UA116531C2 - Виділена молекула антитіла, яка специфічно зв'язується з ділянкою екзосайта 1 тромбіну, та її застосування - Google Patents
Виділена молекула антитіла, яка специфічно зв'язується з ділянкою екзосайта 1 тромбіну, та її застосування Download PDFInfo
- Publication number
- UA116531C2 UA116531C2 UAA201406892A UAA201406892A UA116531C2 UA 116531 C2 UA116531 C2 UA 116531C2 UA A201406892 A UAA201406892 A UA A201406892A UA A201406892 A UAA201406892 A UA A201406892A UA 116531 C2 UA116531 C2 UA 116531C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- thrombin
- antibody molecule
- exosite
- antibody
- molecule according
- Prior art date
Links
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 title claims abstract description 138
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 title claims abstract description 137
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 39
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims abstract description 17
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 7
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 claims description 37
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 30
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 claims description 29
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 23
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 20
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 claims description 17
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 7
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 6
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 5
- 230000001732 thrombotic effect Effects 0.000 claims description 5
- 208000005189 Embolism Diseases 0.000 claims description 4
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 claims description 4
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 claims description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 claims description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims description 2
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 claims description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 claims description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 claims description 2
- 244000005894 Albizia lebbeck Species 0.000 claims 3
- 241000566113 Branta sandvicensis Species 0.000 claims 1
- 101100209990 Rattus norvegicus Slc18a2 gene Proteins 0.000 claims 1
- 235000006732 Torreya nucifera Nutrition 0.000 claims 1
- 244000111306 Torreya nucifera Species 0.000 claims 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 claims 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 abstract 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 32
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 27
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 21
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 21
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 20
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 17
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 17
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 17
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 16
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 16
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 16
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 15
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 15
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 15
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 14
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 14
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 13
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 13
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 13
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 13
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 13
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 13
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 13
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 11
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 11
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 11
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 10
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 9
- 210000003191 femoral vein Anatomy 0.000 description 9
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 9
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 8
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 8
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 8
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 8
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 8
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 8
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 8
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 8
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 8
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 8
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 229960003766 thrombin (human) Drugs 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 6
- 239000004019 antithrombin Substances 0.000 description 6
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 6
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- MGVRBUNKWISLAM-DQWUKECYSA-N (4s)-5-[[(2s)-1-[[(2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]-[(2s)-4-methyl-1-oxo-1-sulfooxypentan-2-yl]amino]-4-carboxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-[[(2s)-1-[(2s,3s)-2-[[(2s)-4-carboxy-2-[[(2s)-4-carboxy-2-[[(2s)-2-[[(2s)-3-carboxy-2-[[2-[[(2s)-2,4-diamino- Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N([C@@H](CC(C)C)C(=O)OS(O)(=O)=O)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C1=CC=CC=C1 MGVRBUNKWISLAM-DQWUKECYSA-N 0.000 description 5
- 238000002266 amputation Methods 0.000 description 5
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 5
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 5
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 5
- 210000001715 carotid artery Anatomy 0.000 description 5
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 5
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 5
- 108010059239 hirugen Proteins 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 5
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 5
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 4
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 4
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 4
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 3
- 206010014523 Embolism and thrombosis Diseases 0.000 description 3
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 3
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 3
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108010079274 Thrombomodulin Proteins 0.000 description 3
- 102000012607 Thrombomodulin Human genes 0.000 description 3
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 3
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 3
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 3
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 108010027612 Batroxobin Proteins 0.000 description 2
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 2
- 206010048964 Carotid artery occlusion Diseases 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010020608 Hypercoagulation Diseases 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Natural products OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 description 2
- 102000017975 Protein C Human genes 0.000 description 2
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 2
- 208000024248 Vascular System injury Diseases 0.000 description 2
- 208000012339 Vascular injury Diseases 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- -1 cofactor Substances 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000001631 haemodialysis Methods 0.000 description 2
- 230000000322 hemodialysis Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N p-hydroxybenzoic acid methyl ester Natural products COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 239000003805 procoagulant Substances 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N resorcinol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1 GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 201000005665 thrombophilia Diseases 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N (+)-catechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N 0.000 description 1
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- QNZCBYKSOIHPEH-UHFFFAOYSA-N Apixaban Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1N1C(C(=O)N(CC2)C=3C=CC(=CC=3)N3C(CCCC3)=O)=C2C(C(N)=O)=N1 QNZCBYKSOIHPEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037260 Atherosclerotic Plaque Diseases 0.000 description 1
- 208000035404 Autolysis Diseases 0.000 description 1
- 239000005552 B01AC04 - Clopidogrel Substances 0.000 description 1
- 239000005528 B01AC05 - Ticlopidine Substances 0.000 description 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241000251730 Chondrichthyes Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 1
- 206010011086 Coronary artery occlusion Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010014522 Embolism venous Diseases 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 230000026769 Factor XII activation Effects 0.000 description 1
- 241000724791 Filamentous phage Species 0.000 description 1
- 101100295738 Gallus gallus COR3 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 206010018852 Haematoma Diseases 0.000 description 1
- 206010019196 Head injury Diseases 0.000 description 1
- 108010022901 Heparin Lyase Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000651439 Homo sapiens Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 101000892986 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase FRK Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical class C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 241000270322 Lepidosauria Species 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 101000994660 Rattus norvegicus Potassium voltage-gated channel subfamily A member 2 Proteins 0.000 description 1
- 101150060303 SOK2 gene Proteins 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241001415849 Strigiformes Species 0.000 description 1
- 208000002667 Subdural Hematoma Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 101000712605 Theromyzon tessulatum Theromin Proteins 0.000 description 1
- 229940122388 Thrombin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 208000001435 Thromboembolism Diseases 0.000 description 1
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 1
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 1
- 206010043647 Thrombotic Stroke Diseases 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 102100040959 Tyrosine-protein kinase FRK Human genes 0.000 description 1
- 206010047249 Venous thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 229960000446 abciximab Drugs 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940127218 antiplatelet drug Drugs 0.000 description 1
- 229960003886 apixaban Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- KXNPVXPOPUZYGB-XYVMCAHJSA-N argatroban Chemical compound OC(=O)[C@H]1C[C@H](C)CCN1C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NS(=O)(=O)C1=CC=CC2=C1NC[C@H](C)C2 KXNPVXPOPUZYGB-XYVMCAHJSA-N 0.000 description 1
- 229960003856 argatroban Drugs 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229940090047 auto-injector Drugs 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 1
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H bis[(2-oxo-1,3,2$l^{5},4$l^{2}-dioxaphosphaplumbetan-2-yl)oxy]lead Chemical compound [Pb+2].[Pb+2].[Pb+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 108010055460 bivalirudin Proteins 0.000 description 1
- 229960001500 bivalirudin Drugs 0.000 description 1
- OIRCOABEOLEUMC-GEJPAHFPSA-N bivalirudin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 OIRCOABEOLEUMC-GEJPAHFPSA-N 0.000 description 1
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N butyl alcohol Substances CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 108090001015 cancer procoagulant Proteins 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N catechin Natural products OC1Cc2cc(O)cc(O)c2OC1c3ccc(O)c(O)c3 ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000005487 catechin Nutrition 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 229950001002 cianidanol Drugs 0.000 description 1
- 229960003009 clopidogrel Drugs 0.000 description 1
- GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N clopidogrel Chemical compound C1([C@H](N2CC=3C=CSC=3CC2)C(=O)OC)=CC=CC=C1Cl GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000011969 continuous reassessment method Methods 0.000 description 1
- 229940125808 covalent inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101150044687 crm gene Proteins 0.000 description 1
- HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N cyclohexanol Chemical compound OC1CCCCC1 HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003850 dabigatran Drugs 0.000 description 1
- YBSJFWOBGCMAKL-UHFFFAOYSA-N dabigatran Chemical compound N=1C2=CC(C(=O)N(CCC(O)=O)C=3N=CC=CC=3)=CC=C2N(C)C=1CNC1=CC=C(C(N)=N)C=C1 YBSJFWOBGCMAKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000000151 deposition Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002618 extracorporeal membrane oxygenation Methods 0.000 description 1
- 238000013213 extrapolation Methods 0.000 description 1
- 230000020764 fibrinolysis Effects 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N hirudin Chemical class C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(OS(O)(=O)=O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H]2CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N2)=O)CSSC1)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)[C@@H](C)O)CSSC1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940039715 human prothrombin Drugs 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 229960004408 lepirudin Drugs 0.000 description 1
- OTQCKZUSUGYWBD-BRHMIFOHSA-N lepirudin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)[C@@H](C)O)C1=CC=C(O)C=C1 OTQCKZUSUGYWBD-BRHMIFOHSA-N 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000003055 low molecular weight heparin Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Chemical class 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000006213 oxygenation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- 230000006461 physiological response Effects 0.000 description 1
- 239000000106 platelet aggregation inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002947 procoagulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 229960001148 rivaroxaban Drugs 0.000 description 1
- KGFYHTZWPPHNLQ-AWEZNQCLSA-N rivaroxaban Chemical compound S1C(Cl)=CC=C1C(=O)NC[C@@H]1OC(=O)N(C=2C=CC(=CC=2)N2C(COCC2)=O)C1 KGFYHTZWPPHNLQ-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- 235000002020 sage Nutrition 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000009738 saturating Methods 0.000 description 1
- 238000010517 secondary reaction Methods 0.000 description 1
- 230000028043 self proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 239000003001 serine protease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M stearalkonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 238000012032 thrombin generation assay Methods 0.000 description 1
- 239000003868 thrombin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229960005001 ticlopidine Drugs 0.000 description 1
- PHWBOXQYWZNQIN-UHFFFAOYSA-N ticlopidine Chemical compound ClC1=CC=CC=C1CN1CC(C=CS2)=C2CC1 PHWBOXQYWZNQIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 208000004043 venous thromboembolism Diseases 0.000 description 1
- 229960005080 warfarin Drugs 0.000 description 1
- PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N warfarin Chemical compound OC=1C2=CC=CC=C2OC(=O)C=1C(CC(=O)C)C1=CC=CC=C1 PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/36—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against blood coagulation factors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Винахід стосується виділеної молекули антитіла, яка специфічно зв’язується з ділянкою екзосайта 1 тромбіну. Винахід також стосується фармацевтичної композиції, що включає дану молекулу антитіла, застосування молекули антитіла у виробництві лікарського засобу та способу лікування тромбін-медійованого стану.
Description
молекулу антитіла, застосування молекули антитіла у виробництві лікарського засобу та способу лікування тромбін-медійованого стану.
Даний винахід стосується молекул антитіла, що інгібує тромбін.
Згортання крові є ключовим процесом в запобіганні кровотечі з ушкоджених кровоносних судин (гемостаз). Однак, згусток крові, який заважає потоку крові у судині (тромбоз) або відривається, відкладаючись у судині десь в іншій частині організму (тромбоемболізм), може бути серйозною загрозою для здоров'я.
Існує ряд антикоагулянтних терапій для лікування патологічного згортання крові. Спільним недоліком цих терапій є підвищений ризик кровотечі (МасКтап (2008) Маїшге 451(7181): 914- 918). Багато антикоагулянтів мають вузьке терапевтичне вікно між дозою, що запобігає тромбозу, та дозою, що індукує кровотечу. Це вікно часто додатково обмежене варіаціями відгуку у індивідуальних пацієнтів.
Даний винахід стосується несподіваного відкриття, що молекули антитіла, яке розпізнає епітоп екзосайта 1 тромбіну, селективно інгібують тромбін без промотування кровотечі. Ці молекули антитіла можуть бути корисними для лікування та профілактики тромбозу, емболізму та інших станів, медійованих тромбіном.
Аспект даного винаходу передбачає виділену молекулу антитіла, яка специфічно зв'язується з екзосайтом 1 тромбіну.
Виділені молекули антитіла проти екзосайта 1 можуть інгібувати тромбін іп мімо без промотування або суттєвого промотування кровотечі або геморагії, тобто молекули антитіла не інгібують або суттєво не інгібують нормальні фізіологічні відповіді на судинне ушкодження (тобто гемостаз). Наприклад, гемостаз може не інгібуватися або може мінімально інгібуватися молекулами антитіла (тобто інгібуватися в незначному ступені, що не впливає на самопочуття пацієнта або не потребує додаткового втручання). Кровотеча може не збільшуватися або може мінімально збільшуватися молекулами антитіла.
Екзосайт 1 (також відомий як "аніонзв'язуючий екзосайт 1" та "екзосайт розпізнавання фібриногену") є добре охарактеризованим вторинним сайтом зв'язування молекули тромбіну (див., наприклад, щЧатез А. Нипііпдіоп, 2008, зігисіига! Іпзідніє іпіо (Ше І Ше Нібіогу ої Тпготбіп, у: Кесепі Адмапсе5 іп Тпготровів апа
Нетозіазів 2008, едіют5; К. Тапака апа ЕМ/. Оамівє, Зргіпдег Чдхарап КК, Токуо, рр. 80-106).
Екзосайт 1 формується у зрілому тромбіні, але не сформований у протромбіні (див., наприклад,
Зо Апаегзоп вї аї. (2000) УВО 2775 16428-16434).
Екзосайт 1 бере участь у розпізнаванні субстратів тромбіну, таких як фібриноген, але є віддаленим від каталітично активного сайта. Різні фактори зв'язування тромбіну зв'язуються з екзосайтом 1, включаючи антикоагулянт додекапептид гіруген (ПпПігидеп) (МабкКі еї аїЇ. 1990 УВС 265 13484-13489), фактор М, фактор МІ, тромбомодулін (кофактор активації білка С та ТАРІ (активований тромбіном інгібітор фібринолізу)), фібриноген, РАК! та фібрин (кофактор активації фактора ХІЇ).
Антитіло проти екзосайта 1 може зв'язуватися з екзосайтом 1 зрілого людського тромбіну.
Послідовність людського препротромбіну представлена в 5ЕО ІЮ МО: 1. Людський протромбін має послідовність залишків 44-622 5ЕО ІЮО МО: 1. Зрілий людський тромбін має послідовність залишків 314-363 (легкий ланцюг) та залишків 364-622 (важкий ланцюг).
В деяких варіантах втілення, антитіло проти екзосайта 1 може також зв'язуватися з екзосайтом 1 зрілого тромбіну інших біологічних видів. Послідовності тромбіну інших біологічних видів відомі фахівцям та доступні у публічних базах даних, таких як СепрапкК. Відповідні залишки у послідовностях тромбіну інших біологічних видів можуть бути легко ідентифіковані за допомогою інструментів вирівнювання послідовностей.
Схема нумерації тромбінових залишків, викладена в даному документі, «є загальноприйнятою для даної галузі техніки та базується на хімотрипсиновій матриці (Воде УМ еї ам. ЕМВО 3). 1989 Мом; 8(11):3467-75). Тромбін має інсерційні петлі у порівнянні з хімотрипсином, які позначають послідовно маленькими літерами.
Екзосайт 1 зрілого людського тромбіну підкреслений у 5ЕО ІЮ МО: 1 і може включати такі залишки: М32, Е34, К35, К3б6, 53ба, РЗ7, 238, Е39, 140, 165, 867, 572, 873, 174, 875, У76,
В77а, М78, ЕВ8О, К81, Ів2, 583, М84, К109, К110, К1496, 0150, 0151, 5153 та М154. В деяких варіантах втілення, інші тромбінові залишки, розташовані поряд (тобто, на відстані не більш ніж 0,5 нм або не більш ніж 1 нм) з будь-яким із цих залишків, також може вважатися частиною екзосайта 1.
Антитіло проти екзосайта 1 може зв'язуватися з епітопом, який включає 1,2, 3,4,5,6, 7,8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 або більш ніж 20 залишків екзосайта 1. Краще, антитіло проти екзосайта 1 зв'язується з епітопом, який цілююом складається із залишків екзосайта 1. 60 Наприклад, антитіло проти екзосайта 1 може зв'язуватися з епітопом, який включає 1, 2, 3,
4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 або усі 16 залишків, вибрані з групи, що складається з М32,
Е34, 5Зба, РЗ7, 038, ЕЗ39, 140, 165, 67, К73, 174, К75, 76, К77а, І82 та 9151 людського тромбіну або еквівалентних залишків у тромбіні інших біологічних видів. У деяких кращих варіантах втілення, епітоп може включати тромбінові залишки 038, К73, 174, 76 та К77а та, необов'язково, один чи декілька додаткових залишків.
Молекули антитіла проти екзосайта 1, описані в даному документі, є специфічними до екзосайта 1 тромбіну та зв'язуються з цим епітопом з високою афінністю у порівнянні з іншими епітопами, наприклад, епітопами з білків ссавців, відмінних від зрілого тромбіну. Наприклад, молекула антитіла проти екзосайта 1 може виявляти афінність зв'язування з екзосайтом 1 тромбіну, щонайменше у 500 разів, щонайменше у 1000 разів, або щонайменше у 2000 разів більшу, ніж з іншими епітопами.
Краще, молекула антитіла, описана в даному документі, яка є специфічною до екзосайта 1, може зв'язуватися зі зрілим тромбіном, але не виявляє зв'язування або по суті на зв'язується з протромбіном.
Без обмеження будь-якою теорією, антитіла проти екзосайта 1 можуть бути нездатними наближатися до тромбіну у серцевині гемостатичного згустку, і тому нездатні впливати на гемостаз шляхом перешкоджання нормальній функції тромбіну на ділянках судинних ушкоджень. Однак, через те, що антитіла проти екзосайта 1 усе-такі зв'язуються з тромбіном на поверхні згустку та у зовнішній оболонці згустку, відбувається запобігання тромбозу, тобто перешкоджається розширення не-гемостатичного згустку.
Молекула антитіла проти екзосайта 1 може мати константу дисоціації з екзосайтом 1, яка становить менш ніж 50 нМ, менш ніж 40 нМ, менш ніж 30 нМ, менш ніж 20 нМ, менш ніж 10 нМ, або менш ніж 1 нМ. Наприклад, молекула антитіла може мати афінність до екзосайта 1, що становить від 0,1 до 50 нМ, наприклад, від 0,5 до 10 нМ. Придатна молекула антитіла проти екзосайта 1 може, наприклад, мати афінність до екзосайта 1 тромбіну, що дорівнює приблизно 1 нм.
Кінетика зв'язування та афінність (виражена як рівноважна константа дисоціації, Ка) молекул антитіла проти екзосайта 1 можуть бути визначені за допомогою стандартних методів, таких як поверхневий плазмонний резонанс, наприклад, з використанням аналізу ВІіАсоге.
Зо Молекула антитіла проти екзосайта 1, описана в даному документі, може бути імуноглобуліном або його фрагментом, і може бути природною або частково чи повністю синтетично одержаною, наприклад, рекомбінантною молекулою.
Молекули антитіла проти екзосайта 1 можуть включати будь-який поліпептид або білок, що включає антигензв'язуючу ділянку антитіла, включаючи Раб, Рар2г, Рар3З, діатіла, триатіла, тетратіла, мінітіла та однодоменні антитіла, включаючи нанотіла, а також цілі антитіла будь- якого ізотипу або підкласу. Молекули антитіла та способи їх конструювання і застосування описані, наприклад, у Ноїїїдег 5 Ниазоп, Майшге Віоїесппоіоду 23(9):1126-1136 (2005).
У деяких кращих варіантах втілення, молекула антитіла проти екзосайта 1 може бути цілим антитілом. Наприклад, молекула антитіла проти екзосайта 1 може належати до Ідс, ІдДА, ІДЕ чи
ІМ або будь-якого з підкласів ізотипу, зокрема ІДС! та Ідсб4. Молекули антитіла проти екзосайта 1 можуть бути моноклональними антитілами. В інших кращих варіантах втілення, молекула антитіла проти екзосайта 1 може бути фрагментом антитіла.
Молекули антитіла проти екзосайта 1 можуть бути химерними, гуманізованими або людськими антитілами.
Молекули антитіла проти екзосайта 1, описані в даному документі, можуть бути виділені, в розумінні звільнення від забруднень, таких як антитіла, здатні зв'язувати інші поліпептиди, та/або компоненти сироватки. Моноклональні антитіла є кращими для певних застосувань, хоча можуть бути використані також поліклональні антитіла.
Молекули антитіла проти екзосайта 1 можуть бути одержані з використанням методів, які є стандартними в даній галузі техніки. Способи продукування антитіл включають імунізацію ссавця (наприклад, мишу, щура, кроля, коня, козу, вівцю або мавпу) білком або його фрагментом. Антитіла можуть бути одержані від імунізованих тварин з використанням будь-якої з множини методик, відомих фахівцям, та піддані скринінгу, краще, з використанням зв'язування антитіла з бажаним антигеном. Наприклад, можуть бути використані методи вестерн-блотинга або імунопреципітації (Агтйаде еї аїЇ.,, 1992, Маїште 357: 80-82). Виділення антитіл та/або антитіло-продукуючих клітин у тварини може супроводжуватися стадією умертвіння тварини.
Як альтернатива або на додаток до імунізації ссавця пептидом, антитіло, специфічне по відношенню до білка, може бути одержане з рекомбінантно продукованої бібліотеки експресованих варіабельних доменів імуноглобуліну, наприклад, з використанням лямбда- 60 бактеріофага або ниткоподібного бактеріофага, які демонструють на своїх поверхнях функціональні імуноглобулін- зв'язуючі домени; наприклад, див. УМО92/01047. Бібліотека може бути наївною, тобто, сконструйованою з послідовностей, одержаних від організму, який не був імунізований будь-яким з білків (або фрагментів), або може бути сконструйована з використанням послідовностей, одержаних від організму, експонованого потрібним антигеном.
Інші молекули антитіла проти екзосайта 1 можуть бути ідентифіковані шляхом проведення скринінгу сироватки пацієнта на антитіла, які зв'язуються з екзосайтом 1.
В деяких варіантах втілення, молекули антитіла проти тромбіну можуть бути продуковані будь-якими зручними засобами, наприклад, способом, описаним вище, і потім піддані скринінгу на диференційне зв'язування зі зрілим тромбіном у порівнянні з тромбіном з мутацією екзосайта 1, гамма-тромбіном (дефект екзосайта 1 внаслідок аутолізу в положеннях К75 та К77а) або протромбіном. Придатні методи скринінгу є добре відомими фахівцям.
Антитіло, яке виявляє підвищене зв'язування зі зрілим тромбіном, у порівнянні з нетромбіновими білками, тромбіном з мутацією екзосайта 1, гамма- тромбіном або протромбіном, наприклад, антитіло, яке зв'язується зі зрілим тромбіном, але не зв'язується з тромбіном із мутацією екзосайта 1, гамма- тромбіном або протромбіном, може бути ідентифіковане як молекула антитіла проти екзосайта 1.
Після продукування та/або виділення, можна провести випробування біологічної активності молекули антитіла проти екзосайта 1. Наприклад, може бути визначена здатність молекули антитіла інгібувати зв'язування та/або розщеплення тромбіном тромбінового субстрату, кофактора або інгібітора, та/або може бути визначена здатність молекули антитіла інгібувати тромбоз без промотування кровотечі.
Придатні молекули антитіла можуть бути випробувані на активність шляхом проведення аналізу згортання фібриногену або тромбінового часу. Придатні аналізи є добре відомими фахівцям.
Вплив молекули антитіла на коагуляцію та кровотечу може бути визначений з використанням стандартних методик. Наприклад, вплив молекули антитіла на тромбоз може бути визначений у тваринній моделі, такій як мишача модель зі згустками у кровоносних судинах, індукованих хлоридом заліза(3). Вплив на гемостаз також може бути визначений у тваринній моделі, наприклад, шляхом вимірювання хвостової кровотечі у миші.
Зо Молекули антитіла нормально включають антигензв'язуючий домен, що містить варіабельний домен важкого ланцюга імуноглобуліну (МН) та варіабельний домен легкого ланцюга імуноглобуліну (МІ), хоча можливі також антигензв'язуючі домени, що містять лише варіабельний домен важкого ланцюга (МН) (наприклад, антитіла верблюдячих або акули).
Кожен з доменів МН та Мі типово включає три гіперваріабельні ділянки (ділянки, що визначають комплементарність (СОМК)), відповідальні за зв'язування антигена, які перемежаються з каркасними ділянками.
В деяких варіантах втілення, зв'язування з екзосайтом 1 може відбуватися цілком або в значній мірі через МНСОКЗ молекули антитіла проти екзосайта 1.
Наприклад, молекула антитіла проти екзосайта 1 може включати МН-домен, який містить
НСОВЗ з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮО МО: 5 або послідовністю ЗЕО ІЮ МО: 5 з 1 чи декількома, наприклад, 2, 3, 4 або 5 чи більше, амінокислотними заміщеннями, делеціями або інсерціями. Заміщення можуть бути консервативними заміщеннями. В деяких варіантах втілення, НСОКЗ може включати амінокислотні залишки в положеннях 4-9 5ЕБЕО І МО: 5 (ЗЕЕЕРРЕ), або, ще краще, амінокислотні залишки в положеннях 2 та 4-10 5ЕО ІО МО: 5 (0 та
ЗЕРЕЕРЕЗ) із заміщеннями, делеціями або інсерціями в одному чи декількох інших положеннях
ЗЕО ІЮ МО:5. НСОКЗ може бути єдиною ділянкою молекули антитіла, що взаємодіє з епітопом екзосайта 1 тромбіну, або по суті единою ділянкою. Тому НСОКЗ може визначати специфічність та/або афінність молекули антитіла до ділянки екзосайта 1 тромбіну.
МН-домен молекули антитіла проти екзосайта 1 може додатково включати НСОК2, що має
БО амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 4 або послідовність 5ЕО ІЮ МО: 4 з 1 чи декількома, наприклад, 2, 3, 4 або 5 чи більше, амінокислотними заміщеннями, делеціями або інсерціями. В деяких варіантах втілення, НСОК2 може включати амінокислотні залишки в положеннях 3-7
ЗЕО ІЮ МО: 4 (РОБ) або амінокислотні залишки в положеннях 2 та 4-7 ЗЕО ІЮ МО: 4 (І та
РОЮО) ЗЕО ІО МО: 4, із заміщеннями, делеціями або інсерціями в одному чи декількох інших положеннях 5ЕО ІО МО: 4.
