RU2703537C2 - Method for making semi-products of immunoglobulin and albumin biopreparations of slaughtered animal blood, abortion and placental human blood - Google Patents
Method for making semi-products of immunoglobulin and albumin biopreparations of slaughtered animal blood, abortion and placental human blood Download PDFInfo
- Publication number
- RU2703537C2 RU2703537C2 RU2016132955A RU2016132955A RU2703537C2 RU 2703537 C2 RU2703537 C2 RU 2703537C2 RU 2016132955 A RU2016132955 A RU 2016132955A RU 2016132955 A RU2016132955 A RU 2016132955A RU 2703537 C2 RU2703537 C2 RU 2703537C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- blood
- plasma
- phenol
- albumin
- concentration
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/16—Blood plasma; Blood serum
Abstract
Description
Изобретение относится к биологической или медицинской промышленности, в частности, к заготовке сырья (крови человека и животных) в нестерильных условиях и его транспортировке в форме полуфабрикатов без использования режима «холодовой цепи» для промышленного фракционирования и обеспечения серийного выпуска иммуноглобулиновых и альбуминовых биопрепаратов.The invention relates to the biological or medical industry, in particular, to the procurement of raw materials (human and animal blood) in non-sterile conditions and its transportation in the form of semi-finished products without using the “cold chain” mode for industrial fractionation and ensuring serial production of immunoglobulin and albumin biological products.
Техническое решение изобретения направлено на заготовку сырья в нестерильных условиях по месту сбора крови и ее сепарирования за счет инактивации бактериальной микрофлоры и ингибирования протеаз в индивидуальных или пулированных образцах плазмы или сыворотки по мере их изготовления.The technical solution of the invention is directed to the procurement of raw materials in non-sterile conditions at the place of blood collection and its separation due to inactivation of bacterial microflora and inhibition of proteases in individual or pooled plasma or serum samples as they are manufactured.
Технико-технологическое оформление заготовки донорских кроводач человека устраняет проблематику бактериальной обсемененности индивидуальных образцов крови и сопряженного производства контаминированных образцов плазмы крови. Аналогичные условия в промышленном масштабе невозможно создать для заготовки абортной, плацентарной крови человека, или боенской крови сельскохозяйственных животных, или трупной крови пушных зверей. Одним из негативных свойств бактериальной обсемененности крови является приобретение пирогенных свойств плазмой (сывороткой) крови и переход пирогенов в состав фармацевтических биопрепаратов.The technical and technological design of the procurement of human blood donation eliminates the problem of bacterial contamination of individual blood samples and the associated production of contaminated blood plasma samples. Similar conditions on an industrial scale cannot be created for procuring abortion, placental blood of a person, or slaughter blood of farm animals, or cadaveric blood of fur animals. One of the negative properties of bacterial contamination of blood is the acquisition of pyrogenic properties by plasma (serum) of the blood and the transition of pyrogens to pharmaceutical biologics.
Известны методы обеззараживания индивидуальных и пулированных образцов плазмы. Обработка метиленовым голубым и облучение видимым светом с подобранными величинами освещенности и экспозиции используются для инактивации инфекционности вирусных агентов [1]. Guidelines on viral inactivation and removal procedures intended to assure the viral safety of human blood plasma products // WHO Technical Report, Series №.924, 2004, p. 151-219; 2. Панов В.П. Принципы обеспечения вирусной безопасности продуктов крови (обзор). // Хим.-фарм. журнал. 2004, т. 38, №3, с. 39-47]. Сольвент-детергентный способ основан на внесении в состав исходной плазмы крови органического растворителя и неионного детергента [3. Horowitz В. Investigations into the application of tri(n-butyl)phosphate/detergent mixtures to blood derivatives. Current Studies in Hematology and Blood Transfusion, 1989, p. 83-96]. Предлагается также ультрафиолетовое облучение свежезамороженной плазмы и изготовленных из обработанной плазмы факторов свертывания [4. Као К.J. Effects of leukocyte depletion and UVB irradiation on allogenecity of major histocompatibility antigens in platelet concentrates: a comparative study // Blood, 1992, p. 2931-2937].Known methods of disinfection of individual and pooled plasma samples. Processing with methylene blue and irradiation with visible light with selected values of illumination and exposure are used to inactivate the infectivity of viral agents [1]. Guidelines on viral inactivation and removal procedures intended to assure the viral safety of human blood plasma products // WHO Technical Report, Series No. 924, 2004, p. 151-219; 2. Panov V.P. Principles for ensuring the viral safety of blood products (review). // Chem.-farm. Journal. 2004, t. 38, No. 3, p. 39-47]. The solvent-detergent method is based on the introduction of an organic solvent and a non-ionic detergent into the composition of the initial blood plasma [3. Horowitz B. Investigations into the application of tri (n-butyl) phosphate / detergent mixtures to blood derivatives. Current Studies in Hematology and Blood Transfusion, 1989, p. 83-96]. It is also proposed ultraviolet irradiation of freshly frozen plasma and coagulation factors made from treated plasma [4. Kao K.J. Effects of leukocyte depletion and UVB irradiation on allogenecity of major histocompatibility antigens in platelet concentrates: a comparative study // Blood, 1992, p. 2931-2937].
Одним из наиболее эффективных способов обеззараживания плазмы считается обработка низкомолекулярным электрофильным соединением (Инактивин), йодоацетальдегидом в условиях сольвент-детергентного инкубирования [5. Guidelines on viral inactivation and removal procedures intended to assure the viral safety of human blood plasma products // WHO Technical Report, Series №924, 2004, p. 151-219; 2. Панов В.П. Принципы обеспечения вирусной безопасности продуктов крови (обзор). // Хим.-фарм. журнал. 2004, т. 38, №3, с. 39-47]. На стадии НИОКР отрабатывается инактивация бактериальных и вирусных агентов на основе сверхбыстрой (миллисекунды) низкотемпературной (50-55)°C пастеризации/стерилизации (МСТ-технология).One of the most effective methods of plasma disinfection is considered to be treatment with a low molecular weight electrophilic compound (Inaktivin), iodoacetaldehyde in conditions of solvent-detergent incubation [5. Guidelines on viral inactivation and removal procedures intended to assure the viral safety of human blood plasma products // WHO Technical Report, Series No. 924, 2004, p. 151-219; 2. Panov V.P. Principles for ensuring the viral safety of blood products (review). // Chem.-farm. Journal. 2004, t. 38, No. 3, p. 39-47]. At the R&D stage, the inactivation of bacterial and viral agents based on ultrafast (millisecond) low temperature (50-55) ° C pasteurization / sterilization (MCT technology) is being worked out.
Недостатком перечисленных методов является использование плазмы, которая производится в условиях, исключающих бактериальную контаминацию донорских кроводач. Эффективность обеззараживающих подходов оценивается при незначительном уровне контаминации индивидуальных образцов плазмы, изготовленных в стерильных условиях с последующим хранением при температуре от (-20)°C до (-65)°C, обеспечивающей бактериостатические условия.The disadvantage of these methods is the use of plasma, which is produced under conditions excluding bacterial contamination of donor blood donations. The effectiveness of disinfecting approaches is evaluated at a low level of contamination of individual plasma samples made under sterile conditions, followed by storage at a temperature of (-20) ° C to (-65) ° C, which provides bacteriostatic conditions.
Известны способы транспортировки и хранения плазмы в режиме холодовой цепи. Допускается низкотемпературное хранение плазмы крови при температуре (-20)°C и ниже в течение не более 7 лет [6. Сборник «Препараты крови. Инструктивно-методические материалы по контролю и производству» под редакцией Буренкова С.П. М: Изд-во Минздрава СССР, 1976, с. 203-218; 7. Русанов В.Н., Скобелев Л.И. «Фракционирование белков плазмы в производстве препаратов крови». - М: Медицина, 1983, с. 49-83; 8. Руководство по организации, обслуживанию и использованию оборудования холодовой цепи для крови. Женева: Всемирная организация здравоохранения, 2009 г., с. 8-9]. За счет быстрого замораживания плазмы до температур (-35)°C или (-40)°C возможно увеличить срок хранения плазмы крови человека без потери физиологической активности целевых белков с гемостатическим или иммуномодулирующим, или комплексным механизмом действия [9. Жибурт Е.Б. «Трансфузиология: учебник». СПб: Питер, 2002, 736 с.]. Показана возможность удлинения сроков хранения иммуносыворотки при температуре (-5 - -10)°C без потери активности антител, если ее заморозку осуществляли при (-196)°C [10. Патент RU №2151617, А61М 1/38, опубл. 27.06.2000; 11. Чард Т. «Радиоиммунологические методы». М.: Мир, 1981, с. 48].Known methods of transporting and storing plasma in the cold chain mode. Allowed low-temperature storage of blood plasma at a temperature of (-20) ° C and below for no more than 7 years [6. Collection "Blood products. Guidance materials on control and production ”edited by SP Burenkov M: Publishing House of the Ministry of Health of the USSR, 1976, p. 203-218; 7. Rusanov V.N., Skobelev L.I. "Fractionation of plasma proteins in the production of blood products." - M: Medicine, 1983, p. 49-83; 8. Guidelines for the organization, maintenance and use of blood cold chain equipment. Geneva: World Health Organization, 2009, p. 8-9]. Due to the rapid freezing of plasma to temperatures of (-35) ° C or (-40) ° C, it is possible to increase the shelf life of human blood plasma without losing the physiological activity of target proteins with hemostatic or immunomodulating, or complex mechanism of action [9. Zhiburt E.B. "Transfusiology: a textbook." St. Petersburg: Peter, 2002, 736 p.]. The possibility of extending the shelf life of immunoserum at a temperature of (-5 - -10) ° C without loss of antibody activity was shown if it was frozen at (-196) ° C [10. Patent RU No. 2151617,
Недостатком методов низкотемпературной транспортировки и хранения донорской плазмы (сыворотки) крови является их энергоемкость, которая для обеспечения надлежащего режима требует стационарных помещений. Не допускается оттаивание и повторное замораживание плазмы по техническим причинам, поскольку такого рода технологические нарушения оказывают негативное влияние на физиологическую активность целевых белков [11. Чард Т. «Радиоиммунологические методы». М.: Мир, 1981, с. 48]. При этом для боенской (трупной) плазмы (сыворотки) крови животных, либо для абортной и плацентарной крови человека в настоящее время не представляется возможным технически организовать получение стерильных кроводач и производство стерильных образцов индивидуальных заготовок стерильной плазмы крови.The disadvantage of the methods of low-temperature transportation and storage of donor plasma (serum) of blood is their energy intensity, which requires stationary rooms to ensure proper mode. Thawing and repeated freezing of the plasma is not allowed for technical reasons, since such technological violations have a negative effect on the physiological activity of the target proteins [11. Chard T. "Radioimmunological methods." M .: Mir, 1981, p. 48]. Moreover, for slaughter (cadaveric) plasma (serum) of animal blood, or for abortion and placental human blood, it is currently not possible to technically organize the production of sterile blood vessels and the production of sterile samples of individual sterile blood plasma blanks.
