JP6705785B2 - トロンビン結合性抗体分子及びその使用 - Google Patents
トロンビン結合性抗体分子及びその使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6705785B2 JP6705785B2 JP2017165700A JP2017165700A JP6705785B2 JP 6705785 B2 JP6705785 B2 JP 6705785B2 JP 2017165700 A JP2017165700 A JP 2017165700A JP 2017165700 A JP2017165700 A JP 2017165700A JP 6705785 B2 JP6705785 B2 JP 6705785B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- thrombin
- exosite
- antibody molecule
- antibody
- seq
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 title claims description 132
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 title claims description 132
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 claims description 43
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 30
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 20
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 19
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 17
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 16
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 13
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 11
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 8
- 208000005189 Embolism Diseases 0.000 claims description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 7
- 230000001732 thrombotic effect Effects 0.000 claims description 7
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 6
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 claims description 5
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 claims description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims description 3
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 claims description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims description 3
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 claims description 3
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 claims description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 32
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 31
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 description 26
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 24
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 24
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 18
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 17
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 17
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 17
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 17
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 15
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 15
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 15
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 14
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 13
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 13
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 13
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 13
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 13
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 12
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 12
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 11
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 11
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 10
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 10
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 9
- 239000004019 antithrombin Substances 0.000 description 9
- 210000003191 femoral vein Anatomy 0.000 description 9
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 9
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 9
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 9
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 8
- 229960003766 thrombin (human) Drugs 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 7
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 7
- 206010048964 Carotid artery occlusion Diseases 0.000 description 6
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 6
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 6
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 6
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 6
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 6
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 6
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 6
- MGVRBUNKWISLAM-DQWUKECYSA-N (4s)-5-[[(2s)-1-[[(2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]-[(2s)-4-methyl-1-oxo-1-sulfooxypentan-2-yl]amino]-4-carboxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-[[(2s)-1-[(2s,3s)-2-[[(2s)-4-carboxy-2-[[(2s)-4-carboxy-2-[[(2s)-2-[[(2s)-3-carboxy-2-[[2-[[(2s)-2,4-diamino- Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N([C@@H](CC(C)C)C(=O)OS(O)(=O)=O)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C1=CC=CC=C1 MGVRBUNKWISLAM-DQWUKECYSA-N 0.000 description 5
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 5
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 5
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 5
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 5
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 5
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 4
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 4
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 4
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 4
- 210000001715 carotid artery Anatomy 0.000 description 4
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 108010059239 hirugen Proteins 0.000 description 4
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 3
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 3
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 108010079274 Thrombomodulin Proteins 0.000 description 3
- 102000012607 Thrombomodulin Human genes 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 3
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 3
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 241000486679 Antitype Species 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 101100008047 Caenorhabditis elegans cut-3 gene Proteins 0.000 description 2
- 108090000201 Carboxypeptidase B2 Proteins 0.000 description 2
- 102100035023 Carboxypeptidase B2 Human genes 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 108010014172 Factor V Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010018852 Haematoma Diseases 0.000 description 2
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 2
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 2
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Natural products OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 description 2
- 102000017975 Protein C Human genes 0.000 description 2
- 101710121440 Proteinase-activated receptor 1 Proteins 0.000 description 2
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 2
- 208000024248 Vascular System injury Diseases 0.000 description 2
