Азр-ОВ2!І

У 3-х горловій колбі ємністю Тл розчиняють 6,0г (4,69ммоль) ЕМОС-Ї уз-СІи (ОїВи) -Ага (РМС) -МаІ-Авр-

ОВ у Зббмл диметилформаміду при кімнатній температурі під азотом і додають 3,44г (6,61ммоль, 1,41 еквівалента) гексафторацетату бензотриазолілокси-трисІпіролідино| фосфонію (РУВОР), 0,89г (6,57ммоль, 1,40 еквівалента) гідроксибензотриазолгідрату і 1,73г (13,4ммоль; 2,85 еквівалента) диізопропілеетиламіну.

Жовтогарячий розчин перемішують протягом 1 години при температурі навколишнього середовища, потім розбавляють З00мл води, що приводить до утворення масляного осаду. Мутну рідину (що містить, головним чином, домішки) декантують. Масляний залишок перемішують протягом ночі з 100мл води, одержуючи тверду речовину у вигляді кірки, що збирають фільтруванням, одержуючи 4,2г блідо-жовтої твердої речовини. З фільтрату вигляділяють 1,0г другої порції у вигляді жовтої твердої речовини з загальним виходом 5,2г ЕМОС- цикло (І уз-Агр) І уз-С1и (ОїВи) -Ага (РМС) -МаІ-Азр-ОВЇ, (Мобчисл. 1262; Мзнайдено 12625). й. Видалення бензильного ефіру: Синтез ЕМОС-цикло (І уз-Агр) І уз-С1и (ОїВи) -Ага (РМС) -МаІ-Агр-ОН

Розчин 5,9г (4,7ммоль) ЕМОС-цикло (Гувз-Авр) І увг-СіІ0-Агд-МаІ-Агр-ОВ2І у 25мл диметилформаміду обробляють 5,9г активованого вугілля і фільтрують і потім обробляють 0,59г 1095 Ра/С і поміщають в апарат

Парра під тиском 344,7кПа водню. Після 1,5 годин суміш фільтрують, обробляють знову активованим вугіллям, повторно фільтрують, повторно завантажують 0,59г 1095 Ра/С і впливають воднем під тиском 344,7кПа протягом додаткових 2 годин. Суміш фільтрують, фільтрат розбавляють 50мл води й екстрагують трьома 200мл порціями метиленхлориду. Об'єднані метиленхлоридні екстракти концентрують, одержуючи 1,2г

ЕМОС-цикло (І уз-Авр) І уз-С1Іи (ОЇВи) -Ага (РМС) -МаІ-Азр-ОН олію. (Моебчисл. 1171; МУ-1 знайдено 1172,3). 3. Очищення 40Омг зразка Етос-цикло (Гуз-А5р) Іув-Сіи (ОїВи) -Агу (РМС) -МаІ-Агр-ОН розчиняють у 10мл трифторетанолу і ізопропанолу, у відношенні 1:11. Зразок впирскують двома 5мл порціями в препаративну колонку ВЕРХ (Місгозого ММ С18, З00Апо, ви, 41,4х250мм), урівноважену 5595 В (А - 0,106.95 водний розчин трифтороцтової кислоти; В - 0,195 розчин трифтороцтової кислоти в ацетонітрилі і ізопропіловому спирті в співвідношенні 75:25 за обсягом). Сполуку, що очищається, елують зі швидкістокю 70мл у хвилину при градієнті від 5595 В до 6595 В протягом 30 хвилин, від 6595 В до 9595 В протягом 1 хвилини, з наступним ізократним промиванням колонки додаванням 9595 В протягом 10 хвилин. Потік контролюють при використанні

Уф-спектрометра при довжині хвилі 21Онм. Фракції з 93/5А9о чистотою або вищою поєднують і концентрують на роторному випарнику. Ліофілізація залишку дає 200мг ЕМОС-цикло (І уз-Авгр) І увг-СІи-Агд-МаІ-Азр-ОН (Мобчисл. 1171; Мазнайдено 1172, б).

Стадія З

Етос-Гуз-Ош-Аго- Уаі-А5р-Тгр(Вос)-Ї еи- Агр(Рте)-

Гук(Вос)- І еи-Цец- Обі Ти) АЗМОВи)-УаїМИ. сполімер

ЕМОС-Птр(ВОС), Аго?? (РМС), Гувг2б(ВОС), Гецг", (тот) І1-НРТН (23-31) -полімер хлортритил (г, 0О,185ммоль) піддають набряканню в 10мл диметилформаміду з перемішуванням струшуванням протягом 30 хвилин, потім розчинник зливають і обробляють 10мл 2006.95 розчину піперидину в диметилформаміді з перемішуванням струшуванням протягом 30 хвилин. Розчинник зливають і промивають полімер трьома 20мл порціями диметилформаміду. Додають розчин 240мг (0,205ммоль, 1,1 еквівалента). ЕМОС-цикло(І ув 18-

Аврег(Ї ув-СІЩОВи)-Аго(РМС)-МаІ-Азр-ОН 312мМг (О,бммоль, З еквівалента) гексафторацетату бензотриазолілокси-трисІпіролідиноїфосфонію (РУВОР) і 156бмг (1,2ммоль, 6 еквівалентів) диіїзопропілетиламіну в 1їОмл диметилформаміду і суміш перемішують протягом 16 годин. Розчинник зливають, промивають полімер трьома 20мл порціями диметилформаміду (реакція з ТМВ5 позитивна ) і повторно обробляють ЕМОС-цикло (Іувз!8-Авре2) Іув-(Іи (ОЇВи) -Аг9 (РМС)-МаІ-Азр-ОН/РУВОР/РГ2МЕЇ протягом других 16 годин, потім розчинник зливають і промивають полімер трьома 1Омл порціями диметилформаміду (реакція з ТМВ5 негативна). Аліквоту цільового пептиду відбирають, як описано в стадії 2, способу А при використанні реактиву К для одержання фрагмента пептиду з вилученими захисними групами в бічному ланцюзі. (І С-МС Мобчислено 2001; Мзнайдено 2000, 5). Залишок використовують на стадії 4.

Стадія 4

Ірод ну оррнненин

Етос-Гув(Восі-Ніз(Тге)-Ген- Ав Тте)-5екОВм)- Гуз О1Ви)-Аге(РМС)-МаЇ-Ахр-

Тер(Вос)-Іеи-Аге(РМС У ух(Вос)- і еи-,емн-Сіл(Ти)-Азр(ОгВи)-УаЇ-МН- полімер

Необхідний пептид, зв'язаний з полімером, одержують відповідно стадії 1 видаленням захисної групи

Етос у 1,38г (0,244ммоль з розрахунку на титр у Тр) полімер-зв'язаного пептиду стадії 3, наступною послідовною циклізацією за участю груп, у яких вилучені групи ЕМОС, і сполученням з 0,5ммоль кожної з

ЕМОС-5ег (ОїВи) -«ОН, ЕМОС-Авп (ТИ) -ОН, ЕМОС-Геш-ОН, ЕМОС-Нів (ТИ) -ОН і ЕМОС-Гуз (ВОС) -ОН відповідно стадії 1 при використанні 190мг (0,5ммоль гексафторфосфату О-бензотриазол-і-ил-М, М, М, М'- тетраметилуронію (НВТ) і 2ммоль М-метилморфоліну в 25мл диметилформаміду. Сполучення здійснюють при температурі навколишнього середовища протягом приблизно 1 години. Отриманий полімер-зв'язаний пептид промивають 25мл порціями диметилформаміду, тетрагідрофурану і диетилового ефіру і сушать у вакуумі (1,93г). Аліквоту цільового пептиду відбирають, як описано нижче (реагент К), для одержання фрагмента пептиду з вилученими захисними групами в бічному ланцюзі. (ІС-МО Мобчисл. 2579,4; МзнайденО 2580,7) з 52А905 чистотою.