МН-домен молекули антитіла проти екзосайта 1 може додатково включати НСОКІ1, що має амінокислотну послідовність 5ХЕО ІЮО МО: З або послідовність 5ЕО ІЮ МО: З з 1 чи декількома, наприклад, 2, 3, 4 або 5 чи більше, амінокислотними заміщеннями, делеціями або інсерціями. В деяких варіантах втілення, НСОКІ може включати амінокислотний залишок Т в положенні 5 бо ЗБО ІЮ МО: 3 із заміщеннями, делеціями або інсерціями в одному чи декількох інших положеннях 5ЕО ІЮ МО: 3.
В деяких варіантах втілення, молекула антитіла може включати МН-домен, що містить
НОСОВІ, НСОМ2 та НОСОК, які мають послідовності ЗЕО ІЮ МО 3, 4 та 5, відповідно. Наприклад, молекула антитіла може включати МН-домен, який має послідовність 5ЕО ІЮО МО: 2 або послідовність ЗЕО ІЮО МО: 2 з 1 чи декількома, наприклад, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 чи більше амінокислотними заміщеннями, делеціями або інсерціями у ЗЕО ІЮО МО: 2.
Молекула антитіла проти екзосайта 1 може додатково включати Мі -домен, наприклад, МІ - домен, що містить ГСОКІ1, ЇСОК2 та І СОКЗ, які мають послідовності зЗЕО ІЮО МО 7, 8 та 9, відповідно, або послідовності 5ЕО ІЮ МО 7, 8 та 9, відповідно, незалежно, з 1 чи більше, наприклад, 2, 3, 4 або 5 чи більше, амінокислотними заміщеннями, делеціями або інсерціями.
Заміщення можуть бути консервативними заміщеннями. Наприклад, молекула антитіла може включати Мі-- домен, який має послідовність ФЕО ІЮО МО: 6 або послідовність ЗЕО ІО МО: 6 з 1 чи декількома, наприклад, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 чи більше амінокислотними заміщеннями, делеціями або інсерціями у ЗЕО ІЮ МО: 6.
В деяких варіантах втілення, Мі -домен може включати Туг49.
Молекула антитіла проти екзосайта 1 може, наприклад, включати одне чи декілька амінокислотних заміщень, делецій або інсерцій, які поліпшують одну чи декілька властивостей антитіла, наприклад, афінність, функціональний період напіввиведення, константи зв'язування та дисоціації.
Методи, потрібні для введення заміщень, делецій або інсерцій до амінокислотних послідовностей СОК, МН- або Мі -доменів антитіла та антитіл, є загальнодоступними в даній галузі техніки. Можуть бути виготовлені варіанти послідовностей із заміщеннями, делеціями або інсерціями, для яких можна чи не можна передбачити, що вони будуть мати мінімальний або корисний ефект на активність, та провести випробування на здатність зв'язувати екзосайт 1 тромбіну та/або на будь-яку іншу бажану властивість.
В деяких варіантах втілення, молекула антитіла проти екзосайта 1 може включати УНн- домен, що містить НСОКІ, НСОК2 та НСОКЗ, які мають послідовності 5ЕО ІЮО МО 3, 4 та 5, відповідно, та Мі -домен, що містить /СОК1, ГСОКа2 та І СОКУ, які мають послідовності БЕО ІЮ
МО 7, 8 та 9, відповідно.
Наприклад, МН- та Мі-домени можуть мати амінокислотні послідовності «ЕС ІЮ МО: 2 та
ЗЕО ІО МО: 6, відповідно; або можуть мати амінокислотні послідовності ЗЕО ІЮ МО: 2 та ЗЕО ІЮ
МО: 6, що включають, незалежно, 1 чи більше, наприклад, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 чи більше, амінокислотних заміщень, делецій або інсерцій. Заміщення можуть бути консервативними заміщеннями.
В деяких варіантах втілення, антитіло може включати одне чи декілька заміщень, делецій або інсерцій, які видаляють сайт глікозилювання. Наприклад, сайт глікозилювання у Мі -домені
ЗЕБЕО ІЮ МО б може бути видалений в результаті мутації шляхом введення заміщення в положенні М28 або 530.
Молекула антитіла проти екзосайта 1 може мати будь-який формат, описаний вище, У деяких кращих варіантах втілення, молекула антитіла проти екзосайта 1 може бути цілим антитілом, наприклад, дос, таким як Їд1 або дося, ІдА, ЧЕ або І9М.
Молекула антитіла проти екзосайта 1 за даним винаходом може бути такою, що конкурує за зв'язування з екзосайтом 1 з молекулою антитіла, описаною вище, наприклад, молекулою антитіла, яка (і) зв'язує екзосайт 1 тромбіну, та (ії) включає МН-домен ЗЕО ІЮО МО: 2 та/або Мі -домен ЗЕО ІЮ МО: 6; НСОКЗ 5ЕО ІЮ МО: 5;
НОСОВІ, НОСОВ, І СОВІ1, І СОВ2, або І СОКЗ 5ЕО ІО МО: 3, 4, 7, 8 або 9, відповідно; МН-домен, що містить послідовності НСОМК1, НСОК2 та НСОКЗ 5ЕО ІО МО: 3, 4 та 5, відповідно; та/або МН- домен, що містить послідовності НСОК1, НСОК2 та НСОКЗ 5ЕО ІО МО: 3, 4 та 5, і МІ -домен, що
БО містить послідовності ІСОР1, ГО2 та Ї/СОР3 5ЕО ІО МО: 7, 8 та 9, відповідно.
Конкуренцію між молекулами антитіла можна легко оцінити іп міо, наприклад, з використанням ЕГІ5А, та/або шляхом мічення специфічною репортерною молекулою до однієї молекули антитіла, яка може бути детектована в присутності однієї чи декількох інших немічених молекул антитіла, для забезпечення можливості ідентифікації молекул антитіла, які зв'язують один й той самий епітоп або перекривний епітоп. Ці способи добре відомі пересічному фахівцю в даній галузі техніки. Таким чином, додатковий аспект даного винаходу передбачає молекулу антитіла, що містить антигензв'язуючу ділянку антитіла, яка конкурує з молекулою антитіла, наприклад, молекулою антитіла, що містить МН- та/(або Мі -домен, СОК, наприклад,
НСОКЗ, або набір СОК батьківського антитіла, описаного вище, за зв'язування з екзосайтом 1 бо тромбіну. Придатна молекула антитіла може включати антигензв'язуючу ділянку антитіла, яка конкурує з антигензв'язуючою ділянкою антитіла за зв'язування з екзосайтом 1, де антигензв'язуюча ділянка антитіла складається з МН-домену та Мі -домену, і де МН- та МІі- домени включають послідовності НСОКІ, НСОБ2 та НСОКЗ 5ЕО ІО МО: 3, 4 та 5, і послідовності ГСОКІ1, ГОК2 та /СОКЗ 5ЕО ІО МО: 7, 8, та 9, відповідно, наприклад, МН- та Мі - домени 5ЕО ІО МО: 2 та 6.
Молекула антитіла проти екзосайта 1, описана в даному документі, може інгібувати зв'язування тромбінзв'язуючих факторів, включаючи фактори, які зв'язуються з екзосайтом 1.
Наприклад, молекула антитіла може конкурентно або неконкурентно інгібувати зв'язування з тромбіном одного чи декількох з ПМ, МІ, тромбомодуліну, фібриногену або фібрину, РАК!1 та/або гіругену (пігидеп) та аналогів гірудину.
Молекула антитіла проти екзосайта 1, описана в даному документі, може інгібувати одну чи декілька активностей тромбіну. Наприклад, молекула антитіла проти екзосайта 1 може інгібувати гідролітичне розщеплення одного чи декількох тромбінових субстратів, таких як фібриноген, тромбоцитарний рецептор РАК-1 та фактор коагуляції ЕМ. Наприклад, зв'язування молекули антитіла з тромбіном може приводити до щонайменше 5-кратного, щонайменше 10-кратного, або щонайменше 15-кратного, зменшення гідролізу фібриногену,
РАВ-1, фактора коагуляції ЕМ та/або інших тромбінових субстратів, таких як фактор М, фактор
ХІЇЇ в присутності фібрину, та білок С та/або ТАРІ в присутності тромбомодуліну. В деяких варіантах втілення, зв'язування тромбіну молекулою антитіла проти екзосайта 1 може приводити до відсутності детектованого розщеплення тромбінового субстрату тромбіном.
Методи вимірювання тромбінової активності, наприклад, шляхом вимірювання гідролізу тромбінових субстратів іп мійто є стандартними в даній галузі техніки та описані в даному документі.
Молекули антитіла проти екзосайта 1 можуть бути додатково модифіковані шляхом хімічної модифікації, наприклад, шляхом пегілювання (РЕСуїайоп), або шляхом включення в ліпосому, з метою поліпшення їх фармацевтичних властивостей, наприклад, шляхом збільшення іп мімо періоду напіввиведення.
Вплив молекул антитіла проти екзосайта 1 на коагуляцію та кровотечу може бути визначений з використанням стандартних методик. Наприклад, може бути визначений ефект
Зо антитіла у моделі тромбозу. Придатні моделі включають індукування згустку у кровоносних судинах хлоридом заліза(3) у мишачій моделі, з подальшою хвостовою кровотечею для випробувань нормального гемостазу. Інші придатні моделі тромбозу добре відомі фахівцям (див., наприклад, Умезігіск еї ам. АТМВ (2007) 27:2079-2093).
Молекули антитіла проти екзосайта 1 можуть бути включені до складу фармацевтичних композицій з фармацевтично прийнятним ексципієнтом.
Фармацевтично прийнятний ексципієнт може бути сполукою або комбінацією сполук, що входять до складу фармацевтичної композиції, які не провокують вторинних реакцій і які дозволяють, наприклад, сприяти введенню молекули антитіла проти екзосайта 1, збільшувати її період напіврозкладу та/або її ефективність в організмі або підвищувати її розчинність у розчині.
Такі фармацевтично прийнятні носії є добре відомими та будуть адаптовані кваліфікованим фахівцем в даній галузі техніки в залежності від способу введення молекули антитіла проти екзосайта 1.
В деяких варіантах втілення, молекули антитіла проти екзосайта 1 можуть бути забезпечені у ліофілізованій формі для відновлення перед введенням. Наприклад, ліофілізовані молекули антитіла можуть бути відновлені у стерильній воді та змішані із сольовим розчином перед введенням особі.
Молекули антитіла проти екзосайта 1 будуть звичайно вводитися у формі фармацевтичної композиції, яка може включати щонайменше один компонент на додаток до молекули антитіла.
Таким чином, фармацевтичні композиції можуть включати, на додаток до молекули антитіла проти екзосайта 1, фармацевтично прийнятний ексципієнт, носій, буфер, стабілізатор або інші матеріали, добре відомі кваліфікованим фахівцям в даній галузі техніки. Такі матеріали мають бути нетоксичними та не повинні заважати ефективності молекули антитіла проти екзосайта 1.
Точний характер носія або іншого матеріалу буде залежати від способу введення, яке може здійснюватися шляхом болюсу, інфузії, ін'єкції або будь-яким іншим придатним шляхом, як описано далі.
Для парентерального, наприклад, підшкірного або внутрішньовенного введення, наприклад, шляхом ін'єкції, фармацевтична композиція, що включає молекулу антитіла проти екзосайта 1, може мати форму парентерально прийнятного водного розчину, який є апірогенним та має придатні рн, ізотонічність та стабільність. Фахівці належної кваліфікації в даній галузі техніки бо будуть здатні приготувати придатні розчини з використанням, наприклад, ізотонічних носіїв,
таких як хлорид натрію для ін'єкцій, розчин Рингера для ін'єкцій, розчин Рингера з лактозою для ін'єкцій. Консерванти, стабілізатори, буфери, антиоксиданти та/або інші домішки можуть бути використані у разі потреби, включаючи буфери, такі як фосфатний, цитратний, та інші органічні кислоти; антиоксиданти, такі як аскорбінова кислота та метіонін; консерванти (такі як октадецилдиметилбензиламонію хлорид; гексаметонію хлорид; бензалконію хлорид; бензетонію хлорид; фенол, бутиловий або бензиловий спирт; алкілларабени, такі як метил- або пропілпарабен; катехін; резорцин; циклогексанол; 3'-пентанол; та м-крезол); низькомолекулярні поліпептиди; білки, такі як сироватковий альбумін, желатин або імуноглобуліни; гідрофільні полімери, такі як полівінілпіролідон; амінокислоти, такі як гліцин, глутамін, аспарагіни, гістидин, аргінін або лізин; моносахариди, дисахариди та інші вуглеводи, включаючи глюкозу, манозу або декстрини; хелатуючі агенти, такі як ЕДТА; цукри, такі як сахароза, маніт, трегалоза або сорбіт; солетвірні протиіони, такі як натрій; комплекси металів (наприклад, комплекси 2п-білок); та/або неіонні поверхнево- активні речовини, такі як ТМ"ЕЕМТМ, РІ ОВОМІС5ТМ або поліетиленгліколь (ПЕГ).
Фармацевтична композиція, що включає молекулу антитіла проти екзосайта 1, може бути введена сама або в комбінації з іншими терапіями, одночасно чи послідовно, в залежності від стану, який потребує лікування.
Молекула антитіла проти екзосайта 1, описана в даному документі, може бути використана у способі лікування людського або тваринного організму, включаючи профілактичне або превентивне лікування (наприклад, лікування до початку проявів стану у особи для зменшення ризику виникнення стану у особи; уповільнення початку його розвитку; або зменшення його тяжкості після початку розвитку). Спосіб лікування може включати введення молекули антитіла проти екзосайта 1 особі, що потребує цього.
Введення нормально здійснюється в "терапевтично ефективній кількості", яка є достатньою для створення корисного ефекту для пацієнта. Такий корисний ефект може бути щонайменше ослабленням принаймні одного симптому. Фактично введена кількість і швидкість та часовий графік введення будуть залежати від природи та тяжкості стану, лікування якого проводиться, конкретного ссавця, який отримує лікування, клінічного стану конкретного пацієнта, чинника розладу, місця доставки композиції, способу введення, графіка введення та інших факторів, відомих лікарям. Призначення лікування, наприклад, рішення щодо дози і т.д., входить в обов'язки лікарів-терапевтів та інших лікарів і може залежати від тяжкості симптомів та/або проогресування хвороби, лікування якої проводиться. Прийнятні дози молекул антитіл добре відомі фахівцям (І едегтапп -.А. еї аїІ. (1991) Іпї. У. Сапсег 47: 659-664; Вадзпамже К.О. еї аї. (1991) Апіїроду, Іттипосопіцдаїез апа Радіорпаптасеціїса!5 4: 915-922). Конкретні дози можуть бути наведені в даному документі або в Рпузісіап'є ОезК Кеїегепсе (2003), в залежності від типу медикаментів, що можуть бути використані для введення. Терапевтично ефективні кількості або придатна доза молекул антитіла може бути визначена шляхом порівняння його іп міто активності та іп мімо активності у тваринній моделі. Методи екстраполяції ефективних дозувань для мишей та інших лабораторних тварин на людину є відомими. Точна доза буде залежати від ряду факторів, включаючи застосування антитіла для профілактики або для лікування, розміру та положення ділянки, на якій проводиться лікування, точної природи антитіл (наприклад, ціле антитіло, фрагмент) та природи будь-якої детектованої мітки або іншої молекули, приєднаної до антитіла.
Типова доза антитіла буде мати значення в діапазоні від 100 мкг до 1 г для системного застосування, і від 1 мкг до 1 мг для місцевого застосування. Може бути введена початкова більша ударна доза, з подальшими однією чи декількома більш низькими дозами. Типово, антитіло буде цільним антитілом, наприклад, ізотипу (ДС1 або Ідб4. Це доза для разового введення дорослому пацієнту, яка може бути пропорційно змінена для дітей та немовлят, а також відкоригована для інших форматів антитіла пропорційно молекулярній вазі. Лікування може повторюватися щодня, з інтерваламі двічі на тиждень, щотижня або щомісяця, на розсуд лікаря. Схема лікування особи може залежати від фармакокінетичних та фармакодинамічних властивостей композиції антитіла, шляху введення та характеру стану, лікування якого проводиться.
Лікування може бути періодичним, і період між введеннями може становити приблизно два тижні чи більше, наприклад, приблизно три тижні чи більше, приблизно чотири тижні чи більше, приблизно раз на місяць чи більше, приблизно п'ять тижнів чи більше, або приблизно шість тижнів чи більше. Наприклад, лікування може проводитися через кожні від двох до чотирьох тижнів, або через кожні від чотирьох до восьми тижнів. Лікування може проводитися до та/або після хірургії, талабо може бути введене або нанесене безпосередньо на анатомічну ділянку бо проведення хірургічного лікування або інвазивної процедури. Придатні композиції та шляхи введення описані вище.
В деяких варіантах втілення, молекули антитіла проти екзосайта 1, описані в даному документі, можуть бути введені у вигляді підшкірних ін'єкцій. Підшкірні ін'єкції можуть бути введені з використанням автоінжектора, наприклад, для довгострокової профілактики/лікування.
У деяких кращих варіантах втілення, терапевтичний ефект молекули антитіла проти екзосайта 1 може зберігатися протягом декількох періодів напіввиведення, в залежності від дози. Наприклад, терапевтичний ефект разової дози молекули антитіла проти екзосайта 1 може зберігатися у особи протягом 1 місяця чи більше, 2 місяців чи більше, З місяців чи більше, 4 місяців чи більше, 5 місяців чи більше, або 6 місяців чи більше.
Молекули антитіла проти екзосайта 1, описані в даному документі, інгібують тромбін та можуть бути корисними для лікування тромбін-медійованих станів.
Гемостаз є нормальною реакцією коагуляції, тобто, запобігання кровотечі або геморагії, наприклад, з ушкодженої кровоносної судини. Гемостаз зупиняє кровотечу та геморагію з кровоносних судин в організмі.
Молекули антитіла проти екзосайта 1 можуть не впливати або по суті не впливати на гемостаз, тобто вони не промотують кровотечу або геморагію.
Аспекти даного винаходу забезпечують: молекулу антитіла проти екзосайта 1, описану в даному документі, для використання у способі лікування людського або тваринного організму; молекулу антитіла проти екзосайта 1, описану в даному документі, для використання у способі лікування тромбін-медійованого розладу; використання молекули антитіла проти екзосайта 1, описаної в даному документі, у виробництві лікарського засобу для лікування тромбін- медійованого стану; та спосіб лікування тромбін-медійованого стану, який включає введення молекули антитіла проти екзосайта 1, описаної в даному документі, особі, що потребує цього.
Інгібування тромбіну антитілами проти екзосайта 1, описаними в даному документі, може бути клінічно ефективним у лікуванні будь-якого тромбін- медійованого стану. Тромбін- медійований стан може включати розлади, асоційовані з утворенням або активністю тромбіну.
Тромбін відіграє ключову роль у гемостазі, коагуляції та тромбозі. Тромбін-медійовані стани включають тромботичні стани, такі як тромбоз та емболізм.
Тромбоз є коагуляцією, яка перевищує потрібну для гемостазу (тобто, надмірна коагуляція),
Зо або яка є непотрібною для гемостазу (тобто екстрагемостатична або негемостатична коагуляція).
Тромбоз є утворенням згустків крові у порожнині кровоносної судини. Він характеризується утворенням згустку (тромбу), який перевищує потреби або є непотрібним для гемостазу. Згусток може перешкоджати кровотоку у кровоносній судині, приводячи до медичних ускладнень.
Згусток може відірватися від місця його утворення, приводячи до емболізму десь в іншому місці кровоносної системи. В артеріальній системі, тромбоз є типово результатом відриву атеросклеротичної бляшки.
В деяких варіантах втілення, тромбоз може виникати після початкової фізіологічної гемостатичної реакції, наприклад, ушкодження ендотеліальних клітин у кровоносній судині. В інших варіантах втілення, тромбоз може виникати без жодної фізіологічної гемостатичної відповіді.
Тромбоз може виникати у осіб з притаманною схильністю до тромбозу (тобто, тромбофілією) або у "нормальних" осіб без притаманної схильності до тромбозу, наприклад, у відповідь на зовнішній стимул.
Тромбоз та емболізм можуть виникати в будь-якій вені, артерії або іншій кровоносній судині в кровоносній системі і може включати мікросудинний тромбоз.
Тромбоз та емболізм можуть бути асоційовані з хірургією (будь то під час хірургії або після неї) або з введенням пацієнту чужорідних об'єктів, таких як коронарні стенти.
Наприклад, антитіла проти екзосайта 1, описані в даному документі, можуть бути корисними при хірургічних та інших процедурах, при яких кров контактує зі штучними поверхнями, таких як хірургія на відкритому серці та діаліз.
Тромботичні стани можуть включати тромбофілію, тромботичний інсульт та оклюзію коронарної артерії.
Пацієнти, придатні для лікування, описаного в даному документі, включають пацієнтів зі станами, при яких тромбоз є симптомом або побічним ефектом лікування, або які створюють підвищений ризик тромбозу, або пацієнтів, які Є схильними до, або мають підвищений ризик тромбозу, у порівнянні із загальною популяцією. Наприклад, молекула антитіла проти екзосайта 1, описана в даному документі, також може бути корисною при лікуванні або профілактиці венозного тромбозу у ракових пацієнтів, та при лікуванні або профілактиці бо внутрішньолікарняного тромбозу, який відповідає за 5095 випадків венозного тромбоемболізму.
Молекули антитіла проти екзосайта 1, описані в даному документі, можуть виявляти терапевтичний або інший корисний ефект на тромбін-медійовані стани, такі як тромботичні стани, без суттєвого інгібування або перешкоджання гемостазу. Наприклад, ризик геморагії у пацієнтів, які одержують молекули антитіла проти екзосайта 1, може не збільшуватися або суттєво не збільшуватися у порівнянні з особами, які не одержують лікування.
У осіб, які одержують звичайні антикоагулянти, такі як природні та синтетичні гепарини, варфарин, прямі інгібітори серинової протеази (наприклад, аргатробан, дабігатран, апіксабан та ривароксабан), сгірудин та його похідні (наприклад, лепірудин та бівалірудин), та антитромбоцитарні лікарські засоби (наприклад, клопідогрел, тіклопідин та абциксимаб), виникає кровотеча. Ризик кровотечі у пацієнтів, які одержують лікування молекулами антитіла проти екзосайта 1, описаними в даному документі, може бути знижений у порівнянні з особами, які одержують лікування звичайними антикоагулянтами.
Тромбін-медійовані стани включають нетромботичні стани, асоційовані з тромбіновою активністю, включаючи запалення, інфекцію, ріст пухлин та метастази, відторгнення органів та деменцію (судинну та несудинну, наприклад, хворобу Альцгеймера) (І ісагі еї а). У Меї Етегу Стії
Саге (Зап Апіопіо). 2009 Реб;19(1):111-22; Твораподіои еї аі. Еиг СуюКіпе Меїм. 2009 Оес 120(4):171-9).
Молекули антитіла проти екзосайта 1, описані в даному документі, також можуть бути корисними при іп мйто випробуваннях, наприклад, для аналізу та характеризації коагуляції, наприклад, у зразку, одержаному від пацієнта.
Молекули антитіла проти екзосайта 1 можуть бути корисними для вимірювання утворення тромбіну. Аналізи утворення тромбіну є технічно проблематичними, тому що перетворення фібриногену на фібрин спричинює мутність, яка заважає використанню простої хромогенної кінцевої точки.
Додавання до зразка крові молекул антитіла проти екзосайта 1, описаних в даному документі, перешкоджає або інгібує утворення фібрину і, отже, мутності, та дозволяє вимірювати утворення фібрину з використанням хромогенного субстрату, без необхідності стадії дефібринування.
Наприклад, спосіб вимірювання утворення фібрину може включати введення в контакт
Зо зразка крові із хромогенним тромбіновим субстратом у присутності молекули антитіла проти екзосайта 1, описаної в даному документі, та вимірювання хромогенного сигналу від субстрату; де хромогенний сигнал вказує на утворення тромбіну у зразку.
Хромогенний сигнал може бути виміряний безпосередньо, без дефібринування зразка.
Придатні субстрати добре відомі фахівцям та включають 52238 (Н-0-РНе- Рір-Агд-рМа), Д-
АІа-Сіу-Аго-п-нітроанілід діацетат (Ргаза, ОЮ. еї аІ. (1997) Тпготр. Наєетозві. 78, 1215; бідта
Аїдгісп Іпс) та То5-С1у-Рго-Агду-рМа.АсОнН (Віорнеп С5- 01(81); Апіага Іпс ОН О5А).
Молекули антитіла проти екзосайта 1 також можуть бути корисними для інгібування або запобігання коагуляції крові, як описано вище, в умовах штучного кровообігу, таких як при гемодіалізі та екстракорпоральній мембранній оксигенації.
Наприклад, спосіб інгібування або запобігання згортанню крові іп мйто або ех мімо може включати введення молекули антитіла проти екзосайта 1, описаної в даному документі, в зразок крові. Зразок крові може бути введений в систему штучного кровообігу до, одночасно з або після введення антитіла проти екзосайта 1 та, необов'язково, підданий обробці, такій як гемодіаліз або оксигенація. В деяких варіантах втілення, оброблена кров може бути згодом введена особі. Інші варіанти втілення передбачають молекулу антитіла проти екзосайта 1, описану в даному документі, для використання в способі інгібування або запобігання згортанню крові у зразку крові ех мімо та використання молекули антитіла проти екзосайта 1, описаної в даному документі, у виробництві лікарського засобу для використання в способі інгібування або запобігання згортанню крові у зразку крові ех мімо.
Інші аспекти даного винаходу стосуються продукування молекул антитіла, які зв'язуються з епітопом екзосайта 1 тромбіну та можуть бути корисними, наприклад, у лікуванні патологічного згортання крові або тромбозу.
Спосіб продукування антигензв'язуючого домену антитіла до епітопа екзосайта 1 тромбіну може включати; забезпечення, шляхом додавання, делеції, заміщення або інсерції, однієї чи декількох амінокислот в амінокислотну послідовність батьківського МН-домену, що містить НСОМК1,
НСОК2 та НСОКЗ, де НСОКІ, НСОК2 та НСОКЗ мають амінокислотні послідовності 5ЗЕО ІЮ
МО: 3, 4 та 5, відповідно, МН-домену, який є варіантом амінокислотної послідовності батьківського МН-домену, і; 60 необов'язково, об'єднання одержаного у такий спосіб МН-домену з одним чи декількома Мі -
доменами для забезпечення однієї чи декількох комбінацій МНЛ/І; та тестування зазначеного МН-домену, який є варіантом амінокислотної послідовності батьківського МіН-домену, або комбінації чи комбінацій МН/Л// для ідентифікації антигензв'язуючого домену антитіла до епітопа екзосайта 1 тромбіну. МН-домен, який є варіантом амінокислотної послідовності батьківського МН- домену, може мати послідовність
НСОКЗ 5ЕО ІО МО: 5 або її варіант з додаванням, делецією, заміщенням або інсерцією однієї, двох, трьох чи більше амінокислот.
МН-домен, який є варіантом амінокислотної послідовності батьківського МН- домену, може мати НСОКІ та НСОК2-послідовності 5ЕО ІЮО МО: 3 та 4, відповідно, або варіанти цих послідовностей з додаванням, делецією, заміщенням або інсерцією однієї, двох, трьох чи більше амінокислот.
Спосіб продукування молекули антитіла, яка специфічно зв'язується з епітопом екзосайта 1 тромбіну, може включати: забезпечення вихідної нуклеїнової кислоти, що кодує МН-домен, або вихідного репертуару нуклеїнових кислот, кожна з яких кодує МН-домен, де МН- домен або МН-домени або включають
НСОКІ, НСОМК2О та/"або НСОМКЗ, що мають бути замінені, або не містять кодуючої ділянки
НСОКІ, НСОК2 та/або НСОКЗ; об'єднання зазначеної вихідної нуклеїнової кислоти або вихідного репертуару з донорною нуклеїновою кислотою або донорними нуклеїновими кислотами, кодуючими або продукованими шляхом мутації амінокислотної послідовності НСОМКІ, НСОМ2, та/або НСОКЗ, що мають амінокислотні послідовності «ЕО ІЮО МО: 3, 4 та 5, відповідно, у такий спосіб, щоб зазначена донорна нуклеїнова кислота була або донорні нуклеїнові кислоти були вставлені в ділянку
СОКІ, СОК2 та/або СОМКЗ вихідної нуклеїнової кислоти або вихідного репертуару, для забезпечення репертуару продуктів нуклеїнових кислот, що кодують МН-домени; експресію нуклеїнових кислот зазначеного репертуару продуктів для одержання продукту
МН-доменів; необов'язково, об'єднання зазначеного продукту МН-доменів з одним чи декількома Мі - доменами; селектування молекули антитіла, що зв'язує екзосайт 1 тромбіну, яка включає продукт МН-домену та, необов'язково, Мі -домен; і кодує. виділення зазначеної молекули антитіла або нуклеїнової кислоти, що її
Придатні методики дозрівання та оптимізації молекул антитіла є добре відомими фахівцям.
Антигензв'язуючі домени антитіла та молекули антитіла до епітопа екзосайта 1 тромбіну можуть бути піддані тестуванню, як описано вище. Наприклад, може бути визначена здатність зв'язуватися з тромбіном та/або інгібувати розщеплення тромбінових субстратів.
Вплив молекули антитіла на коагуляцію та кровотечу може бути визначений з використанням стандартних методів. Наприклад, може бути використана мишача модель тромбозу з індукуванням згустку хлоридом заліза(3) у кровоносній судині, такій як стегнова вена або сонна артерія, з подальшою хвостовою кровотечею для тестування нормального гемостазу.
Різні додаткові аспекти та варіанти втілення даного винаходу будуть очевидними для кваліфікованих фахівців в даній галузі техніки з урахуванням даного розкриття.
Усі документи, згадувані в цьому описі, цілком включені до даного документу як посилання.
Якщо не зазначене інше, залишки антитіл пронумеровані в даному доркументі відповідно до схеми нумерації Кабат (Кабраб. "Та/або", при використанні в даному документі, слід розглядати як конкретне розкриття кожної з двох зазначених ознак або компонентів, разом з іншою або без неї. Наприклад, ТА та/або В" слід розглядати як конкретне розкриття кожного варіанта з (і) А, (ії) В, і (ії) А та В, так само, як би вони були вказані індивідуально в даному документі.
Якщо з контексту не випливає протилежне, описи та визначення описаних вище ознак не обмежені будь-яким конкретним аспектом або варіантом втілення даного винаходу і є застосовними до усіх описаних аспектів та варіантів втілення. Таким чином, описані вище ознаки розкриті в усіх комбінаціях та видозмінах.
Певні аспекти та варіанти втілення даного винаходу будуть далі проілюстровані як приклад та з посиланням на фігури та таблиці, наведені нижче.
Фігура 1 зображує зв'язування та елюцію ІдА на колонці людський тромбін- сефароза. Фігура 1А зображує профіль елюції для ІдА (вузький пік) з колонки тромбін-сефароза з використанням градієнта рН (від нейтрального до низького, відображений лінією з нахилом угору). Фігура 18 зображує нативний синій гель, який показує повне навантаження ІдА, прохідний потік з колонки з людським тромбіном та елюат після елюції при низькому рн. бо Фігура 2 зображує невідновлювальний гель ДСН-ПААГ (505-РАСЕ), який показує, що ІдДА зв'язує тромбін, але не протромбін. В цьому аналізі преципітацією, лектинову агарозу використовують для зв'язування з ДА у присутності тромбіну або протромбіну. Супернатант потім розділяють на ДСН-гелі. Доріжка 1 є стандартами розміру; доріжка 2 зображує зниження рівня тромбіну у супернатанті; доріжка З показує, що зниження рівня є залежним від присутності
ІдА; доріжки З та 4 показують, що рівень протромбіну не знижується, тобто він не зв'язується з
ІДЗА.
Фігура З зображує відносну швидкість розщеплення 52238 тромбіном у присутності ІА або за його відсутності (тобто, один кут нахилу для залежності Аб5405 (поглинання на довжині хвилі 405 нм) від часу при гідролізі 52238). Це вказує на те, що ІдДА не зв'язується з активним сайтом тромбіну.
Фігура 4 зображує результати досліджень зв'язування, які показують, що ІА конкурує з флуоресцентно міченим додекапептидом гіругеном за зв'язування з тромбіном.
Фігура 5 показує ефект ІдДА на розщеплення 52238 тромбіном. Цей аналіз дозволяє оцінити
Ка для взаємодії ІдА-тромбін 12 НМ.
Фігура 6 зображує гель ДСН-ПААГ цільного ІДА та фрагментів Бар у відновлювальних та невідновлювальних (ох) умовах. Показано, що невідновлений ІА має молекулярну вагу в межах 100-200 кДа, і невідновлений Бар має молекулярну вагу приблизно 50 кДа.
Фігура 7 зображує кристалічну структуру комплексу тромбін-Раб, що свідчить про взаємодії між екзосайтом 1 тромбіну та НСОКЗ фрагмента Раб.
Фігура 8 зображує деталь кристалічної структури, що показує взаємодії між специфічними залишками екзосайта 1 тромбіну та НСОКЗ фрагмента Раб.
Фігура 9 зображує флуоресцентні мікрофотографії РесіЗ-індукованих згустків крові в ушкодженнях стегнової вени у мишей С57ВІ/6, яким робили ін'єкції флюоресцеїнізотіоціанат- міченого (ФІТЦ) фібриногену в період часу між 2 та 30 хвилинами. Вводили 100 мкл фосфатно- сольового буфера (ФСБ) (контрольний носій).
Фігура 10 зображує флуоресцентні мікрофотографії РесіЗ-індукованих згустків крові в ушкодженнях стегнової вени у мишей С57ВІ /6, яким робили ін'єкції ФІТЦ-міченого фібриногену та 40 нМ (кінцева концентрація у мишачій крові, еквівалентна дозі приблизно 0,6 мг/кг) ІЧА проти екзосайта 1 (100 мкл в ФСБ).
Зо Фігура 11 зображує флуоресцентні мікрофотографії РесіЗ-індукованих згустків крові в ушкодженнях стегнової вени у мишей С57ВІ /6, яким робили ін'єкції ФІТЦ-міченого фібриногену та 80 нМ (кінцева концентрація у мишачій крові, еквівалентна дозі приблизно 1,2 мг/кг) ІДА проти екзосайта 1 (100 мкл в ФСБ), та ділянки за межами місця ушкодження для порівняння.
Фігура 12 зображує флуоресцентні мікрофотографії РесіЗ-індукованих згустків крові в ушкодженнях стегнової вени у мишей С57ВІ /6, яким робили ін'єкції ФІТЦ-міченого фібриногену та 200 нМ (кінцева концентрація у мишачій крові, еквівалентна дозі приблизно З мг/кг) ІА проти екзосайта 1 (100 мкл в ФСБ), та ділянки за межами місця ушкодження для порівняння.
Фігура 13 зображує флуоресцентні мікрофотографії РесіЗ-індукованих згустків крові в ушкодженнях стегнової вени у мишей С57ВІ /6, яким робили ін'єкції ФІТЦ-міченого фібриногену та 400 нМ (кінцева концентрація у мишачій крові, еквівалентна дозі приблизно 6 мг/кг) ІЗА проти екзосайта 1 (100 мкл в ФСБ).
Фігура 14 зображує флуоресцентні мікрофотографії РесіЗ-індукованих згустків крові в ушкодженнях стегнової вени у мишей С57ВІ/6, які отримували ФІТЦ-мічений фібриноген та 4
МКМ (кінцева концентрація у мишачій крові, еквівалентна дозі приблизно 60 мг/кг) ІЇДА проти екзосайта 1 (100 мкл в ФСБ).
Фігура 15 зображує кількісний аналіз залежності доза-відповідь для ІдДА проти екзосайта 1, проведений по флуоресцентним фотографіям, наведеним на Фігурах 9-13.
Фігура 16 зображує час хвостової кровотечі у контрольних мишей С57ВІ/6б та у мишей, які одержували зростаючі кількості ІДА проти екзосайта 1. Друге середнє виключає виброси.
Фігура 17 зображує результати аналізів з ампутацією кінчика хвоста (Заї!Ї сіїр аззау) самців мишей дикого типу (М/Т) С57ВІ/6 (п-5) після введення ін'єкцією в хвостову вену ІА або ФоБ (РВ5). Через 15 хв. після ін'єкції хвости обрізають при діаметрі З мм і втрату крові контролюють протягом 10 хв.
Фігури 18А-180 показують результати моделі оклюзії сонної артерії з використанням РесізЗ у самців мишей С57ВІ/6 дикого типу (МТ) у віці 9 тижнів, яким вводили ін'єкцією, як описано вище, 400 нМ анти-тромбінового ІдА (кінцева концентрація в крові, еквівалентна дозі приблизно 6 мг/кг) або ФСБ за 15 хв. до ушкодження з використанням 595 РесіЗ протягом 2 хв. Фігура 18А зображує результати для типової миші з ін'єкцією ФСБ (оклюзія через 20 хв.), а Фігури 188, 180 та 180 демонструють приклади результатів для мишей, яким вводили 400 нм анти- 60 тромбінового ІдА (без оклюзії).
Фігура 19 зображує тромбінові часи (тобто згортання пулу плазми) при зростаючих концентраціях Ідс та ІдА за даним винаходом, після додавання 20 нМ людського тромбіну.
Фігура 20 зображує зв'язування синтетичного дб з іммобілізованим тромбіном (на інструменті Бопевіо Осієї Кед).
Фігура 21 зображує типову криву Осіеї для зв'язування 24 нМ тромбіну 5195А з іммобілізованим дос, яка зображує фазу взаємодії (оп рпазе), з подальшою фазою відсутності взаємодії (ої рпазе). Чорна лінія - апроксимація.
Фігура 22 зображує криву Осії для 500 нМ протромбіну з кінчиком, завантаженим іммобілізованим ІдсС. Умови такі самі, як в експерименті з тромбіном на Фіг. 21. Свідчення зв'язування відсутні, навіть при такій високій концентрації.
Експе р име нти 1. Виділе ння та хара кте р иза ція а нтиті ла
Скринінг коагуляції проводили на зразку плазми крові пацієнта. Тести на коагуляцію проводили для пацієнта, який страждав на субдуральну гематому після травми голови.
Гематома спонтанно розсмокталася без втручання. Попередня історія кровотеч була відсутня і за 4 роки після звертання пацієнта до лікаря додаткові епізоди кровотечі не спостерігалися.
Результати наведені у Таблиці 1.
Протромбіновий час (РТ), активований частковий тромбопластиновий час (АРТТ) та тромбіновий час (ТТ) усі збільшувалися у пацієнта порівніно з контролями, але рептилазний час був нормальним.
Тромбіновий час не коригувався гепариназою, вказуючи на те, що обробка або забруднення гепарином не мали до цього відношення. Рівні фібриногену у пацієнта були нормальними, за результатами аналізів методом ЕГІЗА та з рептилазою. Аналіз Клауса (Сіаи55) давав штучно занижений рівень фібриногену внаслідок присутності інгібітора тромбіну. Було знайдено, що часи згортання РТ та АРТТ залишаються збільшеними після випробувань зі змішуванням (тіхіпд їе5)) з використанням суміші 50:50 з пулом плазми нормальних осіб. Це вказує на присутність інгібітора у зразку пацієнта.
Було знайдено, що плазма крові пацієнта має високий титр ДА. Було знавидено, що ця молекула ІдА зв'язується на колонці з людським тромбіном (Фігура 1). Зв'язування ІдА лектин-
Зо агарозою знижувало рівень тромбіну у присутності ІдА, але не за його відсутності. Протромбін зв'язувався лектин-агарозою у присутності (ДА, вказуючи, що ІА специфічно зв'язується з тромбіном, але не з протромбіном (Фігура 2).
Потім був досліджений сайт зв'язування ІдА молекули тромбіну.
Дещо вища швидкість розщеплення 52238 тромбіном була визначена в присутності ІдДА, вказуючи на те, що ІдА не блокує активний сайт тромбіну (Фігура 3).
Зв'язування флуоресцентно міченого гіругену з тромбіном інгібується у присутності 700 нм
ІА, вказуючи, що епітоп антитіла перекривається із сайтом зв'язування гіругену тромбіну, а саме, екзосайтом 1 тромбіну (Фігура 4).
Був досліджений вплив ІА на гідроліз деяких субстратів тромбінового прокоагулянту.
Результати наведені у Таблиці 2. Ці результати демонструють, що молекула ІдА, виділена зі зразка пацієнта, інгібує численні прокоагулянтні активності тромбіну.
Інгібування тромбіну антитромбіном (АТ) у присутності ІДА лише мінімально змінювалося як в умовах відсутності гепарину, так і в його присутності (Таблиця 3). Константа дисоціації (Ка)
ІЗА з тромбіном була спочатку визначена приблизно на основі швидкості гідролізу 52238 як рівна приблизно 12 нМ (Фігура 5). Величина Ка для зв'язування ІА з тромбіном 5195А (інактивованим мутацією каталітичного серину) була визначена рівною 2 нМ з використанням інструменту РогпіеВіо Осієї Кей (Таблиця 4).
Очищений ІдА розщеплювали папаїном (Фігура б), і фрагмент Раб виділяли та об'єднували з людським РРАСК-тромбіном (РРАСК є ковалентним інгібітором активного сайта). Комплекс людський РРАСК-тромбін-РАВ кристалізували та використовували для структурного аналізу.
Статистичні характеристики одержаної структури були такими: розрізнення 1,9 А; В-фактор (Агасіог) - 194390; вільний К- фактор (Кітеє) - 23,42905; один комплекс в асиметричній комірці; карта Рамачандрана (Катаспапагап): кращі значення - 97,095, повні маргінали (ошЦіеге) - 090.
Кристалічна структура продемонструвала тісний зв'язок між НСОКЗ Раб ІдА та екзосайтом 1 тромбіну (Фігура 7).
Зокрема, залишки М32, 34, 238, Е39,140,165, Кб7, 73, 174, К75, 76, К77а та І82 екзосайта 1 усі напряму взаємодіють з петлею НСОКЗ Раб ІдА (Фігура 8).
Аналіз методом РІЗА (аналіз положення, інтенсивності та форми) поверхні розділу антитіло- тромбін показав, що загальна площа прихованої поверхні у комплексі становить 1075 Аг. бо Контактними залишками у важкому ланцюзі ІдА були (нумерація за Кабат): 30, 51, 52а, 53-55,
96, 98, 99, 100, 100а, 10060, 100с, 1004). Усі вони входять до гіперваріабельних ділянок (СОК):
СОВНІ- СУТІ ТЕААІН; СОВН2г- СГ ОРОССЕТУМАООЕКа; СОВнНЗ- арЕЗЕРЕРЕЗМОМЕНЕ (підкреслені контактні залишки). Було знайдено, що СОКНЗ є найбільш важливим, забезпечуючи 8595 прихованої площі поверхні антитіла. Легкий ланцюг утворював один маргінальний контакт з Туг49, безпосередньо перед СОКІ2 (з ЗегЗ3ба тромбіну). Деякими з індивідуальних внесків до прихованої поверхні є: СІн99 54А2, Рпе100 134.8 Аг, Сіи10ба 80.6 Аг,
Рпе100с 141.7 Аг.
Було знайдено, що контактними залишками тромбіну є такі (нумерація за хімотрипсином): 32, 34, Зба-40, 65, 67, 73-76, 77а, 82, та 151. Найбільш важливими з індивідуальних внесків до прихованої поверхні є: Сіп38 86.4 Аг, Аго73 44.5 Аг, Тпг74 60,1 Аг, Туг/76 78.4 Аг, Аго77а 86.9 2.
Пацієнт не виявляв підвищеної або аномальної кровотечі або геморагії, незважаючи на рівні цього ІДА у кровотоці, що дорівнювали З г/л, демонструючи, що антитіло інгібує тромбін, не впливаючи на нормальний гемостаз. 2. Вплив ІДА на тва р инні мо де лі тр о мбо зу Мишей С57ВІ/6 анестезували. Катетер вставляли в сонну артерію (для ін'єкції сполуки). ФІТЦ-мічений фібриноген (2 мг/мл) вводили ін'єкцією в сонну артерію. ФОБ (контроль) або ІДА також вводили ін'єкцією в сонну артерію.
Оголяли стегнову вену та наносили 1095 ГесіІЗ (насичений промокальний папір довжиною З мм) протягом З хв. для індукування згортання.
Робили флуоресцентні мікрофотографії по довжині місця ушкодження в моменти часу 0, 5, 10 та 20 хв. після ушкодження РесіЗ з використанням методу флуоресцентної мікроскопії.
Згустки (відкладення фібрину) у стегновій вені були чітко видні як світлі ділянки (Фігура 9).
Було помічено, що найнижча доза антитіла спричинювала значне інгібування згортання, але з ростом дози згортання припинялося (Фігури 10-15).
Також були виміряні часи кровотечі у мишей. Часи кровотечі оцінювали як час до припинення кровотечі після ампутації хвоста. Незважаючи на присутність одного зразка з викидом, було знайдено, що час кровотечі не залежить від введення ІА проти екзосайта 1 (Фігура 16).
Ці результати показують, що антитіло проти екзосайта 1 ІдА є сильним інгібітором тромбозу,
Зо але не впливає на час кровотечі. 3. Аналізи з а мпута цією кінчика хвоста 4. Аналіз з ампутацією кінчика хвоста проводять на самцях мишей С57ВІ /6 дикого типу (МУТ), яким роблять ін'єкцію 400 нМ ІдА (кінцева концентрація у крові, еквівалентна дозі приблизно 6 мг/кг) або ФСБ (РВ5). Втрату крові контролюють протягом 10 хв. після ампутації хвоста на ділянці з діаметром З мм через 15 хвилин після ін'єкції. Було знайдено, що загальна втрата крові не залежить від введення ІдА проти екзосайта 1 (Фігура 17). 5. Оклюзія сонної артерії внаслідок ушкодження Ресіз
Дослідження оклюзії сонної артерії внаслідок ушкодження БесСіЗ проводили на самцях мишей С57ВІ /6 дикого типу (М/Т) у віці 9 тижнів. Мишам робили ін'єкцію 400 нМ анти-Па ІДЗА (кінцева концентрація у крові, еквівалентна дозі приблизно б мг/кг) або ФСБ за 15 хв. до ушкодження за допомогою 595 РесСіЗ протягом 2 хв. Кровотік контролювали за допомогою доплерівського методу (Юоррієгї та вимірювали час до оклюзії. "Згусток' визначали як стабільний оклюзивний тромб, при якому кровотік відновлювался до значення типово менше 0,1 мл/хв. та залишався відновленим. У контрольних мишей, утворення стабільного згустку спостерігалося приблизно через 20 хв. після ушкодження (Фігура 18А). Однак, більшість мишей, які одержали 400 НМ анти-МШа ІдА, були нездатними утворювати стабільні згустки і демонстрували результати, згідно з якими згустки швидко розсмоктувалися, неодноразово розсмоктувалися або взагалі не утворювалися. Три типові криві представлені на Фігурах 188- 180. 6. до протиеєекзо сайта 1
Молекулу ІдА, ідентифіковану у пацієнта, описану вище, перетворювали на Ідс; з використанням стандартних методів.
Час згортання пулу людської плазми, до якої вводили порціями зростаючі кількості вихідного
ІЇДА та нового ІдсС, тестували при додаванні людського тромбіну до 20 нМ (Фігура 19). Як батьківський ІДА, так і синтезований дО збільшували час утворення згустку в ідентичний концентрація-залежний спосіб, що свідчить про ідентичні афінності до тромбіну.
Цей висновок був підтверджений шляхом вимірювань зв'язування синтетичного ІДС з іммобілізованим тромбіном 5195А з використанням інструмента ЕогіеВіо ТМ Осієї Кей. Тромбін був приєднаним до зонду, і контролювали зв'язування антитіла (при різних концентраціях). Були 60 визначені константи швидкості зв'язування та дисоціації. Обидва антитіла давали близькі константи швидкості зв'язування, рівні приблизно 3х105 М-1с-1, та константи швидкості дисоціації, рівні приблизно 5х10-4 с-1, і константи дисоціації (Ка), рівні приблизно 2 нМ.
Значення Ка, рівні приблизно 2 нМ, були також одержані для ІА та дос методом аналізу усталеного режиму (Таблиця 4). Типова крива для усталеного режиму наведена на фігурі 20.
Таким чином, властивості ІдА були відтворені на базі Ід.
Тестування зв'язування протромбіну з антитілом до ІдсСс проводили з використанням системи Осієї шляхом іммобілізації ІдсС. Тромбін зв'язувався з іммобілізованим Ідс зі значеннями швидкостей та афінностей, порівнянними з одержаними при використанні іммобілізованого тромбіну (Таблиця 4); протромбін не зв'язувався з до. Фігура 21 є кривою зв'язування 24 нМ тромбіну з, та дисоціації від, іммобілізованого Ідс. Фігура 22 зображує результати такого саме експерименту з використанням 500 нМ протромбіну, та не демонструє свідчень зв'язування.
Послідовності
Амінокислотна послідовність людського препротромбіну (ЗЕО Ю. МО: 1;
СепеО: 2147; МР. 000497.1 СІ: 4503635; підкреслені залишки екзосайта 7) 1 тавугу1їд1р асіазїаа1св 17Б84БУуїг1а радак5зі1дг угхапесл1ее Уско1егес 61 уеегсзуєвга Ееаз1еввктає ауєкакКусас есагтрІіакі азасіедпсае чідчспукову 121 пісгздіесч Іічг5зкуриКкКр еіпзЕсБрда дідепесгпр йзвеЕбодресу скареуккде 181 сзірусуддач усуатеревзе да5упізррі едсурагкддчч учогіахусеЕй Чірсіачава 241 чдака1і5КкнЧй Єпзаудітеп Есгпраддеє дуч«сутадкр дагаусатпу севатееесу 301 ачійедзага іедгсаєвзеу ЧЕЕЕприїїд вдеайсдігр 1геКккзівйак сеге11езуї 361 дугічзедвіа еідмпзркеидуп 12гк5радеії сдабвії5акке у1Єаапсі1у рриакпєєеп 421 ат11Укідкв5 кегуєкпієк ізтіекіуїй ргупигепід гаіїзіткікк руаєзауібр 481 усірагеєсаа зі1дачукує усомопікеє «сСапудкадр зу1дуупірі уекрускаве 541 гігісаптїс ачукраедкг дааседівзач рЕупшкерЕпп гхудюдітузи дедсагадку е01 ЯжуєпУїКік КбічкУідаЧх де
Амінокислотна послідовність ДА проти екзосайта 1 та МН-домену дО з нумерацією за Кабат (СОВА підкреслені): (ЗЕО !Ю МО: 2), .
ОУОІІО5Б5АУККРОСАБУВУЗСКУЗСУТІТЕААІНИУВОАРОКСТЕИМОС 10 20 зо 40 50
ПОРООСЕТУУАООЕКСВУТМТЕОВОТОТАУМЕУММЬВЗЕОТАТУУСТТСО шо 52а бо 70 8082а8рс 90
ЕЗЕЕКЕРЕБМОХЕНЕЙСОСТУУТУА5 : ше 10барсаг дн 110 . .
Амінокислотна послідовність ІЇДА проти екзосайта 1 та Іда НСОМВІ (ЗЕО 0
МО; 3).
СУТІТЕААІН .
Амінокислотна послідовність ІЧА проти екзосайта 1 та а нов (ЗЕО І
МО: 4).
СПОРООСЕТУУАООККО
Амінокислотна послідовність ДА проти екзосайта 1 та Їда НСОВЗ (ЗЕО І
МО: 5). І
СРЕБЕКЕРЕБМОУЕНЕ '
Амінокислотна послідовність (ДА проти екзосайта 1 та Мі-домену ДО з нумерацією за Кабат: (5ЕО І МО: 6). І
БІУІТО5РАТІ5ЗІ5РОЕВАТЬЗСВАЗОМУЗБЕГАЖУОНКРСОАРЕТТІХО 10 20 30 40 50
АЗ5ЗВАТОРІРІВЕЗСУЗОЗСТОЕТІЬТІЗСІЕРЕОКАУУХУСООВВБИРРІТЕС бо то во 90 З5а
ССТКУКІКЕВ нИшщ 100 108
Амінокислотна послідовність ЇДА проти екзосайта 1 та /СОВІ ща (ЗЕО 0
МО: 7). ше
ВАБОМУВБЕБА :
Амінокислотна послідовність (ДА проти екзосайта 1 та ГСОН2 ща (5ЕО ІЮ
МО: 8). :
РАЗЗВАТ ше
Амінокислотна послідовність ДА проти екзосайта 1 та ГСОВЗ дО (5ЕО Ір
МО: 9). оОВВЗИвгРІтТ
Таблиця 1
Результати скринінгу коагуляції
Тест Резупьтат Співвідношення
У контроль/нормоване (МК)
Протромбіновийчас.//-/| сс | 43 МА - 11-13 11111111 Фкорекця50:50 | 3З5с | :К( б Ф Ф пластиновий час 11111111 |корекця50:50 | 1056. | : сс о Тромбіновийчас.//-//| 77777771 171115ос | МА - 10-13 с
Рептилазнийчас.//-/-/ | (2; | с л1бс1 | Контроль - 15 с
МА - 1,5-4,5 г/л 11111111 Фантиєннийї// | 50г/л. | 77777771
Таблиця 2
Вплив ІдА проти екзосайта 1 на гідроліз тромбіном прокоагулянтних субстратів
Тромбіновий субстрат розщеплення
Пептид РАК-1 тромбоцитарного : . Й . . рецептора Активація тромбоцитів 15-кратне зниження гідролізу
Зворотна активація тромбіну
ЕМ! через комплекс із зовнішньою | 7-кратне зниження гідролізу теназою (Хазе)
Таблиця З
Ефект насичувальної концентрації ІдА проти екзосайта 1 (Раб) на інгібування тромбіну антитромбіном (АТ) у присутності 1 нМ гепарину (Нер) та без нього. 0000 Константа швидкості інгібування (М-1с-1 Ефект гепарину 4,8ж0,2х103 11,8:0,3х103 нн
АТ-Бар 1,7х0и1х103
АТ-Нер-Еаб 5,650,3х103 нн
Таблиця 4
Константи зв'язування антитіл проти екзосайта 1 ІдДА (п-1 для даних конкретних умов), до (п-3), та Ідс-похідного ЕАВ з тромбіном 5195А (без активного сайта, рекомбінантний тромбін). 7 Ка визначена за результатами аналізу усталеного режиму залежності відповіді від концентрації. Ка обчислена з констант швидкості. - визначена з використанням іммобілізованого ЕАВ. 11111117 касу | копом-тої) | кой(сї) | КасмЖ
Claims (19)
1. Виділена молекула антитіла, яка специфічно зв'язується з ділянкою екзосайта 1 тромбіну, при цьому молекула антитіла включає МН-домен, що містить НСОКІ, НСОК2 і НСОКЗ, які мають послідовності зЗЕО ІЮО МО: 3, 4 і 5, відповідно, і МІ -домен, що містить ЇЇ СОВ2 і І СОМ, які мають послідовності ЗЕО ІЮ МО: 8 і 9, відповідно, та Ї СОВІ, яка має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 7 або має послідовність ЗЕО ІЮО МО: 7, в якій сайт глікозилювання може бути видалений в результаті мутації шляхом введення заміщення в амінокислотний залишок у положенні М28 або ЗЗО в ЗЕО ІЮ МО: 6.
2. Молекула антитіла за п. 1, яка інгібує активність тромбіну.
З. Молекула антитіла за п. 2, яка не інгібує гемостаз і/або не спричинює кровотечу.
4. Молекула антитіла за будь-яким із пп. 1-3, яка включає МН-домен, що має амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 2.
5. Молекула антитіла за будь-яким із пп. 1-4 яка включає Мі -домен, що має амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 6 або амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 6, в якому сайт глікозилювання може бути видалений в результаті мутації шляхом введення заміщення в амінокислотний залишок у положенні М28 або 530.
б. Молекула антитіла за будь-яким із пп. 1-5, яка включає МН-домен, що містить НСОМКІ, НСОК2 і НСОКЗ, які мають послідовності БЕО ІЮ МО: 3, 4 і 5, відповідно, і МІ -домен, що містить ІСОК1, сСО2 і СОКЗ, які мають послідовності ЗЕО ІЮ МО: 7, 8 і 9, відповідно.
7. Молекула антитіла за п.б, яка включає МН-домен, що має амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 2, і МІ -домен, що має амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 6.
8. Молекула антитіла за будь-яким із пп. 1-7, яка є цільним антитілом.
9. Молекула антитіла за п. 8, яка є ІдА або Ід.
10. Молекула антитіла за будь-яким із пп. 1-7, яка є фрагментом антитіла.
11. Молекула антитіла за будь-яким із пп. 1-7, яка є моноклональним антитілом.
12. Фармацевтична композиція, яка включає молекулу антитіла за будь-яким із пп. 1-11 та фармацевтично прийнятний ексципієнт.
13. Молекула антитіла за будь-яким із пп. 1-11 для застосування у способі лікування людського або тваринного організму.
14. Молекула антитіла за будь-яким із пп. 1-11 для застосування у способі лікування тромбін- медійованого стану.
15. Застосування молекули антитіла за будь-яким із пп. 1-11 у виробництві лікарського засобу для застосування у лікуванні тромбін-медійованого стану.
16. Спосіб лікування тромбін-медійованого стану, який включає введення молекули антитіла за будь-яким із пп. 1-11 особі, що потребує цього.
17. Молекула антитіла для застосування за п. 14, застосування за п. 15, або спосіб за п. 16, у яких тромбін-медійований стан є тромботичним станом.
18. Молекула антитіла для застосування, застосування або спосіб за п.17, у яких тромботичний стан є тромбозом або емболізмом.
19. Молекула антитіла для застосування за п. 14, застосування за п. 15, або спосіб за п. 16, у яких тромбін-медійований стан є запаленням, інфекцією, ростом пухлин, метастазами пухлин або деменцією.
А зі Метт няня і Копонка й У ! твоваіву Е ї ЕЕ Н р ї і і а ш п "7 й / І у і р х т ШІ у и Х і / й і х ні і і р | х ! і й З і ект Й , чи хо 15 ха за за зе РН Ми ! Те тв 5 ре КУ я : ШЕ ШЕ БЕ є 5 щі ря Ф я во с 3 ЕН ЩІ В КК ХК о С
0. 0 - с
ФГ.
ФО сот Фі ЩО юю т ж вевв ооо а. СС
0. пл ФГ Кк Я Кк доповів овооооововоосоеое ооо вовоооововообо ово ооо еовоооооо ооо ово овес осо, Г43) | :
Ба . за З С | я 3 ни ЕІ 0104 ш їх. Кая | 3 З ; ве ; г о ;
ве. ; . . т ю Баш . еВ я Твомобін Тромбін з ША За
КАБ ША КД віднов. неа-віднов. віднов. /не-віднов. п В В В п В оон. її; нан: . ша ОО ше зо є м но о. с; аг и її ФІГ
«а я тка ж , щі Тромбін ЕАВ- Пегкий ланцюг ж о мая Я ОО «і ж ах в ї КОХ МЛИНКИ, хе З ке і бе аю С ь Он ни ЯН БК -- з За СО и и кв о на о а и НН АК Ко шк, я и у Що с оно о; В ех З й хх Кон - а нм ВХ ТТ; ВЕ Ку 000 осо Зоо Я З їй ан Я дя Я же Же а -к а КАБ-Нажкий ланцюг
ЯНГ. У Е ай ІЗ : й г Я ЗКУ ї З Хо Кл Зх и й, ух г -ш х плит о нан: ї е М покою , ша їх шик: й ШИ ШЕ Кк З ! ь їх А Е Ей Ж. а Я. г . ех УК ІВ СЯ з. й Й ою Й Ше оче ОА Я ж фе, - й же Її Миття гай Ку у і чар З фено МОЯ шиї МО й Х а хо. ш и у З Я щу. га
«Г.Я
Б НН В НО ни М НН І І В В во п ПО ОК ОО ПИЛИП НВК ППП ОО В ОН в о В с М ОО я о в но о Ки о КМ я М М
НКУ М я МІОМІ ОО ОО ППО М о о о и МО ОКО ОКО Ки МИ Ко КК нн ВК о У ВО КК и МО НК Х о о ОО вв о у Вк в о ях ОО ОО МО В В ОО В ПК я ОО ПО ПВ в М о ХВ В У ПО В ВООКОК В В В ВХ ПО я ІІ І, І І КО о В ВН фо о о он ок ХА о в КК КВ КК Пов Нв У ОКО В и НЯ пн зи
ЧЕ, о
ЗВО ВВ ОВ ВВ ВК ЕК КК ОК КЕКВ КВК ВВЕ КВ МО в в ВОК В о п в В в В В фо Ко о о о о Ко КК ооо фо Ко Ко ооо ооо Ко МКК оо о в о ооо ПИ и В М КВ ИН АК: ВН М в В В КК ВЯ СОН оо В я ОН ІІ ПО в о в ППП КОН ОКО о ни в В в У У ДОВ В ме
ФО ОО ОО В я В В КН НЯ Ко КК В ООН я В В КО В В В ВА о ОО В НО я ВО о ПО В В я СКК КВУ КА ВК КА КЕ ПМ а ОК КК ВК и А А ВХ КК КО ОО В ОО я ІІ а а аа о Є Є о ОО ВО Во о о КК Я А я ОО В В В о ОО ОО Б КОКО ВК ВК ОК КК КК ВХ КО ОО ОО о КОН Ко о о я КОН ПО Пео В Н КО КО КО І І Пео ОККО В ВИ и я г М п Ко я З В У Ко о А В МК В В У КО В о я В В Я
Фіра
СИНЯ
Її
«ФГ. 13 Фо ла С І Ж її:
о. Й кт ФО с о до Шия ся щі сват т о що 200 зай 400 ПоАр М ФГ, В конпропеові зеси кровотечі зр. вом кроекутт; з ЩА ж ше : : ді по па сх хау 4 а В о справа «Вк ВВ Е середне с? Я28. 2 пан .2Б1 В тк я : В ті ЖЕ Н і Н З СК Ж о Хі й На й но ЩЕ ща в. 78 я рат Ми : я 2 а Коко т 2 на зна ин на в й ї КУ 3. 3 5 ГУ т ї х за ях ЖЕ щк мкм о зи даю УЖ змжя Еш м Миша Ме Под нм ОЗ пи нн нн Н ; Н і ва З і і - Н Я Н хх і . 1 ! і Е ож Н Ї ! Ж 0. 35 т г Й і Кк ! Н рої І Е ох | і І г : Н Н ой п.3 ті і і є Е і
Ева. ї М : ОХ НН о 1 Н Н МО КО : і в : ОО в і
ОБ. | ооо Ох ! ї мак ї ПЕН ОК ї ї К - ОН ИН ї ши с і ОО ШМК Н
! г. ! а В і : : о о : Н : ПК ОО : ї Н МОМ ХОМ Н й пре ВЖК о с з в нн ШЕ ! і : УТ я Юм внти- ТА ВХ : : ' Над . і ФЕ1
0 МИ МИ М М НО ОО МОНА МОНЕ ОН НО МОЖ МИ НЄ ОТ : А : : ї ї Н : : Н : Н 7 Н нин о ши шеншишнининишише шини ши шини о . Коко ще сосее ; оон коКонкое: зов : -е пе зеосссе зок сов кв кон шо ж в п ІІ пп гі І гПпПП гпО Пп" "Оу п. лад . нн нн і нн НН НН НН НИЙ Манту а У : 1 пох : У й п. І : : Я : ЗХ БО В совно нене КК Кк еконо У Я аскикн ВВА ВВ НБК ОВОВВВО БВ ВОВК БО ВК ВВЕ в В
ФІГ. ВЕ ш ин ни нн нн НН НН : : Я й : РУ ХО ж ІН І м нн п м ан п Бе хх о на НН НН ї ;. В У 2 ПЕС : КОСОВО ЕК Ки ев 5 Коко Хр г. 8 ши ОО п Б зн кн нн нн в НН НН НН А НН МИ НИ БК МЕ ТЕ Н ! : Н : ї Ж ди ад ши Ж дм Коди кю мм ОХ . я нин нн п п В В о о р о ши шини : ше ше шк 00 пон КОКО кокон кишка сококве онов її А НН |! шпон. нн я вн т мм кн ТТ яп ЗВ ЕММА НОВО
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB1121513.4A GB201121513D0 (en) | 2011-12-14 | 2011-12-14 | Thrombin-binding antibody molecules and uses thereof |
| PCT/GB2012/053140 WO2013088164A1 (en) | 2011-12-14 | 2012-12-14 | Thrombin-binding antibody molecules and uses thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA116531C2 true UA116531C2 (uk) | 2018-04-10 |
Family
ID=45560465
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201406892A UA116531C2 (uk) | 2011-12-14 | 2012-12-14 | Виділена молекула антитіла, яка специфічно зв'язується з ділянкою екзосайта 1 тромбіну, та її застосування |
Country Status (33)
| Country | Link |
|---|---|
| US (5) | US9518129B2 (uk) |
| EP (2) | EP2791177B1 (uk) |
| JP (2) | JP6216954B2 (uk) |
| KR (1) | KR102114506B1 (uk) |
| CN (2) | CN107936119B (uk) |
| AU (2) | AU2012351858B2 (uk) |
| BR (1) | BR112014014605A2 (uk) |
| CA (1) | CA2856656C (uk) |
| CO (1) | CO7101192A2 (uk) |
| CY (1) | CY1119599T1 (uk) |
| DK (1) | DK2791177T3 (uk) |
| ES (1) | ES2642718T3 (uk) |
| GB (1) | GB201121513D0 (uk) |
| HK (2) | HK1202564A1 (uk) |
| HR (1) | HRP20171775T1 (uk) |
| HU (1) | HUE034793T2 (uk) |
| IL (1) | IL232797B (uk) |
| LT (1) | LT2791177T (uk) |
| ME (1) | ME02901B (uk) |
| MX (1) | MX353281B (uk) |
| MY (1) | MY170980A (uk) |
| NO (1) | NO2791177T3 (uk) |
| PE (2) | PE20141706A1 (uk) |
| PH (1) | PH12014501169A1 (uk) |
| PL (1) | PL2791177T3 (uk) |
| PT (1) | PT2791177T (uk) |
| RS (1) | RS56510B1 (uk) |
| RU (2) | RU2017144629A (uk) |
| SG (1) | SG11201402560WA (uk) |
| SI (1) | SI2791177T1 (uk) |
| UA (1) | UA116531C2 (uk) |
| WO (1) | WO2013088164A1 (uk) |
| ZA (1) | ZA201403836B (uk) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9518128B2 (en) * | 2011-12-14 | 2016-12-13 | Janssen Pharmaceuticals, Inc. | Thrombin-binding antibody molecules |
| GB201121513D0 (en) * | 2011-12-14 | 2012-01-25 | Cambridge Entpr Ltd | Thrombin-binding antibody molecules and uses thereof |
| GB201310948D0 (en) * | 2013-06-19 | 2013-07-31 | Cambridge Entpr Ltd | Screening methods |
| GB201310949D0 (en) * | 2013-06-19 | 2013-07-31 | Cambridge Entpr Ltd | Binding Motif |
| CN107043423B (zh) * | 2016-02-05 | 2021-02-26 | 江苏恒瑞医药股份有限公司 | 凝血酶抗体、其抗原结合片段及医药用途 |
| RU2018129180A (ru) * | 2016-02-05 | 2020-03-05 | Цзянсу Хэнжуй Медицин Ко., Лтд. | Тромбиновое антитело, антиген-связывающий фрагмент и их фармацевтическое применение |
| WO2018081534A1 (en) * | 2016-10-28 | 2018-05-03 | President And Fellows Of Harvard College | Assay for exo-site binding molecules |
| WO2019030706A1 (en) | 2017-08-10 | 2019-02-14 | Janssen Pharmaceutica Nv | ANTI-THROMBIN ANTIBODY MOLECULES AND METHODS OF USE IN ORTHOPEDIC SURGERY |
| WO2019035055A1 (en) | 2017-08-16 | 2019-02-21 | Janssen Pharmaceutica Nv | ANTI-THROMBIN ANTIBODY MOLECULES AND METHODS OF USE WITH PLATELET ANTI-AGGREGATE AGENTS |
| WO2020003077A1 (en) * | 2018-06-25 | 2020-01-02 | Janssen Pharmaceutica Nv | Anti-thrombin antibody molecules for use in patients at risk for gastrointestinal (gi) bleeding |
Family Cites Families (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE68908175T2 (de) * | 1988-05-27 | 1994-03-03 | Centocor Inc | Gefriergetrocknete formulierung für antikörperprodukte. |
| US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
| US5240913A (en) | 1989-08-18 | 1993-08-31 | Biogen, Inc. | Inhibitors of thrombin |
| US5196404B1 (en) | 1989-08-18 | 1996-09-10 | Biogen Inc | Inhibitors of thrombin |
| EP0534988A1 (en) | 1990-05-10 | 1993-04-07 | Cetus Corporation | Inhibitors of factor xii activation and applications thereof |
| GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
| US5443827A (en) * | 1993-05-03 | 1995-08-22 | President And Fellows Of Harvard College | Fibrin-targeted inhibitors of thrombin |
| WO1995017907A1 (en) * | 1993-12-27 | 1995-07-06 | Hamilton Civic Hospitals Research Development, Inc. | Methods and compositions for inhibiting thrombogenesis |
| GB9613718D0 (en) | 1996-06-29 | 1996-08-28 | Thrombosis Res Inst | Thrombin inhibitors |
| US5985833A (en) | 1996-09-17 | 1999-11-16 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Thrombin inhibitor |
| AU5903000A (en) | 1999-06-29 | 2001-01-31 | Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The | Novel anti-thrombin peptide |
| CA2378473A1 (en) * | 1999-07-23 | 2001-02-01 | The Regents Of The University Of California | Modulation of platelet activation |
| KR20070116192A (ko) * | 2000-05-15 | 2007-12-06 | 스미스클라인 비참 코포레이션 | 항혈전제 |
| AU2001286900A1 (en) | 2000-08-31 | 2002-03-13 | Cor Therapeutics, Inc. | Therapeutics and diagnostics based on a novel signal transduction system in platelets |
| WO2003003988A2 (en) * | 2001-07-06 | 2003-01-16 | Oregon Health & Science University | Peptides which modulate blood coagulation and methods of use thereof |
| TWI338009B (en) * | 2001-10-29 | 2011-03-01 | Genentech Inc | Antibodies for inhibiting blood coagulation and methods of use thereof |
| JP2009508473A (ja) | 2005-08-26 | 2009-03-05 | アーケミツクス・コーポレイシヨン | 高親和性でトロンビンに結合するアプタマー |
| CA2680736A1 (en) | 2006-03-15 | 2007-09-20 | Emory University | Use of thrombin mutants to inhibit the anticoagulation effect of thrombin inhibitors |
| GB0711779D0 (en) | 2007-06-18 | 2007-07-25 | Univ Singapore | Thrombin inhibitor |
| HUE041556T2 (hu) | 2008-06-19 | 2019-05-28 | Prothix Bv | XI-es faktor elleni ellenanyagok alkalmazása vérrögképzõdés megelõzésére vagy kezelésére |
| WO2010033167A2 (en) * | 2008-09-18 | 2010-03-25 | Archemix Corp. | Anti-thrombin aptamer formulations and methods for use |
| KR102042982B1 (ko) | 2011-07-22 | 2019-11-11 | 체에스엘 베링 게엠베하 | 억제성 항-ｘｉｉ/ｘｉｉａ 인자 모노클로날 항체 및 이들의 사용 |
| US9518128B2 (en) * | 2011-12-14 | 2016-12-13 | Janssen Pharmaceuticals, Inc. | Thrombin-binding antibody molecules |
| GB201121513D0 (en) * | 2011-12-14 | 2012-01-25 | Cambridge Entpr Ltd | Thrombin-binding antibody molecules and uses thereof |
-
2011
- 2011-12-14 GB GBGB1121513.4A patent/GB201121513D0/en not_active Ceased
-
2012
- 2012-12-14 UA UAA201406892A patent/UA116531C2/uk unknown
- 2012-12-14 BR BR112014014605A patent/BR112014014605A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2012-12-14 RU RU2017144629A patent/RU2017144629A/ru unknown
- 2012-12-14 CN CN201711384542.3A patent/CN107936119B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2012-12-14 EP EP12806641.2A patent/EP2791177B1/en active Active
- 2012-12-14 KR KR1020147019168A patent/KR102114506B1/ko active IP Right Grant
- 2012-12-14 PE PE2014000953A patent/PE20141706A1/es active IP Right Grant
- 2012-12-14 SG SG11201402560WA patent/SG11201402560WA/en unknown
- 2012-12-14 MX MX2014007170A patent/MX353281B/es active IP Right Grant
- 2012-12-14 PL PL12806641T patent/PL2791177T3/pl unknown
- 2012-12-14 ES ES12806641.2T patent/ES2642718T3/es active Active
- 2012-12-14 HU HUE12806641A patent/HUE034793T2/en unknown
- 2012-12-14 AU AU2012351858A patent/AU2012351858B2/en not_active Ceased
- 2012-12-14 JP JP2014546649A patent/JP6216954B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2012-12-14 PT PT128066412T patent/PT2791177T/pt unknown
- 2012-12-14 RU RU2014124985A patent/RU2642276C2/ru active
- 2012-12-14 ME MEP-2017-243A patent/ME02901B/me unknown
- 2012-12-14 NO NO12806641A patent/NO2791177T3/no unknown
- 2012-12-14 MY MYPI2014001764A patent/MY170980A/en unknown
- 2012-12-14 RS RS20171073A patent/RS56510B1/sr unknown
- 2012-12-14 CN CN201280061294.8A patent/CN104053673B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2012-12-14 DK DK12806641.2T patent/DK2791177T3/en active
- 2012-12-14 EP EP17177235.3A patent/EP3275903A1/en not_active Withdrawn
- 2012-12-14 PE PE2018002007A patent/PE20190171A1/es unknown
- 2012-12-14 CA CA2856656A patent/CA2856656C/en active Active
- 2012-12-14 SI SI201231145T patent/SI2791177T1/en unknown
- 2012-12-14 WO PCT/GB2012/053140 patent/WO2013088164A1/en active Application Filing
- 2012-12-14 LT LTEP12806641.2T patent/LT2791177T/lt unknown
- 2012-12-14 US US14/363,514 patent/US9518129B2/en active Active
-
2014
- 2014-05-26 PH PH12014501169A patent/PH12014501169A1/en unknown
- 2014-05-26 ZA ZA2014/03836A patent/ZA201403836B/en unknown
- 2014-05-26 IL IL232797A patent/IL232797B/en active IP Right Grant
- 2014-07-11 CO CO14150372A patent/CO7101192A2/es unknown
-
2015
- 2015-03-27 HK HK15103146.0A patent/HK1202564A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2016
- 2016-11-10 US US15/348,250 patent/US9988463B2/en active Active
-
2017
- 2017-08-30 JP JP2017165700A patent/JP6705785B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2017-11-14 CY CY20171101189T patent/CY1119599T1/el unknown
- 2017-11-16 HR HRP20171775TT patent/HRP20171775T1/hr unknown
- 2017-12-01 AU AU2017268655A patent/AU2017268655B2/en not_active Ceased
-
2018
- 2018-05-08 HK HK18105913.3A patent/HK1246326A1/zh unknown
- 2018-05-10 US US15/976,512 patent/US10287363B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2019
- 2019-03-25 US US16/363,396 patent/US20190276558A1/en not_active Abandoned
-
2021
- 2021-06-10 US US17/344,577 patent/US20210371543A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| UA116531C2 (uk) | Виділена молекула антитіла, яка специфічно зв'язується з ділянкою екзосайта 1 тромбіну, та її застосування | |
| Grant | Beneficial effects of metformin on haemostasis and vascular function in man | |
| US6391299B1 (en) | Anti-factor IX/IXa antibodies | |
| JP2023145564A (ja) | 第ＸＩＩａ因子のモノクローナル抗体阻害剤 | |
| CN105705517A (zh) | 用于治疗凝血障碍的新方法和抗体 | |
| JP2018520684A5 (uk) | ||
| US10676539B2 (en) | Tissue plasminogen activator antibodies and methods of use | |
| Nakashima et al. | Pharmacokinetics and safety of a novel recombinant soluble human thrombomodulin, ART‐123, in healthy male volunteers | |
| KR20030034071A (ko) | 항혈전제 | |
| WO2014202992A1 (en) | Screening methods for thrombin binding agent and uses of thrombin binding agent for inhibiting or preventing coagulation | |
| Miller | The molecular interactions of the catalytic domain of factor XIa (FXIa): Catalysis of substrates IX and S-2366, inhibition by the Kunitz protease inhibitory domain (KPI) of Protease Nexin 2 (PN2), and binding to the surface of activated platelets | |
| NZ625386B2 (en) | Thrombin-binding antibody molecules and uses thereof |