UA124430C2 - Кислотостабільна ротавірусна вакцина з низьким об'ємом дози, яка не містить буфер - Google Patents

Abstract

Розкритою є ротавірусна вакцина, яка не містить буфер, стійка до кислоти, з низьким об'ємом дози. Вакцина є доступною в об'ємі дози менше, ніж 1 мл на дозу для перорального введення, та не містить будь-якого буфера. Вакцина також не вимагає перед або після введення будь-якого антациду під час перорального введення вакцини суб'єкту для нейтралізації шлункової кислоти. Вакцина демонструє номінальне падіння титру вакцини при рН 2-4 протягом часового проміжку 30 хвилин. Вакцина є стабільною при -20 °C протягом щонайменше 60 місяців.

Description

ГАЛУЗЬ ВИНАХОДУ

Винахід відноситься до галузі ротавірусних вакцин. Більш конкретно, даний винахід відноситься до галузі ротавірусних вакцин, які не містять буфер або не вимагають будь-якої антацидної до, під час або після введення ротавірусної вакцини. Даний винахід також відноситься до галузі об'єму дози на одиницю вакцини, зокрема ротавірусної вакцини.

Передумови створення винаходу

Добре відомо, що ротавіруси є провідною причиною важкого гастроентериту у немовлят та дітей у всьому світі. Навіть покращення гігієни, якості води та санітарії, які зазвичай можуть контролювати багато бактерій та паразитів, які несуть відповідальність за заподіяння інших типів діареї, адекватно не запобігають поширенню ротавірусу. Таким чином, вакцинація являє собою єдину стратегію, здатну в значній мірі зменшити тягар захворювання, викликаний ротавірусною інфекцією в слаборозвинених та країнах світу, які розвиваються. Вакцинація є більш значущою для країн, які не мають необхідної економічної підтримки та інфраструктури для вирішення ротавірусної інфекції у інфікованих пацієнтів. До сьогоднішнього дня в світі існувало принаймні чотири комерціалізованих ротавірусних вакцин, першою серед яких була

КоїазпієідФт, яка поставляється компанією Уууеїй Ноідіпд5, у 1999 році. Це була жива, пероральна, чотиривалентна ротавірусна вакцина, вироблена з використанням вакцини 1 ротавірусу макак резус, З псевдоваріонів резус-людини, ліцензованих у Сполучених Штатах.

Проте їх вилучили з ринку через 14 місяців через зв'язок з негативними наслідками щодо кишкової інвагінації.

Коїазпівїйю включав композицію, яка містить сахарозу, мононатрію глутамат, калію монофосфат, калію дифофат, бичачу фетальну сироватку та неоміцину сульфат в середовищі амфотерицину. Відповідна патентна публікація щодо ротавірусних вакцинних композицій

МО 2000006196А2, вказує, що вакцинні композиції можуть містити фармацевтично прийнятні допоміжні речовини, необхідні для наближення фізіологічних умов, таких як регулювання рн, та буферні агенти та інші, наприклад, натрію ацетат, натрію лактат, натрію хлорид, калію хлорид, кальцію хлорид, сорбіту монолаурат, триетаноламіну олеат, цитрат-бікарбонат або подібні.

Коли композицію вводять перорально, може також бути необхідним забезпечити окремий буферний розчин для часткової нейтралізації шлункової кислоти та захистити реасортантний

Зо ротавірус при проходженні через кишечник. Буферні розчини, відповідні для цього застосування, включають бікарбонат натрію, цитрат-бікарбонат або тому подібне.

КоїаТед? являє собою пентавалентну людську-бичачу (МУС3) реассортантну живу ослаблену, пероральну вакцину, вироблену компанією МегсК 5 Со., яка містить штам УУСЗ,

Р7І5|С6, яка включає 5 реассортант; з яких 4 реасортанта з геном МР7 з С1, 52, 3, або 4 та 1 реассортант з геном МРА4 РІАЇВ| з людського ротавірусного батьківського штаму з залишком генів з батьківського бичачого ротавірусу МУСЗ3. Вакцинний препарат (відповідні патентні публікації МегсК мі7. М/О 1998/13065, УУО 2001/08495 та УМО 2002/011540) містить певні стабілізатори в тканинних культуральних середовищах разом з присутністю буферів в самому препараті, причому зазначений буфер представляє собою натрію цитрат та натрію фосфат.

Використовують карбоксилат запатентованих формул, та він діє як буфер для того, щоб ротавірусний антиген витримував кислотність шлунка, коли вірусний антиген вводиться в шлунок дитини.

Крім того, Воїагіх? представляє собою моновалентну вакцину, яка включає штам ротавірусу людини КІХ4414, який пересівається, отриманий з штаму 89-12. Коїагіхб (виробляється компанією СіІахоЗтійКіїпе Віоіодісаіє), представляє собою живу вакцину, яка містить ослаблений моновалентний (31, РІВ| штам ротавірусу людини. Вакцина є доступною в ліофілізованій формі, змішаній зі стабілізаторами, яка відновлюється буферним розріджувачем на основі карбонату кальцію перед введенням вакцини суб'єктам.

Коїагіх отримували шляхом відновлення ліофілізованого активного інгредієнта (штам

КІХ4414 ї- допоміжні речовини) 1,0 мл буфера 5К СасСОз який міститься в попередньо заповненому шприці. Після введення шприцем буфера у флакон, який містить ліофілізовану вакцину, флакон добре струшували, щоб ресуспендувати вакцину. Весь об'єм ресуспендованого продукту потім витягували в той самий шприць, голка (або пристрій перенесення) шприца відкидали, та продукт вводили одразу у вигляді однієї пероральної дози.

Альтернативно, відновлення комерційної ліофілізованої вакцини буде здійснюватись за тими самими процедурами, використовуючи аплікатор для перорального введення, заповнений буфером та перехідним адаптером замість шприця та голки. Відновлена вакцина повинна виглядати молочно-біллою. Вона повинна бути візуально перевірена на наявність твердих частинок та/або знебарвлення, та не повинна вводитися, якщо існує одна з даних умов. Коїагіх 60 слід вводити перорально. Немовля має сидіти в положенні, відкинувшись назад, та весь вміст аплікатора для перорального застосування, який містить відновлену вакцину, слід вводити всередину щоки. Коїагіх не слід вводити ін'єкційно. Отже, очевидним є те, що відновлення буферного розріджувача містить стільки стадій, скільки потрібно для забезпечення того, щоб відновлення було правильно виконане до моменту введення вакцини. Всі ці чинники однозначно спричиняють зниження відповідності вакцини, частково захищаючи від ротавірусної інфекції, а не досягаючи повної захисту.

Відповідні патентні заявки від (35К щодо ротавірусних вакцинних препаратів

МО 2001/012797, МО 2005/02133, УМО 2006/087205, які включають живий ослаблений ротавірусний штам Р4іЗ, серійно пересіяний зі специфічними мутаціями, також доповнений антацидним буфером для відновлення. Зазначений С-протеїн ротавірусного штаму (МРА4 та

МР7) здатний індукувати імунну відповідь до, щонайменше, 4 інших штамів ротавірусу до 1 та щонайменше одного із серотипів (32-С14.

Крім того, розкритими були інші запатентовані ротавірусні вакцинні композиції зі стабілізаторами та буферами Впагаї Віоїесі Іпіегпайіопаї І ітйей з індійським асимптоматичним штамом 116Е, виділеним у дитини людини. Вони вимагають окремого введення антацидного буфера реципієнту вакцини перед прийомом вакцини для підвищення рН шлунка, при цьому згаданий антацидний буфер представляє собою цитрат-фосфатний буфер, який нейтралізує кислотність шлунка під час введення ротавірусного вакцинного антигена. Патентна публікація

УМО 2013160913 представляє ротавірусні вакцинні композиції, які включають ротавірусні антигени, стабілізатори та певні нові буферні комбінації. Буфери у винаході попередньо змішують в ротавірусних вакцинних композиціях для того, щоб нейтралізувати високу кислотність рН шлунка без необхідності роздільного введення антациду перед введенням вакцини.