Стадія 5

Етос-АЇа-Уа!-ЗекОїВи)-біц(О(Ва)-Пе-Сіх Тп)-ї,ец- Міе- Ніс То)-Аяк Го)- І еи-О1У-ОН

ЕМОС-АЇїв!, бег(ОІВи), Сім (Ви), СілТт), Нів'Єги), Азп'"єтлуМміеРТН- 12)

Пептид, зазначений вище, одержують сполученням 2,65г (5ммоль) Етос-ІГецш-ОН з 5г (Зммоль) з Сс1у-2- полімеру хлортритил, що має 195 поперечних зв'язків, що містять О,бмекв/г, з 3,9г (7,5ммоль) гексафторацетату бензотриазолілокси-трисІпіролідиноїфосфонію (РуВос), 1,94г (15ммоль) диізопропілетиламіну в Х0мл диметилформаміду і тетрагідрофурану (06/06) при перемішуванні струшуванням протягом 0,5 годин. Розчинник зливають і потім промивають п'ятьма порціями диметилформаміду і тетрагідрофурану й однією порцією метанолу (нінгідрину реакція негативна). Полімер промивають однократно диметилформамідом, потім обробляють двічі бОмл 2095 розчину піперидину в диметилформаміді протягом 15 хвилин щораз, трьома бомл порціями диметилформаміду й однієї ббмл порцією метанолу між кожною обробкою. Після другої такої обробки нінгідринова реакція на вільні МНо-групи дає знрачно позитивний результат. Цей цикл повторюють, використовуючи однократну 0,5 годинну обробку піперидином у диметилформаміді в кожнім наступному випадку і 2,5 молярні еквіваленти кожного з ЕМОС-Авп (Ті), ЕМОС-

Ні (ТО), ЕМОС-Міє, ЕМОС-Геи, ЕМОС-а1п (т), ЕМОС-Пе, ЕМОС, Спи (ОїВи), ЕМОС-5ег (ОЇВи), ЕМОС-Маї і

ЕМОС-АЇа, разом з 2,5 молярними еквівалентами кожного з РУВОР і диізопропропілетиламіну. Полімер- зв'язаний пептид відщеплюють при струшуванні з 10О0мл оцтової кислоти, трифторетилену і дихлорметану в співвідношенні 1:1:3 протягом 1 години. Рідину видаляють з полімеру і полімер промивають 200 мл дихлорметану; потім змивши з'єднують з основною порцією рідини, що випарюють послідовно з гексану, етилацетату і ізопропілового спирту. Залишок розтирають з диетиловим ефіром, потім сушать (протягом ночі у вакуумі), одержуючи 2,24г цільовогоого. Пептиду (ВЕРХ: з 83АЗбо чистотою). Полімер повторно обробляють в умовах відщеплення, і рідину обробляють, як після першого відщеплення, остаточно одержуючи 2,75г другої порції цільового пептиду з загальним виходом 4,95г (2,1ммоль, 7095 вихід від полімеру). ЇС-МО (Мобчисл. 15148; Мзнайдено 1514,7). Отриманий продукт використовують на стадії 6.

Стадія 6

Етос-Аїа-Уаі-5ег ОгВи)-СІЩОєВи)-Не-б іп Р)-Тен-мПе-Ніє(Тп)-Ава(Тго)-Геп-С1у- ук(Вос)-Нів(Тп)-їеи-Аза(Ті пубегіОгВиуї уг- СО) Аге(РМС) Уаі-Авр-

Тр(Восуїеп-Аге(РМС)- Туз (Во) ев-Ї ев-СТСТ, к)-Азр(ОВи) маєм ополім ер

Пептид, отриманий на стадії 5, (900мг, 0,114ммоль) піддають набряканню в 15мл диметилформаміду да протягом 40 хвилин з перемішуванням струшуванням, потім розчинник зливають і полімер обробляють 15мМл 2006.96 розчину піперидину в диметилформаміді протягом 45 хвилин. Розчинник зливають, полімер промивають трьома ЗОмл порціями диметилформаміду (реакція полімеру з ТМВ5 позитивна). До полімеру додають 15мл диметилформаміду, 775мг (0,3З3ммоль, 2,7 моляних еквівалентів з розрахунку на титр у позиції 23) ЕМОС-Аїа", бегзОїВи), СіІШЧОВи), Сіпб (Ти), Нів(Ти), Авп'(тТИ)МевзиРТН(1-12) (зі стадії 4), 151мг (0,29ммоль, 0,21 молярного еквівалента) гексафторацетат бензотриазолілокси-третІпіролідиноїфосфонію (РуВос), З9мг (0,25ммоль) гідроксибензотриазолгідрату і 75мг (0,58ммоль) диізопропілетиламіну і суміш перемішують при струшуванні протягом З днів. Розчинник зливають, промивають полімер трьома ЗОмл порціями диметилформаміду (при реакції з ТМВ5 утвориться суміш слабо пофарбованих і безбарвних гранул), потім обробляють 15мл 200695 розчину піперидину в диметилформаміді, розчинник зливають і промивають полімер трьома 15мл порціями кожного з диметилформаміду, тетрагідрофурану і диетилового ефіру, потім сушать, видаляють захисні групи й відщеплюють від полімеру, відповідно до стадії 7.

Стадія 7

Аа-Уаї-бег-ОТм-Пе-біп-ї.ен-Міе- Ніє-Авп- І еп-О1у- ув Нев-Геи-Авп-

Ди

Бег-Іуз-бін-Ате-Уа!-Азр-Ттр-ї еп-Агр-ГСув-Т еи-ї еи-Сіп-Азр-УаМЕ о

Полімер-зв'язаний пептид зі стадії б обробляють для видалення групи ЕМОС на Аа! відповідно стадії 1 способу А, потім одночасно відщеплюють від полімеру і видаляють захисну групу в суміші трифтороцтової кислоти, фенолу, тіонізолу, етандитіолу і води в співвідношенні 33/2/2/1/2 (реактив К при повному розведенні в кількості 10мл/полімер-зв'язаного пептиду) протягом З годин. Розчинник зливають і продукт висаджують з фільтрату додаванням реакційної суміші до охолодженого трет-бутилметилового ефіру (5Омл/м полімер- зв'язаного пептиду). Суміш залишають у стані спокою на 15 хвилин, потім центрифугують (2000об/хв, 5 хвилин). Рідину декантують і тверду речовину, що залишилася, промивають диетиловим ефіром, надосадову рідину відокремлюють центрифугуванням і видаляють. Отриману тверду речовину перемішують у 0,195 водному розчині трифтороцтової кислоти (бмл/м полімер-зв'язаного пептиду) протягом 1 години для забезпечення повного видалення груп, чуттєвих до кислоти.

Розчин ліофілізують, одержуючи 414мг цільового пептиду (з 37АЗ9о чистотою, 26,395 ваг. чистотою з 26,39 виходом за Ттгр-) як білої твердої речовини. (І С-МС: Мобчисл. 3632,0: М-н1 знайдено 3633,4).