Известны способы инактивации микрофлоры в составе плазмы (сыворотки) крови за счет использования этанола на самых первых стадиях технологии производства фармацевтических биопрепаратов. За счет увеличения концентрации этанола и варьирования рН осуществляется выделение и очистка целевых белков из плазмы (сыворотки) крови. В процессе этанольного фракционирования используются бактериостатические (8%) и бактерицидные (17-40%) концентрации этанола [6. Сборник «Препараты крови. Инструктивно-методические материалы по контролю и производству» под редакцией Буренкова С.П. М.: Изд-во Минздрава СССР, 1976, 384 с.; 7. Русанов В.Н., Скобелев Л.И. «Фракционирование белков плазмы в производстве препаратов крови». - М.: Медицина, 1983, с. 75-111]. Однако, бактериально-контаминированная плазма содержит в своем составе пирогены. Удаление пирогенов бактериальной природы требует дополнительных стадий очистки целевого белка [12. Зубкова Н. Б. Биотехнологические аспекты эффективной и безопасной переработки донорской плазмы: проблемы и перспективы // Биопрепараты. - 2014, №1, с. 4-10; 13. Исрафилов А.Г. и др. Опыт получения апирогенных препаратов // Тезисы докладов IV Российского национального конгресса «Человек и лекарство», Москва 8-12 апреля 1997 г.: сборник «Человек и лекарство». Российский нац. конгр. (4; 1997; Москва). - М.: "ФАРМЕДИНФО", 1997. - с. 54].Known methods of inactivation of microflora in the plasma (serum) of blood through the use of ethanol in the very first stages of the production technology of pharmaceutical biological products. By increasing the concentration of ethanol and varying pH, the target proteins are isolated and purified from plasma (serum) of the blood. In the process of ethanol fractionation, bacteriostatic (8%) and bactericidal (17-40%) ethanol concentrations are used [6. Collection "Blood products. Guidance materials on control and production ”edited by SP Burenkov M .: Publishing House of the Ministry of Health of the USSR, 1976, 384 p .; 7. Rusanov V.N., Skobelev L.I. "Fractionation of plasma proteins in the production of blood products." - M .: Medicine, 1983, p. 75-111]. However, bacterial-contaminated plasma contains pyrogens. Removing bacterial pyrogens requires additional stages of purification of the target protein [12. Zubkova N. B. Biotechnological aspects of effective and safe processing of donor plasma: problems and prospects // Biological products. - 2014, No. 1, p. 4-10; 13. Israfilov A.G. et al. Experience in obtaining pyrogen-free drugs // Abstracts of the IV Russian National Congress “Man and Medicine”, Moscow April 8-12, 1997: collection “Man and Medicine”. Russian nat. Congr. (4; 1997; Moscow). - M .: "PHARMEDINFO", 1997. - p. 54].
Недостатком известных методов этанольного фракционирования является использование донорской стерильной плазмы и невозможность удаления бактериальных пирогенов из состава биопрепаратов на основе стандартных технологических процессов.A disadvantage of the known methods of ethanol fractionation is the use of donor sterile plasma and the inability to remove bacterial pyrogens from biologics based on standard technological processes.
Рекомендуется использование риванола в технологии фракционирования плазмы (сыворотки) крови с учетом его бактериостатического действия [14. Zhurina N.A., Shatskaia Т.L., Katushkina N.V. The virological safety and bacterial sterility of a method for fractionating blood plasma proteins with rivanol // Zh. Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol. 1993, 1: p. 45-48]. С аналогичных позиций обсуждается бактериостатический эффект сульфата аммония или каприловой кислоты в технологии производства фармацевтических биопрепаратов.The use of rivanol in the technology of fractionation of plasma (serum) of blood is recommended taking into account its bacteriostatic effect [14. Zhurina N.A., Shatskaia T.L., Katushkina N.V. The virological safety and bacterial sterility of a method for fractionating blood plasma proteins with rivanol // Zh. Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol. 1993, 1: p. 45-48]. The bacteriostatic effect of ammonium sulfate or caprylic acid in the production technology of pharmaceutical biological preparations is discussed from a similar point of view.
Недостатком известных схем фракционирования с использованием реагентов-материалов, обладающих бактерицидно-бактериостатическим эффектом, является невозможность их применения на самых первых этапах заготовки сырья и его первичной переработки.A disadvantage of the known fractionation schemes using reagent materials with a bactericidal and bacteriostatic effect is the impossibility of their use at the very first stages of the harvesting of raw materials and its primary processing.
Представлены материалы и методы физико-химической инактивации инфекционных агентов в составе полупродуктов плазмы. Пастеризация полупродуктов альбумина, других полупродуктов плазмы и концентратов физиологически активных белков и их модифицированных форм осуществляется за счет термической обработки в сухом и влажном вариантах [15. Colvin В.Т. Effect of dry heating of coagulation factor concentrates at 80°C for 72 hours on transmission of non-A, non-B hepatitis // Lancet. - 1988. - p. 814-816; 7. Русанов В.H., Скобелев Л.И. «Фракционирование белков плазмы в производстве препаратов крови». - М.: Медицина, 1983, с. 211; 16. Brackmann Н.Н., Egli Н. Acute hepatitis В infection after treatment with heatinactivated factor VIII concentrate // Lancet, 1988, p. 967].Materials and methods for the physicochemical inactivation of infectious agents in plasma intermediates are presented. Pasteurization of albumin intermediates, other plasma intermediates and concentrates of physiologically active proteins and their modified forms is carried out by heat treatment in dry and wet versions [15. Colvin V.T. Effect of dry heating of coagulation factor concentrates at 80 ° C for 72 hours on transmission of non-A, non-B hepatitis // Lancet. - 1988. - p. 814-816; 7. Rusanov V.N., Skobelev L.I. "Fractionation of plasma proteins in the production of blood products." - M .: Medicine, 1983, p. 211; 16. Brackmann NN, Egli N. Acute hepatitis B infection after treatment with heatinactivated factor VIII concentrate // Lancet, 1988, p. 967].
Недостатком известных методов является инактивация потенциально возможных инфекционных агентов в основном на заключительных стадиях технологического процесса производства фармацевтических биопрепаратов. Обеззараживающее воздействие на поздних стадиях техпроцесса обеспечивает накопление в составе полупродуктов бактериальных и вирусных антигенов, в т.ч. фрагментов распада бактериальных клеток с потенциально-возможным пирогенным эффектом.A disadvantage of the known methods is the inactivation of potential infectious agents, mainly at the final stages of the technological process for the production of pharmaceutical biological products. The disinfecting effect in the late stages of the process ensures the accumulation of bacterial and viral antigens in the intermediate products, including decay fragments of bacterial cells with a potential pyrogenic effect.
Известны методы противовирусной обработки донорской плазмы с помощью псоралена в сочетании с облучением ультрафиолетом [17. Wages D., Smith D., Walsh J. et all. Virally inactivated fresh frozen plasma transfusion in normal volunteers // Vox Sang 1998; 74, Suppl 1: p. 1290].Known methods for antiviral treatment of donor plasma using psoralen in combination with ultraviolet radiation [17. Wages D., Smith D., Walsh J. et all. Virally inactivated fresh frozen plasma transfusion in normal volunteers // Vox Sang 1998; 74, Suppl 1: p. 1290].
Недостатком указанных методов является отсутствие сведений о бактерицидных эффектах, сопутствующих целенаправленным противовирусным воздействиям. Донорские кроводачи и производство индивидуальных образцов плазмы осуществляется в стерильных условиях, что исключает микробную контаминацию плазмы и клеточных компонентов крови.The disadvantage of these methods is the lack of information about the bactericidal effects associated with targeted antiviral effects. Donor blood supply and production of individual plasma samples is carried out under sterile conditions, which excludes microbial contamination of plasma and cellular blood components.