- 208000012339 Vascular injury Diseases 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000001631 haemodialysis Methods 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 230000000322 hemodialysis Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 1
- KWPACVJPAFGBEQ-IKGGRYGDSA-N (2s)-1-[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]-n-[(3s)-1-chloro-6-(diaminomethylideneamino)-2-oxohexan-3-yl]pyrrolidine-2-carboxamide Chemical compound C([C@@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)CCl)C1=CC=CC=C1 KWPACVJPAFGBEQ-IKGGRYGDSA-N 0.000 description 1
- VYLJFJGMPYBPMN-VXKWHMMOSA-N (2s)-n-[(2s)-5-(diaminomethylideneamino)-1-(4-nitroanilino)-1-oxopentan-2-yl]-1-[2-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]acetyl]pyrrolidine-2-carboxamide Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)NCC(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NC=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)CCC1 VYLJFJGMPYBPMN-VXKWHMMOSA-N 0.000 description 1
- 150000005206 1,2-dihydroxybenzenes Chemical class 0.000 description 1
- 150000005207 1,3-dihydroxybenzenes Chemical class 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 241000746129 Aniara Species 0.000 description 1
- QNZCBYKSOIHPEH-UHFFFAOYSA-N Apixaban Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1N1C(C(=O)N(CC2)C=3C=CC(=CC=3)N3C(CCCC3)=O)=C2C(C(N)=O)=N1 QNZCBYKSOIHPEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037260 Atherosclerotic Plaque Diseases 0.000 description 1
- 208000035404 Autolysis Diseases 0.000 description 1
- 239000005552 B01AC04 - Clopidogrel Substances 0.000 description 1
- 239000005528 B01AC05 - Ticlopidine Substances 0.000 description 1
- 108010027612 Batroxobin Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241000251730 Chondrichthyes Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 206010011086 Coronary artery occlusion Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical class OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010014523 Embolism and thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 206010014522 Embolism venous Diseases 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 108010071289 Factor XIII Proteins 0.000 description 1
- 241000724791 Filamentous phage Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 206010019196 Head injury Diseases 0.000 description 1
- 108010022901 Heparin Lyase Proteins 0.000 description 1
- 108010007267 Hirudins Proteins 0.000 description 1
- 102000007625 Hirudins Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101001098529 Homo sapiens Proteinase-activated receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000651439 Homo sapiens Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 101000713169 Homo sapiens Solute carrier family 52, riboflavin transporter, member 2 Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical class C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102100032341 PCNA-interacting partner Human genes 0.000 description 1
- 101710196737 PCNA-interacting partner Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241000404883 Pisa Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037136 Proteinase-activated receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 239000008156 Ringer's lactate solution Substances 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100028904 Serine/threonine-protein kinase MARK2 Human genes 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000002667 Subdural Hematoma Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 101000712605 Theromyzon tessulatum Theromin Proteins 0.000 description 1
- 229940122388 Thrombin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 1
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 1
- 206010043647 Thrombotic Stroke Diseases 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 206010047249 Venous thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 229960000446 abciximab Drugs 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- WDJHALXBUFZDSR-UHFFFAOYSA-N acetoacetic acid Chemical compound CC(=O)CC(O)=O WDJHALXBUFZDSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 238000002266 amputation Methods 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940127218 antiplatelet drug Drugs 0.000 description 1
- 229960003886 apixaban Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- KXNPVXPOPUZYGB-XYVMCAHJSA-N argatroban Chemical compound OC(=O)[C@H]1C[C@H](C)CCN1C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NS(=O)(=O)C1=CC=CC2=C1NC[C@H](C)C2 KXNPVXPOPUZYGB-XYVMCAHJSA-N 0.000 description 1
- 229960003856 argatroban Drugs 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 1
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H bis[(2-oxo-1,3,2$l^{5},4$l^{2}-dioxaphosphaplumbetan-2-yl)oxy]lead Chemical compound [Pb+2].[Pb+2].[Pb+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 108010055460 bivalirudin Proteins 0.000 description 1
- 229960001500 bivalirudin Drugs 0.000 description 1
- OIRCOABEOLEUMC-GEJPAHFPSA-N bivalirudin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 OIRCOABEOLEUMC-GEJPAHFPSA-N 0.000 description 1
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N butyl alcohol Substances CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- BMLSTPRTEKLIPM-UHFFFAOYSA-I calcium;potassium;disodium;hydrogen carbonate;dichloride;dihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].OC([O-])=O BMLSTPRTEKLIPM-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- ZEWYCNBZMPELPF-UHFFFAOYSA-J calcium;potassium;sodium;2-hydroxypropanoic acid;sodium;tetrachloride Chemical compound [Na].[Na+].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].CC(O)C(O)=O ZEWYCNBZMPELPF-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 108010018472 chromozym TH Proteins 0.000 description 1
- 150000001860 citric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229960003009 clopidogrel Drugs 0.000 description 1
- GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N clopidogrel Chemical compound C1([C@H](N2CC=3C=CSC=3CC2)C(=O)OC)=CC=CC=C1Cl GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N cyclohexanol Chemical class OC1CCCCC1 HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003850 dabigatran Drugs 0.000 description 1
- YBSJFWOBGCMAKL-UHFFFAOYSA-N dabigatran Chemical compound N=1C2=CC(C(=O)N(CCC(O)=O)C=3N=CC=CC=3)=CC=C2N(C)C=1CNC1=CC=C(C(N)=N)C=C1 YBSJFWOBGCMAKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002618 extracorporeal membrane oxygenation Methods 0.000 description 1
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 1
- 229940012444 factor xiii Drugs 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 229940006607 hirudin Drugs 0.000 description 1
- WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N hirudin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(OS(O)(=O)=O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H]2CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N2)=O)CSSC1)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)[C@@H](C)O)CSSC1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940039715 human prothrombin Drugs 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 229960004408 lepirudin Drugs 0.000 description 1