Стадія 8 Очищення

Один грам речовини, отримані, вище, розчиняють у 1Омл води і розчин впирскують у 5,08смх25смМ препаративну колонку ВЕРХ (10 мікрон, 120А або З00А), попередньо урівноважену 0,196 водним розчином трифтороцтової кислоти (А), 0,195 розчином трифтороцтової кислоти в ацетонітрилі (В) і ізопропіловим спиртом (С) у співвідношенні 75/5/20. Колонку елують зі щвидкістокю 115мл у хвилину з градієнтом від 75А/58/20С до 60А/208/20С протягом 30 хвилин, потім промивають сильним струменем сполуки 30905 А, 6090

В, 2095 С і повторно врівноважують 75А/58/20С. Потік, що випливає, контролюють при використанні УФ- детектування при 28Онм. Фракції, що містять цільовий пептид із приблизно 7595 чистотою, з'єднують і концентрують на роторному випарнику (7357"С). Концентрований водний розчин впирскують у ту ж саму препаративну колонку і вдруге проганяють з тим же самим градієнтом за 30 хвилин. Фракції, що містять цільовий пептид з 9095 або великим відсотком чистоти, з'єднують і концентрують на роторному випарнику при (735"С). Концентрований розчин потім впирскують у препаративну колонку, що попередньо врівноважують 01 М водним розчином оцтокислого амонію (доведеного оцтовою кислотою до рН б) (0), ацетонітрилом (Е), ізопропіловим спиртом (С) у співвідношенні 75/15/10. Колонку елують зі швидкістокю 115мл у хвилину з градієнтом від 750/15Е/10С до 600Б/З0ОЕ/10С протягом 30 хвилин, потім промивають сильним струменем сполуки ЗО0/6ОЕ/20С. Фракції, що містять цільовий пептид 95А95 або великим відсотком чистоти, сполучають і ліофілізують, одержуючи очищений продукт у вигляді твердої ацетатної солі (1г неочищеної речовини дає приблизно 100-200мг із приблизно 95А95 чистотою). На кожній стадії фракції аналізують на вміст і чистоту, використовуючи аналітичну ВЕРХ із С18 колонкою (4,6ммх25см, 5 мікрон, 120А або ЗО00А) із градієнтом 25- 40956 В (А - 0,195 розчин трифтороцтової кислоти у воді; В - 0,195 розчин трифтороцтової кислоти в ацетонітрилі) протягом 30 хвилин при швидкості 1мл у хвилину і Уф-контролю при 220нм.

Список послідовностей -110» 5ієдезкі, Адат М/. Мепсеї, датез у. «120» Спосіб одержання полімер-зв'язаних циклічних Пептидів

«130» АЗ11ЗА-МО -1505» 60/081, 897 -1515» 1998-04-15 «160546 «170» Патент у версії 2.1 -21051 «2115 31 -212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «221» Пептид «рге» (18)..(22) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 18 і Авр у положенні 22 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» МОЮ ВЕ5 «ре» (8) «223» Ме «220» «221» Пептид «ре» (31) «223» "Ця С-кінцева амінокислота являє собою амід, тобто, СОМН»г"

Ма тії бетх сім І1е бів беш Хаа Нів Авп еп пу ув Нів тех деп 1 І 10 15 бек Пуз січ Агу Уаї Авр Ттр Пец Аку Буз Тви Пец С1п Авр уаї зо «-21052 «2115 31 -212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «2215 МОЮ ВЕ5 «РРО» (8) «223» Ме «220» «221» Пептид «д22» (18). (22) «223» "Синтетичний пептид, бічні ланцюги Гуз у положенні 18 і Авр у положенні 22 зв'язані амідним зв'язком" «1220» «221» Пептид «ре» (31) «223» "Ця С-кінцева амінокислота являє собою амід, тобто, СОМН»г" «40052

Аіа Аза бек бій 11 Сіп Пе Хаа Нів дво Пец с1у цув Нів Пец Авп 1 5 10 15

Зех цув сій Аго Уа! Авр Ттр Пец Аху Був ем рей біп Авр уаї 20 25 30 «2105 З «2115 31 -212» РАТ «213 :» Штучна послідовність «220» «2212иМОЮО ВЕБ5 «ре» (8) «223» Ме «220» «221» Пептид «рге» (18)..(22) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 18 і Авр у положенні 22 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «ре» (31) «223» "Ця С-кінцева амінокислота являє собою амід, тобто, СОМН»г" «4005» З

Аїа Маї Аза сій ї11е 0120 Цей Хаа Ні Авл о печ біу був Нів Цей Авп 1 й Б 160 15 бек цув Сі Акд уаї Ар Ткр Печ Акд Був Пец еп біп Авр о Уаї - 20 25 30 «21054 «2115 31 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «2215МОЮ ВЕ5 «РРО» (8) «223» Ме «220» «221» Пептид «ре» (18)..(22) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 18 и Авр у положенні 22 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «ре» (31) «223» "Ця С-кінцева амінокислота являє собою амід, тобто, СОМН»г" «400» 4

Аїа чаї бек А1ї1а І1е біп Пе Хаа Нів Аяп Пец Сіу бує Нів Пец Авп 1 Б 10 15

Бек уз біп Агу Ма! Авр Ткр пйем Аку Буз Пеп Бей біп Авр Маї 20 25 зо «21055 «2115 31 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «2215МОЮО ВЕ5 «ре» (8) «223» Ме «220» «221» Пептид «рге» (18)..(22) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 18 і Авр у положенні 22 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «ре» (31) «223» "Ця С-кінцева амінокислота являє собою амід, тобто, СОМН»г" «400» 5 ма Уа! Зек сій Аїа сіл Пец Хаа Нів Авп Геп б1у цув Нія Пец деп бек Був біц Ага Уаї Авр Ткр Пец Агу Був цей Гец біп Авр Уаї «21056 «2115 31 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «2215МОЮ ВЕ5 «РРО» (8) «223» Ме «220» «221» Пептид «ре» (18)..(22) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 18 і Авр у положенні 22 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «ре» (31) «223» "Ця С-кінцева амінокислота являє собою амід тобто, СОМН»" «400» 6

А1а Маї Бек Сій І1е А1а цем Хаза Ні Авп ей С1у Був Нів цей Авп 1 5 10 15

Зет цуз бій Аху Уаї Авр Тхр Пеп Ака Тув ез Гей біп Авр Уаї 20 25 зо

«2115 31 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «2212иМОЮО ВЕБ5 «РРО» (8) «223» Ме «220» «221» Пептид «д22»(18). (22) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 18 і Ар у положенні 22 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «ре» (31) «223» "Ця С-кінцева амінокислота являє собою амід, тобто, СОМНг" мама Бек біч І11е біп Аза Хаа Нів Авп Те с1у Був нів Без Авп 1 5 10 15

Зех Був сім Акад Маї Авр Тер Теч Акад Був ївц пе біп Авр Чаї «2105 8 «2115 31 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «221» Пептид «222» (18). (22) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 18 і Авр у положенні 22 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «ре» (31) «223» "Ця С-кінцева амінокислота являє собою амід, тобто, СОМН»г"

Ма чаї Вех сій І1е б1іп ей діа Нія Авпопеш С1у бує Нів Пец Авп 1 5 10 15 бег цув 011 Ага Уаї Авр Тур рей Аку Був ви Кей біп Ар Уа) 20 25 зо «21059 «2115 31 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «2212иМОЮО ВЕБ5 «РРО» (8) «223» Ме «220» «221» Пептид «ра2»(18).(22) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 18 і Авр у положенні 22 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «де» (31) «223» "Ця С-кінцева амінокислота являє собою амід, тобто, СОМН»г"

Матв, бек бі І1е біп їей Хаа Нів Аїа Пеш 01у Був Нів Печ АБп і 5 10 15

Бек муя біш Агу уаї АвБр Тгр ее Аку Пув рез Пез біп Авр чаї 20 25 зо -210510 «2115 31 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «2215 МОЮ ВЕ5 «РРО» (8) «223» Ме «220» «221» Пептид «рге» (18)..(22)

«223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 18 і Авр у положенні 22 зв'язані амідним зв'язком" «221» Пептид «ре» (31) «223» "Ця С-кінцева амінокислота являє собою амід, тобто, СОМН»г" дія ма вет б1ч І1е бід це Хав Нів Аза Аза біу Гуз Нія Геч АБп 1 5 10 15

