TWI816680B - 經細胞之選擇性分離用或細胞培養用聚合物被覆的基體 - Google Patents

經細胞之選擇性分離用或細胞培養用聚合物被覆的基體 Download PDF

Info

Publication number
TWI816680B
TWI816680B TW107123766A TW107123766A TWI816680B TW I816680 B TWI816680 B TW I816680B TW 107123766 A TW107123766 A TW 107123766A TW 107123766 A TW107123766 A TW 107123766A TW I816680 B TWI816680 B TW I816680B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
group
polymer
ligand
substrate
cells
Prior art date
Application number
TW107123766A
Other languages
English (en)
Other versions
TW201920293A (zh
Inventor
北野博巳
中路正
臼井友輝
西野泰斗
岸岡高広
Original Assignee
國立大學法人富山大學
日商日產化學股份有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 國立大學法人富山大學, 日商日產化學股份有限公司 filed Critical 國立大學法人富山大學
Publication of TW201920293A publication Critical patent/TW201920293A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI816680B publication Critical patent/TWI816680B/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/50—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link
    • C07K7/54—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring
    • C07K7/60—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring the cyclisation occurring through the 4-amino group of 2,4-diamino-butanoic acid
    • C07K7/62—Polymyxins; Related peptides
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3202—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the carrier, support or substrate used for impregnation or coating
    • B01J20/3204—Inorganic carriers, supports or substrates
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3268—Macromolecular compounds
    • B01J20/327—Polymers obtained by reactions involving only carbon to carbon unsaturated bonds
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3268—Macromolecular compounds
    • B01J20/3272—Polymers obtained by reactions otherwise than involving only carbon to carbon unsaturated bonds
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3268—Macromolecular compounds
    • B01J20/3272—Polymers obtained by reactions otherwise than involving only carbon to carbon unsaturated bonds
    • B01J20/3274—Proteins, nucleic acids, polysaccharides, antibodies or antigens
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3285—Coating or impregnation layers comprising different type of functional groups or interactions, e.g. different ligands in various parts of the sorbent, mixed mode, dual zone, bimodal, multimodal, ionic or hydrophobic, cationic or anionic, hydrophilic or hydrophobic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F112/00—Homopolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by an aromatic carbocyclic ring
    • C08F112/34—Monomers containing two or more unsaturated aliphatic radicals
    • C08F112/36—Divinylbenzene
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F220/00—Copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and only one being terminated by only one carboxyl radical or a salt, anhydride ester, amide, imide or nitrile thereof
    • C08F220/02—Monocarboxylic acids having less than ten carbon atoms; Derivatives thereof
    • C08F220/10—Esters
    • C08F220/34—Esters containing nitrogen, e.g. N,N-dimethylaminoethyl (meth)acrylate
    • C08F220/36—Esters containing nitrogen, e.g. N,N-dimethylaminoethyl (meth)acrylate containing oxygen in addition to the carboxy oxygen, e.g. 2-N-morpholinoethyl (meth)acrylate or 2-isocyanatoethyl (meth)acrylate
    • C08F220/365—Esters containing nitrogen, e.g. N,N-dimethylaminoethyl (meth)acrylate containing oxygen in addition to the carboxy oxygen, e.g. 2-N-morpholinoethyl (meth)acrylate or 2-isocyanatoethyl (meth)acrylate containing further carboxylic moieties
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F220/00—Copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and only one being terminated by only one carboxyl radical or a salt, anhydride ester, amide, imide or nitrile thereof
    • C08F220/02—Monocarboxylic acids having less than ten carbon atoms; Derivatives thereof
    • C08F220/10—Esters
    • C08F220/40—Esters of unsaturated alcohols, e.g. allyl (meth)acrylate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09D—COATING COMPOSITIONS, e.g. PAINTS, VARNISHES OR LACQUERS; FILLING PASTES; CHEMICAL PAINT OR INK REMOVERS; INKS; CORRECTING FLUIDS; WOODSTAINS; PASTES OR SOLIDS FOR COLOURING OR PRINTING; USE OF MATERIALS THEREFOR
    • C09D133/00—Coating compositions based on homopolymers or copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by only one carboxyl radical, or of salts, anhydrides, esters, amides, imides, or nitriles thereof; Coating compositions based on derivatives of such polymers
    • C09D133/04—Homopolymers or copolymers of esters
    • C09D133/06—Homopolymers or copolymers of esters of esters containing only carbon, hydrogen and oxygen, the oxygen atom being present only as part of the carboxyl radical
    • C09D133/10—Homopolymers or copolymers of methacrylic acid esters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09D—COATING COMPOSITIONS, e.g. PAINTS, VARNISHES OR LACQUERS; FILLING PASTES; CHEMICAL PAINT OR INK REMOVERS; INKS; CORRECTING FLUIDS; WOODSTAINS; PASTES OR SOLIDS FOR COLOURING OR PRINTING; USE OF MATERIALS THEREFOR
    • C09D133/00—Coating compositions based on homopolymers or copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by only one carboxyl radical, or of salts, anhydrides, esters, amides, imides, or nitriles thereof; Coating compositions based on derivatives of such polymers
    • C09D133/04—Homopolymers or copolymers of esters
    • C09D133/14—Homopolymers or copolymers of esters of esters containing halogen, nitrogen, sulfur or oxygen atoms in addition to the carboxy oxygen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/20—Material Coatings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
    • C12N5/0662—Stem cells
    • C12N5/0663—Bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSC)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
    • C12N2533/30—Synthetic polymers

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本發明係提供一種在表面的至少一部分被覆有包含下述式(1a)及式(1b)所示之結構單元的聚合物(P1)的附有配體之基體；及其原材料，以及其製造方法；(式中，R1 、R2 、X、Y、L、Q1 、Q2 、Q3 、m1、m2及n係如申請專利範圍及說明書所記載)。

