UA58727A - Method for purification of bovine serum - Google Patents
Method for purification of bovine serum Download PDFInfo
- Publication number
- UA58727A UA58727A UA2002097159A UA200297159A UA58727A UA 58727 A UA58727 A UA 58727A UA 2002097159 A UA2002097159 A UA 2002097159A UA 200297159 A UA200297159 A UA 200297159A UA 58727 A UA58727 A UA 58727A
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- serum
- purification
- centrifugation
- filtration
- bovine serum
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 238000000746 purification Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 title abstract description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 9
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 8
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims abstract description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 28
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 238000012876 topography Methods 0.000 claims 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 abstract description 4
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 4
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000702673 Bovine rotavirus Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 101001125496 Homo sapiens Pre-mRNA-processing factor 19 Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102100029522 Pre-mRNA-processing factor 19 Human genes 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 206010067470 Rotavirus infection Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
Опис винаходуDescription of the invention
Винахід відноситься до ветеринарії та медицини, а саме до вірусології, та стосується отримання клітинних 2 культур, які використовуються з вірусологічною метою.The invention relates to veterinary medicine and medicine, namely to virology, and relates to obtaining cell 2 cultures that are used for virological purposes.
На цей час жодна сучасна вірусологічна лабораторія не може обійтися без використання культур клітин.Currently, no modern virological laboratory can do without the use of cell cultures.
Для росту та розмноження клітин поза організму необхідним є великий комплекс фізико-хімічних факторів, присутність амінокислот та сироваткових білків. Наявність у сироватці крові біологічно активних речовин, таких як коензими, вітаміни комплексу В, гормони, мікроелементи та інші визначає біологічне значення 70 сироватки для клітин та стимулює їх ріст (В.Н. Сюрин, Р.В. Белоусова, Н.В. Фомина. Ветеринарная вирусологияA large complex of physicochemical factors, the presence of amino acids and serum proteins are necessary for the growth and reproduction of cells outside the body. The presence of biologically active substances in blood serum, such as coenzymes, vitamins of the B complex, hormones, microelements, and others determines the biological value of 70 serum for cells and stimulates their growth (V.N. Syurin, R.V. Belousova, N.V. Fomina Veterinary virology
М.: Колос", 1984.-376 с.1).M.: Kolos", 1984.-376 p.1).
Поряд з біологічними речовинами сироватка містить у своєму складі різні фракції імуноглобулінів.Along with biological substances, serum contains different fractions of immunoglobulins.
Гама-глобуліни є специфічними до різних інфекційних збудників, тому при індикації або накопиченні вірусів з використанням культур клітин, наявність 7 -глобулінів у сироватці знижує інфекційний титр вірусів, а іноді 12 взагалі перешкоджає їх реплікації в клітинах. Наприклад, при накопиченні ротавірусів великої рогатої худоби в культурі клітин нирки теляти з використанням сироватки крові великої рогатої худоби, яка вміщувала специфічні до ротавірусів глобуліни, інфекційний титр вірусу знижувався на 2-3 Ід ТЦД 50/см? (Букринская Ротавирусная инфекция /М.: "Наука", 1990.- 213 с.).Gamma-globulins are specific for various infectious agents, therefore, when indicating or accumulating viruses using cell cultures, the presence of 7-globulins in the serum reduces the infectious titer of viruses, and sometimes 12 prevents their replication in cells altogether. For example, during the accumulation of bovine rotaviruses in calf kidney cell culture using bovine blood serum containing globulins specific to rotaviruses, the infectious titer of the virus was reduced by 2-3 IU TCD 50/cm? (Bukryn Rotavirus infection / M.: "Nauka", 1990. - 213 p.).
Вилучення "- глобулінів з сироватки дозволяє використовувати Її для вірусологічної мети без попередньої перевірки на наявність специфічних до вірусів глобулінів.The extraction of globulins from serum allows its use for virological purposes without prior checking for the presence of virus-specific globulins.
В Україні сироватка великої рогатої худоби виробляється комерційними виробниками або цехами м'ясокомбінатів, де вона не очищується від гама-глобулінової фракції білків.In Ukraine, bovine serum is produced by commercial producers or meat processing plants, where it is not purified from the gamma-globulin fraction of proteins.