Яег муз біз Аха Уа) Авр Тур ей Акд Був Пем Течп біп Авр Уаї -210511 «2115 31 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «2215 МОЮ ВЕ5 «РРО» (8) «223» Ме «220» «221» Пептид «да» (18).(22) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 18 і Авр у положенні 22 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «222» 31 «223» "Ця С-кінцева амінокислота являє собою амід, тобто, СОМН»" «4002 11

Віа Уаї бек б1ч І1е 01п Гец Хаа нів Авп пе Аза цув Нів Пец Авп 1 5 10 15 бек Був сій Акуд Маї Авр ТтІр Пец Ак ув Пей рей б1п Авр Маї 20 25 . 30 -210512 «2115 31 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «2215 МОЮ ВЕ5 «РРО» (8) «223» Ме «220» «221» Пептид «д22»(18). (22) «223» "Синтетичний пептид: бічні цілі Гуз у положенні 18 і Азр у положенні 22 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «222» (31) «Р23» "Ця С-кінцева амінокислота являє собою амід, тобто, СОМН»" «400» 12

Аїа Ууаі Бек біч І1е бій Тем Хаа Нів Авп ви б1у АТа нів Бем Авпос 1 5 10 15

Бех Був Сі Аг уаї Авр тТтр ем Агу був цец рем біп Авр Уа1 20 25 за -2105 13 «2115 31 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «221»иМОЮО ВЕБ5 «РРО» (8) «223» Ме «220» «221» Пептид «ра2»(18). (22) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 18 і Авр у положенні 22 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «де» (31) «223» "Ця С-кінцева амінокислота являє собою амід, тобто, СОМН»г"

«100» 13

А1а Уаї бек бій І1е Сіп Пец Хаа Нів Авп цец П01у Пцув Аїа без Ави 1 5 10 . 15

Яек Пув 61 Атгу УМа1ї Авр Ттр Пец Акд Цув Пез пеш б1іп Авр о Маї 70 25 зо «210» 14 «2115 31 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «2215 МОЮ ВЕ5 «ре» (8) «223» Ме «220» -221» Пептид «ра2»(18). (22) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 18 і Авр у положенні 22 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «Д22»(31) «223» "Ця С-кінцева амінокислота являє собою амід, тобто, СОМН»г" дів ув сег бій ї1е бій Пец Хаа Нів Азп Пец С1у Був Нів А1а Авп 1 5 Й 10 15

Єек Цув бі Аку Ма! Аяр Тур Геч Аху Був Пес Пец Сійп Авр Уаї зо «210515 «2115 31 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «2212иМОЮО ВЕБ5 «ре» (8) «223» Ме «220» «221» Пептид «рге» (18)..(22) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 18 і Авр у положенні 22 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «де» (31) «РОЗ» "Ця С-кінцева амінокислота являє собою амід, тобто, СОМНг"

Ма чаї вет сі 112 Сіп Пец Хаа Нів Авпобец сіу був Нів ред Аа 1 5 10 15

Зек цув бій Агуд уаї Авр Тер о Пез Ако був Тем їв С1п Авр о уаї 20 25 зо «210516 «2115 31 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «2212иМОЮО ВЕБ5 «ре» (8) «223» Ме «220» «221» Пептид «р22»(13)..(17) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 13 і Авр у положенні 17 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «ра2»(18). (22) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 18 і Азр у положенні 22 зв'язані айидним зв'язком" «220» «221» Пептид «ре» (31) «223» "Ця С-кінцева амінокислота являє собою амід, тобто, СОМН»г"

«400» 16

А1їа уаї Бек сій І1е б1п рец Хаа нів Авп цей с1у Був Нів реч Ап 1 5 10 15

Авр Був біц Акд Уа! Авр Ткр цем Акд Був Печ тїеч б1іп Авр уві й «-2105 17 «2115 31 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «2215 МОЮ ВЕ5 «ре» (8) «223» Ме «220» -221» Пептид «Д22(18).(22) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 18 і Авр у положенні 22 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «д22» (26). (30) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 26 і Ар у положенні 30 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «ре» (31) «223» "Ця С-кінцева амінокислота являє собою амід, тобто, СОМН»г" дів чаї ве бі Т1е біп Гей Хаа Нів Авп о бец б1у Пув Нів ем Ав 1 5 10 15

Бех Пув б1іц Ат Ма1ї Авр Ткр Меч Агу Був рей Гей біп Авр Уа) 20 25 за -210518 «211» 34 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «2215 МОЮ ВЕ5 «РРО» (8) «223» Ме «220» -221» Пептид «д22»(18). (22) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 18 і Ар у положенні 22 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «ре» (34) «223» "Ця С-кінцева амінокислота являє собою амід, тобто, СОМН»г" «400з 18

Аза Маї Бех б1іх І1є б1й Пес Хаа Ні Авп Пец 01у пуз Нів це Азп і 5 10 15

Век цув бій Ахд уаї Азр Тір Печ Агу Пуя Пе Теч біп Ар уаї нів 20 25 30

Авоп Ре -2105 19 «211» 34 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «2215 МОЮ ВЕ5 «ре» (8) «223» Ме «220» «221» Пептид «222»(13)..(17) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 13 і Авр у положенні 17 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид

«рге» (18)..(22) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 18 і Авр у положенні 22 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «ре» (34) «223» "Ця С-кінцева амінокислота являє собою амід, тобто, СОМН»г" дія чаї ве біш 116 сіп рец Ха Нів Авп ем Сіу уз Нія цец Авп 1 Й 5 я 10 15

Авр цув 21 Агу Маї Авр Ттр ви Агу цув цей пе б1іп Авр Уаї Ніяв зо

Авп Рпе -210» 20 «211» 34 -212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «221» Пептид «ра2»(18). (22) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 19 і Авр у положенні 22 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «дае» (34) «223» "Ця С-кінцева амінокислота являє собою амід, тобто, СОМНг"

Ма уві ех бій Нів б1іп Пе Ієц Нів Авр цув б1у уз бег І1е сіп 1 5 10 15

Авр був Ако Акд Аку Авр Рпе Тец Кія Нів бец І1е А1а біц І1е Нів 20 25 зо

Тиг А1а -2105» 21 «2115» 34 -212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» -221» Пептид «ра2»(18). (22) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 18 і Авр у положенні 22 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «дае» (34) «223» "Ця С-кінцева амінокислота являє собою амід, тобто, СОМН»г"

Мія уві вег бій Ні сій цей цей нів Авр був б1у Був Зех Ше біп 1 5 10 15

Авр був Агу Аку Ату Авр Пец пед біц цув Пец пей сій Був їец нів 20 25 30

ТНиг Аа -2105 22 «2115 28 -212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «221» Пептид «ре2» (12)..116) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 12 і Авр у положенні 16 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «ре» (28) «223» "Ця С-кінцева амінокислота являє собою амід, тобто, СОМН»г" «220» «2215» МОО ВЕ5 «Дд2» (2) «223» Ме

«4100» 22 рей Хаа Нів Авп Гем С1у Був Нів Пец Авп бек Пув 0) Аго Уа1ї Авр 1 Й Б 10 15 тр вч Аку Ппув Пец Бей біп Авр За1і Нів Авп Ре -2105» 23 «2115» 28 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» -221» Пептид «Да» (12)..(16) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 12 і Авр у положенні 16 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «ре» (28) «223» "Ця С-кінцева амінокислота являє собою амід, тобто, СОМН»г"