Description

經細胞之選擇性分離用或細胞培養用聚合物被覆的基體
本發明係有關於一種經包含顯示細胞非黏著性之結構單元與顯示細胞黏著性之結構單元的聚合物被覆的基體及其原材料，以及其製造方法。尤其係有關於一種前述顯示細胞黏著性之結構單元包含對特定的細胞可發揮作為配體之作用的胜肽、抗體、蛋白質或低分子化合物的經細胞之選擇性分離用或細胞培養用聚合物被覆的基體及其製造方法。
迄今已有人報導各種利用對特定的細胞可發揮作為配體之作用的胜肽、抗體、蛋白質或低分子化合物等，使細胞選擇性地黏著，而利用其細胞選擇性的細胞分離方法或分離材料。例如，有人報導一種將淋巴毒素固定於96孔板盤或塑膠珠等而得的擔體及使用該擔體而使具有淋巴毒素之受體的細胞選擇性地吸附於擔體的方法(例如參照專利文獻1)。
此外，有人報導一種細胞的分離方法，其特徵為由以下步驟所構成：藉由使具有在待分離之細胞表面所顯現之與抗原之結合性的單株抗體或多株抗體等，與含有羧基之分子量10000以下的化合物形成共價鍵而得到修飾抗體之步驟；使含有目標細胞之細胞懸浮液等與修飾抗體反應，使修飾抗體結合於目標細胞之步驟；藉由將所得之結合有修飾抗體的細胞液，與表面含有胺基或亞胺基的水不溶性擔體進行處理使目標細胞結合於擔體，而去除其他細胞等之步驟；及藉由適當的方法僅使目標細胞由上述擔體解離之步驟(例如參照專利文獻2)。於所述分離方法中，作為用來回收結合有修飾抗體的細胞之表面含有胺基或亞胺基的水不溶性擔體，具體而言係使用使聚乙烯二丙烯酸酯與聚乙烯亞胺含浸於不織布，再藉由電子束照射使其接枝而成的擔體。
再者，有人報導一種細胞選擇過濾器，其特徵為對不織布固定胜肽或蛋白質而成，該不織布係由纖維所構成，該纖維係至少具有芳香族環及/或聚烯烴鏈，於此芳香族環及/或聚烯烴鏈，羰基碳之α位的碳及/或位於β位的碳係鍵結有至少2個以上之鹵素或擬鹵素取代基，且平均纖維徑為1μm以上100μm以下；該胜肽或蛋白質係具有可形成構成細胞特有的重鏈或輕鏈之可變區的胺基酸序列中之互補性決定區的胺基酸序列(例如參照專利文獻3)等。 [先前技術文獻] [專利文獻]
[專利文獻1]　日本特開平6-32800號公報 　　[專利文獻2]　日本特開平7-113799號公報 　　[專利文獻3]　日本特開平8-201384號公報
[發明所欲解決之課題]
然而，此等習知技術有以下問題：配體對基體(珠粒、板盤、過濾器等)固定力不足，或者因細胞對擔持配體之化合物(聚合物)或基材本身的非特異性黏著而損及配體的細胞選擇性。 [解決課題之手段]
本案發明人等迄此針對對基體的黏著性優良，而且具有細胞等生物物質的附著抑制能力的塗覆材料重複多次研究。而且，基於到目前為止的見解而發現：經與顯示細胞非黏著性之結構單元共同包含顯示細胞黏著性之結構單元的聚合物被覆的基體，不會因細胞對聚合物或基材本身的非特異性黏著而損及細胞選擇性，可發揮優良的細胞選擇性培養能力及分離能力，遂完成本發明。 　　亦即，本發明如下：
[1]　一種附有配體之基體，其係在表面的至少一部分被覆有包含下述式(1a)及式(1b)所示之結構單元的聚合物(P3)；[式中，R1 及R2 分別獨立地表示碳原子數1至5之直鏈烷基，X表示氫原子或碳原子數1至5之直鏈烷基，Y表示羧酸根陰離子(-COO- 基)或磺酸根陰離子(-SO3 - 基)，L表示配體，Q1 及Q2 分別獨立地表示酯鍵、磷酸二酯鍵、醯胺鍵、碳原子數1至10之直鏈或者分支伸烷基或可經取代之伸苯基，或者由此等之組合所構成的二價基，Q3 表示包含1,2,3-三唑環骨架之二價有機基，m1及m2分別獨立地表示1至200之整數，n分別獨立地表示1至10之整數]。
[2]　一種附有配體之基體，其表面的至少一部分係經包含顯示細胞非黏著性之結構單元與含有配體之結構單元的聚合物(P2)被覆。
[3]　如上述[1]或[2]之附有配體之基體，其中前述配體係選自由胜肽、抗體、蛋白質及低分子化合物所成群組。
[4]　如上述[3]之附有配體之基體，其中前述胜肽包含Gln-Gln-Gly-Trp-Phe之序列。
[5]　一種基體，其表面的至少一部分係經包含顯示細胞非黏著性之結構單元與顯示細胞黏著性之結構單元的聚合物(P1)被覆。
[6]　如上述[1]～[5]中任一項之基體，其為細胞分離用。
[7]　如上述[1]～[5]中任一項之基體，其為細胞培養用。
[8]　一種基體，其表面的至少一部分係經包含顯示細胞非黏著性之結構單元與含有碳-碳三鍵或疊氮基之結構單元的聚合物(P4)被覆。
[9]　一種基體，其係在表面的至少一部分被覆有包含下述式(1a)及式(1c)所示之結構單元的聚合物(P5)；(式中，R1 、R2 、X、Y、Q1 、Q2 、m1、m2及n係與上述[1]相同，Z表示包含碳-碳三鍵或疊氮之基)。
[10]　如上述[1]～[9]中任一項之基體，其中前述基體為培養皿、基板、多孔質膜、粒子或過濾器。
[11]　一種組成物，其包含含有下述式(1a)及式(1c)所示之結構單元的聚合物(P5)及溶媒；(式中，R1 、R2 、X、Y、Z、Q1 、Q2 、m1、m2及n係與上述[9]相同)。
[12]　一種附有配體之基體的製造方法，其包含使如上述[8]或[9]之基體接觸含有碳-碳三鍵或疊氮基的配體之步驟。
[13]　一種附有配體之基體的製造方法，其包含：將如上述[11]之組成物塗佈於基體，而製造聚合物(P5)被覆基體之步驟；及，接著使前述被覆基體接觸含有碳-碳三鍵或疊氮基的配體之步驟。
[14]　一種方法，其係使表面的至少一部分經包含顯示細胞非黏著性之結構單元與含有碳-碳三鍵或疊氮基之結構單元的聚合物(P4)被覆的基體接觸含有疊氮基或碳-碳三鍵的配體，而對基體賦予細胞黏著性。
[15]　如上述[6]之基體，其係由包含至少2種以上之細胞的細胞混合液中，將至少1種細胞選擇性地分離。
[16]　一種細胞分離方法，其係使用如上述[1]～[5]中任一項之基體。
[17]　如上述[7]之基體，其係由包含至少2種以上之細胞的細胞混合液中，選擇性地培養至少1種細胞。
[18]　一種細胞培養方法，其係使用如上述[1]～[5]中任一項之基體。
[19]　如上述[1]之附有配體之基體，其中聚合物(P3)進一步包含下述式(1d)所示之結構單元：(式中，R3 分別獨立地表示碳原子數1至5之直鏈烷基，X表示氫原子或碳原子數1至5之直鏈烷基，Q4 表示酯鍵、磷酸二酯鍵、醯胺鍵、碳原子數1至10之直鏈或者分支伸烷基或可經取代之伸苯基，或者由此等之組合所構成的二價基，m3表示1至200之整數)。
[20]　如上述[9]之基體，其中聚合物(P5)進一步包含下述式(1d)所示之結構單元：(式中，R3 分別獨立地表示碳原子數1至5之直鏈烷基，X表示氫原子或碳原子數1至5之直鏈烷基，Q4 表示酯鍵、磷酸二酯鍵、醯胺鍵、碳原子數1至10之直鏈或者分支伸烷基或可經取代之伸苯基，或者由此等之組合所構成的二價基，m3表示1至200之整數)。
[21]　如上述[11]之組成物，其中聚合物(P5)進一步包含下述式(1d)所示之結構單元：(式中，R3 分別獨立地表示碳原子數1至5之飽和直鏈烷基，X表示氫原子或碳原子數1至5之直鏈烷基，Q4 表示酯鍵、磷酸二酯鍵、醯胺鍵、碳原子數1至10之直鏈或者分支伸烷基或可經取代之伸苯基，或者由此等之組合所構成的二價基，m3表示1至200之整數)。 [發明之效果]
本發明之經包含顯示細胞非黏著性之結構單元與顯示細胞黏著性之結構單元的聚合物被覆的基體，不會因細胞對聚合物或基體本身的非特異性黏著而損及細胞選擇性，可發揮優良的細胞選擇性培養能力及分離能力。尤其是透過經前述顯示細胞黏著性之結構單元包含對特定的細胞可發揮作為配體之作用的胜肽、抗體、蛋白質或低分子化合物的聚合物被覆的基體具有顯示細胞非黏著性之結構單元，聚合物對基體的黏著性優良，而且除了配體部分外，亦使聚合物或基體本身呈細胞非黏著性，而不會損及配體的細胞選擇性，可發揮優良的細胞選擇性培養及細胞分離能力。
[實施發明之形態]
≪用語的說明≫ 　　本發明中所使用之用語，除非另外特別明述，否則具有以下定義。
於本發明中，「鹵素原子」係指氟原子、氯原子、溴原子或碘原子。
於本發明中，「烷基」係指非環式或者環式飽和脂肪族烴之一價基。作為「碳原子數1至5之直鏈或者分支烷基」，可舉出例如甲基、乙基、n-丙基、異丙基、n-丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、n-戊基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基或1-乙基丙基。其中「碳原子數1至5之直鏈烷基」為甲基、乙基、n-丙基、n-丁基或n-戊基。
於本發明中，「炔基」係指直鏈或者分支之包含至少1個碳-碳三鍵的不飽和脂肪族烴之一價基。作為「碳原子數2至5之炔基」，可舉出例如乙炔基、炔丙基、3-丁炔基或4-戊炔基。
於本發明中，「酯鍵」係指-C(=O)-O-或者　-O-C(=O)-；「磷酸二酯鍵」係指-O-P(=O)(-O- )-O-；「醯胺鍵」係指-NHC(=O)-或者-C(=O)NH-；「醚鍵」係指　　-O-；「胺基鍵」係指-NH-；「羰基鍵」係指-C(=O)-基；「硫醚鍵」係指-S-。
於本發明中，「可經取代之伸苯基」係指「伸苯基」或「經取代之伸苯基」。作為「伸苯基」，可舉出1,4-伸苯基、1,3-伸苯基或1,2-伸苯基，其中較佳為1,4-伸苯基。「經取代之伸苯基」可舉出經選自鹵素原子、碳原子數1至5之直鏈或者分支烷基等之至少1個取代基取代的1,4-伸苯基、1,3-伸苯基或1,2-伸苯基。
於本發明中，「伸烷基」係指直鏈或者分支之飽和脂肪族烴之二價基。作為「碳原子數1至10之直鏈或者分支伸烷基」的實例，可舉出亞甲基、伸乙基、伸丙基、三亞甲基、四亞甲基、1-甲基伸丙基、2-甲基伸丙基、二甲基伸乙基、乙基伸乙基、五亞甲基、1-甲基-四亞甲基、2-甲基-四亞甲基、1,1-二甲基-三亞甲基、1,2-二甲基-三亞甲基、2,2-二甲基-三亞甲基、1-乙基-三亞甲基、六亞甲基、八亞甲基及十亞甲基等，此等當中，較佳為伸乙基、伸丙基、八亞甲基及十亞甲基，更佳為例如伸乙基、伸丙基、三亞甲基、四亞甲基等碳原子數1至5之直鏈或者分支伸烷基，特佳為伸乙基或伸丙基。
於本發明中，(甲基)丙烯酸酯化合物係指丙烯酸酯化合物與甲基丙烯酸酯化合物此兩者。例如(甲基)丙烯酸係指丙烯酸與甲基丙烯酸。
於本發明中，作為細胞，可舉出例如纖維母細胞、骨髓細胞、B淋巴球、T淋巴球、嗜中性球、紅血球、血小板、巨噬細胞、單核球、骨細胞、骨髓細胞、外被細胞、樹狀細胞、角質細胞、脂肪細胞、間葉細胞、上皮細胞、表皮細胞、內皮細胞、血管內皮細胞、肝實質細胞、軟骨細胞、卵丘細胞、神經系統細胞、神經膠細胞、神經元、寡樹突細胞、小神經膠質細胞、星狀膠細胞、心臟細胞、食道細胞、肌肉細胞(例如平滑肌細胞或骨骼肌細胞)、胰臟β細胞、黑色素細胞、造血前驅細胞、單核細胞、胚胎幹細胞(ES細胞)、胚胎腫瘤細胞、胚胎生殖幹細胞、人工多能性幹細胞(iPS細胞)、神經幹細胞、造血幹細胞、間葉系幹細胞、肝幹細胞、胰幹細胞、肌肉幹細胞、生殖幹細胞、腸幹細胞、癌幹細胞、毛囊幹細胞、巨核細胞、源自CD34陽性脊髓之巨核細胞及各種細胞株(例如HCT116、Huh7、HEK293(人類胎兒腎細胞)、HeLa(人類子宮頸癌細胞株)、HepG2(人類肝癌細胞株)、UT7/TPO(人類白血病細胞株)、CHO(中國倉鼠卵巢細胞株)、MDCK、MDBK、BHK、C-33A、HT-29、AE-1、3D9、Ns0/1、Jurkat、NIH3T3、PC12、S2、Sf9、Sf21、High Five、Vero)等，此等當中較佳為間葉系幹細胞。
所稱細胞黏著性，一般而言係指可促進細胞黏著之蛋白質(例如纖維黏連蛋白或玻璃黏連蛋白、層黏連蛋白等)吸附於任意基材，該吸附蛋白質與細胞膜上的整合素受體相互作用所產生的黏著；或存在於細胞膜上的受體之一的鈣黏素彼此相互作用而於細胞間產生的黏著。然而，本發明中的細胞黏著性，係與一般的細胞黏著性些微不同，係指藉由預先將可與特異性地表現之細胞膜上的受體相互作用的配體固定於基材，並使其與存在於特定之細胞的膜上的受體相互作用，來捕捉細胞之意。 　　另一方面，細胞非黏著性係指細胞對基材不會產生響應・相互作用之意，於本發明中亦同。一般而言，此種基材表面通常也不會吸附蛋白質。其原因在於，大部分的細胞黏著，在細胞-基材間的黏著中為經由吸附於基材上之蛋白質的整合素依存性黏著之故。從而，就細胞非黏著性的基材建構而言，可謂需對基材表面賦予不會與生物物質響應之機能。