Наиболее близким техническим решением для инактивации бактериальной микрофлоры в плазме или сыворотке крови является последовательное внесение 40% фенола в глицерине до его конечной концентрации (0,7±0,2)% и, далее, через 5 дней инкубирования фенолизированной плазмы, внесение сухого сульфата аммония [18. Патент RU №2338375. Способ хранения плазмы или сыворотки крови для получения иммуноглобулиновых и альбуминовых биопрепаратов. Опубл. 20.11.2008 г. Бюл. №32] (прототип).The closest technical solution for the inactivation of bacterial microflora in plasma or blood serum is the sequential application of 40% phenol in glycerol to its final concentration (0.7 ± 0.2)% and, then, after 5 days of incubation of phenolized plasma, the introduction of dry ammonium sulfate [eighteen. Patent RU No. 23338375. A method for storing plasma or blood serum to obtain immunoglobulin and albumin biological products. Publ. November 20, 2008 Bull. No. 32] (prototype).
Недостаток известного метода состоит в хранении контаминированной микрофлорой плазмы в нестерильном помещении в процессе ее накопления до объема реакторной закладки по мере сепарирования контаминированных микрофлорой индивидуальных образцов крови. Только затем следует стадия инактивации за счет внесения 40% раствора фенола в глицерине, которая продолжается в течение 5 суток при охлаждении до температуры (10±1)°C. Далее в фенолизированную плазму вносят порошок сульфата аммония до концентрации 50% от насыщения. Например, для убойных пунктов крупных сельскохозяйственных животных, технологически адаптированных к обработке животных в течение 20-30 минут, производство бактериально-контаминированной плазмы крови составляет 15-10 литров в 1 час, т.е. производство бактериально-контаминированной плазмы до объема 150 литров осуществляется за 10-15 часов, в течение которых плазма хранится в плазмоприемнике, расположенном в нестерильных помещениях по месту заготовки крови и ее сепарирования. Еще более длительный процесс характерен для производства плазмы (сыворотки) из абортной, плацентарной крови человека или из трупной крови пушных зверей. В известном способе процесс инактивации бактериальной микрофлоры требует внесения концентрированного 40% раствора фенола в условиях охлаждения сырья до (10±1)°C и инкубирования фенолизированной плазмы в течение 5 суток. Последующее внесение сухого сульфата аммония ограничено концентрацией 50% от насыщения, которая превышает известную концентрацию 33% от насыщения и содействует осаждению белков из альбумин-трансферриновой фракции в состав гамма-глобулинов. Таким образом, инактивация бактериальной микрофлоры в сырьевой заготовке осуществляется только через 10-15 часов после получения плазмы (сыворотки) крови в нестерильных помещениях. Кроме того, бактерицидные условия достигаются за счет внесения в состав плазмы или сыворотки крови 40% раствора фенола, который обладает в указанной концентрации локальным белок-денатурирующим эффектом, а сам процесс экспозиции фенолизированной плазмы требует охлаждения до температуры (10±1)°C и продолжается в течение 5 суток. Последующее внесение сульфата аммония до концентрации 50% от насыщения определяется, также, созданием бактерицидно-бактериостатических условий, которые нарушают распределение белков плазмы (сыворотки) крови по фракциям гамма-глобулинов и альбуминов, под действием указанной концентрации сульфата аммония.A disadvantage of the known method is the storage of plasma microflora contaminated in a non-sterile room during its accumulation up to the volume of the reactor bookmark as the separation of individual blood samples contaminated with microflora. Only then does the inactivation step follow by introducing a 40% solution of phenol in glycerol, which lasts for 5 days when cooled to a temperature of (10 ± 1) ° C. Next, ammonium sulfate powder is added to the phenolized plasma to a concentration of 50% of saturation. For example, for slaughterhouses of large farm animals that are technologically adapted to process animals within 20-30 minutes, the production of bacterial-contaminated blood plasma is 15-10 liters per hour, i.e. production of bacterial-contaminated plasma up to a volume of 150 liters is carried out in 10-15 hours, during which the plasma is stored in a plasma receiver located in non-sterile rooms at the place of blood collection and its separation. An even longer process is characteristic for the production of plasma (serum) from abortion, placental blood of a person or from the cadaveric blood of fur animals. In the known method, the process of inactivation of bacterial microflora requires the introduction of a concentrated 40% phenol solution under conditions of cooling the feed to (10 ± 1) ° C and incubating the phenolized plasma for 5 days. Subsequent introduction of dry ammonium sulfate is limited to a concentration of 50% of saturation, which exceeds the known concentration of 33% of saturation and promotes the precipitation of proteins from the albumin-transferrin fraction in the composition of gamma globulins. Thus, the inactivation of bacterial microflora in the raw material procurement is carried out only 10-15 hours after receiving plasma (serum) of blood in non-sterile rooms. In addition, bactericidal conditions are achieved by introducing a 40% phenol solution into the plasma or blood serum, which has a local protein-denaturing effect in the indicated concentration, and the phenolized plasma exposure process itself requires cooling to a temperature of (10 ± 1) ° C and continues within 5 days. Subsequent introduction of ammonium sulfate to a concentration of 50% of saturation is also determined by the creation of bactericidal and bacteriostatic conditions that violate the distribution of plasma proteins (serum) of blood fractions of gamma globulins and albumin, under the influence of the specified concentration of ammonium sulfate.
Задача изобретения состоит в создании способа инактивации микрофлоры за счет использования бактерицидно-фракционирующих свойств фенольно-сульфатных растворов, в которых инкубируются плазма или сыворотка крови по мере сепарирования индивидуальных или пулированных кроводач в нестерильных помещениях. За счет дробного внесения образцов плазмы или сыворотки крови осуществляется разведение фенольно-сульфатных растворов до конечных концентраций сульфата аммония 27% или 33% от насыщения (1,09 и 1,34 моль/л) и бактериостатических концентраций фенола до 0,3-0,4%.The objective of the invention is to create a method of inactivation of microflora through the use of bactericidal-fractionating properties of phenol-sulfate solutions, in which plasma or blood serum is incubated as individual or pooled blood flows are separated in non-sterile rooms. Due to the fractional introduction of plasma or serum samples, phenol-sulfate solutions are diluted to final concentrations of ammonium sulfate 27% or 33% of saturation (1.09 and 1.34 mol / l) and bacteriostatic phenol concentrations to 0.3-0, four%.
Длительность инкубирования плазмы или сыворотки в фенольно-сульфатном растворе определяется интенсивностью сепарирования крови и изготовления индивидуальных или пулированных образцов. В промышленном варианте без изменений локализации целевых белков и белкового спектра нехроматографических фракций процесс загрузки сырья может продолжаться в течение 5-13 часов при интенсивности дробного разведения от 1,079 до 1,011 исходных концентратов фенольно-сульфатных растворов образцами плазмы или сыворотки с интервалом 10-30 минут по мере их изготовления сепарированием крови. В лабораторном варианте белковый спектр фракций и содержание целевых белков также носят постоянный характер при порционном либо одновременном внесении сырьевой заготовки. После отделения центрифугированием гамма-глобулинов в надосадочный раствор вносят сухой порошок сульфата аммония до концентрации 75% от насыщения (3,04 моль/л) и снижают рН до 4,6±0,1. После отделения осадка альбуминов в безбелковый центрифугат добавляют фенол до расчетной концентрации 1,0% и используют его для суспендирования осадков гамма-глобулинов (полуфабрикаты иммуноглобулиновых биопрепаратов) и осадков альбумина (полуфабрикаты альбуминовых биопрепаратов).The duration of incubation of plasma or serum in a phenol-sulfate solution is determined by the intensity of blood separation and the manufacture of individual or pooled samples. In the industrial version, without changing the localization of the target proteins and the protein spectrum of non-chromatographic fractions, the raw material loading process can continue for 5-13 hours at a fractional dilution rate of 1.079 to 1.011 of the initial concentrates of phenol-sulfate solutions by plasma or serum samples with an interval of 10-30 minutes as their manufacture by blood separation. In the laboratory version, the protein spectrum of the fractions and the content of the target proteins are also constant in the case of portioned or simultaneous introduction of the raw material. After separation of gamma globulins by centrifugation, dry ammonium sulfate powder is added to the supernatant to a concentration of 75% of saturation (3.04 mol / L) and the pH is reduced to 4.6 ± 0.1. After separation of the albumin precipitate, phenol is added to the protein-free centrifuge to a calculated concentration of 1.0% and it is used to suspend gamma globulin precipitates (semi-finished products of immunoglobulin biological products) and albumin precipitates (semi-finished albumin biological products).