- OTQCKZUSUGYWBD-BRHMIFOHSA-N lepirudin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)[C@@H](C)O)C1=CC=C(O)C=C1 OTQCKZUSUGYWBD-BRHMIFOHSA-N 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 150000002672 m-cresols Chemical class 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Chemical class 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000001453 nonthrombogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N p-hydroxybenzoic acid methyl ester Natural products COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 108010005158 phenylalanyl-prolyl-arginine chloromethyl ketone-thrombin Proteins 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000006461 physiological response Effects 0.000 description 1
- 239000000106 platelet aggregation inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000003805 procoagulant Substances 0.000 description 1
- 230000002947 procoagulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 238000010379 pull-down assay Methods 0.000 description 1
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 229940121896 radiopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 239000012217 radiopharmaceutical Substances 0.000 description 1
- 230000002799 radiopharmaceutical effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 1
- 229960001148 rivaroxaban Drugs 0.000 description 1
- KGFYHTZWPPHNLQ-AWEZNQCLSA-N rivaroxaban Chemical compound S1C(Cl)=CC=C1C(=O)NC[C@@H]1OC(=O)N(C=2C=CC(=CC=2)N2C(COCC2)=O)C1 KGFYHTZWPPHNLQ-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000010517 secondary reaction Methods 0.000 description 1
- 230000028043 self proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 239000003001 serine protease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000008354 sodium chloride injection Substances 0.000 description 1
- SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M stearalkonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 239000003868 thrombin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229960005001 ticlopidine Drugs 0.000 description 1
- PHWBOXQYWZNQIN-UHFFFAOYSA-N ticlopidine Chemical compound ClC1=CC=CC=C1CN1CC(C=CS2)=C2CC1 PHWBOXQYWZNQIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 208000004043 venous thromboembolism Diseases 0.000 description 1
- PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N warfarin Chemical compound OC=1C2=CC=CC=C2OC(=O)C=1C(CC(=O)C)C1=CC=CC=C1 PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005080 warfarin Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/36—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against blood coagulation factors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Oncology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は、トロンビンを阻害する抗体分子に関する。
血液の凝固は、損傷した血管からの出血の防止（止血）において鍵となるプロセスである。しかし、血管を通る血液の流れを妨げる血塊（血栓）、または破砕して身体の他の場所における血管内に留まる血塊（血栓塞栓症）は、健康への深刻な脅威となり得る。
多数の抗凝固療法が、病的な血液凝固を治療するために利用可能である。これらの治療法の共通の欠点は、出血リスクの増加である（Ｍａｃｋｍａｎ（２００８）Ｎａｔｕｒｅ ４５１（７１８１）：９１４−９１８）。多くの抗凝固剤は、血栓を防ぐ用量と出血を誘発する用量の間の治療域が狭い。この域は、多くの場合、個々の患者の応答性の違いによってさらに制限される。
本発明は、トロンビンのエキソサイト１エピトープを認識する抗体分子は、出血を促進することなくトロンビンを選択的に阻害するという予想外の発見に関する。これらの抗体分子は、血栓、塞栓、およびトロンビン介在性のその他の状態の治療および予防に有用であり得る。
本発明の１の態様は、トロンビンのエキソサイト１に特異的に結合する単離された抗体分子を提供する。
単離された抗エキソサイト１抗体分子は、出血（ｂｌｅｅｄｉｎｇ）または大出血（ｈａｅｍｏｒｒｈａｇｅ）を促進または実質的に促進することなく、すなわち、この抗体分子が血管損傷に対する正常な生理的反応（すなわち止血）を阻害または実質的に阻害することなく、インビボでトロンビンを阻害し得る。例えば、この抗体分子により、止血は阻害されないか、または、最小限度で阻害（すなわち、患者の健康に影響を与えないか、または、さらなる介入を必要としないというわずかな程度で阻害）され得る。この抗体分子により、出血は増加しない、または最小限度で増加し得る。
エキソサイト１（「アニオン結合エキソサイト１」および「フィブリノゲン認識エキソサイト」としても知られている）は、よく特徴付けされたトロンビン分子上の二次結合部位である（例えば、Ｊａｍｅｓ Ａ．Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ，２００８，Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ Ｌｉｆｅ Ｈｉｓｔｏｒｙ ｏｆ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ，ｉｎ Ｒｅｃｅｎｔ Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ ２００８，ｅｄｉｔｏｒｓ；Ｋ． Ｔａｎａｋａ ａｎｄ Ｅ．Ｗ．Ｄａｖｉｅ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｊａｐａｎ ＫＫ，Ｔｏｋｙｏ，ｐｐ．８０−１０６参照）。エキソサイト１は、成熟したトロンビン中には形成されるが、プロトロンビン中には形成されない（例えば、Ａｎｄｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ（２０００）ＪＢＣ ２７７５ １６４２８−１６４３４参照）。
エキソサイト１は、フィブリノゲンなどのトロンビン基質の認識に関与するが、触媒活性部位からは離れている。抗凝固ドデカペプチドヒルゲン（Ｎａｓｋｉ ｅｔ ａｌ １９９０ ＪＢＣ ２６５ １３４８４−１３４８９）、第Ｖ因子、第ＶＩＩＩ因子、トロンボモジュリン（プロテインＣおよびＴＡＦＩの活性化のための補因子）、フィブリノゲン、ＰＡＲＩおよびフィブリン（第ＸＩＩＩ因子の活性化のための補因子）を含む、様々なトロンビン結合因子が、エキソサイト１に結合する。
抗エキソサイト１抗体は、成熟ヒトトロンビンのエキソサイト１に結合できる。ヒトプレプロトロンビンの配列は、配列番号１に記載の通りである。ヒトプロトロンビンは、配列番号１の残基４４〜６２２の配列を有する。成熟ヒトトロンビンは、残基３１４〜３６３（軽鎖）および残基３６４〜６２２（重鎖）の配列を有する。
いくつかの実施形態では、抗エキソサイト１抗体は、他の種由来の成熟トロンビンのエキソサイト１にも結合できる。他の種由来のトロンビン配列は、当該分野において公知であり、ＧｅｎＢａｎｋなどの公共データベース上で利用可能である。他の種由来のトロンビン配列中の対応する残基は、配列アラインメントツールを用いて容易に同定可能である。
本明細書に記載のトロンビン残基のナンバリングのスキームは、当該分野で通常のものであり、キモトリプシンテンプレート（Ｂｏｄｅ Ｗ ｅｔ ａｌ ＥＭＢＯ Ｊ．１９８９ Ｎｏｖ；８（１１）：３４６７−７５）に基づく。トロンビンは、順番に小文字が付されたキモトリプシンに対する挿入ループを有する。
成熟ヒトトロンビンのエキソサイト１には、配列番号１中に下線が付されており、以下の残基を含み得る：Ｍ３２、Ｆ３４、Ｒ３５、Ｋ３６、Ｓ３６ａ、Ｐ３７、Ｑ３８、Ｅ３９、Ｌ４０、Ｌ６５、Ｒ６７、Ｓ７２、Ｒ７３、Ｔ７４、Ｒ７５、Ｙ７６、Ｒ７７ａ、Ｎ７８、Ｅ８０、Ｋ８１、Ｉ８２、Ｓ８３、Ｍ８４、Ｋ１０９、Ｋ１１０、Ｋ１４９ｅ、Ｇ１５０、Ｑ１５１、Ｓ１５３およびＶ１５４。いくつかの実施形態では、これらの残基のいずれか１つと近接して（すなわち、０．５ｎｍ以内または１ｎｍ以内）位置する他のトロンビン残基もまたエキソサイト１の一部と考えることができる。
抗エキソサイト１抗体は、エキソサイト１の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、または２０個を超える残基を含むエピトープに結合し得る。好ましくは、抗エキソサイト１抗体は、エキソサイト１残基全体から構成されるエピトープに結合する。
例えば、抗エキソサイト１抗体は、ヒトトロンビンまたは他の種由来のトロンビンにおける等価残基のＭ３２、Ｆ３４、Ｓ３６ａ、Ｐ３７、Ｑ３８、Ｅ３９、Ｌ４０、Ｌ６５、Ｒ６７、Ｒ７３、Ｔ７４、Ｒ７５、Ｙ７６、Ｒ７７ａ、Ｉ８２ およびＱ１５１からなる群より選択される１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または全１６個の残基を含むエピトープに結合し得る。いくつかの好ましい実施形態では、エピトープは、トロンビン残基Ｑ３８、Ｒ７３、Ｔ７４、Ｙ７６ およびＲ７７ａ、そして場合により１つ以上の追加残基を含み得る。
本明細書に記載の抗エキソサイト１抗体分子は、トロンビンエキソサイト１に特異的であり、このエピトープに対し、他のエピトープ、例えば、成熟トロンビン以外の哺乳動物タンパク質由来のエピトープ、よりも高い親和性で結合する。例えば、抗エキソサイト抗体１分子は、トロンビンエキソサイト１に対し、他のエピトープよりも、少なくとも５００倍、少なくとも１０００倍、または他よりも少なくとも２０００倍高い結合親和性を示し得る。
好ましくは、エキソサイト１に特異的な本明細書に記載の抗体分子は、成熟トロンビンに結合し得るが、プロトロンビンには結合しないまたは実質的に結合しないことを示し得る。
いかなる理論にも束縛されないが、抗エキソサイト１抗体は、止血性血塊のコア内にあるトロンビンにアクセス不能なので血管損傷の部位における正常なトロンビンの機能を阻害することで止血に対し影響することがない可能性がある。しかしながら、抗エキソサイト１抗体は依然として血塊の表面および血塊の外殻でトロンビンに結合するので、血栓が防止される、すなわち、非止血性血塊の伸長が防止される。
抗エキソサイト１抗体分子は、５０ｎＭ未満、４０ｎＭ未満、３０ｎｍ未満、２０ｎＭ未満、１０ｎΜ未満、または１ｎＭ未満のエキソサイト１に対する解離定数を有し得る。例えば、抗体分子は、０．１〜５０ｎＭ、例えば、０．５〜１０ｎＭのエキソサイト１に対する親和性を有し得る。好適な抗エキソサイト１抗体分子は、例えば、約１ｎＭのトロンビンエキソサイト１に対する親和性を有し得る。
抗エキソサイト１抗体分子の結合動態（Ｂｉｎｄｉｎｇ ｋｉｎｅｔｉｃｓ）および親和性（平衡解離定数Ｋdとして表される）は、標準的な手法、例えばＢＩＡｃｏｒｅ分析を使用した表面プラズモン共鳴などを用いて決定できる。
本明細書に記載の抗エキソサイト１抗体分子は、免疫グロブリンまたはその断片であってもよく、天然または部分的もしくは完全に合成して生成されるもの、例えば組換え分子であってもよい。
抗エキソサイト１抗体分子は、任意のアイソタイプまたはサブクラスの抗体の全体ならびに、Ｆａｂ、Ｆａｂ2、Ｆａｂ3、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディおよび単一ドメイン抗体（ナノボディを含む）等の抗体抗原結合部位を含む任意のポリペプチドまたはプロテインを含み得る。抗体分子ならびにそれらの構築方法および使用方法は、例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ＆Ｈｕｄｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２３（９）：１１２６−１１３６（２００５）に記載される。
いくつかの好ましい実施形態では、抗エキソサイト１抗体分子は、完全抗体であり得る。例えば、抗エキソサイト１抗体分子は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、またはＩｇＭ、あるいは任意のアイソタイプのサブクラス、特にＩｇＧ１およびＩｇＧ４であってもよい。抗エキソサイト１抗体分子は、モノクローナル抗体であってもよい。他の好ましい実施形態では、抗エキソサイト１抗体分子は、抗体の断片であってもよい。
抗エキソサイト１抗体分子は、キメラ、ヒト化またはヒト抗体であってもよい。
