TWI809334B

TWI809334B - ２－（（４－（（Ｓ）－２－（５－氯吡啶－２－基）－２－甲基苯并〔ｄ〕〔１，３〕二氧呃－４－基）哌啶－１－基）甲基）－１－（（（Ｓ）－氧呾－２－基）甲基）－１Ｈ－苯并〔ｄ〕咪唑－６－羧酸１，３－二羥基－２－（羥基甲基）丙烷－２－胺鹽之固體形式

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Publication number: TWI809334B
Application number: TW109143088A
Authority: TW
Inventors: 蓋瑞艾斯柏尼斯; 史考特貝格里; 衛斯理克拉克; 約翰客托; 大衛艾德蒙; 馬克佛蘭根; 二木建太郎; 大衛格利菲斯; 金華德; 連亞靜; 克里斯林柏克斯; 艾力龍卓根; 艾倫馬西威茲; 大衛帕歐卓斯基; 羅奇路格理
Original assignee: 美商輝瑞股份有限公司
Priority date: 2019-12-10
Filing date: 2020-12-07
Publication date: 2023-07-21
Also published as: BR112022010599A2; EP4073028A1; ZA202207589B; CN115175893A; AU2020402177A1; WO2021116874A1; KR20220112811A; AR120703A1; MX2022007105A; TW202136247A; CA3163979A1; US20230045419A1; JP2021091683A

Abstract

本發明提供2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧呃-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧呾-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺鹽之固體形式，例如水合物(例如單水合物)晶形(例如晶形2或晶形3)或非晶形；以及其醫藥組成物及治療哺乳動物(諸如人類)之以GLP-1R調節疾病、病況或疾患之用途。

Description

２－（（４－（（Ｓ）－２－（５－氯吡啶－２－基）－２－甲基苯并〔ｄ〕〔１，３〕二氧呃－４－基）哌啶－１－基）甲基）－１－（（（Ｓ）－氧呾－２－基）甲基）－１Ｈ－苯并〔ｄ〕咪唑－６－羧酸１，３－二羥基－２－（羥基甲基）丙烷－２－胺鹽之固體形式

本發明提供2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧呃-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧呾-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺鹽之固體形式(例如晶形)；其製備方法；其醫藥組成物、劑型及治療哺乳動物(諸如人類)之以GLP-1R調節之疾病、病況或疾患之用途。

糖尿病係因為其越來越盛行及相關聯的健康風險而為重要的公共衛生問題。此疾病係以胰島素生產、胰島素作用或二者的缺陷所引起之高血糖含量為特徵。已辨認出兩種主要的糖尿病型式，第1型及第2型。第1型糖尿病(T1D)係在身體免疫系統破壞胰臟β細胞時發展，該細胞為體內製造調節血糖之激素胰島素的唯一細胞。為了存活，患有第1型糖尿病的人必須具有以注射或泵投予之胰島素。第2型糖尿病(通常稱為T2DM)經常始於胰島素抗性或當胰島素生產不足以維持可接受的葡糖糖含量時。

目前各種藥理學方法有效用於治療高血糖症及隨後的T2DM(Hampp,C.等人之Use of Antidiabetic Drugs in the U.S.,2003-2012,Diabetes Care 2014,37,1367-1374)。該等方法可分組成六個主要的類別，各者係通過不同的主要機制起作用：(A)胰島素促泌素，包括磺醯脲(例如格列吡秦(glipizide)、格列美吡拉(glimepiride)、格列本脲(glyburide))、美格替耐(meglitinide)(例如那格列奈(nateglidine)、雷帕格列奈(repaglinide))、二肽基肽酶IV(DPP-IV)抑制劑(例如西他列汀(sitagliptin)、維格列汀(vildagliptin)、阿格列汀(alogliptin)、杜特列汀(dutogliptin)、林那列汀(linagliptin)、沙格列汀(saxogliptin))及類升糖素肽-1受體(GLP-1R)促效劑(例如利拉魯肽(liraglutide)、阿必魯肽(albiglutide)、艾塞那肽(exenatide)、利塞那肽(lixisenatide)、杜拉魯肽 (dulaglutide)、希馬魯肽(semaglutide))，該等係藉由在胰臟β細胞上起作用而提高胰島素分泌。磺醯脲及美格替耐具有的效力及耐受性有限，引起體重增加及常誘發低血糖症。DPP-IV抑制劑具有的效力有限。所銷售之GLP-1R促效劑為經皮下注射投予之肽。利拉魯肽另外經批准用於治療肥胖症。(B)雙胍(例如甲福明(metformin))被認為主要藉由降低肝臟葡萄糖生產而起作用。雙胍常引起胃腸紊亂及乳酸中毒，進一步限制彼等用途。(C)α-葡萄糖苷酶抑制劑(例如阿卡波糖(acarbose))降低腸道葡萄糖吸收。該等劑常引起胃腸紊亂。(D)噻唑啶二酮(Thiazolidinedione)(例如匹格列酮(pioglitazone)、羅格列酮(rosiglitazone))係在肝、肌肉及脂肪組織之特定受體(過氧化物酶體增生物活化受體γ)上起作用。彼等調控脂質代謝，隨後提高該等組織對胰島素作用的反應。常使用該等藥物可導致體重增加且可誘發水腫及貧血。(E)胰島素係單獨或與上述劑之組合用於更嚴重的病例，且常使用亦可導致體重增加及帶有低血糖症風險。(F)鈉-葡萄糖連結之轉運蛋白共轉運蛋白2(SGLT2)抑制劑(例如達格列淨(dapagliflozin)、恩格列淨(empagliflozin)、卡格列淨(canagliflozin)、依格列淨(ertugliflozin))抑制葡萄糖在腎臟中再吸收且從而降低血液的葡萄糖含量。此新興的藥物類別可能與酮酸中毒及尿道感染相關聯。

然而，除了GLP-1R促效劑及SGLT2抑制劑以外，該等藥物具有的效力有限且未解決最重要的問題：β細胞功能衰退及相關聯的肥胖症

肥胖症為慢性疾病，其在現代社會中高度盛行且與許多醫學問題相關聯，包括高血壓、高膽固醇血症和冠狀心臟疾病。其進一步與T2DM及胰島素抗性高度相關，後者通常伴隨高胰島素血症或高血糖症或二者。另外，T2DM係與冠狀動脈疾病的風險增加2至4倍相關聯。目前以減重手術為高效力消除肥胖症的唯一治療，但是此治療的費用昂貴且有風險。藥理學干預通常不太有效且與副作用相關聯。因此，顯然需要更有效的藥理學干預，具有較少的副作用及方便投藥。

儘管T2DM最常與高血糖症及胰島素抗性相關聯，但是與T2DM相關聯的其他疾病包括肝臟胰島素抗性、葡萄糖耐受不良、糖尿病性神經病變、糖尿病性腎病變、糖尿病性視網膜病變、肥胖症、異常血脂症、高血壓、高胰島素血症和非酒精性脂肪肝病(NAFLD)。

NAFLD為代謝性症候群之肝臟表現，且為涵蓋脂肪變性、非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、纖維變性、硬化及最終肝細胞癌之肝病況範圍。NAFLD及NASH被認為是主要的脂肪肝疾病，因為彼等導致最大比例之個體具有升高的肝脂質。NAFLD/NASH的嚴重性係基於脂質的存在、發炎性細胞浸潤、肝細胞氣球樣變及纖維化程度。儘管並非患有脂肪變性的所有個體皆進展成NASH，但是大部分確實如此。

GLP-1為腸內L細胞反應食物攝取所分泌的30種胺基酸長度之腸促胰液激素。已顯示GLP-1係以生理及葡萄糖依賴性方式刺激胰島素分泌、降低升糖素分泌、抑制胃排空、降低食慾及刺激β細胞增生。在非臨床實驗中，GLP-1係藉由刺激對葡萄糖依賴性胰島素分泌重要的基因轉錄及藉由促進β細胞新生而促進持續的β細胞能力(Meier等人之Biodrugs.2003；17(2)：93-102)。

在健康的個體中，GLP-1係藉由刺激以胰臟的葡萄糖依賴性胰島素分泌，導致末稍的葡萄糖吸收增加而扮演調控餐後血糖含量的重要角色。GLP-1亦抑制升糖素分泌，造成肝臟葡萄糖排出量減少。另外，GLP-1延遲胃排空及減慢小腸運動而延遲食物吸收。在患有T2DM的人中，正常的餐後GLP-1上升不出現或降低(Vilsboll T.等人之Diabetes.2001.50；609-613)。

Holst(Physiol.Rev.2007,87,1409)及Meier(Nat.Rev.Endocrinol.2012,8,728)說明GLP-1受體促效劑(諸如GLP-1、利拉魯肽及愛生丁(exendin)-4)具有藉由降低空腹和餐後葡萄糖(FPG和PPG)以改善患有T2DM的患者之血糖控制的3種主要的藥理學活性：(i)增加的葡萄糖依賴性胰島素分泌(經改善之第一及第二期)，(ii)在高血糖狀況下的升糖素抑制活性，(iii)延遲胃排空速率，導致膳食衍生之葡萄糖的吸收延緩。

對容易地投予以預防及/或治療心臟代謝及相關疾病仍有需求。

2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧呃-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧呾-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(在本文稱為「化合物1」)為GLP1促效劑。

化合物1(游離酸及成為其托立斯鹽(tris salt)之兩種型式)係以2019年6月10日申請之美國專利申請案第16/436,311號及以2019年6月11日申請之國際申請案第PCT/IB2019/054867號的實施例10製備，將該等申請案每一者以其全文特此併入本文以供參考。在那裡，化合物1被標示為2-({4-[2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二氧呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S)-氧呾-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸，DIAST-X2：

其中在化合物結構之左側部分上的手性中心被標記為「abs」，其表明手性中心僅具有一個立體構型(亦即關於該手性中心沒有消旋物)。

另外，美國專利申請案第16/436,311號及國際申請案第PCT/IB2019/054867號記述化合物1的托立斯鹽之無水晶形(標示為形式A)。

熟知固體形式(例如特定藥物之晶形(包括例如無水物、水合物、溶劑合物等))時常為藥物的易製備性、穩定性、溶解度，儲存穩定性、易調配性、易處置性及活體內藥理及/或效力之重要的決定因素。在相同的物質組成係以不同的晶格排列結晶的情況下，出現不同的晶形，導致特定的多晶形式特有的不同熱力學性質及穩定性。若在可產生二或更多種晶形的情況下，希望具有使得每一晶形呈純形式之方法。在決定何種晶形較佳時，必須比較晶形的許多性質且基於許多物理性質變量來選擇較佳的的晶形。在某些方面(諸如易製備性、穩定性等)被認為是關鍵的情況下，完全有可能在某些狀況下可以一種晶形較佳。在其他的情況中，出於較高的溶解度及/或優越的藥物動力學，可能以不同的晶形較佳。而且，因為與一種純晶形相關聯的潛在優勢，所以當一種物質可以二或更多種晶形存在時，則希望防止或減至最少的多晶形轉換(亦即一種晶形轉換成另一晶形；或一種晶形與非晶形之間的轉換)。此多晶形轉換可發生在含有晶形之調配物的製備期間及在含有晶形之醫藥劑型的儲存期間。因為一直尋求顯示例如更好的生物利用率或更好的穩定性之改進的藥物調配物，所以對現有藥物分子之新穎或更純的固體(例如結晶)形式有持續需要。本文所述之化合物1的托立斯鹽之新穎固體形式(例如晶形)係針對此及其他重要的目標。

本發明之概述

本發明提供2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧呃-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧呾-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸托立斯鹽之固體形式，例如水合物(例如單水合物)晶形(例如晶形2或晶形3)或非晶形，其係根據本文提供的粉末X射線繞射數據、¹³C固態NMR數據及/或視需要的單晶光譜數據特徵化。

本發明進一步提供含有本發明之水合物(例如單水合物)晶形(例如晶形2或晶形3)的組成物。

本發明進一步提供用於製備本發明之水合物(例如單水合物)晶形(例如晶形2或晶形3)之方法，例如製備晶形3之方法包含將化合物1的托立斯鹽之無水晶形(例如晶形A)在混合溶劑中漿化以形成單水合物晶形，其中混合溶劑包含水及乙腈。

本發明進一步提供治療疾病或疾患之方法，其包含對需要此治療的哺乳動物投予治療有效量的本發明之水合物(例如單水合物)晶形(例如晶形2或晶形3)，其中該疾病或疾患係選自由下列者所組成之群組：T1D、T2DM、糖尿病前期、特發性T1D、LADA、EOD、YOAD、MODY、營養失調相關性糖尿病、妊娠性糖尿病、高血糖症、胰島素抗性、肝臟胰島素抗性、葡萄糖耐受不良、糖尿病性神經病變、糖尿病性腎病變、腎病、糖尿病性視網膜病變、脂肪細胞功能障礙、內臟脂肪沉著、睡眠呼吸中止、肥胖症、飲食障礙、使用其他藥劑所致體重增加、過度的糖渴望、異常血脂症、高胰島素血症、NAFLD、NASH、纖維變性、伴隨纖維變性之NASH、硬化、肝細胞癌、心血管疾病、動脈粥樣硬化症、冠狀動脈疾病、末梢血管疾病、高血壓、內皮功能障礙、血管順應性受損、鬱血性心衰竭、心肌梗塞、中風、出血性中風、缺血性中風、創傷性腦損傷、肺高壓、血管成形術後再狹窄、間歇性跛行、餐後脂血症、代謝性酸中毒、酮病、關節炎、骨質疏鬆症、帕金森氏病(Parkinson’s Disease)、左心室肥大、周邊動脈疾病、黃斑部退化、白內障、腎小球硬化、慢性腎衰竭、代謝症候群、症候群X、經期前症候群、心絞痛、血栓症、動脈粥樣硬化症、暫時性腦缺血發作、血管再狹窄、葡萄糖代謝受損、空腹血糖受損狀況、高尿酸血症、痛風、勃起功能障礙、皮膚和結締組織疾患、牛皮癬、足潰瘍、潰瘍性結腸炎、高apo B脂蛋白血症(hyper apo B lipoproteinemia)、阿茲海默氏症(Alzheimer’s Disease)、思覺失調症、認知受損、發炎性腸病、短腸症候群、克隆氏症(Crohn’s disease)、結腸炎、腸躁症候群、多囊性卵巢症候群及成癮。

本發明進一步提供2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧呃-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧呾-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸托立斯鹽之非晶形、其醫藥組成物及其治療以GLP-1R調節之疾病或疾患之用途。

[圖1]顯示在配備有Cu輻射源之Bruker AXS D8 Endeavor繞射計上進行之化合物1的托立斯鹽之無水晶形(晶形A)所觀察的粉末X射線繞射圖案。

[圖2]顯示在安置於Bruker-BioSpin Avance III 500MHz(¹H頻率)NMR光譜儀中的Bruker-BioSpin CPMAS探針上進行之化合物1的托立斯鹽之晶形A所觀察的¹³C ssNMR圖案。以#號(hashed mark)標記及灰色陰影框之峰為旋轉邊帶。

[圖3]顯示化合物1的托立斯鹽之單水合物晶形(晶形2)的例證性單晶結構。

[圖4]顯示化合物1的托立斯鹽之晶形2基於其單晶X射線數據分析之資料的經計算/模擬之PXRD圖案。

[圖5]顯示化合物1的托立斯鹽之單水合物晶形(晶形3)的例證性單晶結構。

[圖6]顯示在配備有Cu輻射源之Bruker AXS D8 Endeavor繞射計上進行之化合物1的托立斯鹽之晶形3所觀察的粉末X射線繞射圖案。

[圖7]顯示在安置於Bruker-BioSpin Avance III 500MHz(¹H頻率)NMR光譜儀中的Bruker-BioSpin CPMAS探針上進行的化合物1的托立斯鹽之晶形3所觀察的¹³C ssNMR圖案。以#號標記及灰色陰影框之峰為旋轉邊帶。

本發明之詳細說明

在第一方面，本發明提供化合物1的托立斯鹽之水合物(例如單水合物)晶形，其可以關於例如單晶X射線數據、粉末X射線繞射圖案(PXRD)及其他固態方法(諸如固態NMR)之其獨特的固態標誌鑑定。本文所揭示之化合物1的托立斯鹽之水合物晶形係指包括化合物1的托立斯鹽及水(水合水)兩者於結晶材料/複合物之晶格中的結晶材料/複合物。

在第二方面，本發明提供化合物1的托立斯鹽之單水合物晶形，在本文被標示為晶形2。化合物1的托立斯鹽之單水合物晶形(晶形2)可以關於例如單晶X射線數據、粉末X射線繞射圖案(PXRD)及其他固態方法之其獨特的固態標誌鑑定。