Таким чином, очевидним є те, що різні ротавірусні вакцини були розроблені з використанням різних штамів, як людських, так і тваринних типів. Існує декілька важливих відмінностей в характеристиках даних штамів, типових для них, як зазначено нижче.

Таблиця 1

Відмінності між людською моновалентною та тваринною реассортантною вакцинами ротавірусного захворювання. штамами, які знижують реплікацію у людей.

Віруси людини мають високу здатність до реплікації у господаря, та, отже, ослаблені шляхом чисельного пересівання тканинної Ротавірусні вакцини з тваринними культури в декількох господарях. Оскільки дані реасортантними штамами вимагають дуже штами є людськими, титр вакцини 1074 РРО/0,5 | високих титрів вакцин для того, щоб вони мл є достатнім для індукування необхідної могли індукувати необхідну імунну відповідь. імуногенності проти ротавірусної інфекції у людини.

Очікується, що необхідними є нейтралізуючі

Широкий імунітет набувається через різні імунні | антитіла в просвіті кишки. Отриманий імунітет ефекторні механізми. не є високим як з вакцинами з людськими штамами.

Гетеротиповий захист набувається за рахунок Реассортантні вакцинні конструкти широкого імунної відповіді. Це означає, що він включають загальні людські ротавірусні надає перехресний захист між різними штамами. | антигени.

ОБГРУНТУВАННЯ ПРЕДСТАВЛЕНОГО ВИНАХОДУ

Зо Таким чином, відомо, що ротавіруси є високочутливими до кислотних середовищ ПЕЗзіев5,

М., Станат, О., тій, Е. апа Сетба, С. (1979). Воїамігив еїабіїйу апа Іпасіїмайоп. ЧдЧошцтаї ої

Сепега! Мігоіоду, 43(2), рр.403-409). Крім того, повідомлялося, що вірус гастроентериту новонароджених стає нестабільним та відбувається розпад його зовнішньої оболонки та капсомерів коли піддаються дії навколишнього середовища з рН меншим, ніж 3,0 (Раїтег, Е.,

Мапіп, М. апа Митрну, Р. (1977)). Могрпоїоду апа етарійшу ої Іптапійе Савзігоепівтійв Мігив:

Сотрагізоп м/ййп Неоміги5 апа Вісеопдиє Міги5. Уошигттаї ої Сепега! Мігоіоду, 35(3), рр.403-414).

Крім того, повідомлялося, що багато штамів ротавірусу інактивувалися протягом однієї хвилини, коли піддавалися дії навколишнього середовища, яке має рН 2, та подібні результати були отримані з людським шлунковим соком, що має рН 1,8 (Умеі55, Сб. апа Сіаж, Н. (1985). Варій

Іпасіїмайоп ої Ноїамігизе5 бу Ехровиге о Асій ВиМег ог Асідіс Савігіс дцісе. доитаї ої Сепегаї!

Мігоіоду, 66(12), рр.2725-2730). Крім того, повідомлялося, що людський ротавірус серотипу 1 повністю інактивується, коли його піддають дії середовища з рн 2,5 (Мепо, 2., Вігсп, С., Неаїйй,

В. апа Сиві, І. (1987). Рнузісоспетіса! єїаріїйу апа Іпасіїмайоп ої Нитап апа 5ітіап Коїамігивев5.

Арріїєа апа Епмітттенпіа! Місгобіоіоду, 59(4), рр, 727-730). Ротавіруси, як правило, відомі як дуже нестабільні, коли їх піддають дії кислотного середовища та швидко інактивуються. Швидкості інактивації трьох бичачих ротавірусів та декількох ротавірусів з походженням від приматів визначали під час впливу кислотних буферів при рН 2,0, рН 3,0 або рН 4,0. Кожен ротавірус був інактивований при рН 2,0 (кислотність, що найбільше нагадує нормальний шлунок натщесерце) дуже швидко, причому період напіврозпаду щодо інфекційності, як було визначено, становить 1 хв. або менше. Кожен ротавірус був інактивований зі значно меншою швидкістю при рН 3,0; інактивація при рН 4,0 була мінімальною. Виявленими були деякі відмінності в стійкості до кислотності між різними штамами ротавірусу. Хоча дані визначення проводили при кімнатній температурі (2322), експерименти при різних температурах свідчили про ще більш високу швидкість інактивації вірусу кислотою при нормальній температурі тіла (372С). Дослідження ротавірусу, підданого впливу природного людського шлункового соку при рН 1,8 або рН 211, виявили швидкість інактивації вірусу, аналогічну тій, яка спостерігається з глициновим буфером з ідентичним рн. Сеїду зсіепійіс Таріе5, моїште 1, 1981, раде 126).

Інактивація ротавіруса відбувається в межах від рН 2,0 до рН 3,0, але при рН 4,0 відсутня або відбувається мінімальна інактивація. Оскільки шлунок містить сильно кислотне середовище шлунка, до цього часу доцільним було додати буфери у вакцинні ротавірусні препарати.

Буфери в ротавірусних препаратах допомагають утримувати постійний рН ротавірусних вакцинних препаратів, таким чином, забезпечуючи антацидну або буферну здатність вакцинних препаратів. Антацидна здатність (також називається здатністю до нейтралізації кислоти) ротавірусних вакцин була виміряна з використанням аналізів Вабу Коз5зей Кісе в патентах С5К.

Ємність кислотної нейтралізації даного препарата визначається як час, виміряний для підтримки рН вище 4,0, та оцінюється за аналізом Вару Коззеце Кісе. Як стверджується, аналізи Вабу Коззеї імітують шлункове середовище шлунка людини. Останній патент З5К

Зо И5882189182 виступає за зниження концентрації фосфатів та з підвищеною концентрацією карбоксилату переважно адипатом, яка знаходиться в діапазоні від 100 мМ до 1М, переважно від 400 мМ до 700 мМ в об'ємі дози лише 1,5 мл на дозу ротавірусної вакцини людини. Адипат діє як буфер, здатний витримувати високу кислотність шлунка (рН від 1 до 2). Здатність витримувати кислотність шлунка людини вимірюється з використанням аналізу Вабу Коззеї

Кісе, який має значення від 8 до 23 хвилин, який, як вважають, є здатним та достатньо гарним, щоб уникнути інактивації ротавірусного антигену у вакцинному препараті після введення ротавірусної вакцини немовляті людини.

Таким чином, для ефективного введення ротавірусної вакцини, яка є здатною викликати імуногенну реакцію, досить достатньої для забезпечення захисту від ротавірусної інфекції, необхідним є вводити щонайменше від 1,5 до 2 мл ротавірусної вакцини або відновленого вакцинного препарата на дозу людини для перорального введення для того, щоб ротавірусний антиген міг ефективно пройти через сильно кислотне середовище шлунка. Отже, за описаними вище характеристиками статусу представленої природи ротавірусної вакцини, доступної на даний час, кваліфікованому фахівцю даній галузі техніки також легко зрозуміти та визнати, що ротавірусний антиген є високо кислотним лабільним антигеном, та введення ротавірусної вакцини завжди вимагає присутності антацидного або буферного компонента, тим самим збільшуючи необхідну кількість (з точки зору дозування в об'ємах на одиницю вакцини) вакцини для введення.

Крім того, існує факт, що ротавірусний антиген представляє собою дуже нестабільний вірус та враховуючи ситуацію, що живий ослаблений ротавірусний вакцинний антиген буде ще більш нестійким; тому ротавірусний антиген доповнюють відповідними запатентованими вакцинними стабілізаторами для стабілізації вакцинних препаратів, які додаються до кількості дози вакцини в перерахунку об'єма на одиницю вакцини. Крім того, включення буферів, або антацидів, або необхідність відновлення вакцини з використанням вакцинного розріджувача на основі буфера збільшує кількість дози вакцини в об'ємі на одиницю вакцини. Отже, забезпечення ротавірусної вакцини без буфера/антациду, безумовно, зменшить об'єм дози на одиницю вакцини. В той же час, необхідним є те, щоб така ротавірусна вакцина без буфера не призводила б до зменшення ефективності, а також стабільності ротавірусної вакцини.