Теч їв ів Азр Пцув с1у цув Вех І1є б1п Авр Був Аху Ака Ак Авр 1 5 10 15

Ре ей Нів Нів ей І12е А1їа 014 І1е Ні Тк діа 20 25 «210» 24 «2115 28 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «2215 МОЮ ВЕ5 «др» (2) «223» Ме «220» -221» Пептид «рр2»(7).. (11) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 7 і Ар у положенні 11 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «Да» (12)..(16) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 12 і Авр у положенні 16 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «22» (28) «223» "Ця С-кінцева амінокислота являє собою амід, тобто, СОМН»г" тво хва нів Авп Пец біу пув Нів цей Авп Авробув 01) Аку Уаї Авр. 1 5 10 15

Ткр Печ Ахуд Бу ївч Печ біп АвроУа1 Нів Аво Ре 20 25 -210» 25 «2115 28 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «2215 МОЮ ВЕ5 «др» (2) «223» Ме «220» «221» Пептид «ре2» (12)..116) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 12 і Авр у положенні 16 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «рога» (20)..(24) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 20 і Авр у положенні 24 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «ре» (28)

«223» "Ця С-кінцева амінокислота являє собою амід, тобто, СОМН»г"

Тел Ха Нів Авп о бей біу Пув Нів Бей Авп бек Пув Січ Агу Маї Азр 1 5 10 15

Ткр ей Ага Був пей Пен Сіп Авр Уа) Нів Аво Ре -210» 26 «211» 34 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «400» 26

Яех Маї Бек біц Т1е Сіп Бе Меб Нія Авп Пец С1іу Був Нів Пем Авп 1 5 10 15 . беїт Мек сій Акд Ууаї сСіш Тер ей Агуд був пуз печ біп Авр уаї Нів 20 25 зо

Авп Ре . «-2105 27 «211» 34 «212» РАТ «213» Штучна послідовність

Мо чиї нех сіє Кі 3: Газ фо Нія дероцув 61уУ пуб Жебх їїв 515

З 5 13 1х

Бар ви Ах Ах Ага БКе Ре їбкі НАв Ніч їсю їїю дів бів Її Нів то 25 за

Жпг дій -2105» 28 «21159 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» -221» Пептид «де» (1) «223» ЕМОС-Тір (ВОС) «220» -221» Пептид «рр» (3) «223» продукт -Аго (РМС) «220» -221» Пептид «де» (4) «223» продукт -іІ уз (ВОС) «220» -221» Пептид «ре» (7) «223» продукт -СО1п (ТИ) «220» -221» Пептид «ре» (8) «223» продукт -Агр (ОЇВИ) «220» -221» Пептид «РРО» (9) «223» Синтетичний пептид іншої - "ця С-кінцева амінокислота зв'язана за допомогою амідного зв'язку з полімером ВіпкК Атіде МВНА" «4100» 28

Тгр Пед Аку Пцуз Пец Пец Сіп Авр Уаї 1 5 -210» 29 «2115 14 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «221» Пептид «де» (1) «223» ЕМОС-Ї ув «220» «221» Пептид «ре» (1)..(5) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 1 і Ар у положенні 5 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид

«ре» (2) «223» сш (СІВИи) «220» «221» Пептид «рр» (3) «223» Ага (РМО) «220» «221» Пептид «ре» (1)..(5) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 1 і Ар у положенні 5 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «рр» (6) «Р2З3» Пр (ВОС) «220» -221» Пептид «РРО» (8) «223» Ага (РМО) «220» -221» Пептид «РРО» (9) «223» І уз (ВОС) «220» -221» Пептид «рре»(12) «223» Сп (ТП) «220» -221» Пептид «рр» (13) «223» Авр (ОЇВИ) «220» -221» Пептид «ре» (14) «223» "Ця С-кінцева амінокислота зв'язана за допомогою амідного зв'язку з полімером Віпк Атіде МВНА"

Гув січ Ак чаї Авр Тер Печ дуа пуб ви пем біп Авроуаї 1 5 10 «2105 30 «211519 «2125» РАТ «213» Штучна послідовність «220» -221» Пептид «ре» (1) «223» ЕМОС-Ї ув (ВОС) «220» -Р21» : Пептид «ре» (2) «223» Нів (ТИ) «220» -221» Пептид «ре» (4) «223» Авп (ТІ) «220» -221» Пептид «рр» (5) «223» Зег (ОЇВиИ) «220» -221» Пептид «ре» (6)..(10) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гує у положенні бі Абєр у положенні 10 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «ре» (7) «223» сш (СІВИи) «220» «221» Пептид «РРО» (8) «223» Ага (РМО)

«221» Пептид «Д22» (6)..(10) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні б і Ар у положенні 10 зв'язані амідним зв'язком" «220» -221» Пептид «рае» (11) «223» Пр (ВОС) «220» -221» Пептид «ре» (13) «223» Ага (РМО) «220» -221» Пептид «ре» (14) «223» І уз (ВОС) «220» -221» Пептид «де» (17) «223» Ссіп (ТИ) «220» -221» Пептид «рр» (18) «223» Авр (ОЇВИ) «220» -221» Пептид «Д22» (6).(10) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 6 і Ар у положенні 10 зв'язані амідним зв'язком" «400» 10

Пув Ніє цем Авзп Бек Тув б1ц Агу Уаї Авр Тур Пец Акад бує Печ Гей 1 5 120 15 біп Авр Уаї -2105 31 -211512 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» -221» Пептид «ре» (1) «223» ЕОС-АЇІа «220» -221» Пептид «рег» (3) «223» Бег (ОЇВИ) «220» -221» Пептид «ре» (4) «223» Сім (ОЇВи) «220» -221» Пептид «ре» (б) «223» сп (Ті) «220» -221» Пептид «РРО» (9) «220» -221» Пептид «рр» (10) «223» Авп (ТІЇ) «220» «2215» МОО ВЕ5 «РРО» (8) «223» Ме «400» 31 .

А1їта Уа1 Бех Сіц І1е біп Пес Хаа Нів Авп цеч б1У 1 5 10 -2105 32 «2115 31

«2125» РАТ

«213»:Штучна послідовність

«220»

«221» Пептид

«222» (1) «2235» ЕМОС-Аїа

«220»

«221» Пептид

«рр» (3)

«223» Зег (ОЇВиИ)

«220»

«221» Пептид

«ре» (4)

«223» Сім (ОЇВи)

«220»

«221» Пептид

«222» (6) «223» Віп (ТИ)

«220»

«221» Пептид

«рере» (9)

«223» Нів (ТИ)

«220»

«221» Пептид

«рр» (10)

«РеЗ» Авп (ТІЇ)

«220»

«221» Пептид

«ре» (13)

«Р23» І уз (ВОС)

«220»

«221» Пептид

«222» (14)

«223» Нів (Ти)

«220»

-221» Пептид

«222»(16)

«223» Авп (ТІЇ)

«220»

-221» Пептид

«222» (17)

«223» Зег (ОЇВИ)

«220»

-221» Пептид

«де» (18)...(22)

«223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 18 і Ар у положенні 22 зв'язані амідним зв'язком"

«220»

«221» Пептид

«рр» (19)

«223» Сі (ОЇВи)

«220»

«221» Пептид

«де» (20)

«223» Ага (РМО)

«220»

«221» Пептид

«ре» (22)..(30)

«223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 22 і Авр у положенні 30 зв'язані амідним зв'язком"

«220»

«221» Пептид

«де» (23)

«Р23» Пр (ВО)

«220»

«221» Пептид

«де» (25)

«223» Ага (РМ)

«220»

-221» Пептид

«ре» (26)

«223» І уз (ВОС)

-221» Пептид «де» (29) «223» сп (Ті) «220» -221» Пептид «рр» (18) «223» Авр (ОЇВИ) «220» -221» Пептид «дае» (30) «223» "Ця С-кінцева амінокислота зв'язана за допомогою амідного зв'язку з полімером НВіпк Атіде МВНА" «220» «2215 МОЮ ВЕ5 «РРО» (8) «223» Х - норлейцин, Міє «4005» 32