晶形2可藉由緩慢蒸發在溶劑中的化合物1的托立斯鹽之溶液的溶劑以沉澱晶形2來製備，其中溶劑為約3%至約10%(例如約2%至約5%，或約3%至約4%，v/v)之水於質子性有機溶劑(其與水可混溶，例如醇，諸如甲醇或乙醇)中。在一些實施態樣中，晶形2可藉由緩慢蒸發在溶劑中的化合物1的托立斯鹽之溶液的溶劑來製備，其中溶劑為約2%至約5%(例如或約3%至約4%，v/v)之水於甲醇中。在一些實施態樣中，化合物1的托立斯鹽之溶液係現場產生，例如藉由將與水可混溶之質子性有機溶劑(例如醇，諸如甲醇)中的化合物1之溶液與托立斯水溶液混合。

晶形2具有實質上與圖4中所示者相同的經計算/模擬之PXRD圖案。在圖4中的PXRD圖案的經模擬之峰位置及強度提供於表E2-5中。以2θ±0.2° 2θ表示之晶形2的一些特徵性PXRD峰係在7.1、7.6、10.7及19.4(繞射角)。在一些實施態樣中，晶形2具有包含至少一個在7.1、7.6、10.7及19.4以2θ±0.2° 2θ表示之峰的粉末X射線繞射圖案(PXRD)。在一些實施態樣中，晶形2具有包含至少兩個在7.1、7.6、10.7及19.4以2θ±0.2° 2θ表示之峰的PXRD。在一些實施態樣中，晶形2具有包含至少兩個在7.1及10.7以2θ±0.2° 2θ表示之峰的PXRD。在一些實施態樣中，晶形2具有包含至少兩個在7.1及7.6以2θ±0.2° 2θ表示之峰的PXRD。在一些實施態樣中，晶形2具有包含至少三個在7.1、7.6及10.7以2θ±0.2° 2θ表示之峰的PXRD。在一些實施態樣中，晶形2具有包含至少三個在7.1、7.6及19.4以2θ±0.2° 2θ表示之峰的PXRD。在一些實施態樣中，晶形2具有包含至少四個在7.1、7.6、10.7及19.4以2θ±0.2° 2θ表示之峰的PXRD。

在第三方面，本發明提供化合物1的托立斯鹽之單水合物晶形，在本文被標示為晶形3。化合物1的托立斯鹽之單水合物晶形(晶形3)可以關於例如單晶X射線數據、PXRD、¹³C ssNMR及其他固態方法之其獨特的固態標誌鑑定。

晶形3可藉由漿液至漿液之轉化來製備。將溶劑系統中的晶形A(化合物1的托立斯鹽之無水形式)之漿液攪拌一段使晶形A轉化成晶形3之足夠長的時間，其中溶劑系統包括非質子性有機溶劑(例如乙腈或四氫呋喃)及水。在一些實施態樣中，溶劑系統包括乙腈及水，且在溶劑系統中的水對乙腈之比為約2：98至約15：85(例如約8：92 v/v)。在一些實施態樣中，溶劑系統(以mL計)對晶形A(以克計)之比為約10：1至約40：1，例如約15：1至約30：1，或約25：1至約35：1。漿液至漿液之轉化可在室溫下以充分的混合/攪拌來進行。起始材料晶形A之製備(及其物理特徵性質)顯示於實施例1中。晶形A轉化成晶形3可以PXRD監測/評定。

另一選擇地，晶形3可藉由在溶劑系統中蒸氣擴散乙腈至化合物1的托立斯鹽之濃縮(例如飽和)溶液中來製備，其中溶劑系統為乙腈與水之混合物，且在溶劑系統中的水之百分比超過約10體積%，例如約15%。在一些實施態樣中，呈飽和溶液之化合物1的托立斯鹽可為現場產生的濃縮(例如飽和)溶液，例如藉由將乙腈中的化合物1之溶液與托立斯水溶液(例如約1：1之莫耳比)混合。另一選擇地，乙腈可在本文所述之蒸氣擴散方法中經另一與水可混溶的非質子性有機溶劑(例如四氫呋喃)取代[亦即晶形3可藉由在溶劑系統中蒸氣擴散非質子性溶劑至化合物1的托立斯鹽之濃縮(例如飽和)溶液中來製備，其中溶劑系統為非質子性有機溶劑與水之混合物]。

晶形3具有實質上與圖6中所示者相同的PXRD圖案。在圖6中的PXRD圖案之峰位置及強度提供於表E3-5中。以2θ±0.2° 2θ表示之晶形3的一些特徵性PXRD峰係在3.7、7.4、9.9、14.8及20.6(繞射角)。在一些實施態樣中，晶形3具有包含至少一、二、三或四個在3.7、7.4、9.9、14.8及20.6以2θ±0.2° 2θ表示之峰的PXRD。在一些實施態樣中，晶形3具有包含至少二或三個在3.7、7.4、9.9、14.8及20.6以2θ±0.2° 2θ表示之峰的PXRD。在一些實施態樣中，晶形3具有包含至少兩個在7.4及14.8以2θ±0.2° 2θ表示之峰的PXRD。在一些實施態樣中，晶形3具有包含至少三個在3.7、7.4及14.8以2θ±0.2° 2θ表示之峰的PXRD。在一些實施態樣中，晶形3具有包含四個在3.7、7.4、14.8及20.6以2θ±0.2° 2θ表示之峰的PXRD。在一些實施態樣中，晶形3具有包含五個在3.7、7.4、9.9、14.8及20.6以2θ±0.2° 2θ表示之峰的PXRD。在一些實施態樣中，晶形3具有包含在3.7、7.4、9.9、11.1、14.8、18.2、20.6、23.5、24.3及24.6以2θ±0.2° 2θ表示之峰的PXRD。

晶形3具有實質上與圖7中所示者相同的¹³C ssNMR光譜。如圖7中所示之晶形3的¹³C化學位移(±0.2ppm)列示於表E3-6中。以ppm表示之晶形3的一些特徵性¹³C ssNMR化學位移係在42.8、54.7、128.2、138.4及156.6±0.2ppm。

在一些實施態樣中，晶形3具有包含在54.7及138.4±0.2ppm之化學位移的¹³C ssNMR光譜。在一些實施態樣中，晶形3具有包含在54.7、138.4和156.6ppm±0.2ppm之化學位移的¹³C ssNMR光譜。

在第四方面，本發明進一步提供化合物1的托立斯鹽之非晶形。化合物1的托立斯鹽之非晶形不給出獨特的X-射線繞射圖案(亦即其PXRD不具有如晶形A或晶形3之PXRD中的銳峰)。化合物1的托立斯鹽之非晶形可藉由例如冷凍乾燥法來製備(自化合物1的托立斯鹽之溶液開始)。

本發明之任何固體形式可為實質上純的。如本文述及特定的固體形式(例如晶形)所使用之術語「實質上純的」意指特定的固體形式(例如晶形)包括少於15重量%、少於10重量%、少於5重量%、少於3重量%或少於1重量%之化合物1的托立斯鹽之任何其他物理形式。

當用於說明X射線粉末繞射圖案時，術語「實質上相同的」意謂著包括其中峰係在+/- 0.2° 2θ之標準偏差內的圖案。

當用於說明¹³C ssNMR光譜時，術語「實質上相同的」意謂著包括其中化學位移係在+/- 0.2ppm之標準偏差內的¹³C ssNMR光譜。

術語「約」通常意指在給出之值或範圍的10%內，較佳為5%內，且更佳為1%內。另一選擇地，當由熟習本技術領域者考量時，術語「約」意指在平均值之可接受的標準誤差內。

術語「托立斯」意指1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺，亦稱為THAM、胺丁三醇(tromethamine)或2-胺基-2-(羥基甲基)丙烷-1,3-二醇。

化合物1的托立斯鹽意指使用1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺製成之化合物1的鹽。托立斯係與化合物1的羧酸部分締合。當述及化合物1的托立斯鹽時，除非另有其他陳述，否則相對離子及化合物1具有約1：1之化學計量比(亦即0.9：1.0至1.0：0.9，例如0.95：1.00至1.00：0.95)。化合物1的托立斯鹽之另一化學名稱為2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧呃-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧呾-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺鎓鹽(aminium)，其亦可以例如以下結構之一表示。

或

那些熟習本技術領域者能輕易地理解可使用多種命名法命名相同的化合物(包括相同的鹽)。

當使用術語「單水合物」說明化合物(或鹽)之晶形時，則該術語意指水合水對化合物(或鹽)之化學計量比為約1：1(例如0.9：1.0至1.1：1.0)。

在另一實施態樣中，本發明提供醫藥組成物，其包含與至少一種醫藥上可接受的賦形劑摻合的本發明之晶形(例如晶形3)。本發明可包括醫藥組成物，其包含與至少一種醫藥上可接受的賦形劑摻合的如本文所述之實施態樣中任一者所定義的本發明之晶形(例如晶形3)及本文所討論的一或多種其他治療劑。

在另一實施態樣中，本發明提供醫藥組成物，其包含與至少一種醫藥上可接受的賦形劑摻合的本發明之非晶形。本發明可包括醫藥組成物，其包含與至少一種醫藥上可接受的賦形劑摻合的本發明之非晶形及本文所討論的一或多種其他治療劑。

在另一實施態樣中，本發明提供醫藥組成物，其包含治療有效量的化合物1的托立斯鹽及醫藥上可接受的載劑，其中至少5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、98%或99%之化合物1的托立斯鹽係以本發明之固體形式之一存在(例如晶形2、晶形3或非晶形)。

在另一實施態樣中，本發明提供醫藥組成物，其包含治療有效量的化合物1的托立斯鹽及醫藥上可接受的載劑，其中化合物1的托立斯鹽係以至少兩種固體形式存在，例如晶形及非晶形。

在另一實施態樣中，本發明提供醫藥組成物，其包含治療有效量的化合物1的托立斯鹽及醫藥上可接受的載劑，其中化合物1的托立斯鹽係以至少兩種固體形式存在，例如本發明之晶形(例如晶形2或晶形3)及非晶形。在進一步的實施態樣中，本發明提供醫藥組成物，其包含治療有效量的化合物1的托立斯鹽及醫藥上可接受的載劑，其中化合物1的托立斯鹽係以兩種固體形式存在，其中之一為非晶形及另一者為晶形3。

在另一實施態樣中，本發明提供醫藥組成物，其包含治療有效量的化合物1的托立斯鹽及醫藥上可接受的載劑，其中化合物1的托立斯鹽係以兩種固體形式存在，其中之一為非晶形及另一者為晶形2。

在另一實施態樣中，本發明提供醫藥組成物，其包含治療有效量的化合物1的托立斯鹽及醫藥上可接受的載劑，其中化合物1的托立斯鹽係以兩種固體形式存在，其中之一為晶形A及另一者為晶形3。

本發明亦包括下列的實施態樣：如本文所述之實施態樣中任一者所定義的本發明之固體形式(例如晶形2、晶形3或非晶形)，其係用作為藥劑；如本文所述之實施態樣中任一者所定義的本發明之固體形式(例如晶形2、晶形3或非晶形)，其係用於預防及/或治療本文所討論的心臟代謝及相關疾病，包括T2DM、糖尿病前期、肥胖症、NASH(例如伴隨纖維變性之NASH)、NAFLD和心血管疾病；治療需要此等預防及/或治療的個體之以GLP-1R促效劑適用的疾病之方法，其包含對個體投予治療有效量的如本文所述之實施態樣中任一者所定義的本發明之固體形式(例如晶形2、晶形3或非晶形)；如本文所述之實施態樣中任一者所定義的本發明之固體形式(例如晶形2、晶形3或非晶形)的用途，其係用於製造供治療以GLP-1R促效劑適用的疾病或病況之藥劑；如本文所述之實施態樣中任一者所定義的本發明之固體形式(例如晶形2、晶形3或非晶形)，其係用於治療以GLP-1R促效劑適用的疾病或病況；或用於治療以GLP-1R促效劑適用的疾病或病況之醫藥組成物，其包含如本文所述之實施態樣中任一者所定義的本發明之固體形式(例如晶形2、晶形3或非晶形)。

本發明亦包括下列的實施態樣：如本文所述之實施態樣中任一者所定義的本發明之晶形(例如晶形3)，其係用作為藥劑；如本文所述之實施態樣中任一者所定義的本發明之晶形(例如晶形3)，其係用於預防及/或治療本文所討論的心臟代謝及相關疾病，包括T2DM、糖尿病前期、肥胖症、NASH(例如伴隨纖維變性之NASH)、NAFLD和心血管疾病；治療需要此等預防及/或治療的個體之以GLP-1R促效劑適用的疾病之方法，其包含對個體投予治療有效量的如本文所述之實施態樣中任一者所定義的本發明之晶形(例如晶形3)；如本文所述之實施態樣中任一者所定義的本發明之晶形(例如晶形3)的用途，其係用於製造供治療以GLP-1R促效劑適用的疾病或病況之藥劑；如本文所述之實施態樣中任一者所定義的本發明之晶形(例如晶形3)，其係用於治療以GLP-1R促效劑適用的疾病或病況；或用於治療以GLP-1R促效劑適用的疾病或病況之醫藥組成物，其包含如本文所述之實施態樣中任一者所定義的本發明之晶形(例如晶形3)。

本發明之固體形式的每個實例可單獨或與任何數量的本文所述之各個及每個實施態樣以任何組合一起提出申請。

本發明亦關於包含如本文所述之實施態樣中任一者所定義的本發明之固體形式(例如晶形2、晶形3或非晶形)的醫藥組成物，其係用於治療及/或預防本文所討論的心臟代謝及相關疾病，包括T2DM、糖尿病前期、肥胖症、NASH(例如伴隨纖維變性之NASH)、NAFLD和心血管疾病。

本發明亦關於包含如本文所述之實施態樣中任一者所定義的本發明之晶形(例如晶形3)的醫藥組成物，其係用於治療及/或預防本文所討論的心臟代謝及相關疾病，包括T2DM、糖尿病前期、肥胖症、NASH(例如伴隨纖維變性之NASH)、NAFLD和心血管疾病。

本發明之另一實施態樣關於如本文所述之實施態樣中任一者所定義的本發明之固體形式(例如晶形2、晶形3或非晶形)，例如本發明之晶形(例如晶形3)，其係用於治療及/或預防以GLP-1R促效劑適用的疾病及/或疾患，包括糖尿病(T1D及/或T2DM，包括糖尿病前期)、特發性T1D(第1b型)、潛伏性成人自體免疫糖尿病(LADA)、早發性T2DM(EOD)、青少年發作型非典型糖尿病(YOAD)、年輕人成年發作型糖尿病(MODY)、營養失調相關性糖尿病、妊娠性糖尿病、高血糖症、胰島素抗性、肝臟胰島素抗性、葡萄糖耐受不良、糖尿病性神經病變、糖尿病性腎病變、腎病(例如急性腎疾患、腎小管功能障礙、近曲小管之促發炎變化)、糖尿病性視網膜病變、脂肪細胞功能障礙、內臟脂肪沉著、睡眠呼吸中止、肥胖症(包括下視丘性肥胖症和單基因性肥胖症)及相關性合併症(例如骨關節炎和尿失禁)、飲食障礙(包括劇食症候群、暴食症和症候群性肥胖症，諸如普拉得威利(Prader-Willi)和巴德-畢德(Bardet-Biedl)症候群)、使用其他藥劑所致體重增加(例如使用類固醇和抗精神病藥)、過度的糖渴望、異常血脂症(包括高脂血症、高三酸甘油脂血症、增加的總膽固醇、高的LDL膽固醇和低的HDL膽固醇)、高胰島素血症、NAFLD(包括相關性疾病，諸如脂肪變性、NASH、纖維變性、伴隨纖維變性之NASH、硬化和肝細胞癌)、心血管疾病、動脈粥樣硬化症(包括冠狀動脈疾病)、末梢血管疾病、高血壓、內皮功能障礙、血管順應性受損、鬱血性心衰竭、心肌梗塞(例如壞死和凋亡)、中風、出血性中風、缺血性中風、創傷性腦損傷、肺高壓、血管成形術後再狹窄、間歇性跛行、餐後脂血症、代謝性酸中毒、酮病、關節炎、骨質疏鬆症、帕金森氏病、左心室肥大、周邊動脈疾病、黃斑部退化、白內障、腎小球硬化、慢性腎衰竭、代謝症候群、症候群X、經期前症候群、心絞痛、血栓症、動脈粥樣硬化症、暫時性腦缺血發作、血管再狹窄、葡萄糖代謝受損、空腹血糖受損狀況、高尿酸血症、痛風、勃起功能障礙、皮膚和結締組織疾患、牛皮癬、足潰瘍、潰瘍性結腸炎、高apo B脂蛋白血症、阿茲海默氏症、思覺失調症、認知受損、發炎性腸病、短腸症候群、克隆氏症、結腸炎、腸躁症候群、多囊性卵巢症候群及成癮(例如酒精及/或藥物濫用)。