Оскільки суб'єкт одержувач ротавірусної вакцини завжди являє собою немовля у віковій бо групі від 6 тижнів до 6 місяців, існують всі можливості того, що значна кількість ротавірусного вакцинного препарата, який вводиться в рот немовляти, проливається. Це створює можливість часткового введення вакцини, тим самим зменшуючи відповідність вакцини і не захищаючи від тягар захворювання, незважаючи на отримання вакцини. Тому завжди є бажаним, щоб кількість дозування в об'ємних показниках на одиницю ротавірусної вакцини максимально знижується без шкоди для ефективності вакцинного препарата. В даний час найменший об'єм дозування, розкритий в рівні техніки для ротавірусної вакцини, знаходиться в діапазоні від 1,5 мл до 2,5 мл.

Вакцини містять вакцинні стабілізатори та вакцинні буфери, які додають до загального об'єму дози вакцини. Таким чином, зменшення об'єму дози на одиницю ротавірусної вакцини, яка має однакову здатність підвищувати необхідну імуногенність для профілактики проти ротавірусних інфекцій у дітей, буде зменшувати можливість проливання вакцинного препарата, який вводиться немовляті. Отже, була б дуже неочевидною доступність низькодозованого ротавірусного вакцинного препарата об'ємом до 1 мл, переважно тільки 0,8 мл, або найбільш переважно 0,5 мл тільки на людську дозу без буфера, який є рівним або точніше, більш ефективним, ніж ротавірусна(ї) вакцина(и), зроблені доступними з буферами або антацидами, які мають високий об'єм дози на одиницю вакцини.

Попередній рівень техніки розкриває ротавірусні вакцинні препарати, всі з яких повинні бути стабілізованими в рідких препаратах при температурах холодильника 5-3 "С або у вигляді ліофілізованих порошків, які вимагають відновлення вакцини перед введенням вакцини відповідним розріджувачем. Вже обговорювалося, що відновлення вакцини для ліофілізованого порошку вимагає спеціальних навичок та догляду. Крім того, окремі вимоги до виробництва розчинників разом з вакциною подвоюють витрати на виробництво вакцини, а також транспортні витрати. Дефіцит навичок, догляду та відповідної інфраструктури для складських потреб посилює проблему з постачанням ліофілізованої ротавірусної вакцини. Для рідких вакцин при 5-3 "С термін зберігання вакцин обмежується лише до 2 років. Також існує пов'язана з втратою титру вакцинами, наданими при 2-8 "С, під час зберігання та транспортування, що є небажаним.

Але, ротавірусні вакцинні препарати при -20" С, як було встановлено, що не мали ніяких втрат при транспортуванні та зберігання взагалі. Шанси забруднення вакцини також в значній мірі зменшуються для вакцин при -20 "С. Крім того, можливість постачання вакцин при -20 "С вже запроваджена у майже 120 країнах світу для постачання вакцини проти поліомієліту. Таким чином, відповідно до існуючих можливостей для зберігання вакцин та постачання вакцини, подібно до постачання вакцини проти поліомієліту, в значній мірі допомогло б зменшити навантаження на ротавірусні захворювання у світі. Бажаним є те, щоб були розроблені альтернативні стратегії, в яких стабільність ротавірусної вакцини додатково збільшувалася, так що вакцина може бути доступна для найвіддаленіших куточків земної кулі. Таким чином, нові ротавірусні вакцинні препарати є розкритими в даній патентній заявці, причому ротавірусні вакцинні препарати є стабільними протягом щонайменше 5 років, які є абсолютно новими та взагалі не зазначені у нинішньому рівні техніки.

МЕТА ПРЕДСТАВЛЕНОГО ВИНАХОДУ

Головною метою винаходу є забезпечити ротавірусну вакцину, яка не містить буфера та є стійкою до кислоти.

Ще однією головною метою винаходу є забезпечити низький об'єм дози до 1 мл або навіть тільки 0,8 мл, переважно низький об'єм дози ротавірусної вакцини становить 0,5 мл.

Іншою метою винаходу є забезпечити стабільну ротавірусну вакцинну композицію з об'ємом вакцини всього лише 0,5 мл на дозу.

Іншою метою винаходу є зменшити проливання ротавірусної вакцини та мінімізувати неефективні витрати пов'язані з вакциною у реципієнтом вакцини та збільшити відповідності самих вакцин.

Іншою метою винаходу є виготовлення ротавірусної вакцинної композиції, яка не вимагає будь-яких спеціальних способів розбавлення або відновлення від перед до або під час введення вакцини.

Ще однією метою винаходу є забезпечити ротавірусну вакцину, яка є стабільною протягом щонайменше 5 років при -20 "С.

Наступною метою винаходу є забезпечити низький об'єм дози ротавірусної вакцини, яка є стабільною протягом 2 років при 5-3 "С, та 6 місяців при 25 "С, та 1 тижня при 37 "С.

Ще однією наступною метою винаходу є забезпечити ротавірусну вакцинну композицію, яка не містить буфера, з низьким об'ємом дози до 1 мл, яка є стабільною в шлунку при від рН 2 до рН 4 протягом щонайменше 20 хвилин.

Іншою метою винаходу є забезпечити ротавірусну вакцинну композицію, яка не містить буфера, з низьким об'ємом дози до 1 мл, яка є стабільною при кислотному рН 2-4 без будь- 60 якого доповнення буферів або кислотностабілізуючих агентів.

Наступною метою винаходу є забезпечити ротавірусну вакцинну композицію, яка не містить буфера, стійка до кислоти, з низьким об'ємом дози, яка не вимагає введення будь-якого антацида або буфера, перед, або після, або під час введення вакцини суб'єкту.

Альтернативно, крім того, метою винаходу є забезпечити ротавірусну вакцину з низьким об'ємом дози 0,5 мл разом з присутністю буфера, який є однаково ефективним проти ротавірусних інфекцій у людини.

Наступною метою винаходу є забезпечити ротавірусну вакцину з низьким об'ємом дози без буфера, яка є здатною генерувати або еквівалентну, або більшу імунну відповідь, ніж ротавірусні вакцини, які є доповненими антацидами або буферами в вакцинних композиціях.

Суть винаходу

Відповідно до одного варіанта здійснення винахід передбачає вакцинну композицію, в якій втрата титру ротавірусної вакцини становить не більше, ніж 0,55 ЕРШ/ на 0,5 мл при рН від 2 до 4 протягом періоду часу щонайменше однієї години.

В наступному варіанті здійснення, винахід передбачає вакцинну композицію, в якій втрата титру ротавірусної вакцини становить не більше, ніж 0,68 ЕРШ/ на 0,5 мл при рН від 2 до 4 протягом періоду часу щонайменше 20 хвилин.

Ще один варіант здійснення винаходу, передбачає різні ротавірусні вакцинні композиції в об'ємі дози, яка знаходиться в діапазоні від 1 мл до 0,5 мл, причому вакцинні препарати не містять будь-яких буферів або антацидів, та ілюструють номінальне падіння титру вакцини при рн 2, та рН протягом проміжку часу в 30 хвилин.

Ще один варіант здійснення винаходу, передбачає можливості нейтралізації кислоти ротавірусною композицією з низьким об'ємом дози від 0,5 мл до 1 мл на одиницю вакцини в порівнянні з ротавірусними вакцинними композиціями в присутності буферів, встановлених з використанням аналізів Вару Коззеї Кісе.

Наступний варіант здійснення винаходу, передбачає ротавірусну вакцину, яка не містить буфера, з об'ємом дози тільки 0,5 мл, яка є здатною генерувати або еквівалентну, або більшу імунну відповідь в умовах чотириразової сероконверсії після вакцинації подібної до тієї сероконверсії, яка досягається з вакцинним препаратом або в присутності буферів або при введенні антацидів.