Прототипом способу очистки, що патентується, є спосіб очистки сироватки великої рогатої худоби, який запропонований Л.І. Інгундіним, С.Д. Орловим, Н.В. Шалуновою та іншими (Способ очистки сьіроватки крови 29 крупного рогатого скота. Л.М. Игудин, С.Д. Орлов, Н.В. Шалунова и др. // Вопр. виросологии.-1980.- Мо5.-С. « 640.). Для очистки від "7 - глобулінової фракції сироватку крові великої рогатої худоби обробляли стерильним 4095 водним розчином поліетиленгліколю (ПЕГ) з мол. м. 5500-7000 (фірма ,Зегма", ФРГ). Кінцеву концентраціюThe prototype of the patentable cleaning method is the method of cleaning cattle serum, which was proposed by L.I. Ingundinim, S.D. Orlovim, N.V. Shalunova and others (Method of purification of blood serum of 29 cattle. L.M. Igudin, S.D. Orlov, N.V. Shalunova and others. // Vopr. virosologii.-1980.- Mo5.-S. « 640 .). To purify the "7-globulin fraction" of bovine blood serum, it was treated with a sterile 4095 aqueous solution of polyethylene glycol (PEG) with a molar mass of 5500-7000 (Zegma, Germany). Final concentration
ПЕГ у сироватці доводили до 6-85 з експозицією 16-18 годин при плюс 4"С. Далі сироватку центрифугували при 2000-3000об/хв протягом 20 хвилин для отримання надосадової рідини. Вміст білку в сироватці після обробки -The PEG in the serum was brought to 6-85 with an exposure of 16-18 hours at plus 4"C. Then the serum was centrifuged at 2000-3000 rpm for 20 minutes to obtain the supernatant. The protein content of the serum after treatment -
ПЕГом знижувався у 2 рази. ГеPEG decreased by 2 times. Ge
Основним недоліком цього способу очистки є робота з сироваткою у стерильних флаконах, об'єм яких не перевищує О,5л або потребує додаткової стерилізації сироватки. Під час роботи з такими невеликими об'ємами - виробництво сироватки, яка була оброблена ПЕГ, економічно не виправдано, так як кількість очищеної за один (се) раз сироватки не перевищує 2-3 літрів. Цей спосіб очистки придатен для одержання невеликих об'ємів сироватки в лабораторних умовах. йThe main disadvantage of this cleaning method is working with serum in sterile vials, the volume of which does not exceed 0.5 l or requires additional sterilization of the serum. When working with such small volumes, the production of serum that has been treated with PEG is not economically justified, since the amount of purified serum at one time does not exceed 2-3 liters. This purification method is suitable for obtaining small volumes of serum in laboratory conditions. and
В основу винаходу, що передбачається поставлено задачу розробити спосіб очистки сироватки крові великої рогатої худоби шляхом очистки 7 - глобулінової фракції розчином поліетиленгліколю, отримання надосадової рідини центрифугуванням, після чого надосадову рідину освітлюють центрифугуванням, або сепарацією, або « дю фільтрацією, потім стерилізують фільтрацією, щоб забезпечити очистку сироватки крові великої рогатої худоби. -оThe basis of the proposed invention is the task of developing a method of purifying bovine blood serum by purifying the 7-globulin fraction with a polyethylene glycol solution, obtaining the supernatant by centrifugation, after which the supernatant is clarified by centrifugation, or by separation, or by filtration, then sterilized by filtration to to ensure the purification of bovine blood serum. -at
Спосіб виконується таким чином: до сироватки, яка була освітлена центрифугуванням на поточній або кутовій с центрифугах, або сепарацією на кров'яному сепараторі АСГ-ЗМ, або фільтруванням через фільтр-пластіни типу :з» »"Ф" додають 5095 водний розчин ПЕГа-115 або 4095 водний розчин ПЕгГа з мол. м. 10000 в співвідношенні 1:5,6 (1 частина розчину ПЕгГа та 5,6 частин сироватки). Сироватка повинна бути охолоджена до температури від плюс 2 до плюс 8"С. Суміш інтенсивно перемішують до отримання гомогенної суспензії, яка містила відділену масу сл 395 глобулінів. Суспензію витримують 72-96 годин при температурі 2-8"С. Надосадову рідину освітлюють центрифугуванням, або сепарацією, або фільтрацією після чого сироватку піддають стерилізуючій фільтрації (ее) скрізь фільтри зета-плюс, зета-фор або інші фільтри з перепускною здібністю 0,2-0,25 нм.The method is carried out as follows: to the serum, which has been clarified by centrifugation on a current or corner centrifuge, or by separation on a blood separator ASG-ZM, or by filtering through filter plates of the "Z" "F" type, add 5095 of an aqueous solution of PEG- 115 or 4095 aqueous solution of PEgGa with mol. m. 10,000 in a ratio of 1:5.6 (1 part of PEgGa solution and 5.6 parts of serum). The serum should be cooled to a temperature from plus 2 to plus 8"C. The mixture is intensively stirred to obtain a homogeneous suspension, which contained a separated mass of 395 ml of globulins. The suspension is kept for 72-96 hours at a temperature of 2-8"C. The supernatant liquid is clarified by centrifugation, or separation, or filtration, after which the serum is subjected to sterilizing filtration (ee) through zeta-plus, zeta-for or other filters with a throughput of 0.2-0.25 nm.
Приклад 1.Example 1.
Аглобулінову сироватку розфасовували в стерильні скляні ємності об'ємом 0,25-5,0 літрів. Розфасовану ко 50 сироватку піддавали провокуванню на наявність контамінації бактеріальною та грибковою флорою при «мч температурі плюс Зо протягом 5-6 діб. Далі аглобулінову сироватку великої рогатої худоби використовували з вірусологічною метою.Agglobulin serum was packaged in sterile glass containers with a volume of 0.25-5.0 liters. Packaged ko 50 serum was subjected to provocation for the presence of contamination with bacterial and fungal flora at "mch temperature plus Zo for 5-6 days. Further, aglobulin bovine serum was used for virological purposes.