室溫：RT(15至25℃)。

甲醇：MeOH。

乙醇：EtOH。

異丙醇：iPrOH。

乙酸乙酯：EtOAc。

四氫呋喃：THF。

甲苯：PhCH₃。

碳酸銫：Cs₂CO₃。

雙(三甲基矽基)胺化鋰：LiHMDS。

三級丁醇鈉：NaOtBu。

三級丁醇鉀：KOtBu。

二異丙基胺化鋰：LDA。

三乙胺：NEt₃。

N,N-二異丙基乙胺：DIPEA。

碳酸鉀：K₂CO₃。

二甲基甲醯胺：DMF。

二甲基乙醯胺：DMAc。

二甲基亞碸：DMSO。

N-甲基-2-吡咯啶酮：NMP。

氫化鈉：NaH。

三氟乙酸：TFA。

三氟乙酸酐：TFAA。

乙酸酐：Ac₂O。

二氯甲烷：DCM。

1,2-二氯乙烷：DCE。

氫氯酸：HCl。

1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一-7-烯：DBU。

硼烷-二甲硫複合物：BH₃-DMS。

硼烷-四氫呋喃複合物：BH₃-THF。

鋁氫化鋰：LAH。

乙酸：AcOH。

乙腈：MeCN。

對甲苯磺酸：pTSA。

二亞苄基丙酮：DBA。

2,2’-雙(二苯膦基)-1,1’-聯萘：BINAP。

1,1’-二茂鐵二基-雙(二苯膦)：dppf。

1,3-雙(二苯膦基)丙烷：DPPP。

3-氯過氧苯甲酸：m-CPBA。

三級丁基甲基醚：MTBE。

甲磺醯基：Ms。

N-甲基吡咯啶酮：NMP。

薄層層析法：TLC。

超臨界流體層析法：SFC。

4-(二甲基胺基)吡啶：DMAP。

三級丁氧基羰基：Boc。

三苯膦：Ph₃P。

六氟磷酸1-[雙(二甲基胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓-3-氧化物：HATU。

石油醚：PE。

六氟磷酸2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓：HBTU。

2-胺基-2-(羥甲基)丁-1,3-二醇：托立斯。

參(二亞苄基丙酮)二鈀：Pd₂(dba)₃。

¹H核磁共振(NMR)光譜在所有的例子中與所提出之結構一致。特徵性化學位移(δ)係在氘化溶劑(在7.27ppm之CHCl₃；在3.31ppm之CD₂HOD；在1.94ppm之MeCN；在2.50ppm之DMSO)中相對於殘餘質子訊號而以百萬分率給出，且使用主要峰標示的常規縮寫來記述：例如s，單峰；d，雙峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；br，寬峰。符號^表示¹H NMR峰面積係假定的，因為該峰被水峰部分遮蔽。符號^^表示¹H NMR峰面積係假定的，因為該峰被溶劑峰部分遮蔽。

下文所述之化合物及中間物係使用以ACD/ChemSketch 2012,ChemDraw,File Version C10H41,Build 69045(Advanced Chemistry Development,Inc.,Toronto,Ontario,Canada)所提供的命名約定命名。以ACD/ChemSketch 2012所提供的命名約定為那些熟習本技術領域者所熟知且咸信以ACD/ChemSketch 2012所提供的命名約定通常與基於機化學命名法的IUPAC(國際純粹及應用化學聯合會(International Union for Pure and Applied Chemistry))建議及CAS索引規則相符。應注意化學名稱可能僅有圓括號或可能有圓括號及方括號。立體化學說明符號亦可取決於命名約定而放置在名稱本身內的不同位置。一般熟習本技術領域者能識別該等格式變化且理解該等變化係提供相同的化學結構。

醫藥上可接受的鹽包括酸加成鹽及鹼鹽。

適合的酸加成鹽係自形成無毒性鹽的酸形成。實例包括乙酸鹽、己二酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、碳酸氫鹽/碳酸鹽、硫酸氫鹽/硫酸鹽、硼酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環己胺基磺酸鹽、乙二磺酸鹽、乙磺酸鹽、甲酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、六氟磷酸鹽、海苯酸鹽(hibenzate)、鹽酸鹽/氯化物、氫溴酸鹽/溴化物、氫碘酸鹽/碘化物、羥乙基磺酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、萘酸鹽、2-萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、硝酸鹽、乳清酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽/磷酸二氫鹽、焦麩胺酸鹽、糖二酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、單寧酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽、三氟乙酸鹽、1,5-萘二磺酸鹽和昔萘酸鹽(xinafoate)。

適合的鹼鹽係自形成無毒性鹽的鹼形成。實例包括鋁鹽、精胺酸鹽、苄星(benzathine)鹽、鈣鹽、膽鹼鹽、二乙胺鹽、雙(2-羥乙基)胺(二乙醇胺(diolamine))鹽、甘胺酸鹽、離胺酸鹽、鎂鹽、葡甲胺(meglumine)鹽、2-胺基乙醇(乙醇胺(olamine))鹽、鉀鹽、鈉鹽、2-胺基-2-(羥甲基)丙-1,3-二醇(托立斯或胺丁三醇)鹽和鋅鹽。

亦可形成酸及鹼的半鹽，例如半硫酸鹽和半鈣鹽。關於適合的鹽之綜述，參見Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties,Selection,and Use by Stahl and Wermuth(Wiley-VCH,2002)。

醫藥上可接受的鹽可以下列三種方法中之一或多者製備：(i)藉由將化合物與所欲酸或鹼反應；(ii)藉由使用所欲酸或鹼自化合物之適合的前驅物移除酸或鹼不穩定性保護基或使適合的環狀前驅物(例如內酯或內醯胺)開環；或(iii)由將化合物的一種鹽與適當的酸或鹼反應或藉助於適合的離子交換管柱而轉化成另一種鹽。

所有三種反應通常係以溶液進行。所得鹽可沉澱出且以過濾收集或可以蒸發溶劑而回收。所得鹽之離子化程度可從完全離子化至幾乎未離子化不等。

化合物及醫藥上可接受的鹽可呈非溶劑化及溶劑化形式存在。本文使用之術語「溶劑合物」說明包含化合物或其鹽與一或多種醫藥上可接受的溶劑分子(例如乙醇)之分子複合物。當該溶劑為水時，則使用術語「水合物」。例如，本文所揭示之化合物1的托立斯鹽之水合物晶形係指包括化合物1的托立斯鹽及水(水合水)兩者於結晶材料/複合物之晶格中的結晶材料/複合物。

目前公認之有機水合物的分類系統為界定經隔離之部位、通道或金屬離子配位水合物的系統，參見K.R.Morris之Polymorphism in Pharmaceutical Solids(Ed.H.G.Brittain,Marcel Dekker,1995)。經隔離之部位水合物為其中水分子係藉由插入有機分子而彼此隔離不直接接觸的水合物。在通道水合物中，水分子係位於晶格通道內，在此與其他的水分子相鄰。在金屬離子配位水合物中，水分子係與金屬離子鍵結。

當溶劑或水緊密結合時，複合物可具有與濕度無關的明確界定之化學計量。然而，當溶劑或水弱結合時，如在通道溶劑合物及吸濕性化合物中，水/溶劑含量可取決於濕度及乾燥條件。在此等例子中，非化學計量將為常態。

多組分複合物(除了鹽及溶劑合物以外)亦包括在本發明之範圍內，其中藥物及至少一種其他組分係以化學計量或非化學計量之量存在。此類型之複合物包括晶籠化合物(藥物-主體包合複合物(drug-host inclusion complexe))及共晶體。後者通常經定義為通過非共價交互作用結合在一起的中性分子成分之結晶複合物，但亦可能為中性分子與鹽之複合物。共晶體可藉由熔融結晶、自溶劑再結晶或將組分一起經物理研磨而製備，參見O.Almarsson和M.J.Zaworotko之Chem Commun,17,1889-1896(2004)。多組分複合物之概括綜述，參見Haleblian之J Pharm Sci,64(8),1269-1288,(1975年8月)。

本發明化合物亦可以完全非晶形至完全結晶為範圍之連續固體狀態存在。術語「非晶形」係指其中材料以分子層級缺乏長範圍有序性且取決於溫度而可能展現固體或液體之物理性質的狀態。此等材料通常不給出獨特的X-射線繞射圖案，且雖然展現固體性質，但更正式地說明為液體。一經加熱，發生自固體性質改變成液體性質，其係以狀態改變為特徵，典型為二級改變(「玻璃轉變」)。術語「結晶」係指其中材料以分子層級具有規則有序的內部結構且給出具有明確的峰之獨特的X-射線繞射圖案之固相。此等材料當經充分加熱時亦展現液體性質，但是自固體改變成液體係以相改變為特徵，典型為一級改變(「熔點」)。

當經受適當的條件時，化合物亦可以介晶態(中間相或液晶)存在。介晶態為介於真正結晶態與真正液態(熔融或溶液)之間的中間態。由於溫度改變所引起之介晶現象經說明為「熱致性(thermotropic)」，及起因於加入第二組分(諸如水或另一溶劑)之介晶現象經說明為「溶致性 (lyotropic)」。具有形成溶致性中間相之可能性的化合物經說明為「兩親性(amphiphilic)」且由具有離子極性頭端基(head group)(諸如-COO^-Na⁺、-COO^-K⁺或-SO₃ ^-Na⁺)或非離子極性頭端基(諸如-N^-N⁺(CH₃)₃)之分子所組成。關於更多資料，參看N.H.Hartshorne和A.Stuart之第四版Crystals and the Polarizing Microscope(Edward Arnold,1970)。

一些化合物可展現多晶形現象及/或一或多種異構現象(例如光學、幾何或互變異構現象)。本發明之晶形亦可經同位素標記。此等變化係藉由參考彼等的結構特性而無疑為所定義之化合物1或其鹽且因此在本發明之範圍內。

含有一或多個不對稱碳原子的化合物可以二或更多種立體異構物存在。在化合物含有烯基或伸烯基的情況下，有可能為幾何順式/反式(或Z/E)異構物。在結構異構物係經由低能屏障而互相轉換的情況下，可能出現互變異構現象(「互變異構現象(tautomerism)」)。這在含有例如亞胺基、酮基或肟基之化合物中可呈質子互變異構現象的形式，或在含有芳族部分之化合物中可呈所謂的價互變異構現象的形式。由此得出單一化合物可展現一種類型以上的異構現象。

化合物1之特定的醫藥上可接受的鹽亦可含有具有光學活性(例如d-乳酸鹽或l-離胺酸)或消旋性(例如dl-酒石酸鹽或dl-精胺酸)之相對離子。

順式/反式異構物可以那些熟習本技術領域者熟知的常規技術分離，例如層析法及分步結晶。

用於製備/單離個別的鏡像異構物之常規技術包括自適合的光學純性前驅物之手性合成，或使用例如手性高壓液相層析法(HPLC)之消旋物(或鹽或衍生物之消旋物)解析。另一選擇地，含有手性酯之消旋性前驅物可以酵素解析法分離(參見例如A.C.L.M.Carvaho等人之Int J Mol Sci 29682-29716(2015))。在化合物含有酸或鹼部分的例子中，可以光學純性鹼或酸(諸如1-苯基乙胺或酒石酸)形成鹽。所得非鏡像異構物混合物可經分步結晶分離，且非鏡像異構物中之一或兩者可以技術人員熟知的方式轉化成對應之純鏡像異構物。另一選擇地，消旋物(或消旋性前驅物)可與適合的光學活性化合物(例如醇、胺或氯甲苯)反應。所得非鏡像異構物混合物可以技術人員熟知的方式經層析法及/或分步結晶分離，以給出具有2或更多個手性中心之單一鏡像異構物形式的經單離之非鏡像異構物。手性化合物(及其手性前驅物)可使用層析法(通常為HPLC)在具有流動相的不對稱樹脂上以鏡像異構物濃化形式獲得，該流動相係由含有0至50體積%(通常為2體積%至20體積%)之異丙醇及0至5體積%之烷胺(通常為0.1體積%之二乙胺)的烴(通常為庚烷或己烷)所組成。以濃縮溶析液供給濃化之混合物。可利用使用亞臨界及超臨界流體之手性層析法。在本發明之一些實施態樣中有用的手性層析方法為本技術中已知(參見例如Smith,Roger M.,Loughborough University,Loughborough,UK；Chromatographic Science Series(1998),75(SFC with Packed Columns),pp.223-249，及其中引用的參考文獻)。在本文的一些相關實例中，管柱係自Daicel^® Chemical Industries,Ltd.,Tokyo,Japan之子公司Chiral Technologies,Inc,West Chester,Pennsylvania,USA獲得。

當任何消旋物結晶時，可能有兩個不同類型的晶體。第一類型為上文述及之消旋性化合物(真正消旋物)，其中產生含有等莫耳量的兩種鏡像異構物之均質形式的晶體。第二類型為消旋性混合物或晶團，其中產生具有等莫耳量的兩種形式的晶體，各包含單一鏡像異構物。雖然在消旋性混合物中存在的兩種晶體形式具有相同的物理特性，但是與真正消旋物相比，彼等可能具有不同的物理性質。消旋性混合物可以那些熟習本技術領域者已知的常規技術分離，參見例如E.L.Eliel和S.H.Wilen之Stereochemistry of Organic Compounds(Wiley,1994)。

必須強調化合物1及其鹽在本文已以單一互變異構物形式繪製，但是所有可能的互變異構物形式皆包括在本發明之範圍內。

本發明包括所有醫藥上可接受的經同位素標記之化合物1或其鹽，其中將一或多個原子經具有相同的原子數，但原子質量或質量數不同於自然界中佔優勢的原子質量或質量數之原子置換。

適合於內含在本發明化合物中之同位素的實例包括下列者之同位素：氫，諸如²H和³H；碳，諸如¹¹C、¹³C和 ¹⁴C；氯，諸如³⁶Cl；氮，諸如¹³N和¹⁵N；及氧，諸如¹⁵O、¹⁷O和¹⁸O。

特定的經同位素標記之化合物1或其鹽(例如那些併入放射活性同位素者)有用於藥物及/或基質組織分布研究。放射活性同位素氚(亦即³H)及碳-14(亦即¹⁴C)係鑑於彼之易併入性及現成的檢測方式而特別有用於此目的。

以較重的同位素(諸如氘，亦即²H)取代可起因於更大的代謝穩定性而供給特定的治療優勢，例如增加活體內半生期或降低劑量需求。

以正子發射同位素(諸如¹¹C、¹⁸F、¹⁵O和¹³N)取代可用於檢查基質受體佔有率之正子放射斷層攝影術(PET)研究。

經同位素標記之化合物通常可以那些熟習本技術領域者已知的常規技術或以類似於那些在所附實施例和製法中所述之方法使用適當的經同位素標記之試劑代替先前所使用的未經標記之試劑來製備。

依照本發明之醫藥上可接受的溶劑合物包括那些其中結晶溶劑可經同位素取代(例如D₂O、d₆-丙酮、d₆-DMSO)之溶劑合物。

投予及給藥

本發明化合物(呈晶形)通常以有效治療如本文所述之病況的量投予。本發明化合物可以化合物本身或另一選擇地以醫藥上可接受的鹽投予。出於投予及給藥之目的，化合物本身或其醫藥上可接受的鹽簡單地稱為本發明化合物。

本發明化合物係由任何適合的途徑以適合於此途徑之醫藥組成物形式及對意欲治療有效的劑量投予。本發明化合物可經口、直腸、陰道、非經腸或局部投予。

本發明化合物可經口投予。經口投予可包含吞服，使得化合物進入胃腸道，或可使用頰內或舌下投予，藉此使化合物從嘴巴直接進入血流中。

在另一實施態樣中，本發明化合物亦可直接投予血流中、肌肉中或內部器官中。適合於非經腸投予的方式包括靜脈內、動脈內、腹膜內、脊髓內、心室內、尿道內、胸骨內、顱內、肌肉內和皮下。適合於非經腸投予的裝置包括針(包括微針)注射器、無針注射器和輸液技術。

在另一實施態樣中，本發明化合物可局部投予皮膚或黏膜，亦即經皮膚或穿透皮膚。在另一實施態樣中，本發明化合物亦可經鼻內或以吸入投予。在另一實施態樣中，本發明化合物可經直腸或陰道投予。在另一實施態樣中，本發明化合物亦可直接投予眼或耳。