本明細書に記載の抗エキソサイト１抗体分子は、他のポリペプチドおよび／または血清成分に結合可能な抗体等の汚染物質がないという意味で、単離可能である。モノクローナル抗体がいくつかの目的のために好ましいことがあるが、ポリクローナル抗体を用いてもよい。
抗エキソサイト１抗体分子は、当該分野で標準的な技術を用いて得ることができる。抗体を生産する方法には、タンパク質またはその断片を用いて、哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ウマ、ヤギ、ヒツジまたはサル）を免疫化することが挙げられる。抗体は、当該分野で公知の様々な技術のいずれかを用いて免疫動物から得ることができ、好ましくは、目的の抗原に対する抗体の結合を利用して、スクリーニングできる。例えば、ウェスタンブロッティング法または免疫沈降を用いることができる（Ａｒｍｉｔａｇｅ ｅｔ ａｌ．，１９９２、Ｎａｔｕｒｅ３５７：８０−８２）。動物から抗体および／または抗体産生細胞を単離するのに、動物を犠牲にする工程を伴う場合がある。
ペプチドで哺乳動物を免疫する代わりまたは補完として、組換えにより製造した、発現した免疫グロブリン可変ドメインのライブラリーから（例えば、その表面に機能的免疫グロブリン結合ドメインを提示するラムダバクテリオファージまたは糸状バクテリオファージを用いることにより；例として、ＷＯ９２／０１０４７を参照のこと）、タンパク質に特異的な抗体を得ることができる。このライブラリーは、いかなるタンパク質（または断片）にも免疫化されていない生物から得た配列から構築したナイーブなものであってもよく、あるいは目的の抗原に曝した生物から得た配列を使用して構築したものであってもよい。
他の抗エキソサイト１抗体分子は、エキソサイト１に結合する抗体について、患者の血清をスクリーニングすることによって同定できる。
いくつかの実施形態では、抗トロンビン抗体分子は、例えば、上述の方法等の任意の便利な手段によって生産することができ、そして、エキソサイト１に変異を有するトロンビン、ガンマトロンビン（自己消化によりＲ７５およびＲ７７ａが欠損するエキソサイト１）またはプロトロンビンと比較した成熟トロンビンに対する結合の違いによってスクリーニングできる。好適なスクリーニング方法は、当該分野において周知である。
トロンビン以外のタンパク質、エキソサイト１変異を有するトロンビン、ガンマトロンビンまたはプロトロンビンと比較して成熟トロンビンに対する結合の増加を示す抗体、例えば、成熟トロンビンに結合するが、エキソサイトＩに変異を有するトロンビン、ガンマトロンビンまたはプロトロンビンに結合しない抗体を、抗エキソサイト１抗体分子として同定し得る。
生産および／または単離後、抗エキソサイト１抗体分子の生物学的活性を検査してもよい。例えば、抗体分子のトロンビン基質阻害能、トロンビンによる補因子または阻害因子の結合および／または切断を決定してもよく、および／または出血を促進することなく血栓を阻害する抗体分子の能力を決定してもよい。
好適な抗体分子を、フィブリノゲン凝血またはトロンビン時間アッセイを用いて活性について検査してもよい。好適なアッセイは、当該分野において周知である。
凝固および出血に対する抗体分子の効果は、標準的な技術を用いて決定し得る。例えば、血栓に対する抗体分子の効果は、血管中に塩化第二鉄誘導性血栓を有するマウスモデルなどの動物モデルにおいて決定し得る。止血への効果もまた、例えば、マウスの尾出血を測定することなどにより、動物モデルにおいて決定し得る。
抗体分子は、通常、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗原結合ドメインを含むが、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）のみを含む抗原結合ドメイン（例えば、ラクダ科動物またはサメの抗体）も可能である。
ＶＨおよびＶＬドメインの各々は、典型的に、フレームワーク領域により散在し、抗原結合に関与する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
いくつかの実施形態では、エキソサイト１への結合は、完全または実質的に抗エキソサイト１抗体分子のＶＨＣＤＲ３を介して起こり得る。
例えば、抗エキソサイト１抗体分子は、配列番号５のアミノ酸配列、あるいは配列番号５の配列に１つ以上、例えば２、３、４または５つまたはそれ以上のアミノ酸が置換、削除または挿入された配列を有するＨＣＤＲ３を含むＶＨドメインを含み得る。置換は、保存的置換であってもよい。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ３は、配列番号５の４位〜９位のアミノ酸残基（ＳＥＦＥＰＦ）を含み得る、あるいは、より好ましくは、配列番号５の２位、および４位〜１０位のアミノ酸残基（ＤおよびＳＥＦＥＰＦＳ）を含み、配列番号５のその他の位置の１つ以上が置換、削除または挿入され得る。ＨＣＤＲ３は、トロンビンエキソサイト１エピトープと相互作用する抗体分子の唯一の領域または実質的に唯一の領域であり得る。ＨＣＤＲ３は、したがって、トロンビンのエキソサイト１領域に対する抗体分子の特異性および／または親和性を決定し得る。
抗エキソサイト１抗体分子のＶＨドメインは、追加的に、配列番号４のアミノ酸配列、あるいは配列番号４の配列に１つ以上、例えば２、３、４または５つまたはそれ以上のアミノ酸が置換、削除または挿入された配列を有するＨＣＤＲ２を含み得る。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ２は、配列番号４の３位〜７位のアミノ酸残基（ＤＰＱＤＧ）を含み得る、あるいは、配列番号４の２位、および４位〜７位のアミノ酸残基（ＬおよびＰＱＤＧ）を含み、配列番号４のその他の位置の１つ以上が置換、削除または挿入され得る。
抗エキソサイト１抗体分子のＶＨドメインは、さらに、配列番号３のアミノ酸配列、あるいは配列番号３の配列に１つ以上、例えば２、３、４または５つまたはそれ以上のアミノ酸が置換、削除または挿入された配列を有するＨＣＤＲ１を含み得る。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１は、配列番号３の５位のアミノ酸残基Ｔを含み、配列番号３のその他の位置の１つ以上が置換、削除または挿入され得る。
いくつかの実施形態では、抗体分子は、それぞれ、配列番号３、４および５つの配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含むＶＨドメインを含み得る。例えば、抗体分子は、配列番号２の配列、あるいは配列番号２の配列に１つ以上、例えば２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれ以上のアミノ酸が置換、削除または挿入された配列を有するＶＨドメインを含み得る。
抗エキソサイト１抗体分子は、さらに、ＶＬドメイン、例えば、それぞれ配列番号７、８および９の配列、あるいは、それぞれ配列番号７、８および９の配列に、独立して１つ以上、例えば２、３、４または５つまたはそれ以上のアミノ酸が置換、削除または挿入された配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むＶＬドメインを含み得る。置換は、保存的置換であってもよい。例えば、抗体分子は、配列番号６の配列、あるいは配列番号６の配列に１つ以上、例えば２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれ以上のアミノ酸が置換、削除または挿入された配列を有するＶＬドメインを含み得る。
いくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、Ｔｙｒ４９を含み得る。
抗エキソサイト１抗体分子は、例えば、親和性、機能的半減期、正反応および逆反応速度（ｏｎ ａｎｄ ｏｆｆ ｒａｔｅｓ）といった抗体の１つ以上の特性を向上させる１つ以上のアミノ酸の置換、削除または挿入を含み得る。
ＣＤＲ、抗体ＶＨまたはＶＬドメイン、および抗体のアミノ酸配列内に置換、削除または挿入を導入するのに必要な技術は、当該分野で一般的に利用可能である。変異配列は、活性に対し最小限または有益な効果を有すると予測し得るまたはし得ない置換、削除または挿入により作製することができ、そしてトロンビンのエキソサイト１への結合能および／または他の任意の所望の特性についてについて検査してもよい。
いくつかの実施形態では、抗エキソサイト１抗体分子は、それぞれ、配列番号３、４および５の配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含むＶＨドメイン、ならびにそれぞれ配列番号７、８および９の配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むＶＬドメインを含み得る。
例えば、ＶＨおよびＶＬドメインは、それぞれ、配列番号２および配列番号６のアミノ酸配列を有してもよく；あるいは、配列番号２および配列番号６のアミノ酸配列に、独立して、１つ以上、例えば２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれ以上のアミノ酸が置換、削除または挿入された配列を有してもよい。置換は、保存的置換であってもよい。
いくつかの実施形態では、抗体は、グリコシル化部位を消去する１つ以上の置換、削除または挿入を含み得る。例えば、配列番号６のＶＬドメイン中のグリコシル化部位を、Ｎ２８またはＳ３０にいずれかの置換を導入する変異で消去してもよい。
抗エキソサイト１抗体分子は、上述したように、任意のフォーマットであってもよい。いくつかの好ましい実施形態では、抗エキソサイト１抗体分子は、完全抗体、例えば、ＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４等のＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥまたはＩｇＭであり得る。
本発明の抗エキソサイト１抗体分子は、上述の抗体分子、例えば、
（１）トロンビンエキソサイト１に結合し、そして
（２）配列番号２のＶＨドメインおよび／または配列番号６のＶＬドメイン；配列番号５のＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号３、４、７、８または９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、またはＬＣＤＲ３；それぞれ配列番号３、４および５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン；
および／またはそれぞれ配列番号３、４および５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３配列を含むＶＨドメインならびに配列番号７、８および９のＬＣＤＲ１、ＬＤＲ２およびＬＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含む抗体分子が、エキソサイト１へ結合するのを競合するものであってもよい。
（１）トロンビンエキソサイト１に結合し、そして
（２）配列番号２のＶＨドメインおよび／または配列番号６のＶＬドメイン；配列番号５のＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号３、４、７、８または９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、またはＬＣＤＲ３；それぞれ配列番号３、４および５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン；
および／またはそれぞれ配列番号３、４および５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３配列を含むＶＨドメインならびに配列番号７、８および９のＬＣＤＲ１、ＬＤＲ２およびＬＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含む抗体分子が、エキソサイト１へ結合するのを競合するものであってもよい。
抗体分子間の競合は、例えば、ＥＬＩＳＡを用いて、および／または、１つ以上の他のタグなしの抗体分子の存在下で検出可能な１つの抗体分子に特異的なレポーター分子をタグ付けすることによって、インビトロで容易にアッセイすることができ、同じエピトープまたは重複するエピトープに結合する抗体分子の同定が可能になる。このような方法は、当業者に容易に公知である。従って、本発明のさらなる態様は、抗体分子、例えば、ＶＨおよび／またはＶＬドメイン、ＨＣＤＲ３もしくはトロンビンのエキソサイト１に結合する上述の親抗体のＣＤＲセット等のＣＤＲを含む抗体分子、と競合する抗体抗原結合部位を含む抗体分子を提供する。好適な抗体分子は、エキソサイト１へ結合する抗体抗原結合部位と競合する抗原結合部位を含み得る、ここで当該抗体抗原結合部位は、ＶＨドメインおよびＶＬドメインから構成され、ここで、当該ＶＨおよびＶＬドメインは、それぞれ配列番号３、４、および５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３配列ならびに配列番号７、８、および９のＬＣＤＲ１、ＬＤＲ２およびＬＣＤＲ３配列を含む、例えば、配列番号２および６のＶＨおよびＶＬドメインである。
本明細書に記載の抗エキソサイト１抗体分子は、エキソサイト１に結合する因子等のトロンビン結合因子の結合を阻害し得る。例えば、抗体分子は、ｆＶ、ｆＶＩＩＩ、トロンボモジュリン、フィブリノゲンもしくはフィブリン、ＰＡＲ１および／またはヒルゲンおよびヒルゲンアナログの１つ以上がトロンビンへ結合するのを競合的または非競合的に阻害し得る。
本明細書に記載の抗エキソサイト１抗体分子は、トロンビンの１つ以上の活性を阻害し得る。例えば、抗エキソサイト１抗体分子は、１つ以上のトロンビン基質、例えばフィブリノゲン、血小板受容体ＰＡＲ−１および凝固因子ＦＶＩＩＩの加水分解による切断を阻害し得る。例えば、抗体分子がトロンビンに結合すると、フィブリノゲン、ＰＡＲ−１、凝固因子ＦＶＩＩＩおよび／または他のトロンビン基質、例えば第Ｖ因子、フィブリン存在下における第ＸＩＩＩ因子、プロテインＣおよび／またはトロンボモジュリン存在下におけるＴＡＦＩ、の加水分解が少なくとも５倍、少なくとも１０倍、または少なくとも１５倍減少するという結果となり得る。いくつかの実施形態では、抗エキソサイト１抗体分子がトロンビンに結合すると、トロンビンによるトロンビン基質の切断が検知不能になるという結果になり得る。
例えば、インビトロでトロンビン基質の加水分解を測定することによってトロンビン活性を測定するための技術は、当該分野において標準的なもので、本明細書に記載される。
抗エキソサイト１抗体分子は、さらに、例えば、ＰＥＧ化等の化学修飾、または、例えば、インビボでの半減期を伸ばす等により医薬的特性を改善するためのリポソームへの組み込みにより修飾してもよい。
凝固および出血に対する抗エキソサイト１抗体分子の効果は、標準的な技術を用いて決定し得る。例えば、血栓モデルに対する抗体の効果を決定し得る。好適なモデルとしては、マウスモデルの血管において塩化第二鉄血栓を誘導し、その後尾部出血させ正常な止血を検査したものが挙げられる。他の好適な血栓モデルが、当該分野で周知である（例えば、Ｗｅｓｔｒｉｃｋ ｅｔ ａｌ ＡＴＶＢ（２００７）２７：２０７９−２０９３参照）。
抗エキソサイト１抗体分子は、医薬的に許容される賦形剤を有する医薬組成物中に含まれていてもよい。
医薬的に許容される賦形剤は、二次反応を誘発せず、そして、例えば、抗エキソサイト１抗体分子の投与、当該分子の寿命および／または身体における有効性の増加、あるいは溶液中における当該分子の溶解を容易にできるようにする医薬組成物中へ入る化合物または化合物の組み合わせであってもよい。これらの医薬的に許容されるビヒクルは周知であり、当業者は、抗エキソサイト１抗体分子の投与様式に応じて、適宜変更するであろう。
