TWI818948B - 啉酮衍生物 - Google Patents

Abstract

本發明之課題係提供一種新穎化合物，其可有效率地將多潛能幹細胞(pluripotent stem cell)分化誘導成胰島素產生細胞。

本發明之解決手段係一種通式(I)所表示的化合物或其鹽，

[式中，R¹、R²、R³、n及A係各自與說明書中之定義同義]。

Description

二氫吲酮衍生物

本發明係關於促進多潛能幹細胞分化為胰島素產生細胞的化合物。

糖尿病為一種嚴重的疾病，以各種遺傳因素及環境因素為背景而發病，因慢性高血糖而腎病等之合併症被引起，結果使患者的QOL顯著降低。現在，世界之糖尿病患者數超過4億人，在醫療經濟方面亦被視為問題。糖尿病大致被分類為第1型及第2型糖尿病，但於任一病態，都以具有胰島素分泌機能的胰臟β細胞的喪失為主要原因。就第1型糖尿病、或胰臟β細胞的喪失顯著的嚴重第2型糖尿病之治療法而言，雖然胰島素製劑的投予已為一般的手段，但低血糖等之副作用、或需要頻繁的自行注射等的問題點多。近年來，將自臟器提供者單離的胰島細胞移植至第1型糖尿病患者成為可能，作為替代胰島素治療且可能完全緩解糖尿病的治療法而受到期待。然而，由於因胰島(pancreatic islet)捐獻者的不足而為普及困難的狀況，所以冀望儘快實現用以自多潛能幹細胞大量製作胰島素產生細胞的技術。

就用以自多潛能幹細胞製作胰島素產生細胞的技術而言，已報告使用下式記載之化合物，經由5階段至7階段之步驟，自ES細胞、iPS細胞分化誘導為胰島素產生細胞的方法(專利文獻1、非專利文獻1、2、3、4、5)。於Shahjalal等之方法(專利文獻1、非專利文獻4)，係逐步地經由5階段的分化步驟，而可自人類iPS細胞製作胰島素產生細胞。首先，使iPS細胞於維持培養基中增殖後，於階段1，係以包含活化素A(activin A)及GSK3β抑制劑CHIR99201的培養基培養數日，誘導為Sox17陽性之胚胎內胚層細胞(embryonic endoderm cell)。於階段2，係將FGF10、音蝟因子(sonic hedgehog)抑制劑KAAD-環杷明(KAAD-cyclopamine)對胚胎內胚層細胞處置數日，誘導成Foxa2陽性之原始腸管細胞。再者，於階段3中，將原始腸管細胞以含有視網酸(retinoic acid)、KAAD-環杷明、TGFβ受體激酶抑制劑SB431542及BMP訊息抑制因子Noggin的培養基處置數日，分化誘導為PDX1陽性之胰臟前驅細胞。於階段4，係對胰臟前驅細胞，以蛋白質激酶C活性化劑吲哚內醯胺V(Indolactam V)、為TGFβ受體激酶抑制劑的ALk5抑制劑II及Noggin給予刺激，誘導成Ngn3陽性之胰內分泌前驅細胞。於最終階段之階段5中，藉由將胰內分泌前驅細胞以含有GLP-1受體促效劑及菸鹼醯胺的培養基培養數日，而可獲得胰島素產生細胞。

再者亦有使用了下式記載的化合物的報告。有使用低分子抑制劑LDN193189替代於上述之分化培養中所使用的Noggin，使用SANT-1(非專利文獻2、6)或多索莫非(Dorsomorphin)替代KAAD-環杷明的情形(非專利文獻5)。又，於分化培養最終步驟，有使用弗斯可林(Forskolin)、地塞米松(Dexamethasone)作為分化誘導劑的情形(非專利文獻5)。其他，已報告AXL抑制劑R428會促進胰島素產生細胞之機能成熟化(非專利文獻3)，已報告AKT抑制劑AT7867為促進PDX-1陽性之胰前驅細胞之增殖的化合物(非專利文獻7)。

為了將源自多潛能幹細胞的胰島素產生細胞應用於細胞治療，細胞機能之安定性及製造法的效率性為重要的。關於細胞機能之安定性，雖所獲得的胰島素產生細胞之對高葡萄糖反應而分泌胰島素的能力或胰島素的分泌動態，在每次實驗的再現性良好，且顯示一定的能力，但以歷來之方法所獲得的細胞，會有依製造批次或細胞株而此等之能力變動，安定的品質之確保為困難的問題。關於製造法之效率性，以歷來之方法，由於可分化誘導的胰島素產生細胞的數目少而有所謂成本效率差的問題。

泛素C末端水解酵素(Ubiquitin C-terminal Hydrolase L1；以下，記載為UCHL1)係具有將泛素及與 其C末端結合的小附加物的鍵結水解，並生成泛素單體的作用的泛素水解酵素之一種。UCHL1係大多於神經細胞或神經內分泌細胞中表現，暗示與阿茲海默氏症、帕金森氏病等之神經變性疾病有關聯(非專利文獻8)。又本酵素，因已報告於胰臟β細胞亦高表現，對該細胞之生存或機能產生重要作用，而推測亦有參與該細胞之分化、發生過程的可能性(非專利文獻9及10)。

先前技術文獻 專利文獻

專利文獻1 國際申請公開第2015/178397號小冊

非專利文獻

非專利文獻1 Kroon，E.et al.，Pancreatic endoderm derived from human embryonic stem cells generates glucose-responsive insulin-secreting cells in vivo. Nature Biotechnology，26：443-452，2008.

非專利文獻2 Pagliuca F.W.，et al.，Generation of functional human pancreatic β cells in vitro. Cell，159：428-439，2014.

非專利文獻3 Rezania A.et al.，Reversal of diabetes with insulin-producing cells derived in vitro from human pluripotent stem cells. Nature Biotechnology，32：1122-1133,2014.

非專利文獻4 Shahjalal H.et al.，Generation of insulin-producing β-like cells from human iPS cells in a defined and completely xeno-free culture system. Journal of Molecular Cell Biology，6：394-408，2014.

非專利文獻5 Kunisada Y.et al.，Small molecules induce efficient differentiation into insulin-producing cells from human induced pluripotent stem cells. Stem Cell Research，8：274-284，2012.

非專利文獻6 Nakashima R.et al.，Neural cells play an inhibitory role in pancreatic differentiation of pluripotent stem cells. Genes Cells，20：1028-1045,2015.

非專利文獻7 Kimura A.et al.，Small molecule AT7867 proliferates PDX1-expressing pancreatic progenitor cells derived from human pluripotent stem cells. Stem Cell Research，24：61-68，2017.

非專利文獻8 Setsuie R.et al.，The functions of UCH-L1 and its relation to neurodegenerative diseases. Neurochemistry International，51：105-111,2007.

非專利文獻9 Costes S.et al.，β-Cell Dysfunctional ERAD/Ubiquitin/Proteasome System in Type 2 Diabetes Mediated by Islet Amyloid Polypeptide-Induced UCH-L1 Deficiency. Diabetes，2011，Jan；60(1)：227-38.

非專利文獻10 Chu K.Y.et al.，Ubiquitin C-terminal hydrolase L1 is required for pancreatic beta cell survival and function in lipotoxic conditions. Diabetologia，2012，Jan；55(1)：128-40.

本發明之課題係提供一種低分子化合物，其可達成以歷來之技術為困難之自幹細胞分化為胰島素產生細胞的高分化效率性。又，本發明之另一課題係提供一種藉由以歷來之低分子化合物為困難的UCHL1之活性化，而治療及/或預防糖尿病或神經變性疾病的方法。

本發明者等認真進行檢討的結果，發現通式(I)所表示的化合物或其鹽具有促進自多潛能幹細胞往胰島素產生細胞的分化誘導的顯著效果，又發現彼等化合物或其鹽有用於胰島素產生細胞之製造，而完成本發明。本發明之化合物係具有與已知之分化誘導劑完全不同的新穎構造，於分化過程的後半階段中，發揮較已知之分化促進化合物或增殖因子更提高分化誘導效率的效果。又，本發明者等發現通式(I)所表示的化合物或其鹽具有將UCHL1活性化的作用，可預防及/或預防糖尿病或神經變性疾病，而完成了本發明。

即，本發明係關於以下說明的[1]~[25]。

[1]一種通式(I)所表示的化合物、或其鹽，

[式中，各取代基係如以下定義： R¹：氫原子、鹵素原子、或C1-C6烷基；R²：氫原子、或C1-C6烷基；R³：可經1至4個獨立選自取代基群α的取代基取代的芳基、C5-C10環烯基、或雜環基；取代基群α：鹵素原子、氰基、羧基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵C1-C6烷基、鹵C1-C6烷氧基、羥基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6烷氧基、(C1-C6烷基)羰基、(C1-C6烷氧基)羰基、(C1-C6烷氧基)羰基氧基、苯基C1-C6烷氧基、非芳香族雜環基、可經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺甲醯基、可經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺甲醯基所取代的C1-C6烷氧基、經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺磺醯基、及可經1至4個獨立選自取代基群β的取代基取代的苯氧基、苯基、及苯甲醯基；取代基群β：鹵素原子、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵C1-C6烷基、鹵C1-C6烷氧基、或(C1-C6烷氧基)羰基；n：0、或1；A：下述式(i)~(iv)之任一者所表示的基：

(式中，各取代基係如以下定義：R⁴：氫原子、C1-C6烷基、或鹵C1-C6烷基 R⁵：氫原子、鹵素原子、或C1-C6烷基Y：N或CH)]。

[2]如[1]記載之化合物、或其鹽，其中R³為萘基、1,3-苯并二

呃基、2,2-二鹵-1,3-苯并二

呃基、C5-C10環烯基、或可經1個或2個獨立選自取代基群α1的取代基取代的苯基或5或6員環雜環基；取代基群α1：鹵素原子、氰基、羧基、苯氧基、苯甲醯基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵C1-C6烷基、鹵C1-C6烷氧基、羥基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6烷氧基、(C1-C6烷基)羰基、(C1-C6烷氧基)羰基、(C1-C6烷氧基)羰基氧基、苯基C1-C6烷氧基、5或6員環非芳香族雜環基、可經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺甲醯基、可經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺甲醯基所取代的C1-C6烷氧基、經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺磺醯基、及可經1個或2個獨立選自取代基群β1的取代基取代的苯基；取代基群β1：鹵素原子、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、及(C1-C6烷氧基)羰基。

[3]如[1]記載之化合物、或其鹽，其中R³為萘基、1,3-苯并二

呃基、2,2-二鹵-1,3-苯并二

呃基、C5-C10環烯基、可經1個或2個獨立選自取代基群α2的取代基取代的苯基、或可經1個或2個獨立選自取代基群γ2的取代基取代的5或6員環雜環基；取代基群α2：鹵素原子、氰基、羧基、苯氧基、苯甲醯基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵C1-C6烷基、 鹵C1-C6烷氧基、羥基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6烷氧基、(C1-C6烷基)羰基、(C1-C6烷氧基)羰基、(C1-C6烷氧基)羰基氧基、苯基C1-C6烷氧基、5或6員環非芳香族雜環基、可經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺甲醯基、可經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺甲醯基所取代的C1-C6烷氧基、經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺磺醯基、及可經1個或2個獨立選自取代基群β2的取代基取代的苯基；取代基群β2：鹵素原子、C1-C6烷基、及C1-C6烷氧基；取代基群γ2：鹵素原子、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、(C1-C6烷基)羰基、及(C1-C6烷氧基)羰基。

[4]如[1]記載之化合物、或其鹽，其中R³為萘基、1,3-苯并二

呃基、2,2-二氟-1,3-苯并二

呃基、C5-C8環烯-1-基、可經1個或2個獨立選自取代基群α3的取代基取代的苯基、或可經1個或2個獨立選自取代基群γ3的取代基取代的5或6員環雜環基；取代基群α3：鹵素原子、氰基、羧基、苯氧基、苯甲醯基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、鹵C1-C2烷基、鹵C1-C2烷氧基、羥基C1-C4烷基、C1-C2烷氧基C1-C2烷氧基、(C1-C4烷基)羰基、(C1-C4烷氧基)羰基、(C1-C4烷氧基)羰基氧基、苯基C1-C4烷氧基、

啉-1-基、可經1個或2個之C1-C4烷基取代的胺甲醯基、可經1個或2個之C1-C4烷基取代的胺甲醯基所取代的C1-C2烷氧基、經1個或2個之C1-C4烷基取代的胺磺醯基、及 可經1個或2個獨立選自取代基群β3的取代基取代的苯基；取代基群β3：氟原子、氯原子、C1-C4烷基、及C1-C4烷氧基；取代基群γ3：鹵素原子、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、(C1-C4烷基)羰基、及(C1-C4烷氧基)羰基。

[5]如[1]~[4]中任一項記載之化合物、或其鹽，其中R¹為氫原子、氯原子、或甲基。

[6]如[1]~[5]中任一項記載之化合物、或其鹽，其中R²為氫原子、或甲基。

[7]如[1]~[6]中任一項記載之化合物、或其鹽，其中A為式(i)所表示的基，R⁴為氫原子、甲基、或三氟甲基。

[8]如[1]~[6]中任一項記載之化合物、或其鹽，其中A為式(ii)所表示的基，R⁵為氫原子、氟原子、或甲基。

[9]如[1]~[6]中任一項記載之化合物、或其鹽，其中A為式(iii)所表示的基，R⁵為氫原子、氟原子、或甲基。

[10]如[1]~[9]中任一項記載之化合物、或其鹽，其中n為1。

[11]如[1]~[10]中任一項記載之化合物、或其鹽，其中R³為可經1個或2個獨立選自包含2,2-二氟-1,3-苯并二

呃基、1-三級丁氧基羰基-3,6-二氫-2H-吡啶-4-基、或氟原子、氯原子、三氟甲基、三級丁氧基、三氟甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基、苄氧基、及苯氧基的群組的取代基取代的苯基。

[12]如[1]記載之化合物、或其鹽，其係選自以下之化合物群之任一者：

[13]如[1]記載之化合物或其鹽，其係以下式表示：

[14]如[1]記載之化合物或其鹽，其係以下式表示：

[15]如[1]記載之化合物或其鹽，其係以下式表示：

[16]如[1]記載之化合物或其鹽，其係以下式表示：

[17]如[1]記載之化合物或其鹽，其係以下式表示：

[18]如[1]記載之化合物或其鹽，其係以下式表示：

[19]如[1]記載之化合物或其鹽，其係以下式表示：

[20]如[1]記載之化合物或其鹽，其係以下式表示：

[21]如[1]記載之化合物或其鹽，其係以下式表示：

[22]一種用以使多潛能幹細胞分化為胰島素產生細胞之如[1]~[21]中任一項記載之化合物、或其鹽。

[23]一種如[1]~[21]中任一項記載之化合物、或其鹽之用途，其係用以使多潛能幹細胞分化為胰島素產生細胞。

[24]一種用以使多潛能幹細胞分化為胰島素產生細胞的方法，其使用如[1]~[21]中任一項記載之化合物、或其鹽。

[25]一種胰島素產生細胞之製造方法，其使用如[1]~[21]中任一項記載之化合物、或其鹽。

又，於其它態樣，本發明係關於以下之[A-1]~[A-48]。

[A-1]一種通式(I)所表示的化合物或其鹽，

[式中，各取代基係如以下定義：R¹：氫原子、鹵素原子、或C1-C6烷基；R²：氫原子、或C1-C6烷基；R³：可經1至4個獨立選自取代基群α的取代基取代的芳基、可經1至4個獨立選自取代基群α的取代基取代的C5-C10環烯基、或可經1至4個獨立選自取代基群α的取代基取代的雜環基；取代基群α：鹵素原子、氰基、羧基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵C1-C6烷基、鹵C1-C6烷氧基、羥基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6烷氧基、(C1-C6烷基)羰基、(C1-C6烷氧基)羰基、(C1-C6烷氧基)羰基氧基、 苯基C1-C6烷氧基、非芳香族雜環基、可經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺甲醯基、可經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺甲醯基所取代的C1-C6烷氧基、經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺磺醯基、可經1至4個獨立選自取代基群β的取代基取代的苯氧基、可經1至4個獨立選自取代基群β的取代基取代的苯基、及可經1至4個獨立選自取代基群β的取代基取代的苯甲醯基；取代基群β：鹵素原子、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵C1-C6烷基、鹵C1-C6烷氧基、及(C1-C6烷氧基)羰基；n：0、或1；A：下述式(i)~(iv)之任一者所表示的基：

(式中，各取代基係如以下定義：‧及＊：表示鍵結肢，‧係與通式(I)之醯胺基之氮原子結合，＊係與R³結合；R⁴：氫原子、C1-C6烷基、鹵C1-C6烷基、或(C1-C6烷氧基)羰基；R⁵：氫原子、鹵素原子、或C1-C6烷基；Y：N或CH)]。

[A-2]如[A-1]記載之化合物或其鹽，其中R³為萘基、1,3-苯并二

呃基、2,2-二鹵-1,3-苯并二

呃基、C5-C10環烯基、可經1個或2個獨立選自取代基群α1 的取代基取代的苯基、或可經1個或2個獨立選自取代基群α1的取代基取代的5或6員環雜環基；取代基群α1：鹵素原子、氰基、羧基、苯氧基、苯甲醯基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵C1-C6烷基、鹵C1-C6烷氧基、羥基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6烷氧基、(C1-C6烷基)羰基、(C1-C6烷氧基)羰基、(C1-C6烷氧基)羰基氧基、苯基C1-C6烷氧基、5或6員環非芳香族雜環基、可經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺甲醯基、可經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺甲醯基所取代的C1-C6烷氧基、經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺磺醯基、及可經1個或2個獨立選自取代基群β1的取代基取代的苯基；取代基群β1：鹵素原子、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、及(C1-C6烷氧基)羰基。