本發明化合物及/或含有該化合物之組成物的劑量方案係基於許多因素，包括患者的類型、年齡、體重、性別和醫學病況；病況的嚴重性；投予投徑；及所使用之特定化合物的活性。因此，劑量方案可廣泛地改變。在一個實施態樣中，用於治療本文所討論之適應病況的本發明化合物之總日劑量為約0.001至約100mg/kg(亦即以每公斤體重計之mg本發明化合物)。在另一實施態樣中，本發明化合物之總日劑量為約0.01至約30mg/kg，且在另一實施態樣中為約0.03至約10mg/kg，且在又另一實施態樣中為約0.1至約3mg/kg。以一天內重複投予本發明化合物很多次並不罕見(通常不超過4次)。若需要，通常可使用每天多次劑量以增加總日劑量。

用於經口投予之組成物可以錠劑形式提供，其含有0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、25.0、30.0、50.0、75.0、100、125、150、175、200、250和500mg活性成分，用於對患者進行症狀調整之劑量。藥劑通常含有約0.01mg至約500mg活性成分，或在另一實施態樣中為約1mg至約100mg活性成分。在固定的速率輸液期間經靜脈內之劑量可在約0.01至約10mg/kg/分鐘之範圍內。

根據本發明之適合的個體包括哺乳動物個體。在一個實施態樣中，人類為適合的個體。人類個體可為任何性別及處於任何發育階段。

醫藥組成物

在另一實施態樣中，本發明包含醫藥組成物。此等醫藥組成物包含與醫藥上可接受的載劑呈示之本發明化合物。亦可有其他的藥理活性物質存在。如本文所使用的「醫藥上可接受的載劑」包括任何及所有的溶劑、分散介質、包膜、抗細菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑及生理上可相容的類似者。醫藥上可接受的載劑的實例包括水、鹽水、磷酸鹽緩衝鹽水、葡萄糖、甘油、乙醇及類似者中之一或多者，以及彼等之組合，且可在組成物中包括等滲劑，例如糖、氯化鈉或多元醇，諸如甘露醇或山梨醇。醫藥上可接受的物質(諸如潤濕劑)或少量輔助物質(諸如潤濕劑或乳化劑、保存劑或緩衝劑)提高抗體或抗體部分的儲存壽命或有效性。

本發明組成物可呈多種形式。該等形式包括例如液體、半固體和固體劑型，諸如液體溶液(例如可注射和可輸液溶液)、分散液或懸浮液、錠劑、丸劑、粉劑、脂質體和栓劑。該形式係取決於意欲投予模式及治療應用而定。

典型的組成物係呈可注射和可輸液溶液形式，諸如類似於那些通常用於以抗體的人類被動免疫之組成物。一種投予模式為非經腸(例如靜脈內、皮下、腹膜內、肌肉內)。在另一實施態樣中，抗體係經靜脈內輸液或注射投予。在又另一實施態樣中，抗體係經肌肉內或皮下注射投予。

固體劑型之經口投予可以例如個別單元呈示，諸如硬或軟膠囊、丸劑、扁囊劑、菱形錠或錠劑，各含有預定量的至少一種本發明化合物。在另一實施態樣中，經口投予可呈粉末或顆粒形式。在另一實施態樣中，經口劑型為舌下形式，諸如菱形錠。在此等固體劑型中，本發明化合物慣常與一或多種佐劑組合。此等膠囊或錠劑可含有控制釋放型調配物。在膠囊、錠劑和丸劑的例子中，劑型亦可包含緩衝劑或可以腸溶衣製備。

在另一實施態樣中，經口投予可呈液體劑型。用於經口投予之液體劑型包括例如含有本技術常使用的惰性稀釋劑(例如水)之醫藥上可接受的乳液、溶液、懸浮液、糖漿和酏劑。此等組成物亦可包含佐劑，諸如潤濕劑、乳化劑、懸浮劑、調味劑(例如甜味劑)及/或芳香劑。

在另一實施態樣中，本發明包含非經腸劑型。「非經腸投予」包括例如皮下注射、靜脈內注射、腹膜內注射、肌肉內注射、胸骨內注射和輸液。可注射製劑(亦即無菌可注射水性或油性懸浮液)可根據已知的技術使用適合的分散劑、潤濕劑及/或懸浮劑調配。

在另一實施態樣中，本發明包含局部用劑型。「局部投予」包括例如經皮投予，諸如經由經皮貼片或電離子透入裝置、眼內投予或鼻內或吸入投予。用於局部投予之組成物亦包括例如局部用凝膠、噴霧、軟膏和乳膏。局部用調配物可包括提高活性成分通過皮膚或其他受感染區域吸收或穿透之化合物。當本發明化合物係以經皮裝置投予時，則投予係使用儲集器及多孔膜類型或固體基質種類之任一者的貼片實現。出於此目的之典型的調配物包括凝膠、水凝膠、洗劑、溶液、乳膏、軟膏、撒布粉、敷料、發泡體、薄膜、皮膚貼片、扁片(wafer)、植入物、海綿、纖維、繃帶和微乳液。亦可使用脂質體。典型的載劑包括醇、水、礦物油、液態石蠟、白石蠟、甘油、聚乙二醇和丙二醇。可併入穿透增強劑，參見例如B.C.Finnin和T. M.Morgan之J.Pharm.Sci.,vol.88,pp.955-958,1999。

適合於局部投予睛眼之調配物包括例如眼滴劑，其中將本發明化合物溶解或懸浮於適合的載劑中。適合於經眼或耳投予之典型的調配物可呈於等滲、pH經調整之無菌鹽水中的微粉化懸浮液或溶液之滴劑形式。適合於經眼及耳投予之其他調配物包括軟膏、生物可降解(亦即可吸收的凝膠海綿、膠原蛋白)和非生物可降解(亦即聚矽氧)植入物、扁片、鏡片及微粒或囊泡系統，諸如泡囊體(niosome)或脂質體。聚合物(諸如經交聯之聚丙烯酸、聚乙烯醇、玻尿酸、纖維素聚合物(例如羥丙基甲基纖維素、羥乙基纖維素或甲基纖維素)或異元多醣聚合物(例如結蘭膠(gelan gum))可與保存劑(諸如氯化烷基二甲基苄基銨(benzalkonium chloride))一起併入。此等調配物亦可藉由電離子透入法投遞。

用於鼻內投予或以吸入投予之本發明化合物係以來自由患者擠壓或泵吸的泵噴霧容器的溶液或懸浮液形式，或以來自使用適合的推進劑之施壓容器或氣霧器的氣霧劑噴霧呈現而方便地投遞。適合於鼻內投予之調配物通常係以來自乾粉吸入器的乾粉形式(單獨；呈例如與乳糖乾燥摻合之混合物，或呈例如與磷脂(諸如磷脂醯膽鹼)混合之混合型組分粒子)，或以來自使用或不使用適合的推進劑(諸如1,1,1,2-四氟乙烷或1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷)之施壓容器、泵、噴霧器、霧化器(較佳為使用電流體動力產生細霧之霧化器)或氣霧器的氣霧劑噴霧形式投予。用於鼻內的粉末可包含生物黏著劑，例如聚葡萄胺糖或環糊精。

在另一實施態樣中，本發明包含直腸劑型。此直腸劑型可呈例如栓劑形式。可可脂為傳統栓劑基底，但在適當時可使用各種替代物。

亦可使用在醫藥技術中已知的其他載劑材料及投予模式。本發明之醫藥組成物可以熟知的醫藥技術中任一者(諸如有效的調配及投予程序)製備。上述關於有效的調配及投予程序的考量為本技術中所熟知且說明於標準教科書中。藥物的調配於例如Hoover,John E.之Remington’s Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,Pennsylvania,1975；Liberman等人編輯之Pharmaceutical Dosage Forms,Marcel Decker,New York,N.Y.,1980；及Kibbe等人編輯之Handbook of Pharmaceutical Excipients(3rd Ed.),American Pharmaceutical Association,Washington,1999中討論。

共同投予

本發明化合物可單獨或與其他治療劑組合使用。本發明提供如本文所定義之用途、方法或組成物中任一者，其中本文之任何實施態樣的化合物或其醫藥上可接受的鹽，或該化合物或鹽之醫藥上可接受的溶劑合物係與本文所討論的一或多種其他治療劑組合使用。這可能包括用於治療以GLP-1R促效劑適用的疾病或病況之醫藥組成物，其包含如本文所述之實施態樣中任一者所定義的本發明之晶形的及本文所討論的一或多種其他治療劑。

二或更多種化合物「組合」投予意指所有的化合物在足夠接近的時間內投予，使各者可在相同的時間框架內產生生物效應。一種藥劑的存在可改變其他化合物的生物效應。二或更多種化合物可同時、並行或依序投予。另外，同時投予可藉由在投予前混合化合物或藉由在相同的時間點但以個別的劑型在相同或不同的投予位點上投予化合物來進行。

短語「並行投予」、「共同投予」、「同時投予」及「同時地投予」意指化合物係組合投予。

在另一實施態樣中，本發明提供治療方法，其包括將本發明化合物與一或多種其他醫藥劑組合投予，其中一或多種其他醫藥劑可選自本文所討論的藥劑。

在一個實施態樣中，本發明化合物係與抗糖尿病劑投予，該抗糖尿病劑包括但不限於雙胍(例如甲福明)、磺醯脲(例如甲苯磺丁脲(tolbutamide)、格列本脲(glibenclamide)、格列齊特(gliclazide)、氯磺丙脲(chlorpropamide)、甲磺氮卓脲(tolazamide)、醋磺環已脲(acetohexamide)、格列吡脲(glyclopyramide)、格列美吡拉或格列吡秦)、噻唑啶二酮(例如匹格列酮、羅格列酮或洛貝格列酮(lobeglitazone))、格列紮(glitazar)(例如沙格列紮(saroglitazar)、阿格列紮(aleglitazar)、莫格列紮(muraglitazar)或替格列紮(tesaglitazar))、美格替耐(例如那格列奈(nateglinide)、雷帕格列奈)、二肽基肽酶4(DPP- 4)抑制劑(例如西他列汀、維格列汀、沙克列汀(saxagliptin)、林那列汀、吉密列汀(gemigliptin)、阿那列汀(anagliptin)、替格列汀(teneligliptin)、阿格列汀、翠拉列汀(trelagliptin)、杜特列汀或歐馬列汀(omarigliptin))、格列酮(glitazone)(例如匹格列酮、羅格列酮、貝拉格列酮(balaglitazone)、瑞沃格列酮(rivoglitazone)或洛貝格列酮(lobeglitazone))、鈉-葡萄糖連結之轉運蛋白2(SGLT2)抑制劑(例如恩格列淨、卡格列淨、達格列淨、艾格列淨(ipragliflozin)、艾格列淨(Ipragliflozin)、托格列淨(tofogliflozin)、依碳酸舍格列淨(sergliflozin etabonate)、依碳酸瑞格列淨(remogliflozin etabonate)或依格列淨)、SGLTL1抑制劑、GPR40促效劑(FFAR1/FFA1促效劑，例如法斯利方(fasiglifam))、葡萄糖依賴性促胰島素肽(GIP)及其類似物、α葡萄糖苷酶抑制劑(例如伏格列波糖(voglibose)、阿卡波糖或米格列醇(miglitol))或胰島素或胰島素類似物，包括具體命名之藥劑的醫藥上可接受的鹽和該藥劑及鹽之醫藥上可接受的溶劑合物。

在另一實施態樣中，本發明化合物係與抗肥胖劑投予，該抗肥胖劑包括但不限於肽YY或其類似物、神經肽Y受體第2型(NPYR2)促效劑、NPYR1或NPYR5拮抗劑、大麻素受體第1型(CB1R)拮抗劑、脂肪酶抑制劑(例如羅氏鮮(orlistat))、人類前胰島肽(human proislet peptide)(HIP)、黑皮質素受體4促效劑(例如賽特美泰(setmelanotide))、黑色素凝集激素受體1拮抗劑、類法尼醇(farnesoid)X受體 (FXR)促效劑(例如歐貝提膽酸(obeticholic acid))、唑尼沙胺(zonisamide)、苯丁胺(phentermine)(單獨或與托吡酯(topiramate)組合)、正腎上腺素/多巴胺再吸收抑制劑(例如必博寧(buproprion))、類鴉片受體拮抗劑(例如納曲酮(naltrexone))、正腎上腺素/多巴胺再吸收抑制劑與類鴉片受體拮抗劑之組合(例如必博寧與納曲酮之組合)、GDF-15類似物、諾美婷(sibutramine)、膽囊收縮素促效劑、澱粉素及其類似物(例如普蘭林肽(pramlintide))、瘦素及其類似物(例如美曲普汀(metroleptin))、血清素激活劑(serotonergic agent)(例如氯卡色林(Iorcaserin))、甲硫胺酸胺基肽酶2(MetAP2)抑制劑(例如貝洛拉尼(beloranib)或ZGN-1061)、苯甲曲秦(phendimetrazine)、安非拉酮(diethylpropion)、苄非他明(benzphetamine)、SGLT2抑制劑(例如恩格列淨、卡格列淨、達格列淨、艾格列淨(ipragliflozin)、艾格列淨(Ipragliflozin)、托格列淨、依碳酸舍格列淨、依碳酸瑞格列淨或依格列淨)、SGLTL1抑制劑、雙SGLT2/SGLT1抑制劑、纖維母細胞生長因子受體(FGFR)調節劑、AMP活化之蛋白激酶(AMPK)活化劑、生物素、MAS受體調節劑或升糖素受體促效劑(單獨或與另一GLP-1R促效劑(例如利拉魯肽、艾塞那肽、杜拉魯肽、阿必魯肽、利塞那肽或希馬魯肽)之組合)，包括具體命名之藥劑的醫藥上可接受的鹽和該藥劑及鹽之醫藥上可接受的溶劑合物。

在另一實施態樣中，本發明化合物係下列中之一或多者組合投予：治療NASH之藥劑，包括但不限於PF-05221304、FXR促效劑(例如歐貝提膽酸)、PPARα/δ促效劑(例如艾拉非諾(elafibranor))、合成脂肪酸-膽酸共軛物(例如阿拉曲(aramchol))、半胱天冬酶(caspase)抑制劑(例如恩利卡生(emricasan))、抗離胺醯基氧化酶同系物(anti-lysyl oxidase homologue)2(LOXL2)單株抗體(例如辛圖珠單抗(simtuzumab))、半乳糖凝集素(galectin)3抑制劑(例如GR-MD-02)、MAPK5抑制劑(例如GS-4997)、趨化激素受體2(CCR2)與CCR5之雙重拮抗劑(例如森尼韋若(cenicriviroc))、纖維母細胞生長因子21(FGF21)促效劑(例如BMS-986036)、白三烯D4(LTD4)受體拮抗劑(例如泰魯司特(tipelukast))、菸鹼酸類似物(例如ARI 3037MO)、ASBT抑制劑(例如沃利巴特(volixibat))、乙醯基-CoA羧酶(ACC)抑制劑(例如NDI 010976或PF-05221304)、己酮糖激酶(ketohexokinase)(KHK)抑制劑、二乙醯基甘油醯基轉移酶2(DGAT2)抑制劑、CB1受體促效劑、抗CB1R抗體或細胞凋亡訊號調節激酶1(ASK1)抑制劑，包括具體命名之藥劑的醫藥上可接受的鹽和該藥劑及鹽之醫藥上可接受的溶劑合物。

可與本發明化合物組合用於治療本文所述之疾病或疾患(例如NASH)的一些具體化合物包括：4-(4-(1-異丙基-7-側氧基-1,4,6,7-四氫螺[吲唑-5,4’-哌啶]-1’-羰基)-6-甲氧基吡啶-2-基)苯甲酸，其為選擇性ACC抑制劑且在美國專利第8,859,577號(其為國際申請案第 PCT/IB2011/054119號之美國階段)的實施例9中以游離酸製得，將其揭示內容出於所有目的特此以其全文併入本文以供參考。4-(4-(1-異丙基-7-側氧基-1,4,6,7-四氫螺[吲唑-5,4’-哌啶]-1’-羰基)-6-甲氧基吡啶-2-基)苯甲酸之晶形(包括無水單托立斯形式(晶形1)和單托立斯鹽之三水合物(晶形2))說明於國際PCT申請案第PCT/IB2018/058966號，將其揭示內容出於所有目的特此以其全文併入本文以供參考；(S)-2-(5-((3-乙氧基吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N-(四氫呋喃-3-基)嘧啶-5-甲醯胺或其醫藥上可接受的鹽及其固體晶形(晶形1及晶形2)為美國專利第10,071,992號的實施例1中所述之DGAT2抑制劑的實例，將其揭示內容出於所有目的特此以其全文併入本文以供參考；[(1R,5S,6R)-3-{2-[(2S)-2-甲基氮呾-1-基]-6-(三氟甲基)嘧啶-4-基}-3-氮雜雙環[3.1.0]己-6-基]乙酸或其醫藥上可接受的鹽(包括其游離酸晶形)為己酮糖激酶抑制劑的實例且說明於美國專利第9,809,579號的實施例4中，將其揭示內容出於所有目的特此以其全文併入本文以供參考；及FXR促效劑托品費索(Tropifexor)或其醫藥上可接受的鹽係說明於美國專利第9,150,568號的實施例1-1B中，將其揭示內容出於所有目的特此以其全文併入本文以供參考。