Поставленная задача решается за счет использования сульфатно-фенольных растворов, обладающих бактерицидно-бактериостатическим и фракционирующим свойствами. Для инкубирования образцов плазмы (сыворотки) крови исходно используется 80% или 100% от насыщения (3,24 или 4,05 моль/л) раствор сульфата аммония с (1,0±0,1)% фенола, который разбавляется до концентрации сульфата аммония 27% или 33% от насыщения (1,09 или 1,34 моль/л) и (0,35±0,05)% фенола за счет внесения образцов плазмы (сыворотки) по мере сепарирования крови. Альбуминовые фракции плазмы (сыворотки) крови осаждают за счет внесения сухого сульфата аммония до концентрации 75% от насыщения (3,04 моль/л) при остаточной концентрации фенола (0,35±0,05) % и доведения значения рН до 4,6±0,1. Для суспендирования осадков используется фенольно-сульфатный центрифугат, полученный после осаждения альбумина, в который вносят дополнительное количество фенола. Таким образом, в фенольно-сульфатных суспензиях полуфабрикатов биопрепаратов конечная концентрация фенола составляет (0,8±0,3)%, а сульфата аммония более 50% от насыщения (2,03 моль/л) в пределах 61-75% от насыщения.The problem is solved by using sulfate-phenolic solutions with bactericidal, bacteriostatic and fractionating properties. To incubate blood plasma (serum) samples, 80% or 100% of saturation (3.24 or 4.05 mol / L) of ammonium sulfate solution with (1.0 ± 0.1)% phenol, which is diluted to sulfate concentration, is initially used. ammonia 27% or 33% of saturation (1.09 or 1.34 mol / L) and (0.35 ± 0.05)% phenol due to the introduction of plasma (serum) samples as blood is separated. Blood albumin fractions (serum) are precipitated by adding dry ammonium sulfate to a concentration of 75% of saturation (3.04 mol / L) with a residual phenol concentration of (0.35 ± 0.05)% and adjusting the pH to 4.6 ± 0.1. Phenol-sulfate centrifugate obtained after precipitation of albumin, into which additional phenol is added, is used to suspend precipitation. Thus, in phenol-sulfate suspensions of semi-finished biological products, the final concentration of phenol is (0.8 ± 0.3)%, and ammonium sulfate is more than 50% of saturation (2.03 mol / l) within 61-75% of saturation.
Изложенный подход апробирован в лабораторном варианте для изготовления и хранения видовых заготовок плазмы (сыворотки) лабораторных животных объемом от 125 мл до 1250 мл и в промышленных условиях до объемов 125-250 литров плазмы (сыворотки) крови сельскохозяйственных животных и пушных зверей.The described approach has been tested in the laboratory version for the manufacture and storage of species blanks of plasma (serum) of laboratory animals with volumes from 125 ml to 1250 ml and under industrial conditions up to volumes of 125-250 liters of plasma (serum) of blood of farm animals and fur animals.
Из анализа уровня техники следует, что фенол в концентрациях 0,5-5% используется для дезактивации бактерий и вирусов [19. Avram N., Paunescu G.Н., Gradinary D. et al. La resistance du virus de la leucose bovine (VLB) a certains agents physiques et chimiques / Bull. Acad. Sc. Agr. Forest, 1980, 10, p. 205-209; 20. Европейская заявка №0281978 «Инактивирование вируса СПИД в содержащих белок растворах при помощи фенола». Опубликовано РЖ ИСМ 44-65-89; 21. Красильников А.П. «Справочник по антисептике», Минск: «Вышэйшая школа», 1995, с. 122-123]. Опубликованы также условия фракционирования белков плазмы (сыворотки) крови с помощью внесения насыщенных растворов сульфата аммония до необходимых концентраций в составе инкубационной среды [22. Suomela Н. An Ion Exchange Method for Immunoglobulin G production. In: Methods of Plasma Protein Fractionation / Ed. J.M. Curling. Academic Press, London, UK, 1980, p. 107-116; 23. Скоупс P.K. Методы очистки белков. M.: Мир, 1985, 358 с; 24. Черкасов А.Н., Пасечник В.А. Мембраны и сорбенты в биотехнологии. - Л.: Химия, 1991, 240 с.]. Традиционный способ фракционирования коллоидных растворов, сложных по составу индивидуальных белков, основан на капельно-струйном внесении насыщенного раствора сульфата аммония до его конечных концентраций в инкубационной среде, но не наоборот, когда насыщенный раствор сульфата аммония разбавляют до необходимой концентрации плазмой или сывороткой крови. В известном способе концентрированный (40%) раствор фенола, способный вызвать локальную денатурацию белка, вносят в состав плазмы или сыворотки крови. Снижение максимальной концентрации фенола в процессе заготовки до (1,0±0,1)% создает условия для исключения белок-денатурирующих эффектов, индуцированных высокой концентрацией дезинфектанта. После обработки фенолом в состав плазмы или сыворотки крови в известном способе вносят сухой порошок сульфата аммония до концентрации 50% от насыщения, что не позволяет в полной мере реализовать принципы фракционирования белков под действием сульфата аммония. Использование насыщенного раствора сульфата аммония с рН 7,0±0,1 и снижение концентрации фракционирующего реагента (сульфата аммония) до 33% или 27% от насыщения за счет разведения образцами плазмы или сыворотки позволяет достичь надлежащего уровня селективности фракционирования. В известном способе экспозиция фенолизированной плазмы осуществляется в течение 5 дней и температуре (10±1)°C. Однако, используемые концентрации фенола (0,7±0,2)% не оказывают существенного действия на активность протеаз и, как следствие этого, известное техническое решение обеспечивает в течение не менее 5 дней нежелательный фермент-индуцированный процесс гидролиза белков плазмы или сыворотки крови [18. Патент RU №2338375. Способ хранения плазмы или сыворотки крови для получения иммуноглобулиновых и альбуминовых биопрепаратов. Опубл. 20.11.2008 г. Бюл. №32] (прототип).From the analysis of the prior art it follows that phenol in concentrations of 0.5-5% is used to deactivate bacteria and viruses [19. Avram N., Paunescu G.N., Gradinary D. et al. La resistance du virus de la leucose bovine (VLB) a certains agents physiques et chimiques / Bull. Acad. Sc. Agr. Forest, 1980, 10, p. 205-209; 20. European application No. 0281978 "Inactivation of the AIDS virus in protein-containing solutions using phenol." Published by RJ ISM 44-65-89; 21. Krasilnikov A.P. “Handbook of Antiseptics”, Minsk: “Higher School”, 1995, p. 122-123]. Also published are the conditions for the fractionation of plasma proteins (serum) of blood by introducing saturated solutions of ammonium sulfate to the required concentrations in the incubation medium [22. Suomela N. An Ion Exchange Method for Immunoglobulin G production. In: Methods of Plasma Protein Fractionation / Ed. J.M. Curling. Academic Press, London, UK, 1980, p. 107-116; 23. Scopes P.K. Protein purification methods. M .: Mir, 1985, 358 s; 24. Cherkasov A.N., Pasechnik V.A. Membranes and sorbents in biotechnology. - L .: Chemistry, 1991, 240 pp.]. The traditional method of fractionating colloidal solutions, complex in composition of individual proteins, is based on the drip-jet application of a saturated solution of ammonium sulfate to its final concentration in an incubation medium, but not vice versa, when a saturated solution of ammonium sulfate is diluted to the required concentration with plasma or blood serum. In the known method, a concentrated (40%) phenol solution capable of causing local protein denaturation is introduced into the plasma or blood serum. Reducing the maximum concentration of phenol in the procurement process to (1.0 ± 0.1)% creates the conditions for the exclusion of protein-denaturing effects induced by a high concentration of disinfectant. After treatment with phenol, a dry powder of ammonium sulfate is added to the plasma or blood serum in a known method to a concentration of 50% of saturation, which does not allow to fully realize the principles of protein fractionation under the influence of ammonium sulfate. The use of a saturated solution of ammonium sulfate with a pH of 7.0 ± 0.1 and a decrease in the concentration of the fractionating reagent (ammonium sulfate) to 33% or 27% of the saturation due to dilution of plasma or serum by the samples allows achieving the proper level of fractionation selectivity. In the known method, the exposure of phenolized plasma is carried out for 5 days and a temperature of (10 ± 1) ° C. However, the phenol concentrations used (0.7 ± 0.2)% do not have a significant effect on the activity of proteases and, as a result, the known technical solution provides for at least 5 days an undesirable enzyme-induced process of hydrolysis of plasma proteins or blood serum [ eighteen. Patent RU No. 23338375. A method for storing plasma or blood serum to obtain immunoglobulin and albumin biological products. Publ. November 20, 2008 Bull. No. 32] (prototype).
На современном этапе развития науки и техники не известны использование фенольно-сульфатных растворов и их составы для инкубирования индивидуальных или пулированных образцов плазмы или сыворотки по мере их изготовления в нестерильных помещениях по месту заготовки и сепарирования крови с целью получения гамма-глобулиновой и альбуминовой фракций. При этом практически сразу же за счет использования высоких концентраций сульфата аммония ингибируется активность протеаз плазмы или сыворотки крови (см. Таблицы 1, 2, 3). Использование в исходном растворе концентрации сульфата аммония 100% от насыщения не позволяет примеси альбуминов из гамма-глобулиновой фракции (II класс вирусной опасности) переводить в альбуминовые полуфабрикаты (III класс вирусной опасности). При концентрации сульфата аммония 80% от насыщения в альбуминовой фракции (III класс вирусной опасности) регистрируются примеси IgG, которые по принципу «от чистого в грязное» возможно на последующих стадиях фракционирования переводить в состав полупродуктов иммуноглобулиновых биопрепаратов. В качестве примера (см. Фигура) приведен белковый спектр фракций гамма-глобулинов (1, 2) и альбумина (3, 4) и соответствующих полуфабрикатов, полученных из плазмы крови крупного рогатого скота, в условиях загрузки индивидуальных образцов в фенольно-сульфатные растворы при исходных концентрациях сульфата аммония 100% (2, 3) и 80% (1, 4) от насыщения. Последующее суспендирование осадков гамма-глобулинов и альбуминов в постальбуминовом центрифугате при концентрации сульфата аммония более 50% от насыщения и фенола (0,8±0,3)% обеспечивает ингибирование протеаз и инактивирование микрофлоры (см. Таблицы 3 и 4). Функциональную активность целевых белков оценивали по активности антител в составе иммуноглобулиновых полуфабрикатов после их хранения в течение 220 дней, в т.ч. при температуре (20±5)°C в течение 40 дней и (10±1)°C в течение 180 дней. Отсутствие достоверных различий в активности антител по результатам иммуноферментного анализа контрольных и опытных образцов свидетельствуют об отсутствии влияния схемы производства полуфабрикатов и состава консервирующего раствора на структуру-функцию IgG (см. Таблица 5). Очищенные формы IgG в электрофоретически гомогенной и хроматографически мономерной форме концентрировали до содержания белка 100 мг/мл, подвергали стерилизующей фильтрации и закладывали на хранение в течение 12 месяцев при температуре (5±3)°C. Наличие выявленных олигомеров в пределах до 5% и отсутствие фрагментированных форм IgG (см. Таблица 6) позволяет утверждать, что схема производства полуфабрикатов и условия их эксплуатации не влияют на структурные особенности видовых IgG, т.е. белков, наиболее склонных к олигомеризации, индуцированной качеством технологического процесса. В техническом решении изобретения реализован, также, энергосберегающий эффект. Не используются энергоемкие холодовые установки на всех стадиях производства полуфабрикатов, в т.ч. их хранение и транспортировка в течение 40 дней осуществляется без применения режима «холодовой цепи». Важно также, что процесс заготовки сырья по способу полуфабрикатов, организованный в отдаленных регионах России (на расстояниях транспортировки в течение 40 дней), обеспечивает распределение белков по фракциям, избирательно обогащенным IgG и альбумином. Последнее обстоятельство позволяет сортировать сырьевую заготовку по месту изготовления полуфабрикатов с целью определения допустимого уровня микробной контаминации и наличия вирусных геномов или антител к вирусспецифическим белкам с помощью непрямых схем иммуноферментного анализа или ПНР-диагностики. Возможность определения указанных выше показателей качества уже на стадии получения гамма-глобулиновой фракции является основанием для совершенствования приборно-методической базы внутризаводской системы контроля с целью обеспечения инфекционной безопасности при транспортировке полуфабрикатов и производстве на их основе фармацевтических биопрепаратов, целевые белки которых представлены конформационно нативными формами.At the present stage of the development of science and technology, the use of phenol-sulfate solutions and their compositions for incubating individual or pooled plasma or serum samples is not known as they are manufactured in non-sterile rooms at the place of blood preparation and separation in order to obtain gamma-globulin and albumin fractions. Moreover, almost immediately due to the use of high concentrations of ammonium sulfate, the activity of plasma or serum proteases is inhibited (see Tables 1, 2, 3). The use in the initial solution of a concentration of ammonium sulfate 100% of saturation does not allow the admixture of albumin from the gamma-globulin fraction (class II viral hazard) to be converted into albumin semi-finished products (class III viral hazard). At a concentration of ammonium sulfate of 80% of saturation in the albumin fraction (class III viral hazard) IgG impurities are recorded, which can be converted to intermediate semi-products of immunoglobulin biological products according to the “clean to dirty” principle. As an example (see the Figure), the protein spectrum of the fractions of gamma globulins (1, 2) and albumin (3, 4) and the corresponding semi-finished products obtained from cattle blood plasma under the loading of individual samples into phenol-sulfate solutions at initial concentrations of ammonium sulfate 100% (2, 3) and 80% (1, 4) of saturation. Subsequent suspension of gamma globulin and albumin precipitates in a postalbumin centrifuge at an ammonium sulfate concentration of more than 50% of saturation and phenol (0.8 ± 0.3)% provides protease inhibition and microflora inactivation (see Tables 3 and 4). The functional activity of the target proteins was evaluated by the activity of antibodies in the composition of immunoglobulin semi-finished products after their storage for 220 days, including at a temperature of (20 ± 5) ° C for 40 days and (10 ± 1) ° C for 180 days. The absence of significant differences in antibody activity according to the results of an enzyme-linked immunosorbent assay of control and experimental samples indicates the absence of the influence of the semi-finished product production scheme and the composition of the preservation solution on the IgG structure-function (see Table 5). The purified forms of IgG in electrophoretically homogeneous and chromatographically monomeric form were concentrated to a protein content of 100 mg / ml, subjected to sterilizing filtration and stored for 12 months at a temperature of (5 ± 3) ° C. The presence of detected oligomers up to 5% and the absence of fragmented forms of IgG (see Table 6) allows us to state that the production scheme of semi-finished products and their operating conditions do not affect the structural features of species IgG, i.e. proteins most prone to oligomerization, induced by the quality of the process. The technical solution of the invention also implements an energy-saving effect. Energy-intensive refrigeration units are not used at all stages of the production of semi-finished products, including their storage and transportation for 40 days is carried out without the use of the “cold chain” mode. It is also important that the process of harvesting raw materials by the method of semi-finished products, organized in remote regions of Russia (at transportation distances for 40 days), ensures the distribution of proteins in fractions selectively enriched with IgG and albumin. The latter circumstance allows us to sort the raw material blank at the place of manufacture of semi-finished products in order to determine the acceptable level of microbial contamination and the presence of viral genomes or antibodies to virus-specific proteins using indirect enzyme-linked immunosorbent assay or PNR diagnostics. The ability to determine the above quality indicators already at the stage of obtaining the gamma-globulin fraction is the basis for improving the instrumentation base of the in-plant control system in order to ensure infection safety during the transportation of semi-finished products and the production of pharmaceutical biological products based on them, the target proteins of which are represented by conformationally native forms.
Пример реализации предлагаемого способаAn example implementation of the proposed method
Стадия 1. Подготовка бактерицидно-фракционирующего раствора. Готовят бактерицидно-фракционирующий раствор на основе 80% (3,24 моль/л) или 100% (4,05 моль/л) от насыщения раствора сульфата аммония с 1% фенолом. Для этого в лабораторном варианте в мерную колбу объемом 1000 мл набирают 500 мл дистиллированной воды с температурой 25-30°C, взвешивают 10 г кристаллического фенола и при перемешивании на магнитной мешалке растворяют навеску фенола в воде. После полного растворения фенола взвешивают сульфат аммония 427 г для 80%-насыщенного (3,24 моль/л) раствора или 534,0 г для 100%-насыщенного (4,05 моль/л) раствора и при перемешивании вышеуказанным способом добавляют порционно навеску сульфата аммония. Далее доводят уровень дистиллированной водой до 1000 мл в мерной колбе и продолжают перемешивание до полного растворения сульфата аммония. При уменьшении уровня раствора, его доводят до 1000 мл дистиллированной водой.
В промышленном варианте в емкость с мерником заливают 35 л дистиллированной воды с температурой 25-30°C. Взвешивают 630 г кристаллического фенола и добавляют в емкость с водой при перемешивании якорной мешалкой на скорости 60-70 об/мин. Перемешивание ведут до полного растворения фенола. После полного растворения фенола взвешивают сульфат аммония 26,9 кг для 80%-насышенного (3,24 моль/л) раствора или 33,6 кг для 100%-насыщенного (4,05 моль/л) раствора и при перемешивании вышеуказанным способом добавляют порционно навеску сульфата аммония. Далее доводят уровень дистиллированной водой до 63 л и продолжают перемешивание до полного растворения сульфата аммония. При уменьшении уровня раствора, его доводят до 63 л дистиллированной водой.In an industrial embodiment, 35 l of distilled water with a temperature of 25-30 ° C is poured into a container with a measuring cup. 630 g of crystalline phenol is weighed and added to a container with water while stirring with an anchor stirrer at a speed of 60-70 rpm. Stirring is carried out until phenol is completely dissolved. After the phenol is completely dissolved, ammonium sulfate is weighed 26.9 kg for an 80% saturated (3.24 mol / L) solution or 33.6 kg for a 100% saturated (4.05 mol / L) solution and added with stirring as above portioned portion of ammonium sulfate. Next, the level is adjusted with distilled water to 63 L and stirring is continued until ammonium sulfate is completely dissolved. With a decrease in the level of the solution, it is brought to 63 liters with distilled water.
Стадия 2. Подведение значения рН бактерицидно-фракционирующего раствора. По окончании растворения отбирают в химический стакан объемом 25 мл 1 мл раствора и разводят 19 мл дистиллированной воды. Измеряют значение рН раствора на рН-метре типа Radelkis ОР-271/1. Затем титруют раствор 1М NaHCO3 до рН 7,0-7,5. Объем 1М NaHCO3, потребовавшийся на титрование, умножают на соотношение исходного объема и объема, взятого на титрование. Полученный объем 1М NaHCO3 при перемешивании вышеуказанным способом добавляют в инактивирующий раствор. Перемешивают 10 минут и контролируют рН ранее описанным способом.
Стадия 3. Контроль показателей качества бактерицидно-фракционирующего раствора. Приготовленный раствор контролируют по концентрации фенола и сульфата аммония в соответствии с известными методами [25. ГОСТ 31940-2012 - Вода питьевая. Методы определения содержания сульфатов; 26. Методические указания МУК 4.1/4.2.588-96 - Методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов, вводимых людям].
Стадия 4. Внесение или загрузка образцов плазмы в процессе сепарирования индивидуальных или объединенных кроводач. К бактерицидно-фракционирующему раствору приливают плазму (сыворотку) крови порционно или однократно (для целей лабораторных исследований), либо порционно в условиях промышленного производства.
В лабораторном варианте нами апробированы нижеследующие объемы: от 63 мл до 630 мл бактерицидно-фракционирующего раствора и от 125 мл до 1250 мл плазмы (сыворотки) крови. Плазму (сыворотку) крови вносят в бактерицидно-фракционирующий раствор порционно или одновременно при перемешивании на магнитной или механической мешалке и перемешивают дополнительно в течение 2 ч при температуре 18-25°C.In the laboratory version, we tested the following volumes: from 63 ml to 630 ml of a bactericidal fractionating solution and from 125 ml to 1250 ml of blood plasma (serum). Blood plasma (serum) is introduced into the bactericidal fractionating solution portionwise or simultaneously with stirring on a magnetic or mechanical stirrer and stirred for an additional 2 hours at a temperature of 18-25 ° C.
В промышленном варианте в реактор емкостью 200 л, наполненный 63 л бактерицидно-фракционирующего раствора, плазму (сыворотку) крови вносят порционно от 1 до 5 литров с интервалом 10 минут до конечного объема загруженной плазмы (сыворотки) - 125 л, при перемешивании якорной мешалкой на скорости 60-70 об/мин. Дополнительное время перемешивания после полного объема загрузки (125 л) плазмы (сыворотки) крови составляет 2 часа.In an industrial embodiment, a reactor with a capacity of 200 l filled with 63 l of a bactericidal fractionating solution, blood plasma (serum) is introduced portionwise from 1 to 5 liters with an interval of 10 minutes to a final volume of loaded plasma (serum) - 125 l, with stirring with an anchor stirrer speeds of 60-70 rpm. The additional mixing time after the full volume of loading (125 l) of plasma (serum) is 2 hours.
Стадия 5. Осаждение гамма-глобулиновой фракции. Суспензию подвергают центрифугированию в лабораторных условиях на центрифугах типа РС-6 при напряженности гравитационного поля 4200 g в течение 30 минут или в промышленном варианте с помощью промышленных центрифуг типа ОТР-1 при напряженности гравитационного поля 10000-16000 g при скорости потока 60 л/час.Stage 5. Precipitation of the gamma globulin fraction. The suspension is subjected to laboratory centrifugation on RS-6 centrifuges at a gravitational field of 4200 g for 30 minutes or in an industrial version using industrial OTP-1 centrifuges at a gravitational field of 10000-16000 g at a flow rate of 60 l / h.
При лабораторном фракционировании в состав гамма-глобулиновой фракции переходит 30-60% от общего белка плазмы (сыворотки) крови.In laboratory fractionation, 30-60% of the total plasma protein (serum) of the blood passes into the gamma-globulin fraction.
При промышленном фракционировании осадки гамма-глобулиновой фракции собирают, вес сырого осадка составляет 20-50 кг, а концентрация белка 50-200 г/кг осадка.In industrial fractionation, gamma globulin fraction precipitates are collected, the weight of the crude precipitate is 20-50 kg, and the protein concentration is 50-200 g / kg of sediment.
В надосадочном растворе альбуминовой фракции концентрация белка колеблется в пределах 20-50 мг/мл.In the supernatant solution of the albumin fraction, the protein concentration ranges from 20-50 mg / ml.
При промышленном фракционировании объем альбуминовой фракции составляет 130-160 литров.In industrial fractionation, the volume of the albumin fraction is 130-160 liters.
Стадия 6. Получение осадка альбуминовой фракции. Осаждение альбуминовой фракции осуществляют внесением в надосадочный раствор сухого порошка сульфата аммония из расчета 250-290 г/л на 1 л раствора. Сульфат аммония добавляют порционно или одновременно при постоянном перемешивании. После растворения сульфата аммония значение рН инкубационной среды доводят до 4,6±0,1 с помощью 1 моль/л раствора соляной кислоты в соответствии с методикой, описанной выше. Время дополнительного перемешивания составляет 2 часа.Stage 6. Obtaining precipitate of the albumin fraction. Precipitation of the albumin fraction is carried out by adding to the supernatant solution a dry powder of ammonium sulfate at a rate of 250-290 g / l per 1 liter of solution. Ammonium sulfate is added portionwise or simultaneously with constant stirring. After dissolution of ammonium sulfate, the pH of the incubation medium is adjusted to 4.6 ± 0.1 with a 1 mol / L hydrochloric acid solution in accordance with the procedure described above. The additional mixing time is 2 hours.
Суспензию центрифугируют в лабораторных условиях на центрифугах типа РС-6 при напряженности гравитационного поля 4200 g в течение 30 мин. В промышленном варианте используют проточные центрифуги типа ОТР-1, при скорости потока 60 л/час и напряженности гравитационного поля 10000-16000 g.The suspension is centrifuged in laboratory conditions on a PC-6 centrifuge with a gravitational field of 4200 g for 30 minutes. In the industrial version, flow-through centrifuges of the OTR-1 type are used, at a flow rate of 60 l / h and a gravitational field of 10000-16000 g.
В лабораторном варианте масса осадков значения не имеет. При промышленном фракционировании вес осадков составляет 20-50 кг, а концентрация белка 40-150 г/кг сырого осадка.In the laboratory version, the mass of precipitation does not matter. In industrial fractionation, the weight of sediments is 20–50 kg, and the protein concentration is 40–150 g / kg of crude sediment.
Стадия 7. Приготовление консервирующего раствора из надосадочной жидкости, полученной после осаждения белков альбуминовой фракции (постальбуминовый центрифугат). В надосадочном растворе концентрация белка не должна превышать 1 мг/мл.Stage 7. Preparation of a preservative solution from the supernatant obtained after precipitation of proteins of the albumin fraction (postalbumin centrifuge). In the supernatant, the protein concentration should not exceed 1 mg / ml.
Для приготовления консервирующего раствора к раствору центрифугата (постальбуминовый центрифугат) добавляют необходимое количество 40% раствора фенола в глицерине до конечной концентрации 1,0%. Далее раствор перемешивают в течение 30 минут. Затем значение рН инкубационной среды доводят до 6,0±0,1 с помощью 1 моль/л раствора гидроксида натрия в соответствии с методикой, описанной выше.To prepare a preservative solution, the necessary amount of a 40% solution of phenol in glycerol is added to a centrifugate solution (postalbumin centrifuge) to a final concentration of 1.0%. Then the solution is stirred for 30 minutes. Then, the pH of the incubation medium is adjusted to 6.0 ± 0.1 with a 1 mol / L sodium hydroxide solution in accordance with the procedure described above.
Стадия 8. Приготовление полуфабрикатов иммуноглобулиновых и альбуминовых биопрепаратов. Сырые осадки гамма-глобулина и альбумина суспендируют в консервирующем растворе из расчета на 1 весовую часть сырого осадка добавляют 2 объема консервирующего раствора и перемешивают в течение 2 часов до образования однородной суспензии.Stage 8. Preparation of semi-finished products of immunoglobulin and albumin biological products. The crude precipitates of gamma globulin and albumin are suspended in a preservative solution, based on 1 part by weight of the crude precipitate, 2 volumes of preservative solution are added and stirred for 2 hours until a homogeneous suspension is formed.
Информация, использованная при подготовке заявки на патентInformation used in preparing a patent application
1. Guidelines on viral inactivation and removal procedures intended to assure the viral safety of human blood plasma products // WHO Technical Report, Series №.924, 2004, p. 151-219;1. Guidelines on viral inactivation and removal procedures intended to assure the viral safety of human blood plasma products // WHO Technical Report, Series No. 924, 2004, p. 151-219;
2. Панов В.П. Принципы обеспечения вирусной безопасности продуктов крови (обзор). // Хим.-фарм. журнал. 2004, т. 38, №3, с. 39-47;2. Panov V.P. Principles for ensuring the viral safety of blood products (review). // Chem.-farm. Journal. 2004, t. 38, No. 3, p. 39-47;
3. Horowitz В. Investigations into the application of tri(n-butyl)phosphate/detergent mixtures to blood derivatives. Current Studies in Hematology and Blood Transfusion, 1989, p. 83-96;3. Horowitz B. Investigations into the application of tri (n-butyl) phosphate / detergent mixtures to blood derivatives. Current Studies in Hematology and Blood Transfusion, 1989, p. 83-96;
4. Kao K.J. Effects of leukocyte depletion and UVB irradiation on allogenecity of major histocompatibility antigens in platelet concentrates: a comparative study // Blood, 1992, p. 2931-2937;4. Kao K.J. Effects of leukocyte depletion and UVB irradiation on allogenecity of major histocompatibility antigens in platelet concentrates: a comparative study // Blood, 1992, p. 2931-2937;
5. Guidelines on viral inactivation and removal procedures intended to assure the viral safety of human blood plasma products // WHO Technical Report, Series №924, 2004, p. 151-219;5. Guidelines on viral inactivation and removal procedures intended to assure the viral safety of human blood plasma products // WHO Technical Report, Series No. 924, 2004, p. 151-219;
6. Сборник «Препараты крови. Инструктивно-методические материалы по контролю и производству» под редакцией Буренкова С.П. М: Изд-во Минздрава СССР, 1976, с. 203-218;6. Collection "Blood products. Guidance materials on control and production ”edited by SP Burenkov M: Publishing House of the Ministry of Health of the USSR, 1976, p. 203-218;
7. Русанов В.Н., Скобелев Л.И. «Фракционирование белков плазмы в производстве препаратов крови». - М.: Медицина, 1983, с. 49-83;7. Rusanov V.N., Skobelev L.I. "Fractionation of plasma proteins in the production of blood products." - M .: Medicine, 1983, p. 49-83;
8. Руководство по организации, обслуживанию и использованию оборудования холодовой цепи для крови. Женева: Всемирная организация здравоохранения, 2009 г., с. 8-9;8. Guidelines for the organization, maintenance and use of blood cold chain equipment. Geneva: World Health Organization, 2009, p. 8-9;
9. Жибурт Е.Б. «Трансфузиология: учебник». СПб: Питер, 2002, 736 с.;9. Zhiburt E.B. "Transfusiology: a textbook." St. Petersburg: Peter, 2002, 736 p .;
10. Патент RU №2151617, А61М 1/38, опубл. 27.06.2000;10. Patent RU No. 2151617,
11. Чард Т. «Радиоиммунологические методы». М.: Мир, 1981, с. 48;11. Chard T. "Radioimmunological methods." M .: Mir, 1981, p. 48;
12. 3убкова Н.Б. Биотехнологические аспекты эффективной и безопасной переработки донорской плазмы: проблемы и перспективы // Биопрепараты. - 2014, №1, с. 4-10;12.3ubkova N.B. Biotechnological aspects of effective and safe processing of donor plasma: problems and prospects // Biological products. - 2014, No. 1, p. 4-10;
13. Исрафилов А.Г. и др. Опыт получения апирогенных препаратов // Тезисы докладов IV Российского национального конгресса «Человек и лекарство», Москва 8-12 апреля 1997 г.: сборник «Человек и лекарство». Российский нац. конгр. (4; 1997; Москва). - М.: "ФАРМЕДИНФО", 1997. - с. 54;13. Israfilov A.G. et al. Experience in obtaining pyrogen-free drugs // Abstracts of the IV Russian National Congress “Man and Medicine”, Moscow April 8-12, 1997: collection “Man and Medicine”. Russian nat. Congr. (4; 1997; Moscow). - M .: "PHARMEDINFO", 1997. - p. 54;
14. Zhurina N.A., Shatskaia Т.L., Katushkina N.V. The virological safety and bacterial sterility of a method for fractionating blood plasma proteins with rivanol // Zh. Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol. 1993, 1: p.45-48;14. Zhurina N.A., Shatskaia T.L., Katushkina N.V. The virological safety and bacterial sterility of a method for fractionating blood plasma proteins with rivanol // Zh. Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol. 1993, 1: p. 45-48;
15. Colvin В.T. Effect of dry heating of coagulation factor concentrates at 80°C for 72 hours on transmission of non-A, non-B hepatitis // Lancet. - 1988. - p. 814-816;15. Colvin B.T. Effect of dry heating of coagulation factor concentrates at 80 ° C for 72 hours on transmission of non-A, non-B hepatitis // Lancet. - 1988. - p. 814-816;
16. Brackmann H.H., Egli H. Acute hepatitis В infection after treatment with heatinactivated factor VIII concentrate // Lancet, 1988, p. 967;16. Brackmann H.H., Egli H. Acute hepatitis B infection after treatment with heatinactivated factor VIII concentrate // Lancet, 1988, p. 967;
17. Wages D., Smith D., Walsh J. et all. Virally inactivated fresh frozen plasma transfusion in normal volunteers // Vox Sang 1998; 74, Suppl 1: p. 1290;17. Wages D., Smith D., Walsh J. et all. Virally inactivated fresh frozen plasma transfusion in normal volunteers // Vox Sang 1998; 74, Suppl 1: p. 1290;
18. Патент RU №2338375. Способ хранения плазмы или сыворотки крови для получения иммуноглобулиновых и альбуминовых биопрепаратов. Опубл. 20.11.2008 г. Бюл. №32 (прототип);18. Patent RU No. 23338375. A method for storing plasma or blood serum to obtain immunoglobulin and albumin biological products. Publ. November 20, 2008 Bull. No. 32 (prototype);
19. Avram N., Paunescu G.Н., Gradinary D. et al. La resistance du virus de la leucose bovine (VLB) a certains agents physiques et chimiques / Bull. Acad. Sc. Agr. Forest, 1980, 10, p. 205-209;19. Avram N., Paunescu G.N., Gradinary D. et al. La resistance du virus de la leucose bovine (VLB) a certains agents physiques et chimiques / Bull. Acad. Sc. Agr. Forest, 1980, 10, p. 205-209;
20. Европейская заявка №0281978 «Инактивирование вируса СПИД в содержащих белок растворах при помощи фенола». Опубликовано РЖ ИСМ 44-65-89;20. European application No. 0281978 "Inactivation of the AIDS virus in protein-containing solutions using phenol." Published by RJ ISM 44-65-89;
21. Красильников А.П. «Справочник по антисептике», Минск: «Вышэйшая школа», 1995, с. 122-123;21. Krasilnikov A.P. “Handbook of Antiseptics”, Minsk: “Higher School”, 1995, p. 122-123;
22. Suomela Н. An Ion Exchange Method for Immunoglobulin G production. In: Methods of Plasma Protein Fractionation / Ed. J.M. Curling. Academic Press, London, UK, 1980, p. 107-116;22. Suomela H. An Ion Exchange Method for Immunoglobulin G production. In: Methods of Plasma Protein Fractionation / Ed. J.M. Curling. Academic Press, London, UK, 1980, p. 107-116;
23. Скоупс P.К. Методы очистки белков. M.: Мир, 1985, 358 с.;23. Scopes P.K. Protein purification methods. M .: Mir, 1985, 358 p .;
24. Черкасов А.Н., Пасечник В.А. Мембраны и сорбенты в биотехнологии. - Л.: Химия, 1991, 240 с.;24. Cherkasov A.N., Pasechnik V.A. Membranes and sorbents in biotechnology. - L .: Chemistry, 1991, 240 p .;
25. ГОСТ 31940-2012 - Вода питьевая. Методы определения содержания сульфатов;25. GOST 31940-2012 - Drinking water. Methods for determining the content of sulfates;
26. Методические указания МУК 4.1/4.2.588-96 - Методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов, вводимых людям.26. Guidelines MUK 4.1 / 4.2.588-96 - Methods of control of medical immunobiological preparations administered to people.
Примечание: М - средняя арифметическая; ±m - стандартное отклонение; Р - уровень значимости различий; n=5; К - контрольные образцы готовили, отбирая часть из сырых осадков γ-глобулиновой фракции плазмы крови, формирующейся при конечных концентрациях сульфата аммония и фенола, соответственно 33% от насыщения и 0,3%. Осадки суспендировали (вес/объем) в 9 объемах раствора сульфата аммония 50% от насыщения, рН (7,0±0,1) и помещали на хранение при температуре (5±3)°C. О - полуфабрикаты (опытные образцы), представлены теми же γ-глобулиновыми фракциями, которые суспендировали в фенольно-сульфатных растворах (конечные концентрации сульфата аммония - 50% от насыщения и фенола - 1±0,1%) в соотношении (вес/объем) 1:2 при рН (7,0±0,1) и хранили в течение 40 дней при температуре (15-25)°C и далее 180 дней при температуре (10±1)°C.Note: M - arithmetic mean; ± m is the standard deviation; P is the level of significance of differences; n is 5; K - control samples were prepared by taking part from the crude precipitate of the γ-globulin fraction of blood plasma, which forms at final concentrations of ammonium sulfate and phenol, respectively 33% of saturation and 0.3%. Precipitation was suspended (weight / volume) in 9 volumes of a solution of ammonium sulfate 50% of saturation, pH (7.0 ± 0.1) and stored at a temperature of (5 ± 3) ° C. O - semi-finished products (test samples), represented by the same γ-globulin fractions, which were suspended in phenol-sulfate solutions (final concentration of ammonium sulfate - 50% of saturation and phenol - 1 ± 0.1%) in the ratio (weight / volume) 1: 2 at pH (7.0 ± 0.1) and stored for 40 days at a temperature of (15-25) ° C and then 180 days at a temperature of (10 ± 1) ° C.
В контрольных и опытных образцах, представленных растворами γ-глобулинов или IgG, выделенных из их состава по ранее опубликованной методике («Прикладная биохимия и биотехнология», 2009, том 45, №3, с. 378-383), определяли активность антител. Общую концентрацию белка в исследуемых образцах устанавливали в пределах (15±1) мг/мл. Анализ выполняли в соответствии с инструктивно-методическими указаниями для иммуноферментного выявления антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота (Veri Test, ООО «Ветбиохим»), вирусу инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота (ИРТ-Серотест, ООО «Ветбиохим») и иммуноглобулинов класса G к вирусу клещевого энцефалита (Векто ВКЭ-IgG, ЗАО «Вектор-Бест»). О сохранности активности антител судили по величине оптической плотности контрольных и опытных образцов при разведении их в 26 раз «Veri Test» или в 100 раз «ИРТ-Серотест» и «Векто ВКЭ-IgG». Отсутствие достоверных различий в величинах ОП между контрольными и опытными образцами свидетельствует о сохранности функциональной активности антител из класса IgG в составе полуфабрикатов при концентрации фенола (1±0,1) % и концентрации сульфата аммония в пределах 50-75% от насыщения в течение 220 дней хранения, в т.ч. в течение 40 дней при температуре (20±5)°C.Antibody activity was determined in control and experimental samples represented by solutions of γ-globulins or IgG isolated from their composition according to a previously published procedure (Applied Biochemistry and Biotechnology, 2009, Volume 45, No. 3, pp. 378-383). The total protein concentration in the test samples was set within (15 ± 1) mg / ml. The analysis was performed in accordance with the guidelines for enzyme-linked immunosorbent assay for antibodies to cattle leukemia virus (Veri Test, LLC Vetbiokhim), infectious rhinotracheitis virus in cattle (IRT Serotest, LLC Vetbiokhim) and class G immunoglobulins to tick-borne encephalitis virus (Vekto VKE-IgG, CJSC Vector-Best). The safety of antibody activity was judged by the optical density of the control and experimental samples when they were diluted 26 times with “Veri Test” or 100 times with “IRT-Serotest” and “Vecto VKE-IgG”. The absence of significant differences in the OD values between the control and experimental samples indicates the preservation of the functional activity of antibodies from the IgG class in semi-finished products at a phenol concentration of (1 ± 0.1)% and an ammonium sulfate concentration in the range of 50-75% of saturation for 220 days storage, including within 40 days at a temperature of (20 ± 5) ° C.
n (количество экспериментов)=3, ЛКРС - лейкоз крупного рогатого скота, ИРТ - инфекционный ринотрахеит, КЭ - клещевой энцефалит.n (number of experiments) = 3, LCRS - cattle leukemia, IRT - infectious rhinotracheitis, CE - tick-borne encephalitis.
Уровень олигомеризации IgG определяли следующим образом. Исходно получали фенольно-сульфатный полуфабрикат согласно описанной методике в настоящем патенте. Далее, после удаления сульфат ионов (патент №2338375 «Способ хранения плазмы или сыворотки крови для получения иммуноглобулиновых и альбуминовых биопрепаратов»), из полученных полуфабрикатов выделяли электрофоретически гомогенные и хроматографически мономерные образцы IgG (Прикладная биохимия и биотехнология», 2009, том 45, №3, с. 378-383). Полученные образцы IgG концентрировали до 100 мг/мл, вносили стабилизатор и подвергали стерилизующей фильтрации, далее отбирали контрольные образцы и оставляли их на хранение при температуре (5±3)°С в течение 12 мес. Уровень олигомеризации IgG определяли в соответствии с Методическими указаниями МУК 4.1/4.2.588-96 «Методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов, вводимых людям», с. 25.The level of IgG oligomerization was determined as follows. Initially, a phenol-sulfate semi-finished product was prepared according to the method described in this patent. Further, after removal of sulfate ions (patent No. 2338375 “A method for storing plasma or blood serum to obtain immunoglobulin and albumin biological products”), electrophoretically homogeneous and chromatographically monomeric IgG samples were isolated from the obtained semi-finished products (Applied Biochemistry and Biotechnology, 2009, Volume 45, No. 3, p. 378-383). The obtained IgG samples were concentrated to 100 mg / ml, a stabilizer was added and subjected to sterilizing filtration, then control samples were taken and left to be stored at a temperature of (5 ± 3) ° С for 12 months. The level of IgG oligomerization was determined in accordance with the Methodological Guidelines of MUK 4.1 / 4.2.588-96 "Methods of control of medical immunobiological preparations administered to people", p. 25.
Claims (4)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016132955A RU2703537C2 (en) | 2016-08-09 | 2016-08-09 | Method for making semi-products of immunoglobulin and albumin biopreparations of slaughtered animal blood, abortion and placental human blood |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016132955A RU2703537C2 (en) | 2016-08-09 | 2016-08-09 | Method for making semi-products of immunoglobulin and albumin biopreparations of slaughtered animal blood, abortion and placental human blood |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2016132955A RU2016132955A (en) | 2018-02-14 |
| RU2016132955A3 RU2016132955A3 (en) | 2018-06-29 |
| RU2703537C2 true RU2703537C2 (en) | 2019-10-21 |
Family
ID=61227564
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016132955A RU2703537C2 (en) | 2016-08-09 | 2016-08-09 | Method for making semi-products of immunoglobulin and albumin biopreparations of slaughtered animal blood, abortion and placental human blood |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2703537C2 (en) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU301158A1 (en) * | А. Е. Киселев, А. А. Фром, А. А. Никитенко , В. М. Русанов Центральный ордена Ленина институт гематологии , переливани | METHOD OF PREPARING ALBUMIN | ||
| RU2007423C1 (en) * | 1991-06-04 | 1994-02-15 | Институт биофизики клетки РАН | Method of serum albumin purification |
| RU2122863C1 (en) * | 1996-09-26 | 1998-12-10 | Институт ревматологии РАМН | Method of immunoregulatory globulin preparing |
| EA000757B1 (en) * | 1996-03-08 | 2000-04-24 | Си Эс Эл ЛИМИТЕД | Filtration of plasma mixtures using cellulose-based filter aids |
| RU2338375C2 (en) * | 2006-09-04 | 2008-11-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Удмуртский государственный университет" | Method of plasma or blood serum storage for obtaining of immunoglobulene and albuminous biological preparations |
-
2016
- 2016-08-09 RU RU2016132955A patent/RU2703537C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU301158A1 (en) * | А. Е. Киселев, А. А. Фром, А. А. Никитенко , В. М. Русанов Центральный ордена Ленина институт гематологии , переливани | METHOD OF PREPARING ALBUMIN | ||
| RU2007423C1 (en) * | 1991-06-04 | 1994-02-15 | Институт биофизики клетки РАН | Method of serum albumin purification |
| EA000757B1 (en) * | 1996-03-08 | 2000-04-24 | Си Эс Эл ЛИМИТЕД | Filtration of plasma mixtures using cellulose-based filter aids |
| RU2122863C1 (en) * | 1996-09-26 | 1998-12-10 | Институт ревматологии РАМН | Method of immunoregulatory globulin preparing |
| RU2338375C2 (en) * | 2006-09-04 | 2008-11-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Удмуртский государственный университет" | Method of plasma or blood serum storage for obtaining of immunoglobulene and albuminous biological preparations |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2016132955A3 (en) | 2018-06-29 |
| RU2016132955A (en) | 2018-02-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4370264A (en) | Method for the cold sterilization of preparations containing blood coagulation factor VIII | |
| JP5178518B2 (en) | Ultra high yield intravenous immunoglobulin preparation | |
| Korneyeva et al. | Enveloped virus inactivation by caprylate: a robust alternative to solvent-detergent treatment in plasma derived intermediates | |
| JP2000511519A (en) | Final sterilization of biological products | |
| ES2836131T3 (en) | Platelet lysate sterilization procedure | |
| US7879332B2 (en) | Ultra-high yield intravenous immune globulin preparation | |
| SE528214C2 (en) | Preparation of blood platelet lysate for culture of animal cells, involves concentrating platelet-rich plasma, adding water and then calcium for forming coagel to the plasma, centrifuging the coagel, and filtering the blood platelet lysate | |
| Lowenhaupt et al. | Pletelet Accumulation observed by Electron Microscopy in the Early Phase of Renal Allotransplant Rejection | |
| Terpstra et al. | Potential and limitation of UVC irradiation for the inactivation of pathogens in platelet concentrates | |
| Rightsel et al. | Tissue-culture cultivation of cytopathogenic agents from patients with clinical hepatitis | |
| US8293242B2 (en) | Ultra-high yield of alpha-1-anti-trypsin | |
| RU2703537C2 (en) | Method for making semi-products of immunoglobulin and albumin biopreparations of slaughtered animal blood, abortion and placental human blood | |
| MX2013008365A (en) | Caprylate viral deactivation. | |
| US20240024459A1 (en) | Method for producing an antigen corresponding to the inactivated sars-cov-2 virus, antigen corresponding to the inactivated sars-cov-2 virus, antigenic composition, kits, and uses thereof | |
| CN104623701B (en) | Parvovirus method and the preparation of acquisition in a kind of effectively inactivation PCC | |
| JP2002525131A (en) | Methods for selectively inactivating viruses in biological compositions | |
| RU2338375C2 (en) | Method of plasma or blood serum storage for obtaining of immunoglobulene and albuminous biological preparations | |
| RU2696480C1 (en) | Method of producing a gamma-globulin semi-product with high content of antiviral antibodies from slaughter blood of vaccinated cows | |
| De Leeuw et al. | Aspects of heat inactivation of foot-and-mouth disease virus in milk from intramammarily infected susceptible cows | |
| Werz et al. | Strategies to avoid virus transmissions by biopharmaceutic products | |
| US6881573B2 (en) | Augmented solvent/detergent method for inactivating enveloped and non-enveloped viruses | |
| AU2006231531A1 (en) | Methods and precipitating reagents for isolating proteins from proteinaceous material | |
| Shultz et al. | Cytotoxicity of rabbit blood for Listeria monocytogenes | |
| US4490357A (en) | Simplified in-vitro interferon production | |
| JP2003513052A (en) | How to inactivate pathogens |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190923 |