[A-3]如[A-1]記載之化合物或其鹽，其中R³為萘基、1,3-苯并二

呃基、2,2-二鹵-1,3-苯并二

呃基、C5-C10環烯基、可經1個或2個獨立選自取代基群α2的取代基取代的苯基、或可經1個或2個獨立選自取代基群γ2的取代基取代的5或6員環雜環基；取代基群α2：鹵素原子、氰基、羧基、苯氧基、苯甲醯基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵C1-C6烷基、鹵C1-C6烷氧基、羥基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6烷氧基、(C1-C6烷基)羰基、(C1-C6烷氧基)羰基、(C1-C6烷氧基)羰基氧基、苯基C1-C6烷氧基、5或6員環非芳香族雜環基、可經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺甲 醯基、可經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺甲醯基所取代的C1-C6烷氧基、經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺磺醯基、及可經1個或2個獨立選自取代基群β2的取代基取代的苯基；取代基群β2：鹵素原子、C1-C6烷基、及C1-C6烷氧基；取代基群γ2：鹵素原子、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、(C1-C6烷基)羰基、及(C1-C6烷氧基)羰基。

[A-4]如[A-1]記載之化合物或其鹽，其中R³為萘基、1,3-苯并二

呃基、2,2-二氟-1,3-苯并二

呃基、C5-C8環烯-1-基、可經1個或2個獨立選自取代基群α3的取代基取代的苯基、或可經1個或2個獨立選自取代基群γ3的取代基取代的5或6員環雜環基；取代基群α3：鹵素原子、氰基、羧基、苯氧基、苯甲醯基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、鹵C1-C2烷基、鹵C1-C2烷氧基、羥基C1-C4烷基、C1-C2烷氧基C1-C2烷氧基、(C1-C4烷基)羰基、(C1-C4烷氧基)羰基、(C1-C4烷氧基)羰基氧基、苯基C1-C4烷氧基、

啉-1-基、可經1個或2個之C1-C4烷基取代的胺甲醯基、可經1個或2個之C1-C4烷基取代的胺甲醯基所取代的C1-C2烷氧基、經1個或2個之C1-C4烷基取代的胺磺醯基、及可經1個或2個獨立選自取代基群β3的取代基取代的苯基；取代基群β3：氟原子、氯原子、C1-C4烷基、及C1-C4烷氧基； 取代基群γ3：鹵素原子、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、(C1-C4烷基)羰基、及(C1-C4烷氧基)羰基。

[A-5]如[A-1]~[A-4]中任一項記載之化合物或其鹽，其中R¹為氫原子、氯原子、或甲基。

[A-6]如[A-1]~[A-5]中任一項記載之化合物或其鹽，其中R²為氫原子、或甲基。

[A-7]如[A-1]~[A-6]中任一項記載之化合物或其鹽，其中A為式(i)所表示的基，且R⁴為氫原子、C1-C6烷基、鹵C1-C6烷基、或(C1-C6烷氧基)羰基。

[A-8]如[A-7]記載之化合物或其鹽，其中R⁴為氫原子、甲基、或三氟甲基。

[A-9]如[A-1]~[A-6]中任一項記載之化合物或其鹽，其中A為式(ii)所表示的基，R⁵為氫原子、鹵素原子、或C1-C6烷基。

[A-10]如[A-9]記載之化合物或其鹽，其中R⁵為氫原子、氟原子、或甲基。

[A-11]如[A-1]~[A-6]中任一項記載之化合物或其鹽，其中A為式(iii)所表示的基，R⁵為氫原子、氟原子、或甲基。

[A-12]如[A-1]~[A-6]中任一項記載之化合物或其鹽，其中A為式(iv)所表示的基。

[A-13]如[A-1]~[A-12]中任一項記載之化合物或其鹽，其中n為1。

[A-14]如[A-1]~[A-13]中任一項記載之化合物或其鹽，其中R³為可經1個或2個獨立選自包含2,2-二氟-1,3- 苯并二

呃基、1-三級丁氧基羰基-3,6-二氫-2H-吡啶-4-基、或氟原子、氯原子、三氟甲基、三級丁氧基、三氟甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基、苄氧基、及苯氧基的群組的取代基取代的苯基。

[A-15]如[A-1]記載之化合物或其鹽，其係選自以下之化合物群之任一者：

[A-16]如[A-1]記載之化合物或其鹽，其係以下式表示：

[A-17]如[A-1]記載之化合物之光學異構物或其鹽，其係以下式表示：

[A-18]一種光學異構物或其鹽，其係下式所表示的[A-1]記載之化合物之光學異構物或其鹽，其藉由下述之分析條件測定之際，顯示14.9分鐘的保持時間，

(分析條件)

管柱：YMC CHIRAL ART Cellulose-SB(5um)，250 x 4.6mm I.D.，管柱溫度：25℃，流速：0.5ml/min，移動相：n-己烷/乙醇=70/30，測定波長：293nm。

[A-19]一種光學異構物或其鹽，其係下式所表示的[A-1]記載之化合物之光學異構物或其鹽，其藉由下述之分析條件測定之際，顯示21.6分鐘的保持時間，

(分析條件)

管柱：YMC CHIRAL ART Cellulose-SB(5um)，250 x 4.6mm I.D.，管柱溫度：25℃，流速：0.5ml/min，移動相：n-己烷/乙醇=70/30，測定波長：293nm。

[A-20]如[A-1]記載之化合物或其鹽，其係以下式表示：

[A-21]如[A-1]記載之化合物或其鹽，其係以下式表示：

[A-22]如[A-1]記載之化合物或其鹽，其係以下式表示：

[A-23]如[A-1]記載之化合物或其鹽，其係以下式表示：

[A-24]如[A-1]記載之化合物或其鹽，其係以下式表示：

[A-25]如[A-1]記載之化合物之光學異構物或其鹽，其係以下式表示：

[A-26]如[A-1]記載之化合物或其鹽，其係以下式表示：

[A-27]如[A-1]記載之化合物或其鹽，其係以下式表示：

[A-28]一種光學異構物或其鹽，其係下式所表示的[A-1]記載之化合物之光學異構物或其鹽，其藉由下述之分析條件測定之際，顯示13.6分鐘的保持時間，

(分析條件)

管柱：YMC CHIRAL ART Cellulose-SC(5um)，250 x 4.6mm I.D.，管柱溫度：25℃，流速：0.5ml/min，移動相：n-己烷/乙醇=40/60，測定波長：288nm。

[A-29]一種光學異構物或其鹽，其係下式所表示的[A-1]記載之化合物之光學異構物或其鹽，其藉由下述之分析條件測定之際，顯示23.4分鐘的保持時間，

(分析條件)

管柱：YMC CHIRAL ART Cellulose-SC(5um)，250 x 4.6mm I.D.，管柱溫度：25℃，流速：0.5ml/min，移動相：n-己烷/乙醇=40/60，測定波長：288nm。

[A-30]如[A-1]記載之化合物或其鹽，其係以下式表示：

[A-31]如[A-1]記載之化合物或其鹽，其係以下式表示：

[A-32]如[A-1]記載之化合物或其鹽，其係以下式表示：

[A-33]一種用於以多潛能幹細胞分化為胰島素產生細胞之如[A-1]~[A-32]中任一項記載之化合物或其鹽。

[A-34]一種多潛能幹細胞之往胰島素產生細胞的分化誘導劑，其含有如[A-1]~[A-32]中任一項記載之化合物或其鹽。

[A-35]一種如[A-1]~[A-32]中任一項記載之化合物或其鹽之用途，其係用以使多潛能幹細胞分化為胰島素產生細胞。

[A-36]一種用以使多潛能幹細胞分化為胰島素產生細胞的方法，其使用UCHL1活性化劑。

[A-37]如[A-36]記載之方法，其中UCHL1活性化劑為如[A-1]~[A-32]中任一項記載之化合物或其鹽。

[A-38]一種用以使多潛能幹細胞分化為胰島素產生細胞之方法，其使用如[A-1]~[A-32]中任一項記載之化合物或其鹽。

[A-39]一種醫藥組成物，其含有如[A-1]~[A-32]中任一項記載之化合物或其藥學上可容許的鹽作為有效成分。

[A-40]如[A-39]記載之醫藥組成物，其用於糖尿病或神經變性疾病之治療及/或預防。

[A-41]如[A-40]記載之醫藥組成物，其中糖尿病或神經變性疾病為第1型糖尿病、第2型糖尿病、帕金森氏病、或阿茲海默氏症。

[A-42]一種如[A-1]~[A-32]中任一項之記載之化合物或其藥學上可容許的鹽之用途，其係用於製造糖尿病或神經變性疾病之治療及/或預防用的醫藥。

[A-43]如[A-42]記載之用途，其中糖尿病或神經變性疾病為第1型糖尿病、第2型糖尿病、帕金森氏病、或阿茲海默氏症。

[A-44]一種用於糖尿病或神經變性疾病之治療及/或預防用的方法中的使用之如[A-1]~[A-32]中任一項記載之化合物或其藥學上可容許的鹽。

[A-45]如[A-44]記載之化合物或其藥學上可容許的鹽，其中糖尿病或神經變性疾病為第1型糖尿病、第2型糖尿病、帕金森氏病、或阿茲海默氏症。

[A-46]一種用於糖尿病或神經變性疾病之治療及/或預防之方法，其係藉由將藥理學的有效量之如[A-1]~[A-32]記載之化合物或其藥學上可容許的鹽投予至溫血動物。

[A-47]如[A-46]記載之方法，其中糖尿病或神經變性疾病為第1型糖尿病、第2型糖尿病、帕金森氏病、或阿茲海默氏症。

[A-48]如[A-46]或[A-47]記載之方法，其中溫血動物為人類。

具有本發明之通式(I)的化合物或其鹽，與公知之分化誘導方法比較，於使源自哺乳類動物之多潛能幹細胞分化為胰島素產生細胞之際，具有顯著效果。因此，本發明之化合物或其鹽可於製造胰島素產生細胞的目的下使用。又，經如此分化誘導的胰島素產生細胞係有用於第1型糖尿病及第2型糖尿病之治療。又，本發 明之化合物或其鹽因具有將UCHL1加以活性化的作用，可使用於用以治療或預防溫血動物(尤其人類)之糖尿病或神經變性疾病。

用以實施發明之形態

以下詳細說明本發明。

本說明書中使用以下說明的用語。

「鹵素原子」：氟原子、氯原子、溴原子、或碘原子。

「C1-C6烷基」：碳數1~6個之直鏈或分枝鏈烷基，具體而言，例如，甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、戊基、異戊基、2-甲基丁基、新戊基、1-乙基丙基、己基、異己基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、或1,2-二甲基丁基等。

「芳基」：為碳數6~10之單環或2環式芳香族碳環，且可與非芳香族雜環或環烷烴稠合。具體而言，例如，苯基、萘基、四氫萘基、二氫茚基、

基、2,3-二氫苯并呋喃基、1,3-苯并二

呃基、2,3-二氫-1,4-苯并二

英基(2,3-dihydro-1,4-benzodioxinyl)、1,2,3,4-四氫喹啉基、1,2,3,4-四氫異喹啉基、吲哚啉基、或3,4-二氫-2H-1,4-苯并

基等。較佳為苯基、萘基、或1,3-苯并二

呃基等。

「C5-C10環烯基」：於碳數5~10之環內具有1個雙鍵的烴環，可經伸烷基交聯，具體而言，可列舉例如，環戊烯基、環己烯基、環庚烯基、環辛烯基、雙環[2.2.1]庚烯基、或雙環[2.2.2]辛烯基等。

「雜環基」：於構成環的原子除碳以外，由獨立選自氮、氧、硫的1~4之雜原子所構成的4~10員環之基，可為芳香族或非芳香族，且非芳香族的情形，可藉由伸烷基交聯。具體而言，例如，作為非芳香族雜環基，可列舉吖呾基、吡咯啶基、哌啶基、吖

基、二吖

基、氮雜環辛基、哌

基、升哌

基、

啉基、氧雜氮雜環庚烷基、硫

啉基、硫吖

基、四氫哌喃基、四氫呋喃基、二

烷基、二

基、2-氮雜雙環[2.2.1]庚基、2,5-二氮雜雙環[2.2.1]庚基、3-氮雜雙環[3.2.1]辛基、8-氮雜雙環[3.2.1]辛基、9-氮雜雙環[3.3.1]壬基、3,9-二氮雜雙環[3.3.1]壬基、二氫哌喃基、二氫吡咯基、二氫吡啶基、四氫吡啶基、四氫吡

基、3,9-二氮雜螺[5.5]十一-3-基、1,9-二氮雜螺[5.5]十一-9-基、1,8-二氮雜螺[4.5]癸-8-基、或1,4-二氧-8-氮雜螺[4.5]癸-8-基等。作為芳香族雜環基，可列舉呋喃基、吡咯基、噻吩基、

唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、

二唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、吡

基、嘧啶基、嗒

基、三

基、吲哚基、異吲哚基、吲唑基、嘌呤基、喹啉基、異喹啉基、或

啶基等。

「C1-C6烷氧基」：於氧原子有前述C1-C6烷基結合的基，具體而言，例如，甲氧基、乙氧基、正 丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、二級丁氧基、異丁氧基、三級丁氧基、戊氧基、異戊氧基、新戊氧基、己氧基、或異己氧基等。

「鹵C1-C6烷基」：於前述C1-C6烷基有1~7個之鹵素原子取代的基，具體而言，例如，三氟甲基、二氟甲基、1,1-二氟乙基、2,2-二氟乙基、或2,2,2-三氟乙基等。

「鹵C1-C6烷氧基」：於前述C1-C6烷氧基有1~7個之前述鹵素原子取代的基，具體而言，例如，氟甲氧基、二氟甲氧基、二氯甲氧基、二溴甲氧基、三氟甲氧基、三氯甲氧基、2-氟乙氧基、2-溴乙氧基、2-氯乙氧基、2-碘乙氧基、2,2-二氟乙氧基、2,2,2-三氟乙氧基、2,2,2-三氯乙氧基、五氟乙氧基、3-氟丙氧基、3-氯丙氧基、4-氟丁氧基、5-氟戊氧基、或6-氟己氧基等。

「羥基C1-C6烷基」：於前述C1-C6烷基有1個之羥基取代的基，具體而言，例如，羥基甲基、羥基乙基、羥基丙基、羥基丁基、羥基戊基、或羥基己基等。

「C1-C6烷氧基C1-C6烷氧基」：於前述C1-C6烷氧基有前述C1-C6烷氧基取代的基，具體而言，例如，甲氧基甲氧基、甲氧基乙氧基、甲氧基丙氧基、乙氧基甲氧基、乙氧基乙氧基、乙氧基丙氧基、或丙氧基丙氧基等。

「(C1-C6烷基)羰基」：於羰基有前述C1-C6烷基結合的基，具體而言，可列舉例如，乙醯基、丙醯基、丁醯基、異丁醯基、或三甲基乙醯基等。

「(C1-C6烷氧基)羰基」：於羰基有前述C1-C6烷氧基結合的基，具體而言，可列舉例如，甲氧基羰基、乙氧基羰基、正丙氧基羰基、異丙氧基羰基、正丁氧基羰基、異丁氧基羰基、二級丁氧基羰基、三級丁氧基羰基、正戊氧基羰基、異戊氧基羰基、新戊氧基羰基、正己氧基羰基、或異己氧基羰基等。

「(C1-C6烷氧基)羰基氧基」：於羰基氧基有前述C1-C6烷氧基結合的基，具體而言，可列舉例如，甲氧基羰基氧基、乙氧基羰基氧基、正丙氧基羰基氧基、異丙氧基羰基氧基、正丁氧基羰基氧基、異丁氧基羰基氧基、二級丁氧基羰基氧基、三級丁氧基羰基氧基、正戊氧基羰基氧基、異戊氧基羰基氧基、新戊氧基羰基氧基、正己氧基羰基氧基、或異己氧基羰基氧基等。

「苯基C1-C6烷氧基」：於前述C1-C6烷氧基之任意位置有苯基取代的基，具體而言，可列舉例如，苄氧基、1-苯基乙氧基、2-苯基乙氧基、1-苯基丙氧基、2-苯基丙氧基、或3-苯基丙氧基等。

「可經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺甲醯基」：於胺甲醯基、或於胺甲醯基有1個或2個前述C1-C6烷基結合的基，具體而言，例如，胺甲醯基、甲基胺甲醯基、二甲基胺甲醯基、乙基胺甲醯基、二乙基胺甲醯基、乙基甲基胺甲醯基、丙基胺甲醯基、或二丙基胺甲醯基等。

「可經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺甲醯基所取代的C1-C6烷氧基」：於前述C1-C6烷氧基有 前述可經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺甲醯基取代的基，具體而言，例如，胺甲醯基甲氧基、胺甲醯基乙氧基、甲基胺甲醯基甲氧基、甲基胺甲醯基乙氧基、二甲基胺甲醯基甲氧基、二甲基胺甲醯基乙氧基、乙基胺甲醯基甲氧基、乙基胺甲醯基乙氧基、二乙基胺甲醯基甲氧基、二乙基胺甲醯基乙氧基、乙基甲基胺甲醯基甲氧基、乙基甲基胺甲醯基乙氧基、丙基胺甲醯基甲氧基、丙基胺甲醯基乙氧基、二丙基胺甲醯基甲氧基、或二丙基胺甲醯基乙氧基等。

「經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺磺醯基」：於胺磺醯基有1個或2個前述C1-C6烷基結合的基，具體而言，例如甲基胺磺醯基、二甲基胺磺醯基、乙基胺磺醯基、乙基甲基胺磺醯基、二乙基胺磺醯基、丙基胺磺醯基、或二丙基胺磺醯基等。

「C1-C4烷基」：碳數1~4個之直鏈或分枝鏈烷基，具體而言，例如，甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、二級丁基、或三級丁基等。

「C1-C4烷氧基」：於氧原子有前述C1-C4烷基結合的基，具體而言，例如，甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、二級丁氧基、異丁氧基、或三級丁氧基等。

「C1-C2烷基」：碳數1或2個之直鏈烷基，為甲基及乙基。

「鹵C1-C2烷基」：於前述C1-C2烷基有1~5個之鹵素原子取代的基，具體而言，例如，可列舉三氟 甲基、二氟甲基、1,1-二氟乙基、2,2-二氟乙基、或2,2,2-三氟乙基等。

「C1-C2烷氧基」：於氧原子有前述C1-C2烷基結合的基，具體而言，甲氧基及乙氧基。

「鹵C1-C2烷氧基」：前述C1-C2烷氧基經1~5個之前述鹵素原子取代的基，具體而言，例如，氟甲氧基、二氟甲氧基、二氯甲氧基、二溴甲氧基、三氟甲氧基、三氯甲氧基、2-氟乙氧基、2-溴乙氧基、2-氯乙氧基、2-碘乙氧基、2,2-二氟乙氧基、2,2,2-三氟乙氧基、2,2,2-三氯乙氧基、或五氟乙氧基等。

「羥基C1-C4烷基」：於前述C1-C4烷基有1個羥基取代的基，具體而言，例如，羥基甲基、羥基乙基、或羥基丙基、羥基丁基等。

「C1-C2烷氧基C1-C2烷氧基」：於前述C1-C2烷氧基有前述C1-C2烷氧基取代的基，具體而言，例如，甲氧基甲氧基、甲氧基乙氧基、乙氧基甲氧基、或乙氧基乙氧基等。

「(C1-C4烷基)羰基」：於羰基有前述C1-C4烷基結合的基，具體而言，可列舉例如，乙醯基、丙醯基、丁醯基、異丁醯基、或三甲基乙醯基等。

「(C1-C4烷氧基)羰基」：於羰基有前述C1-C4烷氧基結合的基，具體而言，可列舉例如，甲氧基羰基、乙氧基羰基、正丙氧基羰基、異丙氧基羰基、正丁氧基羰基、異丁氧基羰基、二級丁氧基羰基、或三級丁氧基羰基等。

「(C1-C4烷氧基)羰基氧基」：於羰基氧基有前述C1-C4烷氧基結合的基，具體而言，可列舉例如，甲氧基羰基氧基、乙氧基羰基氧基、正丙氧基羰基氧基、異丙氧基羰基氧基、正丁氧基羰基氧基、異丁氧基羰基氧基、二級丁氧基羰基氧基、或三級丁氧基羰基氧基等。

「苯基C1-C4烷氧基」：於前述C1-C4烷氧基之任意位置有苯基取代的基，具體而言，可列舉例如，苄氧基、1-苯基乙氧基、2-苯基乙氧基、1-苯基丙氧基、2-苯基丙氧基、或3-苯基丙氧基等。

「可經1個或2個之C1-C4烷基取代的胺甲醯基」：於胺甲醯基、或於胺甲醯基有1個或2個前述C1-C4烷基結合的基，具體而言，例如，胺甲醯基、甲基胺甲醯基、二甲基胺甲醯基、乙基胺甲醯基、二乙基胺甲醯基、乙基甲基胺甲醯基、丙基胺甲醯基、或二丙基胺甲醯基等。

「可經1個或2個之C1-C4烷基取代的胺甲醯基所取代的C1-C2烷氧基」：於前述C1-C2烷氧基有前述可經1個或2個之C1-C4烷基取代的胺甲醯基所取代的基，具體而言，例如，胺甲醯基甲氧基、胺甲醯基乙氧基、甲基胺甲醯基甲氧基、甲基胺甲醯基乙氧基、二甲基胺甲醯基甲氧基、二甲基胺甲醯基乙氧基、乙基胺甲醯基甲氧基、乙基胺甲醯基乙氧基、二乙基胺甲醯基甲氧基、二乙基胺甲醯基乙氧基、乙基甲基胺甲醯基甲氧基、乙基甲基胺甲醯基乙氧基、丙基胺甲醯基甲氧基、丙基胺甲醯基乙氧基、二丙基胺甲醯基甲氧基、或二丙基胺甲醯基乙氧基等。

「經1個或2個之C1-C4烷基取代的胺磺醯基」：於胺磺醯基有1個或2個前述C1-C4烷基結合的基，具體而言，例如甲基胺磺醯基、二甲基胺磺醯基、乙基胺磺醯基、乙基甲基胺磺醯基、二乙基胺磺醯基、丙基胺磺醯基、或二丙基胺磺醯基等。

「幹細胞」：具有自己複製能力及多分化能力的細胞，可列舉例如，ES細胞、iPS細胞、成體幹細胞等。

「多潛能幹細胞」：具有分化成活體之各種細胞的能力的細胞，較佳為ES細胞或iPS細胞。

「胰島素產生細胞」：對高血糖等反應而分泌胰島素的細胞，與升糖素(glucagon)或體抑素(somatostatin)等其它胰臟荷爾蒙相比，胰島素表現能力為顯著優異的細胞。

關於本發明中的通式(I)所表示的化合物之較佳態樣，說明於下。

就本發明中的取代基R¹而言，可列舉氫原子、鹵素原子、C1-C6烷基。較佳為氫原子、氯原子、溴原子、或甲基，更佳為氫原子、氯原子、或甲基。就R¹之取代位置而言，可採任意之位置，可採用以下所示的(I-i)~(I-iii)。

就本發明中的取代基R²而言，可列舉氫原子或C1-C6烷基。較佳為氫原子或C1-C2烷基，更佳為氫原子或甲基。

就本發明中的取代基R³而言，可列舉可經1至4個獨立選自取代基群α的取代基取代的芳基、可經1至4個獨立選自取代基群α的取代基取代的C5-C10環烯基、或可經1至4個獨立選自取代基群α的取代基取代的雜環基。較佳為萘基、1,3-苯并二

呃基、2,2-二鹵-1,3-苯并二

呃基、C5-C10環烯基、可經1個或2個獨立選自取代基群α1的取代基取代的苯基、或可經1個或2個獨立選自取代基群α1的取代基取代的5或6員環雜環基，更佳為萘基、1,3-苯并二

呃基、2,2-二鹵-1,3-苯并二

呃基、C5-C10環烯基、可經1個或2個獨立選自取代基群α2的取代基取代的苯基、或可經1個或2個獨立選自取代基群γ2的取代基取代的5或6員環雜環基。進一步較佳為萘基、1,3-苯并二

呃基、2,2-二氟-1,3-苯并二

呃基、C5-C8環烯-1-基、可經1個或2個獨立選自取代基群α3的取代基取代的苯基、或可經1個或2個獨立選自取代基群γ3的取代基取代的5或6員環雜環基，尤其較佳為可經獨立選自包含2,2-二氟-1,3-苯并二

呃基、1-三級丁氧基羰基-3,6-二氫-2H-吡啶-4-基、或 氟原子、氯原子、三氟甲基、三級丁氧基、三氟甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基、苄氧基、及苯氧基的群組的1個或2個之取代基取代的苯基。關於各取代基群α~γ，係如以下。

就本發明中的取代基群α而言，可列舉鹵素原子、氰基、羧基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵C1-C6烷基、鹵C1-C6烷氧基、羥基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6烷氧基、(C1-C6烷基)羰基、(C1-C6烷氧基)羰基、(C1-C6烷氧基)羰基氧基、苯基C1-C6烷氧基、非芳香族雜環基、可經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺甲醯基、可經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺甲醯基所取代的C1-C6烷氧基、經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺磺醯基、可經1至4個獨立選自取代基群β的取代基取代的苯氧基、可經1至4個獨立選自取代基群β的取代基取代的苯基、及可經1至4個獨立選自取代基群β的取代基取代的苯甲醯基。較佳地為取代基群α1：鹵素原子、氰基、羧基、苯氧基、苯甲醯基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵C1-C6烷基、鹵C1-C6烷氧基、羥基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6烷氧基、(C1-C6烷基)羰基、(C1-C6烷氧基)羰基、(C1-C6烷氧基)羰基氧基、苯基C1-C6烷氧基、5或6員環非芳香族雜環基、可經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺甲醯基、可經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺甲醯基所取代的C1-C6烷氧基、經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺磺醯基、及可經1個或2個獨立選自取代基群β1的取代基取代的 苯基，更佳地為取代基群α2：鹵素原子、氰基、羧基、苯氧基、苯甲醯基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵C1-C6烷基、鹵C1-C6烷氧基、羥基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6烷氧基、(C1-C6烷基)羰基、(C1-C6烷氧基)羰基、(C1-C6烷氧基)羰基氧基、苯基C1~C6烷氧基、5或6員環非芳香族雜環基、可經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺甲醯基、可經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺甲醯基所取代的C1-C6烷氧基、經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺磺醯基、及可經1個或2個獨立選自取代基群β2的取代基取代的苯基。進一步較佳為取代基群α3：鹵素原子、氰基、羧基、苯氧基、苯甲醯基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、鹵C1-C2烷基、鹵C1-C2烷氧基、羥基C1-C4烷基、C1-C2烷氧基C1-C2烷氧基、(C1-C4烷基)羰基、(C1-C4烷氧基)羰基、(C1-C4烷氧基)羰基氧基、苯基C1-C4烷氧基、

啉-1-基、可經1個或2個之C1-C4烷基取代的胺甲醯基、可經1個或2個之C1-C4烷基取代的胺甲醯基所取代的C1-C2烷氧基、經1個或2個之C1-C4烷基取代的胺磺醯基、及可經1個或2個獨立選自取代基群β3的取代基取代的苯基，特佳地為氟原子、氯原子、三氟甲基、三級丁氧基、三氟甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基、苄氧基、或苯氧基。

就本發明中的取代基群β而言，可列舉鹵素原子、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵C1-C6烷基、鹵C1-C6烷氧基、及(C1-C6烷氧基)羰基。較佳為取代基群β1：鹵素原子、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、及(C1-C6 烷氧基)羰基，更佳為取代基群β2：鹵素原子、C1-C6烷基、及C1-C6烷氧基。進一步較佳為取代基群β3：氟原子、氯原子、C1-C4烷基、及C1-C4烷氧基，特佳為甲基、或甲氧基。

就本發明中的取代基群γ而言，可列舉取代基群γ2：鹵素原子、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、(C1-C6烷基)羰基、及(C1-C6烷氧基)羰基。較佳為取代基群γ3：鹵素原子、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、(C1-C4烷基)羰基、及(C1-C4烷氧基)羰基，更佳為氟原子、氯原子、甲基、異丁氧基、或三級丁氧基羰基。

就本發明中的n而言，可採用0或1之數值。n=0時，本發明之化合物係具有以下之式(II)所表示的二氫吡咯啶酮(dihydropyrrolizinone)構造的化合物：

[式中，R¹~R³係表示與上述同意義]，n=1之時，本發明之化合物係具有以下之式(III)所表示的二氫吲

酮構造的化合物；

[式中，R¹~R³係表示與上述同意義]。

更佳為作為本發明中的n而較佳為n=1，具有二氫吲

酮構造的化合物。

就本發明中的A而言，為以下之通式(i)~(iv)所表示的基：

[式中，‧、＊、R⁴、R⁵、及Y係表示與上述同意義]。

A具有通式(i)所表示的基時，本發明之化合物係以下之式(IV)所表示的化合物：

[式中，R¹~R⁴、及n係表示與上述同意義]。

A具有通式(ii)所表示的基時，本發明之化合物係以下之式(V)所表示的化合物：

[式中，R¹~R³、R⁵、n、及Y係表示與上述同意義]。

就R⁵之取代位置而言，可採用任意之位置，可採用以下所示的(V-i)~(V-iii)。

A具有通式(iii)所表示的基時，本發明之化合物係以下之式(VI)所表示的化合物：

[式中，R¹~R³、R⁵、及n係表示與上述同意義]。

就R⁵之取代位置而言，可採用任意之位置，可採用以下所示的(VI-i)~(VI-iii)。

A具有通式(iv)所表示的基時，本發明之化合物係以下之式(VII)所表示的化合物：

[式中，R¹~R³、及n係表示與上述同意義]。

就本發明中的取代基R⁴而言，可列舉氫原子、C1-C6烷基、鹵C1-C6烷基、或(C1-C6烷氧基)羰基。較佳為氫原子、C1-C4烷基、或鹵C1-C2烷基，更佳為氫原子、甲基、或三氟甲基。

就本發明中的取代基R⁵而言，可列舉氫原子、鹵素原子、或C1-C6烷基。較佳為氫原子、氟原子或甲基。

就本發明中的Y而言，可列舉N或CH，Y為N時，A中的(ii)表示吡啶環，Y為CH時，A中的(ii)表示苯環。就該A之(ii)中的Y而言，較佳為CH。

具有通式(I)的化合物，較佳為實施例記載之化合物，更佳為以下之化合物。

8-側氧基-N-[5-[4-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-基]-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

N-[5-(4-三級丁氧基苯基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

8-側氧基-N-[5-[4-(三氟甲基)苯基]噻唑-2-基]-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

N-[5-(4-三級丁氧基苯基)-4-甲基-噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

N-[4-甲基-5-[4-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

N-[5-(4-苄氧基-3-氟-苯基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

8-側氧基-N-[5-[4-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基]噻唑-2-基]-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

又，其結構式係依序如以下所示。

具有通式(I)的化合物，進一步更佳為8-側氧基-N-[5-[4-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-基]-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺之光學活性體或其鹽、以及N-[5-(4- 三級丁氧基苯基)-4-甲基噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺之光學活性體或其鹽。

8-側氧基-N-[5-[4-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-基]-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺之光學活性體系各自為 (5R)-8-側氧基-N-[5-[4-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-基]-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺、或 (5S)-8-側氧基-N-[5-[4-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-基]-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺； N-[5-(4-三級丁氧基苯基)-4-甲基噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺之光學活性體係各自為： (5R)-N-[5-(4-三級丁氧基苯基)-4-甲基噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺、或 (5S)-N-[5-(4-三級丁氧基苯基)-4-甲基噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺。

又，其結構式係依序如以下所示。

自消旋化合物之各光學異構物的分離‧分析，係可利用使用了掌性管柱的高速液體層析(HPLC)等而達成。利用HPLC的光學異構物之鑑定，係可參考其 保持時間而進行，但因其保持時間有因管柱的劣化、裝置間之再現性等而受影響的情形，較佳可藉由分析消旋化合物或光學異構物之標準試料與分析試料之混合物而進行。又，於各光學異構物之利用HPLC的測定中，因於同一測定條件下各光學異構物所溶出的順序不會變化，故亦可於特定條件下藉由相對上保持時間短的第一波峰與相對上保持時間長的第二波峰而賦予光學異構物特徵。

(鹽)

「其鹽」係指化合物因於具有酸性基或鹼性基的情形，可藉由使與鹼或酸反應而作成「與鹼之鹽」或「酸加成鹽」，故表示其鹽。於治療溫血動物(尤其人類)的目的下使用的情形，其鹽係較佳為藥學上可容許的鹽。又，「其鹽」及「藥學上可容許的鹽」亦包含其水合物。

就化合物之「與鹼之鹽」而言，較佳為如鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽的鹼金屬鹽；如鎂鹽、鈣鹽的鹼土類金屬鹽；如N-甲基

啉鹽、三乙基胺鹽、三丁基胺鹽、二異丙基乙基胺鹽、二環己基胺鹽、N-甲基哌啶鹽、吡啶鹽、4-吡咯啶并吡啶鹽、甲吡啶鹽的有機鹼鹽類；或如甘胺酸鹽、離胺酸鹽、精胺酸鹽、鳥胺酸鹽、麩胺酸鹽、天冬胺酸鹽的胺基酸鹽，更佳為鹼金屬鹽或鹼土類金屬鹽。

就化合物之「酸加成鹽」而言，較佳為如氫氟酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽的氫鹵酸鹽；硝 酸鹽、過氯酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽等之無機酸鹽；如甲烷磺酸鹽、三氟甲烷磺酸鹽、乙烷磺酸鹽的低級鏈烷磺酸鹽；如苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽的芳基磺酸鹽；乙酸鹽、蘋果酸鹽、反丁烯二酸鹽、琥珀酸鹽、檸檬酸鹽、抗壞血酸鹽、酒石酸鹽、草酸鹽、順丁烯二酸鹽等之有機酸鹽；及如甘胺酸鹽、離胺酸鹽、精胺酸鹽、鳥胺酸鹽、麩胺酸鹽、天冬胺酸鹽的胺基酸鹽，更佳為氫鹵酸鹽(尤其，鹽酸鹽)。

(水合物等)

本發明之化合物或其鹽，藉由放置於大氣中或再結晶而吸收水分，有附著吸收水或成為水合物之情形，本發明中亦包含如此之各種水合物、溶劑化物及結晶多形之化合物。

(異構物)

本發明之化合物中，依取代基的種類，可存在互變異構物、幾何異構物。本說明書中，雖有僅以異構物之一形態記載本發明之化合物之情形，但本發明亦包含除此以外之異構物，亦包含異構物之經分離者、或彼等之混合物。

本發明之化合物中，有具有不對稱碳原子、不對稱軸的情形，有基於此之光學異構物存在。本發明亦包含光學異構物之經分離者、或彼等之混合物。

(同位素)

本發明之化合物亦包含標示體，即化合物之1或2以上之原子經同位素(例如，²H、³H、¹³C、¹⁴C、³⁵S等)取代的化合物。

(前藥)

本發明中亦包含本發明之化合物之藥理學上可容許的前藥。藥理學上可容許的前藥係指藉由溶媒分解或於生理學的條件下，具有能變換為胺基、羥基、羧基等的基的化合物。就形成前藥的基而言，可列舉例如，Prog.Med，5,2157-2161(1985)記載之基。

作為該前藥，更具體而言，於化合物存有胺基的情形，可列舉該胺基經醯基化、經磷酸化的化合物(例如，該胺基經二十一醯基化、丙胺醯基化、戊基胺基羰基化、(5-甲基-2-側氧基-1,3-二氧雜戊烯-4-基)甲氧基羰基化、四氫呋喃基化、吡咯啶基甲基化、三甲基乙醯氧基甲基化的化合物等)等。

於化合物有羥基存在的情形，可列舉其羥基經醯基化、烷基化、磷酸化、硼酸化的化合物(例如，其羥基經乙醯基化、棕櫚醯基化、丙醯基化、三甲基乙醯基化、丁二醯基化、反丁烯二醯基化、丙胺醯基化、二甲基胺基甲基羰基化的化合物等)等。

於化合物有羧基存在的情形，可列舉其羧基經酯化、醯胺化的化合物(例如，其羧基經乙基酯化、苯基酯化、羧基甲基酯化、二甲基胺基甲基酯化、三甲基 乙醯氧基甲基酯化、乙氧基羰氧基乙基酯化、醯胺化或甲基醯胺化的化合物等)等。

(製造方法)

其次，針對通式(I)所表示的化合物之代表的製造方法進行說明。本發明之化合物可利用各種製造方法製造，以下所示的製造方法為一例，本發明不應被限定於此等例作解釋。

通式(I)所表示的化合物、其鹽及彼等之合成中間體，係可利用基於彼等之基本骨架或取代基的種類之特徵，應用各種之公知製造方法而製造。就公知之方法而言，有例如，「ORGANIC FUNCTIONAL GROUP PREPARATIONS」、第2版、ACADEMIC PRESS，INC.，1989年、「Comprehensive Organic Transformations」、VCH Publishers Inc.，1989年等記載的方法。

又，本發明之化合物及其鹽可按照以下記載的A~C法來合成。合成本發明之化合物之際，依官能基的種類，自原料至中間體的階段，以適當保護基(可容易轉化為該官能基的基)保護該官能基，有於製造技術上有效果的情形。就此種保護基而言，可列舉例如，Wuts(P.G.M.Wuts)及Greene(T.W.Greene)著、Protective Groups in Organic Synthesis(第3版、1999年)記載之保護基等，適當選擇使用此等之反應條件即可。一般而言，若合成路徑由本技術領域中具通常知識者設定，則於該合成路徑最適合的保護基係由本技術領域中具通常知識者適當設定。

在此種方法，導入該保護基而進行了反應之後，可藉由因應必要去除保護基，而獲得所冀望的化合物。又，本發明之化合物之前藥係與上述保護基同樣地，可在自原料至中間體的階段，導入特定之基，或使用獲得的化合物，進一步進行反應來製造。反應係可藉由應用通常之酯化、醯胺化、脫水等之方法而進行。

本發明之化合物係可使用藉由周知之方法或其變化法能夠合成的中間體來製造。尤其，關於包含相當於A的通式(ii)~(iv)所表示的基的中間體，可藉由使用市售原料而應用周知方法或其改變法來製造。

於下述A~C法之各步驟所獲得的化合物，可為與其化合物形成的鹽。可列舉例如，鹽酸鹽或硫酸鹽等、或鈉鹽或鉀鹽等。

於下述A~C法之各步驟的反應中所使用的溶媒，只要是不抑制反應而部分溶解起始原料者即可，並未特別限定，可選自例如下述溶媒群組。溶媒群組係包含如己烷、戊烷、石油醚、環己烷的脂肪族烴類；如苯、甲苯、二甲苯的芳香族烴類；如二氯甲烷(methylene chloride)、氯仿、四氯化碳、二氯乙烷、氯苯、二氯苯的鹵素化烴類；如二乙基醚、二異丙基醚、四氫呋喃、二

烷、二甲氧基乙烷、二乙二醇二甲基醚的醚類；如丙酮、甲基乙基酮、甲基異丁基酮、環己酮的酮類；乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯的酯類；如乙腈、丙腈、丁腈、異丁腈的腈類；如乙酸、丙酸的羧酸類；如甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、1-甲基-1-丙醇、 2-甲基-2-丙醇的醇類；如甲醯胺、二甲基甲醯胺、二甲基乙醯胺、N-甲基-2-吡咯啶酮、六甲基磷酸三醯胺的醯胺類；如二甲基亞碸、環丁碸的亞碸類；水；及彼等之混合物。

於下述A~C法之各步驟的反應中所使用的酸，若為不抑制反應者，則未特別限定，可選自下述酸群組。酸群組包含如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、磷酸、硫酸、硝酸的無機酸；如乙酸、丙酸、三氟乙酸、五氟丙酸的有機酸；及如甲烷磺酸、三氟甲烷磺酸、對甲苯磺酸、樟腦磺酸的有機磺酸。

於下述A~C法之各步驟的反應中所使用的鹼，若為不抑制反應者，則未特別限定，可選自下述鹼群組。鹼群包含如碳酸鋰、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸銫的鹼金屬碳酸鹽；如碳酸氫鋰、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀的鹼金屬碳酸氫鹼；如氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀的鹼金屬氫氧化物；如氫氧化鈣、氫氧化鋇的鹼土類金屬氫氧化物；如氫化鋰、氫化鈉、氫化鉀的鹼金屬氫化物；如鋰胺、鈉胺、鉀胺的鹼金屬醯胺；如甲醇鋰、甲醇鈉、乙醇鈉、三級丁醇鈉、三級丁醇鉀的鹼金屬烷氧化物；如鋰二異丙基醯胺的鋰烷基醯胺；如鋰雙三甲基矽基醯胺、鈉雙三甲基矽基醯胺的矽基醯胺；如正丁基鋰、二級丁基鋰、三級丁基鋰的烷基鋰；如氯化甲基鎂、溴化甲基鎂、碘化甲基鎂、氯化乙基鎂、溴化乙基鎂、氯化異丙基鎂、溴化異丙基鎂、氯化異丁基鎂的鹵素化烷基鎂；及如三乙基胺、三丁基胺、二異丙基乙基胺、N-甲 基哌啶、N-甲基

啉、N-乙基

啉、吡啶、甲吡啶、4-(N,N-二甲基胺基)吡啶、4-吡咯啶并吡啶、2,6-二(三級丁基)-4-甲基吡啶、喹啉、N,N-二甲基苯胺、N,N-二乙基苯胺、1,5-二氮雜雙環[4,3,0]壬-5-烯(DBN)、1,4-二氮雜雙環[2,2,2]辛烷(DABCO)、1,8-二氮雜雙環[5,4,0]十一-7-烯(DBU)的有機胺。

於下述A~C法之各步驟的反應中，反應溫度係因溶媒、起始原料、試藥等而異，反應時間係因溶媒、起始原料、試藥、反應溫度等而異。

於下述A~C法之各步驟的反應中，反應結束後，各步驟之目的化合物係按照通常方法而自反應混合物單離。目的化合物可藉由下列獲得，例如，(i)因應必要而餾除觸媒等之不溶物，(ii)對反應混合物添加水及與水不混和的溶媒(例如，二氯甲烷、二乙基醚、乙酸乙酯等)而萃取目的化合物，(iii)將有機層水洗，而使用無水硫酸鎂等之乾燥劑使其乾燥，及(iv)餾除溶媒。所獲得的目的化合物可因應必要，利用通常方法，例如，再結晶、再沉澱、蒸餾、或、使用了矽膠或是氧化鋁等的管柱層析(包含順相及逆相)等，而進一步純化。所獲得的目的化合物可藉由元素分析、NMR、質量分析(mass spectroscopy)、IR分析等之標準的分析技術而鑑定，並分析其組成或純度。又，各步驟之目的化合物亦可不純化而直接使用於下一反應。

於下述A~C法之各步驟中，可藉由使用了如(R)或(S)-苯乙基胺之光學活性胺的分別再結晶、或使用了光學活性管柱的分離，而將光學異構物分離、純化。

於以下描述有關本發明之化合物的製造方法。惟，製造方法並未限定於下述之方法。

[A法]

A法係製造於製造通式(I)所表示的化合物之際可作為合成中間體使用之化合物(A2)的方法。化合物(A2)於本法及實施例例示的合成法之外，亦可藉由周知方法或其改變法等而製造。

[式中，R³及R⁴係表示與上述同意義]

(步驟A-1)噻唑環形成

步驟A-1係對於化合物(A1)使等量或過度量之鹵素化劑或溴三甲基矽烷、及硫脲作用，而製造化合物(A2)的步驟。就鹵素化劑而言，可列舉氯、溴等。反應之溶媒係只要反應會進行，則不特別限定，但可使用二氯甲烷、氯仿、乙醇、乙腈、N,N-二甲基甲醯胺、乙酸等。反應溫度係通常為0~100℃，反應時間係通常為0.5小時~2日左右。

(B法)

B法係製造於製造通式(I)所表示的化合物之際製造可作為合成中間體使用之化合物(B3)的方法。以下之式中之P¹及P²係表示胺基的保護基或氫原子，就具體的保護基而言，可列舉Boc基(三級丁氧基羰基)、Cbz基(苄氧基羰基)、亞苄基、或二苯基亞甲基等。於P¹為亞苄基、二苯基亞甲基的情形，P²係表示與P¹相同的保護基。R³及A係於彼等所含的取代基上可具有保護基，各步驟包含因應必要=而進行取代基之保護、保護基之去除的步驟。

[式中，R³係與上述同意義，X¹表示鹵素原子或甲烷磺醯氧基、三氟甲烷磺醯氧基或對甲苯磺醯氧基等之脫離基、P¹及P²係表示任意之保護基]

(步驟B-1)偶合反應

步驟B-1係藉由對化合物(B1)之A上的取代基X¹，於鈀觸媒存在下，使用等量或過度量之硼酸或硼酸酯(R³-B(OH)₂或R³-B(OR)₂，R表示任意之烷基)的條件(鈴木‧宮浦偶合)；使用有機錫試藥(R³-SnR₃)的條件(Stille 偶合)；或使用有機鋅試藥(R³-ZnX；X表示鹵素原子)的條件(根岸偶合)等，進行取代基R³之導入而獲得化合物(B2)的步驟。於上述反應，可依必要而添加鹼。就鈀觸 媒而言，可列舉肆(三苯基膦)鈀、[1,1’-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀(II)二氯甲烷錯合物(1：1)、氯(2-二環己基膦-2’4’6’-三異丙基-1,1’-聯苯基)[2-(2’-胺基-1,1’-聯苯基)]鈀(II)、參(二亞苄基丙酮)二鈀、乙酸鈀(II)、乙醯基丙酮鈀(II)、或雙(三苯基膦)二氯化鈀(II)等。又，作為鹼，可列舉三乙基胺、二異丙基乙基胺、1,8-二氮雜雙環[5.4.0]-7-十一烯(DBU)、或1,5-二氮雜雙環[4.3.0]-5-壬烯(DBN)等之有機鹼、碳酸氫鉀、碳酸氫鈉、碳酸鉀、碳酸鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈉、磷酸鉀、或磷酸鈉等之無機鹼。就反應溶媒而言，只要反應會進行，則不特別限定，但可列舉甲醇、乙醇、四氫呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、1,4-二

烷、水、N,N-二甲基甲醯胺、二甲基亞碸、苯、甲苯、二甲苯、或此等之混合物等。反應溫度係通常20~150℃左右。反應時間係通常1小時~2日左右。關於本偶合反應，可按照A.Meijere及F.Diederich著「Metal-Catalyzed Cross-Coupling Reactions(第2版、2004年)」記載之方法來進行。

(步驟B-2)脫保護

步驟B-2係去除化合物(B2)中的保護基P¹及P²而製造化合物(B3)的步驟。於本步驟，可因應必要而進行R³中的保護基的脫保護。本反應條件係依保護基P¹及P²之種類而變化，但可按照例如，T.W.Greene及P.G.Wuts著「Protective Groups in Organic Synthesis(第3版、1999年)」記載之方法來進行。

(C法)

C法係使用周知方法或其改變法等而自可能合成的化合物(C1)製造本發明之化合物(I)的方法。

[式中，R¹~R³、n、A及X¹係與上述同意義，X²係表示鹵素原子，P³係表示任意之保護基]

(步驟C-1)烷基化反應

步驟C-1係對於化合物(C1)，藉由等量或過度量之烷基化劑存在下，以鹼處理而導入取代基R²，製造化合物(C2)的步驟。就烷基化劑而言，可使用鹵素化烷基、甲烷磺酸烷基酯或對甲苯磺酸烷基酯等。就鹼而言，可列舉六甲基二矽氮烷鉀(potassium hexamethyldisilazide)、六甲基二矽氮烷鈉等。反應溶媒係只要反應會進行，則不特別限定，但較佳為四氫呋喃。反應溫度係通常為-78~0℃。反應時間係通常為0.5~24小時。

(步驟C-2)鹵素化及烷基化

步驟C-2係對於化合物(C1)，使用等量或過度量之鹵素化劑而進行鹵素化後，藉由進行烷基化而製造化合物(C3)的步驟。鹵素化與烷基化的順序可適當替換。就鹵素化劑而言，可列舉例如N-溴琥珀醯亞胺、N-碘琥珀醯亞胺等。反應溶媒係只要反應會進行，則不特別限定，但較佳為二氯甲烷、二甲基甲醯胺。反應溫度係通常0~50℃左右。反應時間係通常0.5~24小時。烷基化可利用與步驟C-1相同的方法來進行。

(步驟C-3)偶合反應

步驟C-3係對化合物(C3)進行偶合反應而製造化合物(C4)的步驟。可利用與步驟B-1相同的方法來進行。

(步驟C-4)

步驟C-4係對於化合物(C2)或化合物(C5)，進行鹵素化、或接著鹵素化進行偶合反應，而獲得化合物(C4)或本發明之化合物(I)的步驟。鹵素化可利用與步驟C-2相同的方法來進行，偶合反應可利用與步驟B-1相同的方法來進行。

(步驟C-5)縮合反應

步驟(C-5)係將化合物(C2)或化合物(C4)之羧基的保護基去除而作成羧酸後，等量或過度量使用A法之化合物(A2)或B法之化合物(B3)而進行縮合，製造化合物(C5)或本發明之化合物(I)的步驟。羧基之脫保護係可按照T.W.Greene及P.G.Wuts著「Protective Groups in Organic Synthesis(第3版、1999年)」記載之方法進行。縮合反應係對化合物(C2)及化合物(C4)，於鹼存在下，藉由使適當磺醯基化劑或適當縮合劑作用而進行。於縮合反應，可因應必要而添加促進反應的添加劑。就磺醯基化劑而言，可列舉例如，2,4,6-三異丙基苯磺醯氯、對甲苯磺醯氯、苯磺醯氯等。就縮合劑而言，可列舉例如WSC(1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺)，DCC(1,3-二環己基碳二亞胺)、DMT-MM(4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三

-2-基)-4-甲基氯化

啉鎓)、CDI(1,1’-羰基二咪唑)、DEPC(氰代磷酸二乙酯(diethyl phosphorocyanidoate))、DPPA(疊氮磷酸二苯酯(diphenylphosphoryl azide))等。就鹼而言，可列舉吡啶、二甲基吡啶等之芳香族胺類、三乙基胺、N,N-二異丙基乙基胺、DMAP(4-二甲基胺基吡啶)等之3級胺類等。就添加劑之代表性例而言，可列舉HOAt(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-醇)、HOBt(1H-苯并三唑-1-醇)、HOSu(N-羥基琥珀醯亞胺)等。反應溶媒係只要反應會進行，則不特別限定，但較佳為二氯甲烷、N,N-二甲基甲醯胺。反應溫度係通常為0~50℃。反應時間係通常0.5~24小時。

(步驟C-6)縮合反應

步驟(C-6)係去除化合物(C4)之羧基之保護基後，與胺衍生物縮合，製造化合物(C6)的步驟。可使用與步驟(C-5)相同的方法。

(步驟C-7)偶合反應

步驟(C-7)係對化合物(C6)進行偶合反應，而製造本發明之化合物(I)的步驟。可使用與步驟(B-1)相同的方法進行。

本發明之化合物或其鹽之往胰島素產生細胞的分化促進效果，可利用後述之試驗例1之方法來確認。

本發明之化合物或其鹽，可作為用以促進自多潛能幹細胞往胰島素產生細胞的分化誘導之藥劑或試藥的主要成分而使用，本發明係提供此種藥劑或試藥。

成為對象的多潛能幹細胞，若為具有往內胚葉細胞的分化能力的幹細胞，則可採用各式各樣的幹細胞，但較佳為ES細胞或iPS細胞，更佳為iPS細胞。多潛能幹細胞的來源若為哺乳動物，則可採用各式各樣者，但較佳為人類、小鼠、大鼠、犬或貓等之寵物、牛、馬、豬、羊等之家畜動物，更佳為人類。

自多潛能幹細胞往胰島素產生細胞的分化過程，例如，如非專利文獻4記載，分成5階段。即，自多潛能幹細胞誘導為Sox17陽性之胚胎內胚層細胞的階段1、自胚胎內胚層細胞誘導為Foxa2陽性之原始腸管 細胞的階段2、自原始腸管細胞誘導為PDX1陽性之胰臟前驅細胞的階段3、自胰臟前驅細胞誘導為Ngn3陽性之胰內分泌前驅細胞的階段4、及自胰內分泌前驅細胞最終誘導為胰島素產生細胞的階段5。於本說明書中，細胞之分化階段的表示中，係有利用此等階段來表示的情形。就此等之培養所使用的培養基而言，若為通常之細胞培養所使用的培養基，則不特別限定，可使用各式各樣的培養基，但可例示例如DMEM培養基、B-27補充物等。

本發明之化合物或其鹽，藉由在分化為胰島素產生細胞的過程中，被添加於原始腸管細胞以後的分化階段，而顯著促進往胰島素產生細胞的分化。本發明之化合物，係於自多潛能幹細胞所誘導之原始腸管細胞、胰臟前驅細胞及/或胰內分泌前驅細胞之培養時添加。於上述之分化階段中，相當於自階段3至階段5，可僅添加於任一個階段，亦可於2個階段、或3個階段全部添加，但較佳為自階段3至階段5之全部中被添加。

於階段3，通常，使用含有視網酸、KAAD-環杷明、TGFβ受體激酶抑制劑(例如，SB431542)、BMP訊息抑制因子(例如，Noggin)的培養基，但本發明之化合物或其鹽可替代此等而添加，又亦可對此等追加而被添加。

於階段4，以通常培養基中含有蛋白質激酶C活性化劑(例如，吲哚內醯胺V)、TGFβ受體激酶抑制劑(例如，ALk5抑制劑II)、Noggin的培養基來培養，但本發明之化合物或其鹽可替代此等而添加，又亦可對此等追加而被添加。

於階段5，通常，以含有GLP-1受體促效劑或菸鹼醯胺的培養基培養，但本發明之化合物或其鹽可替代此等而添加，又亦可對此等追加而被添加。

本發明之化合物或其鹽，係可直接將固體狀的化合物直接、或是將其作成粉末狀、或溶解於二甲基亞碸等之有機溶媒，而添加於培養基中。其添加量並未特別限定，但可由本技術領域中具通常知識者設定，使自多潛能幹細胞往胰島素產生細胞進行有效率地分化。於本發明的一些實施形態，本發明之化合物被添加於培養基中，而以1ng/mL~5mg/mL，較佳為10ng/mL~5mg/mL，更佳為50ng/mL~5mg/mL，進一步較佳為100ng/mL~1mg/mL存在。

本發明之化合物或其鹽，與UCHL1結合，並使其酵素活性提升的效果已被確認。UCHL1已被報告於胰臟β細胞顯示高表現量；第2型糖尿病患者之胰臟β細胞中缺乏；其表現量或活性的降低會於胰臟β細胞誘導細胞凋亡等，而被認為是對胰臟β細胞之生存及機能非常重要的酵素。具有將此UCHL1活性化之作用的本發明之化合物促進了往胰島素產生細胞的分化誘導，被認為是暗示藉由細胞內之UCHL1的活性化而誘導、促進及/或支持了分化細胞之作為胰島素產生細胞的表型。即，本發明係亦提供一種於自多潛能幹細胞往胰島素產生細胞的分化誘導中，藉由使分化過程之細胞內的UCHL1的機能亢進，而促進其分化誘導的方法。就使細胞內之UCHL1的機能亢進的方法而言，並不限定於本發 明之化合物的添加，可採用UCHL1基因之導入或基因編集所致使UCHL1蛋白質的表現量增加的方法；於培養液中添加UCHL1蛋白質的方法；藉由添加使UCHL1基因之上游訊息活性化的物質，而使細胞內之UCHL1蛋白質的表現亢進的方法等。

本發明之化合物或其鹽，具有UCHL1之活性化作用，可使用於因UCHL1之活性化而可期待病態之改善的疾病之治療及/或預防。就此種疾病而言，可例示例如第1型糖尿病或第2型糖尿病等之糖尿病、阿茲海默氏症或帕金森氏病等之神經變性疾病。本發明之化合物或其鹽之UCHL1活性化作用可藉由後述之試驗例2確認。

本發明之化合物或其鹽係具有糖尿病病態之改善作用，可使用於糖尿病之治療及預防。該糖尿病病態之改善作用可藉由後述之試驗例3確認。

(投予形態)

本發明之化合物或其鹽可藉由各種形態而被投予。該投予可為利用錠劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、液劑等的經口投予；或利用關節內、靜脈內、肌肉內等之注射劑、栓劑、點眼劑、眼軟膏、經皮用液劑、軟膏劑、經皮用貼附劑、經黏膜液劑、經黏膜貼附劑、吸入劑等的非經口投予之任一種之形態。

就經口投予用之固體組成物而言，係使用錠劑、散劑、顆粒劑等。於此種固體組成物中，1種或2 種以上之有效成分係與至少1種之惰性賦形劑，例如乳糖、甘露糖醇、葡萄糖、羥基丙基纖維素、微結晶纖維素、澱粉、聚乙烯吡咯啶酮、及/或偏矽酸鋁酸鎂等混合。組成物係按照通常方法，可含有惰性添加劑，例如如硬脂酸鎂的潤滑劑、如羧甲基澱粉鈉等地崩解劑、安定化劑、溶解輔助劑。錠劑或丸劑可依必要而以糖衣、或胃溶性或是腸溶性物質之膜衣被膜。

經口投予用之液體組成物係含有藥劑上可容許的乳劑、溶液劑、懸浮劑、糖漿劑或酏劑等，並含有一般使用的惰性稀釋劑，例如純水或乙醇。該液體組成物係於惰性稀釋劑以外，還可含有如可溶化劑、濕潤劑、懸浮劑的輔助劑、甘味劑、風味劑、芳香劑、防腐劑。

非經口投予用之注射劑係含有無菌的水性或非水性之溶液劑、懸浮劑或乳劑。就水性之溶劑而言，係包含例如注射用蒸餾水或生理食鹽液。就非水性之溶劑而言，例如有丙二醇、聚乙二醇或如橄欖油的植物油、如乙醇的醇類、或聚山梨醇酯80等。此種組成物可進一步包含等張化劑、防腐劑、濕潤劑、乳化劑、分散劑、安定化劑、或溶解輔助劑。此等係藉由例如通過細菌保留過濾器的過濾、殺菌劑的摻合或照射而被無菌化。又，此等亦可製造無菌之固體組成物，於使用前溶解或懸浮於無菌水或無菌之注射用溶媒而使用。

就外用劑而言，包含軟膏劑、硬膏劑、霜劑、凝膠劑、泥敷劑、噴霧劑、乳液(lotion)劑、點眼劑、眼軟膏等。含有一般使用的軟膏基劑、乳液基劑、水性或 非水性之液劑、懸浮劑、乳劑等。例如，就軟膏或乳液基劑而言，可列舉聚乙二醇、丙二醇、白色凡士林、白蜂蠟、聚氧伸乙基硬化蓖麻油、一硬脂酸甘油酯、硬脂醇、十六烷醇、聚桂醇(lauromacrogol)、山梨糖醇酐倍半油酸酯(sorbitan sesquioleate)等。

吸入劑或經鼻劑等之經黏膜劑，係使用固體、液體或半固體狀者，可按照歷來周知之方法而製造。例如，可適當添加周知之賦形劑，又可適當添加pH調整劑、防腐劑、界面活性劑、潤滑劑、安定劑或增黏劑等。投予係可使用用以適當吸入或吹送的裝置。例如，使用計量投予吸入裝置等之周知裝置或噴霧器，將化合物單獨、或作成所處方的混合物之粉末、或是與醫藥上可容許的載體組合而作成溶液或懸浮液來投予。乾燥粉末吸入器等係可為單次或多數次之投予用者，亦可使用乾燥粉末或含有粉末的膠囊。或者，亦可為使用了適當驅出劑，例如氯氟烷、氫氟烷或二氧化碳等之適合氣體的加壓氣溶膠噴霧劑等之形態。

(投予量)

通常，經口投予的情形，1日之投予係每單位體重約0.001-100mg/kg，較佳為0.1-30mg/kg，進一步較佳0.1-10mg/kg為適當，將其以1次、或分成2次以上投予。静脈內投予的情形，1日之投予量係每單位體重約0.0001-10mg/kg為適當，以1日1次或分複數次投予。又，就經黏膜劑而言，將每單位體重約0.001-100mg/kg 以1日1次或分複數次投予。投予量係考慮症狀、年齡、性別等而因應各個場合加以適當決定。

(併用)

本發明之化合物或其鹽可與該化合物被認為顯示有效性的疾病之各種之治療劑或預防劑併用。該併用係可同時投予、或分別而連續，或隔所冀望的時間間隔而投予。同時投予製劑係可為摻合劑，亦可為各別製劑化。

(製劑例1)散劑

藉由以混合器混合本發明之化合物5g、乳糖895g及玉米澱粉100g，而獲得散劑。

(製劑例2)顆粒劑

混合本發明之化合物5g、乳糖865g及低取代度羥基丙基纖維素100g後，添加10%羥基丙基纖維素水溶液300g而捏合。將其使用押出造粒機而造粒，乾燥而獲得顆粒劑。

(製劑例3)錠劑

以混合器混合本發明之化合物5g、乳糖90g、玉米澱粉34g、結晶纖維素20g及硬脂酸鎂1g後，藉由以打錠機打錠，而獲得錠劑。

以下，列舉參考例、實施例及試驗例而進一步詳細說明本發明，但本發明之範圍並未限定於此等。

參考例及實施例之管柱層析中的溶出，係於利用TLC(Thin Layer Chromatography、薄層層析法)的觀 察下進行。於TLC觀察中，係採用默克(Merck)公司製之矽膠60F₂₅₄作為TLC板，採用管柱層析法中作為溶出溶媒使用的溶媒作為展開溶媒，採用UV檢測器作為檢測方法。管柱用矽膠係使用同樣為默克公司製之矽膠SK-85(230~400網孔)、或富士SILYSIA化學Chromatorex NH(200-350網孔)。除通常之管柱層析之外，適當使用昭光科學公司之自動層析裝置(Purif-α2或Purif-espoir2)等。溶出溶媒係基於TLC觀察而決定。

又，以下之參考例、實施例及試驗例中所使用的縮寫具有如下意義。

mg：毫克，g：公克，μL：微升，mL：毫升，mmol：毫莫耳，mM：毫莫耳濃度，μM：微莫耳濃度，μm：微米，mm：毫米，MHz：百萬赫。

於以下之參考例及實施例，核磁共振(以下，¹H NMR)光譜係使用四甲基矽烷作為標準物質，將化學位移值記載為δ值(ppm)。分裂樣式係將單峰以s、二重峰以d、三重峰以t、四重峰以q、多重峰以m、寬峰以br表示。質量分析(以下，MS)係使用EI(電子游離(Electron Ionization))法、ESI(電噴灑游離(Electrospray Ionization))法、或FAB(快速原子撞擊(Fast Atom Bombardment))法進行。

[實施例] (參考例1)N-(5-溴噻唑-2-基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

於市售之8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲酸(1.51g，8.43mmol)、市售之5-溴噻唑-2-胺(2.64g，10.2mmol)及3-羥基三唑并[4,5-b]吡啶(1.23g，9.04mmol)之二氯甲烷(30mL)溶液中，添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(2.43g，12.6mmol)及N,N-二異丙基乙基胺(2.94mL，16.9mmol)，於室溫攪拌2小時。將反應液以1N鹽酸及飽和氯化鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，過濾，並減壓下餾除溶媒。殘渣以矽膠管柱層析(正己烷/10%甲醇乙酸乙酯溶液=3/1-0/1)純化，獲得呈固體之標題化合物1.88g(產率66%)。

(參考例2)N-(4-溴苯基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之4-溴苯胺，依據參考例1之方法，獲得呈固體之標題化合物4.66g(產率84%)。

(參考例3)N-(4-溴-2-氟-苯基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之4-溴-2-氟苯胺，依據參考例1之方法，獲得呈固體之標題化合物345mg(產率58%)。

(參考例4)N-(5-溴-4-甲基-噻唑-2-基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之5-溴-4-甲基-噻唑-2-胺，依據參考例1之方法，獲得呈固體之標題化合物252mg(產率25%)。

(參考例5)N-(6-溴-1,3-苯并噻唑-2-基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之2-胺基-6-溴苯并噻唑，依據參考例1之方法，獲得呈固體之標題化合物585mg(產率42%)。

(參考例6)N-(4-溴-2-甲基-苯基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之4-溴-2-甲基-苯胺，依據參考例1之方法，獲得呈固體之標題化合物515mg(產率66%)。

(參考例7)N-(5-溴-2-吡啶基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之5-溴吡啶-2-胺，依據參考例1之方法，獲得呈固體之標題化合物455mg(產率58%)。

(參考例8)N-(2-氯-1,3-苯并噻唑-6-基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之2-氯-1,3-苯并噻唑-6-胺，依據參考例1之方法，獲得呈固體之標題化合物637mg(產率76%)。

(參考例9)5-[4-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-胺

於WO2003014095記載之N-(5-溴噻唑-2-基)-1,1-二苯基-甲亞胺(1.46g，4.25mmol)、市售之4-(三氟甲氧基)苯基硼酸(4.30g，20.0mmol)、碳酸鉀(2.97g，21.5mmol)、 水(3mL)及1,4-二

烷(15mL)之混合物中，添加[1,1’-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀(II)二氯甲烷錯合物(1：1)(338mg，0.414mmol)，氮氣環境下，於100℃攪拌4小時。於反應混合物中添加水後，以乙酸乙酯萃取。合併有機層，以水及飽和食鹽水洗淨後，以無水硫酸鈉乾燥。減壓下餾除溶媒，將獲得的殘渣以矽膠管柱層析(正己烷/乙酸乙酯=9/1-3/1)純化。於獲得的油狀物之甲醇(20mL)溶液中，添加1N鹽酸(5mL，5.0mmol)，於室溫攪拌5.5小時。將反應混合物減壓濃縮，將析出的固體以二氯甲烷洗淨，獲得呈固體之標題化合物897mg(產率81%)。

(參考例10)N-[5-[4-(二甲基胺甲醯基)苯基]噻唑-2-基]胺甲酸三級丁酯

於市售之N-(5-溴噻唑-2-基)胺甲酸三級丁酯(500mg，1.89mmol)之1,4-二

烷(30mL)溶液中，於室溫添加[4-(二甲基胺甲醯基)苯基]硼酸(519mg，2.69mmol)及[1,1’-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀(II)二氯甲烷錯合物(1：1)(74mg，0.09mmol)並攪拌。於反應混合物中添加碳酸鉀(743mg，5.38mmol)及水(3.0mL)，氬氣環境下，於100℃攪拌4.5小時。於反應混合物中添加水後，以乙酸乙酯萃取。合併有機層，以水及飽和食鹽水洗淨後，以無水硫酸鈉乾燥。減壓下餾除溶媒，將獲得的殘渣以矽膠管柱層析(二氯甲烷/甲醇=100/0-93/7、90/10-70/30)純化，獲得呈固體之標題化合物172mg(產率28%)。

(參考例11)4-(2-胺基噻唑-5-基)-N,N-二甲基苯甲醯胺

於參考例10中所獲得的N-[5-[4-(二甲基胺甲醯基)苯基]噻唑-2-基]胺甲酸三級丁酯(172mg、0.495mmol)之二氯甲烷(10mL)溶液中，於室溫添加三氟乙酸(2.0mL，26mmol)，攪拌後，放置。將反應液減壓濃縮，添加飽和碳酸氫鈉水溶液後，以二氯甲烷萃取。將有機層以無水硫酸鈉乾燥後，減壓下餾除溶媒，獲得呈固體之標題化合物118mg(產率96%)。

(參考例12)5-(1,3-苯并二

呃-5-基)噻唑-2-胺

使用市售之1,3-苯并二

呃-5-基硼酸，依據參考例10之方法，獲得產物後，依據參考例11之方法，獲得呈固體之標題化合物123mg(31%，2步驟)。

(參考例13)4-(2-胺基噻唑-5-基)苯甲腈

於市售之4-(2-側氧基乙基)苯甲腈(142mg，0978mmol)之二氯甲烷(10mL)溶液中，冰冷下，添加溴(56μL，1.09mmol)之二氯甲烷(0.56mL)溶液。使反應液回到室溫後，攪拌3小時。冰冷下，於反應液中添加飽和碳酸氫鈉水溶液並中和後，以二氯甲烷萃取。合併有機層，以無水硫酸鈉乾燥後，於減壓下餾除溶媒。於獲得的殘渣之乙醇(30mL)溶液中，添加硫脲(150mg，1.97mmol)，4.5小時加熱回流下，攪拌。冷卻後，於減壓下餾除溶媒後，將獲得的殘渣以矽膠管柱層析(二氯甲 烷/甲醇=99/1-95/5)純化，獲得呈固體之標題化合物8.3mg(4.2%)。

(參考例14)2-[4-[2-(三級丁氧基羰基胺基)噻唑-5-基]苯氧基]乙酸三級丁酯

使用市售之2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊環-2-基)苯氧基]乙酸三級丁酯(2.4g，7.2mmol)，依據參考例10之方法，獲得呈固體之標題化合物248mg(11%)。

(參考例15)2-[4-(2-胺基噻唑-5-基)苯氧基]乙酸甲酯

使用參考例14中所獲得的2-[4-[2-(三級丁氧基羰基胺基)噻唑-5-基]苯氧基]乙酸三級丁酯(193mg，0.475mmol)，依據參考例11之方法，獲得固體。於獲得的固體之四氫呋喃(10mL)及甲醇(3mL)之混合溶液中，於室溫添加三甲基矽基重氮甲烷(0.6M己烷溶液，1.0mL)，並攪拌6小時。將反應液減壓濃縮，添加飽和碳酸氫鈉水溶液後，以二氯甲烷萃取。將有機層以無水硫酸鈉乾燥後，減壓下餾除溶媒，將獲得的殘渣以矽膠管柱層析(二氯甲烷/甲醇=99/1-97/3)純化，獲得呈固體之標題化合物92.5mg(產率74%)。

(參考例16)2-[4-[2-[(8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-羰基)胺基]噻唑-5-基]苯氧基]乙酸甲酯

使用參考例15中所獲得的2-[4-(2-胺基噻唑-5-基)苯氧基]乙酸甲酯，依據實施例1之方法，獲得呈固體之標題化合物85.7mg(產率89%)。

(參考例17)2-溴-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲酸甲酯

於市售之8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲酸甲酯(261mg，1.35mmol)之二氯甲烷(5mL)溶液中，於室溫添加N-溴琥珀醯亞胺(228mg，1.28mmol)，並攪拌4小時。減壓下餾除溶媒，將獲得的殘渣以矽膠管柱層析(正己烷/乙酸乙酯=4/1-2/1)純化，獲得呈固體之標題化合物56.9mg(產率16%)。

(參考例18)2-溴-8-側氧基-N-[5-[4-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-基]-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

於參考例17中所獲得的2-溴-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲酸甲酯(56.9mg，0.209mmol)之乙醇(2mL)溶液中，添加1N氫氧化鈉水溶液(0.5mL，0.50mmol)，並於60℃攪拌2小時。使用1N鹽酸使成為酸性後，以乙酸乙酯萃取。將有機層以無水硫酸鈉乾燥後，減壓下餾除溶媒，獲得黃色固體(52.5mg)。使用獲得的固體(52.5mmol)及於參考例9獲得的5-[4-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-胺，依據實施例9之方法，獲得呈固體之標題化合物48.0mg(產率55%)。

(參考例19)N-(5-溴噻唑-2-基)-2-甲基-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

於參考例17中所獲得的2-溴-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲酸甲酯(65.2mg，0.24mmol)、市售之2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三硼雜環己烷(2,4,6-trimethyl-1,3,5,2,4,6-trioxatriborinane)(0，201mL，1.44mmol)、碳酸鉀(171mg，1.24mmol)之混合物中，添加1,4-二

烷(1.5mL)及水(0.5mL)後，添加[1,1‘-雙(二-三級丁基膦)二茂鐵]二氯化鈀(II)(15.6mg，0.024mmol)，並於氮氣環境下，於100℃攪拌2.5小時。於反應液中添加水及1N鹽酸後，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，於減壓下餾除溶媒。使用獲得的殘渣，依據參考例1之方法，獲得呈固體之標題化合物23.9mg(產率22%)。

(參考例20)2-氯-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲酸甲酯

使用市售之N-氯琥珀醯亞胺，依據參考例17之方法，獲得呈固體之標題化合物56.3mg(產率5.2%)。

(參考例21)5-甲基-8-側氧基-6,7-二氫吲

-5-甲酸甲酯

於市售之8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲酸甲酯(987mg，4.89mmol)及碘甲烷(1.27mL，20.4mmol)之四氫呋喃溶液中，於-78℃歷經30分鐘以上滴加1.0M雙(三甲基矽基)氨基鉀(potassium bis(trimethylsilyl)amide)四氫呋喃溶液(11.2mL，11.2mmol)。於相同溫度攪拌1小時後，添加飽和氯化銨水溶液而驟冷。於反應液中添加 水後，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥。減壓下餾除溶媒，將獲得的殘渣以矽膠管柱層析(正己烷/乙酸乙酯=6/1-1/1)純化，獲得呈油狀物之標題化合物592mg(產率56%)。

(參考例22)5-甲基-8-側氧基-6,7-二氫吲

-5-甲酸

於參考例21中所獲得的5-甲基-8-側氧基-6,7-二氫吲

-5-甲酸甲酯(63.0mg，0.304mmol)之乙醇(1.0mL)溶液中，添加1N氫氧化鈉水溶液(0.91mL，0.91mmol)，於80℃攪拌2小時。於反應液中添加1N鹽酸而中和後，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥。減壓下餾除溶媒，獲得呈固體之標題化合物48.3mg(產率82%)。

(參考例23)N-(5-溴噻唑-2-基)-5-甲基-8-側氧基-6,7-二氫吲

-5-甲醯胺

使用參考例22中所獲得的5-甲基-8-側氧基-6,7-二氫吲

-5-甲酸(472mg，2.44mmol)，依據參考例1之方法，獲得呈固體之標題化合物628mg(產率73%)。

(參考例24)N-(5-溴-4-異丙基-噻唑-2-基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之5-溴-4-異丙基-噻唑-2-胺，依據參考例1之方法，獲得呈固體之標題化合物287mg(產率43%)。

(參考例25)5-溴-2-[(8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-羰基)胺基]噻唑-4-甲酸甲酯

使用市售之2-胺基-5-溴噻唑-4-甲酸甲酯，依據參考例1之方法，獲得呈非晶形狀物之標題化合物219mg(產率29%)。

(實施例1)8-側氧基-N-(5-苯基噻唑-2-基)-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

於市售之8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲酸(1.5g，8.4mmol)、Journal of Medicinal Chemistry 1983，26，1158-1163記載之5-苯基噻唑-2-胺(1.0g，5.7mmol)、N,N-二甲基吡啶-4-胺(0.14g，1.1mmol)及N,N-二異丙基乙基胺(2.5mL，14mmol)之二氯甲烷(50mL)溶液中，於室溫添加市售之2,4,6-三異丙基磺醯氯(2.5g，8.3mmol)，並攪拌3小時。於反應液中添加二氯甲烷並稀釋後，添加飽和碳酸氫鈉水溶液而中和洗淨。將有機層以無水硫酸鈉乾燥後，於減壓下餾除溶媒。將殘渣以矽膠管柱層析(二氯甲烷/甲醇=99/1-95/5)純化，獲得呈固體之標題化合物1.59g(產率83%)。

(實施例2)4-[2-[(8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-羰基)胺基]噻唑-5-基]苯甲酸甲酯

使用WO2012121168記載之4-(2-胺基噻唑-5-基)苯甲酸甲酯，依據實施例1之方法，獲得呈固體之標題化合物18.4g(產率54%)。

(實施例3)N-[5-[4-(二甲基胺甲醯基)苯基]噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用參考例11中所獲得的4-(2-胺基噻唑-5-基)-N,N-二甲基苯甲醯胺，依據實施例1之方法，獲得呈固體之標題化合物7.17g(產率75%)。

(實施例4)N-[5-(1,3-苯并二

呃-5-基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用參考例12中所獲得的5-(1,3-苯并二

呃-5-基)噻唑-2-胺，依據實施例1之方法，獲得呈固體之標題化合物130mg(產率62%)。

(實施例5)4-[2-[(8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-羰基)胺基]噻唑-5-基]苯甲酸

於實施例2中所獲得的4-[2-[(8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-羰基)胺基]噻唑-5-基]苯甲酸甲酯(383mg，0.969mmol)之乙醇(3mL)及水(2mL)之混合溶液中，添加1N氫氧化鈉水溶液(3.8mL，3.8mmol)，並於50℃攪拌4小時。於反應液中添加水，並以1N鹽酸中和，濾取析出的固體。獲得的固體以水洗淨後，乾燥，獲得呈固體之標題化合物326mg(產率88%)。

(實施例6)N-[5-(4-胺甲醯基苯基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

於實施例5中所獲得的4-[2-[(8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-羰基)胺基]噻唑-5-基]苯甲酸(17mg，0.045mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(1mL)溶液中，於室溫添加[二甲基胺基(三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧基)亞甲基]-二甲基-六氟磷酸銨(25mg，0.067mmol)、N,N-二異丙基乙基胺(39μL，0.22mmol)及7M氨甲醇溶液(64μL，0.45mmol)，並攪拌15小時。將反應液直接以矽膠管柱層析(二氯甲烷/50%甲醇乙酸乙酯溶液=95/5-90/10)純化，獲得標題化合物4.9mg(產率29%)。

(實施例7)N-[5-(4-氰基苯基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用參考例中所13獲得的4-(2-胺基噻唑-5-基)苯甲腈，依據實施例1之方法，獲得標題化合物9.0mg(產率60%)。

(實施例8)N-[5-[4-[2-(二甲基胺基)-2-側氧基-乙氧基]苯基]噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

於參考例16中所獲得的2-[4-[2-[(8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-羰基)胺基]噻唑-5-基]苯氧基]乙酸甲酯(84mg，0.197mmol)之四氫呋喃(8.0mL)及甲醇(3.0mL)之混合溶液中，於室溫添加5N氫氧化鈉水溶液(0.20mL，1.0mmol)，攪拌後，放置一晚。以5N鹽酸中和，減壓下餾除溶媒並獲得固體。於獲得的固體之N,N-二甲基甲醯胺(3mL)溶液中，於室溫添加N,N-二異丙基乙基胺 (52μL，0.30mmol)及2.0M二甲基胺四氫呋喃溶液(0.50mL,1.0mmol)後，添加[二甲基胺基(三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧基)亞甲基]二甲基六氟磷酸銨(42mg，0.11mmol)，並攪拌3小時。於反應液中添加二氯甲烷並稀釋後，添加飽和碳酸氫鈉水溶液而中和洗淨。將有機層以無水硫酸鈉乾燥後，於減壓下餾除溶媒。將殘渣以矽膠管柱層析(二氯甲烷/甲醇=99/1-95/5)純化，獲得呈固體之標題化合物39.1mg(產率89%)。

(實施例9)8-側氧基-N-[5-[4-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-基]-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

於市售之8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲酸(109mg，0.61mmol)、參考例9所獲得的5-[4-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-胺(127mg，0.488mmol)、3-羥基三唑[4,5-b]吡啶(128mg，0.941mmol)之二氯甲烷(3mL)溶液中，於室溫添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(352mg，1.84mmol)及N,N-二異丙基乙基胺(0.531mL，3.05mmol)，於室溫攪拌2小時。將反應液以二氯甲烷稀釋後，以水及飽和氯化鈉水溶液洗淨。將有機層以無水硫酸鈉乾燥後，過濾，於減壓下餾除溶媒。將殘渣以矽膠管柱層析(正己烷/乙酸乙酯溶液=3/1-0/1)純化，獲得呈固體之標題化合物74.3mg(產率29%)。

(實施例10)(5R)-8-側氧基-N-[5-[4-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-基]-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺及 (5S)-8-側氧基-N-[5-[4-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-基]-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用實施例9中所獲得的8-側氧基-N-[5-[4-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-基]-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺，以HPLC(管柱：YMC CHIRAL ART Cellulose-SB(5μm)250x30mmI.D.、流速：31.8ml/min、溶媒：正己烷/乙醇=70/30)進行光學分割。收集先溶出的第一高峰後，減壓下餾除溶媒，獲得呈固體之標題化合物(48mg，光學純度99.9%ee)。又，收集後溶出的第二高峰後，減壓下餾除溶媒，獲得呈固體之標題化合物(48mg，光學純度99.8%ee)。

(實施例11)N-[5-(4-三級丁氧基苯基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

於參考例1中所獲得的N-(5-溴噻唑-2-基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺(137mg，0.401mmol)、市售之(4-三級丁氧基苯基)硼酸(389mg，2.01mmol)、碳酸銫(670mg，2.06mmol)之混合物中，添加N,N-二甲基甲醯胺(2mL)及水(1mL)後，添加氯(2-二環己基膦-2’,4’,6’-三異丙基-1,1’-聯苯基)[2-(2’-胺基-1,1’-聯苯基)]鈀(II)(33.2mg，0.042mmol)，氮氣環境下，於90℃攪拌5小時。於反應液中添加水後，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，於減壓下餾除溶媒。將殘渣以矽膠管柱層析(正己烷/乙酸乙酯=3/1-0/1)純化，獲得呈固體之標題化合物63.3mg(產率39%)。

(實施例12)N-[5-(4-氯苯基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之4-氯苯基硼酸，依據實施例11之方法，獲得呈固體之標題化合物11.0mg(產率6.4%)。

(實施例13)N-[5-(3-氯苯基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之5-(3-氯苯基)噻唑-2-胺，依據實施例9之方法，獲得呈固體之標題化合物158mg(產率48%)。

(實施例14)N-[5-(2-氯苯基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之2-氯苯基硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物13.2mg(產率8.0%)。

(實施例15)N-[5-(3-氟苯基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之5-(3-氟苯基)噻唑-2-胺，依據實施例1之方法，獲得呈固體之標題化合物127mg(產率87%)。

(實施例16)N-[5-(4-氟苯基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之5-(4-氟苯基)噻唑-2-胺，依據實施例1之方法，獲得呈固體之標題化合物198mg(產率64%)。

(實施例17)N-[5-(2-氟苯基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之5-(2-氟苯基)噻唑-2-胺，依據實施例1之方法，獲得呈固體之標題化合物119mg(產率82%)。

(實施例18)8-側氧基-N-[5-(對甲苯基)噻唑]-2-基)-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之4-甲基苯基硼酸，依據實施例11之方法，獲得呈固體之標題化合物24.7mg(產率18%)。

(實施例19)N-[5-(鄰甲苯基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之2-甲基苯基硼酸，依據實施例11之方法，獲得呈固體之標題化合物16.6mg(產率11%)。

(實施例20)N-[5-(間甲苯基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之5-(間甲苯基)噻唑-2-胺，依據實施例9之方法，獲得標題化合物115mg(產率58%)。

(實施例21)8-側氧基-N-[5-[4-(三氟甲基)苯基]噻唑-2-基]-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之[4-(三氟甲基)苯基]硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物32.9mg(產率17%)。

(實施例22)N-[5-[4-(2-甲氧基苯基)苯基]噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之[4-(2-甲氧基苯基)苯基]硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物3.6mg(產率16%)。

(實施例23)8-側氧基-N-[5-[4-(對甲苯基)苯基]噻唑-2-基]-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之[4-(對甲苯基)苯基]硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物9.0mg(產率42%)。

(實施例24)N-[5-(2-萘基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之4,4,5,5-四甲基-2-(2-萘基)-1,3,2-二氧雜硼戊環，依據實施例11之方法，獲得標題化合物1.6mg(產率8.2%)。

(實施例25)8-側氧基-N-[5-[3-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-基]-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之[3-(三氟甲氧基)苯基]硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物9.0mg(產率43%)。

(實施例26)N-[5-(4-甲氧基苯基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之(4-甲氧基苯基)硼酸，依據實施例11之方法，獲得呈固體之標題化合物19.7mg(產率17%)。

(實施例27)N-[5-(3-甲氧基苯基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之(3-甲氧基苯基)硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物1.9mg(產率38%)。

(實施例28)N-[5-[2-甲基-4-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之[2-甲基-4-(三氟甲氧基)苯基]硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物4.2mg(產率19%)。

(實施例29)N-[5-[3-甲基-4-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之[3-甲基-4-(三氟甲氧基)苯基]硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物8.4mg(產率38%)。

(實施例30)N-[5-[3-氯-4-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之[3-氯-4-(三氟甲氧基)苯基]硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物2.8mg(產率12%)。

(實施例31)N-[5-[3-(羥基甲基)-4-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之[3-(羥基甲基)-4-(三氟甲氧基)苯基]硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物9.1mg(產率40%)。

(實施例32)N-[5-(4-苄氧基苯基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之(4-苄氧基苯基)硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物7.6mg(產率34%)。

(實施例33)N-[5-(4-異丙氧基苯基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之(4-異丙氧基苯基)硼酸，依據實施例11之方法，獲得呈固體之標題化合物29.0mg(產率24%)。

(實施例34)N-(4-甲基-5-苯基噻唑-2-基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之4-甲基-5-苯基噻唑-2-胺，依據實施例9之方法，獲得標題化合物160mg(產率82%)。

(實施例35)N-[5-(4-三級丁氧基苯基)-4-甲基噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

於參考例4所得的N-(5-溴-4-甲基噻唑-2-基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺(106mg，0.300mmol)、市售之(4-三級丁氧基苯基)硼酸(292mg，1.50mmol)、碳酸銫(596mg，1.83mmol)之混合物中，添加N,N-二甲基 甲醯胺(1.5mL)及水(1mL)後，添加氯(2-二環己基膦-2’,4’,6’-三異丙基-1,1’-聯苯基)[2-(2’-胺基-1,1’-聯苯基)]鈀(II)(25.0mg，0.032mmol)，並於氮氣環境下，於90℃攪拌5小時。於反應液中添加水後，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，於減壓下餾除溶媒。將殘渣以矽膠管柱層析(正己烷/乙酸乙酯=3/1-0/1)純化後，將獲得的固體以二乙基醚洗淨，獲得呈固體之標題化合物65.0mg(產率51%)。

(實施例36)N-[4-甲基-5-[4-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之[4-(三氟甲氧基)苯基]硼酸，依據實施例35之方法，獲得標題化合物72.0mg(產率49%)。

(實施例37)N-[5-[4-(羥基甲基)苯基]噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之[4-(羥基甲基)苯基]硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物5.3mg(產率29%)。

(實施例38)N-[5-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物0.6mg(產率2.7%)。

(實施例39)N-[5-[4-(二氟甲氧基)苯基]噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之[4-(二氟甲氧基)苯基]硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物7.0mg(產率35%)。

(實施例40)N-[5-(2,2-二氟-1,3-苯并二

呃-5-基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之(2,2-二氟-1,3-苯并二

呃-5-基)硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物9.4mg(產率45%)。

(實施例41)N-[5-(4-

啉并苯基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之4-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊環-2-基)苯基]

啉，依據實施例11之方法，獲得呈固體之標題化合物27.6mg(產率24%)。

(實施例42)N-[5-[4-(二甲基胺磺醯基)苯基]噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之[4-(二甲基胺磺醯基)苯基]硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物9.7mg(產率44%)。

(實施例43)N-[5-(4-苄氧基-3-氟苯基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之(4-苄氧基-3-氟苯基)硼酸，依據實施例11之方法，獲得呈固體之標題化合物62.8mg(產率33%)。

(實施例44)N-[5-(4-苄氧基-2-氟苯基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之(4-苄氧基-2-氟苯基)硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物9.7mg(產率42%)。

(實施例45)8-側氧基-N-[5-[4-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基]噻唑-2-基]-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之[4-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基]硼酸，依據實施例11之方法，獲得呈固體之標題化合物53.0mg(產率28%)。

(實施例46)8-側氧基-N-[5-(4-苯氧基苯基)噻唑-2-基]-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之(4-苯氧基苯基)硼酸，依據實施例11之方法，獲得呈固體之標題化合物53.0mg(產率29%)。

(實施例47)N-[5-(4-溴苯基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之5-(4-溴苯基)噻唑-2-胺，依據實施例9之方法，獲得呈固體之標題化合物755mg(產率59%)。

(實施例48)[4-[2-[(8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-羰基)胺基]噻唑-5-基]苯基]碳酸三級丁酯

使用市售之(4-三級丁氧基羰基氧基苯基)硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物1.0mg(產率4.3%)。

(實施例49)N-[5-(4-異丁氧基苯基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之(4-異丁氧基苯基)硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物6.5mg(產率32%)。

(實施例50)N-[5-(環己烯-1-基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之2-(環己烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊環，依據實施例11之方法，獲得呈固體之標題化合物13.8mg(產率13%)。

(實施例51)4-[2-[(8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-羰基)胺基]噻唑-5-基]-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯

使用市售之4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊環-2-基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯，依據實施例11之方法，獲得標題化合物7.7mg(產率35%)。

(實施例52)N-[5-(5-氯-6-異丁氧基-3-吡啶基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之(5-氯-6-異丁氧基-3-吡啶基)硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物3.2mg(產率15%)。

(實施例53)3-[2-[(8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-羰基)胺基]噻唑-5-基]-2,5-二氫吡咯-1-甲酸三級丁酯

使用市售之3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊環-2-基)-2,5-二氫吡咯-1-甲酸三級丁酯，依據實施例11之方法，獲得標題化合物7.6mg(產率35%)。

(實施例54)N-[5-(5-甲基-2-呋喃基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之4,4,5,5-四甲基-2-(5-甲基-2-呋喃基)-1,3,2-二氧雜硼戊環，依據實施例11之方法，獲得標題化合物7.3mg(產率43%)。

(實施例55)N-[5-(2,4-二甲基噻唑-5-基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之2,4-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊環-2-基)噻唑，依據實施例11之方法，獲得標題化合物3.6mg(產率19%)。

(實施例56)N-[5-(5-氯-2-噻吩基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之(5-氯-2-噻吩基)硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物1.0mg(產率5.2%)。

(實施例57)N-[5-(4-乙醯基苯基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之(4-乙醯基苯基)硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物6.2mg(產率33%)。

(實施例58)1-側氧基-N-[5-[4-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-基]-2,3-二氫吡咯啶-3-甲醯胺

使用市售之1-側氧基-2,3-二氫吡咯啶-3-甲酸，依據實施例9之方法，獲呈固體之得標題化合物71.9mg(產率29%)。

(實施例59)8-側氧基-N-[6-[4-(三氟甲氧基)苯基]-1,3-苯并噻唑-2-基]-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用參考例5中所獲得的N-(6-溴-1,3-苯并噻唑-2-基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺及市售之[4-(三氟甲氧基)苯基]硼酸，依據實施例11之方法，獲得呈固體之標題化合物59.5mg(產率46%)。

(實施例60)N-[6-[4-(二氟甲氧基)苯基]-1,3-苯并噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用參考例5中所獲得的N-(6-溴-1,3-苯并噻唑-2-基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺及市售之[4-(二氟甲氧基)苯基]硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物11.2mg(產率49%)。

(實施例61)N-[6-(2,2-二氟-1,3-苯并二

呃-5-基)-1,3-苯并噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用參考例5中所獲得的N-(6-溴-1,3-苯并噻唑-2-基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺及市售之(2,2-二氟-1,3-苯并二

呃-5-基)硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物12.6mg(產率54%)。

(實施例62)2-甲基-8-側氧基-N-[5-[4-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-基]-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

於參考例18中所獲得的2-溴-8-側氧基-N-[5-[4-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-基]-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺(42.8mg，0.0856mmol)、市售之2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三硼雜環己烷(0.127mL，0.908mmol)、碳酸鉀(184mg，1.33mmol)之混合物中，添加1,4-二

烷(1.5mL)及水(0.5mL)後，添加氯(2-二環己基膦-2’4’6’-三異丙基-1,1’-聯苯基)[2-(2’-胺基-1,1’-聯苯基)]鈀(II)(15.3mg，0.019mmol)，氮氣環境下，於100℃攪拌4小時。因原料殘存，再次重複相同的操作並確認原料的消失。於反應液中添加水後，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，於減壓下餾除溶媒。將殘渣以矽膠管柱層析(正己烷/乙酸乙酯9/1-1/1)純化，獲得呈固體之標題化合物5.6mg(產率15%)。

(實施例63)N-[5-(4-三級丁氧基苯基)噻唑-2-基]-2-甲基-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用參考例19中所獲得的N-(5-溴噻唑-2-基)-2-甲基-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺，依據實施例11之方法，獲得呈固體之標題化合物6.4mg(產率22%)。

(實施例64)2-氯-8-側氧基-N-[5-[4-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-基]-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

於參考例20中所獲得的2-氯-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲酸甲酯(66.2mg，0.291mmol)之乙醇(1mL)及四氫呋喃(1mL)混合溶液中，於室溫添加1N氫氧化鈉水溶液(0.5mL，0.5mmol)並攪拌2小時。於反應液中添加水後，添加1N鹽酸而作成酸性，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，於減壓下餾除溶媒。使用獲得的殘渣(羧酸化合物62mg)，依據實施例9之方法，獲得呈固體之標題化合物68.0mg(產率37%)。

(實施例65)5-甲基-8-側氧基-N-[5-[4-三氟甲氧基]苯基]噻唑-2-基]-6,7-二氫吲

-5-甲醯胺

於參考例23中所獲得的N-(5-溴噻唑-2-基)-5-甲基-8-側氧基-6,7-二氫吲

-5-甲醯胺(168mg，0.475mmol)、市售之[4-(三氟甲氧基)苯基]硼酸(588mg，2.86mmol)、碳酸銫(1.03g，3.16mmol)之混合物中，添加N,N-二甲基甲醯胺(2mL)及水(1mL)後，添加氯(2-二環己基膦 -2’4’6’-三異丙基-1,1’-聯苯基)[2-(2’-胺基-1,1’-聯苯基)]鈀(II)(38.6mg，0.049mmol)，並於氮氣環境下，於90℃攪拌4小時。於反應液中添加水後，以乙酸乙酯萃取。將有機層以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，於減壓下餾除溶媒。將殘渣以矽膠管柱層析(正己烷/乙酸乙酯=3/1-0/1)純化，獲得呈固體之標題化合物59.7mg(產率29%)。

(實施例66)5-甲基-8-側氧基-N-[5-(對甲苯基)噻唑-2-基]-6,7-二氫吲

-5-甲醯胺

使用市售之4-甲基苯基硼酸，依據實施例65之方法，獲得標題化合物8.6mg(產率47%)。

(實施例67)5-甲基-N-[5-(間甲苯基)噻唑-2-基]-8側氧基-6,7-二氫吲

-5-甲醯胺

使用市售之3-甲基苯基硼酸，依據實施例65之方法，獲得標題化合物8.1mg(產率44%)。

(實施例68)N-[5-(2,2-二氟-1,3-苯并二

呃-5-基)噻唑-2-基]-5-甲基-8-側氧基-6,7-二氫吲

-5-甲醯胺

使用市售之(2,2-二氟-1,3-苯并二

呃-5-基)硼酸，依據實施例65之方法，獲得標題化合物0.6mg(產率3.0%)。

(實施例69)N-[5-(4-異丙氧基苯基)噻唑-2-基]-5-甲基-8-側氧基-6,7-二氫吲

-5-甲醯胺

使用市售之(4-異丙氧基苯基)硼酸，依據實施例65之方法，獲得標題化合物6.8mg(產率33%)。

(實施例70)5-甲基-N-[5-[3-甲基-4-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫吲

-5-甲醯胺

使用市售之[3-甲基-4-(三氟甲氧基)苯基]硼酸，依據實施例65之方法，獲得標題化合物8.3mg(產率37%)。

(實施例71)N-[5-[3-氯-4-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-基]-5-甲基-8-側氧基-6,7-二氫吲

-5-甲醯胺

使用市售之[3-氯-4-(三氟甲氧基)苯基]硼酸，依據實施例65之方法，獲得標題化合物5.0mg(產率21%)。

(實施例72)5-甲基-8-側氧基-N-[5-[3-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-基]-6,7-二氫吲

-5-甲醯胺

使用市售之[3-(三氟甲氧基)苯基]硼酸，依據實施例65之方法，獲得標題化合物7.8mg(產率36%)。

(實施例73)8-側氧基-N-[4-[4-(三氟甲氧基)苯基]苯基]-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用參考例2中所獲得的N-(4-溴苯基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺(1.21g，3.62mmol)及市售之4-(三氟甲氧基苯基)硼酸，依據實施例11之方法，獲得呈固體之標題化合物1.29g(產率86%)。

(實施例74)N-[4-(2,2-二氟-1,3-苯并二

呃-5-基)苯基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用參考例2中所獲得的N-(4-溴苯基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺及市售之(2,2-二氟-1,3-苯并二

呃-5-基)硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物10.4mg(產率50%)。

(實施例75)N-[4-[4-(二氟甲氧基)苯基]苯基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用參考例2中所獲得的N-(4-溴苯基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺及市售之[4-(二氟甲氧基)苯基]硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物11.5mg(產率58%)。

(實施例76)N-[4-[3-氯-4-(三氟甲氧基)苯基]苯基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用參考例2中所獲得的N-(4-溴苯基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺及市售之[3-氯-4-(三氟甲氧基)苯基]硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物7.0mg(產率31%)。

(實施例77)3-溴-8-側氧基-N-[4-[4-(三氟甲氧基)苯基]苯基]-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

於實施例73中所獲得的8-側氧基-N-[4-[4-(三氟甲氧基)苯基]苯基]-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺(150mg，0.363mmol)之二氯甲烷(15mL)溶液中，於室溫添加N-溴琥珀醯亞胺(45.9mg，0.258mmol)並攪拌4.5小時。將反應液減壓濃縮，將獲得的殘渣以矽膠管柱層析(正己烷/10%甲醇乙酸乙酯溶液=3/1-1/1)純化，獲得呈固體之標題化合物93.6mg(產率52%)。

(實施例78)N-[2-氟-4-[4-(三氟甲氧基)苯基]苯基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用參考例3中所獲得的N-(4-溴-2-氟-苯基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺及市售之[4-(三氟甲氧基)苯基]硼酸，依據實施例11之方法，獲得呈固體之標題化合物73.4mg(產率91%)。

(實施例79)N-[4-[3-氯-4-(三氟甲氧基)苯基]-2-氟苯基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用參考例3中所獲得的N-(4-溴-2-氟苯基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺及市售之[3-氯-4-(三氟甲氧基)苯基]硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物5.0mg(產率21%)。

(實施例80)N-[4-(4-三級丁氧基苯基)-2-氟苯基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用參考例3中所獲得的N-(4-溴-2-氟苯基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺，依據實施例11之方法，獲得呈固體之標題化合物75.0mg(產率84%)。

(實施例81)N-[2-甲基-4-[4-(三氟甲氧基)苯基]苯基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用參考例6中所獲得的N-(4-溴-2-甲基苯基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺及市售之[4-(三氟甲氧基)苯基]硼酸，依據實施例11之方法，獲得呈固體之標題化合物184mg(產率92%)。

(實施例82)8-側氧基-N-[5-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2-吡啶基]-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用參考例7中所獲得的N-(5-溴-2-吡啶基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺及市售之[4-(三氟甲氧基)苯基]硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物4.0mg(產率17%)。

(實施例83)8-側氧基-N-[2-[4-(三氟甲氧基)苯基]-1,3-苯并三唑-6-基]-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用參考例8中所獲得的N-(2-氯-1,3-苯并噻唑-6-基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺及市售之[4-(三氟甲氧基)苯基]硼酸，依據實施例11之方法，獲得呈固體之標題化合物86.8mg(產率58%)。

(實施例84)N-[5-(2,2-二氟-1,3-苯并二

呃-5-基)-4-甲基噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫吲

-5-甲醯胺

使用市售之(2,2-二氟-1,3-苯并二

呃-5-基)硼酸，依據實施例35之方法，獲得標題化合物10.4mg(產率48%)。

(實施例85)N-[5-(4-苄氧基-3-氟苯基)-4-甲基-噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之(4-苄氧基-3-氟苯基)硼酸，依據實施例35之方法，獲得標題化合物10.4mg(產率44%)。

(實施例86)N-[5-(4-異丁氧基苯基)-4-甲基-噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之(4-異丁氧基苯基)硼酸，依據實施例35之方法，獲得標題化合物12.2mg(產率58%)。

(實施例87)N-[5-(5-氯-6-異丁氧基-3-吡啶基)-4-甲基噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之(5-氯-6-異丁氧基-3-吡啶基)硼酸，依據實施例35之方法，獲得標題化合物6.6mg(產率29%)。

(實施例88)N-[4-甲基-5-[4-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基]噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之[4-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基]硼酸，依據實施例35之方法，獲得標題化合物13.2mg(產率59%)。

(實施例89)N-[4-甲基-5-[3-甲基-4-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之[3-甲基-4-(三氟甲氧基)苯基]硼酸，依據實施例35之方法，獲得標題化合物7.5mg(產率33%)。

(實施例90)4-[4-甲基-2-[(8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-羰基)胺基]噻唑-5-基]-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯

使用市售之4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊環-2-基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯，依據實施例35之方法，獲得標題化合物12.8mg(產率56%)。

(實施例91)N-[5-[4-(二氟甲氧基)苯基]-4-甲基噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用參考例5中所獲得的N-(6-溴-1,3-苯并噻唑-2-基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺及市售之[4-(二氟甲氧基)苯基]硼酸，依據實施例35之方法，獲得標題化合物10.9mg(產率52%)。

(實施例92)N-[6-[3-甲基-4-(三氟甲氧基)苯基]-1,3-苯并噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用參考例5中所獲得的N-(6-溴-1,3-苯并噻唑-2-基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺及市售之[3-甲基-4-(三氟甲氧基)苯基]硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物14.0mg(產率58%)。

(實施例93)N-[6-(4-氯苯基)-1,3-苯并噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用參考例5中所獲得的N-(6-溴-1,3-苯并噻唑-2-基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺及市售之4-氯苯基硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物2.8mg(產率13%)。

(實施例94)N-[6-(4-氟苯基)-1,3-苯并噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用參考例5中所獲得的N-(6-溴-1,3-苯并噻唑-2-基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺及市售之4-氟苯基硼酸，依據實施例11之方法，獲得標題化合物13.0mg(產率64%)。

(實施例95)N-[5-(4-苯甲醯基苯基)噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用市售之4-苯甲醯基苯基硼酸，依據實施例11之方法，獲得呈固體之標題化合物75.4mg(產率28%)。

(實施例96)N-[4-異丙基-5-[4-(三氟甲氧基)苯基]噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用參考例24中所獲得的N-(5-溴-4-異丙基-噻唑-2-基)-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺及市售之[4-(三氟甲氧基)苯基]硼酸，依據實施例35之方法，獲得標題化合物112.2mg(產率66%)。

(實施例97)N-[5-[1-(2-甲基丙醯基)-3,6-二氫-2H-吡啶-4-基]噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

於實施例51中所獲得的4-[2-[(8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-羰基)胺基]噻唑-5-基]-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(139mg，0.315mmol)之二氯甲烷溶液(3mL)中，於室溫添加三氟乙酸(0.6mL)，並攪拌2小時。減壓下濃縮反應液，添加二氯甲烷而數次共沸，獲得油狀物(226mg)。於獲得的油狀物(68mg)及N,N-二異丙基乙基胺(0.10mL)之二氯甲烷溶液(3mL)中，冰冷下，添加2-甲基丙醯氯(0.032mL，0.30mmol)而攪拌2小時。將反應液以二氯甲烷稀釋後，以水及飽和食鹽水洗淨。將有機層以無水硫酸鈉乾燥後，於減壓下餾除溶媒。將殘渣以矽膠層析(正己烷/乙酸乙酯=4/1-1/2)純化，獲得呈固體之標題化合物50.3mg(產率81%)。

(實施例98)N-[5-[1-(異丙基胺甲醯基)-3,6-二氫-2H-吡啶-4-基]噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

使用實施例51中所獲得的4-[2-[(8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-羰基)胺基]噻唑-5-基]-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯及2-異氰酸異丙酯(2-isocyanatopropane)，依據實施例97之方法，獲得呈固體之標題化合物30.6mg(產率48%)。

(實施例99)2-[(8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-羰基)胺基]-5-[4-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基]噻唑-4-甲酸甲酯

使用參考例25中所獲得的5-溴-2-[(8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-羰基)胺基]噻唑-4-甲酸甲酯及市售之[4-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基]硼酸，依據實施例35之方法，獲得標題化合物42.3mg(產率31%)。

(實施例100)5-(4-三級丁氧基苯基)-2-[(8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-羰基)胺基]噻唑-4-甲酸甲酯

使用參考例25中所獲得的5-溴-2-[(8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-羰基)胺基]噻唑-4-甲酸甲酯及市售之(4-三級丁氧基苯基)硼酸，依據實施例35之方法，獲得標題化合物45.8mg(產率38%)。

(實施例101)(5R)-N-[5-(4-三級丁氧基苯基)-4-甲基噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺及(5S)-N-[5-(4-三級丁氧基苯基)-4-甲基噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺

將實施例35中所獲得的N-[5-(4-三級丁氧基苯基)-4-甲基噻唑-2-基]-8-側氧基-6,7-二氫-5H-吲

-5-甲醯胺及以YMC CHIRAL ART Cellulose-SC(10μm)250x10mmI.D.、流速：2.3ml/min、溶媒：正己烷/乙醇=40/60)進行光學分割。收集先溶出的第一高峰後，減壓下餾除溶媒，獲得呈非晶形狀物之標題化合物(53mg，光學純度>99%ee)。又，收集後溶出的第二高峰後，減壓 下餾除溶媒，獲得呈非晶形狀物之標題化合物(53mg，光學純度>99%ee)。

於以下之表呈示於參考例及實施例合成的化合物之結構式及物理化學資料。

[試驗例1]自人類iPS細胞往胰島素產生細胞的分化促進效果之評價

自人類iPS細胞往胰島素產生細胞的分化促進效果(藥效)之評價系統，係參考周知情報(非專利文獻6)而構築。又，於各分化階段所使用的培養基亦參考上述公知情報而作成(對於階段1~5，各自使用非專利文獻6記載之分化培養基A~E(Medium A~E)。惟，關於分化培養基E，使用不含GLP-1受體促效劑及菸鹼醯胺者)。

為了評價化合物之藥效，使用實施例1之化合物作為陽性對照，使用終濃度0.1%之二甲基亞碸(DMSO)(SIGMA、D2650)作為無化合物處理的對照。全部之化合物以DMSO溶解，並以添加於培養基後之化合物之終濃度成為2μM及10μM的方式，調製2種類之化合物溶液。於以下之評價，化合物溶液係以DMSO之終濃度成為0.1%的方式添加於培養基。

首先，依據非專利文獻6之「自人類iPS細胞往胰臟β細胞的分化誘導」之方法，自人類iPS細胞Toe株(醫藥基盤研究所)誘導至培養第7日的細胞(交換為分化培養基C而2日後(自FOXA2陽性原始腸管細胞往PDX1陽性胰前驅細胞之分化過程的細胞)，回收細胞後，使用 Bambanker(日本Genetics)，以1x10⁷個細胞/mL/管，於液體氮中保存，製作評價用細胞存料(stock)。於藥效評價之開始時，將本細胞存料溶解，懸浮於階段3用之分化培養基C(DMEM high glucose(Life technologies、11965092)、0.25μM SANT-1、0.1μM LDN193189(Stemgent、04-0074)、10μM SB431542,2μM視網酸(Stemgent、04-0021)、1%B27 serum free supplement(Life technologies、17504044)後，以1x10⁵個細胞/孔接種於以Synthemax II(Corning、#5656)塗布的96孔盤(Corning、#3340)。2日培養後，去除培養基，將添加化合物或僅添加DMSO的新階段3用之分化培養基C以100μL/孔添加。2日培養後，去除培養基，將添加化合物或僅添加DMSO的新階段4用之分化培養基D(DMEM high glucose、0.1μM LDN193189、5μM TGF-β type I receptor kinase inhibitor II(Calbiochem 616452)、0.3μM(-)-indolactam V(Enzo life science ALX-420-011-C300)、1%B27 serum free supplement)以100μL/孔添加。培養2~3日後，去除培養基，將添加化合物或僅添加DMSO的新階段5用之分化培養基E(不含GLP-1受體促效劑及菸鹼醯胺；Knockout DMEM/F-20(Life technologies、12660012)、1%B27 serum free supplement)以200μL/孔添加。培養2日後，去除培養基，以150μL/孔添加4%多聚甲醛磷酸緩衝液(Wako、163-20145)，置於室溫30~60分鐘而將細胞固定。以包含1%之Triton X-100(Sigma、T8787)的磷酸緩衝液(PBS)(Takara、T9181)置於室溫15分鐘後，以 PBS-T(Takara、T9183)洗淨，使用以PBS-T稀釋的20%Blocking One(Nacalai tesque、Tokyo、Japan)，於室溫進行封阻1小時。去除Blocking One後，將以20%Blocking One稀釋200倍的天竺鼠抗胰島素抗體(Abcam、ab7842)以50μL/孔添加，於4℃放置一晚。以PBS-T洗淨3次後，添加以20%Blocking One稀釋1000倍的Alexa Fluor 548標識抗天竺鼠抗體(Life Technologies、A11075)及6-二甲脒基-2-苯基吲哚(DAPI)(Roche Diagnostics、Basel、Switzerland)而置於室溫2小時。以PBS-T洗淨3次後，進行細胞之螢光影像的解析。

細胞影像的攝影係使用高通量顯微影像擷取暨分析系統(High Content Imaging System)Opera Phenix或Operetta(PerkinElmer)進行。再者，藉由使用Harmony(PerkinElmer)的解析，而計測胰島素陽性細胞及DAPI陽性總細胞數，算出胰島素陽性細胞數相對於總細胞數的比率(胰島素陽性細胞率)。使用實施例1之化合物作為陽性對照，使用終濃度0.1%之DMSO作為化合物無處理對照。將10μM之實施例1之化合物中的胰島素陽性細胞率(30例之平均胰島素陽性細胞率、13%)之自化合物無處理對照(30例之平均胰島素陽性細胞率、4.9%)所增加的增加分設為100%，以此為基準，將各化合物各濃度之胰島素陽性細胞率增加分換算為百分率(%)，作為活性值。化合物之一次評價，包含陽性對照之各化合物係以2μM及10μM之2種類濃度，使用複數個孔來實施。藉由將兩濃度中的活性值之和與陽性對照比較，而判斷 活性強度。兩濃度中的活性值之和，與化合物無處理對照相比，為顯著地高，將較陽性對照低的情形記載為+，將與陽性對照同等的情形記載為++，將較陽性對照高的情形記載為+++。關於活性強度為弱的化合物，係以0.4、2、5或10μM之濃度，使用複數個孔而實施再評價，將與化合物無處理對照相比，顯然活性值為高的，或是在任一濃度的活性值顯示為15%以上，且藉由與化合物無處理對照比較的t檢定顯示有意義差(P<0.05)的化合物，判斷為有效。針對顯示比較強的藥效的化合物，為了調查濃度依存的效果，以0.01~10μM之濃度，使用複數個孔而實施二次評價，使用SigmaPlot(Systat Software)，算出EC50(於將10μM之實施例1之化合物之藥效設為100%的情形，可發揮相當於其50%的藥效的化合物之濃度)。

將試驗例1之結果示於表3及表4。

由試驗例1之結果可知，與未添加化合物的情形比較，本發明之化合物或其鹽可有效率地使多潛能幹細胞分化為胰島素產生細胞。

[試驗例2]UCHL1活性化之評價

UCHL1之酵素活性之評價系統，係參考周知情報(非專利文獻，PNAS，110，3489-3494，2013記載之方法)而構築。為了確認評價系統成立，確認藉由為 UCHL1抑制劑的最終濃度50μM之LDN-57444(SIGMA，L4170)而酵素活性被抑制。使用二甲基亞碸(DMSO)(SIGMA、D2650)作為化合物無處理對照(以下，記載為對照)，全部之被驗化合物係溶解於DMSO而使用。DMSO及被驗化合物溶液係以最終濃度成為2%的方式添加於酵素反應液。為了酵素活性測定，首先將UCHL1蛋白質(R&D、E-340-025)溶解於緩衝液{50mM Tris-HCl(pH7.4)、1mM二硫蘇糖醇(SIGMA、D9779)、1mM EDTA(GIBCO、#15575)}使最終濃度成為25nM，於4℃保存。於96孔盤(Thermo Scientific、#236105)分注UCHL1蛋白質溶液40ul/孔後，添加DMSO或以最終濃度成為10μM的方式添加被驗化合物溶液，再於室溫以最終濃度成為570nM的方式添加10μl之螢光標識基質泛素-AMC(ubiquitin-AMC)(7-醯胺基-4-甲基香豆素)(Enzo、BML-SE211)，而調製酵素反應液，並開始酵素反應。於酵素反應開始10分鐘後及2小時後，測定藉由螢光標識基質之水解所生成的AMC之螢光量(激發波長：350nm、螢光波長：440nm)，將兩者相減而算出光量增加分。

AMC之螢光量之測定係使用Envision(PerkinElmer)進行。將對照之螢光量增加分設為100%，以此為基準，將各被驗化合物之螢光量增加分換算為百分率(%)而作為酵素活性值。

酵素活性值(%)={(各被驗化合物之螢光量增加分)/(對照之螢光量增加分)}×100

對照實驗及被驗化合物添加實驗係各自以n=6及n=3來實施，其平均值作為酵素活性值而表示。

將試驗例2之結果示於表5。

由試驗例2之結果可知，本發明之化合物或其鹽將UCHL1加以活性化。因此，本發明之化合物可使用於藉由將UCHL1活性化而能夠治療或預防的疾病(例如，神經變性疾病等)之治療或預防。

[試驗例3]使用ZDF大鼠的糖尿病病態之改善作用之評價

對8週齡之雄性ZDF病態大鼠(日本Charles River股份有限公司)於4週間(第1日至第28日)反覆經口投予實施例9記載之化合物後，於第28日實施糖負荷試驗，而調查糖尿病病態改善效果。ZDF病態大鼠係於第0日，測定隨時血糖、胰島素值、及體重，實施多變量所致的塊分割，並進行分組。於雄性ZDF瘦大鼠4隻(瘦組)、ZDF病態大鼠0.5w/v%甲基纖維素400溶液(以下，0.5%MC)投予組8隻(媒劑組)、及ZDF病態大鼠實施例9化合物投予組8隻(實施例9組)、之合計3組進 行實驗。實施例9記載之化合物係懸浮於0.5%MC，一日一次，以成為10mg/kg的方式經口投予。

糖負荷試驗係如下述方式實施。即，自糖負荷試驗前日之傍晚至次日早上絕食，於糖負荷前30分鐘進行化合物之最終投予。將大塚糖液50%(大塚製藥股份有限公司)以4mL/kg經口投予，實施2g/kg之糖負荷。於糖負荷前、及糖負荷後之60分鐘的時間點，進行尾靜脈採血，並進行血糖值的測定。

血糖值係使用葡萄糖C2-Test Wako(和光純藥工業股份有限公司，Cat No.437-90902，700次用)來測定。將各個體之自糖負荷後60分鐘之測定值減去糖負荷前之測定值的差的值(△血漿葡萄糖)示於表6。

由試驗例3之結果可知，本發明之化合物或其鹽係顯示改善糖尿病病態的效果。因此，本發明之化合物或其鹽可為要於溫血動物(尤其是人類)中治療或預防糖尿病而使用。

Claims (34)

1. 一種通式(I)所表示的化合物或其鹽，

   

   [式中，各取代基係如以下定義：R¹：氫原子、鹵素原子、或C1-C6烷基；R²：氫原子、或C1-C6烷基；R³：萘基、1,3-苯并二

   

   呃基(benzodioxolyl)、2,2-二鹵-1,3-苯并二

   

   呃基、C5-C10環烯基、可經1至4個獨立選自取代基群α的取代基取代的苯基、或可經1至4個獨立選自取代基群γ的取代基取代的5或6員環雜環基；取代基群α：鹵素原子、氰基、羧基、苯氧基、苯甲醯基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵C1-C6烷基、鹵C1-C6烷氧基、羥基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6烷氧基、(C1-C6烷基)羰基、(C1-C6烷氧基)羰基、(C1-C6烷氧基)羰基氧基、苯基C1-C6烷氧基、5或6員環非芳香族雜環基、可經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺甲醯基、可經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺甲醯基所取代的C1-C6烷氧基、經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺磺醯基、及可經1至4個獨立選自取代基群β的取代基取代的苯基；取代基群β：C1-C6烷基、及C1-C6烷氧基； 取代基群γ：鹵素原子、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、(C1-C6烷基)羰基、(C1-C6烷氧基)羰基、及可經1個或2個之C1-C6烷基取代的胺甲醯基；n：0、或1；A：下述式(i)~(iv)之任一者所表示的基：

   

   (式中，各取代基係如以下定義：‧及＊：表示鍵結肢，‧係與通式(I)之醯胺基之氮原子結合，＊係與R³結合R⁴：氫原子、C1-C6烷基、鹵C1-C6烷基、或(C1-C6烷氧基)羰基；R⁵：氫原子、鹵素原子、或C1-C6烷基；Y：N或CH)]。
2. 如請求項1之化合物或其鹽，其中R¹為氫原子、氯原子、或甲基。
3. 如請求項1之化合物或其鹽，其中R²為氫原子、或甲基。
4. 如請求項1之化合物或其鹽，其中A為式(i)所表示的基，R⁴為氫原子、C1-C6烷基、鹵C1-C6烷基、或(C1-C6烷氧基)羰基。
5. 如請求項4之化合物或其鹽，其中R⁴為氫原子、甲基、或三氟甲基。
6. 如請求項1之化合物或其鹽，其中A為式(ii)所表示的 基，R⁵為氫原子、鹵素原子、或C1-C6烷基。
7. 如請求項6之化合物或其鹽，其中R⁵為氫原子、氟原子、或甲基。
8. 如請求項1之化合物或其鹽，其中A為式(iii)所表示的基，R⁵為氫原子、氟原子、或甲基。
9. 如請求項1之化合物或其鹽，其中A為式(iv)所表示的基。
10. 如請求項1之化合物或其鹽，其中n為1。
11. 如請求項1之化合物或其鹽，其中R³為可經1個或2個獨立選自包含2,2-二氟-1,3-苯并二

    

    呃基、1-三級丁氧基羰基-3,6-二氫-2H-吡啶-4-基、或氟原子、氯原子、三氟甲基、三級丁氧基、三氟甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基、苄氧基、及苯氧基的群組的取代基取代的苯基。
12. 如請求項1之化合物或其鹽，其係選自以下之化合物群之任一者：

    
13. 如請求項1之化合物或其鹽，其係以下式表示：

    
14. 如請求項1之化合物之光學異構物或其鹽，其係以下式表示：

    
15. 如請求項1之化合物或其鹽，其係以下式表示：

    
16. 如請求項1之化合物或其鹽，其係以下式表示：

    
17. 如請求項1之化合物或其鹽，其係以下式表示：

    
18. 如請求項1之化合物或其鹽，其係以下式表示：

    
19. 如請求項1之化合物或其鹽，其係以下式表示：

    
20. 如請求項1之化合物之光學異構物或其鹽，其係以下式表示：

    
21. 如請求項1之化合物或其鹽，其係以下式表示：

    
22. 如請求項1之化合物或其鹽，其係以下式表示：

    
23. 如請求項1之化合物或其鹽，其係以下式表示：

    
24. 如請求項1至23中任一項之化合物或其鹽，其係用以使多潛能幹細胞分化為胰島素產生細胞。
25. 一種多潛能幹細胞之往胰島素產生細胞的分化誘導劑，其含有如請求項1至23中任一項之化合物或其鹽。
26. 一種如請求項1至23中任一項之化合物或其鹽之用途，其係用以使多潛能幹細胞分化為胰島素產生細胞。
27. 一種用以在體外使多潛能幹細胞分化為胰島素產生細胞之方法，其使用如請求項1至23中任一項之化合物或其鹽。
28. 一種醫藥組成物，其含有如請求項1至23中任一項之化合物或其藥學上可容許的鹽作為有效成分。
29. 如請求項28之醫藥組成物，其用於糖尿病或神經變性疾病之治療及/或預防。
30. 如請求項29之醫藥組成物，其中糖尿病或神經變性疾病為第1型糖尿病、第2型糖尿病、帕金森氏病、或阿茲海默氏症。
31. 一種如請求項1至23中任一項之化合物或其藥學上可容許的鹽之用途，其係用以製造糖尿病或神經變性疾病之治療及/或預防用的醫藥。
32. 如請求項31之用途，其中糖尿病或神經變性疾病為第1型糖尿病、第2型糖尿病、帕金森氏病、或阿茲海默氏症。
33. 一種用於糖尿病或神經變性疾病之治療及/或預防用的方法中的使用之如請求項1至23中任一項之化合物或其藥學上可容許的鹽。
34. 如請求項33之化合物或其藥學上可容許的鹽，其中糖尿病或神經變性疾病為第1型糖尿病、第2型糖尿病、帕金森氏病、或阿茲海默氏症。