該等藥劑及本發明化合物可與醫藥上可接受的媒劑組合，諸如鹽水、林格(Ringer)氏溶液、葡萄糖溶液及類似者。特別的劑量方案(亦即劑量、時程及重複)係取決於特別的病人及該病人的病史而定。

可接受的載劑、賦形劑或穩定劑在所使用的劑量及濃度下對接受者無毒性，且可包含緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其他的有機酸；鹽，諸如氯化鈉；抗氧化劑，包括抗壞血酸和甲硫胺酸；保存劑(諸如氯化十八烷基二甲基苯甲銨、氯化六甲二銨(hexamethonium chloride)、氯化烷基二甲基苄基銨、氯化苯索寧(benzethonium chloride)、酚、丁醇或苯甲醇、對羥苯甲酸烷酯(諸如對羥苯甲酸甲酯或對羥苯甲酸丙酯)、兒茶酚、間苯二酚、環己醇、3-戊醇和間-甲酚)；低分子量(少於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯基吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；鹽形成相對離子，諸如鈉；金屬複合物(例如Zn-蛋白質複合物)及/或非離子性界面活性劑，諸如TWEEN^TM、PLURONICS^TM或聚乙二醇(PEG)。

含有該等藥劑及/或本發明化合物之脂質體係以本技術中已知的方法製備，諸如美國專利第4,485,045號及第4,544,545號中所述。具有提高之循環時間的脂質體揭示於美國專利第5,013,556號中。特別有用的脂質體可藉由反相蒸發方法以包含磷脂醯膽鹼、膽固醇及經PEG衍生之磷脂醯乙醇胺(PEG-PE)之脂質組成物產生。脂質體經擠壓通過限定孔徑大小的過濾器以得到具有所欲直徑之脂質體。

亦可將該等藥劑及/或本發明化合物包封在例如藉由凝聚技術或藉由界面聚合所製備之微膠囊中，例如分別呈膠體藥物投遞系統(例如脂質體、白蛋白微球、微乳液、奈米粒子和奈米膠囊)或粗滴乳液的羥甲基纖維素或明膠微膠囊及聚(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊。此等技術係揭示於Remington之The Science and Practice of Pharmacy,20th Ed.,Mack Publishing(2000)中。

可使用持續釋放型製劑。持續釋放型製劑之適合的實例包括含有式I、II、III、IV或V化合物的固體疏水性聚合物之半透性基質，該基質係呈成形物件的形式，例如膜或微膠囊。持續釋放型基質的實例包括聚酯、水凝膠(例如聚(甲基丙烯酸2-羥乙酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯(美國專利第3,773,919號)、L-麩胺酸與7-L-麩胺酸乙酯之共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-羥乙酸共聚物(諸如那些在LUPRON DEPOT^TM(由乳酸-羥乙酸共聚物及乙酸柳菩林(leuprolide acetate)所組成之可注射微球)中所使用者)、蔗糖乙酸異丁酯及聚-D-(-)-3-羥基丁酸。

用於靜脈內投予之調配物必須為無菌。這係藉由例如通過無菌過濾薄膜過濾而輕易地達到。通常將本發明化合物放入具有無菌出入口的容器中，例如具有以皮下注射針可刺穿的塞子之靜脈內溶液袋或小瓶。

適合的乳液可使用市場上可取得的脂肪乳液(諸如Intralipid^TM、Liposyn^TM、Infonutrol^TM、Lipofundin^TM和 Lipiphysan^TM)製備。可將活性成分溶解在預混合之乳液組成物中，或另一選擇地可將其溶解在油中(例如大豆油、紅花子油、棉籽油、芝麻油、玉米油或杏仁油)且在與磷脂(例如卵磷脂、大豆磷脂或大豆卵磷脂)及水混合時形成乳液。應理解可添加其他成分(例如甘油或葡萄糖)以調整乳液的滲壓性。適合的乳液通常含有至多20%之油，例如介於5與20%之間。脂肪乳液可包含介於0.1與1.0μm之間，特別為0.1與0.5μm之間的脂肪滴，且具有5.5至8.0之範圍的pH。

乳液組成物可為那些藉由將本發明化合物與Intralipid^TM或其組分(大豆油、卵磷脂、甘油及水)混合而製備之組成物。

用於吸入或吹入之組成物包括在醫藥上可接受的水性或有機溶劑或彼之混合物中的溶液及懸浮液，及粉末。液體或固體組成物可含有如上文提出之適合的醫藥上可接受的賦形劑。在一些實施態樣中，組成物係經口或鼻呼吸途徑投予以達局部或全身性效應。在較佳的醫藥上可接受的無菌溶劑中的組成物可藉由使用氣體而氣霧化。氣霧化溶液可自氣霧化裝置直接吸入或氣霧化裝置可附著至面罩、帷幕或間歇性正壓呼吸機。溶液、懸浮液或粉末組成物可自以適當的方式投遞調配物之裝置投予，較佳地經口或鼻。

套組

本發明之另一方面係提供套組，其包含本發明之固體形式(例如晶形，諸如晶形3)或醫藥組成物(包含本發明之固體形式(例如晶形，諸如晶形3))。除了本發明之固體形式(例如晶形，諸如晶形3)或其醫藥組成物以外，套組可包括診斷或治療劑。套組亦可包括用於診斷或治療方法之用法說明。在一些實施態樣中，套組包括本發明之晶形及診斷劑。在其他的實施態樣中，套組包括本發明之晶形或其醫藥組成物。

在又另一實施態樣中，本發明包含適用於執行本文所述之治療方法的套組。在一個實施態樣中，套組含有第一劑型，其包含足夠的量以進行本發明之方法的本發明之固體形式(例如晶形，諸如晶形3)中之一或多者。在另一實施態樣中，套組包含足夠的量以進行本發明之方法的一或多種本發明之固體形式(例如晶形，諸如晶形3)及用於劑型的容器。

製備法

化合物1、其托立斯鹽及化合物1的托立斯鹽之晶形可使用熟習合成有機化學技術領域者常見的通用知識以下文所述之通用且特定的方法製備。此等常見的通用知識可見於標準的參考書，諸如Comprehensive Organic Chemistry,Ed.Barton and Ollis,Elsevier；Comprehensive Organic Transformations：A Guide to Functional Group Preparations,Larock,John Wiley and Sons；及 Compendium of Organic Synthetic Methods,Vol.I-XII(由Wiley-Interscience發行)。本文所使用的起始材料於市場上取得或可以本技術中已知的慣例方法製備。

在本發明化合物、鹽及晶形之製備法中，應注意本文所述之一些製備方法可能需要保護遠端官能基(例如在前驅物中的一級胺、二級胺、羧基)。此保護的需求係取決於遠端官能基的本性及製備方法的條件而改變。此保護的需求係由熟習本技術領域者輕易地決定。此保護/去保護方法的使用亦在本技術領域範圍內。保護基及其用途的概括說明參見T.W.Greene之Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley & Sons,New York,1991。

例如，特定的化合物含有一級胺或羧酸官能基，若處於未保護狀態，則其可能干擾在分子其他位點的反應。因此，可將此等官能基以在後續步驟中可移除之適當的保護基保護。適合於胺及羧酸保護之保護基包括那些常用於肽合成的保護基(諸如用於胺之N-三級丁氧基羰基(Boc)、苯甲氧基羰基(Cbz)和9-茀基亞甲氧基羰基(Fmoc)及用於羧酸之低碳烷酯或苯甲酯)，其在所述之反應條件下通常不具有化學反應性且通常可移除而無需化學改變在化合物中的其他官能基。

下文所述之流程意欲提供在製備本發明化合物所使用之方法的概括說明。一些本發明化合物可含有具有立體化學標示(R)或(S)之單一或多個手性中心。熟習本技術領域者明白所有的合成轉變可以類似的方式進行，不論材料是否為濃化之鏡像異構性或消旋性。而且，所欲光學活性材料之解析可使用熟知的方法(諸如本文及化學參考文獻中所述)發生在順序中的任何所欲點上。例如，中間物及最終產物可使用手性層析方法分離。另一選擇地，可利用手性鹽單離鏡像異構性濃化之中間物及最終化合物。

實施例

以下係例證本發明之非限制性化合物(包括其固體形式)的合成。

實驗通常係在惰性氛圍(氮氣或氬氣)下進行，特別地在使用氧或水分敏感性試劑或中間物的情況下。通常使用市售溶劑及試劑而無需進一步純化。在適當時使用無水溶劑，通常為來自Acros Organics之AcroSeal^®產品、來自Sigma-Aldrich之Aldrich^®Sure/Seal^TM或來自EMD Chemicals之DriSolv^®產品。在其他的例子中，市售溶劑係通過以4Å分子篩填充之管柱，直到達到以下對於水的QC標準：a)對於二氯甲烷、甲苯、N,N-二甲基甲醯胺及四氫呋喃為<100ppm；b)對於甲醇、乙醇、1,4-二

烷及二異丙胺為<180ppm。用於非常敏感的反應之溶劑可以金屬鈉、氫化鈣或分子篩進一步處理且在要使用前蒸餾。產物通常在進行進一步的反應或提交於生物測試前先在真空下乾燥。記述之質譜數據係來自液相層析-質譜(LCMS)、大氣壓化學游離(APCI)或氣相層析-質譜(GCMS)儀器。符號◆表示在質譜中所觀察到的氯同位素圖案。

使用手性分離以分離在製備本發明化合物期間的一些中間物之鏡像異構物或非鏡像異構物。當完成手性分離時，經分離之鏡像異構物係根據其溶析次序而標示為ENT-1或ENT-2(或DIAST-1或DIAST-2)。在一些實施態樣中，經標示為ENT-1或ENT-2之鏡像異構物可用作為製備其他的鏡像異構物或非鏡像異構物之起始材料。在此等情況下，經製備之所得鏡像異構物係根據其起始材料而分別標示為ENT-X1和ENT-X2；同樣地，經製備之非鏡像異構物係根據其起始材料而分別標示為DIAST-X1和DIAST-X2。在使用多種中間物合成時同樣地使用DIAST-Y和DIAST-Z命名。

通常在通過可檢測的中間物進行之反應後接續LCMS，且容許在加入後續的試劑前進行完全轉化。關於參考其他實施例或方法中的程序之合成，可改變反應條件(反應時間及溫度)。通常在反應後接續薄層層析法或質譜法且在適當時經受後處理。在實驗之間的純化可能不同：通常選擇用於溶析劑/梯度之溶劑及溶劑比率以提供適當R_f或滯留時間。在該等製備及實施例中的所有起始材料係於市場上可取得或可以本技術中已知或如本文所述之方法製備。

製備P7 4-[2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二氧呃-4-基]哌啶-1-羧酸三級丁酯(P7)

步驟1. 2-(4-溴-2-甲基-1,3-苯并二氧呃-2-基)-5-氯吡啶(C11)之合成

將甲苯(25mL)中的5-氯-2-乙炔基吡啶(1.80g，13.1mmol)、3-溴苯-1,2-二醇(2.47g，13.1mmol)與十二羰基三釕(triruthenium dodecacarbonyl)(167mg，0.261mmol)之混合物脫氣1分鐘且接著在100℃下加熱16小時。將反應混合物以乙酸乙酯(30mL)稀釋且通過矽藻土墊過濾；將過濾物在真空中濃縮且使用矽膠層析法純化(梯度：在石油醚中的0%至1%之乙酸乙酯)，以提供成為黃色油的C11。產量：1.73g，5.30mmol，40%。LCMS m/z 325.6(所觀察到的溴-氯同位素圖案)[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 8.63(dd,J=2.4,0.7Hz,1H),7.71(dd,ABX圖案之組分，J=8.4,2.4Hz,1H),7.60(dd,ABX圖案之組分，J=8.4,0.7Hz,1H),6.97(dd,J=8.0,1.4Hz,1H), 6.76(dd,ABX圖案之組分，J=7.8,1.4Hz,1H),6.72(dd,ABX圖案之組分，J=8.0,7.8Hz,1H),2.10(s,3H)。

步驟2. 4-[2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二氧呃-4-基]-3,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸三級丁基酯(C12)之合成

將[1,1’-雙(二苯膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)(388mg，0.530mmol)添加至1,4-二

烷(35mL)及水(6mL)中的C11(1.73g，5.30mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸三級丁酯(1.64g，5.30mmol)及碳酸銫(5.18g，15.9mmol)之懸浮液中。將反應混合物在90℃下攪拌4小時，隨之將其以乙酸乙酯(30mL)及水(5mL)稀釋。將有機層在真空中濃縮且使殘餘物經受矽膠層析法(梯度：在石油醚中的0%至5%之乙酸乙酯)，以供給成為黃色膠的C12。產量：1.85g，4.31mmol，81%。LCMS m/z 451.0◆[M+Na⁺]。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 8.62(dd,J=2.5,0.8Hz,1H),7.69(dd,ABX圖案之組分，J=8.4,2.4Hz,1H),7.57(dd,ABX圖案之組分，J=8.4,0.8Hz,1H),6.84-6.79(m,2H),6.78-6.73(m,1H),6.39-6.33(br m,1H),4.13-4.07(m,2H),3.68-3.58(m,2H),2.60-2.51(br m,2H),2.07(s,3H),1.49(s,9H)。

步驟3. 4-[2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二氧呃-4-基]哌啶-1-羧酸三級丁酯(P7)之合成

將甲醇(100mL)中的C12(2.61g，6.08mmol)及參(三苯膦)氯化銠(I)(威爾金森氏觸媒；563mg，0.608mmol)之溶液在真空下脫氣且接著以氮氣吹洗；此抽真空-吹洗循環共進行3次。接著將反應混合物在60℃下於氫氣(50psi)下攪拌16小時，隨之將其過濾。將過濾物在真空中濃縮且將殘餘物使用矽膠層析法純化(梯度：在石油醚中的0%至10%之乙酸乙酯)；將所得材料與來自以C12(110mg，0.256mmol)進行的類似氫化之材料合併，以提供成為淺黃色膠的P7。合併的產量：2.05g，4.76mmol，75%。LCMS m/z 431.3◆[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 8.62(d,J=2.3Hz,1H),7.69(dd,ABX圖案之組分，J=8.4,2.4Hz,1H),7.57(d,AB四重峰的一半，J=8.4Hz,1H),6.79(dd,ABC圖案之組分，J=7.8,7.7Hz,1H),6.72(dd,ABC圖案之組分，J=7.8,1.3Hz,1H),6.68(br d,ABC圖案之組分，J=7.9Hz,1H),4.32-4.12(br m,2H),2.91-2.73(m,3H),2.05(s,3H),1.90-1.62(m,4H),1.48(s,9H)。

製備P8和P9 4-[2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二氧呃-4-基]哌啶-1-羧酸三級丁酯，ENT-1(P8)和4-[2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二氧呃-4-基]哌啶-1-羧酸三級丁酯，ENT-2(P9)

將P7(500mg，1.16mmol)分離成其組分鏡像異構物係使用SFC實現{管柱：Phenomenex Lux Amylose-1，5μm；流動相：9：1之二氧化碳/[含有0.2%之(甲醇中的7M氨)的2-丙醇]}。第一溶析之鏡像異構物被標示為ENT-1(P8)及第二溶析之鏡像異構物被標示為ENT-2(P9)。

P8產量：228mg，0.529mmol，46%。滯留時間4.00分鐘{管柱：Phenomenex Lux Amylose-1，4.6 x 250mm，5μm；流動相A：二氧化碳；流動相B：[含有0.2%之(甲醇中的7M氨)的2-丙醇)]；梯度：5%之B經1.00分鐘，接著5%至60%之B經8.00分鐘；流率：3.0mL/分鐘；反壓：120巴}。

P9產量：229mg，0.531mmol，46%。滯留時間4.50分鐘(分析條件係與用於P8的那些條件相同)。

製備P15 2-(氯甲基)-1-[(2S)-氧呾-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸甲酯(P15)

以大規模進行此整個順序。在反應前以及添加試劑後，通常將反應器抽真空至-0.08至-0.05MPa且接著以氮氣填充至常壓。此過程通常重複3次，且接著評定氧含量以確保其

1.0%。關於有機層之萃取及清洗過程，通常將混合物攪拌15至60分鐘且接著容許放置15至60分鐘，然後分離層。

步驟1.(2S)-2-[(苯甲氧基)甲基]氧呾(C25)之合成

以三個大約相同規模的批組進行此反應。將2-甲基丙-2-醇(774.7kg)裝入2000L玻璃內襯之反應器中。經由固體加料漏斗添加三級丁醇鉀(157.3kg，1402mol)且將混合物攪拌30分鐘。接著以相同的方式添加碘化三甲基亞碸鎓(308.2kg，1400mol)且將反應混合物在55℃至65℃下加熱2至3小時，隨之以5至20kg/小時之速率添加(2S)-2-[(苯甲氧基)甲基]環氧乙烷(92.1kg，561mol)。在反應混合物在55℃至65℃下維持25小時後，將其冷卻至25℃至35℃且通過矽藻土(18.4kg)過濾。將濾餅以三級丁基甲醚(3 x 340kg)沖洗且將合併的過濾物轉移至5000L反應器，以純水(921kg)處理且在15℃至30℃下攪拌15至30分鐘。接著將有機層使用純水(920.5kg)中的氯化鈉(230.4kg)之溶液清洗兩次且在減壓(

-0.08MPa)下於

45℃下濃縮。添加正庚烷(187kg)且將所得混合物在減壓(

-0.08MPa)下於

45℃下濃縮；將有機相使用在管柱頂端上具有氯化鈉(18.5kg)之矽膠層析法(280kg)純化。將粗製材料使用正庚烷(513kg)裝載於管柱上且接著以正庚烷(688.7kg)與乙酸乙酯(64.4kg)之混合物溶析。將三個批組合併，以提供成為85%純的淺黃色油之C25(189.7kg，906mmol，54%)。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)，C25峰僅在：δ 7.40-7.32(m,4H),7.32-7.27(m,1H),4.98(dddd,J=8.1,6.7,4.9,3.7Hz,1H),4.72-4.55(m,4H),3.67(dd,ABX圖案之組分， J=11.0,4.9Hz,1H),3.62(dd,ABX圖案之組分，J=11.0,3.7Hz,1H),2.72-2.53(m,2H)。

步驟2.(2S)-氧呾-2-基甲醇(C26)之合成

將10%之鈀/碳(30.7kg)通過加料漏斗添加至3000L不銹鋼壓熱反應器中在四氫呋喃(1270kg)中的85%純之C25(來自先前步驟；185.3kg，884.8mol)之10℃至30℃溶液中。將加料漏斗以純水及四氫呋喃(143kg)沖洗且將沖洗液添加至反應混合物中。在反應器內容物以氮氣吹洗後，將彼等同樣地以氫氣吹洗，使壓力增加至0.3至0.5MPa且接著排氣至0.05MPa。重複此氫氣吹洗5次，隨之使氫壓力增加至0.3至0.4MPa。接著將反應混合物加熱至35℃至45℃。在13小時後，在此期間使氫壓力維持在0.3至0.5MPa，將混合物排氣至0.05MPa且以氮氣吹洗5次，由此使壓力增加至0.15至0.2MPa且接著排氣至0.05MPa。在混合物冷卻至10℃至25℃後，將其過濾且將反應器以四氫呋喃(2 x 321kg)沖洗。將濾餅以此沖洗液浸泡兩次且接著過濾；在減壓下濃縮(

-0.06MPa)係在

40℃下進行，以供給在四氫呋喃(251kg)中的C26(62.2kg，706mol，80%)。

步驟3. 4-甲基苯磺酸(2S)-氧呾-2-基甲酯(C27)之合成

將4-(二甲基胺基)吡啶(17.5kg，143mol)添加至四氫呋喃(251kg)中的C26(來自先前步驟；62.2kg，706mol) 及二氯甲烷(1240kg)中的三乙胺(92.7kg，916mol)之10℃至25℃溶液中。在30分鐘後，以20至40分鐘間隔分批添加對甲苯磺醯氯(174.8kg，916.9mol)且將反應混合物在15℃至25℃下攪拌16小時又20分鐘。添加純水(190kg)；在攪拌後，將有機層以碳酸氫鈉水溶液(使用53.8kg碳酸氫鈉及622kg純水製備)清洗及接著以氯化銨水溶液(使用230kg氯化銨及624kg純水製備)清洗。在以純水(311kg)最後清洗後，將有機層通過以矽膠(60.2kg)預裝載之不銹鋼吸濾器(Nutsche filter)過濾。將濾餅以二氯甲烷(311kg)浸泡20分鐘且接著過濾；將合併的過濾物在減壓(

-0.05MPa)及

40℃下濃縮，直到留下330至400L。接著在15℃至30℃下添加四氫呋喃(311kg)且將混合物以相同的方式濃縮至330至400L之最終體積。重複四氫呋喃添加及濃縮，再至330至400L體積，以供給在四氫呋喃(251.8kg)中的C27(167.6kg，692mmol，98%)之淺黃色溶液。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)，C27峰僅在：δ 7.81(d,J=8.4Hz,2H),7.34(d,J=8.1Hz,2H),4.91(ddt,J=8.0,6.7,3.9Hz,1H),4.62-4.55(m,1H),4.53-4.45(m,1H),4.14(d,J=3.9Hz,2H),2.75-2.63(m,1H),2.60-2.49(m,1H),2.44(s,3H)。

步驟4.(2S)-2-(疊氮甲基)氧呾(C28)之合成

將N,N-二甲基甲醯胺(473kg)、疊氮化鈉(34.7kg，534mol)與碘化鉀(5.2kg，31mol)在10℃至25℃下組合在3000L玻璃內襯之反應器中。在添加在四氫呋喃(125.4 kg)中的C27(83.5kg，344.6mol)後，將反應混合物加熱至55℃至65℃經17小時又40分鐘，隨之將其冷卻至25℃至35℃且將氮氣自底層閥起泡15分鐘。接著添加三級丁基甲醚(623kg)及純水(840kg)，且將所得水層以三級丁基甲醚(312kg及294kg)萃取兩次。將合併的有機層以純水(2 x 419kg)清洗，同時維持溫度在10℃至25℃下，以供給在上述有機層溶液(1236.8kg)中的C28(31.2kg，276mol，80%)。

步驟5. 1-[(2S)-氧呾-2-基]甲胺(C29)之合成

將10%之鈀/碳(3.7kg)通過加料漏斗添加至3000L不銹鋼壓熱反應器中在四氫呋喃(328kg)中的C28[來自先前步驟；1264kg(31.1kg C28，275mol)]之10℃至30℃溶液中。將加料漏斗以四氫呋喃(32kg)沖洗且將沖洗液添加至反應混合物中。在反應器內容物以氮氣吹洗後，將彼等同樣地以氫氣吹洗，使壓力增加至0.05至0.15MPa且接著排氣至0.03至0.04MPa。重複此氫氣吹洗5次，隨之使氫壓力增加至0.05至0.07MPa。將反應溫度增加至25℃至33℃且使氫壓力維持在0.05至0.15MPa下經22小時，同時每3至5小時更換氫氣。接著將混合物以氮氣吹洗5次，由此使壓力增加至0.15至0.2MPa且接著排氣至0.05MPa。在過濾後，使用四氫呋喃(92kg及93kg)清洗反應器且接著浸泡濾餅。將合併的過濾物在減壓(

-0.07MPa)及

45℃下濃縮，以供給在四氫呋喃(57.8kg)中的C29(18.0kg，207 mol，75%)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)，C29峰僅在：δ 4.62(ddt,J=7.6,6.6,5.1Hz,1H),4.49(ddd,J=8.6,7.3,5.6Hz,1H),4.37(dt,J=9.1,5.9Hz,1H),2.69(d,J=5.1Hz,2H),2.55-2.49(m,1H),2.39(m,1H)。

步驟6. 4-硝基-3-{[(2S)-氧呾-2-基甲基]胺基}苯甲酸甲酯(C30)之合成

將碳酸鉀(58.1kg，420mol)添加至100L玻璃內襯之反應器中在四氫呋喃(148kg)中的3-氟-4-硝基苯甲酸甲酯(54.8kg，275mol)之溶液中，且將混合物攪拌10分鐘。添加在四氫呋喃(212.9kg)中的C29(29.3kg，336mol)之溶液且將反應混合物在20℃至30℃下攪拌12小時，隨之添加乙酸乙酯(151kg)且將混合物通過矽膠(29kg)過濾。將濾餅以乙酸乙酯(150kg及151kg)沖洗且將合併的過濾物在減壓(

-0.08MPa)及

45℃下濃縮至222至281L體積。在混合物冷卻至10℃至30℃後，添加正庚烷(189kg)，進行攪拌20分鐘且將混合物在減壓(

-0.08MPa)及

45℃下濃縮至222L體積。將正庚烷(181kg)以100至300kg/小時之參考速率再添加至混合物中且持續攪拌20分鐘。取樣混合物，直到殘餘的四氫呋喃為

5%及殘餘的乙酸乙酯為10%至13%。將混合物加熱至40℃至45℃且攪拌1小時，隨之以每小時5℃至10之速率冷卻至15℃至25℃且接著在15℃至25℃下攪拌1小時。使用不銹鋼離心過濾以提供濾餅，將其以乙酸乙酯(5.0kg)與正庚烷(34kg)之混合物沖洗且接著在10℃至30℃下與四氫呋喃(724kg)攪拌15分鐘；以過濾提供主要由C30(57.3kg，210mol，76%)所組成之黃色固體。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)8.34(t,J=5.8Hz,1H),8.14(d,J=8.9Hz,1H),7.63(d,J=1.7Hz,1H),7.13(dd,J=8.9,1.8Hz,1H),4.99(dddd,J=7.7,6.7,5.3,4.1Hz,1H),4.55(ddd,J=8.6,7.3,5.8Hz,1H),4.43(dt,J=9.1,6.0Hz,1H),3.87(s,3H),3.67-3.61(m,2H),2.67(dddd,J=11.1,8.6,7.7,6.2Hz,1H),2.57-2.47(m,1H)。

步驟7. 2-(氯甲基)-1-[(2S)-氧呾-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸甲酯之合成(P15)

將四氫呋喃(678kg)中的C30(來自先前步驟；51.8kg，190mol)之溶液在3000L壓熱反應器中於10℃至30℃下以10%之鈀/碳(5.2kg)處理。將加料管以四氫呋喃(46kg)沖洗且將沖洗液添加至反應混合物中。在反應器內容物以氮氣吹洗後，將彼等同樣地以氫氣吹洗，使壓力增加至0.1至0.2MPa且接著排氣至0.02至0.05MPa。重複此氫氣吹洗5次，隨之使氫壓力增加至0.1至0.25MPa。將反應混合物在20℃至30℃下攪拌，且每2至3小時將混合物以氮氣吹洗三次及接著以氫氣吹洗五次；在每次最後的氫氣更換後，使氫壓力增加至0.1至0.25MPa。在共11.25小時的反應時間後，將反應混合物排氣至常壓且以氮氣吹洗五次，由此使壓力增加至0.15至0.2MPa且接著排氣至0.05MPa。接著將其過濾且將濾餅以四氫呋喃(64kg及63kg)沖洗兩次；將合併的沖洗液及過濾物在減壓(

-0.08MPa)及

40℃下濃縮至128至160L體積。添加四氫呋喃(169kg)且將混合物再濃縮至128至160L體積；此過程共重複4次，以供給中間物4-胺基-3-{[(2S)-氧呾-2-基甲基]胺基}苯甲酸甲酯溶液。

將四氫呋喃(150kg)添加至此溶液中，隨後添加2-氯-1,1,1-三甲氧基乙烷(35.1kg，227mol)及對甲苯磺酸單水合物(1.8kg，9.5mol)。在反應混合物攪拌25分鐘後，將其在40℃至45℃下加熱5小時，隨之將其在減壓下濃縮至135至181L體積。添加2-丙醇(142kg)且將混合物再濃縮至135至181L體積，隨之添加2-丙醇(36.5kg)及純水(90kg)且持續攪拌，直到獲得溶液。將此以在線液體過濾器(in-line liquid filter)過濾且接著在20℃至40℃下以純水(447kg)在150至400kg/小時之參考速率下處理。在混合物冷卻至20℃至30℃後，將其攪拌2小時且經由離心過濾收集固體。將濾餅以2-丙醇(20.5kg)與純水(154kg)之溶液沖洗；在乾燥後，獲得成為白色固體的P15(32.1kg，109mol，57%)。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 8.14-8.11(m,1H),8.01(dd,J=8.5,1.1Hz,1H),7.79(br d,J=8.6Hz,1H),5.26-5.18(m,1H),5.04(s,2H),4.66-4.58(m,2H),4.53(dd,ABX圖案之組分，J=15.7,2.7Hz,1H),4.34(dt,J=9.1,6.0Hz,1H),3.96(s,3H),2.82-2.71(m,1H),2.48-2.37(m,1H)。

另一選擇地，P15可使用美國專利第10,208,019號所述之方法製備(參見專利的第58欄之中間物23)，將其全文特此併入本文以供參考。

實施例1 2-({4-[2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二氧呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S)-氧呾-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸，DIAST-X2(化合物1)[來自P9]

步驟1. 5-氯-2-[2-甲基-4-(哌啶-4-基)-1,3-苯并二氧呃-2-基]吡啶，ENT-X2，對甲苯磺酸鹽(C58)之合成[來自P9]

將乙酸乙酯(2.7mL)中的P9(228mg，0.529mmol)之溶液以對甲苯磺酸單水合物(116mg，0.610mmol)處理且將反應混合物在50℃下加熱16小時。接著容許其在室溫下攪拌隔夜，隨之經由過濾收集沉澱物且以乙酸乙酯與庚烷之混合物(1：1，2 x 20mL)沖洗，以提供成為白色固體的C58。產量：227mg，0.451mmol，85%。LCMS m/z 331.0◆[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)：δ 8.73(d,J=2.4Hz,1H),8.61-8.46(br m,1H),8.35-8.18(br m,1H),8.02(dd,J=8.5,2.5Hz,1H),7.64(d,J=8.5Hz,1H),7.47(d,J=7.8,2H),7.11(d,J=7.8Hz,2H),6.89-6.81(m,2H),6.72(pentet,J=4.0Hz,1H),3.45-3.27(假定為m,2H；經水峰部分遮蔽),3.10-2.91(m,3H),2.28(s,3H),2.02(s,3H),1.97-1.80(m,4H)。

步驟2. 2-({4-[2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二氧呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S)-氧呾-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸甲酯，DIAST-Y2(C59)之合成[來自P9]

將N,N-二異丙基乙胺(0.234mL，1.34mmol)添加至乙腈(2.2mL)中的C58(225mg，0.447mmol)之溶液中。在此混合物在45℃下攪拌5分鐘後，添加P15(120mg，0.407mmol)且在45℃下持續攪拌16小時，隨之再添加P15(11mg，37μmol)。在再攪拌3小時後，將反應混合物以水(2.5mL)處理且容許冷卻至室溫。添加更多水(5mL)且將所得漿液攪拌2小時，隨之經由過濾收集固體且以乙腈與水之混合物(15：85，3 x 5mL)清洗，以供給成為灰白色固體的C59(252mg)。以¹H NMR分析之此材料含有一些N,N-二異丙基乙胺且直接取用於以下步驟。LCMS m/z 589.1◆[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)8.61(d,J=2.3Hz,1H),8.18(d,J=1.5Hz,1H),7.96(dd,J=8.5,1.5Hz,1H),7.74(d,J=8.5Hz,1H),7.67(dd,ABX圖案之組分，J=8.4,2.4Hz,1H),7.59-7.51(m,1H),6.82-6.75(m,1H),6.74-6.66(m,2H),5.28-5.19(m,1H),4.75(dd,ABX圖案之組分，J=15.3,6.0Hz,1H),4.68(dd,ABX圖案之組分，J=15.3,3.4Hz,1H),4.67-4.58(m,1H),4.41(ddd,J=9.1,5.9,5.9Hz,1H),3.95(s,2H),3.95(s,3H),3.07-2.89(m,2H),2.81-2.69(m,2H),2.53-2.41(m,1H),2.37-2.22(m,2H),2.05(s,3H),1.93-1.74(m,4H)。

步驟3. 2-({4-[2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二氧呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S)-氧呾-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸，DIAST-X2(化合物1)之合成[來自P9]

將甲醇(2mL)中的C59(來自先前步驟；250mg，

0.407mmol)之懸浮液加熱至40℃，隨之添加氫氧化納水溶液(1M；0.81mL，0.81mmol)。在17小時後，容許反應混合物冷卻至室溫且將pH以1M檸檬酸水溶液調整至5至6。將所得混合物以水(2mL)稀釋，攪拌2小時且以乙酸乙酯(3 x 5mL)萃取；將合併的有機層以氯化鈉飽和水溶液(5mL)清洗，經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮，以提供泡沫狀固體。將此材料溶解在乙酸乙酯與庚烷之混合物 (1：1，4mL)中，加熱至50℃且接著容許冷卻及攪拌隔夜。以過濾供給成為白色固體的化合物1。產量：179mg，0.311mmol，經2個步驟供給76%。LCMS m/z 575.1◆[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ 12.73(br s,1H),8.71(d,J=2.5Hz,1H),8.27(d,J=1.5Hz,1H),8.00(dd,J=8.5,2.5Hz,1H),7.80(dd,J=8.4,1.6Hz,1H),7.64(d,J=8.4Hz,1H),7.60(d,J=8.5Hz,1H),6.83-6.72(m,3H),5.14-5.06(m,1H),4.77(dd,ABX圖案之組分，J=15.2,7.2Hz,1H),4.63(dd,ABX圖案之組分，J=15.2,2.8Hz,1H),4.50-4.42(m,1H),4.37(ddd,J=9.0,5.9,5.9Hz,1H),3.85(AB四重峰，J_AB=13.6Hz,Δv_AB=71.5Hz,2H),3.01(br d,J=11.2Hz,1H),2.85(br d,J=11.2Hz,1H),2.74-2.57(m,2H),2.47-2.38(m,1H),2.29-2.10(m,2H),2.01(s,3H),1.81-1.64(m,4H)。

合成1S-1. 化合物1，1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺鎓鹽之合成 2-({4-[2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二氧呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S)-氧呾-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺鎓鹽，DIAST-X2(化合物1，1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺鎓鹽)之合成[來自P9]

將四氫呋喃(10mL)中的化合物1(1.54g，2.68mmol)之混合物以2-胺基-2-(羥基甲基)丙烷-1,3-二醇水溶液(托立斯，1.0M；2.81mL，2.81mmol)處理。在24小時後，將反應混合物與乙醇(2 x 50mL)在真空中濃縮。將殘餘物以乙醇(15mL)處理。在攪拌20小時後，經由過濾收集固體且以冷乙醇(5mL)清洗，以供給成為白色固體的化合物1，1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺鎓鹽。產量：1.41g，2.03mmol，76%。LCMS m/z 575.3◆[M+H]⁺。¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ 8.71(d,J=2.5Hz,1H),8.21(br s,1H),8.00(dd,J=8.5,2.5Hz,1H),7.79(br d,J=8.4Hz,1H),7.60(d,J=8.5Hz,1H),7.57(d,J=8.4Hz,1H),6.82-6.73(m,3H),5.13-5.07(m,1H),4.74(dd,J=15.3,7.2Hz,1H),4.61(dd,J=15.3,2.9Hz,1H),4.49-4.43(m,1H),4.37(ddd,J=9.0,5.9,5.9Hz,1H),3.93(d,J=13.6Hz,1H),3.75(d,J=13.5Hz,1H),3.01(br d,J=11.3Hz,1H),2.86(br d,J=11.4Hz,1H),2.73-2.59(m,2H),2.48-2.37(m,1H), 2.27-2.20(m,1H),2.19-2.12(m,1H),2.01(s,3H),1.82-1.66(m,4H)。mp=184℃至190℃。

合成1S-2. 化合物1，1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺鎓鹽之替代合成

將2-甲基四氫呋喃(90ml)中的化合物1(8.80gm，15.3mmol)之混合物在真空中於37℃水浴中在旋轉蒸發器上濃縮，使總體積減少至~54ml。將異丙醇(90ml)添加至混合物中且接著將所得混合物再濃縮至~54ml體積。將異丙醇(135ml)添加至混合物中，隨後添加水性托立斯胺(3M；5.0ml，0.98equiv)。將所得混合物/溶液在周圍溫度下攪拌；且在~15min內開始形成固體沉澱物。接著將混合物在周圍溫度下再攪拌5hr。將所得混合物/漿液冷卻至0℃且將冷卻之漿液再攪拌約2hr。將漿液過濾且以冷異丙醇(3 x 15ml)清洗。容許收集之固體在收集漏斗上經約90min風乾且接著轉移至真空烘箱經隔夜乾燥。在50℃/23inHg真空(有少量氮氣滲出)下~16hr後，獲得成為白色固體的8.66gm化合物1，1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺鎓鹽；根據UPLC之99.8面積%(產量：12.5mmol，81%)。獲得LCMS及¹H NMR數據，其實質上與那些上文所示之合成1S-1的數據相同。

化合物1，1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺鎓鹽之晶形A(亦稱為化合物1的無水托立斯鹽之晶形A)的粉末X射線繞射(PXRD)數據之擷取

提交化合物1的托立斯鹽之白色固體(來自合成1S-1及合成1S-2)用於PXRD分析且發現其為結晶材料(其被標示為晶形A)。粉末X射線繞射分析係使用配備有Cu輻射源之Bruker AXS D8 Endeavor繞射計進行。發散狹縫係設定在15mm連續照光。經繞射之輻射係以具有設定在2.99度之檢測器PSD開口的PSD-Lynx Eye檢測器檢測。X射線管電壓及電流分別設定至40kV及40mA。在使用步輻0.01度及步進時間(step time)1.0秒的3.0至40.0度2θ之θ-θ測角器中於Cu波長下(Cu

=1.5418λ)收集數據。防散射屏係設定至1.5mm的固定距離。將樣品在數據收集期間旋轉。樣品係以將其放置於矽低背景樣品架中來準備且在收集期間旋轉。使用Bruker DIFFRAC Plus軟體收集數據且以EVA diffract plus軟體執行分析。在峰搜尋前，未進行PXRD數據檔案的處理。使用EVA軟體內的峰搜尋演算法，選出具有1之閥值的峰用於進行初步的峰分配。為了確保正確性，以手動進行調整；以目視檢查自動化分配的結果且將峰的位置調至最大峰值。通常選擇具有相對強度

3%之峰。通常不選擇未解析或與雜訊一致的峰。在USP中聲明與PXRD之峰位置相關聯的典型誤差為至多+/- 0.2° 2θ(USP-941)。來自合成1S-2所獲得的晶形A之樣品以2θ度表示及具有相對強度

3.0%之相對強度的PXRD繞射峰之列表提供於表E1-1中。

以本文所述之方法獲得的化合物1的托立斯鹽之無水(無水物)晶形被標示為晶形A。晶形A可以其關於例如粉末X射線繞射圖案(PXRD)及其他固態方法(諸如¹³C固態NMR)之獨特的固態標誌鑑定。

在一些實施態樣中，晶形A展現包含至少兩個選自在7.7±0.2°、15.2±0.2°、15.7±0.2°及17.6±0.2°以2θ表示之特徵峰的粉末X射線繞射圖案。在一些實施態樣中，晶形A展現包含至少三個選自在7.7±0.2°、15.2±0.2°、15.7±0.2°及17.6±0.2°以2θ表示之特徵峰的粉末X射線繞射圖案。在一些實施態樣中，晶形A展現包含選自在7.7±0.2°、15.2±0.2°、15.7±0.2°及17.6±0.2°以2θ表示之特徵峰的粉末X射線繞射圖案。

在一些實施態樣中，晶形A展現包含在7.7±0.2°及17.6±0.2°以2θ表示之特徵峰的粉末X射線繞射圖案。

在一些實施態樣中，晶形A展現包含在7.7±0.2°、15.2±0.2°及17.6±0.2°以2θ表示之峰的粉末X射線繞射圖案。

在一些實施態樣中，晶形A展現包含在7.7±0.2°、15.2±0.2°及15.7±0.2°以2θ表示之峰的粉末X射線繞射圖案。

在一些實施態樣中，晶形A展現包含在7.7±0.2°、15.2±0.2°、15.7±0.2°及17.6±0.2°以2θ表示之峰的粉末X射線繞射圖案。

在一些實施態樣中，晶形A展現實質上如圖1中所示之粉末X射線繞射圖案。

化合物1的1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺鎓鹽之晶形A的固態NMR分析

固態NMR(ssNMR)分析係在安置於Bruker-BioSpin Avance III 500MHz(¹H頻率)NMR光譜儀中的CPMAS探針上進行。將化合物1的1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺鎓鹽之晶形A的樣品填充至4mm轉子中。使用15.0kHz之魔角旋轉速率。

使用質子去耦交叉極化魔角旋轉(CPMAS)實驗收集¹³C ssNMR光譜。在光譜擷取期間施加80至90kHz經相位調變之質子去耦場。交叉極化接觸時間設定至2ms及循環延遲設定至3至8秒。調整掃描次數以獲得適當的訊號雜訊比，對各API收集2048次掃描。¹³C化學位移掃描係使用基於結晶金剛烷的外部標準進行之¹³C CPMAS實驗引據，其高場區共振設定至29.5ppm。

自動化峰揀選係使用Bruker-BioSpin TopSpin 3.6版軟體執行。通常使用3%之相對強度的閥值進行初步峰選擇。以目視檢查自動化峰揀選的結果以確保正確性且若必要時以手動進行調整。儘管在本文記述具體的固態NMR峰(ssNMR)值，但是由於儀器、樣品及樣品製備的差異而使該等峰值確實以範圍存在。因為峰位置固有的變化(variation)，這在ssNMR領域中為常見的操作。結晶固體的¹³C化學位移x軸值之典型的可變量為正或負0.2ppm之等級。本文所記述之ssNMR峰高度為相對強度。固態NMR強度可取決於CPMAS實驗參數的實際設定及樣品的熱歷史而改變。化學位移數據係取決於測試條件(亦即旋轉速度及樣品架)、參考材料及數據處理參數之中的因素而定。ss-NMR結果通常精確至約±0.2ppm之範圍。獲得晶形A之代表性¹³C ssNMR光譜，將其顯示於圖2中。將晶形A之¹³C化學位移[ppm]±0.2ppm列於表E1-2中。

實施例2 化合物1的1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺鎓鹽之晶形2化合物1的1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺鎓鹽之晶形2的製備

將化合物1(49.7mg)與甲醇(0.828mL)在小瓶中混合且加熱至50℃。接著添加托立斯之儲備溶液(30.25μL，3 M)且將所得混合物緩慢地冷卻至室溫。接著容許混合物在室溫下緩慢地蒸發(將小瓶放在通風櫥中且使瓶蓋略微裂開以容許溶劑蒸發)。化合物1的托立斯鹽之晶體係在甲醇/水之混合溶劑中緩慢蒸發而形成(且此晶形被標示為晶形2)。

單晶X射線分析

將化合物1的托立斯鹽之晶形2的樣品進行單晶分析的測試。在室溫下在Bruker D8 Venture繞射計上執行數據收集。數據收集係由ω及

掃描所組成。

使用SHELX軟體套在斜方晶族空間群組P2₁中以內在定相(intrinsic phasing)解出結構。接著以全矩陣最小平方法精修結構。發現所有的非氫原子且使用各向異性位移參數(anisotropic displacement parameter)精修。

使末端環(C1-C2-C3-C4-C5─Cl1)無序。測試此群組的無序模式，但是未滿意地精修。CIF_核對模組(Check module)係基於上文提及之鏈段產生等級「A」。

位於氮及氧上的氫原子係自傅立葉差分圖(Fourier difference map)發現且以限制的距離精修。剩餘的氫原子係放置在計算出的位置上且容許騎於彼等的載體原子上。最終的精修包括所有氫原子之各向同性(isotropic)位移參數。

因為質子係自O5轉移至N5，所以確認了托立斯鹽。另外，結構含有一個水分子(及因此為單水合物)。使用似然法(Hooft 2008)之絕對結構的分析係使用PLATON(Spek 2010)以已知的C22之立體化學資料執行(及因此測定C6之立體化學資料)。經精修之結構係使用SHELXTL繪圖套裝軟體繪製(圖3)。根據經精修之結構，晶形2為化合物1的托立斯鹽之單水合物，其結構可如下文所示之結構表示：

最終R指數為6.6%。最終的差分傅立葉顯露無缺失或錯位之電子密度。

將相關的晶體、數據收集及精修總結於表E2-1中。將原子坐標、鍵長、鍵角及位移參數列於表E2-2至E2-4中。

經計算/經模擬之PXRD數據

使用上文之單晶X射線所獲得的資料可計算/模擬晶形2之PXRD峰位置及強度(參見圖4，使用Bruker DIFFRAC.EVA 5.0.0.22版)。晶形2之以2θ度表示及具有相對強度

3.0%之相對強度的經計算/經模擬之PXRD繞射峰的列表提供於下。

實施例3. 化合物1的托立斯鹽之晶形3 化合物1的托立斯鹽之晶形3的製備(漿液至漿液之轉化)

將化合物1的托立斯鹽之無水形式的晶形A(1.177克)添加至50mL EasyMax®反應器中。接著添加乙腈與水之混合溶劑(27.9mL乙腈與2.4mL水)。將所得混合物(漿液)在室溫(約25℃)下以高架攪拌槳攪拌兩天。接著將混合物冷卻至0℃且攪拌約1小時。接著將混合物以通過濾紙之抽氣過濾方式過濾且將收集之固體(濾餅)以2至3mL冷乙腈(0℃)沖洗兩次。將所得濾餅在漏斗上風乾1小時。將濾餅/漏斗轉移至真空烘箱進一步乾燥(50℃/~22於Hg真空，少量的氮氣滲出)。在約5小時後，獲得1.115gm白色固體(被標示為晶形3)。

化合物1，1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺鎓鹽之晶形3的替代製備

另一選擇地，化合物1的托立斯鹽之晶形3的單晶係藉由在乙腈/15%水(v/v)中蒸氣擴散乙腈至化合物1，1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺鎓鹽之飽和溶液中來製備。

單晶X射線分析

將化合物1的托立斯鹽之晶形3的樣品進行單晶X射線分析的測試。在室溫下在Bruker D8 Venture繞射計上執行數據收集。數據收集係由ω及

掃描所組成。

使用SHELX軟體套(SHELXTL，5.1版，Bruker AXS,1997)在斜方晶族空間群組P2₁中以內在定相解出結構。接著以全矩陣最小平方法精修結構。發現所有的非氫原子且使用各向異性位移參數精修。

位於氮及氧上的氫原子係自傅立葉差分圖發現且以限制的距離精修。剩餘的氫原子係放置在計算出的位置上且容許騎於彼等的載體原子上。最終的精修包括所有氫原子之各向同性位移參數。

使用似然法(參見R.W.W.Hooft等人之J.Appl.Cryst.(2008).41.96-103)之絕對結構的分析係使用PLATON(參見A.L.Spek之J.Appl.Cryst.2003,36,7-13)執行。假定所提交之樣品為純鏡像的(enantiopure)，則確定絕對結構(基於兩個手性中心的立體化學資料)。

最終R指數為5.1%。最終的差分傅立葉顯露無缺失或錯位之電子密度。經精修之結構係使用SHELXTL繪圖套裝軟體繪製(SHELXTL，5.1版，Bruker AXS,1997)(圖5)。絕對構型係以Flack方法測定(參見H.D.Flack之Acta Cryst.1983,A39,867-881)。根據經精修之結構，晶形3為化合物1的托立斯鹽之單水合物：

且此水合物形式的化學名稱(包括立體化學資料)為：2-({4-[(2S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二氧呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S)-氧呾-2-基甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺鎓鹽單水合物。

將相關的晶體、數據收集及精修總結於表E3-1中。將原子坐標、鍵長、鍵角及位移參數列於表E3-2至E3-4中。

化合物1，1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺鎓鹽之晶形3(亦稱為化合物1的托立斯鹽之單水合物的晶形3)的粉末X射線繞射(PXRD)數據之擷取

提交晶形3樣品(例如根據本文所述方法製備之化合物1的托立斯鹽之白色固體)用於PXRD分析且發現其為結晶材料(其被標示為晶形3)。

粉末X射線繞射分析係使用配備有Cu輻射源之Bruker AXS D8 Endeavor繞射計進行(K-α平均)。發散狹縫係設定在15mm連續照光。經繞射之輻射係以具有設定在2.99度之檢測器PSD開口的PSD-Lynx Eye檢測器檢測。X射線管電壓及電流分別設定至40kV及40mA。在使用步輻0.00999度及步進時間1.0秒的3.0至40.0度2θ之θ-θ測角器中於Cu波長下收集數據。防散射屏係設定至1.5mm的固定距離。將樣品在收集期間以15/min旋轉。樣品係以將其放置於矽低背景樣品架中來準備且在收集期間旋轉。使用Bruker DIFFRAC Plus軟體收集數據且以EVA diffract plus軟體執行分析。在特定的實驗中所使用之樣品架在檔名內以代號給出：DW=D深孔架，SD=小的凹陷架及FP=平板架。

在峰搜尋前，未進行PXRD數據檔案的處理。使用EVA軟體內的峰搜尋演算法，選出具有1之閥值及0.3之寬度值的峰用於進行初步的峰分配。以目視檢查自動化分配的結果以確保正確性且若必要時以手動進行調整。通常選擇具有相對強度

3%之峰。不選擇未解析或與雜訊一致的峰。在USP中聲明與PXRD之峰位置相關聯的典型誤差為至多+/- 0.2° 2θ(USP-941)。來自晶形3之樣品以2θ度表示及具有相對強度

3.0%之相對強度的PXRD繞射峰之列表提供於下。

化合物1的托立斯鹽之晶形3(單水合物)的固態NMR分析

固態NMR(ssNMR)分析係在安置於Bruker-BioSpin Avance III 500MHz(¹H頻率)NMR光譜儀中的CPMAS探針上進行。將化合物1的1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺鎓鹽之晶形3的樣品填充至4mm轉子中。使用15.0kHz之魔角旋轉速率。

自動化峰揀選係使用Bruker-BioSpin TopSpin 3.6版軟體執行。通常使用3%之相對強度的閥值進行初步峰選擇。以目視檢查自動化峰揀選的結果以確保正確性且若必要時以手動進行調整。儘管在本文記述具體的固態NMR峰值，但是由於儀器、樣品及樣品製備的差異而使該等峰值確實以範圍存在。因為峰位置固有的變化，這在固態NMR領域中為常見的操作。結晶固體的¹³C化學位移x軸值之典型的可變量為正或負0.2ppm之等級。本文所記述之固態NMR峰高度為相對強度。固態NMR強度可取決於CPMAS實驗參數的實際設定及樣品的熱歷史而改變。化學位移數據係取決於測試條件(亦即旋轉速度及樣品架)、參考材料及數據處理參數之中的因素而定。ss-NMR結果通常精確至約±0.2ppm之範圍。

實施例AA. CHO GLP-1R無性繁殖系H6-檢定法1

經GLP-1R-媒介之促效劑活性係基於細胞之功能性檢定法測定，其係利用測量細胞中的cAMP含量之HTRF(均質性時間解析螢光(Homogeneous Time-Resolved Fluorescence))cAMP檢測套組(cAMP HI Range Assay Kit；CisBio cat #62AM6PEJ)。該方法為由細胞生成之天然cAMP與以染料d2標記之外源性cAMP之間的競爭免疫檢定法。追蹤劑結合係由以穴狀化合物標記之mAb抗cAMP顯現。特定訊號(亦即能量轉移)係與標準或實驗樣品中的cAMP濃度成反比。

將人類GLP-1R編碼序列(包括天然生成的變體Gly168Ser之NCBI參考序列NP_002053.3)次選殖成pcDNA3(Invitrogen)且將穩定表現受體之細胞系單離(標示為無性繁殖系H6)。使用¹²⁵I-GLP-1_7-36(Perkin Elmer)之飽和結合分析顯示自此細胞系衍生之血漿膜表現高的GLP-1R密度(K_d：0.4nM，B_max：1900 fmol/mg之蛋白質)。

細胞係自冷凍保存取出，再懸浮於40mL杜爾貝科(Dulbecco)氏磷酸鹽緩衝鹽水中(DPBS-Lonza Cat # 17-512Q)且在22℃下以800 x g離心5分鐘。接著將細胞沉澱物再懸浮於10mL生長培養基中[具有HEPES、L-Gln之DMEM/F12 1：1混合物500mL(DMEM/F12 Lonza Cat # 12-719F)、10%熱失活之胎牛血清(Gibco Cat # 16140-071)、5mL 100X Pen-Strep(Gibco Cat # 15140-122)、5 mL 100X L-麩醯胺酸(Gibco Cat # 25030-081)及500μg/mL之遺傳黴素(Geneticin)(G418)(Invitrogen #10131035)]。將生長培養基中的1mL細胞懸浮液樣品在Becton Dickinson ViCell上計數以測定細胞存活率及每mL細胞數。接著將剩餘細胞懸浮液以生長培養基調整，使用Matrix Combi Multidrop試劑分配器遞送每一孔2000個活細胞，且將細胞分配至經組織培養物處理之白色384孔檢定盤(Corning 3570)中。接著將檢定盤在37℃下於5%二氧化碳之加濕環境中培育48小時。

欲測試之不同濃度的各化合物(在DMSO中)係在含有100μM 3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(IBMX；Sigma cat # I5879)之檢定緩衝液(具有鈣/鎂之HBSS(Lonza/BioWhittaker cat # 10-527F)/0.1% BSA(Sigma Aldrich cat # A7409-1L)/20mM HEPES(Lonza/BioWhittaker cat #17-737E))中稀釋。最終DMSO濃度為1%。

在48小時之後，自檢定盤孔移出生長培養基，且將細胞在37℃下於5%二氧化碳之加濕環境中以20μL在檢定緩衝液中連續稀釋之化合物處理30分鐘。在30分鐘培育後，將10μL經標記之d2 cAMP及10μL抗cAMP抗體(二者係在細胞溶解緩衝液中以1：20稀釋；如製造商檢定程序中所述)添加至檢定盤的各孔中。接著將盤在室溫下培育，且在60分鐘後，HTRF訊號的變化係使用330nm激發及615與665nm發射之Envision 2104多標記盤讀取機讀取。原始數據係自cAMP標準曲線內插而轉換成nM cAMP(如製造商檢定程序中所述)且測定相對於各盤所包括的完全促效劑GLP-1_7-36(1μM)之飽和濃度的效應百分比。EC₅₀測定係使用4參數邏輯劑量反應公式以曲線擬合程式分析之促效劑劑量反應曲線進行。

實施例BB. CHO GLP-1R無性繁殖系C6-檢定法2

經GLP-1R-媒介之促效劑活性係基於細胞之功能性檢定法測定，其係利用測量細胞中的cAMP含量之HTRF(均質性時間解析螢光)cAMP檢測套組(cAMP HI Range Assay Kit；CisBio cat #62AM6PEJ)。該方法為由細胞生成之天然cAMP與以染料d2標記之外源性cAMP之間的競爭免疫檢定法。追蹤劑結合係由以穴狀化合物標記之mAb抗cAMP顯現。特定訊號(亦即能量轉移)係與標準或實驗樣品中的cAMP濃度成反比。

將人類GLP-1R編碼序列(包括天然生成的變體Leu260Phe之NCBI參考序列NP_002053.3)次選殖成pcDNA5-FRT-TO且將穩定表現低受體密度之無性繁殖CHO細胞系使用Flp-In^TM T-Rex^TM系統單離，如製造商(ThermoFisher)所述。使用¹²⁵I-GLP-1(Perkin Elmer)之飽和結合分析(過濾檢定程序)顯示自此細胞系(標示為無性繁殖系C6)衍生之血漿膜相對於無性繁殖系H6細胞系而表現低的GLP-1R密度(K_d：0.3nM，B_max：240 fmol/mg蛋白質)。

細胞係自冷凍保存取出，再懸浮於40毫升杜爾貝科氏磷酸鹽緩衝鹽水中(DPBS-Lonza Cat # 17-512Q)且在22℃ 下以800 x g離心5分鐘。將DPBS吸出且將細胞沉澱物再懸浮於10mL完全生長培養基中(具有HEPES、L-Gln之DMEM/F12 1：1混合物500mL(DMEM/F12 Lonza Cat # 12-719F)、10%熱失活之胎牛血清(Gibco Cat # 16140-071)、5mL 100X Pen-Strep(Gibco Cat # 15140-122)、5mL 100X L-麩醯胺酸(Gibco Cat # 25030-081)、700μg/mL之潮黴素(Hygromycin)(Invitrogen Cat # 10687010)及15μg/mL之殺稻瘟菌素(Blasticidin)(Gibco Cat # R21001))。將生長培養基中的1mL細胞懸浮液樣品在Becton Dickinson ViCell上計數以測定細胞存活率及每mL細胞數。接著將剩餘細胞懸浮液以生長培養基調整，使用Matrix Combi Multidrop試劑分配器遞送每一孔1600個活細胞，且將細胞分配至經組織培養物處理之白色384孔檢定盤(Corning 3570)中。接著將檢定盤在37℃下於加濕環境中(95% O₂，5% CO₂)培育48小時。

欲測試之不同濃度的各化合物(在DMSO中)係在含有100μM 3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(IBMX；Sigma cat # I5879)之檢定緩衝液[具有鈣/鎂之HBSS(Lonza/BioWhittaker cat # 10-527F)/0.1% BSA(Sigma Aldrich cat # A7409-1L)/20mM HEPES(Lonza/BioWhittaker cat #17-737E)]中稀釋。在化合物/檢定緩衝液混合物中的最終DMSO濃度為1%。

在48小時之後，自檢定盤孔移出生長培養基，且將細胞在37℃下於加濕環境中(95% O₂，5% CO₂)以20μL在檢定緩衝液中連續稀釋之化合物處理30分鐘。在30分鐘培育後，將10μL經標記之d2 cAMP及10μL抗cAMP抗體(二者係在細胞溶解緩衝液中以1：20稀釋；如製造商檢定程序中所述)添加至檢定盤的各孔中。接著將盤在室溫下培育，且在60分鐘後，HTRF訊號的變化係使用330nm激發及615與665nm發射之Envision 2104多標記盤讀取機讀取。原始數據係自cAMP標準曲線內插而轉換成nM cAMP(如製造商檢定程序中所述)且測定相對於各盤所包括的完全促效劑GLP-1(1μM)之飽和濃度的效應百分比。EC₅₀測定係使用4參數邏輯劑量反應公式以曲線擬合程式分析之促效劑劑量反應曲線進行。

在表X-1中，檢定數據係基於所列示之重複次數(次數)以幾何平均值(EC₅₀)及算數平均值(Emax)的兩個(2)有效數字呈示。空白格代表該實施例沒有數據或未計算Emax。

本文所述及之所有專利、專利申請案及參考文獻係以彼等完整內容特此併入以供參考。

Claims

一種2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧呃-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧呾-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺鹽之水合物晶形，其中該晶形為晶形2，且其中該晶形2具有包含至少兩個選自7.1±0.2°、7.6±0.2°、10.7±0.2°及19.4±0.2°以2θ表示之峰的粉末X射線繞射圖案(PXRD)。
如請求項1之水合物晶形，其中該水合物晶形為單水合物晶形。
如請求項1之水合物晶形，其中該晶形2具有包含至少三個選自7.1±0.2°、7.6±0.2°、10.7±0.2°及19.4±0.2°以2θ表示之峰的粉末X射線繞射圖案(PXRD)。
如請求項3之水合物晶形，其中該晶形2具有在7.1±0.2°、7.6±0.2°、10.7±0.2°及19.4±0.2°以2θ表示之峰的粉末X射線繞射圖案(PXRD)。
一種2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧呃-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧呾-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺鹽之單水合物晶形，其中該單水合物晶形係晶形3，且其中該晶形3具有包含至少三個選自3.7±0.2°、7.4±0.2°、9.9±0.2°、14.8±0.2°及20.6±0.2°以2θ表示之峰的PXRD。
如請求項5之單水合物晶形，其中該 PXRD包含在3.7±0.2°、7.4±0.2°及14.8±0.2°以2θ表示之峰。
如請求項5之單水合物晶形，其中該PXRD包含在3.7±0.2°、7.4±0.2°、14.8±0.2°及20.6±0.2°以2θ表示之峰。
如請求項5之單水合物晶形，其中該PXRD包含在3.7±0.2°、7.4±0.2°、9.9±0.2°、14.8±0.2°及20.6±0.2°以2θ表示之峰。
如請求項5至8中任一項之單水合物晶形，其中該單水合物晶形具有包含在54.7±0.2ppm及138.4±0.2ppm之化學位移的¹³C ssNMR光譜。
如請求項9之單水合物晶形，其中該¹³C ssNMR光譜包含在54.7±0.2ppm、138.4±0.2ppm及156.6ppm±0.2ppm之化學位移。
如請求項9之單水合物晶形，其中該¹³C ssNMR光譜包含在42.8±0.2ppm、54.7±0.2ppm、128.2±0.2ppm、138.4±0.2ppm及156.6±0.2ppm之化學位移。
一種醫藥組成物，其包含治療有效量的如請求項1至11中任一項之水合物晶形及醫藥上可接受的載劑。
一種醫藥組成物，其包含治療有效量的2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧呃-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧呾-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺鹽(「化合物1的托立斯鹽(tris salt)」)及醫藥上可接受的載劑，其中至少5%之該化合物1的托立斯鹽係以如請求項1至11中任一項之水合物晶形存在。
如請求項13之醫藥組成物，其中至少10%之該化合物1的托立斯鹽係以如請求項1至11中任一項之水合物晶形存在。
如請求項13之醫藥組成物，其中至少30%之該化合物1的托立斯鹽係以如請求項1至11中任一項之水合物晶形存在。
如請求項13之醫藥組成物，其中至少50%之該化合物1的托立斯鹽係以如請求項1至11中任一項之水合物晶形存在。
如請求項13之醫藥組成物，其中至少80%之該化合物1的托立斯鹽係以如請求項1至11中任一項之水合物晶形存在。
如請求項13之醫藥組成物，其中至少90%之該化合物1的托立斯鹽係以如請求項1至11中任一項之水合物晶形存在。
如請求項13之醫藥組成物，其中至少95%之該化合物1的托立斯鹽係以如請求項1至11中任一項之水合物晶形存在。
一種2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧呃-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧呾- 2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺鹽之非晶形。
一種醫藥組成物，其包含治療有效量的如請求項20之非晶形及醫藥上可接受的載劑。
一種醫藥組成物，其包含治療有效量的2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧呃-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧呾-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺鹽(「化合物1的托立斯鹽」)及醫藥上可接受的載劑，其中至少5%之化合物1的托立斯鹽係以如請求項20之非晶形存在。
一種醫藥組成物，其包含治療有效量的2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧呃-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧呾-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺鹽(「化合物1的托立斯鹽」)及醫藥上可接受的載劑，其中該化合物1的托立斯鹽包含化合物1的托立斯鹽之晶形及化合物1的托立斯鹽之非晶形。
一種醫藥組成物，其包含治療有效量的2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧呃-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧呾-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺鹽(「化合物1的托立斯鹽」)及醫藥上可接受的載劑，其中該化合物1的托立斯鹽包含如請求項1至11中任一項之水合物晶形及如請求項20之非晶形。
一種如請求項1至11中任一項之水合物晶形用於製造供治療需要此治療的哺乳動物中之疾病或疾患之藥物的用途，其中該疾病或疾患係選自由下列者所組成之群組：T2DM、肥胖症、NAFLD、NASH及心血管疾病。
一種如請求項20之非晶形用於製造供治療需要此治療的哺乳動物中之疾病或疾患之藥物的用途，其中該疾病或疾患係選自由下列者所組成之群組：T2DM、肥胖症、NAFLD、NASH及心血管疾病。
一種2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧呃-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧呾-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸之1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺鹽(「化合物1的托立斯鹽」)用於製造供治療需要此治療的哺乳動物中之疾病或疾患之藥物的用途，其中該化合物1的托立斯鹽包含化合物1的托立斯鹽之晶形及化合物1的托立斯鹽之非晶形，且其中該疾病或疾患係選自由下列者所組成之群組：T2DM、肥胖症、NAFLD、NASH及心血管疾病。
一種2-((4-((S)-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧呃-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧呾-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸之1,3-二羥基-2-(羥基甲基)丙烷-2-胺鹽(「化合物1的托立斯鹽」)用於製造供治療需要此治療的哺乳動物中之疾病或疾患之藥物的用途，其中該化合物1的托立斯鹽包含如請求項1至11中任一項之水合物晶形及如請求項20之非晶形，且其中該疾病或疾患係選自由下列者所組成之群組：T2DM、肥胖症、NAFLD、NASH及心血管疾病。
如請求項25至28中任一項之用途，其中該NASH係伴隨纖維變性之NASH。