Аза Маї Бек бій І1е біп Пец Хаа Ніз Авп цей С1у уз Нів цеч Ав 1 Б 10 15

Бег цув Сію Агу Уаї Авр Тер Пец Агу пув цей пеп біп Авр уаї зо «-210» 33 «21152 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» -221» Пептид «ре» (2) «Р23» Авр (Ом) «220» -221» Пептид «де» (1) «223» ВОС-Маї «220» -221» Пептид «ре» (2) «223» "Ця С-кінцева амінокислота знаходиться у формі ефіру з бензиловим спиртом" «400» 33

Уа! Авр 1 -2105» 34 «21152 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «221» Пептид «де» (1) «Р23» "М-кінцева амінокислота знаходиться у формі солі соляної кислоти" «220» «221» Пептид «ре» (2) «223» Авр (ОАПУЇ) «220» -221» Пептид «др» (2) «223» "Ця С-кінцева амінокислота знаходиться у формі ефіру з бензиловим спиртом" «400» 34 маї Азр 1 «-2105» 35 «2115 З «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» -221» Пептид «ре» (1) «223» ЕМОС-Ага (РМС) «220» -221» Пептид «рр» (3)

«223» Авр (ОАУІ) -221» Пептид «рег» (3) «223» "Ця С-кінцева амінокислота знаходиться у формі ефіру з бензиловим спиртом" «400» 35

Аго Ма! Азр 4 «2105 36 «21153 «2125 РВТ «213» Невідома «220» «221» Пептид «222» (1) «223» Ага (РМО) «220» «221» Пептид «рег» (3) «223» Авр (ОАІМІ) «220» -221» Пептид «рр» (3) «223» "Ця С-кінцева амінокислота знаходиться у формі ефіру з бензиловим спиртом" «400» 36

Ага Ма! Авр 4 «2105 37 «21154 «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «220» -221» Пептид «222» (1) «223» ЕМОС-С1и (ОЇВИи) «220» -221» Пептид «Дд2» (2) «223» Ага (РМО) «220» «221» Пептид «222» (4) «223» Авр (ОАМІ) «220» -221» Пептид «222» (4) «223» "Ця С-кінцева амінокислота знаходиться у формі ефіру з бензиловим спиртом" «400» 37 ами Аго Маї Азр 1 «2105» 38 «21154 «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «220» «221» Пептид «222» (1) «223» Сім (ОЇВи) «220» «221» Пептид «Дд2» (2) «223» Ага (РМО) «220» «221» Пептид «222» (4) «223» Авр (ОАУІ) «220» «221» Пептид «222» (4) «223» "Ця С-кінцева амінокислота знаходиться у формі ефіру з бензиловим спиртом"

«4002 38, біз Ак Уаї Авр «2105 39 «21155 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «221» Пептид «ре» (1) «223» ЕМОС-Ї ув (АПос) «220» «221» Пептид «ре» (2) «223» Сім (ОЇВи) «220» -221» Пептид «рр» (3) «223» Ага (РМО) «220» -221» Пептид «рр» (5) «223» Авр (ОАУІ) «220» -221» Пептид «рр» (5) «223» "Ця С-кінцева амінокислота знаходиться у формі ефіру з бензиловим спиртом" «400» 39

Був січ Ак Уа! Авр 1 5 «210» 40 «21155 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «221» Пептид «де» (1) «223» ЕМОС-Ї ув «220» «221» Пептид «ре» (2) «223» Сім (ОЇВи) «220» «221» Пептид «рег» (3) «223» Ага (РМО) «220» -221» Пептид «рр» (5) «223» "Ця С-кінцева амінокислота знаходиться у формі ефіру з бензиловим спиртом" був па ху Чаї дер 1 Б «210» 41 «21155 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «221» Пептид «рре» (1) «223» ЕМОС-Ї ув «220» «221» Пептид «Д22» (1)..(5) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 1 і Ар у положенні 5 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «ре» (2) «223» Сім (ОЇВи)

«221» Пептид «рег» (3) «223» Ага (РМО) «220» «221» Пептид «ре» (1) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 1 і Ар у положенні 5 зв'язані амідним зв'язком" «220» -221» Пептид «реа» (5) «223» "Ця С-кінцева амінокислота знаходиться у формі ефіру з бензиловим спиртом" «4005 51

Був п01й Аку уаї Ар 1 5 «210» 42 «21155 «2125» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «221» Пептид «ре» (1) «223» ЕМОС-Ї ув «220» «221» Пептид «ре» (1)..(5) «223» "Синтетичний пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 1 і Ар у положенні 5 зв'язані амідним зв'язком" «220» «221» Пептид «ре» (2) «223» Сім (ОЇВи) «220» «221» Пептид «рр» (3) «223» Ага (РМО) «220» «221» Пептид «рр» (5) «223» "Синтетичний Пептид: бічні ланцюги Гуз у положенні 1 і Азр у положенні 5 зв'язані амідним зв'язком" «ШО» 43

Був біп Аку Ууаї Авр 1 , 5 «210» 43 «21155 «2125» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «221» ПЕПТИД «ре» (1) «223» ЕМОС-Ї ув (АПос) «220» -221» Пептид «ре» (2) «223» Сім (ОЇВи) «220» -221» Пептид «рег» (3) «223» Ага (РМО) «220» -221» Пептид «рр» (5) «223» Авр (ОАУІ) «220» -221» Пептид «рр» (5) «223» "С-кінцева Авр зв'язана з хлортритиловим полімером" «4005 43

Кув біз Агая Уаї Авр 1 5

«-210» 44 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «221» Пептид «ре» (1) «223» ЕМОС-Ї ув «220» «221» Пептид «др» (2) «223» сш (СІВИи) «220» «221» Пептид «рр» (3) «223» Ага (РМО) «220» «221» Пептид «реа» (5) «223» "С-кінцева Авр зв'язана з хлортритиловим полімером" «400» 44 цув бі) Агу уаї Авр 1 5 -210» 45 «-21155 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «221» Пептид «ре» (1) «223» ЕМОС-Ї ув «220» «221» Пептид «де» (1) «223» "С-кінцева Авр зв'язана з хлортритиловим полімером" «220» -221» Пептид «ре» (2) «223» Сім (ОЇВи) «220» -221» Пептид «рег» (3) «223» Ага (РМО) «220» -221» Пептид «рр» (5) «223» "С-кінцева Авр зв'язана з хлортритиловим полімером" «220» «221» Пептид «Д22» (1)..(5) «223» Бічні ланцюги Гуз у положенні 1 і Азр у положенні 5 зв'язані амідним зв'язком «100» 45

Пув 01 АхЯ Маї Аяр 1 5 -210» 46 «211» 34 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: аналог НРТН «220» «221» Пептид «ре» (1) «223» продукт - Аа «220» «2215 МОЮ ВЕ5 «ре» (8) «223»-Хаа - норпейцин(Міе)

-221» Пептид «ре» (18) «223» продукт - Гуз «220» -221» Пептид «рр» (18) «РОЗ» Бічний ланцюг І уз зв'язаний амідним містком з бічним ланцюгом Ав5р «220» «221» Пептид «ре» (22) «223» продукт - Ар «220» «221» Пептид «ре» (22) «223» Бічний ланцюг Ар зв'язаний амідним містком з бічним ланцюгом І уз «220» «221» Пептид «ре» (26) «223» продукт - Гуз «220» «221» Пептид «ре» (26) «223» Бічний ланцюг І уз зв'язаний амідним містком з бічним ланцюгом Ав5р «220» «221» Пептид «ре» (217) «223» продукт - І еи «220» «221» Пептид «ре» (30) «223» продукт - Ар «220» -221» Пептид «дае» (30) «223» Бічний ланцюг Авр зв'язаний амідним містком з бічним ланцюгом І уз