Зо В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає спосіб профілактики ротавірусної діареї у людей, причому спосіб включає стадії введення ефективної кількості стабілізованого ротавірусного вакцинного препарата, який містить ротавірусний штам 116Е, комбінацію цукрів, вибраних з сахарози, лактози та трегалози, гідролізату лактальбуміну, рекомбінантного людського сироваткового альбуміну, без присутності будь-якого буферного препарата в зазначеному ротавірусному вакцинному препараті.

Ще один варіант здійснення винаходу передбачає стабільні ротавірусні вакцинні композиції, які є стабільними при -20 "С протягом щонайменше 5 років.

Наступний варіант здійснення винаходу передбачає ротавірусні вакцинні композиції стабільні при 2-8 "С, 25 "С та 37 "С протягом 2 років, 6 місяців та З тижнів, відповідно.

Докладний опис винаходу

Варіант здійснення 1: Буферний ротавірусні препарати та кислотність шлунка

Вище в передумовах створення винаходу зазначалось, що використання буферів є загальноприйнятою практикою стратегій розробки ротавірусного вакцинного препарата, яка проводиться різними виробниками ротавірусної вакцини до теперішнього часу, та, отже, вакцинний препарат Коїа, який включає штам 116Е при -20 "С (5РО та ОМЕМ), був досліджений з цитрат-бікарбонатним буфером, та спочатку в нормальних умовах сольового розчину.

Впагаї Віоїесп Іпіегпайопа! Гітйей отримала ротавірусів людини 116Е від Національного інституту охорони здоров'я в рамках угоди про передачу матеріалів з Національним інститутом алергії та інфекційних хвороб (МІА!ІЮ), МІН, Веїпезада, О5А. Повна геномна послідовність штамів ротавірусу 116Е вже повідомляється в літературі.

Три ротавірусні вакцинні препарати з ротавірусом 116Е, які зберігалися при -20 "С, були взяті для З груп (група І, ІІ та ІІ), як детально описано нижче. Ротавірусні вакцинні композиції у всіх трьох групах нижче містять живий ослаблений ротавірусний антиген штаму 116Е, розчинений в 1095 5РО (сахароза, калію дигідрофосфат, та дикалію гідрофосфат) та мінімальне поживне середовище Дульбекко. Зазначені вакцинні препарати обробляли окремо, як детально описано нижче:

Група І: 0,5 мл ротавірусного 116 Е препарата А при -20 76.

Група ІІ: 2 мл (еквівалентні 4 людські дози по 0,5 мл на дозу людини) ротавірусного 116 Е препарата А, змішаного з 5 мл нормального сольового розчину. бо Група ПШ: 0,570 мл ротавірусного 116 Е препарата А ж суміш з (1,42мл цитрат -

бікарбонатного буфера -- 8 мл 34,8 мекв. НОЇ.

Як зазначено вище, група І включає ротавірусний вакцинний препарат при -20 "С причому ніякого буфера або сольового розчину не додавали до вакцинного препарата, та титр вакцини вимірювали протягом наступних 120 хвилин. В групі ІІ, 2 мл ротавірусного 116Е вакцинного препарата (який зберігали при -20 "С) брали та додавали 5 мл нормального сольового розчину, та титр вакцини вимірювали при цільовому титрі 1076 ЕРШО/мл до 120 хвилин. В групі ІП, 0,57 мл ротавірусного 116Е вакцинного препарату (який зберігали при -20 "С) брали та додавали 1,42 мл цитрат-бікарбонатного буфера та 8 мл 34,8 мекв. гідрохлоридної кислоти.

Таблиця 2

Ротавірусний вакцинний препарат (при температурі зберігання: -20 "С) титри вакцини в присутності буферів в 0 хвилин, через 60 хвилин та через 120 хвилин. в ЕРШО,5 мл в ЕЕШ/мл в ЕЕШ/мл

Таким чином, вказана вище таблиця демонструє, що як для піддавання дії вірусу в нормальних умовах сольового розчину або в присутності буферних розчинів, титр ротавірусного антигена є стабільним, та, таким чином, вакцина є стабільною.

Варіант здійснення 2: Імунопероксидазний аналіз ротавірусних вакцинних препаратів при різних рН.

Приклад 1: Імунопероксидазний аналіз проводили після піддавання ротавірусних вакцинних препаратів безпосередньо в кислому середовищі шляхом безпосереднього додавання 34,8 мекв. гідрохлоридної кислоти (НСІ) до ротавірусного вакцинного препарата. рН вакцинних препаратів безпосередньо знижували від рН 7 до різних більш низьких значень рн рн 2, та рН 4 шляхом безпосереднього додавання кислоти, та потім титр вакцинного антигена вимірювали при даних більш низьких рН значеннях - рН 2, та рН 4. Після цього, титр вакцини вимірювали протягом до 1 години при різному зниженні рН 2 та 4. Здійснювали наступні спостереження.

Реакційну суміш досліджували в різні моменти часу та при різних рівнях рН. Деталі представлені нижче в таблиці нижче. Зазначені ротавірусні вакцинні препарати (при температурі зберігання -20 "С) містять живий ослаблений ротавірусний антиген 116Е, 10 95 5РОА (натрію фосфату глутамат), розчинений в мінімальному поживному середовищі Дульбекко.

Таблиця З

Результати імунопероксидазного аналізу при цільовому титрі 1075,0 ЕРШ/О,5 мл дози в 0 хвилин та через 60 хвилин шляхом безпосереднього додавання кислоти до ротавірусних вакцинних препаратів (температура зберігання: -20 С).

Відкоригований Відкоригований ї . Фактичний титр з Фактичний титр з 99 Зауважен-

Деталі приклада с. с. втрати титр в | коефіцієнтом (титр через| коефіцієнтом через 1 ня хвилин розбавлення в 0) 1 годину | розбавлення годину хвилин через 1 годин 0,5 мл Ротавірусного 116Е вакцинного 104,95 104,94 104,94 препарата при рН 7,4 0,5 мл Ротавірусного 116Е вакцинного ! Ніякого препарата « 34,8 10558 10525 158 10525 МІ впливу рН мекв. НСІ при рН 4,0 0,5 мл ротавірусного 116Е вакцинного ва 1 а. 4 Незначний препарата «т 34,8 1072 1052 100 то 0,55 вплив рН мекв. НСІ при рН 2,0

Примітка: Розраховане зниження значення індексу титру внаслідок розведення - 101,47

ЕР). Тому фактичний титр вакцини після розведення становить 102,93 при рн 2. Всі зразки титрували в трьох повторах імунопероксидазного аналізу. Пероральна ротавірусна вакцина (цільовий титр 105 ЕРИ / 0,5 мл) була стабільною при рН 4,0. Цільовий титр означає мінімальну концентрацію ротавірусного 116Е антиген у флаконі з вакциною, що призначається досягатися в наданому флаконі. Вихідний титр при нейтральному рН вакцини становить 10295 ЕРЕШІЮ,5 мл во хвилин. Титр вакцини при рН 2 в 0 хвилин становить 10255 ЕРШ/О,5 мл, та титр знижується до 10293 ЕРЦШ/О,5 мл протягом 1 години. Отже, після додавання значення коефіцієнта розведення 1,47 внаслідок додавання кислоти, з фактичним значенням титру (10293 ЕРШИ,5мл), відкоригований титр вакцини при рН 2 через 1 годину після додавання кислоти становить 10250 в порівнянні з вихідним титром вакцини 10255 рН 7 в 0 хвилин. Таким чином, вакцина зазнала загальну Г 09 втрату в титрі вакцини 0,55 тільки при рН 2,0 протягом 1 години. Це встановлює, що навіть при більш низькому значенні рН ніж 2, тобто в певному кислому середовищі, як воно з'являється в шлунку людини, ротавірусний вакцинний препарат є здатним витримувати свій титр вакцини при значенні 10559 ЕРЕШ/0,5 мл. При такому титрі вакцини вакцина здатна підвищувати достатню імунну відповідь проти наступних ротавірусних інфекцій. В клінічному дослідженні, проведеному з вакциною Коїа 116Е при титрі 1079, вакцина давала 4-кратну серо- конверсію приблизно на 62 95, що є досить обнадійливим (Мпа Врапаагі еї аї, У Іптесі Оі5 2009, 200, 421-9).