≪本發明之說明≫ 　　本發明係有關於一種表面的至少一部分經包含顯示細胞非黏著性之結構單元與顯示細胞黏著性之結構單元的聚合物(P1)被覆的基體。基體只要是在至少一部分的表面具備至少1500nm以下，較佳為10～1300nm，更佳為10～1100nm，再更佳為10～1000nm，特佳為10～500nm之膜厚的塗膜者則不特別限制，較佳具備於該基體之總表面積的10%以上，更佳為20%以上，再更佳為30%以上，特佳為40%以上，最佳為50%以上。例如為平板狀之基體時，較佳具備於其中一單面之總表面積的10%以上，更佳為30%以上，再更佳為50%以上，最佳為80%以上。
本發明之實施形態中，作為可衍生聚合物所含之顯示細胞非黏著性之結構單元的單體的實例，可舉出乙烯性不飽和單體。作為乙烯性不飽和單體的實例，可舉出選自由(甲基)丙烯酸及其酯；乙酸乙烯酯；乙烯吡咯啶酮；乙烯；乙烯醇；以及彼等之親水性官能性衍生物所成群組的1種或2種以上之乙烯性不飽和單體。
作為親水性官能性衍生物之親水性官能性基的實例，可舉出磷酸、膦酸及彼等之酯結構；甜菜鹼結構；醯胺結構；烷二醇殘基；胺基；以及亞磺醯基等。
於此，磷酸及其酯結構係指下述式：[於此，R11 、R12 及R13 彼此獨立地為氫原子或有機基(例如碳原子數1至5之直鏈或者分支烷基等)] 　　所示之基，膦酸及其酯結構係指下述式：[於此，R14 及R15 彼此獨立地為氫原子或有機基(例如碳原子數1至5之直鏈或者分支烷基等)] 　　所示之基。作為具有此種結構之乙烯性不飽和單體的實例，可舉出(甲基)丙烯酸酸性膦醯氧基乙酯、乙烯基膦酸等。
甜菜鹼結構係指具有四級銨型陽離子結構與酸性陰離子結構此兩性中心之化合物的一價或二價基，可舉出例如磷醯膽鹼基：。作為具有此種結構之乙烯性不飽和單體的實例，可舉出2-甲基丙烯醯氧乙基磷醯膽鹼(MPC)等。
醯胺結構係指下述式：[於此，R16 、R17 及R18 彼此獨立地為氫原子或有機基(例如甲基、羥甲基或羥乙基等)] 　　所示之基。作為具有此種結構之乙烯性不飽和單體的實例，可舉出(甲基)丙烯醯胺、N-(羥甲基)(甲基)丙烯醯胺等。再者，具有此種結構之單體係揭示於例如日本特開2010-169604號公報等。
烷二醇殘基係指烷二醇(HO-Alk-OH；此處Alk為碳原子數1至10之直鏈或者分支伸烷基)之單側末端或兩末端的羥基與其他化合物進行縮合反應後所殘留的伸烷氧基(-Alk-O-)，亦包含伸烷氧基單元重複形成的聚(伸烷氧)基。作為具有此種結構之乙烯性不飽和單體的實例，可舉出(甲基)丙烯酸2-羥乙酯、甲氧基聚乙二醇(甲基)丙烯酸酯等。再者，具有此種結構之單體係揭示於例如日本特開2008-533489號公報等。
胺基係指式：-NH2 、-NHR19 或-NR20 R21 [於此，R19 、R20 及R21 彼此獨立地為有機基(例如碳原子數1至5之直鏈或者分支烷基等)]所示之基。本說明書中的胺基包含經四級化或氯化之胺基。作為具有此種結構之乙烯性不飽和單體的實例，可舉出(甲基)丙烯酸二甲基胺基乙酯、(甲基)丙烯酸2-(三級丁基胺基)乙酯、甲基丙烯醯基膽鹼氯化物等。
亞磺醯基係指下述式：[於此，R22 為有機基(例如碳原子數1至10之有機基，較佳為具有1個以上之羥基的碳原子數1至10之烷基等)] 　　所示之基。作為具有此種結構之聚合物，可舉出日本特開2014-48278號公報等所揭示之共聚物。
本發明之實施形態中，作為顯示細胞非黏著性之結構單元，較佳為下述式(1a)所示之結構單元。
式中，R1 及R2 分別獨立地表示碳原子數1至5之直鏈烷基，X表示氫原子或碳原子數1至5之直鏈烷基，Y表示羧酸根陰離子(-COO- 基)或磺酸根陰離子(-SO3 - 基)，Q1 表示酯鍵、磷酸二酯鍵、醯胺鍵、碳原子數1至10之直鏈或者分支伸烷基或可經取代之伸苯基，或者由此等之組合所構成的二價基，m1表示1至200之整數，n表示1至10之整數。
其中，較佳為R1 及R2 分別獨立地表示甲基或乙基，X表示氫原子或甲基，Y表示羧酸根陰離子(-COO- 基)或磺酸根陰離子(-SO3 - 基)，Q1 表示酯鍵、醯胺鍵、碳原子數1至10之直鏈或者分支伸烷基，或者由此等之組合所構成的二價基，m1表示1至200之整數，n表示1至10之整數的上述式(1a)所示之結構單元；更佳為R1 及R2 表示甲基，X表示氫原子或甲基，Y表示羧酸根陰離子(-COO- 基)，Q1 表示-C(=O)-O-、-Alk1 -或-C(=O)-O-Alk1 -，m1表示1至200之整數，n表示1至10之整數的上述式(1a)所示之結構單元。此外，Alk1 為碳原子數1至10之直鏈或者分支伸烷基，較佳為碳原子數1至5之直鏈或者分支伸烷基，更佳為亞甲基、伸乙基或伸丙基。
作為可衍生上述式(1a)所示之結構單元的單體，可舉出例如N-甲基丙烯醯氧乙基-N,N-二甲基銨-α,N-甲基羧基甜菜鹼等。
本發明之實施形態中，聚合物所含之顯示細胞黏著性之結構單元較佳為含有配體之結構單元。亦即，被覆基體的表面的至少一部分之聚合物較佳為包含顯示細胞非黏著性之結構單元與含有配體之結構單元的聚合物(P2)。
本發明之實施形態中，顯示細胞黏著性之結構單元更佳為下述式(1b)所示之結構單元。從而，被覆基體的表面的至少一部分之聚合物較佳為包含上述式(1a)所示之結構單元與下述式(1b)所示之結構單元的聚合物(P3)。
式中，X表示氫原子或碳原子數1至5之直鏈烷基，L表示配體，Q2 表示酯鍵、磷酸二酯鍵、醯胺鍵、碳原子數1至10之直鏈或者分支伸烷基或可經取代之伸苯基，或者由此等之組合所構成的二價基，Q3 表示包含1,2,3-三唑環骨架之二價有機基，m2表示1至200之整數，n表示1至10之整數。
其中，較佳為X表示氫原子或甲基，L表示配體，Q2 表示酯鍵或醯胺鍵，Q3 表示包含下述式(2a)或(2b)：所示之結構的二價基，m2表示1至200之整數，n表示1至10之整數的上述式(1b)所示之結構單元。尤以X表示氫原子或甲基，L表示配體，Q2 表示酯鍵或醯胺鍵，Q3 表示下述式(2a-1)、(2a-2)、(2b-1)或(2b-2)：(式中，S1 及S2 表示由疊氮-炔加成環化反應所衍生的二價基)的上述式(1b)所示之結構單元為更佳。
本發明之實施形態中，作為上述式(1b)所示之結構單元，更佳為下述式(1b-1)至(1b-4)所示之結構單元。
式中，X表示氫原子或碳原子數1至5之直鏈烷基，L表示配體，Q2 表示酯鍵、磷酸二酯鍵、醯胺鍵、碳原子數1至10之直鏈或者分支伸烷基或可經取代之伸苯基，或者由此等之組合所構成的二價基，S1 及S2 分別獨立地表示單鍵、酯鍵、醯胺鍵、醚鍵、胺基鍵、羰基鍵、硫醚鍵、碳原子數1至5之直鏈或者分支伸烷基或由此等之組合所構成的二價基，m2表示1至200之整數，n表示1至10之整數。
其中，更佳為X表示氫原子或甲基，L表示配體，Q2 表示酯鍵或醯胺鍵，S1 及S2 分別獨立地表示單鍵、酯鍵或碳原子數1至5之直鏈或者分支伸烷基，m2表示1至200之整數，n表示1至10之整數的上述式(1b-1)至(1b-4)所示之結構單元；再更佳為上述式(1b-1)或(1b-2)所示之結構單元，特佳為上述式(1b-1)所示之結構單元。
本發明之實施形態中，配體係選自由胜肽、抗體、蛋白質及低分子化合物所成群組。可舉出例如胜肽激素(例如胰島素)、神經胜肽等胜肽；IgG、IgA、IgM等各種抗體；纖維蛋白原、牛血清白蛋白(BSA)、蛋白白蛋白、人類白蛋白、各種球蛋白、血清γ-球蛋白、β-脂蛋白質、溶菌酶、纖維黏連蛋白、胃蛋白酶、組蛋白、膠原蛋白、各種凝集素等蛋白質；糖(例如葡萄糖、半乳糖、甘露糖、果糖)、核苷、核苷酸等低分子化合物。
本發明之實施形態中，配體較佳為胜肽，更佳為包含Gln-Gln-Gly-Trp-Phe-Pro(序列編號1)或Phe-Asp-Ala-Ile-Ala-Glu-Ile-Gly-Asn-Gln-Leu-Tyr-Leu-Phe-Lys-Asp-Gly-Lys-Tyr-Trp(序列編號2)之序列的胜肽。
亦即，本發明之實施形態中，被覆基體的表面的至少一部分之聚合物(P3)為包含下述式(1a)及式(1b)：(式中，R1 、R2 、X、Y、L、Q1 、Q2 、Q3 、m1、m2及n係如上述)所示之結構單元的聚合物，特佳為包含下述式(1a)及式(1b-1)：(式中，R1 、R2 、X、Y、L、Q1 、Q2 、S1 、S2 、m1、m2及n係如上述)所示之結構單元的聚合物。
本案之聚合物(P3)亦可進一步包含下述式(1d)所示之結構單元。包含本結構單元之聚合物可望對尤其是表面具有羥基之基體(例如玻璃基板)賦予密接性。
式中，R3 分別獨立地表示碳原子數1至5之直鏈烷基，X表示氫原子或碳原子數1至5之直鏈烷基，Q4 表示酯鍵、磷酸二酯鍵、醯胺鍵、碳原子數1至10之直鏈或者分支伸烷基或可經取代之伸苯基，或者由此等之組合所構成的二價基，m3表示1至200之整數。
本發明之實施形態中，作為上述式(1d)所示之結構單元，較佳為下述式(1d-1)所示之結構單元。
式中，R3 、X及m3係如上述式(1d)中的定義。
作為可衍生上述式(1d)所示之結構單元的單體，可舉出例如對苯乙烯基三甲氧基矽烷等含伸苯基之單體或3-(甲基)丙烯醯氧丙基三甲氧基矽烷、4-(甲基)丙烯醯氧丙基三乙氧基矽烷、3-(甲基)丙烯醯氧丙基三異丙氧基矽烷等包含由酯鍵與碳數1至10之直鏈或者分支伸烷基所構成的二價基的單體。
本發明之實施形態中，聚合物(P1)至(P3)，在不損及本發明目的的範圍內，除顯示細胞非黏著性之結構單元(例如上述式(1a)所示之結構單元)與顯示細胞黏著性之結構單元(例如上述式(1b)所示之結構單元)外，亦可包含例如如上述式(1d)所示之結構單元的任意結構單元。聚合物(P1)至(P3)的分子量只要為數千至數百萬左右即可，較佳為5,000至5,000,000。更佳為5,000至2,000,000，再更佳為5,000至1,000,000。又，聚合物(P1)至(P3)中之各結構單元的排列不特別限制，聚合物(P1)至(P3)可為隨機、嵌段、交替及/或接枝共聚物任一種。聚合物(P1)至(P3)中顯示細胞非黏著性之結構單元的比例，尤為聚合物(P3)中之式(1a)所示之結構單元的比例，以總結構單元為基準，為3莫耳%至80莫耳%。此外，聚合物(P3)亦可包含2種以上之式(1a)所示之結構單元。 　　聚合物(P1)至(P3)中顯示細胞黏著性之結構單元的比例，尤為聚合物(P3)中之式(1b)所示之結構單元的比例，以總結構單元為基準，為3莫耳%至80莫耳%。此外，聚合物(P3)亦可包含2種以上之式(1b)所示之結構單元。
作為除上述式(1d)所示之結構單元外，亦可含於聚合物(P1)至(P3)之可衍生任意的結構單元之單體，可舉出(甲基)丙烯酸、(甲基)丙烯酸酯化合物、(甲基)丙烯醯胺化合物、乙烯基化合物、苯乙烯化合物、馬來醯亞胺化合物、馬來酸酐、(甲基)丙烯腈等，具體而言可舉出丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、丙烯酸異丙酯、丙烯酸三級丁酯、丙烯酸異丁酯、丙烯酸n-己酯、丙烯酸環己酯、丙烯酸苯甲酯、丙烯酸苯酯、丙烯酸烯丙酯等丙烯酸酯化合物、甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸異丙酯、甲基丙烯酸三級丁酯、丙烯酸異丁酯、甲基丙烯酸n-己酯、甲基丙烯酸環己酯、甲基丙烯酸苯甲酯、甲基丙烯酸苯酯、甲基丙烯酸烯丙酯等甲基丙烯酸酯化合物、N-甲基丙烯醯胺、N-乙基丙烯醯胺、N-苯甲基丙烯醯胺、N-苯基丙烯醯胺等丙烯醯胺化合物、甲基丙烯醯胺、N-甲基甲基丙烯醯胺、N-乙基甲基丙烯醯胺、N-苯甲基甲基丙烯醯胺、N-苯基甲基丙烯醯胺等甲基丙烯醯胺化合物、乙基乙烯基醚、苯甲基乙烯基醚、乙酸乙烯酯等乙烯基化合物、苯乙烯、甲氧基苯乙烯等苯乙烯化合物、馬來醯亞胺、N-甲基馬來醯亞胺、N-苯基馬來醯亞胺、N-環己基馬來醯亞胺等馬來醯亞胺化合物。
本發明之實施形態中，表面的至少一部分經上述聚合物(P1)至(P3)被覆的基體可使用於細胞分離及培養用。 　　又，本發明之基體可作為可由包含至少2種以上之細胞的細胞混合液中，選擇性地分離出至少1種細胞的基體使用。 　　所稱細胞混合液，只要是包含至少2種以上之細胞的液體則不特別限定，可舉出例如血液、誘導分化後之細胞群、經未分化維持培養之幹細胞中所含之進行過無秩序分化之細胞的混合液、hMSC之HEK293 cells的混合液等。 　　較佳為可由不同的3種當中選擇性地分離出1或2種細胞，更佳為可由不同的2種當中選擇性地分離出1種細胞。 　　例如，可依較佳之順序，以播種量的90質量%以上、70質量%以上、50質量%以上、30質量%以上、10質量%以上的比例分離出欲由混合液中分離的細胞。