Мія мах ве 43із тів біп рем Хях НІВ Авп ред Піу уз Нів Юец Аби і 5 хі 1

Ясхк Тук біз Аку Узі Абе Тхроцво Ат бук оби без і2»; Дер Маі нів 22 25 35 деп спе

Claims

1. Спосіб одержання Зк ки и в якій ), І. 1 М представляють лінійні пептидні фрагменти; Кі відсутній або представляє циклічний пептидний фрагмент і Ко представляє циклічний пептидний фрагмент, який включає: -о (1) одержання послідовним приєднанням придатним чином заміщених амінокислотних залишків до полімеру з одержанням: м «Ш де (в) представляє придатний синтетичний полімер для пептиду, 1 М представляє поліпептидний фрагмент; (2) одержання, окремо, звичайним пептидним синтезом фрагмента захищеного за М-кінцем циклічного поліпептиду формули ІУ

РНМ. сон Ом, у якій Р представляє придатну захисну групу для аміногрупи, (3) сполучення Ш з ІМ з одержанням пептиду формули У РНМ ки в У (4) коли циклічний пептид Кі відсутній, тоді (а) одержання поліпептидних фрагментів / 1 І, у вигляді окремого поліпептиду формули У1І РНМ і тулотсон М і сполучення поліпептиду МІ з пептидом МУ з одержанням пептиду формули МП Ши у УП або необов'язково (Б) приєднання захищених індивідуальних амінокислотних елементів поліпептидів / 1 І, послідовно до пептидного фрагмента формули У, або, необов'язково, (с) окреме одержання фрагментів будь-якого або обох / 1 І, у вигляді поліпептидних фрагментів і сполучення цих фрагментів для нарощування пептиду, починаючи з фрагмента формули У; (5) коли циклічний пептид Кі є присутнім, тоді (а) окреме одержання захищеного за М- кінцем циклічного поліпептидного фрагмента формули УШ

РНМ. со,Н КО УШ у якій Р представляє придатну захисну групу для аміногрупи, звичайними методиками пептидного синтезу; (5) одержання пептидного фрагмент формули ІХ

РНМ. сон й ІХ і сполучення пептидного фрагмента ІХ з пептидним фрагментом У з одержанням пептидного фрагмента формули Х РН кум Щ то х і (с) сполучення циклічного пептидного фрагмента МШ з пептидним фрагментом формули Х з одержанням пептидного фрагмента формули ХІ вну кум в) Х (а) одержання пептидного фрагмента формули ХП

РНМ. сон з ХП і сполучення фрагмента ХІЇ з фрагментом Хі; 1 (6) відщіплення полімеру 1 видалення захисної групи.

2. Спосіб за п. 1, у якому пептид формули І представляє циклічний пептид формули Х-Ав-А |! Ах А Ан А А А пн ви А А А Ав Ам Ан А у якій Х вибирають із групи, що включає (а) Вата АНА АгАНАНАНА А

(5). КА кАнА АНА КА А, (с) КА АНАНАСА АКА, (9) Кк АгАгАКАКА А, (е) Кіа Ав-Ав-А;-Ав-Ав-, (9 - Кі кАкАгАсА, (в) Ку АнАрА,, (в) Кі еАкА,, (і) Кк, і 0) КЕ. У вибирають із групи, що включає (а) -К, (5) -Ахж-К,, (с) «Ан А» Ву (4) «Ап Ав Аз Ву, (г) Ап АюЛуйи ке (0 "Аж-Аю-Аю- Ан Аз В, (в) "Аж Ав АюАзеАр Ази і (в) А А Ан ААУ АВ, Кіз представляє Н, алкіл, аралкіл або -СОК»; Кіь представляє Кіа або групу формули в ій Ге! в, І й То жи Н й» або й о ве ; Ко представляє алкіл, алкеніл, алкініл, арил або аралкіл; Кз представляє групу формули Аз5-ОКа або Аз5-МКаК»; Ка 1 Ко незалежно представляють Н або нижчий алкіл; Кв 1 Ко незалежно представляють Н або алкіл; К7 представляє алкіл; Кх представляє Н, алкіл або СОК»; Кіо представляє Н або галоген: Киї представляє або алкіл аралкіл; т дорівнює 1, 2 або 3; п дорівнює 3 або 4; Ао відсутній або представляє пептид, що включає від одного до шести амінокислотних залишків; А представляє 5ег, Аа, СТу або О-Рго, або еквівалентну амінокислоту;

А» представляє АПа, Маї або СПТу, або еквівалентну амінокислоту;

Аз представляє Ла, 5ег, Су або Ю-Рго, або еквівалентну амінокислоту;

Ад представляє Си, Аа або СПТУ, або еквівалентну амінокислоту;

А» представляє Пе, Нів, Аа або Оу, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аб представляє Аа, СІп, СО1Ту або О-Рго, або їх еквівалентну амінокислоту;

А7 представляє Аа, І еп, СПТу, або їх еквівалентну амінокислоту;

Ав представляє І еп, Міє, СТу або О-Рго, або їх еквівалентну амінокислоту;

А» представляє Нів, Аа, Ю-Рго або Оу, або їх еквівалентну амінокислоту;

Атїо представляє Аа, Авп, Авр, Суб, гомо-Сув, СОЇш, СІТу, Гув, Огп, бетг, Тіг, Ю-Рго, -МНСН (СНо)деМНО)СО- або -ХНСНІ(СНооСОНІ|СО-;

А представляє Аа, СПУ, І еп або Гуз, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аї12 представляє Аа або Су, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аїз представляє Аа, Авп, Авр, Суб, гомо-Сув, ОЇ, СІу, Муб, Огп, бег, ТІг, --НСН (СНо)деМНо)СО- або -«-НСНІ(СНоСОНІ|СО-;

Аї14 представляє Аа, Авп, Авр, Сув, гомо-сув, ОЇи, С1у, Нів, був, От, 5ег, ТПг, Ю-Рго, -МЖНСН (СНо)деМНО)СО- або -УНСНІ((СНооСОНІ|СО-;

А15 представляє Аа, СТу, Пе, О-Рго або І ей, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аї16 представляє Авп, Аа, СЛУ, Ю-Рго або Сп, або їх еквівалентну амінокислоту;

А17 представляє Аа, Авп, Авр, Суб, гомо-сув, ОЇш, СПу, Мув, Огп, 5ег, Тіт, Ю-Рго, --НСН (СНо)деМНО)СО- або -ХУНСНІ((СНооСОНІ|СО-;

А1ї8 представляє Авр, Суб, гомо-суб5, ОЇш, Нів, Геп, Пуб, Огп, МІе, ет, Тіт, --НСН (СНо)деМНО)СО- або -УНСНІ((СНооСОНІ|СО-;

А1ою представляє Аге або Си, або їх еквівалентну амінокислоту;

Азо представляє Аге або її еквівалентну амінокислоту;

Алі представляє Аге, Авр, Суб, гомо-Сув, СЇи, Гув, Оп, 5ег, ТВг, Маї, -МНСН (СНо)дяМНОСО- або -МНСН |((СНозпСОнІ|СО-;

А» представляє Авр, Сув, гомо-сув, СЇи, Нів, Гу, Огп, Ре, 5ег, Тг, -АНСН(СНо) МН СО- або -МНСН |((СНозіСОНІСО-;

Азз представляє І еп, Ре або Тгр, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аза представляє І еп або її еквівалентну амінокислоту;

Ао5 представляє Аг, Авр, Суб, гомо-Су5, ОТи, Ніб, МПуб, Огп, Ю-Рго, 5ег, ТВ, -МНСН (СНооМНО)СО- або -МНСН | (СНооСОзН|СО-;