Приклад 2: Такий самий експеримент повторювали з іншою вакциною (при температурі зберігання -207 С), при цаому цільовий титр становить 1076,0 ЕРШ/ 0,5 мл (доза) Розраховані значення титрів разом з коефіцієнтом розбавлення наводяться в наступній таблиці при різних значеннях рН в 0 хвилин та через 1 годину. Зазначені ротавірусні вакцинні препарати (при температурі зберігання -20 "С) містять живий ослаблений ротавірусний антиген 116Е, 10 95

ЗРО, розчинений в ОМЕМ.

Таблиця 4

Результати імунопероксидазного аналізу при цільовому титрі 1076,0 ЕРШ/О,5 мл дози в 0 хвилин та через 60 хвилин шляхом безпосереднього додавання кислоти до ротавірусних вакцинних препаратів (температура зберігання: -20 С).

Відкоригований "Відкоригований титр з . .. я Год втрати

Деталі приклада рН титр з коефіцієнтом| коефіцієнтом через 1 Зауважен- вакцини розбавлення в 0" Ірозбавлення через годину ня год. в ЕЕШ/О,5 мл 1 годину в

ЕРШЮ,5мл 0,5 мл ротавірусного . (без втрат) |впливу рН препарата 0,5 мл ротавірусного 024 116Е вакцинного 40 10533 1059 (незначна Ніякого препарата -- 34,8 мекв впливу рН

Не! втрата) 0,5 мл ротавірусного о 68 116Е вакцинного 20 1089 10521 (незначна Незначний препарата «хз 34,8 мекв вплив рН

Не! втрата)

Висновок: Існувала тільки втрата щодо 0,24 І 09 втрати в титрі вакцини в зразках вакцини при рН 4,0 що, як вважається, не впливає на рН в практичних обставинах зберігається протягом

Зо 1 години. При рН 2,0 спостерігалося втрата титру щодо титру в 0 годин та втрата 0,68 0910 ЕРО через 1 годину. Це зазначає, що це існує дуже незначний вплив на значення рН на значення титру вакцини при такому кислому більш низькому значенні рН 2.

Відповідно до наведеної вище таблиці, видно, що титр вакцини 1074,89 ЕРШ,5мл при рН 2 зберігається до значення титру 1074,21 ЕРШ/,5 мл; Іод титр 4,89-4,21 є достатньо гарним для реплікації ротавірусу в шлунково-кишковому тракті шлунку дитини у віці від б тижнів до 2 років.

Кислотність шлунка немовляти також становить рН 2, що представляє собою імітацію шлункового середовища. Вакцина все ще здатна виживати, маючи титр 4,89 Год 10 ЕРШ/О,5 мл,

який є достатнім для проходження шлунка та потім встановлення в кишкові ворсинки, та для подальшої реплікації ротавірусу, відповідального за генерацію імунної відповіді у немовляти, тим самим надаючи захист та профілактику ротавірусного гастроентериту. Таким чином, було виявлено, що вакцина є стабільною при кислому рН 2 протягом тривалості щонайменше 1 години без будь-яких значних втрат титру вакцини взагалі.

Варіант здійснення 3: Експеримент іп міго для демонстрації того, що ротавірусна 116Е вакцина не вимагає антациду:

За виключенням висновків за результатами клінічних випробувань, які слідують пізніше в описі патенту, також було доведено імітуванням іп міго подібних умов кислотності шлунка, в який вводять вакцину безпосередньо без буфера.

Приклад 3.1: 1 мл вакцини (препарат ЗА), яка містить ротавірус 116Е, комбінацію з сахарози (5095), лактози (0,595) та трегалози (0,595), гідролізату лактальбуміну (1 95), альбуміну сироватки людини (0,4 95), брали та додавали з 1,25 мл 0,1 М НСІ та добре перемішували.

Зразок брали та досліджували щодо вмісту вірусу при різних рівнях рнН в різні інтервали часу.

Результати наведені в таблиці 5.1 нижче.

Таблиця 5.1

Імунопероксидазний аналіз мл вакцини з ротавірусом 116Е (препарат ЗА) ни ТЕ КОТ ПОН КО: х НО

Приклад 3.2: 0,8 мл вакцини, яка містить ротавірус 116Е, комбінацію із сахарози (40 95), та трегалози (0,5 95), гідролізату лактальбуміну (20 95), полівінілпіролідину (0,5 95) (препарат ЗВ) брали, та додавали з 1,25 мл 0,1 М НС, та добре перемішували. Зразок брали та досліджували щодо вмісту вірусу при різних рівнях рН в різні інтервали часу. Результати наведені в таблиці 5.2 нижче.

Таблиця 5.2

Імунопероксидазний аналіз 0,8 мл вакцини з ротавірусом 116Е (препарат ЗВ). . Вміст вірус Вміст вірус 6 |рнЗо-Зохвилиї//////7777/ | 7777777717593...Ю.Ю...ЮЮЙ. | ...77777/75847 07 |Конвтроль/-/:Д777777771СЇ111717171711716Ло1 Її

Приклад 3.3: 0,5 мл ротавірусної 116Е вакцини, яка містить комбінацію із сахарози (60 95), та трегалози (0,595), соєвого протеїну (2095), піридоксину-НСЇ (0,1 95), полівінілпіролідину (0,25 95) (препарат ЗС) брали та додавали з 1,25 мл 0,1 М НСІ та добре перемішували. Зразок брали та досліджували щодо вмісту вірусу при різних рівнях рН в різні інтервали часу.

Результати наведені в таблиці 5.3 нижче.

Коо)

Таблиця 5.3

Імунопероксидазний аналіз 0,8 мл вакцини з ротавірусом 116Е (препарат ЗС) . Вміст вірусу не

РН 2,0-0 хвилин

ОН 2,0-10 хвилин

ОН 2,0-30 хвилин

ОН 3,0-0 хвилин

ОН 3,0-10 хвилин 7776 рН 30-30 хвилин

Приклад 3.4: 0,5 мл ротавірусної 116Е вакцини, яка містить 10 95 ЗРО, розчинену в ОМЕМ (препарат 30) брали, та додавали з 1,25 мл 0,1 М НОСІ, та добре перемішували. Зразок брали та досліджували щодо вмісту вірусу при різних рівнях рН в різні інтервали часу. Результати наведені в таблиці 5.4 нижче.

Таблиця 5.4

Імунопероксидазний аналіз 0,8 мл вакцини з ротавірусом 116Е (препарат 30) . Вміст вірусу

ОН 2,0-0 хвилин рН 2,0-10 хвилин рН 2,0-30 хвилин

ОН 3,0-0 хвилин

ОН 3,0-10 хвилин 777176 |рнНЗ-30 хвилин

Приклад 3.5: 0,5 мл ротавірусної 116Е вакцини, яка містить сахарозу (40 95), трегалозу (0,5 95), лактозу (5 95), "НБЗА (0,5 95), І АН (1 95) та змішаний буфер (ацетат амонію «ж бікарбнат амонію «т діамонію ортофосфат) (препарат 30) брали, та додавали з 1,25 мл 0,1 М НСІ, та добре перемішували. Зразок брали та досліджували щодо вмісту вірусу при різних рівнях рН в різні інтервали часу. Результати наведені в таблиці 5.5 нижче.

Таблиця 5.5

Імунопероксидазний аналіз 0,8 мл вакцини з ротавірусом 116Е (препарат 30) . Вміст вірусу

ОН 2,0-0 хвилин

ОН 2,0-10 хвилин

ОН 2,0-30 хвилин

ОН 3,0-0 хвилин

ОН 3,0-10 хвилин 7776 рН 30-30 хвилин

Висновки: З наведених вище таблиць очевидно, що також при рН 2,0 протягом 30 хвилин будь-які ротавірусні 116Е вакцинні препарати є здатними витримувати відсутність будь-якого буфера або будь-якого антациду.