Приклад 2.Example 2.
При вивченні ростових властивостей різних серій аглобулінової сироватки в порівнянні з нативною 59 сироваткою великої рогатої худоби суттєвої різниці не було. При культивуванні первинне трипсинізованої в. (фібробласти курячих ембріонів) та перещеплюваних ліній культур клітин (СНЕВ, НТ, ТртТ) строки формування моношару в експерименті та в контролі співпадали, а також культури не відрізнялись морфологією клітин.When studying the growth properties of different series of aglobulin serum in comparison with native 59 bovine serum, there was no significant difference. During the cultivation of primary trypsinized in. (chicken embryo fibroblasts) and transplanted lines of cell cultures (SNEV, HT, TrtT), the times of monolayer formation in the experiment and in the control coincided, and the cultures did not differ in cell morphology.
Спосіб очистки нативної сироватки великої рогатої худоби експериментально обгрунтований на первинно трипсинізованих та перещеплюваних культурах клітин. бо Запропонований спосіб очистки сироватки крові великої рогатої худоби дозволяє вилучати гама-глобулінову фракцію. Спосіб придатен для використання у промисловому виробництві.The method of purification of native bovine serum is experimentally based on primary trypsinized and transplanted cell cultures. because the proposed method of purification of bovine blood serum allows to extract the gamma-globulin fraction. The method is suitable for use in industrial production.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA2002097159A UA58727A (en) | 2002-09-03 | 2002-09-03 | Method for purification of bovine serum |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA2002097159A UA58727A (en) | 2002-09-03 | 2002-09-03 | Method for purification of bovine serum |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA58727A true UA58727A (en) | 2003-08-15 |
Family
ID=74219589
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA2002097159A UA58727A (en) | 2002-09-03 | 2002-09-03 | Method for purification of bovine serum |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| UA (1) | UA58727A (en) |
-
2002
- 2002-09-03 UA UA2002097159A patent/UA58727A/en unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4216205A (en) | Process of preparing a serum protein composition for intravenous application | |
| Schwerdt et al. | Purification of poliomyelitis viruses propagated in tissue culture | |
| DK168030B1 (en) | Aqueous PROTEIN SOLUTIONS RESISTANT TO DENATURING, PROCEDURES FOR THEIR PREPARATION AND THEIR USE, AND PROCEDURES FOR TREATING HYDROPHOPE SURFACES. | |
| RU2461629C2 (en) | Mammalian cell culture media which comprise supernatant from cohn fractionation stages and use thereof | |
| Rappaport | Monolayer Cultures of Trypsinized Monkey Kidney Cells in Synthetic Medium. Application to Poliovirus Synthesis. | |
| Thurman et al. | Lymphocyte activation in subacute sclerosing panencephalitis virus and cytomegalovirus infections: in vitro stimulation in response to viral-infected cell lines | |
| WO2013043032A2 (en) | Dialysed extract of leucocytes from shark spleen, for obtaining a transfer factor with increased potential, specifically designed to be used as an immunomodulator, and method for extracting, checking and counting same | |
| UA58727A (en) | Method for purification of bovine serum | |
| CN115232783A (en) | Preparation method of anti-human T cell pig immunoglobulin and hydroformylation placenta | |
| US20060223988A1 (en) | High Resolution Methods and Precipitating Reagents for Isolating Proteins from Proteinaceous Material | |
| EP0048283A1 (en) | Virus-inhibiting substance and process for preparing the same | |
| RU2470664C2 (en) | Method for producing immunoglobulin for intravenous introduction of immunoglobulin m enriched preparation, and preparation prepared by such method | |
| EP0148770B1 (en) | Composition for cell cultivation, production and use thereof | |
| RU2460786C1 (en) | Method for preparing blood serum of grown cattle for animal and human cell culture | |
| RU2054039C1 (en) | Method of purification and sterilization of cultured foot-and-mouth virus | |
| RU2703537C2 (en) | Method for making semi-products of immunoglobulin and albumin biopreparations of slaughtered animal blood, abortion and placental human blood | |
| RU2751664C1 (en) | Method for obtaining immunogenic components of cultural a, o, asia-1 type foot-and-mouth disease virus using a serum-free medium "cellventotm bhk-200" for production of vaccines against foot-and-mouth disease | |
| RU2708394C2 (en) | Method of producing immunoglobulins | |
| EP0115284A2 (en) | Tissue culture medium | |
| RU2066188C1 (en) | Method of human leukocyte interferon preparing | |
| KR101512383B1 (en) | Process of fractionating umbilical cord blood wastes and cell culture media composition comprising the fraction obtained therefrom | |
| RU2189833C2 (en) | Method of immunoglobulin preparation preparing | |
| RU2082432C1 (en) | Method of preparing vaccine for tick-borne encephalitis control | |
| UA58719A (en) | Method for preparing aglobulin serum from blood of the cattle | |
| JPS6229968A (en) | Composition for animal cell culture, production thereof, and animal cell culture medium containing same |