А» представляє Авр, Сув, гомо-сув, СТи, Нів, Гув, От, 5ег, Тіт, -МНСН (СНо)тМНОСоО- або - МНСН |((СноСОнНІ|СО-;

А27 представляє І еп або Гуз, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аз» представляє або Пе І еи, або їх еквівалентну амінокислоту;

Азо представляє Аа, Авр, Сув, гомо-Сув, СТи, СОТп, Гув, Огп, 5ег, ТІг, -МНСН (СНо)дпМНо)СО- або -МНСН |((СНозіСОНІСО-;

Азо представляє Авр, Сув, гомо-Сув, ОЇи, СТУ, Гув, Огп, 5ег, Тіт, -МНСН (СНо)пМНо)СО- або - МНСН (СНооСФОнІсСОо-;

Азі представляє Пе, І еи або Маї, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аз» представляє Нів, або її еквівалентну амінокислоту;

Азз представляє Авп або Тг, або їх еквівалентну амінокислоту 1

Аза представляє Аа або Ре, або їх еквівалентну амінокислоту;

Аз» відсутній або представляє пептид, що містить від 1 до 4 амінокислот і бічні ланцюги, принаймні, однієї з наступних пар амінокислотних залишків А/10 1 А14, А1з 1 А17, А1і4 1 Аї18, А17 1 Алі, Аїв 1 А», Алі 1 Аз, А» 1 А», 1 Ав 1 Азо зв'язані за допомогою амідного, складноефірного, дисульфідного або лантіонінового зв'язку з утворенням містка, 1 бічний ланцюг кожного з наступних амінокислотних залишків: А10, А1з, А14, А17, А18, Алі, А», А25, Ав, Аго 1 Азо вносить вклад, якнайбільше, в утворення одиничного містка; за умови, що, коли бічні ланцюги наступних пар амінокислотних залишків: Аїіз 1 А1і7 або Ав 1 Азо зв'язані за допомогою амідного, дисульфідного або лантіонінового зв'язку з утворенням містка, то бічні ланцюги, принаймні, однієї з наступних пар амінокислотних залишків: Ац0 1

А14, А14 1 Аї8, А17 і Алі, А181 А», А» і Азв і Азов і Азо також зв'язані за допомогою амідного, складноефірного дисульфідного або лантіонінового зв'язку.

3. Спосіб за п. І одержання цикло(ІГув!?-Авр"ГАТа! Мед Гув'ї Авр Ге ЛВРТН(ОИ-3 МН», який включає (а) одержання полімер-зв'язаного пептидного фрагмента А: Етос- Гр (Вос) -Геп-Аге (РМО) -Гув (Вос) -Геп-Генп-ОїЇп (Тит) -Авр(ОїВи) -МаІ-МН- полімер (А); (5) одержання циклічного пептидного фрагмента втоє- Ї5- осв -Атфрте)---Уві---Яер - он (В); (с) сполучення пептидного фрагмента А стадії (а) з пептидним фрагментом В зі стадії (Б) з одержанням проміжного пептиду АВ Етос-І уз-СІн-Агд-МаІ-Азр-Тгр(Вос)-Геиш-Агоа(Ртс)- Гуз(Вос)-Геи-Геш-СІп(Т)-Азр(ОЇВи)-МаІ-МН-полімер (АВ); (а) послідовне приєднання до пептиду АВ 5ег (Ої(Ви), Авп (ТгО), І еп, Нів (Тг) 1 Гуз (Вос) з одержанням проміжного пептиду: Етос-І.у5(Вос)-Ніє(Тг)-І ви-Авп(То)-бекО(Ви). -Буз-Сіш-Агр-Ма1-Авр- Тір(Вос)-Іеи-Аге(РМО)-Гуз(Вос)-І еи- І еп-біц(Ти)-Азр(ОгВи)-Маї-МН- полімер (с (е) одержання пептидного фрагмента І: Етос-АІа-Ма1-5ег (ОїВи) -С1и (ОїВи) «ЦезОіп (Тгу -Геш-Міе-Нів (Тп) -Авп (ту -беш-О1У5-ОН (Ю) сполучення фрагментів С 1 І) з одержанням полімер-зв'язаного пептиду Е: Етос-АІа-МаЇ-5еО18и)-С1щЩОВи)-Пе-Сіц(Тл)-Сеи-Міе-Нів(То)-Азп(Тго-І еи-С1у- Губ(Вос)-Ніз(Тт)-Геи-Ахп(Тп)-5ецОВи). «Бувз-Сіо-Агр-Уа!-Авр- Тгр(Вос)-Геп-Аге(РМС)-Іуз(Вос)-Геи- еп ОС Теа)-Азр(ОВи)-Уаі- МН -полімер (Е); і (г) відщеплення полімеру і видалення захисної групи.

4. Пептид, придатний як проміжна сполука для здійснення способу за п. 3, вибраний із групи, що включає: ТерівВось ец-Ага( тс ув(ВОоськео- еп АВР Учанян. полімер, цикло (Цуз'"-А5р"?)Етос-І.уз-С1щ(О(8и)-Агр(Ртес)-Уа!-Авр-Тгр(Вос)- І. еи-Агр(Рте)- Туз(Вос)-їео-ї епі Тт)-Азр(ОгВи)-Уаі-Меи-полімер, цикло(Цув'"-Авр')Еттос- І уз(Вос)- Ніз(Тп)-ї еи-Аз( Ті) бе ОїВо)-уз-О1КОВи)- Агу(Рте)-УаіІ-Авр-Ттр(Вос)- І еи-Аго(Рте)-Гуз(Вос)-ї еи-їви-біц Ти) Азр(ОгВи)-УаєМн- полімер, Етос-АІа-Ма!-5екОїВи)-СІщ(ОКВи)-Це-Сіа(Теа)-бев-Міе-Ніє(То)-Авц(Т)-І еи-О1У-ОН, цикло (Гув'-Азр")Етос-Аа-Уаї-ЗегіО(Ви)-СІЩОВ и) Пе-С1(Ти)-Гео-Міе-Ніз(То- Азп(Тп)-Геи-Оіу- Гух(Вос)-Ніз(Тп)-І.си-А5о(Тг)-5ек Ви) Бух-бІщОВи)-Аго(Рте)-Уа!- Азр- Тгр(Вос)-Гги-Агр(Ртс)-Гуз(Вос)-Геи-Теи-О1(Ти)-Азр(ОгВи)- Уа!-МН- полімер, Вос-МУаі-Азр(О аліл)-ОВгІ,

НСІ"Уа!-Азр(О аліл)-ОВі, Етос-Агр(Рте)-УаІ-А5р(О аліл)-ОВлі, Агр(Ртс)-Уаї-Азр(О аліл)-ОВі, Етос-СІЩОгВи)-Ага(Рте)-Уаї-Азр(О аліл)-ОВлі, СІЩО:Ви)-Аге(Рте)-Уаї-Азр(О аліл)-ОВгі, Етос-Цу(АПос)-С1Щ(О Ви) Аго(Рте)-МУаї-Авр(О аліл)-ОВІ, Етос-І у5-С1ЩОВи)-Агр(Ріте)- У аі-Азр-ОВаЇ, Етос-цикло (Суб-Азр)уз-С1ЩОВи)-Агр(Рітс)-Уаі-Азр-ОВ2і, Етос-Цикло (Цу5-Азр)Цуз-біщЩОВи)-Ати(Ріте)-Маї-Авр-ОН, Етос-Гу(АПос)-СіТцщ(ОгВи)-Атр(Рте)-Уга!-Азр(О. аліл)ухлортритил полімер, Етос-Гуз-СІщЩОВи)-Агр(Рітс)-Уа!-Авр-хлортритил полімер, і Етос-цикло (Суз-Азр)Суз-СТ(ОїВи)-Аге(Ртс)-Ма!-Авр-хлортритил полімер.