本發明之實施形態中，表面的至少一部分經上述聚合物(P1)至(P3)被覆的基體可藉由將上述聚合物(P1)至(P3)塗佈於基體來調製。將上述聚合物(P1)至(P3)塗佈於基體的手段不特別限制，可適宜採用周知之手段。又，「塗佈」亦包含將基體浸漬於聚合物或包含聚合物之溶液，或將聚合物或包含聚合物之溶液澆注於基體，並靜置既定時間等的方法。浸漬或靜置的時間或溫度可依據基體的材質或聚合物的種類而適宜選擇；例如以30秒至24小時，較佳為1分鐘至3小時，以10～35℃，較佳為周圍溫度(例如25℃)來實施。藉此，基體的表面的至少一部分，較佳為整個基體表面，便經上述聚合物(P1)至(P3)被覆。
本發明其他實施形態中，聚合物(P2)及(P3)之含有配體之結構單元，通常可藉由準備包含含有特定的反應性基之結構單元的聚合物，並使該聚合物中之特定的反應性基及包含可與該反應性基反應之基的配體反應，而導入於聚合物。此種反應為本業者所熟知者，不特別限定，典型上為點擊反應。其中較佳為利用疊氮-炔加成環化反應的點擊反應。又，此種反應亦可在被覆於基體的聚合物上進行。
本發明其他實施形態中，藉由利用疊氮-炔加成環化反應的點擊反應，含有配體之結構單元可藉由使其接觸(i)含有碳-碳三鍵之結構單元與含有疊氮基的配體，或者藉由使其接觸(ii)含有疊氮基之結構單元與含有碳-碳三鍵的配體，而導入於聚合物。
從而，本發明又有關於一種基體，其表面的至少一部分係經包含顯示細胞非黏著性之結構單元與含有碳-碳三鍵或疊氮基之結構單元的聚合物(P4)被覆。
本發明之實施形態中，就含有碳-碳三鍵或疊氮基之結構單元而言，較佳為下述式(1c)所示之結構單元。從而，被覆基體的表面的至少一部分之聚合物可為包含上述式(1a)所示之結構單元與下述式(1c)所示之結構單元的聚合物(P5)。
式中，X表示氫原子或碳原子數1至5之直鏈烷基，Z表示包含碳-碳三鍵或疊氮基之基，Q2 表示酯鍵、磷酸二酯鍵、醯胺鍵、碳原子數1至10之直鏈或者分支伸烷基或可經取代之伸苯基，或者由此等之組合所構成的二價基，m2表示1至200之整數，n表示1至10之整數。
Z之「包含碳-碳三鍵之基」係指例如乙炔或下述式：所示之二苯甲基環辛炔等包含碳-碳三鍵骨架之基。作為此種基，可舉出例如、式：-Sa1 -Ra1 基(式中，Sa1 為單鍵、酯鍵、醯胺鍵、醚鍵、胺基鍵、羰基鍵、硫醚鍵、碳原子數1至5之直鏈或者分支伸烷基，或者由此等之組合所構成的二價基，Ra1 為碳原子數2至5之炔基或二苯甲基環辛炔)。
Z之「包含疊氮之基」係指包含疊氮(-N3 )之基。作為此種基，可舉出例如、式：-Sa2 -N3 基(式中，Sa2 為單鍵、酯鍵、醯胺鍵、醚鍵、胺基鍵、羰基鍵、硫醚鍵、碳原子數1至5之直鏈或者分支伸烷基，或者由此等之組合所構成的二價基)。
其中，較佳為X表示氫原子或甲基，Z表示上述式：-Sa2 -N3 基(於此，Sa2 表示碳原子數1至5之直鏈或者分支伸烷基)，Q2 表示酯鍵或醯胺鍵，m2表示1至200之整數，n表示1至10之整數的上述式(1c)所示之結構單元。作為可衍生此種上述式(1c)所示之結構單元的單體，可舉出例如甲基丙烯酸3-疊氮丙酯等。
又，較佳為X表示氫原子或甲基，Z表示上述式：-Sa1 -Ra1 基(於此，Sa1 表示碳原子數1至5之直鏈或者分支伸烷基，Ra1 表示碳原子數2至5之炔基)，Q2 表示酯鍵或醯胺鍵，m2表示1至200之整數，n表示1至10之整數的上述式(1c)所示之結構單元。作為可衍生此種上述式(1c)所示之結構單元的單體，可舉出例如甲基丙烯酸炔丙酯等。
與本案之聚合物(P3)相同，本案之聚合物(P5)亦可進一步包含下述式(1d)所示之結構單元。
式中，R3 、X、Q4 及m3係如上述。式(1d)所示之結構單元的較佳形態或可衍生式(1d)所示之結構單元的單體的實例亦與上述聚合物(P3)之情形相同。
本發明之實施形態中，例如聚合物(P5)只要是包含上述式(1a)所示之結構單元、上述式(1c)所示之結構單元與如視情況而定之任意的結構單元(例如上述式(1d)所示之結構單元)的聚合物則無特別限制。聚合物(P5)中，除上述式(1d)所示之結構單元外，尚有可衍生任意的結構單元之單體的實例係與上述聚合物(P3)之情形相同。聚合物(P5)較佳為將可衍生上述式(1a)所示之結構單元的單體、可衍生上述式(1c)所示之結構單元的單體與視情況而定之任意的單體進行自由基聚合而得者。
聚合物(P5)中之式(1a)所示之結構單元的比例，以總結構單元為基準，為3莫耳%至80莫耳%。此外，聚合物(P5)亦可包含2種以上之式(1a)所示之結構單元。
聚合物(P5)中之式(1c)所示之結構單元的比例為3莫耳%至80莫耳%。此外，聚合物(P5)亦可包含2種以上之式(1c)所示之結構單元。
作為聚合反應中的溶媒，可舉出水、有機溶媒或此等組合而成的混合溶媒。溶媒可依據供予聚合反應之單體、聚合起始劑及目標聚合物的種類或性質來適宜選擇，作為其實例可舉出水；丙酮、甲基乙基酮、甲基異丁基酮、甲基異戊基酮、甲基戊基酮、環己酮等酮類；甲醇、乙醇、異丙醇、乙二醇單甲基醚、乙二醇單乙基醚、丙二醇單甲基醚、丙二醇單乙基醚等醇類；乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁酯、丙酸甲酯、乳酸甲酯、乳酸乙酯等酯類；四氫呋喃、1,4-二噁烷、乙二醇二甲基醚等醚類；己烷、庚烷、辛烷、環己烷等脂肪族烴類；甲苯、二甲苯等芳香族烴類；乙腈、丙腈、苯甲腈等腈類；N,N-二甲基甲醯胺、N,N-二甲基乙醯胺、N-甲基-2-吡咯啶酮等醯胺類。
為了使聚合反應有效率地進行，較佳使用聚合起始劑。作為聚合起始劑的實例，可使用2,2’-偶氮雙(異丁腈)、2,2’-偶氮雙(2-甲基丁腈)、2,2’-偶氮雙(2,4-二甲基戊腈)(和光純藥工業(股)製；VA-065，10小時半衰期溫度：51℃)、4,4’-偶氮雙(4-氰基戊酸)、2,2’-偶氮雙(4-甲氧基-2,4-二甲基戊腈)、1,1’-偶氮雙(環己烷-1-碳化腈)、1-[(1-氰基-1-甲基乙基)偶氮]甲醯胺、2,2’-偶氮雙[2-(2-咪唑啉-2-基)丙烷]、2,2’-偶氮雙(2-甲基丙脒)二鹽酸鹽、2,2’-偶氮雙[2-甲基-N-(2-羥乙基)丙醯胺](和光純藥工業(股)製；VA-086，10小時半衰期溫度：86℃)、過氧化苯甲醯基(BPO)、2,2’-偶氮雙[N-(2-羧基乙基)-2-甲基丙脒]n-水合物(和光純藥工業(股)製；VA-057，10小時半衰期溫度：57℃)、4,4’-偶氮雙(4-氰基戊酸)(和光純藥工業(股)製；V-501)、2,2’-偶氮雙[2-(2-咪唑啉-2-基)丙烷]二鹽酸鹽(和光純藥工業(股)製；VA-044，10小時半衰期溫度：44℃)、2,2’-偶氮雙[2-(2-咪唑啉-2-基)丙烷]二硫酸鹽二水合物(和光純藥工業(股)製；VA-046B，10小時半衰期溫度：46℃)、2,2’-偶氮雙[2-(2-咪唑啉-2-基)丙烷](和光純藥工業(股)製；VA-061，10小時半衰期溫度：61℃)、2,2’-偶氮雙(2-甲脒基丙烷)二鹽酸鹽(和光純藥工業(股)製；V-50，10小時半衰期溫度：56℃)、過氧二硫酸或t-丁基氫過氧化物等。 　　考量到對水的溶解性、離子平衡及與單體之相互作用時，較佳為由2,2’-偶氮雙[2-甲基-N-(2-羥乙基)丙醯胺]、2,2’-偶氮雙[N-(2-羧基乙基)-2-甲基丙脒]n-水合物、4,4’-偶氮雙(4-氰基戊酸)、2,2’-偶氮雙[2-(2-咪唑啉-2-基)丙烷]二鹽酸鹽、2,2’-偶氮雙[2-(2-咪唑啉-2-基)丙烷]二硫酸鹽二水合物、2,2’-偶氮雙[2-(2-咪唑啉-2-基)丙烷]、2,2’-偶氮雙(2-甲脒基丙烷)二鹽酸鹽及過氧二硫酸中選出。 　　考量到對有機溶媒的溶解性、離子平衡及與單體之相互作用時，較佳使用2,2’-偶氮雙(2,4-二甲基戊腈)或2,2’-偶氮雙(異丁腈)。
就聚合起始劑的添加量而言，相對於用於聚合之單體的合計重量為0.05質量%～10質量%。
就反應條件，為提升單體及聚合物的溶解性，亦可進行加熱，例如藉由將反應容器以油浴等加熱至50℃至200℃，進行1小時至48小時，更佳為加熱至80℃至150℃，進行5小時至30小時的攪拌，可促進聚合反應而獲得本發明之共聚物。反應環境較佳為氮氣環境。
就反應程序而言，可將全部反應物質全加入至室溫的反應溶媒後，加熱至上述溫度而使其聚合，亦可在事先加熱的溶媒中一點一滴地滴下全部或一部分的反應物質之混合物。
聚合物(P5)的分子量只要是數千至數百萬程度即可，較佳為5,000至5,000,000。更佳為5,000至2,000,000，再更佳為5,000至1,000,000。又，其可為隨機共聚物、嵌段共聚物、接枝共聚物任一種，用來製造該共聚物的共聚合反應其本身無特別限制，可使用自由基聚合、離子聚合或利用光聚合、乳化聚合之聚合等周知在溶液中進行合成的方法。此等可視目的用途，單獨使用本發明之聚合物(P5)中任一種，亦可將多種聚合物(P5)混合，且改變其比率地使用。
用於在基體的表面的至少一部分形成聚合物(P5)所產生之被覆的組成物可藉由將包含上述式(1a)及式(1c)所示之結構單元與視情況而定之上述式(1d)所示之結構單元的聚合物(P5)，視情況以適切的溶媒稀釋成既定濃度來調製。亦即，本發明係提供一種包含聚合物(P5)及溶媒的組成物。
作為此種溶媒，可舉出水、有機溶媒或此等組合而成的混合溶媒。溶媒可依據聚合物(P5)的種類或性質而適宜選擇，作為其實例，可舉出水；丙酮、甲基乙基酮、甲基異丁基酮、甲基異戊基酮、甲基戊基酮、環己酮等酮類；甲醇、乙醇、異丙醇、乙二醇單甲基醚、乙二醇單乙基醚、丙二醇單甲基醚、丙二醇單乙基醚等醇類；乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁酯、丙酸甲酯、乳酸甲酯、乳酸乙酯等酯類；四氫呋喃、1,4-二噁烷、乙二醇二甲基醚等醚類；己烷、庚烷、辛烷、環己烷等脂肪族烴類；甲苯、二甲苯等芳香族烴類；乙腈、丙腈、苯甲腈等腈類；N,N-二甲基甲醯胺、N,N-二甲基乙醯胺、N-甲基-2-吡咯啶酮等醯胺類，可單獨或使用彼等之組合的混合溶媒。
組成物亦可由含聚合物(P5)之清漆來調製。含聚合物(P5)之清漆可例如藉由包含將可衍生上述式(1a)所示之結構單元的單體、可衍生上述式(1c)所示之結構單元的單體與視情況而定的任意單體，在溶媒中，以單體的合計濃度0.01質量%至20質量%使其反應(聚合)之步驟的製造方法來調製。聚合物(P5)較佳為進行自由基聚合而得者。
就組成物中的固體含量濃度而言，為了均勻地使被覆形成，宜為0.01至50質量%。
再者，組成物除上述聚合物(P5)與溶媒外，亦可視需求在不損及所得之被覆性能的範圍內添加其他物質。作為其他物質，可舉出防腐劑、界面活性劑、可提高與基體之密接性的底塗劑、防黴劑及醣類等。
本發明之實施形態中，表面的至少一部分經上述聚合物(P4)或(P5)被覆的基體可藉由將上述聚合物(P4)或(P5)塗佈於基體來調製。將上述聚合物(P4)或(P5)塗佈於基體的手段無特別限制，可適宜採用周知之手段。又，「塗佈」亦包含將基體浸漬於聚合物或包含聚合物之溶液，或將聚合物或包含聚合物之溶液澆注於基體，並靜置既定時間等的方法。浸漬或靜置的時間或溫度可依據基體的材質或聚合物的種類而適宜選擇；例如以30秒至24小時，較佳為1分鐘至3小時，以10～35℃，較佳為周圍溫度(例如25℃)來實施。藉此，基體的表面的至少一部分，較佳為整個基體表面，便經上述聚合物(P4)或(P5)被覆。
本發明之實施形態中，基體典型上可為培養皿、基板、多孔質膜、粒子或過濾器。基體尤其可為在實驗儀器類、分析儀器類或醫療儀器類中使用於細胞的分離及/或培養的培養皿、基板、多孔質膜、粒子或過濾器。
又，作為基體之材質，可舉出玻璃、金屬、含金屬化合物或者含半金屬化合物、活性碳或樹脂。金屬可列舉典型金屬：(鹼金屬：Li、Na、K、Rb、Cs；鹼土金屬：Ca、Sr、Ba、Ra)、鎂族元素：Be、Mg、Zn、Cd、Hg；鋁族元素：Al、Ga、In；稀土元素：Y、La、Ce、Pr、Nd、Sm、Eu；錫族元素：Ti、Zr、Sn、Hf、Pb、Th；鐵族元素：Fe、Co、Ni；土酸元素：V、Nb、Ta、鉻族元素：Cr、Mo、W、U；錳族元素：Mn、Re；貴金屬：Cu、Ag、Au；鉑族元素：Ru、Rh、Pd、Os、Ir、Pt等。含金屬化合物或者含半金屬化合物，可列舉例如基本成分為金屬氧化物，且藉由於高溫下熱處理燒結而得的燒結體，即陶瓷；如矽之半導體；金屬氧化物或半金屬氧化物(矽氧化物、氧化鋁等)；金屬碳化物或半金屬碳化物；金屬氮化物或半金屬氮化物(矽氮化物等)；金屬硼化物或半金屬硼化物等無機化合物的成形體等無機固體材料；鋁、鎳鈦、不鏽鋼(SUS304、SUS316、SUS316L等)。