Варіант здійснення 4: Аналіз Вабу Ноззеїй Вісе

Аналіз ВКК представляє собою є перевірену процедуру щодо здатності кислотної нейтралізації ротавірусних вакцинних препаратів. Таким чином, відібрані вакцинні препарати, які містять цитрат-фосфатний буфер та цитрат-бікарбонатний буфера, оцінюються щодо здатності кислотної нейтралізації, використовуючи даний аналіз.

Експерименти іп міго проводили в імітованих умовах дитячого шлунка з використанням аналізу Вару Козеце Кісе (ВЕК). Різні препарати з різними комбінаціями буферних агентів були відібрані для експериментів з кислотною нейтралізацією, та результати наведені в таблиці нижче при різних значеннях рН, причому умови моделювалися як в шлунку дитини. Вакцинні препарати розбавляли водою для ін'єкцій до 10 мл, потім додавали 4 мл 0,1 М НОСІ, потім 0,5 мл 0,1 М НС додавали за хвилину до досягнення рН 4,0. АМС визначається як час в хвилинах, взятий для утримання рН вище 4,0.

Таблиця 6

Деталі щодо вакцинних препаратів

Вакцинний препарат 4А Ротавірусний антиген 116Е з цільовим титром 1076 ЕРШЛ,5мл; 10 95 ц р р ЗРО, та ОМЕМ (кількість достатня)

Ротавірусний антиген 116Е з цільовим титром 1076 ЕРШЛ,5мл; 10 95

Вакцинний препарат 4В | 5РО, та ОМЕМ (кількість достатня) додавали до 2,5 мл цитрат бікарбонатного буфера

Ротавірусний антиген 116Е з цільовим титром 1076 ЕРШ/,5мл,

Вакцинний препарат 4С | комбінація з щонайменше 2 цукрами (сахароза 50 95 та трегалоза 0,5 95) та гідролізатом лактальбуміну 0,5 95. (Зразок 8 нижче).

Ротавірусний антиген 116Е з цільовим титром 1076 ЕРШ/,5мл, - Н м о, о

Вакцинний препарат 40 комбінація з щонайменше 2 цукрами (сахароза 40 ую, трегалоза 0,5 95), 0,5 95 гідролізату лактальбуміну, 0,35 95 альбуміну сироватки людини та 1,1М фосфатного буфера.

Наступні спостереження (Таблиця 7) були зроблені щодо аналізу Вару Коззеї Кісе, виконаного з вакцинними препаратами 4А-40, представленими вище.

Таблиця 7

Аналіз Вабру Коззеї Кісе в порівнянні з ротавірусними вакцинними препаратами з та без буфера.

Початко-ві! Титри в . Початковий РН після об ЄМ Значення аналізу титри вакцин в акцинні препарати Н додавання | доданої Вабу Возвеї Вісе вакцин в І(ІЕЕШ,5 мл р кислоти. | 01М НСІ У ЕЕЦ/О,5 | через 1 мл годину

Вакцинний препарат ВЕК менше, ніж 0

АА при -20 С без хвилин А А буфера дозою 7,48 1,95 4,0 мл (моментальне 107483 1073,83 0,5 мл зниження рН)

Вакцинний препарат 4В при -207С 32,5 мл цитрат- ВЕК через 12 А А бікарбонатного 8,35 422 10,0 мл ХВИПИН 1076,17 | 107615 буфера дозою 0,5 мл

Вакцинний препарат 4С при 53 "С без ВЕК через 2 А А буфера дозою 7,28 3,98 5,0 мл ХВИЛИН 1075,30 1075,02 0,5 мл. олив ВА через 6,75 4,33 10,5 мл приблизно 13 107612 106,11 буфером дозою ХВИПИН 1,5 мл або 2 мл

Висновок: Таким чином, з наведеної вище таблиці було виявлено, що навіть якщо для вакцинного препарату 4А, зазначеного вище, який показує негайне зниження від рН 7,48 до рн 1,95, титр вакцини зберігається на рівні 1074,83 ЕРШО/О0,5 мл та 1073,83 ЕРШ/О,5 мл. Таким самим чином, титр вакцини також зберігається у випадку вакцинного препарата 4С від 1075,30 до 1075,02 ЕРШ/О,5 мл, причому рН падає з рН 7,28 до рН 3,98 протягом 2 хвилин. Таким чином, навіть якщо значення ВК. становить тільки 2 хвилин, титр вакцини добре зберігається, тобто 105,02 РЄРШ/О,5 мл. Такого великого титру титр вакцини достатньо для генерування імунної відповіді та, тим самим, здійснюючи захист та профілактику ротавірусного гастроентериту у немовлят людини.

Варіант здійснення 4: дослідження без буфера для КОТАМАСФ, яка включає штам ротавірусу 116Е.

Гіпотеза та обгрунтування дослідження

Природно, що передача ротавірусу відбувається через фекально-оральний шлях.

Ротавіруси в цілому є лабільними в кислотних умовах, та, вважається, що кисле середовище впливає на життєздатність вірусу.

Враховуючи кислотно-лабільний характер ротавірусів, вони настільки ефективні в повсюдно інфікованих ссавців, більшість з яких мають значення рН шлунка близько 2. Одна з можливостей полягає в тому, що шлунок у немовлят може бути дещо більш допустимим для виживання ротавірусу, ніж шлунок дорослого, оскільки рівень рН шлунка у немовляти, як правило, становить приблизно 3,2 в порівнянні з рН у дорослого - приблизно на 1,0. Це може пояснювати той факт, що від 60 до 90 95 зареєстрованого ротавірусного захворювання людини спостерігається у дітей віком до З років.

Дизайн дослідження

З метою дослідження даної гіпотези було проведено велике багатоцентрове рандомізоване контрольоване дослідження щодо оцінки та порівняння імунної відповіді на вакцину у суб'єктів, які отримували КОТАМАС з цитрат-бікарбонатним буфером, по відношенню до тих, хто отримував КОТАМАС без буфера.

Відповідно, дослідження включало наступні три групи лікування: - Група І (отримувала КОТАМАСФ через 5 хвилин після введення 2,5 мл буфера), - Група ІІ (отримувала КОТАМАСФ без буфера),

Зо - Група ІШ (отримувала КОТАМАСФ одразу змішану з 2,5 мл буфера перед введенням).

Дослідник дослідження та оцінювачі безпеки (координатори дослідження) не були проінформовані щодо призначення групи лікування. Непроінформованість була досягнута за допомогою медсестри дослідження, яка вводила вакцину відповідно до виділеної групи лікування. Всі суб'єкти отримували З дози вакцини, які отримували через 4 тижні. Імунну відповідь на вакцину досліджували через 4 тижні після третьої дози вакцини (день 84) та порівнювали з вихідним рівнем (день 0). Імуногенність досліджували за показниками середньогеометричних титрів (ЗМТ) сироваткового антиротавірусного ІДА та сероконверсії (кратне підвищення рівнів антитіл по відношенню перед вакцинацією до після вакцинації) в групах лікування.

Результати дослідження та висновки

Імунну відповідь після вакцинації порівнювали з відсутністю статистично значущої різниці у відповіді антиротавірусного ІдА між групами лікування. Важливо, що сероконверсія та СМТ, які досягались в групі ІЇ (КОТАМАС-, яка вводилась без буфера) була подібною до тих, які були у двох інших групах лікування, в яких КОТАМАС?З? був введений з буфером.

Після вакцинації антиротавірусний ІДА СМТ в групі, в якій КОТАМАС вводили без буфера, становив 20,7 Од./мл в порівнянні з 19,6 Од./мл та 19,2 Од./мл в двох групах, які отримували антацидний буфер за 5 хвилин до вакцини вакцина та одночасно змішаний з вакциною, відповідно (Таблиця 8). Відмінності між групами не були статистично значущими (р» 0,05, параметричний і-критерій Стьюдента).

