UA48849A - Спосіб виділення днк/рнк із біологічного матеріалу - Google Patents
Спосіб виділення днк/рнк із біологічного матеріалу Download PDFInfo
- Publication number
- UA48849A UA48849A UA2002010106A UA200210106A UA48849A UA 48849 A UA48849 A UA 48849A UA 2002010106 A UA2002010106 A UA 2002010106A UA 200210106 A UA200210106 A UA 200210106A UA 48849 A UA48849 A UA 48849A
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- dna
- rna
- isolation
- zeolite
- sorbent
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 238000002955 isolation Methods 0.000 title abstract description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 title abstract description 4
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 claims abstract description 10
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 8
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 229910021536 Zeolite Inorganic materials 0.000 claims description 13
- HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N dioxosilane;oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 239000010457 zeolite Substances 0.000 claims description 13
- 239000012620 biological material Substances 0.000 claims description 2
- 238000012876 topography Methods 0.000 claims 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 6
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 5
- YQOKLYTXVFAUCW-UHFFFAOYSA-N guanidine;isothiocyanic acid Chemical compound N=C=S.NC(N)=N YQOKLYTXVFAUCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N chloroform;phenol Chemical compound ClC(Cl)Cl.OC1=CC=CC=C1 YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012568 clinical material Substances 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003544 deproteinization Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 229940079920 digestives acid preparations Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000002205 phenol-chloroform extraction Methods 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
Спосіб виділення ДНК/РНК з біологічного матеріалу включає використання NaX як сорбенту нуклеїнових кислот.
Description
Опис винаходу
Винахід належить до медицини, а більш конкретно - до молекулярної біології і може бути використаний для 2 виділення ДНК/РНК з біологічного та клінічного матеріалу.
Відомо, що сучасні молекулярно-біологічні дослідження нерозривно пов'язані з методами, заснованими на ампліфікації нуклеїнових кислот.
Для якісного проведення процесу ампліфікації нуклеїнових кислот, необхідні прості методи виділення ДНК із зразків. Головні критерії при виборі методу, є простота та швидкість, в комбінації з отриманням досить 70 високої кількості ДНК, водночас з успішним усуненням можливої присутності інгібіторів ампліфікації.
Існує ряд методів для виділення ДНК/РНК. До них належать методи фенольно-хлороформної депротеїнізації, травлення протеїназою К. кип'ятіння зразків, детергентна обробка, метод із застосуванням гуанідинізотіоціанату разом із силікагелем (Маниатис Т., Фрич Е.Е., Сзозмбрук Дж. / Методьі генетической инженерии. Молекулярное клонирование // Под ред. А.А. Баєва. - М.: "Мир", 1984. - 480 с.). 12 До недоліків детергентного методу та кип'ятіння зараховується вірогідність високого проценту інгібіторів, в препаратах, метод травлення за допомогою опротеїнази К є досить коштовний, при застосуванні фенольно-хлороформної екстракції має місце велика вірогідність втрати нуклеїнової кислоти на етапах відмивки (ОСгеепПейй 1... МУпНе Т.0. / Затріе ргерагайоп теїодв. 1993. - Р. 122 - 137. Іп О.М. Регвіпд еї аї.
ОіІадповіс тоіесціаг птісгоріоіоду: ргупсіріе апа арріїсайопв. Атегісап босіейу ої Місгобіоіоду. 1997. - З5. 20. Мо, 10, - Р. 2628 - 2633).
Порівняно з описаними методами, метод із застосуванням гуанідинізотіоціанату та силікагелю дає можливість отримати достатньо якісні препарати з відносно невеликим ризиком втрати ДНК на етапах відмивки.