いくつかの実施形態では、抗エキソサイト１抗体分子は、投与前に再構成するための凍結乾燥した形態で提供してもよい。例えば、凍結乾燥した抗体分子を、滅菌水中で再構成し、個体への投与前に生理食塩水と混合してもよい。
抗エキソサイト１抗体分子は、通常、抗体分子に加え、少なくとも１つの成分を含み得る医薬組成物の形態で投与されるであろう。したがって医薬組成物は、抗エキソサイト１抗体分子に加え、医薬的に許容される賦形剤、担体、緩衝剤、安定剤または当業者に周知の他の材料を含んでもよい。このような材料は、非毒性であるべきで、そして抗エキソサイト１抗体分子の効力を妨げるものであってはならない。担体またはその他の物質の正確な性質は、以下に説明するように、ボーラス、点滴、注射または他の任意の適切な経路であり得る投与経路に依存するだろう。
非経口、例えば注射による皮下または静脈内投与では、抗エキソサイト１抗体分子を含む医薬組成物は、発熱物質を含まず、適切なｐＨ、等張性および安定性を有する非経口的に許容される水溶液の形態であってもよい。当該分野における関連技術の当業者は、例えば、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、乳酸リンゲル注射液などの等張性ビヒクルを用いて、適切な溶液を上手く調製できる。保存剤、安定剤、緩衝剤、抗酸化剤および／または他の添加剤を必要に応じて採用してもよく、例えば、かかる添加剤には、以下のものが挙げられる：リン酸塩、クエン酸塩および他の有機酸；アスコルビン酸およびメチオニン等の抗酸化剤；（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３’−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）等の防腐剤；低分子量ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチンもしくは免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリシン等のアミノ酸；グルコース、マンノースもしくはデキストリンを含む単糖類、二糖類および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトール等の糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；および／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤。
抗エキソサイト１抗体分子を含む医薬組成物は、治療すべき状態により、単独で、あるいは、同時または逐次的に他の療法と組み合わせて投与できる。
本明細書に記載の抗エキソサイト１抗体分子は、予防または防止のため（例えば、個体における症状の発症前にその個体での発症リスク低減するため；発症を遅延するため；または発症後その重症度を軽減するため）の治療を含む、ヒトまたは動物の治療方法において使用することができる。その治療方法は、治療を必要とする個体に抗エキソサイト１抗体分子を投与することを含んでもよい。
投与は、通常「治療的有効量」で行われ、これは、患者が恩恵を受けるのに十分な量ということである。そのような恩恵は少なくとも１つの症状についての少なくとも改善であってもよい。実際の投与量、ならびに投与の速度および時間経過は、治療する症状の性質および重症度、治療する特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、組成物の送達部位、投与方法、投与スケジュール、および医師に公知の他の要因に依存するであろう。治療の処方、例えば投与量の決定等、は、一般開業医および他の医師の責任の範囲内にあり、症状の重症度および／または治療する疾患の進行度に依存し得る。抗体分子の適切な用量は、当該分野で周知である（Ｌｅｄｅｒｍａｎｎ Ｊ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ４７：６５９−６６４；Ｂａｇｓｈａｗｅ Ｋ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ａｎｔｉｂｏｄｙ，Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ａｎｄ Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ４：９１５−９２２）。具体的な投与量は、投与する薬剤の種類に適切なものとして、本明細書またはＰｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（２００３）に示される。抗体分子の治療的有効量または適切な用量は、動物モデルにおけるインビトロ活性およびインビボ活性を比較することにより、決定できる。マウスおよび他の試験動物における有効投与量をヒト用に推定する方法は公知である。正確な用量は、抗体が予防用であるかまたは治療用であるか、治療すべき領域のサイズおよび位置、抗体の正確な性質（例えば、抗体の全体であるか断片であるか等）、ならびに任意の検出可能な標識または抗体に結合した他の分子を含む多くの要因に依存するであろう。
典型的な抗体の用量は、全身投与では１００μｇ〜１ｇ、そして局所投与では１μｇ〜１ｍｇの範囲内であるだろう。初期に高い負荷の用量を投与し、それに続いて１つ以上の低い用量を投与してもよい。典型的には、抗体は、例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプといった完全抗体となるだろう。これは、成人患者の一回の治療用の用量であり、これを、子供や乳幼児用に比例的に調整してもよく、そして、分子量に比例して他の抗体の構成に合わせて調整してもよい。治療は、医師の裁量で、毎日、週２回、毎週または毎月の間隔で繰り返すことができる。個々の治療スケジュールは、抗体組成物の薬物動態的および薬力学的性質、投与経路および治療する症状の性質に依存し得る。
治療は定期的であってもよく、投与の間隔は、約２週間以上、例えば約３週間以上、約４週間以上、約１月に１回以上、約５週間以上、または約６週間以上であってもよい。例えば、治療は２〜４週間毎又は４〜８週間毎であってもよい。治療は、手術前および／または手術後に行ってもよく、そして／あるいは外科的処置または侵襲的手技の解剖部位に直接投与または塗布してもよい。好適な製剤及び投与経路は、上記に記載の通りである。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗エキソサイト１抗体分子は、皮下注射として投与してもよい。皮下注射は、例えば、長期的な予防／治療に、自動注射器を用いて投与してもよい。
いくつかの好ましい実施形態では、抗エキソサイト１抗体分子の治療効果は、用量に応じ、いくつかの半減期にわたり持続し得る。例えば、抗エキソサイト１抗体分子の単回投与の治療効果は、ある個体において、１ヶ月以上、２ヶ月以上、３ヶ月以上、４ヶ月以上、５ヶ月以上、または６ヶ月以上、持続し得る。
本明細書に記載の抗エキソサイト１抗体分子は、トロンビンを阻害し、トロンビン介在性の状態の治療に有用であり得る。
止血（Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ）は、正常な凝固反応である、すなわち、例えば損傷した血管からの出血または大出血を防ぐものである。止血は、体内の血管からの出血または大出血を止めるものである。
抗エキソサイト１抗体分子は、止血に対し影響がないまたは実質的に影響がない、すなわち、出血または大出血を促進しない。
本発明の態様は：ヒトまたは動物の治療方法において使用するための、本明細書に記載の抗エキソサイト１抗体分子；トロンビン介在性の障害の治療方法に使用するための、本明細書に記載の抗エキソサイト１抗体分子；トロンビン介在性の状態の治療用の医薬の製造における、本明細書に記載の抗エキソサイト１抗体分子の使用；およびトロンビン介在性の状態の治療を必要とする個体に、本明細書に記載の抗エキソサイト１抗体分子を投与することを含む、トロンビン介在性の状態の治療方法を提供する。
本明細書に記載の抗エキソサイト１抗体によるトロンビンの阻害は、任意のトロンビン介在性の状態の治療において、臨床上有益であり得る。トロンビン介在性の状態には、トロンビンの形成または活性に関連する障害が含まれる。
トロンビンは、止血、凝固および血栓において重要な役割を果たしている。トロンビン介在性の状態には、血栓症や塞栓症などの血栓性の状態が含まれる。
血栓は、止血に必要な範囲を超えた過剰な凝固（すなわち、過剰凝固）、または止血に不要な凝固（すなわち、余分に止血性または非止血性の凝固）である。
血栓は、血管腔内の血液の凝固である。これは、止血に必要な範囲を超えているかまたは止血に不要な血塊（血栓）を形成するという特徴を有する。この血塊は、血管を通る血液の流れを妨げることがあり、医学的合併症につながることがある。血塊は、破砕して形成された場所から離れることがあり、それが循環器系の別の場所における塞栓につながることがある。動脈系において、血栓は、典型的には、動脈硬化性プラークの破裂の結果である。
いくつかの実施形態では、血栓は、初期の生理学的止血性応答、例えば、血管内の内皮細胞の損傷、の後に生じることがある。他の実施形態では、血栓は、いずれかの生理学的止血性応答の非存在下で生じることがある。
血栓は、内因性の血栓症傾向（すなわち、栓友病）を有する個体で生じることがあり、または、内因性の血栓症傾向を有さない「正常な」個体で、例えば、外因性の刺激に応答して生じることがある。
血栓および塞栓は、循環系内の静脈、動脈またはその他の血管内のいずれかに生じることがあり、微小血管の血栓を含み得る。
血栓および塞栓は、外科手術（手術中またはその後のいずれか）、あるいは、患者内への冠動脈ステントなどの異物の挿入に関連することもある。
例えば、本明細書に記載の抗エキソサイト１抗体は、血液が人工物の表面に露出する心臓切開手術や透析などの外科手術および他の処置において有用なことがある。
血栓性の状態には、栓友病、血栓性脳卒中および冠状動脈閉塞が挙げられる。
本明細書に記載の治療に適する患者には、血栓症が症状もしくは治療の副作用である状態、または血栓のリスクを増加させる状態にある患者、あるいは一般集団に比べて血栓のリスクが増加しそうなまたは増加している患者が挙げられる。例えば、本明細書に記載の抗エキソサイト１抗体分子は、癌患者における静脈血栓症の治療または予防、および院内血栓症の治療または予防に有用なこともあり、院内血栓症は、静脈血栓塞栓症の症例の５０％の原因である。
本明細書に記載の抗エキソサイト１抗体分子は、実質的に止血を阻害または妨げることなく、血栓性の状態などのトロンビン介在性の状態に対し治療的またはその他の有益な効果を発揮し得る。例えば、抗エキソサイト１抗体分子で処理した患者における大出血のリスクが、未治療の個体に比べ増加または実質的に増加し得ない。
天然および合成ヘパリン、ワルファリン、直接的なセリンプロテアーゼ阻害剤（例えば、アルガトロバン、ダビガトラン、アピキサバン、およびリバロキサバン）、ヒルジンおよびその誘導体（例えば、レピルジンおよびビバリルジン）、ならびに抗血小板剤（例えばクロピドグレル、チクロピジンおよびアブシキシマブ）などの従来の抗凝固剤で処理した個体では出血が引き起こされる。本明細書に記載の抗エキソサイト１抗体分子で処理した患者における出血のリスクは、従来の抗凝固剤で処理した個体に比べ減少し得る。
トロンビン介在性の状態には、炎症、感染症、腫瘍の増殖および転移、臓器拒絶反応ならびに認知症（血管性および非血管性、例えば、アルツハイマー病）を含む、トロンビン活性に関連する非血栓性の状態を含む（Ｌｉｃａｒｉ ｅｔ ａｌ Ｊ Ｖｅｔ Ｅｍｅｒｇ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ（Ｓａｎ Ａｎｔｏｎｉｏ）．２００９ Ｆｅｂ；１９（１）：１１−２２；Ｔｓｏｐａｎｏｇｌｏｕ ｅｔ ａｌ Ｅｕｒ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｎｅｔｗ．２００９ Ｄｅｃ１；２０（４）：１７１−９）。
本明細書に記載の抗エキソサイト１抗体分子はまた、インビトロ試験、例えば、患者から得た試料における凝固の分析および特徴付け、において有用なこともある。
抗エキソサイト１抗体分子は、トロンビン生成の測定に有用なことがある。トロンビン生成の分析は、フィブリノゲンからフィブリンに変換すると濁りが生じ、簡単に発色のエンドポイントが利用できなくなるので、技術的に問題がある。
本明細書に記載の抗エキソサイト１抗体分子を血液試料に添加すると、フィブリン形成そして濁りを防止または阻害するので、脱フィブリン化工程を必要とせずに、発色基質を用いてトロンビン生成を測定できる。
例えば、トロンビン生成を測定する方法は、本明細書に記載の抗エキソサイト抗体１分子の存在下で、血液試料を発色性トロンビン基質に接触させ、この基質からの発色性シグナルを測定することを含んでもよく；ここで、発色性シグナルが、試料中のトロンビン生成の指標であってよい。
発色性シグナルは、試料の脱フィブリン化をせずに直接測定できる。
好適な基質は、当該分野で周知であり、Ｓ２２３８（Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｉｐ−Ａｒｇ−ｐＮａ）、β−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐ−ニトロアニリド二酢酸（Ｐｒａｓａ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．７８、１２１５；Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ Ｉｎｃ）およびＴｏｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ｐＮａ．ＡｃＯＨ（Ｂｉｏｐｈｅｎ ＣＳ−０１（８１）；Ａｎｉａｒａ Ｉｎｃ ＯＨ ＵＳＡ）が挙げられる。
抗エキソサイト１抗体分子はまた、血液透析および体外膜型酸素供給などの体外循環において、上記のように血液の凝固を阻害または予防する上で有用なこともある。
例えば、インビトロまたはエクスビボでの血液凝固を阻害または予防する方法は、血液試料に本明細書に記載の抗エキソサイト１抗体分子を導入することを含み得る。血液試料は、抗エキソサイト１抗体を導入する前、同時、または後で、体外循環系に導入してもよく、そして、場合により、血液透析または酸素供給等の処理を施してもよい。いくつかの実施形態では、処理した血液を、その後個体に投与してもよい。他の実施形態は、エクスビボでの血液試料中の血液凝固を阻害または予防する方法に使用するための本明細書に記載の抗エキソサイト１抗体分子、ならびに、エクスビボでの血液試料中の血液凝固を阻害または予防する方法において使用するための医薬の製造における本明細書に記載の抗エキソサイト１抗体分子の使用を提供する。
本発明の他の態様は、トロンビンのエキソサイト１エピトープに結合し、例えば、病的な血液凝固または血栓の治療において有用であり得る抗体分子の製造に関する。
トロンビンのエキソサイト１エピトープに対する抗体抗原結合ドメインを製造する方法は；
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む親ＶＨドメインのアミノ酸配列中に１つ以上のアミノ酸を付加、削除、置換または挿入することにより、親ＶＨドメインのアミノ酸配列変異体であるＶＨドメインを設け、ここで、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３はそれぞれ配列番号３、４および５のアミノ酸配列を有し；そして