Таблиця 8

Середньогеометричні титри та 95 95 СІ щодо результатів (день 0 та день 84)

Група І (М-290) Група "І (М-287 Група Ш (М-286 95 95 СІ 95 95 СІ 95 95 СІ 9,4, 11,7 9,7, 11,9 9,2, 11,3 17,0, 22,7 17,8, 240 16,8, 22.1

М - Кількість суб'єктів, оцінених у кожній групі; МТ - середньогеометричне; 9595 СІ (ГГ, ОМ « довірчі інтервали (нижня межа, верхня межа)

Аналогічно, чотирикратна сероконверсія, яка спостерігалася в групах, які отримували

ВОТАМАСЗ без антацидного буфера та з буфером, була аналогічною на рівні 29,2 о, 24,5 95 та 25,1 95, відповідно (Таблиця 9). Крім того, нижня межа 95 95 довірчого інтервалу відмінності сероконверсії (2-кратна) між групами лікування становила » -10905, яка вказувала на неналежність імунної відповіді, досягнутої з усіма трьома схемами лікування (таблиця 10).

Таблиця 9

Сероконверсії та 95 95 СІ (2, З або 4 кратна зміна титрів антитіл) між перед вакцинацією та на 84-й день вакцинації

Група І (М-290 Група ІІ (М-287 Група Ш (М-286 зміни 95 95 СІ 95 95 СІ 95 96 СІ 25,7, 36,2 29,9, 40,9 28,3, 39,2 22,8, 331 27,3, 381 26,7, 37,4 19,8, 29,7 24,3, 34,8 20,5, 30,5

М - Кількість суб'єктів, оцінених в кожній групі; (95 905 СІ) - довірчі інтервали (нижня межа, верхня межа)

Таблиця 10

Відмінність в 95 2-кратній сероконверсії після вакцинації в групах лікування до 2-кратна сероконверсія після вакцинації (день 84)

Група І (М-290) Група ІІ (М-287) Група Ш (М-286) 95 975 СІ 95 95 СІ 95 95 СІ 25,7, 36,2 29,9, 40,9 28,3, 39,2

Різниця в 95 сероконверсії з 95 95 СІ 2-сторонній, Хі-квадрат критерій) 95 (95 95 СІ відмінності)

Група І в порівнянні з групою ЇЇ 4,5 (-3,5, 12,5

Група ІІ в порівнянні з групою І 1,6 (-6,5, 9,7

Група І в порівнянні з групою ІЇЇ 2,9 (-4,7, 10,5

Реактогенність та безпечність по відношенню до затребуваних і небажаних небажаних подій були порівнянні між трьома групами без статистично значущих відмінностей. Вакцина

КОТАМАСО добре переносилася в усіх трьох групах лікування, які отримували вакцину з або без антацидного буфера.

Варіант здійснення 5: Нові ротавірусні 116Е препарати

Дані щодо стабільності ОКМ 116Е рідких препаратів при 372С, 259С та 2-86

Ротавірусні вакцинні препарати з об'ємом дози 0,5 мл без буфера (зразки з 1 по 12, з 14 по 16), та зі змішаним буфером з об'ємом дози 0,5 мл (зразок 13) досліджували протягом тривалого періоду часу, який знаходиться в діапазоні протягом періоду до 5 років, представлені нижче. Різні деталі препаратів представлені нижче разом зі стабільностями при 37 "С протягом до 4 тижнів, 25 "С протягом щонайменше 6 місяців, та при 5-3 "С протягом від 2 років до 5 років.

Дослідження встановлюють, що ротавірусні вакцинні препарати без буфера з об'ємами дози 0,5 мл є також стабільними в природі протягом тривалого періоду часу при температурі в холодильнику протягом щонайменше 2 років. Ротавірусні вакцинні препарати, як також було виявлено, є стабільними протягом 5 років при температурі в холодильнику.

Зразок 1 формулюється, як такий, що містить ротавірус 116Е, сахарозу 50 95, лактозу 0,5 95,

Н5БА 0,5 95 та гідролізат лактальбуміну 0,05 95.

Стабільність зразка 1:

Температура 5 | 602 | 60 | юю | 1643 | бе 6иб | 66 | 607 2592 | 602 | 607 | 581 | 59 | 551 465 ДЦ ( і 379с | 602 | 5532 | 263 | | | її її її її

Зразок 2 формулюється, як такий, що містить ротавірус 116Е, сахарозу 50 95, трегалозу 0,5 Фо, НБЗА 0,5 95 та гідролізат лактальбуміну 0,5 Об.

Стабільність зразка 2:

Температураїбдень| ІМ | |2мМ | зм | 6м | мМ | 12М | 24М | З6М | бом 5536с | 609 614| | | |6л9| 607 бло | 6бо5|601 2556 | 609 602| |606| 563 | БІ |2481.Й.Й.ОС-СХЇ.:УККЩШРЖЇ

І 37с |609|547| |з283| | / її її її

Зразок з формулюється, як такий, що містить ротавірус 116Е, сахарозу 50 95, трегалозу 1,0 95, НБЗА 0,5 95 та гідролізат лактальбуміну 0,5 95.

Стабільність зразка 3:

Температура 553 | бг2 | б2г4 | | |626| | бла | бго | биз | бо 2556 | бг2 | 68 | бл | 580 | 554 | 203| | | / 37 | бг2 | 555 | 3д22а| | | |! її ЇЇ її

Зразок 4 формулюється, як такий, що містить ротавірус 116Е, сахарозу 40 95, лактозу 0,5 95, та гідролізат лактальбуміну 1,0 Об.

Стабільність зразка 4: 53 | вл | 6б18| | |608| |6гі | 624 |6л2 2596 | вло | 566 | 50 48 | 301| | ЇЇ / 37 | бля | 423|20| | | | її Її

Зразок 5 формулюється, як такий, що містить ротавірус 116Е, сахарозу 40 95, мальтозу 5,0 95 та гідролізат лактальбуміну 1,0 9.

Стабільність зразка 5:

Температура о Б53оС | 635 | 637 | | | б/в |... | 6011617 |608| Ж жЖКБ 25966 | 635 | 589 | 51 | 477 | 243 ...ЙО/| | | її і з7с | 635 | 53 | 358 Її 1171111

Зразок 6 формулюється, як такий, що містить ротавірус 116Е, сахарозу 40 95, трегалозу

Зо 0,5 95 та гідролізат лактальбуміну 1 95.

Стабільність зразка 6:

Температура 536 | бло | 65 | (| |6л0| |603|бгг|виз 2556 | 69 | 587 | 543 | 512 |325| | | | ГГ і 37с | бло | 402 | 252|, | | ! Її Її її

Зразок 7 формулюється, як такий, що містить ротавірус 116Е, Сахароза 40 95, Трегалози 1,0 95 та Гідролізату лактальбуміну 1,0 95.

Стабільність зразка 7:

Температура | 634 |5| | |600| |5551607)|609 2566 1 634 | 607 | 58 | 59 | 551 |465| | | / 37 | 634 |532| 263 | | | /!/ /Ї її її

Зразок 8 формулюється, як такий, що містить ротавірус 116Е, сахарозу 50 95, трегалозу 5 0,5 95, та гідролізат лактальбуміну 0,5 95.

Стабільність зразка 8:

Температура 5 1 634 | 634 | 177777177/1633|631| 62 6л4| 6084 2566 1 634 | 632 бла | 60 1525|.ЙДЙДЦГ | (| | Її і 37с | 634 | 5 4 її ЇЇ 1 1 1

Зразок 9 формулюється, як такий, що містить ротавірус 116Е, сахарозу 9о, трегалозу 0,5 95.

Стабільність зразка 9:

Температура 5539С | 638 |6931| | | 6б2з 644 635| боб |6В| Жщ ЗЖ 12556 | 638 | б | 635623 55117171 і 37с | 638 |507|401| | її її ЇЇ її

Зразок 10 формулюється, як такий, що містить ротавірус 116Е, сахарозу 50 95, лактозу 0,5 965, мальтозу 0,5 95, НБ5А 0,5 95 та гідролізат лактальбуміну 0,05 95.