作為基體之材質的樹脂，可為天然樹脂或者其衍生物或合成樹脂任一種，天然樹脂或其衍生物較佳可使用纖維素、三乙酸纖維素(CTA)、硝基纖維素(NC)、固定有聚葡萄糖硫酸之纖維素等；合成樹脂較佳可使用聚丙烯腈(PAN)、聚酯系聚合物合金(PEPA)、聚苯乙烯(PS)、聚碸(PSF)、聚對苯二甲酸乙二酯(PET)、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、聚乙烯醇(PVA)、聚胺基甲酸酯(PU)、乙烯乙烯醇(EVAL)、聚乙烯(PE)、聚酯、聚丙烯(PP)、聚偏二氟乙烯(PVDF)、聚醚碸(PES)、聚碳酸酯(PC)、聚氯乙烯(PVC)、聚四氟乙烯(PTFE)、超高分子量聚乙烯(UHPE)、聚二甲基矽氧烷(PDMS)、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯樹脂(ABS)、Teflon(註冊商標)、尼龍、聚甲基戊烯(PMP)或各種離子交換樹脂等。
於基體中，附有塗膜的表面之材質可為1種或2種以上之組合。此等材質當中，較佳為玻璃、矽、矽氧化物、聚苯乙烯(PS)、聚丙烯(PP)、Teflon(註冊商標)、環烯烴聚合物(COP)、聚二甲基矽氧烷(PDMS)單獨或者不鏽鋼(SUS304、SUS316、SUS316L等)或選自此等之組合。本發明之聚合物，由於可在低溫乾燥條件下被覆，亦可適用於低耐熱性的樹脂等。
上述基體係直接在使用水或者適切的介質洗淨後或施予電漿處理等的表面處理後使用。
本發明又提供一種附有配體之基體的製造方法，其包含使表面的至少一部分經上述聚合物(P4)或(P5)被覆的基體接觸含有碳-碳三鍵或疊氮基的配體之步驟。所述方法亦可包含：將包含上述聚合物(P5)的組成物塗佈於所求之基體，而製造聚合物(P5)被覆基體之步驟；及使該聚合物(P5)被覆基體接觸含有疊氮基或碳-碳三鍵的配體，以使其與聚合物(P5)所含之Z之碳-碳三鍵或疊氮基反應之步驟。
本發明之實施形態中，藉由利用疊氮-炔加成環化反應的點擊反應，配體可藉由使其接觸(i)含有碳-碳三鍵之結構單元與含有疊氮基的配體，或者藉由使其接觸(ii)含有疊氮基之結構單元與含有碳-碳三鍵的配體，而導入於聚合物(P4)或(P5)。此外，點擊反應亦可在被覆於基體的聚合物進行。 　　作為上述實施形態，較佳為(i)。
含有碳-碳三鍵或疊氮基的配體，本業者可由作為點擊化學試劑之可取自Funakoshi(股)、Sigma-Aldrich等試劑提供業者或可取自試劑供給業者的試劑，依循周知之方法來調製。聚合物(P4)或(P5)中，存在(i)含有碳-碳三鍵之結構單元時，係選擇含有疊氮基的配體；存在(ii)含有疊氮基之結構單元時，則選擇含有碳-碳三鍵的配體。亦即，由於結構單元與配體其中一者存在碳-碳三鍵、另一者存在疊氮基，藉由使兩者接觸，可容易地形成下述式(2a)或(2b)：所示之結構，而將配體導入於聚合物。 　　作為本發明之實施形態，較佳為(i)。
作為點擊反應中可使用的溶媒，不特別限定，可舉出例如苯、甲苯、二甲苯等芳香族烴類；乙酸乙酯、乙酸丁酯等酯類；丙酮、甲基乙基酮等酮類；N,N-二甲基甲醯胺、N,N-二甲基乙醯胺、N-甲基-2-吡咯啶酮等醯胺類；乙腈、丙腈等腈類；四氫呋喃、二噁烷等醚類；甲醇、乙醇等碳數1～4之醇類；二甲基亞碸、水等。
點擊反應可於銅觸媒的存在下或未存在下實施。作為點擊反應中可使用的銅觸媒，可舉出溴化銅(I)、碘化銅(I)、乙酸銅(II)、硫酸銅(II)或其水合物等。作為還原劑，代表性可舉出抗壞血酸或者其鹽等。
再者，若有必要時，點擊反應亦可於含氮配基的存在下實施。藉由含氮配基，可提高銅觸媒所產生之加成環化的效率。作為此種含氮配基，可舉出參[(1-苯甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基]胺、參(2-苯并咪唑基甲基)胺等。
此外，就點擊化學試劑的種類而言，亦可不添加銅觸媒及還原劑。例如，上述式(2b)所示之含有碳-碳三鍵的環辛炔衍生物，由環應變而活化能較低，即使無觸媒也能容易地與疊氮反應。
根據所述方法所得之附有配體之基體，於點擊反應結束後，較佳使用水或適切的介質洗淨後，可作為附有配體之基體使用。 [實施例]
以下舉出實施例，對本發明更具體地加以說明，惟本發明非限定於下述實施例。
合成例1　具有兩性離子及點擊反應部位之聚合物的合成 　　使CMB(N-甲基丙烯醯氧乙基-N,N-二甲基銨-α-N-甲基羧基甜菜鹼，大阪有機化學工業(股)製)3.0g、PGMA(甲基丙烯酸炔丙酯)4.0g及2,2′-偶氮雙[N-(2-羧基乙基)-2-甲基丙脒]水合物(VA-057，和光純藥工業(股)製)0.07g溶解於乳酸乙酯28.4g後，於氮氣環境下、80℃加熱攪拌整夜。其後，對反應液添加乙醇使聚合物沉澱，予以回收，將聚合物在減壓下乾燥而得到具有下述式(1)所示之結構的聚合物。所得聚合物的重量平均分子量以標準聚環氧乙烷、聚乙二醇換算為8000。
合成例2　具有兩性離子、點擊反應部位及矽烷耦合基之聚合物的合成 　　合成出使用可藉由化學鍵對玻璃或金屬表面進行修飾之甲基丙烯醯氧丙基三甲氧基矽烷(MPTMS)的三元共聚物之聚(CMB-PGMA-MPTMS)。由於迄此已闡明當MPTMS的組成比為10莫耳%時，被覆率最佳，而且可抑制 CMB所引起之蛋白質或細胞的吸附及黏著(J. Biomed. Mater. Res. A, 2016, 104A, 2029-2036.)，而將MPTMS組成比取10莫耳%，合成出CMB與PGMA 的組成比為80:10、70:20、60:30 的三元共聚物。使CMB與PGMA共計45mmol、MPTMS 0.5mmol、AIBN 0.17mmol溶解於乙醇/二甲基甲醯胺(3：1)混合溶媒，於氮氣環境下、70℃使其反應4小時，其後，追加0.034mmol的AIBN，並進一步使其反應4小時，而得到具有下述式(2)所示之結構的聚合物。
合成例3　胜肽的製作 　　藉由Fmoc固相法來合成表1所記載之胜肽。以Fmoc-Gly-Alko-PEG樹(N-α-(9-Fluorenylmethoxycarbonyl)-glycine p-methoxybenzyl alcohol polyethyleneglycol resin，渡邊化學工業(股)製)為擔體來延長胜肽鏈。自N末端數來7-9殘基的Gly係導入作為軟連結子。對C末端導入疊氮高丙胺酸(AHA)，俾可最終利用點擊反應對高分子鏈導入胜肽。又，胜肽2及3係變更軟連結子的長度者。將在樹脂上延長的胜肽鏈進行去樹脂、去保護而得到粗製胜肽後，以逆相高效液相層析進行純化，所得純化胜肽係藉由MALDI TOF-MS確認其分子量並進行鑑定。
藉由圓偏光二色性(CD)分光法評定表1所示各種寡肽的二次結構。將光譜示於圖1(實線：胜肽1；虛線：胜肽2；長虛線：胜肽3)。胜肽1為導入3殘基之Gly作為連結子者。已知導入有連結子的胜肽及其連結子愈長，胜肽愈為隨機結構，可知在僅有結合於CD44的活性部位之Gln-Gln-Gly-Trp-Phe-Pro(序列編號1)的序列具有β股結構。
實施例1　聚合物對玻璃基板表面的被覆 　　將合成例1中所合成之聚合物溶解於乳酸乙酯，製成10%溶液。其次，藉由旋轉塗佈以1115rpm/60s塗佈於4×4cm的玻璃基板，在加熱至100℃的加熱板上加熱1分鐘，而於玻璃基板上被覆聚合物。聚合物的膜厚為500nm。
實施例2　胜肽擔持 　　使合成例3中所合成之胜肽1 40mg懸浮於純水16g，混合1mg/ml硫化銅水溶液0.43g、1mg/ml抗壞血酸鈉水溶液2.7g，而調成胜肽反應溶液。將此胜肽反應溶液滴至實施例1中所製作之玻璃基板整面，直接在室溫靜置12小時後，將基板以純水洗淨並吹風而製成擔持胜肽之玻璃基板。
比較例1　胜肽對聚合物被覆玻璃基板的塗佈 　　使合成例3中所合成之胜肽1 40mg懸浮於純水16g，而調成胜肽懸浮液。將此液滴至實施例1中所製作之玻璃基板整面，直接在室溫靜置12小時後，將基板以純水洗淨並吹風而製成未擔持胜肽之玻璃基板。
實施例3　胜肽擔持確認試驗 　　為了針對實施例2及比較例1所製作之基板確認胜肽的擔持，而採MicroBCA法實施分析。本試驗係使用Thermo Fisher Scientific Inc.製BCA Protein Assay Reagent Kit來實施，將各試劑混合後，使實施例2及比較例1中所製作之基板各自浸漬於試劑混合液，於60℃保持1小時，回收溶液後，評定溶液在562nm下的穿透率。結果，使用實施例2中所製作之基板時，穿透率為32%，確認藉由胜肽鍵而吸收。另一方面，使用比較例1中所製作之基板時，穿透率則為80%。由此結果確認，實施例2中所製作之基板為藉由點擊反應而擔持胜肽的被覆有擔持胜肽之聚合物的玻璃基板，比較例1中所製作之基板為被覆有未擔持胜肽之聚合物的玻璃基板。
實施例4　細胞選擇性評定 　　茲調查人類骨髓間葉系幹細胞(hMSC)在經擔持胜肽(實施例2)/未擔持胜肽(實施例1)之聚合物被覆的玻璃基板表面的捕捉。又，使用源自人類胚胎幹細胞之神經前驅細胞(hNPC)及源自人類胎兒腎之細胞(HEK293 cell)、源自小鼠之纖維母細胞(3T3 cell)來評定細胞選擇性。使經擔持胜肽/未擔持胜肽之聚合物被覆的玻璃基板浸漬於70%乙醇溶液，於無塵實驗台內加以乾燥而實施滅菌處理後，藉由下表2所示各細胞所對應的培養液，觀察播種細胞後6小時的細胞黏著狀態。將實施例1之結果示於圖2(光學顯微鏡觀察)、將實施例2之結果示於圖3(光學顯微鏡觀察)與圖4(流式細胞儀)。
實施例5　細胞捕捉速度與其細胞數及捕捉細胞的純度評定 　　進行細胞在被覆有擔持胜肽之聚合物的玻璃基板表面(實施例2)及被覆有未擔持胜肽之聚合物的玻璃基板表面(實施例1)的捕捉所需的時間與其細胞數及捕捉細胞是否為hMSC的評定。首先，以3.0×104 cells/cm2 僅播種hMSC，培養5、15、30分鐘後，以培養液洗淨，計數黏著之細胞數。將結果示於圖5(光學顯微鏡觀察)、圖6(A)(細胞計數數)。又，藉由流式細胞儀調查捕捉細胞的表現型。將結果示於圖6(B)。 　　接著，將hMSC與HEK293 cell混合(分別為1.5×104 cells/cm2 )並播種後，培養與上述相同的既定時間，藉由培養液洗淨後，回收黏著之細胞，藉由細胞計數及流式細胞儀進行表現型的調查。將結果分別示於圖7(A)及(B)。
如圖2所示，根據實施例4之評定，在被覆有實施例1中所製作之聚合物的玻璃基板(被覆有未擔持胜肽之聚合物的玻璃基板)，就hMSCs、hNPCs、HEK293 cells、3T3 cells所有的細胞物種，完全未觀察到黏著。由此確認，以基底聚合物之合成例1所合成的聚合物係顯示細胞非黏著性。
如圖3所示，根據實施例4之評定，使用實施例2中所製作之被覆有擔持胜肽之聚合物的玻璃基板時，相對於hMSCs可看出細胞的黏著及伸展(圖3(A))，hNPC(圖3(B))及HEK293 cells(圖3(C))則完全未看出細胞的黏著。就3T3 cells而言，雖較弱但仍可看出黏著。藉由流式細胞儀評定表面抗原表現，獲而得CD34-PE抗體若干結合於表面之結果(圖4)，由此暗示有可能與胜肽產生相互作用。由此闡明，透過使用本材料，可選擇性地捕捉在表面表現CD34的細胞。
如圖5所示，根據實施例5之評定，在被覆有擔持胜肽之聚合物的玻璃基板表面(實施例2)，可隨時間經過看出細胞黏著數增加的傾向。另一方面，在被覆有未擔持胜肽之聚合物的玻璃基板表面(實施例1)，則完全未看出細胞黏著。評定胜肽擔持表面之hMSC捕捉數的結果(圖6(A))，顯示可捕捉播種細胞之約4成的細胞。又，藉由流式細胞儀評定捕捉細胞的表面抗原之表現的結果(圖6(B))，可知為CD34陽性，且為CD44陽性(hMSC的表面標記蛋白質)。 　　進而，混合與hMSC等量的HEK293 cells進行細胞捕捉實驗的結果(圖7(A))，在培養30分鐘後，可知有約10000 cells/cm2 的細胞被捕捉，評定該細胞的表面抗原的結果(圖7(B))，可知幾乎所有的細胞為CD34/44兩陽性細胞，亦即為hMSC。由此等結果闡明，被覆有擔持胜肽之聚合物的玻璃基板表面，由hMSC與HEK293 cells的混合液，僅可選擇性地捕捉hMSC。
實施例6　聚(CMB-PGMA-MPTMS)三元共聚物對玻璃基材的修飾 　　藉由對玻璃基板進行強酸處理(食人魚溶液或濃硫酸等)、氧電漿處理或UV/O3 處理而洗淨後，使其浸漬於將合成例2中所合成之聚(CMB-PGMA-MPTMS)溶解於乙醇成1w/v%的溶液。將由溶液中取出的玻璃基板以乙醇洗淨，以N2 氣體加以乾燥。如此得到經聚(CMB-PGMA-MPTMS)修飾的玻璃基板。
實施例7　胜肽擔持 　　以與實施例2同樣的方法使胜肽1擔持於基材修飾聚合物。
實施例8　經擔持胜肽之聚合物修飾的玻璃基板表面的浸潤性 　　對實施例6及7中所得之經未擔持胜肽及擔持胜肽之聚合物修飾的表面，根據水(液滴)接觸角測定及氣泡接觸角測定評定浸潤性。將結果分別示於圖8(A)及(B)。在經未擔持胜肽之聚合物修飾的表面，隨著PGMA組成的增加(CMB組成的減少)，可看出液滴接觸角的增加及氣泡接觸角的減少，由此可知表面的親水性減少(圖8(A)及(B)中以黑色表示的長條)。研判此係起因於PGMA之炔取代基的疏水性。另一方面，在經擔持胜肽之聚合物修飾的表面，與未擔持胜肽者相比，可看出液滴接觸角的減少及氣泡接觸角的增加(圖8(A)及(B)中以灰色表示的長條)。可研判此係起因於胜肽1的親水性，藉由擔持胜肽而使表面的親水性增加。
實施例9　根據全反射紅外光譜測定之胜肽1對聚合物修飾表面的擔持評定 　　根據全反射紅外光譜測定來調查實施例6及7中所得之經未擔持及擔持胜肽之聚合物修飾的表面。於本測定中，係代表性地針對CMB：PGMA：MPTMS之組成比為70：20：10的聚合物進行評定。將結果示於圖9。在源自胜肽1之醯胺鍵的醯胺II區域(1700～1760cm-1 )，相對於經未擔持胜肽之聚合物修飾的表面的紅外吸收(圖9：實線)，經擔持胜肽之聚合物修飾的表面的紅外吸收(圖9：虛線)係大幅增加。由此結果研判，在修飾於基材之聚合物的炔側鏈與胜肽1的疊氮基之間藉由點擊反應，胜肽1便修飾於聚合物鏈。
實施例10　經擔持胜肽1之聚合物修飾的表面的膜厚評定 　　根據橢圓偏振測定來評定實施例6及7中所得之經未擔持及擔持胜肽之聚合物修飾的表面的乾燥狀態的膜厚。將結果示於圖10。經未擔持胜肽之聚合物修飾的表面的膜厚為4～6nm(圖10中以黑色表示的長條)，已知就任何組成之聚合物均形成了薄膜。另一方面，經擔持胜肽1之聚合物修飾的表面的膜厚，與未擔持胜肽1的表面相比增加1～2.5nm(圖10中以灰色表示的長條)。在CMB：PGMA：MPTMS=90：00：10的聚合物修飾表面，若考量在胜肽反應前後膜厚完全未變化，研判此等膜厚增加係起因於胜肽1的擔持。
實施例11　胜肽1之擔持量的定量 　　根據微量BCA法來定量胜肽1對實施例7中所得之經各種擔持胜肽之聚合物修飾的表面的擔持量(n=3)。將結果示於圖11。取決於PGMA組成比的增加，亦即炔側鏈的導入量，可看出胜肽1之擔持量增加的傾向。又，就其擔持量，已知可依據每1cm2 為2.5pmol至3.65pmol之炔側鏈的導入量來改變胜肽1擔持量。
由上述實施例之液滴/氣泡接觸角測定、全反射紅外光譜測定、橢圓偏振測定及胜肽1擔持量測定的各評定，已知可使胜肽1擔持於修飾於基材的聚合物。又，發現亦可根據PGMA的組成比來改變胜肽1的組成比。
實施例12　血清蛋白質對經擔持胜肽1之聚合物修飾的表面的非特異吸附評定 　　為評定蛋白質有無非特異吸附於實施例7中所得之經擔持胜肽1之聚合物修飾的表面，而根據微量BCA測定來定量血清蛋白質的吸附量(n=3)。將結果示於圖12。作為對照實驗，評定吸附於玻璃基板上的結果，可看出每1cm2 吸附約200ng的蛋白質(圖12中以白色表示的長條)。相對於此，可知實施例6中所得之經未擔持胜肽之聚合物修飾的表面為30～50ng/cm2 ，可大幅抑制蛋白質吸附(圖12中以黑色表示的長條)。又，可知在經擔持胜肽1之聚合物修飾的表面，與經未擔持胜肽之聚合物修飾的表面同樣的可大幅抑制血清蛋白質的非特異吸附(圖12中以灰色表示的長條)。由此結果暗示，藉由胜肽1的擔持，不會阻礙CMB之蛋白質非特異吸附的抑制能力；及血清蛋白質不會與擔持之胜肽1發生非特異性的相互作用，隨之，不會阻礙胜肽1的特異性相互作用。 　　由此結果，可預測以下兩點：(1)可抑制細胞的非特異性黏著；(2)可經由胜肽1而僅捕捉特定的細胞，而能夠達到細胞的選擇性捕捉及選擇性培養。
實施例13　經擔持胜肽1之聚合物修飾的表面的細胞的選擇性捕捉 　　為評定細胞對各種未擔持及擔持胜肽之聚合物修飾的表面的選擇性捕捉，而將NIH3T3細胞、HEK293細胞、人類MSC此3種細胞播種於實施例6及7中所製作之各種基板的表面上(分別為3.0×104 cells/cm2 )，培養12小時後，藉由顯微鏡觀察細胞的捕捉數及細胞的伸展度。將結果示於圖13～16。圖13～15表示播種各細胞物種時之各種修飾表面的相位差顯微鏡像，且圖16為表示定量在經未擔持胜肽之聚合物修飾的表面(-)及經擔持胜肽1之聚合物修飾的表面(+)上捕捉之細胞數(n=3)的結果的圖表。此外，NIH3T3細胞之結果係以淡灰色長條、HEK293細胞之結果係以濃灰色長條、人類MSC之結果則以黑色長條表示。由此等結果可知，在經未擔持胜肽之聚合物修飾的表面完全未捕捉到或未黏著有細胞，而且在經擔持胜肽1之聚合物修飾的表面，未捕捉到NIH3T3細胞及HEK293細胞，而僅捕捉到人類MSC。研判此係在人類MSC的膜表面存在有CD44抗原，藉由將可與該CD44特異性地相互作用的胜肽1(CD44結合胜肽、CD44BP)擔持於經聚合物修飾的表面，可僅選擇性地捕捉、黏著人類MSC。 　　此外，可知隨著PGMA組成比的增加，亦即炔側鏈的增加，細胞捕捉數亦增加。研判此係因炔側鏈增加而引起胜肽1之擔持量的增加所致，可謂與實施例11所示之結果相關的結果。再者，之所以人類MSC的捕捉細胞數，相對於對玻璃基板的黏著數大幅減少，可研判係排除少許進行分化而減少CD44抗原的表現量之細胞，僅捕捉高度表現CD44抗原的人類MSC所致，可建構出高細胞選擇性的基材表面。
圖1表示合成例1中所製作之胜肽1～3之由圓偏光二色性(CD)分光法所得的CD光譜。實線為胜肽1、虛線為胜肽2、長虛線為胜肽3。 　　圖2表示經實施實施例4之細胞選擇性評定的實施例1之被覆有未擔持胜肽之聚合物的玻璃基板的光學顯微鏡照片。(A)為使用人類骨髓間葉系幹細胞(hMSC)；(B)為使用源自人類胚胎幹細胞之神經前驅細胞(hNPC)、(C)為使用源自人類胎兒腎之細胞(HEK293 cell)及(D)為使用源自小鼠之纖維母細胞(3T3 cell)的結果。 　　圖3表示經實施實施例4之細胞選擇性評定的實施例2之被覆有擔持胜肽之聚合物的玻璃基板的光學顯微鏡照片。(A)為使用人類骨髓間葉系幹細胞(hMSC)；(B)為使用源自人類胚胎幹細胞之神經前驅細胞(hNPC)、(C)為使用源自人類胎兒腎之細胞(HEK293 cell)及(D)源自小鼠之纖維母細胞(3T3 cell)的結果。 　　圖4表示經實施實施例4之細胞(3T3 cell)選擇性評定的實施例2之被覆有擔持胜肽之聚合物的玻璃基板之流式細胞儀的結果。 　　圖5表示經實施實施例5之細胞(hMSC)捕捉速度之評定的被覆有擔持胜肽之聚合物的玻璃基板表面(實施例2)及被覆有未擔持胜肽之聚合物的玻璃基板表面(實施例1)的光學顯微鏡照片。自上層的左側起為對被覆有擔持胜肽之聚合物的玻璃基板表面(實施例2)播種細胞，培養5分鐘、15分鐘及30分鐘後的光學顯微鏡照片；自下層的左側起為對被覆有未擔持胜肽之聚合物的玻璃基板表面(實施例1)播種細胞，培養5分鐘、15分鐘及30分鐘後的光學顯微鏡照片。 　　圖6表示經實施實施例5之細胞(hMSC)捕捉速度之評定的(A)計數黏著於被覆有擔持胜肽之聚合物的玻璃基板(實施例2)的表面之細胞數的結果；及(B)被覆有擔持胜肽之聚合物的玻璃基板(實施例2)之流式細胞儀的結果。 　　圖7表示經實施實施例5之從hMSC及HEK293 cell之細胞混合物的hMSC之捕捉速度之評定的(A)計數黏著於被覆有擔持胜肽之聚合物的玻璃基板(實施例2)的表面之細胞數的結果；及(B)被覆有擔持胜肽之聚合物的玻璃基板(實施例2)之流式細胞儀的結果。 　　圖8為在實施例8中藉由(A)水(液滴)接觸角測定及(B)氣泡接觸角測定評定實施例6中所得之經未擔持胜肽之聚合物修飾的表面與實施例7中所得之經擔持胜肽1之聚合物修飾的表面的浸潤性，顯示其結果的圖表。此外，前者之結果係以黑色長條、後者之結果則以灰色長條表示。 　　圖9為對實施例6中所得之經未擔持胜肽之聚合物(CMB：PGMA：MPTMS的組成比=70：20：10)修飾的玻璃表面與經擔持實施例7中所得之胜肽1的聚合物(CMB：PGMA：MPTMS的組成比=70：20：10)修飾的玻璃表面，在實施例9中根據全反射紅外光譜測定進行評定而得到的光譜。此外，前者之光譜係以實線、後者之光譜則以虛線表示。 　　圖10為在實施例10中根據橢圓偏振測定來評定實施例6中所得之經未擔持胜肽之聚合物修飾的表面與實施例7中所得之經擔持胜肽1之聚合物修飾的表面的膜厚，顯示其結果的圖表。此外，前者之結果係以黑色長條、後者之結果則以灰色長條表示。 　　圖11為在實施例11中根據微量BCA法來定量實施例7中所得之胜肽1在經各種擔持胜肽之聚合物修飾的表面的擔持量，顯示其結果的圖表。 　　圖12為為了評定有無蛋白質對玻璃基板、實施例6中所得之經未擔持胜肽之聚合物修飾的表面及實施例7中所得之經擔持胜肽1之聚合物修飾的表面的非特異吸附，而在實施例12中根據微量BCA測定，定量血清蛋白質的吸附量，顯示其結果的圖表。此外，玻璃基板之結果係以白色長條、經未擔持胜肽之聚合物修飾的表面之結果係以黑色長條，而且經擔持胜肽1之聚合物修飾的表面之結果係以灰色長條表示。 　　圖13為在實施例13中，在經各種未擔持胜肽之聚合物修飾的表面及經擔持胜肽1(CD44BP)之聚合物修飾的表面上播種NIH3T3細胞後的相位差顯微鏡照片。 　　圖14為在實施例13中，在經各種未擔持胜肽之聚合物修飾的表面及經擔持胜肽1(CD44BP)之聚合物修飾的表面上播種HEK293細胞後的相位差顯微鏡照片。 　　圖15為在實施例13中，在經各種未擔持胜肽之聚合物修飾的表面及經擔持胜肽1(CD44BP)之聚合物修飾的表面上播種MSC細胞後的相位差顯微鏡照片。 　　圖16為表示在實施例13中，定量在經各種未擔持胜肽之聚合物修飾的表面(-)及經擔持胜肽1之聚合物修飾的表面(+)上捕捉之各種細胞數(n=3)的結果的圖表。此外，NIH3T3細胞之結果係以淡灰色長條、HEK293細胞之結果係以濃灰色長條、人類MSC之結果則以黑色長條表示。
<110> 日產化學(NISSAN CHEMICAL CORPORATION) 富山大學(NATIONAL UNIVERSITY CORPORATION UNIVERSITY OF TOYAMA)
<120> 經細胞之選擇性分離用或細胞培養用聚合物被覆的 基體
<130> FP4291PCT
<140> TW 107123766
<141> 2018-7-10
<150> JP 2017-135585
<151> 2017-07-11
<160> 5
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 配體
<400> 1
Figure 107123766-A0305-02-0058-9
<210> 2
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 配體
<400> 2
Figure 107123766-A0305-02-0058-10
<210> 3
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 配體
<220>
<221> 結合
<222> (10)..(10)
<223> 疊氮高丙胺酸
<400> 3
Figure 107123766-A0305-02-0059-12
<210> 4
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 配體
<220>
<221> 結合
<222> (21)..(21)
<223> 疊氮高丙胺酸
<400> 4
Figure 107123766-A0305-02-0059-13
<210> 5
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 配體
<220>
<221> 結合
<222> (7)..(7)
<223> 疊氮高丙胺酸
<400> 5
Figure 107123766-A0305-02-0059-14

Claims (17)

  1. 一種附有配體之基體，其係在表面的至少一部分被覆有包含下述式(1a)及式(1b)所示之結構單元的聚合物(P3)，前述配體係選自由胜肽、抗體、蛋白質及低分子化合物所成群組；
    Figure 107123766-A0305-02-0060-1
     [式中，R1及R2分別獨立地表示碳原子數1至5之直鏈烷基，X表示氫原子或碳原子數1至5之直鏈烷基，Y表示羧酸根陰離子(-COO-基)或磺酸根陰離子(-SO3 -基)，L表示配體，Q1及Q2分別獨立地表示酯鍵、醯胺鍵、碳原子數1至10之直鏈或者分支伸烷基或可經取代之伸苯基，或者由此等之組合所構成的二價基，Q3表示包含1,2,3-三唑環骨架之二價有機基，m1及m2分別獨立地表示1至200之整數，n分別獨立地表示1至10之整數]。
  2. 如請求項1之附有配體之基體，其中前述胜肽包含Gln-Gln-Gly-Trp-Phe之序列。
  3. 如請求項1或2之附有配體之基體，其為細胞分離用。
  4. 如請求項1或2之附有配體之基體，其為細胞培養用。
  5. 一種用以製造如請求項1~4中任一項之附有配體之基體的基體，其表面的至少一部分係經包含顯示下述式(1a)所示之細胞非黏著性之結構單元與含有碳-碳三鍵或疊氮基之結構單元的聚合物(P4)被覆，
    Figure 107123766-A0305-02-0061-2
     [式中，R1及R2分別獨立地表示碳原子數1至5之直鏈烷基，X表示氫原子或碳原子數1至5之直鏈烷基，Y表示羧酸根陰離子(-COO-基)或磺酸根陰離子(-SO3 -基)，Q1表示酯鍵、醯胺鍵、碳原子數1至10之直鏈或者分支伸烷基或可經取代之伸苯基，或者由此等之組合所構成的二價基，m1表示1至200之整數，n表示1至10之整數]。
  6. 一種用以製造如請求項1~4中任一項之附有配體之基體的基體，其係在表面的至少一部分被覆有包含下述式 (1a)及式(1c)所示之結構單元的聚合物(P5)；
    Figure 107123766-A0305-02-0062-3
     (式中，R1、R2、X、Y、Q1、Q2、m1、m2及n係與請求項1相同，Z表示包含碳-碳三鍵或疊氮之基)。
  7. 如請求項1、2、5或6之基體，其中前述基體為培養皿、基板、多孔質膜、粒子或過濾器。
  8. 一種用以製造如請求項1~4中任一項之附有配體之基體的組成物，其包含含有下述式(1a)及式(1c)所示之結構單元的聚合物(P5)及溶媒；
    Figure 107123766-A0305-02-0062-5
     (式中，R1、R2、X、Y、Z、Q1、Q2、m1、m2及n係與請求項6相同)。
  9. 一種如請求項1~4中任一項之附有配體之基體的製造方法，其包含使如請求項5或6之基體接觸含有碳-碳三鍵或疊氮基的配體之步驟。
  10. 一種如請求項1~4中任一項之附有配體之基體的製造方法，其包含：將如請求項8之組成物塗佈於基體，而製造聚合物(P5)被覆基體之步驟；及，接著使前述被覆基體接觸含有碳-碳三鍵或疊氮基的配體之步驟。
  11. 如請求項3之附有配體之基體，其係由包含至少2種以上之細胞的細胞混合液中，將至少1種細胞選擇性地分離。
  12. 一種細胞分離方法，其係使用如請求項1或2之附有配體之基體。
  13. 如請求項4之附有配體之基體，其係由包含至少2種以上之細胞的細胞混合液中，選擇性地培養至少1種細胞。
  14. 一種細胞培養方法，其係使用如請求項1或2之附有配體之基體。
  15. 如請求項1之附有配體之基體，其中聚合物(P3)進一步包含下述式(1d)所示之結構單元：
    Figure 107123766-A0305-02-0064-6
     (式中，R3分別獨立地表示碳原子數1至5之直鏈烷基，X表示氫原子或碳原子數1至5之直鏈烷基，Q4表示酯鍵、磷酸二酯鍵、醯胺鍵、碳原子數1至10之直鏈或者分支伸烷基或可經取代之伸苯基，或者由此等之組合所構成的二價基，m3表示1至200之整數)。
  16. 如請求項6之基體，其中聚合物(P5)進一步包含下述式(1d)所示之結構單元：
    Figure 107123766-A0305-02-0064-7
     (式中，R3分別獨立地表示碳原子數1至5之直鏈烷基，X表示氫原子或碳原子數1至5之直鏈烷基，Q4表示酯 鍵、磷酸二酯鍵、醯胺鍵、碳原子數1至10之直鏈或者分支伸烷基或可經取代之伸苯基，或者由此等之組合所構成的二價基，m3表示1至200之整數)。
  17. 如請求項8之組成物，其中聚合物(P5)進一步包含下述式(1d)所示之結構單元：
    Figure 107123766-A0305-02-0065-8
     (式中，R3分別獨立地表示碳原子數1至5之飽和直鏈烷基，X表示氫原子或碳原子數1至5之直鏈烷基，Q4表示酯鍵、磷酸二酯鍵、醯胺鍵、碳原子數1至10之直鏈或者分支伸烷基或可經取代之伸苯基，或者由此等之組合所構成的二價基，m3表示1至200之整數)。
TW107123766A 2017-07-11 2018-07-10 經細胞之選擇性分離用或細胞培養用聚合物被覆的基體 TWI816680B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2017-135585 2017-07-11
JP2017135585 2017-07-11

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW201920293A TW201920293A (zh) 2019-06-01
TWI816680B true TWI816680B (zh) 2023-10-01

Family

ID=65001332

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW107123766A TWI816680B (zh) 2017-07-11 2018-07-10 經細胞之選擇性分離用或細胞培養用聚合物被覆的基體

Country Status (6)

Country Link
US (1) US11655273B2 (zh)
EP (1) EP3653648A4 (zh)
JP (1) JP7272590B2 (zh)
CN (1) CN110914309B (zh)
TW (1) TWI816680B (zh)
WO (1) WO2019013148A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7354543B2 (ja) * 2018-01-25 2023-10-03 Ｕｂｅ株式会社 不織布含有細胞培養モジュール
AU2022428176A1 (en) * 2021-12-27 2024-05-30 Sekisui Chemical Co., Ltd. Coating solution for forming cell scaffold and production method thereof

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001090153A2 (en) * 2000-05-23 2001-11-29 Nexell Therapeutics, Inc. Reagents for cell selection and methods of use
WO2014017513A1 (ja) * 2012-07-24 2014-01-30 日産化学工業株式会社 培地組成物及び当該組成物を用いた細胞又は組織の培養方法
TW201425322A (zh) * 2012-10-11 2014-07-01 Univ Toyama 光分解性材料、基板及其圖型形成方法
WO2014168230A1 (ja) * 2013-04-12 2014-10-16 公益財団法人がん研究会 ＥｐＣＡＭに結合するペプチド・アプタマーとホスホリルコリンポリマー共重合体を含む複合体

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0632800A (ja) 1992-07-15 1994-02-08 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd タンパク質固定化担体および該担体を用いる細胞の分離法
JPH07113799A (ja) 1993-10-20 1995-05-02 Toyobo Co Ltd 細胞の選択的分離方法
US6017719A (en) 1994-06-14 2000-01-25 Nexell Therapeutics, Inc. Positive and positive/negative cell selection mediated by peptide release
JP3533541B2 (ja) 1995-01-25 2004-05-31 旭メディカル株式会社 細胞選択フィルター
US20030219445A1 (en) 2000-05-23 2003-11-27 Nexell Therapeutics, Inc. Reagents for cell selection and methods of use
JP2006258458A (ja) 2005-03-15 2006-09-28 Sumitomo Bakelite Co Ltd 医療材料用高分子化合物及び該高分子化合物を用いたバイオチップ用基板
JP4736636B2 (ja) 2005-09-01 2011-07-27 日油株式会社 コーティング膜被覆基体の製造方法
JP5344148B2 (ja) 2009-01-26 2013-11-20 Ｊｓｒ株式会社 非特異吸着防止剤および物品のコーティング方法
KR101909328B1 (ko) 2012-07-27 2018-10-17 가부시키가이샤 지씨 조직 재생 컨스트럭트 및 조직 재생 컨스트럭트의 제조 방법
JP6111569B2 (ja) 2012-09-04 2017-04-12 Jsr株式会社 無機材料で構成される表面用の表面処理剤、該表面処理剤でコーティングされた器具、その製造方法、及び新規重合体
WO2016002796A1 (ja) 2014-06-30 2016-01-07 旭硝子株式会社 タンパク質付着防止剤
JP6497677B2 (ja) * 2015-03-31 2019-04-10 東ソー株式会社 ブロック共重合体、表面処理剤、その膜、およびそれを被覆した細胞培養基材

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001090153A2 (en) * 2000-05-23 2001-11-29 Nexell Therapeutics, Inc. Reagents for cell selection and methods of use
WO2014017513A1 (ja) * 2012-07-24 2014-01-30 日産化学工業株式会社 培地組成物及び当該組成物を用いた細胞又は組織の培養方法
TW201425322A (zh) * 2012-10-11 2014-07-01 Univ Toyama 光分解性材料、基板及其圖型形成方法
WO2014168230A1 (ja) * 2013-04-12 2014-10-16 公益財団法人がん研究会 ＥｐＣＡＭに結合するペプチド・アプタマーとホスホリルコリンポリマー共重合体を含む複合体

Also Published As

Publication number Publication date
US11655273B2 (en) 2023-05-23
CN110914309A (zh) 2020-03-24
CN110914309B (zh) 2023-10-24
US20210130788A1 (en) 2021-05-06
EP3653648A1 (en) 2020-05-20
JP7272590B2 (ja) 2023-05-12
JPWO2019013148A1 (ja) 2020-05-07
EP3653648A4 (en) 2020-06-03
WO2019013148A1 (ja) 2019-01-17
TW201920293A (zh) 2019-06-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5552474B2 (ja) 医療材料用高分子化合物及び該高分子化合物を用いたバイオチップ用基板
US9981244B2 (en) Ligand grafted substrates
US8124188B2 (en) Polymeric coatings and methods for forming them
Song et al. Fabrication of a detection platform with boronic-acid-containing zwitterionic polymer brush
JP4821444B2 (ja) バイオアッセイ用高分子化合物およびこれを用いたバイオアッセイ用基材
JP2010530955A (ja) 二重機能性非汚染表面および材料
JP2010530955A5 (zh)
Wiarachai et al. Clickable and Antifouling Platform of Poly [(propargyl methacrylate)-ran-(2-methacryloyloxyethyl phosphorylcholine)] for Biosensing Applications
TWI816680B (zh) 經細胞之選擇性分離用或細胞培養用聚合物被覆的基體
Xu et al. Spatially well-defined binary brushes of poly (ethylene glycol) s for micropatterning of active proteins on anti-fouling surfaces
KR20190031512A (ko) 박막 단차 피복성을 갖는 코팅막, 그 막을 구비하는 구조 기체
WO2013056090A1 (en) Affinity-based materials for the non-destructive separation and recovery of cells
WO2019107503A1 (ja) 長期培養可能な細胞培養容器及びその製造方法
US8795782B2 (en) Polymeric coatings and methods for forming them
JP2006176720A (ja) 医療材料用高分子化合物およびそれを用いた高分子溶液
WO2006123737A1 (ja) 医療材料用高分子化合物及び該高分子化合物を用いたバイオチップ用基板
JP6299862B2 (ja) コート剤組成物及びその利用
JP2017149810A (ja) 共重合体、これを用いたコーティング剤、及びコーティング方法
US20230392037A1 (en) Biological substance low adhesion material comprising copolymer
JP5364971B2 (ja) 生理活性物質の固定化方法