場合により、このようにして設けたＶＨドメインを、１つ以上のＶＬドメインと結合して１つ以上のＶＨ／ＶＬの組み合わせを設け；そして
親ＶＨドメインのアミノ酸配列変異体である前記ＶＨドメインまたは１つもしくは複数のＶＨ／ＶＬの組み合わせを検査して、トロンビンのエキソサイト１エピトープに対する抗体抗原結合ドメインを同定する、
ことを含んでもよい。
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む親ＶＨドメインのアミノ酸配列中に１つ以上のアミノ酸を付加、削除、置換または挿入することにより、親ＶＨドメインのアミノ酸配列変異体であるＶＨドメインを設け、ここで、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３はそれぞれ配列番号３、４および５のアミノ酸配列を有し；そして
場合により、このようにして設けたＶＨドメインを、１つ以上のＶＬドメインと結合して１つ以上のＶＨ／ＶＬの組み合わせを設け；そして
親ＶＨドメインのアミノ酸配列変異体である前記ＶＨドメインまたは１つもしくは複数のＶＨ／ＶＬの組み合わせを検査して、トロンビンのエキソサイト１エピトープに対する抗体抗原結合ドメインを同定する、
ことを含んでもよい。
親ＶＨドメインのアミノ酸配列変異体であるＶＨドメインは、配列番号５のＨＣＤＲ３配列、あるいは１、２、３つまたはそれ以上のアミノ酸が付加、削除、置換または挿入された変異を有し得る。
親ＶＨドメインのアミノ酸配列変異体であるＶＨドメインは、それぞれ配列番号３および４のＨＣＤＲ１およびＨＣＤＲ２配列、あるいは１、２、３つまたはそれ以上のアミノ酸が付加、削除、置換または挿入された変異を有し得る。
トロンビンのエキソサイト１エピトープに特異的に結合する抗体分子を製造する方法は；
ＶＨドメインをコードする出発核酸または各々がＶＨドメインをコードする核酸の出発レパートリーを設け、ここで、１つまたは複数のＶＨドメインは、置換されるべきＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２および／またはＨＣＤＲ３を含むか、あるいはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２および／またはＨＣＤＲ３コード領域を欠くかのいずれかであり；
前記出発核酸または出発レパートリーを、それぞれ配列番号３、４および５のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、および／またはＨＣＤＲ３のアミノ酸配列の変異をコードするかまたは当該変異により生産した１つまたは複数の供与核酸に結合して、前記１つまたは複数の供与核酸が出発核酸または出発レパートリーのＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３領域に挿入されるようにすることで、ＶＨドメインをコードする核酸の生成レパートリーを設け；
前記生成レパートリーの核酸を発現させて生成ＶＨドメインを生産し；
場合により、前記生成ＶＨドメインを１つ以上のＶＬドメインと結合し；
トロンビンのエキソサイト１に結合する抗体分子であって、生成ＶＨドメインそして場合によりＶＬドメインを含む抗体分子を選択し；そして
前記抗体分子またはそれをコードする核酸を回収する、
ことを含んでもよい。
ＶＨドメインをコードする出発核酸または各々がＶＨドメインをコードする核酸の出発レパートリーを設け、ここで、１つまたは複数のＶＨドメインは、置換されるべきＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２および／またはＨＣＤＲ３を含むか、あるいはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２および／またはＨＣＤＲ３コード領域を欠くかのいずれかであり；
前記出発核酸または出発レパートリーを、それぞれ配列番号３、４および５のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、および／またはＨＣＤＲ３のアミノ酸配列の変異をコードするかまたは当該変異により生産した１つまたは複数の供与核酸に結合して、前記１つまたは複数の供与核酸が出発核酸または出発レパートリーのＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３領域に挿入されるようにすることで、ＶＨドメインをコードする核酸の生成レパートリーを設け；
前記生成レパートリーの核酸を発現させて生成ＶＨドメインを生産し；
場合により、前記生成ＶＨドメインを１つ以上のＶＬドメインと結合し；
トロンビンのエキソサイト１に結合する抗体分子であって、生成ＶＨドメインそして場合によりＶＬドメインを含む抗体分子を選択し；そして
前記抗体分子またはそれをコードする核酸を回収する、
ことを含んでもよい。
抗体分子の成熟および最適化のための適切な技術は、当該分野において周知である。
上述したように、トロンビンのエキソサイト１エピトープに対する抗体抗原結合ドメインおよび抗体分子を検査してもよい。例えば、トロンビンへの結合および／またはトロンビン基質の切断を阻害する能力を決定してもよい。
凝固および出血に対する抗体分子の効果は、標準的な技術を用いて決定してもよい。例えば、大腿静脈または頚動脈などの血管内に塩化第二鉄により血塊を誘導し、その後尾を出血させ正常な止血があるかを検査したマウス血栓症モデルを用いてもよい。
本発明の種々のさらなる態様および実施形態は、本開示を考慮することで当業者には明らかであろう。
本明細書で言及する全ての文書は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
特に明記しない限り、本明細書において抗体残基はカバットナンバリングスキーム（Ｋａｂａｔ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｓｃｈｅｍｅ）に従ってナンバリングされている。
本明細書で使用する場合、「および／または」は、２つの指定された特徴または成分の各々について、もう一方があるまたはない場合の具体的な開示として解釈すべきである。例えば、「Ａおよび／またはＢ」は、（ｉ）Ａ、（ｉｉ）Ｂそして（ｉｉｉ）ＡおよびＢの各々についてあたかもそれぞれが個別で本明細書に記載されているかのような具体的な開示として解釈すべきである。
文脈が指示しない限り、上述の特徴についての記載および定義は、本発明の特定の態様または実施形態に限定されるものではなく、記載されるすべての態様および実施形態に等しく適用される。このように、上述の特徴は、すべての組み合わせおよび置換について開示される。
本発明の特定の態様および実施形態を、図および表を参照しながら例として説明する。
１．抗体の単離および特徴付け
凝固スクリーニングを、患者の血漿試料について行った。凝固検査は、頭部損傷後の硬膜下血腫を負った患者で実施した。血腫は、介入なしに自然消失した。出血について過去の病歴はなく、患者が血腫を示してからの４年間、それ以外の出血エピソードはなかった。結果を表１に示す。
凝固スクリーニングを、患者の血漿試料について行った。凝固検査は、頭部損傷後の硬膜下血腫を負った患者で実施した。血腫は、介入なしに自然消失した。出血について過去の病歴はなく、患者が血腫を示してからの４年間、それ以外の出血エピソードはなかった。結果を表１に示す。
この患者のプロトロンビン時間（ＰＴ）、活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）、およびトロンビン時間（ＴＴ）は全て、対照と比較して長かったが、レプチラーゼ時間は正常であった。
トロンビン時間は、ヘパリナーゼにより補正されなかったので、ヘパリン治療または汚染の関与はなかったことが示唆される。この患者のフィブリノゲンレベルは、ＥＬＩＳＡおよびレプチラーゼアッセイによると正常であった。クラウスアッセイでは、フィブリノゲンレベルがこのトロンビン阻害剤の存在により人為的に低かった。ＰＴおよびＡＰＴＴ凝固時間は、正常な個体からプールした血漿との５０：５０混合物を用いた混合検査でも、長いままであることが分かった。このことより、患者の試料中に阻害因子が存在することを示唆された。
患者の血漿は、高いＩｇＡ力価を有することが分かった。このＩｇＡ分子は、ヒトトロンビンカラムに結合することが分かった（図１）。トロンビンは、レクチンアガロースに結合したＩｇＡの存在下ではプルダウンされていれたが、ＩｇＡの非存在下ではそうではなかった。プロトロンビンは、ＩｇＡの存在下でもプルダウンされなかったので、このＩｇＡは、プロトロンビンではなく、トロンビンに特異的に結合することが示唆された（図２）。
次いで、トロンビン分子上のＩｇＡの結合部位を調べた。
ＩｇＡの存在下ではトロンビンによるＳ２２３８の切断速度がわずかに高くなったことが測定され、よってＩｇＡはトロンビンの活性部位をブロックしないことが示唆された（図３）。
トロンビンへの蛍光標識ヒルゲンの結合が７００ｎＭ ＩｇＡの存在により阻害され、これにより抗体に対するエピトープは、トロンビン、すなわち、トロンビンのエキソサイト１上のヒルゲンの結合部位と重なることが示唆された（図４）。
いくつかのトロンビンの凝固促進基質の加水分解に対するＩｇＡの効果を検査した。結果を表２に示す。これらの結果は、患者試料から単離されたＩｇＡ分子は、トロンビンの複数の凝固促進活性を阻害することを実証する。
ＩｇＡの存在下におけるアンチトロンビン（ＡＴ）によるトロンビンの阻害は、ヘパリンの非存在下および存在下の両方でほんのわずか影響された（表３）。
トロンビンに対するＩｇＡの解離定数（Ｋd）を、Ｓ２２３８の加水分解の速度に基づいて最初に推定したところ、約１２ｎＭであった（図５）。Ｓ１９５Ａトロンビン（触媒セリンの変異により不活化されたもの）へのＩｇＡの結合についてのＫdは、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔを用いて、２ｎＭであると決定された（表４）。
精製したＩｇＡをパパインで切断し（図６）、Ｆａｂ断片を単離し、ヒトＰＰＡＣＫ−トロンビン（ＰＰＡＣＫは共有結合性の活性部位阻害剤である）と結合させた。ヒトＰＰＡＣＫ−トロンビン−ＦＡＢ複合体を結晶化し、構造解析に用いた。得られた構造の統計は以下のようであった：解像度は１．９Å；Ｒ因子＝１９．４３％；Ｒｆｒｅｅ＝２３．４２％；非対称単位中に１つの複合体；ラマチャンドラン：好適値（ｆａｖｏｕｒｅｄ）＝９７．０％、外れ値（ｏｕｔｌｉｅｒｓ）＝０％。結晶構造により、ＩｇＡ ＦａｂのＨＣＤＲ３とトロンビンのエキソサイト１との間で密接に関連していることが明らかになった（図７）。
特に、エキソサイト１の残基Ｍ３２、Ｆ３４、Ｑ３８、Ｅ３９、Ｌ４０、Ｌ６５、Ｒ６７、Ｒ７３、Ｔ７４、Ｒ７５、Ｙ７６、Ｒ７７ａおよびＩ８２は全て直接ＩｇＡ ＦａｂのＨＣＤＲ３ループと相互作用する（図８）。
抗体−トロンビン界面のＰＩＳＡ分析により、複合体中の全埋没表面積が１０７５Å2であることが示された。ＩｇＡ重鎖中の接触残基は、（カバットナンバリングで）：３０、５１、５２ａ、５３−５５、９６、９８、９９、１００、１００ａ、１００ｂ、１００ｃ、１００ｄであった。これらは全てＣＤＲ：ＣＤＲＨ１−ＧＹＴＬＴＥＡＡＩＨ；ＣＤＲＨ２−ＧＬＤＰＱＤＧＥＴＶＹＡＱＱＦＫＧ；ＣＤＲＨ３−ＧＤＦＳＥＦＥＰＦＳＭＤＹＦＨＦ中にあった（下線を付した残基が接触している）。ＣＤＲＨ３は、抗体上の埋没表面積の８５％を示し、最も重要であることが分かった。軽鎖は、周辺部の一か所で、ＣＤＲＬ２の直前のＴｙｒ４９（トロンビンのＳｅｒ３６ａ）と接触していた。埋没表面をもたらしたいくつかの貢献要素は、それぞれ：Ｇｌｕ９９ ５４Å2、Ｐｈｅ１００ １３４．８Å2、Ｇｌｕ１００ａ ８０．６Å2、Ｐｈｅ１００ｃ １４１．７Å2であった。
トロンビンにおける接触残基は、（キモトリプシンナンバリングで）：３２、３４、３６ａ−４０、６５、６７、７３−７６、７７ａ、８２、および１５１あることが分かった。埋没表面をもたらした最も重要な貢献要素は、それぞれ：Ｇｌｎ３８ ８６．４Å2、Ａｒｇ７３ ４４．５Å2、Ｔｈｒ７４ ６０．１Å2、Ｔｙｒ７６ ７８．４Å2、Ａｒｇ７７ａ ８６．９Å2であった。
患者は、このＩｇＡの循環レベルが３ｇ／ｌであるにもかかわらず、増加または異常な出血または大出血を示さなかったので、この抗体が正常な止血に影響を与えずにトロンビンを阻害することが実証された。
２．動物血栓症モデルに対するＩｇＡの効果
Ｃ５７ＢＬ／６マウスを麻酔した。（化合物を注入するため）カテーテルを頸動脈に挿入した。ＦＩＴＣ標識したフィブリノゲン（２ｍｇ／ｍｌ）を頸動脈から注入した。ＰＢＳ（対照）またはＩｇＡも、頸動脈から注射した。大腿静脈を露出し、凝血を誘導するために３分間１０％ＦｅＣｌ3（飽和させた長さ３ｍｍの吸い取り紙）を付した。
Ｃ５７ＢＬ／６マウスを麻酔した。（化合物を注入するため）カテーテルを頸動脈に挿入した。ＦＩＴＣ標識したフィブリノゲン（２ｍｇ／ｍｌ）を頸動脈から注入した。ＰＢＳ（対照）またはＩｇＡも、頸動脈から注射した。大腿静脈を露出し、凝血を誘導するために３分間１０％ＦｅＣｌ3（飽和させた長さ３ｍｍの吸い取り紙）を付した。
蛍光顕微鏡技術を用いて、ＦｅＣｌ3による損傷から０、５、１０、および２０分後に、損傷部位の長さ方向に沿って蛍光顕微鏡画像を撮影した。
大腿静脈中の血塊（フィブリン沈着）は、明るい部分としてはっきりと視認できた（図９）。最低用量の抗体でも凝血の有意な阻害を引き起こすことが観察されたが、用量が増加するにつれて、凝血が減少した。（図１０〜１５）。
マウスの出血時間も測定した。出血時間は、尾の切断から血流の停止までの時間として評価した。１つ外れ値の試料があったにもかかわらず、出血時間は抗エキソサイト１ＩｇＡの処理によって影響を受けないことがわかった（図１６）。
これらの結果により、抗エキソサイト１ＩｇＡ抗体は、血栓の強力な阻害因子であるが、出血時間には影響を及ぼさないことが示される。
３．尾クリップ（Ｔａｉｌ ｃｌｉｐ）アッセイ
尾クリップアッセイを、４００ｎＭのＩｇＡ（血中最終濃度、約６ｍｇ／Ｋｇの用量に相当）またはＰＢＳのいずれかを注射した野生型Ｃ５７ＢＬ／６雄マウスで行った。注射から１５分後に尾を直径３ｍｍで切断し、その後１０分にわたり失血をモニターした。総失血は、抗エキソサイト１ＩｇＡによる処理によって影響を受けないことが分かった（図１７）。
尾クリップアッセイを、４００ｎＭのＩｇＡ（血中最終濃度、約６ｍｇ／Ｋｇの用量に相当）またはＰＢＳのいずれかを注射した野生型Ｃ５７ＢＬ／６雄マウスで行った。注射から１５分後に尾を直径３ｍｍで切断し、その後１０分にわたり失血をモニターした。総失血は、抗エキソサイト１ＩｇＡによる処理によって影響を受けないことが分かった（図１７）。
４．ＦｅＣｌ 3 損傷性頸動脈閉塞
ＦｅＣｌ3損傷性頸動脈閉塞試験を、９週齢の野生型Ｃ５７ＢＬ／６雄マウスで実施した。マウスは、５％ＦｅＣｌ3による損傷の１５分前に、４００ｎＭ抗ＩＩａ型ＩｇＡ（血中最終濃度、約６ｍｇ／Ｋｇの用量に相当）またはＰＢＳを２分間注射した。その後、血流をドップラーによりモニターし、閉塞までの時間を計測した。「血塊」は、血流が典型的には０．１ｍｌ／ｍｉｎ未満の値に減少し、そして減少したままであるという安定した閉塞性血栓であると定義した。対照マウスでは、安定した血塊が、損傷後約２０分で形成されることが観察された（図１８Ａ）。しかし、４００ｎＭ抗ＩＩａ型ＩｇＡで処理したマウスの大多数は、安定した血塊を形成できず、血塊は速やかに溶解し、繰り返し溶解するか、または全く形成されなかったというトレース（ｔｒａｃｅ）を示した。３つの代表的なトレースを、図１８Ｂ〜１８Ｄに示す。