Стабільність зразка 10:

Температура 53 | 625 | 65 | | | 6боз | 634| 608 блг|вбіу в 2566 | 625 | 64 | 627 | бл2 | 588|.ЙДЦ| / її 37 | 625 |502|4535| | | / її Її

Зразок 11 формулюється, як такий, що містить ротавірус 116Е, сахарозу 50 95, трегалозу 0,5 965, мальтозу 0,5 95, Н5А 0,5 9.

Стабільність зразка 11:

Температура 539 | 6,68 | 6,62 | 695 | 684 664 |665| 637 672 |605 2556 | 668 | 6,50 | бго | 604 532 |447 і 37с | 668 | бло | 558 | 426|.Й.ЙДЙДЦ | | її / Її

Зразок 12 формулюється, як такий, що містить ротавірус 116Е, сахарозу 50 95, трегалозу 0,5 Фо, НБЗА 0,5 95 та гідролізат лактальбуміну 0,05 95.

Стабільність зразка 12:

Температура о 5иЗоС | 6,62 | 676 | 698 | 7,00 | 6,86 6,74 599| 646 |67 і 2596б6 | 6бб2 | 646 | бда | 599 | 5БЗ 325 і з7с | 6ббв2 | 558 | 506 | (МГ | її / Її

Зразок 13 формулюється, як такий, що містить ротавірус 116Е, сахарозу (40 95), трегалозу (0,5 95), лактозу (5 95), "НБЗА (0,5 95), І АН (1 95) та змішаний буфер (ацетат амонію «т бікарбнат

Зо амонію «т діамонію ортофосфат).

Стабільність зразка 13:

5БЗоС | 661 | 6,59 | 658 | 66О | 653 | 654 | бл 60 |583 2556 | 661 | 646 | 644 | 579 | 525 | 415 | -: !/|/ і з7с | 661 | 556 | Б | | / / її Її

Стабільність зразка 13 при -20 "С: і -2ос | 661 | 659 | 659 | 656 | 654 | б52 | 621 | би | биЗ | 6.09

Зразки 14, 15 та 16 формулюються з ротавірусом 116Е, 10 95 5РО, розчинений в ОМЕМ.

Зразки 14, 15, та 16 зберігаються при -20 "С, та стабільність перевіряють протягом 60 місяців.

Вакцинні препарати 13, 14, та 15, як було встановлено, є дуже стабільними стабільну при -20 С протягом періоду щонайменше 5 років. (Зразок16 (106,0 РРО,» мл) | 62 |6л216,06| 6,331 6,36 | 6,27 | 6,15 | 6.11 | 6,05

Таким чином, встановлено, що різні ротавірусні вакцинні композиції з об'ємом дози 0,5 мл є стабільними при -20 "С протягом 5 років, 2-8 "С протягом 2 років, 25 "С протягом 6 місяців, та 37 "С протягом 1 тижня. Незалежно від вакцинного препарату, ротавірусна вакцина з об'ємом дози від 0,5 мл до 1 мл, як також було виявлено, є стійкою до кислоти, як ілюструється у варіанті здійснення 3, а також в діапазоні рН 2-4. Таким чином, заявники бажають зазначити, що незалежно від деталей вакцинної композиції, будь-яка ротавірусна вакцина, яка містить живий ослаблений ротавірус 116Е, є здатною витримувати сильне кислотне середовище в шлунку немовлят людини та виробляти необхідну імунну відповідь проти ротавірусної інфекції.

Вакцинні препарати, представлені в даній патентній заявці, є призначеними тільки для цілей пояснення широти та глибини винаходу. Заявнику неможливо надати всі можливі деталі вакцинного препарата, хоча заявник надав численні стратегії формулювання препарата у варіанті здійснення 3, прикладі З та варіанті здійснення 5. Таким чином, всі можливі очевидні варіації кваліфікованим фахівцем в даній галузі щодо стратегії ротавірусного вакцинного препарата, який містить штам ротавірусу 116Е, також є охопленим даним винаходом. Слід розуміти та відповідно тлумачити, що вакцинні композиції, які конкретно не включені в дану заявку на патент, що включає живий ослаблений ротавірус 116Е, також охоплюються в обсягом даного винаходу.

Коо)

Claims (13)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Ротавірусна вакцина без буфера, стійка до кислоти, дозою 0,5 мл, яка є рідкою для перорального введення, композиція якої містить: (а) штам ротавірусу 116Е; 35 (5) комбінацію з цукрів, вибраних з сахарози, лактози та трегалози; (с) гідролізат лактоальбуміну; та (4) рекомбінантний людський сироватковий альбумін в кількості до 0,4 9о, де зазначений вакцинний препарат є здатним викликати імунну відповідь проти ротавірусу, яка дорівнює або перевищує імунну відповідь, що генерується будь-якою звичайною ротавірусною вакциною з 40 буфером.

2. Ротавірусна вакцина за пунктом 1, яка відрізняється тим, що препарат не містить ніяких видів буферів для захисту ротавірусного антигену від кислотності шлунка.

З. Ротавірусна вакцина за пунктом 1, яка відрізняється тим, що зазначений вакцинний препарат є стабільним в шлунку при рН 2 до рН 4 без втрати титру та є здатним витримувати 45 кислотність шлунка у людини протягом періоду щонайменше 20 хвилин без будь-яких добавок антациду або буфера.

4. Ротавірусна вакцина за пунктом 1, яка відрізняється тим, що вакцина не вимагає введення будь-якого антациду або буфера, перед або після введення вакцини суб'єкту.

5. Ротавірусна вакцина за пунктом 1, причому вакцина є стабільною при -20 "С протягом 50 щонайменше 60 місяців.

6. Ротавірусна вакцина за пунктом 1, причому вакцина є стабільною при 2-8 "С протягом щонайменше 36 місяців, при 25 "С протягом 6 місяців та 37 "С протягом щонайменше 4 тижнів.

7. Ротавірусна вакцина за пунктом 1, причому зазначена імунна відповідь генерується з показниками чотирикратної сероконверсії після вакцинації або аналогічної, або більшої за сероконверсію, яка досягається з вакцинним препаратом або в присутності буферів, або за рахунок введення антацидів.

8. Спосіб генерування імунної відповіді у суб'єкта проти ротавірусу, який включає пероральне введення 0,5 мл стабілізованого ротавірусного вакцинного препарату без будь-якого антациду або буфера, причому зазначений препарат містить штам ротавірусу 116Е, комбінацію з цукрів, вибраних з сахарози, лактози та трегалози, гідролізату лактальбуміну, рекомбінантного людського сироваткового альбуміну, без наявності будь-якого буферного препарату в зазначеному ротавірусному вакцинному препараті.

9. Спосіб за пунктом 8, в якому зазначений ротавірусний вакцинний препарат не вимагає введення будь-якого антациду або буфера, перед або після введення вакцини суб'єкту.

10. Спосіб за пунктом 8, в якому зазначені ротавірусний вакцинний препарат є здатним витримувати кислотність шлунка у людини протягом періоду часу, щонайменше 20 хвилин в діапазоні відрН2 до рН 4.

11. Спосіб за пунктом 8, в якому зазначений ротавірусний вакцинний препарат є стабільним протягом періоду щонайменше 60 місяців при -20 "С.

12. Спосіб за пунктом 8, в якому зазначений ротавірусний вакцинний препарат є стабільним протягом періоду щонайменше З роки при 2-8 "С, періоду щонайменше 6 місяців при 25 "С, та протягом періоду щонайменше 4 тижні при 37 "С.

13. Спосіб за пунктом 8, в якому зазначений вакцинний препарат, коли вводиться перорально суб'єкту без антациду або буфера є здатним генерувати імунну відповідь з показниками чотирикратної сероконверсії після вакцинації або аналогічної, або більшої, за сероконверсію, яка досягається з вакцинним препаратом або в присутності буферів, або за рахунок введення антацидів.