Цей метод рекомендовано для виділення ДНК/РНК для подальшого використання препаратів в діагностичній та науково-дослідницькій діяльності (Вотап .., Саудов С., Оціпп о Т.С. / Моїіесціаг аіадповіз ої Спіатуаїйа рпештопіае ІпГесіоп // .). Сп. Місгобіо!. - 1999. - 68. - Р. 3791 - 3799). «
Метод виділення ДНК/РНК із застосуванням гуанідинізотіоціанату га силікагелю є найбільш близьким до способу, що заявляється, тому його обрано в якості прототипу. При застосуванні прототипу в якості сорбенту нуклеїнових кислот використовують силікагель. Проте, в деяких випадках, коли кількість матеріалу мала, має місце часткова втрата ДНК, що може в подальшому, наприклад при застосуванні препарату в полімеразній о ланцюговій реакції (ПЛР), привести до хибнонегативного результату (УМіівоп Р.А., У. РіІрре, О. Затиеї, Зацпдег «ж
М.А. / ЮОемеіоретепі ої зутрійНей роПтегазе спаіп геасПоп-еплуте Іттипеаззау їог (Ше адейесЦопо ої
Спіатуа|а рпештопіае ІпГесі(оп // -). Аррі. Васіегіо!. - 1996. - 80: 431 - 438). со
В основу винаходу покладено задачу покращення якості виділеної ДНК із запобіганням її втрати. с
Задача, яка покладена в основу винаходу вирішується тим, що у відомому способі виділення ДНК/РНК, який включає використання сорбенту, згідно з винаходом, в якості сорбенту використовують цеоліт Мах. М
Ознаками винаходу, що відрізняють його від прототипу - застосування силікагелю - є використання як сорбенту нуклеїнових кислот цеоліт Мах.
Виділення ДНК методом гуанідинізотіоціонатцеолітної сорбції проводили згідно с протоколом. «
До Л1ООмкл фізіологічного розчину, що містив у собі досліджуваний матеріал, додавали ЗООмкл 6М З 50 гуанідинізотіоціонату і бмкл водної суспензії цеоліту. Зразки інкубували 10 - 15 хвилин при кімнатній с температурі, періодично струшуючи на вортексі. Центрифугували ЗОс при 11000об/хв. Супернатант відкидали.
Із» До преципітату додавали 15О0мкл 4М гуанідинізотіоціанату, вортексували, та центрифугували ЗО0Ос при 11000боб/хв. Супернатант відкидали. До осадку добавляли 700мкл відмиваючого розчину (50905 етілового спирту, 0,05М Масі та 0,01 ТгізНСІ). Вортексували та центрифугували ЗОс при 11000об/мин. Супернатант відкидали.
Процедуру промивки повторювали двічі. Зразки підсушували в термостаті при 45 - 5573 протягом 5 хвилин. До шк преципітату додавали Б5Омкл деїіонізованої води, вортексували. Інкубували 5 хвилин при температурі 45 - 557С,
Ге | центрифугували 15 - ЗОс при 11000об/хв. Супернатант, що містив ДНК, переносили до окремої пробірки та використовували в ПЛР. бо Приготування водної суспензії цеоліту Мах. «їз» 20 бог цеоліту Мах розтирали в 500мл бідистильованої води, відстоювали 10хв, відбирали 400мл супернатанту, додавали до нього бОбОмкл концентрованої НОСІ, відстоювали 24 години, зливали супернатант. Осадок зважували с в 100мл Н2оО та автоклавували.
Наявність причинно-наслідкового зв'язку між істотними ознаками і досягнутими технічними результатами, підтверджується даними експериментального дослідження, яке показало, що введення нового сорбенту 29 покращує якість препаратів ДНК та запобігає її втрату під час обробки зразку. в. Для визначення спроможності цеоліту МаХ впливати на якість ДНК, що виділяються з клінічних зразків, препарати нуклеїнових кислот, одержані із застосуванням прототипу, а також нового сорбенту, аналізували методом ПЛР.
ДНК виділяли двома способами з урогенітальних зішкрябів, одержані препарати в подальшому 60 використовували для ПЛР. ПЛР проводили з використанням трьох пар праймерів, підібраних для ампліфікації фрагментів ДНК СпПпіатуа|а ігаспотаїйв, Негрез Зітріех Мігиз І типу, Суїотедаїомігив. Ампліфікацію та реєстрацію результатів проводили згідно з рекомендованими умовами (Уніфікація лабораторних методів дослідження в діагностиці ЗПСШ, МОЗ України, 2000).
У таблиці 1 наведено результати ПЛР, отримані на клінічних зразках, ДНК з яких було виділено бо методом-прототипом та новим методом.
Таблиця 1
Результати ПЛР на препаратах ДНК, отриманих із застосуванням різних сорбентів
Негрег вітрівх мітив 1 типу суотеваютте| 77771112 61611 й й й й й й ше й
Примітка: кількість " відповідає кількості інгібованих зразків.
Отримані результати свідчать про те, що введення цеоліту Мах до складу реактивів для виділення ДНК/РНК позитивно впливає на якість отриманих препаратів. Кількість позитивних результатів ПЛР при застосуванні нового способу виділення збільшується, що можна пояснити кращою сорбуючою властивістю цеоліту Мах.
Структура цеоліту МаХ сприяє надійнішому зв'язуванню на його поверхні молекул ДНК, так що на етапах відмивки зменшується ризик втрати ДНК. Кількість інгібованих зразків при застосуванні цеоліту менша, ніж при застосуванні силікагелю. Можна припустити, що низькомолекулярні речовини, серед яких можуть бути присутні інгібітори ПЛР, сорбуються на пористій структурі цеоліту Мах і, отже, концентрація їх у препаратах виділеної
ДНК зменшується.
Таким чином, запропонований спосіб дозволяє отримати більш якісні препарати ДНК, запобігаючи її втрату.
Claims (1)
- Формула винаходу Спосіб виділення ДНК/РНК з біологічного матеріалу, що включає використання сорбенту нуклеїнових кислот, який відрізняється тим, що як сорбент використовують цеоліт Мах. « Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних мікросхем", 2002, М 8, 15.08.2002. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і Фо зо науки України. « (ее) (ее) «- . и? ЧК» (ее) (ее) ЧК» 3е) 60 б5
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA2002010106A UA48849A (uk) | 2002-01-03 | 2002-01-03 | Спосіб виділення днк/рнк із біологічного матеріалу |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA2002010106A UA48849A (uk) | 2002-01-03 | 2002-01-03 | Спосіб виділення днк/рнк із біологічного матеріалу |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA48849A true UA48849A (uk) | 2002-08-15 |
Family
ID=74216165
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA2002010106A UA48849A (uk) | 2002-01-03 | 2002-01-03 | Спосіб виділення днк/рнк із біологічного матеріалу |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| UA (1) | UA48849A (uk) |
-
2002
- 2002-01-03 UA UA2002010106A patent/UA48849A/uk unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Tan et al. | DNA, RNA, and protein extraction: the past and the present | |
| JP7083756B2 (ja) | タンパク質系試料回収マトリックス及び装置 | |
| US10683496B2 (en) | Method and apparatus for isolating nucleic acids | |
| JP5906740B2 (ja) | Ｒｎａ抽出用溶液 | |
| JP2008529516A (ja) | エチレングリコール多量体の使用を含む核酸の単離方法 | |
| NL8900725A (nl) | Werkwijze en combinatie van middelen voor het isoleren van nucleinezuur. | |
| HUE034870T2 (hu) | Eljárás nukleinsavak izolációjára és ennek készlete | |
| KR20080066727A (ko) | Ｒｎａ의 추출방법 및 ｒｎａ의 검출방법 | |
| WO2004104181A3 (en) | Nucleic acid processing methods, kits and devices | |
| US20040157223A1 (en) | Chemical treatment of biological samples for nucleic acid extraction and kits therefor | |
| KR102136694B1 (ko) | 규조토를 이용한 미생물 농축 방법 및 핵산 추출 방법 | |
| ES2305023T3 (es) | Metodos para el analisis de componentes no proteinaceos usando una proteasa de una cepa de bacilo. | |
| JP2007509620A (ja) | 迅速かつ低コストな核酸の単離方法 | |
| US20230203476A1 (en) | Nucleic acid extraction method and application | |
| Ye et al. | The current status and trends of DNA extraction | |
| JP2009065849A (ja) | 核酸の抽出方法 | |
| CN111718927A (zh) | 一种提高核酸稳定性的保存液及其应用 | |
| UA48849A (uk) | Спосіб виділення днк/рнк із біологічного матеріалу | |
| RU2603098C1 (ru) | Способ выделения циркулирующих днк из плазмы или сыворотки крови | |
| JP2005253464A (ja) | 簡易的核酸抽出法 | |
| JP2001078761A (ja) | 核酸結合性磁性シリカ粒子担体 | |
| RU2808832C1 (ru) | Способ выделения рибонуклеиновой кислоты вируса из спинномозговой жидкости для молекулярно-биологических исследований | |
| JP7122373B2 (ja) | 生物試料からの高品質核酸の迅速精製 | |
| JP4764966B2 (ja) | メッセンジャーｒｎａの分離方法 | |
| ES2350291T3 (es) | Método para aislar ácidos nucleicos que comprende el uso de multímeros de etilenglicol. |