ＦｅＣｌ3損傷性頸動脈閉塞試験を、９週齢の野生型Ｃ５７ＢＬ／６雄マウスで実施した。マウスは、５％ＦｅＣｌ3による損傷の１５分前に、４００ｎＭ抗ＩＩａ型ＩｇＡ（血中最終濃度、約６ｍｇ／Ｋｇの用量に相当）またはＰＢＳを２分間注射した。その後、血流をドップラーによりモニターし、閉塞までの時間を計測した。「血塊」は、血流が典型的には０．１ｍｌ／ｍｉｎ未満の値に減少し、そして減少したままであるという安定した閉塞性血栓であると定義した。対照マウスでは、安定した血塊が、損傷後約２０分で形成されることが観察された（図１８Ａ）。しかし、４００ｎＭ抗ＩＩａ型ＩｇＡで処理したマウスの大多数は、安定した血塊を形成できず、血塊は速やかに溶解し、繰り返し溶解するか、または全く形成されなかったというトレース（ｔｒａｃｅ）を示した。３つの代表的なトレースを、図１８Ｂ〜１８Ｄに示す。
５．抗エキソサイト１ＩｇＧ
前述の患者において同定したＩｇＡ分子を、標準的な技術を用いてＩｇＧとして再構成（ｒｅ−ｆｏｒｍａｔｔｅｄ）した。
前述の患者において同定したＩｇＡ分子を、標準的な技術を用いてＩｇＧとして再構成（ｒｅ−ｆｏｒｍａｔｔｅｄ）した。
２０ｎＭまでヒトトロンビンを添加した上で、もとのＩｇＡおよび新たなＩｇＧの量を増加させながら加えたプールしたヒト血漿の凝固時間を検査した（図１９）。親ＩｇＡおよび合成ＩｇＧの両者は、同一の濃度依存性をもって血塊形成までの時間が増加したので、トロンビンへの親和性が同一であることが示唆された。
これは、ＦｏｒｔｅＢｉｏ（商標）Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔを用いて固定化Ｓ１９５Ａトロンビンへの合成ＩｇＧの結合を測定することにより確認した。トロンビンを、プローブに結合させ、（様々な濃度における）抗体の結合をモニターした。正反応速度（ｏｎ−ｒａｔｅｓ）および逆反応速度（ｏｆｆ−ｒａｔｅｓ）を決定した。両方の抗体は、約３×１０5Ｍ-1ｓ-1の正反応速度、約５×１０-4ｓ-1の逆反応速度、および約２ｎＭの解離定数（Ｋｄ）という似たような値を示した。約２ｎＭという解離定数（Ｋｄ）は、定常解析によるＩｇＡおよびＩｇＧについても得られた（表４）。代表的な定常曲線を、図２０に示す。したがって、ＩｇＡの特性がＩｇＧの構造で再現された。
ＩｇＧ抗体へのプロトロンビンの結合を、オクテットシステムを用いてＩｇＧを固定化して検査した。トロンビンは、固定化トロンビンを用いて得られたものと同等の速度および親和性で固定化ＩｇＧに結合したが（表４）；プロトロンビンは、ＩｇＧに結合しなかった。図２１は、固定化ＩｇＧに結合し解離する２４ｎＭトロンビンのトレースである。図２２は、５００ｎＭプロトロンビンを使用した同様の実験であり、結合した証拠がみられない。
ヒトプレプロトロンビンのアミノ酸配列（配列番号１；ＧｅｎｅＩＤ：２１４７；ＮＰ＿０００４９７．１ ＧＩ：４５０３６３５；エキソサイト１残基に下線を付す）
カバットナンバリングによる抗エキソサイト１ＩｇＡおよびＩｇＧ ＶＨドメインのアミノ酸配列（ＣＤＲに下線を付す）：（配列番号２）
抗エキソサイト１ＩｇＡおよびＩｇＧ ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列（配列番号３）
ＧＹＴＬＴＥＡＡＩＨ
ＧＹＴＬＴＥＡＡＩＨ
抗エキソサイト１ＩｇＡおよびＩｇＧ ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列（配列番号４）
ＧＬＤＰＱＤＧＥＴＶＹＡＱＱＦＫＧ
ＧＬＤＰＱＤＧＥＴＶＹＡＱＱＦＫＧ
抗エキソサイト１ＩｇＡおよびＩｇＧ ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列（配列番号５）
ＧＤＦＳＥＦＥＰＦＳＭＤＹＦＨＦ
ＧＤＦＳＥＦＥＰＦＳＭＤＹＦＨＦ
カバットナンバリングによる抗エキソサイト１ＩｇＡおよびＩｇＧ ＶＬドメインのアミノ酸配列：（配列番号６）
抗エキソサイト１ＩｇＡおよびＩｇＧ ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列（配列番号７）
ＲＡＳＱＮＶＳＳＦＬＡ
ＲＡＳＱＮＶＳＳＦＬＡ
抗エキソサイト１ＩｇＡおよびＩｇＧ ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列（配列番号８）
ＤＡＳＳＲＡＴ
ＤＡＳＳＲＡＴ
抗エキソサイト１ＩｇＡ およびＩｇＧ ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列（配列番号９）
ＱＱＲＲＳＷＰＰＬＴ
ＱＱＲＲＳＷＰＰＬＴ
Claims (18)
- それぞれ、配列番号３、４および５の配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含むＶＨドメイン、ならびにそれぞれ配列番号８および９の配列を有するＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３および配列番号６のＮ２８に相当する１アミノ酸残基に置換を導入する変異によりグリコシル化部位が消去された配列番号７の配列を有するＬＣＤＲ１を含むＶＬドメインを含む、トロンビンのエキソサイト１領域に特異的に結合する単離された抗体分子。
- トロンビン活性を阻害する、請求項１に記載の抗体分子。
- 配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨドメインを含む、請求項１又は２に記載の抗体分子。
- アミノ酸Ｎ２８における１アミノ酸の置換によりグリコシル化部位が消去された配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体分子。
- 配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、及びアミノ酸Ｎ２８における１アミノ酸の置換によりグリコシル化部位が消去された配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体分子。
- 完全抗体である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体分子。
- ＩｇＡまたはＩｇＧである、請求項６に記載の抗体分子。
- 前記抗体分子は抗体の断片であり、該断片はトロンビンのエキソサイト１領域に特異的に結合する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体分子。
- モノクローナル抗体である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体分子。
- 請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体分子および医薬的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
- トロンビン介在性の状態の治療に使用するための医薬の製造における請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体分子の使用。
- トロンビン介在性の状態は血栓性の状態である、請求項１１に記載の使用。
- 血栓性の状態は、血栓症または塞栓症である、請求項１２に記載の使用。
- トロンビン介在性の状態は、炎症、感染症、腫瘍の増殖、腫瘍の転移または認知症である、請求項１１に記載の使用。
- 請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体分子を含む、トロンビン介在性の状態を治療するための医薬組成物。
- トロンビン介在性の状態は血栓性の状態である、請求項１５に記載の医薬組成物。
- 血栓性の状態は、血栓症または塞栓症である、請求項１６に記載の医薬組成物。
- トロンビン介在性の状態は、炎症、感染症、腫瘍の増殖、腫瘍の転移または認知症である、請求項１５に記載の医薬組成物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB1121513.4 | 2011-12-14 | ||
| GBGB1121513.4A GB201121513D0 (en) | 2011-12-14 | 2011-12-14 | Thrombin-binding antibody molecules and uses thereof |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2014546649A Division JP6216954B2 (ja) | 2011-12-14 | 2012-12-14 | トロンビン結合性抗体分子及びその使用 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2018039798A JP2018039798A (ja) | 2018-03-15 |
| JP2018039798A5 JP2018039798A5 (ja) | 2018-06-28 |
| JP6705785B2 true JP6705785B2 (ja) | 2020-06-03 |
Family
ID=45560465
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2014546649A Expired - Fee Related JP6216954B2 (ja) | 2011-12-14 | 2012-12-14 | トロンビン結合性抗体分子及びその使用 |
| JP2017165700A Expired - Fee Related JP6705785B2 (ja) | 2011-12-14 | 2017-08-30 | トロンビン結合性抗体分子及びその使用 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2014546649A Expired - Fee Related JP6216954B2 (ja) | 2011-12-14 | 2012-12-14 | トロンビン結合性抗体分子及びその使用 |
Country Status (33)
| Country | Link |
|---|---|
| US (5) | US9518129B2 (ja) |
| EP (2) | EP3275903A1 (ja) |
| JP (2) | JP6216954B2 (ja) |
| KR (1) | KR102114506B1 (ja) |
| CN (2) | CN107936119B (ja) |
| AU (2) | AU2012351858B2 (ja) |
| BR (1) | BR112014014605A2 (ja) |
| CA (1) | CA2856656C (ja) |
| CO (1) | CO7101192A2 (ja) |
| CY (1) | CY1119599T1 (ja) |
| DK (1) | DK2791177T3 (ja) |
| ES (1) | ES2642718T3 (ja) |
| GB (1) | GB201121513D0 (ja) |
| HK (2) | HK1202564A1 (ja) |
| HR (1) | HRP20171775T1 (ja) |
| HU (1) | HUE034793T2 (ja) |
| IL (1) | IL232797B (ja) |
| LT (1) | LT2791177T (ja) |
| ME (1) | ME02901B (ja) |
| MX (1) | MX353281B (ja) |
| MY (1) | MY170980A (ja) |
| NO (1) | NO2791177T3 (ja) |
| PE (2) | PE20141706A1 (ja) |
| PH (1) | PH12014501169B1 (ja) |
| PL (1) | PL2791177T3 (ja) |
| PT (1) | PT2791177T (ja) |
| RS (1) | RS56510B1 (ja) |
| RU (2) | RU2017144629A (ja) |
| SG (1) | SG11201402560WA (ja) |
| SI (1) | SI2791177T1 (ja) |
| UA (1) | UA116531C2 (ja) |
| WO (1) | WO2013088164A1 (ja) |
| ZA (1) | ZA201403836B (ja) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9518128B2 (en) * | 2011-12-14 | 2016-12-13 | Janssen Pharmaceuticals, Inc. | Thrombin-binding antibody molecules |
| GB201121513D0 (en) * | 2011-12-14 | 2012-01-25 | Cambridge Entpr Ltd | Thrombin-binding antibody molecules and uses thereof |
| GB201310949D0 (en) * | 2013-06-19 | 2013-07-31 | Cambridge Entpr Ltd | Binding Motif |
| GB201310948D0 (en) * | 2013-06-19 | 2013-07-31 | Cambridge Entpr Ltd | Screening methods |
| JP2019510474A (ja) * | 2016-02-05 | 2019-04-18 | ジエンス ヘンルイ メデイシンカンパニー リミテッドＪｉａｎｇｓｕ Ｈｅｎｇｒｕｉ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｃｏ．，Ｌｔｄ． | トロンビン抗体、その抗原結合フラグメント及び医薬用途 |
| CN107043423B (zh) * | 2016-02-05 | 2021-02-26 | 江苏恒瑞医药股份有限公司 | 凝血酶抗体、其抗原结合片段及医药用途 |
| WO2018081534A1 (en) * | 2016-10-28 | 2018-05-03 | President And Fellows Of Harvard College | Assay for exo-site binding molecules |
| WO2019030706A1 (en) | 2017-08-10 | 2019-02-14 | Janssen Pharmaceutica Nv | ANTI-THROMBIN ANTIBODY MOLECULES AND METHODS OF USE IN ORTHOPEDIC SURGERY |
| WO2019035055A1 (en) | 2017-08-16 | 2019-02-21 | Janssen Pharmaceutica Nv | ANTI-THROMBIN ANTIBODY MOLECULES AND METHODS OF USE WITH PLATELET ANTI-AGGREGATE AGENTS |
| WO2020003077A1 (en) * | 2018-06-25 | 2020-01-02 | Janssen Pharmaceutica Nv | Anti-thrombin antibody molecules for use in patients at risk for gastrointestinal (gi) bleeding |
Family Cites Families (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE68908175T2 (de) * | 1988-05-27 | 1994-03-03 | Centocor Inc | Gefriergetrocknete formulierung für antikörperprodukte. |
| US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
| US5240913A (en) | 1989-08-18 | 1993-08-31 | Biogen, Inc. | Inhibitors of thrombin |
| US5196404B1 (en) | 1989-08-18 | 1996-09-10 | Biogen Inc | Inhibitors of thrombin |
| EP0534988A1 (en) | 1990-05-10 | 1993-04-07 | Cetus Corporation | Inhibitors of factor xii activation and applications thereof |
| GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
| US5443827A (en) * | 1993-05-03 | 1995-08-22 | President And Fellows Of Harvard College | Fibrin-targeted inhibitors of thrombin |
| EP0738156A1 (en) * | 1993-12-27 | 1996-10-23 | Hamilton Civic Hospitals Research Development, Inc. | Methods and compositions for inhibiting thrombogenesis |
| GB9613718D0 (en) | 1996-06-29 | 1996-08-28 | Thrombosis Res Inst | Thrombin inhibitors |
| US5985833A (en) | 1996-09-17 | 1999-11-16 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Thrombin inhibitor |
| AU5903000A (en) | 1999-06-29 | 2001-01-31 | Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The | Novel anti-thrombin peptide |
| WO2001007072A1 (en) * | 1999-07-23 | 2001-02-01 | The Regents Of The University Of California | Modulation of platelet activation |
| KR20030034071A (ko) * | 2000-05-15 | 2003-05-01 | 스미스클라인 비참 코포레이션 | 항혈전제 |
| WO2002017711A2 (en) | 2000-08-31 | 2002-03-07 | Cor Therapeutics, Inc. | Therapeutics and diagnostics based on a novel signal transduction system in platelets |
| WO2003003988A2 (en) | 2001-07-06 | 2003-01-16 | Oregon Health & Science University | Peptides which modulate blood coagulation and methods of use thereof |
| TWI338009B (en) * | 2001-10-29 | 2011-03-01 | Genentech Inc | Antibodies for inhibiting blood coagulation and methods of use thereof |
| CA2617782A1 (en) | 2005-08-26 | 2007-03-01 | Archemix Corp. | Aptamers that bind thrombin with high affinity |
| WO2007106893A2 (en) | 2006-03-15 | 2007-09-20 | Emory University | Use of thrombin mutants to inhibit the anticoagulation effect of thrombin inhibitors |
| GB0711779D0 (en) | 2007-06-18 | 2007-07-25 | Univ Singapore | Thrombin inhibitor |
| ES2702365T3 (es) | 2008-06-19 | 2019-02-28 | Prothix Bv | Uso de anticuerpos antifactor XI para la prevención o el tratamiento de la formación de trombos |
| WO2010033167A2 (en) * | 2008-09-18 | 2010-03-25 | Archemix Corp. | Anti-thrombin aptamer formulations and methods for use |
| CN103687878B (zh) | 2011-07-22 | 2018-01-09 | 德国杰特贝林生物制品有限公司 | 抑制性的抗因子xii/xiia单克隆抗体及其用途 |
| GB201121513D0 (en) * | 2011-12-14 | 2012-01-25 | Cambridge Entpr Ltd | Thrombin-binding antibody molecules and uses thereof |
| US9518128B2 (en) | 2011-12-14 | 2016-12-13 | Janssen Pharmaceuticals, Inc. | Thrombin-binding antibody molecules |
-
2011
- 2011-12-14 GB GBGB1121513.4A patent/GB201121513D0/en not_active Ceased
-
2012
- 2012-12-14 MY MYPI2014001764A patent/MY170980A/en unknown
- 2012-12-14 BR BR112014014605A patent/BR112014014605A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2012-12-14 NO NO12806641A patent/NO2791177T3/no unknown
- 2012-12-14 JP JP2014546649A patent/JP6216954B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2012-12-14 PL PL12806641T patent/PL2791177T3/pl unknown
- 2012-12-14 UA UAA201406892A patent/UA116531C2/uk unknown
- 2012-12-14 DK DK12806641.2T patent/DK2791177T3/en active
- 2012-12-14 RS RS20171073A patent/RS56510B1/sr unknown
- 2012-12-14 CN CN201711384542.3A patent/CN107936119B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2012-12-14 CN CN201280061294.8A patent/CN104053673B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2012-12-14 HU HUE12806641A patent/HUE034793T2/en unknown
- 2012-12-14 WO PCT/GB2012/053140 patent/WO2013088164A1/en active Application Filing
- 2012-12-14 SG SG11201402560WA patent/SG11201402560WA/en unknown
- 2012-12-14 ES ES12806641.2T patent/ES2642718T3/es active Active
- 2012-12-14 PE PE2014000953A patent/PE20141706A1/es active IP Right Grant
- 2012-12-14 AU AU2012351858A patent/AU2012351858B2/en not_active Ceased
- 2012-12-14 MX MX2014007170A patent/MX353281B/es active IP Right Grant
- 2012-12-14 SI SI201231145T patent/SI2791177T1/en unknown
- 2012-12-14 LT LTEP12806641.2T patent/LT2791177T/lt unknown
- 2012-12-14 RU RU2017144629A patent/RU2017144629A/ru unknown
- 2012-12-14 CA CA2856656A patent/CA2856656C/en active Active
- 2012-12-14 EP EP17177235.3A patent/EP3275903A1/en not_active Withdrawn
- 2012-12-14 PE PE2018002007A patent/PE20190171A1/es unknown
- 2012-12-14 ME MEP-2017-243A patent/ME02901B/me unknown
- 2012-12-14 PT PT128066412T patent/PT2791177T/pt unknown
- 2012-12-14 EP EP12806641.2A patent/EP2791177B1/en active Active
- 2012-12-14 US US14/363,514 patent/US9518129B2/en active Active
- 2012-12-14 RU RU2014124985A patent/RU2642276C2/ru active
- 2012-12-14 KR KR1020147019168A patent/KR102114506B1/ko active IP Right Grant
-
2014
- 2014-05-26 IL IL232797A patent/IL232797B/en active IP Right Grant
- 2014-05-26 ZA ZA2014/03836A patent/ZA201403836B/en unknown
- 2014-05-26 PH PH12014501169A patent/PH12014501169B1/en unknown
- 2014-07-11 CO CO14150372A patent/CO7101192A2/es unknown
-
2015
- 2015-03-27 HK HK15103146.0A patent/HK1202564A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2016
- 2016-11-10 US US15/348,250 patent/US9988463B2/en active Active
-
2017
- 2017-08-30 JP JP2017165700A patent/JP6705785B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2017-11-14 CY CY20171101189T patent/CY1119599T1/el unknown
- 2017-11-16 HR HRP20171775TT patent/HRP20171775T1/hr unknown
- 2017-12-01 AU AU2017268655A patent/AU2017268655B2/en not_active Ceased
-
2018
- 2018-05-08 HK HK18105913.3A patent/HK1246326A1/zh unknown
- 2018-05-10 US US15/976,512 patent/US10287363B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2019
- 2019-03-25 US US16/363,396 patent/US20190276558A1/en not_active Abandoned
-
2021
- 2021-06-10 US US17/344,577 patent/US20210371543A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6705785B2 (ja) | トロンビン結合性抗体分子及びその使用 | |
| US11155637B2 (en) | Thrombin-binding antibody molecules and uses thereof | |
| CA3018124A1 (en) | Monoclonal antibodies against the active site of factor xi and uses thereof | |
| WO2014202992A1 (en) | Screening methods for thrombin binding agent and uses of thrombin binding agent for inhibiting or preventing coagulation | |
| WO2014202991A1 (en) | Antidote | |
| NZ625386B2 (en) | Thrombin-binding antibody molecules and uses thereof | |
| WO2014202993A1 (en) | Binding motif for thrombin inhibitors | |
| WO2019035055A1 (en) | ANTI-THROMBIN ANTIBODY MOLECULES AND METHODS OF USE WITH PLATELET ANTI-AGGREGATE AGENTS |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170929 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20170929 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20181002 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20181227 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20190205 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20190527 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20200514 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6705785 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |